JP2000516267A

JP2000516267A - 経口シクロスポリン調合剤

Info

Publication number: JP2000516267A
Application number: JP11524568A
Authority: JP
Inventors: ジェイ．チュー，ムー; イー．レビー，ラルフ; ジェイ．ポウレティー，フィリップ
Original assignee: サングスタットメディカルコーポレイション
Priority date: 1997-10-23
Filing date: 1998-10-21
Publication date: 2000-12-05
Also published as: AU9810698A; HUP0004733A2; IL130631A0; HUP0004733A3; US5962019A; RU2174405C2; EP0956035A1; CN1246057A; CA2275773A1; AR013710A1; SK97199A3; KR20000069688A; NO993096D0; TW592707B; PL334100A1; NO993096L; TR199901448T1; BR9806271A; NZ336253A; ZA989684B

Abstract

(57)【要約】高い生物学的利用度を有し、そして液体及び硬カプセルの両剤形で投与することができる改良された経口シクロスポリン調合剤が提供される。本調合剤では、シクロスポリンは、少なくとも１つの、２又は３炭素原子からなるアルカノール溶媒と、少なくとも１つの非イオン性界面活性剤とを組み合わせて含んでいる経口に適する媒体中で分配される。本調合剤は、更に少なくとも１つの共溶媒を含んでよく、注目する共溶媒は、脂肪酸エステル及びジオールである。本調合剤は免疫抑制治療に使用される。

Description

【発明の詳細な説明】経口シクロスポリン調合剤序発明の分野本発明の分野は、経口シクロスポリン調合剤である。背景供与臓器を宿主体に導入する移植術の多くにおいて、宿主体−供与体の組織型の適合性に基づく移植片拒絶を避ける努力が為されてきたにも関わらず、免疫抑制治療は、宿主体内の供与臓器を継続的に生存させるために必須である。移植術では、種々の免疫抑制剤、例えば、アザチオプリン、メトトレキセート、シクロホスファミド、FK-506、ラパマイシン及びコルチコステロイド、が利用されてきた。免疫抑制治療において、T-細胞仲介性の反応に優先的に作用させるために、その利用が増えてきた薬剤は、シクロスポリンである。シクロスポリンは、真菌種Tolypocladium inflatum Gamsによって代謝物として生産される11アミノ酸から成る環状ポリペプチドに属する。シクロスポリンは、免疫能を有するリンパ球、特にT-リンパ球を、その細胞周期のG₀又はG_!相において可逆的に阻害することが観察されている。また、シクロスポリンは、リンホカインの生産及び放出を可逆的に阻害することも観察されている。多くのシクロスポリンが知られているが、シクロスポリンAが、最も広く利用されている。シクロスポリンAの使用は、皮膚、心臓、腎臓、膵臓、骨髄、小腸及び肺に関する同種異形の移植片の生存を延長させることが報告されている。同種異形の移植において、シクロスポリンAは、液性免疫、そして非常に良く細胞性免疫反応、例えば、同種異形移植片の拒絶、感受性亢進の遅延、実験的なアレルギー性脳脊髄炎、フロイントアジュバントによる関節炎、並びに移植片対宿主病、を抑制することが示されている。シクロスポリンAの使用は有効であるが、シクロスポリン治療は可逆的であり、シクロスポリンAの投与を一度中止すると移植片拒絶が発生するので、移植後には本薬剤の投与を続けなければならない。経口投与及び静脈内投与両方のために、シクロスポリン調合剤が開発されているが、投与の容易性、及び患者の受け入れ易さから、シクロスポリンの経口投与が好まれている。しかも、シクロスポリンの静脈内投与は、アナフィラキシー反応、すなわち経口投与では見られない副作用を誘発する可能性がある。開発済みで、現在市販されている経口シクロスポリン調合剤には、軟ゼラチンカプセル及 AL^TMとして販売されている。免疫抑制治療において、経口シクロスポリン調合剤を使用する際には、治療者及び製剤者の両方が、多くの問題点を認識する必要がある。経口シクロスポリン調合剤では、シクロスポリンの水に対する不溶性、及び水性環境におけるシクロスポリンの沈殿し易さのために、シクロスポリンの生物学的利用度が限定される。更に、シクロスポリンの疎水性のために、経口調合剤中のシクロスポリン濃度が限定される。最後に、シクロスポリンの軟カプセル調合剤では気密充填が必要であり、これは、容積がかさばること、及びコストが高くなることから都合が良くない。更に、低温では、シクロスポリンの結晶ができるかもしれないので、シクロスポリン調合剤は不安定である可能性がある。従って、望ましい経口シクロスポリン調合剤は、少なくともいくつかの前記問題点を解決した調合剤である。理想的には、この経口調合剤は、生物学的利用度が高度に促進され、高濃度のシクロスポリンを含むものであって、そして液剤及び硬カプセル剤に調製し易いものである。関連文献 Physician's Desk Reference(1994)pp2071-2074には、登録商品剤が記載されている。また、NEORAL^TMのパッケージには、経口シクロスポリン調合剤が記載されている(Sandoz Pharmaceuticals Corporation,East Hanover,New Jersey 07936)。シクロスポリン及びその誘導体が記載された注目する米国特許には、4,220,64 1;4,639,434;4,289,851;及び4,384,996がある。米国特許5,047,396には、シクロスポリンの静脈投与用の調製品が記載されている。米国特許4,388,307;4,970,07 6及び4,990,337には、経口シクロスポリン調合剤が記載されている。米国特許4,822,618;4,576,284;5,120,710;及び4,894,235には、医薬調合剤を経口投与するための硬カプセル剤の調製が記載されている。発明の要約経口シクロスポリン調合剤、及び、免疫抑制治療において、それを使用する方法が提供される。本調合剤では、シクロスポリンは、少なくとも１つの、２又は３炭素原子からなるアルカノール溶媒と、少なくとも１つの非イオン性界面活性剤とを組み合わせて含んでいる経口に適する媒体中に存在する。本調合剤は、更に１つ以上の共溶媒(cosolvents)を含んでよい。注目する共溶媒は、脂肪酸エステル及びジオール、好ましくはポリグリコールである。本シクロスポリン調合剤は、硬カプセルとして包装することができる。本調合剤は実質的に無水であり、これによって、本調合剤におけるシクロスポリンの沈殿を減少させ、そして生物学的利用度を増加させる。図の簡単な説明図１は、本発明のいくつかの経口調合剤において、ラット内のシクロスポリン濃度のピーク値(C_max)を示す。ここで、このC_max 対する相対値として示される。図２は、図１の各調合剤において、C_maxが認められた時間(T_ma のT_maxに対する相対値として示される。図３は、図１の各調合剤において、血中薬物濃度−時間曲線下面 O)のAUCに対する相対値として示される。図４は、本発明のいくつかの経口調合剤において、人間内のシク(SO)のC_maxも示す（図中のSAND）。図５は、図４の各調合剤において、C_maxが認められた時間(T_max)を示す。図６は、図４の各調合剤において、血中薬物濃度−時間曲線下面積(AUC)を示す。実施形態の説明生物学的利用度が促進され、そしてカプセル剤、特に硬カプセル剤として調合することができる経口シクロスポリン調合剤が提供される。本調合剤では、シクロスポリンは、少なくとも１つの、２又は３炭素原子からなるアルカノール溶媒と、少なくとも１つの非イオン性界面活性剤とを組み合わせて含んでいる経口に適する媒体中に存在する。本調合剤は、更に少なくとも１つの共溶媒を含んでよい。注目する共溶媒は、脂肪酸エステル及びジオール、好ましくは１つ以上のポリグリコールである。本調合剤の各成分は、医薬に適するものである。本調合剤を用いた場合、高い生物学的利用度が得られるばかりでなく、特定の調合剤のバッチ間で、シクロスポリンの吸収の再現性が得られる。本調合剤は、免疫抑制治療において利用される。当分野では、免疫抑制活性を示す多くのシクロスポリンが知られていて、本経口調合剤に供される。本調合剤で投与され得るシクロスポリンには、シクロスポリンA、シクロスポリンB、シクロスポリンC、シクロスポリンD及びシクロスポリンG、並びに、これらの合成アナログがある(Merck Index(1989)2759)。本経口調合剤は、特にシクロスポリンAの分配に適する。本調合剤で分配される場合には、シクロスポリンAは、調合剤の溶媒成分の容量を基にして、50〜150mg/ml、普通は100〜l50mg/mlの濃度で含まれる。本調合剤の媒体成分には、アルカノール溶媒成分があり；このアルカノール溶媒成分は、少なくとも１つのアルカノール、普通は３つ以下の異なるアルカノール、更に普通は２つ以下の異なるアルカノールを含み；このアルカノールは、２又は３炭素原子から、且つ１又は２ヒドロキシ基から成り、そのため炭素原子１ .５個あたり、１個以下のヒドロキシ基が含まれる。適当なアルカノールには、エタノール及びプロピレングリコール、好ましくは無水エタノールがある。調合剤中のアルカノール溶媒の総量は、調合剤に対して、少なくとも約1%(v/v)、普通は少なくとも約3%(v/v)であり、95%(v/v)程度でもよいが、一般的には、約５〜7 5%(v/v)、普通は約５〜60%(v/v)、更に普通は約10〜60%(v/v)である。調合剤中に、アルカノール溶媒としてエタノールが含まれる場合、そのエタノール量は、調合剤に対して、約５〜25%(v/v)、普通は約５〜20%(v/v)、更に普通は約10〜25 %(v/v)である。アルカノール溶媒としてプロピレングリコールが含まれる場合、調合剤中のプロピレングリコール量は、調合剤に対して、約５〜90%(v/v)、普通は約５〜85%(v/v)、更に普通は約10〜50%(v/v)である。また、経口に適する本媒体には、少なくとも１つの非イオン性ポリオキシアルキレン界面活性剤、普通は２つ以下の非イオン性ポリオキシアルキレン界面活性剤が含まれる。このポリオキシアルキレン界面活性剤は、約５〜20の、普通は８〜16の親水性親脂性平衡(HLB)を有する。好ましくは、本調合剤に用いられる非イオン性ポリオキシアルキレン界面活性剤は、ポリオキシエチレン化合物である。注目するポリオキシエチレン化合物には、エトキシル化アルコール、すなわちポリオキシエチレンアルコール又はエトキシル化脂肪族アルコール、このアルコール部分は、概して10〜18、普通は10〜14の炭素原子と、それのエーテル及びエステル置換基とからなり；並びに、４〜６炭素原子、普通は６炭素原子から成るポリオールと脂肪酸の部分エステル、普通はモノエステルのポリオキシエチレン誘導体がある。このポリオールは、ポリオール無水物、例えばソルビタンでよい。本界面活性剤の脂肪酸部分は、典型的には10〜18の炭素原子のものである。エチレンオキシド基の数は、概して２〜30、普通は約２〜25である。好ましい界面活性剤は、ポリオキシエチ存在する非イオン性界面活性剤の量は、調合剤に対して、５〜80%、普通は５〜7 0%、更に普通は５〜65%、好ましくは５〜60%(v/v)、より好ましくは20〜75%(v/v )、そしてしばしば50〜80%である。本調合剤中にTWEEN80が含まれる場合、これは、調合剤に対して、普通は５〜80%、更に普通は５〜70%、好ましくは５〜60% 、より好ましくは約10〜50%(w/v)の範囲の量で含まれる。本調合剤中にBRIJ30が含まれる場合、これは、調合剤に対して、普通は10〜45%、更に普通は約15〜40% (v/v)の範囲の量で含まれる。本調合剤は、更に、１つ以上の共溶媒を、普通は３以下の異なる共溶媒、更に普通には２以下の異なる共溶媒を含んでよく；適当な共溶媒は、脂肪酸エステル及びジオールであり、この共溶媒は、100%脂肪酸エステルでも、100%ジオールでも、又はこれらの組み合わせでもよい。100%脂肪酸エステル又は100%ジオールである共溶媒が、本調合剤に含まれる場合、異なった脂肪酸又はジオールを組み合わせて用いてよい。本調合剤中に存在する共溶媒の総量は、調合剤に対して、約 20〜80%(v/v)であってよく、普通は約25〜75%(v/v)である。共溶媒が調合剤に含まれる場合、調合剤中の共溶媒対溶媒の比は、約１：１〜15：１であってよく、しかし普通は約１：１〜13：１である。本調合剤で共溶媒として機能する脂肪酸エステルは、その脂肪酸の炭化水素鎖が12〜18個、普通は14〜18個の炭素原子である脂肪酸のエステルであり、そして低級アルカノールとのモノエステルである。適当な脂肪酸エステルは、概して偶数個の脂肪酸鎖であり、この炭化水素鎖は、飽和又は不飽和であってよく、普通は２つ以下の不飽和部位を有する。注目する脂肪酸は、概して植物又は哺乳類由来であり、そしてパルミチン酸、ステアリン酸、パルミトレイン酸、リノール酸、及びリノレン酸などで、特にミリスチン酸及びオレイン酸である。この脂肪酸モノエステルのアルコールは、２〜４炭素原子、普通は２又は３炭素原子からなる低級アルカノールであり、枝分かれがあってもなくてもよい。特に注目する脂肪酸エステルは、イソプロピルミリステート及びエチルオレエートである。イソプロピルミリステートが含まれる場合、これは、調合剤に対して、約15〜75%(v/ v)であり、そしてエチルオレエートが含まれる場合、これは、調合剤に対して、約15〜75%(v/v)である。普通は、本脂肪酸エステルは、調合剤中の界面活性剤の量に対して、少なくともほぼ同量から８倍量(v/v)までであり、普通は、調合剤中の界面活性剤の量の５倍以下(v/v)である。本脂肪酸エステルは、好ましくは無水である。ジオールが本調合剤中に存在してもよく、脂肪酸エステル共溶媒に追加して、又はその代わりに存在することができる。好ましくは、このジオールは無水である。共溶媒として注目するジオールは、概して、生理学的温度で液体であり、且つ８〜28個の、普通は16〜20個の炭素原子から成るジオールである。このジオールは、２又は３個の炭素原子から成るアルキレンのポリオキシアルキレンジオールでよいが、更に有意に多くの炭素原子を有するジオールも利用される。共溶媒として利用される適当なジオールは、約200〜10000ダルトン、普通は約300〜100 00ダルトン、更に普通は400〜1000０ダルトン、好ましくは800〜10000ダルトンの範囲にある。特に注目するジオールは、ポリエチレングリコールであり、特に、ポリエチレングリコール200(PEG₂₀₀)、ポリエチレングリコール300(PEG₃₀₀）、ポリエチレングリコール400(PEG₄₀₀)、ポリエチレングリコール600(PEG₆₀₀)、ポリエチレングリコール1000(PEG₁₀₀₀)、ポリエチレングリコール3400(PEG₃₄₀₀)、及びポリエチレングリコール8000(PEG₈₀₀ ₀ )などである。調合剤中にジオールが共溶媒として含まれる場合、これは、調合剤に対して、一般に、約５〜60%、普通は５〜55%(w/v)である。本ジオール、特に、より高分子量のポリエチレングリコール（すなわち分子量1000以上のポリエチレングリコールなど）は、調合剤中に存在する水分子を吸収する機能があり、その結果水分子が無くなるために、本調合剤からシクロスポリンが沈殿する可能性が低くなる。本調合剤中の共溶媒自体が、望ましい物理特性、例えば、粘性、及び安定性などを、本調合剤に付与することもあり得る。更に、希望する場合には、望ましい物理特性を本調合剤に付与する追加薬剤、濃縮剤、縣濁化剤、及び固化剤などが、本調合剤に含まれ得る。この様な薬剤には、アラビアゴム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、レシチン、メチルセルロース、高分子量ポリエチレングリコール、例えば、分子量が約1000〜10000、普通は1000 〜8000ダルトン、更に普通は1000〜6000のポリエチレングリコール、ポビドン、アルギン酸ナトリウム、及びトラガカントゴムなどがある。本調合剤中には、種々の機能を付与する多くの副成分、例えば、酵素阻害剤、保存剤、酸化防止剤、抗微生物剤、安定化剤、及び香料なども存在し得る。これらの濃縮剤などの他の添加剤の総量は、これらが調合剤中に存在する場合には、調合剤に対して、一般に、55重量％以下、普通は45重量％以下、更に普通は25重量％以下である。当分野で知られている多くの賦形剤も、本調合剤中に存在し得る。好ましくは、この様な追加薬剤は無水である。本調合剤は実質的に無水であり、すなわちこれは1.0%未満の、より好ましくは 0.1%未満の水を含むことを意味する。本調合剤は、広範囲の温度に亘って安定である。この安定とは、調合剤の物理的完全性が壊されないこと、例えば、活性シクロスポリン剤の結晶化が起きないことを意味する。本調合剤が安定である温度範囲には、より低い温度、例えば冷蔵貯蔵に用いられる温度、が含まれる。この様な低温とは、典型的には約０〜15 ℃、より典型的には約２〜８℃である。本調合剤は、液剤及びカプセル剤の両方、例えば硬カプセル及び軟カプセル剤としての投与に適する。液体調合剤を含んでいる硬カプセル剤を生産する方法は、当分野に知られていて、そして米国特許4,822,618及び4,576,284に記載されていて、これらの内容を引用して本明細書に組み込む。概して、本調合剤に使用される硬カプセルは、２つの部分：シェル部分とキャップ部分から構成される。このシェルとキャップの部分を合わせて、硬カプセルのシェル内に規定量を密封する密閉内腔が作られる。このシェルとキャップの部分は、親水性ポリマー、例えばデンプン又はゼラチンから加工され得る。本硬カプセル剤を調製する場合、本液体調合剤をシェル部分に注ぎ、次に、このシェル部分の上にキャップ部分を合わせて、このカプセルを密封する。これらの２つの部分間の密封は、カプセル内から調合剤が漏れないように、EP116744に記載されている密閉剤を用いて、確実にする。その内容を引用して本明細書に組み込む。胃での分解を回避するために、本調合剤が含まれているカプセルを、胃の酸性環境でのカプセルの分解を阻止するために、腸溶性被膜で被覆することもできる。種々の腸溶性被膜が当分野で知られていて、例えば米国特許5,206,219に記載されていて、その内容を引用して本明細書に組み込む。本調合剤を、これを必要とする対象に、１つ以上の免疫抑制剤と組み合わせて投与することができる。本発明のシクロスポリン調合剤と共に投与される他の免疫抑制剤には、例えば、ラパマイシン、FK-506、マイコフェノール酸(mycophenolic acid)、これらのアナログ及び誘導体、アザチオプリン、メトトレキセート、シクロフォスファミド、コルチコステロイド、及び、その他の免疫抑制剤又はそのアナログがある。本調合剤は、免疫抑制治療において用いられる。免疫抑制治療は、広範囲の疾患、例えば、原発性ネフローゼ症候群、インスリン依存性の１型糖尿病、Behcet 症候群、Crohn病、再生不良性貧血、重症コルチコステロイド依存性喘息、乾せん、リウマチ様関節炎、及び免疫系を病因とする他の疾患において行われる。本調合剤の使用は、移植分野、例えば、同種異形及び異種の臓器、組織又は細胞の移植において特に注目され、この場合、移植後の移植臓器、組織又は細胞の生存性を維持するために、すなわち、移植片拒絶、あるいは、例えば骨髄移植後の、移植片対宿主病を抑制するために、免疫抑制が望まれる。宿主に免疫抑制治療を施すために本調合剤を用いる場合、有効量のシクロスポリンが、その宿主において望まれる免疫抑制レベルを達成するために、治療される特定の症状に依存して、経口的に投与される。移植では、手術前に、又は術後に、一般には、初期投与量のシクロスポリンが投与される。一般に、宿主に供与臓器を移植した後に、免疫抑制を維持するために、宿主にシクロスポリンを繰り返し、すなわち慢性的に投与する。前記の初期投与量は、移植４〜12時間前に投与され、その量は５〜18mg/kg宿主、普通は５〜15mg/kg宿主でよい。一般には、手術後１〜３週間、普通は１〜２週間、毎日、前記初期投与量を続ける。この投与量は、次第に、１日あたり３〜10mg/kg、普通は１日あたり３〜６mg/kgの維持投与量に減らすことができる。投与量をこの維持レベルに減らしていく速度は、１週間あたり３〜８％でよく、普通は１週間あたり約５％である。この投与量は、典型的には、HPLC、RIA、ELISA又はTDxアッセイで測定する血中レベルで、100〜350ng/mlの濃度に維持される様に調製される。補助的な治療が望まれ、そして当分野で知られている場合には、追加薬剤と共に本調合剤を投与することができる。例えば、本調合剤を、副腎コルチコステロイド、及びアザチオプリンなどと共に投与することができる。供与臓器の移植と共に本調合剤を投与することによって、その供与臓器に対する宿主の免疫反応が抑制され、宿主内の供与臓器の生存性が延長される。「生存性の延長」とは、移植と共に免疫抑制治療が為されない場合に比べて、より長期間、供与臓器が宿主内に生存し続けることを意味する。従って、生存性の延長には、無期限に生存性が維持されることが含まれる。宿主環境内で供与臓器が機能を維持する限り、供与臓器は生存していると見なされる。本調合剤は、良好な生物学的利用度を有するシクロスポリンのナノ粒子の水性コロイド分散として調製されてもよい。この場合、このナノ粒子は実質的に球状で、このシクロスポリンは非晶質の形で存在し、そしてその平均サイズは、概して約1000nm未満、約50nm超であり、概して約200〜800nm、普通は約200〜600nmである。概して、シクロスポリンの総重量の少なくとも約50重量％が、前記したサイズの範囲の粒子として存在する。より大きい粒子が、特にナノ粒子の集合体として存在してよく、その場合、その平均直径は、普通は約50μｍ未満、より普通には約25μｍ未満であり、この集合体は、普通は、シクロスポリン総重量の40重量％を超えない。本組成物中の前記の量のシクロスポリン非晶質粒子は、治療効果を発揮するために十分である。投与前に水性媒体に、あるいは直接に胃液に導入導入することによって、前記調合剤が形成されるので、胃内での希釈が明確でなく、これの特定の濃度を記載することはできない。経口投与前に、水性媒体中で調製する場合、シクロスポリンは、概して、約0.01〜 2.5重量％で、より普通には約0.01〜0.5重量％で存在する。この混合温度は、約 10〜50℃でよく、普通は約20〜40℃である。この混合では、普通、このシクロスポリン溶液を作るのに十分な時間撹拌する。前記ナノ粒子のコロイド状非晶質縣濁液は、投与前にいくらか、多くの場合約６時間まで、より多くの場合約３時間まで放置することができるほど十分に安定である。本発明の前記ナノ粒子シクロスポリン調合剤の調製及び使用に関する詳細は、 PCT/US97/04627に記載されている。本発明を限定するためではなく、説明するために、以下の実施例を挙げる。実験本発明に基づいて、いくつかの経口シクロスポリン調合剤を調製した。これらの調合剤の多くにおいて、シクロスポリンの生物学的利用度を、ラット及び人間で観察した。Ｉ．経口シクロスポリン調合剤以下の経口シクロスポリンA調合剤を調製した。各々の場合で、指示した量のシクロスポリンA、界面活性剤、及びエタノール又はプロピレングリコールを１m lの計量フラスコに加え、場合によっては、適当量の脂肪酸エステル及び／又はジオールを追加して、最終容量を１mlにした。 PG=プロピレングリコール；EtOH=エタノール；Brij30=ポリオキシエチレン(4)ラウリルエーテル；Tween80=ポリオキシエチレン(20)モノソルビタンモノオレエート；IM=イソプロピルミリステート；EO=エチルオレエート II．調合剤19〜24及び33〜42における生物学的利用度の調査調合剤19〜24及び33〜42におけるシクロスポリンの生物学的利用度を以下の様に調べた。生物学的利用度の測定値として、以下の薬物動態学パラメーターを決定した：（ａ）シクロスポリンの血中濃度のピーク値(C_max)；（ｂ）C_maxが得られるための時間(T_max)；及び、血中薬物濃度−時間曲線下面積(AUC)。調合剤19 〜24及の生物学的利用度を、類似条件下で、比較のために観察した。前記調合剤の各々において、体重250-350gmのシクロスポリンA(CsA)投 00,Granville Mill,Greensboro,NC)及び水を無制限に供給した。実験１日前に、軽いエーテル麻酔下に、シリコーンゴム製のカニューレを、右頚静脈及び右大腿部静脈に挿入した。一晩絶食後、胃管によってCsAを投与した。投与後、頚静脈から200μｌの血液サンプルを、0.3mgの凍結乾燥したNaEDTAを含んだポリプロピレン製の微量遠心用チューブに集め、即座に10秒間ボルテックスで撹拌した。経口調合剤を与えた動物からのサンプル採取時間は、投与後、0 ，0.5，１，2，4，8，12，24，36，48及び72時間である。全血中のCsAを、そのいくつかの代謝産物も含めて、蛍光偏光免疫測定(fluore scent polarization immunoassay,FPI(TDx，Abbott Lab.))によって決定した。簡単に述べると、150μｌの全血液サンプルを、定量的に1.5mlの微量遠心チューブに移した。界面活性剤を含んだ50μｌの溶解試薬で細胞を溶解した。次に、30 0μｌのアセトニトリルでタンパク質を沈殿させた。遠心後、その上清を、Abbot t Diagnosticsの推奨方法に従って、TDx自動分析機を用いて、FPI測定した。このTDx測定は、元々は人間の血液に対して開発されたものなので、前記推奨方法を、次の様に改修した。EDTAで処理したラット血液に既知量のCsAを加えることで、一連の既知濃度の標準CsA溶液を調製した。サンプル中のCsA濃度が1.0μg/m lを超えていると考えられた場合には、その血液サンプルを、0.1Mのリン酸塩緩衝液pH7.0で、10倍に希釈した。ラット血液10%及びリン酸塩緩衝液90%の混合液を基にした、既知量のCsAを含有する一連の標準溶液を用いて、希釈したサンプルに対する別の標準曲線を作成した。非コンパートメント解析を行い、薬物動態学の記述パラメーターを得た。各ラットにおいて、生の濃度−時間曲線を検分して、ピーク濃度(C_max)、及びそのピーク濃度に達する時間(T_max)を概算した。時間０から最終データ時点までの血中薬物濃度−時間曲線下面積(AUC₀ _→t)を、線形台形公式に従って計算した。血中薬物濃度 −時間曲線の末尾部分下の残存面積(AUC_t _→∞)を、最終測定濃度(C*)と、本濃度 −時間曲線の最終消失相に関与する１次速度定数（λz）との比として概算した。この速度定数λzを、本濃度−時間曲線の明らかな最終対数−直線相において、本濃度−時間データの対数−直線回帰によって決定した。AUCの全面積(AUC₀ _→ _∞ )を、(AUC₀ _→t)と(AUC_t _→∞)の合計として得た。各調合剤の結果を、SOの結果と比較して、図１〜３に示した。こO)に比べて、各調合剤のAUC値がより大きくなったことから、各調合剤のシクロスポリンの生物学的利用度がより高くなったことが判る。 III.調合剤35，43〜46及び48〜52における人間での生物学的利用度理想体重の 20%増減内にある48人の年齢19〜55才の男性健常者を被験者とした。単回投与で、無投与期間を設けて、無作為に、二重盲検法で、各々３種類の調合剤を用いて、実験を行った。48人の被験者を、８人ずつ６群に無作為に分けた。各群に、上記調合剤又はのシクロスポリンを投与した。各投与時期は、清掃期間として７日間間隔を開けた。投与前10時間、及び投与後４時間は、被験者は絶食することを求められた。投与前１時間から投与後２時間までを除いて、実験中は、水は無制限に摂取できた。投与では、調合剤3ml(300mg)を、希釈液2O0mlと混合してから、経口的に摂取した。10mlの血液サンプルを、t=0，0.5，1，1.5，2，3，4，6，8，10，12，16 ，20及び24時間の時点で採取した。終了後の検査用に15mlの血液サンプルを集めた。全血サンプル中のシクロスポリンAの濃度を、TDx(Abbott Diagn ostics，N.Chicago,IL)を用いて、その取扱説明書に従って測定した。標準的な方法に従って非コンパートメント解析を行い、薬物動態を調べた。血中濃度−時間データから、全血中の濃度の最大値(C_max）、及びその発生時間(T_m _ax )を集めた。その血中薬物濃度−時間曲線下面積(AUC)を、感度限界(25ng/ml) 以上の最終血液濃度までは線形台形公式に従い、そこから無限大までは外捜して、計算した。各調合剤において観察されたC_max，T_max及びAUC値を平均した。各調合剤の前記平均値を図４〜６に示す。この結果では、同条比べて、テストした各調合剤でのC_maxは、少なくとも２倍速く発O)を用いた場合のAUCに比べて、テストした各調合剤でのAUCは、少なくとも2000 ng・hr/ml大きかった。これらの結果に基づくと、て、より高い生物学的利用度を付与する。 IV．低温での液体調合剤35及び44の特性様々な低温で保存し、それらの物理特性を決定した。詳しく述べる、−10℃又は２〜８℃のいずれかで、一晩保存した。−10℃では、かなり粘調になったが、固化しなかった。面白いことに、低温の調合剤35溶液には、シクロスポリンAの結晶沈殿は全く見られなかった。各調合剤を室温に戻した場合、固化した調合剤44は、固化したト状になったが、調合剤35及び44の両方は、粘調な液体溶液のままであった。低温の調合剤35及び44の両溶液には、シクロスポリンAの沈殿は全く見られなかった。前述した結果及び考察から明らかに、生物学的利用度が高い新規なシクロスポリン調合剤が提供される。本調合剤は、高濃度のシクロスポリンを含むことが可能で、且つ、広範囲の温度で、例えば冷蔵に用いられる一般的な低温でも、安定に保存される。本調合剤は、カプセルの剤形で、例えば、保存及び取り扱いが容易な硬カプセルの剤形で、容易に分配される。本明細書内に記載した全ての文献及び特許出願を引用することによって、本明細書に組み込む。本発明を、明確に理解するために、説明と実施例を用いて詳細に記載したが、本発明の意味に照らせば、請求の範囲から逸脱することなく、特定の変更及び改修を施すことができることは、当業者には明白である。

【手続補正書】【提出日】平成１１年６月２４日（１９９９．６．２４）【補正内容】請求の範囲１．経口シクロスポリン調合剤であって、シクロスポリン；少なくとも１つの、２又は３個の炭素原子から成るアルカノールの溶媒；少なくとも１つの非イオン性ポリオキシアルキレン界面活性剤であって、この界面活性剤が、ポリオキシエチレンアルコール、及び４〜６個の炭素原子から成るエトキシル化ポリオールの脂肪酸モノエステルの群中から選択されるもの；並びに、少なくとも１つのポリグリコールであって、この少なくとも１つのポリグリコールの少なくとも１つが、800〜10000ダルトンの範囲の分子量を有するもの；から本質的に成る前記調合剤。２．前記ポリグリコールが、ポリエチレングリコールを含んでいる、請求項１の調合剤。３．前記アルカノール溶媒が、前記調合剤に対して約５〜75%(v/v)である、請求項２の調合剤。４．前記アルカノール溶媒が、前記調合剤に対して約10〜25%(v/v)である、請求項２の調合剤。５．前記アルカノール溶媒が、無水エタノールである、請求項４の調合剤。６．前記の少なくとも１つの非イオン性ポリオキシアルキレン界面活性剤が、前記調合剤に対して約５〜80%(w/v)である、請求項２の調合剤。７．前記の少なくとも１つの非イオン性ポリオキシアルキレン界面活性剤が、前記調合剤に対して約10〜50%(w/v)である、請求項２の調合剤。８．前記の少なくとも１つの非イオン性ポリオキシアルキレン界面活性剤が、前記調合剤に対して約20〜75%(v/v)である、請求項２の調合剤。９．前記の少なくとも１つの非イオン性ポリオキシアルキレン界面活性剤が、ポリオキシエチレン(20)モノソルビタンモノオレエート及びポリオキシエチレン（4）ラウリルエーテルの群中から選択される、請求項２の調合剤。 10．前記の少なくとも１つのポリエチレングリコールが、約1000〜8000ダルトンの範囲の分子量を有するポリエチレングリコールを含んでいる、請求項２の調合剤。 11．前記の少なくとも１つのポリエチレングリコールが、各々異なった分子量を有する２つの異なったポリエチレングリコールの混合物である、請求項２の調合剤。 12．前記の少なくとも１つのポリエチレングリコールが、前記調合剤に対して約20〜80%(w/v)である、請求項２の調合剤。 13．シクロスポリンが100mg/mlの濃度で、無水エタノールが12.5%の濃度で、そしてポリオキシエチレン(20)モノソルビタンモノオレエートが400mg/mlの濃度で存在している、請求項１の調合剤。 14．硬カプセル剤である請求項１の調合剤。 15．シクロスポリン及び生理学的に適する担体を含んでいる経口シクロスポリン調合剤であって、実質的に無水である前記調合剤。 16．請求項１〜15のいずれか１項の前記経口シクロスポリン調合剤の使用。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｋ 47/34 Ａ６１Ｋ 47/34 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者ポウレティー，フィリップジェイ. アメリカ合衆国，カリフォルニア 94027, アサートン，オーデルプレース３

Claims

【特許請求の範囲】１．経口シクロスポリン調合剤であって、シクロスポリン；少なくとも１つの、２又は３個の炭素原子から成るアルカノールの溶媒；少なくとも１つの非イオン性ポリオキシアルキレン界面活性剤であって、この界面活性剤が、ポリオキシエチレンアルコール、及び４〜６個の炭素原子から成るエトキシル化ポリオールの脂肪酸モノエステルの群中から選択されるもの；並びに、少なくとも１つのポリグリコールであって、この少なくとも１つのポリグリコールの少なくとも１つが、800〜10000ダルトンの範囲の分子量を有するもの；から本質的に成る前記調合剤。２．前記ポリグリコールが、ポリエチレングリコールを含んでいる、請求項１の調合剤。３．前記アルカノール溶媒が、前記調合剤に対して約５〜75%(v/v)である、請求項２の調合剤。４．前記アルカノール溶媒が、前記調合剤に対して約10〜25%(v/v)である、請求項２の調合剤。５．前記アルカノール溶媒が、無水エタノールである、請求項４の調合剤。６．前記の少なくとも１つの非イオン性ポリオキシアルキレン界面活性剤が、前記調合剤に対して約５〜80%(w/v)である、請求項２の調合剤。７．前記の少なくとも１つの非イオン性ポリオキシアルキレン界面活性剤が、前記調合剤に対して約10〜50%(w/v)である、請求項２の調合剤。８．前記の少なくとも１つの非イオン性ポリオキシアルキレン界面活性剤が、前記調合剤に対して約20〜75%(v/v)である、請求項２の調合剤。９．前記の少なくとも１つの非イオン性ポリオキシアルキレン界面活性剤が、ポリオキシエチレン(20)モノソルビタンモノオレエート及びポリオキシエチレン (4)ラウリルエーテルの群中から選択される、請求項２の調合剤。 10．前記の少なくとも１つのポリエチレングリコールが、約1000〜8000ダルトンの範囲の分子量を有するポリエチレングリコールを含んでいる、請求項２の調合剤。 11．前記の少なくとも１つのポリエチレングリコールが、各々異なった分子量を有する２つの異なったポリエチレングリコールの混合物である、請求項２の調合剤。 12．前記の少なくとも１つのポリエチレングリコールが、前記調合剤に対して約20〜80%(w/v)である、請求項２の調合剤。 13．シクロスポリンが100mg/mlの濃度で、無水エタノールが12.5%の濃度で、そしてポリオキシエチレン(20)モノソルビタンモノオレエートが400mg/mlの濃度で存在している、請求項１の調合剤。 14．硬カプセル剤である請求項１の調合剤。 15．経口シクロスポリン調合剤であって、シクロスポリン；少なくとも１つの、２又は３個の炭素原子から成るアルカノールの溶媒；並びに、少なくとも１つの非イオン性ポリオキシアルキレン界面活性剤であって、この界面活性剤が、ポリオキシエチレンアルコール、及び４〜６個の炭素原子から成るエトキシル化ポリオールの脂肪酸モノエステルの群中から選択されるもの；から本質的に成る前記調合剤。 16．前記アルカノール溶媒が、前記調合剤に対して約５〜75%(v/v)である、請求項14の調合剤。 17．前記アルカノール溶媒が、前記調合剤に対して約10〜25%(v/v)である、請求項14の調合剤。 18．前記アルカノール溶媒が、無水エタノールである、請求項16の調合剤。 19．前記の少なくとも１つの非イオン性ポリオキシアルキレン界面活性剤が、前記調合剤に対して約５〜80%(w/v)である、請求項14の調合剤。 20．前記の少なくとも１つの非イオン性ポリオキシアルキレン界面活性剤が、前記調合剤に対して約65〜80%(w/v)である、請求項14の調合剤。 21．硬カプセル剤である請求項14の調合剤。 22．シクロスポリン及び生理学的に適する担体を含んでいる経口シクロスポリン調合剤であって、実質的に無水である前記調合剤。 23．宿主において免疫抑制を達成する方法であって、前記宿主に、請求項１〜 22のいずれか１項の経口シクロスポリン調合剤を投与することによって、前記宿主での免疫抑制が達成される前記方法。