JP2975676B2 - 架橋抗体とその製法 - Google Patents
架橋抗体とその製法Info
- Publication number
- JP2975676B2 JP2975676B2 JP2503004A JP50300490A JP2975676B2 JP 2975676 B2 JP2975676 B2 JP 2975676B2 JP 2503004 A JP2503004 A JP 2503004A JP 50300490 A JP50300490 A JP 50300490A JP 2975676 B2 JP2975676 B2 JP 2975676B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- conjugate according
- cross
- antibody
- antibody fragment
- reporter
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
- A61K51/1093—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody conjugates with carriers being antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6875—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody being a hybrid immunoglobulin
- A61K47/6877—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody being a hybrid immunoglobulin the antibody being an immunoglobulin containing regions, domains or residues from different species
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
- A61K51/1045—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against animal or human tumor cells or tumor cell determinants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
- A61K51/1084—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody the antibody being a hybrid immunoglobulin
- A61K51/1087—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody the antibody being a hybrid immunoglobulin the immunoglobulin comprises domains from different animal species, e.g. chimeric immunoglobulins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2123/00—Preparations for testing in vivo
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Ultra Sonic Daignosis Equipment (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 発明の分野 本発明は、架橋抗体、それを含有する組成物、その製
法、ならびにその医薬としておよび診断のための使用に
関する。
法、ならびにその医薬としておよび診断のための使用に
関する。
発明の背景 抗体がレポーターまたはエフェクター基に共有結合し
ている抗体接合体は、診断に、また限られた範囲ではあ
るが治療に使用されてきた。抗体は一般的に、特定の標
的抗原に対する親和性および特異性に基づいて選択さ
れ、使用時にはそれは所望の部位へレポーターまたはエ
フェクター基を送達し、そこにある時間維持できるもの
でなければならない。しかしながら実際には、抗体に、
その抗原への結合能および／または特異性を損うことな
くレポーターまたはエフェクター基を結合させることは
困難で、抗体接合体の有効性は低下してしまう。
ている抗体接合体は、診断に、また限られた範囲ではあ
るが治療に使用されてきた。抗体は一般的に、特定の標
的抗原に対する親和性および特異性に基づいて選択さ
れ、使用時にはそれは所望の部位へレポーターまたはエ
フェクター基を送達し、そこにある時間維持できるもの
でなければならない。しかしながら実際には、抗体に、
その抗原への結合能および／または特異性を損うことな
くレポーターまたはエフェクター基を結合させることは
困難で、抗体接合体の有効性は低下してしまう。
二重特異性異種二量体抗体としてはFab′フラグメン
トがチオエーテル結合を介して連結しているものがすで
に記載されている（Glennie,M.J.ら、J.Immunol.,139:2
367,1987）。また、フルオレセイン誘導体、クラベセイ
ンがジスルフィド結合で連結している抗体も記載されて
いる（Packard,B.P.ら:Biochemistry,25:3548,1986）。
トがチオエーテル結合を介して連結しているものがすで
に記載されている（Glennie,M.J.ら、J.Immunol.,139:2
367,1987）。また、フルオレセイン誘導体、クラベセイ
ンがジスルフィド結合で連結している抗体も記載されて
いる（Packard,B.P.ら:Biochemistry,25:3548,1986）。
本発明者らは、得られた化合物の特異性を変化させな
いで抗体にレポーターまたはエフェクター基を結合させ
ることが可能であることを見出した。これによって、修
飾抗体の抗原結合能も、非修飾抗体に比べて有利に増大
される。in vivoにおいては、この型の修飾抗体はま
た、良好な血液クリアランスを有し、腫瘍が存在する場
合には有利な高い腫瘍：血液および腫瘍：骨比を与え
る。本発明者らはこれを、抗原結合ドメインから離され
た架橋結合において抗体の少なくとも２個の鎖の間にレ
ーポーターまたはエフェクター基を結合させることによ
って達成された。
いで抗体にレポーターまたはエフェクター基を結合させ
ることが可能であることを見出した。これによって、修
飾抗体の抗原結合能も、非修飾抗体に比べて有利に増大
される。in vivoにおいては、この型の修飾抗体はま
た、良好な血液クリアランスを有し、腫瘍が存在する場
合には有利な高い腫瘍：血液および腫瘍：骨比を与え
る。本発明者らはこれを、抗原結合ドメインから離され
た架橋結合において抗体の少なくとも２個の鎖の間にレ
ーポーターまたはエフェクター基を結合させることによ
って達成された。
発明の要約 すなわち、本発明は、その一態様によれば、１個また
は２個以上のレポーターまたはエフェクター基を含有す
る少なくとも１個の分間鎖架橋を有する抗体分子からな
り、その架橋は抗体の抗原結合ドメインの外部に位置す
る１個または２個以上の架橋部位で各鎖に結合している
架橋抗体接合体を提供する。
は２個以上のレポーターまたはエフェクター基を含有す
る少なくとも１個の分間鎖架橋を有する抗体分子からな
り、その架橋は抗体の抗原結合ドメインの外部に位置す
る１個または２個以上の架橋部位で各鎖に結合している
架橋抗体接合体を提供する。
本発明の抗体接合体においては、分子間鎖架橋は、抗
体分子内の任意の重鎖または軽鎖を、同一分子内の１個
または２個以上の他の重鎖および／または軽鎖に連結す
る。しかしながら、好ましくは、架橋は２個の鎖とくに
２個の重鎖を連結する。このような１個の架橋をもつ接
合体が好ましいが、レポーターまたはエフェクター基を
含む２個以上の分子間鎖基が存在してもよい。
体分子内の任意の重鎖または軽鎖を、同一分子内の１個
または２個以上の他の重鎖および／または軽鎖に連結す
る。しかしながら、好ましくは、架橋は２個の鎖とくに
２個の重鎖を連結する。このような１個の架橋をもつ接
合体が好ましいが、レポーターまたはエフェクター基を
含む２個以上の分子間鎖基が存在してもよい。
各抗体鎖中の架橋部位は一般に、その鎖のアミノ酸残
基形成部分であるが抗原結合ドメインには直接関与しな
い側鎖に存在する。適当なアミノ酸には、アミノ、スル
フヒドリル、カルボキシル、フェノールまたは他の芳香
性もしくは異項環芳香性官能基を含む側鎖をもつアミノ
酸が包含される。その官能基によって分子間鎖架橋が連
結される。これらの型の特定のアミノ酸残基としては、
リジン、システイン、グルタミン酸、アスパラギン酸お
よびチロシン残基を挙げることができる。別法として、
架橋部位は、抗体に結合した炭水化物残基、とくに分子
間鎖架橋が連結できる少なくとも１個のアルデヒド基を
含有する酸化炭水化物残基にあってもよい。
基形成部分であるが抗原結合ドメインには直接関与しな
い側鎖に存在する。適当なアミノ酸には、アミノ、スル
フヒドリル、カルボキシル、フェノールまたは他の芳香
性もしくは異項環芳香性官能基を含む側鎖をもつアミノ
酸が包含される。その官能基によって分子間鎖架橋が連
結される。これらの型の特定のアミノ酸残基としては、
リジン、システイン、グルタミン酸、アスパラギン酸お
よびチロシン残基を挙げることができる。別法として、
架橋部位は、抗体に結合した炭水化物残基、とくに分子
間鎖架橋が連結できる少なくとも１個のアルデヒド基を
含有する酸化炭水化物残基にあってもよい。
とくに好ましい架橋部位は、システイン残基のスルフ
ヒドリル基、たとえば通常分子間ジスルフィド橋として
機能する部位である。この型の好ましい部位としては、
抗体の蝶番領域における重鎖に存在するシステイン残基
のスルフヒドリル基がある。
ヒドリル基、たとえば通常分子間ジスルフィド橋として
機能する部位である。この型の好ましい部位としては、
抗体の蝶番領域における重鎖に存在するシステイン残基
のスルフヒドリル基がある。
他の好ましい架橋部位は、正常な免疫グロブリンには
存在しないが、以下に記載するような組換えDNA技術の
使用によって導入されたアミノ酸残基の側鎖にあっても
よい。このような部位にはシステインおよびリジン残基
のそれぞれスルフヒドリル基およびアミノ基が包含され
る。
存在しないが、以下に記載するような組換えDNA技術の
使用によって導入されたアミノ酸残基の側鎖にあっても
よい。このような部位にはシステインおよびリジン残基
のそれぞれスルフヒドリル基およびアミノ基が包含され
る。
本発明の接合体中の分子間鎖架橋は一般的には所望の
任意の長さまたは組成とすることができる。適当な架橋
には、ホモまたはヘテロ官能性架橋試薬の残基、とく
に、１個または２個以上のレポーターまたはエフェクタ
ー基を含有するホモまたはヘテロ二官能性架橋試薬の残
基が包含される。すなわち、架橋は、２個またはそれ以
上の架橋部位を連結するものである。特定の架橋として
は、任意に置換された多価、とくに２価の、脂肪族、芳
香族または芳香族脂肪族化合物のラジカルが包含され
る。
任意の長さまたは組成とすることができる。適当な架橋
には、ホモまたはヘテロ官能性架橋試薬の残基、とく
に、１個または２個以上のレポーターまたはエフェクタ
ー基を含有するホモまたはヘテロ二官能性架橋試薬の残
基が包含される。すなわち、架橋は、２個またはそれ以
上の架橋部位を連結するものである。特定の架橋として
は、任意に置換された多価、とくに２価の、脂肪族、芳
香族または芳香族脂肪族化合物のラジカルが包含され
る。
分子間鎖架橋は一般に、非ジスルフィド分子間鎖架橋
であることが好ましい。非ジスルフィドの語は、抗体に
通常見出される型のＳ−Ｓ架橋は排除することを意図す
るものである。
であることが好ましい。非ジスルフィドの語は、抗体に
通常見出される型のＳ−Ｓ架橋は排除することを意図す
るものである。
分子間鎖架橋は一般に、レポーターまたはエフェクタ
ー基と共有結合している。すなわち、レポーターまたは
エフェクター基は架橋構造と一体の部分を形成する。分
子間鎖架橋はたとえば、次の構造をとることができる。
ー基と共有結合している。すなわち、レポーターまたは
エフェクター基は架橋構造と一体の部分を形成する。分
子間鎖架橋はたとえば、次の構造をとることができる。
〔−X1−〕ｍ−Y1−Ｅ−Y2−〔−X2−〕ｎ 式中、Ｅはレポーターまたはエフェクター基であり、
X1およびX2はそれぞれ反応性官能基の残基であり、Y1お
よびY2は両者で架橋の残部を形成し、ｍおよびｎは互い
に同じまたは異なる数で１またはそれ以上の整数であ
る。また、Ｅは架橋上の置換基であってもよく、たとえ
ば架橋は次の構造をとることもできる。
X1およびX2はそれぞれ反応性官能基の残基であり、Y1お
よびY2は両者で架橋の残部を形成し、ｍおよびｎは互い
に同じまたは異なる数で１またはそれ以上の整数であ
る。また、Ｅは架橋上の置換基であってもよく、たとえ
ば架橋は次の構造をとることもできる。
上述の特定の型の架橋においては、Y1およびY2は両者
で、直鎖状または分岐状のC1-20アルキレン（たとえばC
4-10アルキレンのようなC1-10アルキレン、たとえばブ
チレン、ペンチレン、ヘキシレンまたはヘプチレン）、
C2-20アルケニレンまたはC2-20アルキニレンであり、所
望によって１個または２個以上の−Ｏ−または−Ｓ−原
子が中間に挿入されていてもよい。また、C5-8シクロア
ルキレン（たとえばシクロペンチレンまたはシクロヘキ
シレン）、C6-12芳香族（たとえばフェニレンまたは置
換フェニレン）、C5-10異項環芳香族（たとえばフラニ
ル、ピリジル）、−Ｎ（R1）−（式中R1は水素原子また
はC1-6アルキル基である）、−CON（R1）または−Ｎ（R
1）CO−基であってもよい。
で、直鎖状または分岐状のC1-20アルキレン（たとえばC
4-10アルキレンのようなC1-10アルキレン、たとえばブ
チレン、ペンチレン、ヘキシレンまたはヘプチレン）、
C2-20アルケニレンまたはC2-20アルキニレンであり、所
望によって１個または２個以上の−Ｏ−または−Ｓ−原
子が中間に挿入されていてもよい。また、C5-8シクロア
ルキレン（たとえばシクロペンチレンまたはシクロヘキ
シレン）、C6-12芳香族（たとえばフェニレンまたは置
換フェニレン）、C5-10異項環芳香族（たとえばフラニ
ル、ピリジル）、−Ｎ（R1）−（式中R1は水素原子また
はC1-6アルキル基である）、−CON（R1）または−Ｎ（R
1）CO−基であってもよい。
一般的に、X1またはX2で表される反応性官能基の残基
には、チオール、アミノ、カルボキシル、ヒドロキシ
ル、アルデヒド、芳香族または異項環芳香族基と反応で
きる任意の基の残基が包含される。すなわち、X1または
X2は、たとえば、−CH2−、−Ｓ−、−NH−、−NHN＝、
−Ｎ（CH3）Ｎ＝、−NHCONHN＝、−NHCSNHN＝、−Ｎ（P
h）Ｎ＝（式中Phはフェニルである）、−NC（Ｏ）−、
−NC（Ｓ）−、−CO−、 −Het1C（Het2）CH2− （式中Het1およびHet2は互いに同種でも異種でもよく、
それぞれ窒素含有異項環基たとえばピリジル基である
か、またはHet1は窒素含有異項環基、Het2は水素原子で
ある）、または （式中、ＡｋはC1-4アルキルたとえばメチル基であ
る）である。
には、チオール、アミノ、カルボキシル、ヒドロキシ
ル、アルデヒド、芳香族または異項環芳香族基と反応で
きる任意の基の残基が包含される。すなわち、X1または
X2は、たとえば、−CH2−、−Ｓ−、−NH−、−NHN＝、
−Ｎ（CH3）Ｎ＝、−NHCONHN＝、−NHCSNHN＝、−Ｎ（P
h）Ｎ＝（式中Phはフェニルである）、−NC（Ｏ）−、
−NC（Ｓ）−、−CO−、 −Het1C（Het2）CH2− （式中Het1およびHet2は互いに同種でも異種でもよく、
それぞれ窒素含有異項環基たとえばピリジル基である
か、またはHet1は窒素含有異項環基、Het2は水素原子で
ある）、または （式中、ＡｋはC1-4アルキルたとえばメチル基であ
る）である。
架橋が分岐している場合には、反応性官能基は各分岐
に供給され、架橋が２個以上の架橋部位を介して各鎖へ
の架橋の結合を可能にすることが望ましい。
に供給され、架橋が２個以上の架橋部位を介して各鎖へ
の架橋の結合を可能にすることが望ましい。
架橋は一般に、レポーターまたはエフェクター基と安
定な共有結合を形成している。結合は一般に直接結合、
すなわち架橋内の１個または２個以上の基とレポーター
もしくはエフェクター基またはその反応性誘導体の１個
または２個以上の基の間の反応による結合である。in v
ivoでの使用に際し、標的部位におけるエフェクター基
の放出が意図される場合には、結合はたとえば欧州特許
175,617号に記載されているような蛋白分解酵素で切断
可能なものとすることができる。
定な共有結合を形成している。結合は一般に直接結合、
すなわち架橋内の１個または２個以上の基とレポーター
もしくはエフェクター基またはその反応性誘導体の１個
または２個以上の基の間の反応による結合である。in v
ivoでの使用に際し、標的部位におけるエフェクター基
の放出が意図される場合には、結合はたとえば欧州特許
175,617号に記載されているような蛋白分解酵素で切断
可能なものとすることができる。
所望により、架橋は２個以上のレポーターまたはエフ
ェクター基を含有させることもできる。
ェクター基を含有させることもできる。
本発明の接合体における「レポーター基」の語は、in
vitroおよび／またはin vivoにおいて分析手段により
容易に検出できて、この性質を接合体に付与する。任意
の基または化合物を意味するものと理解すべきである。
「エフェクター基」の語は、生体系の変化または生体系
からの応答を誘導できて、この性質を本発明の接合体に
付与する、任意の基または化合物を意味するものと理解
すべきである。
vitroおよび／またはin vivoにおいて分析手段により
容易に検出できて、この性質を接合体に付与する。任意
の基または化合物を意味するものと理解すべきである。
「エフェクター基」の語は、生体系の変化または生体系
からの応答を誘導できて、この性質を本発明の接合体に
付与する、任意の基または化合物を意味するものと理解
すべきである。
適当なレポーターまたはエフェクター分子には、放射
性核種たとえば125Iおよび131I;キレート金属；蛍光化
合物またはNMRもしくはESRスペクトルによって検出でき
る化合物；細胞毒性化合物およびトキシン、たとえばリ
シンおよびそのフラグメントを含む薬理学的性質、酵
素；ならびにホルモンが包含される。
性核種たとえば125Iおよび131I;キレート金属；蛍光化
合物またはNMRもしくはESRスペクトルによって検出でき
る化合物；細胞毒性化合物およびトキシン、たとえばリ
シンおよびそのフラグメントを含む薬理学的性質、酵
素；ならびにホルモンが包含される。
キレート金属には、２から８までの配位数を有する２
または３価の陽性金属のキレートが包含される。このよ
うな金属の特定の例としてはテクネチウム（Tc）、レニ
ウム（Re）、コバルト（Co）、銅（Cu）、金（Au）、銀
（Ag）、鉛（Pb）、ビスマス（Bi）、インジウム（I
n）、ガリウム（Ca）、イットリウム（Ｙ）、テルビウ
ム（Tb）、ガドリニウム（Gd）およびスカンジウム（S
c）を挙げることができる。一般的には、金属は放射性
核種であることが好ましい。特定の放射性核種として
は、99mTc,186Re,188Re,58Co,60Co,67Cu,195Au,199Au,
110Ag,111Ag,203Pb,206Bi,207Bi,111In,67Ga,68Ga,88Y,
90Y,160Tb,153Gdおよび47Scを挙げることができる。
または３価の陽性金属のキレートが包含される。このよ
うな金属の特定の例としてはテクネチウム（Tc）、レニ
ウム（Re）、コバルト（Co）、銅（Cu）、金（Au）、銀
（Ag）、鉛（Pb）、ビスマス（Bi）、インジウム（I
n）、ガリウム（Ca）、イットリウム（Ｙ）、テルビウ
ム（Tb）、ガドリニウム（Gd）およびスカンジウム（S
c）を挙げることができる。一般的には、金属は放射性
核種であることが好ましい。特定の放射性核種として
は、99mTc,186Re,188Re,58Co,60Co,67Cu,195Au,199Au,
110Ag,111Ag,203Pb,206Bi,207Bi,111In,67Ga,68Ga,88Y,
90Y,160Tb,153Gdおよび47Scを挙げることができる。
キレート金属は、たとえば非環式または環式ポリアミ
ン、ポリエーテル（たとえばクラウンエーテルおよびそ
の誘導体）、ポリアミド、ポルフィリン、およびカルボ
ン酸誘導体のような任意の適当な多座キレート剤とキレ
ートした上述の種類の金属の１種を例として挙げること
ができる。
ン、ポリエーテル（たとえばクラウンエーテルおよびそ
の誘導体）、ポリアミド、ポルフィリン、およびカルボ
ン酸誘導体のような任意の適当な多座キレート剤とキレ
ートした上述の種類の金属の１種を例として挙げること
ができる。
一般に、キレート剤の種類は、使用される金属によっ
て決定される。しかしながら、本発明の接合体のキレー
ト剤としてとくに有用なキレート剤群は、非環式および
環式ポリアミン、とくにポリアミノカルボン酸、たとえ
ばジエチレントリアミンペンタ酢酸およびその誘導体、
および大環式アミンたとえば環状トリアザおよびテトラ
アザ誘導体；ならびにポリアミドとくにデスフェリキソ
アミンおよびその誘導体である。
て決定される。しかしながら、本発明の接合体のキレー
ト剤としてとくに有用なキレート剤群は、非環式および
環式ポリアミン、とくにポリアミノカルボン酸、たとえ
ばジエチレントリアミンペンタ酢酸およびその誘導体、
および大環式アミンたとえば環状トリアザおよびテトラ
アザ誘導体；ならびにポリアミドとくにデスフェリキソ
アミンおよびその誘導体である。
特定の大環式アミンの例には、式（１） （式中、Ｌは反応性の基であり、Ｂは置換されていても
よい１個または２個の置換窒素原子を中間にはさんでい
るC2-14アルキレン鎖であり、W1およびW2は互いに同種
でも異種でもよく、それぞれ置換されていてもよい窒素
原子であり、ｐは０または整数１であり、ｑは０または
整数１もしくは２であるが、ｐが０の場合にはｑは整数
１または２である）で表される化合物が包含される。基
Ｌは本発明の接合体における大環式化合物と架橋に結合
点を与えるものである。
よい１個または２個の置換窒素原子を中間にはさんでい
るC2-14アルキレン鎖であり、W1およびW2は互いに同種
でも異種でもよく、それぞれ置換されていてもよい窒素
原子であり、ｐは０または整数１であり、ｑは０または
整数１もしくは２であるが、ｐが０の場合にはｑは整数
１または２である）で表される化合物が包含される。基
Ｌは本発明の接合体における大環式化合物と架橋に結合
点を与えるものである。
式（１）の好ましいアミンには、式（２） 〔式中、基Ｌはすでに定義したとおり、W1およびW2は互
いに同種でも異種でもよく、それぞれ基−Ｎ〔（CH2）r
R1〕−（式中、ｒは０または整数１〜６であり、R1はア
ルキル、アルコキシアルキル、−CO2H、−SO3H、−PO3H
2またはアリール基である）であり、Ｂは基−CH2（C
H2）sN（Ｒ）（CH2）tCH2−（式中、ｓおよびｔは互い
に同じ数でも異なる数でもよく、それぞれ０または整数
１、２もしくは３であり、Ｒは−（CH2）rR1であり、ｒ
およびR1はすでに定義したとおりである）である〕で表
されるトリアザ誘導体、および式（３） 〔式中、基Ｌはすでに定義したとおり、W1およびW2は同
種でも異種でもよく、それぞれ基−Ｎ〔（CH2）rR1〕−
（すでに定義したとおりである）であり、Ｂは基−CH2
（CH2）sN−（Ｒ）CH2（CH2）dN（Ｒ）（CH2）tCH2−
（式中ｄは０または整数１、２もしくは３であり、s,t
およびＲはすでに定義したとおりである）である〕で表
されるテトラアザ誘導体が包含される。
いに同種でも異種でもよく、それぞれ基−Ｎ〔（CH2）r
R1〕−（式中、ｒは０または整数１〜６であり、R1はア
ルキル、アルコキシアルキル、−CO2H、−SO3H、−PO3H
2またはアリール基である）であり、Ｂは基−CH2（C
H2）sN（Ｒ）（CH2）tCH2−（式中、ｓおよびｔは互い
に同じ数でも異なる数でもよく、それぞれ０または整数
１、２もしくは３であり、Ｒは−（CH2）rR1であり、ｒ
およびR1はすでに定義したとおりである）である〕で表
されるトリアザ誘導体、および式（３） 〔式中、基Ｌはすでに定義したとおり、W1およびW2は同
種でも異種でもよく、それぞれ基−Ｎ〔（CH2）rR1〕−
（すでに定義したとおりである）であり、Ｂは基−CH2
（CH2）sN−（Ｒ）CH2（CH2）dN（Ｒ）（CH2）tCH2−
（式中ｄは０または整数１、２もしくは３であり、s,t
およびＲはすでに定義したとおりである）である〕で表
されるテトラアザ誘導体が包含される。
式（２）のとくに有用なアミンは、式（４） で表される化合物である。
式（３）のとくに有用なアミンは、式（５） で表される化合物である。
本発明の接合体における好ましいキレート金属には、
式（２）の化合物とくに式（４）の化合物とキレートし
たインジウム、または式（３）の化合物とくに式（５）
の化合物とキレートしたイットリウムが包含される。
111Inおよび90Yがとくに好ましい。
式（２）の化合物とくに式（４）の化合物とキレートし
たインジウム、または式（３）の化合物とくに式（５）
の化合物とキレートしたイットリウムが包含される。
111Inおよび90Yがとくに好ましい。
適当な薬剤を架橋基に結合させることも一般的に可能
である。もちろん、生成した結合物質はその活性を保持
するものであるか、または薬剤はin vivoで、たとえば
宿主酵素の作用によって活性物質に変換できる型で結合
させる。
である。もちろん、生成した結合物質はその活性を保持
するものであるか、または薬剤はin vivoで、たとえば
宿主酵素の作用によって活性物質に変換できる型で結合
させる。
本発明の化合物中にエフェクター分子として使用され
る細胞毒性化合物には、細胞増殖抑制性の化合物が包含
される。特定の化合物としては、たとえば、アルキル化
剤たとえばナイトロジェンマスタード（たとえばクロラ
ムブシル、メルファラン、メクロレタミン、シクロホス
ファミドまたはウラシルマスタード）およびその誘導
体、トリエチレンリン酸アミド、トリエチレンチオリン
酸アミド、ブスルファンまたはシスプラチン、抗代謝薬
たとえばメトトレキセート、フルオロウラシルおよびフ
ロキシウリジン、シタラビン、メルカプトプリン、チオ
グアニン、フルオロ酢酸またはフルオロコハク酸；抗生
物質たとえばブレオマイシン（たとえば硫酸ブレオマイ
シン）、ドキソルビシン、ダウノルビシン、マイトマイ
シン（たとえばマイトマイシンＣ）、アクチノマイシン
（たとえばダクチノマイシン）またはプリカマイシン、
分裂阻害剤たとえばエトポシド、ビンクリスチンまたは
ビンブラスチン；尿素類たとえばヒドロキシ尿素；ヒド
ラジン類たとえばプロカルバジン；またはイミダゾール
類たとえばダカルバジン；カリキアマイシン、エスペラ
マイシンまたはタキソールを挙げることができる。
る細胞毒性化合物には、細胞増殖抑制性の化合物が包含
される。特定の化合物としては、たとえば、アルキル化
剤たとえばナイトロジェンマスタード（たとえばクロラ
ムブシル、メルファラン、メクロレタミン、シクロホス
ファミドまたはウラシルマスタード）およびその誘導
体、トリエチレンリン酸アミド、トリエチレンチオリン
酸アミド、ブスルファンまたはシスプラチン、抗代謝薬
たとえばメトトレキセート、フルオロウラシルおよびフ
ロキシウリジン、シタラビン、メルカプトプリン、チオ
グアニン、フルオロ酢酸またはフルオロコハク酸；抗生
物質たとえばブレオマイシン（たとえば硫酸ブレオマイ
シン）、ドキソルビシン、ダウノルビシン、マイトマイ
シン（たとえばマイトマイシンＣ）、アクチノマイシン
（たとえばダクチノマイシン）またはプリカマイシン、
分裂阻害剤たとえばエトポシド、ビンクリスチンまたは
ビンブラスチン；尿素類たとえばヒドロキシ尿素；ヒド
ラジン類たとえばプロカルバジン；またはイミダゾール
類たとえばダカルバジン；カリキアマイシン、エスペラ
マイシンまたはタキソールを挙げることができる。
ホルモンには、アンドロジェン（たとえばドロモスタ
ノロンまたはテストラクトン）、プロゲスチン（たとえ
ばメゲストロールアセテートまたはメドロキシプロゲス
テロンアセテート）、エストロジェン（たとえばジエチ
ルスチルベストロール二リン酸エステル、ポリエストラ
ジオールリン酸エステルまたはエストラムスチンリン酸
エステル）またはアンチェストロジェン（たとえばタモ
キシフェン）が包含される。
ノロンまたはテストラクトン）、プロゲスチン（たとえ
ばメゲストロールアセテートまたはメドロキシプロゲス
テロンアセテート）、エストロジェン（たとえばジエチ
ルスチルベストロール二リン酸エステル、ポリエストラ
ジオールリン酸エステルまたはエストラムスチンリン酸
エステル）またはアンチェストロジェン（たとえばタモ
キシフェン）が包含される。
本発明の接合体における抗体は、一般に、どの免疫グ
ロブリンクラスに属するものであってもよい。すなわ
ち、それはたとえば、免疫グロブリンＭ抗体でもよく、
またとくに、イソタイプIgG1,IgG2,IgG3およびIgG4を包
含する免疫グロブリンＧ抗体である。本発明の接合体に
はイソタイプIgG1,IgG2およびIgG4、とくにイソタイプI
gG1およびIgG4が有用である。
ロブリンクラスに属するものであってもよい。すなわ
ち、それはたとえば、免疫グロブリンＭ抗体でもよく、
またとくに、イソタイプIgG1,IgG2,IgG3およびIgG4を包
含する免疫グロブリンＧ抗体である。本発明の接合体に
はイソタイプIgG1,IgG2およびIgG4、とくにイソタイプI
gG1およびIgG4が有用である。
抗体分子は動物たとえば哺乳類起源、たとえばマウ
ス、ラットまたはヒト起源のものである。天然抗体もし
くはそのフラグメントでもよく、また所望により組換え
抗体または抗体フラグメント、すなわち組換えDNA技術
を用いて製造された抗体分子または抗体フラグメントを
使用できる。
ス、ラットまたはヒト起源のものである。天然抗体もし
くはそのフラグメントでもよく、また所望により組換え
抗体または抗体フラグメント、すなわち組換えDNA技術
を用いて製造された抗体分子または抗体フラグメントを
使用できる。
特定の組換え抗体または抗体フラグメントには、
（１）少なくともその一部は異なる抗体から誘導される
抗原結合部位を有するもの、たとえばある抗体の超可変
または相補性決定領域を第二の異なる抗体の可変枠組み
領域中に移植したもの（欧州特許明細書239,400号参
照）；（２）非−Fv配列を他の異なる抗原からの非−Fv
配列で置換した組換え抗体もしくはフラグメント、また
は（３）天然免疫グロブリンの実質的構造を有するが、
１個または２個以上のアミノ酸残基が変更され、たとえ
ば蝶番領域が天然の免疫グロブリンとは異なる数のシス
テイン残基を有するか、組換え抗体もしくはフラグメン
トの表面ポケットにおける１個もしくは２個以上のシス
テイン残基が天然の免疫グロブリンでは他のアミノ酸残
基が存在する位置にあるか（それぞれ国際特許明細書WO
89/01974およびWO89/01782に記載されている）、あるい
は天然の免疫グロブリンでは他のアミノ酸残基が存在す
る位置にリジン残基がある組換え抗体またはフラグメン
トが包含される。
（１）少なくともその一部は異なる抗体から誘導される
抗原結合部位を有するもの、たとえばある抗体の超可変
または相補性決定領域を第二の異なる抗体の可変枠組み
領域中に移植したもの（欧州特許明細書239,400号参
照）；（２）非−Fv配列を他の異なる抗原からの非−Fv
配列で置換した組換え抗体もしくはフラグメント、また
は（３）天然免疫グロブリンの実質的構造を有するが、
１個または２個以上のアミノ酸残基が変更され、たとえ
ば蝶番領域が天然の免疫グロブリンとは異なる数のシス
テイン残基を有するか、組換え抗体もしくはフラグメン
トの表面ポケットにおける１個もしくは２個以上のシス
テイン残基が天然の免疫グロブリンでは他のアミノ酸残
基が存在する位置にあるか（それぞれ国際特許明細書WO
89/01974およびWO89/01782に記載されている）、あるい
は天然の免疫グロブリンでは他のアミノ酸残基が存在す
る位置にリジン残基がある組換え抗体またはフラグメン
トが包含される。
抗体が抗体フラグメントである場合には、たとえば、
全抗体の酵素消化によって得られる蛋白分解フラグメン
トであってもよい。また、抗体フラグメントは組換えDN
A技術によって得られる抗体、たとえばFvフラグメント
（国際特許明細書WO89/02465に記載されている）でもよ
い。
全抗体の酵素消化によって得られる蛋白分解フラグメン
トであってもよい。また、抗体フラグメントは組換えDN
A技術によって得られる抗体、たとえばFvフラグメント
（国際特許明細書WO89/02465に記載されている）でもよ
い。
一般に、抗体が抗体フラグメントである本発明の接合
体では、とくにＦ（ab′）２フラグメントが好ましい。
体では、とくにＦ（ab′）２フラグメントが好ましい。
抗体はポリクローナルまたはモノクローナルいずれの
起源でもよいが、モノクローナル抗体が好ましい。それ
は任意の数の抗原決定基に対して特異的であってもよい
が、１個の抗原決定基に特異的であることが好ましい。
抗原決定基は、ハプテンでも、任意の抗原に関連した抗
原決定基でもよい。特定の抗原としては、動物、たとえ
ばヒト〔たとえば正常動物組織または臓器細胞関連抗
原、腫瘍細胞関連抗原（たとえばカルシノエンブリオ抗
原またはα−フェトプロテインのような癌胎児性抗原、
絨毛性ゴナドトロピンおよび胎盤アルカリホスファター
ゼのような胎盤性抗原、ならびにプロスタン酸ホスファ
ターゼおよび前立腺特異的抗原のような前立腺性抗原）
および体液成分たとえばフィブリンまたは血小板関連抗
原〕、ウイルス、最近およびカビに関連した抗原を挙げ
ることができる。
起源でもよいが、モノクローナル抗体が好ましい。それ
は任意の数の抗原決定基に対して特異的であってもよい
が、１個の抗原決定基に特異的であることが好ましい。
抗原決定基は、ハプテンでも、任意の抗原に関連した抗
原決定基でもよい。特定の抗原としては、動物、たとえ
ばヒト〔たとえば正常動物組織または臓器細胞関連抗
原、腫瘍細胞関連抗原（たとえばカルシノエンブリオ抗
原またはα−フェトプロテインのような癌胎児性抗原、
絨毛性ゴナドトロピンおよび胎盤アルカリホスファター
ゼのような胎盤性抗原、ならびにプロスタン酸ホスファ
ターゼおよび前立腺特異的抗原のような前立腺性抗原）
および体液成分たとえばフィブリンまたは血小板関連抗
原〕、ウイルス、最近およびカビに関連した抗原を挙げ
ることができる。
好ましい態様においては、抗体は、腫瘍細胞関連抗
原、とくにヒト乳癌および結腸癌に関連したTAG−72抗
原上の１種または２種以上のエピトープを認識し、それ
に結合できる抗体である。この型のとくに好ましい抗体
はモノクローナル抗体B72.3（Colcher,D.ら;Proc.Natl.
Acad.Sci.USA,78:3199,1981）またはそのフラグメン
ト、とくにＦ（ad′）２フラグメントである。
原、とくにヒト乳癌および結腸癌に関連したTAG−72抗
原上の１種または２種以上のエピトープを認識し、それ
に結合できる抗体である。この型のとくに好ましい抗体
はモノクローナル抗体B72.3（Colcher,D.ら;Proc.Natl.
Acad.Sci.USA,78:3199,1981）またはそのフラグメン
ト、とくにＦ（ad′）２フラグメントである。
本発明の接合体の一つの好ましい群は、各抗体接合体
が、それぞれ金属をキレートした式（１）のキレート剤
１種または２種以上を含有する重鎖間架橋を有する抗体
分子からなり、その架橋はその抗体分子の蝶番領域にお
いて各鎖に存在するシステイン残基のスルフヒドリル基
によって各重鎖に結合する接合体である。
が、それぞれ金属をキレートした式（１）のキレート剤
１種または２種以上を含有する重鎖間架橋を有する抗体
分子からなり、その架橋はその抗体分子の蝶番領域にお
いて各鎖に存在するシステイン残基のスルフヒドリル基
によって各重鎖に結合する接合体である。
この型のとくに有用な接合体は、抗体がその蝶番領域
における各重鎖に唯１個のシステイン残基を有し、この
システイン残基が重鎖間架橋の架橋部位を形成する接合
体である。
における各重鎖に唯１個のシステイン残基を有し、この
システイン残基が重鎖間架橋の架橋部位を形成する接合
体である。
この型の他の有用な接合体は、腫瘍細胞関連抗原、と
くにヒト乳癌および結腸癌に関連したTAG−72抗原上の
１種または２種以上のエピトープを認識し、それに結合
できる接合体である。抗体は、天然に存在する抗体もし
くはそのフラグメント、とくにＦ（ab′）２フラグメン
トであるか、または上述したような組換え抗体または抗
体フラグメントとすることができる。抗体はB27.3抗体
またはそのフラグメントが好ましく、また組換えB72.3
抗体またはそのフラグメントでもよい。
くにヒト乳癌および結腸癌に関連したTAG−72抗原上の
１種または２種以上のエピトープを認識し、それに結合
できる接合体である。抗体は、天然に存在する抗体もし
くはそのフラグメント、とくにＦ（ab′）２フラグメン
トであるか、または上述したような組換え抗体または抗
体フラグメントとすることができる。抗体はB27.3抗体
またはそのフラグメントが好ましく、また組換えB72.3
抗体またはそのフラグメントでもよい。
この好ましい型の接合体においては、式（１）のキレ
ート剤はとくに式（２）もしくは（３）の化合物、とく
に式（４）もしくは（５）の化合物である。金属は、配
位数２から８までの２価または３価の陽性金属であるこ
とが好ましく、とくに放射性核種であることが好まし
い。インジウムとくに111Inおよびイットリウムとくに
90Yがとくに好ましい。
ート剤はとくに式（２）もしくは（３）の化合物、とく
に式（４）もしくは（５）の化合物である。金属は、配
位数２から８までの２価または３価の陽性金属であるこ
とが好ましく、とくに放射性核種であることが好まし
い。インジウムとくに111Inおよびイットリウムとくに
90Yがとくに好ましい。
本発明の接合体は、診断薬または治療剤として有用で
ある。すなわち、抗体ならびにレポーターまたはエフェ
クター基の性質に応じて、接合体は、適当な検出器と組
合せて、正常または疾患組織たとえば腫瘍および血栓を
造影するためにin vivoで、または異常は細胞障害たと
えば腫瘍、血栓、および感染を含めた疾患組織の処置に
使用することができる。また、本発明の接合体はin vit
roで診断技術に、たとえばラジオイムノアッセイまたは
酵素連結イムノアッセイに使用することができる。
ある。すなわち、抗体ならびにレポーターまたはエフェ
クター基の性質に応じて、接合体は、適当な検出器と組
合せて、正常または疾患組織たとえば腫瘍および血栓を
造影するためにin vivoで、または異常は細胞障害たと
えば腫瘍、血栓、および感染を含めた疾患組織の処置に
使用することができる。また、本発明の接合体はin vit
roで診断技術に、たとえばラジオイムノアッセイまたは
酵素連結イムノアッセイに使用することができる。
したがって、本発明はさらに他の態様として、ヒトま
たは動物対象の処置または診断方法に使用される抗体接
合体であって、１個または２個以上のレポーターまたは
エフェクター基を含有する少なくとも１個の鎖間架橋を
有する抗体分子からなり、架橋は抗体の抗体結合ドメイ
ンの外側に位置する１個または２個以上の架橋部位で各
鎖に結合する抗体接合体を提供する。
たは動物対象の処置または診断方法に使用される抗体接
合体であって、１個または２個以上のレポーターまたは
エフェクター基を含有する少なくとも１個の鎖間架橋を
有する抗体分子からなり、架橋は抗体の抗体結合ドメイ
ンの外側に位置する１個または２個以上の架橋部位で各
鎖に結合する抗体接合体を提供する。
in vivoで使用するためには、抗体接合体は適当な投
与量で適当な組成物として製剤化することができる。
与量で適当な組成物として製剤化することができる。
したがって、本発明はさらに他の態様として、１個ま
たは２個以上のレポーターまたはエフェクター基を含有
する少なくとも１個の鎖間架橋を有する抗体分子からな
り、架橋は抗体の抗原結合ドメインの外側に位置する１
個または２個以上の架橋部位で各鎖に結合している抗体
と、１種または２種以上の医薬的に許容される担体また
は賦形剤より構成される医薬組成物を提供する。
たは２個以上のレポーターまたはエフェクター基を含有
する少なくとも１個の鎖間架橋を有する抗体分子からな
り、架橋は抗体の抗原結合ドメインの外側に位置する１
個または２個以上の架橋部位で各鎖に結合している抗体
と、１種または２種以上の医薬的に許容される担体また
は賦形剤より構成される医薬組成物を提供する。
接合体のin vivo投与は任意の適当な経路によって行
われるが、非経口投与たとえば注射または注入が好まし
い。接合体の非経口投与に適当な製剤には、接合体の油
性または水性ビヒクル中懸濁液、溶液または乳化液が包
含され、これには懸濁剤、安定剤および／または分散剤
のような調剤用物質を加えてもよい。また、接合体は粉
末の形態とし、使用前に適当なビヒクルたとえば滅菌、
パイロジェン不含水で再構築するものであってもよい。
所望により、接合体は、単位用量剤型として、また１種
もしくは２種以上の他の活性成分または造影剤とともに
提供されてもよい。
われるが、非経口投与たとえば注射または注入が好まし
い。接合体の非経口投与に適当な製剤には、接合体の油
性または水性ビヒクル中懸濁液、溶液または乳化液が包
含され、これには懸濁剤、安定剤および／または分散剤
のような調剤用物質を加えてもよい。また、接合体は粉
末の形態とし、使用前に適当なビヒクルたとえば滅菌、
パイロジェン不含水で再構築するものであってもよい。
所望により、接合体は、単位用量剤型として、また１種
もしくは２種以上の他の活性成分または造影剤とともに
提供されてもよい。
接合体を投与する場合の正確な用量は、投与経路、抗
体およびレポーターまたはエフェクター基の性質、使用
目的すなわち診断かまたは治療かのほか、他の変数たと
えば患者の体重および病態によって決定される。したが
って、適用の際の用量は常に、標準操作を用いて、経験
的に決定される必要がある。
体およびレポーターまたはエフェクター基の性質、使用
目的すなわち診断かまたは治療かのほか、他の変数たと
えば患者の体重および病態によって決定される。したが
って、適用の際の用量は常に、標準操作を用いて、経験
的に決定される必要がある。
本発明の接合体がin vitroでの診断に考慮される場合
には、慣用の操作、たとえばMethods in Enzymology,8
4:1982および92:377〜532,1983（Langone,J.J.＆ Van V
anakis,H.編,Academic Press,New York）に記載された
操作を用いて、利用することができる。
には、慣用の操作、たとえばMethods in Enzymology,8
4:1982および92:377〜532,1983（Langone,J.J.＆ Van V
anakis,H.編,Academic Press,New York）に記載された
操作を用いて、利用することができる。
本発明の接合体は一般に抗体またはそのフラグメント
を、レポーターもしくはエフェクター基またはその前駆
体を含有する架橋剤と反応させることによって製造でき
る。
を、レポーターもしくはエフェクター基またはその前駆
体を含有する架橋剤と反応させることによって製造でき
る。
この反応は一般に、適当な溶媒、たとえば水または水
性無機もしくは水性有機緩衝液のような水性溶媒、たと
えばリン酸、クエン酸もしくは酢酸緩衝液またはそれら
の混合物、あるいはたとえば含水アセトンもしくはジメ
チルホルムアミドのような水性有機溶媒中、適当な温
度、たとえば０゜〜30℃の範囲、とくに室温付近で行わ
れる。
性無機もしくは水性有機緩衝液のような水性溶媒、たと
えばリン酸、クエン酸もしくは酢酸緩衝液またはそれら
の混合物、あるいはたとえば含水アセトンもしくはジメ
チルホルムアミドのような水性有機溶媒中、適当な温
度、たとえば０゜〜30℃の範囲、とくに室温付近で行わ
れる。
抗体ならびに／またはレポーターおよびエフェクター
基が、多数の反応にあずかる可能性のある基を含有する
場合には、上述の一般的な形の架橋反応では、無差別の
反応が起こり、不均一な混合生成物が得られることにな
る。これを避けるためには、適当な反応試薬および／ま
たは反応条件を単独でまたは組合せて選択することによ
り、一般的架橋方法を、均一な生成物が得られるように
適合させる。
基が、多数の反応にあずかる可能性のある基を含有する
場合には、上述の一般的な形の架橋反応では、無差別の
反応が起こり、不均一な混合生成物が得られることにな
る。これを避けるためには、適当な反応試薬および／ま
たは反応条件を単独でまたは組合せて選択することによ
り、一般的架橋方法を、均一な生成物が得られるように
適合させる。
すなわち、ひとつの選択としては、架橋試薬を抗体中
の特定の官能基と選択的に反応する官能基をもつように
選択することができる。適当な条件下に選択的様式で反
応する基には多くの例があり、たとえばアミノ反応性お
よびチオール反応性官能基等、熟練者はよく知られてい
る通りである（たとえば、欧州特許明細書173629号およ
び175617号、英国特許明細書2109407号ならびに国際特
許明細書WO88/05433号参照）。
の特定の官能基と選択的に反応する官能基をもつように
選択することができる。適当な条件下に選択的様式で反
応する基には多くの例があり、たとえばアミノ反応性お
よびチオール反応性官能基等、熟練者はよく知られてい
る通りである（たとえば、欧州特許明細書173629号およ
び175617号、英国特許明細書2109407号ならびに国際特
許明細書WO88/05433号参照）。
第二の選択としては、抗体および／またはレポーター
もしくはエフェクター基中の反応可能な基で架橋するこ
とが望ましくないものを、架橋反応を行う前に保護する
ことができる。蛋白質の反応性の基の保護に際しての慣
用方法を、標準的な脱保護技術とともに採用することが
できる。
もしくはエフェクター基中の反応可能な基で架橋するこ
とが望ましくないものを、架橋反応を行う前に保護する
ことができる。蛋白質の反応性の基の保護に際しての慣
用方法を、標準的な脱保護技術とともに採用することが
できる。
その他の選択としては、抗体を、架橋に利用できる少
なくとも１対の独特の架橋部位を有するように選択する
方法がある。たとえば、β−メルカプトエチルアミンの
ような緩和な還元剤を用いて、たとえば抗体の重鎖を連
結するジスルフィド橋から遊離のスルフヒドリル基を生
成させるが分子の他の部分には実質的に影響がないよう
に抗体を部分還元することも可能である。ついでスルフ
ヒドリル基を、チオール特異的架橋剤との選択的反応の
架橋部位として使用できる。別法として、抗体を、化学
的方法または酵素的方法で、たとえば欧州特許明細書17
3629号に記載されているようにして酸化し、炭水化物側
鎖にアルデヒド基を生成させ、これをついで一般的に上
述した架橋剤と反応させることもできる。
なくとも１対の独特の架橋部位を有するように選択する
方法がある。たとえば、β−メルカプトエチルアミンの
ような緩和な還元剤を用いて、たとえば抗体の重鎖を連
結するジスルフィド橋から遊離のスルフヒドリル基を生
成させるが分子の他の部分には実質的に影響がないよう
に抗体を部分還元することも可能である。ついでスルフ
ヒドリル基を、チオール特異的架橋剤との選択的反応の
架橋部位として使用できる。別法として、抗体を、化学
的方法または酵素的方法で、たとえば欧州特許明細書17
3629号に記載されているようにして酸化し、炭水化物側
鎖にアルデヒド基を生成させ、これをついで一般的に上
述した架橋剤と反応させることもできる。
さらに別の方法として、架橋剤との反応に先立って、
組換えDNA技術を用いて抗体に独特の架橋部位を導入す
ることもできる。たとえば、各重鎖の蝶番領域における
システイン残基の数を１個に減らした抗体を準備する。
これは、抗体分子のCH1ドメインを通常伴う蝶番領域を
有する抗体重鎖をコードするDNA配列が含まれるオペロ
ンをまず発言ベクター中に作成することによって得るの
が便利である。
組換えDNA技術を用いて抗体に独特の架橋部位を導入す
ることもできる。たとえば、各重鎖の蝶番領域における
システイン残基の数を１個に減らした抗体を準備する。
これは、抗体分子のCH1ドメインを通常伴う蝶番領域を
有する抗体重鎖をコードするDNA配列が含まれるオペロ
ンをまず発言ベクター中に作成することによって得るの
が便利である。
オペロンは、あるクラスの抗体からのCH1領域をコー
ドするDNA配列を、別のクラスの抗体からの蝶番領域を
コードするDNA配列に結合させることによって作成でき
る。また、あるクラスのCH1ドメインと蝶番領域をクロ
ーニングし、特定部位の突然変異たとえばアラニンをコ
ードする配列への突然変異によってシステイン残基をコ
ードするDNAトリプレットの数を１個に変換することに
よっても作成できる。適当な細胞系をそのベクターでト
ランスフェクトし、ついでトランスフェクトされた細胞
系を培養することによって、所望の重鎖ポリペプチドが
産生される。
ドするDNA配列を、別のクラスの抗体からの蝶番領域を
コードするDNA配列に結合させることによって作成でき
る。また、あるクラスのCH1ドメインと蝶番領域をクロ
ーニングし、特定部位の突然変異たとえばアラニンをコ
ードする配列への突然変異によってシステイン残基をコ
ードするDNAトリプレットの数を１個に変換することに
よっても作成できる。適当な細胞系をそのベクターでト
ランスフェクトし、ついでトランスフェクトされた細胞
系を培養することによって、所望の重鎖ポリペプチドが
産生される。
このベクターは重鎖ポリペプチドのみをコードするの
で、細胞系が相補的な軽鎖を産生するように調整するこ
とが必要になる。これを達成するためには、３つの別個
の方法のいずれかを使用できる。第一の方法としては、
細胞系を第二のベクターでトランフェクトし、第二のベ
クターは相補的軽鎖誘導ポリペプチドをコードするもの
とする。各ポリペプチド鎖が等しく発現されることを可
能な限り確実にするため、ベクターは、コードする配列
と選択可能マーカーに関する点を除いては、同一である
ことが好ましい。
で、細胞系が相補的な軽鎖を産生するように調整するこ
とが必要になる。これを達成するためには、３つの別個
の方法のいずれかを使用できる。第一の方法としては、
細胞系を第二のベクターでトランフェクトし、第二のベ
クターは相補的軽鎖誘導ポリペプチドをコードするもの
とする。各ポリペプチド鎖が等しく発現されることを可
能な限り確実にするため、ベクターは、コードする配列
と選択可能マーカーに関する点を除いては、同一である
ことが好ましい。
第二の変法においては、ベクターに、軽鎖および重鎖
の両者を誘導するポリペプチドをコードする配列を包含
させる。第三の変法においては、天然に相補的な軽鎖を
分泌する宿主細胞を使用する。これらのベクターを構築
する一般的方法、トランスフェクション法および培養法
はよく知られている（たとえば、Maniatisら:Molecular
Cloning Cold Spring Harbor,New York,1982;Primrose
＆ Old:Principles of Gene Manipulation,Blackwell,
Oxford,1980参照）。上述の方法は、国際特許明細書WO8
9/01974号にとくに詳細に記載されている。
の両者を誘導するポリペプチドをコードする配列を包含
させる。第三の変法においては、天然に相補的な軽鎖を
分泌する宿主細胞を使用する。これらのベクターを構築
する一般的方法、トランスフェクション法および培養法
はよく知られている（たとえば、Maniatisら:Molecular
Cloning Cold Spring Harbor,New York,1982;Primrose
＆ Old:Principles of Gene Manipulation,Blackwell,
Oxford,1980参照）。上述の方法は、国際特許明細書WO8
9/01974号にとくに詳細に記載されている。
上述の方法は、１個のシステイン残基をもつ蝶番領域
を含有する任意のサイズの重鎖−軽鎖対の生成に適用で
きる。このような構築体は、一般的に上述した以下の実
施例に述べる架橋剤と反応させることができる。
を含有する任意のサイズの重鎖−軽鎖対の生成に適用で
きる。このような構築体は、一般的に上述した以下の実
施例に述べる架橋剤と反応させることができる。
上述した組換えDNA技術と類似の方法を用いて（国際
特許明細書WO89/01782号も参照）、抗体分子の各重鎖に
システイン残基を導入し、本発明の接合体を生成させる
ための以後の架橋剤との反応のための独特の架橋部位を
提供する。上述の方法はまた、他の組換え抗体、たとえ
ば付加的リジン基または架橋試薬に対する独特の架橋部
位を与える他のアミノ基を含有する組換え抗体の製造が
所望の場合、適当な出発原料を用い、適宜適合させた形
で使用することができる。
特許明細書WO89/01782号も参照）、抗体分子の各重鎖に
システイン残基を導入し、本発明の接合体を生成させる
ための以後の架橋剤との反応のための独特の架橋部位を
提供する。上述の方法はまた、他の組換え抗体、たとえ
ば付加的リジン基または架橋試薬に対する独特の架橋部
位を与える他のアミノ基を含有する組換え抗体の製造が
所望の場合、適当な出発原料を用い、適宜適合させた形
で使用することができる。
一般に、本発明の化合物を製造するための架橋反応で
は、とくに抗体がたとえば上述のように独特の架橋部位
をもつ場合、架橋剤は過剰の抗体と反応させることが好
ましいことが明らかにされている。こうすることによっ
て、無差別な架橋は回避され、所望の抗体生成物が好収
率、高純度に生成される。抗体が架橋剤に対して過剰濃
度（たとえば２倍およびそれ以上の過剰）で用いられる
架橋反応もさらに本発明の特徴を形成する。
は、とくに抗体がたとえば上述のように独特の架橋部位
をもつ場合、架橋剤は過剰の抗体と反応させることが好
ましいことが明らかにされている。こうすることによっ
て、無差別な架橋は回避され、所望の抗体生成物が好収
率、高純度に生成される。抗体が架橋剤に対して過剰濃
度（たとえば２倍およびそれ以上の過剰）で用いられる
架橋反応もさらに本発明の特徴を形成する。
本発明の接合体においてレポーターまたはエフェクタ
ー基がキレート化金属である場合には、接合体製造の最
終工程は、金属を導入する反応となる。すなわち、１種
または２種以上のキレート剤を含む少なくとも１個の鎖
間架橋を有する抗体分子前駆体を適当な溶媒、たとえば
水性または非水性溶媒（たとえば、アセトニトリル、ア
セトン、プロピレンカルボネート、ジメチルホルムアミ
ドまたはジメチルスルホキシド）中、金属塩（たとえ
ば、金属ハライド）と、０℃〜50℃の適当な温度たとえ
ば室温付近で反応させることができる。
ー基がキレート化金属である場合には、接合体製造の最
終工程は、金属を導入する反応となる。すなわち、１種
または２種以上のキレート剤を含む少なくとも１個の鎖
間架橋を有する抗体分子前駆体を適当な溶媒、たとえば
水性または非水性溶媒（たとえば、アセトニトリル、ア
セトン、プロピレンカルボネート、ジメチルホルムアミ
ドまたはジメチルスルホキシド）中、金属塩（たとえ
ば、金属ハライド）と、０℃〜50℃の適当な温度たとえ
ば室温付近で反応させることができる。
本発明の接合体の製造に際し、出発原料として使用さ
れる抗体は、慣用方法により、たとえば免疫動物の血清
から、または好ましくは骨髄腫もしくはハイブリドーマ
細胞から、あるいは欧州特許明細書171496号、173494
号、194279号および239400号ならびに国際特許出願明細
書WO89/01974号、WO89/01782号、WO89/02465号および89
/01783号に記載されているような組換えDNA技術によっ
て得ることができる。抗体フラグメントは、全抗体から
酵素的もしくは化学的方法または両者を組合せた方法に
より、慣用の実用的操作に従って、あるいは全抗体の代
わりにフラグメントを産生するように適宜適合させた上
述の組換えDNA技術によって製造できる。
れる抗体は、慣用方法により、たとえば免疫動物の血清
から、または好ましくは骨髄腫もしくはハイブリドーマ
細胞から、あるいは欧州特許明細書171496号、173494
号、194279号および239400号ならびに国際特許出願明細
書WO89/01974号、WO89/01782号、WO89/02465号および89
/01783号に記載されているような組換えDNA技術によっ
て得ることができる。抗体フラグメントは、全抗体から
酵素的もしくは化学的方法または両者を組合せた方法に
より、慣用の実用的操作に従って、あるいは全抗体の代
わりにフラグメントを産生するように適宜適合させた上
述の組換えDNA技術によって製造できる。
本発明の接合体を製造するための架橋剤は、一般的に
レポーターまたはエフェクター基自体またはその誘導体
であって、これが抗体分子における架橋部位と反応でき
る２個またはそれ以上の官能基を含有し、鎖間架橋がレ
ポーターまたはエフェクター基によって形成される。ま
た、架橋剤は、適当に置換された異種官能性架橋剤であ
って、この置換基がレポーターまたはエフェクター基で
あってもよい。異種官能性架橋剤を得る方法はよく知ら
れている（たとえば、Ghose,T.I.ら:Methods in Enzymo
logy,93:280〜333,1983参照）。これらとレポーターま
たはエフェクター基の結合は、慣用操作たとえば以下の
実施例に記載する操作を用いて作成することができる。
レポーターまたはエフェクター基自体またはその誘導体
であって、これが抗体分子における架橋部位と反応でき
る２個またはそれ以上の官能基を含有し、鎖間架橋がレ
ポーターまたはエフェクター基によって形成される。ま
た、架橋剤は、適当に置換された異種官能性架橋剤であ
って、この置換基がレポーターまたはエフェクター基で
あってもよい。異種官能性架橋剤を得る方法はよく知ら
れている（たとえば、Ghose,T.I.ら:Methods in Enzymo
logy,93:280〜333,1983参照）。これらとレポーターま
たはエフェクター基の結合は、慣用操作たとえば以下の
実施例に記載する操作を用いて作成することができる。
本発明の接合体に使用されるエフェクターまたはレポ
ーター基は、容易に入手できるか（たとえば英国特許明
細書2109407号、米国特許明細書4472509号、欧州特許明
細書175617号ならびに国際特許明細書WO89/01475号およ
びWO89/01476号参照）、もしくはこれらの既知化合物か
ら慣用技術を用いて単純な化学的変換によって得られる
か、または既知化合物の製造に使用された方法と類似の
方法を用いて既知の出発原料から製造できる。
ーター基は、容易に入手できるか（たとえば英国特許明
細書2109407号、米国特許明細書4472509号、欧州特許明
細書175617号ならびに国際特許明細書WO89/01475号およ
びWO89/01476号参照）、もしくはこれらの既知化合物か
ら慣用技術を用いて単純な化学的変換によって得られる
か、または既知化合物の製造に使用された方法と類似の
方法を用いて既知の出発原料から製造できる。
式（１）、（２）および（３）の特定の巨大環状アミ
ンは、国際特許明細書WO89/01475号およびWO89/01476号
に記載された方法で製造できる。
ンは、国際特許明細書WO89/01475号およびWO89/01476号
に記載された方法で製造できる。
以下の中間体および実施例は本発明を例示するもので
ある。以下のように略号が使用される。
ある。以下のように略号が使用される。
「Bis CBZリジン−OSU」は、式 で示される化合物である。
「SMP」はスクシンイミジルマレイミドプロピオネー
トである。
トである。
中間体１ ２−（４−アミノ）ブチルペルヒドロ−1,4,7−トリア
ザノニン−1,4,7−トリ（２−酢酸） 標記化合物は、国際特許明細書WO89/01475号の実施例
３（ｂ）の方法に従って製造された。
ザノニン−1,4,7−トリ（２−酢酸） 標記化合物は、国際特許明細書WO89/01475号の実施例
３（ｂ）の方法に従って製造された。
中間体２ ２−〔４−〔Ｎ−〔2,6−ジ−Ｎ−〔（カルボベンゾキ
シ）ヘキサンアミジル〕〕ブチル〕〕−N,N′,N″−ト
リ（２−アセトイル）ペルヒドロ−1,4,7−トリアゾニ
ン ジメチルホルムアミド（0.1ml）中Bis−CBZリジン−O
SU（9.4mg）を、ジメチルホルムアミド（0.2ml）中、中
間体１（4mg）に加えた。ついで４−メチルモルホリン
（5.4mg）と金属を含まない水（0.05ml）、続いてジメ
チルホルムアミド（0.067ml）中ジメチルアミノピリジ
ン（0.4mg）を加え、混合物を60℃に加熱した。反応は
逆相hplc〔ｔ＝0:A＝95％,C＝５％,t＝20分:A＝５％,C
＝95％;A＝0.1％トリフルオロ酢酸（TFA）/H2O,C＝0.1
％,TFA/CH3CN）によって完結するまでモニタリングし
た。精製混合物をついでポリマー逆相カラム上で精製す
ると〔100A;保持時間（0.1％TFA）14.9分〕、標記化合
物（3mg）が得られた。m/e771（M+＋１）;1HNMR δ（C
DCl3/CD3OD）1.0〜1.7（12H,m,リジン−CH2）,2.4〜3.9
（21H,m,大環−CH2）,4.9（4H,d,カルボベンゾキシ−CH
2）,7.1（10H,s,フェニル）。
シ）ヘキサンアミジル〕〕ブチル〕〕−N,N′,N″−ト
リ（２−アセトイル）ペルヒドロ−1,4,7−トリアゾニ
ン ジメチルホルムアミド（0.1ml）中Bis−CBZリジン−O
SU（9.4mg）を、ジメチルホルムアミド（0.2ml）中、中
間体１（4mg）に加えた。ついで４−メチルモルホリン
（5.4mg）と金属を含まない水（0.05ml）、続いてジメ
チルホルムアミド（0.067ml）中ジメチルアミノピリジ
ン（0.4mg）を加え、混合物を60℃に加熱した。反応は
逆相hplc〔ｔ＝0:A＝95％,C＝５％,t＝20分:A＝５％,C
＝95％;A＝0.1％トリフルオロ酢酸（TFA）/H2O,C＝0.1
％,TFA/CH3CN）によって完結するまでモニタリングし
た。精製混合物をついでポリマー逆相カラム上で精製す
ると〔100A;保持時間（0.1％TFA）14.9分〕、標記化合
物（3mg）が得られた。m/e771（M+＋１）;1HNMR δ（C
DCl3/CD3OD）1.0〜1.7（12H,m,リジン−CH2）,2.4〜3.9
（21H,m,大環−CH2）,4.9（4H,d,カルボベンゾキシ−CH
2）,7.1（10H,s,フェニル）。
中間体３ ２−〔４−〔Ｎ−（2,6−ジアミノヘキサンアミジル〕
ブチル〕−N,N′,N″−トリ（２−アセトイル）ペルヒ
ドロ−1,4,7−トリアザオニン 中間体２（13mg）をCH3CN（30ml）中、窒素気相下に
数分間攪拌させた。新たな蒸留したトリメチルシリルヨ
ード（36mg）を素早く添加し、混合物を一夜攪拌した。
次に混合物を水に加え、水層をジクロロメタンで抽出す
ることによって後処理した。粗製の標記化合物（22mg）
は水層に残った。m/e563（M+1）;1NMR δ（CD3OD）1.4
〜2.0（12H,m,リジン−CH2）,2.9〜4.5（22H,m,大環−C
H2）。
ブチル〕−N,N′,N″−トリ（２−アセトイル）ペルヒ
ドロ−1,4,7−トリアザオニン 中間体２（13mg）をCH3CN（30ml）中、窒素気相下に
数分間攪拌させた。新たな蒸留したトリメチルシリルヨ
ード（36mg）を素早く添加し、混合物を一夜攪拌した。
次に混合物を水に加え、水層をジクロロメタンで抽出す
ることによって後処理した。粗製の標記化合物（22mg）
は水層に残った。m/e563（M+1）;1NMR δ（CD3OD）1.4
〜2.0（12H,m,リジン−CH2）,2.9〜4.5（22H,m,大環−C
H2）。
中間体４ ２−〔４−〔Ｎ−〔2,6−ジ−Ｎ−〔（Ｎ−マレイミジ
ル）−Ｎ−プロピル〕ヘキサンアミジル〕ブチル〕〕−
N,N′,N″−トリ（２−アセトイル）ペルヒドロ−1,4,7
−トリアゾニン ジメチルホルムアミド（2ml）中SMPエステル（350m
g）をジメチルホルムアミド（0.7ml）中、中間体３（15
0mg）に加えた。Ｎ−メチルモルホリン（150mg）を加
え、反応はHPLC（条件は中間体２の製造の場合と同じ）
によってモニタリングした。反応がほぼ完了したのち、
混合物をポリマー逆相カラム上で精製すると〔100A;保
持時間（0.1％TFA）10.35分〕、標記化合物（30mg）が
生成した。m/e805（Ｍ＋１）（827−ナトリウム付加
物）。1NMR δ（CD3CN＋D2O １滴）1.1〜1.6（12H,m,
リジン−CH2）,2.5〜4.0（30H,m,大環−CH2）,2.3およ
び2.4（4H,2xt,カルバメート−CH2）,3.6（4H,m,プロピ
オネート−CH2）,6.6（4H,s,マレイミド−CH2）。
ル）−Ｎ−プロピル〕ヘキサンアミジル〕ブチル〕〕−
N,N′,N″−トリ（２−アセトイル）ペルヒドロ−1,4,7
−トリアゾニン ジメチルホルムアミド（2ml）中SMPエステル（350m
g）をジメチルホルムアミド（0.7ml）中、中間体３（15
0mg）に加えた。Ｎ−メチルモルホリン（150mg）を加
え、反応はHPLC（条件は中間体２の製造の場合と同じ）
によってモニタリングした。反応がほぼ完了したのち、
混合物をポリマー逆相カラム上で精製すると〔100A;保
持時間（0.1％TFA）10.35分〕、標記化合物（30mg）が
生成した。m/e805（Ｍ＋１）（827−ナトリウム付加
物）。1NMR δ（CD3CN＋D2O １滴）1.1〜1.6（12H,m,
リジン−CH2）,2.5〜4.0（30H,m,大環−CH2）,2.3およ
び2.4（4H,2xt,カルバメート−CH2）,3.6（4H,m,プロピ
オネート−CH2）,6.6（4H,s,マレイミド−CH2）。
中間体５ ３−〔４−メチル〔Ｎ−〔2,6−ジ,N〔（Ｎ−マレイミ
ジル）−Ｎ−プロピル〕ヘキサンアミジル〕フェニルメ
チル〕−N,N′,N″,N−テトラ（２−アセトイル）ペ
ルヒドロ−1,5,7,11−テトラアゾテトラデシン 標記化合物は３−〔４−（アミノメチル）フェニルメ
チル〕ペルヒドロ−1,5,7,11−テトラアゾテトラデシン
−1,5,7,11−テトラ（２−酢酸）から、中間体2,3およ
び４の製造について記載したのと類似の操作を用いて製
造された。
ジル）−Ｎ−プロピル〕ヘキサンアミジル〕フェニルメ
チル〕−N,N′,N″,N−テトラ（２−アセトイル）ペ
ルヒドロ−1,5,7,11−テトラアゾテトラデシン 標記化合物は３−〔４−（アミノメチル）フェニルメ
チル〕ペルヒドロ−1,5,7,11−テトラアゾテトラデシン
−1,5,7,11−テトラ（２−酢酸）から、中間体2,3およ
び４の製造について記載したのと類似の操作を用いて製
造された。
中間体６ ２−〔４−〔Ｎ−〔2,6−ジ−Ｎ−〔Ｎ−マレイミジ
ル）−Ｎ−プロピル〕ヘキサンアミジル〕ブチル〕〕−
N,N′,N″,N−テトラ（２−アセトイル）ペルヒドロ
−1,4,7,10−テトラアザデカン 標記化合物は２−（４−アミノ）ブチルペルヒドロ−
1,4,7,10−テトラアザデカン−1,4,7,10−テトラ（２−
酢酸）（国際特許出願明細書WO89/01476号参照）から、
中間体2,3および４の製造について記載したのと類似の
操作を用いて製造された。
ル）−Ｎ−プロピル〕ヘキサンアミジル〕ブチル〕〕−
N,N′,N″,N−テトラ（２−アセトイル）ペルヒドロ
−1,4,7,10−テトラアザデカン 標記化合物は２−（４−アミノ）ブチルペルヒドロ−
1,4,7,10−テトラアザデカン−1,4,7,10−テトラ（２−
酢酸）（国際特許出願明細書WO89/01476号参照）から、
中間体2,3および４の製造について記載したのと類似の
操作を用いて製造された。
例１ （ａ） B27.3IgG（Colcher,Dら:Proc.Natl.Acad.Sci.U
SA,78:3199,1981）からＦ（ab′）２の製造 Ｆ（ab′）２フラグメントはB72.3IgGからブロメライ
ンでの消化によって製造した。ブロメラインはまず、1.
0mg/ml溶液を3mM EDTA含有0.1M酢酸塩pH5.50中50mMシ
ステインと37℃で30分間インキュベートして活性化し
た。活性化ブロメラインを、PD10（Sephadex G25）カラ
ムを用い、3mM EDTA含有0.1M酢酸塩pH5.50中に脱塩し
てシステインを除き、同一緩衝液中B72.3（1w/w:50w/w
酵素:IgG）の2.0mg/ml溶液に加えた。消化液を37℃で約
２時間インキュベートし、IgGからＦ（ab′）２サイズ
のピークへの変換をSDS−PAGEでモニタリングした。消
化完了後、アンチパインおよびロイペプチンを加え（終
濃度0.05mg/ml）、混合物のpHをNaOHで6.0で調整し、つ
いでS Sepharose Fast Flowイオン交換クロマトグラフ
ィーに付した。Ｆ（ab′）2,Fcおよび残ったIgGは流出
液中に溶出するが、ブロメラインはマトリックスに結合
して残った。この陰性精製工程により、消化混合物から
すべてのベロメラインが効率的に除去された。
SA,78:3199,1981）からＦ（ab′）２の製造 Ｆ（ab′）２フラグメントはB72.3IgGからブロメライ
ンでの消化によって製造した。ブロメラインはまず、1.
0mg/ml溶液を3mM EDTA含有0.1M酢酸塩pH5.50中50mMシ
ステインと37℃で30分間インキュベートして活性化し
た。活性化ブロメラインを、PD10（Sephadex G25）カラ
ムを用い、3mM EDTA含有0.1M酢酸塩pH5.50中に脱塩し
てシステインを除き、同一緩衝液中B72.3（1w/w:50w/w
酵素:IgG）の2.0mg/ml溶液に加えた。消化液を37℃で約
２時間インキュベートし、IgGからＦ（ab′）２サイズ
のピークへの変換をSDS−PAGEでモニタリングした。消
化完了後、アンチパインおよびロイペプチンを加え（終
濃度0.05mg/ml）、混合物のpHをNaOHで6.0で調整し、つ
いでS Sepharose Fast Flowイオン交換クロマトグラフ
ィーに付した。Ｆ（ab′）2,Fcおよび残ったIgGは流出
液中に溶出するが、ブロメラインはマトリックスに結合
して残った。この陰性精製工程により、消化混合物から
すべてのベロメラインが効率的に除去された。
（ｂ） Ｆ（ab′）２フラグメントの精製 残った消化混合物をまず20mM Tris pH7.8に透析しDEA
E Sepharose Fast Flowカラム上に負荷した。Ｆ（a
b′）２はカラムから流出液中に溶出したが、Fc部分お
よび残った完全なIgGはカラムに残った。結合した物質
は20mM Tris pH7.8中0.1M NaClでマトリックスから溶出
され、カラムが再生された。
E Sepharose Fast Flowカラム上に負荷した。Ｆ（a
b′）２はカラムから流出液中に溶出したが、Fc部分お
よび残った完全なIgGはカラムに残った。結合した物質
は20mM Tris pH7.8中0.1M NaClでマトリックスから溶出
され、カラムが再生された。
（ｃ） 化学的架橋Ｆ（ab′）２分子の製造 2mM EDTA含有0.1Mリン酸塩緩衝液pH8.0中0.5mg/mlの
B72.3F（ab′）２に、終濃度5mMの２−メルカプトエチ
ルアミンを加え、37℃で30分間インキュベートして還元
した。還元後、サンプルを、2mM EDTA含有0.1Mクエン
酸/0.2M Na2HPO4,pH6.0で平衡化したSephadex G25（Pha
rmacia）カラムを通して脱塩した。
B72.3F（ab′）２に、終濃度5mMの２−メルカプトエチ
ルアミンを加え、37℃で30分間インキュベートして還元
した。還元後、サンプルを、2mM EDTA含有0.1Mクエン
酸/0.2M Na2HPO4,pH6.0で平衡化したSephadex G25（Pha
rmacia）カラムを通して脱塩した。
中間体５を終濃度が72mMになるようにジメチルホルム
アミドに溶解し、0.9mMのレベルの新たな還元したFab′
SHに加えた（滴定されるチオールに対して約22倍過
剰）。室温で絶えず攪拌しながら90分間インキュベート
したのち、Ｎ−エチルマレイミドを終濃度9mMになるよ
うに加え、さらに30分間インキュベートし、ついで0.1M
クエン酸/0.2M Na2HPO4,2mM EDTA中に脱塩した。マレ
イミド化Fab′（Fab′mal）を直ちに、新鮮なFab′SH
に、Fab′mal:Fab′SH 1.1:1.0のモル比で加え、絶えず
攪拌しながら約20分間、室温でインキュベートした。架
橋Ｆ（ab′）２を反応混合物から、HPLCゲル濾過によっ
て精製した。
アミドに溶解し、0.9mMのレベルの新たな還元したFab′
SHに加えた（滴定されるチオールに対して約22倍過
剰）。室温で絶えず攪拌しながら90分間インキュベート
したのち、Ｎ−エチルマレイミドを終濃度9mMになるよ
うに加え、さらに30分間インキュベートし、ついで0.1M
クエン酸/0.2M Na2HPO4,2mM EDTA中に脱塩した。マレ
イミド化Fab′（Fab′mal）を直ちに、新鮮なFab′SH
に、Fab′mal:Fab′SH 1.1:1.0のモル比で加え、絶えず
攪拌しながら約20分間、室温でインキュベートした。架
橋Ｆ（ab′）２を反応混合物から、HPLCゲル濾過によっ
て精製した。
架橋反応混合物の組成は、一夜インキュベートしたの
ち、HPLCゲル濾過によって測定した。反応混合物10μ
を200mM2−メルカプトエチルアミン10μに加え、15分
間インキュベートした。800mMヨード酢酸アミド20μ
をさらに加え、15分間反応させた。還元されアルキル化
されたサンプルをついで、HPLC GF250で分析し、クロ
マトグラムの百分率組成を積分で求めた。移動相0.2Mリ
ン酸塩緩衝液pH7.0、流速1ml/分の標準HPLC条件下に、
化学的に架橋された分子は保持時間8.62分で溶出した
が、未反応Fab′は遅れて9.48分で溶出した。架橋Ｆ（a
b′）２はまた、精製後、還元SDS−PAGEによっても確認
された。すなわちこのＦ（ab′）２は架橋Ｈ′−Ｈ′バ
ンド（Mr＝〜46,000）とＬバンド（Mr＝〜22,000）を示
したが、対照は通常のＨ′（Mr＝23,000）とＬバンド
（Mr＝22,000）を示した。
ち、HPLCゲル濾過によって測定した。反応混合物10μ
を200mM2−メルカプトエチルアミン10μに加え、15分
間インキュベートした。800mMヨード酢酸アミド20μ
をさらに加え、15分間反応させた。還元されアルキル化
されたサンプルをついで、HPLC GF250で分析し、クロ
マトグラムの百分率組成を積分で求めた。移動相0.2Mリ
ン酸塩緩衝液pH7.0、流速1ml/分の標準HPLC条件下に、
化学的に架橋された分子は保持時間8.62分で溶出した
が、未反応Fab′は遅れて9.48分で溶出した。架橋Ｆ（a
b′）２はまた、精製後、還元SDS−PAGEによっても確認
された。すなわちこのＦ（ab′）２は架橋Ｈ′−Ｈ′バ
ンド（Mr＝〜46,000）とＬバンド（Mr＝〜22,000）を示
したが、対照は通常のＨ′（Mr＝23,000）とＬバンド
（Mr＝22,000）を示した。
例２ この例は、中間体４で架橋されたキメラB72.3 Fab′
デルタcysの製造を例示する。B72.3 Fab′デルタcys出
発原料は、国際特許出願PCT/GB 88/00731号およびPCT/G
B 88/00730号に特定的に記載されている方法に従って製
造された。
デルタcysの製造を例示する。B72.3 Fab′デルタcys出
発原料は、国際特許出願PCT/GB 88/00731号およびPCT/G
B 88/00730号に特定的に記載されている方法に従って製
造された。
150mM NaClおよび2mM EDATを含有する0.05Mリン酸塩
緩衝液pH8.0中、1.0〜2.0mg/mlのキメラB72.3 Fab′デ
ルタcysに、終濃度5mMの２−メルカプトエチルアミンを
加え、37℃で30分間インキュベートして還元した。還元
後、サンプルを、リン酸緩衝食塩溶液pH7.5で平衡化し
たSephadex G25（Pharmacia）カラムを通して脱塩し
た。
緩衝液pH8.0中、1.0〜2.0mg/mlのキメラB72.3 Fab′デ
ルタcysに、終濃度5mMの２−メルカプトエチルアミンを
加え、37℃で30分間インキュベートして還元した。還元
後、サンプルを、リン酸緩衝食塩溶液pH7.5で平衡化し
たSephadex G25（Pharmacia）カラムを通して脱塩し
た。
中間体４を水に溶解し、新たに還元した3.8mM濃度のF
ab′SHに加え（滴定されるチオール濃度に対して約40倍
過剰）、絶えず攪拌しながら室温で60分間インキュベー
トした。Ｎ−エチルマレイミドを終濃度9mMになるよう
に加え、さらに30分間インキュベートしたのち、リン酸
緩衝食塩溶液pH7.5中に脱塩した。マレイミド化Fab′
（Fab′mal）を直ちに、新鮮なバッチのFab′SHに、Fa
b′mal:Fab′SH1.1:1.0の重量比で加え、絶えず攪拌し
ながら約20時間、室温でインキュベートした。
ab′SHに加え（滴定されるチオール濃度に対して約40倍
過剰）、絶えず攪拌しながら室温で60分間インキュベー
トした。Ｎ−エチルマレイミドを終濃度9mMになるよう
に加え、さらに30分間インキュベートしたのち、リン酸
緩衝食塩溶液pH7.5中に脱塩した。マレイミド化Fab′
（Fab′mal）を直ちに、新鮮なバッチのFab′SHに、Fa
b′mal:Fab′SH1.1:1.0の重量比で加え、絶えず攪拌し
ながら約20時間、室温でインキュベートした。
架橋反応混合物の組成は、一夜インキュベートしたの
ち、HPLCゲル濾過によって測定した。反応混合物10μ
を200mM2−メルカプトエチルアミン10μに加え、15分
間インキュベートした。さらに800mMヨード酢酸アミド2
0μを添加し、15分間反応させた。還元されアルキル
化されたサンプルを次に、HPLC GF250によって分析
し、クロマトグラムの百分率組成を積分で求めた。0.2M
リン酸緩衝液pH7.0を移動相とし、流速1ml/分とした標
準HPLC条件下に、中間体４と架橋した物質は保持時間8.
62分で溶出されたが、未反応cFab′は遅れて9.48分で溶
出した。架橋物質はまた、精製後、還元SDS−PAGEによ
っても確認された。すなわち、架橋物質は、架橋Ｈ′−
Ｈ′バンド（Mr＝〜46,000）とＬバンド（Mr＝〜22,00
0）を示したが、対照は通常のH1（Mr＝〜23,000）およ
びＬバンド（Mr＝22,000）を示した。
ち、HPLCゲル濾過によって測定した。反応混合物10μ
を200mM2−メルカプトエチルアミン10μに加え、15分
間インキュベートした。さらに800mMヨード酢酸アミド2
0μを添加し、15分間反応させた。還元されアルキル
化されたサンプルを次に、HPLC GF250によって分析
し、クロマトグラムの百分率組成を積分で求めた。0.2M
リン酸緩衝液pH7.0を移動相とし、流速1ml/分とした標
準HPLC条件下に、中間体４と架橋した物質は保持時間8.
62分で溶出されたが、未反応cFab′は遅れて9.48分で溶
出した。架橋物質はまた、精製後、還元SDS−PAGEによ
っても確認された。すなわち、架橋物質は、架橋Ｈ′−
Ｈ′バンド（Mr＝〜46,000）とＬバンド（Mr＝〜22,00
0）を示したが、対照は通常のH1（Mr＝〜23,000）およ
びＬバンド（Mr＝22,000）を示した。
例２の操作を、中間体４の代わりに、中間体５または
中間体６を用いて反復した。
中間体６を用いて反復した。
例３ この例は、中間体６で架橋されたキメラB72.3 Fab′
デルタcysの製造を例示する。キメラB72.3 Fab′デルタ
cys出発原料は、国際特許出願PCT/GB88/00731号およびP
CT/GB88/00730号にとくに記載された方法に従って製造
した。
デルタcysの製造を例示する。キメラB72.3 Fab′デルタ
cys出発原料は、国際特許出願PCT/GB88/00731号およびP
CT/GB88/00730号にとくに記載された方法に従って製造
した。
2mM EDTAを含有する0.1M酢酸ナトリウム／クエン酸
ナトリウム緩衝液pH6.0中5mg/mlのキメラB72.3 Fab′デ
ルタcysに、終濃度4.5mMの２−メルカプトエチルアミン
を加え、37℃で30分間インキュベートして還元した。還
元後、サンプルを、2mMEDTA含有0.1M酢酸ナトリウム／
クエン酸ナトリウム緩衝液pH6.0で平衡化したSephadexG
25（Pharmacia）カラムを通して脱塩した。
ナトリウム緩衝液pH6.0中5mg/mlのキメラB72.3 Fab′デ
ルタcysに、終濃度4.5mMの２−メルカプトエチルアミン
を加え、37℃で30分間インキュベートして還元した。還
元後、サンプルを、2mMEDTA含有0.1M酢酸ナトリウム／
クエン酸ナトリウム緩衝液pH6.0で平衡化したSephadexG
25（Pharmacia）カラムを通して脱塩した。
中間体６を水に溶解し、新たに還元したFab′SHにモ
ル等量比Fab′SH:中間体６＝2.2:1になるように加え、
絶えず攪拌しながら、37℃で60分間インキュベートし
た。
ル等量比Fab′SH:中間体６＝2.2:1になるように加え、
絶えず攪拌しながら、37℃で60分間インキュベートし
た。
架橋反応混合物の組成は、60分間インキュベートした
のちHPLCゲル濾過で求めた。反応混合物10を200mM2−
メルカプトエチルアミン10に加え、15分間インキュベ
ートした。さらに800mMヨード酢酸アミド20を加え
て、15分間反応させた。還元されアルキル化されたサン
プルをついで、HPLC GF250で分析し、クロマトグラム
の百分率組成を積分によって求めた。0.2Mリン酸塩緩衝
液pH7.0を移動相とし、流速を1ml/分とした標準HPLC条
件下に、中間体６で架橋された物質は保持時間8.62分で
溶出したが、未反応cFab′は遅れて9.48分で溶出した。
架橋物質はまた、精製後、還元SDS−PAGEで確認した。
この場合、架橋物質は、架橋Ｈ′−Ｈ′バンド（Mr＝4
6,000）とＬバンド（Mr＝22,000）を示したが、対照は
通常のＨ′（Mr＝23,000）とＬバンド（Mr＝22,000）を
示した。
のちHPLCゲル濾過で求めた。反応混合物10を200mM2−
メルカプトエチルアミン10に加え、15分間インキュベ
ートした。さらに800mMヨード酢酸アミド20を加え
て、15分間反応させた。還元されアルキル化されたサン
プルをついで、HPLC GF250で分析し、クロマトグラム
の百分率組成を積分によって求めた。0.2Mリン酸塩緩衝
液pH7.0を移動相とし、流速を1ml/分とした標準HPLC条
件下に、中間体６で架橋された物質は保持時間8.62分で
溶出したが、未反応cFab′は遅れて9.48分で溶出した。
架橋物質はまた、精製後、還元SDS−PAGEで確認した。
この場合、架橋物質は、架橋Ｈ′−Ｈ′バンド（Mr＝4
6,000）とＬバンド（Mr＝22,000）を示したが、対照は
通常のＨ′（Mr＝23,000）とＬバンド（Mr＝22,000）を
示した。
0.1M酢酸ナトリウム緩衝液pH5.0中に脱塩したのち、
例１〜３の生成物を塩化インジウム（111In）で処理し
て、111I標識生成物を得た。同様に、0.1M酢酸カリウム
緩衝液中に脱塩したのち塩化イットリウム（90Y）と反
応させると相当する90Y標識生成物が得られた。
例１〜３の生成物を塩化インジウム（111In）で処理し
て、111I標識生成物を得た。同様に、0.1M酢酸カリウム
緩衝液中に脱塩したのち塩化イットリウム（90Y）と反
応させると相当する90Y標識生成物が得られた。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 51/00 Ｇ０１Ｎ 33/531 Ａ Ｇ０１Ｎ 33/531 Ａ６１Ｋ 49/02 Ａ (72)発明者 ミリカン，トーマス アンドリュー イギリス国 エスエル６ ０ディーワイ バークシャー，メイドンヘッド，ドー ニィ リーチ，ハーコート クロース ３ (56)参考文献 特開 昭62−120378（ＪＰ，Ａ) 特開 昭61−153568（ＪＰ，Ａ) 特表 昭63−502659（ＪＰ，Ａ) 特表 昭62−501442（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) G01N 33/531 G01N 33/532
Claims (18)
- 【請求項１】１個もしくは２個以上のレポーターまたは
エフェクター基を含む少なくとも１個の非ジスルフィド
性鎖間架橋を有する標識抗体フラグメント分子からな
り、その架橋は抗体フラグメントの抗原結合ドメインの
外側に位置する１個または２個以上の架橋部位で各鎖に
結合し、その架橋部位はアミノ酸残基の側鎖に存在する
アミノ、スルフヒドリル、カルボキシル、フェノールま
たは他の芳香族もしくは複素環芳香族官能基である、架
橋抗体フラグメント接合体。 - 【請求項２】架橋部位はシステイン残基の側鎖に存在す
るスルフヒドリル基である請求項１記載の接合体。 - 【請求項３】システイン残基は蝶番領域における各重鎖
中に存在する請求項２記載の接合体。 - 【請求項４】システイン残基は蝶番領域に存在する唯一
つのシステイン残基である請求項３記載の接合体。 - 【請求項５】抗体フラグメントは組換え抗体フラグメン
トである請求項１〜４のいずれかに記載の接合体。 - 【請求項６】該接合体は少なくとも１個の非ジスルフィ
ド性鎖間架橋を有するＦ（ab′）２フラグメントからな
る請求項１〜５のいずれかに記載の接合体。 - 【請求項７】該Ｆ（ab′）２フラグメントがさらにジス
ルフィド架橋を有することを特徴とする請求項６記載の
接合体。 - 【請求項８】非ジスルフィド性鎖間架橋は同種または異
種官能性架橋剤の残基である請求項１〜７のいずれかに
記載の接合体。 - 【請求項９】レポーターまたはエフェクター基は、放射
性核種、キレート化金属、蛍光化合物、NMRもしくはESR
で検出できる化合物、薬理学的物質、酵素またはホルモ
ンである請求項１〜８のいずれかに記載の接合体。 - 【請求項１０】レポーターまたはエフェクター基は、放
射性核種またはキレート化金属である請求項９記載の接
合体。 - 【請求項１１】放射性核種は放射性ヨウ素である請求項
10記載の接合体。 - 【請求項１２】キレート化金属は、配位数２から８まで
の二価または三価陽性金属と多座キレート剤のキレート
である請求項10記載の接合体。 - 【請求項１３】多座キレート剤は、非環式もしくは環式
ポリアミン、ポリエーテル、ポリアミド、ポリフィリン
または炭素環式誘導体である請求項12記載の接合体。 - 【請求項１４】非環式ポリアミンはポリアミノカルボン
酸である請求項13記載の接合体。 - 【請求項１５】環式ポリアミンは環式トリアザまたはテ
トラアザ誘導体である請求項13記載の接合体。 - 【請求項１６】請求項１の抗体フラグメント接合体と、
１種以上の医薬的に許容される担体または賦形剤からな
るヒトまたは動物の治療または診断に使用するための医
薬組成物。 - 【請求項１７】請求項１の抗体フラグメント接合体の製
造方法であって、レポーターまたはエフェクター基また
はその前駆体を含有する架橋剤と抗体フラグメントとを
反応させ、該前駆体を含有する架橋剤を反応させた場合
には反応後、更に該前駆体をレポーターまたはエフェク
ター基に変換させて抗体フラグメント接合体を完成させ
ることからなる製造方法。 - 【請求項１８】抗体フラグメントは架橋剤に対して過剰
濃度で存在させる請求項17記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB898903022A GB8903022D0 (en) | 1989-02-10 | 1989-02-10 | Chemical compounds |
| GB8903022.5 | 1989-02-10 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03504644A JPH03504644A (ja) | 1991-10-09 |
| JP2975676B2 true JP2975676B2 (ja) | 1999-11-10 |
Family
ID=10651472
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2503004A Expired - Lifetime JP2975676B2 (ja) | 1989-02-10 | 1990-02-12 | 架橋抗体とその製法 |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0384624B1 (ja) |
| JP (1) | JP2975676B2 (ja) |
| KR (1) | KR910700075A (ja) |
| AT (1) | ATE123952T1 (ja) |
| AU (1) | AU632536B2 (ja) |
| CA (1) | CA2026312A1 (ja) |
| DE (1) | DE69020182T2 (ja) |
| FI (2) | FI904975A0 (ja) |
| GB (2) | GB8903022D0 (ja) |
| HU (1) | HUT56288A (ja) |
| IE (1) | IE67320B1 (ja) |
| IL (1) | IL93361A0 (ja) |
| NO (1) | NO904367L (ja) |
| NZ (1) | NZ232490A (ja) |
| WO (1) | WO1990009195A1 (ja) |
| ZA (1) | ZA90983B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005181192A (ja) * | 2003-12-22 | 2005-07-07 | Tacmina Corp | 残留塩素濃度測定方法 |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5194594A (en) * | 1990-09-07 | 1993-03-16 | Techniclone, Inc. | Modified antibodies |
| GB9112536D0 (en) * | 1991-06-11 | 1991-07-31 | Celltech Ltd | Chemical compounds |
| US6764681B2 (en) | 1991-10-07 | 2004-07-20 | Biogen, Inc. | Method of prophylaxis or treatment of antigen presenting cell driven skin conditions using inhibitors of the CD2/LFA-3 interaction |
| DE19911329A1 (de) * | 1998-03-27 | 2000-09-21 | Benes Ivan Friedrich | Humantherapeutisch anwendbares Radioimmunkonjugat und Verfahren zu seiner Herstellung |
| GB9812545D0 (en) | 1998-06-10 | 1998-08-05 | Celltech Therapeutics Ltd | Biological products |
| CN101469329B (zh) | 1998-11-27 | 2012-10-24 | 达尔文发现有限公司 | 增加骨矿化的组合物和方法 |
| US20040009535A1 (en) | 1998-11-27 | 2004-01-15 | Celltech R&D, Inc. | Compositions and methods for increasing bone mineralization |
| CA2454618C (en) | 2001-07-24 | 2012-04-03 | Biogen Idec Ma, Inc. | Methods for treating or preventing sclerotic disorders using cd2-binding agents |
| GB0124317D0 (en) | 2001-10-10 | 2001-11-28 | Celltech R&D Ltd | Biological products |
| WO2005115436A1 (en) | 2004-05-07 | 2005-12-08 | Astellas Us Llc | Soluble lfa-3 polypeptide for treating viral disorders |
| RU2007118385A (ru) | 2004-11-22 | 2008-12-27 | Джи-И Хелткер АС (NO) | Контрастные агенты для направлений доставки во внеклеточный матрикс |
| DE102005034950A1 (de) | 2005-07-22 | 2007-02-01 | Tesa Ag | Abroller für die Herstellung eines Klebebandschlauchs |
| DE602007009954D1 (de) | 2006-03-22 | 2010-12-02 | Viral Logic Systems Technology | Verfahren zur identifizierung von polypeptid-targets |
| US8377448B2 (en) | 2006-05-15 | 2013-02-19 | The Board Of Trustees Of The Leland Standford Junior University | CD47 related compositions and methods for treating immunological diseases and disorders |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4751286A (en) * | 1985-11-19 | 1988-06-14 | The Johns Hopkins University | Protein label and drug delivery system |
| GB8603537D0 (en) * | 1986-02-13 | 1986-03-19 | Parker D | Conjugate compound |
| GB8720833D0 (en) * | 1987-09-04 | 1987-10-14 | Celltech Ltd | Recombinant dna product |
-
1989
- 1989-02-10 GB GB898903022A patent/GB8903022D0/en active Pending
-
1990
- 1990-02-09 ZA ZA90983A patent/ZA90983B/xx unknown
- 1990-02-12 EP EP90301441A patent/EP0384624B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-02-12 HU HU901641A patent/HUT56288A/hu unknown
- 1990-02-12 AT AT90301441T patent/ATE123952T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-02-12 AU AU50475/90A patent/AU632536B2/en not_active Ceased
- 1990-02-12 WO PCT/GB1990/000213 patent/WO1990009195A1/en active Application Filing
- 1990-02-12 CA CA002026312A patent/CA2026312A1/en not_active Abandoned
- 1990-02-12 IE IE49490A patent/IE67320B1/en not_active IP Right Cessation
- 1990-02-12 JP JP2503004A patent/JP2975676B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1990-02-12 DE DE69020182T patent/DE69020182T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1990-02-12 IL IL93361A patent/IL93361A0/xx unknown
- 1990-02-12 KR KR1019900702231A patent/KR910700075A/ko not_active Application Discontinuation
- 1990-02-12 NZ NZ232490A patent/NZ232490A/en unknown
- 1990-10-09 FI FI904975A patent/FI904975A0/fi not_active Application Discontinuation
- 1990-10-09 FI FI904974A patent/FI904974A0/fi not_active Application Discontinuation
- 1990-10-09 NO NO90904367A patent/NO904367L/no unknown
- 1990-10-09 GB GB9021894A patent/GB2237020B/en not_active Revoked
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005181192A (ja) * | 2003-12-22 | 2005-07-07 | Tacmina Corp | 残留塩素濃度測定方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO904367L (no) | 1990-12-06 |
| GB2237020A (en) | 1991-04-24 |
| IE67320B1 (en) | 1996-03-20 |
| HUT56288A (en) | 1991-08-28 |
| FI904974A0 (fi) | 1990-10-09 |
| EP0384624B1 (en) | 1995-06-21 |
| JPH03504644A (ja) | 1991-10-09 |
| NZ232490A (en) | 1992-09-25 |
| GB8903022D0 (en) | 1989-03-30 |
| AU632536B2 (en) | 1993-01-07 |
| EP0384624A2 (en) | 1990-08-29 |
| GB2237020B (en) | 1993-04-14 |
| DE69020182T2 (de) | 1995-11-30 |
| AU5047590A (en) | 1990-09-05 |
| KR910700075A (ko) | 1991-03-13 |
| WO1990009195A1 (en) | 1990-08-23 |
| HU901641D0 (en) | 1991-03-28 |
| CA2026312A1 (en) | 1990-08-11 |
| IE900494L (en) | 1990-08-10 |
| FI904975A0 (fi) | 1990-10-09 |
| ATE123952T1 (de) | 1995-07-15 |
| EP0384624A3 (en) | 1990-11-14 |
| NO904367D0 (no) | 1990-10-09 |
| GB9021894D0 (en) | 1990-11-28 |
| ZA90983B (en) | 1991-10-30 |
| DE69020182D1 (de) | 1995-07-27 |
| IL93361A0 (en) | 1990-11-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2975677B2 (ja) | 架橋抗体およびその製造方法 | |
| JP3373849B2 (ja) | ３価および４価の単一特異性抗原結合性タンパク質 | |
| US6511663B1 (en) | Tri- and tetra-valent monospecific antigen-binding proteins | |
| JP2975676B2 (ja) | 架橋抗体とその製法 | |
| US5354554A (en) | Crosslinked antibodies and processes for their preparation | |
| JPH0692873A (ja) | 診断および治療物質としての作用を併せ持つ３機能性抗体様化合物 | |
| JPH0647557B2 (ja) | 放射性標識抗体フラグメント | |
| IE902254A1 (en) | Bispecific and oligospecific mono- and oligovalent receptors, the preparation and use thereof | |
| JPH0647560B2 (ja) | 放射性標識された抗体断片用のカツプリング剤 | |
| AU2022213825A1 (en) | Immunoconjugates comprising kallikrein related peptidase 2 antigen binding domains and their uses | |
| US5714149A (en) | Crosslinked antibodies and processes for their preparation | |
| CA2113578A1 (en) | Trifunctional compounds having specificity for multi-drug resistant cells | |
| EP0569531B1 (en) | Stabilized antibody fragments | |
| Schmitz-Dräger et al. | Monoclonal antibodies and renal cell carcinoma—current possibilities and future options | |
| IE921898A1 (en) | Tri- and tetravalent mono specific antigen binding proteins |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080903 Year of fee payment: 9 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080903 Year of fee payment: 9 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090903 Year of fee payment: 10 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100903 Year of fee payment: 11 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term | ||
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100903 Year of fee payment: 11 |