HUT56289A - Crosslinked antibodies and process for their production - Google Patents
Crosslinked antibodies and process for their production Download PDFInfo
- Publication number
- HUT56289A HUT56289A HU901927A HU192790A HUT56289A HU T56289 A HUT56289 A HU T56289A HU 901927 A HU901927 A HU 901927A HU 192790 A HU192790 A HU 192790A HU T56289 A HUT56289 A HU T56289A
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- antibody
- conjugate
- bridge
- fragment
- group
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
- A61K51/1093—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody conjugates with carriers being antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6875—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody being a hybrid immunoglobulin
- A61K47/6877—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody being a hybrid immunoglobulin the antibody being an immunoglobulin containing regions, domains or residues from different species
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
- A61K51/1084—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody the antibody being a hybrid immunoglobulin
- A61K51/1087—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody the antibody being a hybrid immunoglobulin the immunoglobulin comprises domains from different animal species, e.g. chimeric immunoglobulins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2123/00—Preparations for testing in vivo
Description
A találmány sserlnti antitest konjugátomekban as antitest molelrolábao lóvé lánoköstl Md bármelyik nohés vagy
-5 könnyű láncot egy vagy több más nőkén és/vagy könnyű lánshos köthati ugyanabban a molekulában· Asonban a* as dőayös» ka a hid két láaoot köt öcs se · főként két nőkén lánoot· kgynU több lánekösti hidat alkotó csoport jalenléto is lehetséges· asonban as egy ilyen híddal ellátott konjugátumokat helyeslők előnybe* á nom-dissulfid lánekösti kid kifejősós ont jelenti* hogy as antitestekben rondáé körülmények kösött meglévő S - S típusa hidak ki vannak sárra·
A hídfő-hely minden antitest láncban általában egy olyan amlnoMvssopert oldallánoán lehat· amely aláné résiét képesl, de kösvetlonül nem vess rémit as antigén kötő dómé·» boa· ásek ai alkalmai eadJMMMvA» amolyekMk as előállássá agy amino-· ssulfhidrll-, karboxil-, fenoloa vagy más «Még vagy hotorearosás fumkoiós osoportot tartalma·· «ivei a láma* költi hid ide keposolódhat· in ilyen típusa speciális aminoaaresoportek köaé tsftoiik a lisin-» olsstoin-· glitanlHiam·· essparaglnaav- és tirosinossport· Egy másik lehetőség· hogy a hidfő-hely egy· as antitest lánehes k<osolt ssénhidrétoooporton hslyogtoodlk el» főként oxidált ssénhidrátoaoporten· amely legalább egy olyan aldohidcseportot tartamos» amelyhas a lánekösti hid kapssolódhat·
A leginkább előnyös hídfő-helyek a cissteinosopor* tok esulfhldxilesoportjal· például esek» amelyek ronda· körülmények kösött a lánekösti diaaulfid-hidakban sserepelnék· ás ilyen tlpusu előnyös helyek as antitest nshéi láma· csukló ssakaasában jelenlévő eissteinosopoxtak ssulfhidrllcsGpert jel· Egy máalk előnyös esetben a hidfő-hely egy olyan
• 4 akiaeaavesapeat eldallánaán m, amelyet rendesen m tartalBaB a* i—aümi <·. a· MMljat a* alábbiakban Isist τνίτιιη bináns DNS teohnlkák felhasználásával bevittünk· Ilyen helyek • eisztein te e lizin walftMiiUi illetve sniaoesoportjai· A találmány szerinti konjiigátunokbsn lévő lánoköati hidak álteláben bámilyea beázások és öasMtételüak lehetnek* Alkalmas hűek lehetnek a M ée hotero-bif unkeiée térháléaité reagensek oseportjei, főként a honé* ée hetero-bifwBkeiéa térhálésitő reagensek csoportjai· Így a hidak egy vagy több MdfMielyhes kapcsolódhatnak· A különleges hidak asebaati* teáit alifás, aromás vagy aralifás vegyületek adott esetben polivalens, főleg bivalons gyökei· á láneközti hid sserkeaete példám a következő leheti amelyben mind 1\ nind & ·& ttok* tár f Maién oatMt nsMéka· I* éa I* együttesen e hit többi, réazét képezik, n éa n, anelyok vagy azonosak vagy kő· lönbözőek, egész aséM» péiéám 1 vagy több·
A fenti apaoiélia fcigM hidakban és 1* együtt vagy ogyoM vagy elágazó 0iwe20 alkilén- (példás! a^|Q alkilé»»· igy Ö4.xo alkilén*, példáéi betűén*· peatiléa*· honi* lén· vagy hsptilé»·), Őj gn alkonilén- vagy alktailénláne, amelyeket gdett esetben egy vagy több -0» vagy -S-atoa aaakit sági továbbá ö^g oikloalkilé»* (például eiklopenbiléa» vagy siklehenilén-), öW2 amáa csoport (példám foniléavagy szubsztituált fonilén»), hoMeaMáa csoport (például tamil*· pirUil-)i -*cé> (melyben a1 hidrogénam vagy Oj^g alkilcsoport), -WB1)· vagy *W<R*)ÖÖ· eaopest· * · · #··♦ ·· ·· • · · · · · · • · ···«· » · · ····« ·· ·· · • ···»·»· ·»· · ♦ • 5Általában a reaktív tunkoló· csoportok maradéka, amelyet j? vagy x2 képvisel, bármilyen olyan csoport saradóka lobot» amely bármilyen tiel-» amin· » karbojcUL-, hidroseil»» aldehid-, arénán vagy heteroaroaás csoporttal képe· moagálM* CabAt például x1 ragjr / -OH*-. -8-, -4®-, -n(CBjXa,
-WOOfo» ««mm*» -B(Ki)?r« («Mlyton Λ ienlleseportot Jolánt) ceopert, továbbá -&>($>» W(S>» «00»· a) képletü csoport· -Bot^d (Bet8)QBg- általán·· képletü osápért, (emelyben a Bot1 ée a Bet8 * amelyek vagy aoonoaák vagy különbö»·ok - mindegyike aitsogéntartalmo hetoreeiklueoo 0Mpertt például piridilasoport, vagy Bet1 egy nitrogéntartalro botéraciklusos csoport éa Bet8 hürogónatea) vagy b) általáM képlotü oaoport» amelyben álk 0^ alkil-· példám notileaopert*
Ba a híd elágaaé» úgy előnyös, ha minden ágban van egy reaktív inkáié· eeopert, éa esek lehetővé tessik, iwor a kid egynél több hidid-hely révén mindegyik Iának·· kap····» lódjék* á találmány eeenántl konjugátemtkban a Jvleett antitest molekula seghstáreaás egy olyan antitest molekalát Je* lent» amelybe» riporter vagy efiektor esopert lupeaeUdik*
Riporter aropgrt alatt bármilyen olyan eaopmrtot ▼agy vegyületet értünk, amely analitikai nédaaorokkal in vitro éa/vagy in vive könnyen kimutatható éa amely ilyen tulajdon» ságot kölaaM· a konjugátranak· Étiekkor csoport alatt bár» milyen olyan eocpertot vagy vegyülotat értünk, amely egy bio· légiai romdaaorbon váltósáét képen olőidéani vagy a biológiai xendacoxt válaaaaiáara késeket/ éa amely a találmány aaerlati « «···*·* • « «··«···· ····· · · ·· * • ······· · · ·*
-6kcmjogétunot Ilyen tulajdonsággal ruhássá fel·
Alkalmsa riporter vagy effektor molekulák a radienuklldok, pUUol a lt5J ta a l%« a keUtkl>ttatea l*rt fának I a fluoreaskáló vegyületek vagy na olyan vegyületek, amelyek B® vagy Χ8Λ qpektros&ópiével kimutathatók! a farmakológia! anyagok* ide tartósnak a oitotoxlkiMi vegyületek ón taxinak* például ilyen a sióin éa fragmentumait as enslnoki éa hormonok®
A koléWÖtésbon lévé fémek kősó tartósnak a két vagy káron pesitiv töltéMOl és 2-tól ő-4g terjedd koordinációs ssámmal ronóelkeső fémek kólátjai· Esek a férnék főként as alábbiak lehetnek» toahnéoion (le)* rénium Oo)* kobalt (de)* rés (Oo)* arany 0®)· osüot (ág)* ólom (Pb)* Manet (Μ)* indit» (In), gallium (Oo)* ittriun (t), terhit» (fb), gaMinim (Od) és sskondiun (Se). Általában előnyös, ha a fán radioffiftlld· A apooiállc radiondclldok késé tartósnak a követkesóki ^^fo* 1ββ£ο* *®*ηο· ^®Öo, ®%o* ®^Οο» ^Au, «»«. ω4. *”». “Si. «li, ÍU^, «7β1, “r, ’°x. ·.
KoléW&tésbon lóvé fém lehet például a fonti fé·* eianBek aevike. —hámMar -Ίν»*—— makfMta kalátkánaő ágensen! képes kelétot· Ilyen ágensek lehetnek példád! a követkosökt nill nőse vans nem tiki mos yan—h—m. noiióterek Cpéldául a koroaaéterek és esémasékalk), poliamldok* porfirinek és a karbooikllkue asármasékOk· á kolátkópső ágens típusa általában a hasaséit fémtől függ· A találmány aserlnti kelétképső aserek különösen hassnoa csoportját alkotják neonban a eikluaoe és nem sikló• ·· »··♦ ·♦-.'·* • ·*· · · · · ·* · ··· 4 ··.. » ···· · · · · · · • ······· ♦ · · * « 7 •os pollasinok, különösön a pollmainokarbonasvak, például a dietilén-trlamin-peiita-eaetssv és szársasékai és · nakro»oiklúgos aminok· például a oikluaos briósa· és tetraasa-osárme· zékok) továbbá a poUamidok, főként a desforrl-oso-enin és származékai* ás előnyös makrociklusos eminok közé tartoznak a* (I) általános képletü vegyületek· amelyekben 1 agy reaktív csoport, B egy alkllénlán·, aselyot egy vagy két - adott osotbsn ssubastituált » nitrogénatom esteit segg t* és Λ esélyek azonosak vagy különözőek, tetszés szerint ssubszti» tűéit nitrogénatomi a p nulla vagy 1 és a g null· vagy 1 ▼•S7 8« aszal a faltétollol· hogy ha p nulla· akkor g 1 vagy 2» toolosszorüon as 1 osoport ssolgáltstj· · makro» olklus esésére a osatlakosási pontot a találata? ssorlnti konjugálásban* ás (I) általános képletü előnyös ősinek kösé tartóznák a (XI) általános képletü triasa^ssársasékok, amelybem as 1 osoport as előzőekben megadott jsloatésü, & és g* - melyek azonosak vagy különbösöok - jelenté·· -BÍ(0Hg osoport (amelyben r nulla vagy l»töl &*ig torjodö egéss •sás és B1 alkil», alkoml»alkll»t -ΟΟ^Η, »8$^» «20^ arilosoporb), B egy -0^(^)^(2)(¾¾^ osoport (amely bon s és t » amelyek azonosak vagy különbözőek lekötnek jelentése l, 2 vagy 5» 2 jelentése -(¾¾^ amelyben r és B1 meghatározás· megtörtént )i a (XXX) általános képletü tetraaso-ssármazékok, a képletben 1 a fonti jolontésü, w* és W* » amelyek asonesak vagy különbözőek - -Wí (Oa*)^]osepost (amely a fonti jelentésű) és B -CHgCGH^WCi)^'' · ··· · · ♦ · • · · · · · ♦ ♦ · * ··«·· ·· ·· * • ···♦··· ·· ·· — 8 — (αΗ2)4Η(Β)(βΗ2)^βΗ2- csoport, amelyben d nulla vagy 1, 2 vagy 3 és a, t és B jelentése a fonti*
Különösen értékes (XX) általános képletü amin a (XT) általános képletü vogyület*
Továbbá különösen értékes (XIX) általános képletü amin az (V) általános képletü vogyület*
A találmány szerinti konjugátumokban az előnyős kelátkötésbon lévő fémek közé tartozik az indián, amely a (II) általános képletü vegyülettel, főként pádig a (IV) általános képletü vegyülettel képez kelát-kompleacot, vagy az ittrlum, amely a (III) általános képletü vegyülettel, főként az (V) általános képletü vegyülettel képes kelát-koas>lexst. Különösen előnyösek a ^In és a ®°T*
A riporter vagy offektor csoport vagy közvetlenül (például mint egy radionuklid -például a jód - esetében) vagy egy reaktív funkciós csoporton keresztül - például a fent leirt valamely xl· csoporton keresztül - közvetett módon kapcsolódhat az antitesthez*
A találmány szerinti kenj agát urnákban lévő antitest általában bármelyik immunglobulin osztályhoz tartozhat* lehet például az immunglobulin M vagy főképpen egy immunglobulin G antitest, beleértve as IgGl, IgG2, IgGJ és IgG4 isotipusokat. As IgGl, IgG2 és ZgG4 izotipusok különösen hasznosak a találmány szerinti konjugátúrnőkben, de főképpen az XgGl és XgG4 izotipusok a hasznosak*
Az antitest lehet állati eredetű, például emlős eredetű, mint például egér, patkány vagy emberi eredetű* lehet természetes antitest vagy ennek fragmentuma vagy - ha kívánt rokoBblaáne antitest vagy antitest fragnöBt«M asaa agy ölyen antitest nolekula vagy antitest fragmentum, amelyet rokoBalnáns m toohnikákkm állítottunk elő· i kedvese rekeabimns antitestek vagy antitest fra«* Bontanok kösd tartósam esek, amelyek 1) egy olyan antigén-kötő helyet tartalmasnak, amelynek legalább egy réssé egy másik antitestből ssárnaslk· példám, «melyben as egyik antitest hipervariábilia vagy komplementaritást meghatározó ssa* kassait beültettük egy aásédlk, sás antitest variábilis szerkezetű sseksssába (a 239· 400 számú európai szabadalmi leirás ssorisb)s 2) as olyan reakoabinána antitestek vagy fragBom/ tőnek, esélyekben a nesnlv asekvenoiákat más, különböző antitestekből származó nen-Wv ssokveneiákkal helyettesítettük (s 171 496, 173 494 és 194 276 számú európai saabadelni leírások szerint)i >) vagy olyan rekanbináns antitestek vagy fraeeentOMk, anelyek lényegiben egy természetes teunglobib» Un ssezkosetével rendelkeznek, de amelyekben vagy több aminossveseportot megváltoztattunk, példám amelyekben az antitest eaekló szokássában a cisstein csoportok száma a természetes lmnunglobulinban lévőktől különbözik vagy amelyekben a rokaablaána antitest vagy fragmentum egy felületi rétegében egy vagy több oiszteinoaopert a természetes inmaglebminban jelenlévő egy más eeinosavcsoportot helyettesit (a WO 89/01974» illetve WO 99/10782 számon nyilváneaságrabozott nemzetközi seabadalai leírások szerint) vagy annlyekben egy lizinesoport van a terméasetes immunglobulinban lévő mám aminoasvcsopert helyében·
Ha as antitest egy antitest fragmentum, úgy az példám
-10egy proteclitlkus fragmentum lehet, amelyet a teljes antitest onstetlkus eméastéae révén kaptunk· Más esetben as antitest fra^aentua egy olyan fragmentum lehet, amelyet rokombinána PSS technikákkal állítottunk elé, példád JTv fragmentumok lehetnek (lásd a WO 89/02465 esten nyilvánosságra Mosott nomsetkösi ssabadalmi leírást )·
Általánosságban, a találmány ssorlntl köményét nmek •setén, amelyekben as antitest egy antitest fragmentum, fő· ként ss ?(ab*)g fragmentumot helycsaWc előnybe· ás antitest lehet pdiklonális vagy előnyösen posá.....
klónál!· eredetű és akárhány antigén determinánsra lehet epe· oifikus, de előnyösebb, ha egyse apooifikss· ás antigén determináns lehet bármilyen hsptén vagy bármilyen antigénnel kapcsolat·· antigén determináns· speciális antigének kösé tartassak ss állatokkal és emberekkel kapcsolatos antigének (példád a ásnál állati ssövet vagy aserv sejtjeivel kapcsolatos antigének, a tumor sejtekkel kapcsolatos antigének (példád ss •aksdotálls antigének, mint a karainoenbrioaális antigén vagy ss slfs-fetoproteln, s placeatárls antigének, mint a korie•gonadetsapin és a plaoentáris alkalikua fossfstás és s presotata antigének· mint a prosstata savanyú fosat atás és a presstata apssitlki» antigén) és a test folyadékokkal kapcsolatos antigének, mint a fibrin vagy a vérleasskékl, valamint a vl* rusakksl· tettért önökkel és sombákkal kapcsolatos antlménék· Így előnyös kiviteli dák ssesint as antitest képes felismerni és megkötni egy tumorsa jttsl kapcsolatos antigént, főként a humán moll- és vastagbéltumorral kapcsolatos Táfi-71 antigénen egy vagy több epitépot· Különösen előnyös Ilyen tl• · · · · · · · • · · ··· * · · · κ ···· · 9 9 9 9 9 • ···· ·······
- u poeu antitest a B72.J aonctíüLenális antitest (D.Colcher és munkatársai, Proe· Wstl. Aöad. Sói·, 78.» 5199# (1981.)1 vagy annak agy fregmontuma, féként ?(áb· )g fragmentuma·
A találmány szerinti kenjugótunok előnyős csoportjában minden egyes antitest konjugátum egy olyan jelzett antitestmolekulát tartalmaz, amelyben egy nehézláne közötti nem-diszulfid hid van és a szóbanforgó hid egy ciszteinosoport - amely jelen van mindegyik említett lánoban, az antlrtest molekula esukló szakaszában - szulfhidrilosoport ján keresztül kapcsolódik mindegyik nehéslánohoz·
Az ilyen tipusu konjugátonék közül különösön hasznosak azok, amelyekben az antitest esek egy eisztoinosoportot tartalmas mindegyik nehéz lánc ceukló szakaszában és az «Oltott eisztelnssoport alkotja a hídfőket a lánoköstl hid szénára·
Más ilyen tipusu konjugátunok közül ásók as előnyösek* amelyekben as antitest képes felismerni és megkötni egy tusoméjttel kapcsolatos antigént, főként a hunén noH- és vastagMltunomal kapcsolatos $Afi-T2 antigénen egy vagy több epitöpot* Az antitest lehet természetben előforduló antitest vagy fragmentuma, faként as >(ab»)2 fragmentum vagy rekombináns antitest vagy antitest fragmentum, amint ezt aa előbbiekben leírtuk· Előnyös antitest a Β72·3 antitest vagy fragmentuma, ideértve a rekombináns B72.J antitestet vagy fragmentumát·
Esen előnyös tipusu konjugátunokban az előnyös jelzés jódstosmal történik, ilyen főként a vagy a vagy ·1Ζ (X) általános képletü kelátképzé ágenssel, amely • 44 44···· • ,44 ··' · • 4 · 4 · · ·· · • 4444 4444 • 4444 44444
- 12 főként olyan (H) vagy (XXI) általános képlottt vegyület vagy főleg olyan (XV) vagy (V) általános képletü veryülot lehat, amely agy fámmal komplexet alkot· Előnyösek a két- vagy három pozitív töltésű fémek, amelyeknek a koordinációs ssáaa 2-től 8-lg terjedhet és amelyek leginkább rádión tikiidők* különösen előnyös «z indlum és főleg a ^In, valamint az ittrluxa és főleg a ^T«
A találmány szerinti konjugátumok diagnosztikus vagy terápiás szerekként használhatók fel* Az antitest természetétől és a riporter és effektor csoporttól függően a konjugátum felhasználható in vivő alkalmas detektorral együtt a normál és beteg szövetek - ideértve a tumorokat és trombusokat - leképezésére) vagy rendellenes sejtsavarok kezelésére, például tumorok, trombueók és beteg szövetek - Így fertőzött szövetek - keselésére· A találmány szerinti konjugátunok in vitré diagnosztikus technikákban is felhasználhatók, például radloismunassay-kben vagy enslm-ímmunassey-kben· Tehát a találmány egy olyan antitest konjugátwaot is ismertet, amely humán vagy animál betegnél kezelési vsgy diagnosztizálási módszerben használható, és as említett anti^· test konjugátum egy olyan jelzett antitestmolekulát tartalmas, «melyben legalább egy láneközti hid van, és e z a hid as entitást antigénkötő doménjeín kívül fekvő egy vagy több hídfőnél kapcsolódik mindegyik lánchoz*
In vivő felhasználás céljára az antitest konjugátun alkalmas összetételben, megfelelő dózisban formulázhstó·
A találmány további tárgyát tehát egy olyan gyógyszerkészítmény képezi, amely olyan jelzett antiteetmolekulát • · · ♦ · · · · • · ·«··· · · · ····· ···«· • ···· ··· ·· ·♦ *13tartalmas, amelyben legalább egy nea-disaulfid lánckösti Md van, és a ssóbanforgó híd as antitest antigénkötő doméajein kívül elhelyezkedő egy vagy több hídfő-helynél kapcsolódik mindegyik lánchoz? a készítőéihez tartoslk egy vagy több gyógyszerészeti szempontból elfogadott hordósé és kötőanyag· A konjugátum in vivő alkalmazása bármilyen alkalmas módon tfrtétíhet, de előnyösen parenterálisan, például injekció vagy infúzió formájában· A perenterális alkalmazáshoz megfelelő formálásán magába foglalja a konjugétumból késsi» tett ezusspenziót, oldatokat vagy eaulálókzt olajom vagy vizes vivősnyagban· A késsitmény formulázóazoreket is tartalmashat, példám ssnsapoadáló, stabilizáló és/vagy disspezgálé ágensokét. A komjngátom per formában is készíthető, amelyet hasssálat előtt megfelelő vivőanyaggal, példán! steril, pirogft»· mente· vissol fel kell oldani· Be kívánt, a konjsgátom östil·» léén dosirosva és/vagy egy vagy több más hatóanyaggal vagy leképcaősservel együtt dosirosva is klszerolbotő· á kenjagátnm alkalnasásokór használaton meghatározása függ as alkalmasán módjától, as antitest teamé» esetétől· a riporter éa effektor csoporttól, továbbá hegy a készítőéit milyen célból szándékosnak fölhasználni· assz dlagnéslsm-o vagy terápiára és egyéb válteséktél, ilyen a testtömeg ée a beteg kértöstéasto· Tehát a dózist bármilyen alkalmasán esetén általában osükoégea mesetáron— ni, standard eljárások használatával·
Hm a találmány szerinti konjugátumet in vitro dlagnésislios ssánjak, agy erre a felhasználásra a készítmény hagyományos eljárások aUelmasásável adaptálható, példás! a * ·· ···♦ ·« ·7 • · · ♦ · · · · ·· · · · · * · · · ···« · · · · · · • ·♦♦· ··· 99 ♦ ·
Mothods 1» Bnayndegy 84* (1982.) és §2. (377-523·» 198¼) kötetében («Γ·Α· tangón· ée H* vac tűnek!·, Acadenle tre·8, l?8w Tónk) leírtak eserlnt*
A találata? eserlnti konjugátumakat általában agy állltjte old* hogy egy antitestet vagy ennek egy fregmeutonát egy tórhálóaité reageaead reagáltabjuk. tfegjegyaendö, hogy a hálósitó reakció dvégeshető akár jdaett, akár nem jelaett antitestedekulával·
A reakciót általában uegfelelő oldószerben folytatjuk lo| például vtaoa eldóasarben, ilyen a vla» vagy visoa saervetlen vagy asarvoa ddóaserben, példád foesfáb-, sittét- tagy acebáb-pufferben vagy mk keverékébeni vagy vtaoa aserves ddósaerben, ilyen példád a vinne eceten vagy dtaetü-fomanid, bármilyen alkalma· hőmérsékleten, például 0 *ő-tel >0 ®C-igi főképp·» kösd esobahtaórnékleten*
Kegjegyaendő, hogy as ily·» általán·· tipuau térhálóéit· rtekatékbta· ehd as entiteat éa/vagy a riporter éa •f rektor csoportok - ha jelen vannak + ssénoe potenciálisan reaktív csoportot tartalmasnak· rendasertden hálósodén fordulhat elő, amely a termékek heterogén keverékét eredményesheti. SbbiM elkerülésére as általán·· térhálóaltó eódsaer a reagáló anyagoknak és/vagy a reakció feltételeinek * akár egyedüli, akár kombináció· - megfelelő negráleestáaával heOMbAb ΦαχμΑΙε BjLeAXXJLiMhB4áiBS
As egyik váltósat saorint olyan térhálóaitó reagenseket válaesthabunk. amelveknok a funkciós oocnortlal cselek— tlven reagálnak na antitest apecifikus funkció· csoportjaival· esésen példája van esen csoportoknak, példád ilyenek aa entao• ··· · · · · • , V ··· · · · · ··«· · ·<···· • ·♦·· ··· ·· ♦· *15 «reaktív és tiol*reaktiv funkciós ceoporbok · azokat a gye* kprlott szakemberek ismerik (leírásukat lásd például a 173 629 és 175 Q.7 számú európai szabadalmi leírásban» a 2 109 407 száma egyesült királyságbeli szabadalmi leírásban és a eü 88/05433 számon nyilvánosságra hozott namaotköai szabadalmi leírásban) *» amelyek megfelelő feltételek «ellett szelektív módon reagálnak#
Így második változatban, ha az antitest éa/vagy a riporter vagy affélekor osoport olyan potonoiáliae® abektlr csoportokat tartalmaz, amelyek nem kívántak» hegy réoatvagyonek a hálókötósbon, azok megvédbetők még mielőtt a hálósité reakció végbemenőé· A proteinek reaktív csoportjainak védelemére hagyoaátyea eljárásokat használhatunk, a védelmet meg* szüntető standard technikákkal együtt#
Sgy további változatban úgy választhatjuk meg aa antitestet· hogy aa aa egyedi hidfő-halyből legalább egy pé^ rat tartalmazzon a térhálósitáshoz# Saért lebotaégea· hogy részlegesen redukáljunk egy antitestet, példám egy enyhe no* dufcálóazer * mint amilyen a S-eexkapto-etil-amin - használatával úgy, hogy szabad szulfhidriloöoportok keletkezzenek az antitest nehéz láncait összekötő diazulfid hidasból, de közben a molekula többi része lényegében sértetlen meredjen· A ssulfhlArilcsoportok ezután hídfő-helyekként hasanálhatók fel egy tiol-specifikua térhálósitószerrel végzett szelektív reakcióhoz# Egy más megoldás szerint az antitestet kémiai technikákkal omldálhat juk * példám a
173 629 számú európai szabadalmi leírás szerint hogy áldó* hid csoportokat képezzünk a szénhidrát eldalláneckban, amo*
99 ··♦♦ *· ·* ν ♦ · ♦ · ·> · · • « · ♦·· · · 9 · »···· · · ·· · • ·«*· ·······
- u * lyeket ezután tMálósltó reagenssel reagáltaUhattmk a fenti általános leírás szerint·
Egy további alternatív negoldás sserint rekosblnáns SUft technikákkal egyedi hídfőket veaothottink be as antitestbe a bőrhálósító reagenssel való reagáltatás előtt· Így dául egy olyan antitestet hozhatnak létre, amelyben nlndon nehéz lánc csukló szakaszában a cissteinseopertek szánét egyre redukáljuk· let osckásos «ódon «gy érjük el, hogy előeste ezpresszlóz vektorban olyan crperont állítunk elő, anely oly» antitest—aehós láncot kódoló DNS ssekvenelát tartamos* anely* nők a csukló szakasza nemál sódon kapcsolódik az antitestBMbítfkflüLfl CREŰL
Az eporoet úgy állíthatjuk dd, hogy as egyik osztályba tartósé antitestből számozó OSI szakaszt kódoló Dl® szekvenciát egy násik osztályhoz tartósé antitestből ssámasó csukló szakaszt kódoló DNS szekvenciához illeszt jkk (aplioing) Egy aáslk nódszor sserlnt agy állíthatjuk elő as opexent* hegy as egyik osztályhoz tartósé antitest 0H1 donénjét és csukló ssdkaoaát klónowwfc és a oisstolnoseportukslí DNS triplátok ooteót egy ilyen trlpletté váltestat juk helybe irányuló nntanonosiaMl· «4104 «d alanint kódoló ssekvenelálká való nutációkkal· Megfelelő sejtvonalat transsforeálwüt i ite tömi· ezt kte-otteo a transottolált oejtvonalat tenyészt jük, és os előállít ja a kívánt nebós lánc polipeptidet·
Minthogy a vektor ooak a nehéz láne pollpeptldot kódolja» ssükaóg less arra· hogy a aejtvonal szénára negternaljCk a keoplonoBber könnyű láncot· Hogy est elérjek* báron alternatív stratégiát alkslnaábstnnk· ás egyik váltósat sso*17* rlnt a sejtvonalat egy második vektorral traaasfisláMi&t és •a a második vektor egy kORplesenber könnyű láno polipeptidet kódol· Üőnyös» ha a vektorok azonosak - a kódoló aaekvonal* Ókat és a sselakolóo «árkosokét kivéve hegy biztoeitsák amennyire lehetséges» hegy minden pollpaptldláne egyenlően fejesődjék ki·
A második váltósakban a vektor magába feglalhafrőa mlad a kőanyű lánn» mind a nobós láma pollpeptldeket kódoló esakvennlákat· így harmadik váltósat sserlnt olyan gasdasojtet hassnálhatnak, amely texnéssetssorűen asekretál egy kaaplomemtor könnyű lánoot· A vektorok asakkoestéeére sselgáló általános «ódssord és a tenyésstéel «ódssorek jól ismertek (lásd néldádt ltaniatia és * - Molsmiljkr danine· edd spxing Karbon, Wev York. 1982·« Priaroae és öld» Mnslples o£ deao líanlptilatian» BlaakeeU, Ozford, 1980· )· A fonti módomért résslotesehboa ismerteti a WO 89/01974 ssámon nyilvánosságra hozott nensetkösi ssabadalmi leírás·
Mogjogyeasűk» hogy a fent lairt toohmikák átddgo»» kurták bámekkoefh olyan nohós láss — könnyű láno pár előálll— témára· «mely egy oiastolneseparttal rendalkoső esetié esskamat tartalmas· As ilyen sserkosetekot táx^Alósitó reagensad reagáltathatjak a fenti általános leírás szerint és ss alábbi példák saosdat·
As Imént leírtakban hasonló rekonblnáns SRg teeb— Bikákat (lásd a WO 89/01782 szánon nyilvánosságra hozott ne»» setkösi saabadalmi leírást is) alkalmasra» egy antitestmdekda mindegyik nehés lámáéba bevihetünk egy eisztoiaoaoportot egyedi hidfMdyek létesítésére, a téxhálósitó reagensed ·· ···« aa ·· • · · · · · ·
Λ ,·· · · · · • · · · · 4 ···· ·«* ·· ··
-leváló következő reekdóhos, a találmány msodnti konjugálás •leállítása céljából* A leírt médeserekot megfoldőon áldd» göncit formában szintén fel Adót hamsnálni alkalmas kiindulási anyagokhoz, maikor más rekombináns antitestek előállítása kívánatos, például olyan antitesteké, amdyck egyedi hídfőket képesnek a bőrhálósító reagens rémsége· általában ast találtuk, hogy a találmány szerinti vegyületek termelésére végsotb téakálómitó reakciókban, főleg amelyekben as antitest egyedi hídfő-helyeket tartalmas - például mint fent leírtuk - előnyös, ha a bőrhálósító reagenst fdeslegbon reagáltáljd aa antitesttel. Ha Így járunk el, elkerüljük a keromstkötéaek kialakulását és a kitárni antitest terméket jé kitermelésed és tísstasággal állíthatjuk elő· ás olyan térhálósitó reakciók, amelyekben aa antitestet ham·* Báljuk nagyobb koncentrációban (például kétszeres vagy ennél nagyobb feleslegben) a bőrhálósító reagenshez viszonyítva, a találmány egy további jeUeaső jét jelentik.
Ha a találmány szerinti kos legátusokban a riporter vagy offektor csoport egy kdátkötésben lévő fán, agy a ken» jugátum előállításának utolsó lépése a fém bevitelére szolgáló rcdció. A fémet úgy lehet bevezetni, hogy as antitestet egy fémsóval (példád fém-hdogeníddel) reagáltatjuk alkalmam oldóssorben, példád vizes vagy non visoa oldószerben (ilyen például as aaotonitríl, eceten, propilén-karbonát, dlmetll-fonunld vagy dinotil-esulfoxld) bármilyen alkalmsa hőmérsékleten 0 °G—tói 50 °G-ig, példád kösd szobahőmérsékleten.
Aa antitesteket, amelyeket a találmány szerinti kon* áasábmak dőállltásáhos kiindulási seresekként hassnálenk.
• ·· ···· ·· »· • ······♦ • · · ··· » · · ♦ ···. · · · · ♦ · • ···· ··· ·· ·· * 1$ « bagyemányos sódon állíthat jtít elő, például iumonizált állatok sséraáhól vagy előnyösen ayeloaa vagy hibridemé sejtekből vagy rekombináns pKg technikákkal, például a 171 496, 175 494» 194 276 éa 259 400 saámu európai saabadalni leírása* szerint és a WO 89/911974, ’W 89/01781, WO 89/02465 éa wo 89/01789 ásáson nyilvánosságra hozott nemnetkösi szabadalmi leírások szerint· ás antitest Xragmontumok a teljes antitestből állíthatók elő enslaatlkus vagy késiül módszerekkel vagy a két sódsser kombinációjával a szokásos gyakorlatnak megtolalőon, vagy as előbbiekben eulitett rekombináns 3MB technikákkal, esélyekkel - Bogfelelő átdolgozásuk után teljes antitest helyett a fragmentum állítható elő.
A találmány szerinti kan jogát unok előjllitásáhes használt tárhálóeitó reagensek általában hotorofunkoiós bőrhálósító reagensek· A haterofuekolóa reagensek készítésének módszerei jól Ismertek tlásd például ι 2·Τ· Ghose és munkatársai, Mothods in Ensymology, 93·» 280-333· (1983· )] * á találmány szerinti kanjugátumokhoz használt effek.1 tor és riporter csoportok könnyen honzáférhetők (lásd példáüli 2 109 407 száma egyesült királyságbeli szabadalmi leírás· 4 472 Ő09 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás, 175 Ő17 száma európai szabadalmi lairAS és WO 89/04^ és WO 89/0147« számán nyilvánosságra hozott szabadalmi leírások) vagy előállithatók ismert vegyül etekből egyszerű kémiai módosítással, a szokásos technikák használatára! vagy előállithatók ismert kiindulási anyagokból ugyanolyan módszerekkel, mint amelyeket as ismert vegyületek előállítására használmsk.
Az (Ζ), (XX) éa (XXX) általános képletü különleges
- 2ο makrooikllkus eminok a WO 39/01475 és WO 89/01476 számon nyilvánosságra hozott nemzetközi szabadalmi leírásokban ismertetett módszerekkel állíthatók elő·
A riporter és effektor csoportokat hagyományos módszerek használatával kapcsolhatjuk az antitesthez· Tehát például a jódot közvetlenül köthetjük az antitesthez a klór* amin T módszerrel (lásd például a 4 351 647 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírást)» mig más riporter vagy effektor caoportok a riporter vagy effektor csoporton lévő alkalmas funkcióé csoportok reakció ja révén köthetők as antitesthez, standard módszerek segítségével» lásd például a 2 109 407 számú egyesült királyságbeli szabadalmi leírást és a WO 89/01475 és WO 89/01476 ázáson nyilvánosságra hozott nemzetközi szabadalmi leírásokat·
A találmányt az alábbi példák világítják meg» anélkül neonban, hogy ezek korlátoznák a találmány oltalmi körét·
1· példa
a) V(ab«)2 fragmentumok előállítása *72*5 Xgü-böl £©♦ oolchor és munkatársai» Proc· Kati· lead· Sói·» 78·» Mauma
As f(ab*)2 íragmeatoMkat a »71· 3 Xgö-Ml bresslinnel való emésztéssel állítjuk elő. a bromelimt először ék* tiváljuk, asas l»0 mg/al*os oldatát 50 mmol ciazteinnol iák»báljuk 37 °0-on >0 percig 3 amal ΚΛΜ tartalmasé 0»X mólos aoctát pufferben (pH « 5»50). az aktivált broosllnt >M0 (Sephadex 0-25) oszlop és 35 mmol IMA tartalmú 0»l nólos aaotát (pH · 5*50) használatával aótalanitjUk a oiazteln el* távolítására és hozzáadjuk a 172.3 2»0 ag^al koncentrációjú» • a · ugyteosen puffom! készült oidteátes í 1 (tönog/tömeg) » 50 (tömeg/tteog)i onstei Xggl· te onéastést ugyvégoaate, hogy 37 °0-oa 2 érán ét lnkubálunk ég as Xgö teateteUlát I(ab* fragmentummá sse-fiB segítségével, a menta mérésével követjük· Λλ emésstte befejesődéso után aatipetat (enzim inhibitorok) adagolunk (végkonoentrteiói 0,05 mg/tó) te aa elegy pB»jte 6,Ora állítjuk Imi MB*val ez est kővető 8 Septerose rest floe ionoetrélő ktemstogséftetes· te >(08·)^, aa te te a visssemaradt Zg8 átfolyik et oeslopon és a teemelte a nátri»· tea kötődte· Basel a megölte tisztittel lépései as omésstott olegyből oroteéayosea távolítunk el minden tetetünk· b) te y(ab»)a ftegte«toumk ttestitása
A kapott emésztett elegyet előeste 20 nmétes tetem» ben (pH e 7,8) dializáljuk, majd felvisszük PKA1 Septerese Pást flow oszlopra· Az y(ab*)2 átfolyik as oszlopom, míg as te rését és a maradék intakt XgG-t aa oszlop visesstateja· A megkötött anyagot 20 nteloe trism»bon (pH w 7»8) oldott 0,1 mai teCl-ol eluáljuk a mátrixról aa oszlop regenerálása céljából.
e) Kémiailag térhálósított T(abf )g molekulák előállítása á Β72·> etetett >(ab*)t «4 5t0 mg/M teaoootetelte ja oldatban · 2 nmei mi tartól·* 0,15 nőies feaafte paffer (pH « 8,0) - redukáláuk 2-«ioxkapto~otilante hoasás&teával 5 nme! végtoteontaéstóig» >7 ®0-on 30 poréig iskuhálite· A redukáló után a mtette soDhadex ami fteaxmaeia) oihfI énen <* melyet előzőleg 2 msei Btetet tartalmazó 0,1 nel oitromssv/0,2 mól WajHPO* (pH « 6,0) oldattal testnek egyensúlyba • ·
sételakte|te· eldtnfc tel dlaetil-forma* midbe* 72 szel véteeaeeeteteiélg ée hozzáadjuk a txdssoa re* dukált yab’SK -hoz, 0,9 emel szintig (ee^öaalitőleg 22-ezo· sem feleslegben a tltsAlksté tlel csoportokhoz képest)# ás elegyet 90 partig lakUbáM* állasáé keverés mellett esőbehteéroékloten, W^eMV^tf****11** álunk készé 9 omol vég— keteesteteteig# lautte tovább tekteáXjfe >0 percig, majd eótalanltjte a ssaimá tartalma 0,1 mai citroessv/0,2 mól Ik^teg olást segítségével* a maleUldáel reagáltatott PabMt (teb*Ml) assstel hossásdjuk frissen készített Pak*SMos 1>1 t 1,0 Pabteal ι Kb*SK moláris esteyban, majd as elegyet sssbakteéssteletes, állaséé keverés mellett, 20 érám át laka» báljuk· á téAálósltett P(ab»)^t a reakolóelegyböl OM gél* szűréssel tlastltjuk·
pl SOO mmélee jód-aoetamiáot és 15 peréig reagálhatjuk# á redukált és alkilesott mintát esette ma éf 25® htezaálatával analizáljuk te a taekstegresste a százalékos összetételt inteateltesal hitánué — * a kémiailag térhálósított mitkóla 8,62 perces setemiés léével oldódik le, míg a roagálsb* Ite Vak* késtek, 9,4® poroméi, standard KPDO feltételek melletti átfolyási sebességi 1 ml/pere, mobil fázisa0,2 mólee , foszfát puffor (pH . 7,0)# A térhálósított p(ab>)^t tisztítás ette Is megvizsgáltok sedukálé aps-FAűE segítségével, étel * 93 az y(ab*)a egy keresztkötéses Η· - Μ· sávot Qtel * 46*000) és egy L sávot Qlri ~ 22,000) mutatott, mig a kontroll a eső· lése· H· Qtei 23·000) és X> (Mri 22· 000) sávot mutatta·
A reakciót as l»6-bis»«alelmid<>4iaxán helyett a következő térhálósitó reagensekkel megismételtük! I?,F*-0-dL· salolAlái M as·—el-*14?4*—! és llsÍA<4Ü4MHBalolaáA·
A fontlek szerint előállított térhálós antitesteket klórjain T módszerrel jódozzuk, hogy megkapjuk a találmány szerinti konjugált antitestet· melyben a jelző a jód és a hldképső csoport vagy az l,6-blaa-maleimidt>4iaxán vagy az Π,Κ^-0-fenilén-diiaalelmid vagy a blssHmaleimid-metiléter vagy a llsin-blsa-malelmld, amelyek hozzákapcsolódnak az antitest mindegyik nehéz láncához a csbkló szakaszban jelenlévő ciszteln hldfŐ-helyeken keresztül.
2· példa
A példa a kínéra 972*3 fab» delta cys előállítását Ismerteti, amelyet vagy as 1,6-blaz-malelmido-haxánnal vagy a lisia-blss-maloimiddal tézhálósitunk. a kimére 97263 fab* delta cys kiindulási anyagot a WO 89/91974 éa a WO 09/01963 számon nyilvánosságra hozott nemzetközi szabadalmi leírások· ben Ismertetett módszerek szerint állitottto elő·
A kiméra 972*3 fab’ delta oys 0*96 mmol citrossavst és 2 mmol EDSA-t tartalmazó 0,1 mólos nátrlnn«aoetát puffor* rol (pH « 6,0) készült l»9»2,0 mg/ml koncentrációjú oldatát 2-aerkapto-etll-aiain hozzáadásával - 3 omol vétoenaentrásiólg · redukáljuk és 37 9O-on porcig inkubáljuk· Redüfccló után a mintákat sophadex 025 0karmaela) oszlopon, amelyet előzőleg 2 mmol El®A-t tartalmazó 0,1 mól nátriam-acetát-cltrét • ·· ···· ·· ·· • *······ • · · · · · · · · · ····· · · · · · • ······· ·· ··
- 24 pufferrel (pH « 6,0) hoztunk egyensúlyba· sótalanitjük· k lizin-bisz-maleimidot vízben feloldjuk és hozzáadjuk a frissen redukált ?ab*-S&*hez, 3,8 ásol konoentráoló mellett (körülbelül 40-szeres felesleg a titrálható tlel eső» portokhoz viszonyítva), majd az elegyet szobahőmérsékleten inkubáljuk 60 poráig állandó keveréssel· KEStil-aalolmidot adunk az elcgybez 9 mmol végkonoentráoíóig és további 30 poréig inkubálumk mielőtt foszfáttal paffOrolt konyhasó segítségével (pH * 7,5) eótalanituak· k malciniddel reagált Vab’-t (VaMmal) rögtön hozzáadjuk egy frissen készített rab*8S sarashoz a kövotkoső tömegarázybani 1*1 t lto yab*nal t fab*8S óm szobahőmérsékleten állandó keverés mellett 20 órán át lnkubálunk* k térhálósított reekolóolegy Öaasotétolót egy éjSMkán át tartó InkUbálás után 92X0 gélssürésael határozzuk meg· á reákolóelegy 10 jel-ót hozzáadjuk 10 jel 200 «mólos SMzaxkapto-atil-aminhoz ós 15 percig inkubáljuk· Ezután 20 pl 800 nnólOB Jód-aoetroidot adunk a rockolóelogyhes ós 19 poráig reagáltatJuk· 1 redukált, alkilezett mintát esetén BW-vel (Zorbax d>-290 gólssürő oazlopjahalizáljuk ós a kronatogrmsa bél a százalékos összetételt integrálással határozzuk meg· 1 lizin-bioz-malelmiddal térhálósított anyag 8,62 perces rotenelós idővel oluálódik· alg a' rmagélatlan láb· később» 9,48 percnél· standard HPLO feltételek melletti átfolyási sebességi 1 ml/pero, mobil fázlsi 0,2 mólos foszfát puffer· k térhálósított anyagot tisstitás után Is megvizsgáltuk redukáló SBg-riŐS módszerrel, amivel egy kcrosztkötésü Η’ - H* sávot Qtri 48*000) és egy 1 sávot (Mii 22·ooo) kaptunk, mig a • · · ······ · • · · · · ·· ·· · * ······· · · ·· * 29 » kontroll a zzekáoos 2* 0<ri 2>*000) éa L (Mr» 22* (XX)) sávot sutatta*
A reAclét a válts llzin-blsfaaleiAld helyett száras dlmotil-foriBamidban oldott l,6*bls»*«alolmiőo-boacánnal soglamételtők· hogy blsz-saleisido-hexáiinal térhálósított antitest tormákét kgp jumk*
A kát kísérletben kapott texaékokot klórjain f mód· szerről jédossukt hogy a találmány szerinti konjügált antl· testhez jussunk, amelyben a jelző a jód éa a hidképzö osoport ▼agy a lisin-biaz-ealeiaid vagy as lt6*biss-euaeiai4o-bexán, amelyek ez antitest aindegyik nehéz láncához hozoákaposolódnsk a lángokban lévő ogyotlon oiszteinosoporton korosstül*
3· példa
A 2. példában leirt kísérleteket segisaételjük, kivéve hogy mindegyik térhálósitót hossáaáj ok a redukált yab*8B»&os okvimeláris arányban» 2,2 ι 1 fab^QH t bőrhálósító· A reakoióelegTOt 37 eOon 60 poréig inkubáljuk, májé a tér· hálóaltott anyagot a 2* példában leírt módon izoláljuk* ás Imoláit tormékot 8PS»PAGE anallalaeol vássgáltuk, és as a 2· példa szerinti anyaggal azonosnak bizonyult· As őst követő 2« példa szerinti jódosás jelzott térhálóé antitestet eredmé nye zott*
Claims (16)
- Szabadalmi igénypontok1· Térhálósított antitoet konjngátum, azzal j o 1 * löméivé , hagy agy olyan jelzett antitest molekulát tartalmas, amely legalább egy nem-diszulfid láneközti hidat tartalmaz, és az említett Mid egy vagy több olyas hídfő-helynél kapcsolódik aindogyik Idáéhoz, SMlyCek) as antitest a»· tlgénkötö doaénjoln kitti helyezkedik (helyeakadnék) el*
- 2« dz 1« Igénypont szerinti konjugátam, azzal p l leméivé, hogy a hídfő-hely vagy amino- vagy ssulfhid» ril- vagy karboxil- vagy fenolon vagy mán aromás vtgr hotoro* aromás funkoiős csoport, amely egy «alnosavcaoport oldallá»/ oán találhatő· > á 2· igénypont aeerlntl keejegátom· aszal j ο 1 < 1 o a o s v · , hogy as említett hídfő egy niulfhidrilasopert, amely a oissteiaosoport oldallánsán helyezkedik el· ♦•AJ· igénypont snesintl konjegátum, aszal Jel1e m a a v e « » aj estei na enmoib oindnn nobáslánAban a csokié szakaszban van·J. A 4. igénypont szerinti kenjugátum, ássál p 1 < lonosvo, hegy a olsstoineoeport a esnklö enakastbsn lévő egyetlen oisstelnoseport·
- 6. is előző igénypontok bármelyike szerinti konjngátnm, azzal jellonesve, hegy as antitest egy rekombináns entitást*
- 7· is olőső igénypontok bármelyike szerinti konjugátnm, ássál jellom esve, hogy az antitest egy antitest fragmentum· • 27 • ····«··« ·· • ··· ···· • · · · ·» · ·· · ···· · · · ·· · • ······· ·· ·· β» A 7* ‘igénypont szerinti konjugátum, azzal jellemezt e , hegy a fragmentum egy E(ab· )2 fragmentum·
- 9« As előző igénypontok bármelyike szerinti kenjegáton, aszal jellemezve , hogy benne a nem-ál* szulf iá láoeközti hid egy homo- vagy beterof unkoiós bőrhálósító reagens maradéka·
- 10. az előző Igénypontok bármelyike szerinti konjugátum, azzal jellemezve , hogy a bennelévő jelzett antitest molekula egy olyan antitest molekula, amelyhez egy riporter és egy effektor osoport kapcsolódik·
- 11· A 10· igénypont szerinti konjugátum, azzal jellemezt e , hogy a riporter vágy as effektor osoport vagy radioatftlld vagy kelátkötésben lévé fém vagy egy fluoreszkáló vegyület vagy egy olyan vegyület, amely Mt vagy W spektroszkópiával mutatható ki, vagy egy farmakológiái ágens vagy egy enzim vagy egy hormon·
- 12· A 11· igénypont szerinti koajogátun, aszal jellemezve , hogy a riporter vagy az effektor asoport vagy radionUklid vagy kelátkötésben lóvé fém·
- 13· A 12· igénypont sserdnti konjugátum, azzal jellemezve, hogy a radlonuklid egy jód izotóp*
- 14· A 12« igénypont szerinti konjugátum, azzal jellemezve , hogy a kelátkosplekbon lóvé fém egy 2-tól 8-ig terjedő koordináoiós ssánu, két vagy bármi pozitív töltésű fém és egy sokfogu kelátképsó ágens kelét ja·
- 15« A 14· igénypont sserinti konjugátua, aszal jellemezve, hogy a sokfogu kelátképző ágens vagy aoiklusos vagy oiklusos poliamin vagy poliétor vagy poliamidA vagy porfirin vagy egy kerbooikluscz Másmasák*
- 16· A 15· Igtaypekt sseriati koajogátsn* ássál j · 1 1 o a o s v e « hogy as aoiklusos pollmain egy pali»
- 17· A 15· igénypont ssorlKtl konjugátum* ássál j ο 1 1 e,n a ovo » hogy a ciklusos poliszán agy olklikos tri-asa vagy tetra»asa osásmasék· .IS· Gyógyszerkészítmény, azzal jelleme eve * hogy egy jelzett antitest molekulát tartalaas* amelyben legalább egy nenHdlazulfld lánoköstl hid van, ás as említett híg egy vagy több olyan hiddó-halynél kapcsolódik mindegyik lánohős, amely (eh) as antitest antigétikötö doménjoia kívül helye·» kedlk (helyeekednek) el* továbbá, hogy · készítmény egy vagy több gyógysseréssoti ssenpontból elfogadott hordozót vagy vlvőanyagot tartalmas·
- 19· Kijárás antitest közjogát» - amely olyan jelnett antitest malokulát tartalmast amely legalább agy nem*d!» szulfid lánekösti hidat foglal magába* és as említett hid egy vagy több* as antitest antlgéhkötó doménjeln kívül élbolyé·» kedd Mflfö helynél kopeselédlk mindegyik lánshoz — előáll Ifi— tására, aszal jelleme s v o * hogyr egy téshálósitó reagenst egy antitesttel roagáltatucfc·
- 20. A 19· igénypont aserAntl eljárás* aszal j öllé m o a v e* hogy as antitest feleslegben van a táskáié* oltó reagonabes vlssosyiWa·
- 21· Antitest konjsgátom* analy hasán vagy animál beteg késelésére vagy diagnóslsára alkalmazható, ássál jel* o m · s v o * hogy a jelsett antitest nolekula legalább • · • · «··*» • 29 * agy nen-dlrziflfid lánoközti hidat tartalaai, éa az említett híd agy vagy több olyan hidfö-helynél kapcsolódik mindegyik lánehoz, amely (ek) az antitest antlgénkötö dononjén kívül helyezkedik, (helyezkednek) el·
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB898903021A GB8903021D0 (en) | 1989-02-10 | 1989-02-10 | Chemical compounds |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU901927D0 HU901927D0 (en) | 1991-03-28 |
| HUT56289A true HUT56289A (en) | 1991-08-28 |
Family
ID=10651471
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU901927A HUT56289A (en) | 1989-02-10 | 1990-02-12 | Crosslinked antibodies and process for their production |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0385601B1 (hu) |
| JP (1) | JP2975677B2 (hu) |
| KR (1) | KR910700076A (hu) |
| AT (1) | ATE123653T1 (hu) |
| AU (1) | AU636872B2 (hu) |
| CA (1) | CA2026313A1 (hu) |
| DE (1) | DE69020007T2 (hu) |
| GB (2) | GB8903021D0 (hu) |
| HU (1) | HUT56289A (hu) |
| IE (1) | IE67448B1 (hu) |
| IL (1) | IL93346A0 (hu) |
| NO (1) | NO904368L (hu) |
| NZ (1) | NZ232489A (hu) |
| WO (1) | WO1990009196A1 (hu) |
| ZA (1) | ZA90982B (hu) |
Families Citing this family (30)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5010176A (en) * | 1988-11-10 | 1991-04-23 | Eli Lilly And Company | Antibody-drug conjugates |
| US5194594A (en) * | 1990-09-07 | 1993-03-16 | Techniclone, Inc. | Modified antibodies |
| GB9422383D0 (en) * | 1994-11-05 | 1995-01-04 | Wellcome Found | Antibodies |
| US5922618A (en) * | 1996-03-04 | 1999-07-13 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Dye-labeled antibody conjugate and preparation method thereof |
| US5990286A (en) * | 1996-12-18 | 1999-11-23 | Techniclone, Inc. | Antibodies with reduced net positive charge |
| US6306393B1 (en) * | 1997-03-24 | 2001-10-23 | Immunomedics, Inc. | Immunotherapy of B-cell malignancies using anti-CD22 antibodies |
| DE19911329A1 (de) * | 1998-03-27 | 2000-09-21 | Benes Ivan Friedrich | Humantherapeutisch anwendbares Radioimmunkonjugat und Verfahren zu seiner Herstellung |
| GB9809951D0 (en) | 1998-05-08 | 1998-07-08 | Univ Cambridge Tech | Binding molecules |
| US9770517B2 (en) | 2002-03-01 | 2017-09-26 | Immunomedics, Inc. | Anti-Trop-2 antibody-drug conjugates and uses thereof |
| US9707302B2 (en) | 2013-07-23 | 2017-07-18 | Immunomedics, Inc. | Combining anti-HLA-DR or anti-Trop-2 antibodies with microtubule inhibitors, PARP inhibitors, bruton kinase inhibitors or phosphoinositide 3-kinase inhibitors significantly improves therapeutic outcome in cancer |
| US10058621B2 (en) | 2015-06-25 | 2018-08-28 | Immunomedics, Inc. | Combination therapy with anti-HLA-DR antibodies and kinase inhibitors in hematopoietic cancers |
| CA2853138A1 (en) | 2011-12-05 | 2013-06-13 | Immunomedics, Inc. | Therapeutic use of anti-cd22 antibodies for inducing trogocytosis |
| US9757458B2 (en) | 2011-12-05 | 2017-09-12 | Immunomedics, Inc. | Crosslinking of CD22 by epratuzumab triggers BCR signaling and caspase-dependent apoptosis in hematopoietic cancer cells |
| US10206918B2 (en) | 2012-12-13 | 2019-02-19 | Immunomedics, Inc. | Efficacy of anti-HLA-DR antiboddy drug conjugate IMMU-140 (hL243-CL2A-SN-38) in HLA-DR positive cancers |
| US10744129B2 (en) | 2012-12-13 | 2020-08-18 | Immunomedics, Inc. | Therapy of small-cell lung cancer (SCLC) with a topoisomerase-I inhibiting antibody-drug conjugate (ADC) targeting Trop-2 |
| US9492566B2 (en) | 2012-12-13 | 2016-11-15 | Immunomedics, Inc. | Antibody-drug conjugates and uses thereof |
| CA2884313C (en) | 2012-12-13 | 2023-01-03 | Immunomedics, Inc. | Dosages of immunoconjugates of antibodies and sn-38 for improved efficacy and decreased toxicity |
| US9931417B2 (en) | 2012-12-13 | 2018-04-03 | Immunomedics, Inc. | Antibody-SN-38 immunoconjugates with a CL2A linker |
| ES2819573T3 (es) | 2012-12-13 | 2021-04-16 | Immunomedics Inc | Método para producir inmunoconjugados de anticuerpo-SN-38 con un enlazador CL2A |
| US10413539B2 (en) | 2012-12-13 | 2019-09-17 | Immunomedics, Inc. | Therapy for metastatic urothelial cancer with the antibody-drug conjugate, sacituzumab govitecan (IMMU-132) |
| US10137196B2 (en) | 2012-12-13 | 2018-11-27 | Immunomedics, Inc. | Dosages of immunoconjugates of antibodies and SN-38 for improved efficacy and decreased toxicity |
| US11253606B2 (en) | 2013-07-23 | 2022-02-22 | Immunomedics, Inc. | Combining anti-HLA-DR or anti-Trop-2 antibodies with microtubule inhibitors, PARP inhibitors, Bruton kinase inhibitors or phosphoinositide 3-kinase inhibitors significantly improves therapeutic outcome in cancer |
| WO2016172427A1 (en) | 2015-04-22 | 2016-10-27 | Immunomedics, Inc. | Isolation, detection, diagnosis and/or characterization of circulating trop-2-positive cancer cells |
| US10195175B2 (en) | 2015-06-25 | 2019-02-05 | Immunomedics, Inc. | Synergistic effect of anti-Trop-2 antibody-drug conjugate in combination therapy for triple-negative breast cancer when used with microtubule inhibitors or PARP inhibitors |
| CA3011372A1 (en) | 2016-02-10 | 2017-08-17 | Immunomedics, Inc. | Combination of abcg2 inhibitors with sacituzumab govitecan (immu-132) overcomes resistance to sn-38 in trop-2 expressing cancers |
| JP7379795B2 (ja) | 2016-04-27 | 2023-11-15 | イミューノメディクス、インコーポレイテッド | チェックポイント阻害薬に再発／耐性を示す腫瘍を治療するための抗Ｔｒｏｐ－２－ＳＮ－３８抗体薬物複合体の効果 |
| CN110392570A (zh) | 2017-03-27 | 2019-10-29 | 免疫医疗公司 | 用沙妥珠单抗格维替康和rad51抑制剂治疗表达trop-2的三阴性乳腺癌 |
| WO2018187074A1 (en) | 2017-04-03 | 2018-10-11 | Immunomedics, Inc. | Subcutaneous administration of antibody-drug conjugates for cancer therapy |
| CN111876460A (zh) * | 2020-08-17 | 2020-11-03 | 郑州伊美诺生物技术有限公司 | 鼠单抗IgG2a F(ab`)2的制备方法 |
| CN117466980A (zh) * | 2023-11-02 | 2024-01-30 | 浙江普罗亭健康科技有限公司 | 基于多肽链骨架应用于金属抗体标记的负载金属缀合物及其应用 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4751286A (en) * | 1985-11-19 | 1988-06-14 | The Johns Hopkins University | Protein label and drug delivery system |
| GB8603537D0 (en) * | 1986-02-13 | 1986-03-19 | Parker D | Conjugate compound |
| GB8720833D0 (en) * | 1987-09-04 | 1987-10-14 | Celltech Ltd | Recombinant dna product |
-
1989
- 1989-02-10 GB GB898903021A patent/GB8903021D0/en active Pending
-
1990
- 1990-02-09 ZA ZA90982A patent/ZA90982B/xx unknown
- 1990-02-11 IL IL93346A patent/IL93346A0/xx unknown
- 1990-02-12 JP JP2503355A patent/JP2975677B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1990-02-12 EP EP90301442A patent/EP0385601B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-02-12 IE IE49390A patent/IE67448B1/en not_active IP Right Cessation
- 1990-02-12 NZ NZ232489A patent/NZ232489A/en unknown
- 1990-02-12 CA CA002026313A patent/CA2026313A1/en not_active Abandoned
- 1990-02-12 HU HU901927A patent/HUT56289A/hu unknown
- 1990-02-12 AU AU50810/90A patent/AU636872B2/en not_active Ceased
- 1990-02-12 DE DE69020007T patent/DE69020007T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1990-02-12 AT AT90301442T patent/ATE123653T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-02-12 WO PCT/GB1990/000214 patent/WO1990009196A1/en active Application Filing
- 1990-02-12 KR KR1019900702232A patent/KR910700076A/ko not_active Application Discontinuation
- 1990-10-09 GB GB9021895A patent/GB2236529B/en not_active Revoked
- 1990-10-09 NO NO90904368A patent/NO904368L/no unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO904368L (no) | 1990-12-10 |
| EP0385601A3 (en) | 1990-11-14 |
| KR910700076A (ko) | 1991-03-13 |
| DE69020007T2 (de) | 1995-11-23 |
| GB8903021D0 (en) | 1989-03-30 |
| GB2236529A (en) | 1991-04-10 |
| IE67448B1 (en) | 1996-04-03 |
| IE900493L (en) | 1990-08-10 |
| WO1990009196A1 (en) | 1990-08-23 |
| DE69020007D1 (de) | 1995-07-20 |
| AU636872B2 (en) | 1993-05-13 |
| ZA90982B (en) | 1991-10-30 |
| EP0385601B1 (en) | 1995-06-14 |
| AU5081090A (en) | 1990-09-05 |
| EP0385601A2 (en) | 1990-09-05 |
| CA2026313A1 (en) | 1990-08-11 |
| JP2975677B2 (ja) | 1999-11-10 |
| ATE123653T1 (de) | 1995-06-15 |
| IL93346A0 (en) | 1990-11-29 |
| HU901927D0 (en) | 1991-03-28 |
| GB2236529B (en) | 1993-03-31 |
| GB9021895D0 (en) | 1990-11-21 |
| NO904368D0 (no) | 1990-10-09 |
| NZ232489A (en) | 1992-09-25 |
| JPH03504645A (ja) | 1991-10-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HUT56289A (en) | Crosslinked antibodies and process for their production | |
| CN105085681B (zh) | 靶向人前列腺特异性膜抗原的j591微抗体和双抗体 | |
| EP2593142B1 (en) | Multifunctional antibody conjugates | |
| US6511663B1 (en) | Tri- and tetra-valent monospecific antigen-binding proteins | |
| NO169947B (no) | Fremgangsmaate for fremstilling av et monoklonalt antistoff til et tumorassosiert antigen | |
| US6509451B1 (en) | Cross-linked antibodies and processes for their preparation | |
| CN109952375B (zh) | 新型抗人MUC1抗体Fab片段 | |
| AU7788787A (en) | Advanced anticancer therapy and cytotoxic medicaments for its implementation | |
| CN106659783A (zh) | Her2抗体‑药物缀合物 | |
| CN110545852B (zh) | 非肽聚合物接头化合物、包含该接头化合物的缀合物及制备该接头化合物和缀合物的方法 | |
| JPS6270377A (ja) | ハプテンで修飾された診断薬および治療薬の抗体コンプレツクス | |
| WO1992022583A2 (en) | Tri- and tetra-valent monospecific antigen-binding proteins | |
| KR20030097883A (ko) | 세포독성 ｃｄ44 항체 면역접합체 | |
| JP2975676B2 (ja) | 架橋抗体とその製法 | |
| CA2128544A1 (en) | Humanised antibodies directed against a33 antigen | |
| EA010653B1 (ru) | Нацеливание на опухолевую сосудистую сеть при использовании меченного радиоактивным изотопом антитела l19 к ed-b фибронектину | |
| CN115461354A (zh) | 用于分子缀合或改造的串联重复癌症靶向肽及其在癌症治疗诊断学中的用途 | |
| JPH05294994A (ja) | アクチノマイシンｄ複合体の製造方法 | |
| US5714149A (en) | Crosslinked antibodies and processes for their preparation | |
| JP2003513985A (ja) | 天然に存在しないエナンチオマー（Ｌ−ビオチン）を結合する抗体および該抗体のターゲッティング薬剤（ａｇｅｎｔ）としての使用 | |
| Yamaguchi et al. | Production, binding and cytotoxicity of human/mouse chimeric monoclonal antibody‐neocarzinostatin conjugate | |
| JPS62175500A (ja) | 修飾糖タンパク質、当該修飾糖タンパク質の製造方法、当該修飾糖タンパク質を含む免疫毒素および当該免疫毒素を有効成分として含む抗ガン剤組成物 | |
| US20240058467A1 (en) | Anti-ror1 antibody conjugates, compositions comprising anti ror1 antibody conjugates, and methods of making and using anti-ror1 antibody conjugates | |
| TW202408589A (zh) | 抗ror1抗體及抗體結合物、包含抗ror1抗體或抗體結合物之組合物，及製造及使用抗ror1抗體及抗體結合物之方法 | |
| CA2219961A1 (en) | Vasopermeability enhancing peptide of human interleukin-2 and immunoconjugates thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| DFC9 | Refusal of application |