HUT73527A - Remedy for nervous diseases - Google Patents
Remedy for nervous diseases Download PDFInfo
- Publication number
- HUT73527A HUT73527A HU9600278A HU9600278A HUT73527A HU T73527 A HUT73527 A HU T73527A HU 9600278 A HU9600278 A HU 9600278A HU 9600278 A HU9600278 A HU 9600278A HU T73527 A HUT73527 A HU T73527A
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- formula
- threo
- pdmp
- phenyl
- derivative
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D295/00—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms
- C07D295/04—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms
- C07D295/12—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly or doubly bound nitrogen atoms
- C07D295/125—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly or doubly bound nitrogen atoms with the ring nitrogen atoms and the substituent nitrogen atoms attached to the same carbon chain, which is not interrupted by carbocyclic rings
- C07D295/13—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly or doubly bound nitrogen atoms with the ring nitrogen atoms and the substituent nitrogen atoms attached to the same carbon chain, which is not interrupted by carbocyclic rings to an acyclic saturated chain
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
- A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
- A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D295/00—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms
- C07D295/04—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms
- C07D295/12—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly or doubly bound nitrogen atoms
- C07D295/125—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly or doubly bound nitrogen atoms with the ring nitrogen atoms and the substituent nitrogen atoms attached to the same carbon chain, which is not interrupted by carbocyclic rings
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Psychology (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Surgical Instruments (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
A találmány neuronalis betegségek gyógyítására szolgáló szerre vonatkozik, amely hatóanyagként egy, a glikoszfingolipidek bioszintézisét gyorsító anyagot tartalmaz.
Hosszabb ideje ismert, hogy a glikoszfingolipidek (GSL) az emlős sejtek sejtfelületi membránjainak alapvető fontosságú komponensei, amelyek egy fiziológiásán aktív anyag receptor funkcióján, egy intercelluláris kölcsönös felismerési funkción, egy intercelluláris kölcsönhatáson stb. keresztül szoros kapcsolatban állnak az olyan sejtfunkciókkal, amilyenek például a következők: sejtszaporodás, sejtnövekedés, differenciálódás, transzformáció, immunreakció stb.
Ezek között a gangliozid egy olyan, szialinsavat tartalmazó glikoszfingolipid, amelyről azt állítják, hogy a perifériás idegek sérülését vagy a központi idegek rendellenességeit gyógyító aktivitással rendelkezik, azaz alkalmas a idegek regenerációjának és a naurotranszmisszó folyamatának a felgyorsítására. Az előbbi állítás kapcsán különféle idegbetegség-modelleken a korábbiakban már vizsgálták az exogén gangliozid hatásosságát. Olaszországban már kereskedelmi forga® lomba került egy a gangliozidot felhasználó, Cronassial névvel ellátott gyógyszer, továbbá a ganglioziddal kapcsolatos szabadalmi bejelentést is tettek már (34912/1977. számú japán ideiglenes szabadalmi közlemény). Ugyanakkor azonban olyan klinikai eseteket is megfigyeltek már, amelyekben ennek a gyógyszernek, azaz az exogén gangliozidnak a beadása egy antigangliozid antitestet fejlesztett, ami viszont különféle idegi szimptómákat okozott. Például beszámoltak olyan amyo troph laterális sclerosisról, amelyben egy anti-GM2 antitest fejlődik ki [Láncét, 337, 1109-1110 (1991)], továbbá leírták az úgynevezett Guillain-Barré-szindrómát is, amelyben egy anti-GMl antitest fejlődik ki [Láncét, 338, 757 (1991)].
A gangliozid funkciójának kutatásában jelenleg alkalmazott egyik leggyakoribb módszer szerint egy kísérleti rendszerhez kívülről adnak gangliozidot. Ebben az esetben az endogén ganglioziddal kapcsolatos viszony problémát jelenthet. Bizonyított tény, hogy az oly módon nyert eredmények, amelyeket úgy kapnak, hogy további gangliozidot adnak egy olyan rendszerhez, amelyben a sejtmembránban lévő endogén gangliozid a különféle sejtfelületi receptorokkal stb. már komplexet képezett, nem minden esetben tükrözik az endogén gangliozid aktuális fiziológiai jellemzőit. Annak érdekében, hogy megismerhessük a gangliozid inherens citofiziológiai szerepét, szükség van egy olyan eljárásra, amely az endogén glikoszfingolipid-bioszintézist specifikusan megváltoztatja. A korábbiakban már szintetizáltuk az l-fenil-2-(dekanoil-amino)-3-morfolino-l-propanol (PDMP) ceramid analógot, továbbá igazoltuk, hogy a o-treo-PDMP specifikusan gátol egy glikozil-ceramid bioszintetizáló enzimet, valamint glikozil-ceramid kiindulási anyagként történő alkalmazásával egészen nagy mértékben lecsökkenti az összes glikoszfingolipid intracelluláris mennyiségét [J. Lipid. Rés., 28, 565-571 (1987)]. Ezenkívül arról is beszámoltunk már, hogy a D-treo-PDMP által csökkentetett glikoszfingolipid-tartalom következményeként a neuritek (idegnyúlványok) extenziója szuppresszált [J. Biochem., 110,
96-103 (1991)].
Más vonatkozásban azt találtuk, hogy az l-treo-PDMP, ami a D-treo-PDMP optikai enantiomere, lehetőséget nyújt a glikoszfingolipid bioszintézisének gyorsítására [J. Cell. Physiol., 141, 573-583 (1989)]. Ugyanakkor jelenleg még nem ismert, illetve máig nem képezte vizsgálat tárgyát az, hogy az l-treo-PDMP növeli-e vagy sem az idegsejtekben az endogén gangliozidszintet, illetve hogy az endogén gangliozid növekedése aktiválja-e vagy sem az idegsejtek működését.
A jelen találmány egyik tárgyát egy olyan, központi idegrendszeri vagy perifériás idegrendszeri rendellenességek által okozott különféle betegségek gyógyítására szolgáló szer képezi, amelyben egy olyan hatóanyagot alkalmazunk, amely az idegsejtekben gyorsítja az endogén glikoszfingolipid, különösen a gangliozid bioszintézisét.
Különféle vizsgálatokat végeztünk annak érdekében, hogy kifejlesszünk egy új mechanizmuson alapulú, neuronalis betegségek gyógyítására szolgáló szert. Ezen vizsgálataink során ismertük fel azt, hogy egy specifikus, találmány szerinti 2-(acii-amino)-propanol-származék gyorsítja a glikoszfingolipid bioszintézisét, és jelentős mértékben gyorsítja a neuritextenziót és a szinapszisképződést.
A jelen találmány tárgyát képező egy olyan, központi idegrendszeri vagy perifériás idegrendszeri rendellenességek által okozott neuronalis betegségek gyógyítására szolgáló szer, amely hatóanyagként egy (I) általános képletű 2-(acilamino)-propanol-származékot 7Ν
FT-CH-CH-CH?--ΝΟ
I 2 \/
OH NHCO(CH2)nCH3 (I) — amelynek képletében
R1 jelentése fenilcsoport vagy ciklohexilcsoport, amelyek mindegyike adott esetben 1-3 azonos vagy különböző alkilcsoporttal, alkoxicsoporttal, hidroxicsoporttal és/vagy nitrocsoporttal van szubsztituálva, vagy alkilcsoport; és n értéke 0-tól 16-ig terjedő egész szám — tartalmaz vagy ennek egy gyógyszerészetileg elfogadható sóját tartalmazza (a továbbiakban ezeket a vegyületeket és sókat helyenként a találmány szerinti vegyületek összefoglaló néven említjük) .
A találmány részét képezi egy neuronalis betegségek kezelésére szolgáló eljárás, amelynek során egy perifériás idegrendszeri vagy központi idegrendszeri rendellenességek által okozott neuronalis betegségekben szenvedő emlősnek a glikoszfingolipidek bioszintézisének gyorsításához, a neuritextenzió gyorsításához és/vagy a szinapszisképződés gyorsításához elegendő mennyiségben beadjuk a fenti (I) általános képletű 2-(acil-amino)-propanol-származékot vagy ennek egy gyógyszerészetileg elfogadható sóját.
A találmány magában foglalja a fenti (I) általános kép • · · letű 2-(acil-amino)-propanol-származékból vagy ennek egy gyógyszerészetileg elfogadható sójából vagy mindkettőből álló gyógyászati kompozíció felhasználását egy perifériás idegrendszeri vagy központi idegrendszeri rendellenességek által okozott neuronalis betegségek gyógyítására szolgáló szer előállítására.
A fentieken kívül a jelen találmány körébe tartozik egy olyan liposzóma preparátum kompozíció, amely legalább a fenti (I) általános képletű 2-(acil-amino)-propanol-származékból vagy ennek egy gyógyszerészetileg elfogadható sójából, valamint egy foszfolipidből áll.
Az alábbiakban a részletek ismertetésével mutatjuk be a találmányt.
A fenti (I) általános képlet R1 szubsztituensének jelentésében lévő ienilcsoport vagy ciklohexilcsoport szubsztituenseiként szereplő alkil- vagy alkoxicsoportok szénatomjainak száma előnyösen 1-4. Az R1 szubsztituens jelentésében szereplő alkilcsoport előnyösen 6-15, legelőnyösebben 10-15 szénatomos. Az ilyen alkilcsoport példái közé tartoznak — egyebek mellett — például a következők: hexil-, hepzil-, oktil-, nonil-, decil-, undecil-, dodecil- (lauril-), tridecil-, tetradecil- (mirisztil-) , pentadecilcsoport stb. Az (I) általános képletben szereplő n értéke egy 0-tól 16-ig terjedő egész szám, előnyösen egy 4-től 16-ig terjedő egész szám, legelőnyösebben egy 6-tól 12-ig terjedő egész szám.
Az (I) általános képletű vegyületek közül különösen előnyösek az olyan l-fenil-2-(acil-amino)-3-morfolino-l-propa • · « nol-származékok, amelyek képletében n értéke egy 6-tól 12-ig terjedő egész szám; az egyik legelőnyösebb vegyület az 1-fenil-2-(dekanoil-amino)-3-morfolino-l-propanol (ezt a vegyületet a továbbiakban PDMP rövidítéssel hivatkozzuk). A találmány szerinti vegyületekben sztereoizomerek létezhetnek, amely sztereoizomerek mindegyike felhasználható. Izomerek keverékét, például egy racém keveréket stb. ugyancsak felhasználhatunk. Külön megemlíthetők a következő izomerek: D-treo-izomer [ (ÍR, 2R) -izomer], L-treo-izomer [(IS,2S)-izomer], dl-treo-izomer, d-éritro-izomer [ (IS, 2R)-izomer], L-eritro-izomer [(ÍR, 2S)-izomer], dl-éritro-izomer. Az L-treo-izomer [(IS,2S)-izomer] különösen előnyös olyan szempontból, hogy ez az izomer glikolipid-bioszintézist gyorsító hatással rendelkezik.
A fenti (I) általános képletű vegyületek ismert anyagok (5 041 441. számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás; 254 623/1989. számú japán ideiglenes szabadalmi közlemény) . A vegyületeket például a következő szairodalmi helyeken ismertetett és az alábbi reakcióvázlaton bemutatott eljárás alkalmazásával szintetizálhatjuk: J. Lipid. Rés., 28, 565-571 (1987); és J. Biochem., 111, 191-196 (1992).
• ·
r1-co-ch2
CHoO, HN 0 r1
NHCO (CH2)nCH3 / \
-CO-CH-CHo--N O 2 \___/
NHCO(CH2)nCH3
R1-CH-CH-CH2--N
NaBH4 -------->
/ \ o \__/
OH NHCO(CH2)nCH3
Az így nyert, négy izomerből álló keveréket kloroform/dietil-éter oldószerelegy alkalmazásával végzett frakcionált kristályosítással választhatjuk szét egy DL-treo- és egy dl-eritro-izomerre. Ezenkívül a d-treo-izomer vagy az L-treo-izomer előállítása érdekében a dl-treo-izomert - az előbbi sorrendnek megfelelően — dibenzoil-D-borkősav- vagy dibenzoil-L-borkősav-sóként is kristályosíthatjuk.
Az (I) általános képletű vegyület gyógyszerészetileg elfogadható sóinak a példái között megemlíthetők a következő savakkal képezett sók: szervetlen savak, például hidrogén-klorid, foszforsav, kénsav, salétromsav, hangyasav stb.; szerves savak, például ecetsav, citromsav, tej sav, almasav, oxálsav, maleinsav, fumársav, borostyánkősav, trifluor-ecetsav, metánszulfonsav, p-toluolszulfonsav stb.
Az (I) általános képletű 2-(acil-amino-propanol-származék vagy ennek egy gyógyszerészetileg elfogadható sójának hatásos mennyiségét perifériás idegrendszeri vagy központi idegrendszeri rendellenességek által okozott neuronális be • · tegségektől szenvedő emlősöknek, köztük embereknek beadva az említett emlősök, köztük emberek kezelhetők. A találmány szerinti megoldással kezelhető betegségek reprezentatív példái közé tartoznak az olyan betegségek, amelyek az idegrostok regenerálásával várhatóan gyógyíthatók. Ebbe a körbe tartoznak — egyebek mellett — például a következő betegségek: apoplexia, infarctus cerebri, haemorrhagia cerebri, cerebralis sérülés, dysmnesia, dementia senilis, Alzheimer-kór, parkinsonizmus stb. Az említett reprezentatív példák másik csoportjába a különféle perifériás idegrendszeri betegségek tartoznak, amilyen például a cacochymia által okozott polyneuropathia, a mechanikus neuropathia, a toxikus neuropathia stb.
Gyógyszerkészítmény
A találmány szerinti vegyületet hordozóanyaggal, vivőanyaggal, hígítószerrel vagy egyéb adalékanyagokkal alkalmazva orális vagy parenteralis beadásra alkalmas gyógyszerkészítményt állíthatunk elő. A találmány szerinti vegyület képes áthatolni a vér-agy gáton [J. Lipid Rés., 32, 713-722 (1991)], így várható, hogy injekció vagy orális szer formájában beadva hatást fejt ki a cerebralis neuronalis betegségekre. Közelebbről egy, a találmány szerinti vegyületet hordozó finom méretű liposzóma preparátum, például egy lipid nanoszféra stb. vagy egy ilyen lipid emulzió preparátum, körülbelül tízszer jobban áthatol a vér-agy gáton, mint egy fiziológiás sóoldat, így a találmány szerinti szer hatékonyan alkalmazható a cerebralis neuronalis betegségek gyógyítására.
• ·· · · 4 · ·· • « · · · • · · ·«· · · · ·»·· · · · * • ··*· «·· *·
Az orális beadásra alkalmas készítmények között megemlíthetők a szilárd készítmények, amilyen például a por, a granula, a kapszula, a tabletta stb.; valamint a folyékony készítmények, például egy szirup, elixír, emulzió stb.
A porokat például egy vivőanyaggal, így laktózzal, keményítővel, kristályos cellulózzal, kalcium-laktáttal, kalcium-hidrogén-foszfáttal, magnézium-alumínium-metaszilikáttal, kovasavanhidriddel stb. végzett összekeveréssel állíthatjuk elő. A granulákat úgy állíthatjuk elő, hogy a hatóanyaghoz hozzáadjunk egy vagy több, az előbbiekben említett vivőanyagot, valamint kívánt esetben egy kötőanyagot, például szacharózt, (hidroxi-propil)-cellulózt, poli(vinil-pirrolidon)-t stb. vagy egy szétesést elősegítő szert, például (karboxi-metil)-cellulózt, kalcium-(karboxi-metil)-cellulózt stb., majd a keveréket egy nedves eljárással vagy egy száraz eljárással granuláljuk. A tablettát úgy állíthatjuk elő, hogy a fenti port vagy granulát önmagában, illetve egy lubrikánssal, például magnézium-sztearáttal, talkummal stb. tablettázzuk. Ezen túlmenően a fenti tablettát vagy granulát előállíthatjuk bélben oldódó vagy elnyújtott hatású preparátumként is, amelyet úgy nyerünk, hogy a tablettát vagy granulát egy bélben oldódó alappal, például (hidroxi-propil)-metil-cellulóz-ftaláttal, egy metil-metakrilát-kopolimerrel stb. vonjuk be, illetve etil-cellulózzal, karnaubaviasszal, keményített olajjal stb. vonjuk be. Kemény kapszulákat úgy nyerhetünk, hogy kemény kapszulákat a fenti porral vagy granulával töltünk meg. Az előbbieken túlmenően lágy kapszulákat is előállíthatunk, ·« »·4* ·· • 44 « • ··· ··· • · · · • 4*4 ««* «4 jük a beadásra alkalmas formát, úgy állíthatjuk elő, hogy az előbbi konponensekhez mannitot, dextrint, ciklodextrint, zselatint stb. adunk, majd a keveréket vákuum alatt liofilizáljuk. Az injekciós úton beadható emulziókat úgy állíthatjuk elő, hogy a találmány szerinti vegyülethez egy emulgeálószert, például lecitint, poliszorbát 80-at, poli(oxi-etilén)nel keményített ricinusolajat stb. adunk, majd a keveréket vízben emulgeáljuk.
Az injekciós készítményformák közé tartozik még egy olyan liposzóma preparátum, amely alkalmas az oldékonyságnak és a célszervhez történő átvitel sebességének a javítására. Közelebbről egy nanoszféra liposzóma (lipid nanoszféra) nemcsak megnöveli a vérben lévő koncentrációt (anélkül, hogy ez bejutna a reticuloendothelialis szövetekbe) és csökkenti a gyógyszerészeti hatás kifejtéséhez szükséges minimális hatásos dózis nagyságát, hanem könnyen keresztüljut a vér-agy gáton is; ennek eredményeként a liposzóma preparátumok alkalmasak a cerebralis neuronalis betegségek gyógyításában történő felhasználásra. A liposzóma preparátum előállítását ismert liposzóma előállítási eljárások szerint végezhetjük [C. G. Knight, Liposomes: From Physical Structure to Therapeutic Applications, pp. 51-82, Elsevier, Amsterdam (1981); Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 75, 4194 (1978)].
Liposzóma membránt képező amfipatikus anyagként felhasználhatók — egyebek mellett — például foszfolipidek, így egy természetes foszfolipid (tojássárga lecitin, szójabab lecitin, szfingomielin, foszfatidil-szerin, foszfatidil-glicerin4 · · • · · « 4 ·· « ·«· ·«· «···· ·* · • «·«· ··· ·♦ amelynek során a találmány szerinti vegyületet feloldjuk glicerinben, polietilénglikolban, szezámolajban, olívaolajban stb., majd a keveréket zselatinfilmmel burkoljuk. A szirupot úgy állíthatjuk elő, hogy egy édesítőszert, például szacharózt, szorbitot, glicerint stb., valamint egy (I) általános képletű vegyületet vagy ennek egy sóját vízben oldjuk. Egy elixír előállításához az előbbi édesítőszer és víz mellé még illóolajat, etanolt stb. adunk. Az emulziók vagy szuszpenziók előállításához az előbbi édesítőszer és víz mellé még gumiarábikumot, tragakantmézgát, poliszorbát 80-at, nátrium-(karboxi-metil)-cellulózt stb. adhatunk. Az előbbi folyékony készítményekhez kívánt esetben még állagjavító anyagot, színezőszert, tartósítószert stb. is adhatunk.
A parenteralis készítmények példájaként az injekciós kompozíciókat említjük. A további alkalmas készítményformák közé tartoznak az intrarectalis beadásra szolgáló szerek, a pesszáriumok, a bőrön alkalmazandó szerek, az inhalálásra szolgáló szerek, az aeroszolok, a szemcseppek stb.
Az injekciós készítményeket úgy állíthatjuk elő, hogy a találmány szerinti vegyülethez hozzáadunk egy pH-beállító szert, például hidrogén-kloridot, nátrium-hidroxidot, tej savat, nátrium-laktátot, nátrium-monohidrogén-foszfátot, nátrium-dihidrogén-foszfátot stb.; egy izotonizálószert, például nátrium-kloridot, glükózt stb.; valamint desztillált vizet. Az így nyert keveréket ezt követően sterilizáljuk és szűrjük, majd ampullákba töltjük. Az olyan injekciós készítményeket, amelyekből közvetlenül a beadás előtt végzett oldással nyer4«4· jük a beadásra alkalmas formát, úgy állíthatjuk elő, hogy az előbbi konponensekhez mannitot, dextrint, ciklodextrint, zselatint stb. adunk, majd a keveréket vákuum alatt liofilizáljuk. Az injekciós úton beadható emulziókat úgy állíthatjuk elő, hogy a találmány szerinti vegyülethez egy emulgeálószert, például lecitint, poliszorbát 80-at, poli(oxi-etilén)nel keményített ricinusolajat stb. adunk, majd a keveréket vízben emulgeáljuk.
Az injekciós készítményformák közé tartozik még egy olyan liposzóma preparátum, amely alkalmas az oldékonyságnak és a célszervhez történő átvitel sebességének a javítására. Közelebbről egy nanoszféra liposzóma (lipid nanoszféra) nemcsak megnöveli a vérben lévő koncentrációt (anélkül, hogy ez bejutna a reticuloendothelialis szövetekbe) és csökkenti a gyógyszerészeti hatás kifejtéséhez szükséges minimális hatásos dózis nagyságát, hanem könnyen keresztüljut a vér-agy gáton is; ennek eredményeként a liposzóma preparátumok alkalmasak a cerebralis neuronalis betegségek gyógyításában történő felhasználásra. A liposzóma preparátum előállítását ismert liposzóma előállítási eljárások szerint végezhetjük [C. G. Knight, Liposomes: From Physical Structure to Therapeutic Applications, pp. 51-82, Elsevier, Amsterdam (1981); Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 75, 4194 (1978)].
Liposzóma membránt képező amfipatikus anyagként felhasználhatók — egyebek mellett — például foszfolipidek, így egy természetes foszfolipid (tojássárga lecitin, szójabab lecitin, szfingomielin, foszfatidil-szerin, foszfatidil-glicerin13 foszfatidil-inozit, difoszfatidil-glicerin, foszfatidil-etanolamin, kardiolipin stb.), egy szintetikus foszfolipid (disz tearoil-foszfatidil-kolin, dipalmitoil-foszfatidil-kolin, dipalmitoil-foszfatidil-etanolamin stb.) és más, az előbbiekhez hasonló anyagok. Ezenkívül a membrán stabilitásának, a fluiditásnak, valamint a hatóanyag membránpermeabilitásának a javítása érdekében különféle ismert adalékanyagokat is alkalmazhatunk, amilyenek — egyebek mellett — például a következők: koleszterinek (koleszterin, ergoszterin, fitoszterin, szitoszterin, stigmaszterin stb.), egy olyan anyag, amelyről ismert, hogy a liposzómának negatív töltést kölcsönöz (foszfatidsav, dicetil-foszfát stb.), egy olyan anyag, amelyről ismert, hogy a liposzómának pozitív töltést kölcsönöz (sztearil-amin és sztearil-amin-acetát), antioxidáns (tokoferol stb.), olajos anyagok (szójababolaj, gyapotmagolaj, szezámolaj, csukamájolaj stb.), valamint más, az előbbiekhez hasonló jellegű anyagok.
A liposzóma előállítását például a következő eljárásnak megfelelően hajthatjuk végre. A fenti amfipatikus anyagot és adalékanyagokat, illetve külön a találmány szerinti vegyületet feloldjuk szerves oldószerben (egyetlen oldószerben, például kloroformban, hexánban stb. vagy egy ilyen oldószerkeverékben) , a két oldatot összekeverjük, az oldószert inért gáz (például nitrogéngáz, argongáz stb.) jelenlétében egy edényben, például lombikban eltávolítjuk, majd egy vékony membránt illesztünk az edényfalra. Ezt követően a vékony membránt hozzáadjuk egy alkalmas vizes közeghez (fiziológiás sóoldathoz, • ·» ··· ** • · » · * • * · ··* ··»
Λ ·*·· · V · · — 1 <± — ♦ ·«·» ··* *· pufferhez, foszfát-pufferelt fiziológiás sóoldathoz stb.), és a keveréket kevertetjük. Annak érdekében, hogy kellőképpen kis részecskeméretű liposzómát nyerjünk, a keveréket tovább diszpergáljuk, például egy ultrahangos emulgeátor, egy túlnyomásos emulgeátor, egy franciaprés sejtporlasztó stb. alkalmazásával. Amint azt a fentiekben ismertettük, annak érdekében, hogy egy szabályozott részecskeméret-eloszlású nanoszféra liposzómát (lipid nanoszférát; körülbelül 25-50 nm közötti részecskeméret) nyerjünk, a membránszűrővel végzett kezeléssel történő liposzómaelőállitás során a liposzóma előállításához szükséges amfipatikus anyagot stb. tartalmazó folyadékot és a találmány szerinti vegyületet egy vizes közegben diszpergáljuk. A hordozóanyaghoz nem kötődő hatóanyag eltávolítása érdekében a liposzómát ezt követően frakcionálási kezelésnek, például ultrafiltrálásnak, centrifugálásnak, gélszűrésnek stb. vethetjük alá.
Amennyiben a fenti amfipatikus anyagon és adalékanyagokon kívül membránképző anyagként β-oktil-glükozidot, L-tirozin-7-amino-4-metil-kumarint, fenil-amino-mannozidot vagy szulfatidot alkalmazunk, és így olyan, a találmány szerinti vegyületet hordozó liposzómát nyerünk, amelynek membránján glükózcsoport, tirozincsoport, mannózcsoport vagy szulfatid van, a liposzómát alkalmassá tehetjük a vér-agy gáton történő könnyű átjutásra (egy ilyen típusú eljárás önmagában történő leírása a következő szabadalmi dokumentumban található: 69332/1992. számú japán ideiglenes szabadalmi közlemény).
Az intrarectalis badásra alkalmas szert például úgy ál• · láthatjuk elő, hogy kúpalapot, például alifás kakaósav mono-, di- vagy trigliceridjét, polietilénglikolt stb. hozzáadunk a találmány szerinti vegyülethez, majd a keveréket melegítéssel megolvasztjuk, öntőformába öntjük és lehűtjük, vagy pedig a találmány szerinti vegyületet polietilénglikolban, szójababolajban stb. feloldjuk, majd a keveréket zselatinfilmmel borítjuk.
A bőrön alkalmazható szert például úgy állíthatjuk elő, hogy a találmány szerinti vegyülethez fehérvazelint, méhviaszt, paraffinolajat, polietilénglikolt stb. adunk, a keveréket melegítjük, és kívánt esetben kevertetjük. Tapaszt például úgy állíthatunk elő, hogy a találmány szerinti vegyületet összekeverjük egy ragasztóanyaggal, például gyantával, egy alkil-akrilát-polimerrel stb., majd a keveréket rápermetezzük egy nem szövött textilárura. Az inhalációs szert például úgy állíthatjuk elő, hogy a találmány szerinti vegyületet egy hajtógázban, például egy gyógyszerészetileg elfogadható inért gázban oldjuk vagy diszpergáljuk, majd a keveréket egy nyomásálló tartályba töltjük.
Beadási mód
A hatóanyagként a találmány szerinti vegyületet tartalmazó gyógyszerek beadási módjai nincsenek különösebben korlátozva, azonban ha a gyógyszert központi idegrendszeri rendellenességek által okozott neuronalis betegségek gyógyítására alkalmazzuk, előnyben részesítjük az intramuszkuláris injekciót, az intravénás injekciót, a hypodermaticus injekciót • ·
- ··:·.:.....· ·..· vagy az intraperitonealis injekciót. Amennyiben a gyógyszert cerebralis neuronalis betegségek gyógyítására alkalmazzuk, a liposzóma preparátum vagy a lipid emulzió preparátum injekcióval történő beadását választjuk.
Dózis
A dózist alkalmasan a beadási módtól, a beteg korától, egészségi állapotától, testtömegétől stb. függően határozzuk meg, azonban a dózis általában 0,25-200 mg/kg, előnyösen 0,5-100 mg/kg közötti értékű. Ezt a dózist naponként egyszerre vagy több részletben adjuk be.
Akut toxicitás l—treo-PDMP—hidrokloridot feloldottunk egy nemionos felületaktív szerben (Myrj 52), majd az oldatot intraperitonealis úton beadtuk hím, hathetes, körülbelül 28-30 g testtömegű ICR egereknek. Az LD50 350 mg/kg értékű volt.
dl-treo-PDMP—hidrokloridot vagy DL-eritro-PDMP—hidrokloridot dimetil-szulfoxidban oldva 125 mg/ml koncentrációjú oldatot készítettünk, majd az így nyert oldatot intraperitonealis úton beadtuk hím, nyolchetes, körülbelül 38-40 g testtömegű ICR egereknek. A dl-treo-PDMP esetén az LD50 értéke körülbelül 250 mg/kg volt, míg a DL-eritro-PDMP esetén az LD50 értéke körülbelül 700 mg/kg volt.
Általános toxicitás
L-treo-PDMP—hidrokloridot és dl-treo-PDMP—hidrokloridot • · külön-külön feloldottunk egy nemionos felületaktív szerben (Myrj 52), majd az oldatokat intraperitonealis úton, (a fenti DPMP—hidrokloridra számítva) 100 mg/kg/nap adagolási sebesség mellett 10 napon keresztül hím, hathetes, körülbelül 28-30 g testtömegű ICR egereknek adagoltuk. A vegyületek egyike sem okozott az esetleges csontvelő-szuppresszióra utaló testtömegcsökkenést vagy neutrofil, illetve acidofil sejtcsökkenést. A háromhónapos megfigyelés során semmiféle abnormális jelenséget nem tapasztaltunk.
Az ábrák rövid ismertetése
Az 1. ábra az l-treo-PDMP-nek és különféle acillánchoszszúságú analógjainak a glikolipid bioszintézisét gyorsító hatását mutatja be.
A 2. ábrán a biológiai morfológia fáziskontraszt-mikroszkóppal készített fényképfelvételei láthatók; a fényképek patkány cerebralis idegsejtek primer tenyészetén mutatják be az l-treo-PDMP-nek a neurit extenzióra kifejtett gyorsító hatását (a képeken látható folytonos vonalak a sejtek mérettartományát mutatják; a teljes vonalhosszúság 100 nm-nek felel meg) .
A. : kontroll
B. : 5 μΜ L-treo-PDMP hozzáadásával
C. : 20 μΜ L-treo-PDMP hozzáadásával
D. : 40 μΜ L-treo-PDMP hozzáadásával
A 3. ábra grafikus formában mutatja be az l-treo-PDMPnek a neurit extenzióra kifejtett gyorsító hatását patkány • ·« · · · · ·· • · · · · • · · ··· ··· ···· · ·· · • ««·· ··· ·· cerebralis idegsejtek primer tenyészetén.
A 4. ábra grafikus formában azt mutatja be, hogy az l-treo-PDMP és a ü-treo-PDMP milyen mértékben befolyásolja az intracellularis Ca fluktuáció frekvenciáját (%), ami viszszatükrözi a patkány cerebralis idegsejtek primer tenyészetében előforduló szinapszisképződés gyakoriságát.
Az 5. ábra grafikus formában azt mutatja be, hogy az l-treo-PDMP és a d-treo-PDMP milyen hatást gyakorol a neurit extenzióra.
A 6. ábra egy cerebralis ischaemiában szenvedő patkány térbeli felismerési károsodását (vagy térbeli dezorientációját) mutatja be.
A 7. ábra egy olyan csoport első emlékezetpróbájának az eredményeit mutatja, amelynek tagjai PDMP-t kaptak; a kezelt csoport eredményei mellett a kontrollcsoport eredményei láthatók.
A 8. ábra egy PDMP-vel kezelt csoport esetén a térbeli felismerési károsodás (vagy térbeli dezorientáció) javulásának mértékét mutatja be; a kezelt csoport eredményei mellett a kontrollcsoport eredményei láthatók.
A következőkben példák segítségével mutatjuk be a találmány részleteit. A példák semmilyen vonatkozásban sem korlátozzák a találmány terjedelmét. Az alábbi példákban alkalmazott valamennyi D-treo-PDMP vagy l-treo-PDMP hidrokloridsó formájában van, de ugyanezeket az erdményeket nyertük akkor is, ha ettől eltérő gyógyszerészetileg elfogadható sókat használtunk.
1. példa
Patkánymagzatokat a vemhesség 18. hetében kivettünk, majd a magzatok előagy alaprészeit aszeptikus körülmények között kimetszettük és ollóval apró darabokra vágtuk. A darabokat papainnal kezeltük (0,02 % L-ciszteint tartalmazó foszfát-pufferben lévő 180 egység papain, 0,02 % magzati borjúszérum és 0,5 % glükóz, pH 7,4, 37 °C, 30 perc), majd egy Dulbecco-modifikált Eagle-médium és Ham-féle F12 médium 1 : 1 térfogatarányú keverékéből álló kevert oldattal (DF médiummal) mostuk, és ezt követően egy 5 % magzati borjúszérumot és 5 % lószérumot tartalmazó DF médiumban szuszpendáltuk. Az így nyert idegsejt-szuszpenziót 1 χ 106 sejt/lyuk mennyiségben egy 24 lyukú tenyésztőlemezre (Falcon, Primaria) vittük. Ezt követően 20 μΜ d-treo-PDMP-t vagy l-treo-PDMP-t adtunk hozzá, majd az idegsejtek primer tenyésztését 3 napon keresztül végeztük. A növekedés befejeztével a megfelelő lyukakban lévő sejteket foszfát-pufferrel mostuk, majd gumirendőrrel kinyertük. Egy gangliozid-frakciót extraháltunk 1 : 2 : 0,8 térfogatarányú kloroform/metanol/víz oldószerelegy hozzáadásával, majd 5 percen keresztül végzett rázatással. A gangliozidfrakciót feloldottuk 50 μΐ vízben, majd a gangliozidtartalom meghatározása érdekében Hara és munkatársai módszerével [Hara et al., Anal. Biochem., 179, 162-166 (1989)] mértük a gangliozidhoz kötött szialinsav mennyiségét. A kezelést nem kapott csoport (kontrollcsoport) esetén nyert értékeket 100 %-nak véve, összehasonlítást végeztünk a kezelt csoport és a kontrollcsoport eredményei között. Ezirányú megfigyeléseinket az • ·
1. táblázatban foglaljuk össze.
| 1. táblázat: | A d-treo-PDMP-nek és az l-treo-PDMP-nek az elsődlegesen tenyésztett patkány celebralis idegsejtek gangliozidtartalmára kifejtett hatása |
| Gangliozidtartalom | |
| Kontroll | 100 % |
| D-treo-PDMP | 63,4 % |
| l-treo-PDMP | 127,0 % |
A 20 μΜ d-treo-PDMP-vel végzett kezelés során — amint az várható volt — egyértelműen megfigyelhető volt a glükozilceramid bioszintetizáló enzim gátlásán alapuló gangliozidszint-csökkenés. Másrészt a 3 napon keresztül 20 μΜ l-treoPDMP-vel kezelt idegsejtekben a kontrollcsoporthoz viszonyítva körülbelül 30 %-kal csökkent a gangliozid mennyisége. Ennek alapján megállapítottuk, hogy az l-treo-PDMP a glikoszfingolipid bioszintézisét gyorsító hatást gyakorol a patkány cerebralis idegsejtekre és növeli az endogén gangliozid mennyiségét.
2. példa
Neuroectodermalis eredetű B16 melanoma sejteket 1 * 10 ·«·· sejt/lyuk mennyiségben 12 lyukú tenyésztőlemezre vittünk, majd a sejteket 24 órán keresztül 10 % magzati borjúszérumot tartalmazó Dulbecco-modifikáit Eagle-médiumban tenyésztettük. Ezt követően a médiumot lecseréltük egy ugyanolyan, de 5 μΜ l-treo-PDMP-t vagy ennek különféle acillánchosszúságú analógjait tartalmazó tenyésztooldatra, majd H-galaktózt adtunk hozzá. Huszonnégy óra elteltével a médiumot eltávolítottuk, a sejteket 1 ml 0,1 % EDTA-t tartalmazó foszfát-pufferrel mostuk, majd 1 ml 0,25 % tripszint adtunk hozzá, és a keveréket 37 °C hőmérsékleten 5 percen keresztül állni hagytuk. Amikor a sejtek kiszabadultak, 1,4 χ 10 nemjelzett B16 melanoma sejtet adtunk hozzá, a keveréket foszfát-pufferrel mostuk, és ezt követően egy sejtekből álló masszát kaptunk. Az összes glikoszfingolipid extrakciója céljából a sejtek masszájához egymás után 4 ml metanolt, majd 4 ml kloroformot adtunk, ezt követően pedig szárazra pároltuk. A maradékot 0,2 M nátrium-hidroxidot tartalmazó, 1 : 1 térfogatarányú kloroform/metanol oldószereleggyel lúgosán hidrolizáltuk, ecetsavval· semlegesítettük, majd szárazra pároltuk. A szárazra párolt terméket feloldottuk vízben, majd az oldatot egy C18 Sep-Pak patron (Waters) alkalmazásával sómentesitettük. Az adszorbeált glikoszfingolipidet 1 ml metanollal és 4 ml 1 : 1 térfogatarányú kloroform/metanol oldószereleggyel kioldottuk, majd ezt követően nitrogénáram alatt szárazra pároltuk. A következő lépésben a glikoszfingolipidet szokásos módon, piridin/ecetsavanhidrid alkalmazásával végzett acetilezéssel, Florisil oszlopon végrehajtott kromatográfiával és dezacetilezés22 • ·* • * 9 ·» • · · ··· ··· ····· 9«· • « · · H · · «· · sel tisztítottuk [J. Lipid Rés., 12, 257-259 (1971)], majd sómentesítettük és szárazra pároltuk. Az ily módon megtisztított glikoszfingolipid-frakciót feloldottuk 50 μΐ 1 : 1 térfogatarányú kloroform/metanol oldószerelegyben, majd ennek az oldatnak 40 μΙ-ét vékonyréteg-kromatográfiás szilikagéllemezre vittük; a kifejlesztést 60 : 35 : 8 kloroform/metanol/víz oldószerelegy alkalmazásával hajtottuk végre. A futtatás végén jódozásos színezéssel meghatároztuk a glükozil-ceramid, a laktozil-ceramid és a gangliozid GM3 helyzetét, az anyagokat külön-külön lekapartuk a vékonyréteg-kromatogramról, majd az egyes minták radioaktivitását folyadékszcintillációs számláló alkalmazásával mértük. Az eredményeket az 1. ábrán mutatjuk be. Amint az az 1. ábrán egyértelműen látható, az L-treo-PDMP vagy ennek különféle acillánchosszúságú analógjai közül azok az (I) általános képletű vegyületek, amelyek képletében n értéke 6, 8, 10 vagy 12, szignifikáns módon gyorsítják a gangliozid bioszintézisét.
3. példa
A születés utáni 0. napon patkányok agyának hippocampusait aszeptikus körülmények között kimetszettük, az 1. példában ismertetetteknek megfelelően papainnal végzett enzimes kezelésnek vetettük alá a hippocampusokat, majd DF médiummal mostuk. Az idegsejteket 2 χ 10 sejt/cm sűrűséggel egy előzetesen poli (L-lizin)-nel borított 96 lyukú lemezre terítettük, és ezzel egyidejűleg 5 μΜ, 20 μΜ, illetve 40 μΜ L-treo-PDMP-t adtunk hozzá. Huszonnégy órás tenyésztés után az
- 23 ·» *·<·· *· * · * · • .*» ·#τ < · » · ·· · · *· · * idegsejteket paraformaldehiddel fixáltuk, és a neurit extenziót mikrofényképező géppel rögzítettük, majd a felvételeket értékeltük. Amint az a 2. ábrán látható mikrofényképeken egyértelműen látható, a patkány cerebralis idegsejtek primer tenyészetében az L-treo-PDMP szignifikáns neurit extenziós hatást mutat.
Ezen túlmenően, amint az a 3. ábrán látható, amikor a négy tesztcsoportban a neuritek hosszúságát négy fényképezőgép alkalmazásával mértük, majd statisztikai értékelést végeztünk, egyértelműen kiderült, hogy az L-treo-PDMP széles koncentrációtartományban (1-40 μΜ) P < 0,005 értékű szignifikáns differenciával gyorsítja a neurit extenzióját.
A fenti 1-3. példák eredményei igen erőteljesen arra utalnak, hogy a találmány szerinti L-treo-PDMP és ennek különféle acillánchosszúságú analógjai figyelemre méltó neurit extenzió gyorsító hatással rendelkeznek, azaz egy, az idegsejtek endogén gangliozidszintjét növelő hatás révén differenciációgyorsitó hatást gyakorolnak az idegsejtekre.
4. példa (1) A közelmúltban javaslatot tettünk egy úgynevezett nyomhagyó kör (tracing circuit) modellre, amelynek értelmében a szinapsziskötés dinamikusan változik még a felnőtt humán agyban is, és a hosszú időtartamú emberi memória mechanizmusa magában foglalja a kör külső oldalán lévő szinapszisok szelektív eltávolítását, valamint a körön belül lévő szinapszisok szinapsziskötésszámának növekedését [Kuroda, Y.,
Neurochem. Intern., 14, 309-319 (1989)].
Ezenkívül — a szinapszisképződés viszonylag egyszerű és könnyen végrehajtható mérési eljárásaként — Fura-2 alkalmazdsavai kidolgoztuk az idegsejtekben lévő Ca többpontos megfigyelési rendszerét. Ez megerősítette, hogy a szinapszisképződés száma közvetlen arányban áll az intracelluláris Ca2+ fluktuáció frekvenciájával [Br. J. Pharmacol., 89, 191-198 (1986); Neurosci. Lett., 78, 69-74 (1987)]. Ennek a módszernek az alkalmazásával megvizsgálatuk az l-treo-PDMP-nek és a d-treo-PDMP-nek a patkány cerebralis cortex idegsejtek közötti szinapszisképződésre gyakorolt hatását. Az eredményeket az alábbiakban mutatjuk be.
A vemhesség 18-19. napján patkánymagzatokból papainos enzimkezeléssel izoláltuk a cerebralis cortexek idegsejtjeit, majd a sejteket az 1. példában ismertetettekkel azonos módon tenyésztettük. L-treo-PDMP vagy D-treo-PDMP hozzáadása után a tenyésztés első napjától kezdve mértük az intracelluláris 2+
Ca fluktuáció frekvenciáját, és ennek alapján vizsgáltuk a szinapszisképződés mértékét. Az eredményeket a 4. ábrán mutatjuk be. Egyértelműen megfigyelhető, hogy a szinapszisképződés száma az L-treo-PDMP dózisával arányosan növekszik. Ez azt jelenti, hogy az L-treo-PDMP nemcsak a neuritok extenzióját gyorsító hatással rendelkezik, hanem a szinapszisképződést is gyorsítja, így igen valószínű, hogy a L-treo-PDMP hatásosan alkalmazható különféle neuronalis betegségek gyógyítására. Ezenkívül a glikoszfingolipid bioszintézisét gátló hatással rendelkező D-treo-PDMP szuppresszíven hat a szinap szisképződésre. Megfigyeltük, hogy az endogén glikoszfingolipid, különösen a gangliozid igen lényeges szerepet tölt be a szinapszisképződés folyamatában.
(2) A találmány szerinti szer neuronalis betegségeket gyógyító hatásának igazolása céljából az (1) pont alattiakban ismertetettekhez hasonló módon, 16. napi vemhességből származó patkánymagzatok cerebralis cortexeinek az alkalmazásával, az alábbi eljárás szerint explantációs tenyésztést végeztünk.
A J. Neurochem., 61, 2155-2163 (1993) szakirodalmi helyen ismertetetteknek megfelelően a fenti cerebralis cortexeket kis darabokra vágtuk, majd a cerebralis cortex neuronokat magukban foglaló szövetek tenyésztését szérumot nem tartalmazó közegben, illetve a gyógyszerrel kezelt csoportok esetén 5-20 μΜ l-treo-PDMP-t vagy d-treo-PDMP-t tartalmazó közegben 2 napon keresztül végeztük a tenyésztést. A tenyésztés után a gyógyszer neurit extenziós hatását az explantátumokban (a tenyésztett szövetekben) lévő, neuritekkel rendelkező idegsejtek számának a mérése útján ítéltük meg.
Ahhoz a csoporthoz viszonyítva, amelyhez nem adtunk gyógyszert, abban a csoportban, amelyhez 10 μΜ l-treo-PDMP-t adtunk, a fenti idegsejtek száma körülbelül másfélszeres értékű volt. Másrészről, abban a csoportban, amelyhez 10 μΜ d-treo-PDMP-t adtunk, nem tapasztaltunk semmiféle olyan, neurit extenziót gyorsító hatást, mint amilyet az L-treo-PDMP esetén megfigyeltünk.
Amint azt a fentiekben ismertettük, az L-treo-PDMP még a cerebralis cortexek szövettenyészetében is igen nagy hatással volt a neurit extenzióra, ami nagymértékben valószínűsíti, hogy ha a találmány szerinti, neuronalis betegségek kezelésére szolgáló szert emlősöknek, köztük embereknek adjuk be, hasonló in vivő hatást kifejtve a szer hatékonyan alkalmazható a cerebralis cortex neuronok regresszív változásával kapcsolatos neuronalis betegségek, például az Alzheimer-kór stb. gyógyítására.
5. példa
Az enzimaktivitás vizsgálata
Az enzimforrás előállítása
A 17. napi vemhességből származó Wister albínó patkányok cerebralis cortex szöveteinek primer tenyészetéhez 15 μΜ l-treo-PDMP-t vagy D—treo-PDMP-t adtunk. A keveréket 40 órán keresztül tenyésztettük, majd az enzimforrás előállítása érdekében így nyert tenyészetet leszüreteltük és egy chip típusú szonikátor alkalmazásával homogenizáló pufferben (50 mM Hepes, 0,32 M szacharóz) elporítottuk.
(1) A GlcCer (glükozil-ceramid) szintetáz aktivitása
Akceptor szubsztrátként oktanoil-szfingozint tartalmazó liposzómát donor szubsztrátként 0,23 mM UDP-(uridin-difosz-
6 fát)- H-glükózzal (9,7 χ 10 cpm) reagáltattunk. A reakciótermékként nyert 3H-GlcCer-t terc-butil-metil-éterrel kiextraháltuk, az extraktumot szárazra pároltuk, majd mértük a maradék radioaktivitását.
(2) A LacCer (laktozil-ceramid) szintetáz aktivitása β
Akceptor szubsztrátként GlcCer-t uridin-difoszfát- H-ga• · ·
- 27 - ··:· .:..... ·.
ο laktózzal (2,7 χ 10 cpm) reagáltattunk. A reakció termékeként nyert H-LacCer-t tartalmazó keveréket szilikagél vékonyréteglemezen kromatografáltuk, ezt követően a reakcióterméknek megfelelő részt lekapartuk, majd mértük a maradék radioaktivitását .
(3) A GM3 (N-acetil-neuraminil-galaktozil-glükozil-ceramid) szintetáz aktivitása [a gangliozidok esetén alkalmazott nomenklatúra a Svennerholm-féle rendszeren alapul (J. Neurochem., 10, 613-623 (1963)]
Akceptor szubsztrátként LacCer-t donor szubsztrátként 4,38 mM CMP-(citidin-5’-monofoszfát)-14C-szialinsavval (4,2 χ 106 cpm) reagáltattunk. A reakcióterméket tartalmazó keveréket fordított (reverz) fázisú vékonyréteglemezen kromatografáltuk, a reakcióterméket tartalmazó megfelelő részt lekapartuk, majd mértük a maradék radioaktivitását.
(4) A GD3 (gangliozid GD3, azaz a GM3-hoz egy szialinsav kapcsolódik) szintetáz aktivitása
Akceptor szubsztrátként GM-3-at donor szubsztrátként 30 mM CMP-14C-szialinsawal (2,88 χ 106 cpm) reagáltattunk. A reakcióterméket tartalmazó keveréket fordított fázisú vékonyréteglemezen kromatografáltuk, a reakcióterméket tartalmazó megfelelő részt lekapartuk, majd mértük a maradék radioaktivitását .
(5) A szerin-palmitoil-transzferáz aktivitása
1,5 mM palmitoil-CoA-t (palmitoil-koenzim-A-t) 0,5 mM piridoxál-foszforsav jelenlétében 0,1 mM 14C-szerinnel (8,3 χ 5 cpm) reagáltattunk. A reakciótermékként nyert 3-keto • ·
- 28 - “:· -’·.....* ‘·
-szingozint kiextraháltuk, az extraktumot betöményitettük, szárazra pároltuk, majd mértük a maradék radioaktivitását.
(6) Az acil-CoA : szfingozin N-acil-transzferáz aktivitása
0,25 mM szfingozint ATP (adenozin-5’-trifoszfát) jelenlétében 0,45 mM 14C-palmitoil-CoA-val (8,3 χ 105 cpm) reagáltattunk. A reakciótermékként képződött ceramidot oldószeres extrakciónak vetettük alá, az extraktumot betöményitettük, majd szárazra pároltuk, és ezt követően mértük a maradék radioaktivitását .
Eredmények
Amikor a fenti enzimaktivitásokat D-treo-PDMP-vel kezelt enzimforrás alkalmazásával vizsgáltuk, az aktivitásokban semmiféle változást nem figyeltünk meg. Amint az az alábbi 2. táblázatban látható, amikor l-treo-PDMP-vel kezelt enzimforrást használtunk, az acil-CoA : szfingozin N-acil-transzferáz kivételével valamennyi mért glikolipid bioszintézis enzim esetén az aktivitás fokozódását figyeltük meg. A gangliozid GD3-szintetáz képződése felgyorsítja az idegsejtek differenciálódásának indukcióját [J. Bioi. Chem., 269, 30451-30456 (1994)] . Az L-treo-PDMP szignifikáns módon fokozza a GD3 szintetáz aktivitását (300 %), ami erőteljesen arra utal, hogy az L-treo-PDMP a cerebralis cortex idegek differenciáló dását indukáló aktivitással rendelkezik.
2. táblázat: Az l-treo-PDMP-nek a patkány cerebralis cortex szövetek idegsejtjeinek glikolipiddel kapcsolatos enzimjeire gyakorolt hatása
| Enzim | Gyorsító aktivitás (a kontroll enzimaktivitása 100 %) |
| GlcCer-szintetáz | 121,9 % |
| LacCer-szintetáz | 243,3 % |
| GM3-szintetáz | 197,4 % |
| GD3-szintetáz | 302,5 % |
| Szerin palmitoil-transzferáz | 148,2 % |
| AcilCoA : szfingozin N-acil- | * |
| -transzferáz |
*: nincs gyorsító hatás
6. példa
Az L-treo-PDMP neurit extenziós aktivitásának vizsgálata
Az explantátumot 1,6 χ 10 sejt/lyuk mennyiségben egy DMEM médiumot tartalmazó 24 lyukú lemezre vittük. Két óra elteltével 50 μΐ felülúszót lassan eltávolítottunk és 50 μΐ l-treo-PDMP-t vagy d-treo-PDMP-t adtunk a lyukakba. A keveréket 40 órán keresztül tenyésztettük, majd az így nyert tenyészetet fixáltuk, ezt követően Coomassie alkalmazásával megfestettük. Összeszámoltuk azokat az extendált idegrostokat, amelyek hosszúsága 50-200 μιη-es átmérőnél nagyobb volt.
* · · ·
- 30 - .........
Eredmények
Amint az az 5. ábrán látható, az l-treo-PDMP esetén 5 μΜ vagy ennél nagyobb koncentrációnál a neuritek extenzióját figyeltük meg, amelynek értéke 15 μΜ koncentrációnál ért el maximumot. Ugyanakkor d-treo-PDMP esetén 5 μΜ és 15 μΜ közötti koncentráció mellett a neurit extenziójának mérséklet szuppresszióját figyeltük meg. Amint azt a fentiekben ismertettük, a gangliozid bioszintézisnek az L-izomer általi gyorsítása, illetve a D-izomer általi szuppressziója összefüggésben áll a neurit-extendáló aktivitással. Ily módon igazolva látjuk, hogy az L-treo-PDMP az endogén gangliozidok bioszintézisét fokozó új mechanizmusú, neurotróf faktorszerű aktivitással rendelkezik.
7. példa
Kapszula előállítási példa
100 mg l-treo-PDMP—hidrokloridot, 150 mg burgonyakeményítőt, 50 mg könnyű kovasavanhidridet, 10 mg magnézium-sztearátot és 765 mg laktózt egyenletesen összekevertünk, a keveréket 200 mg-os részletekre osztottuk és az egyes részleteket kemény kapszulába töltöttük.
Tabletta előállítási példa
100 mg l-treo-PDMP—hidrokloridot, 670 mg laktózt, 150 mg burgonyakeményítőt, 60 mg kristályos cellulózt és 50 mg könynyű kovasavanhidridet összekevertünk, majd a keveréket hozzáadtuk 30 mg (hidroxi-propil)-cellulóz metanollal készített oldatához [10 tömeg%-os metanolos (hidroxi-propil)-cellulóz31 • « · ···· * * • · · · · ·· · · · · · · · • · · · · · · • «······ ··
-oldathoz]. A keveréket összegyúrtuk, majd granuláltuk. Ezt követően a granulákat átszitáltuk egy 0,8 mm méretű szitán, és így finom granulákat nyertünk. A granulák szárítása után 15 mg magnézium-sztearátot adtunk a granulákhoz, majd a keveréket egyenként 200 mg tömegű tablettákká alakítottuk.
Injekció előállítási példa
100 mg L-treo-PDMP—hidrokloridhoz összesen 10 ml propilénglikolt adtunk. Az oldatot ezt követően sterilizáltuk és szűrtük, majd 0,2 ml-es részletekre osztottuk, és az egyes részleteket ampullákba töltöttük és az ampullákat végül lezártuk.
A megfelelő előállítási példákban 100 mg L-eritro-PDMP— —hidrokloridot alkalmaztunk az l-treo-PDMP—hidroklorid helyett, és így a megfelelő tabletta-, kapszula- és injekciókészítményeket nyertük.
8. példa
A liposzóma előállítása és in vivő kinetikája
Amint az a 3. és 4. példában látható, az L-treo-PDMP hatással van a központi idegrendszeri szövetekre (a cerebralis cortexre és az agy hippocampus körüli részére). Ily módon szükség van arra, hogy az L-treo-PDMP intravénás beadás esetén áthatoljon a vér-agy gáton, illetve az agyban megemelkedjen a koncentrációja. Az L-treo-PDMP zsíroldékony anyag, amelynek fiziológiás sóoldatban mért maximális oldékonysága 0,5 mg/ml. Ez azzal a következménnyel jár, hogy ha az anyagot az intravénás beadás lehetővé tétele érdekében egy felületak32 tiv szer alkalmazásával szolubilizáljuk, az L-treo-PDMP még azt megelőzően behatol a reticuloendothelialis szövetekbe, hogy elérné a célszervet, miáltal az anyag a tulajdonképpeni hatáshelyen nem képes a gyógyszerészeti hatás kifejtéséhez szükséges koncentrációt elérni.
Az előbbiek ismeretében megvizsgáltuk, hogy milyen eljárás alkalmazásával volna lehetőség a vérből a központi idegszövetekbe (különösen a cerebralis cortexbe és az agy hippocampus körüli területeibe) történ átmenet fokozására. Ezen vizsgálataink során azt találtuk, hogy a fenti probléma megoldható, amennyiben az l-treo-PDMP-t egy nanoszféra liposzómába építjük be, annak megfelelően, ahogyan az a következő kísérletben ismertetésre kerül.
Azt találtuk tehát, hogy ha az l-treo-PDMP-t nanoszféra liposzómába építjük be, majd ezt a keveréket intravénásán patkányoknak adjuk be, az agyban gyógyszerészeti hatást eredményező, hatásos koncentráció érhető el.
(1) A liposzóma preparátum előállítása pmol foszfatidil-kolin, 3 gmol foszfatidil-szerin és 9 μπιοί koleszterin kloroformos oldatát összekevertük 0,5 mg (5,5 μθί [14C]-L-treo-PDMP 2:1 térfogatarányú kloroform/metanol oldószereleggyel készített oldatával, majd a keveréket egy nitrogénáram alatti lombikban betöményítettük és szárazra pároltuk. A maradékhoz hozzáadtunk 1 ml fiziológiás sóoldatot, a keveréket kevertettük, ezt követően 10 percen keresztül ultrahangos kezelésnek vetettük alá, majd egy membránszűrőn (CORNING, egyszer használatos steril fecskendőszűrő, 25 mm, 0,2 pm, cellulóz-acetát membrán) juttattuk keresztül, és így egy L-treo-PDMP-t tartalmazó nanoszféra liposzóma folyadékot nyertünk. A nanoszféra liposzóma előállítása módszere önmagában ismert eljárás [lásd: Japan Medicine Society, the 114th Annual Meeting, Summaries of Lectures 4, p. 32, Subject No. 13-127 (1994)].
(2) In vivő kinetika
A fenti (1) pont szerinti eljárással előállított [14C]- l—treo-PDMP liposzóma oldatot (4,54 gCi) és 0,5 mg/ml [14C]- l—treo-PDMP fiziológiás sóoldattal készített oldatát (4,54 pCi) 30 másodperc alatt a femoralis artérián keresztül intravénásán beadtuk 10 hetes korú Wister-törzsbe tartozó hím patkányoknak, majd meghatározott időközönként vért vettünk az állatoktól. A vérmintákból szokásos módszer alkalmazásával [J. Lipid. Rés., 32, 713-722 (1991)] mennyiségi elemzést végeztünk az l-treo-PDMP-re nézve. A vérben lévő koncentráció időbeli változását vizsgálva olyan eredményeket nyertünk, amelyeket egy tipikus kétszakaszos modell segítségével lehetett elemezni. A farmakokinetikai paramétereket egy nemlineáris legkisebb négyzetek módszerének megfelelő szimplex eljárással, az úgynevezett MULTI program segítségével számítottuk. Az első fázisban az eltűnési félidő 2,56 perc (liposzóma) és 2,77 perc (fiziológiás sóoldat), ugyanakkor a második fázisban 25,2 perc (liposzóma) és 27,5 perc (fiziológiás sóoldat) volt.
A fenti eredmények alapján megállapítottuk, hogy a vérben lévő gyógyszer esetén a koncentráció-idő görbe alatti te34 • ·
rület (area under the concentration curve: AUC) a liposzóma preparátum hatására csaknem kilencszeresére növekedett, és az l-treo-PDMP-nek a vérben visszamaradó része is megemelkedett a liposzóma preparátum hatására. A meghatározás alapján szimulációval megállapítottuk azt az időt, amelynél a kétszakaszos modell perifériás szakasz koncentrációja maximumot ért el. Ez az idő ebben az esetben 10 perc volt, ami alapján valószínű, hogy a koncentráció az agyban is 10 perc körül ér el maximumértéket. Az agyban lévő koncentrációt és a vérben lévő koncentrációt 10 percnél és 60 percnél mértük, amikor az utóbbi esetben már kialakult a szakasz egyensúlyi állapota. Az agyban lévő L-treo-PDMP koncentrációját egy szokásos módszernek [J. Lipid Rés., 32./ 713-722 (1991)] megfelelő mennyiségi meghatározás útján értékeltük. Az eredményeket a 3. táblázatban mutatjuk be.
3. táblázat: Az L-treo-PDMP patkányoknak történő intravénás beadása után a vérben lévő koncentráció és az agyban lévő koncentráció
| - | Liposzóma | Fiziológiás sóoldat | ||
| 10 perc | 60 perc | 10 perc | 60 prec | |
| Koncentráció a vérben (pmol/ml) | 1789,1 | 170, 5 | 451,2 | 118,0 |
| Koncentráció az agyban (μΜ) | 25, 7 | 1,0 | 2,5 | nincs adat |
| Vér/agy koncentrációarány | 0,0144 | 0,0060 | 0,0056 | nincs adat |
• ·· ···· «« • * · « ♦ • w · ··« ·♦· ··*· · · · ·
- 35 - ’ ···· ··· ··
A 3. táblázat eredményeiből látható, hogy a fiziológiás sóoldattal összehasonlítva a liposzóma preparátum az agyban is körülbelül tízszeresére növeli a koncentrációt.
A liposzóma beadását követő egyensúlyi állapotban (60 percnél) nyert agykoncentráció/vérkoncentráció arány felhasználásával szimuláltunk egy folyamatos intravénás injekciós kezelést, amelynek eredményeként megállapítottuk, hogy 4 órán keresztül folyamatosan végzett intravénás injekciós kezelés esetén lehetőség van az agyban lévő egyensúlyi koncentráció 1 %-os határon belüli beállítására.
Az in vitro kísérletek során gyógyszerészeti hatást figyeltünk meg a 25 μΜ mellett 24 órán keresztül végzett tenyésztés esetén neuroectodermalis eredetű B16 melanoma sejtekben, a 40 μΜ mellett 8 órán keresztül végzett tenyésztés esetén a patkánymagzatok cerebralis cortexeinek az idegsejttenyészetében, valamint az 5-20 μΜ mellett a patkánymagzatok cerebralis cortexei darabkáinak tenyészetében. Ezeket a körülményeket egy in vivő alkalmazva szimulációs kísérletet végeztünk. Egy előre meghatározott agyi egyensúlyi koncentráció eléréséhez folyamatos intravénás injekció esetén szükséges sebességet és folyadékmenyiséget számítással határoztuk meg. Az így nyert eredményeket a 4. táblázatban foglaljuk össze.
• 4* **«»«4 • · · *4>
·· · * · 4»· · ····« ·· · * ···· »4 4«« táblázat: Az agyban lévő egyensúlyi koncentráció eléréséhez folyamatos intravénás injekció σ> 'Φ cd Ή >ι β β Φ 'Φ
Φ >1 i—I o
Ή cd 'Φ σ> 'Φ cd cd
Φ Λ
Φ cd ω φ θ' 'φ tn Λ!
Ν CD β 'Φ -Ρ
Φ ω φ
| ω '(ti | — | φ | 90 | Ο | ΧΓ | |||
| Ρ | LD | ^ο | 00 | Ο | ||||
| t | Ό | ΟΊ | σ | σ\ | Ο | |||
| Ό | -Ρ (ti | λ: -φ | (U | 00 | σι | σ> | *» Γ | χτ |
| i—1 | Ό | Ό | σ' | (XI | ΓΟ | γΡ | ||
| 0 | (ti | 'Φ | ||||||
| •P | ο | ω | -κ | |||||
| N | Ό | Γ“| | -Ρ | -κ | CO | (XI | CM | CXJ |
| •P | CD | 0 | >1 | φ | ο | ΙΌ | Γ- | |
| M-4 | (p | β | Ρ | Γ | 00 | rP | ιΓ) | |
| β | Ό | % | ||||||
| φ | m | (Μ | r—1 | ο | ||||
| g | ||||||||
| φ | ||||||||
| P | CD | θ' | Λ | Γ- | οη | ΙΓ) | οη | |
| Φ | 'Φ | 'φ | CXJ | τΡ | 00 | ’Τ | ||
| 75 | β | cn | t—} g. | ’ti1 | Γ- | CM | νΡ | |
| —1 | 'Φ | CD | Κ | ·* | ||||
| U) | > Φ Μ | Φ Λ φ | τΡ | ο | ο | ο | ||
| Ρ | CD | |||||||
| CD | β | |||||||
| '(ti | Ή | Λ! | ||||||
| •H | (ti | Ο | ο | ο | ο | |||
| u> | CD | β | Λ | V | *» | |||
| Ό | Ο | '(ϋ | ο | ο | ο | ο | ||
| '—1 | -Ρ | m | ο | ο | 0X1 | |||
| o | Φ | Ό | Ο g Λ | CXJ | τ—1 | CX1 | ||
| P | g | -Ρ | CM | 90 | Γ- | |||
| N | Φ | ο | οη | η | 90 | |||
| •H | >1 | 90 | C0 | η | <—1 | |||
| 4-1 | Γ—1 | φ | νΡ | |||||
| ο | ΓΊ | |||||||
| 4-1 | β | |||||||
| -Η | ||||||||
| (ti | 10 | C0 | ο | ο | ||||
| (ti | Φ σ' 'φ CD -Η | Ό C0 ΟΧΙ | ΙΌ | (Ν | CX) | |||
| g Ό | 1 Λί | <Χ] *» | τΡ | 00 V | ΧΓ V. | |||
| N CD O ü | 'Φ Ό Φ >1 | t—1 | σι | ο | ο | |||
| d | £ | |||||||
| •H | <Ρ | (ti | 00 | ο | ο | |||
| rp | ο | φ g | ο | ο | CXJ | <ο | ||
| 4-4 | Ό | ΙΟ | Οη | rP V | ο | |||
| ο | ο | ο | ο | |||||
| CD | φ σ> | (Μ | ΙΟ | ο | LO | |||
| 'φ | LT) | Γ- | οη | τΡ | ||||
| (ti | CD | »Ρ | ι—1 | ο | ο | ο | ||
| e na | CD | CD Φ Ό Φ CD | (m | ο | •k. ο | ο | ο | |
| <—1 0 | 'Φ β | |||||||
| <P (ti | 'φ > φ | λ: φ β 'Φ -π | ο | ο | Ο | ο | ||
| e | Ρ | X! | «κ | κ | ||||
| Ό | -Ρ | \ | ο | ο | χτ | CX1 | ||
| N | β | rp | CX) | ιΡ | Οχ] | 90 | ||
| CD | •Ρ | Ο | (Ό | 00 | LG | Γ- | ||
| O | Ο | g | Γ*- | C0 | ιΓ) | Γ· | ||
| ÍX | & | Γ- | CO | οη | γ-1 | |||
| -P | φ | τΡ | ||||||
| •m | ||||||||
| in | ||||||||
| '0 | ||||||||
| > | Ό | |||||||
| 'Φ | -Ρ | -Ρ | β | |||||
| 1—1 | ο | >1 | (ti | |||||
| 'φ | ι—1 | Λ | ||||||
| β | Ρ | 'Ρ | -Ρ | |||||
| Φ | -Ρ | CD | ο | ο | V) | ο | V) | |
| Λ | β | β | & | ΙΌ | CX) | ι—1 | ||
| >1 | φ | Φ | φ | —' | ||||
| θ' | ο | ^>Ί | ι—1 | |||||
| Φ | β | εη | rp | |||||
| ο | φ | 'Φ | ||||||
| Ν | λ: | |||||||
οη belüli egyensúlyi agyi koncentráció 4 órán belül ♦··· · · · » • ··«« ·*· <·♦
A fenti szimuláció eredményeiből látható, hogy a fiziológiás sóoldatból 50 μΜ egyensúlyi agyi koncentráció esetén 39,956 ml/28 óra mennyiséget, míg 25 μΜ egyensúlyi agyi koncentráció esetén 19,964 ml/28 óra mennyiséget kell alkalmazni. Látható, hogy a folyamatos intravénás injekció ilyen folyadékmennyisége a patkány teljes testnedvmennyiségéhez viszonyítva túl nagy. Másrészt viszont a liposzóma oldatból 50 μΜ egyensúlyi agyi koncentráció esetén csak 4,256 ml/28 óra mennyiséget kell alkalmazni, illetve 25 μΜ egyensúlyi agyi koncentráció esetén elég 2,128 ml/28 óra mennyiséget alkalmazni. Az utóbbi folyadékmennyiségek már az élettani szempontból beadható folyadékmennyiségek tartományába esnek.
A fenti eredmények alapján látható, hogy az l-treo-PDMPnek liposzómába történő átalakításával jelentős gyógyszerészeti hatás érhető el, ha egy megfelelő folyadékmennyiséget folyamatos intravénás injekció útján beadunk emlősöknek, köztük embereknek.
9. példa
Kísérleti módszer
A kísérletben 250-280 g testtömegű hím Wister albínó patkányokat alkalmaztunk. Az állatokat kiképeztük egy olyan labirintusfeladat elvégzésére, amely labirintus sugárirányban nyolcfelé ágazott. A kiképzés során napi egy alkalommal végeztettük el a feladatot annak érdekében, hogy az állatok megfelelő térbeli tájékozódóképességet szerezzenek. Amikor a patkányok megszerezték a megfelelő térbeli tájékozódóképessé··· · · « · _ _ 9 ···· ··« ·· get, Pulsinelli, Brierly és mások módszere szerint [Stroke, 10, 267 (1979)] a csigolyaartériákat kauterizáltuk és a közös nyaki artériákat szabaddá tettük (operation of peeling). Másnap kizárólag azokat a patkányokat, amelyekről megbizonyosodtunk, hogy a műtét nem gyakorolt káros hatást a labirintusfeladatot megoldó képességükre, ischaemia kezelésnek vetettük alá. Az ischaemia kezelést kétszer megismételve hajtottuk végre, amelynek során a közös nyaki artériákat anesztézia nélkül kapcsokkal 10 percre lezártuk, majd a véráram ismételt megindítása után egy órával 10 percre újra lezártuk. Az ischaemia kezelés után egy héttel retenciós kísérletet végeztünk, amelynek során az eredményeket az első nyolc választásban lévő helyes választások számával fejeztük ki, azaz hogy a maximálisan 10 perces megfigyelési idő alatt az állat mind a nyolc kihelyezett csalétket megtalálta-e, illetve hogy hányat hibázott el. A gyógyszerészeti hatást három fokozatba osztályozva értékeltük, azaz rendkívül hatásos (ami azt jelenti, hogy a helyes választások száma legalább hét, illetve a hibás választások száma legfeljebb egy), hatásos (ami azt jelenti, hogy a helyes választások száma legalább hét, illetve a hibás választások száma kettő vagy három), valamint hatástalan (ami azt jelenti, hogy a hibás választások száma négy, illetve több).
A 6. ábra egy feladatmegoldás nyomonkövetését mutatja be. Ez a cerabralis ischaemiás patkány az első öt csalétek megtalálásáig öt helyes választást végzett, azonban nyolc hibát vétett, mire mind a nyolc csalétket, azaz a maradék három csalétket is megtalálta.
Az alábbiakban bemutatjuk a megtalálási sorozatot mutatjuk be. A táblázatokban 1 jelenti a helyes választ, mig 0 jelöli a hibát.
| Sorozat | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
| Terület | 6 | 3 | 7 | 3 | 7 | 4 | 8 | 4 |
| Megtalálás | 1 | 1 | 1 | 0 | 0 | 1 | 1 | 0 |
| Idő (másodperc) | 10,5 | 93,1 | 102,2 | 119,2 | 135, 9 | 147,0 | 159, 8 | 174,3 |
| Sorozat | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 |
| Terület | 8 | 4 | 8 | 4 | 1 | 5 | 1 | 2 |
| Megtalálás | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 | 1 | 0 | 1 |
| Idő (másodperc) | 180, 8 | 193,1 | 209, 0 | 218, 9 | 230, 0 | 245, 7 | 267, 7 | 275, 6 |
(Minősítés)
A helyes választások száma: 5.
A hibás választások száma: 8.
Futásidő: 275,6 másodperc.
Kísérleti eredmények
A fenti kísérletben patkányok alkalmazásával azt vizsgáltuk, hogy az ischaemia kezelés után 24 óra elteltével megkezdett, 6 napon keresztül végzett folyamatos kezelés, amely40 nek során naponta két alkalommal intraperitonealis úton beadott 40 mg/kg PDMP-t használtunk, a megismételt cerebralis ischaemia után egy héttel milyen hatást gyakorol a térbeli felismerési rendellenességre a sugárirányban nyolcfelé ágazó labirintusfeladat megoldása során. Amint az a 7. ábrán látható, ha összehasonlítást végzünk azzal a csoporttal, amelyik intraperitonealis úton vivőanyagként 5 % Tween 80-at [kereskedelmi elnevezés; poli(oxi-etilén)-glikol-szorbitán; a NOF Corporation gyártmánya] kapott, megfigyelhetjük, hogy abban a csoportban, amelyik folyamatos intraperitonealis beadással 40 mg/kg PDMP-t kapott, megnőtt az ischaemia kezelés által jelentősen lecsökkent helyes választások száma és csökkent az ischaemia kezelés által jelentős mértékben megemelkedett hibás választások száma. Megállapítható, hogy PDMP mérsékli a megismételt cerebralis ischaemia által okozott térbeli felismerési rendellenességet. Ezen túlmenően, amikor a PDMP hatását a javulás mértéke szerint vizsgáltuk, amint az a 8. ábrán látható, a patkányok 50 %-ánál (4/8 patkány) figyeltünk meg olyan hatást, ami a rendkívül hatásos fokozatba tartozott. Megállapítottuk, hogy ezekben az esetekben a rendellenesség csökkenése olyan mértékű volt, ami megfelelt az egészséges patkányok állapotának.
10. példa
Az L-treo-PDMP antidementiás hatása patkány cerebralis ischaemia modellekben
A sugárirányban nyolcfelé ágazó labirintusban történő tájékozódásra betanított patkányokat eréőteljes cerebralis ischaemia kezelésnek vetettünk alá (a modellben azokat az állatokat alkalmaztuk, amelyek az ischaemia kezelés után egy héttel térbeli felismerési rendellenességet mutattak). Az ischaemia kezelés után 24 órával kezdődően hat napon keresztül intraperitonealis úton 2 χ 40 mg/kg/nap L-treo-PDMP-t adtunk az állatoknak. Az utolsó beadás után 12 óra elteltével retenciós kísérletet végeztünk. A PDMP oldószerének megfelelő 5 % Tween 80-at [kereskedelmi elnevezés; poli(oxi-etilén)-glikol-szorbitán; a NOF Corporation gyártmánya] kapott, hat patkányból álló kontrollcsoportban a patkányok 100 %-ánál figyeltünk meg dysmnesiát. Ugyanezt tapasztaltuk abban a csoportban is, amelyik semmiféle kezelést nem kapott. Ugyanakkor azonban abban a nyolc patkányból álló csoportban, amelyik l-treo-PDMP kezelést kapott, a patkányok 50 %-ának állapota javult oly mértékben, ami megfelelt a normális állapotnak, azaz kifejezett antidementiás hatást figyelhettünk meg.
Ipari alkalmazhatóság
A neuronalis betegségek gyógyítására szolgáló találmány szerinti szer az idegsejtek endogén glikoszfingolipidjei, különösen gangliozidjai bioszintézisének fokozásával felgyorsítja a neurit extenziót és a szinapszisképződést, miáltal a szer hatásosan alkalmazható különféle központi idegrendszeri és perifériás idegrendszeri betegségek gyógyítására. A találmány szerinti megoldással kezelhető betegségek reprezentatív példái közé tartoznak az olyan betegségek, amelyek az ideg rostok regenerálásával várhatóan gyógyíthatók. Ebbe a körbe tartoznak — egyebek mellett — például a következő betegségek: cerebralis apoplexia, infarctus cerebri, haemorrhagia cerebri, cerebralis sérülés, dysmnesia, dementia senilis, Alzheimer-kór, parkinsonizmus stb. Az említett reprezentatív példák másik csoportjába a különféle perifériás idegrendszeri betegségek tartoznak, amilyen például a cacochymia által okozott polyneuropathia, a mechanikus neuropathia, a toxikus neuropathia stb.
A neuronalis betegségek gyógyítására szolgáló találmány szerinti szer képes áthatolni a vér-agy gáton [J. Lipid Rés., 32, 713-722 (1991)], így injekció vagy orális szer formájában beadva hatást fejt ki a cerebralis neuronalis betegségekre. Közelebbről egy, a neuronalis betegségek gyógyítására szolgáló találmány szerinti szert hordozó nanoszféra liposzóma (lipid nanoszféra) nemcsak megnöveli a vérben lévő koncentrációt (anélkül, hogy ez bejutna a reticuloendothelialis szövetekbe) és csökkenti a gyógyszerészeti hatás kifejtéséhez szükséges minimális hatásos dózis nagyságát, hanem ráadásul körülbelül tízszer jobban áthatol a vér-agy gáton, mint egy fiziológiás sóoldat, így a neuronalis betegségek gyógyítására szolgáló találmány szerinti szer rendkívül nagy hatékonysággal alkalmazható a cerebralis neuronalis betegségek gyógyítására.
A jelenleg klinikailag alkalmazott legtöbb dementiaellenes szer esetén csak körülményesen lehet biztosítani a megfelelő hatékonyságot, illetve ezek a szerek csak akkor fejtenek ki megfelelő hatékonyságot, ha közvetlenül az ischaemia előtt vagy közvetlenül az ischaemia után kerülnek felhasználásra. Az l-treo-PDMP még akkor is rendelkezik a megfelelő dementiaellenes hatással, ha az ischaemia megtörténte után 24 órával alkalmazzuk, azaz amikor már a cerebralis ischaemia által okozott akut idegsejt rendellenesség alakult ki. Ennek alapján lehetőség nyílik egy rendkívül nagy klinikai értékkel rendelkező új dementiaellenes szer kifejlesztésére.
Claims (20)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Központi idegrendszeri vagy perifériás idegrendszeri rendellenességek által okozott neuronalis betegségek gyógyítására szolgáló szer, azzal jellemezre, hogy a szer hatóanyagként egy (I) általános képletű 2-(acil-amino)-propanol-származékotR^-CH-CH-CHn--N 0I \____/OH NHCO(CH2)nCH3 (I) — amelynek képletébenR1 jelentése fenilcsoport vagy ciklohexilcsoport, amelyek mindegyike adott esetben 1-3 azonos vagy különböző alkilcsoporttal, alkoxicsoporttal, hidroxicsoporttal és/vagy nitrocsoporttal van szubsztituálva, vagy alkilcsoport; és n értéke 0-tól 16-ig terjedő egész szám — tartalmaz vagy ennek egy gyógyszerészetileg elfogadható sóját tartalmazza.
- 2. Az 1. igénypont szerinti, neuronalis betegségek gyógyítására szolgáló szer, azzal jellemezve, hogy az (I) általános képletben n értéke 6-16.• · ♦ ··· ···
- 3. Az 1. igénypont szerinti, neuronalis betegségek gyógyítására szolgáló szer, azzal jellemezve, hogy az (I) általános képletben R1 jelentése fenilcsoport.
- 4. Az 1. igénypont szerinti, neuronalis betegségek gyógyítására szolgáló szer, azzal jellemezve, hogy az (I) általános képletű 2-acil-amino-propanol-származék egy L-treo-izomer.
- 5. A 4. igénypont szerinti, neuronalis betegségek gyógyítására szolgáló szer, azzal jellemezve, hogy az (I) általános képletű 2-acil-amino-propanol-származék az 1-fenil-2-(dekanoil-amino)-3-morfolino-l-propanol L-treo-izomere vagy ennek egy sója.
- 6. Eljárás neuronális betegségek gyógyítására, azzal jellemezve, hogy egy perifériás idegrendszeri vagy központi idegrendszeri rendellenességek által okozott neuronalis betegségekben szenvedő emlősnek a glikoszfingolipidek bioszintézisének gyorsításához, a neuritextenzió gyorsításához és/vagy a szinapszisképződés gyorsításához elegendő mennyiségben beadunk egy olyan (I) általános képletű 2-(acil-amino)-propanol-származékot1 /\R1-CH-CH-CHo--ΜΟ 2 \/OH NHCO(CH2)nCH3 (I) vagy ennek egy gyógyszerészetileg elfogadható sóját, amelynek képletébenR1 jelentése fenilcsoport vagy ciklohexilcsoport, amelyek mindegyike adott esetben 1-3 azonos vagy különböző alkilcsoporttal, alkoxicsoporttal, hidroxicsoporttal és/vagy nitrocsoporttal van szubsztituálva, vagy alkilcsoport; és n értéke 0-tól 16-ig terjedő egész szám.
- 7. A 6. igénypont szerinti, neuronalis betegségek gyógyítására szolgáló eljárás, azzal jellemezve, hogy az (I) általános képletben n értéke 6-16.
- 8. A 6. igénypont szerinti, neuronalis betegségek gyógyítására szolgáló eljárás, azzal jellemezve, hogy az (I) általános képletben R1 jelentése fenilcsoport.
- 9. A 6. igénypont szerinti, neuronalis betegségek gyógyítására szolgáló eljárás, azzal jellemezve, hogy az (I) általános képletű 2-acil-amino-propanol-származék egy l--treo-izomer.
- 10. A 9. igénypont szerinti, neuronalis betegségek gyógyítására szolgáló eljárás, azzal jellemezve, hogy az (I) általános képletű 2-acil-amino-propanol-származék az 1-fenil-2-(dekanoil-amino)-3-morfolino-l-propanol L-txeo-izomere vagy ennek egy sója.
- 11. Egy (I) általános képletű 2-(acil-amino)-propanolszármazékbólR^CH-CH-CHo--N 0 2 \___/OH NHCO(CH2)nCH3 (I) — amelynek képletébenR1 jelentése fenilcsoport vagy ciklohexilcsoport, amelyek mindegyike adott esetben 1-3 azonos vagy különböző alkilcsoporttal, alkoxicsoporttal, hidroxicsoporttal és/vagy nitrocsoporttal van szubsztituálva, vagy alkilcsoport; és n értéke 0-tól 16-ig terjedő egész szám — vagy ennek egy gyógyszerészetileg elfogadható sójából vagy mindkettőből álló gyógyászati kompozíció alkalmazása egy perifériás idegrendszeri vagy központi idegrendszeri rendellenességek által okozott neuronalis betegségek gyógyítására szolgáló szer előállítására.
- 12.A 11. igénypont szerinti alkalmazás, ahol az általános képletben n értéke 6-16.
- 13.A 11. igénypont szerinti alkalmazás, ahol az (I) általános képletben R1 jelentése fenilcsoport.
- 14.A 11. igénypont szerinti alkalmazás, ahol azÍD általános képletű 2-acil-amino-propanol-származék egyL-treo-izomer.
- 15.A 14. igénypont szerinti alkalmazás, ahol az (I) általános képletű 2-acil-amino-propanol-származék az l-fenil-2-(dekanoil-amino)-3-morfolino-l-propanol L-treo-izomere vagy ennek egy sója.
- 16. Liposzóma preparátum kompozíció, azzal jellemezve, hogy a kompozíció legalább egy (I) általános képletű2-(acil-amino)-propanol-származékbólR1-CH-CH-CH9--N 0 2 \___/OH NHCO(CH2)nCH3d) — amelynek képletébenR1 jelentése fenilcsoport vagy ciklohexilcsoport, amelyek mindegyike adott esetben 1-3 azonos vagy különböző al kilcsoporttal, alkoxicsoporttal, hidroxicsoporttal és/vagy nitrocsoporttal van szubsztituálva, vagy alkilcsoport; és n értéke 0-tól 16-ig terjedő egész szám — vagy ennek egy gyógyszerészetileg elfogadható sójából, valamint egy foszfolipidből áll.
- 17. A 16. igénypont szerinti liposzóma preparátum kompozíció, azzal jellemezve, hogy az (I) általános képletben n értéke 6-16.
- 18. A 16. igénypont szerinti liposzóma preparátum kompozíció, azzal jellemezve, hogy az (I) általános képletben R1 jelentése fenilcsoport.
- 19. A 16. igénypont szerinti liposzóma preparátum kompozíció, azzal jellemezve, hogy az (I) általános képletű2-acil-amino-propanol-származék egy L-treo—izomer.
- 20. A 19. igénypont szerinti liposzóma preparátum kompozíció, azzal jellemezve, hogy az (I) általános képletű2-acil-amino-propanol-származék az l-fenil-2-(dekanoil-amino)-3-morfolino-l-propanol L—treo-izomere vagy ennek egy sója.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22051893 | 1993-08-13 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU9600278D0 HU9600278D0 (en) | 1996-04-29 |
| HUT73527A true HUT73527A (en) | 1996-08-28 |
Family
ID=16752277
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9600278A HUT73527A (en) | 1993-08-13 | 1994-08-12 | Remedy for nervous diseases |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5707649A (hu) |
| EP (1) | EP0720852B1 (hu) |
| JP (1) | JP3778926B2 (hu) |
| KR (1) | KR960703598A (hu) |
| CN (1) | CN1128951A (hu) |
| AT (1) | ATE197672T1 (hu) |
| AU (1) | AU676361B2 (hu) |
| DE (1) | DE69426331T2 (hu) |
| HU (1) | HUT73527A (hu) |
| NO (1) | NO960380L (hu) |
| NZ (1) | NZ269847A (hu) |
| WO (1) | WO1995005177A1 (hu) |
Families Citing this family (45)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NZ269847A (en) * | 1993-08-13 | 1996-11-26 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | 2-alkylamino-3-morpholino-1-propanol derivative in a composition for neuronal disease treatment |
| US5872101A (en) * | 1995-01-06 | 1999-02-16 | Sibia Neurosciences, Inc. | Methods of treating neurodegenerative disorders using protease inhibitors |
| US5804560A (en) * | 1995-01-06 | 1998-09-08 | Sibia Neurosciences, Inc. | Peptide and peptide analog protease inhibitors |
| US6890949B1 (en) * | 1999-07-09 | 2005-05-10 | The Regents Of The University Of Michigan | Amino ceramide-like compounds and therapeutic methods of use |
| NO965193L (no) * | 1995-12-08 | 1997-06-09 | Seikagaku Kogyo Kk Seikagaku C | Aminalkoholderivat og fremgangsmåte for fremstilling derav |
| US5972928A (en) * | 1997-05-21 | 1999-10-26 | Johns Hopkins University | Methods for treatment of conditions associated with lactosylceramide |
| US6440455B1 (en) * | 1997-09-02 | 2002-08-27 | Children's Medical Center Corporation | Methods for modulating the axonal outgrowth of central nervous system neurons |
| US6723838B1 (en) | 1998-04-22 | 2004-04-20 | Johns Hopkins University | Signal transducing synaptic molecules and uses thereof |
| US6368831B1 (en) | 1998-06-29 | 2002-04-09 | Childrens Hospital Los Angeles | Treatment of hyperproliferative disorders |
| BR9912501A (pt) | 1998-06-29 | 2001-05-02 | Los Angeles Childrens Hospital | Tratamento de distúrbios hiperproliferativos |
| US6511979B1 (en) | 1998-07-27 | 2003-01-28 | Johns Hopkins University | Methods for treating conditions modulated by lactosylceramide |
| US6635281B2 (en) * | 1998-12-23 | 2003-10-21 | Alza Corporation | Gastric retaining oral liquid dosage form |
| JP5009459B2 (ja) * | 1999-12-06 | 2012-08-22 | 生化学工業株式会社 | アミノアルコール誘導体及びそれを含有する医薬 |
| US6407064B2 (en) * | 1999-12-06 | 2002-06-18 | Seikagaku Corporation | Aminoalcohol derivative and medicament comprising the same |
| US20100261159A1 (en) * | 2000-10-10 | 2010-10-14 | Robert Hess | Apparatus for assay, synthesis and storage, and methods of manufacture, use, and manipulation thereof |
| CA2434028C (en) * | 2001-01-10 | 2010-11-09 | The Regents Of The University Of Michigan | Amino ceramide-like compounds and therapeutic methods of use |
| JP3742602B2 (ja) * | 2001-05-09 | 2006-02-08 | 株式会社カネカ | 還元型補酵素ｑの安定な溶液 |
| ATE555102T1 (de) | 2001-07-16 | 2012-05-15 | Genzyme Corp | N-acylsphingosinglucosyltransferase-inhibitor |
| US6916802B2 (en) * | 2002-04-29 | 2005-07-12 | Genzyme Corporation | Amino ceramide-like compounds and therapeutic methods of use |
| US20060217560A1 (en) * | 2002-04-29 | 2006-09-28 | Shayman James A | Amino ceramide-like compounds and therapeutic methods of use |
| US7834147B2 (en) * | 2003-04-28 | 2010-11-16 | Childrens Hospital Medical Center | Saposin C-DOPS: a novel anti-tumor agent |
| DE10352449A1 (de) * | 2003-11-07 | 2005-06-16 | Ruprecht-Karls-Universität Heidelberg | Mittel zur prophylaktischen und/oder therapeutischen Behandlung von Morbus Alzheimer |
| DE10352450A1 (de) * | 2003-11-07 | 2005-06-23 | Ruprecht-Karls-Universität Heidelberg | Neues Mittel zur prophylaktischen und/oder therapeutischen Behandlung von Morbus Alzheimer |
| US8912144B2 (en) * | 2003-12-16 | 2014-12-16 | Children's Medical Center Corporation | Method for treating stroke via administration of NEP1-40 and inosine |
| US20090111812A1 (en) * | 2004-06-14 | 2009-04-30 | Musc Foundation For Research Development | Methods for treating inflammatory disorders |
| JP2008519840A (ja) * | 2004-11-10 | 2008-06-12 | ジェンザイム・コーポレイション | 糖尿病の処置方法 |
| JP5042040B2 (ja) | 2005-01-26 | 2012-10-03 | アラーガン、インコーポレイテッド | 鎮痛活性および／または免疫賦活活性を有する１−アリール−１−ヒドロキシ−２，３−ジアミノ−プロピルアミン、１−ヘテロアリール−１−ヒドロキシ−２，３−ジアミノ−プロピルアミンおよび関連化合物 |
| EP1857112B1 (en) * | 2005-03-09 | 2013-05-15 | Sunstar Inc. | Anticancer composition comprising liposomes containing phytosterols |
| EP3357490A1 (en) * | 2006-04-28 | 2018-08-08 | Children's Hospital Medical Center | Fusogenic properties of saposin c and related proteins and polypeptides for application to transmembrane drug delivery systems |
| ES2546181T3 (es) | 2006-05-09 | 2015-09-21 | Genzyme Corporation | Métodos de tratar la enfermedad del hígado graso mediante inhibición de la síntesis de glucoesfingolípidos |
| WO2008011487A2 (en) * | 2006-07-19 | 2008-01-24 | Allergan, Inc. | L-benzyl-l-hydr0xy-2, 3-diamin0-propyl amines and 3-benzyl-3-hydroxy-2-amino-propionicacid amides for chronic pain |
| WO2008011483A2 (en) * | 2006-07-19 | 2008-01-24 | Allergan, Inc. | Methods for treating chronic pain using 1- (hetero) aryl-1-hydroxy 2,3-diamino-propyl amines and related compounds |
| WO2008109287A1 (en) * | 2007-03-06 | 2008-09-12 | Allergan, Inc. | Methods for treating cognitive disorders using 1-benzyl-1-hydroxy-2,3-diamino-propyl amines, 3-benzyl-3-hydroxy-2-amino-propionic acid amides and related compounds |
| EP2167485B1 (en) | 2007-05-31 | 2015-09-30 | Genzyme Corporation | 2-acylaminopropoanol-type glucosylceramide synthase inhibitors |
| MX2010003603A (es) | 2007-10-05 | 2010-06-02 | Genzyme Corp | Metodo para el tratamiento de enfermedades de riñon poliquisticas con derivados de ceramida. |
| CA2731685A1 (en) | 2008-07-28 | 2010-02-04 | Genzyme Corporation | Glucosylceramide synthase inhibition for the treatment of collapsing glomerulopathy and other glomerular disease |
| MX2011003517A (es) * | 2008-10-03 | 2011-05-25 | Genzyme Corp | Inhibidores de la glucosilceramida sintasa tipo 2-acilaminopropanol. |
| JPWO2010087313A1 (ja) * | 2009-01-29 | 2012-08-02 | 株式会社林原生物化学研究所 | 神経突起伸展促進剤 |
| US20110152267A1 (en) * | 2009-11-12 | 2011-06-23 | Texas Tech University System | Compositions and Methods for Treating Hyperproliferative Disorders |
| EP3133070B1 (en) | 2009-11-27 | 2019-08-14 | Genzyme Corporation | Eliglustat (genz 112638) as inhibitor of glucosylceramide synthase for use in a method of treating fabry's or gaucher's disease, the method comprising adjusting the individual therapeutical dose to the p-450 metabolism of the patient |
| CA2789517A1 (en) | 2010-02-12 | 2011-08-18 | The Johns Hopkins University | Use of the lactosylceramide synthase isoform b1,4galt-v as a biomarker for cancer |
| EP3253734B1 (en) | 2015-02-02 | 2020-12-23 | The Regents of The University of Michigan | Glucosylceramide synthase inhibitors and therapeutic methods using the same |
| EP3501495A1 (en) * | 2017-12-21 | 2019-06-26 | InnoMedica Holding AG | Liposomes comprising sphingomyelin |
| JP2022553107A (ja) | 2019-10-23 | 2022-12-21 | ザ・リージェンツ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・ミシガン | グルコシルセラミドシンターゼ阻害剤およびそれを使用する治療方法 |
| WO2021221953A1 (en) | 2020-04-28 | 2021-11-04 | The Regents Of The University Of Michigan | Pyridine inhibitors of glucosylceramide synthase and therapeutic methods using the same |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4963297A (en) * | 1987-12-22 | 1990-10-16 | The Liposome Company, Inc. | Spontaneous vesticulation of multilamellar liposomes |
| US5041441A (en) * | 1988-04-04 | 1991-08-20 | The Regents Of The University Of Michigan | Method of chemotherapy using 1-phenyl-2-decanoylamino-3-morpholino-1-propanol |
| NZ269847A (en) * | 1993-08-13 | 1996-11-26 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | 2-alkylamino-3-morpholino-1-propanol derivative in a composition for neuronal disease treatment |
-
1994
- 1994-08-12 NZ NZ269847A patent/NZ269847A/en unknown
- 1994-08-12 EP EP94922369A patent/EP0720852B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-08-12 WO PCT/JP1994/001342 patent/WO1995005177A1/ja active IP Right Grant
- 1994-08-12 CN CN94193077A patent/CN1128951A/zh active Pending
- 1994-08-12 HU HU9600278A patent/HUT73527A/hu unknown
- 1994-08-12 AU AU73506/94A patent/AU676361B2/en not_active Expired
- 1994-08-12 KR KR1019960700688A patent/KR960703598A/ko not_active Application Discontinuation
- 1994-08-12 DE DE69426331T patent/DE69426331T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-08-12 US US08/464,683 patent/US5707649A/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-08-12 JP JP50686095A patent/JP3778926B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1994-08-12 AT AT94922369T patent/ATE197672T1/de not_active IP Right Cessation
-
1995
- 1995-06-06 US US08/466,243 patent/US5849326A/en not_active Expired - Lifetime
-
1996
- 1996-01-30 NO NO960380A patent/NO960380L/no unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO960380D0 (no) | 1996-01-30 |
| AU7350694A (en) | 1995-03-14 |
| US5849326A (en) | 1998-12-15 |
| DE69426331D1 (de) | 2000-12-28 |
| JP3778926B2 (ja) | 2006-05-24 |
| DE69426331T2 (de) | 2001-06-21 |
| US5707649A (en) | 1998-01-13 |
| WO1995005177A1 (fr) | 1995-02-23 |
| EP0720852B1 (en) | 2000-11-22 |
| EP0720852A4 (en) | 1997-07-23 |
| HU9600278D0 (en) | 1996-04-29 |
| EP0720852A1 (en) | 1996-07-10 |
| KR960703598A (ko) | 1996-08-31 |
| NZ269847A (en) | 1996-11-26 |
| NO960380L (no) | 1996-03-14 |
| CN1128951A (zh) | 1996-08-14 |
| ATE197672T1 (de) | 2000-12-15 |
| AU676361B2 (en) | 1997-03-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HUT73527A (en) | Remedy for nervous diseases | |
| JP3942205B2 (ja) | 神経疾患の治療剤 | |
| US5763438A (en) | 2-acylaminopropanol compound and medical composition | |
| SK154796A3 (en) | Use of rapamycin for the inhibition of neuronal cells necrosis | |
| JP2001525367A (ja) | 膜関連ウイルス複製の阻害 | |
| CN100436447C (zh) | 具有神经原活性的化合物 | |
| HU193302B (en) | Process for producing phospholipide compositions and pharmaceutical compositions containing them as active agents | |
| DE60016363T2 (de) | Aminoalkohol-Derivat und Medikament, das dieses Derivat enthält | |
| JPH02256663A (ja) | 不安および不安抑うつ障害の処置に有用な医薬組成物の調製へのトリフルオロメチルフェニルテトラヒドロピリジンの使用 | |
| JPH03157336A (ja) | 細胞成長阻害物質として有用なスフィンゴシンおよびｎ―メチル―スフィンゴシン | |
| JP2007509925A (ja) | デオキシノジリマイシン誘導体又はその薬学的塩の使用 | |
| TW200831479A (en) | Pharmaceutical compositions and methods for treating diseases | |
| RU2362563C2 (ru) | ИНГИБИТОРЫ НЕЙТРАЛЬНОЙ ЭНДОПЕПТИДАЗЫ (NEP) И РАСТВОРИМОЙ ЭНДОПЕПТИДАЗЫ ЧЕЛОВЕКА (hSEP) ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ НЕЙРОДЕГЕНЕРАТИВНЫХ РАССТРОЙСТВ | |
| JP5009459B2 (ja) | アミノアルコール誘導体及びそれを含有する医薬 | |
| JPH01135720A (ja) | 神経線維再生剤 | |
| JP4632480B2 (ja) | チオレドキシン誘導物質 | |
| EP3909568A1 (en) | Prophylactic or therapeutic drug for neurodegenerative diseases | |
| ITMI951513A1 (it) | Uso di derivati 1,4-diidropiridinici per la prevenzione e la terapia della degenerazione aterosclerotica della parete arteriosa | |
| JP2001523659A (ja) | 細胞外グルタミン酸濃度を低下させるための４位置換２−ピロリジノン誘導体 | |
| CN101293831B (zh) | 3-羟基脂肪酸及其衍生物在制备钙离子通道调节剂中的用途 | |
| CA2168877C (en) | Agent for curing neuronal diseases | |
| Windisch | COGNITION-ENHANCING | |
| JPH08217679A (ja) | コレステロール低下剤 | |
| JPS58206521A (ja) | 抗腫瘍剤 | |
| JP2000136137A (ja) | 虚血再潅流性脳障害軽減剤 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| DFC4 | Cancellation of temporary protection due to refusal |