HU226327B1 - Process for producing (1s,4r)- or (1r,4s)-4-(2-amino-6-chloro-9h-purin-9-yl)-2-cyclopentene-1-methanol - Google Patents
Process for producing (1s,4r)- or (1r,4s)-4-(2-amino-6-chloro-9h-purin-9-yl)-2-cyclopentene-1-methanol Download PDFInfo
- Publication number
- HU226327B1 HU226327B1 HU9801083A HUP9801083A HU226327B1 HU 226327 B1 HU226327 B1 HU 226327B1 HU 9801083 A HU9801083 A HU 9801083A HU P9801083 A HUP9801083 A HU P9801083A HU 226327 B1 HU226327 B1 HU 226327B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- amino
- formula
- cyclopentene
- carried out
- process according
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 19
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 16
- IHEDZPMXLKYPSA-NKWVEPMBSA-N [(1r,4s)-4-(2-amino-6-chloropurin-9-yl)cyclopent-2-en-1-yl]methanol Chemical compound C12=NC(N)=NC(Cl)=C2N=CN1[C@H]1C[C@@H](CO)C=C1 IHEDZPMXLKYPSA-NKWVEPMBSA-N 0.000 title 1
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 42
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 31
- -1 2-amino-6-chloro-9H-purin-9-yl Chemical group 0.000 claims description 30
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 29
- 230000036983 biotransformation Effects 0.000 claims description 22
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 22
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 21
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 17
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 17
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 15
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 14
- 108010073038 Penicillin Amidase Proteins 0.000 claims description 13
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- DDUFYKNOXPZZIW-UHFFFAOYSA-N 3-azabicyclo[2.2.1]hept-5-en-2-one Chemical compound C1C2C(=O)NC1C=C2 DDUFYKNOXPZZIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 241000588986 Alcaligenes Species 0.000 claims description 8
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 claims description 8
- 241000316848 Rhodococcus <scale insect> Species 0.000 claims description 8
- 241000203751 Gordonia <actinomycete> Species 0.000 claims description 7
- 230000010933 acylation Effects 0.000 claims description 7
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 claims description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 7
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 claims description 6
- 241000589180 Rhizobium Species 0.000 claims description 6
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 claims description 6
- UBCKGWBNUIFUST-YHYXMXQVSA-N tetrachlorvinphos Chemical compound COP(=O)(OC)O\C(=C/Cl)C1=CC(Cl)=C(Cl)C=C1Cl UBCKGWBNUIFUST-YHYXMXQVSA-N 0.000 claims description 6
- 241000588807 Bordetella Species 0.000 claims description 5
- 239000003586 protic polar solvent Substances 0.000 claims description 5
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 5
- JPZOAVGMSDSWSW-UHFFFAOYSA-N 4,6-dichloropyrimidin-2-amine Chemical compound NC1=NC(Cl)=CC(Cl)=N1 JPZOAVGMSDSWSW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 241000194107 Bacillus megaterium Species 0.000 claims description 4
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 125000000051 benzyloxy group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])O* 0.000 claims description 4
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 4
- IHLRGGLJGGTPCY-HWKANZROSA-N (e)-hept-5-en-3-one Chemical compound CCC(=O)C\C=C\C IHLRGGLJGGTPCY-HWKANZROSA-N 0.000 claims description 3
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 3
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 claims description 3
- UXKZFJDNFBNQHE-NTSWFWBYSA-N [(1r,4s)-4-aminocyclopent-2-en-1-yl]methanol Chemical compound N[C@H]1C[C@@H](CO)C=C1 UXKZFJDNFBNQHE-NTSWFWBYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000000010 aprotic solvent Substances 0.000 claims description 3
- 239000002585 base Substances 0.000 claims description 3
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 claims description 3
- 150000001244 carboxylic acid anhydrides Chemical class 0.000 claims description 3
- OSFRHUVOPNVUGL-NKWVEPMBSA-N n-[2-amino-4-chloro-6-[[(1s,4r)-4-(hydroxymethyl)cyclopent-2-en-1-yl]amino]pyrimidin-5-yl]formamide Chemical compound NC1=NC(Cl)=C(NC=O)C(N[C@@H]2C=C[C@H](CO)C2)=N1 OSFRHUVOPNVUGL-NKWVEPMBSA-N 0.000 claims description 3
- 241000186063 Arthrobacter Species 0.000 claims description 2
- 150000001342 alkaline earth metals Chemical class 0.000 claims description 2
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 claims description 2
- 125000002433 cyclopentenyl group Chemical class C1(=CCCC1)* 0.000 claims 1
- 230000026030 halogenation Effects 0.000 claims 1
- 238000005658 halogenation reaction Methods 0.000 claims 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims 1
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 29
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 23
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 22
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Inorganic materials [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 20
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 19
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 18
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 16
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N isobutanol Chemical compound CC(C)CO ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 12
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 12
- 241000187561 Rhodococcus erythropolis Species 0.000 description 11
- 150000001941 cyclopentenes Chemical class 0.000 description 10
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 10
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 10
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 10
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 10
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 10
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 9
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 9
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 9
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 9
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 8
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- UXKZFJDNFBNQHE-RITPCOANSA-N [(1s,4r)-4-aminocyclopent-2-en-1-yl]methanol Chemical compound N[C@@H]1C[C@H](CO)C=C1 UXKZFJDNFBNQHE-RITPCOANSA-N 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- BTANRVKWQNVYAZ-UHFFFAOYSA-N butan-2-ol Chemical compound CCC(C)O BTANRVKWQNVYAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 8
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 8
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 7
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 7
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 7
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 7
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 7
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 7
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 7
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 7
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 7
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 6
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 6
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 6
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000187562 Rhodococcus sp. Species 0.000 description 6
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 6
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- PVRSHAUROLANIJ-UHFFFAOYSA-N n-[4-(hydroxymethyl)cyclopent-2-en-1-yl]butanamide Chemical compound CCCC(=O)NC1CC(CO)C=C1 PVRSHAUROLANIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 6
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 6
- BEOUGZFCUMNGOU-UHFFFAOYSA-N tuberculostearic acid Chemical compound CCCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O BEOUGZFCUMNGOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000007698 Alcohol dehydrogenase Human genes 0.000 description 5
- 108010021809 Alcohol dehydrogenase Proteins 0.000 description 5
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 5
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 5
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 150000001414 amino alcohols Chemical class 0.000 description 5
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 5
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 5
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 5
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 5
- JVSLVBYLHIRGJQ-UHFFFAOYSA-N n-[4-(hydroxymethyl)cyclopent-2-en-1-yl]acetamide Chemical compound CC(=O)NC1CC(CO)C=C1 JVSLVBYLHIRGJQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 5
- GMKMEZVLHJARHF-UHFFFAOYSA-N (2R,6R)-form-2.6-Diaminoheptanedioic acid Natural products OC(=O)C(N)CCCC(N)C(O)=O GMKMEZVLHJARHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000004400 Aminopeptidases Human genes 0.000 description 4
- 108090000915 Aminopeptidases Proteins 0.000 description 4
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000003047 N-acetyl group Chemical group 0.000 description 4
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 4
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 4
- 241000589776 Pseudomonas putida Species 0.000 description 4
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 4
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- GMKMEZVLHJARHF-SYDPRGILSA-N meso-2,6-diaminopimelic acid Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CCC[C@@H]([NH3+])C([O-])=O GMKMEZVLHJARHF-SYDPRGILSA-N 0.000 description 4
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 4
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 4
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 4
- HKLFZRGYKCMNPX-UHFFFAOYSA-N 3-butanoyl-3-azabicyclo[2.2.1]hept-5-en-2-one Chemical compound C1C2C=CC1N(C(=O)CCC)C2=O HKLFZRGYKCMNPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000186073 Arthrobacter sp. Species 0.000 description 3
- 241000193400 Bacillus simplex Species 0.000 description 3
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 3
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001657434 Gordonia sp. Species 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 3
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 3
- UORVGPXVDQYIDP-UHFFFAOYSA-N borane Chemical compound B UORVGPXVDQYIDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910010277 boron hydride Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- LPIQUOYDBNQMRZ-UHFFFAOYSA-N cyclopentenylidene Natural products C1CC=CC1 LPIQUOYDBNQMRZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 3
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 229940049920 malate Drugs 0.000 description 3
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N malic acid Chemical compound OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 3
- 150000004671 saturated fatty acids Chemical class 0.000 description 3
- 235000003441 saturated fatty acids Nutrition 0.000 description 3
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 125000005480 straight-chain fatty acid group Chemical group 0.000 description 3
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 3
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 3
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 description 3
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 3
- 125000004178 (C1-C4) alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- DGMOBVGABMBZSB-UHFFFAOYSA-N 2-methylpropanoyl chloride Chemical compound CC(C)C(Cl)=O DGMOBVGABMBZSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VMZCDNSFRSVYKQ-UHFFFAOYSA-N 2-phenylacetyl chloride Chemical compound ClC(=O)CC1=CC=CC=C1 VMZCDNSFRSVYKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N Acetamide Chemical compound CC(N)=O DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001673062 Achromobacter xylosoxidans Species 0.000 description 2
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VGCXGMAHQTYDJK-UHFFFAOYSA-N Chloroacetyl chloride Chemical compound ClCC(Cl)=O VGCXGMAHQTYDJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N Diisopropyl ether Chemical compound CC(C)OC(C)C ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical compound FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 2
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N L-arabinopyranose Chemical compound O[C@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 2
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 2
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DFJSXBUVSKWALM-IBTYICNHSA-N [(1s,4r)-4-aminocyclopent-2-en-1-yl]methanol;hydrochloride Chemical compound Cl.N[C@@H]1C[C@H](CO)C=C1 DFJSXBUVSKWALM-IBTYICNHSA-N 0.000 description 2
- WETWJCDKMRHUPV-UHFFFAOYSA-N acetyl chloride Chemical compound CC(Cl)=O WETWJCDKMRHUPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012346 acetyl chloride Substances 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 239000011260 aqueous acid Substances 0.000 description 2
- WGQKYBSKWIADBV-UHFFFAOYSA-N benzylamine Chemical compound NCC1=CC=CC=C1 WGQKYBSKWIADBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HQABUPZFAYXKJW-UHFFFAOYSA-N butan-1-amine Chemical compound CCCCN HQABUPZFAYXKJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- DVECBJCOGJRVPX-UHFFFAOYSA-N butyryl chloride Chemical compound CCCC(Cl)=O DVECBJCOGJRVPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 238000004296 chiral HPLC Methods 0.000 description 2
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 2
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000004218 chloromethyl group Chemical group [H]C([H])(Cl)* 0.000 description 2
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 2
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 2
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 2
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- XYWHZUCZNRMJGO-UHFFFAOYSA-N n-(2-amino-4,6-dichloropyrimidin-5-yl)formamide Chemical compound NC1=NC(Cl)=C(NC=O)C(Cl)=N1 XYWHZUCZNRMJGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OSFRHUVOPNVUGL-RQJHMYQMSA-N n-[2-amino-4-chloro-6-[[(1r,4s)-4-(hydroxymethyl)cyclopent-2-en-1-yl]amino]pyrimidin-5-yl]formamide Chemical compound NC1=NC(Cl)=C(NC=O)C(N[C@H]2C=C[C@@H](CO)C2)=N1 OSFRHUVOPNVUGL-RQJHMYQMSA-N 0.000 description 2
- VESDMJYTNQGIHQ-UHFFFAOYSA-N n-[4-(hydroxymethyl)cyclopent-2-en-1-yl]-2-methylpropanamide Chemical compound CC(C)C(=O)NC1CC(CO)C=C1 VESDMJYTNQGIHQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 2
- RGSFGYAAUTVSQA-UHFFFAOYSA-N pentamethylene Natural products C1CCCC1 RGSFGYAAUTVSQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 2
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 2
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 2
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RZWZRACFZGVKFM-UHFFFAOYSA-N propanoyl chloride Chemical compound CCC(Cl)=O RZWZRACFZGVKFM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 2
- 239000002212 purine nucleoside Substances 0.000 description 2
- YNCMLFHHXWETLD-UHFFFAOYSA-N pyocyanin Chemical compound CN1C2=CC=CC=C2N=C2C1=CC=CC2=O YNCMLFHHXWETLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 2
- 125000005270 trialkylamine group Chemical group 0.000 description 2
- APJYDQYYACXCRM-UHFFFAOYSA-N tryptamine Chemical compound C1=CC=C2C(CCN)=CNC2=C1 APJYDQYYACXCRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PJVXUVWGSCCGHT-ZPYZYFCMSA-N (2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;(3s,4r,5r)-1,3,4,5,6-pentahydroxyhexan-2-one Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C(=O)CO PJVXUVWGSCCGHT-ZPYZYFCMSA-N 0.000 description 1
- UXKZFJDNFBNQHE-UHFFFAOYSA-N (4-aminocyclopent-2-en-1-yl)methanol Chemical compound NC1CC(CO)C=C1 UXKZFJDNFBNQHE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000229 (C1-C4)alkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- IWYDHOAUDWTVEP-SSDOTTSWSA-M (R)-mandelate Chemical compound [O-]C(=O)[C@H](O)C1=CC=CC=C1 IWYDHOAUDWTVEP-SSDOTTSWSA-M 0.000 description 1
- ORQJKSSANZWDNL-UHFFFAOYSA-N 1-[1-amino-4-(hydroxymethyl)cyclopent-2-en-1-yl]ethanone Chemical compound CC(=O)C1(N)CC(CO)C=C1 ORQJKSSANZWDNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AVFZOVWCLRSYKC-UHFFFAOYSA-N 1-methylpyrrolidine Chemical compound CN1CCCC1 AVFZOVWCLRSYKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MWBWWFOAEOYUST-UHFFFAOYSA-N 2-aminopurine Chemical compound NC1=NC=C2N=CNC2=N1 MWBWWFOAEOYUST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZUMZWQHPSXZHBQ-UHFFFAOYSA-N 3-acetyl-3-azabicyclo[2.2.1]hept-5-en-2-one Chemical compound C1C2C=CC1N(C(=O)C)C2=O ZUMZWQHPSXZHBQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FJAIWBKTJGTXFY-UHFFFAOYSA-N 3-propanoyl-3-azabicyclo[2.2.1]hept-5-en-2-one Chemical compound C1C2C=CC1N(C(=O)CC)C2=O FJAIWBKTJGTXFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VECKMGIKZDTXJB-UHFFFAOYSA-N 4-(2-chloroacetyl)-3-azabicyclo[2.2.1]hept-5-en-2-one Chemical compound C1C2C=CC1(C(=O)CCl)NC2=O VECKMGIKZDTXJB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 8-[3-(1-cyclopropylpyrazol-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl]-3-methyl-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-2-one Chemical class C1(CC1)N1N=CC(=C1)C1=NNC2=C1N=C(N=C2)N1C2C(N(CC1CC2)C)=O HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000590020 Achromobacter Species 0.000 description 1
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- 108010082340 Arginine deiminase Proteins 0.000 description 1
- 241000186001 Arthrobacter pascens Species 0.000 description 1
- 241000185993 Arthrobacter ramosus Species 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000006847 BOC protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000499489 Castor canadensis Species 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N D-Fructose Natural products OC[C@H]1OC(O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QWIZNVHXZXRPDR-UHFFFAOYSA-N D-melezitose Natural products O1C(CO)C(O)C(O)C(O)C1OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O QWIZNVHXZXRPDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940127463 Enzyme Inducers Drugs 0.000 description 1
- 239000004386 Erythritol Substances 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000901842 Escherichia coli W Species 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 1
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000191948 Kocuria rosea Species 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011779 Menyanthes trifoliata Nutrition 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N Muraminsaeure Natural products OC(=O)C(C)OC1C(N)C(O)OC(CO)C1O MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000186359 Mycobacterium Species 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QIAFMBKCNZACKA-UHFFFAOYSA-N N-benzoylglycine Chemical compound OC(=O)CNC(=O)C1=CC=CC=C1 QIAFMBKCNZACKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AHVYPIQETPWLSZ-UHFFFAOYSA-N N-methyl-pyrrolidine Natural products CN1CC=CC1 AHVYPIQETPWLSZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910004616 Na2MoO4.2H2 O Inorganic materials 0.000 description 1
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M Nitrite anion Chemical compound [O-]N=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000187654 Nocardia Species 0.000 description 1
- 241000187681 Nocardia sp. Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108010013639 Peptidoglycan Proteins 0.000 description 1
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 description 1
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000588777 Providencia rettgeri Species 0.000 description 1
- 241000589755 Pseudomonas mendocina Species 0.000 description 1
- 241000185992 Rhizobium viscosum Species 0.000 description 1
- 241000187694 Rhodococcus fascians Species 0.000 description 1
- 241001524101 Rhodococcus opacus Species 0.000 description 1
- 241000187563 Rhodococcus ruber Species 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 241000187389 Streptomyces lavendulae Species 0.000 description 1
- 241000719745 Streptomyces phaechromogenes Species 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- INNVZQNPDSGYIX-UHFFFAOYSA-N [4-(2-methylpropylamino)cyclopent-2-en-1-yl]methanol Chemical compound CC(C)CNC1CC(CO)C=C1 INNVZQNPDSGYIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JEDZLBFUGJTJGQ-UHFFFAOYSA-N [Na].COCCO[AlH]OCCOC Chemical compound [Na].COCCO[AlH]OCCOC JEDZLBFUGJTJGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MCGSCOLBFJQGHM-SCZZXKLOSA-N abacavir Chemical compound C=12N=CN([C@H]3C=C[C@@H](CO)C3)C2=NC(N)=NC=1NC1CC1 MCGSCOLBFJQGHM-SCZZXKLOSA-N 0.000 description 1
- IPBVNPXQWQGGJP-UHFFFAOYSA-N acetic acid phenyl ester Natural products CC(=O)OC1=CC=CC=C1 IPBVNPXQWQGGJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RRUDCFGSUDOHDG-UHFFFAOYSA-N acetohydroxamic acid Chemical compound CC(O)=NO RRUDCFGSUDOHDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 229910000102 alkali metal hydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000008046 alkali metal hydrides Chemical class 0.000 description 1
- 230000003113 alkalizing effect Effects 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- PASDCCFISLVPSO-UHFFFAOYSA-N benzoyl chloride Chemical compound ClC(=O)C1=CC=CC=C1 PASDCCFISLVPSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HSDAJNMJOMSNEV-UHFFFAOYSA-N benzyl chloroformate Chemical compound ClC(=O)OCC1=CC=CC=C1 HSDAJNMJOMSNEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 1
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000001246 bromo group Chemical group Br* 0.000 description 1
- 125000005997 bromomethyl group Chemical group 0.000 description 1
- YHASWHZGWUONAO-UHFFFAOYSA-N butanoyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OC(=O)CCC YHASWHZGWUONAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 235000013877 carbamide Nutrition 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N carbonic acid Chemical class OC(O)=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 125000001309 chloro group Chemical group Cl* 0.000 description 1
- 239000000571 coke Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- PMHQVHHXPFUNSP-UHFFFAOYSA-M copper(1+);methylsulfanylmethane;bromide Chemical compound Br[Cu].CSC PMHQVHHXPFUNSP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- LMYOLOWXQDLHKQ-UHFFFAOYSA-N cyclopent-2-en-1-ylmethanol Chemical compound OCC1CCC=C1 LMYOLOWXQDLHKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 125000004772 dichloromethyl group Chemical group [H]C(Cl)(Cl)* 0.000 description 1
- IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N dihydroxy(oxo)silane Chemical compound O[Si](O)=O IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N erythritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N 0.000 description 1
- 235000019414 erythritol Nutrition 0.000 description 1
- 229940009714 erythritol Drugs 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 238000003818 flash chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000001153 fluoro group Chemical group F* 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 150000002367 halogens Chemical group 0.000 description 1
- IHLRGGLJGGTPCY-UHFFFAOYSA-N hept-5-en-3-one Chemical compound CCC(=O)CC=CC IHLRGGLJGGTPCY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019534 high fructose corn syrup Nutrition 0.000 description 1
- PQPVPZTVJLXQAS-UHFFFAOYSA-N hydroxy-methyl-phenylsilicon Chemical class C[Si](O)C1=CC=CC=C1 PQPVPZTVJLXQAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002346 iodo group Chemical group I* 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 125000002510 isobutoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 235000005772 leucine Nutrition 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- QWIZNVHXZXRPDR-WSCXOGSTSA-N melezitose Chemical compound O([C@@]1(O[C@@H]([C@H]([C@@H]1O[C@@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)O)CO)CO)[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O QWIZNVHXZXRPDR-WSCXOGSTSA-N 0.000 description 1
- 229940098779 methanesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000013048 microbiological method Methods 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- MXHTZQSKTCCMFG-UHFFFAOYSA-N n,n-dibenzyl-1-phenylmethanamine Chemical compound C=1C=CC=CC=1CN(CC=1C=CC=CC=1)CC1=CC=CC=C1 MXHTZQSKTCCMFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OKDQKPLMQBXTNH-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethyl-2h-pyridin-1-amine Chemical compound CN(C)N1CC=CC=C1 OKDQKPLMQBXTNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MFOXRZGFZGAVAO-UHFFFAOYSA-N n-[4-(hydroxymethyl)cyclopent-2-en-1-yl]-2-phenylacetamide Chemical compound C1=CC(CO)CC1NC(=O)CC1=CC=CC=C1 MFOXRZGFZGAVAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ATIOJBQXVDKWON-UHFFFAOYSA-N n-[4-(hydroxymethyl)cyclopent-2-en-1-yl]propanamide Chemical compound CCC(=O)NC1CC(CO)C=C1 ATIOJBQXVDKWON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 150000004767 nitrides Chemical class 0.000 description 1
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 1
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 1
- 150000002972 pentoses Chemical class 0.000 description 1
- 238000009527 percussion Methods 0.000 description 1
- 229940049953 phenylacetate Drugs 0.000 description 1
- WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N phenylacetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC=C1 WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FAQJJMHZNSSFSM-UHFFFAOYSA-N phenylglyoxylic acid Chemical compound OC(=O)C(=O)C1=CC=CC=C1 FAQJJMHZNSSFSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 239000001967 plate count agar Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- VMBJJCDVORDOCF-UHFFFAOYSA-N prop-2-enyl 2-chloroacetate Chemical compound ClCC(=O)OCC=C VMBJJCDVORDOCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 1
- WYVAMUWZEOHJOQ-UHFFFAOYSA-N propionic anhydride Chemical compound CCC(=O)OC(=O)CC WYVAMUWZEOHJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012419 sodium bis(2-methoxyethoxy)aluminum hydride Substances 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 125000004213 tert-butoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C(O*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- DYHSDKLCOJIUFX-UHFFFAOYSA-N tert-butoxycarbonyl anhydride Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)OC(=O)OC(C)(C)C DYHSDKLCOJIUFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RMZJPEGRFQHGBT-UHFFFAOYSA-N tert-butyl carbonofluoridate Chemical compound CC(C)(C)OC(F)=O RMZJPEGRFQHGBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- IMFACGCPASFAPR-UHFFFAOYSA-N tributylamine Chemical compound CCCCN(CCCC)CCCC IMFACGCPASFAPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GKASDNZWUGIAMG-UHFFFAOYSA-N triethyl orthoformate Chemical compound CCOC(OCC)OCC GKASDNZWUGIAMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PYOKUURKVVELLB-UHFFFAOYSA-N trimethyl orthoformate Chemical group COC(OC)OC PYOKUURKVVELLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009281 ultraviolet germicidal irradiation Methods 0.000 description 1
- 150000003672 ureas Chemical class 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000002351 wastewater Substances 0.000 description 1
- 238000010626 work up procedure Methods 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
- C07D473/26—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with an oxygen, sulphur, or nitrogen atom directly attached in position 2 or 6, but not in both
- C07D473/32—Nitrogen atom
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C231/00—Preparation of carboxylic acid amides
- C07C231/16—Preparation of optical isomers
- C07C231/18—Preparation of optical isomers by stereospecific synthesis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C233/00—Carboxylic acid amides
- C07C233/01—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
- C07C233/16—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by singly-bound oxygen atoms
- C07C233/23—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by singly-bound oxygen atoms with the substituted hydrocarbon radical bound to the nitrogen atom of the carboxamide group by a carbon atom of a ring other than a six-membered aromatic ring
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C271/00—Derivatives of carbamic acids, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atom not being part of nitro or nitroso groups
- C07C271/06—Esters of carbamic acids
- C07C271/08—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms
- C07C271/24—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atom of at least one of the carbamate groups bound to a carbon atom of a ring other than a six-membered aromatic ring
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- C07D209/56—Ring systems containing three or more rings
- C07D209/80—[b, c]- or [b, d]-condensed
- C07D209/94—[b, c]- or [b, d]-condensed containing carbocyclic rings other than six-membered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
- C07D473/40—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with halogen atoms or perhalogeno-alkyl radicals directly attached in position 2 or 6
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/001—Amines; Imines
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/02—Amides, e.g. chloramphenicol or polyamides; Imides or polyimides; Urethanes, i.e. compounds comprising N-C=O structural element or polyurethanes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
- C12P17/182—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring heteroatoms in the condensed system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
- C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
- C07B2200/07—Optical isomers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C2601/00—Systems containing only non-condensed rings
- C07C2601/06—Systems containing only non-condensed rings with a five-membered ring
- C07C2601/10—Systems containing only non-condensed rings with a five-membered ring the ring being unsaturated
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Indole Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Low-Molecular Organic Synthesis Reactions Using Catalysts (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
Description
A leírás terjedelme 16 oldal (ezen belül 3 lap ábra)
HU 226 327 Β1
R1 jelentése 1-4 szénatomos alkil-, 1-4 szénatomos alkoxi-, benzil-, fenil-, benzil-oxi- vagy fenil-oxi-csoport, majd a második lépésben a kapott vegyületet az (V) általános képletű ciklopenténszármazékká redukálják, majd a harmadik lépésben a kapott vegyületeket
N-acetil-amino-alkohol-hidroláz hatású enzimet termelő mikroorganizmus vagy penicillin G-aciláz segítségével (VI) vagy (VII) képletű vegyületekké alakítják, majd a negyedik lépésben a fentiek szerint kapott vegyületet (Vili) képletű N-(2-amino-4,6-diklór-pirimidin)-5-il)-formamiddal a (IX) vagy a (X) képletű (1S,4R)- vagy (1R,4S)-4-[(2-amino-6-klór-5-formamido-4-pirimidinil)amino]-2-ciklopentén-1-metanollá alakítják, majd az ötödik lépésben az így kapott vegyületeket az (I) vagy a (II) képletű vegyületekké ciklizálják.
A találmány szerinti eljárással kapott vegyületek közbenső termékként 2-amino-purin-nukleozidok előállításához alkalmazhatók.
A találmány tárgyát új eljárás képezi az (I) vagy (II) képletű (1S,4R)- vagy (1R,4S)-4-[(2-amino-6-klór-9Hpurin-9-il]-2-ciklopentén-1-metanol előállítására. Az (1 S,4R)-4-[(2-amino-6-klór-9H-purin-9-il]-2-ciklopentén-1-metanol fontos közbenső termék a 2-amino-purín-nukleozidok előállítása, így például az (1S,4R)-4[2-amino-6-(ciklopropil-amino)-9H-purin-9-il]-2-ciklopentén-1-metanol szintézise során (WO 95/21 161), vagy az 1592U89 jelzésű vegyület előállításánál [J. Org. Chem., 61, 4192-4193, (1996); J. Org. Chem., 61, 7963-7966(1996)].
A WO95/21161 számú nemzetközi közrebocsátási iratban eljárást ismertetnek (1S,4R)-4-[(2-amino-6-klór9H-purin-9-il]-2-ciklopentén-1-metanol előállítására, ahol kiindulási anyagként (1S,4R)-4-amino-2-ciklopentén-1-metanolt használnak. Ezen eljárás hátránya, hogy az (1 S,4R)-4-amino-2-ciklopentén-1 -metanol-adduktot kizárólag a költséges BOC-védőcsoporttal (terc-butiloxi-karbonil-védőcsoport) szubsztituált (±)-2-aza-biciklo[2.2.1]hept-5-én-3-on-származékon keresztül lehet előállítani [J. Org. Chem., 60, 4602-4616 (1995)].
A találmány feladata egyszerű, gazdaságos és előnyös eljárás kidolgozása (1S,4R)- vagy (1R,4S)-4[(2-amino-6-klór-9H-purin-9-il]-2-ciklopentén-1-metanol előállítására.
A fenti feladatot a találmány szerint úgy oldottuk meg, hogy első lépésben a (III) képletű (±)-2-aza-biciklo[2.2.1]hept-5-én-3-ont (IV) általános képletű (±)-2aza-biciklo[2.2.1]hept-5-én-3-on-származékká acilezzük (e képletben R1 jelentése 1-4 szénatomos alkil-, 1-4 szénatomos alkoxi-, benzil-, fenil-, benzil-oxi- vagy fenil-oxi-csoport), majd a második lépésben a kapott vegyületeket (V) általános képletű ciklopenténszármazékká redukáljuk, majd harmadik lépésben a kapott vegyületeket N-acetil-amino-alkohol-hidroláz hatású enzimet termelő olyan mikroorganizmus segítségével, amely képes az (V) általános képletű származékot egyetlen nitrogén- vagy egyetlen szénforrásként, vagy egyetlen szén- és nitrogénforrásként hasznosítani, vagy penicillin G-aciláz segítségével (VI) vagy (VII) képletű (1R,4S)- vagy (1S,4R)-1-amino-4-(hidroxi-metil)-2-ciklopentén-vegyületekké alakítjuk, majd negyedik lépésben a fentiek szerint kapott vegyületet (Vili) képletű N-(2-amino-4,6-diklór-pirimidin)-5-il)-formamiddal (IX) vagy (X) képletű (1S,4R)- vagy (1R,4S)-4[(2-amino-6-klór-5-formamido-4-pirimidinil)-amino]-2ciklopentén-1-metanollá alakítjuk, majd ötödik lépésben az így kapott vegyületeket (I) vagy (II) képletű vegyületté ciklizáljuk.
A találmány szerinti eljárás első lépésében úgy járunk el, hogy a (III) képletű (±)-2-aza-biciklo[2.2.1]hept5-én-3-ont (IV) általános képletű (±)-2-aza-biciklo[2.2.1]hept-5-én-3-on-származékká acilezzük, ahol a képletben R1 jelentése a fent megadott.
Az 1-4 szénatomos alkilcsoport lehet szubsztituált vagy szubsztituálatlan. Szubsztituált 1-4 szénatomos alkilcsoporton a leírásban halogénatommal szubsztituált 1-4 szénatomos alkilcsoportot értünk. Halogénatomként alkalmazható fluoratom, klóratom, brómatom vagy jódatom. Az 1-4 szénatomos alkilcsoportokra példaként említjük meg a metil-, etil-, propil-, butil-, izobutil-, terc-butil-, izopropil-, klór-metil-, bróm-metil-, diklórmetil- és dibróm-metil-csoportot. 1-4 szénatomos alkilcsoportként előnyösen metil-, etil-, propil-, butil-, izobutil- vagy klór-metil-csoport szerepel.
1-4 szénatomos alkoxicsoportként például metoxi-, etoxi-, propoxi-, butoxi-, terc-butoxi- vagy izobutoxicsoport alkalmazható. Előnyösen 1-4 szénatomos alkoxicsoportként terc-butoxi-csoport szerepel.
A (±)-2-aza-biciklo[2.2.1]hept-5-én-3-on addukt előállítható az EP-A 0 508 3 52 számú szabadalmi leírásban ismertetett megoldás szerint.
Az acilezést végezhetjük (XI) általános képletű karbonsav-halogeniddel vagy (XII) általános képletű karbonsavanhidriddel, ahol a képletekben R1 jelentése a fentiekben megadottal azonos és X jelentése halogénatom. X helyében álló halogénatomként szerepelhet fluoratom, klóratom, brómatom vagy jódatom. Előnyösen klóratomot vagy fluoratomot használunk.
A karbonsav-halogenidekre példaként említjük meg az acetil-kloridot, klór-acetil-kloridot, vajsav-kloridot, izovajsav-kloridot, fenil-ecetsav-kloridot, klór-hangyasavbenzil-észtert (CBz-CI), propionsav-kloridot, benzoil-kloridot, klórhangyasav-allil-észtert vagy terc-butil-oxi-karbonil-fluoridot. A karbonsavanhidridekre példaként említjük meg a terc-butoxi-karbonilanhidridet, vajsavanhidridet, ecetsavanhidridet és propionsavanhidridet.
Az acilezés elvégezhető oldószer nélkül vagy aprotonos oldószer jelenlétében.
Előnyösen az acilezést egy aprotonos oldószerben végezzük. Aprotonos oldószerként számításba jöhet például diizopropil-éter, piridin, acetonitril, dimetilformamid, trietil-amin, tetrahidrofurán, toluol, metilénklorid, N-metil-pirrolidon, valamint ezek elegyei. Az aci2
HU 226 327 Β1 lezést célszerűen -80 és 50 °C közötti hőmérsékleten, előnyösen 0 és 25 °C között végezzük.
A találmány szerinti eljárás második lépésében a kapott (IV) általános képletű (±)-2-aza-biciklo[2.2.1]hept-5én-3-on-származékot az (V) általános képletű ciklopenténszármazékká redukáljuk, ahol a képletben R1 jelentése a fentiekben megadott.
A redukciót célszerűen alkálifém- vagy alkáliföldfém-bór-hidriddel, egy alkálifém- vagy alkáliföldfémalumínium-hidriddel vagy vitriddel [nátrium-bisz(2-metoxi-etoxi)-alumínium-hidrid] végezzük. Alkálifém-alumínium-hidridként alkalmazható nátrium- vagy káliumalumínium-hidrid. Alkálifém-bór-hidridként használhatunk nátrium- vagy kálium-bór-hidridet. Alkáliföldfémbór-hidridként alkalmazhatunk kalcium-bór-hidridet. Nitridként alkalmazható például alumínium-nitrid.
A redukciót célszerűen protonos oldószerben végezzük. Protonos oldószerként alkalmazhatók rövid szénláncú alifás alkoholok, mint metanol, etanol, propanol, izopropanol, butanol, szek-butanol, terc-butanol, izobutanol vagy víz, illetőleg ezen alkoholok és víz elegyei.
A redukciót célszerűen -40 °C és +40 °C közötti hőmérsékleten, előnyösen 0 és 20 °C között végezzük.
A találmány szerinti eljárás harmadik lépésében az (V) általános képletű ciklopenténszármazéknak (VI) vagy (VII) képletű (1R.4S)- vagy (1S,4R)-1-amino-4(hidroxi-metil)-2-ciklopenténné való átalakítását N-acetil-amino-alkohol-hidroláz hatású enzimet termelő mikroorganizmus segítségével vagy penicillin G-acilázok segítségével végezzük. Ezen biotranszformációnál az acilezett (1 S,4R)- vagy (1 R,4S)-amino-alkohol-származékot átalakítjuk, amikor is (VI) vagy (VII) képletű (1R,4S)- vagy (1S,4R)-1-amino-4-(hidroxi-metil)-2-ciklopentén képződik.
A biotranszformációhoz mindazon mikroorganizmusok alkalmazhatók, amelyek az (V) általános képletű ciklopenténszármazékot egyetlen nitrogénforrásként, egyetlen szénforrásként vagy egyetlen szén- és nitrogénforrásként hasznosítják. A mikroorganizmusokat szokásos mikrobiológiai módszerekkel különíthetjük el talajmintákból, iszapokból vagy szennyvízből. A mikroorganizmusok elkülönítése oly módon történik, hogy ezeket egy (V) általános képletű ciklopenténszármazékot tartalmazó táptalajban szokásos módon tenyésztjük, ahol az (V) általános képletben R1 jelentése a fentiekben megadottal azonos; a táptalajban az (V) általános képletű vegyületet
- egyetlen szén- és nitrogénforrásként,
- egyetlen nitrogénforrásként egy megfelelő szénforrás jelenlétében, vagy
- egyetlen szénforrásként egy megfelelő nitrogénforrás jelenlétében alkalmazzuk.
(V) általános képletű ciklopenténszármazékként alkalmazható például az N-acetil-, Ν-propionil-, N-izobutiril-, N-terc-butoxi-karbonil-(N-BOC), N-butiril- vagy N-fenil-acetil-1-amino-4-hidroxi-metil-2-ciklopentén.
Megfelelő nitrogénforrásként a mikroorganizmusok növekedési szubsztrátumként hasznosíthatnak például ammóniumot, nitrátokat, aminosavakat vagy karbamidokat. Megfelelő szénforrásként a mikroorganizmusok növekedési szubsztrátumként hasznosíthatnak például cukrokat, cukoralkoholokat, 2-4 szénatomos karbonsavakat vagy aminosavakat. Cukorként használhatók hexózok, mint glükóz vagy pentózok. Cukoralkoholként számításba jöhet például glicerin. 2-4 szénatomos karbonsavakként alkalmazható például ecetsav vagy propionsav. Aminosavakként számításba jöhetnek például leucin, alanin, aszparagin és hasonlók.
A szelektáláshoz és a tenyésztéshez alkalmazhatók a technika állásából ismert szokásos táptalajok, vagy használhatunk teljes táptalajt (élesztőextraktumot tartalmazó táptalajt), mint például élesztő táptalajt [„Nutrient Yeast Broth (NYB)]; előnyösen az 1. táblázatban említett tápközeget alkalmazzuk.
A tenyésztés és szelektálás során célszerűen a mikroorganizmusok hatásos enzimjeit indukáljuk. Enziminduktorként alkalmazhatók az (V) általános képletű ciklopenténszármazékok.
Szokásos módon a tenyésztés és szelektálás 20 és 40 °C közötti hőmérsékleten, előnyösen 30 °C-38 °C között, 5,5-8 pH-η, előnyösen 6,8 és 7,8 pH között történik.
Előnyösen a biotranszformációt olyan mikroorganizmusokkal végezzük, amelyek a ciklopenténszármazékok (1R,4S)-izomerjét egyetlen szénforrásként, egyetlen szén- és nitrogénforrásként vagy egyetlen nitrogénforrásként hasznosítják.
Előnyösen a biotranszformációt Alcaligenes/Bordetella, Rhodococcus, Arthrobacter, Alcaligenes, Agrobacterium/Rhizobium, Bacillus, Pseudomonas vagy Gordona, különösen Alcaligenes/Bordetella FB 188 (DSM 11172), Rhodococcus erythropolis CB 101 (DMS 10686), Arthrobacter sp. HSZ5 (DSM 10328), Rhodococcus sp. FB 387 (DSM 11291), Alcaligenes xyloxodans ssp. denitrificans HSZ17 (DSM 10329), Agrobacterium/Rhizobium HSZ30, Bacillus simplex K2, Pseudomonas putida K32 vagy Gordona sp. CB 100 (DSM 10687) fajtájú mikroorganizmusokkal, valamint ezek funkcionálisan egyenértékű variánsaival és mutánsaival végezzük. A DSM 10686 és a DSM 10687 mikroorganizmusokat 1996. május 20-án, a DSM 10328 és DSM 10329 mikroorganizmusokat 1995. november 6-án, a DSM 11291 mikroorganizmusokat 1996. október 8-án, továbbá a DSM 11172 mikroorganizmusokat 1996. szeptember 20-án helyezték letétbe a Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen nevű német mikroorganizmusgyűjteményben (Mascheroderweg 1b, D38124 Braunschweig) a Budapesti Megállapodás értelmében.
A „funkcionálisan ekvivalens variánsok és mutánsok” kifejezésen olyan mikroorganizmusokat értünk, amelyek lényegében azonos tulajdonságokkal és funkciókkal rendelkeznek, mint az eredeti mikroorganizmusok. Ilyen variánsok és mutánsok képződhetnek véletlenül, például UV-besugárzás hatására.
Az Alcaligenes/Bordetella FB 188 (DSM 11172) mikroorganizmusok taxonómiai leírása
Sejtalak Pálcika
Szélessége, pm 0,5-0,6
Hosszúsága, pm 1,0-2,5
HU 226 327 Β1
Mozgékonysága | + |
Ostorozottság | peritreális |
Gram-reakció | - |
Lízis 3%-os KOH-dal | + |
Aminopeptidáz (Cemy) | + |
Spórák | - |
Oxidáz | + |
Kataláz | + |
ADH (alkohol-dehidrogenáz) | - |
NO2 NO3-ból | - |
Denitrifikálás | - |
Ureáz | - |
Zselatinból történő hidrolízis | - |
Savak (OF-vizsgálati módszer) Glükózból | |
Fruktózból | - |
Arabinózból | - |
Adipátból | + |
Kaprátból | + |
Citrátból | + |
Malátból | + |
Mannitból |
Rhodococcus erythropolis CB 101 (DSM 10686) taxonómiai leírása
1. A kolóniák morfológiája és színe: rövid, elágazó fonalak, amelyek „pálcikákra és kokkuszokra esnek szét, a csillogó kolóniák részben elfolynak, beigerózsaszín árnyalattal, RAL 1001.
2. A peptidoglikánsokban lévő azonosított aminosavak: mezo-diamino-pimelinsav.
3. Mikolsavak: Rhodococcus-mikolsavak; a mikolsavlánchosszúság meghatározása (32-44 szénatomos), valamint a DSM-mikolsav-adatbankban lévő bejegyzésekkel való összehasonlítás alapján nagy hasonlóság mutatkozik a Rhodococcus erythropolis modelljével (hasonlóság: 0,588).
4. Zsírsavmodell: egyenes láncú, telített és telítetlen zsírsavak plusz tuberkulosztearinsav.
5. A törzs 16S rDNS parciális szekvenciájának vizsgálatánál nagy hasonlóságot (100%) lehetett találni a Rhodococcus erythropolis bizonyos régióiban lévő szekvenciákkal.
Az azonosítási eredmények egyértelműek, minthogy három egymástól független módszer (mikolsavak, zsírsavak, 16S rDNS) ezen törzset a Rhodococcus erythropolis fajtákhoz sorolta.
Gordona sp. CB 100 (DSM 10687) taxonómiai leírása
1. A kolóniák morfológiája és színe: rövid, elágazó láncú fonalak, amelyek idővel „pálcikákra” és kokkuszokra esnek szét, a telepek világos narancsszínűek, RAL 2008.
2. A peptidoglikánokban lévő azonosított aminosavak: mezo-diamino-pimelinsav.
3. Menachino típusa: MK-9 (H2) 100%.
4. Mikolsavak: Gordona-mikolsavak; a mikolsavak lánchosszúságának meghatározását (50-60 szénatomos) magas hőmérsékletű gázkromatográfiával végeztük; a vizsgálati eredmények összhangban állnak a Gordona fajták képviselőinél észlelt adatokkal.
5. Zsírsavmodell: egyenes láncú, telített és telítetlen zsírsavak plusz tuberkulosztearinsav.
6. A törzs 16S rDNS parciális szekvenciájának vizsgálatánál csak viszonylag kismértékű azonosságot (98%) lehetett találni a Gordona rubropertincta speciális régióiban észlelt szekvenciákkal.
Az így kapott eredmények alapján (Menachinone, mikolsavak, zsírsavak 168rDNS) az izolátumot ugyan egyértelműen a Gordona fajtához lehet hozzárendelni, azonban az eredmények alapján nem lehetséges az izolátumot egy ismert Gordona-féleséggel azonosítani. Így feltételezhető, hogy a DSM 10687 törzsnél egy új, eddig nem ismertetett Gordona fajtáról van szó.
Alcaligenes xylosoxydans ssp. denitrifikáns HSZ (DSM 10329) taxonómiai leírása A törzs tulajdonságai
Sejtforma Pálcika
Szélessége, pm 0,5-0,6
Hosszúsága, pm 1,5-3,0
Mozgékonysága +
Ostorozottság peritreális
Gram-reakció
3%-os KOH-dal való lízis +
Aminopeptidáz (Cerny) +
Spórák
Oxidáz +
Kataláz +
Anaerob szaporodás ADH (alkohol-dehidrogenáz) +
NO3-ból származó NO2 +
Denitrifikálás +
Ureáz
Hidrolízis
Zselatinból
Tween 80-ből Savak (OF-vizsgálati módszer)
Glükóz aerobból Xilóz 80-ból
Szu bsztrátumhasznos ítás
Glükózból
Fruktózból
Arabinózból
Citrátból +
Malátból +
Mannitból
Az Arthrobacter sp. HSZ5 (DSM 10328) taxonómiai leírása
Jellemzés Gram-pozitív szabálytalan pálcikák egy kifejezett pálcika-kokkusz szaporodási ciklussal; egyértelműen aerob; glükózból nem idéz elő sav- vagy gázképződést
Mozgékonyság
Spórák
Kataláz +
HU 226 327 Β1
Mezo-diamino-pimelinsav jelenléte a sejtfalban | nem | 5% 7% | — | |
Peptidoglikántlpus | A3a, L-Lys-L-Ser- | 10% | - | |
L-Thr-L-Ala | Lizozim táptalajban | + | ||
16S rDNS-szekvenciahasonlóság a legnagyobb varia- | 5 | Savak (ÁSS) | ||
bilitással rendelkező tartományok szek- | D-Glükózból | + | ||
venciájának vizsgálatából kitűnik, hogy | L-Arabinózból | + | ||
legnagyobb mértékű, | így 98,2%-os az | D-Xilózból | - | |
Arthrobacter pascens, | , A. ramosus és A. | D-Mannitból | + | |
oxydansszal mutatott hasonlóság. | 10 | D-Fruktózból | + | |
Fruktózból gázképződés | - | |||
Agrobacterium/Rhizobium HS30 taxonómiai leírása | Lecitináz | - | ||
Sejtforma | Pleomorf pálcikák | Hidrolízis | ||
Szélesség, pm | 0,6-1,0 | Keményítőből | + | |
Hosszúság, pm | 1,5-3,0 | 15 | Zselatinból | + |
Gram-reakció | - | Kazeinből | - | |
3%-os KOH-dal lízis | - | Tween 80-ból | + | |
Aminopeptidáz | + | Eszkulinból | - | |
Spórák | - | Citrát hasznosítása | + | |
Oxidáz | + | 20 | Propionát hasznosítása | - |
Kataláz | + | Nitritképződés nitrátból | + | |
Mozgékonyság | + | Indol | - | |
Anaerob körülmények között | Fenilalanin-dezamináz | - | ||
szaporodás | - | Arginin-dihidroláz | - | |
Nitrátból nitritképzés | - | 25 | A sejtben lévő zsírsavak analízise alapján a Bacil | |
Denitrifikálás | - | lus fajtához való besorolás megerősítést nyert. | ||
Ureáz | + | A 16S rDNS parciális szekvenciájának meghatáro | ||
Zselatinból történő hidrolízis | - | zása 100%-os hasonlóságot mutat a Bacillus simplex | ||
Savak | hez. | |||
L-Arabinózból | + | 30 | ||
Galaktózból | - | Pseudumonas putida K32 taxonómiai leírása | ||
Melezitózból | - | A sejt alakja | Pálcikák | |
Fukózból | + | Szélesség, pm | 0,8-0,9 | |
Arabitolból | - | Hosszúság, pm | 1,5-4,0 | |
Mannitból | - | 35 | Mozgékonyság | + |
Eritritből | - | Ostorozottság | poláros >1 | |
A lakmusztej lúgosítása | + | Gram-reakció | - | |
Ketolaktóz | - | 3%-os KOH-dal lízis | + | |
A 16S rDNS parciális szekvencia vizsgálata mint- | Aminopeptidáz | + | ||
egy 96%-os hasonlóságot mutat az Agrobacterium és | 40 | Spórák | - | |
Rhizobium fajták képviselőivel. Ezen fajták valamelyi- | Oxidáz | + | ||
kéhez történő egyértelmű hozzárendelés azonban nem | Kataláz | - | ||
lehetséges. | Anaerob körülmények közötti szaporodás | |||
Bacillus symplex K2 taxonómiai leírása | 45 | Pigmentek | ||
Sejtforma | Pálcika | Fluoreszkáló | + | |
Szélesség, pm | 0,8-1,0 | Piocianin | - | |
Hosszúság, pm | 3,0-5,0 | ADH | + | |
Spórák | - | Nitritképződés nitrátból | - | |
Ellipszoid alakú | - | 50 | Denitrifikálás | - |
Gömbölyű | - | Ureáz | - | |
Sporangium | - | Zselatin hidrolízise | - | |
Kataláz | + | Szubsztrátum hasznosítása | ||
Anaerob szaporodás | - | Adipátból | - | |
VP reakció | k. w. | 55 | Citrátból | + |
Maximális hőmérséklet | Malátból | + | ||
Szaporodás pozitív °C-nál | 40 | D-Mandelátból | + | |
Szaporodás negatív °C-nál | 45 | Fenil-acetátból | + | |
Szaporodás 5,7 pH-jú táptalajban | - | D-Tartarátból | - | |
NaCI 2% | + | 60 | D-Glükózból | + |
HU 226 327 Β1
Trehalózból Mannitból
Benzoil-formiát Propilénglikolból +
Butil-aminból +
Benzil-aminból +
Triptaminból
Acetamidból +
Hippurátból +
A sejtben lévő zsírsavak összetétele tipikus a Pseudomonas putida fajtájú mikroorganizmusoknál.
A 16S rDNS parciális szekvenciájának ellenőrzése 98%-os hasonlóságot mutat a Pseudomonas mendocina és a Pseudomonas alcaligenes szekvenciáival. A Pseudomonas putida szekvenciájával való hasonlóság 97,4%-ot tesz ki.
Rhodococcus sp. FB 387 (DSM 11291) taxonómiai leírása
1. A kolóniák morfológiája és színe: rövid elágazó fonalak, amelyek pálcikákká és kokkuszokká esnek szét, a kolóniák tompa, világospiros-narancs színűek RAL 2008.
2. A peptidoglikánsban lévő aminosav azonosítása: mezo-diamino-pimelinsav.
3. Mikolsavak: Rhodococcus-mikolsavak.
A mikolsav-lánchosszúság meghatározása (32-44 szénatomos), továbbá az adatoknak a DSMC-mikolsav-adatbank bejegyzéseivel való összehasonlítása igen csekély hasonlóságot mutat a Rhodococcus ruber törzsek összetételével (hasonlóság: 0,019). Ez a korrelációs faktor túl csekély a fajták azonosítására.
4. Zsírsavösszetétel: egyenes láncú, telített és telítetlen zsírsavak plusz tuberkulosztearinsav.
Ez a zsírsavmodelltípus jellemző a Rhodococcus fajtákra, valamint az ezzel rokon Mycobacterium, Nocardia és Gordona típusokra. Megkíséreltük a zsírsavösszetételben mutatkozó kvalitatív és kvantitatív különbségek alapján a fajtaszinten egy differenciálást elvégezni. A numerikus módszerek segítségével a Rhodococcus sp. FB 387 mikroorganizmus zsírsavmintáját összehasonlítottuk az adatbank bejegyzéseivel. Ezzel a módszerrel sem lehetett a Rhodococcus sp. FB 387-et egy bejegyzett Rhodococcus fajtával sem azonosítani az igen csekély hasonlóság alapján (0,063).
5. A 16S rDNS parciális szekvencia vizsgálatánál a törzs 96-818 szakaszát 97,9%-os korrelációval Rhodococcus opacushoz lehetett besorolni. Ez a szekvenciaazonosság messze 99,5% alatt van, ami pedig szükséges egy egyértelmű fajtameghatározáshoz.
A rendelkezésre álló adatok alapján abból indulunk ki, hogy a Rhodococcus sp. FB 387-es törzsnél egy új, eddig nem ismertetett Rhodococcus fajtáról van szó.
Ezen mikroorganizmus biotranszformációját szokásos tenyésztési módszerrel végezhetjük nyugvó állapotban lévő sejtekkel (már nem növekvő, azaz további szén- és energiaforrást már nem igénylő sejtekkel) vagy növekvő sejtekkel. Előnyösen a biotranszformációt nyugalomban lévő sejtekkel végezzük.
A biotranszformációhoz alkalmas N-acetil-amino-alkohol-hidroláz-aktivitással rendelkező enzimek elkülönítését végezhetjük például a fentiekben leírt mikroorganizmussejtek szakember számára jól ismert felszakításával. E műveletnél végezhetünk ultrahangos kezelést vagy alkalmazhatjuk a French-Press-módszert. Előnyösen a Rhodococcus erythropolis CB101 (DSM 10686) mikroorganizmusokból különítjük el a szükséges enzimeket.
A megfelelő penicillin G-acilázokat számos mikroorganizmusból, így például baktériumokból vagy Actinomycetesekből nyerjük, közelebbről a következő mikroorganizmusokból: Escherichia coli ATCC 9637, Bacillus megaterium, Streptomyces lavendulae ATCC 13664, Nocardia sp. ATCC 13635, Providencia rettgeri ATCC 9918, Arthrobacter viscosus ATCC 15294, Rhodococcus fascians ATCC 12975, Streptomyces phaechromogenes ATCC 21289, Achromobacter ATCC 23584 és Micrococcus roseus ATCC 416. Elsősorban a kereskedelemben beszerezhető penicillin G-acilázokat alkalmazzuk, mint Penicillin G-aciláz EC 3.5.11, amelyet E. coliból (Boehringer Mannheim) vagy Bacillus megateriumból nyernek ki.
Egy előnyös megoldást képez a rögzített penicillin G-acilázok alkalmazása.
A biotranszformáció végezhető a szakember számára jól ismert szokásos módszerekkel, mint például alacsony koncentrációjú foszfát-, citrát- vagy Hepespufferoldatban, vízben, teljes táptalajban, mint például „Nutrient Yeast Broth”-ban (NYB), vagy pedig az 1. táblázatban bemutatott összetételű táptalajban. Előnyösen a biotranszformációt az 1. táblázat szerinti táptalajban vagy alacsony koncentrációjú foszfátpufferoldatban végezzük.
Előnyösen a biotranszformációt az (V) általános képletű ciklopenténszármazéknak egyszeri vagy folyamatos hozzáadása közben végezzük, ahol a koncentráció a 10 tömeg%-ot, előnyösen 2 tömeg%-ot nem lépi túl.
Az elegy pH-ja a biotranszformáció alatt 5-9, előnyösen 6-8 pH-tartományban van. Előnyösen a biotranszformációt 20-40 °C, előnyösen 25-30 °C hőmérsékleten végezzük.
Az előállítás negyedik lépésében a (VI) vagy (VII) képletű ciklopenténvegyületet (Vili) képletű N-(2-amino-4,6-diklór-pirimidin)-5-il)-formamiddal reagáltatva (IX) vagy (X) képletű (1S,4R)- vagy (1R,4S)-4-[(2-amino-6-klór-5-formamido-4-pirimidinil)-amino]-2-ciklopentén-1-metanollá alakítjuk át.
Az N-(2-amino-4,6-diklór-pirimidin)-5-il]-formamid egy nemzetközi szabadalmi bejelentés WO 95/21 161 számú közrebocsátási iratában leírtak szerint állítható elő.
Előnyösen a negyedik lépésben történő átalakítást egy bázis jelenlétében végezzük. Bázisként alkalmazhatók szerves vagy szervetlen bázisok. Szerves bázisként használhatunk trialkil-amint. Trialkil-aminként szerepelhet például trietil-amin, tributil-amin, tribenzilamin, piridin vagy N-metil-pirrolidin. Szervetlen bázis6
HU 226 327 Β1 ként alkalmazhatók például alkálifém- vagy alkáliföldfém-karbonátok, illetőleg alkálifém- vagy alkáliföldfémhidrogén-karbonátok, mint például kálium-karbonát és nátrium-hidrogén-karbonát
Előnyösen a reakció negyedik lépését protonos oldószerben végezzük. Protonos oldószerként szerepelhetnek rövid szénláncú alifás alkoholok, mint metanol, etanol, propanol, izopropanol, butanol vagy izobutanol.
A reakció negyedik lépését előnyösen 0 °C és 150 °C közötti, előnyösen 20 °C és 100 °C közötti hőmérsékleten végezzük.
Az ötödik reakciólépésben az (1S,4R)- vagy (1R,4S)-4-[(2-amino-6-klór-5-formamido-4-pirimidinil)amino]-2-ciklopentén-1-metanolt [(IX), (X) képletű vegyület] ismert módon a WO 95/21161 számú közrebocsátási iratban leírtak szerint (I) vagy (II) képletű vegyületté ciklizáljuk.
Általában a ciklizálást a komponenseknek trialkilortoformátban való feloldása után koncentrált vizes sav jelenlétében végezzük. Trialkil-ortoformátként használhatunk például trimetil- vagy trietil-ortoformátot. Vizes savként szerepelhet például sósav, kénsav vagy metánszulfonsav.
1. példa (±)-2-Acetil-2-aza-blciklo[2.2.1]hept-5-én-3-on előállítása
100 g (±)-2-acabiciklo[2.2.1]hept-5-én-3-ont nitrogénatmoszférában 800 ml acetonitril és 161,26 ml piridin elegyében feloldunk. Az oldathoz 12 °C hőmérsékleten 104,5 g acetil-kloridot csepegtetünk mintegy 2 óra alatt. Az elegyet szobahőmérsékleten 4,5 óra hosszat keverjük. Ezután az elegyhez 800 ml vizet adunk, majd az acetonitrilt vákuumban ledesztilláljuk. A vizes fázist 400 ml etil-acetáttal háromszor extraháljuk. Az egyesített szerves fázisokat 400 ml n HCI-dal, 400 ml vízzel, 400 ml telített NaCI-oldattal mossuk, magnézium-szulfáttal szárítjuk, majd betöményítjük. A maradékot metilén-kloriddal felvesszük, kovasavgélen átszűrjük. A szűrletet betöményítjük, a kapott terméket desztillációval tisztítjuk. 107,76 g terméket kapunk tiszta folyadék formájában. Hozam: 71%.
Forráspont: 51 °C/9,33 Pa.
1H-NMR (CDCI3) 400 MHz: δ (ppm) 2,25 (AB syst.,
2H); 2,8 (s, 3H); 3,42 (m, 1H); 5,30 (m, 1H); 5,30 (m, 1H); 6,89 (m, 1H); 6,92 (m, 1H).
2. példa (±)-2-Butiril-2-aza-biciklo[2.2.1]hept-5-én-3-on előállítása
100,3 g (±)-2-aza-biciklo[2.2.1]hept-5-én-3-ont nitrogénatmoszférában 720 ml acetonitril és 142 ml piridin elegyében feloldunk. Az elegyhez 12 °C hőmérsékleten 1 óra alatt 141,8 g vajsav-kloridot csepegtetünk. A reakcióelegyet 3 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük. 720 ml víz hozzáadása után a fázisokat elkülönítjük. Az acetonitrilt vákuumban ledesztilláljuk, a vizes fázist 300 ml etil-acetáttal háromszor extraháljuk. Az egyesített szerves fázisokat 350 ml n HCI-dal, 400 ml telített NaCI-oldattal és 500 ml vízzel mossuk, magnézium-szulfáttal szárítjuk, majd teljesen betöményítjük. A kapott terméket desztillációval tisztítjuk. így 107,76 g terméket kapunk tiszta folyadék formájában. Hozam: 85%.
Forráspont: 70 °C/6,66 Pa.
1H-NMR (CDCI3) 400 MHz: δ (ppm) 0,98 (t, J=8,5 Hz,
3H); 1,58-1,76 (2H); 2,23 (AB syst, 2H); 2,82-2,90 (2H); 3,42 (m, 1H) 5,30 (m, 1H); 6,62 (m, 1H); 6,90 (m, 1H).
3. példa (±)-2-Fenil-acetil-2-aza-biciklo[2.2.1]-hept-5-én3-on előállítása
33,4 g (±)-2-aza-biciklo[2.2.1]hept-5-én-3-ont nitrogénatmoszférában 240 ml acetonitril és 48,3 ml piridin elegyében feloldunk. Az elegyhez 12 ’C hőmérsékleten 30 perc alatt 68,6 g fenil-ecetsav-kloridot csepegtetünk. Ezután az elegyet 3,5 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük. 240 ml víz hozzáadása után az acetonitrilt vákuumban ledesztilláljuk, majd a vizes fázist 150-150 ml etil-acetáttal háromszor extraháljuk. Az egyesített szerves fázisokat 150 ml n HCI-dal, 150 ml telített NaCI-oldattal, majd 150 ml vízzel mossuk, magnézium-szulfáttal szárítjuk, majd teljesen bepároljuk. Az így kapott nyersterméket kovasavgélen átszűrjük (hexán:etil-acetát=1:1). 78,34 g nyersterméket kapunk sárga színű olajos termék formájában.
4. példa (±)-2-Propionil-2-aza-biciklo[2.2.1 ]hept-5-én-3-on előállítása g (±)-2-aza-biciklo[2.2.1]hept-5-én-3-ont nitrogénatmoszférában 325 ml acetonitril és 41 ml piridin elegyében feloldunk. Az elegyhez 12 °C hőmérsékleten 1 óra alatt 43,9 g propionsav-kloridot csepegtetünk. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 5 óra hosszat keverjük. 145 ml víz hozzáadása után az acetonitrilt vákuumban ledesztilláljuk. A vizes fázist 115 ml etilacetáttal háromszor extraháljuk. Az egyesített szerves fázisokat 140 ml n HCI-dal, 40 ml telített NaHCO3-oldattal és 40 ml NaCI-oldattal mossuk, nátrium-szulfáttal szárítjuk, majd teljes mértékben betöményítjük. A maradékot desztillációval tisztítjuk. így 55,8 g cím szerinti vegyületet kapunk, ami állás közben megszilárdul. Hozam: 81,6%.
Forráspont: 75-80 °C/2,8-102 Pa.
Olvadáspont: 54-56 °C.
1H-NMR (CDCI3): δ (ppm) 400 MHz 0,95 (t, 3H);
2,10 (kvad, 1H); 2,28 (kvad, 1H); 2,64 (m, 2H); 3,42 (s, 1H); 5,16 (s, 1H); 6,78 (m, 1H); 6,96 (m, 1H).
5. példa (±)-2-lzobutiril-2-aza-biciklo[2.2.1]hept-5-én-3-on előállítása
45,1 g (±)-2-aza-biciklo[2.2.1]hept-5-én-3-ont nitrogénatmoszférában 310 ml acetonitril és 39 ml piridin elegyében feloldunk. Az oldathoz 10 °C hőmérsékleten 1 óra alatt 54,1 g izovajsav-kloridot csepegtetünk. A reakcióelegyet 5 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük. 140 ml víz hozzáadása után az acetonitrilt
HU 226 327 Β1 vákuumban ledesztilláljuk. A vizes fázist 120-120 ml etil-acetáttal négyszer extraháljuk. Az egyesített szerves fázisokat 50 ml n sósavval, 50 ml telített NaHCO3oldattal és 50 ml NaCI-oldattal mossuk, nátrium-szulfáttal szárítjuk, majd teljes mértékben betöményítjük. A maradékot visszafolyató hűtő alkalmazásával 240 ml n-hexánban aktív szén hozzáadásával forraljuk. Az aktív szenet szűréssel eltávolítjuk, a szűrletet 0 °C-ra lehűtjük, a kicsapódó cím szerinti vegyületet szűréssel elkülönítjük, (gy 54,5 g cím szerinti vegyületet kapunk. Hozam: 76%.
Olvadáspont: 41-42 °C.
1H-NMR (DMSO-d6): δ (ppm) 400 MHz 0,92 (d, 3H);
1,06 (d, 3H); 2,10 (m, 1H); 2,28 (m, 1H); 3,40 (m,
2H); 5,16 (s, 1H); 6,78 (m, 1H); 7,92 (m, 1H).
6. példa (±)-2-Klór-acetil-2-aza-biciklo[2.2.1 ]hept-5-én-3-on előállítása
10,1 g (±)-2-aza-biciklo[2.2.1]hept-5-én-3-ont nitrogénatmoszférában 10 °C hőmérsékleten 10 ml diklórmetán, 8,4 ml piridin és 0,22 g 4-N,N-dimetil-aminopiridin elegyében feloldunk. Az oldathoz 1 óra alatt
13,5 g klór-acetil-kloridot csepegtetünk. A hőmérséklet °C-ra emelkedik. Az elegyet szobahőmérsékleten 2 óra hosszat tovább keverjük. Az oldatot 100 ml vízzel elegyítjük. A fázisok elkülönítése után a vizes fázist 100 ml diklór-metánnal extraháljuk. Az egyesített szerves fázisokat nátrium-szulfáttal szárítjuk, majd teljes mértékben betöményítjük. A maradékot visszafolyató hűtő alkalmazásával 1 g aktív szén jelenlétében 100 ml diizopropil-éterben 10 percig forraljuk. Az elegyet forrón leszűrjük, a szűrletet szobahőmérsékletre lehűtjük, a szilárd anyagot szűréssel elkülönítjük, majd szárítjuk. 10,35 g cím szerinti vegyületet kapunk. Hozam: 60%.
Olvadáspont: 86-88 °C.
1H-NMR (CDCI3): δ (ppm) 400 MHz 2,28 (d, 1H);
2,40 (d, 1H); 3,48 (s, 1H); 4,56 (d, 2H); 5,30 (s, 1H);
6,70 (d, 1H); 6,94 (m, 1H).
7. példa (±)-1-Acetil-amino-4-(hidroxi-metil)-2-ciklopentén előállítása
79,56 g (±)-2-acetil-2-aza-biciklo[2.2.1]hept-5-én-3ont nitrogénatmoszférában 450 ml etanolban feloldunk, majd -10 °C hőmérsékletre lehűtjük. Részletekben perc alatt 19,8 g nátrium-bór-hidridet adunk az oldathoz.
A reakcióelegyet 0 °C hőmérsékleten 3 óra hosszat keverjük, majd koncentrált kénsavval a pH-t 1,8-es értékre állítjuk. Az elegyhez 200 ml etil-acetátot adunk, majd a szilárd anyagot szűréssel elkülönítjük. A szűrletet teljes mértékben betöményítjük. A maradékot vízzel felvesszük, metilén-kloriddal mossuk, majd betöményítjük. A nyersterméket kovasavgéllel végzett szűréssel tisztítjuk. így 51,83 g cím szerinti vegyületet kapunk fehér színű, szilárd anyag formájában. Hozam: 64% a kiindulási anyagként alkalmazott 2-acetil-2-aza-biciklo[2.2.1]hept-5-én-3-on-ra számítva.
1 H-NMR (DMSO-d6): δ (ppm) 400 MHz 1,18 (m,
1H); 1,78 (s, 3H); 2,29 (m, 1H); 2,66 (m, 1H); 3,35 (s, 2H); 4,58 (s, 1H); 4,72 (m, 1H); 5,61 (d, 1H);
5,85 (d, 1H); 7,83 (d, 1H).
8. példa (±)-1-Butiríl-amino-4-(hidroxi-metil)-2-ciklopentén előállítása
73,87 g (±)-2-butiril-2-aza-biciklo[2.2.1]hept-5-én-3ont nitrogénatmoszférában 400 ml etanolban feloldunk, majd -10 °C-ra lehűtjük. Az oldathoz kisebb adagokban 45 perc alatt 15,68 g nátrium-bór-hidridet adunk. A reakcióelegyet 0 °C hőmérsékleten 3 óra hosszat keverjük, majd koncentrált kénsavval a pH-t 1,5-es értékre állítjuk. Az elegyhez 200 ml etil-acetátot adunk, a szilárd anyagot szűréssel elkülönítjük. A szűrietet teljes mértékben betöményítjük, a maradékot vízzel felvesszük, metilénkloriddal mossuk, bepároljuk, majd magas vákuumban szárítjuk. 60,55 g terméket kapunk. Hozam: 80% a kiindulási anyagként felhasznált (±)-2-butiril-2-aza-biciklo[2.2.1 ]hept-5-én-3-on-ra számítva.
Olvadáspont: 71-72 °C.
1H-NMR (CDCI3): δ (ppm) 400 MHz 0,98 (t,
J=8,5 Hz, 3H); 1,40-1,50 (1H); 1,58-1,68 (2H);
2,10-2,18 (2H); 2,42-2,55 (1H); 2,85 (m, 1H); 3,62 (AB syst., 2H); 4,98 (m, 1H); 5,78-5,82 (2H); 6,38 (m, 1H).
9. példa (±)-1-(Fenil-acetil-amino)-4-(hidroxi-metil)-2ciklopentén előállítása g nyers (±)-2-fenil-acetil-2-aza-biciklo[2.2.1]hept5-én-3-ont nitrogénatmoszférában 450 ml etanolban feloldunk, majd az oldatot -10 °C hőmérsékletre lehűtjük. Az oldathoz részletekben 1 óra alatt 13,2 g nátrium-bórhidridet adunk. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten
3,5 óra hosszat keveijük, majd koncentrált kénsavval a pH-t 1,8-es értékre állítjuk. Ezen elegyet kovasavgélen átszűrve tisztítjuk (hexán:etil-acetát=2:8). Etil-acetáttal végzett átkristályosítás után 15,89 g fehér színű, szilárd terméket kapunk. Hozam: 80% a kiindulási anyagként alkalmazott (±)-2-fenil-acetil-2-aza-biciklo[2.2.1]hept-5én-3-on-ra számítva.
1H-NMR (CDCI3): δ (ppm) 400 MHz 1,28-1,35 (1H);
1,40 (m, 1H); 2,38-2,45 (1H); 2,79 (m, 1H); 3,50 (AB syst., 2H); 3,52 (s, 3H); 4,98 (m, 1H); 5,75 (m,
2H); 5,98 (m, 1H); 7,20-7,38 (5H).
10. példa (±)-1-PrOpionil-amino-4-(hidroxi-metll)-2ciklopentén előállítása
16,6 g (±)-2-propionil-2-aza-biciklo[2.2.1]hept-5-én3-ont nitrogénatmoszférában 140 ml víz és 66 ml 2-butanol elegyében feloldunk, majd az oldatot -5 °C hőmérsékletre lehűtjük. Az oldathoz részletekben 2 óra alatt 3 g nátrium-bór-hidridet adunk. Az elegyet 10 °C hőmérsékleten 2,5 óra hosszat keverjük, majd a pH-t koncentrált sósav és víz 1:1 térfogatarányú elegyével 2,2-es értékre állítjuk. Az oldatot 40 g mennyiségre betöményítjük, majd 2 n NaOH-oldattal a pH-t 6,2 értékre
HU 226 327 Β1 állítjuk. Az elegyet 50-50 ml diklór-metánnal ötször extraháljuk. Az egyesített szerves fázisokat teljes mértékben betöményítjük, a maradékot 150 ml toluollal átkristályosítjuk. Igy 11,1 g cím szerinti vegyületet kapunk. Hozam: 65%.
Olvadáspont: 67-68 °C.
1H-NMR (DMSO-d6): δ (ppm) 400 MHz 0,96 (t, 3H);
I, 16 (kvint., 1H); 2,04 (kvad., 2H); 2,26 (m, 1H);
2,66 (m, 1H); 3,34 (m, 2H); 4,58 (t, 1H); 4,72 (m,
1H); 5,61 (m, 1H); 5,84 (m, 1H); 7,72 (d, 1H).
II. példa (±)-1-lzobutiril-amino-4-(hidroxi-metil)-2ciklopentén előállítása g (±)-2-izobutiril-3-aza-biciklo[2.2.1]hept-5-én-3ont nitrogénatmoszférában 32 ml víz és 84 ml 2-butanol elegyében feloldunk, majd az oldatot 0 °C hőmérsékletre lehűtjük. Az oldathoz részletekben 3,5 óra alatt 1,37 g nátrium-bór-hidridet adunk. Az elegyet 20 °C hőmérsékleten 3 óra hosszat tovább keverjük, majd koncentrált sósav és víz 1:1 térfogatarányú elegyével a pH-t 2,5-es értékre állítjuk, ezután az elegyet 2 n NaOH segítségével semlegesítjük. Az oldatot 40 g mennyiségre betöményítjük. A maradékot 80-80 ml diklór-metánnal háromszor extraháljuk. Az egyesített szerves fázisokat teljes mértékben betöményítjük. Az így kapott szilárd anyagot 25 ml toluollal átkristályosítjuk. 6,8 g cím szerinti vegyületet kapunk. Hozam: 73,6%. Olvadáspont: 80-81 °C.
1H-NMR (DMSO-d6): δ (ppm) 400 MHz 0,98 (d, 6H);
1,16 (kvint., 1H); 2,30 (m, 2H); 2,68 (m, 1H); 3,32 (t,
2H); 4,58 (t, 1H); 4,70 (m, 1H); 5,61 (m, 1H); 5,82 (m, 1H); 7,68 (d, 1H).
12. példa (1R,4S)-1-Amino-4-(hidroxi-metil)-2-ciklopentén előállítása penicillin G-aciláz alkalmazásával A biotranszformációhoz 165 U (egységj/g E. coliból származó penicillin G-aciláz EC 3.5.1.11-et (Boehringer Mannheim) vagy Bacillus megateriumból származó penicillin G-aciláz EC 3.5.1.11-et alkalmazunk. 50 mmol/l nátrium-foszfát-pufferoldatot (pH=5—9; 4 ml) 1 tömeg% nem racém N-fenil-acetil-1amino-4-hidroxi-metil-2-ciklopenténnel és 400 mg megfelelő penicillin G-acilázzal 37 °C hőmérsékleten inkubálunk.
Meghatározott időközökben mintákat veszünk le, és vékonyréteg-kromatográfiával (kovasavgél 60, butanol:víz:jégecet=3:1:1; kimutatás ninhidrinnel), gázkromatográfiával (kapillárisoszlop, HP-5, 5% fenil-metilsziloxán) vagy HPLC-vel analizáljuk. Az enzim a fenilacetil-csoportot nagy aktivitással felszakítja, így 40% megfelelő amino-alkohol szabadul fel. A szabad amino-alkoholt 80% ee-értékkel kapjuk.
13. példa (1R,4S)-1-Amino-4-(hidroxi-metil)-2-ciklopentén előállítása mikroorganizmusok segítségével
13.1 A Visp-i ARA vízderítő létesítményből derítőiszapot veszünk ki (20%), ezt A+N táptalajjal elegyítjük (lásd az 1. táblázatot), ahol a táptalaj 0,5% N-acetil-, Ν-propionil-, N-izobutiril-vagy N-butiril-1-amino4-hidroxi-metil-2-ciklopentént tartalmaz, majd az elegyet rázás közben 37 °C hőmérsékleten inkubáljuk. Az (1R,4S)-1-amino-4-(hidroxi-metil)-2-ciklopentén képződését vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálattal követjük.
Ezen bedúsult táptalajból 1%-ot 1-3-szor átoltunk, és szilárd táptalajon (Plate Count Agar táptalajban,
1. táblázat; 20 g/l) szétoszlatjuk. Ily módon az Alcaligenes/Bordetella FB 188 (DSM 1172), Rhodococcus erythropolis CB 101 (DSM 10 686), Gordona sp. CB 100 (DSM 10 687) és a Rhodococcus sp. FB 387 (DSM 11 291) mikroorganizmusokat lehetett elkülöníteni.
13.2 Az ily módon elkülönített mikroorganizmusokat az 1. táblázatban feltüntetett táptalajban tenyésztjük, a táptalaj 0,5% N-acetil-, Ν-propionil-, N-izobutiril- vagy N-butiril-1 -amino-4-hidroxi-metil-2-ciklopentént tartalmaz. A tenyésztést 24-36 órán át folytatjuk, amíg egy 2-3-as optikai sűrűséget (OD) el nem érünk. Az így kapott sejteket a késői exponenciális növekedési fázisban elkülönítjük és 10 mmol/l foszfátpufferoldattal mossuk.
Az ezt követő biotranszformációt 4,5-9-es pH-jú, 50 mmol/l koncentrációjú foszfátpufferben végezzük, ahol a pufferoldat 1 tömeg% Ν-acetil-, N-izobutiril- vagy N-butiril-1-amino-4-hidroxi-metil-2ciklopentént tartalmaz. A vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálat alapján megállapítható volt, hogy a szubsztrátum 50%-a (1R,4S)-1-amino-4-(hidroximetil)-2-ciklopenténné alakult hidrolízis révén. A HPLC analízis szerint az ee-értékek 80 és 93 között vannak.
Amennyiben szubsztrátumként N-butiril-1-amino-4hidroxi-metil-2-ciklopentént alkalmazunk, úgy a biotranszformáció sebessége 0,14 (g/l/h/OD) a DSM 10 686 jelzésű törzs esetében, amennyiben a tenyésztést A+N táptalajon végeztük, a biotranszformáció sebessége 0,03 (g/l/h/OD), amennyiben a tenyésztést NYB („Nutrient Yest Broth”) táptalajon végeztük, (ahol a táptalaj N-butiril-1-amino-4-hidroximetil-2-ciklopentént tartalmazott).
Amennyiben a tenyésztést a DSM 10 687 jelzésű törzzsel végeztük, és a szubsztrátum koncentrációja (N-butiril-1 -amino-4-hidroxi-metil-2-ciklopentén) 200 mmol/l volt, úgy a biotranszformáció sebessége 0,161 (g/l/h/OD).
1. táblázat A+N táptalaj
MgCI2 | 0,4 g/l |
CaCI2 | 0,014 g/l |
FeCI3 | 0,8 mg/l |
Na2SO4 | 0,1 g/l |
KH2PO4 | 1 g/l |
Na2HPO4 | 2,5 g/l |
HU 226 327 Β1
1. táblázat (folytatás)
NaCI | 3 g/l |
Vitaminoldat | 1 ml/l |
Nyomelemoldat | 1 ml/l |
pH=7,5 |
13.3 Rhodococcus erythropolis DSM 10 686 jelzésű törzset tenyésztünk 6 l-es térfogatú fermentorban minimál táptalajon (lásd a 2, táblázatot), amely táptalaj szén-, illetőleg nitrogénforrásként ammóniumacetátot tartalmaz, a tenyésztést 30 °C hőmérsékleten 650>25 OD sejtsűrűségig végezzük. A tenyésztés alatt folyamatosan további szénforrásként 50%-os ecetsavat adunk az elegyhez. Az enzimatikus tevékenység indukálásához azután 60 g (±)-Nacetil-1-amino-4-hidroxi-metil-2-ciklopentént adunk az elegyhez, majd az inkubálást néhány óra hosszat tovább folytatjuk. Végül még egyszer 40 g (±)-N-acetil-1-amino-4-hidroxi-metil-2-ciklopentént adunk az elegyhez, majd az inkubálást további 10 óra hosszat folytatjuk. A bioátalakulás lefutását egyidejűleg on-line HPLC vizsgálattal követjük. Amikor az analitikai hozam a 40%-ot eléri a felhasznált racém szubsztrátumra vonatkozóan, és 85%-os ee-értéket kapunk, akkor a fermentációt sav hozzáadásával leállítjuk.
2. táblázat Táptalaj összetétele
Komponensek | Koncentráció |
Élesztőextraktum | 0,5 g/l |
Pepton M66 | 0,5 g/l |
KH2PO4 | 4,0 g/l |
Na2HPO4.2 H2O | 0,5 g/l |
K2SO4 | 2,0 g/l |
NH4-acetát | 3,0 g/l |
Cacl2 | 0,2 g/l |
MgCI2.6 H2O | 1,0 g/l |
Nyomelemoldat (lásd az alábbiakban) | 1,5 mg/l |
PPG (polipropilénglikol) | 0,1 g/l |
Nyomelemoldat | |
KOH | 15,1 g/l |
EDTA.Na2.2 H2O | 100,0 g/l |
ZnSO4.7 H2O | 9,0 g/l |
MnCI2.4 H2O | 4,0 g/l |
h3bo3 | 2,7 g/l |
CoCI2.6 H2O | 1,8 g/l |
CuCI2.2 H2O | 1,5 g/l |
NíCI2.6 H2O | 0,18 g/l |
Na2MoO4.2 H2O | 0,27 g/l |
13.4 A 13.3 példában leírtak szerint eljárva az Arthrobacter sp. HSZ 5 (DSM 10 328), Rhodococcus sp FB387 (DSM 11 921), az Alcaligenes xylosoxydans ssp. denitrificans HSZ 17 (DSM 10 329), Agrobacterium/Rhizobium HSZ 30, Bacillus simplex K2 és Pseudomonas putida K32-t tenyésztünk nátrium-acetát-tartalmú táptalajban (lásd az 1. táblázatot), a tenyésztést N-acetil-, Ν-propionil-, N-izobutiril- vagy N-butiril-1-amino-4-hidroxi-metil-2ciklopentén jelenlétében vagy a nélkül végezzük (a továbbiakban a vegyületeket röviden amino-alkoholként említve).
Az amino-alkohol nélkül végzett tenyésztésnél az exponenciális sejtszakaszban az alábbi eredményeket kaptuk (HPLC analízis eredményei).
Törzs | Termelékenység ee-érték/átalakulás | |
(mmol/OD-h) | (%-ban) | |
HSZ 5 | ||
(DSM 10328) | 0,05 | 88,7/16 |
HSZ 17 | ||
(DSM 10329) | 0,005 | 95/23 |
K32 | 0,05 | 54/1 |
CB101 | ||
(DSM 10686) | 0,1 | 84/39 |
K2- és K17-es törzseket tenyésztünk, ezeket elkülönítjük, és 60 óra hosszat tartó biotranszformációhoz használjuk.
Törzs Termelékenység ee-érték/átalakulás (mmol/OD-h) (%-ban)
K2 | - | 92/10 |
HSZ 30 | - | 93/3,5 |
Minden egyes tételből exponenciális és stacionáris sejteket különítünk el, majd nyugvó sejtekként a biotranszformációhoz használjuk. A DC-analízissei nem lehetett különbséget megállapítani az amino-alkohollal indukált vagy nem indukált sejttenyészeteknél a kezdeti átalakítási rátában.
14. példa
Rhododoccus erythropolis CB101 (DSM 10686) tenyészetből származó N-acetil-amino-alkoholhidroláz tisztítása
Az enzimet az alábbiakban leírtak szerint tisztítjuk, mindaddig, amíg az SDS-PAGE-ban (Pharmacia Phast Gél, 10-15%-os gradiens) már csak egy 50 kD molekulatömegű fehérjesáv figyelhető meg.
Rhodococcus erythropolis CB101 (DSM 10686) sejteket 50 mmol trisz-pufferoldatban (pH=6,2) mosunk, és 190 optikai sűrűségig (OD650nm) betöményítjük. Fenil-metánszulfonil-fluoridot (PMSF) adunk az oldathoz, melynek végső koncentrációja 1 mmol/l, majd a sejteket French-Press-szel kezeljük, így nyers extraktumhoz jutunk. Centrifugálást követően 200 ml sejtmentes extraktumot kapunk, amelyben a fehérjekoncentráció 4,8 mg/ml.
960 mg sejtmentes extraktumot viszünk fel HiLoad 26/10 Q-Sepharose-loncserélő kromatográfiás oszlopra (Pharmacia), ahol az oszlopot 50 mmol/l trisz-pufferoldattal (pH=8,0) egyensúlyozzuk ki, amely pufferoldat 1 mmol/l ditiotreitolt (DTT) tartalmaz.
HU 226 327 Β1
Az oszlopot ugyanezen pufferoldattal mosva a fehérjéket egy lineáris puffergradienssel eluáljuk [1500 ml; gradiens: 50 mmol/l trisz-puffer (pH=8,0), amely 1 mmol/l DTT-t tartalmaz - 50 mmol/l trisz-puffer (pH=7,0), amely 1 mmol/l DTT-t és 1 mol/l NaCI-ot tartalmaz]. Az enzim az oszlopról 370 és 430 mmol/l nátrium-klorid között eluálódik 7,6-es pH-nál. Az aktív frakciókat egyesítjük, és 9 ml-re betöményítjük. A fehérjetartalom 41 mg-ot tesz ki.
További tisztítás céljából a fehérjeoldatot olyan gélfiltrációs kromatográfiás oszlopra (HILoad 26/60 Superdes 75 (Pharmacia) visszük fel, amely az oszlopot 50 mmol/l NaCI-ot és 1 mmol/l DTT-t tartalmazó 50 mmol/l trisz-pufferrel egyensúlyoztuk ki. Az aktív frakciókat egyesítjük, az összfehérje-tartalom: 10,9 mg.
Ezen fehérjeoldatot Mono Q HR5/5 oszlopra (Pharmacia) visszük fel, ahol az oszlopot előzőleg 1 mmol/l DTT-tartalmú 50 mmol/l trisz-pufferrel (pH=8,5) egyensúlyoztuk ki. A fehérjeeluáláshoz lineáris gradienst (40 ml) használunk, 1 mmol/l DTT-t tartalmazó 50 mmol/l trisz-pufferoldat (pH=8,5)—1 mmol/l DTT-t és 1 mol/l NaCI-ot tartalmazó 50 mmol/l trisz-pufferoldat (pH=8,5) formájában. Az enzim 390 mmol/l NaCI és 440 mmol/l NaCI között eluálódik. Az aktív frakciók
1,4 mg fehérjét tartalmaznak.
Az utolsó tisztítási lépéshez fenti pufferrel kiegyensúlyozott fenti oszlopot használunk. Az eluáláshoz gradiensként 0-500 mmol/l NaCI-ot tartalmazó azonos puffért használunk (pH=7,0-8,5). Ily módon 430 pg tiszta enzimet lehetett izolálni.
Az enzim N-terminális szekvenciáját közvetlenül a fehérjesávról határozzuk meg. A szekvencia az alábbi 20 aminosavat tartalmazza: Thr-Glu-GIn-Asn-Leu-HisTrp-Leu-Ser-Ala-Thr-Glu-Met-Ala-Ala-Ser-Val-Ala-SerAsn.
Ez a szekvencia az ismert fehérjékkel semmilyen homológiát nem mutat.
15. példa
Az enzim jellemzése
Az enzim jellemzését elvégeztük a tisztított enzimmel, valamint a sejtmentes extraktummal, amit Sephadex G-25 oszlopon (PD-10, Pharmacia) sómentesítettünk.
A sejtmentes extraktum fehérjekoncentrációja
7,3 mg/ml, a tisztított enzim fehérjekoncentrációja 135 pg/ml volt. A sejtmentes extraktumhoz nem adtunk PMSF-et.
15.1 Km-meghatározás
A Km-rneghatározást sejtmentes extraktumban végezzük. Az N-acetil-1-amino-4-hidroxi-metil-2ciklopentén-szubsztrátumra vonatkozóan a 7,0 pH-nál végbemenő reakció Km-értéke 30 °C hőmérsékleten 22,5 mmol.
15.2 pH-optimum
Az N-acetil-1 -amino-4-hidroxi-metil-2-ciklopentén hidrolízisénél (25 mmol) a pH-optimumot a tisztított enzimmel és sejtmentes extraktummal 6,2-9,0 pH-tartományban az alábbi pufferoldattal határoztuk meg.
Trisz-puffer: 100 mmol/l, pH=9,0; 8,5; 8,0; 7,5; 7,0.
Citrát-foszfát-puffer 100 mmol/l, pH=7,0; 6,55; 6,2.
Az aktivitást 24 óra hosszat mértük.
A reakció pH-optimuma 7,0 és 7,5 pH között volt az
1R,4S- és az 1S,4R-enantiomerek képződésénél.
A sejtmentes extraktumban a pH-optimum az aktivitás szempontjából 7,0. A szelektivitás azonban kedvezőbb 6,0 és 7,0 pH között.
Az 1. ábra szemlélteti a Rhodococcus erythropolis
CB 101-ből (DSM 10 686) nyert N-acetil-amino-alkohol-hidroláz (sejtmentes extraktum) aktivitásának a pH-értéktől való függését.
15.3 A 15.2 példánál megadott reakció számára a hőmérséklet-optimum 25 és 30 °C között van.
A 2. ábra szemlélteti a Rhodococcus erythropolis
CB 101-ből (DSM 10 686) származó N-acetil-amino-alkohol-hidroláz (sejtmentes extraktum) aktivitását a hőmérséklet függvényében.
15.4 A móltömeget 50 kD-ben határoztuk meg az SDSPAGE szerint.
15.5 Szubsztrátumként az alábbi vegyületeket hidrolizáltuk: N-acetil-1-amino-4-hidroxi-metil-2-ciklopentén, N-butiril-1-amino-4-hidroxi-metil-2-ciklopentén, N-propionil-1-amino-4-hldroxi-metil-2-ciklopentén, N-izobutiril-1-amino-4-hidroxi-metil-2-ciklopentén, N-izobutil-1-amino-4-hidroxi-metil-2-ciklopentén.
16. példa (1R,4S)-1-Amino-4-(hidroxi-metil)-2-ciklopenténhidroklorid előállítása
374,1 g (1 R,4S)-1-amino-4-hidroxi-metÍI-2ciklopentén-oldatot (előállítása a 13. példában leírtak szerint) 123,7 g-ra betöményítünk. Az oldat
60,2 mmol/l koncentrációban a fenti vegyületet (HPLC) tartalmazza, az oldat pH-ját 30%-os NaOH-oldattal 2-es pH-ról 11,7-es értékre állítjuk, majd az oldatot 70-70 ml izobutanollal háromszor extraháljuk. Az egyesített izobutanolextraktumok pH-ját gáz alakú sósavval 1-es értékre állítjuk, az oldatot 65 g-ra betöményítjük, majd szűrjük (a szilárd szennyeződések eltávolítása). A szűrlethez 20 °C hőmérsékleten alapos keverés közben 60 ml acetont csepegtetünk. A zavaros elegyet a cím szerinti vegyület kristályaival beoltjuk, majd 1 óra hosszat 5 °C hőmérsékleten keverjük. Szűrés és szárítás után 5,2 g cím szerinti vegyületet kapunk. Hozam: 58%.
Olvadáspont: 125-127 °C.
ee-érték 98% (hitelesített királis HPLC oszlop).
1 H-NMR (DMSO-d6): δ (ppm) 400 MHz 1,44 (m,
1H); 2,35 (m, 1H); 2,83 (m, 1H); 3,42 (m, 2H); 4,10 (s, 1H); 4,80 (s, 1H); 5,80 (d, 1H); 6,06 (d, 1H); 8,13 (s, 3H).
17. példa (1R,4S)-1 -[(2-Amino-6-klór-5-formamido-pirimidin4-il)-amino]-4-(hidroxi-metil)-2-ciklopentén előállítása
2,07 g N-(2-amino-4,6-diklór-pirimidin-5-il)-formamidot 40 ml izobutanollal elegyítünk, az elegyet 80 °C-ra felmelegítjük (fehér szuszpenzió). Az elegy11
HU 226 327 Β1 hez 1,97 g (1R,4S)-1-amino-4-hidroxi-metil-2ciklopentén-hidrokloridot, 3,8 g trietil-amint és 15 ml izobutanolt adunk. Az elegyet 80 °C hőmérsékleten 13 óra hosszat tovább keverjük. A tiszta oldathoz 20 °C hőmérsékleten 10 ml n NaOH-ot adunk, majd az elegyet szárazra betöményítjük. A maradékot flashkromatográfiának vetjük alá (kovasav 60-oszlop, hosszúság: 8 cm, átmérő: 6,5 cm, eluálószer: etil-acetát/metanol 95:5). Az oldószert ledesztillálva és a maradékot szárítva 2,1 g cím szerinti vegyületet kapunk. Hozam: 74%. Olvadáspont: 174-176 °C.
ee-érték 98% (hitelesített királis HPLC oszlop). 1H-NMR (DMSO-dg) 400 MHz: δ (ppm) 1,37 (m,
1H); 2,35 (m, 1H); 2,37 (m, 1H); 3,38 (t, 2H); 4,68 (m, 1H); 5,08 (m, 1H); 5,70 (d, 1H); 5,85 (d, 1H); 6,40; 6,55 és 6,65 (s, d és d, együtt 3H); 7,78 és 8,10 (d és s, együtt 1H); 8,55 és 8,95 (d és s, együtt 1H).
18. példa (1R,4S)-1-[(2-Amino-6-klór-5-formamldo-pirimidin4-il)-amino]-4-(hidroxi-metil)-2-ciklopentén előállítása
145,2 ml 13. példa szerint előállított (1R,4S)-1amino-4-hidroxi-metil-2-ciklopentén-oldatot 25,5 ml térfogatra betöményítünk, majd az oldatot Celiten leszűrjük. A szűrőn maradt szilárd anyagot 7,5 ml vízzel mossuk. A szűrlet 17,7 mmol fenti vegyületet tartalmaz (HPLC); a szűrlet pH-ját sósavval 6,6-es értékről 1-es pH-ra állítjuk, majd az oldatot 20 ml izobutanollal extraháljuk. A szerves fázist elöntjük. A vizes fázis pH-ját 30%-os NaOH-oldattal 12-es értékre állítjuk, majd
10-10 ml izobutanollal háromszor extraháljuk. Az egyesített szerves fázisokat 15 ml térfogatra betöményítjük, ehhez 2,53 g trietil-amint adunk. Az elegyhez a 24. példához hasonlóan 2,07 g N-(2-amino-4,6-diklórpirimidin-5-il)-formamidnak 40 ml etanollal készült oldatát adjuk. Az elegyet 80 °C hőmérsékleten 16 óra hosszat keverjük. A feldolgozást a 22. példában leírtak szerint végezzük, (gy 2,4 g cím szerinti vegyülethez jutunk. Hozam: 85%.
A termék fizikai és spektroszkópiai adatai megegyeznek a 17. példában megadottakkal.
Claims (8)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Eljárás az (I) vagy (II) képletű (1S,4R)- vagy (1 R,4S)-4-(2-amino-6-klór-9H-purin-9-il)-2-ciklopentén1-metanol vagy e vegyületek sóinak előállítására, azzal jellemezve, hogy az- első lépésben a (III) képletű (±)—2-aza-biciklo[2.2.1]hept-5-én-3-ont a (IV) általános képletű (±)-2-aza-biciklo[2.2.1]hept-5-én-3-on-származékká acilezzük - e képletbenR1 jelentése 1-4 szénatomos alkil- vagy 1-4 szénatomos alkoxicsoport, benzil-, fenil-, benzil-oxi- vagy fenil-oxi-csoport -, majd a- második lépésben a kapott vegyületeket (V) általános képletű cikfopenténszármazékká redukáljuk, ahol a képletben R1 jelentése a fenti; majd a- harmadik lépésben a kapott vegyületeket N-acetil-amino-alkohol-hidroláz hatású enzimet termelő mikroorganizmus segítségével, amely képes az (V) általános képletű származékot egyetlen nitrogén- vagy egyetlen szénforrásként, vagy egyetlen szén- és nitrogénforrásként hasznosítani, vagy penicillin G-aciláz segítségével a (VI) vagy a (VII) képletű (1R,4S)- vagy (1S,4R)-1-amino-4(hidroxi-metil)-2-ciklopentén-vegyületekké alakítjuk, majd a- negyedik lépésben a fentiek szerint kapott vegyületet a (Vili) képletű N-(2-amino-4,6-diklórpirimidin)-5-il)-formamiddal a (IX) vagy a (X) képletű (1S.4R)- vagy (1R,4S)-4-[(2-amino-6-klór-5formamido-4-pirimidinil)-amino]-2-ciklopentén-1metanollá alakítjuk, végül az- ötödik lépésben az így kapott vegyületeket az (I) vagy a (II) képletű vegyületté ciklizáljuk.
- 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az első lépésben történő acilezést a (XI) általános képletű karbonsav-halogeniddel végezzük, ahol a képletben R1 jelentése 1-4 szénatomos alkil- vagy 1-4 szénatomos alkoxicsoport, benzil-, fenil-, benziloxi- vagy fenil-oxi-csoport, és X jelentése halogénatom, vagy az acilezést egy (XII) általános képletű karbonsavanhidriddel végezzük, ahol a képletben R1 jelentése a fentiekben megadottal azonos.
- 3. Az 1. vagy 2. Igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az első lépésben történő acilezést aprotonos oldószerben, és a második lépésben történő redukciót protonos oldószerben végezzük.
- 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a második lépésben a redukciót alkálifém- vagy alkáliföldfém-bór-hidriddel, alkálifémvagy alkáliföldfém-alumínium-hidriddel vagy vitriddel végezzük.
- 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a harmadik lépésben történő átalakítást Rhodococcus, Gordona, Arthrobacter, Alcaligenes, Agrobacterium/Rhizobium, Bacillus, Pseudomonas vagy Alcaligenes/Bordetella mikroorganizmusokkal végezzük.
- 6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a harmadik lépésben történő átalakítást Bacillus megaterium vagy Escherichia coli mikroorganizmusokból nyert penicillin G-acilázzal végezzük.
- 7. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a harmadik lépésben a biotranszformációt 20-40 °C hőmérsékleten és 5-9 közötti pH-η végezzük.
- 8. Az 1-7. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a negyedik lépésben történő átalakítást egy bázis jelenlétében protonos oldószerben végezzük.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CH111697 | 1997-05-13 | ||
CH274097 | 1997-11-27 |
Publications (4)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
HU9801083D0 HU9801083D0 (en) | 1998-07-28 |
HUP9801083A2 HUP9801083A2 (hu) | 1999-11-29 |
HUP9801083A3 HUP9801083A3 (en) | 2001-09-28 |
HU226327B1 true HU226327B1 (en) | 2008-08-28 |
Family
ID=25686703
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
HU9801083A HU226327B1 (en) | 1997-05-13 | 1998-05-13 | Process for producing (1s,4r)- or (1r,4s)-4-(2-amino-6-chloro-9h-purin-9-yl)-2-cyclopentene-1-methanol |
Country Status (17)
Country | Link |
---|---|
US (4) | US6156893A (hu) |
EP (2) | EP0878548B1 (hu) |
JP (3) | JP4540136B2 (hu) |
KR (2) | KR100577886B1 (hu) |
CN (2) | CN1302116C (hu) |
AT (1) | ATE275206T1 (hu) |
CA (1) | CA2237297C (hu) |
CZ (3) | CZ297887B6 (hu) |
DE (1) | DE59811884D1 (hu) |
DK (1) | DK0878548T3 (hu) |
ES (1) | ES2223095T3 (hu) |
HK (1) | HK1092782A1 (hu) |
HU (1) | HU226327B1 (hu) |
NO (1) | NO324679B1 (hu) |
PL (1) | PL197848B1 (hu) |
PT (1) | PT878548E (hu) |
SK (3) | SK285228B6 (hu) |
Families Citing this family (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DK0705263T3 (da) * | 1993-06-21 | 1997-05-05 | Merrell Pharma Inc | Carbocycliske nukleoside midler anvendelige som selektive inhibitorer af proinflammatoriske cytokiner |
GB9717928D0 (en) * | 1997-08-22 | 1997-10-29 | Glaxo Group Ltd | Process for the enatioselective hydrolysis of n-derivatised lactams |
GB9721780D0 (en) * | 1997-10-14 | 1997-12-10 | Glaxo Group Ltd | Process for the synthesis of chloropurine intermediates |
SK284416B6 (sk) * | 1997-11-27 | 2005-03-04 | Lonza Ag | Spôsob výroby derivátov aminoalkoholov |
SK285795B6 (sk) | 1998-12-23 | 2007-08-02 | Lonza Ag | Spôsob výroby enantiomérne obohatených derivátov 1-amino-4-(hydroxymetyl)-cyklopent-2-énu |
DK1648851T4 (da) * | 2003-07-25 | 2011-12-19 | Prometic Biosciences Inc | Fremstilling af metalsalte af fedtsyrer med mellemlange kæder |
DE102005061756B4 (de) | 2005-12-21 | 2008-01-03 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Verbessertes Verfahren zur Herstellung von Ramipril |
US8236853B1 (en) | 2007-12-03 | 2012-08-07 | University Of South Florida | Formation of cyclopentene nitro-ester and derivatives |
WO2012099904A1 (en) | 2011-01-18 | 2012-07-26 | General Atomics | Hydrolase enzyme substrates and uses thereof |
CN102557990B (zh) * | 2011-04-25 | 2014-06-25 | 开原亨泰制药股份有限公司 | (1s,4r)n-叔丁氧羰基-4-氨基-2-环戊烯-1-羧酸甲酯的制备方法 |
Family Cites Families (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4950758A (en) * | 1988-01-20 | 1990-08-21 | Regents Of The University Of Minnesota | Optically-active isomers of dideoxycarbocyclic nucleosides |
US4931559A (en) * | 1988-01-20 | 1990-06-05 | Regents Of The University Of Minnesota | Optically-active isomers of dideoxycarbocyclic nucleosides |
MY104575A (en) * | 1989-12-22 | 1994-04-30 | The Wellcome Foundation Ltd | Therapeutic nucleosides. |
CA2055086A1 (en) * | 1991-02-12 | 1992-08-13 | Chikara Kaneko | Cyclopentene derivatives and their use |
US5200527A (en) * | 1991-04-08 | 1993-04-06 | Lonza Ltd. | Process for the production of 2-azabicyclo [2.2.1] hept-5-en-3-one |
GB9204015D0 (en) * | 1992-02-25 | 1992-04-08 | Wellcome Found | Therapeutic nucleosides |
GB9205071D0 (en) * | 1992-03-09 | 1992-04-22 | Wellcome Found | Therapeutic nucleosides |
GB9217823D0 (en) * | 1992-08-21 | 1992-10-07 | Glaxo Group Ltd | Chemical process |
JPH06116217A (ja) * | 1992-10-02 | 1994-04-26 | Kuraray Co Ltd | (±)−シス−4−アミノシクロペント−2−エンカルボン酸誘導体の光学分割法 |
GB9402161D0 (en) * | 1994-02-04 | 1994-03-30 | Wellcome Found | Chloropyrimidine intermediates |
WO1997045529A1 (de) * | 1996-05-30 | 1997-12-04 | Lonza Ag | Verfahren zur herstellung von aminoalkoholen und derivaten davon |
GB9625455D0 (en) * | 1996-12-07 | 1997-01-22 | Glaxo Group Ltd | Process for resolving mixtures of carbocyclic steroisomers |
-
1998
- 1998-05-04 SK SK53-2005A patent/SK285228B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1998-05-04 SK SK589-98A patent/SK284810B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1998-05-04 SK SK54-2005A patent/SK285229B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1998-05-06 US US09/073,553 patent/US6156893A/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-05-11 CZ CZ20060694A patent/CZ297887B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-05-11 CZ CZ0145898A patent/CZ297894B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-05-11 CA CA002237297A patent/CA2237297C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-05-11 CZ CZ20060695A patent/CZ297888B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-05-11 KR KR1019980016803A patent/KR100577886B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-05-12 NO NO19982149A patent/NO324679B1/no not_active IP Right Cessation
- 1998-05-12 JP JP12933898A patent/JP4540136B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1998-05-13 ES ES98108721T patent/ES2223095T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-05-13 PT PT98108721T patent/PT878548E/pt unknown
- 1998-05-13 EP EP98108721A patent/EP0878548B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-05-13 DE DE59811884T patent/DE59811884D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-05-13 CN CNB03123433XA patent/CN1302116C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-05-13 AT AT98108721T patent/ATE275206T1/de active
- 1998-05-13 HU HU9801083A patent/HU226327B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1998-05-13 EP EP04020273A patent/EP1502914A1/de not_active Withdrawn
- 1998-05-13 PL PL326267A patent/PL197848B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1998-05-13 CN CN98108865A patent/CN1115343C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-05-13 DK DK98108721T patent/DK0878548T3/da active
-
1999
- 1999-08-13 US US09/373,862 patent/US6137007A/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-08-13 US US09/373,857 patent/US6252112B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-08-13 US US09/373,856 patent/US6262295B1/en not_active Expired - Fee Related
-
2005
- 2005-10-19 KR KR1020050098642A patent/KR100601764B1/ko not_active IP Right Cessation
-
2006
- 2006-12-07 HK HK06113474.2A patent/HK1092782A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2009
- 2009-11-09 JP JP2009256398A patent/JP2010116397A/ja active Pending
- 2009-11-09 JP JP2009256399A patent/JP2010106025A/ja active Pending
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
KR100601764B1 (ko) | (1s,4r)- 또는(1r,4s)-4-(2-아미노-6-클로로-9h-푸린-9-일)-2-시클로펜텐-1-메탄올의 제조 방법 | |
US7405065B2 (en) | Enzyme for the preparation of 1-amino-4-(hydroxymethyl)-2-cyclopentene derivatives | |
US20020037559A1 (en) | Process for producing n-protected d-proline derivatives | |
KR100562734B1 (ko) | 아미노 알코올 및 그의 유도체의 제조방법 | |
JP2001506500A (ja) | D−プロリン誘導体を調製する方法 | |
JP2000515010A (ja) | 微生物を用いてd―プロリン誘導体を調製する方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees |