HU226813B1 - Nucleic acid molecules which encode proteins having fructosyl transferase activity and methods for producing long-chain inulin - Google Patents

Nucleic acid molecules which encode proteins having fructosyl transferase activity and methods for producing long-chain inulin Download PDF

Info

Publication number
HU226813B1
HU226813B1 HU0100111A HUP0100111A HU226813B1 HU 226813 B1 HU226813 B1 HU 226813B1 HU 0100111 A HU0100111 A HU 0100111A HU P0100111 A HUP0100111 A HU P0100111A HU 226813 B1 HU226813 B1 HU 226813B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
nucleic acid
plant
thr
leu
asp
Prior art date
Application number
HU0100111A
Other languages
English (en)
Inventor
Amd G Heyer
Elke W Hellwege
Dominique Gritscher
Original Assignee
Max Planck Gesellschaft
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Max Planck Gesellschaft filed Critical Max Planck Gesellschaft
Publication of HUP0100111A2 publication Critical patent/HUP0100111A2/hu
Publication of HUP0100111A3 publication Critical patent/HUP0100111A3/hu
Publication of HU226813B1 publication Critical patent/HU226813B1/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
    • C12N9/1051—Hexosyltransferases (2.4.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8242—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits
    • C12N15/8243—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine
    • C12N15/8245—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine involving modified carbohydrate or sugar alcohol metabolism, e.g. starch biosynthesis
    • C12N15/8246—Non-starch polysaccharides, e.g. cellulose, fructans, levans

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)

Description

(54) Fruktozil-transzferáz aktivitású fehérjéket kódoló nukleinsavmolekulák és eljárások hosszú láncú inulin előállítására (57) Kivonat
A találmány tárgyát fruktozil-transzferáz (FFT) enzimaktivitással rendelkező fehérjéket kódoló nukleinsavmolekulák, ilyen nukleinsavmolekulákat tartalmazó vektorok, valamint a nevezett nukleinsavmolekulákkal transzformált gazdasejtek, különösen növényi sejtek, növényi szövetek és ezekből regenerálható növények, továbbá olyan transzgén növények előállítási módszerei képezik, amelyek FFT-t kódoló nukleinsavmolekulák bevezetése révén hosszú láncú inulint szintetizálnak.
A találmány szerint nagy molekulájú, átlagosan több mint 20 fruktozilmaradékot tartalmazó inulint úgy állítanak elő, hogy egy gazdasejtet - a találmány szerinti növényi sejtet, növényi szövetet vagy növényt - az FFT termelődését és 1-kesztóz vagy más ekvivalens szubsztrát hosszú láncú inulinná való átalakítását lehetővé tevő körülmények között tenyésztenek, és az így előállított inulint kinyerik a gazdasejtekből vagy a tápközegből.
HU 226 813 Β1
A leírás terjedelme 28 oldal (ezen belül 5 lap ábra)
HU 226 813 Β1
A találmány tárgyát fruktozil-transzferáz (fructosyl transferase=FFT) enzimaktivitással rendelkező fehérjéket kódoló nukleinsavmolekulák képezik. Szintén a találmány tárgyát képezik ilyen nukleinsavmolekulákat tartalmazó vektorok, valamint a nevezett nukleinsavmolekulákkal transzformált gazdasejtek, különösen növényi sejtek, növényi szövetek és növények. Továbbá a találmány olyan transzgén növények előállítási módszereire vonatkozik; amelyek FFT-t kódoló nukleinsavmolekulák bevezetése révén hosszú láncú inulint szintetizálnak. Szintén a találmány tárgyát képezik FFT-t előállító módszerek és hosszú láncú inulin előállítása különböző gazdaszervezetekben, különösen növényekben ugyanúgy, mint hosszú láncú inulin in vitro előállítása a találmány szerinti FFT segítségével. A találmány tárgyát képezik továbbá a találmány szerinti gazdasejtek és a találmány szerinti eljárásokkal kapható inulin.
Vízoldható lineáris polimerek változatos alkalmazásokat tesznek lehetővé, például a viszkozitás növelését vizes rendszerekben detergensként, szuszpendálószerként vagy a kiülepedés gyorsítását, víz komplexálását és akár megkötését is. Szacharidalapú polimerek, úgymint fruktozil-poliszacharidok különösen fontos nyersanyagok, mivel biológiailag lebonthatók.
Az ipari termelés és átalakítás regenerálható nyersanyagaiként történő alkalmazáson kívül fruktozil-polimerek lehetnek élelmiszerek adalékai is, például mint édesítőszerek. A különböző felhasználásokhoz különböző lánchosszúságú polimerek szükségesek. Míg a rövid és közepes láncú polimereket különösen az élelmiszeripar részesíti előnyben, technikai felhasználásokhoz - úgymint felületaktív anyagok előállításához nagy polimerizációs fokú (degree of polymerization=DP) polimerek szükségesek.
Eddig csak olyan hosszú láncú fruktán poliszacharid előállítási módszereket írtak le növényekben, amelyekben baktérium eredetű fruktozil-transzferázok fejeződnek ki. A legtöbb baktérium eredetű fruktozil-transzferáz levánt szintetizál, amely számos β-2,1-elágazással rendelkező β-2,6-^έ5ΰ fruktóz polimer. A leván számos elágazása miatt komoly hátránnyal rendelkezik technikai átalakításoknál és ezért jóval kevésbé jelentős technikai nyersanyag, mint az inulin. Mostanáig csak egy olyan baktériumgén ismert, amelynek a génterméke részt vesz az inulin szintézisében, nevezetesen a Streptococcus mutáns ftf génje. Elvileg van lehetőség a gén kifejezésére növényekben, amennyiben a gént előzőleg genetikailag átalakították. A transzgén növényekből kinyert inulin hozama azonban olyan alacsony, hogy a transzgén növények gazdasági hasznosítása nem jön számításba.
Továbbá ismert Helianthus tuberosus-bó\ származó fruktozil-transzferázokat kifejező transzgén növények előállításának módszere. Ezeknek a géneknek a kifejezése transzgén növényekben DP=6-10 átlagos polimerizációs fokú inulin termelődéséhez vezet. Az ilyen polimerizációs fokú polimerek nem nevezhetők hosszú láncú inulinnak. A DP=6-10 inulin a legtöbb technikai felhasználáshoz alkalmatlan.
Hosszú láncú inulin növényekben történő gazdasági előállítására vagy hosszú láncú inulin előállításához enzimek szintetizálására szolgáló módszerek nem ismeretesek.
A WO 89/12386 számú nemzetközi közzétételi iratban leírják szénhidrát polimerek - különösen dextrán vagy polifruktóz - szintézisének lehetőségét transzgén növényi sejtekben, specifikusan transzgén növények gyümölcseiben. Ilyenformán módosított növények előállítása céljából ajánlják mikroorganizmusokból - különösen Aerobacter levanicum-bó\, Streptococcus salivarius-bó\ és Bacillus subtilis-bö\ - származó leván szacharózok (invertázok) vagy Leuconostoc mesenteroides-ből származó dextrán szacharózok felhasználását. Nem írják le sem a leván vagy dextrán aktív enzimeinek kialakulását, sem a transzgén növények előállítását. A WO 94/04692 számú nemzetközi közzétételi irat ismerteti az Erwinia amylovora Gram-negatív baktériumból származó leván szacharóz lse génjét kifejező transzgén növények előállítási módszerét. A növények nagy molekulájú, erősen elágazó levánt állítanak elő. A WO 94/14970 számú nemzetközi közzétételi irat növények transzformálását írja le a Bacillus subtilis-bő\ származó sacB gént vagy a Streptococcus mutans-bó\ származó ftf gént tartalmazó kiméra génekkel. A sacB gént tartalmazó transzgén növények elágazó levánt állítanak elő. Az ftf gént kifejező növények nagy molekulájú inulint szintetizálnak; a hozam azonban olyan alacsony, hogy gazdasági felhasználás nem jöhet számításba. A WO 96/21023 számú nemzetközi közzétételi irat szénhidrát polimereket szintetizáló enzimeket kódoló DNS-szekvenciákat ismertet, valamint ezen DNSszekvenciák segítségével létrehozott transzgén növények előállítását. A közzétett szekvenciák Helianthus tuberosus-bó\ származnak. A WO 96/21023 számú nemzetközi közzétételi irat szerint az ismertetett szekvenciák felhasználhatók petúnia és burgonya, de maga a Helianthus tuberosus fruktán profiljának módosítása céljából is. Ha a transzgén növények kifejezik az SST és FFT gént, lehetőség van inulintermelésre. Az inulin átlagos polimerizációs foka azonban DP=6-10 között van. A WO 96/21023 számú nemzetközi közzétételi iratban leírt módszer szerint nem lehetséges nagy molekulájú inulin előállítása. A WO 97/42331 számú nemzetközi közzétételi irat transzgén, inulint termelő növények előállítási módszerét írja le a Streptococcus mutáns ftf gén segítségével. A nagy molekulájú inulin hozama alacsony, mint a WO 94/14970 számú nemzetközi közzétételi iratban leírt növények esetében. A WO 98/39460 számú közzétételi irat rövid láncú inulin fruktozil-polimeráz-aktivitással rendelkező enzimek segítségével történő előállítását írja le. A rövid láncú inulin előállítható transzgén növényekben. A rövid láncú inulin hozama magas és burgonyában megfelel a sejt szacharóztartalmának. Hosszú láncú inulin termelődéséről azonban nem írnak.
Inulin szintézisét növényekben átfogóan megvizsgálták [Pollock and Chatterton, Fructans, The Biochemistry of Plants Vol. 14, Academic Press pp. 109-140 (1988)]. A növényekben természetes körülmények kö2
HU 226 813 Β1 zött előforduló inulin azonban rövid láncú fruktán, amelynek maximális polimerizációs foka körülbelül DP=35 (Pollock and Chatterton, 1988). Fruktánok szintézise és metabolizmusa növényekben legalább három enzim aktivitásán alapul: szacharózfüggő szacharózfruktozil-transzferáz (SST), amely a triszacharid kesztózt alakítja ki; fruktánfüggő fruktán-fruktozil-transzferáz (FFT), amely fruktozilmaradékot szállít a fruktánmolekulákról - minimális polimerizációs fok DP=3 (kesztóz) szacharózra és magasabb fruktánokra; és fruktán-exohidroláz (FEH), amely fruktózmaradékokat távolít el fruktánmolekulákról. Nem ismert, vajon az inulin átlagos molekulatömegében mutatkozó eltérések a különböző növényfajokban - például Allium cepa esetében 2χ103 és Helianthus tuberosus esetében 5x103 - azok SST, FFT vagy FEH enzimeinek eltérő sajátságain alapulnak-e.
E célból a növényekben történő inulin szintézisére vonatkozó jelen ismeretek birtokában nem lehetséges olyan megfelelő DNS-szekvenciák azonosítása, amelyek segítségével nagy molekulájú inulint lehetne szintetizálni növényekben gazdaságilag számottevő mennyiségben.
Tehát a találmány alapjául szolgáló technikai probléma olyan nukleinsavmolekulák és módszerek biztosítása, amelyek lehetővé teszik hosszú láncú inulin termelésére képes, genetikailag módosított szervezetek különösen növények - előállítását.
E probléma megoldását szolgálják az igénypontokban jellemzett megvalósítási formák.
Ilyenformán tehát a találmány tárgyát nukleinsavmolekulák képezik, amelyek nagy molekulájú - átlagosan több mint 20 fruktozilmaradékot tartalmazó - fruktán polimerek szintéziséhez vezető, fruktozil-transzferáz (FFT) aktivitással rendelkező fehérjét kódolnak, és az alábbi csoportokból kerülnek kiválasztásra:
(a) nukleinsavmolekulák, melyek egy, a 2. és 4. számú szekvenciában bemutatott aminosavszekvenciát tartalmazó fehérjét kódolnak;
(b) nukleinsavmolekulák, melyek az 1. vagy 3. számú szekvenciában bemutatott kódoló nukleotidszekvenciát vagy egy megfelelő ribonukleotidszekvenciát tartalmaznak;
(c) nukleinsavmolekulák, melyek tartalmaznak egy, az 1. számú szekvenciában bemutatott kódolószekvenciával legalább 80%-ban azonos nukleotidszekvenciát;
(d) nukleinsavmolekulák, melyek egy, a 2. számú szekvenciában bemutatott aminosavszekvenciával legalább 85%-ban azonos aminosavszekvenciát tartalmazó fehérjét kódolnak;
(e) nukleinsavmolekulák, melyek az (a), (b), (c) vagy (d) nukleotidszekvenciájának fragmentumát tartalmazzák.
A találmány szövegösszefüggésében fruktoziltranszferáz (FFT) olyan fehérje, amely fruktózegységek közötti β-2,1 -glikozid és/vagy β-2,6-glikozidkötések képződését képes katalizálni. Tehát az átviendő fruktozilmaradék származhat 1-kesztózból vagy fruktán polimerből. A találmánnyal összefüggésben nagy molekulájú fruktán olyan polimer molekula, amely átlagosan több mint 20, előnyösen több mint 25 és még előnyösebben legalább 32 fruktozilmaradékból áll. Továbbá a nagy molekulájú fruktán előnyösen olyan polimer molekula, amely átlagosan kevesebb mint 3000, még előnyösebben kevesebb mint 300 és különösen előnyösen kevesebb mint 100 fruktozilmaradékot tartalmaz. A fruktozilmaradékok kapcsolódhatnak β-2,1 vagy β2,6 glikozidkötéssel. Inulin esetében a maradékok általában β-2,1 glikozidkötéssel kapcsolódnak. Kismértékben β-2,6 glikozidkötések is előfordulhatnak, különösen kevesebb mint 5%-ban, előnyösen kevesebb mint 3%-ban, még előnyösebben kevesebb mint 1,5%-ban és legelőnyösebben kevesebb mint 0,5%-ban. A fruktozil polimer a végén hordozhat glükózmaradékot, amely a glükóz C-1 OH-csoportján keresztül kapcsolódik a fruktozilmaradék C-2 OH-csoportjához. Ebben az esetben szacharózmolekulát is tartalmaz a fruktozil polimer.
Meglepő módon nagy molekulájú inulin nagy mennyiségei képződnek a találmány szerinti nukleinsavmolekulák transzformált növényekben történő kifejeződése során. A növényekben képződő inulin egyértelműen nagyobb mint DP=20 átlagos polimerizációs fokkal rendelkezik. Ez váratlan volt, mivel Helianthus tuberosus-bó\ származó hasonló enzim az inulinszintézisben kevesebb mint DP=20 átlagos polimerizációs fokkal vesz részt az inulinszintézisben transzgén növényekben (WO 96/21023 számú nemzetközi közzétételi irat).
A találmány szerinti nukleinsavmolekulák egyaránt lehetnek DNS- és RNS-molekulák. Megfelelő DNS-molekulák például a genomiális DNS- vagy cDNS-molekulák. A találmány szerinti nukleinsavmolekulák izolálhatok természetes forrásokból, előnyösen articsókából, vagy ismert módszerek szerint szintetizálhatók. Hagyományos molekuláris biológiai módszerek [Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1989)] segítségével lehetséges különböző mutációk bevitele a találmány szerinti nukleinsavmolekulákba, amely valószínűleg módosított biológiai sajátságokkal rendelkező fehérjék szintéziséhez vezet. Ebből a szempontból egyrészt lehetséges olyan deléciós mutánsok előállítása, amelyekben a kódoló DNS-szekvencia 5’ vagy 3’ végén hozunk létre deléciókat. Ezek a nukleinsavmolekulák megfelelően rövidített fehérjék szintéziséhez vezetnek. A nukleotidszekvencia 5’ végén létrehozott ilyen deléciók segítségével például azonosíthatók olyan aminosavszekvenciák, amelyek az enzimnek a vakuólumba történő transzlokációjáért felelősek (tranzit peptidek). Ez lehetővé teszi olyan enzimek célzott előállítását, amelyek a megfelelő szekvenciák eltávolításának köszönhetően már nem a vakuólumban helyezkednek el, hanem a citoszolban, vagy más szignálszekvenciák hozzáadása révén egyéb kompartmentekben.
Másrészt elképzelhető pontmutációk bevezetése is olyan helyeken, ahol az aminosavszekvencia módosítása például befolyásolja az enzimaktivitást vagy az
HU 226 813 Β1 enzimműködés szabályozását. Ilyen módon előállíthatok például olyan mutánsok, amelyek módosított Km-értékkel rendelkeznek vagy amelyekre már nem hat a sejt szabályozó mechanizmusa, úgymint alloszterikus szabályozás vagy kovalens módosítás.
Továbbá előállíthatok olyan mutánsok, amelyek módosított szubsztrát- vagy termékspecifitással rendelkeznek. Továbbá előállíthatok módosított aktivitáshőmérséklet-profilt mutató mutánsok.
Rekombínáns DNS-átalakításhoz prokarióta sejtekben a találmány szerinti nukleinsavmolekulák vagy ezen molekulák részei inszertálhatók olyan plazmidokba, amelyek mutagenezist vagy szekvenciamódosítást tesznek lehetővé DNS-szekvenciák rekombinációjával. Standard technikák [Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1989)] segítségével elvégezhetők alapvető változtatások vagy hozzáadhatok természetes vagy szintetikus szekvenciák. DNS-fragmentumok egymáshoz kapcsolása céljából adapterek vagy linkerek csatlakoztathatók a fragmentumokhoz. Továbbá alkalmazhatók olyan átalakítások, amelyek megfelelő restrikciós hasítási helyeket biztosítanak, vagy eltávolítják a fölösleges DNS-t vagy restrikciós hasítási helyeket. Alkalmazhatók inszerciók, deléciók vagy szubsztitúciók, in vitro mutagenezis, primer javítás, restrikció vagy ligáció. Analízismódszerek közül általában szekvenciaanalízis, restrikciós analízis vagy további biokémiai, molekuláris biológiai módszerek alkalmazhatók.
A találmány szövegösszefüggésében a „hibridizáció” kifejezés hagyományos körülmények között - előnyösen szigorú körülmények között - végzett hibridizációt jelent, például Sambrook és munkatársainak leírása szerint [Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1989)]. Egy példa szigorú hibridizációs körülményekre: hibridizáció 50% formamid, 5*SSC, 5*Denhardt-féle oldat, 40 mM nátrium-foszfát pH=6,8, 0,5% (w/v) BSA, 1% (w/v) SDS, 0,1 mg/ml heringsperma DNS-keverékében 42 °C-on. Egy példa hagyományos, nem szigorú hibridizációs körülményekre, amikor hibridizációt végzünk a fent leírtakhoz képest azzal az eltéréssel, hogy 50% formamid helyett 30% formamidot alkalmazunk. Szigorú körülmények esetén alkalmazott mosási körülmények előnyösen 0,5*SSC/0,5% SDS 60 °C-on és nem szigorú körülmények esetén előnyösen 2*SSC/0,5% SDS 56 °C-on.
A találmány szerinti molekulákkal hibridizáló nukleinsavmolekulák izolálhatok például megfelelő szervezetekből - úgymint articsókából - előállított genomiális vagy cDNS-könyvtárakból.
Ilyen nukleinsavmolekulák azonosíthatók és izolálhatok a találmány szerinti molekulák vagy ezen molekulák részeinek vagy esetenként ezen molekulák reverz komplementjeinek felhasználásával, például standard technikák szerint végzett hibridizációval [Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1989)]. Hibridizációs próbaként felhasználhatók például olyan nukleinsavmolekulák, amelyek pontosan vagy alapvetően az 1. számú vagy 3. számú szekvenciában bemutatott nukleotidszekvenciával vagy azok részeivel rendelkeznek. A hibridizációs próbaként felhasznált fragmentumok lehetnek a szokásos szintézistechnikákkal előállított szintetikus fragmentumok, amelyeknek a szekvenciája alapvetően hasonló a találmány szerinti nukleinsavmolekulához.
A találmány szerinti nukleinsavmolekulákkal hibridizáló molekulák magukban foglalják a fentiekben leírt, a találmány szerinti fehérjét kódoló nukleinsavmolekulák fragmentumait, származékait és allélváltozatait is. „Fragmentumok alatt a nukleinsavmolekulák azon részeit értjük, amelyek elég hosszúak ahhoz, hogy a találmány szerinti fehérjét kódolják. Ebben a szövegösszefüggésben a „származék” kifejezés azt jelenti, hogy ezen molekulák szekvenciái egy vagy több helyen eltérnek a fent leírt nukleinsavmolekulák szekvenciáitól. Azonban nagyfokú homológiát mutatnak ezekkel a szekvenciákkal. A homológia legalább 40%-os, különösen legalább 60%-os, előnyösen több mint 80%-os és legelőnyösebben több mint 90%-os szekvenciaazonosságot jelent. Az ezen nukleinsavmolekulák által kódolt fehérjék a 2. számú szekvenciában bemutatott aminosavszekvenciával legalább 80%-os, előnyösen 85%-os és különösen előnyösen több mint 90%-os, még előnyösebben több mint 95%-os, még inkább előnyösen több mint 97%-os és legelőnyösebben több mint 99%-os szekvenciaazonosságot mutatnak. A fent leírt nukleinsavmolekuláktól való eltérések lehetnek például deléció, szubsztitúció, inszerció és/vagy rekombináció eredményei.
A fent leírt molekulákkal homológ nukleinsavmolekulák, amelyek ezen molekulák származékait reprezentálják, általában olyan változatai ezen molekuláknak, amelyek módosítást képviselnek ugyanazzal a biológiai funkcióval. Ezek lehetnek természetben előforduló változatok - például más szervezetekből származó szekvenciák - vagy mutációk, ahol ezek a mutációk bekövetkezhetnek természetes úton vagy bevezethetők célzott mutagenezissel. Továbbá a változatok lehetnek szintetikusan előállított szekvenciák. Az allélváltozatok lehetnek természetben előforduló változatok vagy szintetikusan vagy rekombínáns technikával előállított változatok.
A találmány szerinti nukleinsavmolekulák különböző változatai által kódolt fehérjék bizonyos közös jellegzetességeket mutatnak, úgymint enzimaktivitás, molekulatömeg, immunológiai reaktivitás vagy konformáció vagy fizikai sajátságok - úgymint a mozgékonyság gélelektroforézisben - kromatográfiai jellemzők, szedimentációs koefficiens, oldhatóság, spektroszkópiai sajátságok, stabilitás, pH-optimum, hőmérséklet-optimum stb.
Előnyben részesített megvalósítási formában a találmány szerinti nukleinsavszekvenciák articsókából (Cynara scolymus) származnak.
A találmány tárgyát képezik továbbá a találmány szerinti nukleinsavmolekulákat tartalmazó vektorok. Ezek előnyösen plazmidok, kozmidok, vírusok, bakte4
HU 226 813 Β1 riofágok és egyéb, a géntechnológiában szokásos vektorok.
A találmány szerinti vektoron belül a találmány szerinti nukleinsavmolekula előnyösen működőképesen kapcsolódik olyan szabályozóelemekkel, amelyek biztosítják a transzlálandó RNS átírását és szintézisét prokarióta és/vagy eukarióta sejtekben.
A találmány szerinti expressziós vektorok lehetővé teszik hosszú láncú inulin előállítását különböző gazdaszervezetekben, különösen prokarióta vagy eukarióta sejtekben, úgymint baktériumokban, gombákban, algában, állati sejtekben és előnyösen növényi sejtekben és növényekben. Különösen előnyben részesített gazdaszervezetek az élesztők, úgymint S. cerevisiae és tejsavbaktériumok, úgymint Streptococcus thermophilus, Lactobacillus bulgaricus, Streptococcus lactis, S. cremoris, Lactobacillus acidophilus és Leuconostoc cremoris. A kódolt enzimek esetleg felhasználhatók a gazdaszervezeten kívül is hosszú láncú inulin előállítására. Különösen előnyben részesítünk növényi sejteket.
Különböző expressziós rendszerekre vonatkozó áttekintést találhatunk például a következő irodalmakban [Methods in Enzymology 153, 385-516 (1987); Bitteret al., Methods in Enzymology 153, 516-544 (1987); Sawers et al., Applied Microbiology and Biotechnology 46, 1-9 (1996); Billmann-Jacobe, Current Opinion in Biotechnology 7, 500-504 (1996); Hockney, Trends in Biotechnology 12, 456-463 (1994) és Griffiths et al., Methods in Molecular Biology 75, 427-440 (1997)]. Élesztőexpressziós rendszereket írtak le [Hensing et al., Antonie van Leuwenhoek 67, 261-279 (1995); Bussineau et al., Developments in Biological Standardization 83, 13-19 (1994); Gellissen et al., Antonie van Leuwenhoek 62, 79-93 (1992); Fleer, Current Opinion in Biotechnology 3, 486-496 (1992); Vedvick, Current Opinion in Biotechnology 2, 742-745 (1991) és Buckholz, Bio/Technology 9, 1067-1072 (1991)]. Korábban már nagy számban írtak le expressziós vektorokat. A szelekciós markergéntől és a kiválasztott gazdaszervezetben replikációt biztosító replikációs eredőtől eltekintve ezek általában tartalmaznak baktérium- vagy víruspromotert és a legtöbb esetben terminációs szignált a transzkripcióhoz. Legalább egy restrikciós hasítási hely vagy egy polilinker található a promoter és a terminációs szignál között, amely lehetővé teszi kódoló DNSszekvencia beszúrását (inszercióját). Amennyiben a DNS-szekvencia a kiválasztott gazdaszervezetben aktív a megfelelő gén transzkripciójának természetes módon történő kontrolljában, felhasználható promoterszekvenciaként. Ez a szekvencia ki is cserélhető más promoterszekvenciákkal. Egyaránt felhasználhatók olyan promoterek, amelyek a gén konstitutív kifejeződéséhez vezetnek és a downstream gén célzottan szabályozott kifejeződését lehetővé tevő indukálható promoterek. Ilyen sajátságokkal rendelkező baktérium- és víruspromotereket már kiterjedten leírtak korábban a szakmában. Mikroorganizmusokban (úgymint E. coliban, S. cerevisiae-ben) történő kifejeződéshez szabályozó szekvenciákat kielégítően leírtak már korábban a szakmában. A downstream gén különösen erős kifejeződését lehetővé tevő promoterek például a T7 promoter [Studier et al., Methods in Enzymology 185, 60-89 (1990)], lacUV5, trp, trp-lacUV5 [DeBoer et al., in Rodriguez and Chamberlin (eds.) Promoters, Structure and Function; Praeger, New York 462-481 (1982); DeBoer et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 21-25 (1983)], λρ1, rác [Boros et al., Gene 42, 97-100 (1986)]. A fehérje mennyisége általában a mikroorganizmus növekedési ciklusának logaritmikus fázisában a középtől a vége felé haladva a legnagyobb. Emiatt indukálható promoterek használatát részesítik előnyben a fehérjék szintéziséhez. Ez gyakran nagyobb fehérjehozamokhoz vezet, mint a konstitutív promoterek. Az erősen konstitutív promoterek alkalmazása a klónozott gén folyamatos transzkripciójának és transzlációjának köszönhetően gyakran vezet egyéb nélkülözhetetlen sejtfunkciókhoz szükséges energiák kimerüléséhez, amely lelassítja a sejt növekedését [Bemard R. Glick, Jack J. Pasternak, Molekulare Biotechnologie, Spektrum Akademischer Verlag GmbH, Heidelberg Berlin Oxford p. 342 (1995)]. Ezért a fehérje optimális mennyiségének eléréséhez gyakran kétlépcsős eljárást alkalmaznak. Először szaporítják a gazdasejteket optimális körülmények között viszonylag magas sejtsűrűség eléréséig. A második lépésben transzkripciót indukálnak a felhasznált promoter típusától függően. Ebben az összefüggésben különösen alkalmas a laktózzal vagy IPTG-vel (izopropil-βD-tiogalakto-piranoziddal) indukálható tac promoter [DeBoer et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80, 21-25 (1983)]. A transzkripcióhoz terminációs szignálokat szintén leírnak korábbi szakirodalmak.
A gazdasejtnek a megfelelő fehérjét kódoló DNSsel történő transzformációja általában elvégezhető standard technikák segítségével Sambrook és munkatársainak leírása szerint [Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1989)]. A gazdasejt tenyésztése olyan tápoldatban történik, amely megfelel a felhasznált gazdasejtek szükségleteinek, különösen figyelembe véve a pH-értéket, hőmérsékletet, sókoncentrációt, levegőztetést, antibiotikumokat, vitaminokat, nyomelemeket stb.
A gazdasejtek által termelt enzim tisztítása elvégezhető hagyományos tisztítási technikák segítségével, úgymint precipitációval, ioncserével, kromatográfiával, affinitáskromatográfiával, gélszűréssel, reverz fázisú HPLC-vel stb.
A gazdasejtekben kifejeződő DNS módosításával olyan polipeptid állítható elő a gazdasejtben, amely bizonyos sajátságoknak köszönhetően könnyebben izolálható a szaporító tápoldatból. így lehetőség nyílik a fehérjének további polipeptidszekvenciát tartalmazó fúziós fehérjeként történő kifejezésére, amely specifikus kötődési sajátságai révén lehetővé teszi a fúziósfehérje-affinitás kromatográfiával történő izolálását [Hopp et al., Bio/Technology 6, 1204-1210 (1988); Sassenfeld, Trends Biotechnoi. 8, 88-93 (1990)].
Növényi sejtekben történő kifejeződéshez a patatin B33 promoter szabályozóelemeit részesítjük előnyben. Egyéb előnyben részesített promoterek a 35S CaMV
HU 226 813 Β1 promoter és a Saccharomyces cerevisiae alkohol dehidrogenáz génjének promotere.
A találmány szerinti vektorok rendelkezhetnek további funkciós egységekkel, amelyek stabilizálják a vektort a gazdaszervezeten belül, például baktérium replikációs eredő vagy a 2-mikron-DNS Saccharomyces cerevisiae-ben történő stabilizáláshoz. Továbbá tartalmazhatnak agrobakteriális T-DNS bal és jobb határszekvenciákat, ily módon lehetővé téve a növények genomjába való stabil beépülést.
A találmány szerinti vektorok tartalmazhatnak továbbá funkciós terminátorokat, úgymint az Agrobacterium sp.-ékből származó oktopin szintetáz gén terminátorát.
Egy másik megvalósítási formában a találmány szerinti nukleinsavmolekula a találmány oltalmi körébe tartozó vektorban található nukleinsavmolekulához kapcsolódik, ahol nevezett nukleinsavmolekula funkciós szignálszekvenciát kódol az enzimnek különböző sejtkompartmentekbe történő irányítása céljából. Ez a módosítás állhat például N-terminális szignál szekvencia hozzáadásából magasabb rendű növények apoplasztjában történő kiválasztáshoz; de bármilyen egyéb módosítás, amely szignálszekvencia és a kódolt FFT fúziójához vezet, szintén a találmány tárgyát képezi. A találmány szerinti vektorban található nukleinsavmolekula főleg kiválasztást eredményező aminosavszekvenciát kódoló szekvenciát tartalmazhat. Ebben az összefüggésben előnyösen a Klebsiella oxytoca M5A1-ből származó α-CGT-áz szignálpeptidet [Fiedler et al., J. Mól. Bioi. 256, 279-291 (1996)] vagy a génbank X86014 letéti számú szekvencia 11529-11618. nukleotidjai által kódolt szignálpeptidet alkalmazzuk.
A találmány egy különösen előnyben részesített megvalósítási formáját a p35-csFFT és p33-csFFT plazmidok képezik, amelyeknek az összeállítását a példáknál írjuk le (2. és 4. ábra).
A találmány egy további megvalósítási formáját olyan gazdasejtek képezik, amelyek átmenetileg vagy stabilan tartalmazzák a találmány szerinti nukleinsavmolekulákat vagy vektorokat, vagy ilyen sejtekből származnak. Ebben az összefüggésben a gazdasejt olyan szervezet, amely rekombináns DNS in vitro felvételére - és ha alkalmazható - a találmány szerinti nukleinsavmolekulák által kódolt fehérjék szintézisére képes. A gazdasejtek egyaránt lehetnek prokarióta és eukarióta sejtek. Leginkább mikroorganizmusok lehetnek. A találmány szövegösszefüggésében ezek mind baktériumok vagy protiszták (úgymint gombák, különösen élesztők és algák), például Schlegel meghatározása szerint [Allgemeine Mikrobiologie, Georg Thieme Verlag 1-2 (1985)]. Prokarióta gazdaszervezetekkel kapcsolatban meg kell említeni, hogy sikeresen kimutatták inulin pozitív hatását bizonyos szervezetek úgymint a humán bélrendszerben található Bifidobacterium sp. - növekedésére. Bifidobaktériumoknak egészségvédő hatást tulajdonítanak [Gibson et al., Int. Sugár J. 96, 381-386 (1994); Roberfroid et al., J. of Nutrition 128, 11-19 (1998)]. Daganatot gátló hatást is leírtak már [Reddy et al., Carcinogenesis 18,
1371-1374 (1997); Singh et al., Carcinogenesis 18, 833-841 (1997)]. Ennek értelmében a találmány szerinti gazdasejtek, úgymint élesztő (kenyér) és tejsavbaktériumok (joghurt, savanyú tej stb.) alkalmazhatók az élelmiszeriparban.
Különösen előnyben részesített megvalósítási formában a találmány szerinti gazdasejt tartalmaz még szacharózfüggő szacharóz-fruktozil-transzferázt (SST-t) kódoló gént. Ilyen szekvenciákat izoláltak például articsókából (DE-A1 19708774 számú közzétételi irat), Cichorium intibus-bó\ [DeHalleux et al., Plánt Physiol. 113, 1003-1013 (1997)] Helianthus tuberosus-ból (WO 96/21023 számú közzétételi irat és Allium cepa-bó\ [Vijn et al., Plánt Physiol. 117, 1507-1513 (1998)].
Különösképpen a találmány tárgyát képezik a találmány szerinti nukleinsavmolekulával transzformált vagy a találmány szerinti vektorrendszereket - vagy ezek származékait vagy részeit - tartalmazó transzgén növényi sejtek. Ezek képesek a találmány szerinti vektorrendszerek vagy a vektorrendszer származékainak vagy részeinek bevezetése révén hosszú láncú inulin termelődéséhez enzimeket szintetizálni. A találmány szerinti sejtek előnyösen úgy jellemezhetők, hogy a bevezetett találmány szerinti nukleinsavmolekula vagy heterológ a transzformált sejtre nézve, azaz természetes körülmények között nem fordul elő ezekben a sejtekben, vagy a természetben előforduló megfelelő szekvenciához képest eltérő helyzetben található a genomban. Továbbá ilyen találmány szerinti transzgén növényi sejt előnyösen tartalmaz SST-t kódoló DNSszekvenciát.
A találmány tárgyát képezik továbbá a találmány szerinti nukleinsavmolekulák által kódolt fehérjék ugyanúgy, mint ezek előállításának módszerei, ahol a találmány szerinti gazdasejtet olyan körülmények között szaporítjuk, amely lehetővé teszi a fehérje szintézisét. A fehérjét ezt követően izoláljuk az elszaporított sejtekből és/vagy a szaporító tápoldatból. A találmány tárgyát képezi továbbá a találmány szerinti gazdasejtből vagy a találmány szerinti módszerrel kinyerhető FFT.
A találmány tárgyát képezik továbbá olyan nukleinsavmolekulák, amelyek specifikusan hibridizálnak a találmány szerinti nukleinsavmolekulával, ezen molekulákkal komplementer molekulák vagy ilyen molekulák részei. Ezek előnyösen legalább 10, különösen legalább 15 és különösen előnyösen legalább 50 nukleotid hosszúságú oligonukleotidok. A találmány szerinti oligonukleotidok felhasználhatók például PCR-reakciók primereiként. Lehetnek antiszenz szerkezetek komponensei vagy megfelelő ribozimokat kódoló DNS-molekulák is.
Szintén a találmány tárgyát képezi olyan transzgén növényi sejtek, növényi szövet és növények előállítási módszere, amely tartalmazza a találmány szerinti nukleinsavmolekula vagy vektor bevezetését növényi sejtekbe, növényi szövetbe és növényekbe. A találmány szerinti nukleinsavmolekulák révén rekombináns DNStechnikák segítségével lehetséges hosszú láncú inulin
HU 226 813 Β1 előállítása különböző szervezetekben, különösen növényekben, amely hagyományos, például tenyésztési módszerekkel eddig lehetetlen volt. A találmány szerinti FFT aktivitásának növelésével - például a találmány szerinti nukleinsavmolekulák túlzott kifejezése révén, vagy olyan mutánsokkal, amelyek már nem alárendeltjei sejtspecifikus szabályozó mechanizmusoknak és/vagy aktivitásukat tekintve eltérő hőmérsékletfüggést mutatnak - lehetőség nyílik rekombináns DNStechnikák segítségével megfelelően módosított növények hozamának növelésére.
Tehát lehetőség nyílik a találmány szerinti nukleinsavmolekulák kifejezésére növényi sejtekben a megfelelő FFT aktivitásának növelése céljából, vagy olyan sejtekbe történő bevezetésére, amelyek normális körülmények között nem fejezik ki ezt az enzimet. Továbbá lehetséges a találmány szerinti nukleinsavmolekulák módosítása a szakember számára ismert módszerekkel annak érdekében, hogy megkapjuk a találmány szerinti FFT-t, amely már nem alárendeltje sejtspecifikus szabályozó mechanizmusoknak vagy amely módosult hőmérsékletfüggést, szubsztrát- vagy termékspecifitást mutat.
Erre a célra a szakember különböző növényi transzformációs rendszereket alkalmazhat. Ezért intenzíven tanulmányozták és leírták T-DNS használatát növényi sejtek transzformálására [EP-A 120516 számú szabadalmi irat; Hoekema, The Binary Plánt Vector System, Offsetdrukkerij Kanters Β. V., Alblasserdam, Chapt. V, (1985); Fraley, Crit. Rév. Plánt Sci. 4, 1-46 és EMBO J. 4, 277-287 (1985)].
A DNS-nek a növényi sejtbe történő beviteléhez a növény megfelelően együtt tenyészthető Agrobacterium tumefaciens vagy Agrobacterium rhizogenes baktériumokkal. A fertőzött növényi anyagból (például levéldarabkákból, törzsszegmensekből, gyökérből, de protoplasztokból is vagy szuszpenzióban tenyésztett növényi sejtekből) azután teljes növényeket regenerálunk megfelelő tápoldatban, amely tartalmazhat antibiotikumokat vagy biocideket a transzformált sejtek kiválogatásához. Az ilyen úton kapott növények azután megvizsgálhatók, vajon tartalmazzák-e a bevezetett DNS-t vagy nem. Idegen DNS bevezetésére egyéb lehetőségek a biolisztikus módszer alkalmazása vagy protoplasztok transzformálása ismert a szakember számára [Willmitzer L., Transgenic plants in: Biotechnology, A Multi-Volume Comprehensive Treatise (H. J. Rehm, G. Reed, A. Pühler, P. Stadler, eds.), Weinheim-New York-Basel-Cambridge, Vol 2, 627-659 (1993)].
Alternatív rendszerek egyszikű növények transzformációjára a biolisztikus megközelítéssel végzett transzformáció, DNS elektromosan vagy kémiailag indukált felvétele protoplasztokba, részlegesen permeabilizált sejtek elektroporációja, DNS makroinjektálása infloreszcenszekbe, DNS mikroinjektálása mikrospórákba és előembriókba duzzasztással [Lusardi, Plánt J. 5, 571-582 (1994); Paszkowski, Biotechnology 24, 387-392 (1992)]. Míg a kétszikű növények transzformációja Ti-plazmid vektorrendszerekkel Agrobacterium tumefaciens segítségével egy jól bevált módszer, újabb vizsgálatok azt mutatják, hogy Agrobacteriumalapú vektorok egyszikű növények esetében is alkalmazhatók [Chan et al., Plánt Mól. Bioi. 22, 491-506 (1993); Hiei et al., Plánt J. 6, 271-282 (1994); Bytebier et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84, 5345-5349 (1987); Raineri etal., Bio/Technology 8, 33-38 (1990); Gould et al., Plánt Physiol. 95, 426-434 (1991); Mooney et al., Plánt Cell Tissue & Org. Cult. 25, 209-218 (1991); Li et al., Plánt Mól. BioL 20, 1037-1048 (1992)]. A fent említett transzformációs rendszerek közül hármat a múltban különböző típusú gabonafélékre dolgoztak ki: növényi sejt elektroporációját, protoplasztok transzformációját és a DNS-transzfert regenerálható szövetbe és sejtekbe részecskebombázással, melyekről áttekintést adnak Jáhne és munkatársai [Euphytica 85, 35-44 (1995)]. A megfelelő irodalomban leírják búza transzformációját különböző módszerekkel, erről adnak áttekintést Maheshwari és munkatársai [Critical Reviews in Plánt Science 14 (2), 149-178 (1995)].
A találmány szerinti nukleinsavmolekulák növényekben történő kifejezésekor elvileg lehetőség van arra, hogy a szintetizálódott fehérje a növényi sejt bármelyik kívánt kompartmentjében helyezkedjen el. Annak érdekében, hogy egy bizonyos kompartmentben történő elhelyezkedést elérjünk, a vakuólumon belül való elhelyezkedést biztosító szekvenciát törölni (deléció) kell és a maradék kódolórégiót adott esetben olyan DNS-szekvenciákhoz kapcsolni, amelyek biztosítják a megfelelő kompartmentben történő elhelyezkedést. Ilyen szekvenciák ismertek a szakmában [Braun, EMBO J. 11, 3219-3227 (1992); Wolter, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85, 846-850 (1988); Sonnewald, Plánt J. 1, 95-106 (1991); Rocha-Sosa, EMBO J. 8, 23-29 (1989],
Szintén a találmány tárgyát képezik a találmány szerinti nukleinsavmolekulák egyikével vagy többjével transzformált transzgén növényi sejtek, növényi szövetek és növények ugyanúgy, mint ilyen módon transzformáit sejtekből származó transzgén növényi sejtek. Ilyen sejtek tartalmaznak a találmány szerinti nukleinsavmolekulákból egyet vagy többet, előnyösen olyan szabályozó DNS-elemekhez - különösen promoterhez - kapcsolva, amelyek biztosítják a transzkripciót növényi sejtekben. Az ilyen sejtek abban különböznek a természetben előforduló növényi sejtektől, hogy legalább egy olyan találmány szerinti nukleinsavmolekulát tartalmaznak, amely természetes körülmények között nem fordul elő ezekben a sejtekben, vagy ilyen molekula olyan helyzetben található ezen sejtek genomjában, ahol természetes körülmények között nem fordul elő, azaz más genomiális környezetben. Mivel 1-kesztóz az FFT természetes szubsztrátja és önmaga a szacharózfüggő szacharóz-fruktozil-transzferáz (SST) szacharózzal való reakciójával keletkezik, különösen előnyös és talán elengedhetetlen SST biztosításához, eltekintve a találmány szerinti nukleinsavmolekulától, vektortól vagy FFT-től. Tehát előnyben részesített megvalósítási formában a találmány tárgyát képezik olyan transzgén
HU 226 813 Β1 növényi sejtek, növényi szövetek vagy növények, amelyek ezenkívül tartalmaznak még szacharózfüggő szacharóz-fruktozil-transzferázt (SST-t) kódoló gént. Ezek lehetnek például olyan növények vagy növényi sejtek, amelyek már természettől fogva kifejeznek SST-t, úgymint például cikória, Helianthus tuberosus vagy dália, vagy olyan növények, amelyekbe rekombináns DNStechnikák segítségével SST-t kódoló DNS-szekvenciát vittünk be. A nevezett szekvencia bevezethető a találmány szerinti nukleinsavmolekulától vagy vektortól függetlenül vagy azzal egyidejűleg.
A transzgén növényi sejtek és növényi szövetek teljes növényekké regenerálhatok a szakember által ismert technikák segítségével. A találmány szerinti transzgén növényi sejtek regenerálásával kapható növények szintén a találmány tárgyát képezik. A találmány további tárgyát képezik olyan növények, amelyek tartalmazzák a fent leírt transzgén növényi sejteket. A transzgén növényi sejtek elvben bármilyen kívánt növényfaj sejtjei lehetnek, például egyszikűek ugyanúgy, mint kétszikűek. Előnyösen alkalmazható növények, különösen a szacharóztartalmúak, úgymint rizs, kukorica, cukorrépa, cukornád vagy burgonya, zöldségfélék (például paradicsom, sárgarépa, póréhagyma, cikória stb.), takarmány vagy legelő füvek, édesburgonya, búza, árpa, repce vagy szójabab.
Szintén a találmány tárgyát képezi szaporító anyag és a találmány szerinti növények learatott termései, úgymint gyümölcsök, magok, gumók, gyökerek, magoncok, dugványok, sejtkultúrák stb.
A találmány további tárgyát képezi a találmány szerinti gazdasejtekből - különösen transzgén növényi sejtekből, növényi szövetekből, növényekből, valamint a szaporító anyagból és a learatott termésekből - kinyerhető hosszú láncú inulin.
A találmány tárgyát egy másik megvalósítási formában hosszú láncú inulin előállítására irányuló módszerek képezik, amelyek tartalmazzák:
a) a gazdasejt - különösen a találmány szerinti növényi sejt, növényi szövet vagy növény - tenyésztését olyan körülmények között, amely lehetővé teszi FFT termelődését és 1-kesztóz adott esetben kívülről pótolva - vagy más ekvivalens szubsztrát átalakítását hosszú láncú inulinná; és
b) az így előállított inulin kinyerését a tenyésztett gazdasejtekből, különösen növényi sejtekből, szövetekből vagy növényekből, vagy a tápoldatból.
A találmány tárgyát egy további megvalósítási formában hosszú láncú inulin előállításának olyan módszere képezi, amely tartalmazza:
a) 1-kesztóz vagy ekvivalens szubsztrát érintkeztetését a találmány szerinti FFT-vel olyan körülmények között, amely lehetővé teszi hosszú láncú inulinná történő átalakulását; és
b) az így előállított inulin kinyerését.
Inulin kinyerését különböző forrásokból, különösen növényi szövetből, többen leírták [Gibson et al., Int. Sugár J. 96, 381-386 (1994); Baxa, Czech J. Food Sci. 16, 72-76 (1998); EP-A 787745 számú szabadalmi irat; DeLeenheer, Carbohydr. Org. Raw Mater. Ili,
Workshop, Verlag VCH Weinheim, Germany p. 67-92 (1996) és RU 2001621C1 számú szabadalmi irat],
A találmány tárgyát képezi továbbá hosszú láncú inulin előállítására irányuló in vitro módszer szacharóz szubsztrát és a találmány szerinti SST és FFT enzimkombináció felhasználásával. Egy további megvalósítási formában a találmány tárgyát képezi inulin előállítására irányuló in vitro módszer fruktozil oligomereket és a találmány szerinti FFT-t tartalmazó keverék alkalmazásával. Ebben az összefüggésben a fruktozil oligomer fruktózegységeket tartalmazó, körülbelül 2-7 polimerizációs fokú oligomer, amely glükózmaradékot tartalmazhat a végén. A találmány szerinti módszert alkalmazva, előnyösen rekombináns úton előállított fehérjéket használunk. A jelen találmány szövegösszefüggésében ezek olyan fehérjék, amelyeket a megfelelő fehérjét kódoló DNS-szekvencia gazdasejtbe történő bevezetésével és ott történő kifejezésével állítottunk elő. A fehérje ezt követően kinyerhető a gazdasejtből és/vagy a szaporító tápoldatból. A gazdasejt előnyösen a fentiekben definiált, találmány szerinti gazdasejt. A találmány szerinti módszer előnyben részesített megvalósítási formájában rekombináns úton előállított enzimeket használunk, amelyeket a gazdasejt kiválasztott a tápoldatba, így nem szükséges a sejtek szétroncsolása a fehérje további tisztításához, mivel a kiválasztott fehérje kinyerhető a felülúszóból. A tápoldat maradványainak elválasztása céljából alkalmazhatók hagyományos feldolgozási technikák, úgymint dialízis, reverz ozmózis, kromatográfiás módszerek stb. Ugyanez vonatkozik a tápoldatba kiválasztott fehérje töményítésére. A fehérjék mikroorganizmusok általi kiválasztását normális esetben N-terminális szignálpeptidek (szignálszekvencia, vezérpeptid) közvetítik. Ezzel a szignálszekvenciával rendelkező fehérjék behatolhatnak a mikroorganizmus sejtmembránjába. A fehérjék kiválasztása elérhető ezt a szignálpeptidet kódoló DNS-szekvencia és a megfelelő enzimet kódoló régió összekapcsolásával. Előnyösen a Klebsiella oxytoca M5A1 α-CGT-áz szignálpeptidjét [Fiedler et al., J. Mól. Bioi. 256, 279-291 (1996)] vagy a génbankban X86014 letéti számon található szekvencia 11529-11618. nukleotidjai által kódolt szignálpeptidet alkalmazzuk.
A találmány szerinti módszerben felhasznált enzimek egy másik lehetőség szerint nem mikroorganizmusok alkalmazásával, hanem a fehérjék kifejeződéséhez vezető in vitro transzkripciós és transzlációs rendszerek segítségével állíthatók elő. A találmány egy különösen előnyben részesített megvalósítási formájában az FFT-t növények levélszövetének protoplasztjaiból állítjuk elő.
A találmány tárgyát képezi továbbá hosszú láncú, több mint 20 fruktozilmaradékot tartalmazó inulin, amely képződhet egy találmány szerinti gazdasejtben, különösen növényi sejtben, növényi szövetben vagy a találmány szerinti növényben, vagy a találmány szerinti növények vagy növényi sejtek szaporítóanyagában vagy learatott termékében, vagy amelyet a fent említett találmány szerinti módszerek valamelyikével kapunk.
HU 226 813 Β1
Ez az inulin előnyösen felhasználható felületaktív anyagok előállítása céljából vizes rendszerek viszkozitásának növelésére, detergensként, szuszpendálószerként, ülepedés sebességének növelésére, víz megkötésére vagy komplexbe vitelére.
Ezek vagy más közzétett megvalósítási formák nyilvánvalóak a szakember számára. Ezeket tartalmazza a jelen találmány leírása és példái. További irodalom, amely a fent említett módszerek, eszközök vagy felhasználások egyikére vonatkozik és a jelen találmány értelmében alkalmazható, átvehető a szakmai előzményekből, például nyilvános könyvtárakból vagy elektronikus eszközök felhasználásával. Ezt a célt szolgálják nyilvános adatbázisok, mint például a „Medline”, amely hozzáférhető az interneten, például a http://www.ncbi.nlm.nih.gov/PubMed/medline.html címen. A szakember számára további adatbázisok és címek ismeretesek, amelyek hozzáférhetők az interneten, például a http://www.lycos.com címen. Biotechnológiai szabadalmakra vagy szabadalmi bejelentésekre vonatkozó források és információk áttekintését adja Berks [TIBTECH 72, 352-364 (1994)].
Az ábrák leírása
1. ábra: mutatja teljes protoplaszt extraktum HPLC analízisét. A protoplasztokat különböző vektorokkal transzformáltuk: A) a transzformációt a pA7 vektorral végeztük, amely nem tartalmaz CaMV 35S promoterrel fuzionált kódolórégiót. B) transzformációt hajtottunk végre a pA7-csFFT vektorral, amely az articsókából származó fruktámfruktán-fruktozil-transzferáz kódolórégióját a CaMV 35S promoterrel fuzionálva tartalmazza. C) transzformációt végeztünk a pA7-htFFT vektorral, amely a Helianthus tuberosus-bó\ származó fruktámfruktán-fruktozil-transzferáz kódolórégióját a CaMV 35S promoterrel fuzionálva tartalmazza. Analízis előtt a teljes protoplasztkivonatot inkubáltuk fruktozil oligomerek keverékében egyenként 12 órát. Az analízist az 1. példában leírtak szerint végeztük el.
2. ábra: mutatja a p35-csFFT plazmid összeállítását.
3. ábra: mutatja a p35-csFFT szerkezettel transzformáit transzgén növények HPLC analízisét. Az analízis azt mutatja, hogy hosszú láncú inulinmolekulák képződtek articsókából származó SST-t és FFT-t egyaránt kifejező transzgén növényekben (35S-SST/FFT 22/19).
4. ábra: mutatja a p33-csFFT összeállítását.
5. ábra: mutatja a p33-csFFT szerkezettel transzformáit transzgén növények HPLC analízisét. Az analízis azt mutatja, hogy hosszú láncú inulinmolekulák képződtek articsókából származó SST-t és FFT-t egyaránt kifejező transzgén növényekben (B33-SST/FFT47).
A találmányt az alábbi példákkal szemléltetjük, az oltalmi kör korlátozása nélkül.
Példák
1. példa: Articsókából (Cynara scolymus) származó fruktozil-transzferázt kódoló cDNS azonosítása, izolálása és jellemzése Teljes RNS-t izoláltunk az articsóka magbugájából (receptacle) [Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1989)]. Poly(A)+mRNS-t izoláltunk a PolyTract mRNS izolációs rendszer (Promega Corporation, Madison, Wl, USA) segítségével. Komplementer DNS-t (cDNS-t) állítottunk elő ezen RNS 5 pg-jából a ZAP-cDNS-szintézis kit segítségével (Stratagene, Heidelberg) a gyártó utasításai szerint és 2*10® egymástól független rekombináns fág kiónt kaptunk. A megsokszorozott cDNSkönyvtárat standard módszerek szerint, nem túl szigorú körülmények között screeneltük az articsókából származó SST cDNS-ének megfelelő, 32P-jelölt DNSfragmentum segítségével (a pCy21 plazmid Notl fragmentuma, a WO 98/39460 számú közzétételi iratban leírtak szerint). Az articsókából származó SST szekvenciáját a WO 98/39460 számú közzétételi iratban írták le. Pozitív kiónokat screeneltünk az SST-próba segítségével nagyon szigorú körülmények között. Az ezen screenelés során pozitívan reagáló kiónokat elhagytuk, mivel ezek nyilvánvalóan SST cDNS-ek voltak. A maradék klónokból izoláltuk a cDNS inszertumot a standard eljárással izolált plazmid DNS Notl restrikciós enzimes hasításával és a pA7 vektorba klónoztuk. A Notl fragmentum ragadós végeit T4 polimeráz segítségével feltöltöttük. Ezt követően a fragmentumot a pA7 Smal helyére ligáltuk. A pA7 vektor a pUC18 származéka [Yanish-Perron, Gene 33, 103-119 (1985)], amely a polilinker EcoRI és Sacl helyei között a karfiol mozaikvírus 35S promoter inszertumát tartalmazza [Gardner, Nucleic Acids Rés. 9, 2871-2888 (1981) szerint a 7146-7464. nukleotidok]. A 35S promotertől eltekintve pA7 tartalmazza a pTiACH5 Ti plazmid T-DNS-ének 3. génje poliadenilációs szignálját [Gielen, EMBO J. 3, 835-846 (1984)] a 11749-11939. nukleotidokat, amelyeket Pvull—Hindlll fragmentumként izoláltunk a pAGV40 plazmidból [Herrera-Estrella, Natúré 303, 209-213 (1983)] és a polilinker Sphl és Hindlll helye közé klónoztuk, miután a Pvull helyhez Sphl linkereket adtunk.
Az articsóka-cDNS-t tartalmazó pA7 származékok segítségével dohányprotoplasztokat transzformáltunk Negrutiu módszere [Plánt Mól. Bioi. 8, 363-373 (1987)] segítségével. A transzformált protoplasztokat K3 tápoldatban [Nagy and Maliga, Z. Pflanzenphysiologie 78, 453-455 (1976)], 25 °C-on, két napig sötétben szaporítottuk. Ezt követően a sejtkivonatokat ismételt fagyasztással és felolvasztással nyertük ki. A kivonatokat oligofruktánokkal (67,5% 1-kesztóz, 28,4% nisztóz, 3,6% fruktozil-nisztóz, 0,5% szacharóz) inkubáltuk 12 órán át 28 °C-on és ezt követően HPLC analizáltuk. A HPLC
HU 226 813 Β1 analízist CarboPac PA 100 anioncserélő oszlopon végeztük, amely Dionex DX-300 gradiens kromatográfiás rendszerhez (Dionex, Sunnyvale, CA, USA) kapcsolódott. Cukor monomereket, oligomereket és polimereket pulzáló amperometriás detektálással mutattunk ki. A detektorbeállítás erre a célra a következő volt: ^=0,48 s; T2=0,12 s; T3=0,12 s; Ε^Ο,Οδ V; E2=0,65 V; E3=-0,95 V; érzékenységé,1 pC; integrációd,28-0,48 s; Atápoldatáram=0,15 M NaOH; B tápoldatáram=1 M NaAc 0,15 M NaOH-ban; gradiens: 10 perc 100% A; 2 perc lineáris növekedés 0% B-től 100% B-ig; 2 perc 100% B; 2 perc lineáris növekedés 0% A-tól 100% A-ig; 5 perc A. A mintákat felhasználás előtt sómentesítettük és szűrtük (microcon 10, amicon, Beverley, USA). Az áramlási sebesség 1 ml/perc volt. Néhány kivonatban nagy molekulájú inulint találtunk (1. ábra).
2. példa: A pCy3 plazmid cDNS inszertumának szekvenciaanalízise
A pA7 származék (pCy3) cDNS inszertumát amely a protoplasztvizsgálatban nagy molekulájú inulin szintézisét közvetítette - a didezoxi-nukleotid technika segítségével szekvenáltuk [Sanger, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74, 5463-5467 (1977)]. A pCy3 klón inszertuma 2073 bp hosszúságú DNS. A nukleotidszekvenciát az 1. számú szekvenciában mutatjuk be. A megfelelő aminosavszekvencia a 2. számú szekvenciában található. A 3. számú szekvencia az 1. számú szekvencia egy változata, amely ugyanazt a fehérjét kódolja, mint az 1. számú szekvencia. A szekvenciaanalízis és a már közzétett szekvenciákkal történő összehasonlítás azt mutatta, hogy az 1. számú szekvenciában bemutatott szekvencia új, és más szervezetekből származó FFT-vel homológiát mutató kódolórégiót tartalmaz.
3. példa: A p35-csFFT plazmid szintézise és a plazmid beépítése a burgonyagenomba
A p35-csFFT plazmid (2. ábra) három fragmentumot - A-t, B-t és C-t - tartalmaz a pBin 19 bináris vektoron belül [Bevan, Nud. Acids Rés. 12, 8711 (1984)] Becker szerint [Nucleic Acids Rés. 18, 203 (1990)] módosítva.
Az A fragmentum tartalmazza a karfiol-mozaikvírus (CaMV) 35S promoterét. Ez a 7146-7464. nukleonokat [Gardner, Nucleic Acids Rés. 9, 2871-2888 (1981)] tartalmazza inszertumként a pBin19—Hyg polilinkerének EcoRI és Sacl helyei között.
A B fragmentum az 1. számú szekvencia 1-2073. nukleotidjait tartalmazza. A B fragmentumot Notl fragmentumként kaptuk a pBK-CMV vektorból, amelybe az az EcoRI helyre EcoRI/Notl linker szekvencián keresztül volt inszertálva.
A C fragmentum tartalmazza a pTi ACH 5 Ti plazmid T-DNS-e 3. génjének poliadenilációs szignálját [Gielen, EMBO J. 3, 835-846 (1984)], a 11749-11939. nukleotidokat, amelyeket PvulI—HindiiI fragmentumként izoláltunk a pAGV 40 plazmidból [Herrera-Estrella, Natúré 303, 209-213 (1983)] és a pBinl 9—Hyg polilinkerének Sphl és Hindlll helye közé klónoztuk, miután Sphl linkereket adtunk a Pvull helyre.
A p35-csSST plazmidot Agrobacteríumba vittük be [Höfgen and Willmitzer, Nucleic Acids Rés. 16, 9877 (1988)] és ezt követően az Agrobacterium közvetítette géntranszfer útján burgonyanövényekbe juttattuk a fent leírt standard technikák segítségével. Nevezett burgonyanövényeket articsókából származó SST-t kódoló (DE-A1 19708774 számú szabadalmi irat) - és azt a 35S promoter kontrollja alatt kifejező - DNS-szekvenciával transzformáltuk. Intakt növényeket regeneráltunk transzformált sejtekből. A regenerált növények leveleiből kivonatot készítettünk és fruktozil polimerek jelenlétére nézve vizsgáltuk. Az analízist az 1. példában leírtak szerint végeztük el. Ezzel a vektorrendszerrel transzformált növények sorozatából származó levelek analízise egyértelműen igazolta nagy molekulájú inulin előfordulását, amely a p35-csFFT plazmidban levő, articsókából származó FFT gén kifejeződésének eredménye (3. ábra).
1. táblázat
Articsóka SST és FFT gént kifejező transzgén burgonyagumók analízise inulintartalomra
Növény száma Fruktán- tartalom μηιοΙ fruktóz/g friss tömeg Átlagos polimerizációs fok (fruktóz/glükóz arány)
35-SST/FFT 22/26 30,81 21 (20/1)
35-SST/FFT 36/17 27,34 20(19/1)
4. példa: A p33-csFFT plazmid előállítása és a plazmid beépítése a burgonyagenomba
A p33-csFFT plazmid (4. ábra) azonos a p35-csFFT plazmiddal azzal az eltéréssel, hogy az A fragmentum a burgonyából származó patatin b33 gén B33 promoterét tartalmazza a CaMV 35S promotere helyett. Ez tartalmazza a patatin b33 gén egy Dral fragmentumát (-1512. helytől a +14. helyig) [RochaSosa, EMBO J. 8, 23-29 (1989)], amelyet a pBin19—Hyg polilinker EcoRI és Sacl helyei közé inszertáltunk. A p33-csFFT plazmid körülbelül 14 kb méretű. A p33-csSST plazmidot burgonyanövényekbe Agrobacterium közvetítette géntranszfer segítségével vittük be a 3. példában leírtak szerint. Nevezett burgonyanövényeket articsókából származó SST-t kódoló DNS-szekvenciával transzformáltuk (lásd a DE-A1 19708774 számú szabadalmi iratot), amely ezeket a szekvenciákat a B33 promoter kontrollja alatt fejezte ki. Intakt növényeket regeneráltunk a transzformáit sejtekből. Az ezzel a vektorrendszerrel transzformáit növények sorozatából származó gumók analízise egyértelműen bizonyította nagy molekulájú inulin előfordulását, amely a p33-csFFT-ben (5. ábra) található, articsókából származó FFT gén kifejeződésének az eredménye.
HU 226 813 Β1 (Szekvenciák jegyzéke)
Sequence Listing (1) GENERAL INFORMATION:
(i) APPLICANT:
(A) NAME: Max-Planck-Gesellschaft zűr Förderung dér Wissenschaften, e. V.
(B) STREET: nőne (C) CITY: Berlin (D) STATE: nőne (E) COUNTRY: Germany (F) POSTAL CODE: nőne (ii) TITLE OF THE INVENTION: Nucleic acid molecules which encode proteins having fructosyl transferase activity and methods fór producing long-chain inulin (iii) NUMBER OF SEQUENCES: 4 (iv) COMPUTER-READABLE VERSION:
(A) DATA CARRIER: Floppy disk (B) COMPUTER: IBM PC compatible (C) OPERATING SYSTEM: PC-DOS/MS-DOS (D) SOFTWARE: Patentln Release #1.0, Version #1.30 (EPA) (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO: 1:
(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 2073 base pairs (B) TYPE: nudeotide (C) STRANDEDNESS: single stranded (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE TYPE: cDNA (iii) HYPOTHETICAL: NO (ix) FEATURE:
(A) NAME/KEY: CDS (B) POSITION: 21..1872 (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 1:
TTACCTCATT TCCATCAACC ATG AGA ACG ACT GAA CCC CAA ACT GAC CTT 50
Met Arg Thr Thr Glu Pro Gin Thr Asp Leu
10
GAG Glu CAT His GCA Alá CCC AAC Pro Asn 15 CAC His ACT Thr CCA Pro CTA Leu CTG Leu 20 GAC Asp CAC His CCC Pro GAA Glu CCA Pro 25 CCA Pro 98
CCG GCC GCC GTG AGA AAC CGG TTG TTG ATT AGG GTT TCG TCC AGT ATC 146
Pro Alá Alá Val Arg Asn Arg Leu Leu Ile Arg Val Ser Ser Ser Ile
30 35 40
ACA TTG GTC TCT CTG TTT TTT GTT TCA GCA TTC CTA CTC ATT CTC CTG 194
Thr Leu Val Ser Leu Phe Phe Val Ser Alá Phe Leu Leu Ile Leu Leu
45 50 55
TAC CAA CAC GAT TCC ACT TAC ACC GAT GAT AAT TCA GCA CCG TCG GAA 242
Tyr Gin His Asp Ser Thr Tyr Thr Asp Asp Asn Ser Alá Pro Ser Glu
60 65 70
HU 226 813 Β1
AGT Ser 75 TCT Ser TCC Ser CAG Gin CAG CCC TCC Ser GCT Alá GCC Alá GAT Asp CGC Arg 85 CTG AGA TGG GAG AGA 290
Gin Pro 80 Leu Arg Trp Glu Arg 90
ACA GCT TTT CAT TTC CAG CCC GCC AAA AAT TTC ATT TAT GAT CCC AAC 338
Thr Alá Phe His Phe Gin Pro Alá Lys Asn Phe Ile Tyr Asp Pro Asn
95 100 105
GGT CCA TTG TTC CAT ATG GGT TGG TAC CAT CTT TTC TAC CAA TAC AAC 386
Gly Pro Leu Phe His Met Gly Trp Tyr His Leu Phe Tyr Gin Tyr Asn
110 115 120
CCG TAC GCA CCG TTT TGG GGC AAC ATG ACA TGG GGT CAC GCC GTG TCC 434
Pro Tyr Alá Pro Phe Trp Gly Asn Met Thr Trp Gly His Alá Val Ser
125 130 135
AAA GAC ATG ATC AAC TGG TTC GAG CTT CCG ATC GCC TTG GCC CCA ACC 482
Lys Asp Met Ile Asn Trp Phe Glu Leu Pro Ile Alá Leu Alá Pro Thr
140 145 150
GAA TGG TAC GAT ATC GAG GGT GTT TTA TCA GGC TCA ACC ACG ATC CTC 530
Glu Trp Tyr Asp Ile Glu Gly Val Leu Ser Gly Ser Thr Thr Ile Leu
155 160 165 170
CCT GAT GGT CGA ATC TTT GCT CTC TAT ACC GGA AAC ACA AAC GAT CTC 578
Pro Asp Gly Arg Ile Phe Alá Leu Tyr Thr Gly Asn Thr Asn Asp Leu
175 180 185
GAG CAA CTT CAA TGC AAA GCC GTG CCA GTT AAT GCA TCC GAC CCA CTT 626
Glu Gin Leu Gin Cys Lys Alá Val Pro Val Asn Alá Ser Asp Pro Leu
190 195 200
CTT GTT GAA TGG GTC AGG TAC GAT GCT AAC CCG ATC CTG TAT GCT CCA 674
Leu Val Glu Trp Val Arg Tyr Asp Alá Asn Pro Ile Leu Tyr Alá Pro
205 210 215
TCA GGG ATC GGG TTA ACA GAT TAC CGG GAC CCG TCA ACA GTT TGG ACG 722
Ser Gly Ile Gly Leu Thr Asp Tyr Arg Asp Pro Ser Thr Val Trp Thr
220 225 230
GGT CCC GAT GGA AAA CAT CGG ATG ATC ATA GGG ACT AAA CGA AAT ACT 770
Gly Pro Asp Gly Lys His Arg Met Ile Ile Gly Thr Lys Arg Asn Thr
235 240 245 250
ACA GGA CTC GTA CTT GTA TAC CAT ACC ACC GAT TTC ACA AAC TAC GTA 818
Thr Gly Leu Val Leu Val Tyr His Thr Thr Asp Phe Thr Asn Tyr Val
255 260 265
ATG TTG GAC GAG CCG TTG CAC TCG GTC CCC AAC ACT GAT ATG TGG GAA 866
Met Leu Asp Glu Pro Leu His Ser Val Pro Asn Thr Asp Met Trp Glu
270 275 280
TGT GTC GAC CTT TAC CCT GTG TCA ACG ACC AAC GAT AGT GCA CTT GAT 914
Cys Val Asp Leu Tyr Pro Val Ser Thr Thr Asn Asp Ser Alá Leu Asp
285 290 295
GTT GCG GCC TAT GGT CCG GGT ATC AAG CAT GTG CTT AAA GAA AGT TGG 962
Val Alá Alá Tyr Gly Pro Gly Ile Lys His Val Leu Lys Glu Ser Trp
300 305 310
HU 226 813 Β1
GAG Glu 315 GGA Gly CAC His GCG Alá ATG Met GAC Asp 320 TTT Phe TAC Tyr TCG ATC GGG Gly 325 ACA Thr TAC Tyr GAT Asp GCA Alá TTT Phe 330 1010
Ser lle
AAC GAT AAG TGG ACA CCC GAT AAT CCC GAA CTA GAC GTC GGT ATC GGG 1058
Asn Asp Lys Trp Thr Pro Asp Asn Pro Glu Leu Asp Val Gly lle Gly
335 340 345
TTG CGG TGC GAT TAC GGA AGG TTC TTT GCG TCG AAG AGC CTC TAC GAC 1106
Leu Arg Cys Asp Tyr Gly Arg Phe Phe Alá Ser Lys Ser Leu Tyr Asp
350 355 360
CCG TTG AAG AAA CGA AGA GTC ACT TGG GGT TAT GTT GCG GAA TCC GAC 1154
Pro Leu Lys Lys Arg Arg Val Thr Trp Gly Tyr Val Alá Glu Ser Asp
365 370 375
AGT TAC GAC CAA GAC GTC TCT AGA GGA TGG GCT ACT ATT TAT AAT GTT 1202
Ser Tyr Asp Gin Asp Val Ser Arg Gly Trp Alá Thr He Tyr Asn Val
380 385 390
GCA AGG ACC ATT GTA CTC GAT CGG AAG ACT GGA ACC CAT CTA CTT CAA 1250
Alá Arg Thr lle Val Leu Asp Arg Lys Thr Gly Thr His Leu Leu Gin
395 400 405 410
TGG CCG GTG GAG GAA ATC GAG AGC TTG AGA TCC AAC GGT CAT GAA TTC 1298
Trp Pro Val Glu Glu lle Glu Ser Leu Arg Ser Asn Gly His Glu Phe
415 420 425
AAA AAT ATA ACA CTT GAG CCG GGC TCG ATC ATT CCC CTC GAC GTA GGC 1346
Lys Asn lle Thr Leu Glu Pro Gly Ser lle lle Pro Leu Asp Val Gly
430 435 440
TCA GCT ACG CAG TTG GAC ATC GTT GCA ACA TTT GAG GTG GAT CAA GAG 1394
Ser Alá Thr Gin Leu Asp He Val Alá Thr Phe Glu Val Asp Gin Glu
445 450 455
GCG TTA AAA GCA ACA AGT GAC ACG AAC GAC GAA TAC GGT TGC ACC ACA 1442
Alá Leu Lys Alá Thr Ser Asp Thr Asn Asp Glu Tyr Gly Cys Thr Thr
4 60 465 470
AGT TCG GGT GCA GCC AAA GGG GAA GTT TTG GAC CAT TCG GGG ATT GCA 1490
Ser Ser Gly Alá Alá Lys Gly Glu Val Leu Asp His Ser Gly He Alá
475 480 485 490
GTT CTT GCC CAC GGA ACC CTT TCG GAG TTA ACT CCG GTG TAT TTC TAC 1538
Val Leu Alá His Gly Thr Leu Ser Glu Leu Thr Pro Val Tyr Phe Tyr
495 500 505
ATT GCT AAA AAC ACC AAG GGA GGT GTG GAT ACA CAT TTT TGT ACG GAT 1586
lle Alá Lys Asn Thr Lys Gly Gly Val Asp Thr His Phe Cys Thr Asp
510 515 520
AAA CTA AGG TCA TCA TAT GAT TAT GAT GGT GAG AAG GTG GTG TAT GGC 1634
Lys Leu Arg Ser Ser Tyr Asp Tyr Asp Gly Glu Lys Val Val Tyr Gly
525 530 535
AGC ACC GTC CCA GTG CTC GAC GGC GAA GAA TTC ACA ATG AGG ATA TTG 1682
Ser Thr Val Pro Val Leu Asp Gly Glu Glu Phe Thr Met Arg He Leu
540 545 550
HU 226 813 Β1
GTG GAT Val Asp 555 CAT His TCG Ser GTG GTG GAG Glu GGG Gly TTT Phe GCA CAA GGG GGA AGG ACA Thr GTA Val 570 1730
Val Val 560 Alá Gin 565 Gly Gly Arg
ATA ACG TCA AGA GTG TAT CCC ACG AAA GCA ATA TAC GAA GCA GCC AAG 1778
Ile Thr Ser Arg Val Tyr Pro Thr Lys Alá Ile Tyr Glu Alá Alá Lys
575 580 585
CTT TTC GTC TTC AAC AAT GCC ACT ACG ACC AGT GTG AAG GCG ACT CTC 1826
Leu Phe Val Phe Asn Asn Alá Thr Thr Thr Ser Val Lys Alá Thr Leu
590 595 600
AAG GTC TGG CAA ATG TCT CAA GCC TTT GTC AAG GCT TAT CCG TTT T 1872
Lys Val Trp Gin Met Ser Gin Alá Phe Val Lys Alá Tyr Pro Phe
605 610 615
AGTTTTTTAT
GTTATGTTAA
AACTATTTTT
AAAAAAAAAA
GCATCTTTTT
GACACGCAGC
TAATATGCAA
AAAAAAAAAA
AAGACATTGT
TTAAAATAGC
CTTCAGTAAT
A
TGTTTCATAT
CACATGTGAG
GCTATTTACA
GATTCAAGTT
ATCATTTGCG
GTATGTTTTA
TTATCTGTGT
TATGGCCGTC
AGGAAAAAAA
1932
1992
2052
2073 (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO: 2:
(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 617 amino acids (Β) ΤΥΡΕ: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE ΤΥΡΕ: protein (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 2:
Met 1 Arg Thr Thr Glu 5 Pro Gin Thr Asp Leu 10 Glu His Alá Pro Asn 15 His
Thr Pro Leu Leu Asp His Pro Glu Pro Pro Pro Alá Alá Val Arg Asn
20 25 30
Arg Leu Leu Lle Arg Val Ser Ser Ser Ile Thr Leu Val Ser Leu Phe
35 40 45
Phe Val Ser Alá Phe Leu Leu Ile Leu Leu Tyr Gin His Asp Ser Thr
50 55 60
Tyr Thr Asp Asp Asn Ser Alá Pro Ser Glu Ser Ser Ser Gin Gin Pro
65 70 75 80
Ser Alá Alá Asp Arg Leu Arg Trp Glu Arg Thr Alá Phe His Phe Gin
85 90 95
Pro Alá Lys Asn Phe Lle Tyr Asp Pro Asn Gly Pro Leu Phe His Met
100 105 110
Gly Trp Tyr His Leu Phe Tyr Gin Tyr Asn Pro Tyr Alá Pro Phe Trp
115 120 125
Gly Asn Met Thr Trp Gly His Alá Val Ser Lys Asp Met Ile Asn Trp
130 135 140
HU 226 813 Β1
Phe Glu Leu Pro Ile Alá Leu Alá Pro Thr Glu Trp Tyr Asp Ile Glu
145 150 155 160
Gly Val Leu Ser Gly Ser Thr Thr Ile Leu Pro Asp Gly Arg Ile Phe
165 170 175
Alá Leu Tyr Thr Gly Asn Thr Asn Asp Leu Glu Gin Leu Gin Cys Lys 180 185 190
Alá Val Pro Val Asn Alá Ser Asp Pro Leu Leu Val Glu Trp Val Arg 195 200 205
Tyr Asp Alá Asn Pro Ile Leu Tyr Alá Pro Ser Gly Ile Gly Leu Thr 210 215 220
Asp Tyr Arg Asp Pro Ser Thr Val Trp Thr Gly Pro Asp Gly Lys His
225 230 235 240
Arg Met Ile Ile Gly Thr Lys Arg Asn Thr Thr Gly Leu Val Leu Val
245 250 255
Tyr His Thr Thr Asp Phe Thr Asn Tyr Val Met Leu Asp Glu Pro Leu 260 265 270
His Ser Val Pro Asn Thr Asp Met Trp Glu Cys Val Asp Leu Tyr Pro 275 280 285
Val Ser Thr Thr Asn Asp Ser Alá Leu Asp Val Alá Alá Tyr Gly Pro 290 295 300
Gly Ile Lys His Val Leu Lys Glu Ser Trp Glu Gly His Alá Met Asp
305 310 315 320
Phe Tyr Ser Ile Gly Thr Tyr Asp Alá Phe Asn Asp Lys Trp Thr Pro
325 330 335
Asp Asn Pro Glu Leu Asp Val Gly Ile Gly Leu Arg Cys Asp Tyr Gly 340 345 350
Arg Phe Phe Alá Ser Lys Ser Leu Tyr Asp Pro Leu Lys Lys Arg Arg 355 360 365
Val Thr Trp Gly Tyr Val Alá Glu Ser Asp Ser Tyr Asp Gin Asp Val 370 375 380
Ser Arg Gly Trp Alá Thr Ile Tyr Asn Val Alá Arg Thr Ile Val Leu
385 390 395 400
Asp Arg Lys Thr Gly Thr His Leu Leu Gin Trp Pro Val Glu Glu Ile
405 410 415
Glu Ser Leu Arg Ser Asn Gly His Glu Phe Lys Asn Ile Thr Leu Glu 420 425 430
Pro Gly Ser Ile Ile Pro Leu Asp Val Gly Ser Alá Thr Gin Leu Asp 435 440 445
Ile Val Alá Thr Phe Glu Val Asp Gin Glu Alá Leu Lys Alá Thr Ser 450 455 460
HU 226 813 Β1
Asp 465 Thr Asn Asp Glu Tyr Gly 470 Cys Thr Thr Ser 475 Ser Gly Alá Alá Lys 480
Gly Glu Val Leu Asp His Ser Gly Ile Alá Val Leu Alá His Gly Thr
485 490 495
Leu Ser Glu Leu Thr Pro Val Tyr Phe Tyr Ile Alá Lys Asn Thr Lys
500 505 510
Gly Gly Val Asp Thr His Phe Cys Thr Asp Lys Leu Arg Ser Ser Tyr
515 520 525
Asp Tyr Asp Gly Glu Lys Val Val Tyr Gly Ser Thr Val Pro Val Leu
530 535 540
Asp Gly Glu Glu Phe Thr Met Arg Ile Leu Val Asp His Ser Val Val
545 550 555 560
Glu Gly Phe Alá Gin Gly Gly Arg Thr Val Ile Thr Ser Arg Val Tyr
565 570 575
Pro Thr Lys Alá Ile Tyr Glu Alá Alá Lys Leu Phe Val Phe Asn Asn
580 585 590
Alá Thr Thr Thr Ser Val Lys Alá Thr Leu Lys Val Trp Gin Met Ser
595 600 605
Gin Alá Phe Val Lys Alá Tyr Pro Phe
610 615 (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO: 3:
(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 2073 base pairs (B) TYPE: nudeotide (C) STRANDEDNESS: single (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE TYPE: genomic DNA (iii) HYPOTHETICAL: YES (ix) FEATURE:
(A) NAME/KEY: CDS (B) POSITION: 21..1872 (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 3:
TTACCTCATT TCCATCAACC ATG AGA ACG ACT GAA CCC CAA ACT GAC CTT 50
Met Arg Thr Thr Glu Pro Gin Thr Asp Leu
620 625
GAG Glu CAT His GCA Alá 630 CCC Pro AAC Asn CAC His ACT Thr CCA Pro 635 CTA Leu CTG Leu GAC Asp CAC His CCC Pro 64 0 GAA Glu CCA Pro CCA Pro 98
CCG GCC GCC GTG AGA AAC CGG TTG TTG ATT AGG GTT TCG TCC AGT ATC 146
Pro Alá Alá Val Arg Asn Arg Leu Leu Ile Arg Val Ser Ser Ser Ile
645 650 655
HU 226 813 Β1
ACA TTG GTC TCT Ser CTG Leu TTT Phe 6 65 TTT Phe GTT Val TCA GCA Ser Alá TTC Phe 670 CTA Leu CTC Leu ATT Ile CTC Leu CTG Leu 675 194
Thr 660 Leu Val
TAC CAA CAC GAT TCC ACT TAC ACC GAT GAT AAT TCA GCA CCG TCG GAA 242
Tyr Gin His Asp Ser Thr Tyr Thr Asp Asp Asn Ser Alá Pro Ser Glu
680 685 690
AGT TCT TCC CAG CAG CCC TCC GCT GCC GAT CGC CTG AGA TGG GAG AGA 290
Ser Ser Ser Gin Gin Pro Ser Alá Alá Asp Arg Leu Arg Trp Glu Arg
695 700 705
ACA GCT TTT CAT TTC CAG CCC GCC AAA AAT TTC ATT TAT GAT CCC AAC 338
Thr Alá Phe His Phe Gin Pro Alá Lys Asn Phe Lle Tyr Asp Pro Asn
710 715 720
GGT CCA TTG TTC CAT ATG GGT TGG TAC CAT CTT TTC TAC CAA TAC AAC 386
Gly Pro Leu Phe His Met Gly Trp Tyr His Leu Phe Tyr Gin Tyr Asn
725 730 735
CCG TAC GCT CCC TTT TGG GGA AAC ATG ACT TGG GGA CAT GCC GTC AGT 434
Pro Tyr Alá Pro Phe Trp Gly Asn Met Thr Trp Gly His Alá Val Ser
740 745 750 755
AAG GAT ATG ATA AAT TGG TTT GAA TTA CCG ATA GCC TTA GCG CCA ACT 482
Lys Asp Met Ile Asn Trp Phe Glu Leu Pro Ile Alá Leu Alá Pro Thr
760 765 770
GAG TGG TAC GAC ATA GAA GGT GTT CTG AGT GGC AGT ACT ACC ATT TTA 530
Glu Trp Tyr Asp Ile Glu Gly Val Leu Ser Gly Ser Thr Thr Ile Leu
775 780 785
CCT GAC GGA AGA ATT TTC GCT CTC TAC ACC GGA AAT ACA AAC GAC CTC 578
Pro Asp Gly Arg Ile Phe Alá Leu Tyr Thr Gly Asn Thr Asn Asp Leu
790 795 800
GAG CAG CTC CAG TGT AAG GCC GTG CCA GTT AAT GCT AGT GAT CCA TTA 626
Glu Gin Leu Gin Cys Lys Alá Val Pro Val Asn Alá Ser Asp Pro Leu
805 810 815
TTG GTA GAA TGG GTT CGC TAC GAT GCC AAT CCG ATA TTA TAT GCC CCT 674
Leu Val Glu Trp Val Arg Tyr Asp Alá Asn Pro Ile Leu Tyr Alá Pro
820 825 830 835
AGT GGC ATC GGC CTC ACA GAT TAC AGA GAT CCT AGT ACT GTG TGG ACG 722
Ser Gly Ile Gly Leu Thr Asp Tyr Arg Asp Pro Ser Thr Val Trp Thr
840 845 850
GGC CCT GAC GGT AAA CAC CGT ATG ATA ATC GGG ACG AAG AGG AAT ACG 770
Gly Pro Asp Gly Lys His Arg Met Ile Ile Gly Thr Lys Arg Asn Thr
855 860 865
ACT GGA CTC GTC TTA GTA TAT CAC ACT ACC GAC TTT ACA AAT TAT GTA 818
Thr Gly Leu Val Leu Val Tyr His Thr Thr Asp Phe Thr Asn Tyr Val
870 875 880
ATG TTG GAC GAG CCG TTG CAC TCG GTC CCC AAC ACT GAT ATG TGG GAA 866
Met Leu Asp Glu Pro Leu His Ser Val Pro Asn Thr Asp Met Trp Glu
885 890 895
HU 226 813 Β1
TGT Cys 900 GTC Val GAC Asp CTT Leu TAC Tyr CCT Pro 905 GTG Val TCA Ser ACG Thr ACC Thr AAC Asn 910 GAT Asp AGT Ser GCA Alá CTT Leu GAT Asp 915 914
GTT GCG GCC TAT GGT CCG GGT ATC AAG CAT GTG CTT AAA GAA AGT TGG 962
Val Alá Alá Tyr Gly 920 Pro Gly Ile Lys His 925 Val Leu Lys Glu Ser 930 Trp
GAG GGA CAC GCG ATG GAC TTT TAC TCG ATC GGG ACA TAC GAT GCA TTT 1010
Glu Gly His Alá 935 Met Asp Phe Tyr Ser 940 Ile Gly Thr Tyr Asp 945 Alá Phe
AAC GAT AAG TGG ACA CCC GAT AAT CCC GAA CTA GAC GTC GGT ATC GGG 1058
Asn Asp Lys 950 Trp Thr Pro Asp Asn 955 Pro Glu Leu Asp Val 960 Gly Ile Gly
TTG CGG TGC GAT TAC GGA AGG TTC TTT GCG TCG AAG AGC CTC TAC GAC 1106
Leu Arg 965 Cys Asp Tyr Gly Arg 970 Phe Phe Alá Ser Lys 975 Ser Leu Tyr Asp
CCG TTG AAG AAA CGA AGA GTC ACT TGG GGT TAT GTT GCG GAA TCC GAC 1154
Pro 980 Leu Lys Lys Arg Arg 985 Val Thr Trp Gly Tyr 990 Val Alá Glu Ser Asp 995
AGT TAC GAC CAA GAC GTC TCT AGA GGA TGG GCT ACT ATT TAT AAT GTT 1202
Ser Tyr Asp Gin Asp Val 1000 Ser Arg Gly Trp Alá 1005 Thr Ile Tyr Asn 1010 Val l
GCA AGG ACC ATT GTA CTC GAT CGG AAG ACT GGA ACC CAT CTA CTT CAA 1250
Alá Arg Thr Ile Val 1015 Leu Asp Arg Lys Thr 1020 Gly Thr His Leu Leu 1025 Gin
TGG CCG GTG GAG GAA ATC GAG AGC TTG AGA TCC AAC GGT CAT GAA TTC 1298
Trp Pro Val 103C Glu 1 Glu Ile Glu Ser Leu 1035 Arg Ser Asn Gly 104 C His ) Glu Phe
AAA AAT ATA ACA CTT GAG CCG GGC TCG ATC ATT CCC CTC GAC GTA GGC 1346
Lys Asn Ile 1045 Thr Leu Glu Pro 105C Gly l Ser Ile Ile Pro Leu 1055 Asp Val Gly
TCA GCT ACG CAG TTG GAC ATC GTT GCA ACA TTT GAG GTG GAT CAA GAG 1394
Ser Alá 1060 Thr Gin Leu Asp Ile 1065 Val Alá Thr Phe Glu 1070 Val Asp Gin Glu 1075
GCG TTA AAA GCA ACA AGT GAC ACG AAC GAC GAA TAC GGT TGC ACC ACA 1442
Alá Leu Lys Alá Thr Ser 1080 Asp Thr Asn Asp Glu 1085 Tyr Gly Cys Thr 1090 Thr l
AGT TCG GGT GCA GCC AAA GGG GAA GTT TTG GAC CAT TCG GGG ATT GCA 1490
Ser Ser Gly Alá Alá 1095 Lys Gly Glu Val Leu 1100 Asp His Ser Gly Ile 1105 Alá
GTT CTT GCC CAC GGA ACC CTT TCG GAG TTA ACT CCG GTG TAT TTC TAC 1538
Val Leu Alá 111 c His 1 Gly Thr Leu Ser Glu 1115 Leu Thr Pro Val 1120 Tyr ) Phe Tyr
ATT GCT AAA AAC ACC AAG GGA GGT GTG GAT ACA CAT TTT TGT ACG GAT 1586
Ile Alá Lys 1125 Asn Thr Lys Gly 113C Gly 1 Val Asp Thr His Phe 1135 Cys Thr Asp
HU 226 813 Β1
AAA CTA AGG Lys Leu Arg 1140 TCA TCA TAT GAT Tyr Asp 1145 TAT Tyr GAT Asp GGT Gly GAG AAG Glu Lys 1150 GTG GTG TAT GGC Gly 1155 1634
Ser Ser Val Val Tyr
AGC ACC GTC CCA GTG CTC GAC GGC GAA GAA TTC ACA ATG AGG ATA TTG 1682
Ser Thr Val Pro Val Leu Asp Gly Glu Glu Phe Thr Met Arg lle Leu
1160 1165 1170
GTG GAT CAT TCG GTG GTG GAG GGG TTT GCA CAA GGG GGA AGG ACA GTA 1730
Val Asp His Ser Val Val Glu Gly Phe Alá Gin Gly Gly Arg Thr Val
1175 1180 1185
ATA ACG TCA AGA GTG TAT CCC ACG AAA GCA ATA TAC GAA GCA GCC AAG 1778
lle Thr Ser Arg Val Tyr Pro Thr Lys Alá lle Tyr Glu Alá Alá Lys
1190 1195 1200
CTT TTC GTC TTC AAC AAT GCC ACT ACG ACC AGT GTG AAG GCG ACT CTC 1826
Leu Phe Val Phe Asn Asn Alá Thr Thr Thr Ser Val Lys Alá Thr Leu
1205 1210 1215
AAG GTC TGG CAA ATG TCT CAA GCC TTT GTC AAG GCT TAT CCG TTT T 1872
Lys Val Trp Gin Met Ser Gin Alá Phe Val Lys Alá Tyr Pro Phe
1220 1225 1230
AGTTTTTTAT GCATCTTTTT AAGACATTGT TGTTTCATAT GATTCAAGTT ' TTATCTGTGT 1932
GTTATGTTAA GACACGCAGC TTAAAATAGC CACATGTGAG ATCATTTGCG ' TATGGCCGTC 1992
AACTATTTTT TAATATGCAA CTTCAGTAAT GCTATTTACA GTATGTTTTA AGGAAAAAAA 2052
AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA A 2073 (2) INFORMATION FÓR SEQ ID NO: 4:
(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
(A) LENGTH: 617 amino acids (Β) ΤΥΡΕ: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE ΤΥΡΕ: protein (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 4:
Met 1 Arg Thr Thr Glu 5 Pro Gin Thr Asp Leu 10 Glu His Alá Pro Asn 15 His
Thr Pro Leu Leu Asp His Pro Glu Pro Pro Pro Alá Alá Val Arg Asn
20 25 30
Arg Leu Leu lle Arg Val Ser Ser Ser lle Thr Leu Val Ser Leu Phe
35 40 45
Phe Val Ser Alá Phe Leu Leu lle Leu Leu Tyr Gin His Asp Ser Thr
50 55 60
Tyr Thr Asp Asp Asn Ser Alá Pro Ser Glu Ser Ser Ser Gin Gin Pro
65 70 75 80
Ser Alá Alá Asp Arg Leu Arg Trp Glu Arg Thr Alá Phe His Phe Gin
85 90 95
Pro Alá Lys Asn Phe lle Tyr Asp Pro Asn Gly Pro Leu Phe His Met
100 105 110
HU 226 813 Β1
Gly Trp Tyr His Leu Phe Tyr Gin Tyr Asn Pro Tyr Alá Pro Phe Trp 115 120 125
Gly Asn Met Thr Trp Gly His Alá Val Ser Lys Asp Met Ile Asn Trp 130 135 140
Phe Glu Leu Pro Ile Alá Leu Alá Pro Thr Glu Trp Tyr Asp Ile Glu
145 150 155 160
Gly Val Leu Ser Gly Ser Thr Thr Ile Leu Pro Asp Gly Arg Ile Phe
165 170 175
Alá Leu Tyr Thr Gly Asn Thr Asn Asp Leu Glu Gin Leu Gin Cys Lys 180 185 190
Alá Val Pro Val Asn Alá Ser Asp Pro Leu Leu Val Glu Trp Val Arg 195 200 205
Tyr Asp Alá Asn Pro Ile Leu Tyr Alá Pro Ser Gly Ile Gly Leu Thr 210 215 220
Asp Tyr Arg Asp Pro Ser Thr Val Trp Thr Gly Pro Asp Gly Lys His
225 230 235 240
Arg Met Ile Ile Gly Thr Lys Arg Asn Thr Thr Gly Leu Val Leu Val
245 250 255
Tyr His Thr Thr Asp Phe Thr Asn Tyr Val Met Leu Asp Glu Pro Leu 260 265 270
His Ser Val Pro Asn Thr Asp Met Trp Glu Cys Val Asp Leu Tyr Pro 275 280 285
Val Ser Thr Thr Asn Asp Ser Alá Leu Asp Val Alá Alá Tyr Gly Pro 290 295 300
Gly Ile Lys His Val Leu Lys Glu Ser Trp Glu Gly His Alá Met Asp
305 310 315 320
Phe Tyr Ser Ile Gly Thr Tyr Asp Alá Phe Asn Asp Lys Trp Thr Pro
325 330 335
Asp Asn Pro Glu Leu Asp Val Gly Ile Gly Leu Arg Cys Asp Tyr Gly 340 345 350
Arg Phe Phe Alá Ser Lys Ser Leu Tyr Asp Pro Leu Lys Lys Arg Arg 355 360 365
Val Thr Trp Gly Tyr Val Alá Glu Ser Asp Ser Tyr Asp Gin Asp Val 370 375 380
Ser Arg Gly Trp Alá Thr Ile Tyr Asn Val Alá Arg Thr Ile Val Leu
385 390 395 400
Asp Arg Lys Thr Gly Thr His Leu Leu Gin Trp Pro Val Glu Glu Ile
405 410 415
Glu Ser Leu Arg Ser Asn Gly His Glu Phe Lys Asn Ile Thr Leu Glu 420 425 430
HU 226 813 Β1
Pro Gly Ser 435 Ile Ile Pro Leu Asp Val 440 Gly Ser Alá Thr Gin Leu Asp 445
Ile Val Alá Thr Phe Glu Val Asp Gin Glu Alá Leu Lys Alá Thr Ser
450 455 4 60
Asp Thr Asn Asp Glu Tyr Gly Cys Thr Thr Ser Ser Gly Alá Alá Lys
465 470 475 480
Gly Glu Val Leu Asp His Ser Gly Ile Alá Val Leu Alá His Gly Thr
485 490 495
Leu Ser Glu Leu Thr Pro Val Tyr Phe Tyr Ile Alá Lys Asn Thr Lys
500 505 510
Gly Gly Val Asp Thr His Phe Cys Thr Asp Lys Leu Arg Ser Ser Tyr
515 520 525
Asp Tyr Asp Gly Glu Lys Val Val Tyr Gly Ser Thr Val Pro Val Leu
530 535 540
Asp Gly Glu Glu Phe Thr Met Arg Ile Leu Val Asp His Ser Val Val
545 550 555 560
Glu Gly Phe Alá Gin Gly Gly Arg Thr Val Ile Thr Ser Arg Val Tyr
565 570 575
Pro Thr Lys Alá Ile Tyr Glu Alá Alá Lys Leu Phe Val Phe Asn Asn
580 585 590
Alá Thr Thr Thr Ser Val Lys Alá Thr Leu Lys Val Trp Gin Met Ser
595 600 605
Gin Alá Phe Val Lys Alá Tyr Pro Phe
610 615

Claims (29)

1. Nukleinsavmolekulák, amelyek nagy molekulájú
- átlagosan több mint 20 fruktozilmaradékot tartalmazó
- fruktán polimerek szintéziséhez vezető, fruktoziltranszferáz (FFT) enzimaktivitással rendelkező fehérjét kódolnak, és az alábbi csoportokból kerülnek kiválasztásra:
(a) nukleinsavmolekulák, melyek egy, a 2. és 4. számú szekvenciában bemutatott aminosavszekvenciát tartalmazó fehérjét kódolnak;
(b) nukleinsavmolekulák, melyek az 1. vagy 3. számú szekvenciában bemutatott kódoló nukleotidszekvenciát vagy egy megfelelő ribonukleotidszekvenciát tartalmaznak;
(c) nukleinsavmolekulák, melyek tartalmaznak egy, az 1. számú szekvenciában bemutatott kódolószekvenciával legalább 80%-ban azonos nukleotidszekvenciát;
(d) nukleinsavmolekulák, melyek egy, a 2. számú szekvenciában bemutatott aminosavszekvenciával leg60 alább 85%-ban azonos aminosavszekvenciát tartalmazó fehérjét kódolnak;
(e) nukleinsavmolekulák, melyek az (a), (b), (c) vagy (d) nukleotidszekvenciájának fragmentumát tartalmazzák.
2. Az 1. igénypont szerinti nukleinsavmolekula, amely az 1. számú szekvenciában bemutatott kódolószekvenciával több mint 90%-ban azonos nukleotidszekvenciát tartalmaz.
3. Az 1. igénypont szerinti nukleinsavmolekula, ahol a kódolt fehérje aminosavszekvenciája több mint 90%ban azonos a 2. számú szekvencia aminosavszekvenciájával.
4. Az 1. igénypont szerint nukleinsavmolekula, ahol a kódolt fehérje aminosavszekvenciája több mint 95%ban azonos a 2. számú szekvencia aminosavszekvenciájával.
5. Az 1. igénypont szerint nukleinsavmolekula, ahol a kódolt fehérje aminosavszekvenciája több mint 97%ban azonos a 2. számú szekvencia aminosavszekvenciájával.
HU 226 813 Β1
6. Az 1. igénypont szerint nukleinsavmolekula, ahol a kódolt fehérje aminosavszekvenciája több mint 99%ban azonos a 2. számú szekvencia aminosavszekvenciájával.
7. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti nukleinsavmolekula, amely DNS-molekula.
8. A 7. igénypont szerinti nukleinsavmolekula, amely cDNS-molekula.
9. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti nukleinsavmolekula, amely RNS-molekula.
10. Az 1-9. igénypontok bármelyike szerinti nukleinsavmolekula, amely articsókából (Cynara scolymus) származik.
11. Vektor, amely egy 1-10. igénypontok bármelyike szerinti nukleinsavmolekulát tartalmaz.
12. A 11. igénypont szerinti vektor, amelyben a nukleinsavmolekula működőképesen kapcsolódik egy transzlálható RNS transzkripcióját és szintézisét prokarióta és/vagy eukarióta sejtekben biztosító szabályozóelemekhez.
13. A12. igénypont szerinti vektor, amelyben a szabályozóelemek a patatin B33 promoterből vagy a CaMV 35S promoterből származnak.
14. Gazdasejt, amely az 1-10. igénypontok bármelyike szerinti nukleinsavmolekulával vagy a 11-13. igénypontok bármelyike szerinti vektorral transzformált, vagy amely egy ilyen gazdasejtből származó sejt, amely az említett nukleinsavmolekulát vagy vektort tartalmazza.
15. A 14. igénypont szerinti gazdasejt, amely még egy szacharózfüggő szacharóz-fruktozil-transzferázt (SST) kódoló gént is tartalmaz.
16. Eljárás FFT előállítására, azzal jellemezve, hogy egy 14. igénypont szerinti gazdasejtet az FFT szintézisét lehetővé tevő körülmények között tenyésztünk, és az FFT-t a tenyésztett sejtekből és/vagy tápközegből izoláljuk.
17. FFT, amely az 1-10. igénypontok bármelyike szerinti nukleinsavmolekula által kódolt, vagy a 16. igénypont szerinti eljárással előállított.
18. Eljárás a 14. vagy 15. igénypont szerinti transzformáit gazdasejt - különösen transzgén növényi sejt, transzgén növényi szövet vagy transzgén növény előállítására, azzal jellemezve, hogy bevezetünk egy 1-10. igénypontok bármelyike szerinti nukleinsavmolekulát vagy egy 11-13. igénypontok bármelyike szerinti vektort egy gazdasejtbe, növényi sejtbe, növényi szövetbe vagy növénybe.
19. Transzformált gazdasejt, transzgén növényi sejt, növényi szövet vagy növény, amely az 1-10. igénypontok bármelyike szerinti nukleinsavmolekulát vagy a 11-13. igénypontok bármelyike szerinti vektort tartalmazza, vagy a 18. igénypont szerinti eljárással előállítható, vagy egy ilyen sejtből, szövetből vagy növényből származik, ahol a származott sejt, szövet vagy növény tartalmazza az említett nukleinsavmolekulát vagy vektort.
20. A 19. igénypont szerinti transzformált gazdasejt, transzgén növényi sejt, növényi szövet vagy növény, amely még egy szacharózfüggő szacharóz-fruktozil-transzferázt kódoló gént is tartalmaz.
21. Növény, amely 19. vagy 20. igénypont szerinti növényi sejteket vagy növényi szöveteket tartalmaz.
22. A 19-21. igénypontok bármelyike szerinti növény, amely egy haszonnövény.
23. A 22. igénypont szerinti növény, ahol a haszonnövény szacharózt tartalmazó növény.
24. A 19-23. igénypontok bármelyike szerinti növény szaporítóanyaga, amely 19. vagy 20. igénypont szerinti növényi sejteket tartalmaz.
25. A 19-23. igénypontok bármelyike szerinti növény termése, amely 19. vagy 20. igénypont szerinti növényi sejtet tartalmaz.
26. Eljárás nagy molekulájú, átlagosan több mint 20 fruktozilmaradékot tartalmazó inulin előállítására, azzal jellemezve, hogy
a) egy 19. vagy 20. igénypont szerinti transzformált sejtet, transzgén növényi sejtet vagy növényi szövetet, vagy egy 19-23. igénypontok bármelyike szerinti növényt tenyésztünk FFT termelését és 1-kesztóz vagy ezzel ekvivalens szubsztrát - adott esetben külső rátáplálással történő - nagy molekulájú inulinná való átalakulását biztosító körülmények között; és
b) az így kapott inulint a tenyésztett sejtekből, szövetből vagy növényekből, vagy a tápközegből kinyerjük.
27. Eljárás nagy molekulájú, átlagosan több mint 20 fruktozilmaradékot tartalmazó inulin előállítására, azzal jellemezve, hogy
a) 1-kesztózt vagy ezzel ekvivalens szubsztrátot érintkeztetünk egy 17. igénypont szerinti FFT-vel nagy molekulájú inulinná való átalakulását biztosító körülmények között; és
b) az így előállított inulint kinyerjük.
28. Eljárás nagy molekulájú, átlagosan több mint 20 fruktozilmaradékot tartalmazó inulin in vitro előállítására, azzal jellemezve, hogy szacharózszubsztrátot nagy molekulájú inulinná alakítunk át SST-ből és egy 17. igénypont szerinti FFT-ből álló enzim kombinációjával.
29. Nagy molekulájú, átlagosan több mint 20 fruktozilmaradékot tartalmazó inulin alkalmazása, amely a 19. vagy 20. igénypont szerinti gazdasejtből, növényi sejtből, a 19-23. igénypontok bármelyike szerinti növényből, a 24. igénypont szerinti szaporítóanyagból vagy a 25. igénypont szerinti termésből nyerhető, vagy a 26-28. igénypontok bármelyike szerinti eljárással állítható elő, vizes oldatokban a viszkozitás növelésére szolgáló felületaktív anyagok előállítására, detergensként, szuszpendálószerként, ülepedés gyorsítására és víz komplexálására vagy megkötésére.
HU0100111A 1997-11-06 1998-11-06 Nucleic acid molecules which encode proteins having fructosyl transferase activity and methods for producing long-chain inulin HU226813B1 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19749122A DE19749122A1 (de) 1997-11-06 1997-11-06 Nucleinsäuremoleküle codierend Enzyme, die Fructosyltransferaseaktivität besitzen
PCT/EP1998/007115 WO1999024593A1 (en) 1997-11-06 1998-11-06 Nucleic acid molecules which encode proteins having fructosyl transferase activity and methods for producing long-chain inulin

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HUP0100111A2 HUP0100111A2 (hu) 2001-05-28
HUP0100111A3 HUP0100111A3 (en) 2003-04-28
HU226813B1 true HU226813B1 (en) 2009-11-30

Family

ID=7847857

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU0100111A HU226813B1 (en) 1997-11-06 1998-11-06 Nucleic acid molecules which encode proteins having fructosyl transferase activity and methods for producing long-chain inulin

Country Status (17)

Country Link
US (2) US6559356B1 (hu)
EP (1) EP1029067B1 (hu)
JP (1) JP4287046B2 (hu)
CN (1) CN1202255C (hu)
AR (1) AR017767A1 (hu)
AT (1) ATE427357T1 (hu)
AU (1) AU753390B2 (hu)
BR (2) BR9813968B1 (hu)
CA (1) CA2309133C (hu)
CZ (1) CZ299825B6 (hu)
DE (2) DE19749122A1 (hu)
DK (1) DK1029067T3 (hu)
ES (1) ES2324188T3 (hu)
HU (1) HU226813B1 (hu)
PL (1) PL194854B1 (hu)
WO (1) WO1999024593A1 (hu)
ZA (1) ZA9810110B (hu)

Families Citing this family (190)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0952222A1 (en) 1998-04-17 1999-10-27 Centrum Voor Plantenveredelings- En Reproduktieonderzoek (Cpro-Dlo) Transgenic plants presenting a modified inulin producing profile
DE19840028A1 (de) * 1998-09-02 2000-03-09 Max Planck Gesellschaft Nucleinsäuremoleküle codierend Enzyme, die Fructosyltransferaseaktivität besitzen, und deren Verwendung
DE19857654A1 (de) 1998-12-14 2000-06-15 Max Planck Gesellschaft Beeinflussung des Blühverhaltens von Pflanzen durch Expression Saccharose-spaltender Proteine
US6791015B2 (en) 2000-10-30 2004-09-14 E. I. Du Pont De Nemours And Company Fructan biosynthetic enzymes
MXPA03005645A (es) * 2000-12-21 2004-04-21 Suedzucker Ag Procedimiento para la preparacion de carbohidratos.
EP1597978A1 (en) 2004-05-17 2005-11-23 Nutricia N.V. Synergism of GOS and polyfructose
AR052059A1 (es) 2004-12-21 2007-02-28 Bayer Cropscience Gmbh Plantas de cana azucarera con contenido incrementado de carbohidratos de almacenamiento
FR2888971B1 (fr) * 2005-07-20 2007-11-02 Nicolas Bara Procede d'identification sequentielle d'echantillons
DE602007014037D1 (de) * 2006-04-28 2011-06-01 Bayer Corpscience Ag Inulin mit sehr grosser kettenlänge
AU2007247377B2 (en) * 2006-04-28 2013-05-02 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Inulin of very high chain length
ES2363380T3 (es) * 2006-04-28 2011-08-02 Bayer Cropscience Ag Inulina de longitud de cadena muy elevada.
ES2356690T3 (es) * 2006-04-28 2011-04-12 Bayer Cropscience Ag Inulina de longitud de cadena muy larga.
CL2007003743A1 (es) * 2006-12-22 2008-07-11 Bayer Cropscience Ag Composicion que comprende fenamidona y un compuesto insecticida; y metodo para controlar de forma curativa o preventiva hongos fitopatogenos de cultivos e insectos.
CL2007003744A1 (es) 2006-12-22 2008-07-11 Bayer Cropscience Ag Composicion que comprende un derivado 2-piridilmetilbenzamida y un compuesto insecticida; y metodo para controlar de forma curativa o preventiva hongos fitopatogenos de cultivos e insectos.
WO2008110280A2 (de) 2007-03-12 2008-09-18 Bayer Cropscience Ag Phenoxy-substitutierte phenylamidin-derivativen und deren verwendung als fungiziden
WO2008110279A1 (de) 2007-03-12 2008-09-18 Bayer Cropscience Ag Dihalogenphenoxyphenylamidine und deren verwendung als fungizide
WO2008110281A2 (de) * 2007-03-12 2008-09-18 Bayer Cropscience Ag 3,4-disubstituierte phenoxyphenylamidine und deren verwendung als fungizide
EP1969931A1 (de) * 2007-03-12 2008-09-17 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Fluoalkylphenylamidine und deren Verwendung als Fungizide
EP1969934A1 (de) 2007-03-12 2008-09-17 Bayer CropScience AG 4-Cycloalkyl-oder 4-arylsubstituierte Phenoxyphenylamidine und deren Verwendung als Fungizide
EP1969929A1 (de) 2007-03-12 2008-09-17 Bayer CropScience AG Substituierte Phenylamidine und deren Verwendung als Fungizide
JP2010524869A (ja) * 2007-04-19 2010-07-22 バイエル・クロツプサイエンス・アクチエンゲゼルシヤフト チアジアゾリルオキシフェニルアミジンおよび殺菌剤としてのこれらの使用
DE102007045919B4 (de) 2007-09-26 2018-07-05 Bayer Intellectual Property Gmbh Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften
DE102007045956A1 (de) 2007-09-26 2009-04-09 Bayer Cropscience Ag Wirkstoffkombination mit insektiziden und akariziden Eigenschaften
DE102007045920B4 (de) 2007-09-26 2018-07-05 Bayer Intellectual Property Gmbh Synergistische Wirkstoffkombinationen
DE102007045953B4 (de) 2007-09-26 2018-07-05 Bayer Intellectual Property Gmbh Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften
DE102007045922A1 (de) 2007-09-26 2009-04-02 Bayer Cropscience Ag Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften
EP2090168A1 (de) 2008-02-12 2009-08-19 Bayer CropScience AG Methode zur Verbesserung des Pflanzenwachstums
EP2072506A1 (de) 2007-12-21 2009-06-24 Bayer CropScience AG Thiazolyloxyphenylamidine oder Thiadiazolyloxyphenylamidine und deren Verwendung als Fungizide
EP2168434A1 (de) 2008-08-02 2010-03-31 Bayer CropScience AG Verwendung von Azolen zur Steigerung der Resistenz von Pflanzen oder Pflanzenteilen gegenüber abiotischem Stress
JP2011530548A (ja) 2008-08-14 2011-12-22 バイエル・クロップサイエンス・アーゲー 殺虫性４−フェニル−１ｈ−ピラゾール類
DE102008041695A1 (de) 2008-08-29 2010-03-04 Bayer Cropscience Ag Methoden zur Verbesserung des Pflanzenwachstums
EP2201838A1 (de) 2008-12-05 2010-06-30 Bayer CropScience AG Wirkstoff-Nützlings-Kombinationen mit insektiziden und akariziden Eigenschaften
EP2198709A1 (de) 2008-12-19 2010-06-23 Bayer CropScience AG Verfahren zur Bekämpfung resistenter tierischer Schädlinge
EP2223602A1 (de) 2009-02-23 2010-09-01 Bayer CropScience AG Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials genetisch modifizierter Pflanzen
AU2009335333B2 (en) 2008-12-29 2015-04-09 Bayer Intellectual Property Gmbh Method for improved use of the production potential of genetically modified plants
EP2204094A1 (en) 2008-12-29 2010-07-07 Bayer CropScience AG Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants Introduction
EP2039772A2 (en) 2009-01-06 2009-03-25 Bayer CropScience AG Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants introduction
EP2039771A2 (en) 2009-01-06 2009-03-25 Bayer CropScience AG Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants
EP2039770A2 (en) 2009-01-06 2009-03-25 Bayer CropScience AG Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants
EP2227951A1 (de) 2009-01-23 2010-09-15 Bayer CropScience AG Verwendung von Enaminocarbonylverbindungen zur Bekämpfung von durch Insekten übertragenen Viren
JP5592398B2 (ja) 2009-01-28 2014-09-17 バイエル・クロップサイエンス・アーゲー 殺菌剤ｎ−シクロアルキル−ｎ−二環式メチレン−カルボキサミド誘導体
AR075126A1 (es) 2009-01-29 2011-03-09 Bayer Cropscience Ag Metodo para el mejor uso del potencial de produccion de plantas transgenicas
BRPI1006006B1 (pt) 2009-02-17 2018-05-22 Bayer Intellectual Property Gmbh Compostos, composição fungicida e método para o controle de fungos fitopatogênicos de culturas
EP2218717A1 (en) 2009-02-17 2010-08-18 Bayer CropScience AG Fungicidal N-((HET)Arylethyl)thiocarboxamide derivatives
TW201031331A (en) 2009-02-19 2010-09-01 Bayer Cropscience Ag Pesticide composition comprising a tetrazolyloxime derivative and a fungicide or an insecticide active substance
WO2010108505A1 (de) 2009-03-25 2010-09-30 Bayer Cropscience Ag Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden eigenschaften
CN102448305B (zh) 2009-03-25 2015-04-01 拜尔农作物科学股份公司 具有杀昆虫和杀螨虫特性的活性成分结合物
EP2410847A1 (de) 2009-03-25 2012-02-01 Bayer CropScience AG Wirkstoffkombinationen mit insektiziden und akariziden eigenschaften
US9012360B2 (en) 2009-03-25 2015-04-21 Bayer Intellectual Property Gmbh Synergistic combinations of active ingredients
MX2011009830A (es) 2009-03-25 2011-10-06 Bayer Cropscience Ag Combinaciones de principios activos con propiedades insecticidas y acaricidas.
EP2232995A1 (de) 2009-03-25 2010-09-29 Bayer CropScience AG Verfahren zur verbesserten Nutzung des Produktionspotentials transgener Pflanzen
EP2239331A1 (en) 2009-04-07 2010-10-13 Bayer CropScience AG Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants
BRPI1015543A8 (pt) 2009-05-06 2016-05-24 Bayer Cropscience Ag Compostos de ciclopentanodiona e seu uso como inseticidas, acaricidas e/ou fungicidas.
AR076839A1 (es) 2009-05-15 2011-07-13 Bayer Cropscience Ag Derivados fungicidas de pirazol carboxamidas
EP2251331A1 (en) 2009-05-15 2010-11-17 Bayer CropScience AG Fungicide pyrazole carboxamides derivatives
EP2255626A1 (de) 2009-05-27 2010-12-01 Bayer CropScience AG Verwendung von Succinat Dehydrogenase Inhibitoren zur Steigerung der Resistenz von Pflanzen oder Pflanzenteilen gegenüber abiotischem Stress
BRPI1011983A2 (pt) 2009-06-02 2015-09-22 Bayer Cropscience Ag utilização de inibidores de succinato desidrogenase para o controle sclerotinia ssp.
AU2010272872B2 (en) 2009-07-16 2014-08-28 Bayer Intellectual Property Gmbh Synergistic active substance combinations containing phenyl triazoles
WO2011015524A2 (en) 2009-08-03 2011-02-10 Bayer Cropscience Ag Fungicide heterocycles derivatives
EP2292094A1 (en) 2009-09-02 2011-03-09 Bayer CropScience AG Active compound combinations
EP2343280A1 (en) 2009-12-10 2011-07-13 Bayer CropScience AG Fungicide quinoline derivatives
TW201141381A (en) 2009-12-28 2011-12-01 Bayer Cropscience Ag Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives
CN105399666A (zh) 2009-12-28 2016-03-16 拜尔农科股份公司 杀真菌剂肟基-杂环衍生物
BR112012012107B1 (pt) 2009-12-28 2019-08-20 Bayer Cropscience Ag Composto, composição fungicida e método para controlar fungos fitopatogênico de culturas
RS55986B1 (sr) 2010-01-22 2017-09-29 Bayer Ip Gmbh Akaricidne i/ili insekticidne kombinacije aktivnih supstanci
WO2011107504A1 (de) 2010-03-04 2011-09-09 Bayer Cropscience Ag Fluoralkyl- substituierte 2 -amidobenzimidazole und deren verwendung zur steigerung der stresstoleranz in pflanzen
WO2011124554A2 (de) 2010-04-06 2011-10-13 Bayer Cropscience Ag Verwendung der 4-phenylbuttersäure und/oder ihrer salze zur steigerung der stresstoleranz in pflanzen
CN102933083B (zh) 2010-04-09 2015-08-12 拜耳知识产权有限责任公司 (1-氰基环丙基)苯基次膦酸或其酯的衍生物和/或其盐提高植物对非生物胁迫耐受性的用途
JP2013525400A (ja) 2010-04-28 2013-06-20 バイエル・クロップサイエンス・アーゲー 殺菌剤ヒドロキシモイル−複素環誘導体
WO2011134911A2 (en) 2010-04-28 2011-11-03 Bayer Cropscience Ag Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives
US20130116287A1 (en) 2010-04-28 2013-05-09 Christian Beier Fungicide hydroximoyl-heterocycles derivatives
CA2796191A1 (en) 2010-06-03 2011-12-08 Bayer Cropscience Ag N-[(het)arylethyl)] pyrazole(thio)carboxamides and their heterosubstituted analogues
US8999956B2 (en) 2010-06-03 2015-04-07 Bayer Intellectual Property Gmbh N-[(het)arylalkyl)] pyrazole(thio)carboxamides and their heterosubstituted analogues
UA110703C2 (uk) 2010-06-03 2016-02-10 Байєр Кропсайнс Аг Фунгіцидні похідні n-[(тризаміщений силіл)метил]-карбоксаміду
AU2011264074B2 (en) 2010-06-09 2015-01-22 Bayer Cropscience Nv Methods and means to modify a plant genome at a nucleotide sequence commonly used in plant genome engineering
US9574201B2 (en) 2010-06-09 2017-02-21 Bayer Cropscience Nv Methods and means to modify a plant genome at a nucleotide sequence commonly used in plant genome engineering
CA2803083A1 (en) 2010-07-20 2012-01-26 Bayer Cropscience Ag Benzocycloalkenes as antifungal agents
RU2013114710A (ru) 2010-09-03 2014-10-10 Байер Интеллектуэль Проперти Гмбх Замещенные конденсированные пиримидиноны и дигидропиримидиноны
WO2012038480A2 (en) 2010-09-22 2012-03-29 Bayer Cropscience Ag Use of biological or chemical control agents for controlling insects and nematodes in resistant crops
EP2460406A1 (en) 2010-12-01 2012-06-06 Bayer CropScience AG Use of fluopyram for controlling nematodes in nematode resistant crops
WO2012045798A1 (en) 2010-10-07 2012-04-12 Bayer Cropscience Ag Fungicide composition comprising a tetrazolyloxime derivative and a thiazolylpiperidine derivative
CA2815114A1 (en) 2010-10-21 2012-04-26 Juergen Benting 1-(heterocyclic carbonyl) piperidines
UA107865C2 (ru) 2010-10-21 2015-02-25 Байєр Інтелекчуал Проперті Гмбх Гетероциклические карбоксамиды
WO2012059497A1 (en) 2010-11-02 2012-05-10 Bayer Cropscience Ag N-hetarylmethyl pyrazolylcarboxamides
BR112013012080A2 (pt) 2010-11-15 2016-07-19 Bayer Ip Gmbh n-aril pirazol (tio) carboxamidas
AR083874A1 (es) 2010-11-15 2013-03-27 Bayer Cropscience Ag 5-halogenopirazol(tio)carboxamidas
WO2012065947A1 (en) 2010-11-15 2012-05-24 Bayer Cropscience Ag 5-halogenopyrazolecarboxamides
EP2460407A1 (de) 2010-12-01 2012-06-06 Bayer CropScience AG Wirkstoffkombinationen umfassend Pyridylethylbenzamide und weitere Wirkstoffe
EP3372081A3 (en) 2010-12-01 2018-10-24 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Use of fluopyram for controlling nematodes in crops
EP2474542A1 (en) 2010-12-29 2012-07-11 Bayer CropScience AG Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives
US20130289077A1 (en) 2010-12-29 2013-10-31 Juergen Benting Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives
EP2471363A1 (de) 2010-12-30 2012-07-04 Bayer CropScience AG Verwendung von Aryl-, Heteroaryl- und Benzylsulfonamidocarbonsäuren, -carbonsäureestern, -carbonsäureamiden und -carbonitrilen oder deren Salze zur Steigerung der Stresstoleranz in Pflanzen
EP2494867A1 (de) 2011-03-01 2012-09-05 Bayer CropScience AG Halogen-substituierte Verbindungen in Kombination mit Fungiziden
CA2823999C (en) 2011-03-10 2020-03-24 Bayer Intellectual Property Gmbh Use of lipochito-oligosaccharide compounds for safeguarding seed safety of treated seeds
BR112013023502A2 (pt) 2011-03-14 2016-08-02 Bayer Ip Gmbh composto fórmula (i), composição fungicida, método para o controle de fungos fitopatogênicos de culturas, utilização dos compostos de fórmula (i) e processo para a produção das composições
US20140051575A1 (en) 2011-04-08 2014-02-20 Juergen Benting Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives
AR085585A1 (es) 2011-04-15 2013-10-09 Bayer Cropscience Ag Vinil- y alquinilciclohexanoles sustituidos como principios activos contra estres abiotico de plantas
AR090010A1 (es) 2011-04-15 2014-10-15 Bayer Cropscience Ag 5-(ciclohex-2-en-1-il)-penta-2,4-dienos y 5-(ciclohex-2-en-1-il)-pent-2-en-4-inos sustituidos como principios activos contra el estres abiotico de las plantas, usos y metodos de tratamiento
EP2511255A1 (de) 2011-04-15 2012-10-17 Bayer CropScience AG Substituierte Prop-2-in-1-ol- und Prop-2-en-1-ol-Derivate
AR085568A1 (es) 2011-04-15 2013-10-09 Bayer Cropscience Ag 5-(biciclo[4.1.0]hept-3-en-2-il)-penta-2,4-dienos y 5-(biciclo[4.1.0]hept-3-en-2-il)-pent-2-en-4-inos sustituidos como principios activos contra el estres abiotico de las plantas
DK2997825T3 (en) 2011-04-22 2019-03-11 Bayer Ip Gmbh COMPOSITIONS OF ACTIVE COMPOUNDS CONTAINING A (THIO) CARBOXAMIDE DERIVATIVE AND A FUNGICID COMPOUND
TR201802544T4 (tr) 2011-06-06 2018-03-21 Bayer Cropscience Nv Önceden seçilmiş bir bölgede bir bitki genomunu modifiye için yöntemler ve araçlar.
EP2729007A1 (de) 2011-07-04 2014-05-14 Bayer Intellectual Property GmbH Verwendung substituierter isochinolinone, isochinolindione, isochinolintrione und dihydroisochinolinone oder jeweils deren salze als wirkstoffe gegen abiotischen pflanzenstress
ES2612126T3 (es) 2011-07-22 2017-05-12 Thales Un procedimiento de gestión para reutilización espacial de único canal en presencia de nodos potencialmente perjudiciales en una red ad-hoc móvil
WO2013020985A1 (en) 2011-08-10 2013-02-14 Bayer Intellectual Property Gmbh Active compound combinations comprising specific tetramic acid derivatives
JP2014524455A (ja) 2011-08-22 2014-09-22 バイエル・インテレクチユアル・プロパテイー・ゲー・エム・ベー・ハー 殺真菌性ヒドロキシモイル−テトラゾール誘導体
BR112014003919A2 (pt) 2011-08-22 2017-03-14 Bayer Cropscience Ag métodos e meios para modificar um genoma de planta
EP2561759A1 (en) 2011-08-26 2013-02-27 Bayer Cropscience AG Fluoroalkyl-substituted 2-amidobenzimidazoles and their effect on plant growth
JP2014530173A (ja) 2011-09-09 2014-11-17 バイエル・インテレクチユアル・プロパテイー・ゲー・エム・ベー・ハー 植物の収量を改善するためのアシル−ホモセリンラクトン誘導体
US9090600B2 (en) 2011-09-12 2015-07-28 Bayer Intellectual Property Gmbh Fungicidal 4-substituted-3-{phenyl[(heterocyclylmethoxy)imino]methyl}-1,2,4-oxadizol-5(4H)-one derivatives
US20140378306A1 (en) 2011-09-16 2014-12-25 Bayer Intellectual Property Gmbh Use of 5-phenyl- or 5-benzyl-2 isoxazoline-3 carboxylates for improving plant yield
CN103781352A (zh) 2011-09-16 2014-05-07 拜耳知识产权有限责任公司 苯基吡唑啉-3-甲酸酯类用于提高植物产量的用途
AR087874A1 (es) 2011-09-16 2014-04-23 Bayer Ip Gmbh Uso de acilsulfonamidas para mejorar el rendimiento de las plantas
JP2014527973A (ja) 2011-09-23 2014-10-23 バイエル・インテレクチユアル・プロパテイー・ゲー・エム・ベー・ハー 非生物的な植物ストレスに対する作用剤としての４−置換１−フェニルピラゾール−３−カルボン酸誘導体の使用
AU2012320554B2 (en) 2011-10-04 2017-11-09 Bayer Intellectual Property Gmbh RNAi for the control of fungi and oomycetes by inhibiting saccharopine dehydrogenase gene
WO2013050324A1 (de) 2011-10-06 2013-04-11 Bayer Intellectual Property Gmbh Abiotischen pflanzenstress-reduzierende kombination enthaltend 4- phenylbuttersäure (4-pba) oder eines ihrer salze (komponente (a)) und eine oder mehrere ausgewählte weitere agronomisch wirksame verbindungen (komponente(n) (b)
MX2014005976A (es) 2011-11-21 2014-08-27 Bayer Ip Gmbh Derivados de n-[(silil trisustituido)metil]-carboxamida fungicidas.
CN105906567B (zh) 2011-11-30 2019-01-22 拜耳知识产权有限责任公司 杀真菌的n-二环烷基和n-三环烷基(硫代)羧酰胺衍生物
BR112014015002A2 (pt) 2011-12-19 2017-06-13 Bayer Cropscience Ag uso de derivados de diamida de ácido antranílico para o controle de pragas em culturas transgênicas
BR112014015993A8 (pt) 2011-12-29 2017-07-04 Bayer Ip Gmbh composto, composição, método para o controle dos fungos, utilização dos compostos e processo para a produção das composições
KR102028903B1 (ko) 2011-12-29 2019-10-07 바이엘 인텔렉쳐 프로퍼티 게엠베하 살진균 3-[(피리딘-2-일메톡시이미노)(페닐)메틸]-2-치환-1,2,4-옥사디아졸-5(2h)-온 유도체
PT2816897T (pt) 2012-02-22 2018-04-02 Bayer Cropscience Ag Utilização de fluopiram para controlar doenças da madeira em uvas
EP2819518B1 (en) 2012-02-27 2017-09-06 Bayer Intellectual Property GmbH Active compound combinations containing a thiazoylisoxazoline and a fungicide
WO2013139949A1 (en) 2012-03-23 2013-09-26 Bayer Intellectual Property Gmbh Compositions comprising a strigolactame compound for enhanced plant growth and yield
WO2013153143A1 (en) 2012-04-12 2013-10-17 Bayer Cropscience Ag N-acyl- 2 - (cyclo) alkylpyrrolidines and piperidines useful as fungicides
CN104428294B (zh) 2012-04-20 2017-07-14 拜尔农科股份公司 N‑环烷基‑n‑[(杂环基苯基)亚甲基]‑(硫代)羧酰胺衍生物
US20150080337A1 (en) 2012-04-20 2015-03-19 Bayer Cropscience N-cycloalkyl-n-[(trisubstitutedsilylphenyl)methylene]-(thio)carboxamide derivatives
EP2841581B2 (en) 2012-04-23 2023-03-08 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Targeted genome engineering in plants
EP2847170B1 (en) 2012-05-09 2017-11-08 Bayer CropScience AG Pyrazole indanyl carboxamides
EP2662362A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG Pyrazole indanyl carboxamides
EP2662363A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG 5-Halogenopyrazole biphenylcarboxamides
EP2662361A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG Pyrazol indanyl carboxamides
EP2662364A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG Pyrazole tetrahydronaphthyl carboxamides
EP2662360A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG 5-Halogenopyrazole indanyl carboxamides
WO2013167544A1 (en) 2012-05-09 2013-11-14 Bayer Cropscience Ag 5-halogenopyrazole indanyl carboxamides
EP2662370A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG 5-Halogenopyrazole benzofuranyl carboxamides
AR091104A1 (es) 2012-05-22 2015-01-14 Bayer Cropscience Ag Combinaciones de compuestos activos que comprenden un derivado lipo-quitooligosacarido y un compuesto nematicida, insecticida o fungicida
EP2871958A1 (en) 2012-07-11 2015-05-20 Bayer CropScience AG Use of fungicidal combinations for increasing the tolerance of a plant towards abiotic stress
CA2883574A1 (en) 2012-09-05 2014-03-13 Bayer Cropscience Ag Use of substituted 2-amidobenzimidazoles, 2-amidobenzoxazoles and 2-amidobenzothiazoles or salts thereof as active substances against abiotic plant stress
PL2908642T3 (pl) 2012-10-19 2022-06-13 Bayer Cropscience Ag Sposób wzmacniania tolerancji roślin na stres abiotyczny z zastosowaniem pochodnych karboksyamidowych lub tiokarboksyamidowych
US9801374B2 (en) 2012-10-19 2017-10-31 Bayer Cropscience Ag Active compound combinations comprising carboxamide derivatives
US9668480B2 (en) 2012-10-19 2017-06-06 Bayer Cropscience Ag Method for treating plants against fungi resistant to fungicides using carboxamide or thiocarboxamide derivatives
CN105357967B (zh) 2012-10-19 2019-02-19 拜尔农科股份公司 使用羧酰胺衍生物促进植物生长的方法
WO2014079957A1 (de) 2012-11-23 2014-05-30 Bayer Cropscience Ag Selektive inhibition der ethylensignaltransduktion
EP2735231A1 (en) 2012-11-23 2014-05-28 Bayer CropScience AG Active compound combinations
BR112015012473A2 (pt) 2012-11-30 2017-07-11 Bayer Cropscience Ag misturas binárias pesticidas e fungicidas
WO2014083088A2 (en) 2012-11-30 2014-06-05 Bayer Cropscience Ag Binary fungicidal mixtures
BR112015012519A2 (pt) 2012-11-30 2017-07-11 Bayer Cropscience Ag misturas ternárias fungicidas e pesticidas
WO2014082950A1 (en) 2012-11-30 2014-06-05 Bayer Cropscience Ag Ternary fungicidal mixtures
UA117820C2 (uk) 2012-11-30 2018-10-10 Байєр Кропсайєнс Акцієнгезелльшафт Подвійна фунгіцидна або пестицидна суміш
EP2740356A1 (de) 2012-12-05 2014-06-11 Bayer CropScience AG Substituierte (2Z)-5(1-Hydroxycyclohexyl)pent-2-en-4-insäure-Derivate
EP2740720A1 (de) 2012-12-05 2014-06-11 Bayer CropScience AG Substituierte bicyclische- und tricyclische Pent-2-en-4-insäure -Derivate und ihre Verwendung zur Steigerung der Stresstoleranz in Pflanzen
EP2928296A1 (de) 2012-12-05 2015-10-14 Bayer CropScience AG Verwendung substituierter 1-(arylethinyl)-, 1-(heteroarylethinyl)-, 1-(heterocyclylethinyl)- und 1-(cyloalkenylethinyl)-cyclohexanole als wirkstoffe gegen abiotischen pflanzenstress
WO2014090765A1 (en) 2012-12-12 2014-06-19 Bayer Cropscience Ag Use of 1-[2-fluoro-4-methyl-5-(2,2,2-trifluoroethylsulfinyl)phenyl]-5-amino-3-trifluoromethyl)-1 h-1,2,4 tfia zole for controlling nematodes in nematode-resistant crops
AR093996A1 (es) 2012-12-18 2015-07-01 Bayer Cropscience Ag Combinaciones bactericidas y fungicidas binarias
WO2014095677A1 (en) 2012-12-19 2014-06-26 Bayer Cropscience Ag Difluoromethyl-nicotinic- tetrahydronaphtyl carboxamides
JP2016515100A (ja) 2013-03-07 2016-05-26 バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト 殺菌性３−｛フェニル［（ヘテロシクリルメトキシ）イミノ］メチル｝−ヘテロ環誘導体
CA2908403A1 (en) 2013-04-02 2014-10-09 Bayer Cropscience Nv Targeted genome engineering in eukaryotes
US9550752B2 (en) 2013-04-12 2017-01-24 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Triazolinthione derivatives
MX2015014365A (es) 2013-04-12 2015-12-07 Bayer Cropscience Ag Derivados de triazol novedosos.
CA2909725A1 (en) 2013-04-19 2014-10-23 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants
US9554573B2 (en) 2013-04-19 2017-01-31 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Binary insecticidal or pesticidal mixture
TW201507722A (zh) 2013-04-30 2015-03-01 Bayer Cropscience Ag 做為殺線蟲劑及殺體內寄生蟲劑的ｎ－（２－鹵素－２－苯乙基）－羧醯胺類
WO2014177514A1 (en) 2013-04-30 2014-11-06 Bayer Cropscience Ag Nematicidal n-substituted phenethylcarboxamides
CN105636939B (zh) 2013-06-26 2018-08-31 拜耳作物科学股份公司 N-环烷基-n-[(二环基苯基)亚甲基]-(硫代)甲酰胺衍生物
AR096827A1 (es) 2013-07-09 2016-02-03 Bayer Cropscience Ag Uso de piridoncarboxamidas seleccionadas o sus sales como ingredientes activos contra estrés abiótico en plantas
CN105873907B (zh) 2013-12-05 2019-03-12 拜耳作物科学股份公司 N-环烷基-n-{[2-(1-取代的环烷基)苯基]亚甲基}-(硫代)甲酰胺衍生物
AU2014359208B2 (en) 2013-12-05 2018-10-04 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft N-cycloalkyl-N-{[2-(1-substitutedcycloalkyl)phenyl]methylene}-(thio)carboxamide derivatives
AR101214A1 (es) 2014-07-22 2016-11-30 Bayer Cropscience Ag Ciano-cicloalquilpenta-2,4-dienos, ciano-cicloalquilpent-2-en-4-inas, ciano-heterociclilpenta-2,4-dienos y ciano-heterociclilpent-2-en-4-inas sustituidos como principios activos contra el estrés abiótico de plantas
CN104145825B (zh) * 2014-09-04 2016-04-13 东莞市睿绅生物技术有限公司 朝鲜蓟试管实生苗茎尖快繁育苗的方法
AR103024A1 (es) 2014-12-18 2017-04-12 Bayer Cropscience Ag Piridoncarboxamidas seleccionadas o sus sales como sustancias activas contra estrés abiótico de las plantas
BR112017022000A2 (pt) 2015-04-13 2018-07-03 Bayer Cropscience Ag derivados de n-cicloalquil-n-(biheterocicliletileno)-(tio)carboxamida.
AU2016279062A1 (en) 2015-06-18 2019-03-28 Omar O. Abudayyeh Novel CRISPR enzymes and systems
US11306337B2 (en) 2015-11-12 2022-04-19 Ctc—Centro De Tecnologia Canavieira S.A. Polypeptides having hydrolytic activity on 1-kestose in the presence of sucrose but lacking sucrase (invertase) activity, polynucleotides encoding same and methods of producting and using same in industrial sucrose production from 1-kestose
CA3032030A1 (en) 2016-07-29 2018-02-01 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Active compound combinations and methods to protect the propagation material of plants
US20190281828A1 (en) 2016-09-22 2019-09-19 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Novel triazole derivatives
BR112019005668A2 (pt) 2016-09-22 2019-06-04 Bayer Ag novos derivados de triazol
US20190225974A1 (en) 2016-09-23 2019-07-25 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Targeted genome optimization in plants
CN106617081B (zh) * 2016-09-26 2020-08-04 江南大学 长链菊粉调节急性胰腺炎症及其引起的相关组织损伤的作用
US20190261630A1 (en) 2016-10-26 2019-08-29 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Use of pyraziflumid for controlling sclerotinia spp in seed treatment applications
RU2755433C2 (ru) 2016-12-08 2021-09-16 Байер Кропсайенс Акциенгезельшафт Применение инсектицидов для борьбы с проволочниками
WO2018108627A1 (de) 2016-12-12 2018-06-21 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Verwendung substituierter indolinylmethylsulfonamide oder deren salze zur steigerung der stresstoleranz in pflanzen
EP3332645A1 (de) 2016-12-12 2018-06-13 Bayer Cropscience AG Verwendung substituierter pyrimidindione oder jeweils deren salze als wirkstoffe gegen abiotischen pflanzenstress
US11591601B2 (en) 2017-05-05 2023-02-28 The Broad Institute, Inc. Methods for identification and modification of lncRNA associated with target genotypes and phenotypes
WO2019025153A1 (de) 2017-07-31 2019-02-07 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Verwendung von substituierten n-sulfonyl-n'-aryldiaminoalkanen und n-sulfonyl-n'-heteroaryldiaminoalkanen oder deren salzen zur steigerung der stresstoleranz in pflanzen
AU2018338318B2 (en) 2017-09-21 2022-12-22 Massachusetts Institute Of Technology Systems, methods, and compositions for targeted nucleic acid editing
US10968257B2 (en) 2018-04-03 2021-04-06 The Broad Institute, Inc. Target recognition motifs and uses thereof
BR112020024615A2 (pt) 2018-06-04 2021-03-02 Bayer Aktiengesellschaft benzoilpirazóis bicíclicos de ação herbicida
WO2020131862A1 (en) 2018-12-17 2020-06-25 The Broad Institute, Inc. Crispr-associated transposase systems and methods of use thereof
US20220372501A1 (en) * 2019-09-24 2022-11-24 Ginkgo Bioworks, Inc. Production of oligosaccharides

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL100908A0 (en) * 1991-02-22 1992-11-15 Salk Inst Biotech Ind Invertase genes and their use
AU5843794A (en) * 1992-12-28 1994-07-19 Stichting Scheikundig Onderzoek In Nederland Method for obtaining transgenic plants showing a modified fructan pattern
DE4316425C2 (de) * 1993-05-17 1998-05-20 Suedzucker Ag Verfahren zur Herstellung von langkettigem Inulin, das so hergestellte Inulin sowie dessen Verwendung
JP3840259B2 (ja) * 1995-01-06 2006-11-01 プラント リサーチ インターナショナル ベスローテン フェンノートシャップ 炭水化物ポリマー合成酵素をコードするｄｎａ配列及びトランスジェニック植物を製造するための方法
DE19617687C2 (de) * 1996-05-03 2000-11-16 Suedzucker Ag Verfahren zur Herstellung transgener, Inulin erzeugender Pflanzen

Also Published As

Publication number Publication date
ES2324188T3 (es) 2009-07-31
CZ299825B6 (cs) 2008-12-03
CA2309133C (en) 2011-09-06
WO1999024593A1 (en) 1999-05-20
CN1202255C (zh) 2005-05-18
AU753390B2 (en) 2002-10-17
JP4287046B2 (ja) 2009-07-01
EP1029067A1 (en) 2000-08-23
US6559356B1 (en) 2003-05-06
HUP0100111A3 (en) 2003-04-28
DE19749122A1 (de) 1999-06-10
BR9813968A (pt) 2000-09-26
EP1029067B1 (en) 2009-04-01
BR9813968B1 (pt) 2011-03-09
DE69840704D1 (de) 2009-05-14
BRPI9816319B1 (pt) 2016-05-17
AU1667499A (en) 1999-05-31
JP2001521757A (ja) 2001-11-13
US20040014092A1 (en) 2004-01-22
US7083963B2 (en) 2006-08-01
AR017767A1 (es) 2001-10-24
DK1029067T3 (da) 2009-06-22
CN1280624A (zh) 2001-01-17
CA2309133A1 (en) 1999-05-20
HUP0100111A2 (hu) 2001-05-28
ZA9810110B (en) 1999-05-05
PL340364A1 (en) 2001-01-29
CZ20001680A3 (cs) 2000-10-11
PL194854B1 (pl) 2007-07-31
ATE427357T1 (de) 2009-04-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU753390B2 (en) Nucleic acid molecules which encode proteins having fructosyl transferase activity and methods for producing long-chain inulin
KR100352532B1 (ko) 식물,진균류및미생물에서선형알파-1,4글루칸의형성을용이하게할수있는효소를코딩하는dna서열
US6515203B1 (en) Nucleic acid molecules encoding enzymes having fructosyl polymerase activity
JP3643591B2 (ja) ポリフルクタン（レバン）を生成するｄｎａ配列、この配列を含むプラスミド並びにトランスジェニック植物の製造方法
JP3840259B2 (ja) 炭水化物ポリマー合成酵素をコードするｄｎａ配列及びトランスジェニック植物を製造するための方法
AU777455B2 (en) Nucleic acid molecules from artichoke (cynara scolymus) encoding enzymes having fructosyl polymerase activity

Legal Events

Date Code Title Description
FH91 Appointment of a representative

Free format text: FORMER REPRESENTATIVE(S): BELICZAY LASZLO, S.B.G. & K. BUDAPESTI NEMZETKOEZI SZABADALMI IRODA, HU

Representative=s name: DR. LANG TIVADARNE, S.B.G. & K. SZABADALMI UEG, HU

FH92 Termination of representative

Representative=s name: BELICZAY LASZLO, S.B.G. & K. BUDAPESTI NEMZETK, HU

MM4A Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees