JP2000512633A

JP2000512633A - チオエーテル結合を含む環状ポリペプチドおよびそれらの調製方法

Info

Publication number: JP2000512633A
Application number: JP10500733A
Authority: JP
Inventors: ユ，リン
Original assignee: La Jolla Pharmaceutical Co
Current assignee: La Jolla Pharmaceutical Co
Priority date: 1996-06-06
Filing date: 1997-05-28
Publication date: 2000-09-26
Also published as: AU3293897A; WO1997046248A1; EP0904096A1; US5817752A; US6031073A; AU714954B2; EP0904096A4; CA2251536A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、一般にチオエーテル結合を含む環状ポリペプチドおよびそれらの調製方法に関する。より詳細には、本発明は少なくとも１つのハロアラニン様アミノ酸を有するハロゲン化ポリペプチド、およびそれらの調製方法に関し、この調製方法は、セリン様アミノ酸のヒドロキシル基（すなわち-OH）を、トリフェニルホスフィン二ハロゲン化物(すなわち(C₆H₅)₃PX₂、ここでXはCl、Br、またはI)、亜リン酸トリフェニル二ハロゲン化物(すなわち(C₆H₅O)₃PX₂、ここでXはCl、Br、またはI)、あるいはトリフェニルホスフィンまたは亜リン酸トリフェニルとハロ炭化水素の混合物のようなリンベースのハロゲン化試薬の補助の下、ハロ基（すなわち-X、ここでXはCl、Br、またはI)に変換する工程(すなわち「ハロ変換」)を伴う。本発明はまた、チオエーテル結合を含む少なくとも1つのポリペプチドループを有する環状ポリペプチド、ならびにこれらの調製方法に関し、この方法は、ハロゲン化ポリペプチドを利用し、そして適切な塩基性条件下、ハロアラニン様アミノ酸のハロ基によるシステイン様アミノ酸のチオール基の分子内アルキル化によってチオエーテル結合を形成する工程(すなわち「環化」)を伴う。

Description

【発明の詳細な説明】チオエーテル結合を含む環状ポリペプチドおよびそれらの調製方法技術分野本発明は、一般にチオエーテル結合を含む環状ポリペプチドおよびそれらの調製方法に関する。より詳細には、本発明は少なくとも１つのハロアラニン様アミノ酸を有するハロゲン化ポリペプチド、およびそれらの調製方法に関し、この調製方法は、セリン様アミノ酸のヒドロキシル基（すなわち-OH）をトリフェニルホスフィン二ハロゲン化物(すなわち(C₆H₅)₃PX₂、ここでXはCl、Br、またはI)、亜リン酸トリフェニル二ハロゲン化物(すなわち(C₆H₅O)₃PX₂、ここでXはCl、Br 、またはI)、あるいはトリフェニルホスフィンまたは亜リン酸トリフェニルとハロ炭化水素の混合物のようなリンベースのハロゲン化試薬の補助の下、ハロ基（すなわち-X、ここでXはCl、Br、またはI)に変換する工程(すなわち「ハロ変換」 )を伴う。本発明はまた、チオエーテル結合を含む少なくとも1つのポリペプチドループを有する環状ポリペプチド、ならびにこれらの調製方法に関し、この方法は、ハロゲン化ポリペプチドを利用し、そして適切な塩基性条件下、ハロアラニン様アミノ酸のハロ基によるシステイン様アミノ酸のチオール基の分子内アルキル化によってチオエーテル結合を形成する工程(すなわち「環化」)を伴う。関連技術の説明本出願を通して、引用を明示して種々の刊行物、特許、および公開特許出願に言及する。本出願中で言及される刊行物、特許、および公開特許出願の開示は、本発明が関連する分野の水準をより完全に説明するために本開示中に参考として援用される。チオエーテル結合は安定なジスルフィドの代替として、ホルモン、神経伝達物質および神経調節物質のような生理活性の環状ぺプチドの天然のジスルフィド架橋を置き換えてて、その生物学的活性を延長するために広く利用されている(Leb lおよびHruby、Tetrahedron Lett.(1984)25：2067-2068；Pollnskyら、J.Med.Ch em .(1992)35：4185-4194；Mayerら、Tetrahedron Lett.(1995)36：7387-7390)。チオエーテル結合はまた、通常は非環式のポリペプチドの環状アナログを調製して、そのコンホメーションの移動度を限定し、それによってその生物学的活性および生分解に対する安定性を高めるためにも使用されている(Mosbergら、J.Am.C hem.Soc. (1985)107:2986-2987;Hrubyら、Biochem.J.(1990)268:249-262;Kataoka ら、Biopolymers(1992)32:1519-1533;HrubyおよびBonner,Methods in Molecular Biology (1994)35201-240)。さらに、チオエーテル連結環状ペプチドはまた天然でも見いだされており、特にポリ環状ペプチド抗生物質、ランチビオティクス(lantibiotics)のファミリーにおいて見いだされており、これには重要な食品保存料であるナイシン、ざ瘡に対する治療剤であるエピデルミン(epidermin)、ならびに酵素阻害剤および免疫学的に活性なペプチドが包含される(Jung,G.Angew ．Chem．Int．Ed．Engl．（19 91）30:1051-1192;Jack，R.W.およびSahl，H.G．Trend in Biotechnology(1995)13 :269-278;Sahl，H.G.,Jack，R.W.，およびBierbaum，G．Eur ．K．Biochem．（ 1995）230:827-853)。すべてのランチビオティクスの顕著な構造的特徴はチオエーテルジアミノジカルボン酸であるランチオニン(lanthionine)によって形成される内部鎖スルフィド架橋である。チオエーテル架橋環状ペプチドの合成のための従来のアプローチは、チオエーテルジアミノ酸ランチオニン(例えば、H₂NCH(COOH)CH₂SCH₂CH(COOH)NH₂)およびシスタチオニン(例えば、H₂NCH(COOH)CH₂SCH₂CH₂CH(COOH)NH₂)を組立ブロックとして使用する。ペプチド環化はアミド結合の形成を通じて達成される(Lebl and Hruby，Tetrahedron Lett ．（1984）25:2067-2068;Osapay and Goodman，J ．Che m．Soc．Chem．Commun. (1993):1599-1600;Safarら，in Peptides: Chemistry，S tructure and Biology(Hodges，R.S．and Smith，J.A.,編)Escom，Leiden，The Netherlands，（1994）119-120)。このアプローチは直交して(orthogonally)保護されたランチオニンおよびシスタチオニンの誘導体の冗漫かつ広範囲な合成を必要とする(Jost and Rudinger，Collect ．Czech．Chem．Commun．(1967)32:248 5-2490;Cavelier-FrontiniらTetrahedron Asymmetry(1992)3:85-94; Shaoら，J ．Org．Chem. (1995)60:2956-2957;Probertら、Tetrahedron Lett ．（1996）37:1 101-1104)。近年、Rolinskyおよび共同研究者らは、システイン残基のチオール基の活性化オレフィンへの分子内マイケル付加によってランチオニン含有ペプチドを得ることを特徴とする合成アプローチを報告した(Polinskyら，J ．Med．Chem．（1992）35:4185-4194)。しかし、このアプローチはマイケル付加反応が立体特異性を欠くため、しばしば2つのジアステレオマー生成物を与える(Probertら，T etrahedron Lett ．（1996）37:1101-1104)。Mayerおよび共同研究者らは、システイン残基のチオール基によるブロモ基の分子内置換反応によってシスタチオニン含有ペプチドを提供することによる経路を記載している(Mayerら、Tetrahedro n Lett ．（1995）36:7383-7390)。このアプローチは、競合する分子内環化反応に起因する、ペプチド合成におけるブロモアミノ酸のカップリング効率の低さによって制限される。チオエーテル架橋はまた、トリス(ジアルキルアミノ)ホスフィン(すなわちP(NR₂)₃)による、ジスルフィドペプチドからの可逆硫黄押出し(ex trusion)を通じて、中程度の収率で形成され得る(Fukaseら、Bull ．Chem．Soc． Jpn. （1985）59:2505-2508)。本発明はポリペプチドのハロゲン化のための一般的方法を提供する。本発明はまた、チオエーテル結合を含む環状ポリペプチドの形成におけるハロゲン化ポリペプチドの使用のための一般的方法を提供する。この合成方法は、今までのアプローチの限界のうちのいくつかを回避し、そしてチオエーテル環状ペプチドの合成のための強力な方法を提供する。この合成方法は、チオエーテルで束縛された環状ペプチドのライブラリを構築して、新規な酵素阻害剤、ならびに生理活性分子のアゴニストおよびアンタゴニストを開発するために使用され得る(Katzら、J ．Am．Chem．Soc．(1995)117:854 1-8547)。より詳細には、ランチオニン含有ライブラリは、抗生物質耐性細菌に対抗する新規な抗菌剤の開発のために使用され得る(Jung，Angew ，Chem．Int．E d．Engl. (1991)30:1051-1192;BlondelleおよびHoughten，Trends in Biotechnol ogy （1996）14:60-65)。ランチビオティクス(lantibiotics)の全体としての合成もまた本発明の合成方法によって非常に促進され得る。本発明の方法はまた、コンホメーション的に拘束された抗原性ポリペプチドの調製にも使用され得る。環状チオエーテル抗原は、抗原性タンパク質キャリアまたは環状の抗原骨格と共役するために、または多重抗原ペプチド(MAP)を構築するために使用され得る(Dintzis，Pediatric Res.（1992）32:356-376;Tam，Proc ． Natl．Acad．Sci．USA． (1988)85:5409-5413;Cunninghamら、英国特許GB 2 282 813(1995))。中和されたＢ細胞エピトープおよびＴ細胞エピトープの両方を含むペプチド結合体および複数抗原ペプチドは、インフルエンザ、Ｂ型肝炎および後天性免疫不全症候群(AIDS)のような種々の感染性疾患に対するワクチンを効果的に誘発する免疫原として使用されてきた(Tam，Peptide:Synthesis ，Structure， and Applications （Gutte編）Academic Press，San Diego，(1995)455-500にて; Cunninghamら、英国特許GB 2 282 815(1995))。さらに、チオエーテル環状抗原は多価非免疫原性プラットフォームと結合し得る(Liuら、Biochemistry（1979）18：690-697；Jonesら、Bioconjugate ．Chem．（1994）5：390-399；Jonesら、J ．Med．Chem．(1995)38：2138-2144)。これらのペプチド結合体はB細胞エピトープのみを含み、そして全身性狼蒼性腎炎、抗リン脂質抗体仲介血栓、重症筋無力症、グレーブス病、および新生児のRh溶血のような抗体仲介自己免疫疾患の処置のための寛容原として使用され得る(Barstra dおよびIverson、米国特許第5,268,454(1993)；Couttsら、Lupus(1996)5：158-1 59)。本発明の環状ポリペプチドの1つのクラスは、特に、抗カルジオリピン抗体に結合した、9個以下のアミノ酸のチオエーテル含有ポリペプチドループ、またはジスルフィドの模倣物(mimetics)である。これらのチオエーテル環状ポリペプチドは、その一次配列がファージディスプレイライブラリースクリーニング(phage display library screening)から得られた、その親ジスルフィド環状抗リン脂質エピトープから誘導された(VictoriaおよびMarquis，米国特許出願第08/482,6 51)。これらの環状ポリペプチドの結合体は、抗リン脂質抗体を抑制して、反復性卒中および反復性胎児死亡(fetal loss)のような疾患を処置するために使用され得る。チオエーテル環状ペプチドの合成における用途に加えて、ハロポリペプチドは酵素阻害剤のような治療薬(Cheungら、J ．Med．Chem.（1983）26:1733-1741;Che ungら、J ．Med．Chem．(1986)29:2060-2068)または診断薬の開発に有用である。発明の要旨本発明の1つの局面は、少なくとも1つのポリペプチドループを有する環状ポリペプチドに関する。上記ループはチオエーテル結合を含み、上記環状ポリペプチドは式：で表され、ここでSは硫黄原子であり；L¹およびL²は独立して1個から10個の炭素原子の二価炭化水素部分であり；A¹およびA²は独立してαアミノ酸フラグメントであり；X¹は式J^N-(AA)_p-で表され；X²は式-(AA)_q-で表され；X³は式-(AA)_r-J^C で表され；ここでAAはアミノ酸を表し、これは保護形態であり得；J^NはN末端置換基であり；J^CはC末端置換基であり；そしてp、q、およびrは独立して0から50 の自然数である。他の好ましい実施態様において、上記環状ポリペプチドは式：で表され、ここでSは硫黄原子であり；Cは炭素原子であり；Nは窒素原子であり；Ｏは酸素原子であり；L¹およびL²は独立して1個から10個の炭素原子の二価炭化水素部分であり；R¹およびR²は独立して-Hまたは1個から6個の炭素原子を有するアルキル基であり；R¹およびR²は炭素原子Cに結合し、これが独立してキラリティーRまたはSを有し；R^N1およびR^N2は独立して-Hまたは1個から6個の炭素原子を有するアルキル基であり；X¹は式J^N-(AA)_p-で表され；X²は式-(AA)_q-で表され；X³は式-(AA)_r-J^Cで表され；ここで最はアミノ酸を表し、これが保護形態であり得；J^NはN末端置換基であり；J^CはC末端置換基であり；そしてp、q、およびr は独立して0から50の自然数である。他の好ましい実施態様において、L¹およひL² は独立して1個から6個の炭素原子の二価アルキル部分であり、そしてより好ましくは、独立して、-CH₂-、-CH₂CH₂-、および-CH₂CH₂CH₂-からなる群から選択される。他の好ましい実施態様において、p、q、およびrは独立して0から10の自然数である。他の好ましい実施態様において、R¹およびR²は独立して-Hまたは-CH₃である。他の好ましい実施態様において、R^N1およびR^N2は独立して-Hまたは-CH₃である。本発明の他の局面は、少なくとも1つのハロアラニン様アミノ酸を有するハロゲン化ポリペプチドに関する。上記ハロゲン化ポリペプチドは式：Ｙ¹−ＡＡ^H−Ｙ² で表され、ここでAA^Hハロアラニン様アミノ酸であり；Y¹は式J^N-(AA)_j-で表され；Y²は式-(AA)_k-J^Cで表され；ここで品はアミノ酸を表し、これは保護形態であり得；J^NはN末端置換基であり；J^CはC末端置換基であり；そしてjおよびkは独立して0から50の自然数であり、ただしj＋kは0ではない。好ましい実施態様において、上記ハロゲン化ポリペプチドは式：Ｙ¹−ＮＲ^N−ＣＲ^HＲ^B−Ｃ（＝Ｏ）−Ｙ² で表され、ここでCは炭素原子であり；Nは窒素原子であり；0は酸素原子であり；R^Hは、-Cl、-Br、および-Iからなる群から選択されるハロ基；ならびに1個から10個の炭素原子のアルキル基を含むハロゲン含有アルキル基であり；R^BはHまたは1個から6個の炭素原子を有するアルキル基であり；R^HおよびR^Bは炭素原子C に結合し、これがキラリティーRまたはSを有し；R^NはHまたは1個から6個の炭素原子を有するアルキル基であり；Y¹は式J^N-(AA)_j-であり；Y²は式-(AA)_k-J^Cで表され；ここでAAはアミノ酸を表し、これは保護形態であり得；J^NはN末端置換基であり；J^CはC末端置換基であり；そしてjおよびkは独立して0から50の自然数であり、ただしj＋kは0ではない。他の好ましい実施態様において、R^Hは式-(CH₂)₂ Xで表されるハロゲン含有アルキル基であり、ここでzは1から10の自然数であり、そしてXはCl、Br、またはIである。より好ましくはR^Hは-CH₂Cl、-CH₂Br、-CH₂ CH₂Cl、および-CH₂CH₂Brからなる群から選択される。他の好ましい実施態様において、jおよびkは独立して0から10の自然数である。他の好ましい実施態様において、R^Bは-Hまたは- CH₃である。他の好ましい実施態様において、R^Nは-Hまたは-CH₃である。本発明のさらに他の局面は、環状ポリペプチドを反応物ポリペプチドから調製する方法に関する。上記環状ポリペプチドは少なくとも1つのポリペプチドループを有し、上記ループはチオエーテル結合を含む。上記反応物ポリペプチドは少なくとも1つのシステイン様アミノ酸(このシステイン様アミノ酸はチオール基を有する)、および少なくとも1つのセリン様アミノ酸(このセリン様アミノ酸はヒドロキシル基を有する)を有する。上記方法は：（ａ）セリン様アミノ酸のヒドロキシル基を、リンベースのハロゲン化試薬の補助の下にハロ基に変換してハロアラニン様アミノ酸を形成し、かくしてハロゲン化ポリペプチドを形成する工程；および（ｂ）ハロゲン化ポリペプチドのハロアラニン様アミノ酸のハロ基とハロゲン化ポリペプチドのシステイン様アミノ酸のチオール基とを塩基性条件下で分子内反応させて、チオール結合を形成する工程、を包含する。好ましい実施態様において、リンベースのハロゲン化試薬は、トリフェニルホスフィン二ハロゲン化物、亜リン酸トリフェニル二ハロゲン化物、トリフェニルホスフィンとハロ炭化水素化合物との混合物、および亜リン酸トリフェニルとハロ炭化水素化合物との混合物からなる群から選択される試薬を含む。他の好ましい実施態様において、塩基性条件は炭酸ナトリウムの添加によって提供される。他の好ましい実施態様において、反応物ポリペプチドは溶解形態で提供される。他の好ましい実施態様において、反応物ポリペプチドは担持形態で提供され;変換工程(a)はその担持反応物ポリペプチドを用いて行われ；工程(b)を行う前に、工程(a)で製造されるハロゲン化ポリペプチドをその支持体から切断して溶解ハロゲン化ポリペプチドを得；そして反応工程(b)はその溶解ハロゲン化ポリペプチドを用いて行われる。好ましい実施態様において、反応物ポリペプチドは担持形態で提供され；変換工程(a)をその担持反応物ポリペプチドを用いて行い、担持ハロゲン化ポリペプチドを得；そして反応工程(b)がその担持ハロゲン化ポリペプチドを用いて行われる。本発明のさらに他の局面は、ハロゲン化ポリペプチドを、反応物ポリペプチドから調製する方法に関する。上記ハロゲン化ポリペプチドは少なくとも1つのハロアラニン様アミノ酸を有し、上記ハロアラニン様アミノ酸はハロ基-Xを有し、ここでXはCl、Br、またはIであり；上記反応物ポリペプチドは少なくとも1つのセリン様アミノ酸を有し、このセリン様アミノ酸がヒドロキシル基を有する。上記方法は：（ａ）セリン様アミノ酸のヒドロキシル基を、リンベースのハロゲン化試薬の補助の下にハロ基に変換して、ハロアラニン様アミノ酸を得る工程を包含する。好ましい実施態様において、リンベースのハロゲン化試薬は、トリフェニルホスフィン二ハロゲン化物、亜リン酸トリフェニル二ハロゲン化物、トリフェニルホスフィンとハロ炭化水素化合物との混合物、および亜リン酸トリフェニルとハロ炭化水素化合物との混合物からなる群から選択される試薬を含む。他の好ましい実施態様において、反応物ポリペプチドに対してモル過剰の前記リンベースのハロゲン化試薬が使用される。他の好ましい実施態様において、セリン様アミノ酸のヒドロキシル基は保護形態である。より好ましくはtert-ブチルジメチルシリルエーテル基として保護された形態である。他の好ましい実施態様において、反応物ポリペプチドは溶解形態である。他の好ましい実施態様において、反応物ポリペプチドは担持形態である。明らかとなるように、本発明の1つの局面の好ましい特徴および性質は本発明の他の任意の局面に適用できる。図面の簡単な説明図1は、環状チオエーテルポリペプチドの概略的な合成ストラテジーを示す。図2は、実施例1に記載のようなN^α-Fmoc-3G3-EMTEおよび3G3-EMTE環状ペプチドの合成を示す反応スキームである。図3は、実施例2に記載のような3G3-EMTE環状ペプチドの合成を示す反応スキームである。図4は、実施例3に記載のような3G3-MMTE環状ペプチドの合成を示す反応スキームである。図5は、実施例5に記載のような2G3-EMTE環状ペプチドの合成を示す反応スキームである。図6は、実施例7に記載のようなl-2G3-METEおよびd-2G3-METE環状ペプチドの合成を示す反応スキームである。図7は、実施例8に記載のようなl-2G3-METE環状ペプチドの合成を示す反応スキームである。図8は、実施例11に記載のようなG3-EETE環状ペプチドの合成を示す反応スキームである。図9は、実施例14に記載のようなAG3-EMTE環状ペプチドの合成を示す反応スキームである。好適な実施態様の説明Ａ．環状ポリペプチド本発明は、少なくとも1つのポリペプチドループを有する環状ポリペプチドに関し、ここでポリペプチドループはチオエーテル結合を含む。用語「ポリペプチド」は本明細書において従来の意味で用いられ、アミノ酸のポリマーを意味する。ポリペプチドの繰り返し単位はアミノ酸から誘導され、そしてアミド結合(すなわち、ペプチド結合；-C(=O)NR^N-、ここでR^Nは窒素置換基であり、しばしば-Hである)を通じて化学的に連結する。ポリペプチドは線状、分枝、または環状であり得、ペプチド結合原子を含む隣接する原子の鎖(すなわちポリペプチド骨格)によって決定される。用語「直鎖状ポリペプチド」は本明細書において従来の意味で使用され、ポリペプチド骨格が線状であるポリペプチドを意味する。用語「分枝ポリペプチド」は本明細書において従来の意味で使用され、ポリペプチド骨格が少なくとも1つのポリペプチド分枝を含むポリペプチドを意味する。用語「環状ポリペプチド」は本明細書において従来の意味で使用され、ポリペプチド骨格が少なくとも1つのループを含むポリペプチドを意味する。用語「チオエーテル結合」は本明細書において従来の意味で使用され、1つの硫黄原子を伴う2つの炭化水素基の間の化学結合を意味し、そしてしばしばR-S-R で表される。本発明の環状ポリペプチドの多くは次式：で都合良く表され得る。上記式(I)において、A¹およびA²はアミノ酸フラグメントを表し(しばしば本明細書中、A^Fで表される)これにチオエーテル結合(すなわち-L¹-S-L²-)およびペプチドフラグメント(すなわち-X²-)の両者が結合し、かくしてポリペプチドループが形成される。アミノ酸フラグメントA¹およびA²はその会合するリンカー部分L¹ およびL²と共に、各々アミノ酸残基を表す。上記式(I)および(II)において、L¹およびL²はリンカー部分を表し、そしてSは 2つのリンカー部分に結合する硫黄原子を表し、かくしてチオエーテル結合(すなわち-L¹-S-L²-)が形成される。リンカー部分L¹およびL²は独立して二価の炭化水素部分である。用語「炭化水素部分」は本明細書において従来の意味で用いられ、水素(すなわち、H)および炭素(すなわち、C)から構成される化学部分を意味する。より好ましくは、リンカー部分L¹およびL²は独立して、1個から10個の炭素原子を有する二価の炭化水素部分である。より好ましくは、1個から10個の炭素原子を有する直鎖状、環状、またば分枝の二価のアルキル部分である。好ましいリンカー部分L¹およびL²は1個から6個の炭素原子を有する二価のアルキル部分であり、例えば-CH₂-(すなわちメチレン)、-CH₂CH₂-(すなわちエチレン)、および- CH₂CH₂CH₂-(すなわちn-プロピレン)が挙げられる。簡便のため、本明細書中では、チオエーテル結合-CH₂-S-CH₂-をMMTE(すなわちメチレン−メチレン−チオエーテル);チオエーテル結合-CH₂CH₂-S-CH₂-をEMTE(すなわちエチレン−メチレン− チオエーテル)；チオエーテル結合-CH₂-S-CH₂CH₂-をMETE(すなわちメチレン−エチレン−チオエーテル）;およびチオエーテル結合-CH₂CH₂-S-CH₂CH₂-をEETE(すなわちエチレン−エチレン−チオエーテル)と表す。上記式(II)において、C、Nおよび0は各々、炭素、窒素、および酸素原子を表し、そしてR¹およびR²は置換基を表し、これは独立して-Hまたは有機置換基である。好ましい実施態様において、R¹およびR²は独立して-Hまたは1個から6個の炭素原子を有するアルキル基である。他の好ましい実施態様において、R¹およびR² は独立して-Hまたは-CH₃である。さらに他の好ましい実施態様において、R¹およびR² は両方とも-Hである。これらの2つの炭素(すなわちR¹およびR²置換基と共に表示されたC)のキラリティーは独立してRまたはSである。上記式(II)において、R^N1およびR^N2は窒素置換基を表し、これは独立して-Hまたは有機置換基であり得る。有機置換基の例としては、1個から6個の炭素原子を有するアルキル基のような、N^α-アルキルαアミノ酸において見いだされるものが挙げられ、例えば-CH₃が挙げられる。他の有機置換基の例としては、後述するように、例えばプロリン(すなわちPro)、テトラヒドロイソキノリンカルボン酸( すなわちTic)、およびテトラヒドロカルボリンカルボン酸(すなわちTca)のような、環状αアミノ酸において見いだされるものが挙げられる。いくつかの実施態様において、置換基R¹，L¹、およびR^N1のうちの1つまたはそれ以上は一緒に、ひとつの多価置換基を形成し得る。同様に、置換基R²、L²、およびR^N2のうちの1つまたはそれ以上は一緒に、ひとつの多価置換基を形成し得る。このように、リンカー部分はポリペプチドに多重に結合し得る。例えば、アミノ酸A¹(またはA²)が4-メルカプトプロリンのようなアミノ酸由来である場合、置換基L¹およびR^N1は一緒にひとつの三価置換基(すなわち、-CH₂CH(-)CH₂-)を形成し、これがα炭素原子、アミノ窒素原子、およびチオエーテル硫黄原子に結合する。他の例において、アミノ酸A¹(またはA²)が1-アミノ-3-メルカプト-1-シクロペンタンカルボン酸(すなわち，環状ロイシンのアナログ、Ac₅c）のようなアミノ酸由来である場合、置換基L¹およびR¹は一緒に、ひとつの三価置換基(例えば、-CH₂CH(-)CH₂CH₂-)を形成し、これはα炭素原子(二重に結合)、およびチオエーテル硫黄原子に結合する。上記式(I)においてX¹、X²、X³は各々、式J^N-(AA)_p-、-(AA)_q-、および(AA)_r-J^C で表され得るペプチドフラグメントであり、ここでAAはアミノ酸；J^NはN末端基；J^CはC末端基；ならびにp、qおよびrは独立して、好ましくは0から約50、より好ましくは0から約20、さらにより好ましくは0から約10の自然数を表す。ポリペプチドフラグメント-(AA)_p-、-(AA)_q-、および(AA)_r-は、存在する場合(すなわち、p、q、および／またはrがゼロではない場合)、独立して線状、分枝、または環状であり得るが、好ましくは線状である。好ましい実施態様において、qは7以下であり、そしてポリペプチドループは9個以下のアミノ酸残基で構成される。好ましい実施態様において、アミノ酸AAはαアミノ酸である。アミノ酸AAは保護形態または非保護形態であり得る。上記N末端基J^Nは-Hまたは適切な末端基であり得る。N末端基J^Nの例としては、 -H(遊離アミノ基を与える)；カルボキシ基(すなわち、-C(=O)OR；カルバメート基を与える);およびカルボニル基(すなわち、-C(=O)R；アシルアミノ基を与える )が挙げられる。カルボキシ基の例としては、-Fmoc(すなわち、9-フルオレニルメチルオキシカルボニル)、-Boc(すなわち、tert-ブトキシカルボニル、-C(=O)O C(CH₃)₃)、-CBZ(すなわち、ベンジルオキシカルボニル、-C(=O)OCH₂C₆H₅)、および-2-Cl-CBZ(すなわち、2-クロロベンジルオキシカルボニル、-C(=O)OCH₂C₆H₄Cl )が挙げられる。カルボニル基の例としては、1個から10個の炭素原子のアルキルカルボニル、例えばアセチル(すなわち、-C(=O)CH₃)が挙げられる。上記C末端基J^Cは-Hまたは適切な末端基であり得る。C末端基J^Cの例としては、ヒドロキシル(すなわち、-OH；遊離カルボン酸基を与える)；アルコキシ基(すなわち、-OR；エステル基を与える)；アミノ基(すなわち、-NH₂、-NHR、NR₂；アミド基を与える)；およびヒドラジノ基(例えば、-NHNH₂；ヒドラジド基を与える) が挙げられる。アルコキシ基の例としては、1個から10個の炭素原子のアルコキシ基、例えば、メトキシ(すなわち-OCH₃)、エトキシ(すなわち-OCH₂CH₃)、シクロヘキシルオキシ(すなわち-OCHx；-OC₆H₁₁)、tert-ブトキシ(すなわち-OC(CH₃)₃ )；およびベンジルオキシ(すなわち-OCH₂C₆H₅)が挙げられる。アミノ基の例としては第一級アルキルアミノ基(すなわち、-NHR；第二級アミド基を与える)および第二級アルキルアミノ基(すなわち、-NR₂；第三級アミド基を与える)が挙げられ、ここでRは独立して1個から10個の炭素原子のアルキル基、例えばメチル(すなわち-CH₃)およびエチル(すなわち-CH₂CH₃)であり得る。用語「アミノ酸」は本明細書において従来の意味で用いられ、少なくとも1つのアミノ基(すなわち-NH₂または-NR^NH)および少なくとも1つのカルボキシル基( すなわち-COOH)を含む有機化学種を意味する。いくつかの場合において、アミノ基は置換アミノ基(すなわち-NR^NH、ここでR^Nは窒素置換基)であり得る(例えばプロリンの場合)。簡便のため、本明細書中、アミノ酸をしばしばAA、またはH-AA- OH と表し、ここで最初の-Hはアミノ基の一部であり、そして最後の-OHはカルボン酸基の一部である。アミノ酸はしばしば、その構造によって都合良くさらにクラス分けされ得、例えばαアミノ酸、ベータアミノ酸などとクラス分けされる。用語「αアミノ酸」は本明細書において従来の意味で用いられ、少なくとも1 つのカルボン酸基(すなわち-COOH)および少なくとも1つのアミノ基(すなわち-NH₂ または-NR^NH)が1つの炭素原子(α炭素とよぶ)に直接結合したアミノ酸を意味し、そして簡便にはHNR^N-CR^AR^B-COOHと表され得、ここでR^N、R^A、およびR^Bは置換基である。置換基R^N、R^A、およびR^Bのうち2つ以上は、一緒に1つの多価置換基を形成し得る。例えば、環状αアミノ酸プロリンにおいて、R^NおよびR^Aは一緒に1 つの二価置換基-CH₂CH₂CH₂-を形成し、そしてR^Bは-Hである。置換基R^AおよびR^Bが異なる場合、α炭素はキラル(すなわちRまたはS)となり、そしてそのαアミノ酸は光学活性となる。例えば、そのR^AおよびR^Bが両方とも-H であるグリシンは光学活性ではないが、そのR^Aが-CH₃、およびR^Bが-Hであるアラニンは光学活性であり、そしてd-体またはl-体であり得、各々d-アラニンまたは l-アラニンと表される。d-アラニンのα炭素はR立体配置であり、他方l-アラニンのα炭素はS立体配置である。多様な公知のαアミノ酸のなかで、わずか約20種が天然由来である。天然αアミノ酸はしばしばHNR^N-CHR-COOH(R^BがHなので)と表され、ここでR^Nは窒素置換基を表し、そしてRはアミノ酸置換基(しばしばアミノ酸側鎖とよばれる)を表す。窒素置換基R^Nはすべての天然αアミノ酸について-Hであり、プロリンだけが例外である(ここでR^NおよびRは一緒に二価置換基-CH₂CH₂CH₂-を形成する)。グリシンを除いて、これらの20の天然αアミノ酸のすべては光学活性であり、そしてl-体である。アミノ酸置換基の例としては、20種の天然αアミノ酸において見いだされる置換基が挙げられ、例えば、-H(グリシンの場合)、-CH₃(アラニンの場合)、 -CH₂OH(セリンの場合)、-CH(CH₃)OH(トレオニンの場合)、-CH₂SH(システインの場合)、および-CH₂C₆H₅(フェニルアラニンの場合)が挙げられる。アミノ酸置換基の他の例としては、天然由来アミノ酸において見いだされる置換基と構造的に類似の置換基が挙げられ、例えば、-CH₂CH₂OH(ホモセリンの場合)および-CH₂CH₂ SH(ホモシステインの場合)が挙げられる。簡便のため、天然アミノ酸はしばしば3文字表記または1文字表記で表される。例えば、システインはしばしばトCys-OH、またはH-C-OHと略記され、そしてセリンはしばしばH-Ser-OHまたはH-S-OHと略記され、ここで-H基はアミノ基(すなわち-NH₂または-NR^NH)の一部であり、そして-OH基はカルボン酸基(すなわち-COOH) の一部である。しばしば-Hおよび-OH基は、例えばCys、C；およびSer、Sのように単純化のため省略される。20種の天然アミノ酸についての3文字表記および1文字表記は当該分野で十分に確立されており、同じ慣例を本明細書において使用する。本明細書において、ホモセリンについての対応する「1文字表記」はHsであり、ホモシステインについての対応する「1文字表記」はHcである。 αカルボン酸基(すなわち-COOH)およびαアミノ基(すなわち-NH₂または-NR^NH) に加えて、多くのアミノ酸がさらなる官能基を有する。アミノ酸置換基Rが-(CH₂ )₄NH₂であるリジンはさらにアミノ基(すなわち-NH₂)を有する。アミノ酸置換基R が各々-CH₂COOHおよび-(CH₂)₂COOHであるアスパラギン酸およびグルタミン酸は、各々さらにカルボン酸基(すなわち-COOH)を有する。アミノ酸置換基Rが-CH₂OH であるセリンはさらに第一級ヒドロキシル基(すなわち-OH)を有する。アミノ置換基Rが-CH(CH₃)OHであるトレオニンはさらに第二級ヒドロキシル基(すなわち-O H)を有する。アミノ酸置換基Rが-CH₂SHであるシステインはさらにチオール基(すなわち-SH)を有する。他のアミノ酸は、チオエーテル基(例えばメチオニンにおいて)、フェノール基(例えばチロシンにおいて)、アミド基(例えばグルタミンにおいて)、およびヘテロ環式基(例えばヒスチジンにおいて)のような他のさらなる官能基を有する。 20種の天然アミノ酸に加えて、いくつかの他のクラスのαアミノ酸がまた公知である。これらの他のクラスの例としては、d-アミノ酸、N^α-アルキルアミノ酸、α−アルキルアミノ酸、環状アミノ酸、キメラアミノ酸、および種々のアミノ酸が挙げられる。これらの非天然アミノ酸は、生理活性ポリペプチドを改変して、タンパク質加水分解に対する耐性を増強するため、および／またはコンホメーション的拘束を与えて生物学的活性を向上させるために、広く使用されてきた(H rubyら、Biochem ．J．(1990)268:249-262;HrubyおよびBonner、Methods in Mole cular Biology （1994）35：201-240)。最も普通のN^α-アルキルアミノ酸は、N ^α -メチルグリシン(すなわちN^αMeGly)、N^α-メチルアラニン(すなわちN^αMeAla )、およびN^α-メチルリジン(すなわちN^αMeLys)のようなN^α-メチルアミノ酸である。αアルキルアミノ酸の例としては、αアミノイソ酪酸(すなわちAib)、ジエチルグリシン(すなわちDeg)、ジフェニルグリシン(すなわちDpg)、αメチルプロリン(すなわち(αMe)Pro)、およびαメチルバリン(すなわち(αMe)Val)が挙げられる(Balaram，Pure & Appl ．Chem.（1992）64:1061-1066;Tonioloら，Biopol ymers （1993）33:1061-1072;Hindsら，J ．Med．Chem.（1991）34:1777-1789)。環状アミノ酸の例としては、1-アミノ-1-シクロプロパンカルボン酸(すなわちAc₃ c)、1-アミノ-1-シクロペンタンカルボン酸(すなわちシクロロイシン、Ac₅c)、アミノインダンカルボン酸(すなわちInd)、テトラヒドロイソキノリンカルボン酸(すなわちTic)、およびテトラヒドロカルボリンカルボン酸(すなわちTca)が挙げられる(Toniolo，C.，Int ．J．Peptide Protein Res.（1990）35:287-300;Bur gess，K.，Ho，K.K.，およPal，B．J ．Am．Chem．Soc.（1995）117:3808-3819) 。キメラアミノ酸の例としては、システインとバリンとの組み合わせであるペニシラミン(すなわちPen)、およびプロリンとホモシステインとの組み合わせである4-メルカプトプロリン(すなわちMpt)が挙げられる。種々のαアミノ酸の例としては、オルニチン(すなわちOrn)、2-ナフチルアラニン(すなわち2-Nal)、フェニルグリシン(すなわちPhg)、t-ブチルグリシン(すなわちtBug)、シクロヘキシルアラニン(すなわちCha)、およびαアミノ-2-チオフェンプロピオン酸(すなわちThi)が挙げられる。αアミノ酸に加えて、ベータアミノ酸のような他のアミノ酸もまた本発明に用いられ得る。これらの他のアミノ酸の例としては、2-アミノ安息香酸(すなわちAbz)、β-アミノプロパン酸(すなわちβ-Apr)、γ-アミノ酪酸(すなわちγ-Abu)、および6-アミノヘキサン酸(すなわちε-Ahx)が挙げられる。アミノ酸含有種(例えばポリペプチド)の合成および操作において、アミノ酸の特定の官能基(例えば、αアミノ基、αカルボン酸基、および側鎖官能基)を「保護」することがしばしば必要とされる。広範囲の保護基およびストラテジーが当該分野で公知である。例えば、αアミノ基(すなわち-NH₂)は、9-フルオレニルメチルオキシカルボニル基(すなわちFmoc;−NHFmocとして)、tert-ブトキシカルボニル基(すなわち-C(=O)OC(CH₃)₃、Boc；-NHBocとして)、あるいはベンジルオキシカルボニル基(-C(=O)OCH₂C₆H₅)、CBZ；-NHCBZとして)で保護され得る。アルギニンのグアニジノ基(すなわち-NHC(=NH)NH₂)は、2,2,5,7,8-ペンタメチルクロマン -6-スルホニル基(すなわちPmc；-NHC(=NH)NH-Pmcとして)、4-メトキシ-2,3,6-トリメチルベンゼンスルホニル基(すなわちMtr；-NHC(=NH)NH-Mtrとして)またはメシチレン-2-スルホニル基(すなわちMts;-NHC(=NH)NH-Mtsとして)で保護され得る。アスパラギンおよびグルタミンのカルボキサミド基(すなわち-CONH₂)は、トリチル基(すなわち-C(C₆H₅)₃、Tr；-CONHTrとして)で保護され得る。アスパラギン酸およびグルタミン酸の側鎖カルボン酸基は、t-ブチル基(すなわち-C(CH₃)₃、t Bu；-COOtBuとして)またはシクロヘキシル基(すなわち-C₆H₁₁、cHx；-COOcHxとして)で保護され得る。さらに、末端カルボン酸基のようなカルボン酸基は、メチル基(すなわち-CH₃、-COOCH₃として)、エチル基(すなわち-CH₂CH₃、-COOCH₂CH₃ として)、またはベンジル基(すなわち-CH₂C₆H₅、-COOCH₂C₆H₅として)で保護され得る。システインのチオール基(すなわち-SH)は、t-ブチルチオ基(すなわち-S C(CH₃)₃、tBuS；-SStBuとして)またはトリチル基(すなわち-C(C₆H₅)₃、Tr；-Str として)で保護され得る。ヒスチジンのイミダゾール基は、トリチル基(すなわち -C(C₆H₅)₃、Tr)で保護され得る。リジンのεアミノ基(すなわちNH₂)は、tert-ブトキシカルボニル基(すなわち-C(=O)OC(CH₃)₃、Boc、-NHBocとして)、ベンジルオキシカルボニル基(すなわち-C(=O)OCH₂C₆H₅、CBZ、-NHCBZとして)、または2- クロロベンジルオキシカルボニル基(すなわち-C(=O)OCH₂C₆H₄Cl、2-Cl-CBZ、-NH -2-Cl-CBZとして)で保護され得る。ホモセリン、セリンおよびトレオニンのヒドロキシル基(すなわち-OH)は、t-ブチル基(すなわち-C(CH₃)₃、tBu；-OtBuとして )、トリチル基(すなわち-C(C₆H₅)₃、Tr;-OTrとして)、またはt-ブチルジメチルシリル基(すなわち-Si(CH₃)₂(C(CH₃)₃)、TBDMS；-OTBDMSとして)で保護され得る。トリプトファンのインドール窒素は、トリチル基(すなわち-C(C₆H₅)₃、Tr)で保護され得る。チロシンのヒドロキシル基(すなわち-OH)は、トリチル基(すなわち-C(C₆H₅)₃、Tr；-OTrとして)で保護され得る。ポリペプチドのペプチド結合(すなわち-C(=O)-NR^N-)は、簡便には、アミノ酸のカルボン酸基(すなわち-COOH)と他のアミノ酸のアミノ基(すなわち-NR^NH)との反応によって形成される化学結合であると考えられる。この考え方で、2つのアミノ酸、セリンおよびシステインのポリペプチド(例えば「2-mer」)は(セリンのカルボン酸基とシステインのアミノ基とがペプチド結合を形成した場合)、簡便にはH -Ser-Cys-OHまたはH-S-C-OH、あるいはより単純にはSer-Cys、S-C、またはSCと表され得る。ポリペプチドのアミノ酸部分はしばしばアミノ酸残基と呼ばれる。本発明の好ましい環状ポリペプチドの例には、ジスルフィドポリペプチドAGPC LGVLGKLCPG(3G3と表す)のチオエーテルアナログである上記式(II)で表されるポリペプチドが包含され、ここで： X¹はAla-Gly-Pro-(すなわちAGP-であり、そしてpが3)；X²は-Leu-Gly-Val-Leu -Gly-Lys-Leu-(すなわちLGVLGKL-であり、そしてqが7)；X³は-Pro-Gly(すなわち -PGであり、そしてrが2)；L¹は-CH₂-；L²は-CH₂-；R¹は-H；およびR²は-Hである (本明細書中、化合物3G3-MMTEと表す)。置換基R¹を有する炭素のキラリティーは d-体とl-体との混合である。置換基R²を有する炭素のキラリティーはl-体である。 X¹はAla-Gly-Pro-(すなわちAGP-であり、そしてpが3)；X²は-Leu-Gly-Val-Leu -Gly-Lys-Leu-(すなわちLGVLGKL-であり、そしてqが7)；X³は-Pro-Gly(すなわち -PGであり、そしてrが2)；L¹は-CH₂CH₂-；L²が-CH₂-;R¹は-H；およびR²は-Hである(本明細書中、化合物3G3-EMTEと表す)。置換基R¹およびR²を有する炭素のキラリティーはl-体である。 X¹はAla-Gly-Pro-(すなわちAGP-であり、そしてpが3)；X²は-Leu-Gly-Val-Leu -Gly-Lys-Leu-(すなわちLGVLGKL-であり、そしてqが7)；X³は-Pro-Gly(すなわち -PGであり、そしてrが2)；L¹は-CH₂-；L²は-CH₂CH₂-；R¹は-H；およびR²は-Hである(本明細書中、化合物3G3-METEと表す)。置換基R¹およびR²を有する炭素のキラリティーはl-体である。 X¹はAla-Gly-Pro-(すなわちAGP-であり、そしてpが3)；X²は-Leu-Gly-Val-Leu -Gly-Lys-Leu-(すなわちLGVLGKL-であり、そしてqが7)；X³は-Pro-Gly(すなわち -PGであり、そしてrが2)；L¹は-CH₂CH₂-；L²は-CH₂CH₂-R¹は-H；およびR²は-Hである(本明細書中、化合物3G3-EETEと表す)。置換基R¹およびR²を有する炭素のキラリティーはl-体である。本発明の好ましい環状ポリペプチドの例には、ジスルフィドポリペプチドGPCL GVLGKLCPG(2G3と表す)のチオエーテルアナログである上記式(II)で表されるポリペプチドが包含され、ここで： X¹はGly-Pro-(すなわちGP-であり、そしてpが2)；X²は-Leu-Gly-Val-Leu-Gly- Lys-Leu-(すなわち、-LGVLGKL-であり、そしてqが7)；X³は-Pro-Gly(すなわち-P Gであり、そしてrが2）;L¹は-CH₂-；L²は-CH₂-；R¹は-H；およびR²は-Hである( 本明細書中、化合物2G3-MMTEと表す)。置換基R¹を有する炭素のキラリティーはd -体とl-体との混合である。置換基R²を有する炭素のキラリティーはl-体である。 X¹はGly-Pro-(すなわちGP-であり、そしてpが2)；X²は-Leu-Gly-Val-Leu-Gly- Lys-Leu-(すなわちLGVLGKL-であり、そしてqが7)；X³は-Pro-Gly(すなわち-PGであり、そしてrが2)；L¹は-CH₂CH₂-；L²が-CH₂-；R¹は-H；およびR²は-Hである( 本明細書中、化合物2G3-EMTEと表す)。置換基R¹およびR²を有する炭素のキラリティーはl-体である。 X¹はGly-Pro-(すなわちGP-であり、そしてpが2)；；X²は-Leu-Gly-Val-Leu-Gl y-Lys-Leu-(すなわちLGVLGKL-であり、そしてqが7)；X³は-Pro-Gly(すなわち-PG であり、そしてrが2)；L¹は-CH₂−；L²は-CH₂CH₂-；R¹は-H；およびR²は-Hである(本明細書中、化合物2G3-METEと表す)。置換基R¹を有する炭素のキラリティーはd-体またはl-体である。置換基R²を有する炭素のキラリティーはl-体である。 X¹はGly-Pro-(すなわちGP-であり、そしてpが2)；；X²は-Leu-Gly-Val-Leu-Gl y-Lys-Leu-(すなわちLGVLGKL-であり、そしてqが7)；X³は-Pro-Gly(すなわち-PG であり、そしてrが2)；L¹は-CH₂CH₂-；L²は-CH₂CH₂-R¹は-H；およびR²は-Hである(本明細書中、化合物2G3-EETEと表す)。置換基R¹およびR²を有する炭素のキラリティーはl-体である。本発明の好ましい環状ポリペプチドの例には、ジスルフィドポリペプチドCLGV LGKLC(G3と表す)のチオエーテルアナログである上記式(II)で表されるポリペプチドが包含され、ここで： X¹はH-(すなわちpが0)；X²は-Leu-Gly-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-(すなわち、-LGV LGKL-であり、そしてqが7)；X³は-NH₂(すなわちrが0)；L¹は-CH₂-；L²は-CH₂-； R¹は-H；およびR²は-Hである(本明細書中、化合物G3-MMTEと表す)。置換基R¹を有する炭素のキラリティーはd-体とl-体との混合である。置換基R²を有する炭素のキラリティーはl-体である。 X¹はH-(すなわちpが0)；X²は-Leu-Gly-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-(すなわち、-LGV LGKL-であり、そしてqが7)；X³は-NH₂(すなわちrが0)；L¹は-CH₂CH₂-；L²が-CH₂ -；R¹は-H；およびR²は-Hである(本明細書中、化合物G3-EMTEと表す)。置換基R¹ およびR²を有する炭素のキラリティーはl-体である。 X¹はH-(すなわちpが0)；X²は-Leu-Gly-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-(すなわち、-LGV LGKL-であり、そしてqが7)；X³は-NH₂(すなわちrが0)；L¹は-CH₂-；L²は-CH₂CH₂ -；R¹は-H；およびR²は-Hである(本明細書中、化合物G3-METEと表す)。置換基R¹ を有する炭素のキラリティーはd-体またはl-体である。置換基R²を有する炭素のキラリティーはl-体である。 X¹はH-(すなわちpが0)；X²は-Leu-Gly-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-(すなわち、-LGV LGKL-であり、そしてqが7)；X³は-NH₂(すなわちrが0)；L¹は-CH₂CH₂-；L²は-CH₂ CH₂-R¹は-H；およびR²は-Hである(本明細書中、化合物G3-EETEと表す)。置換基R¹ およびR²を有する炭素のキラリティーはl-体である。本発明の好ましい環状ポリペプチドの例には、ジスルフィドポリペプチドCLGV LAKLC(AG3と表す)のチオエーテルアナログである上記式(II)で表されるポリペプチドが包含され、ここで： X¹はH-(すなわちpが0)；X²は-Leu-N^αMeGly-d-Val-d-Leu-Ala-Lys-Leu-(すなわち、-L(N^αMe-G)(d-V)(d-L)AKL-であり、そしてqが7)；X³は-NH₂(すなわちrが 0)；L¹は-CH₂-;L²は-CH₂-；R¹は-H；およびR²は-Hである(本明細書中、化合物AG 3-MMTEと表す)。置換基R¹を有する炭素のキラリティーはd-体とl-体との混合である。置換基R²を有する炭素のキラリティーはl-体である。 X¹はH-(すなわちpが0)；X²は-Leu-N^αMeGly-d-Val-d-Leu-Ala-Lys-Leu-(すなわち、-L(N^αMe-G)(d-V)(d-L)AKL-であり、そしてqが7)；X³は-NH₂(すなわちrが 0)；L¹は-CH₂CH₂-；L²が-CH₂-；R¹は-H；およびR²は-Hである(本明細書中、化合物AG3-EMTEと表す)。置換基R¹およびR²を有する炭素のキラリティーはl-体である。 X¹はH-(すなわちpが0)；X²は-Leu-N^αMeGly-d-Val-d-Leu-Ala-Lys-Leu-(すなわち、-L(N^αMe-G)(d-V)(d-L)AKL-であり、そしてqが7)；X³は-NH₂(すなわちrが 0)；L¹は-CH₂-；L²は-CH₂CH₂-；R¹は-H；およびR²は-Hである(本明細書中、化合物AG3-METEと表す)。置換基R²を有する炭素のキラリティーはl-体である。 X¹はH-(すなわちpが0)；X²は-Leu-N^αMeGly-d-Val-d-Leu-Ala-Lys-Leu-(すなわち、-L(N^αMe-G)(d-V)(d-L)AKL-であり、そしてqが7)；X³は-NH₂(すなわちrが 0)；L¹は-CH₂CH₂-；L²は-CH₂CH₂-R¹は-H；およびR²は-Hである(本明細書中、化合物AG3-EETEと表す)。置換基R¹およびR²を有する炭素のキラリティーはl-体である。本発明の好ましい環状ポリペプチドの例には、ジスルフィドポリペプチドGPCL ILAPDRC(CB10と表す)のチオエーテルアナログである上記式(II)で表されるポリペプチドが包含され、ここで： X¹はGly-Pro-(すなわちGP-であり、そしてpが2)；X²は-Leu-Ile-Leu-Ala-Pro- Asp-Arg-(すなわち、-LILAPDR-であり、そしてqが7)；X³は-NH₂(すなわちrが0) ；L¹は-CH₂-；L²は-CH₂-；R¹は-H；およびR²は-Hである(本明細書中、化合物CB1 0-MMTEと表す)。置換基R¹を有する炭素のキラリティーはd-体とl-体との混合である。置換基R²を有する炭素のキラリティーはl-体である。 X¹はGly-Pro-(すなわちGP-であり、そしてpが2)；X²は-Leu-Ile-Leu-Ala-Pro- Asp-Arg-(すなわち、-LILAPDR-であり、そしてqが7)；X³は-NH₂(すなわちrが0) ；L¹は-CH₂CH₂-；L²が-CH₂-；R¹は-H；およびR²は-Hである(本明細書中、化合物 CB10-EMTEと表す)。置換基R¹およびR²を有する炭素のキラリティーはl-体である。 X¹はGly-Pro-(すなわちGP-であり、そしてpが2)；X²は-Leu-Ile-Leu-Ala-Pro- Asp-Arg-(すなわち、-LILAPDR-であり、そしてqが7)；X³は-NH₂(すなわちrが0) ；L¹は-CH₂-；L²は-CH₂CH₂-；R¹は-H；およびR²は-Hである(本明細書中、化合物 CB10-METEと表す)。置換基R¹およびR²を有する炭素のキラリティーはl-体である。 X¹はGly-Pro-(すなわちGP-であり、そしてpが2)；X²は-Leu-Ile-Leu-Ala-Pro- Asp-Arg-(すなわち、-LILAPDR-であり、そしてqが7)；X³は-NH₂(すなわちrが0) ；L¹は-CH₂CH₂-；L²は-CH₂CH₂-R¹は-H；およびR²は-Hである(本明細書中、化合物CB10-EETEと表す)。置換基R¹およびR²を有する炭素のキラリティーはl-体である。Ｂ．ハロゲン化ポリペプチド本発明はまた、少なくとも1つのハロアラニン様アミノ酸を有するハロゲン化ポリペプチドに関し、このハロアラニン様アミノ酸はハロ基を有する。ハロゲン化ポリペプチドは遊離形態(例えば、固体として、あるいは溶液中)であり得、あるいは担持形態(例えば、支持体に付着)であり得る。用語「ハロアラニン様アミノ酸」は本明細書において、式NHR^N-CR^HR^B-COOH(遊離アミノ酸として)あるいはNR^N-CR^HR^B-C(=O)-(ポリペプチド鎖の一部の場合)として表され得、ここでR^N、R^HおよびR^Bは置換基である。置換基R^NおよびR^Bは、R^N ¹ ／R^N2およびR¹／R²について各々、上記で定義したとおりであり、そして独立して-Hまたは有機置換基である。置換基R^N、R^HおよびR^Bの2つ以上が一緒に1つの多価置換基を形成し得る。置換基R^H(あるいはR^HならびにR^NおよびR^Bの1つ以上を取り込む1つの多価置換基)はハロゲン含有基である。用語「ハロゲン含有基」は本明細書において、ハロ基(すなわち-X、ここでXはCL、Br、またはI)を含む有機部分をいう。ハロアラニン様アミノ酸のα炭素はRまたはSのキラリティーを有し得る。いくつかの好ましい実施態様において、R^Hはハロゲン含有アルキル基である。用語「ハロゲン含有アルキル基」は本明細書において、ハロ基(すなわち-X、ここでXはCL、Br、またはI)およびアルキル基を含む有機部分をいう。好ましいハロ基の例はブロモ基(すなわち-Br)およびクロロ基(すなわち-Cl)である。アルキル部分は好ましくは1個から10個の炭素原子、より好ましくは1個から5個の炭素原子、さらにより好ましくは1個から3個、最も好ましくは1個から2個の炭素原子を含む。アルキル部分は、線状、環状、または分枝であり得るが、好ましくは線状である。好ましいハロ含有アルキル基の例としては、一般式-(CH₂)_zXのものが挙げられ、ここでzは1から10、好ましくは1から5、より好ましくは1から3、最も好ましくは1から2の自然数であり、そしてXはCL、Br、またはIである。好ましいハロ含有アルキル基の例としては-CH₂Cl、-CH₂Br、-CH₂CH₂Cl、および-CH₂CH₂Br が挙げられる。他の好ましいハロ含有アルキル基の例としては-CH(CH₃)Clおよび CH(CH₃)Brが挙げられる。本発明の多くのハロゲン化ポリペプチドは次式：Ｙ¹−ＡＡ^H−Ｙ² (III) Ｙ¹−ＮＲ^N−ＣＲ^HＲ^B−Ｃ（＝Ｏ）−Ｙ² (IV) で都合良く表され得る。上記式(III)および(IV)において、C、N、およびOは各々、炭素、窒素、および酸素原子を表し；上述のようにAA^Hはハロアラニン様アミノ酸を表し、そしてY¹ およびY²はペプチドフラグメントを表す。Y¹およびY²は便利には各々、式J^N-(AA)_j -および(AA)_k-J^cで表され得、ここでAAはアミノ酸；J^Nは上記で定義したようなN 末端基；J^Cは上記で定義したようなC末端基;ならびにjおよびkは独立して、好ましくは0から約50、より好ましくは0から約20、さらにより好ましくは0から10の自然数を表す。ただし、j＋kはゼロではない。ポリペプチドフラグメント-(AA)_j -および(AA)_k-は、存在する場合（すなわち、jおよび／またはkがゼロではない場合)、独立して線状、分枝、または環状であり得るが、好ましくは線状である。好ましい実施態様において、アミノ酸AAはαアミノ酸である。アミノ酸AAは保護形態または非保護形態であり得る。本発明の好ましいハロゲン化ポリペプチドの例には、ポリペプチドAGPSLGVLGK LCPG(X-3G3と表す)のハロアナログを有効に含む上記式(IV)で表されるポリペプチドが包含され、ここで： Y¹はAla-Gly-Pro-(すなわちAGP-であり、そしてjが3)；Y²は-Leu-Gly-Val-Leu -Gly-Lys-Leu-Cys-Pro-Gly-(すなわち-LGVLGKLCPG-であり、そしてkが10)；R^Hは -CH₂X、ここでXはCl、Br、またはI；およびR^Bは-Hである。置換基R^HおよびR^Bを有する炭素のキラリティーはl-体である。 Y¹はAla-Gly-Pro-(すなわちAGP-であり、そしてｊが3)；Y²は-Leu-Gly-Val-Le u-Gly-Lys-Leu-Cys-Pro-Gly-(すなわち-LGVLGKLCPG-であり、そしてkが10)；R^H は-CH₂CH₂X、ここでXはCl、Br、またはI；およびR^Bは-Hである。置換基R^Hおよび R^Bを有する炭素のキラリティーはl-体である。 Y¹はAla-Gly-Pro-(すなわちAGP-であり、そしてJが3)；Y²は-Leu-Gly-Val-Leu -Gly-Lys-Leu-ホモシステイン-Pro-Gly-(すなわち-LGVLGKLHcPG-であり、そして kが10)；R^Hは-CH₂X、ここでXはCl、Br、またはI；およびR^Bは-Hである。置換基R^H およびR^Bを有する炭素のキラリティーはl-体である。 Y¹はAla-Gly-Pro-(すなわちAGP-であり、そしてjが3)；Y²は-Leu-Gly-Val-Leu -Gly-Lys-Leu-ホモシステイン-Pro-Gly-(すなわち-LGVLGKLHcPG-であり、そして kが10)；R^Hは-CH₂CH₂X、ここでXはCl、Br、またはI；およびR^Bは-Hである。置換基R^HおよびR^Bを有する炭素のキラリティーはl-体である。本発明の好ましいハロゲン化ポリペプチドの例には、ポリペプチドGPSLGVLGKL CPG(X-2G3と表す)のハロアナログを有効に含む上記式(IV)で表されるポリペプチドが包含され、ここで： Y¹はGly-Pro-(すなわちGP-であり、そしてjが2)；Y²は-Leu-Gly-Val-Leu-Gly- Lys-Leu-Cys-Pro-Gly-(すなわち-LGVLGKLCPG-であり、そしてkが10)；R^Hは-CH₂X 、ここでXはCl、Br、またはI；およびR^Bは-Hである。置換基R^HおよびR^Bの炭素を有するキラリティーはl-体である。 Y¹はGly-Pro-(すなわちGP-であり、そしてjが2)；Y²は-Leu-Gly-Val-Leu-Gly- Lys-Leu-Cys-Pro-Gly-(すなわち-LGVLGKLCPG-であり、そしてkが10)；R^Hは-CH₂C H₂X、ここでXはCl、Br、またはI；およびR^Bは-Hである。置換基R^HおよびR^Bを有する炭素のキラリティーはl-体である。 Y¹はGly-Pro-(すなわちGP-であり、そしてjが2)；Y²は-Leu-Gly-Val-Leu-Gly- Lys-Leu-ホモシステイン-Pro-Gly-(すなわち-LGVLGKLHcPG-であり、そしてkが10 )；R^Hは-CH₂X、ここでXはCl、Br、またはI；およびR^Bは-Hである。置換基R^HおよびR^Bを有する炭素のキラリティーはl-体である。 Y¹はGly-Pro-(すなわちGP-であり、そしてjが2)；Y²は-Leu-Gly-Val-Leu-Gly- Lys-Leu-ホモシステイン-Pro-Gly-(すなわち-LGVLGKLHcPG-であり、そしてkが10 )；R^Hは-CH₂CH₂X、ここでXはCl、Br、またはI；およびR^Bは-Hである。置換基R^H およびR^Bを有する炭素のキラリティーはl-体である。 Y¹はGly-Pro-Cys-Leu-Gly-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-(すなわちGPCLGVLGKL-であり、そしてjが10)；Y²は-Pro-Gly-(すなわち-PGであり、そしてkが2)；R^Hは-CH₂CH₂ X、ここでXはCl、Br、またはI；およびR^Bは-Hである。置換基R^HおよびR^Bを有する炭素のキラリティーはl-体である。本発明の好ましいハロゲン化ポリペプチドの例には、ポリペプチドSLGVLGKLC( X-G3と表す)のハロアナログを有効に含む上記式(IV)で表されるポリペプチドが包含され、ここで： Y¹はH-(すなわちjが0)；Y²は-Leu-Gly-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Cys-NH₂(すなわち-LGVLGKLC-NH₂であり、そしてkが8)；R^Hは-CH₂X、ここでXはCl、Br、またはI ；およびR^Bは-Hである。置換基R^HおよびR^Bの炭素を有するキラリティーはl-体である。 Y¹はH-(すなわちjが0)；Y²は-Leu-Gly-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Cys-NH₂(すなわち- LGVLGKLC-NH₂であり、そしてkが8)；R^Hは-CH₂CH₂X、ここでXはCl、Br、またはI ；およびR^Bは-Hである。置換基R^HおよびR^Bの炭素を有するキラリティーはl-体である。 Y¹はH-(すなわちjが0)；Y²は-Leu-Gly-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-ホモシステイン- NH₂(すなわち-LGVLGKLHc-NH₂であり、そしてkが8)；R^Hは-CH₂X、ここでXはCl、B r、またはI；およびR^Bは-Hである。置換基R^HおよびR^Bを有する炭素のキラリティーはl-体である。 Y¹はH-(すなわちjが0)；Y²は-Leu-Gly-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-ホモシステイン- NH₂(すなわち-LGVLGKLHc-NH₂であり、そしてkが8)；R^Hは-CH₂CH₂X、ここでXはCl 、Br、またはI；およびR^Bは-Hである。置換基R^HおよびR^Bを有する炭素のキラリティーはl-体である。本発明の好ましいハロゲン化ポリペプチドの例には、ポリペプチドSLGVLAKLC( X-AG3と表す)のハロアナログを有効に含む上記式(IV)で表されるポリペプチドが包含され、ここで： Y¹はH-(すなわちjが0)；Y²は-Leu-N^αMeGly-d-Val-d-Leu-Ala-Lys-Leu-Cys-NH₂ (すなわち-L(N^αMe-G)(d-V)(d-L)AKLCであり、そしてkが8)；R^Hは-CH₂X、ここでXはCl、Br、またはI；およびR^Bは-Hである。置換基R^HおよびR^Bの炭素を有するキラリティーはl-体である。 Y¹はH-(すなわちjが0)；Y²は-Leu-N^αMeGly-d-Val-d-Leu-Ala-Lys-Leu-Cys-NH₂ (すなわち-L(N^αMe-G)(d-V)(d-L)AKLCであり、そしてkが8)；R^Hは-CH₂CH₂X、ここでXはCl、Br、またはI；およびR^Bは-Hである。置換基R^HおよびR^Bを有する炭素のキラリティーはl-体である。 Y¹はH-(すなわちjが0)；Y²は-Leu-N^αMeGly-d-Val-d-Leu-Ala-Lys-Leu-ホモシステイン-NH₂(すなわち-L(N^αMe-G)(d-V)(d-L)AKLHcであり、そしてkが8)；R^Hは -CH₂X、ここでXはCl、Br、またはI；およびR^Bは-Hである。置換基R^HおよびR^Bを有する炭素のキラリティーはl-体である。 Y¹はH-(すなわちjが0)；Y²は-Leu-N^αMeGly-d-Val-d-Leu-Ala-Lys-Leu-ホモシステイン-NH₂(すなわち-L(N^αMe-G)(d-V)(d-L)AKLHc-であり、そしてkが8)；R^H は-CH₂CH₂X、ここでXはCl、Br、またはI；およびR^Bは-Hである。置換基R^Hおよび R^Bを有する炭素のキラリティーはl-体である。本発明の好ましいハロゲン化ポリペプチドの例には、ポリペプチドGPSLILAPDR C(X-CB10と表す)のハロアナログを有効に含む上記式(IV)で表されるポリペプチドが包含され、ここで： Y¹はGly-Pro-(すなわちGP-であり、そしてjが2)；Y₂は-Leu-Ile-Leu-Ala-Pro- Asp-Arg-Cys-NH₂(すなわち-LILAPDRC-NH₂であり、そしてkが8)；R^Hは-CH₂X、ここでXはCl、Br、またはI；およびR^Bは-Hである。置換基R^HおよびR^Bの炭素を有するキラリティーはl-体である。 Y¹はGly-Pro-(すなわちGP-であり、そしてjが2)；Y²は-Leu-Gly-Val-Leu-Gly- Lys-Leu-Cys-NH₂(すなわち--LILAPDRC-NH₂であり、そしてkが8)；R^Hは-CH₂CH₂X 、ここでXはCl、Br、またはI；およびR^Bは-Hである。置換基R^HおよびR^Bを有する炭素のキラリティーはl-体である。 Y¹はGly-Pro-(すなわちGP-であり、そしてjが2)；Y²は-Leu-Gly-Val-Leu-Gly- Lys-Leu-ホモシステイン-NH₂(すなわち-LILAPDRHc-NH₂であり、そしてkが8)；R^H は-CH₂X、ここでXはCl、Br、またはI；およびR^Bは-Hである。置換基R^HおよびR^B を有する炭素のキラリティーはl-体である。 Y¹はGly-Pro-(すなわちGP-であり、そしてjが2)；Y²は-Leu-Gly-Val-Leu-Gly- Lys-Leu-ホモシステイン-NH₂(すなわち-LILAPDRHc-NH₂であり、そしてkが8)；R^H は-CH₂CH₂X、ここでXはCl、Br、またはI；およびR^Bは-Hである。置換基R^Hおよび R^Bを有する炭素のキラリティーはl-体である。Ｃ．ハロゲン化ポリペプチドの調製本発明はまた、少なくとも1つのハロアラニン様アミノ酸を有し、このハロアラニン様アミノ酸がハロ基(すなわち-X、ここでXはCL、Br、またはI)を有する、ハロゲン化ポリペプチドの調製方法に関する。より詳細には、そのようなハロゲン化ポリペプチドは反応物ポリペプチドから調製され得、この反応物ポリペプチドは少なくとも1つのセリン様アミノ酸を有し、このセリン様アミノ酸はヒドロキシル基(すなわち-OH)を有する。より詳細には、本発明のハロゲン化ポリペプチドは、セリン様アミノ酸のヒドロキシル基を、リンベースのハロゲン化試薬の補助の下にハロ基に変換することによって、ハロアラニン様アミノ酸を得る(すなわち「ハロ変換」)ことによって調製され得る。用語「セリン様アミノ酸」は本明細書において式HNR^N-CR⁰R^B-C00H(遊離アミノ酸として)あるいは-NR^N-CR⁰R^B-C(=O)-として(ポリペプチド鎖の一部の場合)表され得るαアミノ酸を意味し、ここでR^N、R⁰およびR^Bは置換基である。置換基R^NおよびR^Bは、R^N1／R^N2およびR¹/R²について各々、上記で定義したとおりであり、そして独立して-Hまたは有機置換基である。置換基R^N、R⁰およびR^Bの2つ以上が一緒に1つの多価置換基を形成し得る。置換基R⁰(あるいはR⁰ならびにR^NおよびR^B の1つ以上を取り込む1つの多価置換基)はヒドロキシル含有基である。用語「ヒドロキシル含有基」は本明細書において、ヒドロキシル基(すなわち-OH)を含む有機部分をいう。セリン様アミノ酸のα炭素はRまたはSのキラリティーを有し得る。いくつかの好ましい実施態様において、R⁰はヒドロキシル含有アルキル基である。用語「ヒドロキシル含有アルキル基」は本明細書において、ヒドロキシル基 (すなわち-OH)およびアルキル基を含む有機部分をいう。アルキル部分は好ましくは1個から10個の炭素原子、より好ましくは1個から5個の炭素原子、さらにより好ましくは1個から3個、最も好ましくは1個から2個の炭素原子を含む。アルキル部分は、線状、環状、または分枝であり得るが、好ましくは線状である。好ましいヒドロキシル含有アルキル基の例としては、一般式-(CH₂)₂OHのものが挙げられ、ここでzは1から10、好ましくは1から5、より好ましくは1から3、最も好ましくは1から2の自然数である。好ましいヒドロキシ含有アルキル基の例としては -CH₂OH(すなわち、セリンの場合)、および-CH₂CH₂0H(すなわちホモセリンの場合 )が挙げられる。他の好ましいヒドロキシル含有アルキル基の例としては-CH(CH₃ )OH(すなわちトレオニンの場合)が挙げられる。ハロ基に変換されるべきセリン様アミノ酸のヒドロキシル基は適切に保護され得、あるいは遊離形態(すなわち-OH)であり得る。好ましくは、ヒドロキシル基は保護形態であり得る。これは、例えば反応物ポリペプチドが保護形態で得られるような場合に必要とされ得る脱保護工程の必要を排除し得る。従って、好ましい実施態様において、セリン様アミノ酸のヒドロキシル基は保護され、より好ましくはTBDMS基(例えば、-Si(CH₃)₂(C(CH₃)₃；-OTBDMSとして)で保護される。セリン様アミノ酸のヒドロキシル基のハロ変換が遊離形態(すなわち-OH)で行われることが所望される場合、TBDMS基は、Fmocのような塩基に対して不安定な基以外の保護基の存在下で、THF(すなわちテトラヒドロフラン)中の3当量のTBAF(すなわちフッ化テトラブチルアンモニウム)で選択的に除去され得る。同様にトリチル保護ヒドロキシル基(すなわち-OTr)は、1：1DCM/MeOH(すなわちジクロロメタン、メタノール)中の1％TFA(すなわちトリフルオロ酢酸)で都合良く脱保護されて、遊離ヒドロキシル基(すなわち-OH)を与える。ハロ変換は、反応物ポリペプチドとリンベースのハロゲン化試薬との反応によって達成される。本明細書において、用語「リンベースのハロゲン化試薬」はトリアルキルホスフィンベースまたは亜リン酸トリアルキルベースのハロゲン化試薬に関する。好ましいハロゲン化試薬の例としては、トリフェニルホスフィン二ハロゲン化物(すなわち(C₆H₅)₃PX₂、ここでXはCl、Br、またはI；ジハロトリフェニルホスホラン)；亜リン酸トリフェニルニハロゲン化物(すなわち(C₆H₅O)₃PX₂ 、ここでXはCl、Br、またはI)；あるいはトリフェニルホスフィン(すなわち(C₆ H₅)₃P)または亜リン酸トリフェニル(すなわち(C₆H₅O)₃P)とハロ炭化水素化合物との混合物を含むものが挙げられる。ハロ炭化水素化合物の例としては、四ハロゲン化炭素(すなわちCX₄、ここでXはCl、Br、またはI)、ヘキサハロアセトン(すなわちCX₃C(=O)CX₃、ここでXは独立してCl、Br、またはI)、およびヘキサハロエタン(すなわちC₂X₆、ここでXは独立してCl、Br、またはI)が挙げられる。好ましいハロゲン化試薬は、二塩化トリフェニルホスフィン(すなわちすなわち(C₆H₅)₃ PCl₂)を含む。他の好ましいハロゲン化試薬は、トリフェニルホスフィン二臭化物(すなわち(C₆H₅O)₃PBr₂)を含む。さらに他の好ましいハロゲン化試薬は、トリフェニルホスフィン(すなわち(C₆H₅)₃P)と四塩化炭素(すなわちCCl₄)との混合物を含む。ハロ変換は溶解反応物ポリペプチド(すなわち溶液中)を使用して、あるいは担持反応物ポリペプチド(例えば支持物質に付着した)を使用して行われ得る。例えば、標準固相ポリペプチド合成法を用いて、固体支持体に付着した所望のポリペプチドが得られ得る。次にその担持されたポリペプチドを反応物ポリペプチドとして用いてハロ変換が行われ得るか、あるいはそのポリペプチドを支持体から切断し、そして変換反応は次にこの溶解ポリペプチドを反応物ポリペプチドとして用いて行われ得る。好ましい実施態様において、ハロ変換は担持ポリペプチドを反応物ポリペプチドとして用いて行われる。多様な固体支持体が当該分野で公知であり、これには樹脂、ピン、またはシリコーンチップの形態の支持体が含まれる。好ましくは、支持体は樹脂形態である。好ましい樹脂の例としては、ポリスチレン樹脂の誘導体、例えばWANG^TM樹脂、MERRIFIELD^TM樹脂、4-メチルベンズヒドリルアミン(すなわちMBHA)樹脂、RINK^TMアミド樹脂、RINK^TMアミドMBHA樹脂、SIEBER^TM樹脂、N OVAS 上述のように、ハロ基に変換されるセリン様アミノ酸のヒドロキシル基は適切な保護形態(例えば-OTBDMS)であり得るか、あるいは遊離形態(すなわち-OH)であり得る。反応物ポリペプチドがハロ基に変換されるべきではない(すなわちハロ変換に供されない)セリン、ホモセリン、トレオニン、または他のセリン様アミノ酸を含む実施態様において、これらのアミノ酸のヒドロキシル基はハロ変換の前に、例えばtBu基(すなわち-C(CH₃)₃；-OC(CH₃)₃として)で適切に保護される。好ましくは、反応物ポリペプチドの任意のシステイン様アミノ酸のチオール基 (すなわち-SH)はハロ変換の前に適切に保護される。好ましい実施態様において、チオール基はTr基(すなわち-C(C₆H₅)₃、-STrとして)で保護され、あるいは、より好ましくはtBuS基(すなわち-SC(CH₃)₃；-SSC(CH₃)₃として)で保護される。好ましくは、ハロ変換は、側鎖官能基が適切に保護された反応物ポリペプチドを用いて行われる。例えば、ポリペプチドがアルギニンを含む実施態様において、アルギニンのグアニジノ基は例えばPmc、Mts、またはMtr基で保護される。ポリペプチドがアスパラギンおよびグルタミンを含む実施態様においては、アスパラギンおよびグルタミンのカルボキサミド基は例えば、トリチル(すなわちTr)基で保護される。ポリペプチドがアスパラギン酸およびグルタミン酸を含む実施態様において、アスパラギン酸およびグルタミン酸の側鎖カルボキシル基は、例えばtert-ブチル(すなわちt-Bu)またはシクロヘキシル(すなわちcHx)基で保護される。ポリペプチドがヒスチジンを含む実施態様においては、ヒスチジンのイミダゾール基は、例えば、トリチル基で保護される。ポリペプチドがリジンを含む実施態様においては、リジンのεアミノ基は、例えば、Boc、CBZまたは2-Cl-CBZ基で保護される、ポリペプチドがトリプトファンを含む実施態様においては、トリプトファンのインドール窒素は例えば、トリチル基で保護される。ポリペプチドがチロシンを含む実施態様においては、チロシンのヒドロキシル基は例えばトリチル基で保護される。ハロ変換は、末端αアミノ基が遊離(すなわち-NH₂またはNR^NH)または適切に保護された反応物ポリペプチドを用いて行われ得る。好ましい実施態様において、末端αアミノ基は、例えば、Fmoc、Boc、またはCBZ基(例えば、各々、-NHFmoc、 -NHBoc、または-NHCBZとして)。好ましくは、ハロ変換はモル過剰のリンベースのハロゲン化試薬を用いて行われる。モル過剰は、反応物ポリペプチドの量およびリンベースのハロゲン化試薬の量から都合良く計算され得る。反応物ポリペプチドが担持ポリペプチドである実施態様については、反応物ポリペプチドの量は樹脂を差し引いて決定される( すなわちどれだけのポリペプチドが理論的に樹脂に付着しているか)。リンベースのハロゲン化試薬として二ハロゲン化トリフェニルホスフィンを用いる好ましい実施態様において、ハロ変換は、より好ましくは3倍から6倍モル過剰の二ハロゲン化トリフェニルホスフィン、あるいは濃度が約100mg/mLの二ハロゲン化トリフェニルホスフィンを適切な溶媒系中で用いて行われる。ハロ変換は適切な溶媒系中で、好ましくはおよそ室温で行われる。適切な溶媒はいかなる所望されない副反応を引き起こさない溶媒である。樹脂に担持した反応物ポリペプチドを使用する実施態様において、適切な溶媒はまた、好ましくは樹脂に良好に溶媒和する溶媒である。適切な溶媒の例としてはACN(すなわちアセトニトリル、CH³CN)およびDCN(すなわちジクロロメタン、CH₂Cl₂)が挙げられる。 SIEBER^TM樹脂のような酸に対して非常に不安定な樹脂については、ハロ変換は、好ましくはイミダゾールのような塩基の存在下で行われる。ハロ変換が担持ポリペプチドを用いて行われる実施態様において、ハロ変換が完了したらハロゲン化ポリペプチドを固体支持体から切断することが所望され得る。この切断は標準的なペプチド合成方法を用いて行われ得る。例えば、ハロゲン化ポリペプチドはMBHA樹脂から、適切な捕捉剤、例えば、エチレンジチオールと共にフッ化水素を用いて脱着され得る。これらの条件下で、多くの保護基が同時にポリペプチドから除去され得るが、Fmoc基(例えば、末端αアミノ基上)は除去されない。ハロポリペプチドはWang樹脂から、適切な捕捉剤、例えば、エチレンジチオールと共にトリフルオロ酢酸を用いて脱着され得る。これらの条件下で、多くの保護基が同時にポリペプチドから除去され得るが、Fmoc基(例えば、末端αアミノ基上)もtBUS基(例えば、システイン様アミノ酸のチオール基上)は除去されない。Ｄ．環状ポリペプチドの調製本発明はまた、環状ポリペプチドの調製の方法に関する。この環状ポリペプチドは少なくとも1つのポリペプチドループを有し、このループはチオエーテル結合を含む。より詳細には、そのような環状ポリペプチドは、(i)少なくとも1つのハロアラニン様アミノ酸(このハロアラニン様アミノ酸がハロ基(すなわち-X、ここでXはCl、Br、またはI)を有する)、および(ii)少なくとも1つのシステイン様アミノ酸(このシステイン様アミノ酸はチオール基(すなわち-SH)を有する)を有する、ハロゲン化ポリペプチドから調製され得る。環状ポリペプチドは、適切な塩基性条件下で、このようなハロアラニン様アミノ酸のハロ基によりシステイン様アミノ酸のチオール基を分子内アルキル化してチオエーテル結合を形成することによって(すなわち「環化」)、ハロゲン化ポリペプチドから調製され得る。用語「システイン様アミノ酸」は本明細書において式HNR^N-CR^SR^B-COOH(遊離アミノ酸として)あるいは-NH-CR^SR^B-C(=O)-として(ポリペプチド鎖の一部の場合) 表され得るαアミノ酸を意味し、ここでR^N、R^SおよびR^Bは置換基である。R^Bは-H または有機置換基、例えば1個から6個の炭素原子を有するアルキル基であるが、より好ましくは-CH₃または-Hであり；そしてR^Nは-Hまたは有機置換基、例えば1 個から6個の炭素原子を有するアルキル基であるが、より好ましくは-Hである。置換基R^N、R^SおよびR^Bの2つ以上が一緒に1つの多価置換基を形成し得る。置換基 R^S(あるいはR^SならびにR^NおよびR^Bの1つ以上を取り込む1つの多価置換基)はチオール含有基である。用語「チオール含有基」は本明細書において、チオール基( すなわち-SH)を含む有機部分をいう。システイン様アミノ酸のα炭素はRまたはS のキラリティーを有し得る。いくつかの好ましい実施態様において、R^Sはチオール含有アルキル基である。用語「チオール含有アルキル基」は本明細書において、チオール基(すなわち-SH )およびアルキル基を含む有機部分をいう。アルキル部分は好ましくは1個から10 個の炭素原子、より好ましくは1個から5個の炭素原子、さらにより好ましくは1 個から3個、最も好ましくは1個から2個の炭素原子を含む。アルキル部分は、線状、環状、または分枝であり得るが、好ましくは線状である。好ましいチオール含有アルキル基の例としては、一般式-(CH₂)_zSHのものが挙げられ、ここでzは1 から10、好ましくは1から5、より好ましくは1から3、最も好ましくは1から2の自然数である。好ましいチオール含有アルキル基の例としては-CH₂SH(すなわちシステインの場合)および-CH₂CH₂SH(すなわちホモシステイン)が挙げられる。他の好ましいチオール含有アルキル基の例としては-CH(CH₃)SHおよび-C(CH₃)₂SH(すなわちペニシラミンの場合)が挙げられる。さらに他のシステイン様アミノ酸の例としては4-メルカプトプロリンおよび2-メルカプトヒスチジンが挙げられる。異なるハロゲン化ポリペプチドを用いることによって異なるチオエーテル結合が得られ得る。例えば、ハロアラニン様アミノ酸が、セリン(R^Hが-CH₂-X)のハロ変換によって得られ、そしてシステイン様アミノ酸がシステイン(R^Sが-CH₂-SH) である場合、チオエーテル結合-CH₂-S-CH₂-(すなわちMMTE；メチレン−メチレン −チオエーテル)が得られる。同様に、ハロアラニン様アミノ酸が、ホモセリン( R^Hが-CH₂CH₂-X)のハロ変換によって得られ、そしてシステイン様アミノ酸がホモシステイン(R^Sが-CH₂CH₂-SH)である場合、チオエーテル結合-CH₂CH₂-S-CH₂CH₂-( すなわちEETE；エチレン−エチレン−チオエーテル)が得られる。ハロアラニン様アミノ酸が、ホモセリン(R^Hが-CH₂CH₂-X)のハロ変換によって得られ、そしてシステイン様アミノ酸がシステイン(R^Sが-CH₂-SH)である場合、チオエーテル結合-CH₂CH₂-S-CH₂-(すなわち、EMTE、エチレン-メチレン-チオエーテル)または-C H₂-S-CH₂CH₂-(すなわちMETE；メチレン−エチレン−チオエーテル)が、2つのアミノ酸の相対位置に応じて得られる。同様に、ハロアラニン様アミノ酸が、セリン(R^Hが-CH₂-X)のハロ変換によって得られ、そしてシステイン様アミノ酸がホモシステイン(R^Sが-CH₂CH₂-SH)である場合、チオエーテル結合-CH₂-S-CH₂CH₂-(すなわちMETE；メチレン−エチレン−チオエーテル)または-CH₂CH₂-S-CH₂-(すなわちEMTE；エチレン−メチレン−チオエーテル)が、2つのアミノ酸の相対位置に応じて得られる。環化は、適切な塩基性媒体中で、少なくとも1つのハロアラニン様アミノ酸と少なくとも1つのシステイン様アミノ酸を有するハロゲン化ポリペプチドのハロ基による、チオール基の分子内アルキル化によって達成される。例えば、環化はハロゲン化ポリペプチドを適切な溶媒中で炭酸ナトリウム(すなわちNa₂CO₃)と反応させることによって達成され得る。環化は、溶解ハロゲン化ポリペプチド(すなわち溶液で)を用いて、あるいは担持ハロゲン化ポリペプチド(例えば支持体物質に付着した)を使用して行われ得る。例えば、ハロゲン化ポリペプチドは、上述のように、固体支持体に付着した反応物ポリペプチドを誘導体化(すなわち、ハロ変換)することによって調製され得る。次にその担持ハロゲン化ポリペプチドを用いて環化が行われ、あるいはハロゲン化ポリペプチドを支持体から切断し、そして溶解ハロゲン化ポリペプチドを用いて環化が行われる。担持ハロゲン化ポリペプチドを用いて環化が行われ、システイン様アミノ酸のチオール基が保護形態である実施態様において、これは適切な条件下で脱保護され得る。例えば、tBuS基で保護されたチオール基はトリブチルホスフィン(すなわちP(C₄H₉)₃)で脱保護され得る。トリチル基で保護されたチオール基はDCM(すなわちジクロロメタン)中の1％TFA(すなわちトリフルオロ酢酸)とトリメチルシラン(すなわちSiH(CH₃)₃)で都合良く脱保護され得る。これらの条件下では、多くの他のタイプの保護基はそのままである。環化反応は、アセトニトリル(すなわちCH₃CN)と水(すなわちH₂O)との溶媒混合物(1：1 v/v)と約10〜20mg/mLの炭酸ナトリウム(すなわちNa₂CO₃)を用いて効果的に行われ得る。担持ハロゲン化ポリペプチドようなポリ(エチレングリセロール)樹脂が挙げられる。溶解ハロポリペプチド(すなわち溶液中)を用いて環化工程が行われる実施態様において、システイン様アミノ酸のチオール基は脱保護され得る(例えば、開裂条件下で)。しかし、必要ならば、これは適切な条件下で脱保護され得る。例えば、tBuS基で保護されたチオール基はトリブチルホスフィン(すなわちP(C₄H₉)₃) で脱保護され得る。分子間の副反応を避けるため、環化の間、溶液のハロポリペプチドを高度に希釈することが必要とされる。溶液中で、環化反応は、アセトニトリル(すなわちCH₃CN)と水(すなわちH₂O)との溶媒混合物(1：1v/v)と約1mg/mLの炭酸ナトリウム(すなわちNa₂CO₃)中で希釈されたポリペプチド溶液を用いて効果的に行われ得る。このように、本発明の環状ポリペプチドは、少なくとも1つのセリン様アミノ酸および少なくとも1つのシステイン様アミノ酸を有する反応物ポリペプチドから、上述のように、第一にハロ変換、そして第二に環化によって、調製され得る。より詳細には、本発明の環状ポリペプチドは、(i)少なくとも1つのセリン様アミノ酸(このセリン様アミノ酸はヒドロキシル基(すなわち-OH)を有する)；および(ii)少なくとも1つのシステイン様アミノ酸(このシステイン様アミノ酸はチオール基(すなわち-SH)を有する)を有する反応物ポリペプチドから、(a)上記セリン様アミノ酸のヒドロキシル基をリンベースのハロゲン化試薬の補助の下にハロ基(すなわち-X、ここでXはCl、Br、またはI)に変換し、かくしてハロアラニン様アミノ酸を形成する工程(すなわち「ハロ変換」)；次に(b)上記システイン様アミノ酸のチオール基を、適切な塩基性条件下、ハロアラニン様アミノ酸のハロ基で分子内アルキル化し、チオエーテル結合を生成する工程(すなわち「環化」)によって調製され得る。ハロ変換および環化工程は、上記で詳述される。ハロ変換工程は、上記のように溶解(すなわち溶液中)または担持(例えば支持体物質に付着)した反応物ポリペプチドを用いて行われ得る。同様に環化工程も、上記のように、溶解(すなわち溶液中)または担持(例えば支持体物質に付着)したハロゲン化ポリペプチドを用いて行われ得る。ハロ変換が担持ポリペプチドを利用し、そして環化工程が溶液中で行われる実施態様において、ハロゲン化ポリペプチドはハロ変換が完了したら標準的なペプチド合成方法を用いて固体支持体から切断され得る。好ましくはハロ変換工程は担持された反応物ポリペプチドを用いて行われる。以上記述した本発明の多くの改変および変更が、本発明の思想および範囲から逸脱することなくなされ得、従って添付の請求の範囲に示される制限のみが課される。Ｅ．実施例本発明のハロゲン化ポリペプチドおよび環状ポリペプチドのいくつか、ならびにそれら調製方法を以下の実施例に記載する。この実施例は、例示のために提供され、限定のためではない。簡便のため、多くの化学物質を、その化学名、化学式、および／または適当な頭文字で互換的に呼ぶ。これらのものには、DCM(すなわち、ジクロロメタンCH₂C l₂)；DMF(すなわち、ジメチルホルムアミド、(CH₃)₂NCHO)；MeOH(すなわち、メタノール、CH₃OH)；EtOH(すなわち、エタノール、CH₃CH₂OH)；nPrOH(すなわち、 n-プロパノール、CH₃CH₂CH₂OH)；TFA(すなわち、トリフルオロ酢酸、CF₃COOH)； DMS(すなわち、ジメチルスルフィド、CH₃SCH₃)；ACN(すなわち、アセトニトリル、CH₃CN)；THF(すなわち、テトラヒドロフラン、C₄H₈O)；水(すなわち、H₂0)；フッ化水素(すなわち、HF)；アニソール(すなわちC₆H₅OCH₃)；パラ−チオクレゾール(すなわち、CH₃-C₆H₄-SH)；ジエチルエーテル(すなわち、C₂H₅OC₂H₅)；炭酸ナトリウム(すなわち、Na₂C0₃）；エチレンジチオール(すなわち、HSCH₂CH₂SH) ；およびトリブチルホスフィン(すなわち、P(C₄H₉)₃)が挙げられる。本開示で用いられる概略的な分析方法および特徴付け手法を以下に示す。¹H N MRスペクトルはBruker AC300分光計で300MHzで記録した。化学シフトはTMS(すなわち、トリメチルシラン、δ＝0.0ppm)に対するppm(δ)で記録した。分析HPLC分析はHewlett Packard液体クロマトグラフィーHP1090装置にVydac C18カラム(4.6 ×250mm、粒径5mm)を装着して行った。分取HPLCはDynamax SD200システムにVyda c C18カラム(22×250mm、粒径10mm)を装着して行った。ペプチド産物の純度は2 つのHPLC溶媒系を用いて分析した：酢酸(TFA)系またはリン酸トリエチルアミン( TEAP)系。TFA系において、20分間でBが5〜50％のグラジエントを用い、ここでA は0.1％(v/v)TFA/H₂Oであり、そしてBは0.1％(v/v)TFA/ACNであった。TEAP系において、20分間でBが5−60％のグラジエントを用い、ここでAは9：1TEAP/ACN(v/ v)であり、Bは4：6TEAP／ACN(v/v)であった。TEAP緩衝液は、11mLの濃リン酸(すなわちH₃PO₄、85％w/v)を900mLのH₂Oに加え、そしてpHをトリエチルアミン(すなわち、N(C₂H₅)₃、約10mL)で2.3に調節し、そして次にさらにH₂Oを加えて容量100 0mLとした。すべての一般的なアミノ酸誘導体はNovaBiochemまたはAdvanced ChemTech.から購入した。N^α-(9-フルオレニルメトキシカルボニル)-O-t-ブチルジメチルシリル-l-セリンおよびN^α-(9-フルオレニルメトキシカルボニル)-O-t-ブチルジメチルシリル-d-セリンは、Bachem Bioscience Inc.から入手した。N^α-(9-フルオレニルメトキシカルボニル)-O-t-ブチルジメチルシリル-l-ホモセリンはFisher(Tetrahedron Lett ．（1992）49:7605-7608)によって記載されたようにして調製した。N^α-(9-フルオレニルメトキシカルボニル)-S-t-ブチルチオ-l-ホモセリンは、Wunschらの手順(Hoppe-Seyler's Z ．Physiol．Chem．（1982）363:1461-146 4)に従って調製した。二塩化トリフェニルホスフィンおよび二臭化トリフェニルホスフィンはAldrich Chemical Companyから購入した。それらの純度は³¹P NMR で使用前にモニターした(Appelら、Chem ．Ber．（1976）109:58-70)。より好ましくは、二塩化トリフェニルホスフィンはAppelおよびScholer(Chem ．Ber．（19 77）110:2382-2384)の手順に従って新たに調製した。本発明の環状ポリペプチドの調製に使用されるポリペプチドは、標準的な固相合成方法を用いて調製された。実施例で使用された方法Aおよび方法Bと示される 2つの特定の方法の実験の詳細を以下に記載する。方法Aにおいて、ポリペプチドは、標準Fmoc固相化学を用いてマニュアルで合成した(StewartおよびYoung，Solid Phase Peptide Synthesis、第二版、Pierce Chemical Co,：Rockford，IL.，(1984)；p82；FieldおよびNoble、Int ．J．Pep t．Protein Res．（1990）35:161-214)。各サイクルにおいて、Fmoc基を、DMF中の20％ピペリジン(すなわち、NHC₅H₁₁)による5および10分間の処理によって除去した。ペプチド樹脂を次にDMF(2回)、MeOH(2回)、DMF(2回)、およびMeOH(2回)で逐次洗浄した。3当量のFmoc保護アミノ酸、3当量のDIC(すなわち、N,N'-ジイソプロピルカルボジイミド)、および3当量のHOBt(すなわち、N-ヒドロキシベンゾトリアゾール)を用いてDMF中、55℃で、アミノ酸を樹脂にカップリングさせた。カップリング反応を、指示薬ブロモフェノールブルー(〜5mLの0.05MのDMF溶液) を添加することによってモニターした。青色が消失して、黄色が生成されるまでカップリングを続けた。典型的な一回のカップリングはポリペプチド配列およびカップリングされるアミノ酸残基に応じて、15分から120分を必要とする。ポリペプチド樹脂をDMF(2回)、MeOH(2回)、DMF(2回)、および、MeOH(2回)で逐次洗浄した。カップリングの完了はニンヒドリンテスト(Kaiserら、Anal ．Biochem．（1970）34:595-598 )で確認され、そして必要があればダブルカップリングが行われた。方法Bにおいては、ポリペプチドを固相化学を用いてAdvanced ChemTech 357 M PS自動合成機でFmoc化学を用いて自動的に合成した(FieldsおよびNoble，Int ．J ．Pept．Protein Res．（1990）35:161-214)。個々のアミノ酸のカップリングのための典型的なサイクルは以下の通りであった：(1)樹脂上のアミノ酸を30％ピペリジン/DMFで5分および10分かけて脱保護；(2)DMF、MeOH、DMF、およびMe0Hで逐次洗浄；(3)6当量のFmoc保護アミノ酸、6当量のDIC、および6当量のHOBtで、D MF中60分間、室温でのアミノ酸のダブルカップリング；(4)DMF、MeOH，DMF、およMeOHで逐次洗浄。次に樹脂を切断容器に移し、そしてDCMで洗浄し、そして真空乾燥した。実施例1 (Fmoc)AGPHsLGVLGKLCPG の環化による3G3-EMTEおよびN^α-Fmoc-3G3-EMTEの形成この実施例の合成を示す反応スキームを図2に示す。樹脂に結合した完全保護ペプチド(Fmoc)AGP(TBDMS)HsLGVLG(CBZ)KL(tBuS)CPG-樹脂を、方法Aを用いて(Fm oc)-Gly-Wang樹脂(NovaBiochem、0.50g、0.67mmol/g)上で調製した。側鎖官能基を以下のように保護した：Cys(tBuS)；Lys(CBZ)；Hs(TBDMS)。すべてのカップリングを完了した後、ペプチド樹脂をDCM(2回)で洗浄し、次に真空下乾燥した。ホモセリン残基HsのTBDMS保護ヒドロキシル基(すなわち-0TBDMS)を、DCM中の6 当量の二塩化トリフェニルホスフィン(すなわち(C₆H₅)₃PCl₂)で終夜室温で処理して、クロロ基(すなわち-Cl)に転化した。ポリペプチド樹脂をDMF(2回)、MeOH( 2回)、DMF(2回)、およびMeOH(2回)で逐次洗浄し、そして次に真空下乾燥した。次に乾燥したポリペプチド樹脂を、HF、アニソール、DMS、およびパラ-チオクレゾールの10：1：1：0.2(v/v)混合物で0℃で1時間処理した。HFを真空下で除去した後、残渣をジエチルエーテルで3回洗浄して捕捉剤を除去し、そして1：1(v/v) H₂O／ACN中の0.1％TFAで3回抽出した。あわせた濾液を凍結乾燥し、そして粗ポリペプチドを分取HPLCで、10mL／分で40％から70％のBの直線グラジエント(ここでAはH₂O中の0.1％(v/v)TFAであり、そしてBはACN中の0.08％(v/v)TFAである)で 40 分かけて溶出して精製した。さらなる凍結乾燥の後にクロロポリペプチドを白色粉末として得た(153.5mg、収率28％；分析RP-HPLC：TFA系、20−80％Bのグラジエント、20分間：t_R15.60分；純度97.2％；MS(ESI)：m/e(M+1)計算値C₇₂H₁₀₉N₁₅ O₁₇SCl：1523、実測値：1523)。クロロポリペプチド(48.0mg)を、ACN/水(1：1)中の炭酸ナトリウム(すなわちN a₂CO₃、1mg/mL、pH〜10.5)の溶液50mL中に、室温でアルゴン下36時間攪拌しながら溶解した。環化反応を分析HPLCでモニターした。出発物質の消失により示される環化の完了の後、溶液をTFAで中和し、そして凍結乾燥した。粗環状ポリペプチドを分取HPLCを用いて、10mL／分で10％から70％のBの直線グラジエント(ここでAはH₂O中の0.1％(v/v)TFAであり、そしてBはACN中の0.08％(v/v)TFAである)で 40分かけて溶出して精製した。2つの環状ポリペプチド、N^α-Fmoc-3G3-EMTEおよび3G3-EMTEが得られた(N^α-Fmoc-3G3-EMTE：9.0mg、収率19％；分析RP-HPLC：TF A系、20−80％Bのグラジエント、20分間：t_R15.58分；純度97.0％；TEAP系：t_R1 7.13分；純度94.0％；MS(ESI)：m/e(M+Cs⁺)計算値C₇₂H₁₀₇N₁₅O₁₇SCs：1618.6744 、実測値：1618.6763；3G3-EMTE：13.3mg、収率33％；分析RP-HPLC：TFA系：t_R1 5.16分；純度100％；TEAP系：t_R12.85分；純度100％；HRMS(ESI)：m/e(M+Cs⁺)計算値C₅₇H₉₇N₁₅O₁₅SCs：1369.6064、実測値：1396.6083)。実施例2 AGPHsLGVLGKLCPG の環化による3G3-EMTEの形成この実施例の合成を示す反応スキームを図3に示す。樹脂に結合した完全保護ペプチド(CBZ)AGP(TBDMS)HsLGVLG(CBZ)KL(tBuS)CPG-樹脂を、方法Aを用いて(Fmo c)-Gly-Wang樹脂(NovaBiochem、0.50g、0.60mmol/g)上で調製した。側鎖官能基を以下のように保護した：Cys(tBuS)；Lys(CBZ)；Hs(TBDMS)。ポリペプチドのアルファアミノ基をCBZで保護した。すべてのカップリングを完了した後、ペプチド樹脂をDCM(2回)で洗浄し、次に真空下乾燥した。ホモセリン残基HsのTBDMS保護ヒドロキシル基(すなわち-OTBDMS)を、DCM中の6 当量の二塩化トリフェニルホスフィン(すなわち(C₆H₅)₃PCl₂)で終夜室温で処理して、クロロ基(すなわち-Cl)に転化した。ポリペプチド樹脂をDMF(2回)、MeOH( 2 回)、DMF(2回)、およびMeOH(2回)で逐次洗浄し、そして次に真空下乾燥した。次に乾燥したポリペプチド樹脂を、HF、アニソール、DMS、およびパラーチオクレゾールの10：1：1：0.2(v/v)混合物で0℃で１時間処理した。HFを真空下で除去した後、残渣をジエチルエーテルで3回洗浄して捕捉剤を除去し、そして1：1(v/ v)H₂O／ACN中の0.1％TFAで3回抽出した。あわせた濾液を凍結乾燥し、そして粗ポリペプチドを分取HPLCで、10mL／分で10％から40％のBの直線グラジエント(ここでAはH₂O中の0.1％(v/v)TFAであり、そしてBはACN中の0.08％(v/v)TFAである) で40分かけて溶出して精製した。さらなる凍結乾燥の後にクロロポリペプチドを白色粉末として得た(100.5mg、収率22％；分析RP-HPLC：TFA系：t_R16.48分；純度95.1％；TEAP系：t_R14.69分；純度93.7％；MS(ESI)：m/e(M＋l)計算値C₅₇H₉₉N₁₅ O₁₅SCl：1301、実測値：1301)。クロロポリペプチド(18.5mg)を、ACN/水(1：1)中の炭酸ナトリウム(すなわちN a₂CO₃、1mg/mL、pH〜10.5)の溶液20mL中に、室温でアルゴン下24時間攪拌しながら溶解した。環化反応を分析HPLCでモニターした。出発物質の消失により示される環化の完了の後、溶液をTFAで中和し、そして凍結乾燥した。粗環状ポリペプチドを分取HPLCを用いて、10mL／分で10％から40％のBの直線グラジエント(ここでAはH₂O中の0.1％(v/v)TFAであり、そしてBはACN中の0.08％(v/v)TFAである)で 40分かけて溶出して精製した。さらなる凍結乾燥の後に環状ポリペプチドが白色粉末として得られた(17.0mg、収率94％；分析RP-HPLC：TFA系：t_R15.16分；純度 100％；TEAP系：t_R12.85分；純度100％；HRMS(ESI)：m/e(M+Cs⁺)計算値C₅₇H₉₇N₁ ₅ O₁₅SCs：1396.6064、実測値：1396.6083)実施例3 AGPSLGVLGKLCPG の環化による3G3-MMTEの形成この実施例の合成を示す反応スキームを図4に示す。上記実施例2のポリペプチド合成、塩素化、および環化のための方法を、本実施例に適用した。側鎖官能基およびアルファアミノ基についての同じ保護基のスキームを本実施例で用いた。 0.50gの(Fmoc)-Gly-Wang樹脂(NovaBiochem、0.60mmol/g)を用いて、クロロポリペプチドを、精製の後白色粉末として得た(105.5mg、収率23％；分析RP-HPLC ：T FA系：t_R15.99分；純度92.5％；TEAP系：t_R14.08分；純度95.9％；MS(ESI)：m/e (M+1)計算値C₅₆H₉₇N₁₅O₁₅SCl：1287、実測値：1287)。 50.0mgのクロロポリペプチドを用いて、環状ポリペプチドを2つのジアステレオマーの混合物として得た(43.1mg、収率89％；分析RP-HPLC：TFA系：t_R14.78分；純度100％；TEAP系：t_R11.98分；純度100％(ショルダーを有する)；HRMS(ESI) ：m/e(M+Cs⁺)計算値C₅₆H₉₅N₁₅O₁₅SCs：1382.5907、実測値：1382.5919)実施例4 GPHsLGVLGKLHcPG の環化による2G3-EETEの形成上記実施例2のポリペプチド合成、塩素化、および環化のための方法を、本実施例に適用した。側鎖官能基およびアルファアミノ基についての同じ保護基のスキームを本実施例で用いた。 1.0gの(Fmoc)-Gly-Wang樹脂(Advanced ChemTech、0.34mmol/g)を用いて、クロロポリペプチドを、精製の後、白色粉末として得た(72.0mg、収率17％；分析RP- HPLC：TFA系：t_R16.89分；純度100％；TEAP系：t_R14.84分；純度100％；HRMS(ES I)：m/e(M+1)計算値C₅₅H₉₆N₁₄O₁₄SCl：1243.6640、実測値:1243.6692)。 25.0mgのクロロポリペプチドを用いて、環状ポリペプチドを白色粉末として得た(18.2mg、収率75％；分析RP-HPLC：TFA系：t_R15.63分；純度100％；TEAP系：t_R 13.81分；純度100％；HRMS(ESI)：m/e(M+1)計算値C₅₅H₉₅N₁₄O₁₄S：1207.6873、実測値：1207.6827)。実施例5 GPHsLGVLGKLCPG の環化による2G3-EMTEの形成この実施例の合成を示す反応スキームを図5に示す。上記実施例2のポリペプチド合成、塩素化、および環化のための方法を、本実施例に適用した。側鎖官能基を以下のように保護した：CyS(tBUS)；LyS(2-Cl-CBZ)；Hs(TBDMS)。ペプチドのアルファアミノ基をCBZで保護した。塩素化工程を、DCM中の二塩化トリフェニルホスフィン(すなわち(C₆H₅)₃PCl₂)(130mg/mL)の溶液を用いて行った。乾燥したポリペプチド樹脂を、HF、DMS、およびエチレンジチオールの10:1:1(v/v)混合物で0℃ で1時間処理した。次にこのクロロポリペプチドを実施例2の方法を用いて精製した。 0.5gの(Fmoc)-Gly-Wang樹脂(Advanced ChemTech、0.34mmol/g)を用いて、クロロポリペプチドを、精製の後、白色粉末として得た(82.6mg、収率39％；分析RP- HPLC：TFA系：t_R16.12分；純度88.4％；TEAP系：t_R14.80分；純度92.9％；MS(ES I)：m/e(M+1)計算値C₅₄H₉₄N₁₄O₁₄SCl：1230、実測値：1230)。 36.5mgのクロロポリペプチドを用いて、環状ポリペプチドを白色粉末として得た(29.7mg、収率84％；分析RP-HPLC：TFA系:t_R15.48分;純度100％;TEAP系：t_R13 .58分；純度100％；HRMS(ESI)：m/e(M+1)計算値C₅₄H₉₃N₁₄O₁₄Ｓ：1193.6717、実測値：1193.6674)。実施例6 GPSLGVLGKLCPG の環化による2G3-MMTEの形成上記実施例5のポリペプチド合成、塩素化、および環化のための方法を、本実施例に適用した。側鎖官能基およびアルファアミノ基についての同じ保護基のスキームを本実施例で用いた。 0.50gの(Fmoc)-Gly-Wang樹脂(Advanced ChemTech、0.34mmol/g)を用いて、クロロポリペプチドを、精製の後、白色粉末として得た(78.3mg、収率32％；分析R P-HPLC：TFA系：t_R15.88分；純度93.3％；TEAP系：t_R14.30分；純度100％；MS(E SI)：m/e(M+1)計算値C₅₃H₉₂N₁₄O₁₄SCl：1216、実測値：1216)。 34.2mgのクロロポリペプチドを用いて、環状ポリペプチドをジアステレオマーの混合物として得た(28.9mg、収率87％；分析RP-HPLC：TFA系：t_R14.90分；純度 100％；TEAP系：t_R11.93分；純度58.8％および12.17分、純度、41％；HRMS(ESI) ：m/e(M+1)計算値C₅₃H₉₁N₁₄O₁₄Ｓ：1179.6560、実測値：1179.6610)。実施例7 GPSLGVLGKLHcPG の環化による1-2G3-METEおよびd-2G3-METEの形成この実施例の合成を示す反応スキームを図6に示す。上記実施例5のポリペプチド合成、塩素化、および環化のための方法を、本実施例に適用した。側鎖官能基およびアルファアミノ基についての同じ保護基のスキームを本実施例で用いた。 1.0gの(Fmoc)-Gly-Wang樹脂(Advanced ChemTech、0.34mmol/g)を用いて、クロロポリペプチドを、精製の後、白色粉末として得た(25.2mg、収率6％；分析RP-H PLC：TFA系：t_R16.29分；純度100％；TEAP系：t_R14.06分；純度92.0％；HRMS(ES I)：m/e(M+1)計算値C₅₄H₉₄N₁₄O₁₄SCl：1230、実測値：1230)。 34.2mgのクロロポリペプチドを用いて、2つの環状ポリペプチド、d-異性体およびl-異性体を得た(d-異性体：4.0mg、収率16％；分析RP-HPLC：TFA系：t_R15.0 4分；純度98.4％；TEAP系：t_R12.66分；純度91.6％；HRMS(ESI)：m/e(M+Cs⁺)計算値C₅₄H₉₃N₁₄O₁₄SCs：1325.5693、実測値：1325.5703；およびl-異性体：7.0mg 、収率29％；分析RP-HPLC：TFA系：t_R15.39分；純度85.3％；TEAP系：t_R13.09分；純度84.4％；HRMS(ESI)：m/e(M+Cs⁺)計算値C₅₄H₉₃N₁₄O₁₄SCs：1325.5693、実測値：1325.5699)。実施例8 GPCLGVLGKLHsPG の環化による2G3-METEの形成この実施例の合成を示す反応スキームを図7に示す。上記実施例5のポリペプチド合成、塩素化、および環化のための方法を、本実施例に適用した。側鎖官能基ついての同じ保護基のスキームを本実施例で用いた。ペプチドのアルファアミノ基はBoc基で保護した。 1.0gの(Fmoc)-Gly-Wang樹脂(Advanced ChemTech、0.34mmol/g)を用いて、クロロポリペプチドを、精製の後、白色粉末として得た(114.3mg、収率23％；分析RP -HPLC：TFA系：t_R16.30分；純度84.8％；TEAP系：t_R14.59分；純度85.6％；MS(E SI)：m/e(M+1)計算値C₅₄H₉₄N₁₄O₁₄SCl：1230、実測値：1230)。 17.9mgのクロロポリペプチドを用いて、環状ポリペプチドを白色固体として得た(6.3mg、収率36％；分析RP-HPLC：TFA系：t_R15.39分；純度85.3％；TEAP系：t_R 13.09分；純度84.4％；HRMS(ESI)：m/e(M+Cs⁺)計算値C₅₄H₉₃N₁₄O₁₄SCs：1325.5 693、実測値：1325.5699)。実施例9 HsLGVLGKLC の環化によるG3-EMTEの形成上記実施例8のポリペプチド合成、塩素化、および環化のための方法を、本実施例に適用した。側鎖官能基およびアルファアミノ基についての同じ保護基のスキームを本実施例で用いた。 0.45gのMBHA樹脂(NovaBiochem、0.42mmol/g)を用いて、クロロポリペプチドを、精製の後、白色粉末として得た(158.2mg、収率73％；分析RP-HPLC：TFA系：t_R 15.83分；純度100％；TEAP系：t_R13.77分；純度93.8％；MS(ESI)：m/e(M+1)計算値C₄₀H₇₅N₁₁O₉SCl：920、実測値：920)。 50.0mgのクロロポリペプチドを用いて、環状ポリペプチドを白色固体として得た(24.7mg、収率51％；分析RP-HPLC：TFA系：t_R15.43分；純度92.8％；TEAP系： t_R12.94分；純度94.4％；HRMS(ESI)：m/e(M+1)計算値C₄₀H₇₄N₁₁O₉S：885.5470、実測値：885.5491)。実施例10 SLGVLGKLC の環化によるG3-EMTEの形成上記実施例8のポリペプチド合成、塩素化、および環化のための方法を、本実施例に適用した。側鎖官能基およびアルファアミノ基についての同じ保護基のスキームを本実施例で用いた。 0.50gのMBHA樹脂(NovaBiochem、0.42mol/g)を用いて、クロロポリペプチドを、精製の後、白色粉末として得た(151.8mg、収率64％；分析RP-HPLC：TFA系：t_R 15.33分；純度98.2％；TEAP系：t_R13.40分；純度98.4％；MS(ESI)：m/e(M+1)計算値C₃₉H₇₃N₁₁O₉SCl：906、実測値：906)。 50.0mgのクロロポリペプチドを用いて、環状ポリペプチドを白色固体として得た(23.9mg、収率49％；分析RP-HPLC：TFA系：t_R15.13分；純度97.1％；TEAP系： t_R12.27分；純度97.6％；HRMS(ESI)：m/e(M+1)計算値C₃₉H₇₂N₁₁O₉S：871.5313、実測値：871.5332)。実施例11 HsLGVLGKLHc の環化によるG3-EETEの形成この実施例の合成を示す反応スキームを図8に示す。樹脂に結合した完全保護ペプチド(Boc)(TBDMS)HsLGVLG(Boc)KL(tBuS)Hc-樹脂を、方法Bを用いてRinkアミドMBHA樹脂(NovaBiochem、0.5g、0.5mmol/g)上で調製した。側鎖官能基を以下のように保護した：Hc(tBuS)；Lys(Boc)；Hs(TBDMS)。アルファアミノ基をBocで保護した。すべてのカップリングを完了した後、ペプチド樹脂を反応容器から切断容器に移した。樹脂をDCM（２回）で洗浄し、次に真空下乾燥した。ポリペプチドの塩素化を、DCM中の二塩化トリフェニルホスフィン(すなわちP( C₆H₅)₃Cl₂)の溶液(200mg/mL)を用いて行った。ポリペプチド樹脂をDMF(2回)、Me OH(2回)、DMF(2回)、およびMeOH(2回)で逐次洗浄し、そして次に真空下乾燥した。乾燥したポリペプチド樹脂を、95％TFA水溶液で、室温で1時間処理した。TFA および水をアルゴン流下で除去し、残渣をジエチルエーテルで3回洗浄し、そして1：1(v/v)H₂O／ACN中の0.1％TFA30mL中に溶解した。ホモシステイン残基のtBu S保護基を除去するために、0.75mLのトリブチルホスフィン(すなわち、P(C₄H₉)₃ )を粗ポリペプチド溶液に加え、そして室温で終夜攪拌した。反応混合物を凍結乾燥し、そして粗ポリペプチドを分取HPLCで、10mL／分で10％から40％のBの直線グラジエント(ここでAはH₂O中の0.1％(v/v)TFAであり、そしてBはACN中の0.08 ％(v/v)TFAである)で40分かけて溶出して精製した。さらなる凍結乾燥の後にクロロポリペプチドを白色粉末として得た(162.5mg、収率70％；分析RP-HPLC：TFA 系：t_R16.36分；純度100％；TEAP系：t_R14.74分；純度88.1％_;HRMS(ESI)：m/e(M +1)計算値C₄₁H₇₇N₁₁O₉SCl：934.5315、実測値：934.5361)。環化を実施例2の方法に従って行った。53.0mgのクロロポリペプチドを用いて、環状ポリペプチドを白色固体として得た(24.2mg、収率48％；分析RP-HPLC：TF A系：t_R15.61分；純度97.1％；TEAP系：t_R13.23分；純度98.0％；HRMS(ESI)：m/ e(M+1)計算値C₄₁H₇₆N₁₁O₉S：899.5626、実測値：899.5646)実施例12 SLGVLGKLHc の環化によるG3-METEの形成上記実施例11のポリペプチド合成、塩素化、および環化のための方法を、本実施例に適用した。側鎖官能基およびアルファアミノ基についての同じ保護基のスキームを本実施例で用いた。 0.50gのMBHA樹脂(NovaBiochem、0.50mmol/g)を用いて、クロロポリペプチドを、精製の後、白色粉末として得た(57.5mg、収率25％；分析RP-HPLC：TFA系：t_R1 5.93分；純度97.4％；TEAP系：t_R13.81分；純度95.4％；HSMS(ESI)：m/e(M+1)計算値C₄₀H₇₅N₁₁O₉SCl：920.5158、実測値：920.5206)。 17.3mgのクロロポリペプチドを用いて、環状ポリペプチドを白色固体として得た(8.5mg、収率52％；分析RP-HPLC：TFA系：t_R15.65分；純度94.8％；TEAP系：t_R 13.15分；純度93.4％；HRMS(ESI)：m/e(M+1)計算値C₄₀H₇₄N₁₁O₉S：885.5470、実測値：885.5488)。実施例13 GPSLILAPDRC の環化によるCB10-MMTEの形成樹脂に結合した完全保護ペプチド(Boc)GP(Tr)SLILAP(tBu)D(Pmc)R(tBuS)C-樹脂を、方法Aを用いてMBHA樹脂(NovaBiochem、2.0g、0.6mmol/g)上で合成した。最初のカップリングの前に、MBHA樹脂をDMF中の20％ピペリジン(〜5mL/g)で5分間中和し、そして次にDMF(2回)、MeOH(2回)、DMF(2回)、およびMeOH(2回)で逐次洗浄した。側鎖官能基を以下のように保護した：Arg(Pmc)；Asp(tBu)；Cys(tBuS )；Lys(CBZ)；およびSer(Tr)。ポリペプチド合成の完了の後、セリン残基のトリチル保護基を、DCM／MeOH(1：1v/v)中の1％TFAで5回、各々30分間処理することによって、選択的に除去した。ペプチド樹脂をDCM（２回）で洗浄し、そして次に真空下乾燥して3.38gの樹脂結合ポリペプチドを得た。セリン残基Sの遊離ヒドロキシル基(すなわち-OH)は、樹脂結合ポリペプチド(0 .5g、0.044mmol)を4mLのACN中の二臭化トリフェニルホスフィン(すなわち(C₆H₅)₃ PBr₂、172mg、0.407mmol)およびDIEA(すなわち(CH₃)₂CH)₂NCH₂CH₃、ジイソプロピルエチルアミン、25μｌ，0.138mmol)で終夜室温で処理して、ブロモ基(すなわち-Br)に転化した。ポリペプチド樹脂をDMF(2回)、MeOH(2回)、DMF(2回)、およびMeOH(2回)で逐次洗浄し、そして次に真空下乾燥した。乾燥したポリペプチド樹脂を次に、HF、アニソール、DMS、およびパラ-チオクレゾールの10：1：1： 0.2(v/v)混合物で0℃で1時間処理して、切断/脱保護した。HFを真空下で除去した後、残渣をジエチルエーテルで3回洗浄して捕捉剤を除去し、そして1：1(v/v)H₂O／ACN 中の0.1％TFAで3回抽出した。あわせた濾液を凍結乾燥し、そして粗ポリペプチドを分取HPLCで、10mL／分で10％から40％のBの直線グラジエント(ここでAはH₂O 中の0.1％(v/v)TFAであり、そしてBはACN中の0.08％(v/v)TFAである)で40分かけて溶出して精製した。さらなる凍結乾燥の後にブロモポリペプチドを白色粉末として得た(12.7mg、収率24％；；MS(ESI)：m/e(M+1)計算値C₄₉H₈₅N₁₅O₁₃SBr：120 3、1205、実測値：1203、1205)。ブロモポリペプチド(12.7mg)をpH〜10.5の炭酸ナトリウム(すなわちNa₂CO₃)の水溶液70mL中に、アルゴン下で2時間、溶解した。環化反応を分析HPLCでモニターした。出発物質の消失により示される環化の完了の後、溶液をTFAで中和し、そして凍結乾燥した。粗環状ポリペプチドを分取HPLCを用いて、10mL／分で10％から40％のBの直線グラジエント(ここでAはH₂O中の0.1％(v/v)TFAであり、そしてBはACN中の0.08％(v/v)TFAである)で40分かけて溶出して精製した。さらなる凍結乾燥の後に環状ポリペプチドが白色粉末として得られた(3.2mg、収率27％； MS(ESI)：m/e(M+1)計算値C₄₉H₈₄N₁₅O₁₃S：1123、実測値：1123)。実施例14 HsL(N ^αMeGly)(d-V)(d-L)AKLCの環化によるAG3-EMTEの形成この実施例の合成を示す反応スキームを図9に示す。樹脂に結合した完全保護ペプチド(Boc)(TBDMS)HsL(N^αMeGly)(d-V)(d-L)A(Boc)KL(tBuS)C-樹脂を、方法B をびd-Lの表記は、各々d-バリンおよびd-ロイシンを意味する。側鎖官能基を以下のように保護した：Hs(TBDMS)；Lys(Boc)；Cys(tBuS)。アルファアミノ基をBoc で保護した。すべてのカップリングを完了した後、ペプチド樹脂を反応容器から切断容器に移し、樹脂をDCM(2回)で洗浄し、次に真空下乾燥した。担持ポリペプチドの塩素化を、DCM中の二塩化トリフェニルホスフィン(すなわちP(C₆H₅)₃Cl₂)の6当量を用いて行った。ペプチド樹脂の少量を95％TFA水溶液で 1時間室温で切断し、そして切断したペプチドをHPLCで分析することによって測定して、塩素化は2時間後に完了した。ポリペプチド樹脂をDMF(2回)、MeOH(2回) 、D MF(2回)、MeOH(2回)、およびDCM(2回)で逐次洗浄した。システイン残基上のtBuS保護基を、10mLのnProOH／DMF／H₂O(5：3：2)中の299 μｌのトリブチルホスフィン(すなわち、P(C₄H₉)₃)で担持塩素化ポリペプチドを室温で1時間処理することによって、除去した。その後、樹脂をDMF(2回)、MeOH( 2回)、DMF(2回)、およびMeOH(2回)で逐次洗浄した。樹脂上の環化を、ACN/H₂O(1：1)中の炭酸ナトリウム溶液(すなわちNa₂CO₃、20 mg/mL)10mL中で、室温で48時間行った。Ellmanテスト(Ellman、Arch ．Biochem． Biophys．（1959）82:70)において黄色が現れないことで示される環化の完了の後、樹脂をDMF(2回)、MeOH(2回)、およびDMF(2回)で逐次洗浄し、そして次に真空下乾燥した。担持された環状ポリペプチドを、95%TFA水溶液で室温で1時間処理することによって、乾燥したポリペプチド樹脂から切断した。真空下でのTFA および水の除去の後、粗環状ポリペプチドを分取HPLCで、10mL／分で10％から40 ％のBの直線グラジエント(ここでAはH₂O中の0.1％(v/v)TFAであり、そしてBはAC N中の0.08％(v/v)TFAである)で40分かけて溶出して精製した。凍結乾燥の後に環状ポリペプチドを白色粉末として得た(5.7mg、収率3％；分析RP-HPLC：TFA系：t_R 14.54分；純度84.9％；TEAP系：t_R10.50分_;純度86.9％_;HRMS(ESI)：m/e(M+Cs⁺) 計算値C₄₂H₇₈N₁₁O₉SCs：1044.4681、実測値：1044.4653)。実施例15から18は、他の種々の天然アミノ酸を含むポリペプチド中に存在する場合の、セリン様アミノ酸、ホモセリンのハロ転化を示す。実施例15 HsLRSLGEMC の塩素化上記実施例14のポリペプチド合成の方法を、本実施例に適用した。側鎖官能基を以下のように保護した：Hs(TBDMS)；Arg(Pmc)；Ser(tBu)；Cys(tBuS)。ペプチドのアルファアミノ基をBoc基で保護した。ポリペプチドの塩素化を、DCM中の新しく調製した二塩化トリフェニルホスフィン(すなわちP(C₆H₅)₃Cl₂)の3当量を用いて1時間行った。ポリペプチド樹脂をD MF(2回)、MeOH(2回)、およびDMF(2回)で逐次洗浄し、そして次に真空下乾燥した。95％TFA水溶液で室温で1時間処理することによって、クロロポリペプチドを樹脂から切断した。真空下で溶媒を除去した後、粗生成物の純度をC-18カラムのRF-HPLC で、1mL／分で20％から80％のA中のBの直線グラジエント(ここでAはH₂OOO中の0. 1％(v/v)TFAであり、そしてBはACN中の0.08％(v/v)TFAである)で20分かけて溶出して分析した。粗クロロペプチドは2つの主要成分を有する：出発物質(t_R8.84分；25.2％；MS(ESI)：m/e(M+1)計算値C₄₄H₈₂N₁₃O₁₃S₃：1906、実測値：1096)およびクロロペプチド(t_R9.26分；34.8％；MS(ESI)：m/e(M+1)計算値C₄₄H₈₁N₁₃O₁₂S₃ Cl：1114、実測値：1114)実施例16 HsLWFLGDLC の塩素化上記実施例15のポリペプチド合成および塩素化の方法を、本実施例に適用した。側鎖官能基を以下のように保護した：Hs(TBDMS)；Trp(Boc);Asp(tBu)；Cys(tB uS)。ペプチドのアルファアミノ基をBoc基で保護した。塩素化および切断の後、粗クロロペプチドをRF-HPLCで分析したところ、主要ピークが1つだけ観測された(t_R14.40分；80.6％；MS(ESI)：m/e(M+1)計算値C₅₅H₈₃ N₁₁O₁₁S₂Cl：1172、実測値：1172)実施例17 HsHNLGQLC の塩素化上記実施例15のポリペプチド合成および塩素化の方法を、本実施例に適用した。側鎖官能基を以下のように保護した：Hs(TBDMS)；His(Tr)；Asn(Tr)；Gln(Tr) ；Cys(tBus)。ペプチドのアルファアミノ基をBoc基で保護した。塩素化および切断の後、粗生成物の純度を分析RF-HPLCで決定し、2つの主要成分が観測された：出発物質(t_R8.91分；32.5％；MS(ESI)：m/e(M+1)計算値C₄₆H₈₁ N₁₄O₁₂S₂：1085、実測値：1085)およびクロロペプチド(t_R9.33分；57.2％；MS(E SI)：m/e(M+1)計算値C₄₆H₈₀N₁₄O₁₁S₂Cl：1103、実測値：1103)。実施例18 HsYGTLGKLC の塩素化上記実施例15のポリペプチド合成および塩素化の方法を、本実施例に適用した。側鎖官能基を以下のように保護した:Hs(TBDMS)；Tyr(tBu)；Thr(tBu)；Lys(Bo c)；cys(tBus)。ペプチドのアルファアミノ基をBoc基で保護した。塩素化および切断の後、粗生成物の純度を分析RF-HPLCで決定し、1つの主要成分が観測された：クロロペプチド(t_R9.35分；71.6％；MS(ESI)：m/e(M+1)計算値 C₄₆H₇₉N₁₁O₁₁S₂Cl：1060、実測値：1060)実施例19 抗カルジオリピン抗体に対するチオエーテル環状ポリペプチドの結合親和性の決定抗カルジオリピン抗体に対する本発明のいくつかのチオエーテル環状ポリペプチドの結合親和性を競合ELISA(すなわち酵素結合免疫吸着アッセイ)によって決定し、そして対応するジスルフィド環状ポリペプチドの結合親和性と比較した( 例えば、3G3,2G3,およびG3)。 96ウェルの平底のImmulon Iマイクロタイタープレート(Dynatech Labs、Alexa ndria、VA)のうち、94ウェルを、30mLのエタノール中、1ウェル当たり50mgのカルジオリピンで被覆した。残りの2つのウェルをコントロールとして用い、そして各々に30mLのエタノールを入れた。4℃で終夜おいた後、リン酸緩衝生理食塩水(すなわちPBS、0.15M NaClおよび0.01M Na₂HPO₄、pH7.2)中の5％(w/v)の魚類ゼラチン200mLで、プレートを室温で2時間ブロックした。プレートをTris緩衝生理食塩水中で5回洗浄した(すなわち、TBS、0.15M NaClおよび0.05M Tris-HCl、p H8.5)。次に、β₂-糖タンパク質I(すなわちβ₂-GPI)を、100mL／ウェルの2.3％( v/v)IgG欠乏ヒト血清(Sigma Chemical Co.)として添加し、そして室温で2時間インキュベートした。このインキュベーションの間、チオエーテル環状ペプチドをTBS中の3％魚類ゼラチン中に溶解して、ペプチド溶液(約2mg/mL)を調製した。1500のGPL(すなわち IgGリン脂質)スコアを有する患者ACA-6501，および102のGPLスコアを有する患者 ACA-6701の血清を、TBS-PBS(1：1)中の3％魚類ゼラチン中で約40倍に希釈した。各ペプチドの可変量を希釈したヒト血清の各々の22mLとあわせ、そして次にTBS- PB S(1：1)中の3％魚類ゼラチンで最終容量220mLとした。各ペプチドについて、少なくとも4つのぺプチド濃度を用い、そして各データ点を二回測定した。 TBSで5回洗浄した後、100mLのペプチド／ヒト血清溶液を加え、そしてマイクロプレートをオービタルシェーカー(American Scientific，Rotator V)中、40rp mで1時間室温で攪拌した。プレートをTBS(5回)でよく洗浄し、そして0.5％(w/v) BSA-TBS中の希釈(1／1000)したアルカリホスファターゼ結合ヤギ抗ヒトIgG(Zyme d、South San Francisco，CA)を各ウェルに加えた(すなわちウシ血清アルブミン、BSA)。次に、プレートを室温で1時間インキュベートし、次いで100mL／ウェルのPPMP溶液(水中、3g/Lフェノールフタレインモノホスフェートと26.7g/Lの2-アミノ-2-メチル-1-プロパノール)を加えた。プレートを室温で21分間展開させ、そして各ウェルに50mLの0.2M Na₂HPO₄(Mallinckrodt)を添加して反応を停止させた。ブランクは、タンパク質被覆ウエルで構成し、これらのウエルにヒト血清を加えなかったこと以外は同様の処理をした。マイクロプレートリーダー(Bio-Tek Instruments、Model EL311)をプレートを550nmで読み取った。添加したペプチド量に対する吸光度をGraph Pad Prism(Graph Pad Software， Inc.)を用いてプロットした。ヒト血清の結合を50％阻害するペプチドの量(IC₅₀ として知られる)を、グラフから半極大吸光度と添加ペプチド量との交点で計算した。結果を表1に示す。全体として、チオエーテルアナログは対応するジスルフィド環状ペプチドに匹敵する類似の生物学的活性を有する。興味深いことに、G3ペプチドの系列の1つのチオエーテル環状ペプチドであるG3-EMTEは、ジスルフィドペプチドG3より活性である。患者ACA-6501の場合、G3-EMTEはG3の約2倍の活性である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ

Claims

【特許請求の範囲】１．少なくとも1つのポリペプチドループを有する環状ポリペプチドであって、該ループがチオエーテル結合を含み、該環状ポリペプチドが式：で表され、ここで Sが硫黄原子であり； L¹およびL²が独立して1個から10個の炭素原子の二価炭化水素部分であり； A¹およびA²が独立してαアミノ酸フラグメントであり； X¹が式J^N-(AA)_p-で表され； X²が式-(AA)_q-で表され； X³が式-(AA)_r-J^Cで表され；ここでAAがアミノ酸を表し； J^NがN末端置換基であり； J^CがC末端置換基であり；そして p、q、およびrが独立して0から50の整数である、環状ポリペプチド。２．請求項１に記載の環状ポリペプチドであって、該環状ポリペプチドが式：で表され、ここで Sが硫黄原子であり；Cが炭素原子であり； Nが窒素原子であり；0が酸素原予であり； L¹およびL²が独立して1個から10個の炭素原子の二価炭化水素部分であり； R¹およびR²が独立して-Hまたは1個から6個の炭素原子を有するアルキル基であり； R¹およびR²が炭素原子Cに結合し、これらが独立してキラリティーRまたはSを有し； R^N1およびR^N2が独立して-Hまたは1個から6個の炭素原子を有するアルキル基であり； X¹が式J^N-(AA)_p-で表され； X²力拭-(AA)_q-で表され； X³が式-(AA)_r-J^Cで表され；ここでAAがアミノ酸を表し； J^NがN末端置換基であり； J^CがC末端置換基であり；そして p、q、およびrが独立して0から50の整数である、環状ポリペプチド。３．L¹およびL²が独立して1個から6個を有する炭素原子の二価アルキル部分である、請求項２に記載の環状ポリペプチド。４．L¹およびL²が独立して、-CH₂-、-CH₂CH₂-、および-CH₂CH₂CH₂-からなる群から選択される、請求項２に記載の環状ポリペプチド。５．p、q、およびrが独立して0から10の整数である、請求項２に記載の環状ポリペプチド。６．R¹およびR²が独立して-Hまたは-CH₃である、請求項２に記載の環状ポリペプチド。７．R^N1およびR^N2が独立して-Hまたは-CH₃である、請求項２に記載の環状ポリペプチド。８．請求項２に記載の環状ポリペプチドであって、 X¹がAla-Gly-Pro-；pが3； X²が-Leu-Gly-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-；qが7； X³が-Pro-Gly；rが2； R¹が-H;R²が-H； R^N1が-H；R^N2が-H；であり、かつ L¹が-CH₂−；L²が-CH₂-； L¹が-CH₂CH₂-；L²が-CH₂-； L¹が-CH₂-;L²が-CH₂CH₂-；または L¹が-CH₂CH₂−;L²が-CH₂CH₂- である環状ポリペプチドの群から選択される、環状ポリペプチド。９．請求項２に記載の環状ポリペプチドであって、 X¹がGly-Pro-；pが2； X²が-Leu-Gly-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-；qが7； X³が-Pro-Gly；rが2； R¹が-H；R²が-H； R^N1が-H；R^N2が-H；であり、かつ L¹が-CH₂-；L²が-CH₂-； L¹が-CH₂CH₂-；L²が-CH₂-； L¹が-CH₂-；L²が-CH₂CH₂-；または L¹が-CH₂CH₂-；L²が-CH₂CH₂- である環状ポリペプチドの群から選択される、環状ポリペプチド。１０．請求項２に記載の環状ポリペプチドであって、 X¹がH-；pが0； X²が-Leu-Gly-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-；qが7； X³が-NH₂；rが0； R¹が-H；R²が-H； R^N1が-H；R^N2が-H；であり、かつ L¹が-CH₂-；L²が-CH₂-； L¹が-CH₂CH₂-；L²が-CH₂-； L¹が-CH₂-；L²が-CH₂CH₂-；または L¹が-CH₂CH₂-；L²が-CH₂CH₂- である環状ポリペプチドの群から選択される、環状ポリペプチド。１１．請求項２に記載の環状ポリペプチドであって、 X¹がH-；pが0； X²が-Leu-N^αMeGly-d-Val-d-Leu-Ala-Lys-Leu-；qが7； X³が-NH₂；rが0； R¹が-H；R²が-H； R^N1が-H；R^N2が-H；であり、かつ L¹が-CH₂-；L²が-CH₂-； L¹が-CH₂CH₂-；L²が-CH₂-； L¹がCH₂-；L²が-CH₂CH₂-；または L¹が-CH₂CH₂-；L²が-CH₂CH₂- である環状ポリペプチドの群から選択される、環状ポリペプチド。１２．請求項２に記載の環状ポリペプチドであって、 X¹がGly-Pro-；pが2； X²が-Leu-Ile-Leu-Ala-Pro-Asp-Arg-；qが7； X³が-NH₂；rが0； R¹が-H；R²が-H； R^N1が-H；R^N2が-H；であり、かつ L¹が-CH₂−;L²が-CH₂-； L¹が-CH₂CH₂-；L²が-CH₂-； L¹が-CH₂-；L²が-CH₂CH₂-；または L¹が-CH₂CH₂-；L²が-CH₂CH₂- である環状ポリペプチドの群から選択される、環状ポリペプチド。１３．少なくとも1つのハロアラニン様アミノ酸を有するハロゲン化ポリペプチドであって、該ハロゲン化ポリペプチドが式：Ｙ¹−ＡＡ^H−Ｙ² で表され、ここで AA^Hハロアラニン様アミノ酸であり； Y¹が式J^N-(AA)_j-で表され； Y²が式-(AA)_k-J^Cで表され；ここでAAがアミノ酸を表し； J^NがN末端置換基であり； J^CがC末端置換基であり；そして jおよびkが独立して0から50の整数であり、ただしj＋kが0ではない、ハロゲン化ポリペプチド。１４．請求項１３に記載の環状ポリペプチドであって、該ハロゲン化ポリペプチドが式：Ｙ¹−ＮＲ^N−ＣＲ^HＲ^B−Ｃ（＝Ｏ）−Ｙ² で表され、ここで Cが炭素原子であり；Nが窒素原子であり；0が酸素原子であり； R^Hが、-Cl、-Br、および-Iからなる群から選択されるハロ基；ならびに1個から1 0個の炭素原子のアルキル基を含むハロゲン含有アルキル基であり； R^Bが-Hまたは1個から6個の炭素原子を有するアルキル基であり； R^HおよびR^Bが炭素原子Cに結合し、これがキラリティーRまたはSを有し； R^Nが-Hまたは1個から6個の炭素原子を有するアルキル基であり； Y¹が式J^N-(AA)_j-で表され； Y²が式-(AA)_k-J^Cで表され；ここでAAがアミノ酸を表し； J^NがN末端置換基であり； J^CがC末端置換基であり；そして jおよびkが独立して0から50の整数であり、ただしj＋kが0ではない、ハロゲン化ポリペプチド。１５．R^Hが式-(CH₂)₂Xで表されるハロゲン含有アルキル基であり、ここでzが1から10の整数であり、そしてXがCl Br、またはIである、請求項１４に記載のハロゲン化ポリペプチド。１６．R^Hが-CH₂Cl、-CH₂Br、-CH₂CH₂Cl-、および-CH₂CH₂Br-からなる群から選択されるハロゲン含有アルキル基である、請求項１４に記載のハロゲン化ポリペプチド。１７．jおよびkが独立して0から10の整数である、請求項１４に記載のハロゲン化ポリペプチド。１８．R^Bが-Hまたは-CH₃である、請求項１４に記載のハロゲン化ポリペプチド。１９．R^Nが-Hまたは-CH₃である、請求項１４に記載のハロゲン化ポリペプチド。２０．請求項１４に記載のハロゲン化ポリペプチドであって、 R^Hが-CH₂Xまたは-CH₂CH₂X、ここでXがCl、Br、またはI； R^Bが-H；R^Nが-H； Y¹がAla-Gly-Pro-；jが3； Y²が-Leu-Gly-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Cys-Pro-Glyまたは -Leu-Gly-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-ホモシステイン-Pro-Gly；かつ kが10 であるハロゲン化ポリペプチドの群から選択される、ハロゲン化ポリペプチド。２１．請求項１４に記載のハロゲン化ポリペプチドであって、 R^Hが-CH₂Xまたは-CH₂CH₂X、ここでXがCl、Br、またはI； R^Bが-H；R^Nが-H； Y¹がGly-Pro-；jが2； Y²が-Leu-Gly-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Cys-Pro-Glyまたは -Leu-Gly-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-ホモシステイン-Pro-Gly；かつ kが10 であるハロゲン化ポリペプチドの群から選択される、ハロゲン化ポリペプチド。２２．請求項１４に記載のハロゲン化ポリペプチドであって、 R^Hが-CH₂Xまたは-CH₂CH₂X、ここでXがCl、Br、またはI； R^Bが-H；R^Nが-H； Y¹がH-；jが0； Y²が-Leu-Gly-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Cys-NH₂または -Leu-Gly-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-ホモシステイン-NH₂；かつ kが8 であるハロゲン化ポリペプチドの群から選択される、ハロゲン化ポリペプチド。２３．請求項１４に記載のハロゲン化ポリペプチドであって、 R^Hが-CH₂Xまたは-CH₂CH₂X、ここでXがCl、Br、またはI； R^Bが-H；R^Nが-H； Y¹がH-；jが0； Y²が-Leu-N^αMeGly-d-Val-d-Leu-Ala-Lys-Leu-Cys-NH₂または -Leu-N^αMeGly-d-Val-d-Leu-Gly-Lys-Leu-ホモシステイン-NH₂；かつ kが8 であるハロゲン化ポリペプチドの群から選択される、ハロゲン化ポリペプチド。２４．請求項１４に記載のハロゲン化ポリペプチドであって、 R^Hが-CH₂Xまたは-CH₂CH₂X、ここでXがCl、Br、またはI； R^Bが-H；R^Nが-H； Y¹がGly-Pro-；jが2； Y²が-Leu-Ile-Leu-Ala-Pro-Asp-Arg-Cys-NH₂または -Leu-Ile-Leu-Ala-Pro-Asp-Arg-ホモシステイン-NH₂；かつ kが8 であるハロゲン化ポリペプチドの群から選択される、ハロゲン化ポリペプチド。２５．環状ポリペプチドを、反応物ポリペプチドから調製する方法であって、該環状ポリペプチドが少なくとも1つのポリペプチドループを有し、該ループがチオエーテル結合を含み；該反応物ポリペプチドが、少なくとも1つのシステイン様アミノ酸および少なくとも1つのセリン様アミノ酸を有し、該システイン様アミノ酸がチオール基を有し、該セリン様アミノ酸がヒドロキシル基を有し；該方法が：（ａ）該セリン様アミノ酸の該ヒドロキシル基を、リンベースのハロゲン化試薬の補助の下にハロ基に変換してハロアラニン様アミノ酸を形成し、かくしてハロゲン化ポリペプチドを形成する工程；および（ｂ）該ハロゲン化ポリペプチドの該ハロアラニン様アミノ酸の該ハロ基と該ハロゲン化ポリペプチドの該システイン様アミノ酸の該チオール基とを、塩基性条件下で分子内反応させて、該チオエーテル結合を形成する工程を包含する、方法。２６．前記リンベースのハロゲン化試薬が、トリフェニルホスフィン二ハロゲン化物、亜リン酸トリフェニル二ハロゲン化物、トリフェニルホスフィンとハロ炭化水素化合物との混合物、および亜リン酸トリフェニルとハロ炭化水素化合物との混合物からなる群から選択される試薬を含む、請求項２５に記載の方法。２７．前記塩基性条件が炭酸ナトリウムの添加によって提供される、請求項２５に記載の方法。２８．前記反応物ポリペプチドが溶解形態で提供される、請求項２５に記載の方法。２９．前記反応物ポリペプチドが担持形態で提供され；前記変換工程(a)が該担持反応物ポリペプチドを用いて行われ；工程(b)を行う前に、工程(a)で製造される前記ハロゲン化ポリペプチドをその支持体から切断して溶解ハロゲン化ポリペプチドを得;そして該反応工程(b)が該溶解ハロゲン化ポリペプチドを用いて行われる、請求項２５に記載の方法。３０．前記反応物ポリペプチドが担持形態で提供され;前記変換工程(a)が該担持反応物ポリペプチドを用いて行われ、担持ハロゲン化ポリペプチドを得；そして前記反応工程(b)が該担持ハロゲン化ポリペプチドを用いて行われる、請求項２５に記載の方法。３１．ハロゲン化ポリペプチドを、反応物ポリペプチドから調製する方法であって、該ハロゲン化ポリペプチドが少なくとも1つのハロアラニン様アミノ酸を有し、該ハロアラニン様アミノ酸がハロ基-Xを有し、ここでXがCl、Br、またはIであり；該反応物ポリペプチドが少なくとも1つのセリン様アミノ酸を有し、該セリン様アミノ酸がヒドロキシル基を有し；該方法が：（ａ）該セリン様アミノ酸の該ヒドロキシル基を、リンベースのハロゲン化試薬の補助の下にハロ基に変換して、ハロアラニン様アミノ酸を得る工程を包含する、方法。３２．前記リンベースのハロゲン化試薬が、トリフェニルホスフィン二ハロゲン化物、亜リン酸トリフェニル二ハロゲン化物、トリフェニルホスフィンとハロ炭化水素化合物との混合物、および亜リン酸トリフェニルとハロ炭化水素化合物との混合物からなる群から選択される試薬を含む、請求項３１に記載の方法。３３．前記リンベースのハロゲン化試薬が二塩化トリフェニルホスフィンを含む、請求項３１に記載の方法。３４．前記リンベースのハロゲン化試薬が二臭化トリフェニルホスフィンを含む、請求項３１に記載の方法。３５．前記リンベースのハロゲン化試薬がトリフェニルホスフィンと四塩化炭素との混合物を含む、請求項３１に記載の方法。３６．前記反応物ポリペプチドに対してモル過剰の前記リンベースのハロゲン化試薬が使用される、請求項３１に記載の方法。３７．前記セリン様アミノ酸の前記ヒドロキシル基が保護形態である、請求項３１に記載の方法。３８．前記セリン様アミノ酸の前記ヒドロキシル基が、tert-ブチルジメチルシリルエーテル基としての保護形態である、請求項３１に記載の方法。３９．前記反応物ポリペプチドが溶解形態である、請求項３１に記載の方法。４０．前記反応物ポリペプチドが担持形態である、請求項３１に記載の方法。