JP2000212200A - Ｔリンパ球培養用担体、活性化ｔリンパ球の製造方法、活性化ｔリンパ球製造用キット及び免疫治療剤 - Google Patents
Ｔリンパ球培養用担体、活性化ｔリンパ球の製造方法、活性化ｔリンパ球製造用キット及び免疫治療剤Info
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【課題】 簡便な操作で雑菌等のコンタミネーション等
による危険性が少なく長期保存に対する保存安定性、品
質性能の信頼性に優れる活性化Ｔリンパ球が得られるＴ
リンパ球培養用担体、これを用いるＴリンパ球の培養効
率及びその培養リンパ球の活性化効率などのバラツキが
少ない活性化Ｔリンパ球の製造方法、活性化Ｔリンパ球
製造用キット並びに癌、感染症等の養子免疫療法に好適
な免疫治療剤の提供。 【解決手段】 抗ＣＤ３抗体を固定化した不溶性担体で
あって、その表面が乾燥されたものからなるＴリンパ球
培養用担体、このＴリンパ球培養用担体及び培養用液体
培地を用いてＴリンパ球を培養し活性化Ｔリンパ球を得
ることを特徴とする活性化Ｔリンパ球の製造方法、前記
Ｔリンパ球培養用担体及び培養用培地からなる活性化Ｔ
リンパ球製造用キット並びに前記活性化Ｔリンパ球の製
造方法によって得られる活性化Ｔリンパ球を含有してな
る免疫治療剤。
による危険性が少なく長期保存に対する保存安定性、品
質性能の信頼性に優れる活性化Ｔリンパ球が得られるＴ
リンパ球培養用担体、これを用いるＴリンパ球の培養効
率及びその培養リンパ球の活性化効率などのバラツキが
少ない活性化Ｔリンパ球の製造方法、活性化Ｔリンパ球
製造用キット並びに癌、感染症等の養子免疫療法に好適
な免疫治療剤の提供。 【解決手段】 抗ＣＤ３抗体を固定化した不溶性担体で
あって、その表面が乾燥されたものからなるＴリンパ球
培養用担体、このＴリンパ球培養用担体及び培養用液体
培地を用いてＴリンパ球を培養し活性化Ｔリンパ球を得
ることを特徴とする活性化Ｔリンパ球の製造方法、前記
Ｔリンパ球培養用担体及び培養用培地からなる活性化Ｔ
リンパ球製造用キット並びに前記活性化Ｔリンパ球の製
造方法によって得られる活性化Ｔリンパ球を含有してな
る免疫治療剤。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、Ｔリンパ球培養用
担体、活性化Ｔリンパ球の製造方法、Ｔリンパ球製造用
キット及び免疫治療剤に関する。
担体、活性化Ｔリンパ球の製造方法、Ｔリンパ球製造用
キット及び免疫治療剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】近年、免疫学の進歩により、免疫学的監
視機構の低下によって発生する種々の免疫学的不全症に
対して、さまざまな免疫治療法が試みられている。免疫
学的監視機構の低下によって発生する疾患としては、癌
（悪性腫瘍）、先天性免疫不全症、後天的免疫不全症等
が挙げられる。免疫療法の目的の一つは、免疫学的監視
機構を回復または亢進させることにより、これらの疾患
を治療することである。
視機構の低下によって発生する種々の免疫学的不全症に
対して、さまざまな免疫治療法が試みられている。免疫
学的監視機構の低下によって発生する疾患としては、癌
（悪性腫瘍）、先天性免疫不全症、後天的免疫不全症等
が挙げられる。免疫療法の目的の一つは、免疫学的監視
機構を回復または亢進させることにより、これらの疾患
を治療することである。
【０００３】例えば、癌の免疫療法としては、免疫担当
細胞（例えばキラーＴリンパ球、ＮＫ細胞等）による腫
瘍細胞への認識能力を高めて、腫瘍細胞を破壊し、排除
させる方法が挙げられる。先天性免疫不全症や後天的免
疫不全症の場合の免疫療法としては、欠如または低下し
た免疫学的監視機構を補助または亢進することにより、
重篤な感染症を排除したり、あるいは、根本的に免疫不
全状態を回復させる方法が挙げられる。免疫療法の代表
的なものとして、例えば、患者の血液を採取し、リンパ
球を分離し培養用培地中で培養し、ＩＬ−２を作用させ
ることにより、リンフォカイン活性化キラー（以下、Ｌ
ＡＫと略す）細胞を誘導し、培養し、得られたＬＡＫ細
胞を再び患者の体内に戻す養子免疫療法（活性化リンパ
球療法）が開発されている。
細胞（例えばキラーＴリンパ球、ＮＫ細胞等）による腫
瘍細胞への認識能力を高めて、腫瘍細胞を破壊し、排除
させる方法が挙げられる。先天性免疫不全症や後天的免
疫不全症の場合の免疫療法としては、欠如または低下し
た免疫学的監視機構を補助または亢進することにより、
重篤な感染症を排除したり、あるいは、根本的に免疫不
全状態を回復させる方法が挙げられる。免疫療法の代表
的なものとして、例えば、患者の血液を採取し、リンパ
球を分離し培養用培地中で培養し、ＩＬ−２を作用させ
ることにより、リンフォカイン活性化キラー（以下、Ｌ
ＡＫと略す）細胞を誘導し、培養し、得られたＬＡＫ細
胞を再び患者の体内に戻す養子免疫療法（活性化リンパ
球療法）が開発されている。
【０００４】活性化Ｔリンパ球の誘導には、不溶性担体
の表面に抗ＣＤ３抗体を固定化されたＴリンパ球培養用
担体を用いて培養する方法が提案されている（特開平３
−８００７６号公報）。このＴリンパ球培養用担体とし
ては、各実験者が培養前に、用時に、不溶性担体に抗Ｃ
Ｄ３抗体を添加することにより、抗ＣＤ３抗体を固定化
したＴリンパ球培養用担体を調製し使用するか又はこの
調製したＴリンパ球培養用担体を不溶性の担体に抗ＣＤ
３抗体を添加した溶液状態のまま、低温で静置して保存
したものを使用しているのが現状である。
の表面に抗ＣＤ３抗体を固定化されたＴリンパ球培養用
担体を用いて培養する方法が提案されている（特開平３
−８００７６号公報）。このＴリンパ球培養用担体とし
ては、各実験者が培養前に、用時に、不溶性担体に抗Ｃ
Ｄ３抗体を添加することにより、抗ＣＤ３抗体を固定化
したＴリンパ球培養用担体を調製し使用するか又はこの
調製したＴリンパ球培養用担体を不溶性の担体に抗ＣＤ
３抗体を添加した溶液状態のまま、低温で静置して保存
したものを使用しているのが現状である。
【０００５】しかしながら、実験者にとって、上記Ｔリ
ンパ球培養器の調製は、熟達と多くの煩雑な操作を要す
るものである。また、抗ＣＤ３抗体溶液を添加したまま
で調製されたＴリンパ球培養用担体は、それをそのまま
培養に使用すると、固定化されていないフリーの抗ＣＤ
３抗体の存在によりＴリンパ球の増殖性が抑制される。
そのため、使用時、培養時に、上記Ｔリンパ球培養用担
体は、固定化されていないフリーの抗ＣＤ３抗体溶液を
除去したり、さらに、リン酸緩衝食塩水溶液（ＰＢＳ）
等適当な洗浄液を使用し洗浄したりする処理が必要とな
る。しかし、この抗ＣＤ３抗体溶液の除去及び洗浄処理
において、細心の注意で行っても、Ｔリンパ球培養用担
体としての培養フラスコ等の開口部又は蓋に付着した液
滴を介した雑菌のコンタミネーション等による危険性が
ある。
ンパ球培養器の調製は、熟達と多くの煩雑な操作を要す
るものである。また、抗ＣＤ３抗体溶液を添加したまま
で調製されたＴリンパ球培養用担体は、それをそのまま
培養に使用すると、固定化されていないフリーの抗ＣＤ
３抗体の存在によりＴリンパ球の増殖性が抑制される。
そのため、使用時、培養時に、上記Ｔリンパ球培養用担
体は、固定化されていないフリーの抗ＣＤ３抗体溶液を
除去したり、さらに、リン酸緩衝食塩水溶液（ＰＢＳ）
等適当な洗浄液を使用し洗浄したりする処理が必要とな
る。しかし、この抗ＣＤ３抗体溶液の除去及び洗浄処理
において、細心の注意で行っても、Ｔリンパ球培養用担
体としての培養フラスコ等の開口部又は蓋に付着した液
滴を介した雑菌のコンタミネーション等による危険性が
ある。
【０００６】さらに、調製後の抗ＣＤ３抗体を固定化さ
れたＴリンパ球培養用担体は、その固定化された抗ＣＤ
３抗体のＴリンパ球活性化能が、保存温度、保存時間と
ともに低下するため、Ｔリンパ球の培養効率及び活性化
効率のバラツキなどＴリンパ球培養用担体の保存安定性
上、品質性能の信頼性上の問題もある。そのため、臨床
において、保存安定性、品質性能の信頼性に優れ、しか
も、簡便な操作で雑菌等のコンタミネーション等による
危険性の少ないＴリンパ球培養用担体及びＴリンパ球製
造用キットが望まれている。
れたＴリンパ球培養用担体は、その固定化された抗ＣＤ
３抗体のＴリンパ球活性化能が、保存温度、保存時間と
ともに低下するため、Ｔリンパ球の培養効率及び活性化
効率のバラツキなどＴリンパ球培養用担体の保存安定性
上、品質性能の信頼性上の問題もある。そのため、臨床
において、保存安定性、品質性能の信頼性に優れ、しか
も、簡便な操作で雑菌等のコンタミネーション等による
危険性の少ないＴリンパ球培養用担体及びＴリンパ球製
造用キットが望まれている。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】請求項１記載の発明
は、簡便な操作で、雑菌等のコンタミネーション等によ
る危険性が少なく、しかも、長期保存に対する保存安定
性、品質性能の信頼性に優れる活性化Ｔリンパ球が得ら
れるＴリンパ球培養用担体を提供するものである。請求
項２記載の発明は、簡便な操作で、雑菌等のコンタミネ
ーション等による危険性が少なく、Ｔリンパ球の培養効
率及びその培養リンパ球の活性化効率などのバラツキが
少ない活性化Ｔリンパ球が得られる製造方法を提供する
ものである。請求項３記載の発明は、請求項２記載の発
明に加えて、特に、Ｔリンパ球の培養効率及びその培養
リンパ球の活性化効率に優れる活性化Ｔリンパ球の製造
方法を提供するのもである。
は、簡便な操作で、雑菌等のコンタミネーション等によ
る危険性が少なく、しかも、長期保存に対する保存安定
性、品質性能の信頼性に優れる活性化Ｔリンパ球が得ら
れるＴリンパ球培養用担体を提供するものである。請求
項２記載の発明は、簡便な操作で、雑菌等のコンタミネ
ーション等による危険性が少なく、Ｔリンパ球の培養効
率及びその培養リンパ球の活性化効率などのバラツキが
少ない活性化Ｔリンパ球が得られる製造方法を提供する
ものである。請求項３記載の発明は、請求項２記載の発
明に加えて、特に、Ｔリンパ球の培養効率及びその培養
リンパ球の活性化効率に優れる活性化Ｔリンパ球の製造
方法を提供するのもである。
【０００８】請求項４〜６のいずれかに記載の発明は、
簡便な操作で、雑菌等のコンタミネーション等による危
険性が少なく、Ｔリンパ球の培養効率及びその培養リン
パ球の活性化効率などのバラツキが少ない活性化Ｔリン
パ球が得られる活性化Ｔリンパ球製造用キットを提供す
るものである。請求項７記載の発明は、癌、感染症等の
養子免疫療法に好適な免疫治療剤を提供するものであ
る。
簡便な操作で、雑菌等のコンタミネーション等による危
険性が少なく、Ｔリンパ球の培養効率及びその培養リン
パ球の活性化効率などのバラツキが少ない活性化Ｔリン
パ球が得られる活性化Ｔリンパ球製造用キットを提供す
るものである。請求項７記載の発明は、癌、感染症等の
養子免疫療法に好適な免疫治療剤を提供するものであ
る。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明は、下記（１）〜
（８）に関する。 （１）抗ＣＤ３抗体を固定化した不溶性担体であって、
その表面が乾燥されたものからなるＴリンパ球培養用担
体。 （２）上記（１）記載のＴリンパ球培養用担体及び培養
用液体培地を用いてＴリンパ球を培養し活性化Ｔリンパ
球を得ることを特徴とする活性化Ｔリンパ球の製造方
法。 （３）インターロイキン−２の存在下にＴリンパ球を培
養することを特徴とする上記（２）記載の活性化Ｔリン
パ球の製造方法。 （４）上記（１）記載のＴリンパ球培養用担体及び培養
用培地からなる活性化Ｔリンパ球製造用キット。
（８）に関する。 （１）抗ＣＤ３抗体を固定化した不溶性担体であって、
その表面が乾燥されたものからなるＴリンパ球培養用担
体。 （２）上記（１）記載のＴリンパ球培養用担体及び培養
用液体培地を用いてＴリンパ球を培養し活性化Ｔリンパ
球を得ることを特徴とする活性化Ｔリンパ球の製造方
法。 （３）インターロイキン−２の存在下にＴリンパ球を培
養することを特徴とする上記（２）記載の活性化Ｔリン
パ球の製造方法。 （４）上記（１）記載のＴリンパ球培養用担体及び培養
用培地からなる活性化Ｔリンパ球製造用キット。
【００１０】（５）培養用培地がインターロイキン−２
を含有することを特徴とする上記（４）記載の活性化Ｔ
リンパ球製造用キット。 （６）上記（１）記載のＴリンパ球培養用担体、培養用
培地及びインターロイキン−２を含有する培養補助剤か
らなる活性化Ｔリンパ球製造用キット。 （７）上記（２）又は（３）記載の活性化Ｔリンパ球の
製造方法によって得られる活性化Ｔリンパ球を含有して
なる免疫治療剤。
を含有することを特徴とする上記（４）記載の活性化Ｔ
リンパ球製造用キット。 （６）上記（１）記載のＴリンパ球培養用担体、培養用
培地及びインターロイキン−２を含有する培養補助剤か
らなる活性化Ｔリンパ球製造用キット。 （７）上記（２）又は（３）記載の活性化Ｔリンパ球の
製造方法によって得られる活性化Ｔリンパ球を含有して
なる免疫治療剤。
【００１１】
【発明の実施の形態】本発明において、不溶性担体とし
ては、リンパ球培養に使用できるものであれば、特に制
限されないが、繊維状、プレート状、ビーズ状及びフラ
スコ状の形状が挙げられる。培養効率の観点から、少ス
ケールの培養においては、フラスコ状の形状が好まし
く、大量スケールの培養においては、ビーズ状の形状が
好ましい。
ては、リンパ球培養に使用できるものであれば、特に制
限されないが、繊維状、プレート状、ビーズ状及びフラ
スコ状の形状が挙げられる。培養効率の観点から、少ス
ケールの培養においては、フラスコ状の形状が好まし
く、大量スケールの培養においては、ビーズ状の形状が
好ましい。
【００１２】本発明において、不溶性担体の材質として
は、水に不溶性であって、抗ＣＤ３抗体を固定化できる
材質であれば、特に制限されないが、例えば、シリカ、
ガラス等の活性炭等の無機物質、ポリエチレン、ポリプ
ロピレン等のポリオレフィン、ポリスチレン、ポリ塩化
ビニル等の合成高分子プラスチック、不溶性アガロー
ス、セルロース、不溶性デキストラン等天然高分子物質
などが挙げられる。これらの中では、成形の容易性、エ
チレンオキサイドガス又はガンマ線滅菌の容易性及び抗
ＣＤ３抗体の固定化効率などの観点から、ポリオレフィ
ン系のプラスチックが好ましい。市販のプラスチック製
滅菌済み細胞培養フラスコや細胞培養用ビーズ等を使用
することもでき、その使用するフラスコの大きさやビー
ズ数は、培養のスケールや培養開始時に添加する細胞浮
遊液の量等により適宜選択できる。例えば、市販のプラ
スチック製滅菌済み細胞培養フラスコの大きさとして
は、底面積が２５cm2、７５cm2、又は２２５cm2等のフ
ラスコが挙げられる。
は、水に不溶性であって、抗ＣＤ３抗体を固定化できる
材質であれば、特に制限されないが、例えば、シリカ、
ガラス等の活性炭等の無機物質、ポリエチレン、ポリプ
ロピレン等のポリオレフィン、ポリスチレン、ポリ塩化
ビニル等の合成高分子プラスチック、不溶性アガロー
ス、セルロース、不溶性デキストラン等天然高分子物質
などが挙げられる。これらの中では、成形の容易性、エ
チレンオキサイドガス又はガンマ線滅菌の容易性及び抗
ＣＤ３抗体の固定化効率などの観点から、ポリオレフィ
ン系のプラスチックが好ましい。市販のプラスチック製
滅菌済み細胞培養フラスコや細胞培養用ビーズ等を使用
することもでき、その使用するフラスコの大きさやビー
ズ数は、培養のスケールや培養開始時に添加する細胞浮
遊液の量等により適宜選択できる。例えば、市販のプラ
スチック製滅菌済み細胞培養フラスコの大きさとして
は、底面積が２５cm2、７５cm2、又は２２５cm2等のフ
ラスコが挙げられる。
【００１３】本発明において不溶性担体への固定化に使
用する抗ＣＤ３抗体としては、リンパ球細胞の増殖・活
性化を促進できる抗体であれば、特に、限定されない。
ＣＤ３分子はＴリンパ球の細胞表面に存在し、Ｔ細胞受
容体（ＴＣＲ）と共に標的抗原を認識する際に重要な分
子である。ＣＤ３分子を介して刺激情報が細胞内に伝達
されることにより、Ｔリンパ球は増殖を開始する。同様
な現象が、ＣＤ３分子に対する特異的抗体（抗ＣＤ３抗
体）の刺激により起こる。リンパ球細胞の刺激に用いる
抗ＣＤ３抗体は、精製したＣＤ３分子を動物又は細胞に
免疫して産生させることができる。また、安定性、コス
ト、品質等に優れた市販のＯＫＴ−３抗体（製造元：オ
ーソファーマスーティカル）も使用できる。
用する抗ＣＤ３抗体としては、リンパ球細胞の増殖・活
性化を促進できる抗体であれば、特に、限定されない。
ＣＤ３分子はＴリンパ球の細胞表面に存在し、Ｔ細胞受
容体（ＴＣＲ）と共に標的抗原を認識する際に重要な分
子である。ＣＤ３分子を介して刺激情報が細胞内に伝達
されることにより、Ｔリンパ球は増殖を開始する。同様
な現象が、ＣＤ３分子に対する特異的抗体（抗ＣＤ３抗
体）の刺激により起こる。リンパ球細胞の刺激に用いる
抗ＣＤ３抗体は、精製したＣＤ３分子を動物又は細胞に
免疫して産生させることができる。また、安定性、コス
ト、品質等に優れた市販のＯＫＴ−３抗体（製造元：オ
ーソファーマスーティカル）も使用できる。
【００１４】上記、不溶性担体の表面への抗ＣＤ３抗体
の固定化に際し、抗ＣＤ３抗体は、滅菌したリン酸緩衝
食塩水溶液（ＰＢＳ）等の希釈液により、１〜５０μg/
mlの濃度に希釈し使用することが好ましい。１μg/ml未
満の濃度では、Ｔリンパ球の増殖が不十分な傾向とな
り、５０μg/mlを超える濃度でも、Ｔリンパ球の増殖
は、十分であるが、不溶性担体に固定化しないフリーの
抗ＣＤ３抗体が多くなる傾向となる。なお、希釈液とし
ては、滅菌されているリン酸緩衝食塩水溶液（ＰＢＳ）
等の生理的な溶液であれば特に制限されるものではない
が、保護剤としてアルブミンやＣＭＣセファロースなど
を加えることもできる。
の固定化に際し、抗ＣＤ３抗体は、滅菌したリン酸緩衝
食塩水溶液（ＰＢＳ）等の希釈液により、１〜５０μg/
mlの濃度に希釈し使用することが好ましい。１μg/ml未
満の濃度では、Ｔリンパ球の増殖が不十分な傾向とな
り、５０μg/mlを超える濃度でも、Ｔリンパ球の増殖
は、十分であるが、不溶性担体に固定化しないフリーの
抗ＣＤ３抗体が多くなる傾向となる。なお、希釈液とし
ては、滅菌されているリン酸緩衝食塩水溶液（ＰＢＳ）
等の生理的な溶液であれば特に制限されるものではない
が、保護剤としてアルブミンやＣＭＣセファロースなど
を加えることもできる。
【００１５】不溶性担体がフラスコ状又はプレート状の
場合、抗ＣＤ３抗体の固定化は、フラスコ又はプレート
の底面部に、希釈された抗ＣＤ３抗体溶液を無菌的に添
加し、一定時間一定温度で静置することにより行う。ま
た、不溶性担体が繊維状又はビーズ状の場合、抗ＣＤ３
抗体の固定化は、別容器に希釈された抗ＣＤ３抗体溶液
をとり、この溶液中に、無菌的に、これら不溶性担体を
浸漬する。固定化の際の反応温度は、４〜４０℃である
ことが好ましく、４〜２５℃であることがより好まし
く、４〜１０℃であることがさらに好ましい。４℃未満
であると抗ＣＤ３抗体の固定化の効率が低下する傾向と
なり、４０℃を超えると抗ＣＤ３抗体の活性が低下する
傾向となる。固定化の際の反応時間は、３０分から２４
時間であることが好ましく、１時間から２４時間である
ことがより好ましい。３０分未満であると抗ＣＤ３抗体
の固定化量が低下する傾向となり、２４時間を超えると
固定化時間が長すぎて、生産効率が低下する傾向とな
る。
場合、抗ＣＤ３抗体の固定化は、フラスコ又はプレート
の底面部に、希釈された抗ＣＤ３抗体溶液を無菌的に添
加し、一定時間一定温度で静置することにより行う。ま
た、不溶性担体が繊維状又はビーズ状の場合、抗ＣＤ３
抗体の固定化は、別容器に希釈された抗ＣＤ３抗体溶液
をとり、この溶液中に、無菌的に、これら不溶性担体を
浸漬する。固定化の際の反応温度は、４〜４０℃である
ことが好ましく、４〜２５℃であることがより好まし
く、４〜１０℃であることがさらに好ましい。４℃未満
であると抗ＣＤ３抗体の固定化の効率が低下する傾向と
なり、４０℃を超えると抗ＣＤ３抗体の活性が低下する
傾向となる。固定化の際の反応時間は、３０分から２４
時間であることが好ましく、１時間から２４時間である
ことがより好ましい。３０分未満であると抗ＣＤ３抗体
の固定化量が低下する傾向となり、２４時間を超えると
固定化時間が長すぎて、生産効率が低下する傾向とな
る。
【００１６】上記抗ＣＤ３抗体の固定化に続き、固定化
されなかった残余の抗ＣＤ３抗体希釈液を除去し、リン
酸緩衝食塩水溶液（ＰＢＳ）等適当な洗浄液を使用する
ことにより固定化されなかった抗ＣＤ３抗体を洗浄し、
乾燥させる。乾燥法としては、洗浄液を除いた後、４〜
１０℃での冷蔵庫中での自然乾燥、１０〜４０℃での加
温された条件下での乾燥、凍結乾燥等周知の方法が利用
できる。抗ＣＤ３抗体の活性及びその安定性の観点か
ら、凍結乾燥が好ましく、４〜１０℃での冷蔵庫中での
自然乾燥がより好ましい。以上のようにして、不溶性担
体表面に抗ＣＤ３抗体を固定化され、該抗ＣＤ３抗体の
固定化表面が乾燥されてなるＴリンパ球培養用担体が得
られる。
されなかった残余の抗ＣＤ３抗体希釈液を除去し、リン
酸緩衝食塩水溶液（ＰＢＳ）等適当な洗浄液を使用する
ことにより固定化されなかった抗ＣＤ３抗体を洗浄し、
乾燥させる。乾燥法としては、洗浄液を除いた後、４〜
１０℃での冷蔵庫中での自然乾燥、１０〜４０℃での加
温された条件下での乾燥、凍結乾燥等周知の方法が利用
できる。抗ＣＤ３抗体の活性及びその安定性の観点か
ら、凍結乾燥が好ましく、４〜１０℃での冷蔵庫中での
自然乾燥がより好ましい。以上のようにして、不溶性担
体表面に抗ＣＤ３抗体を固定化され、該抗ＣＤ３抗体の
固定化表面が乾燥されてなるＴリンパ球培養用担体が得
られる。
【００１７】本発明において、Ｔリンパ球製造用キット
は、上記Ｔリンパ球培養用担体、培養用培地を必須の構
成とし、必要に応じ培養補助剤を組合せることができ
る。培養用培地としては、ＲＰＭＩ−１６４０、ダルベ
ッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、イスコフ改変イー
グル培地（ＩＭＤＭ）等の一般に広く用いられる細胞培
養用培地が挙げられる。
は、上記Ｔリンパ球培養用担体、培養用培地を必須の構
成とし、必要に応じ培養補助剤を組合せることができ
る。培養用培地としては、ＲＰＭＩ−１６４０、ダルベ
ッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、イスコフ改変イー
グル培地（ＩＭＤＭ）等の一般に広く用いられる細胞培
養用培地が挙げられる。
【００１８】培養補助剤としては、細胞培養の効率向上
のため、リンパ球の増殖を促進させる成分、例えば、イ
ンターロイキン−２（ＩＬ−２）等のサイトカインな
ど、周知の成分が挙げられる。なお、インターロイキン
−２（ＩＬ−２）等のサイトカインは、培養補助剤とせ
ずに培養用培地中に含有させることもできる。ＩＬ−２
の量としては、培養開始時のリンパ球約１×１０6個／m
l当たり１〜２０００Ｕを含有させることが好ましい。
１Ｕ未満では、リンパ球の培養の効率向上が期待できな
い傾向となり、２０００Ｕを超えた濃度でも、リンパ球
に悪影響を与えることはないが一定以上の培養効率向上
は期待できない傾向となる。
のため、リンパ球の増殖を促進させる成分、例えば、イ
ンターロイキン−２（ＩＬ−２）等のサイトカインな
ど、周知の成分が挙げられる。なお、インターロイキン
−２（ＩＬ−２）等のサイトカインは、培養補助剤とせ
ずに培養用培地中に含有させることもできる。ＩＬ−２
の量としては、培養開始時のリンパ球約１×１０6個／m
l当たり１〜２０００Ｕを含有させることが好ましい。
１Ｕ未満では、リンパ球の培養の効率向上が期待できな
い傾向となり、２０００Ｕを超えた濃度でも、リンパ球
に悪影響を与えることはないが一定以上の培養効率向上
は期待できない傾向となる。
【００１９】培養用培地及び培養補助剤は、溶液状態あ
るいは凍結乾燥状態のいずれの剤形としても良いが、溶
液状態の剤形とした場合、あるいは凍結乾燥状態の剤形
のものを一度溶解した場合は、活性の低下を防ぐため、
冷蔵保存（４〜１０℃）とすることが望ましい。以下、
本発明のリンパ球のＴリンパ球培養用担体又はＴリンパ
球製造用キットを用いた活性化Ｔリンパ球の製造方法に
ついて説明する。
るいは凍結乾燥状態のいずれの剤形としても良いが、溶
液状態の剤形とした場合、あるいは凍結乾燥状態の剤形
のものを一度溶解した場合は、活性の低下を防ぐため、
冷蔵保存（４〜１０℃）とすることが望ましい。以下、
本発明のリンパ球のＴリンパ球培養用担体又はＴリンパ
球製造用キットを用いた活性化Ｔリンパ球の製造方法に
ついて説明する。
【００２０】培養すべきリンパ球としては、末梢血リン
パ球の他、上皮性リンパ球、腫瘍内浸潤リンパ球、癌性
腹水胸水浸潤リンパ球など生体に存在するあらゆるリン
パ球が挙げられ、特に制限されないが、採血直後の新鮮
末梢血中に含まれるリンパ球であることが、採血患者へ
の身体的負担、リンパ球分離の簡便さ、分離後リンパ球
の生存率の良さ、という点で好ましい。活性化Ｔリンパ
球の製造において、採血の量、培養開始時のリンパ球の
数は、特に、制限されないが、患者への負担、リンパ球
分離などの処理のし易さ等の観点から、約５〜５０mlの
少量の新鮮末梢血を採取し、そこから分離したリンパ球
約１〜１００×１０6個から開始することが好ましい。
パ球の他、上皮性リンパ球、腫瘍内浸潤リンパ球、癌性
腹水胸水浸潤リンパ球など生体に存在するあらゆるリン
パ球が挙げられ、特に制限されないが、採血直後の新鮮
末梢血中に含まれるリンパ球であることが、採血患者へ
の身体的負担、リンパ球分離の簡便さ、分離後リンパ球
の生存率の良さ、という点で好ましい。活性化Ｔリンパ
球の製造において、採血の量、培養開始時のリンパ球の
数は、特に、制限されないが、患者への負担、リンパ球
分離などの処理のし易さ等の観点から、約５〜５０mlの
少量の新鮮末梢血を採取し、そこから分離したリンパ球
約１〜１００×１０6個から開始することが好ましい。
【００２１】分離した新鮮リンパ球は、適当量のＩＬ−
２と体積比１０（Ｖ／Ｖ）％の正常ヒト血清を含む新鮮
な培養用培地に浮遊させ、抗ＣＤ３抗体を１〜５０μg/
mlの濃度で結合させたＴリンパ球培養用担体と接触させ
る。接触させる細胞浮遊液の量は、培養のスケール等に
より制限されないが、一般に、細胞濃度として、約１〜
１０×１０6個／mlが好ましい。ここで使用する正常ヒ
ト血清の濃度は、１〜２０（Ｖ／Ｖ）％の範囲で十分で
あるが、リンパ球の増殖促進には一般的に２〜１０（Ｖ
／Ｖ）％が好ましい。ここで使用する培養用培地は、一
般に滅菌したＲＰＭＩ−１６４０培地を使用できるが、
リンパ球の培養に適していればこの限りではない。培養
は、一般的な細胞培養と同様に、５％ＣＯ2、３７℃の
ＣＯ2インキュベーター内で行うのが好ましい。
２と体積比１０（Ｖ／Ｖ）％の正常ヒト血清を含む新鮮
な培養用培地に浮遊させ、抗ＣＤ３抗体を１〜５０μg/
mlの濃度で結合させたＴリンパ球培養用担体と接触させ
る。接触させる細胞浮遊液の量は、培養のスケール等に
より制限されないが、一般に、細胞濃度として、約１〜
１０×１０6個／mlが好ましい。ここで使用する正常ヒ
ト血清の濃度は、１〜２０（Ｖ／Ｖ）％の範囲で十分で
あるが、リンパ球の増殖促進には一般的に２〜１０（Ｖ
／Ｖ）％が好ましい。ここで使用する培養用培地は、一
般に滅菌したＲＰＭＩ−１６４０培地を使用できるが、
リンパ球の培養に適していればこの限りではない。培養
は、一般的な細胞培養と同様に、５％ＣＯ2、３７℃の
ＣＯ2インキュベーター内で行うのが好ましい。
【００２２】Ｔリンパ球培養用担体を用いての培養日数
は、特に制限されないが、少なくとも３〜７日程度であ
り、これ以上の日数になっても、細胞の活性化になんら
問題はない。培養の期間内は、顕微鏡下で細胞の状態を
観察し、適宜細胞数を計測しながら、１〜５０mlの同じ
培養液を添加する。この時、培養開始１〜２日目は目立
った細胞の増殖はなく、３日目頃から細胞増殖が観察さ
れる。培養液の劣化及びＩＬ−２活性の低下を常に考
え、適量の新鮮培養液を毎日添加することが重要であ
る。
は、特に制限されないが、少なくとも３〜７日程度であ
り、これ以上の日数になっても、細胞の活性化になんら
問題はない。培養の期間内は、顕微鏡下で細胞の状態を
観察し、適宜細胞数を計測しながら、１〜５０mlの同じ
培養液を添加する。この時、培養開始１〜２日目は目立
った細胞の増殖はなく、３日目頃から細胞増殖が観察さ
れる。培養液の劣化及びＩＬ−２活性の低下を常に考
え、適量の新鮮培養液を毎日添加することが重要であ
る。
【００２３】本発明のＴリンパ球培養用担体及び活性化
Ｔリンパ球製造用キットを用いることにより、ＣＤ３＋
ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ３＋ＣＤ８＋Ｔ細胞、ガンマー・
デルタＴ細胞、希に少数のＣＤ１６＋ＮＫ細胞が増殖で
きる。つまり、少量のリンパ球から標的細胞を障害する
活性を有するＴリンパ球集団が効率的かつ大量に誘導で
きる。通常、５００〜１０、０００倍の細胞が誘導でき
る。
Ｔリンパ球製造用キットを用いることにより、ＣＤ３＋
ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ３＋ＣＤ８＋Ｔ細胞、ガンマー・
デルタＴ細胞、希に少数のＣＤ１６＋ＮＫ細胞が増殖で
きる。つまり、少量のリンパ球から標的細胞を障害する
活性を有するＴリンパ球集団が効率的かつ大量に誘導で
きる。通常、５００〜１０、０００倍の細胞が誘導でき
る。
【００２４】本発明のＴリンパ球培養用担体及び活性化
Ｔリンパ球製造用キットを用いる製造方法によって得ら
れた活性化Ｔリンパ球を癌、自己免疫疾患、細菌ウィル
ス感染、アレルギー、先天性及び後天性免疫不全症など
の患者に対する養子免疫療法に使用する場合、免疫治療
剤としての活性化Ｔリンパ球の投与量は、１回当りの細
胞の量で１０6〜１０12個の細胞が望ましい。投与形態
としては、注射剤、点滴剤などの液体が好ましく、前記
細胞をヒト血清アルブミンを０．０１〜５％となるよう
に添加した生理食塩液に分散した注射剤又は点滴剤がよ
り好ましい。投与方法としては、静脈への点滴、又は静
脈、動脈、局所などへの注射が好ましい。投与する液量
は、投与方法、投与する場所などにより異なるが、５０
〜５００mlとするのが好ましく、この液量に前記の量の
細胞が含まれるようにするのが好ましい。投与頻度は、
１回／日〜１回／月とするのが好ましく、投与回数は、
少なくとも１回、好ましくは５回以上である。
Ｔリンパ球製造用キットを用いる製造方法によって得ら
れた活性化Ｔリンパ球を癌、自己免疫疾患、細菌ウィル
ス感染、アレルギー、先天性及び後天性免疫不全症など
の患者に対する養子免疫療法に使用する場合、免疫治療
剤としての活性化Ｔリンパ球の投与量は、１回当りの細
胞の量で１０6〜１０12個の細胞が望ましい。投与形態
としては、注射剤、点滴剤などの液体が好ましく、前記
細胞をヒト血清アルブミンを０．０１〜５％となるよう
に添加した生理食塩液に分散した注射剤又は点滴剤がよ
り好ましい。投与方法としては、静脈への点滴、又は静
脈、動脈、局所などへの注射が好ましい。投与する液量
は、投与方法、投与する場所などにより異なるが、５０
〜５００mlとするのが好ましく、この液量に前記の量の
細胞が含まれるようにするのが好ましい。投与頻度は、
１回／日〜１回／月とするのが好ましく、投与回数は、
少なくとも１回、好ましくは５回以上である。
【００２５】
【実施例】（１）Ｔリンパ球培養用担体の調製 抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３、オルソ ファーマシューティ
カル コーポレイション製）をリン酸緩衝食塩水溶液
（ＰＢＳ）で１μg/mlの濃度に希釈し、表面積２５cm2
のフラスコ（住友ベークライト）に５ml注入した。この
溶液をフラスコの底面にまんべんなく広げ、冷蔵庫（４
℃）で一晩静置し、その後ＯＫＴ３希釈液を吸引除去
し、ＰＢＳで３回洗浄し、クリーンベンチ内で室温にて
風乾させＴリンパ球培養用担体を調整した。比較のため
に、ＰＢＳで洗浄した直後のＴリンパ球培養用担体（湿
潤）も作成した。更に、作成した２種類のＴリンパ球培
養用担体を、４１℃の恒温槽内に静置した。
カル コーポレイション製）をリン酸緩衝食塩水溶液
（ＰＢＳ）で１μg/mlの濃度に希釈し、表面積２５cm2
のフラスコ（住友ベークライト）に５ml注入した。この
溶液をフラスコの底面にまんべんなく広げ、冷蔵庫（４
℃）で一晩静置し、その後ＯＫＴ３希釈液を吸引除去
し、ＰＢＳで３回洗浄し、クリーンベンチ内で室温にて
風乾させＴリンパ球培養用担体を調整した。比較のため
に、ＰＢＳで洗浄した直後のＴリンパ球培養用担体（湿
潤）も作成した。更に、作成した２種類のＴリンパ球培
養用担体を、４１℃の恒温槽内に静置した。
【００２６】（２）培養用培地の調製 ＩＬ−２を１０００U/ml含有したＲＰＭＩ−１６４０＋
９培地（日研生物医学研究所製）を基本培地であるＲＰ
ＭＩ−１６４０＋７培地（日研生物医学研究所製）でＩ
Ｌ−２濃度が７００U/mlに希釈し、さらに体積比１０％
ヒト血清（新鮮凍結血漿を３７℃で解凍後、５６℃、３
０分間加熱して非働化し、１８０００rpm、６０分、４
℃の遠心により沈殿物を除去し、さらに０．４５μｍの
フィルターで濾過したもの）を含むように培養用培地を
調製した。（３）Ｔリンパ球製造用キット上記（１）の
Ｔリンパ球培養用担体及び（２）培養用培地を組合せＴ
リンパ球製造用キットとした。
９培地（日研生物医学研究所製）を基本培地であるＲＰ
ＭＩ−１６４０＋７培地（日研生物医学研究所製）でＩ
Ｌ−２濃度が７００U/mlに希釈し、さらに体積比１０％
ヒト血清（新鮮凍結血漿を３７℃で解凍後、５６℃、３
０分間加熱して非働化し、１８０００rpm、６０分、４
℃の遠心により沈殿物を除去し、さらに０．４５μｍの
フィルターで濾過したもの）を含むように培養用培地を
調製した。（３）Ｔリンパ球製造用キット上記（１）の
Ｔリンパ球培養用担体及び（２）培養用培地を組合せＴ
リンパ球製造用キットとした。
【００２７】（４）リンパ球の培養 ヘパリン処理をした２０mlの注射器を用いて採血したヒ
ト抹消血全血２０mlに生理食塩液２０mlを加え２倍に希
釈し、密度勾配遠心分離の媒体であるFicoll-Paque（フ
ァルマシア社製）３mlに希釈血液１０mlを重層して１６
００rpm、２５分、２０℃の条件で遠心を行い、リンパ
球層を回収した。分離したリンパ球はＲＰＭＩ−１６４
０培地で３回洗浄し、前記のＩＬ−２を含む培養液中に
細胞密度約２×１０6個／mlで懸濁させ、この細胞懸濁
液５ml（１×１０7個）を前記２種類のＴリンパ球培養
用担体である抗ＣＤ３抗体固定化培養フラスコ中に加え
て培養を開始した。翌日（培養１日目）からＩＬ−２を
含む培養用培地を１ml添加し、この操作を培養７日目ま
で繰り返した。
ト抹消血全血２０mlに生理食塩液２０mlを加え２倍に希
釈し、密度勾配遠心分離の媒体であるFicoll-Paque（フ
ァルマシア社製）３mlに希釈血液１０mlを重層して１６
００rpm、２５分、２０℃の条件で遠心を行い、リンパ
球層を回収した。分離したリンパ球はＲＰＭＩ−１６４
０培地で３回洗浄し、前記のＩＬ−２を含む培養液中に
細胞密度約２×１０6個／mlで懸濁させ、この細胞懸濁
液５ml（１×１０7個）を前記２種類のＴリンパ球培養
用担体である抗ＣＤ３抗体固定化培養フラスコ中に加え
て培養を開始した。翌日（培養１日目）からＩＬ−２を
含む培養用培地を１ml添加し、この操作を培養７日目ま
で繰り返した。
【００２８】本発明の抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）の結合
面を乾燥させたＴリンパ球培養用担体（乾燥）及び従来
の乾燥させていないＴリンパ球培養用担体（湿潤）を、
４１℃の恒温槽内に１週間静置させ、その後、ＩＬ−２
を含む培養用培地に浮遊させ、そのリンパ球を７日間培
養した時の増殖曲線を図１に示す。図１において、リン
パ球増殖率は、培養開始時のリンパ球数に対する比率を
表す。リンパ球増殖率、即ち、活性化リンパ球を増殖さ
せる培養効率、活性化効率は、本発明の乾燥させたＴリ
ンパ球培養用担体を使用した場合に、明らかに良好であ
った。
面を乾燥させたＴリンパ球培養用担体（乾燥）及び従来
の乾燥させていないＴリンパ球培養用担体（湿潤）を、
４１℃の恒温槽内に１週間静置させ、その後、ＩＬ−２
を含む培養用培地に浮遊させ、そのリンパ球を７日間培
養した時の増殖曲線を図１に示す。図１において、リン
パ球増殖率は、培養開始時のリンパ球数に対する比率を
表す。リンパ球増殖率、即ち、活性化リンパ球を増殖さ
せる培養効率、活性化効率は、本発明の乾燥させたＴリ
ンパ球培養用担体を使用した場合に、明らかに良好であ
った。
【００２９】
【発明の効果】請求項１記載のＴリンパ球培養用担体
は、簡便な操作で、雑菌等のコンタミネーション等によ
る危険性が少なく、しかも、長期保存に対する保存安定
性、品質性能の信頼性に優れる活性化Ｔリンパ球が得ら
れる。請求項２記載の活性化Ｔリンパ球の製造方法は、
簡便な操作で、雑菌等のコンタミネーション等による危
険性が少なく、Ｔリンパ球の培養効率及びその培養リン
パ球の活性化効率などのバラツキが少ない活性化Ｔリン
パ球が得られる。請求項３記載の活性化Ｔリンパ球の製
造方法は、請求項２記載の活性化Ｔリンパ球の製造方法
に加えて、特に、Ｔリンパ球の培養効率及びその培養リ
ンパ球の活性化効率に優れる。
は、簡便な操作で、雑菌等のコンタミネーション等によ
る危険性が少なく、しかも、長期保存に対する保存安定
性、品質性能の信頼性に優れる活性化Ｔリンパ球が得ら
れる。請求項２記載の活性化Ｔリンパ球の製造方法は、
簡便な操作で、雑菌等のコンタミネーション等による危
険性が少なく、Ｔリンパ球の培養効率及びその培養リン
パ球の活性化効率などのバラツキが少ない活性化Ｔリン
パ球が得られる。請求項３記載の活性化Ｔリンパ球の製
造方法は、請求項２記載の活性化Ｔリンパ球の製造方法
に加えて、特に、Ｔリンパ球の培養効率及びその培養リ
ンパ球の活性化効率に優れる。
【００３０】請求項４〜６のいずれかに記載の活性化Ｔ
リンパ球製造用キットは、簡便な操作で、雑菌等のコン
タミネーション等による危険性が少なく、Ｔリンパ球の
培養効率及びその培養リンパ球の活性化効率などのバラ
ツキが少ない活性化Ｔリンパ球が得られる。請求項７記
載の免疫治療剤は、癌、感染症等の養子免疫療法に好適
である。
リンパ球製造用キットは、簡便な操作で、雑菌等のコン
タミネーション等による危険性が少なく、Ｔリンパ球の
培養効率及びその培養リンパ球の活性化効率などのバラ
ツキが少ない活性化Ｔリンパ球が得られる。請求項７記
載の免疫治療剤は、癌、感染症等の養子免疫療法に好適
である。
【図１】本発明のＴリンパ球培養用担体及び従来のＴリ
ンパ球培養用担体を用い７日間培養した時のリンパ球の
増殖曲線の比較を示す。
ンパ球培養用担体を用い７日間培養した時のリンパ球の
増殖曲線の比較を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｎ 5/02 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｅ (72)発明者 馬場 憲三 茨城県日立市東町四丁目13番１号 日立化 成工業株式会社医薬品研究所内 (72)発明者 黒岩 保幸 茨城県日立市東町四丁目13番１号 日立化 成工業株式会社医薬品研究所内 (72)発明者 関根 暉彬 東京都江東区塩浜１−１−13−420 Ｆターム(参考） 4B065 AA94X BB19 BC45 CA44 CA60 4C087 AA01 AA02 AA03 AA10 BB37 CA04 MA01 ZB01 ZB09 ZB26 ZB35 4H045 BA62 DA50 DA75
Claims (7)
- 【請求項１】 抗ＣＤ３抗体を固定化した不溶性担体で
あって、その表面が乾燥されたものからなるＴリンパ球
培養用担体。 - 【請求項２】 請求項１記載のＴリンパ球培養用担体及
び培養用液体培地を用いてＴリンパ球を培養し活性化Ｔ
リンパ球を得ることを特徴とする活性化Ｔリンパ球の製
造方法。 - 【請求項３】 インターロイキン−２の存在下にＴリン
パ球を培養することを特徴とする請求項２記載の活性化
Ｔリンパ球の製造方法。 - 【請求項４】 請求項１記載のＴリンパ球培養用担体及
び培養用培地からなる活性化Ｔリンパ球製造用キット。 - 【請求項５】 培養用培地がインターロイキン−２を含
有することを特徴とする請求項４記載の活性化Ｔリンパ
球製造用キット。 - 【請求項６】 請求項１記載のＴリンパ球培養用担体、
培養用培地及びインターロイキン−２を含有する培養補
助剤からなる活性化Ｔリンパ球製造用キット。 - 【請求項７】 請求項２又は３記載の活性化Ｔリンパ球
の製造方法によって得られる活性化Ｔリンパ球を含有し
てなる免疫治療剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11016957A JP2000212200A (ja) | 1999-01-26 | 1999-01-26 | Ｔリンパ球培養用担体、活性化ｔリンパ球の製造方法、活性化ｔリンパ球製造用キット及び免疫治療剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11016957A JP2000212200A (ja) | 1999-01-26 | 1999-01-26 | Ｔリンパ球培養用担体、活性化ｔリンパ球の製造方法、活性化ｔリンパ球製造用キット及び免疫治療剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000212200A true JP2000212200A (ja) | 2000-08-02 |
Family
ID=11930604
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11016957A Withdrawn JP2000212200A (ja) | 1999-01-26 | 1999-01-26 | Ｔリンパ球培養用担体、活性化ｔリンパ球の製造方法、活性化ｔリンパ球製造用キット及び免疫治療剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2000212200A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002069990A1 (fr) * | 2001-03-05 | 2002-09-12 | Lymphotec Inc. | Methode de traitement d'une tumeur et systeme servant a la proliferation et au traitement de lymphocytes activees destinees a une utilisation parallele a la therapie tpd |
| JP2004002312A (ja) * | 2002-04-08 | 2004-01-08 | Lymphotec:Kk | 腫瘍・感染症および自己免疫疾患の予防・治療用ｈｌａ一致他人由来活性化リンパ球および該リンパ球を主成分とする製剤ならびに該製剤の製造方法、該製剤調製用キット |
| US7115259B2 (en) | 1997-11-05 | 2006-10-03 | University Of Southern California | Use of cytokines and mitogens to inhibit pathological immune responses |
| JP2009195228A (ja) * | 2008-01-21 | 2009-09-03 | Univ Of Tokyo | 制御性ｔ細胞製造方法及び制御性ｔ細胞増幅装置 |
-
1999
- 1999-01-26 JP JP11016957A patent/JP2000212200A/ja not_active Withdrawn
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7115259B2 (en) | 1997-11-05 | 2006-10-03 | University Of Southern California | Use of cytokines and mitogens to inhibit pathological immune responses |
| WO2002069990A1 (fr) * | 2001-03-05 | 2002-09-12 | Lymphotec Inc. | Methode de traitement d'une tumeur et systeme servant a la proliferation et au traitement de lymphocytes activees destinees a une utilisation parallele a la therapie tpd |
| JP2004002312A (ja) * | 2002-04-08 | 2004-01-08 | Lymphotec:Kk | 腫瘍・感染症および自己免疫疾患の予防・治療用ｈｌａ一致他人由来活性化リンパ球および該リンパ球を主成分とする製剤ならびに該製剤の製造方法、該製剤調製用キット |
| JP4562353B2 (ja) * | 2002-04-08 | 2010-10-13 | 株式会社リンフォテック | Ｈｌａ一致他人由来活性化リンパ球を含有してなる腫瘍・感染症および自己免疫疾患の予防・治療用製剤 |
| JP2009195228A (ja) * | 2008-01-21 | 2009-09-03 | Univ Of Tokyo | 制御性ｔ細胞製造方法及び制御性ｔ細胞増幅装置 |
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