JP2000512272A - 酸化窒素の合成を増大させる方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、血管内皮細胞における酸化窒素(ＮＯ)の濃度を増大させる方法であって、式(Ｉ) ［式中、Ｒは、水素、−ＯＨ、−Ｏ(Ｃ₁−Ｃ₄アルキル)、−ＯＣＯ(Ｃ₁−Ｃ₄アルキル)、または−ＯＣＯＡｒ(Ａｒは、フェニル、または場合により置換されていることのあるフェニルである)であり；Ｒ₁は、Ｒ、−Ｃｌ、または−Ｆであり；Ｒ₂は、１−ピロリジニル、１−ピペリジニル、または１−ヘキサメチレンイミノである］の化合物、またはその医薬的に許容され得る塩もしくは溶媒和物を投与することを含んでなる方法を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】 酸化窒素の合成を増大させる方法 本出願は、１９９６年５月２１日に提出した米国仮出願６０／０１８，０７１ の利益を請求する。 発明の分野 本発明は、有機化学および薬学の分野を扱い、そして特に血管内皮細胞におい て内皮酸化窒素(ＮＯ)の合成を増大させる化合物および方法を提供する。 発明の背景 酸化窒素は、心臓血管系、腸管系、中枢神経系、および免疫系の正常な生理機 能において、極めて重要な役割を担う調節分子である。酸化窒素は、ＮＯシンタ ーゼ(ＮＯＳ)として知られている酵素のファミリーによりＬ−アルギニンから合 成される。特に本発明と密接な関係があるものは、ｅＮＯＳとして知られている 、血管内皮細胞において産生されるカルシウム依存性ＮＯＳである。最近、ｅＮ ＯＳ遺伝子の調節をホルモンであるエストロゲンと結びつける研究が多数なされ ている。エストロゲンは、ｅＮＯＳ ｍ−ＲＮＡの産生を上方調節して、その結 果、内皮細胞におけるｅＮＯＳの合成を上方調節することが示された。このｅＮ ＯＳの量の増大は、内皮細胞が血管系における適当な刺激に応答してより多くの ＮＯを産生することを可能にする。 脈管構造において、内皮により誘導されるＮＯは幾つかの作用を有し、その中 には、血小板凝集の阻害、炎症性細胞の癒着、および平滑筋細胞の増殖がある。 内皮により誘導されるＮＯは、血管の正常状態の重要な調節物質である。一般的 に使用される内皮機能の指標である流量依存性拡張は、主として、ＮＯにより媒 介される。 ＮＯによる血管の正常状態の調節機構は、内皮管壁細胞に対する、アセチルコ リン、ブラジキニン、剪断応力等といったような刺激により開始される。内皮細 胞は、ｅＮＯＳによりＬ−アルギニンからＮＯを産生することにより応答する。 産生されたＮＯは、内皮細胞から離れて、隣接の平滑筋細胞において活性グアニ ル酸シクラーゼを刺激する。グアニル酸シクラーゼの活性化は、ｃＧＭＰのレベ ルを増大させて、平滑筋を弛緩させ、従って、血管を拡張させて、血流を増大さ せる。さらなる情報に関しては、Moncadaら，New Eng．J．Med.，３２９，２０ ０２−２０１２頁（１９９３）、およびVallanceら，J．Royl．Coll.Physjcian London，２８，２０９−２１９頁（１９９４）を参照。 内皮ＮＯ生成の減少は、血管拡張の障害、異常血管痙攣、血小板凝集の増大、 並びに炎症性細胞の癒着および湿潤の増大をもたらし得る。内皮ＮＯおよび内皮 機能の障害は、喫煙、高コレステロール血症、ホモシスチン尿症(homocycteinur ia)、および糖尿病を含め、冠状動脈疾患に対する危険因子と関連がある。冠状 動脈においてＮＯにより調節される活性の変化は、心筋梗塞をもたらす急性冠症 候群の原因となり得る。内皮ＮＯシステムの障害、およびその結果として生ずる 血管収縮は、発作のような大脳虚血事象においてニューロンに対する損傷を悪化 させることに関係があった。加えて、最近の研究は、内皮ＮＯがインシュリンに 対する血管感受性を媒介することを示し、従って、高められたＮＯ産生は、糖尿 病の血管効果を処置するのに有用であり得る。 一般に、実験的証拠と臨床的証拠との両方の多数の証拠があり、これらは、脈 管構造におけるＮＯのレベルの増大が、糖尿病、発作、アテローム性動脈硬化症 、および高血圧症といったような多くの病的状態において有利であることを示す 。 脈管構造においてＮＯレベルを高めるための現在の療法は、代謝的にＮＯを放 出する、高用量のＬ−アルギニン(ｅＮＯＳ基質)、またはニトログリセリンもし くはニトロプルシドナトリウムといったような化合物を投与することである。こ れらの療法は、有効であり得るが、各々、望ましくない副作用を示している。加 えて、これらの療法は、身体からのそれらの迅速なクリアランスにより、それら がＮＯの持続性放出を維持できないことが欠点である。 脈管構造におけるＮＯの濃度を増大させるために、新たな療法を利用できるな らば、素晴らしく有益なことであろう。 発明の要約 本発明は、内皮により誘導されるＮＯを増大させる方法であって、その必要が あるヒトに、式Ｉ： ［式中、 Ｒは、水素、−ＯＨ)−Ｏ(Ｃ₁−Ｃ₄アルキル)、−ＯＣＯ(Ｃ₁−Ｃ₄アルキル) 、または−ＯＣＯＡｒ(Ａｒは、フェニル、または場合により置換されているこ とのあるフェニルである)であり； Ｒ₁は、Ｒは−Ｃｌ、または−Ｆであり； Ｒ₂は、１−ピロリジニル、１−ピペリジニル、または１−ヘキサメチレンイ ミノである］ の化合物、またはその医薬的に許容され得る塩もしくは溶媒和物の有効量を投与 することを含んでなる方法を提供する。 本発明の詳細な説明 本発明は、選択された一群の２−アリールベンゾ[ｂ]チオフェン類である式Ｉ の化合物が、ｅＮＯＳおよび内皮により誘導されるＮＯ濃度を増大させるのに有 用であるという発見に関する。 本明細書中に記載する化合物の記述で使用される一般用語は、それらの通常の 意味を有する。例えば、「Ｃ₁−Ｃ₄アルキル」は、メチル、エチル、プロピル、 ィソプロピル、ｎ−ブチル等を含め、１〜４個の炭素原子からなる直鎖状または 分枝鎖状の脂肪族鎖をいう。 「置換されているフェニル」という用語は、Ｃ₁−Ｃ₄アルキル、Ｃ₁−Ｃ₄アル コキシ、ヒドロキシ、ニトロ、クロロ、フルオロ、またはトリ(クロロもしくは フルオロ)メチルよりなる群から選択される、１つまたは２つの置換基を有する フェニル基をいう。「Ｏ(Ｃ₁−Ｃ₄アルキル)」は、メトキシ、エトキシ、ｎ−プ ロポキシ、イソプロポキシ等といったような、酸素架橋を介して結合したＣ₁− Ｃ₄アルキル基をいう。 「医薬的に許容され得る塩」という用語は、無毒であることが知られており、 医薬品文献で一般的に使用される酸付加塩または塩基付加塩のいずれかをいう。 一般的に使用される酸付加塩には、硫酸、硝酸、塩酸、臭化水素酸、リン酸、亜 リン酸等の添加により形成される無機塩；または酢酸、ギ酸、安息香酸、クエン 酸、メタンスルホン酸等の添加により形成される有機塩が含まれる。一般的に使 用される塩基付加塩には、アルカリ金属またはアルカリ土類金属の水酸化物、水 酸化アンモニウム、アルキルアミン類、または芳香族アミン類等により形成され る塩が含まれるであろう。本発明の好ましい塩は、塩酸塩であろう。 「酸化窒素(ＮＯ)の欠乏または酸化窒素(ＮＯ)の必要と関連がある生理的状態 を抑制する」という言葉には、該生理的状態の進行、重篤度、またはその結果と して生ずる症状もしくは効果を妨げること、予防すること、抑えること、そして 遅らせること、止めること、または反転させることが含まれる。そのような生理 的状態には、病的血小板凝集、病的血管収縮、糖尿病、発作、アテローム性動脈 硬化症の血管効果、および異常血管痙彎といったような、この出願で述べる生理 的状態が含まれる。 「溶媒和物」という用語は、１つまたはそれ以上の適当な溶媒分子と共に、１ つまたはそれ以上の、式Ｉの化合物のような溶質分子を含んでなる集合体を表す 。本発明の好ましい態様であるラロキシフェン塩酸塩は、ＲおよびＲ₁が各々ヒ ドロキシルであり；Ｒ₂が１−ピペリジニルであり；そして、その塩酸塩である 場合の式Ｉの化合物である。ラロキシフェンは、[２−(４−ヒドロキシフェニル )−６−ヒドロキシベンゾ[ｂ]チエン−３−イル][４−[２−(１−ピペリジニル) エトキシ]フェニル]メタノン塩酸塩と名付けられている。 一般に、少なくとも１つの式Ｉの化合物を一般的な賦形剤、希釈剤、または担 体と共に製剤化して、錠剤に圧縮するか、または経口投与に便利なエリキシル剤 もしくは溶液剤として製剤化し、または筋肉内もしくは静脈内経路により投与す る。その化合物は、経皮的に投与することができ、また持続性放出用量形態等と して製剤化してもよい。 本発明の方法で使用する化合物は、米国特許第４,１３３,８１４号、同第４, ４１８,０６８号、同第４,３８０,６３５号、および同第５,３９３,７６３号（ これらの米国特許に記載されている内容は全て、本発明の一部を構成する）に詳 述されている方法のような、確立された方法に従って製造することができる。一 般に、その方法は、６−ヒドロキシル基および２−(４−ヒドロキシフェニル)基 を有するベンゾ[ｂ]チオフェンで開始される。その出発化合物を保護し、アシル 化し、脱保護して、式Ｉの化合物を形成する。そのような化合物の製造例は、先 に論じた米国特許に記されている。 本発明の方法で使用する化合物は、広範囲にわたる様々な有機酸および無機酸 並びに塩基と共に、医薬的に許容され得る酸および塩基付加塩を形成し、医薬品 化学で使用されることの多い生理的に許容され得る塩が含まれる。そのような塩 もまた、本発明の一部である。そのような塩を形成するのに使用される典型的な 無機酸には、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸、次リン酸 等が含まれる。脂肪族モノカルボン酸およびジカルボン酸、フェニル置換アルカ ン酸、ヒドロキシアルカン酸およびヒドロキシアルカン二酸、芳香族酸、脂肪族 スルホン酸および芳香族スルホン酸といったような有機酸から誘導される塩もま た使用することができる。従って、そのような医薬的に許容され得る塩には、酢 酸塩、フェニル酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、アクリル酸塩、アスコルビン酸塩 、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩 、メトキシ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ｏ−アセトキシ安息香酸塩、ナフタ レン−２−安息香酸塩、臭化物、イソ酪酸塩、フェニル酪酸塩、β−ヒドロキシ 酪酸塩、ブチン−１,４−二酸塩、ヘキシン−１,４−二酸塩、カプリン酸塩、カ プリル酸塩、塩化物、ケイ皮酸塩、クエン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グリコー ル酸塩、ヘプタン酸塩、馬尿酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、ヒドロ キシマレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシラート、ニコチン酸塩、イ ソ ニコチン酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、フタル酸塩、テレフタル酸塩、リン酸塩、 一水素リン酸塩、二水素リン酸塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、プロピオル酸 塩、プロピオン酸塩、フェニルプロピオン酸塩、サリチル酸塩、セバシン酸塩、 コハク酸塩、スベリン酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、ピロ硫酸塩、亜硫酸塩、重亜硫 酸塩、スルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、p−ブロモフェニルスルホン酸塩 、クロロベンゼンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、２−ヒドロキシエタンス ルホン酸塩、メタンスルホン酸塩、ナフタレン−１−スルホン酸塩、ナフタレン −２−スルホン酸塩、p−トルエンスルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、酒石 酸塩等が含まれる。好ましい塩は塩酸塩である。 医薬的に許容され得る酸付加塩は、典型的には、式Ｉの化合物を等モル量また は過剰量の酸と反応させることにより形成される。その反応物は、一般に、ジエ チルエーテルまたはベンゼンといったような相互溶媒中で混合する。塩は、通常 、約１時間〜１０日以内に溶液から沈析するので、濾過により単離するか、また は溶媒を従来の方法によりストリップして除去することができる。 本明細書中で使用する場合、「有効量」という用語は、そのような処置の必要 があるヒトにおいて、内皮により誘導されるＮＯ濃度を増大させることができる 式Ｉの化合物の量を意味する。処置の必要があるヒトには、限定されるものでは ないが、冠疾患危険因子、糖尿病等による内皮ＮＯ調節経路の障害により、血管 収縮または不適当な血小板凝集を患っているヒトが含まれるであろう。本発明で 意図するように、式Ｉの化合物は、内皮ＮＯ調節経路の障害による病的続発症を 抑制する、改善する、減少させる、制限する、または予防するのに有用であろう 。 本発明により投与される化合物の具体的な用量は、勿論、例えば、投与される 化合物、投与経路、患者の状態、および処置する病的状態を含め、その病気を取 り巻く個々の状況により決定されるであろう。典型的な１日の用量は、本発明の 化合物の約０．１mg〜約１０００mg／日という無毒用量レベルを含むであろうし 、より詳細には、各日１回〜３回、または効能を必要とする度に、約１５mg〜約 ８０mg／日であろう。 加えて、式Ｉの化合物は、内皮ＮＯ経路と相互作用する他の薬剤、例えば、ニ トログリヤリン、ニトロプルシドナトリウム、Ｌ−アルギニン等と同時に、また は引き続いて使用することができる。 「医薬的に許容され得る製剤」とは、担体、希釈剤、賦形剤、および塩が製剤 の活性成分(式Ｉの化合物)と適合しなければならず、そのレシピエントに対して 有害であってはならないことを意味する。 医薬品製剤は、当業界において知られている方法により製造することができる 。例えば、本発明の化合物は、一般的な賦形剤、希釈剤、または担体と共に製剤 化して、錠剤、カプセル剤等に形成することができる。そのような製剤に適当で ある賦形剤、希釈剤、および担体の例には、次のものが含まれる：デンプン、糖 類、マンニトール、およびケイ酸誘導体といったような充填剤および増量剤；カ ルボキシメチルセルロースおよび他のセルロース誘導体、アルギン酸塩、ゼラチ ン、およびポリビニルピロリドンといったような結合剤；グリセロールのような 湿潤剤；寒天(agar agar)、炭酸カルシウム、および重炭酸ナトリウムといった ような崩壊剤；パラフィンのような溶解を遅延するための物質；第四級アンモニ ウム化合物のような吸収促進剤；セチルアルコール、グリセロールモノステアラ ートといったような界面活性剤；カオリンおよびベントナイトといったような吸 着担体；並びにタルク、ステアリン酸カルシウムおよびステアリン酸マグネシウ ム、および固形ポリエチルグリコールといったような滑沢剤。最終医薬品形態は 、使用する賦形剤の種類により、丸剤、錠剤、粉末剤、ロゼンジ剤、シロップ剤 、エアゾール剤、サシェ剤、カシェ剤、エリキシル剤、懸濁液剤、エマルション 剤、軟膏剤、坐剤、無菌注射用溶液剤、または無菌包装粉末剤であり得る。 加えて、本発明の化合物は、持続性放出用量形態としての製剤に十分適してい る。その製剤はまた、それらが腸管のある特定部位においてのみ、または好まし くは腸管のある特定部位において、出来る限り一定時間にわたり、活性成分を放 出するよう構築することもできる。そのような製剤は、高分子物質またはワック スから製造することができる、コーティング、エンベロープ、または保護マトリ ックスを必要とするであろう。 次の製剤例は、説明を目的として記すものであって、何ら限定しようと意図す るものではない。そのような製剤中の全活性成分は、その製剤の０．１重量％〜 ９９．９重量％を含んでなる。「活性成分」という用語は、式Ｉの化合物、また はその塩もしくは溶媒和物を意味する。 製剤例 製剤例１ ：ゼラチンカプセル剤 次のものを使用して、ゼラチン硬カプセル剤を製造する。 各成分を混合し、No.４５メッシュＵ.Ｓ.の篩にかけて、ゼラチン硬カプセル に充填する。 上記の製剤は、与えられた妥当な変形に応じて変化させることができる。 以下の成分を使用して、錠剤を製造する。製剤例２ ：錠剤 各成分を混合し、圧縮して、錠剤を形成する。 あるいはまた、活性成分を各々２.５−１０００mg含む錠剤を次のように製造 する。製剤例３ ：錠剤活性成分、デンプン、およびセルロースをNo.45メッシュＵ.Ｓ.の篩にかけて、 完全に混合する。その結果得られた粉末とポリビニルピロリドン溶液とを混合し た後、これをNo.１４メッシュＵ.Ｓ.の篩にかける。このようにして製造した顆 粒を５０−６０℃で乾燥させて、No.１８メッシュＵ.Ｓ.の篩にかける。次いで 、予めNo.６０メッシュＵ.Ｓ.の篩にかけておいたカルボキシメチルデンプンナ トリウム、ステアリン酸マグネシウム、およびタルクを顆粒に加え、混合した後 、これを打錠機で圧縮して、錠剤を得る。 ５ml用量につき、薬物を各々０.１−１０００mg含む懸濁液剤を次のように製 造する。製剤例４ ：懸濁液剤 薬物をNo.４５メッシュＵ.Ｓ.の篩にかけ、カルボキシメチルセルロースナトリ ウムおよびシロップと混合して、滑らかなペーストとする。安息香酸溶液、香料 、および着色料を少量の水で希釈して、撹拌しながら加える。次いで、十分水を 加えて、必要な体積とする。 次の成分を含むエアゾール溶液剤を製造する。製剤例５ ：エアゾール剤活性成分をエタノールと混合して、その混合物をプロペラント２２の一部に加え 、３０℃まで冷却して、充填装置に移す。次いで、必要な量をステンレススチー ル製の容器に入れ、残りのプロペラントで希釈する。次いで、その容器にバルブ 装置を取り付ける。 坐剤を次のように製造する。製剤例６ ：坐剤 活性成分をNo.６０メッシュＵ.Ｓ.の篩にかけ、必要最小限の熱を使用して、予 め溶融しておいた飽和脂肪酸グリセリドに懸濁させる。次いで、その混合物を呼 称２ｇ容量の坐薬型に流し込んで、放冷する。 静脈内製剤を次のようにして製造する。製剤例７ ：静脈内溶液剤 先の成分の溶液を１分間あたり約１mlの速度で患者に静脈内投与する。 試験法 内皮組織においてＮＯの濃度を高めるという、本発明の化合物の有用性の証拠 として、次の試験システムを使用した。細胞培養 ： 凍結保存された１人のドナーのヒト臍静脈内皮細胞(ＨＵＶＥＣ)をClonetics Corporation，San Diego ＣＡから購入した。これらの細胞は、Cloneticsによ り１°(一次継代細胞)であると定義されている。その細胞を液体窒素中に保存し て、各々の実験のためにアリコートを新たに取り出す。その細胞を解凍して、培 地７５mlの入ったＴ−７５フラスコに入れる。全てのＨＵＶＥＣ培養に関して、 ラブウェア(labware)(Corning)を全て、Ｍ１９９培地(Gibco)中の０.２％ゼラチ ン(Sigma Chemical Co.)を用いて３７℃で２０分間被覆した。１０％ウシ胎仔血 清(Gibco)、５０ug／ml内皮細胞増殖補助剤(Collaborative Biochemical Produc ts，Bedford ＭＡ)、100ug／mlブタヘパリン(Gibco)、１０単位／mlペニシリン 、１０ug／mlストレプトマイシン、および０.２mＭ Ｌ−グルタミンを含む、フ ェノールレッド不含有Ｍ１９９中、その細胞を３７℃および５％ＣＯ₂で培養し た。２°培養細胞が７０−９０％の集密度に達したら、それらを、培地１５mlの 入った、ゼラチンで被覆したＴ−７５フラスコに１：３で分けて、３°培養細胞 を産生する。これらの培養が７０−９０％の集密度に達した後、典型的には、３ −４日後、これらの４°培養細胞を、培地１mlの入った、被覆した１２ウェルの プレートに１：３で分けた。実験は全て、これらの四次継代細胞を用いて行った 。７２時間後、その細胞が集密となって、薬物処理を開始した。古い培地を吸引 して取り除き、薬物を含む薬物試験培地(１５％去勢されたウマ血清(Gemini Bio products，Calabasas ＣＡ)、１０単位／mlペニシリン、１０ug／mlストレプト マイシン、および０.２ｍＭ Ｌ−グルタミン)1mlを加えた。ＤＭＳＯ中、式Ｉの 試験化合物または１７−β−エストラジオールの保存溶液を１０ｍＭで調製した 。その細胞を、薬物を用いて３７℃で４８時間処理した。酸化窒素依存性ｃＧＭＰの誘導 ３枚のプレート(１つの実験用)をインキュベータから取り出し、ペーパータオ ルの上に置いて、冷却を防ぐ。一度に１枚のプレート、培地を取り除いて、温か いＨＢＳＳ(Gibco)1mlを加える。これを取り除いて、平衡化緩衝液０．５ml＋／ −Ｌ−ＮＡＭＥ(Ｎ−ニトロ−Ｌ−アルギニンメチルエステル、Sigma)２００ul で置き換える。その平衡化緩衝液は、ＨＢＳＳ、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１.２ｍ Ｍ CaCl₂、０.６ｍＭ ＭｇＳＯ₄、および０．５ｍＭイソブチルメチルキサンチ ン(ＩＢＭＸ)、および１０ｕＭ Ｌ−アルギニンからなり、これを各々の保存溶 液に新たに加える。ＩＢＭＸは、ＤＭＳＯ中の２００ｍＭ保存溶液として３７℃ で製造する。５％ＣＯ₂中、細胞を３７℃で３０分間平衡化する。インキュベー ション後、刺激剤を含む「刺激」緩衝液０．５mlを１０分間加える。対照のため の刺激緩衝液は、平衡化緩衝液＋指定した刺激剤からなり、これは、１）負の対 照、２）正の対照、１ｍＭニトロプルシドナトリウム(Sigma)、３）１ｕＭＡ− ２３１８７(カルシウムイオノホア)、４）１ｕＭ Ａ−２３１８７および２００ ｕＭ Ｌ−ＮＡＭＥ(この対照グループは、このアッセイにおいて見られる効果( ｃＧＭＰの増大)が単に内皮細胞において産生されたＮＯによるものであること を実証する)である。式Ｉの化合物で処理した試験細胞を１ｕＭ Ａ−２３１８７ で刺激する。１０分後、その緩衝液を取り除き、０．０１Ｎ ＨＣｌ ２００ulを 加えて、その細胞を４℃で３０分間揺り動かす(rocking)ことにより、ｃＧＭＰ を抽出する。２００ulのアリコートを各々、１Ｎ ＮａＯＨ 2ulを含む管に入れ る。保存のために、試料を−２０℃で凍結させる。プレートの各々のウェルに、 ０.１Ｎ NaOH中の０.５％ＳＤＳ ２５０ulを加えて、付着している細胞を可溶 化する。プレートをプラスチック製のラップにくるんで、ＢＣＡ法(Pierce Chem ical Co.)による後のタンパク質アッセイのために、−２０℃で凍結させた。（ 実験において、平均総タンパク質量(ｍｇ単位)を各々のウェルについて測定して 、ｃＧＭＰ含量を標準化する(normalize)ために使用した）。アセチル化のプロ トコルに関する製造業者の指示に従って、ｃＧＭＰ含量を酵素イムノアッセイ(A mersham Co，ＲＰＮ.２２６)により測定した。試料２００ulのアセチル化で 、試料１mlに対して試薬を１００ulではなく、２０ul用いたことを除けば、指示 に従っ て、アッセイを行う。アッセイをサーモマックス(thermomax)分光光度計にて４ ５０ｎＭで定量した。 １７−β−エストラジオールの正の対照は、ＮＯ依存性ｃＧＭＰの量の予期さ れる増大を実証した。式Ｉの化合物は、ＮＯの濃度を増大させて、これらの内皮 細胞においてｃＧＭＰを誘導することが発見された。表１において、ラロキシフ ェン塩酸塩に関するＮＯ依存性ｃＧＭＰの増大が示されている。 表１ ^aｐＭ／ml。^b タンパク質のｐＭ／mg。^* p＞．０１。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 31/4025 Ａ６１Ｋ 31/40 ６０４ 31/4436 31/44 ６１２ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，Ｓ Ｄ，ＳＺ，ＵＧ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ， ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，Ｇ Ｂ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ， ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，Ｎ Ｏ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ， ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．その必要があるヒトにおいて血管内皮細胞における酸化窒素(ＮＯ)合成を 増大させる方法であって、該ヒトに、式Ｉ： ［式中、 Ｒは、水素、−ＯＨ、−Ｏ(Ｃ₁−Ｃ₄アルキル)、−ＯＣＯ(Ｃ₁−Ｃ₄アルキル) 、または−ＯＣＯＡｒ(Ａｒは、フェニル、または場合により置換されているこ とのあるフェニルである)であり； Ｒ₁は、Ｒ、−Ｃｌ、または−Ｆであり； Ｒ₂は、１−ピロリジニル、１−ピペリジニル、または１−ヘキサメチレンイ ミノである］ の化合物、またはその医薬的に許容され得る塩もしくは溶媒和物を投与すること を含んでなる方法。 ２．式Ｉの該化合物が[２−(４−ヒドロキシフェニル)−６−ヒドロキシベン ゾ[ｂ]チエン−３−イル][４−[２−(１−ピペリジニル)エトキシ]フェニル]メ タノン塩酸塩である、請求項１に記載の方法。 ３．酸化窒素(ＮＯ)の欠乏または酸化窒素(ＮＯ)の必要と関連がある生理的状 態を抑制する方法であって、その必要があるヒトに、式Ｉ：［式中、 Ｒは、水素、−ＯＨ、−Ｏ(Ｃ₁−Ｃ₄アルキル)、−ＯＣＯ(Ｃ₁−Ｃ₄アルキル) 、または−ＯＣＯＡｒ(Ａｒは、フェニル、または場合により置換されているこ とのあるフェニルである）であり； Ｒ₁は、Ｒ、−Ｃｌ、または−Ｆであり； Ｒ₂は、１−ピロリジニル、１−ピペリジニル、または１−ヘキサメチレンイ ミノである］ の化合物、またはその医薬的に許容され得る塩もしくは溶媒和物を投与すること を含んでなる方法。 ４．式Ｉの該化合物が[２−(４−ヒドロキシフェニル)−６−ヒドロキシベン ゾ[ｂ]チエン−３−イル][４−[２−(１−ピペリジニル)エトキシ]フェニル]メ タノン塩酸塩である、請求項３に記載の方法。