JP2000081423A - 液体クロマトグラフィー用充填剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 分離能を飛躍的に向上させ、特にタンパク質
等の分離に適したカチオン交換クロマトグラフィー用充
填剤を提供する。 【解決手段】 １分子中に非イオン性含窒素官能基を１
個以上含む単量体、１分子中にカチオン交換基を１個以
上含む単量体及び架橋性単量体を構成成分とする重合体
よりなるカチオン交換クロマトグラフィー用充填剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、カチオン交換液体
クロマトグラフィー用充填剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】イオン交換クロマトグラフィーは、イオ
ン性を有する物質の分離に汎用されており、そのうち、
カチオン交換クロマトグラフィーは、カルボキシル基や
スルホン酸基などのカチオン交換基を有する充填剤を用
いて、主にカチオン性物質の分離を行うものであり、糖
化ヘモグロビン類をはじめ各種生体関連物質の分析等に
極めて有効な方法である。

【０００３】カチオン交換基を有する充填剤の製造方法
としては、（ａ）架橋性粒子に、カチオン交換基を有す
る化合物を反応させる方法や（ｂ）カチオン交換基を有
する単量体を、架橋性単量体と混合して共重合する方法
等が挙げられる。

【０００４】上記の架橋性粒子にカチオン交換基を有す
る化合物を反応させる方法とは、反応性官能基を有する
無機系あるいは有機系粒子に、該官能基と反応する官能
基およびカチオン交換基を有する物質を反応させること
により、カチオン交換基を導入してカチオン交換充填剤
を製造する方法である。この方法の例としては、特開平
１−２６２４６８号公報に開示されているように、粒子
中のエポキシ基にカルボキシル基またはスルホン酸基を
有する物質を反応させる方法が挙げられる。しかしなが
ら、この方法は、イオン交換基を有する物質を定量的に
導入することは困難であることが一般に知られており、
また、製造再現性の点においても劣る。（吉廻、細矢、
木全、田中、Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，１６
（１）７−１２（１９９５））また、後処理の方法が極
めて煩雑で長時間を要するという欠点がある。

【０００５】一方、カチオン交換基を有する単量体を、
架橋性単量体と混合して共重合する方法は、例えば、特
公昭６３−５９４６３号公報に開示されているように、
カルボキシル基含有単量体５〜９０重量％、架橋性単量
体１０〜９５重量％、非架橋性単量体０〜８５重量％を
混合して重合させる方法等が挙げられる。この方法は、
カチオン交換基含有単量体の添加量や重合条件を制御す
ることにより、充填剤に対して定量的にカチオン交換基
を含有させることができ、また、操作も簡便である。し
かしながら、この方法により調製した従来の充填剤を用
いた場合においては、短時間分析で、溶出位置が近接す
るピークがある場合、溶離液の変更等、溶出条件の変更
だけでは分離できないことがあり、また、充填剤の性質
の微妙な調節ができなかった。この問題を解決するに
は、カチオン交換基を有する部分あるいは骨格を形成す
る架橋性粒子部分を組成する物質の変更だけでは不十分
であり、カチオン交換反応時に、極わずかではあるが、
作用している疎水性相互作用に関する効果を調節する必
要がある。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、分離
能を飛躍的に向上させ、特にタンパク質等の分離に適し
たカチオン交換クロマトグラフィー用充填剤を提供する
ことである。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明は、１分子中に非
イオン性含窒素官能基を１個以上含む単量体、１分子中
にカチオン交換基を１個以上含む単量体及び架橋性単量
体を構成成分とする重合体よりなるカチオン交換クロマ
トグラフィー用充填剤である。

【０００８】上記１分子中に非イオン性含窒素官能基を
１個以上含む単量体における非イオン性含窒素官能基と
は、液体クロマトグラフィーによる測定を行う状態で、
イオン交換能がないかまたは極めてわずかであり、かつ
窒素原子を少なくとも１つ以上含む官能基のことをい
い、例えば、１級アミノ基、２級アミノ基、シアノ基な
どが挙げられる。

【０００９】上記１分子中に非イオン性含窒素官能基を
１個以上含む単量体としては、例えば、（メタ）アクリ
ルアミド、Ｎ−メチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−エ
チルアクリルアミド、Ｎ−イソプロピルアクリルアミ
ド、Ｎ−メチロール（メタ）アクリルアミド、Ｎ−ブト
キシメチロール（メタ）アクリルアミド、Ｎ．Ｎ’−メ
チレンビス（メタ）アクリルアミド、Ｎ．Ｎ’−ジメチ
ルプロピルアミノ（メタ）アクリルアミドなどの（メ
タ）アクリルアミド誘導体；（メタ）アクリロニトリ
ル、２−シアノメチル（メタ）アクリレート、２−シア
ノエチル（メタ）アクリレート、２−シアノアルキル
（メタ）アクリレートなどのアクリロニトリル関連物質
などが挙げられる。

【００１０】上記１分子中に非イオン性含窒素官能基を
１個以上含む単量体の使用量は、単量体の種類によって
異なるが、架橋性単量体１００重量部に対し、１０〜１
００重量部が用いられる。また、上記１分子中に非イオ
ン性含窒素官能基を１個以上含む単量体は、必要に応じ
て２種以上が混合されて用いられてもよい。

【００１１】上記１分子中にカチオン交換基を１個以上
含む単量体とは、例えば、カルボキシル基、スルホン酸
基、リン酸基などのカチオン交換基を１分子中に１個以
上有する単量体のことをいう。また、これらのナトリウ
ム塩、カリウム塩等の塩であってもよい。

【００１２】上記１分子中にをカチオン交換基を１個以
上含む単量体のうち、カルボキシル基を含むものとして
は、例えば、（メタ）アクリル酸、クロトン酸、イタコ
ン酸、シトラコン酸、メサコン酸、マレイン酸、フマル
酸等が挙げられる。

【００１３】上記１分子中にをカチオン交換基を１個以
上含む単量体のうち、スルホン酸基を含むものとして
は、例えば、スチレンスルホン酸、アリルスルホン酸、
２−（メタ）アクリルアミド−２−メチルプロパンスル
ホン酸、（３−スルホプロピル）−イタコン酸、３−ス
ルホプロピル（メタ）アクリル酸などが挙げられる。

【００１４】上記１分子中にをカチオン交換基を１個以
上含む単量体のうち、リン酸基を含むものとしては、例
えば、（（メタ）アクリロイルオキシエチル）アシッド
ホスフェート、（２−（メタ）アクリロイルオキシエチ
ル）アシッドホスフェート、（３−（メタ）アクリロイ
ルオキシプロピル）アシッドホスフェート等が挙げられ
る。

【００１５】上記１分子中にをカチオン交換基を１個以
上含む単量体の使用量は、単量体の種類によって異なる
が、架橋性単量体１００重量部に対し、１０〜１００重
量部が用いられる。また、上記１分子中にをカチオン交
換基を１個以上含む単量体は必要に応じて２種以上が混
合されて用いられてもよい。

【００１６】上記架橋性単量体としては、例えば、１分
子中に２個以上のビニル基を有する単量体、後述のよう
な（メタ）アクリル酸エステルの誘導体、脂肪族ジエン
化合物およびその誘導体などが挙げられる。

【００１７】上記１分子中に２個以上のビニル基を有す
る単量体としては、例えば、ジビニルベンゼン、ジビニ
ルトルエン、ジビニルキシレン、ジビニルエチルベンゼ
ン、ジビニルナフタレン等のスチレン誘導体などが挙げ
られる。

【００１８】上記（メタ）アクリル酸エステルの誘導体
としては、例えば、エチレングリコールジ（メタ）アク
リレート、ポリエチレングリコールジ（メタ）アクリレ
ート、１，３−ブチレングリコールジ（メタ）アクリレ
ート、１，６−ヘキサグリコールジ（メタ）アクリレー
ト、ネオペンチルグリコールジ（メタ）アクリレート、
ポリプロピレングリコールジ（メタ）アクリレート、ト
リメチロールプロパントリ（メタ）アクリレート、テト
ラメチロールメタントリ（メタ）アクリレート、テトラ
メチロールメタントテトラ（メタ）アクリレート等が挙
げられる。

【００１９】上記脂肪族ジエン化合物としては、例え
ば、１，３−ブタジエン、イソプレン、１，４−ヘキサ
ジエン等が挙げられる。

【００２０】上記架橋性単量体は必要に応じて２種以上
が混合されて用いられてもよい。また、上記架橋性単量
体として、上記１分子中に非イオン性含窒素官能基を１
個以上含む単量体であるＮ．Ｎ’−メチレンビス（メ
タ）アクリルアミドを用いてもよい。

【００２１】上記重合体の構成成分としては、上記架橋
性単量体等に加えて、非架橋性単量体を用いることもで
きる。また、その他の添加物を添加してもよい。

【００２２】上記非架橋性単量体としては、例えば、ス
チレン、α−メチルスチレン、クロロメチルスチレン等
のスチレン誘導体；塩化ビニル等の脂肪族系の単量体；
酢酸ビニル、プロピオン酸ビニル、ステアリン酸ビニル
等のビニルエステル類；アクリル酸メチル、メタクリル
酸メチル、アクリル酸エチル、メタクリル酸エチル、ア
クリル酸ブチル、メタクリル酸ブチル、アクリル酸−２
−エチルヘキシル、メタクリル酸−２−エチルヘキシ
ル、アクリル酸ステアリル、メタクリル酸ステアリル等
のアクリル酸誘導体等が挙げられる。

【００２３】上記非架橋性単量体の使用量は、単量体の
種類によって異なるが、上記架橋性単量体１００重量部
に対し、０〜１００重量部が用いられる。また、上記非
架橋性単量体は必要に応じて２種以上が混合されて用い
られてもよい。

【００２４】上記その他の添加物としては、例えば、多
孔質化剤、重合体粒子等を必要に応じて単量体に添加し
てもよい。また、例示したこれらの添加物に限定される
わけではなく、公知の種々の添加物を添加してもよい。

【００２５】上記多孔質化剤は、単量体を溶解させる
が、重合体を溶解させない有機溶媒であるので、得られ
る重合体を多孔質にすることができ、例えば、トルエ
ン、キシレン、ジエチルベンゼン、ドデシルベンゼン等
の芳香族炭化水素類；ヘキサン、ヘプタン、オクタン、
デカン等の飽和炭化水素；イソアミルアルコール、オク
チルアルコール等のアルコールなどが挙げられる。。

【００２６】上記多孔質化剤の使用量は、上記架橋性単
量体１００重量部に対し、０〜１００重量部が好まし
い。

【００２７】上記重合体粒子は、粒度分布が揃ったもの
であり、これを上記架橋性単量体混合物に添加してから
重合を行うと、粒度分布の揃った充填剤を得ることがで
きる。上記重合体粒子としては、例えば、スチレン重合
体、スチレン−ジビニルベンゼン共重合体、（メタ）ア
クリル酸メチル重合体、（メタ）アクリル酸エチル重合
体など、上記非架橋性単量体等の単独あるいは共重合体
である非架橋性重合体粒子が挙げられる。また、上記重
合体粒子として、上記非架橋性単量体および上記架橋性
単量体などからなる架橋共重合体粒子を用いてもよい。
この場合、架橋性重合体の割合が１０％以下である、低
架橋性の重合体粒子を用いるのがよい。

【００２８】上記重合体粒子は、公知の重合方法によっ
て調製されたものが使用でき、例えば、乳化重合、ソー
プフリー重合、分散重合、懸濁重合等により重合でき
る。

【００２９】上記重合体粒子の平均粒径は、０．１〜１
０μｍ、粒径のばらつきはＣＶ（％）＝１５％以下（Ｃ
Ｖ（％）＝（標準偏差／平均粒径）×１００）が好まし
い。上記重合体粒子の使用量は、上記架橋性単量体１０
０重量部に対して、０．５〜１００重量部である。

【００３０】本発明において、単量体の重合に際して用
いる重合開始剤は、特に限定されず、水溶性または油溶
性の公知のラジカル重合開始剤を用いることができ、例
えば、過硫酸カリウム、過硫酸ナトリウム、過硫酸アン
モニウム等の過硫酸塩；クメンハイドロパーオキサイ
ド、ベンゾイルパーオキサイド、ラウロイルパーオキサ
イド、オクタノイルパーオキサイド、ｏ−クロロベンゾ
イルパーオキサイド、アセチルパーオキサイド、ｔ−ブ
チルハイドロパーオキサイド、ｔ−ブチルパーオキシア
セテート、ｔ−ブチルパーオキシイソブチレート、３，
５，５−トリメチルヘキサノイルパーオキサイド、ｔ−
ブチルパーオキシ−２−エチルヘキサノエート、ジ−ｔ
−ブチルパーオキサイド等の有機過酸化物；２，２−ア
ゾビスイソブヒロニトリル、２，２−アゾビス（２，４
−ジメチルバレロニトリル）、４，４−アゾビス（４−
シアノペンタン酸）、２，２−アゾビス（２−メチルブ
チロニトリル）、２，２−アゾビス（２，４−ジメチル
バレロニトリル）、アゾビスシクロヘキサンカルボニト
リル等のアゾ化合物が挙げられる。

【００３１】上記重合開始剤の使用量は、架橋性単量体
１００重量部に対し、０．０５重量部未満の場合には、
重合反応が不十分になったり、重合に長時間要すること
があり、５重量部を超えると急激な反応の進行により、
凝集物が発生することがあるので、０．０５〜５重量部
で用いる。なお、上記重合開始剤は、上記架橋性単量体
に溶解させて用いるのがよい。

【００３２】本発明の充填剤の重合方法は、公知の方法
が用いられるが、例えば、上記１分子中に非イオン性含
窒素官能基を１個以上含む単量体、上記１分子中にカチ
オン交換基を１個以上含む単量体、上記架橋性単量体及
び重合開始剤を、さらに必要に応じて上記非架橋性単量
体及び上記その他の添加物を混合して、懸濁重合、乳化
重合または分散重合する方法などが挙げられる。また、
特公平８−７１９７号公報記載の、上記架橋性単量体等
を重合して得られた架橋重合体粒子に、重合開始剤を含
浸させて、さらに上記１分子中に非イオン性含窒素官能
基を１個以上含む単量体および上記１分子中にカチオン
交換基を１個以上含む単量体を順次あるいは両者の混合
物を一度に重合系に添加して重合する方法を用いてもよ
い。

【００３３】上記充填剤の平均粒径は、好ましくは、約
０．５〜１００μｍであり、ＣＶ値が１５％以下の均一
な粒度分布を有するのが好ましい。

【００３４】

【実施例】以下に実施例を掲げて本発明を更に詳しく説
明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されるもの
ではない。

【００３５】実施例１ （充填剤の調製）アクリルアミド（和光純薬）５０ｇ、
メタクリル酸（和光純薬）７５ｇ、イタコン酸（キシダ
化学）５０ｇ、ジエチレングリコールジメタクリレート
（新中村化学）４００ｇおよびベンゾイルパーオキサイ
ド（和光純薬）１．０ｇを混合し、４％ポリビニルアル
コール水溶液２．５ｌに分散させた。これを窒素雰囲気
下で攪拌しながら昇温し、８０℃で８時間重合した。こ
のあと、洗浄し、分級して平均粒径５μｍの充填剤を得
た。

【００３６】（カラムへの充填）上記充填剤０．７ｇ
を、５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）３０ｍｌに分
散し、５分間超音波処理した後、よく撹拌した。全量を
ステンレス製の空カラム（４．６φ×３５ｍｍ）を接続
したパッカー（梅谷精機社製）に注入した。パッカーに
送液ポンプ（サヌキ工業社製）を接続し、圧力２００ｋ
ｇ／ｃｍ² で定圧充填した。

【００３７】（糖化ヘモグロビン（Ｈｂ）類の測定）得
られたカラムを用いて、以下の測定条件でヘモグロビン
類の測定を行った。 測定条件 システム：送液ポンプ：ＬＣ−９Ａ（島津製作所社製） オートサンプラ：ＡＳＵ−４２０（積水化学社製） 検出器：ＳＰＤ−６ＡＶ（島津製作所社製） 溶離液：溶離液Ａ：過塩素酸塩含有５０〜２００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ５． ３〜５．７） 溶離液Ｂ：過塩素酸塩含有３００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．２） 安定化ＨｂＡ１ｃの保持時間が最適となるよう、溶離液Ａの濃度お よびｐＨを、上記範囲で調節し、緩衝液Ａ・Ｂによるステップグラデ ィエント溶出を行った。 流速：１．５ｍｌ／分 検出波長：４１５ｎｍ 試料注入量：１０μｌ

【００３８】（測定試料）健常人血をフッ化ナトリウム
採血し、以下の試料を調製した。 ・試料ａ（糖負荷血）：健常人血に、５００ｍｇ／ｄｌ
となるようグルコース水溶液を添加し、３７℃で５時間
反応させたもの。 ・試料ｂ（カルバミル化ヘモグロビン（ＣＨｂ）含有試
料）：健常人血１０ｍｌに、０．３重量％のシアン酸ナ
トリウムの生理食塩水溶液１ｍｌを添加し、３７℃で５
時間反応させたもの。 ・試料ｃ（アセチル化ヘモグロビン（ＡＨｂ）含有試
料）：健常人血１０ｍｌに、０．３重量％のアセトアル
デヒドの生理食塩水溶液１ｍｌを添加し、室温で３時間
反応させたもの。なお、試料ａ、ｂおよびｃは溶血希釈
液（0.1%ポリエチレングリコールモノ−４−オクチルフ
ェニルエーテル（トリトンＸ-100）（東京化成）のリン
酸緩衝液(pH7.0) ）で溶血し、150 倍に希釈して測定試
料とした。

【００３９】（測定結果）上記測定条件により、試料
ａ、ｂおよびｃを測定して得られたクロマトグラムを図
１〜３に示す。図１は試料ａを、図２は試料ｂを、図３
は試料ｃを測定した結果をそれぞれ示す。ピーク１はヘ
モグロビンＡ１ａ（ＨｂＡ１ａ）及びヘモグロビンＡ１
ｂ（ＨｂＡ１ｂ）、ピーク２はヘモグロビンＦ（Ｈｂ
Ｆ）、ピーク３は不安定型ヘモグロビンＡ１ｃ（不安定
型ＨｂＡ１ｃ）、ピーク４は安定型ヘモグロビンＡ１ｃ
（安定型ＨｂＡ１ｃ）、ピーク５はヘモグロビンＡ０
（ＨｂＡ０）、ピーク６はＡＨｂ、ピーク７はＣＨｂを
示す。ここで、ＨｂＦおよび糖尿病の指標となる安定型
ＨｂＡ１ｃの良好な定量性を維持するには、ＨｂＦ、不
安定型ＨｂＡ１ｃ、安定型ＨｂＡ１ｃ、ＨｂＡ０の順に
溶出される必要がある。これは、ＨｂＦのピークは通
常、ＨｂＡ１ｃ類やＨｂＡ０のピークと比較して小さい
ため、例えば、安定型ＨｂＡ１ｃとＨｂＡ０の間などに
溶出されると、ＨｂＦの定量性が極めて低下するためで
ある。図１では、上記の順序で各ピークが現れており、
また、ＨｂＦや安定型ＨｂＡ１ｃが他の成分と良好に分
離されていることがわかる。また、図２・３において
も、ＣＨｂとＡＨｂのピークが不安定型ＨｂＡ１ｃのピ
ークと重なっているが、安定型ＨｂＡ１ｃのピークは良
好に分離されている。

【００４０】（タンパク質標準物質の測定）上記のカラ
ムを用いて、以下の測定条件でタンパク質標準物質の測
定を行った。 測定条件 溶離液：溶離液Ｃ：１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０） 溶離液Ｄ：５００ｍＭＮａＣｌを含有する１００ｍＭリン酸緩衝液（ ｐＨ７．０） 溶離液Ｃ１００％から溶離液Ｄ１００％へのリニアグラディエント 溶出法を用いた。 流速：１．５ｍｌ／分 検出波長：２５４ｎｍ 試料注入量：１０μｌ

【００４１】（測定試料）ミオグロビン（ピーク８）、
リボヌクレアーゼＡ（ピーク９）、α−キモトリプシノ
ーゲン（ピーク１０）、リゾチーム（ピーク１１）（い
ずれもＳｉｇｍａ社製）を用いた。

【００４２】（測定結果）図４に示したように、短時間
で良好に分離されていることがわかる。

【００４３】実施例２ Ｎ，Ｎ’−ジメチルプロピルアミノアクリルアミド５０
ｇ、テトラエチレングリコールメタクリレート３５０ｇ
にベンゾイルパーオキサイド（和光純薬）１．０ｇを混
合して溶解し、４％ポリビニルアルコール水溶液２．５
ｌに分散させた。これを窒素雰囲気下で攪拌しながら昇
温し、８０℃で１時間重合した。更に、メタクリル酸１
５０ｇおよびイタコン酸５０ｇを反応系に添加してさら
に８０℃で１時間重合した。このあと、洗浄し、分級し
て平均粒径５μｍの充填剤を得た。実施例１と同様にし
てカラムに充填し、糖化ヘモグロビン（Ｈｂ）類の測定
を行った結果、実施例１と同様に短時間で良好に分離さ
れた。

【００４４】実施例３ トリエチレングリコールジメタクリレート４００ｇにベ
ンゾイルパーオキサイド１．０ｇを混合して溶解し、４
％ポリビニルアルコール水溶液２．５ｌに分散させた。
これを窒素雰囲気下で攪拌しながら昇温し、８０℃で１
時間重合した。更にアクリロニトリル５０ｇ、メタクリ
ル酸１５０ｇを添加して、８０℃で１時間重合した。こ
のあと、洗浄し、分級して平均粒径５μｍの充填剤を得
た。実施例１と同様にしてカラムに充填し、糖化ヘモグ
ロビン（Ｈｂ）類の測定を行った結果、実施例１と同様
に短時間で良好に分離された。

【００４５】実施例４ トリエチレングリコールジメタクリレート４００ｇにベ
ンゾイルパーオキサイド１．０ｇを混合して溶解し、４
％ポリビニルアルコール水溶液２．５ｌに分散させた。
これを窒素雰囲気下で攪拌しながら昇温し、８０℃で１
時間重合した。更にアクリルアミド１００ｇ、２−アク
リルアミド−２−メチルプロパンスルホン酸１００ｇを
添加して、８０℃で１時間重合した。このあと、洗浄
し、分級して平均粒径５μｍの充填剤を得た。実施例１
と同様にしてカラムに充填し、糖化ヘモグロビン（Ｈ
ｂ）類の測定を行った結果、実施例１と同様に短時間で
良好に分離された。

【００４６】比較例１ メタクリル酸（和光純薬）７５ｇ、イタコン酸（キシダ
化学）５０ｇ、ジエチレングリコールジメタクリレート
（新中村化学）４００ｇおよびベンゾイルパーオキサイ
ド（和光純薬）１．０ｇを混合し、４％ポリビニルアル
コール水溶液２．５ｌに分散させた。これを窒素雰囲気
下で攪拌しながら昇温し、８０℃で８時間重合した。こ
のあと、洗浄し、分級して平均粒径５μｍの充填剤を得
た。実施例１と同様にしてカラムに充填し、糖化ヘモグ
ロビン（Ｈｂ）類の測定を行った結果を図５〜７に示し
た。試料ａの場合は、安定型ＨｂＡ１ｃのピークが不安
定型ＨｂＡ１ｃピークから分離されたが、試料ｂの場合
は、若干、安定型ＨｂＡ１ｃのピークとＣＨｂのピーク
の分離が悪くなり、試料ｃの場合は、安定型ＨｂＡ１ｃ
のピークはＡＨｂのピークと重なり、測定時間を延長し
ても分離能は改善されなかった。また、実施例１と同様
にして、タンパク質標準物質の測定を行った結果を図８
に示した。実施例１と比較すると分離能が低いことが解
る。

【００４７】比較例２ トリエチレングリコールジメタクリレート４００ｇにベ
ンゾイルパーオキサイド１．０ｇを混合して溶解し、４
％ポリビニルアルコール水溶液２．５ｌに分散させた。
これを窒素雰囲気下で攪拌しながら昇温し、８０℃で１
時間重合した。更にメタクリル酸１５０ｇを添加して、
８０℃で１時間重合した。このあと、洗浄し、分級して
平均粒径５μｍの充填剤を得た。比較例１と同様の測定
を行ったが、比較例１と同様に実施例と比較して分離能
が低かった。

【００４８】

【発明の効果】本発明の液体クロマトグラフィー用充填
剤を用いれば、分離能が飛躍的に向上し、従来のカチオ
ン交換充填剤では分離できなかったピークを短時間で分
離できる。

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例１によって得られた充填剤を用いて、ヘ
モグロビン類（試料ａ）の測定を行ない得られたクロマ
トグラムを示す図。

【図２】実施例１によって得られた充填剤を用いて、ヘ
モグロビン類（試料ｂ）の測定を行ない得られたクロマ
トグラムを示す図。

【図３】実施例１によって得られた充填剤を用いて、ヘ
モグロビン類（試料ｃ）の測定を行ない得られたクロマ
トグラムを示す図。

【図４】実施例１によって得られた充填剤を用いて、タ
ンパク質標準物質の測定を行ない得られたクロマトグラ
ムを示す図。

【図５】比較例１によって得られた充填剤を用いて、ヘ
モグロビン類（試料ａ）の測定を行ない得られたクロマ
トグラムを示す図。

【図６】比較例１によって得られた充填剤を用いて、ヘ
モグロビン類（試料ｂ）の測定を行ない得られたクロマ
トグラムを示す図。

【図７】比較例１によって得られた充填剤を用いて、ヘ
モグロビン類（試料ｃ）の測定を行ない得られたクロマ
トグラムを示す図。

【図８】比較例１によって得られた充填剤を用いて、タ
ンパク質標準物質の測定を行ない得られたクロマトグラ
ムを示す図。

【符号の説明】

１ ＨｂＡ１ａ及びＨｂＡ１ｂのピーク ２ ＨｂＦのピーク ３ 不安定型ＨｂＡ１ｃのピーク ４ 安定型ＨｂＡ１ｃのピーク ５ ＨｂＡ０のピーク ６ ＡＨｂのピーク ７ ＣＨｂのピーク ８ ミオグロビンのピーク ９ リボヌクレアーゼのピーク １０ α−キモトリプシノーゲンのピーク １１ リゾチームのピーク

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き Ｆターム(参考） 4G066 AB07A AB09A AB15A AB19A AB30A AC12A AC14A AC17A AC17B AC33A AD01A AD06A AD15A AD20A AE10A AE10B BA09 BA20 CA54 CA56 DA12 EA01 FA01 FA07 FA31 FA33 FA34

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 １分子中に非イオン性含窒素官能基を１
   個以上含む単量体、１分子中にカチオン交換基を１個以
   上含む単量体及び架橋性単量体を構成成分とする重合体
   よりなるカチオン交換クロマトグラフィー用充填剤。