HUE035518T2 - Javított eljárás ginkgokivonatok elõállítására - Google Patents

Description

JAVÍTÓIT EiJÁRÁS CÜNKGOkíVONAíOK ELŐÁLLÍTÁSÁRA

Leírás Ä leién táiáímány tárgya javítött többlépéses eljárás kivonat előíüh'tására Ginkgo biloba (páfrányfenyő) leveleiből gyógyszerként! alkalmazásra, A páfrányfenyő leveleiből készült kivonatokat évtizedek óta gyógyszerként használják. Jelenleg ezeket a demeneia különböző fajtáinak és ezek tüneteinek, valamint ce-rebráils és periférikus vérkeringést zavarok kezelésére alkalmazzak, A hatóanyagok a terpéniaktonok (Á-> B-,< Ggínkgoíid és bliobaiid), valamint a fiavonok giikozídjal (kverce-tin, kempferol és izorhamnetin), Az érvényességi területén minden gyógyszerként engedélyezhető ginkgökivonstra kötelező aktuális Európai Gyógyszerkönyv (8,0 verzió; 04/200x8 monográfia: 182? „Ginkgo dry extract, refined and quantified"') szerint a gink' gokivonat 22..0-27,0 % Oavonoidot, fíavon-gíikozidkent számítva., 2,0-3,2 % hiiohalidet, 2,8-3/4 % A-, B- és C-glnkgoIldet, valamim legfeljebb 5 ppm glnkgolsavat tartalmaz, A „Bekanntmachung über die Zulassung und Registrierung von Arzneimittel (Äufberel-tungsmonograpblen für den hnmanmedizin'ischen Bereich) - Ginkgo folium (Glokgo-biloba-Blátterj“ (Bundesanzeiget 46, (2.33), 7360-7361 (1994) a következő leírástadja: „Ginkgo biloba LINNE szárított Ieveiéiből acetonnai-vizzel, majd tisztítási lépésekkel koncentrálnotok vagy izoiáit hatóanyagok hozzáadása nélkül előállított száraz kivonat’7.

Az utóbbi Időben egyre gyakrabban fordulnak elő páffányfenyöleveiek olyan hatóanyag-tartalommal, hogy az ismert eijárásokkai végzett kivonás nem eredményez az Európai Gyógyszerkönyv követelményeinek megfelelő kivonatokat. Jelenleg különösen gyakran gyűjtenek be olyan páfrányfenyőleveleket, amelyek szokatlanul sok terpénlak-tont tartalmaznak, aminek következtében ez a kivonatban ís nagy mennyiségben van jelem Esetenként a páfrényfenyölevelékszoketlánul nagy mennyiségű fiavonoldot is tartalmaznak, A legfontosabb kivonási eljárásukat, amelyek megfelelő páfrényfenyőíeveíek aí- kafmazasakor â PH, Eur, előírásai: szerinti' kivonatokhoz vezetnek, ax EP'411 535 SI (Dr, Willmar Schwabe GmbW&amp;Co.) és az EP 360 556 SI (Indens 5,p,A,j Hja ie, A közelmúlt-ban -egyre jelentősebb lett az EP 431 535 BÍ (Dr, Willmar Sehwabè OmbK&amp;Cod szerinti eljárás, mivei ©sínél az eljárásnál nines szükség toxíkolőgiaíiag aggályóS anyagokra,.mint az ólomsók (EP 431S35 BÍ) vágy áZ aromas Szénhidrogének (EP 360 556 SÍ). A? EP 431536 BÍ /W 3 940 092 >411, Igénypontja szerint az abban igényelt eljárást kivonat előállítására páfrányfényőieveíekhől az jellemzi, hogy (a) páfrányfenyő friss vagy szárított tőid leveleit víztartalmú aeetohnaí, 1-3 C atomos víztartalmú alkanolial vagy vízmentes metanollal kb. 40- 100“C-on extraháiják, (b) a kivonatból a szerves' oldószer fő mennyiségét legfeljebb 10 súlyM tartalo·· rnig leválasztják, miközben az utolsó desztillációs fokozatokban adott esetben vizet adagolnak, (ej a megmaradó koncentrált vizes oldatot vízzol 5-25súiyH szilardanyag-tartalomra hígítják, keverés közben 25X alatti hőmérsékletre butik le, amíg csapadék képződik, és leválasztják a keletkezett csapadékot, amely vízben nehézen oldódó íipofíí alkotórészekből áll, (d) a megmaradó vizes oldatot ammóníum-szulféttal keverik, és a keletkezett oldatot metil-etíl-ketonnal vagy métíbetll-ketön és aratón keverékével extrahálják, (ej a kapott kivonatot 50-70% szilárdanyag-tartalomra koncentrállak, és a kapott koneentrátomot vízzel 5-20 % szilárdanyag-tartalomra hígítják, (f) az így kapott oldatot több fokozatban vízzel nem elegyedő butsnolíai vagy pen ta n óllal ext ra h à | j a k, (g) a butanol·, ill, pentanoifázisokat 50-70 % szilárdanyag-tartalomra koncentrálják, (bj a koneentrátumoi olyan mennyiségd víz és gtáftöi' hozzáadásával hígítják, hogy S-2ösúiy% száraz kivonat oldatát kapják 20-60 súly% vizes etanolban, (I) a vizes-alkoholos oldatot SÖ-lOOT forráspóntö alifás vagy cíkloalífás oldószerrel extrahálják az aíkil-fenoí vegyüíetek további leválasztásához. (I) 3 vízfézist csökkentett nyomásod kohcentráíják, és legfeljebb SteWC bőmér-sékieten 5 %mal kisebb víztartalmú szára? kivonattá szárítják, A jelen találmány feladata olyanjávítoú eljárás kldoigozása felvonat előállítására páfrányfenyő {Ginkgo biloba) levételből,· amely ekkor is teljesíti a Ph, Eur. előírásait, amikor a felhasznált páfrányfenyőievelek kedvezőtlen hatőanyagspektrummál rendel· késnék, különösen sok terpénlákfont vagy flavonoídottartalmaznák, Ezenkívül a jelen találmány feladata á? eljárást ügy íevezetnl, hogy kémiailag tiszta anyagokat, vagy ehhez közeli koneentráfumokat nem adagolónk, mert ez az orvosilag háSZtíált Glnkgő·» kivonatoknál nem megengedett.

Meglepő módón azt állapltöttok meg, hogy az EP 4SI S3S 81 szerinti eljárásban járulékos eljárási lépésekkel a kedvezőtlen boteanyegspektrummal rendelkező páfrány-fenyöteveíekhoí Is készíthetők olyan kivonatok, amelyek megfelelnek az Európai Gyógyszerkönyvnek, Ehhez a (d) lépés szerinti kivonás után {folyadék-folyadék eloszlás) a vizes fázist elválasztjuk a metíietiikefön-, ill., metiietilketen-aceton-fázistoE a metiletliketon-, III, ntetiletllketon-aeeton-fázist 40-80 súly% szérazkivonat-részarányig sűrítjük,, hogy kOncentrátumot kapjunk, A koncentrétum ÍO-ÖÖ súly%-os részét vízzel és metli-otíl-ketonna! legfeljebb S0 súiyM szárazkívonat-részarányra és legfeljebb 30 súly% metiíetíl-keton-tartaíomra állítjuk he, és metil-et.il'keton és égy 60-1ÛCFC forrásponté alifás oldószer 2/3-S/X (m/m) arányú keverékével axtraháíjyk, hogy víz-meiitetííketomfáziSí és m et í le tllketo n-al if ásol dosz e r-f á z I st kapj u e k. A viz-mefíiotíikétoo-fázlst egyesítjük a maradék 90-40 súlyie koncentrátümmsl, hogy egy oldatot kapjunk, és így a végtermékben ne legyen tűi magas a terpénlákton-t art alom.

Alternatívaként a kapott metitehíketón-slífásoidőszer-fázís egyesíthető a maradék üO-40 súly% koneentráturnmaí, hogy a végtermékben ne legyen túl magas a fiavo-noldtartaiom, A találmány szerinti eljárás száraz kivonat előállítására: vonatkozik péírányfenyő-leveiokbői 22,0 súíyéó~2'2,0 súíyí&amp; flavonoid-, fiavon-gilkozidként számítva, 2,8 súlylö-3,2 sdly% blloballd-, 2,8 sulyWfebé sdly% A-, 6- és C-glnkgohd^ valamint legfeljebb S ppm gmkgolsav- tartalommal, a követkefe lépésekkel; (a) fess vagy szárított töld páfrányfenyőlevolek kivonása víztartalmú acetonnaí, 1-3 C-atomos alkanollal vagy vízmentes metanollal kb, 4Ô-10ÛX hőmérsékleten, hogy egy nyers klvonatoldatot kapjunk, fe j az acetőn vagy az 1-3 C-atomos alkanol fő mennyiségének leválasztása desz-tllláclovol az (a) lépés szerinti nyers kívonatoídathöí legfeljebb ÍÖ sdly% tartalomig, továbbá be vízmentes metánok alkalmazunk az (aj lépésben, az utolsó desztillációs fokozatokban víz adagolása, begy egy koncentrált vizes oldatot kapjunk, fej a (bj lépes szerinti koncentrált vizes oldat hígítása vízzel 5-25 súly% szilárd-anyag-tartalomra, lehűtés 2S*€ alatti hőmérsékletre, hidegen tartás osapádék képződéséig, és a keletkezett csapadék leválasztása, hogy Ismét egy vizes oldatot kapjunk, (dj a (ej lépésben kapott vlzas oldat keverése ammőnlurmszulféttal és a keletkezett ammóniumszulfátuarfalmú oldat extrahálása metlhetil·ketonnal vagy medbetil· keton és aceton keverékével a vizes fázis elválasztása a met Heti (keton- vagy métííetííke-tő n -ecet ο n · Iá z I s tó I, h egy metll éti I keton- vagy rn etl I et I ! ke to n - ne e to n- f ázi sf ka p jen k, (ej a (dj lépésben kapott metiíetilketom· vagy metHetílkéton-acefen-fázIs sűrítése 4(3-80 suíy% szárazklvonat-ré.szarányra, hogy egy koncentrátumot kapjunk, (fjet (ej lépésben kapott koncentrátum 10-60 sulyfe-os részének beállítása: vizitel és melll-etíl-ketonnai legfeljebb 60 súly'% szárazklvonat-részarányra és legfeljebb 30 sulySS metlletllketon-tartalomra, hogy egy beállított klvonatoldatot kapjunk, és á kapott beállított kivonatoldatevírahálása metíl-etífeketön és egy 60-:100°C fórráspontu alifás oldószer 7/3-9/3 (m/mj arányú keverékével, hogy vlz-metdetilkéton-fázlst és rnetlletll-k e to n - ah Iá sóid ó sz e r-f âz I s t ka pj un k. fed az (ej lépésben kapott koncentrátum megmaradó 00-40 sólymos részének egyesítése az (f) lépésben kapott víz-metlletllketon-fázlssal vagy az (f) lépésben kapott metiletilketon-allfásoldószer-fázlssal, hogy egy oldatot kapjunk, (h) a (gj lépésben kapott oldat koncentrálása 50-70 súly% szilárdanyag tartalomra, :é:s 8 kapott koncantrátnm hígítása vízzel legfeljebb SO süiySÖ szllárdsnyag-tartálomra, hogy egy oldatot köpjünk (I) a jh) lépésben köpött oiőát többfokozatú ext-rahálása víztől nem .elegyedő butanolíai vagy pentanoöal, bogy butanol- vagy pentanolfázist kapjunk, jj) az (I) lépésben kapott butanol· vagy pentanolfázis koncentrálása legalább 50 súly% sziíárőányag-tertaíomra, hogy egy koncentrátnmot kapjunk, (k) a (j) lépésben kapott köncentrátom hígítása olyan mennyiségű víz és adott esetben Manói hozzáadásával,- hogy 5-20s«ly% száraz kivonat oldatét kapjuk vízben vagy legfeljebb 60 súly% vizes etanelban, (IJ a (kj lépésben kapott vizes oldat vagy vizes étanöíoldat éxtteháíása egy 60-XöOfo forrásponté alifás oldószerrel, a vizes fázis elválasztása az alifásoldószer-fézistöb hogy egy vízfázist kapjunk, •(m) az :(l) lépésben kapott vízfázis koncentrálása csökkentett nyomáson és legíel-jobb óö-SQfo hőmérsékletem hogy 5 sólyfo-náí kisebb víztartalmú száraz kivonatot kapjunk, A találmány előnyös kiviteli alakjainál • az (a) lépésben kivonó oldószerként kb, Sfo?0 sűly% acetont tartalmazó víztartalmú acetont alkalmazunk, különösen előnyösen kh, 60 súly% acötontattafom-mai, * az (aj lépésben kivonó oldószerként kb, 50 súlyfo-Jö sóíy% aikanolt tartalmazó víztartalmú alkáholt alkalmazunk, metanol, etanoí, X-propanol és 2-propanol közül választva, különösen előnyösen km 60 súly% etanolt tartalmazó víztartalmú manóit, « a jé) lépésben a hígított vizes oldatot ITC. alatti hőmérsékletre hűtjük le, » a ídj lépésben e (ej lépés szerinti vizes oldatra vonatkoztatva legalább 30 sűly% ammóníum-szujfofot, különösen előnyösen 30-50 sűly% ammóníom-szulfotot adagolunk, « a ídj lépésben metii--etil-keton és aeeton 7/3-3/4 (m/mj arányé keverékével ezt“ rab álunk, * az id lépésben I-hetanoliei extrahálunk, és/vsgv aa (Il lépésben heptánnal extrahálunk, különösen előnyösen n-heptánnal vagy több. mint 35 sóly% n-heptánt t a rta I m a z ó h eo tan izom er- kev e ré kke I.

Továbbá az 61- 431 536 BÍ ./ÚE 3 940 ÖS2 Al-bez és az 6P 1 M3 568 31-bez hasonlóan ® követező további eljárási lépéseket hajtjuk végró a 4'temeöbpíridöxln eltávolítására; ín) egy vizes-etanolos Ginkgo-kivonatoídat előállítása 40 súly%»60 súíy% etanoí-Wtáförnmal a ík) lépés swinh vízfázisból vagy az (m) lépés szerinti száraz kivonatból, (o) az in) lépés szerinti vlzes-etanolos Gínkgo-kivonatolőat felhordása egy erősen savas ioncserélőre, amely pollsztirol gyantából van, amelyhez szulfonsavcsoportok kötődnék, hogy eltávolítsuk az Ioncserélőn visszamaradó A'-Ö-metlhpIrldöXính továbbá elválás vizes etanoi alkalmazásával, hogy eiuátumként egy 4‘-ö-metli-pinőoidníöi mentes kivonotoldatot kapjunk, (p) az (o) lépésben kapott elválom koncentrálása csökkentett nyomáson., és szárítás legfeljebb 50-80X hőmérsékleten 5 súlyíomá! kisebb víztartalmú száraz kivonattá.

Erősen savas ioncserélők például a Merck I és az Amberlite ÍR-120.

Az alábbiakban még a találmány szerinti eljárással kapcsolatban használt néhány fogalom definíciója következik:

Száraz kivonat: a száraz kivonatok az Európai Gyógyszerkönyv szerint általában legfeljebb 5 süiy% vizet tartalmaznak, A vizmentesség kifejezés, például a vízmentes metanollal kapcsolatban az |a) lépésben, a jelen találmánnyal összefüggésben <1 súlyé» víztartalomra utak A kivonás iehet egyfokozatú, többfokozatú vagy folyamatos kivonás. A 60-100’C forrásponté alifás oldószereknél előnyösein n-heptánrői vagy telített aeiklíkus és/vagy cskUkus alifás szénhidrogének keverékeiről van szó, amelyeket forráspontjukkal definiálnak, és amelyek például petroléter vagy petróleumbenzln néven is mertek és ^kereskedelemben kaphatóak, Előnyösen dîÿâo alífásszénbldrogén-keverékét alkalmazunk, :emély lényegében n-bepténból és más €?-aikáookböl áll, 35 súiy% n~heptánnál (forráspont 9SXj nagyobb n-hégtán tartalom például a-94*ÏÔOX-o$ frakcióban található.

Az (I) lépésben említett, vízzel nem elegyedő butanol és pestsnol előnyösen 1-butanol vagy 1·· pent an or A találmány szerinti eljárást e továbbiakban az EP 431 536 Bl/ DE 3.940-092 Ä1 szerinti, összehasonlító példa és a találmány szerinti 1. példa kapcsán részletesen -má* gyarázzuk és leírjuk, Kílnóolásl oldat az 1, példához és az 1, ősszehasanfítö példához (az ÉP 431 SM Blés atalálmány szerinti eljárás (a j-(dj lépéseinek megfelelően):

Az alábbi példákban „Képtáré" megnevezés alatt egy telített alifásszénhldrogé.m keverék értendő, amelynek forráspontja a 94-iöÓX-ós tartományban van, és n-heptán tartalma több, mint 35 sulyX 5ÖÖ g szárított és aprított páfrányfenyőleveíet 3,75 kg 60 súlyőé eeetönnal 30 peréig OOX-on extraháltunk, ,A. növényi anyagot leszűrtük,: újra 3,75 kg 60 sóly% ace·-tonnal 30 percig δΟΧ-on extraháltak, és lseiét leszűrtük. Az így kapott kívonatoldatokat egyesítettük és sűrítettük (433 g. 36,9 % szárazkivonat-részarányj, A kapott koneentrátumot 400 g vízzel hígítottuk, és 1 ora: hosszat J3X-'0n kevertük. A keletkezett csapadékot leszűrtük, és a szürlefet 240 g ammónlum-'Szuifáttal kevertük, és ezt feloldottuk. Ezt az oldatot kétszer egyenként 400 ml 6/5 fm/m) metlIetll· kefon/acetdnnal extraháltak# A rneflietilketon/aeeton-fázlsokat egyesítettük (303 g). Összehasonlító 1, példa ez EP 431536 SÍ szerint (az (e)-(j} eljárási lépéseknek megfelelően) A fenti kíindulásroldat felét (404 g) sűrítettük (27,2 g; 50 % szárazkívonat-részarányp Ezt a köneentrátumot :107,8 g vízzel hígítottuk (10 % szárazkivonat·'

részarány), és háromszor egyenként 65 ml vízzel'telített X-butanollal extraháltuk. Az Ιό utanoí fázisokat egyesltatfük, bepároltuk és vákuumban 16 dós hosszai SÖT-ors szári» toltuk (6,72 g}..

Az így kapott száraz kivonatot 20,2 g etanol és 4ő,3 g víz keverékében oldottuk (10 % szárazklvonat-részaráoy), Ezt áz oldatot háromszor egyenként 20 tol heptánnai extraháltuk, bepótoltuk és 16 óta hosszat SO’G-on vákuumban szárítottuk; 6,11 g (2,4 % a drogra vonatkoztatva). Tényleges Ph. Eur, .___ ~ '"23762'%.........η^2λο%' "ëïiöbëiïd »™__—..................2,6-372% A?GésGgîrtkgôîïdëk....................................Ίλ 29 % ÏH4 %

Glokgoisavsk <5 ppm max. S ppm

Az így kapott extraktum a bllohalid és ez A»,, B~ és C-ginkgoildektekinteteben nem felel meg az Európai Gyógyszerkönyv előírásaíuak.

Találmány szerinti 1, példa (a találmány swinh (©Mm) eljárási lépéseknek megfelelően) A fenti kiindulás) oldat másik fölét (4Ö4 g) sűrítettük (26,S g; 66,2 % szárazklvo-nat-részarányj, Ebbői a koncentrátamból XÖHS gmt 34 g vízzel és 5,6 g metll-etlh ketonnal 30 % szárazanyag-részarányra és 23 suly% meflietilketonUartalömra állítöt-tünk be, és kétszer egyenként 8/2 (rn/m) rneiíletiíketon/heptáonai extraháltunk. A vsz-metííetllketon-íázlst egyesítettük a kiindulás) oldat megmaradt koncentrá-tornával (9,75 g), Ezt az oldatot 24,17 gua koncentráltuk, 115,5 g vízzel 10 % szétazkl· vonaórészarányra állítottuk be, és háromszor egyénként 65 ml vízzel telített 1-buteooiíal extraháltuk. Az l-bufanől fázisokat egyesítettük, bepótoltok és vákuumban 16 óra hosszat 5G”Gon szárítottuk (5,93 g).

Äz így kopott száraz kivonatot 3.7,8 g otahoi és 35,6 g víz keverékébe« oldottuk (ΙΟ % szárazkivonat-részarány). Ezt az oldatot háromszor egyenként 20 ml hepténnal extraháltuk, bepároltuk e? 38 ere hosszat SÖX-on vákuumban szántottuk: 5,29 g |2,3. % a drogra vonatkoztatva). .................................................................................. Tényleges Ph, Eur. j n'avonöïdok ............................'*2S?9S'%.............................................22>27/tóé |

"ßHobahd "“ΓξδΪΜ · I

,‘Xog% .........4%................ ’ I

Ginkgolsavak <5 ppm max. 5 ppm

Az. így kapott extraktum minden alkotórést, különösen a bllohalld és A-, ö- és Ç* ginkgolldek tekintetében megfelel az Európai Gyógyszerkönyv előírásainak.

Claims (12)

1. Szabadalmi igénypontok 1, kijárás száraz kivonat előállítására páfrányfenyőlevelekbőí 22,0 súiy%-27,0 súly% flavonoid-, flavon-giíkozidként számítva, 2,6 súly%'3,2 súly% biíobaOd·, 2,8 súly%-3,4 éöly% A-, 8- és C-ginkgolid-, vahmhft legfeljebb 5 ppsm ginkgobav-tartaiommai, a következő lépésekkel: (aj Iris? vagy szárított zöld páfrányfenyőleveiek kivonása víztartalmú acetonnai, 1-3 C-atomos síkanoiiai vagy vízmentes metanollal kb. 40-1ÖÖT hőmérsékleten, hogy egy nyers kívonatoidatot kapjunk, (bj az acélon vagy a* 3.u3 C-atnmos elkenő! fő mennyiségének leválasztása desz·· fíiiácíóval az (a) lépés szerinti nyers kivonatoldatból legfeljebb 10 súiy% tartalomig, továbbá ha vízmentes metanolt alkalmazunk az (aj lépésben, az utolsó desztillációs fokozatokban víz adagolása,· hogy egy koncentrált vizes oldatot kapjunk,· (ej a (bj lépés szerinti koncentrált vizes oldat hígítása vízzel 5-25 súly% sztlárd-anyag-tartelomra, lehűtés 2S“Ű alatti hőmérsékletre, hidegen tartás csapadék képződé-M»íg es a keletkezett v supadek lova asttasa, hogy ssmet egv vizes oldatot kapjunk ídj zt (ej lépésben kapott vizes oldat keverése ammóniurn-szulfáttai, és a keletkezett ammőnlumsznifát-tarfaimú oldat extrahálása metii-etibkefonnal vagy metil-étil-keton és aceton keverékével, a vizes fázis elválasztása a metíletilketon- vagy metiletllke-ton-aceton-fázistői, hogy metiletilketon- vágy metiletflketomaceton-fazlst kapjunk, (ej a (d) lépésben kapott metíletilketon- vagy metlletilketon-acetondazis sűrítésé 4Ö-B0 süly% szárazkívonat-Fészáfányre, hogy égy koncentrátumot kapjunk, (fi az (ej lépésben kapott koncentrétnrn 10-60 súiy%-os részének beállítása vízzel és metibetil·ketonnal legfeljebb 60 súiy% szárazkivonst-részarányra és legfeljebb 30 súly% metíletilketon -tartalomra, hogy egy beállított kivonatoldatot kapjunk, és a kz-ipott beállított kivonatoldat extrahálása metH-etil-keton és egy Sö-XOO’C forráspontú alifás oldószer '//3-9/1 (m/mj arányú keverékével, hogy viz-metiletüketon-fázist és metilefl!' kéton-alifásoldószer-fázist kapjunk, <g> az (e) lépésben kapott koncentrálom megmaradd 90-40 süiy%-os részének egyesítése av pl lépesben kapott víz-metlletíikoton-fáz|ssal vagy az <f) lépésben kapott metiietilketomalifasoidószer-fázissai, hogy egy oldatot kapjunk., ^h) a (g) lépésben kapott óidat koncentrálása 50-70 súly% szllárdanyag-tartatomra, és a kapott koncentrálom hígítása vitáéi legfeljebb 50 súly% szllárdanyag* tartaíowa, hogy egy oldatot kapjunk, (0 a íhj lépésben kapott, oldat többfokozatú extreháláse vízzel nem elegyedő butanollal vagy pentanollal, hogy butanol- vagy pentenolfázsst kapjunk, <j> az (ij lépésben kapott butanol- vagy pentsnolíázís koncentrálása legalább 50 süly% szilárdanyag-tartalomra, hogy egy koncentrátumot kapjunk, ík) a (j) lépésben kapott koncentrátum hígítása olyan mennyiségé víz és adott esetben etanol hozzáadásával, hogy 5-20 súly% száraz kivonat oldatát kapjuk vízben vagy legfeljebb 60 súly% vizes etanolban, (Il a ík) lépésben kapott vizes oldat vagy vizes etanoíoldaf. extrahálása egy SÖ~ !öÖaC forrásponté alifás oldószerrel, a vizes fázis elválasztása ez álifásoldőszerfázlstől, hogy egy vízfázlsf kapjunk, ímj az (lí lépésben kapott vízfázis koncentrálása csökkentett nyomáson es legfeljebb 60-80'C hőmérsékleten, hogy 5 súlyát-nál kisebb víztartalmú száraz kivonatot kapjunk,
2. 2, Az 1, igénypont szerinti eljáfás, amelynél az ía) lépésben kivonó oldószerként kb. 50-70 sésy% acetont tartalmazó víztartalmú acetont alkalmazunk.
3. 3, A 2. igénypont szerinti eljárás, amelynél az ía) lépésben kivonó oldószerként kb. 60 sdlyM acetont tartalmazó víztartalmú acetont alkalmazunk,
4. 4, Az 1, igénypont szerinti eljárás, amelynél az (aj lépésben kivonó oldószerként kb. 50 súlyát-70 súlyáé alkanolt tartalmazó víztartalmú alkanoit alkalmazunk, metanol, etanol, l~propanol ©s Z-prepanei közül választva,
5. 5, A4, Igénypont szerinti eljárás, amelynél az (a) lépésben kivonó o idős zerk ént k.b.
6. Sö súly% etanolt tartalmazó víztartalmú etanoh alkalmazunk· S, Az VS. Igénypontok egyik© szerinti eljárás, amélÿnél a (ej lépésben a hígított vizes oldatot 12T alatti hőmérsékletre hűtjük íe.
7. 7. At 1-6, Igénypontok egyike szerinti eljárás, amelynél a (d) lépésben a (ej lépés szerinti vizes oldatra vonatkoztatva legalább 30 súlyáé ammonium -szulfátot adagolunk,
8. 8. Az 1-7. Igénypontok egyike szerinti eljárás, amelynél a (d) lépésben motil-etil-keton .és aeeton 7/3-3/4 (m/m) arányú keverékével exlráháiunk.
9. 9. Az 1-8, igénypontok egyike szerinti eljárás, amelynél az (ij lépésben l-butanoliai ext-r ahálunk,
10. 10. Az 1-9, Igénypontok egyike szerinti eljárási amelynél az (ij lépésben bepténnal ©seb ra hálónk.
11. 11. A 10. igénypont szerinti eljárás, amelynél a hepían n-heptán vagy több., mint 3S súíy% n-heptánt tartalmazó hepiámzorrmr-keverék.
12. 12. Az 1 11. igénypontok egyike szerinti eljárás, amely a következő további lépéseket tartalmazza. (n) egy vizes-etanolos Ginkgo-kivonatoldat előállítása 40 suly%-öO sú!y% etanoP tartalommal a jkj lépés szerinti vlzíázlsbéi vagy az (né lépés szerinti száraz kivonatból.. (oj az (n) lépés szerinti vizes-etanolos Ginkgo-kivonatoldat leibordása egy erő- sen savas ioncserélőre, amely pellsztiroi gyantából van, amelyhez szulfönsevcsoportok kötődnek, hogy ekávoh'fsok az ioncserélőn visszamaradó ^-O-metil-piridoxint, továbbá eioáiás vizes etanol alkalmazásával, Hogy eíuáiumként egy S'-O-metil-pindoxintdl mem tes klvonstoldatet kapjunk, (p) az (o) lépésben kapott aiuátum koncentrálása csökkentett nyomáson, és szántás legfeljebb öö-dCTC hőmérsékleten 5 séfyőámál kisebb víztartalmú száraz kivonattá.