HUT75459A - Carrier compositions comprising lipid-solvent bilayer - Google Patents

Carrier compositions comprising lipid-solvent bilayer Download PDF

Info

Publication number
HUT75459A
HUT75459A HU9602146A HU9602146A HUT75459A HU T75459 A HUT75459 A HU T75459A HU 9602146 A HU9602146 A HU 9602146A HU 9602146 A HU9602146 A HU 9602146A HU T75459 A HUT75459 A HU T75459A
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
galactolipid
weight
digalactosyldiacylglycerols
percent
polar
Prior art date
Application number
HU9602146A
Other languages
English (en)
Other versions
HU9602146D0 (en
Inventor
Anders Carlsson
Bengt Hersloef
Snezana Petrovic-Kaellholm
Original Assignee
Scotia Lipidteknik Ab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from SE9400368A external-priority patent/SE9400368D0/xx
Priority claimed from SE9402455A external-priority patent/SE9402455L/xx
Application filed by Scotia Lipidteknik Ab filed Critical Scotia Lipidteknik Ab
Publication of HU9602146D0 publication Critical patent/HU9602146D0/hu
Publication of HUT75459A publication Critical patent/HUT75459A/hu

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/02—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by special physical form
    • A61K8/04—Dispersions; Emulsions
    • A61K8/06—Emulsions
    • A61K8/064—Water-in-oil emulsions, e.g. Water-in-silicone emulsions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23D—EDIBLE OILS OR FATS, e.g. MARGARINES, SHORTENINGS, COOKING OILS
    • A23D7/00—Edible oil or fat compositions containing an aqueous phase, e.g. margarines
    • A23D7/005—Edible oil or fat compositions containing an aqueous phase, e.g. margarines characterised by ingredients other than fatty acid triglycerides
    • A23D7/0053—Compositions other than spreads
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/115—Fatty acids or derivatives thereof; Fats or oils
    • A23L33/12—Fatty acids or derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L35/00—Food or foodstuffs not provided for in groups A23L5/00 – A23L33/00; Preparation or treatment thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/02—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by special physical form
    • A61K8/14—Liposomes; Vesicles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/60—Sugars; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0014—Skin, i.e. galenical aspects of topical compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/107—Emulsions ; Emulsion preconcentrates; Micelles
    • A61K9/1075—Microemulsions or submicron emulsions; Preconcentrates or solids thereof; Micelles, e.g. made of phospholipids or block copolymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
    • A61K9/1272—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers with substantial amounts of non-phosphatidyl, i.e. non-acylglycerophosphate, surfactants as bilayer-forming substances, e.g. cationic lipids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Coils Or Transformers For Communication (AREA)
  • Magnetic Heads (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Organic Insulating Materials (AREA)
  • General Preparation And Processing Of Foods (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)

Description

A találmány lipidekből és poláris oldószerekből álló kettősrétegek készítményeire vonatkozik. Ezek a készítmények hatóanyagok vivőanyagaiként alkalmazhatók nemcsak gyógyászati készítményekben, hanem tápanyag-, kozmetikai, élelmiszerés mezőgazdasági termékekben is.
A természetes eredetű, amfifil lipid vivőanyagokat a kozmetikai és gyógyszeriparban mindeddig csak korlátozottan alkalmazták. Ennek oka sok esetben a nyersanyag hiánya és a magas gyártási költségek, valamint a lipid végtermék csekély hozama.
A természetes eredetű, poláris kettősrétegképző lipidek - azaz amfifil lipidek - között kozmetikai és gyógyászati célra legáltalánosabban a foszfolipideket használják. Ket84245-675-SZO-fa tősrétegképző képességük következtében ezek a poláris lipidek felhasználhatók különböző típusú halmazok és részecskék (szemcsék) - így vezikulumok és folyadékkristályok - kialakítására, amelyek számos műszaki területen alkalmazást nyertek.
Ezzel ellentétben a gyógyszertechnológiában mindeddig csak korlátozott keretek között alkalmaztak foszfolipidekre alapozott lipidgéleket; főként nem kielégítő gélképző sajátságaik és csekély kémiai stabilitásuk következtében. Az eddig alkalmazott, kettősrétegképző poláris, természetes eredetű lipidek közül kiemelkedik a tojássárgájából vagy szójababból eredő foszfatidil-kolin, amely kissé túlságosan lipofil a vízben végbemenő optimális duzzadás, valamint olyan rugalmas kettősrétegek kialakítása szempontjából, amelyek a folyadékkristályos lamelláris (lemezes) szerkezeteket felépítik.
Mivel a liposzómák kettősrétegű vagy lamelláris fázisok diszperziói fölös mennyiségű vizes oldatban, azért liposzómák kialakítása során foszfolipid-alapú lamelláris fázisok alkalmazása nem optimális. A duzzadási folyamat lassú, és gyakran nagyobb mennyiségű mechanikai energia bevetése szükséges liposzómák és vezikulumok kialakítására egy foszfolipid anyagból, számításba vehető időtartamon belül.
A természetes eredetű foszfolipidek - például a tojássárgájából származó foszfatidil-kolin - erősen telítetlenek. A foszfolipid acilláncainak a telítetlensége a folyadékkristályos lamelláris fázis szobahőmérsékletű képződésének az előfeltétele. Ez azonban azt is jelenti, hogy a térmészetes eredetű foszfolipidek által kialakított, kettősrétegű membránok vízben oldható hatóanyagokkal szemben lényegesen permeabilisabbak (átjárhatóbbak), mivel az acilláncok rendezetlen, mintegy folyékony (fluid) állapotban vannak. A természetes eredetű foszfolipidekből készült liposzómákra ezért csekély kapszulázó (betokoló) képesség jellemző, mivel a beágyazott hatóanyag a liposzóma kettősrétegén át kiszivárog. Általában, ha természetes eredetű foszfolipid liposzómákba hatóanyagokat kell foglalni, akkor ezeket nagy mennyiségű, az egész lipidkészítmény 30-50 mólszázalékát kitevő koleszterin hozzáadásával stabilizálják.
Ez a megállapítás a gyógyszerhatóanyagoktól eltérő más, hatásos anyagokra is vonatkozik, amelyeket ugyanazon okból kell liposzómákba vagy más, kettősrétegű szerkezetekbe ágyazni.
A foszfolipid-alapú vezikulumok és liposzómák felezési ideje a véráramba való bevezetésük után nagyon rövid. A vérből végbemenő gyors feltisztulásuk (klirenszük) annak tulajdonítható, hogy a máj és a lép retikulo-endoteliális rendszere (RÉS) ezeket felveszik. Ennek kiküszöbölése céljából a liposzómák szférikusán stabilizálhatok több szénhidrátegységet tartalmazó gangliozidok hozzáadásával, vagy hidrofil polimerekkel, amilyenek a polietilénoxid vagy a pullulan. Az utóbbi szerek általában kovalensen kapcsolódnak a foszfatidil-etanol-aminhoz. Ez a megközelítés elvben nagyon hatékony, s így a módosított liposzómák a RÉS általi felvételt elkerülhetik. A gyakorlatban azonban mind gyógyszerbiztonsági, mind gazdaságossági szempontból hátrányos kiegészítő komponensek hozzáadása a liposzóma-készítményhez, mert ezek vagy természetes eredetűek, és ritkán fordulnak elő, továbbá költségesek; vagy szintetikus eredetűek, és ennek következtében nem szükségszerűen biokompatibilisak.
Jól ismert foszfolipidek és más poláris lipidek felhasználása folyadékkristályok és liposzómák előállítására.
Az EP-B1-0 126 751 számú európai szabadalmi dokumentumban szabályzott ütemű felszabadítást biztosító készítményt ismertetnek, amely amfifil anyagot, így például galaktolipideket, foszfolipideket és monoglicerideket tartalmazhat. Ez a szabadalom olyan szabályos (köbös) és fordított hexagonális folyadékkristályos fázisokra irányul, amelyek feleslegben lévő vizes oldatban stabilisak.
A WO 91/11993 számon közzétett nemzetközi szabadalmi bejelentésben alkoholos, vizes, gél típusú foszfolipid készítményt közölnek. Az alkohol etanol, 1-propanol vagy 2-propanol. A foszfolipidtartalom 15-30 tömeg% tartományban van. Ismertetik továbbá e foszfolipid készítmény felhasználását liposzómák előállítására vizes oldattal végzett hígítás útján; közlik továbbá a gélt tartalmazó topikus készítményeket .
A WO 91/04013 számon közzétett nemzetközi PCT bejelentésben olyan hibrid, kevéssé lamelláris lipid vezikulumokat közölnek, amelyek a lipid kettősrétegekben egy foszfo- vagy glikolipidet és egy nemionos, anionos vagy ikerionos nedvesítőszert (felületaktív szert) tartalmaznak. Előnyös glikolipidek a cerebrozidok, gangliozidok és szulfatidok, amelyek valamennyien a glikoszfingolipidek családjába tartoznak.
A glikozil-gliceridek, mint a glikolipidek egyik típusa, a növényi sejtfalak jól ismert alkotórészei. Általánosan ismert a galaktóz-alapú két típus: a monogalaktozil-diacil-glicerin (röviden: MDGD) és a digalaktozil-diacil-glicerin (DGDG), amelyek a tilakoid membránok száraz tömegének 40 %ig terjedő mennyiségét képviselik.
A növényi glikolipidek szénhidrátegységeket - főként galaktózt - tartalmaznak, amelyek a glicerinhez kapcsolódnak. Az MGDG-ben a galaktózgyűrű 1-helyzetében, B-konfigurációban kötődik a glicerinhez; a DGDG-ben a cukrok között a,1-6 kötés áll fenn. Csekély mennyiségű alkotórész egy növényi szulfolipid, pontosabban megnevezve a szulfokinovozil-diacil-glicerin (SQDG), amely a terminális dezoxiglükóz maradék 6-helyzetű szénatomján hidroxilcsoport helyett szulfonátcsoportot visel. A legtöbb növényi glikolipid az (I) általános képlettel Írható le,
Rí - 0 - CH?
I
R? - o - CH (I)
I
H2C -E- 0 - szénhidrát - CH2—}-n “ R3 ahol Rí és R2 jelentése egymástól függetlenül 2-24 szénatomos, 0-6 kettős kötést tartalmazó, telitett vagy telítetlen zsírsavmaradék; továbbá észterezett hidroxisavak (azaz esztolidok); vagy hidrogénatom; a szénhidrát jelentése monoszacharidegység; n értéke 1-5; és R3 hidroxil- vagy szulfonátcsoportot jelent.
Vizsgáltuk glikozil-gliceridek kölcsönhatását vízzel és más poláris oldószerekkel. Meglepő módon azt találtuk, hogy a gabonafélékből származó, specifikus glikolipid anyagok olyan sajátságokkal rendelkeznek, amelyek alkalmassá teszik ezeknek a lipidanyagoknak célszerű és egyszerű felhasználását vivőanyagokként különösen gyógyászati készítményekben, de más készítményekben, így például kozmetikai, mezőgazdasági, tápanyag- és élelmiszerkészítményekben is.
Jól ismert tény, hogy gabonafélékből származó lipidek viszonylag nagy mennyiségű poláris komponenseik következtében - vízzel kölcsönhatásba lépve lamelláris (lemezes) folyadékkristályos fázist alakítanak ki [G. Jayasinghe és munkatársai: J. Disp. Sci. Technoi. 12., 443-451 (1991)].
Az SE 9400368-8 számú svéd szabadalmi dokumentumban iparilag alkalmazható eljárást ismertetnek glikolipid anyag előállítására növényekből, különösen gabonafélékből, extrakció és kromatográfiás elválasztás útján. Az így előállított glikolipid anyag gyógyászati termékekben, kozmetikai és élelmiszertermékekben amfifil anyagként alkalmazható.
A találmány lipidből és poláris oldószerből álló kettősrétegkészítményre vonatkozik, amely poláris oldószerben 0,01-90 tömeg%, előnyösen 0,1-50 tömeg% kettősrétegképző anyagot tartalmaz. E készítményre jellemző, hogy a kettősrétegképző anyag gabonafélékből származó galaktolipid anyag, amely legalább 50 % mennyiségben digalaktozil-diacil-glicerineket tartalmaz, és fennmaradó része más, poláris lipidekből áll.
Egy előnyös találmány szerinti készítményben a galaktolipid anyag körülbelül 70-80 % mennyiségben digalaktozil-diacil-glicerineket és 20-30 % mennyiségben más, poláris lipideket tartalmaz .
Egy másik előnyös készítményben a galaktolipid anyag 100 %-ra kiegészítő mennyiségben digalaktozil-diacil-glicerinekből áll.
A digalaktozil-diacil-glicerinek a (II) általános képlettel foglalhatók össze,
RjL - O - CH2
R2 - O - CH (II)
H2C-f- O - galaktózegység - CH2 —2 - R3 ahol R^ és R2 jelentése egymástól függetlenül telített vagy telítetlen, 10-22 szénatomos, 0-4 kettős kötést tartalmazó zsírsavmaradék; vagy hidrogénatom; és R3 hidroxil- vagy szulfonátcsoportot jelent.
Az Rí és R2 zsírsavmaradékok előnyös példái a természetben előforduló zsírsavakból eredő acilcsoportok, így a 16 szénatomos, kettős kötést tartalmazó palmitinsav, valamint a 18 szénatomos, kettős kötést nem tartalmazó sztearinsav acilcsoportja; az egyszeresen telítetlen, 18 szénatomos olajsav acilcsoportja; valamint a 18 szénatomos, két kettős kötést tartalmazó linolsav és a 18 szénatomos, három kettős kötést tartalmazó linolénsav acilcsoportja. A zsírsavmaradékok további, zsírsavakkal észterezett hidroxilcsoportokat tartalmazó hidroxisavakat is magukban foglalhatnak, amelyek a glicerinegységgel kapcsolódnak (úgynevezett esztolidok).
A többi poláris lipidek, amelyek a galaktolipid anyag részét képezik - különböző gliko- és foszfolipidek - például MGDG és foszfatidil-kolinok - keverékei. Ezek összetétele a kiinduló anyagtól és a galaktolipidek gyártási eljárásától függ.
A galaktolipid anyag komponenseinek pontos arányai a találmány szempontjából nem kritikus jellegűek mindaddig, amíg a DGDG tartalom legalább 50 %. Számos felhasználás szempontjából azonban a legnagyobb előnyök akkor valósíthatók meg, ha a DGDG - mint legfontosabb kettosrétegképző komponens - tartalma nagy.
A galaktolipid anyag csaknem bármely típusú növényi anyagból extrahálható. Ebből a szempontból előnyös növényi anyagok a magvak, gabonamagvak belső része és gabonanövények, például a búza, rozs, zabfélék, kukorica, rizs, köles és szézám. A zabdara és búzasikér lipidkoncentrációja nagy, s ennek következtében az előállítási eljárásban a felhasználásuk előnyös. Ha a galaktolipid anyagban lévő digalaktozil-diacil-glicerinek alkalmazhatók, akkor szintetikus eredetűek is lehetnek.
A galaktolipid anyag, mint poláris lipid komponens, különböző, rendezett szerkezetű oldatokban alkalmazható, ahol a lipid rendezett részecskéket képez, amelyek egy híg, randomizált tartalmú oldatban, így például vízben, etanolban, glicerinben és más, poláris oldószerekben vagy ezek keverékeiben diszpergálva vannak. A DGDG molekuláris geometriai felépítése csonkakúphoz hasonlít, s ez lehetővé teszi rugalmas kettösrétegek, azaz lemezes, folyadékkristályos fázisok, valamint liposzómák vagy vezikulumok kialakulását vizes oldatokban, fiziológiai körülmények között.
A galaktolipidek nagy mennyiségű poláris oldószert, így vizet fogadhatnak be, azaz duzzadhatnak. Ha a galaktolipidekhez vizet adunk, akkor spontán módon átlátszó, viszkózus gél képződik. Ez a gél egy La-val jelölt lamelláris folyadékkristályos fázisból áll, ahol a lipid kettósrétegek lamelláris szerkezetű elhelyezkedésben vízzel váltakoznak. A polarizált fénymikroszkóppal könnyen kimutatható La fázis termodinamikai szempontból stabilis.
A lamelláris, folyadékkristályos gélszerkezet viszkozitása következtében a duzzadási folyamat viszonylag lassú; azonban csupán 10 tömeg% vizes oldatot tartalmazó, átlátszó, homogén minták állíthatók elő lassú keveréssel 24 órán belül. Az így képződött gél kémiai és mikrobiális bomlással szemben rendkívül stabilis, és fizikai épségét hosszabb időtartamon át megtartja.
A galaktozil-acil-glicerinek és a poláris oldószer váltakozó rétegei alkalmassá teszik a gél szerkezetét mind lipofil, mind hidrofil, biológiailag hatásos (bioaktív) anyagok beágyazására. Nagy nyírási sebesség mellett a lamelláris szerkezet viszkozitása viszonylag csekély, s ez lehetővé teszi gél befecskendezését fecskendővel, vékony tűn át. Ez a készítmény felhasználható gyógyszerhatóanyagok adagolására emberek és állatok testének különböző helyeire.
A poláris oldószerek előnyösen biokompatibilisek, és gyógyászati, kozmetikai, valamint élelmiszerkészítményekben való felhasználásra elfogadottak: ilyen a víz, etanol, 1-propanol, 1,2-propándiol, glicerin és keverékeik.
A találmány egyik előnyös megvalósítását jelenti egy gélkészítmény, amely poláris oldószerben 25-90 tömeg% gálák10 tolipid anyagot tartalmaz.
Géleket könnyen állíthatunk elő úgy, hogy poláris oldószert, például vizet vagy valamilyen vizes oldatot a száraz galaktolipid anyaghoz adunk, s így 25-90 tömeg% végső lipidkoncentrációt érünk el. A keveréket enyhe keverés közben megfelelő tartóedényben, például üveglombikban vagy nyílt hengerpohárban, szobahőmérsékleten 1-24 órán át duzzadni hagyjuk. A gélek üvegcsövekben (kémcsövekben) is előállíthatók üvegbottal végzett keveréssel és szobahőmérsékleten végzett centrifugálással.
A géles pszeudoplasztikusak, és fizikai küllemük és mikrobiális ellenállóképességük szempontjából figyelemrérnéltóan stabilisak. A gélek viszkozitását mérsékelt hőmérsékleti változások jelentősen nem befolyásolják, így például hűtőszekrényből fecskendőbe vagy más adagolóeszközbe közvetlenül átvihetők.
Kimutatható továbbá, hogy a találmány szerinti gélek, mint a beágyazott hatásos komponensek lassú felszabadulást biztosító közegei, hatékonyabbak, mint a foszfolipidekből készített gélek.
Kimutatható továbbá, hogy a találmány szerinti gélekbe terápiásán hatásos komponensek széles körű típusait, például lipofil komponenseket, hidrokloridokat, nitrátokat, amfifil vegyületeket, proteineket és peptideket építhetünk be.
A találmány egy másik, előnyös megvalósítását olyan liposzóma készítmények képviselik, amelyek poláris oldószerben 0,01-25 tömeg% galaktolipid anyagot tartalmaznak.
A galaktozil-acil-glicerinek mindig jelentkező (intrin11 zik) előnyös sajátságát jelentik a galaktózegységek, amelyek minden egyes lipidmolekulában a poláris főcsoportot képviselik; sztérikusan stabilizálják a liposzómákat, s így a véráramlásba fecskendezés után tartós élettartamot tesznek lehetővé.
A liposzómákat, azaz multilamelláris (több lamellát tartalmazó) vezikulumokat közvetlen hidratálással állítjuk elő. A száraz galaktolipid anyaghoz valamilyen poláris oldószert, például vizet vagy vizes oldatot adva 0,01-25 tömeg% közötti végső lipidkoncentrációt érünk el. A keveréket szobahőmérsékleten 1-24 órán át enyhe keverés közben hagyjuk duzzadni és egyensúlyba jutni, így liposzómák diszperziójához jutunk. Liposzómák előállíthatók úgy is, hogy a fentiek szerint előállított gélhez feleslegben vett poláris oldószert adunk, azaz a gélt egyszerűen hígítjuk.
Egylamellás (unilamelláris) vezikulumokat multilamelláris vezikulumok diszperziójából állítunk elő, például membránon végbemenő átnyomással vagy nagy nyomáson végzett homogenizálás útján.
A galaktolipid anyag szokatlan és meglepő duzzadási sajátságai révén liposzóma diszperziók és vizes gélek előállítása figyelemreméltóan könnyebb. így például a liposzómák vízben végbemenő spontán kialakulása meglepően jól alkalmazható liposzóma diszperzióknak még nagy méretekben végzett előállításában is. Ez eltér azon eljárásoktól, amelyek liposzómáknak foszfolipidekből való kialakításához szükségesek, ahol szerves oldószerek - például kloroform, éter, etanol vagy ezek keverékei - használatosak. A szokásos, foszfolipi12 deket alkalmazó liposzóma készítmények méretnövelése jól ismert probléma, és számos különböző eljárást javasoltak e nehézségek kiküszöbölésére. Találmányunk révén lehetővé válik liposzóma diszperzió kialakítása egyszerű és reprodukálható módon, ami igen fontos lehet liposzómáknak például gyógyszerhatóanyagok vivőanyagaiként való gyakorlati felhasználásában.
Kimutatjuk, hogy a találmány szerinti liposzómák meglepően jó kapszulázó képességgel rendelkeznek.
Kimutatjuk továbbá, hogy a találmány szerinti liposzómák meglepő módon jelentősen megnyújtják hatásos komponensek hatásának az időtartamát akkor is, ha a vezikulumokat ezeknek a komponenseknek az oldatában létesítjük, aminek következtében az említett komponenseknek csak egy részét kapszulázzák (tokolják be) a vezikulumok.
Azt is kimutatjuk, hogy a találmány szerinti liposzómák hatékony rákellenes gyógyszerhatóanyag toxicitását farmakológiai hatásának csökkenése nélkül csökkentik.
A találmány szerinti liposzómák bioadhezivek (biológiai körülmények között tapadók), s így megoldhatják egy beágyazott hatásos komponens megfelelő hasznosulását egyes biológiai felületeken, például a szaruhártyán és nyálkahártyákon.
A találmány szerinti liposzómák meglepően sok típusú hatóanyag, például lipofil komponensek, hidrokloridok, nitrátok, amfifilek, proteinek, peptidek és más hatóanyagok beágyazására alkalmasak.
A találmány szerint galaktózra vagy bármely más monoszacharidegységre, például glükózra alapozott, szintetikus eredetű diglikozil-diacil-glicerinek, vagy a galaktóztól eltérő, bármely szacharidegységre, például glükózra alapozott, bármilyen forrásból izolált természetes eredetű glikozil-gliceridek alkalmazhatók.
zo σ-c ··'— λ / · ι *
A qalaktolipid anyag -sx c, .
Amint az alábbiakból látható, a galaktolipid anyagokat különböző gabonanövényekből készítettük, és a példákban közölt módon alkalmaztuk találmány szerinti vivőanyagkészítmények és gyógyászati készítmények előállítására. A részletezésben a %-os érték tömeg%-ot jelent, ha erre vonatkozó más megjegyzést nem teszünk. Oldószerkeverékekben az oldószerek arányát térfogatrészben közöljük.
Galaktolipid anyag előállítása zabfélékből
200 kg zabbelet (a Kungsörnen AB cég terméke, Svédország) megőrölünk, és keverés közben extrakciós tartályban
1000 liter 95 %-os etanollal 70 °C hőmérsékleten 3 órán át extraháljuk. A szuszpenziót még melegen centrifugáljuk, míg a szilárd részecskéket (szemcséket) elkülönítjük. A folyékony frakciót 60 °C hőmérsékleten bepárolva körülbelül 10 kg könnyű, barna olajat kapunk.
Ezt az olaj szerű terméket 6,25 kg szilikagélt tartalmazó [Matrex Silica Si, részecskeméret 20-45 μιη, pórusátmérő 60 A; az Amicon Corp. cég (USA) terméke] rozsdamentes acélkolonnára visszük, amelynek hőmérséklete 50 °C. Az oszlopot 30 liter 90:10 arányú hexán-izopropanol eleggyel mossuk az összes, nempoláris lipidek eltávolítására.
Ezután a galaktolipid anyagot az oszlopról 20 liter 60: 40 arányú hexán-izopropanol eleggyel eluáljuk, s így jutunk a galaktozil-diacil-glicerin frakcióhoz, amelynek Lepárlásával körülbelül 700 g DGDG-t kapunk, ez a többségben lévő lipidek csoportja. A galaktolipid anyagot vízben diszpergáljuk, majd liofilizáljuk, s így gördülékeny porhoz jutunk.
A DGDG feldúsítása a galaktolipidek közül g zabból a fentiek szerint kapott, mintegy 70 %
DGDG-t tartalmazó galaktolipidet 250 ml 70:30 arányú hexán-izopropanol elegyben oldunk, így 300 ml összes térfogatot kapunk. Az így nyert oldatot 110 g szilikagélt tartalmazó oszlopra öntjük, és a kevéssé poláris komponenseket 1 liter 70:30 arányú hexán-izopropanol eleggyel eluáljuk. A dúsított DGDG frakciót 2 liter acetonnal eluáljuk. Az acetonos frakciót bepároljuk, és liofilizáljuk. így összesen 17 g hozammal csaknem tiszta DGDG terméket nyerünk.
A galaktolipidek hidrogénezése
200 g zabból a fenti leírás szerint előállított galaktolipid keveréket 2 liter meleg izopropanolban oldunk, 15 g, 15 % palládiumot tartalmazó csontszenes palládiumkatalizátort [nedvességtartalma 53 %; az Engelhardt cég terméke (Róma)] viszünk egy nyomásálló reaktor (Model No. 4552M; Parr Instrument Co., USA) fenekére, amelyet egy keverőtengelyen felszerelt két keverőszárnnyal látunk el. Ezután az oldatot nitrogén alatt visszük a reaktorba a tűzveszély kiküszöbölése céljából. A reaktort, zárjuk, és előbb három alkalommal nitrogénnyomás alá helyezzük a levegő eltávolítása céljából, majd háromszor hidrogéngázzal nyomatjuk meg (Plus 4,5, AGA Gas AB, Svédország). A hidrogén nyomását 600 kPa értéken tartjuk, a keverést 600 rpm sebességgel üzembe helyezzük, és a keveréket 70 °C-ra melegítjük. A reakcióelegy ezt a hőmérsékleti kezdőpontot 14 perc alatt éri el. A hidrogénezést 6 órán át végezzük, utána a reakcióterméket 0,4 5 μπι szűrőnyílású szűrőn át szűrjük a szén- és palládiumrészecskék eltávo lítása céljából. Az oldószert forgóbepárlón (rotavaporon) bepároljuk, a visszamaradó szilárd anyagot 1600 ml deionizált vízben diszpergáljuk, és liofilizáljuk.
Szűrés és liofilizálás után a hidrogénezett galaktolipideket 155 g hozammal kapjuk.
A hidrogénezés eredményességét gázkromatográfiásán értékeltük ki; ennek alapján a hidrogénezett termékben csak telített zsírsavak voltak kimutathatók.
Galaktolipidek előállítása búzasikérből 1 kg búzasikérport (az AB Skanebránnerier, Svédország) liter 95 %-os etanollal 70 °C hőmérsékleten 3 órán át tartályban extrahálunk. A szuszpenziót 400-500 kPa nyomás alatt szűrjük, és a szűrőkalácsot 1 liter meleg 95 %-os etanollal mossuk. Az egyesített etanolos oldatot legfeljebb 60 °C hőmérsékleten bepároljuk, s így körülbelül 60 g sárga, olajszerű terméket kapunk.
Ezt az olajat 45 g szilikagélt (Matrex Silica Si, részecskemérete 20-45 μπι, pórusmérete 60 A, az Amicon Corp.
terméke, USA) tartalmazó, rozsdamentes acéloszlopra visszük, és az oszlopot a neutrális lipidek eltávolítása céljából 700 ml 90:10 arányú hexán-izopropanol eleggyel mossuk.
Ezt követően az MGDG és más poláris lipidek eltávolítására az oszlopot 1000 ml 70:30 arányú hexán-izopropanol eleggyel mossuk. A DGDG-t 1000 ml tiszta acetonnal eluáljuk. Bepárlás után körülbelül 4 g csaknem tiszta DGDG terméket kapunk.
Gáláktólipidek előállítása rozsból
100 g rozspelyhet (a Kungsörnen AB terméke, Svédország) ipari minőségű hexán és izopropanol 90:10 arányú elegyével 60 percig keverünk, utána a szuszpenziót szűrjük, és bepároljuk. így 0,5 g poláris lipidanyagot kapunk. A maradékot 10 ml hexán és izopropanol 70:30 arányú elegyében oldjuk, és három Sep-pak Silica plus oszlopra (Millipore Corp., USA) töltjük, amelyeket sorba kapcsolunk; a mosást 20 ml azonos oldószerkeverékkel végezzük, és az oszlopokat 15 ml acetonnal eluáljuk. Az eluátumok bepárlásával és liofilizálásával 47 mg gáláktólipid terméket kapunk.
Különböző galaktolipid anyagok kémiai és fizikai jellemzése
A lipidcsoport elemzése
A lipidcsoport elemzését nagy teljesítményű folyadékkromatográfiával (HPLC) végeztük; diollal módosított szilikagéllel (LiChrosphere 100 DIOL, 5 μιη; 250 mm x 4 mm belső átmérő; E. Merck, Németország) töltött oszlopot alkalmaztunk
Az oszlopot 75 °C hőmérsékleten tartott vízfürdőbe helyeztük. Az elemző rendszer alkatrészei: HPLC szivattyú CM 4000 (LDC/Milton Roy, USA) és egy injektor (Model 7125) 20 μΐ-t befecskendező (injekciós) hurokkal (Rheodyne Inc., USA). Bepárologtató, fényszórásos detektorként Sedex 55 porlasztókamrával ellátott Sedex 45 eszközt (S.E.D.E.R.E., Franciaország) használtunk, 97 °C driftcső-hőmérséklettel és 200 kPa bemeneti légnyomással.
A mozgó fázis áramlása az elemzés alatt 1 ml/perc volt. Binér oldószer gradienst alkalmaztunk (25 percen át lineáris) , 100 % A eleggyel kezdtük, és 100 % B eleggyel végeztük, ahol A = hexán:izopropanol:n-butanol:tetrahidrofurán:
:izooktán:víz = 64:20:6:4,5:4,5:1; és B = izopropanol:n-butanol:tetrahidrofurán:izooktán:víz = 75:6:4,5:4,5:10. Az összes oldószerek 180 mg/liter ammónium-acetátot tartalmaztak.
Az adatokat GynkoSoft Data system version 4.22 (Softron GmbH, Németország) számítógépes rendszerrel gyűjtöttük, és dolgoztuk fel. Elemzés céljából általában 100 μg mennyiséget fecskendeztünk be. Az azonosítást autentikus standard anyagokkal végzett retenciós idő-összehasonlítással végeztük (Karlshamns LipidTeknik AB, Svédország). Ebben a rendszerben illékony vegyületeket nem detektáltunk. A mennyiségi meghatározásokat a csúcsok területének számítására alapoztuk.
A zéta-potenciálokat híg vizes galaktolipid diszperziókkal állapítottuk meg Zetasizer 4 mérőműszerrel (Malvern Instruments Ltd., Egyesült Királyság).
1. táblázat
Különböző galaktolipid anyagok jellemzése
O—h—GX* o-DODO w-GL w-DODO r-OL 1
DGDG tarta| lom, a terü1 let %-ában 73 70 72 100 80 100 67 1
1 Z-potenciál, | mV -74 -76 -30 -51 -75 -38 -37
Mind az 1., mind a 2. táblázatban a következő rövidítéseket használjuk:
o-GL: zabból származó galaktolipidek o-h-GL: zabból származó, hidrogénezett galaktolipidek o-DGDG: zabból származó, dúsított galaktolipidek w-DL: búzából származó galaktolipidek w-DGDG: búzából származó, dúsított galaktolipidek r-GL: rozsból származó galaktolipidek
A zsírsavak elemzése
A zsírsavprofil elemzését a lipidek zsírsav-metil-észterekké végzett átészterezése után gázkromatográfiával végeztük. A metil-észtereket kapilláris oszlopon végzett gázkromatográfiával elválasztottuk, és mennyiségileg mértük Varian 3500 Capillary Gas Chromatograph műszeren, amely 30 m x 0,25 mm belső átmérőjű kapilláris oszloppal (DB-WAX; J&W Scientific, USA), az oszlopra helyezett injektorral és lángionizációs detektorral volt ellátva. Vivőgázként héliumot ·· ·
- 19 alkalmaztunk. Az integrálást GynkoSoft Data system version 4.22 eljárással (Softron GmbH, Németország) végeztük. Az átészterezést úgy hajtottuk végre, hogy 1 mg lipidmintát adtunk 2 ml 1:1 arányú dimetil-karbonát/izooktán elegyhez. Ehhez 1 ml olyan oldatot adtunk, amely 200 ml metanolban 2,3 g oldott nátriumot tartalmazott, a kémcsövet erélyesen összeráztuk 30 másodpercig, majd a reakció teljes végbemenetele céljából 15 percig szobahőmérsékleten állni hagytuk. Ekkor 3 ml vizet adtunk hozzá, a kémcsövet rázogattuk, majd 2 x g sebességgel centrifugáltuk. A szerves fázisból 0,5 μΐ-t injektáltunk a kromatográfba, és az elválasztást az alábbi körülmények megtartásával végeztük. A hevítő hőmérsékletét programmoztuk: 130 °C-on inkubáltunk (2 perc), a hőmérsékletet 150 °C-ra növeltük (30 ’C/perc), majd 220 °C-ra növeltük (3,2 °C/perc), és 10 percig tartottuk. Az injektor hőmérséklete 130 °C, a detektor hőmérséklete 250 °C. A kezdeti gázáramlási sebesség 2,7 ml/perc. Az eredményeket normalizált tömeg%-os értékekben fejeztük ki a külső standard módszer alkalmazásával. A kisebb mennyiségű alkatrészek esetében amelyek számára standardok nem álltak rendelkezésre, vagy tisztaságuk nem volt elegendő - korrekciós tényezőket nem alkalmaztunk.
2. táblázat
A zsírsavösszetétel jellemzése
Zsírsavösszetétel , tömeg% o—GL o-h-QL o-DODO w-OL w-DGDG r-GL
14 szénatomos, telített 1
| 16 szénatomos, | telített 20 21 21 16 IS 13 12
I 18 szénatomos, 1 telített 1 1 74 2 1 1
Í18 szénatomos, 11 kettős kötés, n-9 17 17 19 6 5 8
B18 szénatomos, 1 kettős kötés, n-7 1 1 1 1 1 1
J18 szénatomos, 1 2 kettős kötés, n-6 53 52 58 71 68 69
B18 szénatomos, |3 kettős kötés, n-3 2 2 3 3 3 s 1
B 1 X-nál kisebb Π mennyiségű és 1 azonosítat lan 1 komponensek 6 6 5 1 3 8 5 I
Digalaktozil-diacil-glicerinek NMR színképének a vizsgálata Az egydimenziós, megszüntetett protonkapcsolású, termé szetes előfordulású 13C-NMR színképeket Bruker AM-400 spektrométeren (Bruker Analytische Messtechnik GmbH, Németország) 100,614 MHz 13C frekvencián vettük fel. A pulzusszög 36°, a pulzus ismétlődési időtartama 1,0 másodperc, a feloldás adatpontonként 1,526 Hz. A feldolgozás során 3 Hz vonalszélesítést alkalmaztunk. A mintákat (10-40 mg mennyiségben) 730 μΐ DMSO-dg és 20 μΐ D2O keverékével hígítottuk, majd NMR mérőcsőbe (belső átmérője 5 mm) vittük át.
3. táblázat
Búzából és zabból származó digalaktozil-diacil-glicerinek 13C kémiai eltolódásai (ppm)
Szignál v-DGDG o-DGDG
Zsírsavegységek
C(n) 13.8 13.7
C(n-l) 21.9 21.9
C(n-2) 30.8 30.8
C, metilén 28.3-28.9 28.4-29.0
C, alliles 26.5 26.5
C,kétszeresen alliles 25.1 25.1
C, olefines 127.6-129.6 127.6-129.5
C3 24.3 24.3
C2 33.3, 33.5 33.3, 33.5
Cl 172.2, 172.5 172.1, 172.4
Glicerinegység
sn-1 62.3 62.4
sn-2 69.8 69.8
sn-3 66.6 66.6
Digalaktozil- egység Cl (belső) 103.6 103.6
Cl' (külső) 99.4 99.4
egyéb 60.4, 66.3, 60.4, 66.3,
67.7, 68.2, 67.7, 68.2,
68.6, 69.3, 68.6, 69.3,
70.1, 71.1, 70.1, 71.1,
72.8, 72.8 72.8, 72.9
• · ·
- 22 1. példa
Vizes gél kialakítása
A zabfélékből előállított galaktolipid anyagot különböző mennyiségű vízzel kevertük a vízben végbemenő duzzadás képességének vizsgálata céljából. A lipid-víz mintákat tömeg szerint mérve üvegcsövekben készítettük. A mintákat váltakozva üvegbottal kevertük, illetve centrifugáltuk szobahőmérsékleten mindaddig, amíg láthatóan homogén rendszereket nem kaptunk. A minták külső megjelenését hathónapos szobahőmérsékletű tárolás után vizsgáltuk. A lamelláris, folyadékkristályos fázist polarizációs fénymikroszkópiás úton mutattuk ki. Eredményeinket az alábbi táblázatban foglaljuk össze:
Galaktolipid anyag % Küllem (külső megjelenés)
1,0 Finom diszperzió; csekély ülepedés
4,8 Finom diszperzió; csekély ülepedés
10,5 Lamelláris + vizes fázis; térfogatuk egyenlő
19,3 Lamelláris + vizes fázis; a vizes
fázis térfogata 10 %-nál . kisebb
24,8 Lamelláris fázis
45,0 Lamelláris fázis
A fentiek alapján körülbelül 25 %, vagy ennél nagyobb galaktolipid-tartalom mellett homogén, egyfázisú gél képződött.
2. példa
Vizes gél viszkozitási sajátságai
Az 1. példa szerint 55 % vizet tartalmazó galaktolipid gélt állítottunk elő. A viszkozitási méréseket koncentrikus hengerren (C14; torziós nyomaték: 91 gcm) ellátott Bohlin VOR reométerrel (Bohlin Reologi AB, Svédország) végeztük különböző nyírási sebességek és hőmérsékletek mellett. A viszkozitást az előállítás után 24 órával mértük. Az állandó (stacioner) áramlású viszkozitás értékeit (Pa-ban kifejezve) az alábbiakban összegezzük:
Nvírási sebesséq, 1/s 20 °C 40 °C 60 °<
0,292 98,8 84,5 77,0
0,581 65,7 54,5 42,1
2,312 46,0 34,0 19,5
9,207 37,4 29,6 15,0
Ebből az következik, hogy a minta a nyírás következtében ritkul (pszeudoplasztikus), azaz a viszkozitás a nyírási sebességtől függ; ez a reológiai viselkedés a lamelláris folyadékkristályos fázisokra tipikusan jellemző. Továbbá, a hőmérséklet növekedése a viszkozitásnak csak csekély csökkenését idézi elő, ami arra mutat, hogy a vizsgált hőmérséklettartományon belül fázisátmenet nem megy végbe. 18 hónapon át szobahőmérsékleten végzett tárolás után a gélt vizuálisan vizsgáltuk, mikrobák szaporodását nem észleltük. A minta fizikai külleme a tárolás során nem változott: ez figyelemreméltó, mivel a tárolás hőmérsékletére, antioxidánsokra, sta• · ·
- 24 bilizálószerekre vonatkozóan semmiféle óvintézkedést nem tettünk. Ez a galaktolipid anyag kitűnő stabilitását mutatja még víztartalmú környezetben is, amely például az acilláncok hidrolízisét vagy mikrobiális bomlást idézhet elő.
3. példa
A felszabadulás vizsgálata
Vizsgáltuk az in vitro körülmények közötti felszabadulást egy vízben oldható festékanyag, a metilénkék (E. Merck, Németország) alkalmazásával olyan galaktolipid és foszfolipid gélekből, amelyek kezdetben 60 % lipidet és 50 mM koncentrációban metilénkéket tartalmaztak. A galaktolipid anyagot zabfélékből állítottuk elő. Foszfolipidként szójababból származó, kromatográfiásan tisztított foszfatidil-kolint (s-PC; Karlshamns LipidTeknik AB, Svédország) alkalmaztunk. Diffúziós közegünk membránon szűrt, 37 °C hőmérsékleten egyensúlyban lévő víz volt. A diffúziós cella kürölbelül
2,5 g gélt tartalmazó, regenerált cellulózból készült membráncsővezeték (Spectra/Por; molekulatömeg-mérethatár: 60008000; felületi szélessége 1,0 cm). A csövet 10 cm belső átmérőjű, termosztatáit edénybe mártottuk, amely 250 g közeget tartalmazott, a fenéktől számítva körülbelül 3 cm távolságban rögzített helyzetben. Az edényt mágneses keverővei, percenként 200 fordulatszám (rpm) sebességgel kevertük. Meghatározott időpontokban a közegből alikvot részeket vettünk ki, és spektrofotometriásán 665 nm hullámhosszon elemeztük. Összehasonlítás céljára megmértük metilénkék felszabadulását 50 mM metilénkéket tartalmazó, cellulózcsőben elhelyezett vizes oldatból.
2,5 óra elmúltával festékanyag felszabadulása a galaktolipid gélből nem volt kimutatható, míg a foszfatidil-kolint tartalmazó gélből a festékanyag 1,3 %-a szabadult fel. Öt óra eltelte után a galaktolipid gélből a festéktartalmának mindössze 0,13 %-a szabadult fel, ez megközelítőleg 12szer kevesebb, mint a foszfatidil-kolint tartalmazó gél esetében.
Ez arra utal, hogy a galaktolipid készítményből egy biológiailag hatásos anyag - in vivő adagolás után - lassú ütemben szabadulhat fel, ami lehetőséget adhat depokészítmény (lassú felszabadulást biztosító készítmény) megvalósítására .
4. példa
A felszabadulás vizsgálata
Megvizsgáltuk egy kezdetben 60 % lipidet, 15 % remoxiprid-hidrokloridot és 25 % vizet tartalmazó galaktolipid gélből egy vízben oldható gyógyszerhatóanyag, a remoxiprid-hidroklorid-monohidrát (Astra AB, Svédország) felszabadulását in vitro körülmények között.
Diffúziós közegként 7,4 pH-értékű, 0,05 M ionerősségű, 37 °C-on egyensúlyozott foszfátpuffért alkalmaztunk. A diffúziós cella körülbelül 1 ml gélt tartalmazó, regenerált cellulózból álló membráncsőből állt (Spectra/Por 3; molekulatömeg-mérethatára 3500, felszíni szélessége 1,0 cm, hossza 4 cm) . A csővezetéket mindkét végén kapcsokkal zártuk, és termosztatáit oldó fürdő fenekére helyeztük (Sotax AT 6;
belső átmérője 10 cm), amely 600 ml foszfátpuffért tartalmazott. A pufferoldatot 50 rpm sebességgel, lapátos keverővei kevertük. Előre meghatározott időpontokban 1 ml mintát vettünk, és elemeztük. A minta helyett 1 ml pufferoldatot adtunk hozzá. A remoxiprid koncentrációját fordított fázisú folyadékkromatográfiával, μ-Bondapak C18 oszlopon határoztuk meg. Eluálásra 1,8 pH-értékű foszfátpuffer és acetonitril 4:1 arányú elegyét alkalmaztuk. Spektrofotometriás detektort alkalmaztunk 254 nm hullámhosszon.
A beágyazott gyógyszerhatóanyag meglepően lassú ütemben szabadult fel a gélből. Két óra eltelte után a galaktolipid gélből a beágyazott gyógyszerhatóanyagnak kevesebb, mint 2 %-a szabadult fel; 4 óra után a felszabadult mennyiség megközelítőleg 3 %.
Ennek alapján valószínű, hogy a galaktolipid készítmény parenterális depóként hasznosítható biológiailag hatásos (bioaktív) anyag - itt például remoxiprid-hidroklorid - lassú ütemű felszabadítására.
5. példa
Liposzómák kialakítása
Liposzómákat - azaz multilamelláris (több, lemezes rétegből álló) vezikulumokat - az alábbi módon állítottunk elő, és jellemeztünk. Zabfélékből származó galaktolipidekhez 1,0, illetve 10,0 % végső lipidkoncentráció eléréséig vizet adtunk. A mintákat enyhe keverés közben 24 órán át szobahőmérsékleten hagytuk egyensúly elérésére, s így liposzómákat tartalmazó diszperziókat kaptunk.
• · ·
- 27 Unilamelláris (egy lemezes rétegű) vezikulumok előállítása céljából a diszperzió egy részét üvegcsőbe vittük át, és mikrohegyű szondával ellátott ultrahangképző eszközzel (XL-2020; Heat Systems Inc., USA) nitrogéngázzal védve 0 °C hőmérsékleten roncsoltuk. A beállítást a következőképpen végeztük: teljesítmény-kontroli 3,5, a folyamat ideje 3x2 perc, az impulzus időtartama 2x4 perc.
Az így kapott liposzóma-diszperzió szemcseméreteloszlását dinamikus fényszórással (Zetasizer 4, Malvern Instruments, Egyesült Királyság), 90°-os szöggel szobahőmérsékleten határoztuk meg ZET5110 mérőcella és multimodális elemzés alkalmazásával. Az alábbi - Z átlagértékében kifejezett - eredményeket kaptuk:
Ultrahangkezelés előtt Méret, nm
1,0 %-os diszperzió 467
10,0 %-os diszperzió 551
Ultrahangkezelés után Méret, nm
1,0 %-os diszperzió 144
10,0 %-os diszperzió 148
Az így kapott diszperziókat az ultrahangkezelés előtt és után optikai mikroszkóppal (40-100-szoros nagyítással, Olympus CH-2, Japán) viszgáltuk. A liposzóma-diszperzió kis mennyiségét üveglemezre helyeztük, majd a minta külső megjelenését keresztezett polarizátorok között figyeltük meg.
Csupán ultrahanggal nem kezelt liposzómákat figyelhettünk meg, melyek jellemző máltai kereszt formát mutattak. A galaktolipidek vezikulumkialakító képességét fagyasztásos-töréses transzmissziós elektronmikroszkópiával is igazoltuk.
A fenti eredmények azt mutatják, hogy a galaktolipidek kitűnő képességgel rendelkeznek multilamelláris vezikulumok kialakítására az egyszerű, közvetlen hidratáló eljárás alkalmazásával, illékony szerves oldószerek és társított nedvesítőszerek hozzáadása nélkül. Ezt követően kisméretű, unilamelláris vezikulumok a fentebb leírtak szerint vagy bármilyen szokásos eljárással, például polikarbonát-membránon átnyomással, ultrahangkezelés alkalmazásával kialakíthatók.
6. példa
A kapszulázás hatékonyságának vizsgálata
Megvizsgáltuk zabfélékből előállított galaktolipid anyag vezikulumaiba foglalt festékanyag kapszulázásának hatékonyságát. A galaktolipid anyagot 4,8 %-os koncentrációban 20 mM koncentrációjú vizes fluoreszceinoldatban közvetlenül hidratáltuk. A diszperziót szobahőmérsékleten 24 órán át duzzadni hagytuk.
A festékanyagot tartalmazó vezikulumokat a be nem ágyazott festéktől Sephadex G 50 oszlopon (magassága 60 cm, belső átmérője 1,5 cm) szobahőmérsékleten végzett gélszűréssel választottuk el. Eluálószerként 7,4 pH-értékre állított EDTA puffért (tartalma: 1 mM EDTA, 5 mM Tris, 150 mM NaCl) használtunk. Az oszlopba előbb koncentrált festéket tartalmazó liposzóma-diszperziót vittünk, és ezt követően vezettük be a pufferolt EDTA oldatot. Az oszlopról származó eluálószert mikroáramlási cellával és felvevő eszközzel ellátott UV spektrofotométer segítségével 240 nm hullámhosszon folyamatosan figyeltük, és automatikus frakciógyüjtőben végeztük az eluálószer gyűjtését. Két frakciót, a festékanyaggal töltött vezikulumokat és a be nem zárt festékoldatot külön-külön gyűjtöttük, és meghatározott térfogatra állítottuk be. A festékanyag koncentrációit spektrofotometriásán 285,2 nm hullámhosszon határoztuk meg, és az így kapott adatokból számítottuk ki a kapszulázott térfogatot és a kapszulázás hatékonyságát. Az alábbi eredményeket kaptuk: a kapszulázott (betokolt, bezárt) térfogat 2,1 μΙ/mg lipid, a kapszulázás hatékonysága 11 %. A vezikulum méretét a meghatározás alapján 509 nm-nem találtuk (Z átlaga).
A galaktolipidek közvetlen hidratálása multilamelláris vezikulumok kialakulásához vezet, amint ezt az 5. példában leírtuk. A fenti adatok azt mutatják, hogy ezeknek a vezikulumoknak a kapszulázott térfogata sokkal nagyobb, és kapszulázási hatékonyságuk kedvezőbb, mint a szokásos foszfolipid-alapú vezikulumoké, amelyekről közölték, hogy kapszulázott térfogatuk megközelítőleg 0,5 μΙ/mg lipid.
A multilamelláris vezikulumok előállítására alkalmas, közvetlen hidratálási eljárás műszaki szempontból egyszerű és gyors, és ennek alapján iparilag alkalmazható módszer. E módszernek galaktolipidekre alkalmazásával jóval nagyobb kapszulázási térfogat, azaz sokkal kedvezőbb kapszulázási hatékonyság érhető el; ezek a sajátságok voltak mindeddig a leghátrányosabbak, amikor multilamelláris vezikulumok gyártására foszfolipideket használtak fel.
7. példa
Vizes diszperziók kialakítása
Zabfélékból származó, dúsított galaktolipid anyagot (DGDG-t) vízzel kevertünk a vízben elérhető duzzadóképesség vizsgálata céljából. A lipid-víz mintákat az 1. példában leírt módon állítottuk elő. Eredményeinket az alábbi táblázatban összegeztük:
Dúsított galaktolipid, % Külső megjelenés
1,1 Finom, tejszerü diszperzió
9,6 Enyhén viszkózus, tej szerű diszperzió
21,2 Viszkózus, tejszerű diszperzió
Hasonlóan a nem dúsított anyag duzzadóképessége vízben diszperziók könnyen alakulnak anyag esetéhez, a dúsított rendkívül kedvező, homogén ki.
8. példa
Vizes diszperziók kialakítása
Zabfélékből származó, hidrogénezett galaktolipid anyagot vízzel kevertünk a vízben mutatott duzzadóképesség vizsgálata céljából. A lipid-víz mintákat az 1. példában leírt módon készítettük.
• * ·
Hidrogénezett galaktolipid
Külső megjelenés
1,3
Finom, fehér diszperzió
5,7
10,2
Enyhén viszkózus, fehér diszperzió
Viszkózus, fehér diszperzió
Hasonlóan a nem hidrogénezett anyaghoz, a hidrogénezett anyag vízben mutatott duzzadóképessége rendkívül kedvező. Ez az anyag csak telített zsírsavmaradékokat tartalmaz, ami azt jelenti, hogy mind száraz állapotban, mind víz jelenlétében igen rendezett, kristályos szerkezet alakul ki. A hidrogénezett anyag - mint vizes diszperzió - láncolvadási pontja megközelítőleg 55 °C pásztázó differenciál-kalorimetriás meghatározás alapján. A nem hidrogénezett anyag megfelelő értéke jóval 0 °C alatt van.
9. példa
Vízmentes, viszkózus diszperzió előállítása
Viszkózus diszperziókat állítottunk elő az alábbi összetétellel;
Komponensek %
Galaktolipidek 10,0
Glicerin, 99 %-os 90,0
Komponensek %
Galaktolipidek 20,0
Glicerin, 99 %-os 80,0
A zabfélékből előállított galaktolipideket glicerinnel felváltva bottal kevertük, és szobahőmérsékleten centrifugáltuk mindaddig, amíg erősen viszkózus, homogén és látszólag izotróp folyadékok ki nem alakultak. Mindkét folyadék glicerinben lévő lamelláris fázis diszperziójából, azaz multilamelláris vezikulumokból állt, polarizált fénymikroszkópban megfigyelt felépítésük alapján. Egy éven át szobahőmérsékleten végzett tárolás után megfigyeltük a minták külső megjelenését. A galaktolipid koncentrációjára való tekintet nélkül ülepedést nem figyeltünk meg; ez arra utal, hogy a glicerin a vezikulumok diszperziójára stabilizáló hatást fejtett ki.
10. példa
Nyálkahártya állapotának javítására alkalmazható, vízmentes készítmény előállítása
Szulfhidrilcsoportot tartalmazó szerek - így a DL-cisztein és az N-acetil-L-cisztein - emberben a duodénum fekélyének gyógyulását elősegíthetik, és kiújulását megelőzhetik. Iszkémia vagy káros anyagok - így például az etanol valamint az acetil-szalicilsav gyomorfekélyt idézhetnek elő; a káros anyagok a duodénum nyálkahártyáját megkárosítják, és eltávolítják.
Készítményt állítottunk elő az alábbi komponensek felhasználásával :
Komponensek
Zabfélékből származó galaktolipidek N-Acetil-L-cisztein
10,0
10,0
Glicerin, 99 %-os 80,0
Az N-acetil-L-ciszteint enyhe keverés közben glicerinben oldottuk, és nyílt edényben körülbelül 60 °C-ra melegítettük. Ezután hozzáadtuk a galaktolipid anyagot, és az így kapott, átlátszó folyadékot műanyagkupakkal ellátott üveg tartóedénybe vittük át. Ezt a készítményt - a polarizált fénymikroszkópos vizsgálat alapján diszperziót - több, mint hat hónapon át hűtőszekrényben tároltuk.
Oldószerül glicerint választottunk, mivel a szulfhidril-tartalmú anyagok, például az N-acetil-L-cisztein vizes oldatban nem stabilisak, és olyan anyagokká alakulnak át, amelyek a nyálkahártyára farmakológiai hatást nem fejtenek ki.
A galaktolipid anyag önmagában kedvező hatású, mivel in vivő patkányokon végzett vizsgálatok megmutatták, hogy a gyomornyálkahártyára védőhatása van.
Hidrokortizon - egy gyulladáscsökkentő gyógyszerhatóanyag - alkalmazásával a 11.-14. példákban leírt, különböző topikus (helyileg adagolható) készítményeket állítottunk elő. A galaktolipid anyagot zabfélékből állítottuk elő. Az összes készítmények szobahőmérsékleten több, mint két hónapon át stabilisak maradtak.
11. példa
Komponensek %
Galaktolipidek 10,3
Hidrokortizon
1,0
Víz 88,7
A hidrokortizont és a galaktolipideket örvényeltető keverovel alaposan összekevertük. Víz hozzáadása után a készítményt felváltva alaposan kevertük, és centrifugáltuk, majd enyhén melegítettük, amíg finom, tejszerű diszperziót nem kaptunk.
12. példa
Komponensek %
Galaktolipidek 22,1
Hidrokortizon 1,2 l-Propanol 16,1
Víz 60,6
A hidrokortizont a propanolban enyhe melegítéssel és keveréssel oldottuk. Víz és a galaktolipidek hozzáadása után az elegyet felváltva kevertük, centrifugáltuk, és enyhén melegítettük mindaddig, amíg homályos, erősen viszkózus gélt nem kaptunk.
13. példa
Komponensek %
Galaktolipidek 18,9
Hidrokortizon 0,8
1-Propándinol 26,3
Víz 54,0
A hidrokortizont enyhe melegítéssel és keveréssel oldottuk az 1,2-propándiolban. Víz és a galaktolipid anyag hozzáadása után az elegyet felváltva erélyesen kevertük, és centrifugáltuk, majd enyhén melegítettük mindaddig, amíg sárgás, majdnem átlátszó gélt nem nyertünk.
14. példa
Komponensek %
Galaktolipidek 26,8
Hidrokortizon 1,2
Etanol 20,7
Víz 51,3
A hidrokortizont enyhe melegítéssel, keverés közben oldottuk az etanolban. Víz és a galaktolipidek hozzáadása után az elegyet felváltva erélyesen kevertük, és centrifugáltuk, majd enyhén hevítettük mindaddig, amíg enyhén barnás, átlátszó gélt nem kaptunk.
Az alábbi 15.-17. példákban különböző, vízmentes topikus készítményeket írunk le. Gyógyszerhatóanyag modelljeként itt is a hidrokortizont választottuk. A galaktolipideket zabfélékból állítottuk eló. Az összes készítmények szobahőmérsékleten több, mint két hónapon át stabilisak maradtak .
15. példa
Komponensek %
Galaktolipidek 7,0
Hidrokortizon 0,8
Glicerin, 99 %-os 92,2
A galaktolipideket glicerinben diszpergáltuk. A homogén gélfázis képződése után hidrokortizont adtunk hozzá. Az
- 36 elegyet örvénylő keverés előtt enyhén hevítettük. Az így ka pott készítmény sárgás, viszkózus gél (szuszpenzió), amely finoman diszpergált szilárd hidrokortizon-részecskéket tartalmaz .
16. példa
Komponensek %
Galaktolipidek 13,5
Hidrokortizon 1,1
Glicerin, 99 tömeg%-os 85,4
A készítményt a 15. példa szerint állítottuk elő. Az így kapott készítmény homályos, enyhén sárga színű, igen viszkózus gél.
17. példa
Komponensek %
Galaktolipidek 21,8
Hidrokortizon 1,1
Propanol 14,5
Glicerin, 99 tömeg%-os 62,6
A hidrokortizont a propanolban enyhe melegítés és keverés közben részben oldottuk. A galaktolipidek hozzáadása és erélyes keverés után glicerint tettünk hozzá. A készítményt azután erélyesen kevertük, centrifugáltuk és melegítettük mindaddig, amíg sárgás, gélszerű fázis nem képződött A gél finoman diszpergált hidrokortizon-részecskéket tártál mázott.
18. példa
Gombaellenes hatású, hüvelyen át (vaginálisan) adagolható készítmény
Komponensek %
Galaktolipidek 45,6
Mikonazol-nitrát 1,8
Víz 52,6
A mikonazol-nitrátot és a zabból előállított galaktolipideket örvénykeverőben alaposan összekevertük. Víz hozzáadása után a készítményt felváltva örvénylőén kevertük, és centrifugáltuk mindaddig, amíg barnás, homogén, igen viszkózus gélt nem kaptunk.
19. példa
Sebkötözésnél alkalmazható, antibakteriális készítmény
Komponensek %
Galaktolipidek 42,8 Doxiciklin-hidroklorid 1,7 Víz 55,5
A doxiciklin-hidrokloridot vízben oldva sárga oldatot kaptunk, ehhez adtuk a zabfélékből előállított galaktolipideket, majd az elegyet felváltva erélyesen kevertük, és örvényeltettük amíg enyhén barnás, erősen viszkózus gél ki nem alakult.
20. példa
A külső hallójáratba adagolható, antibakteriális készítmény • · ·
Komponensek
Galaktolipidek
2,0
Doxiciklin-hidroklorid
2,0
Víz
96,0
A doxiciklin-hidrokloridot vízben oldva sárga oldatot kaptunk. Ehhez adtuk a zabfélékből előállított galaktolipideket, majd az elegyet örvénylő keverésnek vetettük alá mindaddig, amíg doxiciklinnel töltött vezikulumok sárga, tejszerű diszperziója nem képződött.
21. példa
Orrnyálkahártyán át (nazálisán) adagolható, cukorbetegség elleni készítmény
Komponensek %
Galaktolipidek 3,5
Inzulinoldat, 100 NE/ml (Actrapid
Humán, Novo Nordisk AS, Dánia) 96,5
A zabfélékből előállított galaktolipideket a kereskedelmi forgalomból beszerezhető inzulinoldatban enyhe keverés közben 24 órán át hidratáltuk. Az így kapott diszperziót szokásos, nazális adagolásra alkalmazható, pumpával ellátott flakonba vittük át, amelyből finom aeroszol permet fejleszthető.
22. példa
Spermatocid készítmény
Komponensek
Galaktolipidek
22,5 • · ·
- 39 Nonoxinol 5,0
VÍZ 72,5
A három komponens elegyét felváltva örvénylő keverésnek, illetve centrifugálásnak vetettük alá, majd enyhén hevítettük, amíg enyhén barnás, átlátszó gélt nem kaptunk.
23. példa
Rektálisan (végbélen át) adagolható, fájdalomcsillapító készítmény
Komponensek %
Galaktolipidek 43,4
Paracetamol 2,9
Víz 53,7
A zabfélékből előállított galaktolipideket a paracetamollal alaposan összekevertük. A víz hozzáadása után kapott elegyet felváltva bottal kevertük, enyhén melegítettük, majd szobahőmérsékleten centrifugáltuk, amíg sárgásbarna, erősen viszkózus gél nem képződött.
A galaktolipid készítmények viszkozitását mérsékelt hőmérsékletváltozások jelentősen nem érintik. Hűtőszekrényben tartott készítmény fecskendőbe vagy hasonló eszközbe könnyen átvihető, majd rektálisan adagolható; ezt követően melegszik fel testhőmérsékletre viszkozitásának vagy állagának elvesztése nélkül.
24. példa
Szembe adagolásra alkalmazható, glaukóma (zöldhályog) elleni készítmény
Komponensek
-δ
Gáláktólipidek
1,00
Timolol-maleát
0,34
Víz
98,66
A zabfélékből előállított galaktolipideket a víz egy részében diszpergáltuk, és enyhe keverés közben szobahőmérsékleten éjszakán át duzzadni hagytuk. A timolol-maleátot a víz maradékában oldottuk, hozzáadtuk, az így kapott liposzóma diszperziót üvegcsőbe vittük át, és ultrahangkeltő eszközben (XL-2020, Heat Systems Inc., USA) (teljesítménykontroli 4.), amely mikrohegyű szondával volt ellátva, nitrogéngáz alatt 0 °C hőmérsékleten 10 percig roncsoltuk.
Ennek eredményeként kis, unilamelláris vezikulumokat, farmakológiailag hatásos mennyiségű gyógyszerhatóanyagot tartalmazó tiszta diszperziót kaptunk, amely szemcseppkészítményként alkalmazható. A galaktolipidek egyrészt növelik a készítmény viszkozitását, másrészt biológiai tapadóképességét javítják; ez kedvezőbbé teheti a gyógyszerhatóanyag biológiai hasznosulását a szaruhártyán való hosszabb tartózkodási ideje következtében.
25. példa
Γ-Linolénsav-lítiumsó beágyazása galaktolipid liposzómákba f-Linolénsav-lítiumsót, egy rákellenes gyógyszerhatóanyagot tartalmazó liposzómás galaktolipidkészitményt állítottunk elő az alábbi módon.
• · ·
Komponensek
Γ-Linolénsav-lítiumsó (röviden: Li-GLA)
Dúsított galaktolipid
2,3 glicerint tartalmazó víz, amennyi szükséges
1,5
10,0
100,0-hoz
A 75 % Li-GLA-t tartalmazó lítiumsót a Callanish Ltd. cégtől (Skócia) kaptuk. A dúsított galaktolipid anyagot (amelyet zabfélékből állítottunk elő) és a Li-GLA-t egymással összekevertük, majd hozzáadtuk a 2,3 %-os glicerinoldatot. Az elegyet hidratáltuk (vagy duzzasztottuk) 8 órán át. Az elegyet nagy nyíróerejű keveréssel, 12 000 rpm sebességgel 30 másodpercig kevertük, utána a liposzóma diszperziót 86 MPa nyomáson homogenizáltuk 3 percig (EmulsiFlex-C30, Avestin Inc., Kanada). 1,5 %-os Li-GLA koncentráció 53 mM koncentrációnak felel meg.
A liposzóma diszperzió hemolitikus hatását az alábbi 6. vizsgálatban közölt módon in vitro körülmények között vizsgáltuk.
26. példa % L-tirozint tartalmazó diszperzió előállítása
Diszperziót állítottunk elő az alábbi úton:
Komponensek %
Zabfélékből származó galaktolipidek 6,4
L-Tirozin 10,0
Víz 83,6
Valamennyi komponenst összekevertük, és nagy nyíróerejű keveréssel, 15 000 rpm sebességgel 4 perc alatt homogén diszperziót képeztünk. A diszperzió előállítása után több héten át stabilis maradt.
Az ábrák rövid magyarázata
Az 1. ábra a 9. példában előállított, 10 tömeg% galaktolipidből glicerinben előállított liposzómák mikrofotográfiás képét mutatja polarizált fényben százszoros nagyítással. A liposzómák jellemző megjelenése a gömbalak, máltai kereszt alakzatokkal.
A 2. ábra helyiérzéstelenítő gyógyszerhatóanyag idegblokkoló hatását mutatja gerincvelőburkon belül krónikus implantátumot viselő patkánymodellen a 3. vizsgálatban alább leírtak szerint.
Biológiai vizsgálatok
1. vizsgálat
A bőr irritációja (ingerlése) in vivő körülmények között
A találmány szerinti galaktolipidek bőrre kifejtett toxicitásának kiértékelése céljából az alábbi vizsgálatot végeztük.
Zabfélékből származó galaktolipideket vízzel, injekciós célra 10 %-os géllé kevertünk, és állatonként 0,5 ml adagban 6 New Zealand fajtájú fehér, hím nyúl ép bőrére vittük fel, majd féligzáró kötés alatt tartottuk 4 órán át. A kötés eltávolítása után 1, 24, 48 illetve 72 órával az állatok bőrén eritéma (bőrvörösödés) és ödéma kialakulását vizsgáltuk. A bőrön 24, 48, illetve 72 óra eltelte után megfigyelhető sérülések kiértékelésével átlagértékeket számítottunk, amelyeket az alábbi 5. táblázatban mutatunk be.
5. táblázat
A bőr ingerlése nyulakon
Eritéma Ödéma
24 óra 0 0
48 óra 0 0
72 óra 0 0
Ebből következik, hogy a galaktolipid gél alkalmazása említésre méltó ingerlést nem okozott.
2. vizsgálat
Galaktolipid liposzómák klirenszének a kiértékelése in vivő körülmények között 3H-zsírsavcsoporttal (zsírsav-acilcsoporttal) jelzett
DGDG előállítása
500 mg, zabfélékből származó galaktolipidet tríciummal jeleztünk úgy, hogy a zsírsavegységek kettős kötéseit gázalakú tríciummal (Amersham Tritium Labeling Service, Egyesült Királyság) katalitikusán redukáltuk. így redukált kettős kötésenként 30-60 Ci/mmol fajlagos aktivitást értünk el. A 3H-DGDG terméket kétdimenziós, szilikagélen végzett vékonyréteg-kromatográf iával 60 lemezen tisztítottuk. Mozgó fázisként az első irányban kloroform, metanol és víz 65:25:4 tér44 fogatarányú elegyét, a második irányban kloroform, metanol, ecetsav és víz 85:15:10:3,5 térfogatarányú elegyét alkalmaztuk. A DGDG foltját a következőképpen és következő sorrend szerint eluáltuk: kloroform, metanol, víz 65:25:4 térfogatarányú, majd 50:50:10 térfogatarányú elegyével; tiszta metanollal; végül metanol és víz 1:1 térfogatarányú elegyével. A galaktolipid molekula lipofil részében tartalmazott 3H menynyiségét a következőképpen határoztuk meg: 18 nci 3H-jelzett DGDG anyagot és 2 mg nem jelzett anyagot 1 ml 1 mólos kálium -hidroxid oldattal 4 órán át 60 °C hőmérsékleten alkálikusan hidrolizáltunk, majd 0,2 ml 5 mólos sósavoldattal közömbösítettünk, 5 ml kloroformot, 1,5 ml etanolt és 2,5 ml vizet adtunk hozzá. A két fázis elkülönülése után a radioaktivitás 97 %-át az alsó (kloroformos) fázisban kaptuk meg.
Nem jelzett galaktolipidet és 3H-DGDG-t 2,0 tömeg% öszszes koncentrációban 2,5 tömeg%-os vizes glicerinoldatban diszpergáltunk. A liposzóma diszperziót 36 órán át 4 °C hőmérsékleten egyensúlyba hoztuk, utána mikrohegyű szondával 3 x 2 percig ultrahanggal kezeltük (impulzusidő 4 perc; nitrogéngáz védelmében, 0 °C hőmérsékleten).
Vizsgálat patkányokon
Körülbelül 250 g testtömegű, éheztetett, hímnemű Sprague Dawley patkányokat dietil-éterrel érzéstelenítettünk, majd 1,8-2,7 gCi radioaktivitást tartalmazó 0,5 ml, ultrahanggal kezelt diszperziót fecskendeztünk az állatok külső, nyaki (juguláris) vénájába. Az állatokat az aorta átszúrásával 2, illetve 15, illetve 60 perc, majd 4 óra és óra elmúltával leöltük. A májban és a vérplazmamintákban tartalmazott lipideket kloroform és metanol 1:1 térfogatarányú elegyével extraháltuk. A kivonatokat nitrogéngáz alatt szárítottuk, kloroformban ismét oldottuk, és szilikagélen, lemezen vékonyréteg-kromatográfiát végeztünk. A kifejlesztésre kloroform, metanol, víz és ecetsav 65:25:4:4 térfogatarányú elegyét használtuk. A DGDG foltját számlálócsövekbe kapartuk, 1 ml 1:1 térfogatarányú metanol-víz elegyet adtunk hozzá, és az elegyet örvényeltetve kevertük, majd 10 ml 1:1 térfogatarányú toluol-Instagel (Packard Instruments B.V., Hollandia) elegyet tettünk hozzá. A radioaktivitást Packard TriCarb folyadékszcintillációs mérőeszközben határoztuk meg. A 10 ml vérplazmában (mely a teljes testtömeg 4 %-a) és a teljes májban különböző időpontokban jelenlévő 3HDGDG-t a befecskendezett dózis százalékos értékében fejeztük ki, és eredményeinket az alábbi táblázatban szemléltetjük.
6. táblázat
A befecskendezett 3H-DGDG-nek 10 ml vérplazmában, (mely a teljes testtömeg 4 %-a) és a májban különböző időpontokban megmaradt százalékos értéke; az adatokat az átlag + standard deviáció (n = 3) szerint adjuk meg
2 perc 15 perc 60 perc 4 óra 2 4 óra
Plazma 57,8 + 47,7 + 17,4 + 2, o ± 0,04 ±
9,0 5,4 1,9 o, 4 0,04
Máj 9,9 + 17,2 + 13,0 ± 2, 1 + 0,16 ±
2,2 2,2 1,6 o, 5 0,03
Az eredmények alapján valószínű, hogy patkányoknak intravénásán befecskendezett, DGDG-t tartalmazó vezikulumok felezési ideje körülbelül 30 perc. Nyilvánvaló továbbá, hogy a galaktolipid vezikulumok a véráramlásból feltisztultak (távoztak), illetve jelentősen lebomlanak, főként a máj hatására.
3. vizsgálat
Helyiérzéstelenítő hatóanyagot tartalmazó készítmények és gerincagyi érzéstelenítés vizsgálata patkányokon in vivő körülmények között
Különböző, bupivakain-hidrokloridot (helyiérzéstelenítőszert) tartalmazó készítményeket állítottunk elő az alábbiak szerint.
A Komponensek készítmény % B készítmény % C készítmény %
Bupivakain.HCl 1,00 0,50 -
Galaktolipidek 10,00 - 10,00
Glicerin, 99 %-os 1,57 2,48 2,59
Víz 86,47 97,02 87,41
Kontrollált kísérletben, gerincagyburok alá krónikusan implantált katétereket viselő patkányokon vizsgáltuk a készítmények képességét egy helyiérzéstelenítőszer gerincagyra és ideggyökökre kifejtett hatása időtartamának a meghosszabbítására.
235-300 g testtömegű, hímnemű Sprague-Dawley patkányok négy csoportját vizsgáltuk a gerincagy burka alá ültetett katéter beültetése után egy héttel T. L. Yaksh és T. A. Rudy eljárása szerint [Physiol. Behav. 17., 1031-1036 (1976)]. A patkányok két csoportját galaktolipid készítményben adagolt bupivakain két különböző dózisával kezeltük (A készítmény); egy harmadik csoportot vízben oldott bupivakainnal kezeltünk (B készítmény); és egy negyedik csoportnak helyiérzéstelenítőszert nem tartalmazó galaktolipid készítményt (C készítményt) adagoltunk az alábbi táblázat szerint:
Csoport A patkányok száma Készít- mény Befecskedne- zett térfogat μΐ A bupivakain befecskendezett mennyi- sécre, ug
Nagy adag 7 A 20 200
Kis adag 7 A 10 100
Kontroll 8 B 20 100
Placebo 6 C 20 0
A patkányokat találomra (randomizáltan) osztottuk a négy csoport egyikébe. A vizsgálati anyagot (tesztanyagot) a beültetett katéteren át a durazsák alsó, lumbáris területére adagoltuk. Szabályos időközökben megfigyeltük a vizsgálati anyag hatását a helyváltoztatásra, és ezt 0, 1, 2, 3 és 4 számok szerinti skálával osztályoztuk; itt 0 azt jelenti, hogy a helyváltoztatás nem romlott, és 4 jelenti mindkét hátsó és elülső végtag bénulását. A patkányokat legalább 90 percig figyeltük.
Eredményeinket a 2. ábrában összegeztük. Valamennyi, helyiérzéstelenítő hatóanyaggal kezelt állat mozgási funkciója az adagolás után rövid idővel súlyosan romlott. Ezzel szemben ennek a hatásnak az időtartama a három csoportban jelentősen különbözött: a nagy dózissal kezelt csoportban volt a bénulás időtartama a leghosszabb, és a kontrollcsoportban a legrövidebb. A 90. percben az összes állatok teljesen magukhoz tértek. A különbségek statisztikailag jelentősek voltak a nagy dózissal, és az alacsony dózissal kezelt csoportban a kontrollcsoporttal szemben a 20. percben (Wilcoxon-féle tesztsorozat). Továbbá, a nagy dózissal ke• · ·
- 49 zelt csoport szintén különbözött a kontrollcsoporttól a 30. percben. A placebo-csoport egyetlen időpontban sem mutatott hatást. Váratlan vagy toxikus hatásokat nem láttunk, és valamennyi hatás megfordítható volt.
Mindebből következik, hogy a bupivakaint tartalmazó galaktolipid készítmény képes jelentősen meghosszabbítani a bupivakain idegblokkoló hatásának időtartamát a gerincagyburkon belül krónikus implantátumot viselő patkány modelljén. Ez igazolja továbbá, hogy galaktolipid készítmény biológiailag aktív komponensek hatásának a meghosszabbítására alkalmazható.
4. vizsgálat
JT-Linolénsav-lítiumsót (Li-GLA) tartalmazó liposzómákkal kiváltott hemolízis vizsgálata in vitro körülmények között
Vizsgáltuk a 25. példa szerint előállított liposzómás Li-GLA liposzóma készítmény hemolitikus hatását, és összehasonlítottuk szabad Li-GLA hatásával emberi, teljes vér alkalmazásával, az alábbi kísérleti menet szerint.
Egészséges önkéntesektől gyűjtöttünk emberi vért 10 ml térfogatú, 143 USP egység heparin-nátriumot tartalmazó Vacutainer kémcsövekben (Becton Dickinson, Kanada). 2 ml térfogatú vérmintákat 25 ml-es Erlenmeyer lombikokba helyezünk, egyenként 1,0 ml vizsgálati készítménnyel (tesztkészítménnyel) keverve, amely utóbbi 0,9 %-os konyhasóoldattal hígítva a kívánt, vizsgálati koncentrációt eredményezte. Ezt követően a mintákat 37 °C hőmérsékleten oxigént és szén-di50 oxidot 95:5 arányban tartalmazó, dúsított atmoszférában (3 liter/perc) inkubáltuk 1 órán át, állandó enyhe rázás közben. Az inkubálás befejeztével 10 μΐ vérkeveréket 1,5 ml-es Eppendorf-kémcsóben elhelyezett 500 μΐ konyhasóoldatba vittünk át. 100 %-os hemolízist jelző standardokat úgy állítottunk elő, hogy egy 1,5 ml-es Eppendorf-kémcsőben elhelyezett 500 μΐ tiszta vízhez 10 μΐ vért adtunk. Ezután az összes mintákat 2 percig Eppendorf-féle mikrocentrifugában (Brinkman Instruments Ltd., Kanada) centrifugáltuk, és végül centrifugás elemző berendezésben (Cobas Bioanalyser; HoffmannLa Roche Ltd., Kanada) 540 nm-en végzett UV pásztázással elemeztük. Eredményeink az alábbi táblázatban láthatók.
Li-GLA koncentráció Hemolízis mM%
1,0
5,0
10,0
12,0
15,0
17,5
0,8
1,1
2,8
6,9
21,9
38,8
0,9 %-os konyhasóoldatban oldott Li-GLA körülbelül 4-5 mM koncentrációban 100 %-os hemolízist idéz elő. Ennek alapján a Li-GLA hemolitikus aktivitását a liposzómás forma nagy mértékben csökkenti. A liposzómás Li-GLA hemolitikus aktivitásának csökkenését patkányokon végzett, előzetes in vivő vizsgálatokkal alátámasztottuk; a hemolízis 50-80 %-kal csökkent, ha a szabad Li-GLA helyett liposzómás készítményt • · ·
- 51 alkalmaztunk. A lipszómás készítmény nem váltja ki vörös vizelet megjelenését patkányokon, ezzel szemben a szabad Li-GLA ezt előidézheti. Ezen túlmenően kimutattuk, hogy in vitro körülmények között a szabad Li-GLA és a liposzómás LiGLA ráksejtek elleni hatékonysága csaknem azonos. E vizsgálatok valószínűsítik, hogy a liposzómás galaktolipid készítmény csökkenti e gyógyszerhatóanyag hemolitikus hatását amely súlyos mellékhatás -, annak farmakológiai hatását azonban nem érinti.
Következtetés
Összegezve: A találmánnyal kapcsolatos megfigyeléseink alapján a találmány szerinti, galaktolipid anyagra alapozott, lipidet és poláris oldószert tartalmazó készítmények minden vonatkozásban - így a készítmények fizikai stabilitásában, hatóanyagok beágyazási képességében és a beágyazott hatóanyagok lassú felszabadulását biztosító képességükben felülmúlják a foszfolipid készítményeket.

Claims (19)

  1. Szabadalmi igénypontok
    1. 0,09-90 tömegszázalék, előnyösen 0,1-50 tömegszázalék kettősrétegképző anyagot poláris oldószerben tartalmazó, lipidből és poláris oldószerből álló kettősréteg-készítmény, ahol a kettősrétegképző anyag gabonafélékből származó galaktolipid anyag, amely legalább 50 százalék mennyiségben digalaktozil-diacil-glicerineket tartalmaz, és fennmaradó része más, poláris lipidekből áll.
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti készítmény, ahol a galaktolipid anyag körülbelül 70-80 százalék mennyiségben digalaktozil-diacil-glicerineket, és 20-30 százalék mennyiségben más, poláris lipideket tartalmaz.
  3. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti készítmény, ahol a galaktolipid anyag 100 százalékig terjedő mértékben digalaktozil-diacil-glicerinekből áll.
  4. 4. Az 1.-3. igénypontok bármelyike szerinti gélkészítmény, amely poláris oldószerben 25-90 tömegszázalék galaktolipid anyagot tartalmaz.
  5. 5. Az 1.-3. igénypontok bármelyike szerinti liposzóma készítmény, amely poláris oldószerben 0,01-25 tömegszázalék galaktolipid anyagot tartalmaz.
  6. 6. Az 1.-5. igénypontok bármelyike szerinti készítmény alkalmazása hatóanyag vivőanyagaként gyógyászati, kozmetikai vagy élelmiszertermékben.
  7. 7. Gyógyászati készítmény, amely az 1.-5. igénypontok bármelyike szerinti, lipidből és poláris oldószerből álló kettősréteg-készítményt terápiás hatóanyaggal összekeverve tartalamzza.
  8. 8. A 7. igénypont szerinti gyógyászati készítmény, amely
    - terápiásán hatásos mennyiségben egy terápiás hatású anyagot, az egész készítményre vonatkoztatva 1-50 tömnegszázalék galaktolipid anyagot, valamilyen poláris oldószert, és
    - izotonizáló hatású mennyiségben valamilyen izotonizáló szert tartalmaz.
  9. 9. A 7. vagy 8. igénypont szerinti, orális, enterális, parenterálís, rektális (végbélen át történő), vaginális (hüvelyen át történő), topikus, okuláris (szemben történő), nazális (orrnyálkahártyán át történő) vagy aurális (fülön át történő) adagolásra alkalmazható gyógyászati készítmény.
  10. 10. A 7. vagy 8. igénypont szerinti gyógyászati készítmény, ahol a terápiásán hatásos anyag a f-linolénsav valamilyen sója vagy észtere, és a galaktolipid anyag menynyisége a teljes készítmény 25 tömegszázalékánál kevesebb.
  11. 11. Gabonafélékből származó, legalább 50 százalék menynyiségben digalaktozil-diacil-glicerineket és többi részében más, poláris lipideket tartalmazó galaktolipid anyag alkalmazása liposzómák előállítására.
  12. 12. Körülbelül 70-80 százalék mennyiségben digalaktozil-diacil-glicerineket, és 20-30 százalék mennyiségben más, (
    - 54 poláris lipideket tartalmazó galaktolipid anyag 11. igénypont szerinti alkalmazása.
  13. 13. 100 százaikig terjedő mennyiségben digalaktozil-di acil-glicerineket tartalmazó galaktolipid anyag 10. vagy 11 igénypont szerinti alkalmazása.
  14. 14. Gabonafélékből származó, legalább 50 százalék meny nyiségben digalaktozil-diacil-glicerineket, és többi részében más, poláris lipideket tartalmazó galaktolipid anyag al kalmazása gél előállítására.
  15. 15. Körülbelül 70-80 százalék mennyiségben digalaktozil-diacil-glicerineket, és 20-30 százalék mennyiségben más poláris lipideket tartalmazó galaktolipid anyag 14. igénypont szerinti alkalmazása.
  16. 16. 100 százalékig terjedő mennyiségben digalaktozil-diacil-glicerineket tartalmazó galaktolipid anyag 14. vagy
    15. igénypont szerinti alkalmazása.
  17. 17. Eljárás liposzómák előállítására, azzal j e 1 1 e m e z v e, hogy 0,01-25 tömegszázalék, gabonafélékből szár mazó galaktolipid anyagot - amely legalább 50 százalék diga laktozil-diacil-glicerineket tartalmaz, és fennmaradó része más, poláris lipidekből áll - 100 tömegszázalékig terjedő mennyiségben valamilyen poláris oldószerrel összekeverünk.
  18. 18. A 17. igénypont szerinti eljárás, azzal j e 1 1 e m e z v e, hogy a galaktolipid anyag körülbelül 70-80 százalék mennyiségben digalaktozil-diacil-glicerineket, és 20-30 százalék mennyiségben más, poláris lipideket tartalmaz.
  19. 19. A 17. vagy 18. igénypont szerinti eljárás, azzal r »
    - 55 j ellemezve, hogy a galaktolipid anyag 100 százalékig terjedő mennyiségben digalaktozil-glicerinekböl áll.
HU9602146A 1994-02-04 1995-02-06 Carrier compositions comprising lipid-solvent bilayer HUT75459A (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE9400368A SE9400368D0 (sv) 1994-02-04 1994-02-04 Glycolipid material
SE9402455A SE9402455L (sv) 1994-07-12 1994-07-12 Biskiktspreparat

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HU9602146D0 HU9602146D0 (en) 1996-09-30
HUT75459A true HUT75459A (en) 1997-05-28

Family

ID=26661955

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9602146A HUT75459A (en) 1994-02-04 1995-02-06 Carrier compositions comprising lipid-solvent bilayer

Country Status (19)

Country Link
US (1) US6022561A (hu)
EP (1) EP0744939B1 (hu)
JP (1) JP3203358B2 (hu)
CN (1) CN1083713C (hu)
AT (1) ATE224704T1 (hu)
AU (1) AU691249B2 (hu)
CA (1) CA2182576C (hu)
DE (1) DE69528355T2 (hu)
DK (1) DK0744939T3 (hu)
ES (1) ES2183865T3 (hu)
FI (1) FI963065A (hu)
HU (1) HUT75459A (hu)
MY (1) MY113341A (hu)
NO (1) NO312494B1 (hu)
NZ (1) NZ279953A (hu)
PL (1) PL178438B1 (hu)
PT (1) PT744939E (hu)
TW (1) TW402502B (hu)
WO (1) WO1995020944A1 (hu)

Families Citing this family (77)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SE504664C2 (sv) * 1995-09-22 1997-03-24 Scotia Lipidteknik Ab Sätt att framställa fraktionerad olja, oljan, dess användning samt emulsionskomposition innehållande oljan
AR013065A1 (es) * 1996-10-25 2000-12-13 Monsanto Technology Llc COMPOSICIoN Y METODO DE TRATAMIENTO PARA PLANTAS.
EP0941029B1 (en) 1996-10-25 2002-09-18 Monsanto Technology LLC Composition and method for treating plants with exogenous chemicals
WO1998020884A1 (fr) * 1996-11-08 1998-05-22 Takara Shuzo Co., Ltd. Inducteurs d'apoptose
WO1999012640A1 (en) * 1997-09-09 1999-03-18 Select Release, L.C. Coated particles, methods of making and using
EP1043016B1 (en) * 1999-03-30 2014-08-20 Sodic Sa A plant extract based on glycerides,phospholipids and phytosphingolipids, a method for the preparation of this extract and a cosmetic composition containing the same
FR2810540B1 (fr) * 2000-06-21 2004-04-30 C3D Nouvelles preparations cosmetiques ou hygieniques sous forme de dispersion
FR2814071A1 (fr) * 2000-09-21 2002-03-22 Oreal Composition a base de glycoglyceride et ses utilisations notamment cosmetiques
US6890255B2 (en) 2001-12-17 2005-05-10 Igt Multiple wheel roulette game
DK1499294T3 (da) * 2002-04-29 2010-12-06 Biotesys Gmbh Polymeriserede, peptid-modificerede lipider som biologiske transportsystemer til mikronæringsstoffer
US20040018237A1 (en) * 2002-05-31 2004-01-29 Perricone Nicholas V. Topical drug delivery using phosphatidylcholine
US7731947B2 (en) * 2003-11-17 2010-06-08 Intarcia Therapeutics, Inc. Composition and dosage form comprising an interferon particle formulation and suspending vehicle
SE0300207D0 (sv) 2003-01-29 2003-01-29 Karolinska Innovations Ab New use and composition
DE10336841A1 (de) * 2003-08-11 2005-03-17 Rovi Gmbh & Co. Kosmetische Rohstoffe Kg Kosmetische Zusammensetzung zur Unterstützung des Sauerstofftransports in die Haut
SE0401942D0 (sv) * 2004-07-28 2004-07-28 Lipopeptide Ab New antimicrobial peptide complexes
KR101376895B1 (ko) 2004-05-03 2014-03-25 헤르메스 바이오사이언스, 인코포레이티드 약물 전달에 유용한 리포좀
US8658203B2 (en) 2004-05-03 2014-02-25 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Liposomes useful for drug delivery to the brain
US20050255154A1 (en) 2004-05-11 2005-11-17 Lena Pereswetoff-Morath Method and composition for treating rhinitis
EP1846444A2 (en) 2004-12-22 2007-10-24 Lipopeptide AB Agents inhibiting the cathelin-like protein cap18/ll-37
WO2006083761A2 (en) 2005-02-03 2006-08-10 Alza Corporation Solvent/polymer solutions as suspension vehicles
US11246913B2 (en) 2005-02-03 2022-02-15 Intarcia Therapeutics, Inc. Suspension formulation comprising an insulinotropic peptide
DE102005023640A1 (de) * 2005-05-19 2006-11-23 Beiersdorf Ag Wirkstoffkombinationen aus Glucosylglyceriden und einem oder mehreren partiell neutralisierten Ester von Monoglyceriden und / oder Diglyceriden gesättigter Fettsäuren mit Zitronensäure
DE102005023636A1 (de) * 2005-05-19 2006-11-23 Beiersdorf Ag Wirkstoffkombinationen aus Glucosylglyceriden und Kreatin und / oder Kreatinin
DE102006015544A1 (de) * 2006-03-31 2007-10-04 Kuhs Gmbh Topisch zu applizierende Zusammensetzung
KR101106510B1 (ko) 2006-05-30 2012-01-20 인타르시아 세라퓨틱스 인코포레이티드 투피스, 내부채널 삼투압 전달 시스템 유동 조절기
AU2007284759B2 (en) 2006-08-09 2010-10-28 Intarcia Therapeutics, Inc. Osmotic delivery systems and piston assemblies
WO2008084253A1 (en) * 2007-01-12 2008-07-17 Lipopeptide Ab Use of a galactolipid for wound and ulcer healing
RU2440097C2 (ru) 2007-04-23 2012-01-20 Интарсия Терапьютикс, Инк. Способ лечения диабета ii типа и ожирения, осмотическое устройство для доставки и способ его изготовления
US20090137497A1 (en) * 2007-11-23 2009-05-28 Beiersdorf Ag Active ingredient combinations of glucosyl glycerides and creatine and/or creatinine
DK2240155T3 (da) 2008-02-13 2012-09-17 Intarcia Therapeutics Inc Indretninger, formuleringer og fremgangsmåder til levering af flere gavnlige midler
US20090285882A1 (en) * 2008-04-22 2009-11-19 Jochen Weiss Stabilized Liposome Compositions and Related Methods of Use
EP2406361B1 (en) * 2009-03-11 2021-01-20 Swedish Oat Fiber AB Method for separating neutral and polar lipids and an oil rich in polar lipids
EP3735944A1 (en) 2009-09-28 2020-11-11 Intarcia Therapeutics, Inc. Rapid establishment and/or termination of substantial steady-state drug delivery
WO2011043008A1 (ja) * 2009-10-07 2011-04-14 パナソニック株式会社 人工脂質膜形成方法
UA111147C2 (uk) 2009-11-11 2016-04-11 Байєр Б.В. Способи та композиції для лікування або профілактики зовнішнього отиту
WO2011087403A1 (en) * 2010-01-18 2011-07-21 Lipidor Ab Alcoholysis of glycolipid and corresponding lysis product
US9237762B2 (en) 2010-05-24 2016-01-19 Swedish Oat Fiber Ab Aqueous dispersion comprising galactolipids and method for production thereof
US20120208755A1 (en) 2011-02-16 2012-08-16 Intarcia Therapeutics, Inc. Compositions, Devices and Methods of Use Thereof for the Treatment of Cancers
JP2014508166A (ja) 2011-03-17 2014-04-03 トランスダーマル バイオテクノロジ インコーポレーテッド 局所的一酸化窒素システム及びその使用方法
US8871259B2 (en) 2012-09-19 2014-10-28 Transdermal Biotechnology, Inc. Techniques and systems for treatment of neuropathic pain and other indications
US8871256B2 (en) 2012-09-19 2014-10-28 Transdermal Biotechnology, Inc. Methods and systems for treatment of inflammatory diseases with nitric oxide
US8871255B2 (en) 2012-09-19 2014-10-28 Transdermal Biotechnology, Inc. Treatment of skin and soft tissue infection with nitric oxide
US8871261B2 (en) 2012-09-19 2014-10-28 Transdermal Biotechnology, Inc. Cancer treatments and compositions for use thereof
US8871262B2 (en) 2012-09-19 2014-10-28 Transdermal Biotechnology, Inc. Compositions and methods for treatment of osteoporosis and other indications
US8871260B2 (en) 2012-09-19 2014-10-28 Transdermal Biotechnology, Inc. Methods and compositions for muscular and neuromuscular diseases
US8871257B2 (en) 2012-09-19 2014-10-28 Transdermal Biotechnology, Inc. Prevention and treatment of cardiovascular diseases using systems and methods for transdermal nitric oxide delivery
US8871258B2 (en) 2012-09-19 2014-10-28 Transdermal Biotechnology, Inc. Treatment and prevention of learning and memory disorders
US8871254B2 (en) 2012-09-19 2014-10-28 Transdermal Biotechnology, Inc. Systems and methods for treatment of acne vulgaris and other conditions with a topical nitric oxide delivery system
US9295647B2 (en) 2013-03-13 2016-03-29 Transdermal Biotechnology, Inc. Systems and methods for delivery of peptides
US9314433B2 (en) 2013-03-13 2016-04-19 Transdermal Biotechnology, Inc. Methods and systems for treating or preventing cancer
US9314422B2 (en) 2013-03-13 2016-04-19 Transdermal Biotechnology, Inc. Peptide systems and methods for metabolic conditions
US9687520B2 (en) 2013-03-13 2017-06-27 Transdermal Biotechnology, Inc. Memory or learning improvement using peptide and other compositions
US9241899B2 (en) 2013-03-13 2016-01-26 Transdermal Biotechnology, Inc. Topical systems and methods for treating sexual dysfunction
US9320706B2 (en) 2013-03-13 2016-04-26 Transdermal Biotechnology, Inc. Immune modulation using peptides and other compositions
US9314423B2 (en) 2013-03-13 2016-04-19 Transdermal Biotechnology, Inc. Hair treatment systems and methods using peptides and other compositions
US9339457B2 (en) 2013-03-13 2016-05-17 Transdermal Biotechnology, Inc. Cardiovascular disease treatment and prevention
US9387159B2 (en) 2013-03-13 2016-07-12 Transdermal Biotechnology, Inc. Treatment of skin, including aging skin, to improve appearance
US9750787B2 (en) 2013-03-13 2017-09-05 Transdermal Biotechnology, Inc. Memory or learning improvement using peptide and other compositions
US9393264B2 (en) 2013-03-13 2016-07-19 Transdermal Biotechnology, Inc. Immune modulation using peptides and other compositions
US9314417B2 (en) 2013-03-13 2016-04-19 Transdermal Biotechnology, Inc. Treatment of skin, including aging skin, to improve appearance
US9295637B2 (en) 2013-03-13 2016-03-29 Transdermal Biotechnology, Inc. Compositions and methods for affecting mood states
US20140271938A1 (en) 2013-03-13 2014-09-18 Transdermal Biotechnology, Inc. Systems and methods for delivery of peptides
US20140271937A1 (en) 2013-03-13 2014-09-18 Transdermal Biotechnology, Inc. Brain and neural treatments comprising peptides and other compositions
US9849160B2 (en) 2013-03-13 2017-12-26 Transdermal Biotechnology, Inc. Methods and systems for treating or preventing cancer
US20140271731A1 (en) 2013-03-13 2014-09-18 Transdermal Biotechnology, Inc. Cardiovascular disease treatment and prevention
US9320758B2 (en) 2013-03-13 2016-04-26 Transdermal Biotechnology, Inc. Brain and neural treatments comprising peptides and other compositions
US9393265B2 (en) 2013-03-13 2016-07-19 Transdermal Biotechnology, Inc. Wound healing using topical systems and methods
US9724419B2 (en) 2013-03-13 2017-08-08 Transdermal Biotechnology, Inc. Peptide systems and methods for metabolic conditions
US9295636B2 (en) 2013-03-13 2016-03-29 Transdermal Biotechnology, Inc. Wound healing using topical systems and methods
US9889085B1 (en) 2014-09-30 2018-02-13 Intarcia Therapeutics, Inc. Therapeutic methods for the treatment of diabetes and related conditions for patients with high baseline HbA1c
MA44390A (fr) 2015-06-03 2019-01-23 Intarcia Therapeutics Inc Systèmes de mise en place et de retrait d'implant
CA3001467A1 (en) 2015-10-16 2017-04-20 Ipsen Biopharm Ltd. Stabilizing camptothecin pharmaceutical compositions
WO2017200943A1 (en) 2016-05-16 2017-11-23 Intarcia Therapeutics, Inc. Glucagon-receptor selective polypeptides and methods of use thereof
USD840030S1 (en) 2016-06-02 2019-02-05 Intarcia Therapeutics, Inc. Implant placement guide
USD860451S1 (en) 2016-06-02 2019-09-17 Intarcia Therapeutics, Inc. Implant removal tool
IL267736B2 (en) 2017-01-03 2024-03-01 Intarcia Therapeutics Inc Methods involving continuous administration of a GLP-1 receptor agonist and co-administration of a drug
CN110183500B (zh) * 2019-07-05 2022-09-09 湖北中医药大学 一种植物半乳糖脂的制备方法

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US437567A (en) * 1890-09-30 Cash and parcel carrier
EP0009842B1 (en) * 1978-10-02 1982-11-10 THE PROCTER &amp; GAMBLE COMPANY Liposomes for drug delivery and composition containing a liposome drug system
SE8206744D0 (sv) * 1982-11-26 1982-11-26 Fluidcarbon International Ab Preparat for kontrollerad avgivning av substanser
DE3778972D1 (de) * 1986-06-12 1992-06-17 Liposome Co Inc Mittel unter verwendung liposomverkapselter, nichtsteroider, antiinflammatorischer arzneistoffe.
US5234767A (en) * 1987-03-13 1993-08-10 Micro-Pak, Inc. Hybrid paucilamellar lipid vesicles
ATE92765T1 (de) * 1989-02-06 1993-08-15 Chiba Flour Milling Limulustest-positives pflanzenglykolipid und verfahren zur stimulierung des immunsystems eines tieres.

Also Published As

Publication number Publication date
JP3203358B2 (ja) 2001-08-27
TW402502B (en) 2000-08-21
ATE224704T1 (de) 2002-10-15
CA2182576A1 (en) 1995-08-10
ES2183865T3 (es) 2003-04-01
NO963241L (no) 1996-08-02
CN1083713C (zh) 2002-05-01
DE69528355T2 (de) 2003-05-15
NO963241D0 (no) 1996-08-02
PL178438B1 (pl) 2000-04-28
MY113341A (en) 2002-01-31
EP0744939B1 (en) 2002-09-25
WO1995020944A1 (en) 1995-08-10
NZ279953A (en) 1998-02-26
FI963065A (fi) 1996-09-30
PT744939E (pt) 2003-02-28
CA2182576C (en) 2002-09-17
JPH09508414A (ja) 1997-08-26
PL315779A1 (en) 1996-12-09
FI963065A0 (fi) 1996-08-02
US6022561A (en) 2000-02-08
AU1723495A (en) 1995-08-21
EP0744939A1 (en) 1996-12-04
AU691249B2 (en) 1998-05-14
DK0744939T3 (da) 2003-02-03
CN1144478A (zh) 1997-03-05
DE69528355D1 (de) 2002-10-31
HU9602146D0 (en) 1996-09-30
NO312494B1 (no) 2002-05-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HUT75459A (en) Carrier compositions comprising lipid-solvent bilayer
KR100220546B1 (ko) 호지성 담체 제제
JP3825468B2 (ja) ジアシルグリセロール、リン脂質、極性液体および生物活性物質を含有する脂質をベースとした組成物
AU691248B2 (en) Oil-in-water emulsions
US20190321268A1 (en) Apparatus and method for preparing cosmeceutical ingredients containing epi-dermal delivery mechanisms
HU219240B (en) A pharmaceutical composition containing lipid system and heparine, and process for its production
HUE027467T2 (hu) Az irinotekán liposzómái vagy hidrokloridjai és elõkészítési módszerük
Date et al. Microemulsions: applications in transdermal and dermal delivery
KR20000049266A (ko) 장벽을 통한 활성성분 운반용 제제
JPH03176425A (ja) 脂肪乳剤
AU764413B2 (en) A pharmaceutical composition comprising cyclosporin in a lipid carrier
RU2166332C2 (ru) Двуслойные препараты
NO303481B1 (no) FremgangsmÕte for fremstilling av virkestoffholdige liposomsuspensjoner og anvendelse derav
KR20170122653A (ko) ２―하이드록시올레산이 포함된 지질 비히클의 용도
AU2001280084B2 (en) Amphotericin b structured emulsion
JP3287941B2 (ja) 安定なリポソームの水分散液
AU2001276254B2 (en) Liposomic formulation of clobetasol propionate
PL197412B1 (pl) Preparat liposomowy zawierający dimaleinian 6,9-bis-[(2-aminoetylo)-amino]benzo[g]izochinolino-5,10-dionu
Monisha et al. Liposomes as targeted drug delivery system: A review.
Verma et al. Liposomes as carrier systems

Legal Events

Date Code Title Description
DGB9 Succession in title of applicant

Owner name: LIPOCORE HOLDING AB, SE