HUT56288A - Crosslinked antibodies and process for their production - Google Patents

Crosslinked antibodies and process for their production Download PDF

Info

Publication number
HUT56288A
HUT56288A HU901641A HU164190A HUT56288A HU T56288 A HUT56288 A HU T56288A HU 901641 A HU901641 A HU 901641A HU 164190 A HU164190 A HU 164190A HU T56288 A HUT56288 A HU T56288A
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
antibody
conjugate
bridge
reporter
chain
Prior art date
Application number
HU901641A
Other languages
English (en)
Other versions
HU901641D0 (en
Inventor
Stephen Rhind
Kenneth Millar
Thomas Andrew Millican
Original Assignee
Celltech Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Celltech Ltd filed Critical Celltech Ltd
Publication of HU901641D0 publication Critical patent/HU901641D0/hu
Publication of HUT56288A publication Critical patent/HUT56288A/hu

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
    • A61K51/1093—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody conjugates with carriers being antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6875—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody being a hybrid immunoglobulin
    • A61K47/6877—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody being a hybrid immunoglobulin the antibody being an immunoglobulin containing regions, domains or residues from different species
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
    • A61K51/1045—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against animal or human tumor cells or tumor cell determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
    • A61K51/1084—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody the antibody being a hybrid immunoglobulin
    • A61K51/1087—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody the antibody being a hybrid immunoglobulin the immunoglobulin comprises domains from different animal species, e.g. chimeric immunoglobulins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2123/00—Preparations for testing in vivo

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Ultra Sonic Daignosis Equipment (AREA)
  • Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Description

A találmány téihálósltott antitestekre» az eséket tartalaasó készítményekre, az előállításukra szolgáló eljé* résekre· valóiét a gyógyításban és a diagnózisban való fel* használásukra vonatkozik·
Az olyan antitest konjugátumokat, aswlyekben az antitestek kovalens kötéssel kötődnek riporter (kösvetitő) vagy efLektor (végrehajtó) csoportokhoz, felhasználják a dl· * 2 — agnózisban és korlátozott mértékben a terápiában. As antitestet általában egy különleges cél-antigénre vonatkozó tffinitása és specificitása alapján választják ki olyan módon» hogy felhasználása esetén képes legyen riporter vagy affektor csoportot a kívánt helyre szállítani és ott tartani blzonyos Ideig· A gyakorlatban azonban mbét a riporter vagy effektor csoportot as antitestben kapcsolni anélkül» hogy ne akadályoznák eszel az antigénkötő kapacitást és/vagy a spécii idtást, s igy as antitest konjugétim hatékonyságát no csökkentenék· .
Az irodalomban már leírtak biapeolfikua heterodlmer antitesteket» amelyekben Bab· fragmentumokat tioéter kötésen keresztül kapcsoltak össze IM«J« ülennie és munkatársai» J· Immunoi·» 139·» 2367· (1937*)!· Leírtak olyan antitesteket is» amelyekben a fluorénzcein származék c^beacein dissulfid kötésen keresztül kapcsolódott hozzájuk ÍB.P. Paokard és munkatársai, Bioohemistry, 25·» 3543· (1986·)!·
Azt találtuk» hogy olyan ásódon is lehetséges egy riporter vagy effaktor csoportot az antitesthez hozzákapcsolni, hogy a kapott vegyület speciflcitása változatlan maradjon· Ilyen eljárással a módosított antitest antigénkötö kapacitását előnyösen fakozhatjuk is a nem módosított antitesthez viszonyítva* Az ilyen típusa módosított antitesteknek in vivő jó a vér klirensze is és égy tumor jelenléte előnyösen magas tumor »vér és tumora csont arányokat ad· Ezt úgy értük al, .hogy a riporter és effaktor csoportot az antitest legalább két lánca közé kapcsoltuk - keresztkötéssel - as antigénkötö doménektől távol* • · · · — 5 *
Tehát a találmány térhálósított antitest koniugátűmet szolgáltat, amely magába foglal egy olyan antitest molekulát, amely legalább egy lánoköstl hidat tartalmas» amely» ben egy vagy több riporter vagy effektor csoport van, és as említett híd egy vagy több hídfő-helynél kapcsolódik mindé* gyík lánchoz, s a hídfők aa antitest antigénkötő donénjein kívül helyezkednek el.
A találmány szerinti antitest kon^ugátuaokban aa antitest molekulában lévő lánoköati híd bármelyik nehéz va®r könnyű láncot egy vagy több ®áe nehéz éa/Vagy könnyűlánchoz kötheti ugyanabban a molekulában· áronban aa as előnyös» ha a híd két láncot köt öroro» főként két nehéz láncot. Egynél több riporter vagy effektor csoportot tartalmasó híd jelenléte is lehetséges» azonban as egy ilyen híddal ellátott konjugátumok as előnyösek·
A hídfő-hely minden antitest láncban általában egy olyan aminosavosoport eldallároa lehet» amely a láno részét képes!» de közvetlenül nem vess réaat as antigénkötő doménben· Az alkalmas aminosavaknak aa oldallánoa egy amino-, szulfhidxlL», karboxil-, fenolon vagy más aromás vagy hetero* aromás funkciós csoportot tartalmas» mivel a láneköati hid ide kapcsolódhat. As ilyen típusa speciális aminosavesobortok kömé tartozik a lizia-» cisztáin-, glutaminsav-, aesparagiroav- és tlrosinosoport. így másik lehetőség, hogy a hídfő-hely az antitest lánchoz kaporolt egy szénhidrátosoporton, amely legalább egy olyan aldehidcsoportot tartalmaz, amelyhez a lánekösti hid kapcsolódhat.
A leginkább előnyös hidfő-helyek a ciszteinosopor• · · ··« » · « ····· ···'· • ···«··· . · · · — 4 — tok ssulfhidrilGSopaEtjai, például azok, amelyek rendes körülmények között a Unöközti diszulfid hidakban vannak jelen·
Az ilyen tipusu előnyös helyek az antitest nehéz lánca csukló szakaszában jelenlévő oisztein csoportok szulfhidrilcsoportjai·
Egy Maik előnyös esetben a hídfő-hely agy oiyan aminosavcsoport eldalláncán lehet, amelyet rendesen nem tartalmaz az'immunglobulin, de amelyet az alábbiakban leírt reko&bináns birs technikák felhas snálásávsl bevittünk· Ilyen helyek a sisztsin-é» a lisin .szulfbldril-r. illetve ffilnooso?....._.......................
partjai·
A találmány szerinti konjugátumokban lévő láncközti hidak általában bármilyen hosszúak és összetételiek lehetnek· Alkalmas hidak lehatnék a homo- és hetero-bifunkciós térhálósitó reagensek csoportjai, főleg az olyan homo- és hetem-blfunkciós térhálósitó reagensek, amelyek egy vagy több riporter vagy eflektor csoportot tartalmaznak. így a hidak egy vagy több hídfő-helyhez kapcsolódhat Bek· A különleges hidak adott esetben szubsztituált alifás, aromás vagy aralifás vegyületek polivalens, főleg bivalens gyököket tartalmaznak.
Általában előnyös, ha a láncközti hid egy nea-dl^ csuliid láncközti hid· A nem-dizzulfid kifejezéssel azt óhajtjuk jelezni, hogy az S - 3 típusa hidak, amelyeket· normál . . körülmények között tartalmaznak az antitestek, ki vannak zárva»
A lánchoz ti hid általában kovalens kötésben tartalmazza a riporter vagy offektor csoportot. Tehát a .riporter vagy effektor ©söpört a hídszerkezet egy integsáns részét * 5 * alkothatja, asas a hid szerkezete a kövotkeső leheti (amelyben £ a riporter- vagy effektor osoport, as X1 és X2 egyaránt reaktív funkciós csoport maradéka, as rf éa X2 együtt a Md többi réssét alkotják* as m éa as a * amelyek azonosak vagy különbözőek · egéas csérnek, asas 1 vagy több), vagy a hídon asubastituons lehet, asas a Md szerkezet© a követkeső leheti ί-Λι.-χ* T At-Aj„. ..........; >.........................................................................................................
Λ fenti speciális tipusu hidakban as X* éa rf együtt egyenes tagy elágazó 0^^^ alkilén- (például Οχ^,χθ alkilén-, igy C^q alkilén-, például butilén-, pontilén-, Maxiién- vagy Meptilén-), ^^20 olkenilén- vagy elkinllénlánc, amelyeket adott esetben egy vagy több -0- Vagy —S— atom szakit meg, továbbá cikloalkilén- (például óik· lopentilén- tagy ciklohexilén-), 0θ.χ2 «román csoport (például fenilén- tagy asubsstituált fenUén·), Cj^xq Metoroaromás csoport (például furanll-, piridil-), -N(R^)- (amelyben rf hidrogénatom vagy O^g alkilcsoport), -OOKCR1)- vagy ·Ν(ΒΧ)ΟΟ-osoport.
Általában a reaktív funkciós csoportok maradéka, amelyet rf tagy rf jelent, bármilyen olyan csoport masadé* ka lehet* amely bármilyen tiol-, amino·, karboxil-, hidroxil·, aldehid-, aromás tagy heteroaromás csoporttal képen reagálni* I«M» pildAul X1 vagy X2 -OHj-, -3-, -!®-, -W(CHjX-,
-WOOWs, -WBJSKHNw, -BG?h)K« (amelyben Ph fenil csoportot jelent) csoport, továbbá -HC(O)-, W(S>, -00-, a) képletü *
osoport, -HeA(Het2XJH2- általános képletü osoport, amelyben a Met1 és a - ©aelyek vagy azonosak vagy különbözőek - mindegyike nitrogéntartalmú heterociklusos QMp&s** például piridilcsoport, vagy Bet1 egy nitrogéntartalmú heterociklusos és Bet2 egy hidrogénatom) vagy egy b) áltáléi nos képletü csoport, melyben as Alk egy alkil·· például isstilosoport.
Ma a Mid elágazó, úgy előnyös, ha minden ágban van egy reaktív funkciós csoport, és esek lehetővé teszik, hogy a kid egynél több hidfő-hely révén mindegyik lánchoz kapcsolódjék.
A híd általában stabil kovalens kötést siket a riporter vagy effektor csoporttal. A hídban lévő egy vagy több csoport és a riporter vagy effektor csoportban vagy esek reaktív ssáxnasékalban lévő egy vagy több csoport kösött létrejött roákoié után általában dlrokt kötés alakul ki. In vivő folhassnáláa oéljára és ahol as effektor osoport felasabado· lása szükséges a oél-helyen, a kötés olyan, hogy ast protonlitlkus onslaekkel le lehessen nősíteni, például s 175 617 ésáoii európai szabadalmi leírta ssorlnt·
Ha kívánt, a híd egynél több riporter vagy effektor csoportot tartalmas·
A találmány sseMntl konjugátumokban a ^riporter csoport” megjelölés básnUyen olyan csoportot vagy vegyületet jelent· amely analitikai módszerekkel in vitro és/vagy in vivő könnyen kimutatható ée amely Uyoa tulajdonsággal ruhássá fel a konjugátumot. as effektor csoport” kifejezés alatt bármely olyan osoport vagy vegyület értendő, mely egr bio lógiai rendszerben változást képes előidézni vagy a biológiai rendszert válaszadásra készteti éa amely a találmány szerinti konáugátusmsknak ilven tulajdonságot kölcsönöz·
Alkalmas riporter vagy effektor molekulák a radlo· nuklidok, például a éa a *^J| a kelátkötésben lévé fémek? a fluoreszkáló vegyületek vagy as olyan vegyületek, amelyek MR vagy NSR spektroszkópiával kimutathatókι a farmakológia! anyagok, ide tartoznak a citotoxikus vegyületek és toxinok, például a rioln és fragmentumai? as enzimek? éa hQymonok*
A kelátkötésben lévő fémek közé tartoznak a két vagy három pozitív töltéssel és 2-től 8*lg terjedő koordinációs számmal rendelkeső fémek kelétjal· Bzek a fémek főként az alábbiak lehetnekι teohnéoium (To), rénium (Re), kobalt (Co), rés (Cu), arany (Au), ezüst (Ag), ólom (Pb), bizsuit (Bi), indium (In), gallium (Ga), ittrium (X), terbium (Tb), gadoll^ nlum (Gd) és aakandimn (se)· Általában előnyös, ha a fém re*· dionuklid. a speciális radiontfklidok közé tartoznak a követk.^. la6R., 188H., ^OO, “o·, 67CU, 195Au. 199Au, 110Ag, mAS. 2°^. 2°®M. 207M, 1UIn, 67Ga, 88*. 9¾. 16%>, 19’<m «. ^so.
Kelátkötésben lévő fém lehet például a fonti fém· -típusok egyike, amely bármely alkalmas soikfogu kelátképző ágenssel képez kólátot· Uyen ágensek lehetnek például a kö* vetkezők: ciklusos vagy nem ciklusos polieainok, poliéterek (például a koronaéterek és származékaik)? a poUamidok? porfirinek: és a karbociklusos azármasiékak·
A kelátképző ágens tlrusa általában a használt — 8 — fémtől függ· A találmány szerinti kelátképző cserek különösen hasznos csoportját alkotják azonban a ciklusos és nan ciklusos t poliaminok, különösen a poli-aminokarbonsavsk, például ® diotl* lén-trimin-penta-ecetssv éa származékaik és a aakro-ciklueos aoinok, például a ciklusos triaza- és tétraaza-száxmasékok; továbbá a poliaMdok, főként a dezferri*os»-emin és származé** kei·
Az előnyös makrociklikus említők közé tartoznak az (I) általános képlett! vegyületek, amelyekben L egy reaktív csoport, B egy alkilénláncj amelyet e&F vagy két - adott esetben szubsztituált - nitrogénatom szakit aeg? és a W®, amelyek azonosak vagy különbözőek, tetszés szerint szubsatituált nitrogén-atom; p nulla vagy 1 és q nulla vagy 1 vagy 2, azzal a feltétellel, hogy ha p nulla, akkor q 1 vagy 2. Megjegyezzük, hogy as L csoport szolgáltatja a makrocikli» ée a híd számára a csatlakozási pontot a találmány szerinti kon j ugat tanban.
Az CD általános képletü atnlnok közé tartoznak a (XI) általános képletü triaze*származékok> (amelyben az I» csoport a fenti jelentésű, W3, és W® - melyek azonosak vagy különbözőek - jelentése egy -W( (OH^)^!- osoport (amolyben r nulla vagy l*tŐl 6-lg terjedő égés» szám és R* alkil*, alkoxi*elkil*t -OOgB, -SO^H, vagy ariloooport),
B egy -ahgCCHg^KCRXcBg^CHg- csoport (amelyben s és t - amelyek azonosak vagy különbözőek lehetnek - jelentése 1, 2 vagy 3i B jelentése -(0¾ )^- csoport, amelyben r és X* jelentése a fenti! ι a (III) általános képletü tetreassrszáf* sazékok, amely képletben, az 1 csoport a fenti jelentésű, i3. ♦ · · · # · · • · «·*·· · | ·♦··« *· * I • «··««·* ».# » »·
- 9 * és W2 * amelyek azonosak vagy különbözőok - jolontése
-WfCöKg)^!* osoport (jelentése a fenti) és B egy
Hm2(0a2)sNmM2(afí2)daW(R)(eH2)tCH2- csoport. amelyben d nulla vagy 1, 2 vagy 3 és s, t és R a fenti jelentésül#
Különösen hasznos (XI) általános képletü amin a (IV) általános képletü vegyület#
Továbbá különösen hasznos (III) általános képletü amin az (V) általános képletü vegyület#
A találmány szerinti konjugátumokban az előnyős kelátkötéaben lévő fémek közé tartozik az indium, amely a (II) általános képletü vegyülettel, főként pedig a (IV) általános képletü vegyülettel képez kelét-komplexet, vagy az ittrium, amely a (III) általános képletü vegyülettel, főként as (V) általános képletü vegyülettel képez kelát-komplexot. Különösen előnyös a ωΐη és a
Megjegyezzük, hogy általában minden alkalmas far· makológiai ágens kapcsolódhat a hidképző csoporthozt feltéve természetesen, hogy a kapott megkötött ágens megtartja aktivitását vagy pedig olyan tormában kapcsolódott, amely in vivő konvertálható az aktív ágensáét például a gazda enzimeinek hatására#
A találmány szerinti vegyülő tökben lévő offektor molekulákhoz használt oitotoxikos vegyületek magukba foglalják a citosztatlkua vegyületeket# Az előnyös vegyületek közé tartoznak például az alkilezőszerek, muatámitrogének (példááU kloraabucil, selfalan, mekloretamln, oiklofoaafamid vagy uraoil-auatár) és származékaik, a trUtilén-£oMtor«BW tráatüén-tio-fostóoramidt buswlfán vagy ois^latin, as érti• · «
- 10 metabolitök, igy a metotrexát, fluoro-uradl és fxo::uridia, oitarabin, merkapt'O-purin, tio-guanln, fluorc^eoetsav vagy fluoro-citroMsv; az antibiotikumok, igy © bloomicinek (például bleomicin-szulfát), doxorubioin, daunorubicin, © mitomidnek (például a mltomicin C), az aktlnomicinek (például a daktinomicin) vagy plikamioinj a mitézis inhibitorok, igy as etopozid, viracrieztin vagy vinblasztini a kazbamidok, igy a hidroxi-karbanid; a hidrazinok, így a prokarbaziní vagy imidszőlők, igy a dakarbaziní kaltkeamioin, eszperaaicin vagy toxol.
A hormonok közé tartoznak az androgének (például a dromoBztanolon vagy tesztolakton), a progesztinek (például a megösztrol-aoetát vagy medroxi-progesztsron-acetát), az őszt rögének (például a d ietÜ-szt 11b őszt rol-difoszfát, poli-ösztradiol-foszfát vagy ösztraausztin-foszfát) vagy aa antl-ösztrogének (például a tamoxifen).
A találmány szerinti konjugat írnokban lévő antitest általában bármelyik immunglobulin osztályhoz tartozhat· Lehet például az immunglobulin M vagy főképpen úgy zouaunglobulin G antitest, beleértve az XgGl, XgG2, IgüJ és XgG4 izotipusokat· Az IgGi, XgG2 és XgG4 izotipueok különösen hass· nőseik a találmány szerinti konjugáturnákban, de főképpen as 1^11 és Xgő4 izotipueok a hasznosak· Az antitest lehet állati eredetű· például emlős eredetű, mint például egér, patkány vagy emberi eredetű· Lehet természetes antitest vagy ennek fragment urna vagy - ha kívánt - rekomblnáns antitest vagy antitest fragmentum, azaz egy olyan antitest molekula vagy antitest fragmentuBi, amelyet rekomblnáns PUd technikákkal állítottunk elő· * · · « * XX *
A kedvező rekombináns antitestek vagy antitest fragmentumok közé tartoznak azok* amelyek X) egy olyan antigénkötő helyet taxtalmasnsk, amelynek legalább egy része egy iMsik antitestből származik, például, amelyben ©z egyik antitest hipervsriábilis vagy kosplsmntaritást magba Mrosó szakaszait beültettük egy raásodik* más antitest variábilis szerkezetű szakaszába (a 239 400 száma európai szabadalmi leírás szerint)! 2) az olyan rekombináns antitostok vagy fra^asntuaok, amelyekben a nem-iv szekvenciákat aás különböző antitestekből származó nam-ϊν szekvenciákkal helyetteaitettük (a 171 496, 173 494 ás 194 276 számú európai szabadalmi leirások esarint)i 3) vagy olyan rekombináns an* titestek vagy fragmentumok, amelyek lényegében egy természetes immunglobulin szerkezetével rendelkeznek, de amelyekben e^y vagy több aminosavcaoportot megváltoztattunk, például amelyekben az antitest csukló szakaszában a ciczteinopoportek száma a természetes immunglobulinban lévőktől különbözik vagy amelyekben a rekombináns antitest vagy fragmentum egy felületi rétegében egy vagy több Giszteinosoport a természetes immunglobulinban jelenlévő ®gy más sminosavcsoportot helyettesit (a WO $9/01974, illetve a WO 09/31782 számon nyilvánosságra hozott nemzetközi szabadalmi leírások szerint) vagy amelyekben egy lizincooport van a természetes lmungloballnban lévő más eminosavcsoporb helyében·
Aiicl az antitest egy antitest fragmontu®, ügy ez például egy proteolitikus eredetű fragmntm lehet, amelyet s teljes antitest ensimatikns emésztése révén kaptunk· iás esetben as antitest fragmentoa egy olyan fragmentum lehet, ···» ♦ · • 12 amelyet rekombináns DNS technikákkal állítottunk elő, például W fragmentumok lehatnák (láeda WO 89/02465 Máson nyilvánooságra hosott nwsetkösi saabadalmi leírást)*
Általánosságban, a találmány sserinti konjugátumok esetén» amelyekben as antitest egy antitest fragmentum, főként as f(ab*)2 fragmentumot helyeszük előnybe·
Az antitest lehet pollklonális vagy előnyösen monoklonális eredetű és akárhány antigén determinánsra lehet specifikus, de előnyösebb, ha egyre speoifikus. ás antigén determináns lehet bármilyen haptén jegy bármilyen antigénnel kapcsolata· antigén determináns· speciális antigének késé tartósnak as állatokkal és emberekkel kapcsolatos antigének (példád a normál állati ssövet vagy sserv sejtjeivel kapcsolatos antigének * a tumorsejtekkel kapcsolatos antigének (például as onkofetális antigének, mint a kareinoembrionális antigén vagy as alfa-fetprotein, a placentáris antigének» mint a koriogonadotropin és a plaoentáris alkalikus fossfatás és a prosstata antigének, mint a prosstata savanyu fossfatás ée a prosstata specifikus antigén) és a test folyadékokkal kapcsolatos antigének, mint a fibrin vagy a vérlemaskékl, valamint a vírusokkal, baktériumokkal és gombákkal kapcsolatos antigének·
Egy előnyös kiviteli alák saerint as antitest képe· felismerni és megkötni egy tumorsejttel kapcsolatos antigént, főként a honán mii- és vastagbéltumorral kapcsolatos 02-72 antigénen egy vagy több epitópot. Különösen előnyös ilyen típusos antitest a B72.J monoklonálie antitest Cd· Oolcher és munkatársai, Pro®. Natl* ássd· 8ο1·» 7®·, ··«««·«·· ····· ·· · 4 « «······ · · ··· • 15 *
5199» (1981· )J vagy annak egy frwaentuma, tőkést E(ab’)2 fragmentuma·
A találmány szerinti konjügátumok előnyös csoportjában minden antitest konjugátum egy olyan antitest molekulát foglal magába, amelyben egy olyan nehéz lánc közötti Md van, amely egy vagy több (X) általános képletü kelátképző ágenst tartalmaz, mindegyikben egy kelátkötésben lévő fémmel, ée a® említett hid egy olyan olszteinaieradék szulfhidrilcsopoxt ján keseestül kapcsolódik mindegyik nehéz lánchoz, amely a esőbanforgó antitest molekula említett láncainak csuklószakaszában van jelen·
As ilyen tlpusu konjugátuaok közül különösen hasznosak azok, amelyekben as antitest esek egy ciszteincaoportot tartalmaz mindegyik nehéz láns csukló szakaszában és as említett ciazteincsopcrt alkotja a hídfőket a láncközti hid számára·
Más ilyen tlpusu konjugátumok közül azok as előnyösek, amelyekben as antitest képes felismerni és megkötni egy tumor sejt tel kapcsolatos antigént, főként a humán mell- éa vastagbéltumorral kapcsolatos TAG-72 antigén egy vagy több epitópot. az antitest lehet természetben előforduló antitest vagy fragmentuma, főként as F(ab* )g fragmentum vagy reko»· teinána antitest Vagy antitest fragmentum, amint est as előb* biokban leírtuk. Előnyös antitest a 872,5 antitest vagy fragmentuma, ideértve a rekombináns 872« 5 antitestet vagy frag* rnntusát·
Szén előnyös tlpusu konjugát írnokban az (X) áltálé* nos képletü kelátképző ágens főleg egy (IX) vagy (XXX) élte* • · · · · · · · ··«·· · · · < ·»♦♦ ·»· ·· — 14 — lánca képletü vegyület ée leginkább egy (XV) vagy (V) élte* lánca képletü vegyület lehet* Előnyösek a két vagy három positit töltésű férnék» amelyeknek a koordinációs száma 2-től 8-ig terjedhet éa amelyek leginkább radíonuklldok* Különösen előnyös as indium éa főleg a ^*In, valaaint az ittrima és m»e a 9°r.
A találmány szerinti konjugátumok diagnosztikus vagy terápiás szerekként használhatók fel· Az antitest természetétől éa a riporter éa effektor csoporttól függően a kon· jugátum felhasználható in vivő alkalmas detektorral együtt a normál éa beteg szövetek - ideértve a tumorokat éa trombuaokat - leképezésért! vagy rendellenes sejtzavarok késelésére· például tumorok» trombuaok és beteg szövetek - például fertőzött szövetek - késelésére· A találmány ssorinti konjugétumok in vitro diagnosztikus technikákban la felhasználhatók» például radloimmunaaaaykben vagy enzim-insaunassaykben.
A találmány egy olyan antitest kenj agát özet la ismartot» amely humán vagy animál betegnél késelési vagy diagnosztizálási eljárásban használható» és az említett antitest kenj agát un» amely egy olyan antitestmolekulát foglal magába» amely legalább egy láncközti hidat tartalmaz» amelyben egy vagy több riporter vagy effektor caoport van» s as említett híd as antitest antigéBkötö doménjein kívül fekvő egy vagy több hídfőnél kapcsolódik mindegyik lánchoz*
In vivő felhasználás céljára as antitest kenjugátua alkalmas összetételben, megfelelő dósísban formulázható* A találmány egy olyan gyógysserkéazitoényt is szolgáltat, amely e&r olyan antitest molekulát f oglal magába».
• ·· »·#· ·· · ·- · « ti · «· ♦ · ···«· ·t ····· · · *4 • ···*··· ·· ··· amely legalább egy lánoközti hidat tartalmas, amelyben egy vagy több riporter vagy effaktor osoport van, és a ezóbanfargó áld az antitest antigénkötő doménjein kivül elhelyezkedő egy vagy több hidfőrhelynél kapcsolódik mindegyik lánchoz;
a készítmény egy vagy több gyógyszerészeti szempontból elfogadott hordozót vagy kötőanyagot tartalmazhat.
A konjugátum in vivő alkalmazása bármilyen alkalmas módon történhet, de előnyösen parenterálisan, például injekció vagy infúzió formájában. A parenterális alkalmazáshoz megfelelő foxmulázás magába foglalja a konjugátumból készített szuszpenziót, oldatokat vagy emulziókat olajos vagy vizes vlvő anyagban. A készítmény foxmulázószereket is tartalmazhat, például szuszpendáló, stabilizáló és/vagy diszpergáló ágenseket. A konjugátum por formájában is elkészíthető, amelyet használat előtt megfelelő vivőanyaggal, például steril, pirogénmentes vízzel fel kall oldani. Ha kívánt, a konjugátum önállóan dozirozva és/vagy agy vagy több más hatóanyaggal vagy leképezőszerrel együtt dozirozva is kiszerelhető.
A konjugátum alkalmazásakor használatos dózisok meghatározása függ az alkalmazás módjától, az antitest természetétől, a riporter és effektor csoporttól, továbbá, hogy a készítményt mi célból szándékozunk felhasználni, azaz diagnózisra-e vagy terápiára és egyéb változóktól, mint a testtömeg és a beteg kórtörténete. Tehát a dózist bármilyen alkalmazás esetén általában empirikusan szükséges meghatározni, standard eljárások felhasználásával.
Amennyiben a találmány szerinti konjugátumetj; in vitro diagnózis céljára szánjuk, úgy erre a felhasználásra a ké• ·* ·· · » · · i · «· ·· »·««· ·>
»···· ·· ·· • ·····♦· ··«4« szitményt hagyományos eljárásokkal adaptálhatjuk, például a. MeWods ln Ensymology 84. (1932.) és 92. (577*525·· 1985*) kdtotében (J.J.Lángon® és H· Ven Vunakis, Academio Pnw, New York) leírtak szerint.
A találmány ssoxlntl konjugátárnokát általában úgy állítjuk elé» hogy egy antitestet vagy ennek egy fragmentumát egy olyan bőrhálósító reagenssel reagáltatjuk, amely egy riporter vagy effektor csoportot vagy egy prekurzorát tártál* messe*
A reakciót általában megfelelő oldósserben folytat* juk le, például vises oldószerben, ilyen a vis vagy vizes szervetlen vagy ssoxves oldószerben, például foszfát-, olt* rét- vagy aoetát-pufferben vagy esek keverékében! vagy vises szerves oldószerben· ilyen például a vises aceton vagy dinétil-formamid» bármilyen alkalmas» például 0 °C-tól 50 °C*ig terjedő hőmérsékleten, főképpen közel szobahőmérsékleten.
Megjegyzendő, hogy as ilyen általános tipusu térhálóaitó reakcióban, ahol as antitest és/Vagy a riporter és effektor csoportok asámoa potenciálisan reaktív csoportot tartalmasnak· rendszertelen hálósodén fordulhat elé, amely a termékek heterogén keverékét eredményezheti. Ennek elkerülésére az általános térhálósító módszer a reagáló és/vagy a reakció feltételeinek - akár egyedüli, akár kom* bináclóa * megfelelő megválasztásával homogén termék előállításához adaptálható· ás egyik változat szerint olyan bőrhálósító wageesebet választhatunk, amelyeknek a funkciós csoportjai szelektíven reagálnak as antitest specifikus funkciós csoportjaival· • 4· ·9 ♦ « ♦ ♦ · · · · •· ···«· · « ·*»·· ···« »·*···«····«* , * 17 *
Számos példáját ismerjük oson csoportoknak, például ilyenek a* amino-reaktiv éa tiol-reáktiv funkeiós csoportok * ezeket e gyakorlott szakemberek ismerik (leírásukat lásd például a 173 629 *» 175 617 számú európai szabadalmi leírásban, a 2 109 407 számú egyesült királyságbeli szabadalmi leírásban és a WO 68/05455 számon nyilvánosságra hozott nemzetközi szabadalmi leírásban)» amelyek megfelelő feltételek mellett szelektív módba reagálnak·
Egy második változatban, ha az antitest és/vagy a riporter vagy effektor osoport olyan potenciálisan reaktív csoportokat tartalmas» amelyek uea kívántak, hogy résstrvogyouek a hálókötésben, azok megvédhetek még mielőtt a hálósitó reakció végbemenőé· a proteinek reaktív csoportjainak védelmére hagyományos eljárásokat használhatunk, a védelmet megszüntető standard technikákkal együtt·
Egy további változatban úgy választhatjuk meg az antitestet» hogy az» as egyedi hídfő-helyből legalább egy párat tartalmazzon a térhálósitásho»· Est elérendő részlegemen redukálhatunk egy antitestet» például egy enyhe rodukálóssor - így B-merkepto-etil-amin - használatával úgy, hogy szabad szulfhídrilceoporbok keletkezzenek az antitest nehéz Idomait Összekötő diszulfid hldakból, de kökben a molekula többi része lényegében sértetlen maradjon, a szuühidzllowtrbok ezután hídfő-helyek gyanánt használhatók fel egy tlol-speoifikuo bőrhálósító sssrrzl végzett sselektiv reakcióhoz. Egy más megoldás szerint az antitestet kémiai vagy enzimatikus technikákkal oxidálhatjuk - például a 175 629 számú európai szabadalmi leírás szerint *, hogy aldehidcsoportokat képezzünk • ·· ···· »* · ·····«· • « *·«*· * · ··*· · · · · i ···*··«····«· « 18 · a sséiMdrát oldalláncokban, amelyeket ezután térhálósitó reagenssel reagáltathatunk a fenti általános leírás szsMnt·
Agy további alternatív me^ldás szerint rekombináns MS teohnikákkal egyedi hídfőket vezethetünk be a· antitestbe a térhálósitó reagenssel való reagáltatás előtt· így például egy olyan antitestet hozhatunk létre, amlyben minden nehéz lánc csukló szakaszában a ciazteincsoportok számát egyre redukáljuk. lat szokásos módon ügy érjük el, hogy először empressziÓB vektorban olyan operont állítunk elő, amely olyan antitest - nehéz lánoot kódoló Ws szekvenciát tartalmaz, amelynek a csukló szakasza normál módon kapcsolódik az antitest molekula GH1 doménjéhez· ás operont úgy állíthatjuk elé, hogy as egyik osztályba tartósé egy antitestből származó CH1 szakaszt kódoló MS szekvenciát egy másik osztályhoz tartozó antitestből származó csukló szakaszt kódoló W szekvenciához illesztjük (aplioing)· Egy aás módszer szerint úgy állíthat juk elő as operont, hogy as egyik osztályhoz tartósé antitest 0Η1 doménjét és osukló szakaszát klónozzuk és a olszteincsoportokat kódoló DNS tripletek ázását egy ilyen tripletté váltostatjdk helyre irányuló műt«genezissel, például alanint kódoló szekvenciákká való mutációkkal. Megfelelő sejtvonalst transzformálunk a vektorral· est követően a trenszficlált sejtvonalat tenyésztjük, s ez előállítja a kívánt nehéz láne polipeptidet·
Minthogy a vektor ozák a nehéz lánc polipeptidet kódolja, szükség less arra» hogy a sejtvonal saéaára mogtex*
Keljük a komplementer könnyű láncot, hogy ezt elérjük, báró· alternatív stratégiát alkalmazhatunk. ás egyik változat sze- • «· ··<· ·4» • · 4 ♦ · 4« • ♦ * *·· » ·4 ···* · 4 « *4 • *»*,«·, · ·« 4· — 19 — riut a sejtvonalat egy második vektorral transzficiáljiík, és ez a második vektor egy komplementer könnyű lánc polipeptidot kódol» Előnyös, ha a vektorok azonosak - a kódoló szekvenciákat és a szelekciós máskorokét kivéve hogy biztosítsák amennyire lehetséges, hogy minden poXipeptld lánc egyenlően fejeződjék ki*
Egy második változatban a vektor magába foglalhatja mind a könnyű lánc, mind a nehéz lánc polipcptidőket kódoló szekvenciákat. Egy harmadik változat szerint olyan gazdasejtet használhatunk, amely természetszerűen szekretál ®gy komplementer könnyű láncot, A vektorok szerkesztésére szolgáló általános módszerek éa a tenyésztési módszerek jól ismertek (lásd példáult Maniatis és munkatársai, kolecular Cloning, Goid Spring Harbor, New York, 1982. í Primrose és Old, Principles of Gene Manipulation, Blackwell, Oxford, 1980.). A fenti módszert részletesebben ismerteti a WO 89/01974 számon nyilvánosságra hozott nemzetközi szabadalmi leírás·
Megjegyezzük, hogy a fent leirt technikák átdolgozhatók bármekkora olyan nehéz lánc - könnyű lánc pár előállítására, amely egy ciszteincsoporttal rendelkező csukló szakaszt tartalmaz. Az ilyen szerkezeteket térhálósító reagenssel magáltathatjuk a fenti általános leírás szerint és as alábbi példák szerint·
As imént leírtakhoz hasonló rekombináns DNS technikákat alkalmazva (lásd a WO 89/M7®2 ázáson nyilvánosságra hozott nemzetközi szabadalmi leírást is), egy- antitest molekula mindegyik nehéz láncába bevihetünk egy cioteincaoportot egyedi hidfő-helysk létesítésére, a térhálósító reagenssel
9» ···· ** · • · ♦ · « · • « ·»· · · · ·· * * · · · • ··♦· »ff ·· ·♦· való következő reakcióhoz, a találmány szerinti konjugátum előállítása céljából· A leírt módszereket megfelelően átdolgozott fosmában szintén fel lehet használni alkalmas kiindulási anyagokhoz, amikor más rekombináns antitestek előállítása kívánatos, például olyan antitesteké, amelyek egyedi hídfőket képeznek a téxbálósltó reagens részére·
Általában azt találtuk, hogy a találmány sserintl vegyületek termelésére végzett térhálósitó reakciókban, főleg amelyekben as antitest egyedi hídfő helyeket tartalmas - például mint fent leírtuk előnyös# ha a térhálósitóreagenst feleslegben reagálhatjuk az antitesttel· Ha igy járunk el, elkorOldftt ® koreszbkötéeak rendszertelen kialakulását és a kívánt antitest terméket jó kitermeléssel és tisztasággal állíthatjuk elő· Az olyan térhálósitó reakciók, amelyekben az antitestet hasánáljuk nagyobb koncentrációban (például kétszeres vagy ennél nagyobb feleslegben) a térhálósitó reagenshez viszonyítva· a találmánynak egy további sajátságát képezik·
Ha a találmány szerinti konjugátumokban a riporter vagy offektor osoport egy kelátkötésben lévő fém, úgy a komjugátum előállításának utolsó lépése a fém bevitelére ssolgéló reakció. Tehát egy antitest molekula prekursorát, amelyben legalább egy olyan láncközti hid van# amely egy vagy több kelátképaő ágenst tartalmas» egy fómsóval (például egy fém-halogeniddel) reagáltathatunk, alkalmas oldószerben» például vises vagy nem visos oldószerben (ilyen például as asetenitrll» aceton» propilén karbonát, dimetil-foxmamid vagy dlmotll-szulfoxid) bármilyen alkalmas» 0 °O-tól 50 °C*ig terjedő hő• ·
mérsékleten, például kösd szobahőmérsékleten.
AS antitesteket, amelyeket a találmány szerinti konjugátumok előállításához kiindulási ^nyaga^sat haíCTományos állíthatjuk elő· például Isnunlsált állatok szérumából vagy előnyösem ayeloma vagy hibridoma sejtekből rigy rekombináns Dffi technikákkal, például a 171 496, 175 494» 194 276 éa 259 430 ssámu európai szabadalmi lel* rázok szerint és a WO 89/011974, WO 89/01782, WO 89/02465 éa WO 89/01785 számon nyilvánosságra hozott nomsetkösl ssa· badalmi leírások szerint. Az antitest fragmentumok a teljes antitestből állíthatók elő enzimatikus vagy kémiai módszerekkel vagy a két módszer kombináció jóval a szokásos gyakorlatnak megfelelően, vagy as előbbiekben emlitett rekombináns DNS technikákkal, amelyekkel - megfelelő átdolgozásuk után teljes antitest helyett a fragmentum állítható elő*
A találmány szerinti konjugátumok előállításához használt térhálósitó reagensek általában maguk a riporter vagy effektor csoportok vagy esek asámasékal lehetnek, amelyek egy vagy több olyan funkciós csoportot tartalmasnak, amelyek as antitest molekulában lévő hídfő-helyekkel képesek reagálni oly módon, hogy a lánoközti híd a riporter vagy ef* faktor csoporton kexeMtÖl jön létre ι vagy, a téxhálósltó reagens egy megfelelően szubsztituált heterofunkalós térhálóaitó reagens lehet, amelyben a szubsztituens a riporter vagy effektor csoport. A hetcrofunkciós térhálósitó reagensek előállítására szolgáló módszerek jól Ismertek (lásd példáult
l.X* Ghose és munkatársai, Methods in Enzymology, 95· , 288-553. (1985· )1 · A riporter Vagy effektor csoporttal való *
• *· ···· 99· • Ο · ·· Ο · • · · ··· * · 9 ···· · · e «· * ···· ··· «· ··· összekötésüket hagyományos módszerekkel végezhetjük el» például ahogyan a példákban leírjuk* á taMlmány szerinti konjugátumokhoz használt ef— faktor és riporter csoportok könnyön hozzáférhetőek (lásd példáult 2 109 40? számú egyesült királyságbeli szabadalmi leírás» 4 472 509 számú amtxákai egyesült államokbeli szabadalmi leírás és WO 09/01475 és WO 39/01476 számon nyilvánosságra hozott nemzetközi szabadalmi leírás) vagy előállíthatok ismert vegyülő tökből egyszerű kémiai módosítással» a szokásos használatával v*gy előállíthatok jywert kiindulási anyagokból ugyanolyan módszerekkel, mint amelyeket az ismert vegyületek előállítására használunk* ás (I)» (XI) és (III) általános képletü különleges makrooiklusos aminek a WO 89/01475 és WO 89/01476 számon nyilvánosságra hozott nemzetkösi szabadalmi leírásokban ismertetett módszerekkel állíthatók elő*
Az alábbi példákkal világitjuk meg a találmányt« anélkül azonban» hogy e példákkal a találmány oltalmi körét korlátoznánk*
A használt rövidítések a következőkι
Bisz OBZ lizin-OSU a (VI) képletü vegyületet Jelenti» W » azukoinimidil-maleimido-propionát.
A használt intermedierek a következők!
laté:
2- (4-Amino )butil-perhidro-l »4» 7-triazanonin-l, 4,7-tri-
iS, 1*11
A sím szerinti vegyületet a WO 89/01475 szánon nyilvánosságra hozott nemzetközi szabadalmi leírás >(b) pél^ dája szerinti módszerrel állítjuk elő·
WlMTfltoA
2-Í4—íw-12, 6»41rff-t {Xasbebcnwsl^mAn-a^dmibutUJ Ι-Κ,Β’,ΙΓ1— =*Sfefe.9S8*5íítemg»»:A*4ife«^iiBa^«_____.
Diaetll-forsaaidban (0,1 el) oldott 9,4 mg bisz-CM lizin OSM adunk dimetil-formamidban (0,2 al) oldott 4 ag interaedier 1-hea·
Esette as elegyhes 5*4 mg 4-aetil-aorfolint és fé»-aentes vizet (0,05 al), majd diaetil-fórásaidban (0,067 al) oldott 0,4 ag dimetil-amino-piridlnt adunk hozzá, a as ele-...........gyet 60 eO-j?a nelegitjtlk· A roskoiő lefolyását sírnak teljessé válásáig revem fázisú HPW-vel követ jük (t»0, áa$5£, o»%l T«20 perc, α«9» AttO,m trifluor-eoetssv CmVHgO, o«O,l% TFA/OH^ON). A nyers elegyet ezután poliaer reverz fáéi·» su oszlopon tisztítjuk (lOOAi retenoiés idő (0,1% TFA) 14*9 pere), s igy 5 ng óim szerinti vegyületet kapunk.
a/· 771 <***l)i *H KB £ (CDOlj/CDjOD)· 1,0-1,7 (12H, n, lltin-CHg-k),
2»4~5i9 (21H, a* makrooiklua-OHg-k), 4*9 (4H, d, kakbo-beasaKl-GBp* 7*1 (10H, s» fenil)· wwwatgJL·.
2»t4*t^(2t6-Maaino-4ie«á»-MÍdÍl )J butUl-1f,N· ,N-trl(2*
SSÍíeiljESÖiajtóidtaáSJS’fi’Si»________ Aa lrtex«ai.r 2. 13 «6-Jét Óidban & *1) kaverjük nitrogén alatt pár poráig. Gyorsan hozzáadunk frissen doostillált 56 ag trl»etll*aailll*t és az elegyet egy é jsna— 24 — kán át keverjük* Az elegy feldolgozása agy történik, hogy vizhes öntjük és a vizes fázist diklóiMaetánnsl extraháljuk.
á nyers cl» szerinti vegyület (22 mg) a vizes fázisban marad· m/e %3 @T%1)<
Xli MR 6 (OD^OD)s 1,4-2,0 (12ü, m, li»in-Cli2-k), 2,9-4»5 (22b, m, makroeákl«iH3Hg-k)·
2-( 3· Í1M 2, Odi-N-Í (lHUleliaidil >l?»propilJ hexán-uuidilJ butlll IDimetil-fonaamidban (2 ml)oldott 3&0mg £MF észtert adunk dimetll-fortasmidban (o»7 ml) oldott 15) mg intermedier 3hoz* Az elegyhez hozzáadunk 150 mg ’Mnetil-morfolint és a reakció lefolyását HPLO-vel követjük (a feltételek megegyeznek az intermedier 2· előállításánál meglévő feltételekkel)· Ami· kor a reakció lényegében teljessé válik, az elegyet polimer revorz fázisú oszlopon tisztítjuk Í100AI retonoiós idő (0,1$
ΤΓΑ) 10,35 perel és igy 30 mg óim szerinti vegyületet kapunk· m/e 805 (M*+l) (327 - nátrium melléktermék *11 TO £ (OPjOK ♦ 1 csepp S20) : 1,1-1,6 (12H, ®, lisln-OHg-fc),
2,5-4,0 (30H, », makrooikluo-OHg-k), 2,3 és
2,4 (4H, 2xt, karbamát-OHg-k), >,6 (48, a, propionát-OHg-k), 6,6 (4H, e, maleiald-OK^)·
5-(4-®etil[TM2,6-di,lM (N-meleimidil >M-propilJhoxán-amldllI- fenil-metilI-^WtjlF^t-totraCS-eeotöllJporhidro-l^fFfW· mm»·*· m»i— iWW.nl >w1
A cim szerinti vegyületet >(4*(smlnomeMlXenlJl·»
-metillporhldro-1,5,7» U-te traaza-tetradecin-1,5,. 7,11-totre· • ·
• 25 (2-ecetsav >ból áUitjuk elő» az intenaedier 2, 3 és 4 elő* állítására leírt eljárásokkal azonos sódon*
2-14—í$*í 2|6-di-H- (IMáalolmidll X^propill hexán-amidill butill J *
A óla szerinti vagyülatst 2-(4-mlnö)butll-perhidro•1,4»7*lOtetraa3a-dekán-l*4*7*13-t©tra (2-eoetsav>ból állít* jük elő (lásd © ?/O 39/01476 számon nyilvánosságra hozott nemzetközi szabadalmi leírást) az intermedier 2», 5. és 4· előállítására leírt eljárásokkalazonos módon.
1. példa (a) f(abf)2 fragmentumok előállítása Β72·3 IgO-ből (D.Ooloher és munkatársai» Proc.l?atl»Acad*sei·» ?8·, 3199· (1931. )I
Az F(ab»)2 fragmentumokat a Β?2·3 IgS-ből bromelitl·nel való emésztéssel állítjuk elő· A bromelint először aktiváljuk, azaz 1»O mg/ml-es oldatát 50 mmol oiazteinnel inkubáljuk 37 °O-on 30 percig 3 mól EDTA-t tartalmazó 0»l mólos acetát pufferben (pH » 5*5)· Az aktivált biomelint MO (8«phedex G-25) oszlop és 33 romol ΕΕΪΑ tartalmú O»1 mólos acetát (pH » 5*50) használatával sótalanitjuk a cisztein eltávolítására és hozzáadjuk a Β72·3 2,0 mg/ml koncentráció ju ugyanezen pufferrd készült oldatáhos (1 (tömeg/tömeg)i 50 (tömeg/tömeg) eazimf Igől. az emésztést úgy végeseik, hogy 37 °0-on 2 órán &« itóübélunk ée ez IgS kowereiéjit Tfeb-)2 íWS-OSE segítségével, a csúcs mérésével követjük* As eméss* tés befejeződése után antipain-t és leupeptin-t (enzim inhLbitorok) adagolunk (végkoncantrációi 0,05 mg/ml) és as elegy • · w 26 — pH-ját 6,0-ra állítjuk be FaOH-vel az ezt követő S Sepharose fest Hév ionosorélő kromatográfiához* Az FíabOg* az Fe ée a visszamaradt Xgó átfolyik az oszlopon és a bwmelin a mátrixhoz kötődik* Eddig a negatív tisztítási lépéssel az emésztett elegyből eredményesen távolituak el minden bromelint.
(b) Az i*(ab*)2 fragmentumok tisztítása
A kapott emésztett elegyet először 20 mmólos trisz*· bon (pH ® 7,8) dializáljUk, majd felvisszük DEAE Sepharose Fest Flow oszlopra* Az F(ab»)o átfolyik az oszlopon, mig az Fo-t és a maradék XgO-t az oszlop visszatart ja* A megköt ött anyagot 20 mólos trisz-ben (pH « 7,8) oldott o,l a»l ffaOl-al eluáljuk a mátrixról az oszlop regenerálása céljából* (c) Kémiailag térhálósított P(abe)2 molekulák előállítása
A B72.J F(ab* )g-t 5,0 mg/®l koncentrációjú oldatban - 2 mmol SDTA tartalmú 0,15 mólos foszfát puffefben (pH ® 8,0) - redukáljuk 2-mexkapto-etU-amin hozzáadásával 5 mmol végkonoentrációig, majd 37 °C-on 30 percig itíkubáljuk* A redukálás után a mintát Sephadex G-25 (Pharmaoia) oszlopon, amelyet előzőleg 2 mmól ΕΰΦΑ-t tartalmazó 0,1 mól citrouuBáv//0,2 mól Wa^HPO* (pH β 6,0) oldattal hoztuk egyensúlyba, sótalanitjuk.
Intermedier 5-öt oldunk fel dimetil-formamidban mmol végkoneontráeióig és hozzáadjuk frissen redukált Fab^SH-hoz, 0,9 mmol szintig (megközelítőleg 22-szeres feleslegben a Vibrálható tiol csoportokhoz viszonyítva)* Az elegyet 90 percig állandó keverés mellett inkibáljuk szobahőmérsékleten, majd N-etil-maleimidet adunk hozzá 9 «mól végfcon• · ······ · ····· ···· • ······· ·· *·· • 27 oentrációig* Hzután tovább inkubáljtík 50 percig, majd sót»* lseitjuk 2 mmol SOTA tartalmú o,l mól cltromssv/0,2 col WgghPO* oldat segítségév©!* A maleiaiddol reagálhatott fab»*t (Fab’mal) azonnal hozzáadjuk frissen készített Föb»sh-hoz 1»1 í 1,0 Fab’mal s láb*83 molarányban, majd az elegyet esobahőmérsákleten állandó keverés collett 20 órán át inkubáXjuk· A térhálósított f(eb’)a~t a reakciáclegyből KFDO gélezüréseel tisztítjuk.
A tózhálósitott reakaióelegy összetételét BPLd gél.szűréssel határozzuk meg* egy éjszakás.inkubálás. után, m wdícióelegy lo pl*ét hozzáadjuk. 10 pl 200 mcolos 2-merkapto-etil-aminhQZ és 15 porcig inkubáljuk* Szutún η6ώ hozzáadunk 20 pl 800 lamólos jód-acetamidet és 15 percig xvagáltatjuk* A redukált és alkilezott mintát ezután HPLC GF-250 használatával analizáljuk és a kromato grammon a százalékos összetételt integrálással határozzuk meg. A kémiailag térhálósított molekula 8,62 perces retenoiós idővel oldódik le, mig a'reagáiatlan «ab* később· 9,48 perces retenoiós idővel oldódik le> standard HPLC feltételek aellett} átfolyási sebességi 1 isl/pero, mobil fázis 1 0,2 mólos foszfát-poffér (pH a 7,0). A térhálósított P(ab· )3^ tisztítás után is megvizsgáltuk redukáló SDS-PkW módszerrel, ahol az k(ab»)g egy keresztkötéses - H· sávot (iíri 46.000) és egy L sávot (Mri 22*000) áshatott» míg a kontroll a szokásos H* (Kri 25*000) és L (Mri 22*000) sávot mutatta*
2* példa
A példa az intermedier 4-el tóxüálósltott kínéra
8^*5 Vab* delta oys előállítását ismrtöti. A klséra >72»3 — 28 — lat* delta oys kiindulási anyagot a fOf/OB 88/00731 és a
PCT/GB 38/0O?)0 ásómon nyilvánosságra hozott nemzetközi szabadalmi bejelentésekben speoiálieaa imaertetett módszerek szerint állítjuk elé#
A kimére »72*3 Bab* delta oys 150 mmol NaOl-t és mmol tartalmazó 0,05 mólos foesfátpufforsol »
8,0) készített 1,0 · 2,0 mg/ml konoentráoióju oldatát 2-merkapto-etil-smin hozzáadásával - 5 ®ol végkonoentráoióig * redukáljuk 37 ®0-on 30 perese InkuMlássel· Redukálás után a mintákat Sephadox 0-25 (Bhanaaoia) oszlopon, amelyet előzőleg foszfáttal puff erőit konyhasó-oldattal (pH « 7,5) hoztunk egyensúlyba, sótalakítjuk*
Az intermedier 4-et vízben oldjuk és hozzáadjuk a frissen redukált PaMsH-hoz, 3,3 mmol koncentráció mellett (körülbelül áO-szeres feleslegben a titrálható tiolosopertokhoz viszonyítva), majd az elegyet szobahőmérsékleten inkutáljuk 60 percig, állandó keveréssel· ^-Btil-maleimidet adunk as elegyhez 9 omol végkoncentráolóig és további 30 percig inkubáljuk, mielőtt foszfáttal pufférőit konyhasó-oldat (pfi « 7,5) segítségével sótalanltunk. a maleiniddol reagált >ab*-t (Fab’aal) rögtön hozzáadjuk egy frissen készített fab*SH sarashoz a következő suly-aránybani 1,1 1 1,0 yab*mal 1 feb*SH, majd szobahőmérsékleten állandó keverés mellett 20 órán át ínkutáljuk·
A térhálósított reakoiéelogy össsstételét egy éjszakán át tartó inkubálás után HPLÖ kiszűréssel bstáressuk meg# A rsakeióelegy 10 pl-ét hozzáadj tik 10 200 smólos
S-meifeapto-otil-aminhoz és 15 peréig inkubáljsk· Bsntáá 20 pl
- 29 300 mmólos jód-acetamidot adunk a reakció©légyhez és 13 peréig reagálhatjuk* A redukált, alkilözeth mintát ezután ΗΕΊΧ3-vei analizáljuk és a kromtogrammból a százalékos ősszotételt integrálással határozzuk meg. Az intermedier 4-al térhálósított anyag 3»62 perces retenciós idővel eluálódlk» Mg a reagálatlan Bab· később» 9,43 perces reteneiós idővel, standard HPLO feltételek melletti átfolyási sebesség:
ml/pero, mobil fázist 0,2 mólos foszfát-puffer. A térhálósltett anyagot tisztítás után is megvizsgáltuk redukáló 3D0-PáGB módszerrel» amivel egy. keresztkötésü. H* - fi* sávot
O’ri ^46.000) és egy L sávot Gíri ~ 22.000) kaptunk, míg a kontroll a szokásos 11* $r: 23*000) és L (Mr: 22.000) sávot mutatta.
A 2. példa szerinti eljárást az intermedier 4 helyett az intermedier 3 vagy az intermedier 6 fölhasználásával megismételtük.
3· példa
A példa az intermedier 6-tal téxhálóeitott kiméra 372#3 Bab» delta cys előállítását ismerteti* A kimére· 872*3 Bab* delta cys kiindulási anyagot a PÓT/GB 88/00731 éa a PCT/GB 86/00730 számon nyilvánosságra hozott nemzetközi szabadalmi bejelentésekben leírt speciális módszerek szerint állítottak elő*
A kisóra B72*3 í*ab» delta oys 2 mmol BSEA-t tartalmazó 0,1 mólos nátriua-s^etát/oitrát-pí<ferxel (pH » 6,0) készített 3 mg/M koncantrációja oldatát 2-aszkepto-etil*esia hozzáadásával - 4,3 ®®ol végkonoentrációig - redukáljtdt 37 a-on 30 perces inkubálással* A redukció után a mlnfcá kát Sephadex 825 (fharmaoia) oszlopon - melyet 2 mai WÁ tartalmú 0,1 mólos nátrium·aootát/dtrát-puffarral (pH « 6,0) kiagyensulyostuak - sótalanitjUk»
Az intermedier 6-ot vízben oldjuk és hozzáadjuk a frissen redukált Jab’SiMioz a következő ekviaclárls arányban 2,2 i 1 Bab*$a ι intermedier 6, majd az elegyet állandó keverés mailett 60 percig 37 °0-on lnkubáljuk*
A 60 perces inkubálás után a térhálósított reakcióelegy összetételét KPL0 gélszüréssel határozzuk meg* A reakcióalogyből 10 μΐ-t h03sáaduak 10 pl 230 rnsólos 2-merkapto-etil-aminhoz éa 15 percig lnkubáljuk* További 20 pl 800 nmólos jód-acetamid hozzáadása után 15 percig reagáltatuek* A redukált, alkilezett mintát ezután HBLO Of 250 segítségével analizáljuk és a kromatogram integrálásával határozzuk meg «
a százalékos Összetételt. Az intexiaédisr 6-tal térhálósított anyag 3,62 perces retenciós idővel eluálódik, mig a reegálatlan yab· később, 9,43 perc retenciós idővel, standard HFLO feltételek mellett? átfolyási sebességi 1 sl/perc, mobil fázist 0,2 mólos foszfát-puffer (pH « 7,0)· A térhálósított anyagot tisztítás után is megvizsgáltuk redukáló SDS-PAGE módszerrel, sirivel agy keresztkötésü κ· - H* sávot (Kri ~ 46,000) és egy 1 sávot (feri 22*000) keptuOk, mig a kontroll a szokásos fi* Gtra 23*000) és L (krt 22*000) sávot mutatta* sótalanitás - 0,1 mólos nátriusHacotát-puffcr (pH « 5,0) segítségével - után az 1* és 3* példa sssrlttti termékeket indium-kloriddal (^fa) kezdjük, ^In-jelsett termékek előállítása céljából* Ehhez hasonlóan, a termékeket • a « ··*# ·» · • « · · a , · ·· ····· · · ····· ·· · « • a·*···· »a ««-a
- 31 sőtalanitás » 3,1 ®ól©s káliom-aeetát-puffer (pH « 5,5 * 6,0) segítségével - ötén ittriua-kloriddal (9¾) késeijük, a megfelelő jelzett termékek előállítása ©áljából#

Claims (19)

  1. Szabadalmi igénypontok
    1* Térhálósított antitest konjugátum» azzal jellemezve , hogy legalább egy olyan lánoközti hidat magába foglaló jelzett antitest molekulát tartalmaz» amelyben egy vagy több riporter vagy effoktor osoport van, és az em* litett híd egy vagy több hidfő-helynél - ezek az antitest antigénkötő doménjein kívül esnek - kapcsolódik mindegyik lánchoz·
  2. 2· Az 1· igénypont szerinti konjugátum, azzal......................
    jellemezve , hogy a szóbanforgó hídfő-hely vagy amino- vagy szulfhidrH- vagy karboxil- vagy fenolos vagy más aromás vagy heteroaromás funkciós csoport, amely egy aminosavcsoport oldalláncán helyezkedik el·
    5· A 2· igénypont szerinti konjugátum, azzal jellemezve, hogy az említett hídfő egy szulfhidrilosoport! amely aciszteincsoport oldalláncán helyezkedik el·
  3. 4· A 5« igénypont szerinti konjugátum, azzal jellemezve , hogy a clszteinosoport minden nehéz láncban a cstíkló szakaszban van·
  4. 5· a 4· igénypont szerinti konjugátum, azzal jellemezve , hogy a oiszteinasoport a csukló szakaszban lévő egyetlen oiszteinosoport·
  5. 6· Az előző igénypontok bármelyike szerinti konjugátum, azzal jellemezve , hogy az antitest egy rekombináns antitest·
  6. 7· Az előző igénypontok bármelyike szerinti konjugátum, azzal jellemezve, hogy as antitest egy ··« * · ·· ·,♦··· · · • · · · · ·· · · • ······* ·· ιι·
    - 33 antitest fragmentum· .
  7. 8· A 7· igénypont szerinti konjugátum* ássál jel·
    1 e ® e z v e * . hogy a fragmentum egy r(ab· )a fragmentum. .
  8. 9· As elésé igénypontok bármelyike szerinti kenjegátam* azzal jellemezve, hogy a lánoköztL hid egy nem-diszulfid láncközti hid· .
  9. 10· Az elésé igénypontok bármelyike szerinti kenjegátam, azzal jellemezve , hogy a láncközti hid egy homo- vagy heterof aukciós térhálósitó reagens maradéka·
  10. 11· A 10· igénypont szerinti konjugátum, azzal jellemezve * hegy a riporter vagy az effektor esőpert vagy radionuklid vagy kelátkötésbon lévé fém vagy egy fluoreszkáló vegyület vagy egy olyan vegyület, amely 1MB vagy ESR spektroszkópiával kimutatható vagy egy farmakológiai ágens vagy egy enzim vagy egy hormon·
  11. 12« A 11· igénypont szerinti konjugátun* azzal jellemezve * hogy a riporter vagy az effektor eseport vagy radionuklid vagy kelátkötésban lévé fém·
  12. 13· A 12· igénypont szerinti kenjugátun, azzal jelleme zve, hogy a radiondklid egy jód izotóp·
  13. 14· A 12· igénypont szerinti konjugátum, aszal jellemezve, hogy a kolátkosplezbea lévé fém 2-tél
    8-ig terjedő koordinációs számú, két vagy három pozitív töltésű fém és sokfogu kelátképzö ágens kólát ja·
  14. 15· A 14· igénypont szerinti konjugátum, ássál jellemezve , hogy a oekfogu kdátképsé ágens vagy aoiklusos vigy ciklusos peliemin vagy peUétor vagy peliamld vagy porfirin vagy egy karbooiklusos származék.
    • * · ··· · · · •••· · · · · · • ······· ·· · <t« * Μ
  15. 16· Λ 15* igénypont szerinti konjugátum, azzal jellemezve, hogy az aciclusoz poliamin sgy poli* amim-karbonsav·
  16. 17« A 15· Igénypont szerinti konjugátum, azzal jellemezve, hogy a olMusos poli®BÍn egy ciklusós triaza- vagy tetraaza-származék·
  17. 18« Gyógyszerkészítmény, azzal jellemez- v. e , hogy ©agábafoglal egy entites molekulát, amelyben legalább agy olyan lánoköztl hid van, amely egy vagy több riporter vagy eflektor csoportot tartalmaz, és az említett hid egy vagy több olyan hídfő-helynél kapcsolódik mindegyik lánchoz, amely (ok) az antitest antigénkötő dósén jóin kívül helyezkedik (helyezkednek) el, továbbá, hogy a készítmény egy vagy több gyógyszerészeti szempontból elfogadott hordozót vagy vivőanyagot tartalmaz·
  18. 19« Eljárás antitest konjugátum - amely magába foglal agy antitest molekulát, amelyben legalább egy olyan láncközti híd van, amely egy vagy több riporter vagy effektor csoportot tartalmaz, és az említett híd as antitest antigénkötő doménjeín kívül eső egy vagy több hídfő-helynél kapcsolódik mindegyik lánchoz * előállítására, azzal jel* lemezve , hogy egy térhálósitó reagenst egy antitesttel reagáltatunk.
  19. 20· A 19« igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve , hogy az antitest feleslegben van a térhálósitó reagenshez képest*
    M« Antitest konjuKátuoL· amely humán vagy animál beteg kezelésére vegy diagnózisára alkalmazható, aszal jel* * 35 *
    1 e a · s v o « hogy as említett antitest konjugátum magába foglal egy olyan antitest molekulát, amelyben legalább egy olyan láncközti hid tan, amely egy vagy több riporter vagy offaktor csoportot taröalmas, és as említett híd as antitest antigénkötő doménjoin kívül eső egy vagy több hídfő-helynél kacsolódik mindegyik láaohos·
HU901641A 1989-02-10 1990-02-12 Crosslinked antibodies and process for their production HUT56288A (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB898903022A GB8903022D0 (en) 1989-02-10 1989-02-10 Chemical compounds

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HU901641D0 HU901641D0 (en) 1991-03-28
HUT56288A true HUT56288A (en) 1991-08-28

Family

ID=10651472

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU901641A HUT56288A (en) 1989-02-10 1990-02-12 Crosslinked antibodies and process for their production

Country Status (16)

Country Link
EP (1) EP0384624B1 (hu)
JP (1) JP2975676B2 (hu)
KR (1) KR910700075A (hu)
AT (1) ATE123952T1 (hu)
AU (1) AU632536B2 (hu)
CA (1) CA2026312A1 (hu)
DE (1) DE69020182T2 (hu)
FI (2) FI904974A0 (hu)
GB (2) GB8903022D0 (hu)
HU (1) HUT56288A (hu)
IE (1) IE67320B1 (hu)
IL (1) IL93361A0 (hu)
NO (1) NO904367L (hu)
NZ (1) NZ232490A (hu)
WO (1) WO1990009195A1 (hu)
ZA (1) ZA90983B (hu)

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5194594A (en) * 1990-09-07 1993-03-16 Techniclone, Inc. Modified antibodies
GB9112536D0 (en) * 1991-06-11 1991-07-31 Celltech Ltd Chemical compounds
US6764681B2 (en) 1991-10-07 2004-07-20 Biogen, Inc. Method of prophylaxis or treatment of antigen presenting cell driven skin conditions using inhibitors of the CD2/LFA-3 interaction
DE19911329A1 (de) * 1998-03-27 2000-09-21 Benes Ivan Friedrich Humantherapeutisch anwendbares Radioimmunkonjugat und Verfahren zu seiner Herstellung
GB9812545D0 (en) 1998-06-10 1998-08-05 Celltech Therapeutics Ltd Biological products
US20040009535A1 (en) 1998-11-27 2004-01-15 Celltech R&D, Inc. Compositions and methods for increasing bone mineralization
NZ552959A (en) 1998-11-27 2008-06-30 Darwin Discovery Ltd Compositions and methods for increasing bone mineralization
EP1419236A4 (en) 2001-07-24 2005-08-03 Biogen Idec Inc METHODS OF TREATING OR PREVENTING SCLEROSIS BY USE OF CD2-BINDING AGENTS
GB0124317D0 (en) 2001-10-10 2001-11-28 Celltech R&D Ltd Biological products
JP2005181192A (ja) * 2003-12-22 2005-07-07 Tacmina Corp 残留塩素濃度測定方法
CA2565259A1 (en) 2004-05-07 2005-12-08 Astellas Us Llc Soluble lfa-3 polypeptide for treating viral disorders
EP1814598B1 (en) * 2004-11-22 2011-01-12 Ge Healthcare As Contrast agents to target extracellular matrix
DE102005034950A1 (de) 2005-07-22 2007-02-01 Tesa Ag Abroller für die Herstellung eines Klebebandschlauchs
ATE485517T1 (de) 2006-03-22 2010-11-15 Viral Logic Systems Technology Verfahren zur identifizierung von polypeptid- targets
US8377448B2 (en) 2006-05-15 2013-02-19 The Board Of Trustees Of The Leland Standford Junior University CD47 related compositions and methods for treating immunological diseases and disorders

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4751286A (en) * 1985-11-19 1988-06-14 The Johns Hopkins University Protein label and drug delivery system
GB8603537D0 (en) * 1986-02-13 1986-03-19 Parker D Conjugate compound
GB8720833D0 (en) * 1987-09-04 1987-10-14 Celltech Ltd Recombinant dna product

Also Published As

Publication number Publication date
GB8903022D0 (en) 1989-03-30
GB2237020B (en) 1993-04-14
IE900494L (en) 1990-08-10
JPH03504644A (ja) 1991-10-09
EP0384624B1 (en) 1995-06-21
FI904975A0 (fi) 1990-10-09
FI904974A0 (fi) 1990-10-09
NO904367L (no) 1990-12-06
WO1990009195A1 (en) 1990-08-23
NO904367D0 (no) 1990-10-09
CA2026312A1 (en) 1990-08-11
NZ232490A (en) 1992-09-25
EP0384624A2 (en) 1990-08-29
KR910700075A (ko) 1991-03-13
DE69020182D1 (de) 1995-07-27
IE67320B1 (en) 1996-03-20
EP0384624A3 (en) 1990-11-14
ATE123952T1 (de) 1995-07-15
IL93361A0 (en) 1990-11-29
AU632536B2 (en) 1993-01-07
AU5047590A (en) 1990-09-05
ZA90983B (en) 1991-10-30
GB2237020A (en) 1991-04-24
JP2975676B2 (ja) 1999-11-10
DE69020182T2 (de) 1995-11-30
HU901641D0 (en) 1991-03-28
GB9021894D0 (en) 1990-11-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0385601B1 (en) Cross-linked antibodies and processes for their preparation
EP0175617B1 (en) Antibody-therapeutic agent conjugates
HUT56288A (en) Crosslinked antibodies and process for their production
JP3373849B2 (ja) ３価および４価の単一特異性抗原結合性タンパク質
US4861869A (en) Coupling agents for joining radionuclide metal ions with biologically useful proteins
CA1276878C (en) Radiolabeled antibody fragments
US5162505A (en) Proteins modified with positively charged carriers and compositions prepared therefrom
JPS6193131A (ja) 放射性標識された抗体断片用のカツプリング剤
US6509451B1 (en) Cross-linked antibodies and processes for their preparation
JP2011148820A (ja) 免疫グロブリンｆａｂフラグメントを選択的且つ定量的に官能基化する方法
EP0649532A1 (en) Photoactivation of proteins for conjugation purposes
IE60604B1 (en) Process for the preparation of an organ-specific substance labeled with technetium-99m
WO2019036433A2 (en) ANTIBODIES IN THE FORM OF PRODRUGS, PRODRUGS BASED THEREON, THEIR METHODS OF USE AND PREPARATION
US5714149A (en) Crosslinked antibodies and processes for their preparation
CA2331348C (en) Positron emission tomography using gallium-68 chelates
EP0569531B1 (en) Stabilized antibody fragments
Adelstein Harvard-MIT research program in short-lived radiopharmaceuticals. Technical progress report, 1991
HUT63343A (en) Process for producing immunereactive compounds

Legal Events

Date Code Title Description
DFC9 Refusal of application