JPH115793A - （１ｓ，４ｒ）−または（１ｒ，４ｓ）−４−（２−アミノ−６−クロロ−９ｈ−プリン−９−イル）−２−シクロペンテン−１−メタノールの製造方法 - Google Patents

（１ｓ，４ｒ）−または（１ｒ，４ｓ）−４−（２−アミノ−６−クロロ−９ｈ−プリン−９−イル）−２−シクロペンテン−１−メタノールの製造方法

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JPH115793A
JPH115793A JP10129338A JP12933898A JPH115793A JP H115793 A JPH115793 A JP H115793A JP 10129338 A JP10129338 A JP 10129338A JP 12933898 A JP12933898 A JP 12933898A JP H115793 A JPH115793 A JP H115793A
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Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【課題】下記式ＩまたはIIの化合物の製造方法を提供す
る。 【解決手段】 第一段階で（±）−２−アザビシクロ
［２．２．１］ヘプト−５−エン−３−オンをアシル化
し第二段階でこれを還元してシクロペンテン誘導体と
し、第三段階でこれを窒素源および（または）炭素源と
して資化する能力をもった微生物を利用するか、または
Ｎ−アセチルアミノアルコール・ヒドロラーゼ活性など
を有する酵素を利用するかして（１Ｓ，４Ｒ）−または
（１Ｒ，４Ｓ）−１−アミノ−４−（ヒドロキシメチ
ル）−２−シクロペンテン誘導体とし、第四段階でこれ
を（１Ｓ，４Ｒ）−または（１Ｒ，４Ｓ）−４−［（２
−アミノ−６−クロロ−５−フォルムアミド−４−ピリ
ミジニル）アミノ］−２−シクロペンテン−１−メタノ
ールとし、第五段階でこれを既知の手法により環化す
る。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、下記の式Ｉおよび
IIの（１Ｓ，４Ｒ）−または（１Ｒ，４Ｓ）−４−（２
−アミノ−６−クロロ−９Ｈ−プリン−９−イル）−２
−シクロペンテン−１−メタノール
【０００２】
【化１８】
【０００３】の製造方法に関し、また、下記の一般式XV
IおよびXVIIの光学活性な化合物
【０００４】
【化１９】
【０００５】の製造方法にも関する。
【０００６】
【従来の技術】（１Ｓ，４Ｒ）−４−（２−アミノ−６
−クロロ−９Ｈ−プリン−９−イル）−２−シクロペン
テン−１−メタノールは、２−アミノプリン・ヌクレオ
シドの製造、たとえば（１Ｓ，４Ｒ）−４−［２−アミ
ノ−６−（シクロプロピルアミノ）−９Ｈ−プリン−９
−イル］−２−シクロペンテン−１−メタノールの製造
（ＷＯ ９５／２１ １６１）、または１５９２Ｕ８９
（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９６，６１，４１９２
−４１９３； Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９６，６
１，７９６３−７９６６）の製造における、重要な中間
体である。
【０００７】（１Ｓ，４Ｒ）−４−アミノ−２−シクロ
ペンテン−１−メタノールから出発する（１Ｓ，４Ｒ）
−４−（２−アミノ−６−クロロ−９Ｈ−プリン−９−
イル）−２−シクロペンテン−１−メタノールの製造
は、ＷＯ ９５／２１ １６１に記述されている。 その
方法の不利な点は、前駆体（１Ｓ，４Ｒ）−４−アミノ
−２−シクロペンテン−１−メタノールが、（±）−２
−アザビシクロ［２．２．１］ヘプト−５−エン−３−
オンの、費用のかかるＢＯＣ保護基（ｔ−ブチロキシカ
ルボニル保護基）で置換されたものを経て、初めて入手
できるということである（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１
９９５，６０，４６０２−４６１６）。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、（１
Ｓ，４Ｒ）−または（１Ｒ，４Ｓ）−４−（２−アミノ
−６−クロロ−９Ｈ−プリン−９−イル）−２−シクロ
ペンテン−１−メタノールの、簡単でコストが安く、か
つ経済的な製造方法を提供することにある。
【０００９】
【課題を解決するための手段】この目的は、請求項１に
記載の新規な方法によって達成される。
【００１０】その新規な方法の第一段階は、下式III の
（±）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプト−５−
エン−３−オン
【００１１】
【化２０】
【００１２】をアシル化して、下の一般式IVの（±）−
２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプト−５−エン−３
−オン誘導体
【００１３】
【化２１】
【００１４】（式中、Ｒ1 はＣ1-4アルキル、Ｃ1-4アル
コキシ、アリールまたはアリロキシを表す。）を得るこ
とからなる。
【００１５】Ｃ1-4 アルキルは、置換されていてもよい
し、非置換であってもよい。 ここで置換Ｃ1-4 アルキ
ルとは、ハロゲン原子で置換されているものを意味す
る。Ｆ，Ｃｌ，ＢｒまたはＩが、ハロゲン原子として使
用できる。 Ｃ1-4 アルキルのを挙げれば、メチル、エ
チル、プロピル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、イ
ソプロピル、クロロメチル、ブロモメチル、ジクロロメ
チル、ジブロモメチルである。 Ｃ1-4 アルキルとして
好ましく使用されるものは、メチル、エチル、プロピ
ル、ブチル、イソブチルまたはクロロメチルである。
【００１６】Ｃ1-4アルコキシとしては、たとえば、メ
トキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ｔ−ブトキ
シまたはイソブトキシを使用することができる。 Ｃ
1-4 アルコキシとして好ましく使用されるものは、ｔ−
ブトキシである。
【００１７】アリールとしては、たとえばフェニルまた
はベンジル、好ましくはフェニルを使用することができ
る。 アリロキシとしては、たとえばベンジロキシまた
はフェノキシが使用できる。
【００１８】前駆体である（±）−２−アザビシクロ
［２．２．１］ヘプト−５−エン−３−オンは、ＥＰ−
Ａ ０５０８３５２の開示に従って製造できる。
【００１９】アシル化は、一般式XIのカルボン酸ハロゲ
ン化物
【００２０】
【化２２】
【００２１】を使用するか、または一般式XIIのカルボ
ン酸無水物
【００２２】
【化２３】
【００２３】（これらの式中、Ｒ1 は前記した意味を有
し、Ｘはハロゲン原子を表す。 Ｆ，Ｃｌ，Ｂｒまたは
Ｉがハロゲン原子として使用できる。 ＣｌまたはＦが
好ましく使用される。）を使用することによって実施で
きる。
【００２４】カルボン酸ハロゲン化物の例は、アセチル
クロライド、クロロアセチルクロライド、ブチリルクロ
ライド、イソブチリルクロライド、フェニルアセチルク
ロライド、ベンジルクロロフォルメート(Ｃｂｚ−Ｃ
ｌ)、プロピオニルクロライド、ベンゾイルクロライ
ド、アリルクロロフォルメートまたはｔ−ブチロキシカ
ルボニルフルオライドである。 カルボン酸無水物の例
は、ジ−ｔ−ブチルジカーボネート、無水ブタン酸、無
水酢酸または無水プロピオン酸である。
【００２５】アシル化は、溶剤を使用せずに実施するこ
ともできるし、アプロティックな溶剤を使用して実施す
ることもできる。
【００２６】アシル化は、アプロティックな溶剤中で好
都合に実施することができる。 適切なアプロティック
溶剤の例は、ジイソプロピルエーテル、ピリジン、アセ
トニトリル、ジメチルフォルムアミド、トリエチルアミ
ン、テトラヒドロフラン、トルエン、メチレンクロライ
ド、Ｎ−メチルピロリジンまたはこれらの混合物であ
る。
【００２７】アシル化は、温度−８０〜５０℃、好まし
くは０〜２５℃において、好都合に実施することができ
る。
【００２８】この新規な方法の第二段階では、式IVの
（±）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプト−５−
エン−３−オン誘導体を還元して、一般式Ｖのシクロペ
ンテン誘導体
【００２９】
【化２４】
【００３０】（式中、Ｒ1 は前記した意味を有する。）
とする。
【００３１】この還元は、アルカリ金属ボロハイドライ
ドもしくはアルカリ土類金属ボロハイドライドを使用し
て、またはアルカリ金属アルミニウムハイドライドもし
くはアルカリ土類金属アルミニウムハイドライド、また
はヴィトライド“Ｖｉｔｒｉｄｅ”すなわちナトリウム
・ビス（２−メトキシエチル）アルミニウム・ハイドラ
イドを使用して、好都合に実施することができる。 ナ
トリウムまたはカリウムのアルミニウムハイドライド
が、アルカリ金属アルミニウムハイドライドとして使用
できる。 カルシウムボロハイドライドが、アルカリ土
類金属ボロハイドライドとして使用できる。 アルミニ
ウムナイトライドが、ナイトライドとして使用できる。
【００３２】還元は、プロティックな溶剤中で好都合に
実施することができる。 使用できるプロティックな溶
剤は、低級アルコールたとえばメタノール、エタノー
ル、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、se
c-ブタノール、t-ブタノール、イソブタノールもしくは
水、または上記のアルコールと水との混合物である。
【００３３】還元は、温度−４０〜４０℃、好ましくは
０〜２０℃において、好都合に実施することができる。
【００３４】この新規な方法の第三段階では、一般式Ｖ
のシクロペンテン誘導体を、式VIまたはVII の（１Ｓ，
４Ｒ）−または（１Ｒ，４Ｓ）−１−アミノ−４−（ヒ
ドロキシメチル）−２−シクロペンテン誘導体
【００３５】
【化２５】
【００３６】とする変換を、微生物を利用するか、また
は、Ｎ−アセチルアミノアルコール・ヒドロラーゼ活性
またはペニシリンＧアシラーゼ活性を有する酵素を利用
するかして、実施する。 このバイオ変換は、アシル化
された（１Ｓ，４Ｒ）−または（１Ｒ，４Ｓ）−アミノ
アルコールを変換して（１Ｒ，４Ｓ）−または（１Ｓ，
４Ｒ）−１−アミノ−４−（ヒドロキシメチル）−２−
シクロペンテン（一般式VIまたはVII）とする。
【００３７】一般式Ｖのシクロペンテン誘導体を、唯一
の窒素源として、唯一の炭素源として、または唯一の窒
素源および唯一の炭素源として資化する能力をもった微
生物は、すべてこの変換に適している。 そのような微
生物は、土壌のサンプル、スラッジ、または排水から、
それらを、一般式Ｖのシクロペンタン誘導体を、
【００３８】
【化２６】
【００３９】（式中、Ｒ1 は前記した意味を有する。） ・唯一の窒素源および唯一の炭素源として含有するか、 ・唯一の窒素源として含有し、かつ適宜の炭素源をも含
有するか、または ・唯一の炭素源として含有し、かつ適宜の窒素源をも含
有する 栄養培地中で、常法に従って培養することにより、単離
することができる。
【００４０】一般式Ｖのシクロペンタン誘導体の適切な
ものの例は、Ｎ−アセチル−、Ｎ−プロピオニル−、Ｎ
−イソブチリル−、Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル（Ｎ−
ＢＯＣ）、Ｎ−ブチリルまたはＮ−フェニルアセチル−
１−アミノ−４−ヒドロキシメチル−２−シクロペンタ
ンである。
【００４１】微生物は、適当な窒素源として、たとえば
アンモニア、硝酸塩、アミノ酸または尿素を、成長の基
質として利用することができる。 微生物は、適当な炭
素源として、たとえば糖類、糖アルコール、Ｃ2−Ｃ4カ
ルボン酸またはアミノ酸を、成長の基質として利用する
ことができる。 グルコースのようなヘキソースや、ペ
ントースが糖類として使用できる。 たとえばグリセロ
ールは、糖アルコールとして使用できる。 Ｃ2−Ｃ4カ
ルボン酸としては、たとえば酢酸またはプロピオン酸が
使用できる。 アミノ酸としては、たとえばロイシン、
アラニン、アスパラギンが使用できる。
【００４２】選択のための培地および培養のための培地
として使用できるものは、当業者が常用しているもの、
たとえば下記の表１に記載したもの、または完全培地
（イーストエキスを含有する培地）たとえば栄養イース
トブロス（ＮＹＢ）であるが、表１に記載のものを使用
することが好ましい。
【００４３】培養および選択の間、微生物の活性酵素が
好都合に誘発される。 一般式Ｖのシクロペンテン誘導
体は、酵素誘発剤として役立つ。
【００４４】培養および選択は、通常、温度２０℃から
４０℃、好ましくは３０℃から３８℃で、ｐＨ５．５か
らｐＨ８の間で、好ましくはｐＨ６．８からｐＨ７．８
の間で行なわれる。
【００４５】バイオ変換は、シクロペンタン誘導体のう
ち（１Ｓ，４Ｒ）異性体を唯一の炭素源として、唯一の
炭素源および窒素源として、または唯一の窒素源として
資化するものを用いて実施するのが好適である。
【００４６】バイオ変換は、好ましくは、アルカリゲネ
ス／ボルデテラ(Alcaligenes/Bordetella)、ロドコッカ
ス(Rhodococcus)、アースロバクター(Arthroebacter)、
アルカリゲネス(Alcaligenes)、アグロバクテリウム／
リゾビウム(Agrobacterium/rhizobium)、バチルス(Baci
llus)、シュードモナス(Pseudomonas) またはゴルドナ
(Gordona)属の微生物を利用して実施する。 とりわけ
好ましいのは、アルカリゲネス／ボルデテラＦＢ１８８
（ＤＳＭ１１１７２）種、ロドコッカス・エリスロポリ
ス(R. erythropolis)ＣＢ１０１（ＤＳＭ１０６８６）
種、アースロバクターｓｐ．ＨＳＺ５（ＤＳＭ１０３２
８）、ロドコッカスｓｐ．ＦＢ３８７（ＤＳＭ１１２９
１）、アルカリゲネス・キシロソキシダンス(A. xyloso
xydans)ｓｓｐ．デニトリフィカンス(denitrificans)Ｈ
ＳＺ１７（ＤＳＭ１０３２９）、アグロバクテリウム／
リゾビウムＨＳＺ３０、バチルス・シンプレックス(B.s
implex)Ｋ２、シュードモナス・プチダ(S. putuda)Ｋ３
２、またはゴルドナｓｐ．ＣＢ１００（ＤＳＭ１０６８
７）、およびこれらの機能的に同等な変異種および突然
変異種である。 ブダペスト条約に従う、ドイッチェ・
ザンムルング・フォン・ミクロオーガニスメン・ウント
・ツエルクルトゥーレンＧｍｂＨ，マシェローダヴェク
１ｂ，Ｄ３８１２４，ブラウンシュヴァイクへの寄託
は、微生物ＤＳＭ１０６８６およびＤＳＭ１０６８７に
関しては１９９５年５月２０日、微生物ＤＳＭ１０３２
８およびＤＳＭ１０３２９に関しては１９９５年１１月
６日、微生物ＤＳＭ１１２９１に関しては１９９６年１
０月８日、そして微生物ＤＳＭ１１１７２に関しては１
９９５年９月２０日に、それぞれ行なわれた。
【００４７】「機能的に同等な変異種および突然変異
種」とは、オリジナルな微生物として本質的に同じ特性
と機能を有する微生物を意味する。 この種の変異種お
よび突然変異種は、偶然に、たとえばＵＶ照射によって
作り出すことができる。
【００４８】 アルカリゲネス／ボルデテラＦＢ１８８（ＤＳＭ１１１７２） の分類学的記述 細胞の形 捍状 幅 μｍ ０．５−０．６ 長さ μｍ １．０−２．５ 運動性 ＋ 鞭毛化 ペリトリカス グラム反応性 − ３％ＫＯＨによる分解 ＋ アミノペプチダーゼ（ツエルニー） ＋ 胞子 − オキシダーゼ ＋ カタラーゼ ＋ ＡＤＨ（アルコールデヒドロゲナーゼ）− ＮＯ3からのＮＯ2 − 脱硝化 − ウレアーゼ − ゼラチンの加水分解 − 酸の生成（ＯＦ試験）下記物質から： グルコース − フラクトース − アラビノース − アジペート ＋ カプレート ＋ シトレート ＋ マレート ＋ マンニトール − ロドコッカス・エリスロポリスＣＢ１０１（ＤＳＭ１０６８６） の分類学的記述 １．コロニーの形態および色： 短い分岐した菌糸で、
古くなると棒状体と球状体とに分解する。 コロニーは
光輝があり、部分的に融合的であって、ピンク色を帯び
たベージュ色。 ＲＡＬ １００１； ２．ペプチドグリカンの判別されたアミノ酸： メソジ
アミノピメリン酸； ３．ミコリン酸： ロドコッカスミコリン酸； ミコリ
ン酸鎖長（Ｃ32−Ｃ44）の測定、および寄託時のデータ
をＤＳＭのミコリン酸データバンクと比較することによ
り、ロドコッカス・エリスロポリス株のパターンとの間
に、大きな類似性のあることがわかった（類似度０．５
８８）。 ４．脂肪酸パターン：非分岐の飽和および不飽和の脂肪
酸にプラスしてチューバーキュロステアリン酸。 ５．菌株の１６Ｓ ｒＤＮＡ の部分的な配列に基づい
て、ロドコッカス・エリスロポリスの特定の領域におけ
る配列との間に、高いレベルでの一致（１００％） が
見出された。
【００４９】上記の同定の結果は、非多義的である。
その理由は、３種（ミコリン酸、脂肪酸、１６Ｓ ｒＤ
ＮＡ)の相互に独立した方法で、この菌株にロドコッカ
ス・エリスロポリス種の判定が与えられたからである。
【００５０】ゴルドナｓｐ．ＣＢ１００（ＤＳＭ１０６
８７）の分類学的記述 １．コロニーの形態および色： 短い分岐した菌糸で、
古くなると棒状体と球状体とに分解する。 コロニーは
淡いオレンジ色。（ＲＡＬ ２００８）； ２．ペプチドグリカンの判別されたアミノ酸： メソジ
アミノピメリン酸； ３．メナキノン・パターン： ＭＫ−９（Ｈ2）１００
％； ４．ミコリン酸： ゴルドナミコリン酸； ミコリン酸
の鎖長（Ｃ50−Ｃ60）は高温ガスクロマトグラフィーに
よって測定した。 そのパターンは、代表的なゴルドナ
属に見いだされるパターンに対応している。
【００５１】５．脂肪酸パターン：非分岐の飽和および
不飽和の脂肪酸にプラスしてチューバーキュロステアリ
ン酸。 ６．菌株の１６Ｓ ｒＤＮＡ の部分的な配列に基づい
て、ゴルドナ・リュブロパーチンクタ(G. rubropertinc
ta) の特定の領域における配列との間に、比較的低い一
致（９８．８％）が見出されただけである。
【００５２】判明した結果（メナキノン、ミコリン酸、
脂肪酸、１６Ｓ ｒＤＮＡ）に基づけば、単離した菌は
ゴルドナ属に非多義的に分類できないわけではないが、
これらの結果だけで既知のゴルドナのいずれかの種に分
類することは不可能である。
【００５３】 アルカリゲネス・キシロソキシダンスｓｓｐ．デニトリフィカンスＨＳＺ１７ （ＤＳＭ１０３２９）の分類学的記述 株の特性 細胞の形 捍状 幅 μｍ ０．５−０．６ 長さ μｍ １．５−３．０ 運動性 ＋ 鞭毛化 ペリトリカス グラム反応性 − ３％ＫＯＨによる分解 ＋ アミノペプチダーゼ（ツエルニー） ＋ 胞子 − オキシダーゼ ＋ カタラーゼ ＋ 嫌気的成長 − ＡＤＨ（アルコールデヒドロゲナーゼ）＋ ＮＯ3からのＮＯ2 ＋ 脱硝 ＋ ウレアーゼ − 加水分解 ゼラチンの − ツイーン（Tween）８０の − 酸の生成（ＯＦ試験）： グルコース 好気的 − キシロース８０ − 基質の資化 グルコース − フラクトース − アラビノース − シトレート ＋ マレート ＋ マンニトール − アースロバクターｓｐ．ＨＳＺ５（ＤＳＭ１０３２８） の分類学的記述 特徴 グラム陽性 不規則な捍状であって、顕 著な捍−球の成長サイクル； 厳密に好 気的； グルコースからの酸またはガス の生成なし 運動性 − 胞子 − カタラーゼ ＋ 細胞壁中のメソ−ジアミノピメリン酸：なし ペプチドグリキカン型： Ａ３α， L-Lys-L-Ser-L-Thr-L-Ala １６Ｓ ｒＤＮＡ 配列の類似性： 最大の変動率をもつ領域の配列に関して 見いだされた最も高い値は、アースロバ クター・パセンス(A. pascens)、エー・ ラモスス(A. ramosusu) およびエー・オ キシダンス(A. oxydans)に対する９８． ２％である。
【００５４】 アグロバクテリウム／リゾビウムＨＳＺ３０ の分類学的記述 細胞の形 プレオモルフィックな捍状 幅 μｍ ０．６−１．０ 長さ μｍ １．５−３．０ グラム反応性 − ３％ＫＯＨによる分解 ＋ アミノペプチダーゼ ＋ 胞子 − オキシダーゼ ＋ カタラーゼ ＋ 運動性 ＋ 嫌気的成長 − 硝酸塩から亜硝酸塩 − 脱硝 − ウレアーゼ ＋ ゼラチンの加水分解 − 酸の生成： Ｌ−アラビノース ＋ ガラクトース − メレジトース − フコース ＋ ラビトール − マンニトール − エリスリトール − リトマスミルクのアルカリ化 ＋ ケトラクトース − １６Ｓ ｒＤＮＡ の部分的な配列から、約９６％の、比
較可能な程度に大きい類似性が、アグロバクテリウム属
およびリゾビウム属の代表的なものとの間に見いだされ
た。 これらの属の中での、特定の種に非多義的な分類
をすることは可能ではない。
【００５５】 バチルス・シンプレックスＫ２の分類学的記述 細胞の形 捍状 幅［μｍ］ ０．８−１．０ 長さ［μｍ］ ３．０−５．０ 胞子 − 楕円体 − 環状体 − スポランギウム − カタラーゼ ＋ 嫌気的成長 − ＶＰ反応 ｎ．ｇ． 最高温度 積極的な成長 ℃ ４０ 消極的な成長 ℃ ４５ 培地のｐＨ５．７における成長 − ＮａＣｌ ２％ ＋ ５％ − ７％ − １０％ − リゾチーム培地 ＋ 酸の生成： Ｄ−グルコース ＋ Ｌ−アラビノース ＋ Ｄ−キシロース − Ｄ−マンニトール ＋ Ｄ−フラクトース ＋ フラクトースからのガス − レシチナーゼ − 加水分解 デンプンの ＋ ゼラチンの ＋ カゼインの − ツイーン８０の ＋ アエスクリンの − 資化 シトレートの ＋ プロピオネートの − 硝酸塩から亜硝酸塩 ＋ インドール − フェニルアラニン・デアミナーゼ − アルギニン・ジヒドロラーゼ − 細胞の脂肪酸を分析した結果、バチルス属への帰属が確
認された。１６Ｓ ｒＤＮＡ の部分的配列決定により、
バチルス・シンプレックスへの類似性が１００％認めら
れた。
【００５６】 シュードモナス・プチダＫ３２の分類学的記述 細胞の形 捍状 幅［μｍ］ ０．８−０．９ 長さ［μｍ］ １．５−４．０ 運動性 ＋ 鞭毛化 極＞１ グラム反応 − ３％ＫＯＨによる分解 ＋ アミノペプチダーゼ ＋ 胞子 − オキシダーゼ ＋ カタラーゼ ＋ 嫌気的成長 − 色素 蛍光色 ＋ ピオシアニン − ＡＤＨ ＋ 硝酸塩から亜硝酸塩 − 脱硝 − ウレアーゼ − ゼラチンの加水分解 − 基質の資化 アジペート − シトレート ＋ マレート ＋ Ｄ−マンデレート ＋ フェニルアセテート ＋ Ｄ−酒石酸塩 − Ｄ−グルコース ＋ トレハロース − マンニトール − ベンゾイルフォルメート − プロピレングリコール ＋ ブチルアミン ＋ トリプタミン − アセタミド ＋ 馬尿酸塩 ＋ 細胞の脂肪酸のプロフィールは、シュードモナス・プチ
ダに典型的なものである。１６Ｓ ｒＤＮＡ の部分的な
配列により、シュードモナス・メンドシーナ(P.mendoci
na)およびシュードモナス・アルカリゲネス(P. alcalig
enes)への類似性が、、約９８％認められた。 シュード
モナス・プチダへの類似性は、９７．４％であった。
【００５７】ロドコッカスｓｐ．ＦＢ３８７（ＤＳＭ１
１２９１）の分類学的記述 １．コロニーの形態および色： 短い分岐した菌糸で、
古くなると棒状体と球状体とに分解する。 コロニーは
ツヤがなく、淡い赤オレンジ色。 ＲＡＬ ２００８； ２．ペプチドグリカンの判別されたアミノ酸： メソジ
アミノピメリン酸； ３．ミコリン酸： ロドコッカスミコリン酸； ミコリ
ン酸鎖長（Ｃ32−Ｃ44）の測定、および寄託時のデータ
をＤＳＭのミコリン酸データバンクと比較することによ
り、ロドコッカス・ルーバー(R. ruber)株のパターンと
の間に、ごく小さな類似性のあることがわかった（類似
度０．０１９）。 この相関係数はあまりに低く、種の
同定には使えない。
【００５８】４．脂肪酸パターン：非分岐の飽和および
不飽和の脂肪酸にプラスしてチューバーキュロステアリ
ン酸。 この脂肪酸パターンは、ロドコッカス属の代表
的な菌のすべてとそれに近い関係を有するもの、たとえ
ばミコバクテリウム(Mycobacterium)、ノカルディア(No
cardia) およびゴルドナに関して、判別を可能にするも
のである。 脂肪酸パターンの定性的および定量的な相
違を含めることによって、種のレベルへの異同の決定を
行なうことを企てた。 多数の方法を利用して、ロドコ
ッカスｓｐ．ＦＢ３８７の脂肪酸パターンのデータをデ
ータバンクのそれらと比較した。 しかし、この方法で
は、ロドコッカスｓｐ．ＦＢ３８７を、すでに記述され
たいずれかの種に分類することは、類似度が小さい
（０．０６３）ため、可能ではなかった。
【００５９】５．菌株の１６Ｓ ｒＤＮＡ の部分的な配
列に基づいて、９６−８１８は、ロドコッカス・オパク
ス(R. opacus)に、相関度９７．９％をもって分類され
た。この配列の一致は、この分類の非多義的な種の決定
に必要な９９．５％に対して、はるかに低い。
【００６０】得られる結果に基づき、ロドコッカスｓ
ｐ．ＦＢ３８７株は、新規であって、いまだロドコッカ
ス種において記述されたことがないと推測される。
【００６１】バイオ変換は、常法に従ったこれら微生物
の初期の培養の後、静止細胞（成長していない細胞で、
もはや炭素源もエネルギー源も必要としない）を用い
て、または成長している細胞を用いて、実施することが
できる。 バイオ変換は、静止細胞を用いて実施するこ
とが好ましい。
【００６２】Ｎ−アセチルアミノアルコール・ヒドロラ
ーゼ活性を有し、バイオ変換に適切な酵素は、上述した
微生物の細胞から、当業技術で常用の方法たとえば細胞
壁の破壊によって、単離することができる。 この目的
には、たとえば超音波またはフレンチプレス法が利用で
きる。 これらの酵素は、微生物ロドコッカス・エリス
ロポリスＣＢ１０１（ＤＳＭ１０６８６）から単離する
ことが好ましい。
【００６３】適切なペニシリンＧアシラーゼは、多くの
微生物から得ることができる。 たとえば、バクテリア
またはアクチノミセテスであり、とりわけ下に記す微生
物である： エシェリチア・コリ ＡＴＣＣ ９６３７、
バチルス・メガテリウム、ストレプトミセス・ラベンデ
ュラエ(Streptmyces lavendulae) ＡＴＣＣ １３６６
４、ノカルディアｓｐ．ＡＴＣＣ １３６３５、プロビ
デンシア・レットゲリ(Providencia rettgeri) ＡＴＣ
Ｃ ９９１８、アースロバクター・ヴィスコスス(A.visc
osus) ＡＴＣＣ １５２９４、ロドコッカス・ファシア
ンス(R. fascians)ＡＴＣＣ １２９７５、ストレプトミ
セス・フェオクロモゲネス(Streptmyces phaeochromoge
nes) ＡＴＣＣ ２１２８９、アクロモバクター ＡＴＣ
Ｃ ２３５８４およびミクロコッカス・ロゼウス(Microc
occus roseus) ＡＴＣＣ ４１６。購入可能なペニシリ
ンＧアシラーゼが使用でき、たとえば、Ｅ．コリからの
ペニシリンＧアシラーゼＥＣ３．５．１．１１（ベーリ
ンガー・マンハイム）またはバチルス・メガテリウムか
らのものが使用できる。
【００６４】固定化したペニシリンＧアシラーゼが、好
ましい態様で使用される。
【００６５】バイオ変換は、当業技術で常用の培地、た
とえば水に低いモル濃度で溶解したフォスフェート、シ
トレートまたはヘペス(Hepes)の緩衝液、完全培地たと
えば栄養イーストブロス（ＮＹＢ）または前掲の表の培
地を使用して実施できる。バイオ変換は、好ましくは表
１に記載した培地、または低モル濃度フォスフェート緩
衝液中で実施する。
【００６６】本発明のバイオ変換は、シクロペンテン誘
導体（式Ｖ）の一回の、または連続的な添加のもとに、
その濃度が１０重量％、好ましくは２重量％を超えない
ようにして行なうのが好都合である。
【００６７】バイオ変換の間のｐＨは、５から９、好ま
しくは６から８の範囲内とすることができる。 バイオ
変換は、温度２０から４０℃、好ましくは２５から３０
℃において、好都合に実施できる。
【００６８】第４段階においては、シクロペンタン誘導
体（式VIまたはVII）は、式VIIIのＮ−（２−アミノ−
４，６−ジクロロ−５−ピリミジニル）フォルムアルデ
ヒド
【００６９】
【化２７】
【００７０】を用いて、式IXまたはＸの（１Ｓ，４Ｒ）
−または（１Ｒ，４Ｓ）−４−［（２−アミノ−６−ク
ロロ−５−フォルムアミド−４−ピリミジニル）アミ
ノ］−２−シクロペンテン−１−メタノール
【００７１】
【化２８】
【００７２】に変換する。
【００７３】Ｎ−（２−アミノ−４，６−ジクロロ−５
−ピリミジニル）フォルムアミドは、ＷＯ ９５／２１
１６１の開示に従って製造することができる。
【００７４】第四段階は、塩基の存在下に好都合に実施
するこっとができる。 塩基としては、有機塩基も無機
塩基も使用できる。 トリアルキルアミンが、有機塩基
として使用できる。 使用できるトリアルキルアミンの
例は、トリエチルアミン、トリブチルアミン、トリベン
ジルアミン、ピリジンまたはＮ−メチルピロリドンであ
る。 使用できる無機塩基の例は、アルカリ金属または
アルカリ土類金属の炭酸塩、またはアルカリ金属または
アルカリ土類金属の炭酸水素塩、たとえば炭酸カリウム
または炭酸水素ナトリウムである。
【００７５】第四段階の反応は、プロティックな溶媒の
中で好都合に実施できる。 低級脂肪族アルコール、た
とえばメタノール、エタノール、プロパノール、イソプ
ロパノール、ブタノールなたはイソブタノールが、プロ
ティックな溶媒として使用できる。
【００７６】第四段階の反応は、温度０から１５０℃、
好ましくは２０から１００℃において好都合に実施でき
る。
【００７７】第五段階においては、（１Ｓ，４Ｒ）−ま
たは（１Ｒ，４Ｓ）−４−［（２−アミノ−６−クロロ
−５−フォルムアミド−４−ピリミジニル）アミノ］−
２−シクロペンテン−１−メタノール（式IX，Ｘ）を、
ＷＯ ９５／２１ １６１に開示された既知の方法によっ
て環化し、式ＩまたはIIの最終生成物とする。
【００７８】環化は、通常、オルト蟻酸トリアルキルに
溶解して、濃厚な水性の酸の存在下に実施する。 使用
できるオルト蟻酸トリアルキルは、トリメチルまたはト
リエチル・オルトフォルメートである。 水性の酸とし
ては、たとえば、塩酸、硫酸またはメタンスルフォン酸
を使用することができる。
【００７９】本発明はさらに、一般式XVI またはXVIIの
光学活性な化合物
【００８０】
【化２９】
【００８１】（式中、Ｒ1 は前記した意味を有する。）
の製造方法にも関する。 これらの化合物は、式Ｖのシ
クロペンテン誘導体を、
【００８２】
【化３０】
【００８３】（式中、Ｒ1 は前記した意味を有する。）
微生物、Ｎ−アセチルアミノ−アルコール・ヒドロラー
ゼまたはペニシリンＧアシラーゼを利用して、式VIおよ
びVII（１Ｒ，４Ｓ）−または（１Ｓ，４Ｒ）−１−ア
ミノ−（ヒドロキシメチル）−２−シクロペンテン
【００８４】
【化３１】
【００８５】に変換し、それを環化して式XVIまたはXVI
Iの化合物にすることによって、製造することができ
る。 これらの手段については、すでに記述した。
【００８６】微生物による変換も、環化も、ともにすで
に述べたところとそれ自体同じ条件で実施することがで
きる。
【００８７】環化は、温度０℃から１００℃、好ましく
は２０℃から８０℃において好都合に実施することがで
きる。
【００８８】この方法によって製造される光学活性な化
合物の例は、（１Ｒ，４Ｓ）−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボ
ニル−１−アミノ−４−（ヒドロキシメチル）−２−シ
クロペンテンのｅｅ９８％のもの、（１Ｒ，４Ｓ）−Ｎ
−アセチル−１−アミノ−４−（ヒドロキシメチル）−
２−シクロペンテンのｅｅ９８％のもの、（１Ｒ，４
Ｓ）−Ｎ−ブチリル−１−アミノ−４−（ヒドロキシメ
チル）−２−シクロペンテンのｅｅ９８％のもの、光学
活性な（１Ｓ，４Ｒ）−Ｎ−アセチル−１−アミノ−４
−（ヒドロキシメチル）−２−シクロペンテンおよび光
学活性な（１Ｓ，４Ｒ）−Ｎ−ブチリル−１−アミノ−
４−（ヒドロキシメチル）−２−シクロペンテンであ
る。
【００８９】これらの化合物のうち、光学活性な（１
Ｒ，４Ｓ）−Ｎ−ブチリル−１−アミノ−４−（ヒドロ
キシメチル）−２−シクロペンテンは、文献未記載の化
合物である。 従って、本発明は光学活性な（１Ｒ，４
Ｓ）−Ｎ−ブチリル−１−アミノ−４−（ヒドロキシメ
チル）−２−シクロペンテンのエナンチオマーエクセス
が０％を超えるもの、好ましくは８０％以上、９０％な
いし９５％のエナンチオマーエクセス、とりわけ９８％
以上のエナンチオマーエクセスを有するものにも関す
る。 これらの光学活性な化合物は、当業者に既知の手
法によってラセミ化し、ラセミ体のＮ−ブチリル−１−
アミノ−４−（ヒドロキシメチル）−２−シクロペンテ
ンとすることができる。 これもまた、文献に記載され
たことがない物質である。
【００９０】一般式XIIIの光学的に活性な４−（ヒドロ
キシメチル）−２−シクロペンテン誘導体
【００９１】
【化３２】
【００９２】（式中、Ｒ1 は前記した意味を有する。）
の製造は、第一段階において、式XIVのシクロペンテン
−４−カルボン酸
【００９３】
【化３３】
【００９４】のラセミ体または光学活性な異性体のいず
れかを、一般式XIのカルボン酸ハロゲン化物
【００９５】
【化３４】
【００９６】（式中、Ｒ1 およびＸは前記した意味を有
する。）を使用してアシル化し、一般式XVのシクロペン
テン−４−カルボン酸誘導体としたのち、
【００９７】
【化３５】
【００９８】第二段階において、後者を還元して式XIII
の所望の化合物を得ることからなる。
【００９９】ここで、光学活性４−（ヒドロキシメチ
ル）−シクロペンテン誘導体（式XIII）および光学活性
４−（ヒドロキシメチル）−シクロペンテン誘導体（式
XV）の語は、対応する（１Ｒ，４Ｓ）または（１Ｓ，４
Ｒ）異性体を意味する。
【０１００】この製造方法の第一段階すなわちアシル化
は、一般式XIのハロゲン化カルボニルを使用して実施す
る。 使用できるハロゲン化カルボニルは、すでに記載
したところで挙げたものと同じであって、ｔ−ブチロキ
シカルボニルが好ましく使用される。
【０１０１】第一段階の反応は、ｐＨ８〜１４、好まし
くは１２〜１４、温度０〜５０℃、好ましくは１５〜２
５℃で、好都合に実施できる。
【０１０２】適当な溶媒は、水とエーテル類との混合物
である。 使用できるエーテル類はジオキサン、テトラ
ヒドロフラン、ジエチルエーテル、グリコールのジメチ
ルまたはジエチルエーテルである。
【０１０３】製造方法の第二段階である還元は、アルカ
リ金属アルミニウムハイドライドを用いて、ボラン／ジ
−Ｃ1-4 アルキルサルファイド錯体を用いて、またはボ
ラン／テトラヒドロフラン錯体を用いて実施することが
できる。 リチウム、ナトリウムまたはカリウムのアル
ミニウムハイドライドが、アルカリ金属アルミニウムハ
イドライドとして使用でき、中でもリチウムアルミニウ
ムハイドライドが好ましく使用される。 ボラン／ジメ
チルサルファイド、ボラン／ジエチルサルファイド、ボ
ラン／ジプロピルサルファイドまたはボラン／ジブチル
サルファイドの錯体が、ボラン／ジ−Ｃ1-4 アルキルサ
ルファイド錯体として使用できる。 ボラン／ジメチル
サルファイド錯体が好ましく使用される。
【０１０４】第二段階においては、溶媒として、上記し
たエーテル類のいずれかを、水を混合せずに使用するこ
とが好都合である。
【０１０５】第二段階の反応は、温度−５０〜５℃、好
ましくは−２５〜−１０℃において実施することができ
る。
【０１０６】
【実施例】
［実施例１］ （±）−２−アセチル−２−アザビシクロ［２．２．
１］ヘプト−５−エン−３−オンの製造 １００ｇの（±）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘ
プト−５−エン−３−オンをアセトニトリル（８００m
l）およびピリジン（１６１．２６ml）中に、窒素雰囲
気下に溶解した。 １２℃において、１０４．５ｇのア
セチルクロライドを、２時間にわたって、滴下して加え
た。 混合物を、室温で４．５時間撹拌した。 ８００
mlの水を混合物に加え、アセトニトリルを減圧下に蒸発
させて除いた。 水相を３回、４００mlの酢酸エチルで
抽出した。 一体にした有機相を１ＮのＨＣｌ（４００
ml）、水（４００ml）、飽和ＮａＣｌ溶液（４００ml）
で洗浄したのち、硫酸マグネシウムで乾燥し、完全に蒸
発させた。 その残渣をメチレン・クロライドにとり、
シリカゲルを通して濾過した。 濾液を濃縮し、生成物
を蒸留により精製した。 １０７．７６ｇの生成物が、
透明な液体として得られた。 収率は７１％。 沸点
（０．０７torr）：５１℃。
【０１０７】1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ［ppm］ ２．２５（ＡＢ syst.，２Ｈ） ４００ＭＨｚ ２．８ （ｓ，３Ｈ）； ３．４２（ｍ，１Ｈ）； ５．３０（ｍ，１Ｈ）； ６．８９（ｍ，１Ｈ）； ６．９２（ｍ，１Ｈ）。
【０１０８】［実施例２］ （±）−２−ブチリル−２−アザビシクロ［２．２．
１］ヘプト−５−エン−３−オンの製造 １００．３ｇの（±）−２−アザビシクロ［２．２．
１］ヘプト−５−エン−３−オンを、アセトニトリル
（７２０ml）およびピリジン（１４２ml）中に、窒素雰
囲気下に溶解した。 １２℃において、１４１．８ｇの
ブチリルクロライドを、１時間にわたって滴下して加え
た。 混合物を、室温で３時間撹拌した。７２０mlの水
を混合物に加え、各相を分離した。 アセトニトリルは
減圧下に蒸発させて除き、水相を３回、３００mlの酢酸
エチルで抽出した。 一体にした有機相を１ＮのＨＣｌ
（３５０ml）、飽和ＮａＣｌ溶液（４００ml）および水
（５００ml）で洗浄したのち、硫酸マグネシウムで乾燥
し、完全に蒸発させた。 生成物を蒸留により精製し
た。 １０７．７６ｇの生成物が、透明な液体として得
られた。 収率は８５％。 沸点（０．０５torr）：７
０℃。
【０１０９】1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ［ppm］ ０．９８（ｔ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，３Ｈ） ４００ＭＨｚ １．５８−１．６５（２Ｈ）； ２．２３（ＡＢ syst.，２Ｈ）； ２．８２−２．９０（２Ｈ）； ３．４２（ｍ，１Ｈ）； ５．３０（ｍ，１Ｈ）； ６．６２（ｍ，１Ｈ）； ６．９０（ｍ，１Ｈ）。
【０１１０】［実施例３］ （±）−２−フェニルアセチル−２−アザビシクロ
［２．２．１］ヘプト−５−エン−３−オンの製造 ３３．４ｇの（±）−２−アザビシクロ［２．２．１］
ヘプト−５−エン−３−オンを、アセトニトリル（２４
０ml）およびピリジン（４８．３ml）中に、窒素雰囲気
下に溶解した。 １２℃において、６８．６ｇのフェニ
ルアセチルクロライドを、３０分間にわたって滴下して
加えた。 混合物を、室温で３．５時間撹拌した。 ２
４０mlの水を混合物に加えた。 アセトニトリルを減圧
下に蒸発させて除き、水相を３回、酢酸エチル（１５０
ml）で抽出した。 一体にした有機相を１ＮのＨＣｌ
（１５０ml）、飽和ＮａＣｌ溶液（１５０ml）および水
（１５０ml）で洗浄したのち、硫酸マグネシウムで乾燥
し、完全に蒸発させた。 粗生成物を、シリカゲルを通
して（ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）精製した。７
８．３４ｇの粗生成物が、黄色の油として得られた。
【０１１１】［実施例４］ （±）−２−プロピオニル−２−アザビシクロ［２．
２．１］ヘプト−５−エン−３−オンの製造 ４７ｇの（±）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプ
ト−５−エン−３−オンを、アセトニトリル（３２５m
l）およびピリジン（４１ml）中に、窒素雰囲気下に溶
解した。 １２℃において、４３．９ｇのプロピオニル
クロライドを、１時間にわたって滴下して加えた。 混
合物を、室温で５時間撹拌した。 １４５mlの水を混合
物に加え、アセトニトリルを減圧下に蒸発させて除い
た。 水相を３回、１１５mlの酢酸エチルで抽出した。
一体にした有機相を、１ＮのＨＣｌ（１４０ml）、飽
和したＮａＨＣＯ3溶液（４０ml）およびＮａＣｌ溶液
（４０ml）で洗浄したのち、硫酸ナトリウムで乾燥し、
完全に蒸発させた。 残渣を蒸留により精製した。 ５
５．８ｇの標題化合物が得られ、放置したところ固化し
た。 収率は８１．６％であった。 沸点：２．８mbarにおいて７５−８０℃ 融点：５４−５６℃。
【０１１２】1 Ｈ−ＮＭＲ （DMSO-d6）：δ［ppm］ ０．９５（ｔ，３Ｈ） ４００ＭＨｚ ２．１０（quart.，１Ｈ）； ２．２８（quart.，２Ｈ）； ２．６４（ｍ，２Ｈ）； ３．４２（ｓ，１Ｈ）； ５．１６（ｓ，１Ｈ）； ６．７８（ｍ，１Ｈ）； ６．９６（ｍ，１Ｈ）。
【０１１３】［実施例５］ （±）−２−イソブチリル−２−アザビシクロ［２．
２．１］ヘプト−５−エン−３−オンの製造 ４５．１ｇの（±）−２−アザビシクロ［２．２．１］
ヘプト−５−エン−３−オンを、アセトニトリル（３１
０ml）およびピリジン（３９ml）中に、窒素雰囲気のも
とに溶解した。 １０℃において、５４．１ｇのイソブ
チリルクロライドを、１時間にわたって滴下して加え
た。 混合物を、室温で５時間撹拌した。１４０mlの水
を混合物に加え、アセトニトリルを減圧下に蒸発させて
除いた。水相を４×１２０mlの酢酸エチルで抽出した。
一体にした有機相を、１ＮのＨＣｌ（５０ml）、飽和
したＮａＨＣＯ3溶液（５０ml）およびＮａＣｌ溶液
（５０ml）で洗浄したのち、硫酸ナトリウムで乾燥し、
完全に蒸発させた。 残渣をｎ−ヘキサン（２４０ml）
中、活性炭とともに、環流下に沸騰させた。 活性炭を
濾過して分け、濾液を０℃に冷却して、標題化合物を濾
過により分け取った。５４．５ｇの生成物が得られた。
収率は７６％であった。 融点：４１−４２℃。
【０１１４】1 Ｈ−ＮＭＲ （DMSO-d6）：δ［ppm］ ０．９２（ｄ，３Ｈ） ４００ＭＨｚ １．０６（ｄ，３Ｈ）； ２．１０（ｍ，１Ｈ）； ２．２８（ｍ，１Ｈ）； ３．４０（ｍ，２Ｈ）； ５．１６（ｓ，１Ｈ）； ６．７８（ｍ，１Ｈ）； ７．９２（ｍ，１Ｈ）。
【０１１５】［実施例６］ （±）−２−クロロアセチル−２−アザビシクロ［２．
２．１］ヘプト−５−エン−３−オンの製造 １０．１ｇの（±）−２−アザビシクロ［２．２．１］
ヘプト−５−エン−３−オンを、ジクロロメタン（１０
ml）、ピリジン（８．４ml）および０．２２ｇの４−
Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジンの混合物中に、１０℃
で、窒素雰囲気下に溶解した。 １３．５ｇのクロロア
セチルクロライドを、１時間にわたって滴下して加え
た。 温度は４４℃に上昇した。 混合物をさらに２時
間、室温で撹拌した。 １００mlの水を混合物に加え
た。 相分離の後、水相を１００mlのジクロロメタンで
抽出した。 一体にした有機相を硫酸ナトリウムで乾燥
し、完全に蒸発させた。 残渣を、１００mlジイソプロ
ピルエーテル中、１ｇの活性炭の存在下に、１０分間、
環流下に沸騰させた。 熱濾過したのち、濾液を室温に
冷却して、固体を濾過により分け、乾燥した。 １０．
３５ｇの標題化合物が得られた。 収率は６０％であっ
た。 融点：８６−８８℃。
【０１１６】1 Ｈ−ＮＭＲ （CDCl3） ：δ［ppm］ ２．２８（ｄ，１Ｈ） ４００ＭＨｚ ２．４０（ｄ，１Ｈ）； ３．４８（ｓ，１Ｈ）； ４．５６（ｄ，２Ｈ）； ５．３０（ｓ，１Ｈ）； ６．７０（ｄ，１Ｈ）； ６．９４（ｍ，１Ｈ）。
【０１１７】［実施例７］ （±）−１−アセチルアミノ−４−（ヒドロキシメチ
ル）−２−シクロペンテンの製造 ７９．５６ｇの（±）−２−アセチル−２−アザビシク
ロ［２．２．１］ヘプト−５−エン−３−オンを、エタ
ノール（４５０ml）中に、窒素雰囲気下に溶解して、−
１０℃に冷却した。 １９．８ｇのナトリウム・ボロハ
イドライドを、小部分に分けて４５分間にわたって添加
した。
【０１１８】混合物を３時間、０℃で撹拌し、ついで濃
硫酸でｐＨを１．８に調節した。酢酸エチル（２００m
l）をこの混合物に加え、固体を濾過分離した。 つい
で完全に蒸発させた。 残渣を水にとり、メチレンクロ
ライドで洗浄して、蒸発させた。 粗生成物を、シリカ
ゲルで濾過することにより精製した。 ５１．８３ｇの
生成物が、白色の固体として得られた。 収率は、使用
した２−アセチル−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘ
プト−５−エン−３−オンを基準にして、６４％であっ
た。
【０１１９】1 Ｈ−ＮＭＲ （DMSO-d6） ：δ［ppm］ １．１８（ｍ，１Ｈ） ４００ＭＨｚ １．７８（ｓ，３Ｈ）； ２．２９（ｍ，１Ｈ）； ２．６６（ｍ，１Ｈ）； ３．３５（ｓ，２Ｈ）； ４．５８（ｓ，１Ｈ）； ４．７２（ｍ，１Ｈ）； ５．６１（ｄ，１Ｈ）； ５．８５（ｄ，１Ｈ）； ７．８３（ｄ，１Ｈ）。
【０１２０】［実施例８］ （±）−１−ブチリルアミノ−４−（ヒドロキシメチ
ル）−２−シクロペンテンの製造 ７３．８７ｇの（±）−２−ブチリル−２−アザビシク
ロ［２．２．１］ヘプト−５−エン−３−オンを、エタ
ノール（４００ml）に、窒素雰囲気下に溶解して、−１
０℃に冷却した。 １５．６８ｇのナトリウム・ボロハ
イドライドを、小部分に分けて、４５分間にわたって添
加した。 混合物を３時間、０℃で撹拌し、ついで濃硫
酸でｐＨを１．５に調節した。 酢酸エチル（２００m
l）をこの混合物に加え、固体を濾過分離した。 つい
で完全に蒸発させた。 残渣を水にとり、メチレンクロ
ライドで洗浄して、蒸発させたのち、高度の減圧下に乾
燥した。 ６０．５５ｇの生成物が得られた。 収率
は、使用した２−ブチリル−２−アザビシクロ［２．
２．１］ヘプト−５−エン−３−オンを基準にして、８
０％であった。 融点：７１−７２℃。
【０１２１】1 Ｈ−ＮＭＲ （CDCl3） ：δ［ppm］ ０．９８（ｔ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，３Ｈ）； ４００ＭＨｚ １．４０−１．５０（１Ｈ）； １．５８−１．６８（２Ｈ）； ２．１０−２．１８（２Ｈ）； ２．４２−２．５５（１Ｈ）； ２．８５（ｍ，１Ｈ）； ３．６２（ＡＢ syst.，２Ｈ）； ４．９８（ｍ，１Ｈ）； ５．７８−５．８２（２Ｈ）； ６．３８（ｍ，１Ｈ）。
【０１２２】［実施例９］ （±）−１−フェニルアセチルアミノ−４−（ヒドロキ
シメチル）−２−シクロペンテンの製造 ７７ｇの粗製の（±）−２−フェニルアセチル−２−ア
ザビシクロ［２．２．１］ヘプト−５−エン−３−オン
を、エタノール（４５０ml）に、窒素雰囲気下に溶解し
て、−１０℃に冷却した。 １３．２ｇのナトリウム・
ボロハイドライドを、小部分に分けて、１時間にわたっ
て添加した。 混合物を３．５時間、室温で撹拌し、つ
いで濃硫酸でｐＨを１．８に調節した。 この混合物
を、シリカゲル濾過（ヘキセン：酢酸エチル＝２：８）
により精製した。 酢酸エチルからの再結晶をへて、１
５．８９ｇの白色の固体が得られた。 収率は、使用し
た２−フェニルアセチル−２−アザビシクロ［２．２．
１］ヘプト−５−エン−３−オンを基準にして、８０％
であった。
【０１２３】1 Ｈ−ＮＭＲ （CDCl3） ：δ［ppm］ １．２８−１．３５（１Ｈ）； ４００ＭＨｚ １．４０（ｍ，１Ｈ）； ２．３８−２．４５（１Ｈ）； ２．７９（ｍ，１Ｈ）； ３．５０（ＡＢ，syst.，２Ｈ）； ３．５２（ｓ，３Ｈ）； ４．９８（ｍ，１Ｈ）； ５．７５（ｍ，２Ｈ）； ５．９８（ｍ，１Ｈ）； ７．２０−７．３８（５Ｈ）。
【０１２４】［実施例１０］ （±）−１−ＢＯＣ−アミノ−４−（ヒドロキシメチ
ル）−２−シクロペンテン（ＢＯＣ＝ｔ−ブトキシカル
ボニル）の製造 １５ｇの粗製の（±）−１−アミノ−４−ヒドロキシメ
チル−２−シクロペンテン塩酸塩（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅ
ｍ．，１９８１，４６，３２６８の記載に従って製造）
を、１５０mlの水と１５０mlのジオキサンとの混合物
に、窒素雰囲気下に室温で溶解した。 溶液のｐＨを１
Ｎ−ＮａＯＨで１４に調整し、ｔ−ブチロキシカルボニ
ル・フルオライド（ＢＯＣ−Ｆ，２０％過剰）のジエチ
ルエーテル溶液を加えて、混合物をさらに３時間、室温
で撹拌した（ＢＯＣ−Ｆは、Ｓｙｎｔｈｅｉｓ，１９７
５，５９９の開示に従って製造した）。 濃塩酸を加え
て、ｐＨを２に調節した。 有機溶剤の蒸留除去後、５
０mlの水を残渣に加え、その混合物を３×１００mlの酢
酸エチルで抽出した。 一体にした有機相を、完全に蒸
発させた。 残渣を、１１０mlのジイソプロピルエーテ
ルと８０mlのｎ−ヘキサンとの混合溶媒から再結晶し
た。 １１．９５ｇの標題化合物が得られた。収率は５
６％であった。 融点：６８−７０℃。
【０１２５】1 Ｈ−ＮＭＲ （DMSO-d6） ：δ［ppm］ １．１８（ｍ，１Ｈ）； ４００ＭＨｚ １．３８（ｓ，９Ｈ）； ２．２６（ｍ，１Ｈ）； ２．６５（ｍ，１Ｈ）； ３．３３（ｔ，２Ｈ）； ４．４５（ｍ，１Ｈ）； ４．５５（ｔ，１Ｈ）； ５．６２（ｍ，１Ｈ）； ５．７９（ｍ，１Ｈ）； ６．７３（ｄ，１Ｈ）。
【０１２６】［実施例１１］ （±）−１−プロピオニルアミノ−４−（ヒドロキシメ
チル）−２−シクロペンテンの製造 １６．６ｇの粗製の（±）−２−プロピオニル−２−ア
ザビシクロ［２．２．１］ヘプト−５−エン−３−オン
を、水（１４０ml）および２−ブタノール（６６ml）の
混合溶媒に、窒素雰囲気下に溶解して、−５℃に冷却し
た。 ３ｇのナトリウム・ボロハイドライドを、小部分
に分けて、２時間にわたって添加した。混合物を１０℃
で２．５時間撹拌し、ついで濃塩酸と水の混合物（１／
１）で、ｐＨを２．２に調節した。 この溶液を蒸発濃
縮して４０ｇとし、２Ｎ−ＮａＯＨでｐＨを６．２に調
節した。 混合物を、５×５０mlのジクロロメタンで抽
出した。 一体にした有機相を完全に蒸発させ、残渣を
トルエン（１５０ml）中で再結晶させた。 １１．１ｇ
の標題化合物が得られ、収率は６５％であった。 融点：６７−６８℃。
【０１２７】1 Ｈ−ＮＭＲ （DMSO-d6） ：δ［ppm］ ０．９６（ｔ，３Ｈ）； ４００ＭＨｚ １．１６（quint.，１Ｈ）； ２．０４（quart.，２Ｈ）； ２．２６（ｍ，１Ｈ）； ２．６６（ｍ，１Ｈ）； ３．３４（ｍ，２Ｈ）； ４．５８（ｔ，１Ｈ）； ４．７２（ｍ，１Ｈ）； ５．６１（ｍ，１Ｈ）； ５．８４（ｍ，１Ｈ）； ７．７２（ｄ，１Ｈ）。
【０１２８】［実施例１２］ （±）−１−イソブチリルアミノ−４−（ヒドロキシメ
チル）−２−シクロペンテンの製造 ９ｇの（±）−２−イソブチリル−２−アザビシクロ
［２．２．１］ヘプト−５−エン−３−オンを、水（３
２ml）および２−ブタノール（８４ml）の混合溶媒に、
窒素雰囲気下に溶解して、０℃に冷却した。 １．３７
ｇのナトリウム・ボロハイドライドを、小部分に分け
て、３．５時間にわたって添加した。 混合物を３時
間、２０℃で撹拌し、ついで濃塩酸と水との混合物（１
／１）でｐＨを２．５に調節したのち、２Ｎ−ＮａＯＨ
で中和した。 この溶液を蒸発濃縮し４０ｇとした。
残渣を、３×８０mlのジクロロメタンで抽出した。 一
体にした有機相を完全に蒸発させた。 その結果残った
固体を、トルエン２５ml中で再結晶させた。 ６．８ｇ
の標題化合物が得られ、収率は７３．６％であった。 融点：８０−８１℃。
【０１２９】1 Ｈ−ＮＭＲ （DMSO-d6） ：δ［ppm］ ０．９８（ｄ，６Ｈ）； ４００ＭＨｚ １．１６（quint.，１Ｈ）； ２．３０（ｍ，２Ｈ）； ２．６８（ｍ，１Ｈ）； ３．３２（ｔ，２Ｈ）； ４．５８（ｔ，１Ｈ）； ４．７０（ｍ，１Ｈ）； ５．６１（ｍ，１Ｈ）； ５．８２（ｍ，１Ｈ）； ７．６８（ｄ，１Ｈ）。
【０１３０】［実施例１３］ ペニシリンＧアシラーゼを使用した（１Ｒ，４Ｓ）−１
−アミノ−４−（ヒドロキシメチル）−２−シクロペン
テンの製造 Ｅ．コリからのペニシリンＧアシラーゼＥＣ３．５．
１．１１（ベーリンガー・マンハイム社）１６５Ｕ（単
位）／ｇまたはバチルス・メガテリウムからのペニシリ
ンＧアシラーゼＥＣ３．５．１．１１を、バイオ変換に
使用した。
【０１３１】この目的で、５０ｍＭのリン酸ナトリウム
緩衝溶液（ｐＨ５−９；４ml）を、１重量％の１−フェ
ニルアセチルアミノ−４−ヒドロキシメチル−２−シク
ロペンテンの非ラセミ体および４００mgの適当なペニシ
リンＧアシラーゼとともに、培養器に入れて３７℃に保
った。
【０１３２】所定の時間間隔をおいてサンプルをとり、
薄層クロマトグラフィー（シリカゲル６０，ブタノー
ル：水：氷酢酸＝３：１：１，ニンヒドリンを用いて検
出）、ガスクロマトグラフィーまたはＨＰＬＣにより分
析した。 上記の酵素は、フェニルアセチル基を高い活
性をもって離脱させ、それによって最高４０％の対応す
るアミノアルコールを放出させた。 遊離したアミノア
ルコールは、８０％のｅｅをもって得られた。
【０１３３】［実施例１４］ 微生物を使用した（１Ｒ，４Ｓ）−１−アミノ−４−
（ヒドロキシメチル）−２−シクロペンテンの製造 １４．１ ヴィスプにあるＡＲＡ水処理プラントからの
下水スラッジ（２０％）を、０．５重量％の１−アセチ
ル−、１−プロピオニル−、１−イソブチリルまたは１
−ブチリルアミノ−４−ヒドロキシメチル−２−シクロ
ペンテンを含有するＡ＋Ｎ培地（表１参照）中、３７℃
で、撹拌下に培養した。 （１Ｒ，４Ｓ）−１−アミノ
−４−（ヒドロキメチル）−２−シクロペンテンの生成
を薄層クロマトグラフィーで追跡した。
【０１３４】それらの１％濃縮体を用いて１−３転移を
行ない、固体培地（表１の培地中の板状寒天；２０ｇ／
ｌ）上で単離した。 微生物アルカリゲネス／ボルデテ
ラＦＢ１８８（ＤＳＭ１１７２）、ロドコッカス・エリ
スロポリスＣＢ１０１（ＤＳＭ１０６８６）、ゴルドナ
ｓｐ．ＣＢ１００（ＤＳＭ１０６８７）およびロドコッ
カスｓｐ．ＦＢ３８７（ＤＳＭ１１２９１）が、このよ
うにして単離された。
【０１３５】１４．２ 単離された微生物を、０．５％
の１−アセチル−、１−プロピオニル−、１−イソブチ
リルまたは１−ブチリルアミノ−４−ヒドロキシメチル
−２−シクロペンテンを含有する培地（表１）中で培養
した。 それらは、２４ないし３６時間で、光学密度
（ＯＤ）２ないし３に成長した。 このようにして得た
細胞を、成長の後期エクスポネンシャル相において収穫
し、１０ｍＭのフォスフェート緩衝液で洗浄した。
【０１３６】続いてバイオ変換を、１重量％の１−アセ
チル−、１−プロピオニル−、１−イソブチリルまたは
１−ブチリルアミノ−４−ヒドロキシメチル−２−シク
ロペンテンを含有する５０ｍＭフォスフェート緩衝液
（ｐＨ４．５−９）中で実施した。 薄層クロマトグラ
フィーによって、基質の５０％が加水分解され（１Ｒ，
４Ｓ）−１−アミノ−４−（ヒドロキシメチル）−２−
シクロペンテンに変化したことが判明した。 ＨＰＬＣ
分析によるｅｅ値は、８０から９３％の間にあった。
【０１３７】基質として１−ブチリルアミノ−４−ヒド
ロキシメチル−２−シクロペンテンを使用した場合、バ
イオ変換の速度は、ＤＳＭ１０６８６株に関してＡ＋Ｎ
培地上で培養したときに０．１４（ｇ／ｌ／ｈ／ＯＤ）
であり、１−ブチリルアミノ−４−ヒドロキシメチル−
２−シクロペンテンを含有するＮＹＢ（栄養イーストブ
ロス）培地上で培養したときに０．０３（ｇ／ｌ／ｈ／
ＯＤ）であった。
【０１３８】同様な変換を、ＤＳＭ１０６８７株で、基
質（１−ブチリルアミノ−４−ヒドロキシメチル−２−
シクロペンテン）濃度２００ｍＭにおいて実施したとこ
ろ、バイオ変換速度は０．１６１（ｇ／ｌ／ｈ／ＯＤ）
であった。
【０１３９】 表 １ Ａ＋Ｎ培地 ＭｇＣｌ2 ０．４ｇ／ｌ ＣａＣｌ2 ０．０１４ｇ／ｌ ＦｅＣｌ3 ０．８ｍｇ／ｌ Ｎａ2ＳＯ4 ０．１ｇ／ｌ ＫＨ2ＰＯ4 １ｇ／ｌ Ｎａ2ＨＰＯ4 ２．５ｇ／ｌ ＮａＣｌ ３ｇ／ｌ ビタミン溶液 １ｍｌ／ｌ 痕跡量元素溶液 １ｍｌ／ｌ ｐＨ ７．５ １４．３ ロドコッカス・エリスロポリスＤＳＭ１０６
８６を、酢酸アンモニウムを炭素および窒素源として加
えた最小限培地（表２参照）上、６リットルの発酵器
中、３０℃で、細胞密度がＯＤ６５０＞２５に至るまで
培養した。 細胞成長の間、５０％の酢酸を、追加のＣ
源として連続的に添加した。 酵素の活性を誘発するた
め、６０ｇの（＋／−）−１−アセチルアミノ−４−ヒ
ドロキシメチル−２−シクロペンテンを加え、培養を数
時間継続した。 最後に、さらに４０ｇの（＋／−）−
１−アセチルアミノ−４−ヒドロキシメチル−２−シク
ロペンテンを追加し、培養をさらに１０時間行なった。
バイオ変換の進行を、ＨＰＬＣによりオンラインで追
跡した。 分析収率が、使用した基質ラセミ体基準で４
０％、ｅｅが８５％に達したとき、酸を加えて培養を停
止した。
【０１４０】 表 ２ 培地組成 成 分 濃 度 イーストエキス ０．５ｇ／ｌ ペプトンＭ６６ ０．５ｇ／ｌ ＫＨ2ＰＯ4 ４．０ｇ／ｌ Ｎａ2ＨＰＯ4・２Ｈ2Ｏ ０．５ｇ／ｌ Ｋ2ＳＯ4 ２．０ｇ／ｌ ＮＨ4酢酸塩 ３．０ｇ／ｌ ＣａＣｌ2 ０．２ｇ／ｌ ＭｇＣｌ2・６Ｈ2Ｏ １．０ｇ／ｌ 痕跡量元素溶液 １．５ｍｌ／ｌ （下記参照） ＰＰＧ（ポリプロピレングリコール） ０．１ｇ／ｌ 痕跡量元素溶液 ＫＯＨ １５．１ｇ／ｌ ＥＤＴＡ・Ｎａ2・２Ｈ2Ｏ １００．０ｇ／ｌ ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ９．０ｇ／ｌ ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ ４．０ｇ／ｌ Ｈ3ＢＯ3 ２．７ｇ／ｌ ＣｏＣｌ2・６Ｈ2Ｏ １．８ｇ／ｌ ＣｕＣｌ2・２Ｈ2Ｏ １．５ｇ／ｌ ＮｉＣｌ2・６Ｈ2Ｏ ０．１８ｇ／ｌ Ｎａ2ＭｏＯ4・２Ｈ2Ｏ ０．２７ｇ／ｌ １４．４ １４．３と同様にして、微生物アースロバクターｓｐ．
ＨＺＳ５（ＤＳＭ１０３２８）、ロドコッカスｓｐ．Ｆ
Ｂ３８７（ＤＳＭ１１２９１）、アルカリゲネス・キシ
ロソキシダンスｓｓｐ．デニトリフィカンスＨＳＺ１７
（ＤＳＭ１０３２９）、アグロバクテリウム／リゾビウ
ウムＨＳＺ３０、バチルス・シンプレックスＫ２および
シュードモナス・プチダＫ３２を、培地（表１）中、酢
酸ナトリウム上で、以下の記述では「アミノアルコー
ル」と略称する１−アセチル−、１−プロピオニル−、
１−イソブチリル−または１−ブチリル−アミノ−４−
ヒドロキシメチル−２−シクロペンテンが存在する場合
と、しない場合とについて培養を行なった。
【０１４１】次の結果が、アミノアルコールを含有しな
い場合の培養によって、対数増殖細胞において得られた
（ＨＰＬＣ分析）： 菌 株 速度［mmol/OD.h］ ｅｅ/転化率[%] ＨＳＺ５ （ＤＳＭ１０３２８） ０．０５ ８８．７／１６ ＨＳＺ１７（ＤＳＭ１０３２９） ０．００５ ９５／２３ Ｋ３２ ０．０５ ５４／１ ＣＢ１０１（ＤＳＭ１０６８６） ０．１ ８４／３９ さらに、菌株Ｋ２およびＫ１７を培養し、収穫して６０
時間のバイオ変換を行なった。
【０１４２】 菌 株 速度［mmol/OD.h］ ｅｅ/転化率[%] Ｋ２ − ９２／１０ ＨＳＺ３０ − ９３／３．５ 対数増殖細胞および定常増殖細胞をすべてのバッチから
収穫し、静止細胞としてバイオ変換に使用した。 アミ
ノアルコールで誘発された細胞もされなかった細胞も、
初期速度に関して、差異はＴＬＣ分析から認められなか
った。
【０１４３】［実施例１５］ ロドコッカス・エリスロポリスＣＢ１０１（ＤＳＭ１０
６８６）からのＮ−アセチルアミノアルコール・ハイド
ラーゼの精製 酵素を、以下に述べるように精製して、ＳＤＡ−ＰＡＧ
Ｅ（ファルマシア・ファストPharmacia Phast ゲル、１
０−１５％勾配）中、分子量５０ｋＤにおいてただ一本
のタンパク質バンドが残るまでにした。
【０１４４】ロドコッカッス・エリスロポリスＣＢ１０
１（ＤＳＭ１０６８６）の細胞を５０ｍＭのトリス緩衝
液（ｐＨ６．２）中で洗浄し、光学密度ＯＤ650nm １９
０まで濃縮した。 フェニルメタンスルフォニル・フル
オライド（ＰＭＳＦ）を最終濃度１ｍＭとなるよう添加
し、ＳＮＡｓｅを添加した後、粗抽出物を得るため、細
胞をフレンチプレスで処理した。 遠心分離の結果、２
００mlの、細胞を含まず、タンパク質濃度４．８ｍｇ／
ｍｌの抽出物を得た。
【０１４５】９６０ｍｇの細胞を含まない抽出物を、あ
らかじめ１ｍＭのジチオスレイトール（ＤＴＴ）を含有
する５０ｍＭのトリス緩衝液（ｐＨ８．０）で平衡にし
た、ハイロードHiLoar ２６／１０ Ｑ−セファロースイ
オン交換クロマトグラフィー（ファルマシア）に載せ
た。
【０１４６】カラムを同じ緩衝液で洗浄した後、タンパ
ク質を、線状勾配緩衝液（１５００ml；勾配は、１ｍＭ
のＤＴＴを含有する５０ｍＭトリス緩衝液ｐＨ８．０か
ら、１ｍＭのＤＴＴおよび１ＭのＮａＣｌを含有する５
０ｍＭトリス緩衝液ｐＨ７．０に変化）で溶出した。
酵素は、３７０および４３０ｍＭのＮａＣｌカラム、ｐ
Ｈ７．６から溶出した。 活性な分画を集め、９mlに濃
縮した。 タンパク質含有量は４１ｍｇであった。
【０１４７】さらなる精製のため、このタンパク質溶液
を、あらかじめ５０ｍＭのＮａＣｌと１ｍＭのＤＴＴを
含有する５０ｍＭのトリス緩衝液（ｐＨ８．０）で平衡
にした、ハイロード２６／６０スーパーデックスSuperd
ex７５ゲル濾過クロマトグラフィーカラム（ファルマシ
ア）に載せた。 活性な分画を一体にしたところ、全タ
ンパク質含有量は１０．９ｍｇであった。
【０１４８】このタンパク質溶液を、あらかじめ１ｍＭ
のＤＴＴを含有する５０ｍＭのトリス緩衝液（ｐＨ８．
５）で平衡にした、モノ(Mono)ＱＨＲＳ５／５カラム
（ファルマシア）に載せた。 タンパク質は、１ｍＭの
ＤＴＴを含有する５０ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ８．５）
−１ｍＭのＤＴＴおよび１ＭのＮａＣｌを含有する５０
ｍＭトリス緩衝液ｐＨ８．５）の線状勾配（４０ｍｌ）
の下で溶出した。 酵素は、３９０ｍＭ−ＮａＣｌおよ
び４４０ｍＭ−ＮａＣｌの間で溶出した。 活性な分画
は、１．４ｍｇのタンパク質を含有していた。
【０１４９】最終的な精製工程においては、上記と同じ
緩衝液で平衡にした同じカラムを使用した。 使用した
溶出液勾配は、同じ緩衝液で、ＮａＣｌが０−５００ｍ
Ｍと変化し、ｐＨが７．０−８．５と変化するものであ
った。 このようにして、純粋な酵素４３０μｇを単離
することができた。
【０１５０】酵素のＮ−末端配列は、タンパク質ブロッ
トから直接決定された。 下記の２０個のアミノ酸の配
列が得られた： Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｌ
ｅｕ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｔｈ
ｅ−Ｇ；ｌｕ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｖａ
ｌ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ。
【０１５１】この配列は、既知のタンパク質のアミノ酸
配列と類似性を示さなかった。
【０１５２】［実施例１６］ 酵素の特徴付け 精製した酵素と、セルフリーエキストラクトであってセ
ファデックスSEphadexＧ−２５カラム（ＰＤ−１０，フ
ァルマシア）を用いて脱塩してあるものと、両方につい
て、酵素の特徴付けを行なった。
【０１５３】セルフリーエキストラクト中のタンパク質
濃度は７．３ｍｇ／ｍｌであり、精製した酵素のタンパ
ク質濃度は１３５μｇ／ｍｌであった。 セルフリーエ
キストラクトに、ＰＭＳＦを添加しなかった。
【０１５４】１６．１ Ｋｍの測定 Ｋｍの測定をセルフリーエキストラクトについて行なっ
た。 ｐＨ７．０、温度３０℃における反応のＫｍは、
基質１−アセチルアミノ−４−ヒドロキシメチル−２−
シクロペンテンに関して、２２．５ｍＭであった。
【０１５５】１６．２ 最適ｐＨ １−アセチルアミノ−４−ヒドロキシメチル−２−シク
ロペンテン（２５ｍＭ）の加水分解に最適なｐＨの決定
を、精製酵素についても、セルフリーエキストラクトに
ついても、ｐＨ６．２−９．０の範囲において、下記の
緩衝液の中で行なった。 トリス緩衝液１００ｍＭ ｐＨ ９．０； ８．５； ８．
０； ７．５； ７．０ クエン酸／リン酸緩衝液１００ｍＭ ｐＨ ７．０；
６．５５； ６．２ 活性は、２４時間測定した。反応に対する最適ｐＨは、
１Ｒ，４Ｓおよび１Ｓ，４Ｒエナンチオマーに関し、ｐ
Ｈ７．０から７．５の間にあった。セルフリーエキスト
ラクトの活性に対する最適のｐＨは、ｐＨ７．０であっ
た。 しかし、選択性は、ｐＨ６．０から７．０の間で
より良かった。
【０１５６】図１は、ロドコッカス・エリスロポリスＣ
Ｂ１０１（ＤＳＭ１０６８６）からのＮ−アセチルアミ
ノアルコール・ハイドロラーゼ（セルフリーエキストラ
クト）の、ｐＨを関数とする活性を示す。 実施例１
６．２において示された最適反応温度は、２５から３０
℃の間にあった。
【０１５７】図２は、ロドコッカス・エリスロポリスＣ
Ｂ１０１（ＤＳＭ１０６８６）からのＮ−アセチルアミ
ノアルコール・ハイドロラーゼ（セルフリーエキストラ
クト）の、温度を関数とする活性を示す。
【０１５８】１６．４ 分子量は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥを用いて、５０ｋＤと測定
された。
【０１５９】１６．５ 下記の基質を加水分解した：１−アセチルアミノ−４−
ヒドロキシメチル−２−シクロペンテン、１−ブチリル
アミノ−４−ヒドロキシメチル−２−シクロペンテン、
１−プロピオニルアミノ−４−ヒドロキシメチル−２−
シクロペンテン、１−イソブチリルアミノ−４−ヒドロ
キシメチル−２−シクロペンテン。
【０１６０】［実施例１７］ （１Ｒ，４Ｓ）−１−アミノ−４−（ヒドロキシメチ
ル）−２−シクロペンテン塩酸塩の製造 （１Ｒ，４Ｓ）−１−アミノ−４−ヒドロキシメチル−
２−シクロペンテン（製造は実施例１４と類似の方法に
よった）の溶液３７４．１ｇを蒸発させ、１２３．７ｇ
に濃縮した。 この溶液は、６０．２mmolの上記化合物
を含んでいた（ＨＰＬＣ）。 濃度３０％のＮａＯＨを
加えて、ｐＨを２から１１．７に調整し、３×７０ｍｌ
のイソブタノールで抽出した。 一体にしたイソブタノ
ール抽出液のｐＨを、ガス状のＨＣｌを用いて１に調節
し、６５ｇに濃縮して濾過した（固体不純物の除去）。
６０ｍｌのアセトンを、激しく撹拌している濾液に、
２０℃において滴下して加えた。 不透明な混合物に、
標題化合物の結晶を接種して、５℃において１時間撹拌
した。 濾過および乾燥をへて、５．２ｇの生成物を得
た。収率は５８％であった。 融点：１２５−１２７℃。
【０１６１】1 Ｈ−ＮＭＲ （DMSO-d6）：δ［ppm］ １．４４（ｍ，１Ｈ）； ４００ＭＨｚ ２．３５（ｍ，１Ｈ）； ２．８３（ｍ，１Ｈ）； ３．４２（ｍ，２Ｈ）； ４．１０（ｓ，１Ｈ）； ４．８０（ｓ，１Ｈ）； ５．８０（ｄ，１Ｈ）； ６．０６（ｄ，１Ｈ）； ８．１３（ｓ，３Ｈ）。
【０１６２】［実施例１８］ （１Ｒ，４Ｓ）−１−ＢＯＣ−アミノ−４−（ヒドロキ
シメチル）−２−シクロペンテンの製造 （１Ｒ，４Ｓ）−１−アミノ−４−ヒドロキシメチル−
２−シクロペンテン（製造は実施例１４と類似の方法に
よった。；４４．６mmol）の溶液７５ｇのｐＨを、濃度
３０％のＮａＯＨを加えて８に調整し、６ｇのＮａＨＣ
Ｏ3 を添加した。 混合物を５２℃に加熱した。 激し
く撹拌しながら、６０ｍｌのジイソプロピルエーテルを
添加し、１１．１２ｇのＢＯＣ無水物の１８．２ｍｌの
ジイソプロピルエーテル溶液を、２時間かけて量り入れ
た。 混合物をセライトCeriteで濾過し、二相を分離し
た。 水相を６５ｍｌのジイソプロピルエーテルで抽出
した。 一体にした有機相を４５ｍｌの水で洗浄し、蒸
発させて３７．５ｇに濃縮し、５０℃に加熱した。 ３
１ｍｌのｎ−ヘキサンを、この溶液に滴下して加えた。
ゆっくりと（２時間）０℃に冷却し、標題化合物を濾
過により得て、これをｎ−ヘキサン／ジイソプロピルエ
ーテル＝１／１混合液１２ｍｌで洗浄し、乾燥した。
６．７５ｇの生成物を得た。 収率は７１％であった。 融点：７０−７１℃。 ｅｅ９８％（キラルＨＰＬＣカラムで較正）。
【０１６３】1 Ｈ−ＮＭＲ （DMSO-d6）：δ［ppm］ １．１８（ｍ，１Ｈ）； ４００ＭＨｚ １．２７（ｓ，９Ｈ）； ２．２８（ｍ，１Ｈ）； ２．６３（ｍ，１Ｈ）； ３．３３（ｑ，２Ｈ）； ４．４３（ｍ，１Ｈ）； ４．５６（ｔ，１Ｈ）； ５．６２（ｍ，１Ｈ）； ５．７８（ｍ，１Ｈ）； ６．７２（ｄ，１Ｈ）。
【０１６４】［実施例１９］ （１Ｒ，４Ｓ）−１−アミノ−４−（ヒドロキシメチ
ル）−２−シクロペンテン塩酸塩の製造 ８７．８ｇの（１Ｒ，４Ｓ）−１−ＢＯＣ−アミノ−４
−ヒドロキシメチル−２−シクロペンテンを、２７０ｍ
ｌの２Ｎ−ＨＣｌと１３４０ｍｌのメタノールとの混合
液に溶解した。 混合物を、環流下に、４．５時間沸騰
させた。 メタノールを蒸留除去し、残渣を８００ｍｌ
の水に溶解した。 水性の溶液を２回、３４０ｍｌの酢
酸エチルで抽出した。 水性層を完全に蒸発させた（５
０℃，６０mbar）。 固体を、５０℃において真空下に
乾燥し、１５０ｍｌのジエチルエーテル中に懸濁させ、
濾過した後、５０ｍｌのジエチルエーテルで２回、洗浄
した。 乾燥して、標題化合物を９５％の収率（５８．
４ｇ）で得た。
【０１６５】生成物の物理的および分光工学的なデータ
は、実施例１７の生成物のそれらと同じであった。
【０１６６】［実施例２０］ （１Ｒ，４Ｓ）−１−アセチルアミノ−４−（ヒドロキ
シメチル）−２−シクロペンテンの製造 ２５ｇの（１Ｒ，４Ｓ）−１−アミノ−４−（ヒドロキ
シメチル）−２−シクロペンテン塩酸塩を１８２ｍｌの
無水酢酸に溶解し、０℃において、これに、１８．２５
ｇのトリエチルアミンの無水酢酸６０ｍｌ中の溶液を添
加した。 混合物を８０℃において３時間撹拌し、つい
で室温に冷却した。 トリエチルアミン塩酸塩を濾過分
離し、１２０ｍｌのｎ−ヘキサンで洗浄した。 濾液を
蒸発させた。 残渣を３００ｍｌのトルエンに混合し、
５．２ｇの活性炭および１３ｇのセライトの存在下に、
室温で２０分間撹拌した。 濾過およびフィルターケー
クの洗浄（３×４０ｍｌのトルエン）後、溶媒を完全に
蒸発除去した。 残渣を１８０ｍｌのメタノールおよび
１５．５ｇのＫ2ＣＯ3と混合し、室温で１０時間撹拌し
た。 懸濁液を濾過し、濾液を蒸発させた。 残渣を７
５０ｍｌの酢酸イソプロピルに懸濁させ、０．５ｇの活
性炭の存在下に、還流下に１．５時間沸騰させた。 活
性炭の濾過分離後（７０〜８０℃）、濾液を０℃に一夜
冷却した。標題化合物を濾別し、８０ｍｌの冷酢酸イソ
プロピルで洗浄し、真空下に乾燥した。 １７．２ｇの
生成物が得られた。 収率は６６％であった。 融点：７７−８０℃。
【０１６７】ｅｅ９８％（キラルＨＰＬＣカラムで較
正）1 Ｈ−ＮＭＲ （DMSO-d6）：δ［ppm］ １．１５（ｍ，１Ｈ）； ４００ＭＨｚ １．７８（ｓ，３Ｈ）； ２．２５（ｍ，１Ｈ）； ２．６６（ｍ，１Ｈ）； ３．３５（ｍ，２Ｈ）； ４．５８（ｔ，１Ｈ）； ４．７０（ｍ，１Ｈ）； ５．６２（ｍ，１Ｈ）； ５．８５（ｍ，１Ｈ）； ７．８０（ｄ，１Ｈ）。
【０１６８】［実施例２１］ （１Ｓ，４Ｒ）−１−アセチルアミノ−４−（ヒドロキ
シメチル）−２−シクロペンテンの製造 標題に掲げたエナンチオマーは、２５ｇの（１Ｓ，４
Ｒ）−１−アミノ−４−ヒドロキシメチル−２−シクロ
ペンテン・塩酸塩から出発して、実施例１８の方法によ
り、製造することができた（収率６８％）。 生成物の
分光光学的および物理的データは、実施例２０と同じで
あった。
【０１６９】［実施例２２］ （１Ｓ，４Ｒ）−１−ブチリルアミノ−４−（ヒドロキ
シメチル）−２−シクロペンテンの製造 ３４．７ｇの（１Ｒ，４Ｓ）−１−アミノ−４−ヒドロ
キシメチル−２−シクロペンテン・塩酸塩および２ｇの
４−Ｎ，Ｎ−ジメチル−アミノピリジンを、６００mlの
メチレンクロライドに溶解した。 溶液を０℃に冷却し
た。 ついで、５２ｇのトリエチルアミンを滴下して加
えた（５分間）。 混合物を、３０分間撹拌した。 ３
５．２ｇのブチリルクロライドを６０mlのメチレンクロ
ライドに溶解した溶液を、この混合物に、０℃におい
て、１時間をかけて加えた。 混合物をさらに１．５時
間、０℃と２０℃の間の温度で撹拌し、ついで６００ml
の水を加えた。 相分離の後、水相を６００mlのメチレ
ンクロライドで抽出した。一体にした有機相を、濃度１
０％のＮａＯＨを毎回５００ml用いて３回洗浄し、完全
に蒸発させた。 乾燥した固体を、１２０mlのメタノー
ルに溶解した。 その溶液を５ｇのＫ2ＣＯ3と混合し、
さらに２時間、室温で撹拌した。 無機塩類を濾過して
分け、２０mlのメタノールで洗浄した。 濾液を、２Ｎ
−ＨＣｌで中和した。 懸濁体を濾過し、フィルターケ
ークを２０mlのメタノールで洗浄した。 濾液を完全に
蒸発させた。固体残渣を乾燥し、１５０mlのトルエンか
ら再結晶した。 ２８．５ｇの標題化合物が得られた。
収率は６７％であった。
【０１７０】融点：７１−７２℃ ｅｅ９８％（キラルＨＰＬＣで較正）1 Ｈ−ＮＭＲ （DMSO-d6）：δ［ppm］ ０．８５（ｔ，３Ｈ）； ４００ＭＨｚ １．１５（ｍ，１Ｈ）； １．５０（ｑ，２Ｈ）； ２．０３（ｄ，２Ｈ）； ２．２８（ｍ，１Ｈ）； ２．６７（ｍ，１Ｈ）； ３．３５（ｄ，２Ｈ）； ４．６２（ｓ，１Ｈ）； ４．７６（ｍ，１Ｈ）； ５．６３（ｍ，１Ｈ）； ５．８５（ｍ，１Ｈ）； ７．７７（ｄ，１Ｈ）。
【０１７１】［実施例２３］ （１Ｓ，４Ｒ）−１−ブチリルアミノ−４−（ヒドロキ
シメチル）−２−シクロペンテンの製造 標題のエナンチオマーは、３４．７ｇの（１Ｓ，４Ｒ）
−１−アミノ−４−ヒドロキシメチル−２−シクロペン
テン・ハイドロクロライドから出発して、実施例２０の
方法により、製造することができた（収率６３％）。
生成物の分光光学的および物理的データは、実施例２２
と同じであった。
【０１７２】［実施例２４］ （１Ｓ，４Ｒ）−１−［（２−アミノ−６−クロロ−５
−フォルムアミド−４−ピリミジニル）アミノ］−４−
（ヒドロキシメチル）−２−シクロペンテンの製造 ２．０７ｇのＮ−（２−アミノ−４，６−ジクロロ−５
−ピリミジニル）フォルムアミドを、４０mlのイソブタ
ノール中（白色の懸濁体として）、８０℃に加熱した。
１．９７ｇの（１Ｒ，４Ｓ）−１−アミノ−４−ヒド
ロキシメチル−２−シクロペンテン・塩酸塩、３．８ｇ
のトリエチルアミンおよび１５mlのイソブタノールを、
この混合物に加えた。 混合物を８０℃においてさらに
１３時間撹拌した。 １０mlの１Ｎ−ＮａＯＨを、この
透明な溶液に２０℃で加え、続いて蒸発させ、乾固に至
らせた。 残渣を、フラッシュクロマトグラフィーにか
けた（シリカゲル６０カラム、長さ８cm、直径６．５c
m、溶離剤は酢酸エチル／メタノール＝９５／５）。
溶離剤を蒸発除去して残渣を乾燥した後、２．１ｇの標
題化合物が得られた。 収率は７４％であった。
【０１７３】融点：１７４−１７６℃ ｅｅ９８％（キラルＨＰＬＣで較正）1 Ｈ−ＮＭＲ （DMSO-d6）：δ［ppm］ １．３７（ｍ，１Ｈ）； ４００ＭＨｚ ２．３５（ｍ，１Ｈ）； ２．７３（ｍ，２Ｈ）； ３．３８（ｔ，２Ｈ）； ４．６８（ｍ，１Ｈ）； ５．０８（ｍ，１Ｈ）； ５．７０（ｄ，１Ｈ）； ５．８５（ｄ，１Ｈ）； ６．４０；６．５５および ６．６５（ｓ，ｄｄ，３Ｈとともに） ７．７８および８．１０（ｄとｓ， １Ｈとともに） ８．５５および８．９５（ｄとｓ， １Ｈとともに） ［実施例２５］ （１Ｒ，４Ｓ）−１−［（２−アミノ−６−クロロ−５
−フォルムアミド−４−ピリミジニル）アミノ］−４−
（ヒドロキシメチル）−２−シクロペンテンの製造 １４５．２mlの（１Ｒ，４Ｓ）−１−アミノ−（ヒドロ
キシメチル）−２−シクロペンテン溶液（実施例１４に
類似の方法により製造した）を、２５．５mlに濃縮し、
セライト上で濾過した。 フィルターケークを、７．５
mlの水で洗浄した。 濾液は１７．７mmolの上記化合物
を含有していた（ＨＰＬＣ）。 これに濃ＨＣｌを加え
てｐＨを６．６から１に調整し、３回、２０mlずつのイ
ソブタノールで抽出した。 有機相は捨てた。 水性相
は濃度３０％のＮａＯＨでｐＨを１２に調整し、３回、
１０mlずつのイソブタノールで抽出した。 一体にした
有機相を蒸発濃縮して１５mlとし、２．５３ｇのトリエ
チルアミンを加えた。 この混合物に、２．０７ｇのＮ
−（２−アミノ−４，６−ジクロロ−５−ピリミジニ
ル）フォルムアミドの４０mlのエタノール中の溶液を、
実施例２４と同様に加えた。混合物を、８０℃において
１６時間撹拌した。 実施例２２と同様に処理して、
２．４ｇの標題化合物を得た。 収率は８５％であっ
た。
【０１７４】生成物の分光光学的および物理的データ
は、実施例２４と同じであった。
【０１７５】［実施例２６］ （±）−１−ＢＯＣ−アミノ−２−シクロペンテン−４
−カルボン酸の製造 １６．４ｇの粗製（±）−１−ＢＯＣ−アミノ−２−シ
クロペンテン−４−カルボン酸・塩酸塩（Ｊ．Ｏｒｇ．
Ｃｈｅｍ．，１９８１，４６，３２６８に記載のように
して製造）を、８０mlの水と８０mlのジオキサンの混合
物に、室温で、窒素雰囲気下に溶解した。 溶液を、１
Ｎ−ＨＣｌでｐＨ１４に調整し、ｔ−ブチロキシカルボ
ニル・フルオライド（ＢＯＣ−Ｆ，２０％過剰）の、ジ
エチルエーテル溶液を添加した（ＢＯＣ−Ｆは、ｓｙｎ
ｔｈｅｓｉｓ，１９７５，５９９に記載のようにして製
造したもの）。 混合物を、さらに５時間、室温で撹拌
した。 濃ＨＣｌでｐＨを２に調整した。 有機溶媒を
蒸留除去した後、５０mlの水を残渣に加え、混合物を３
回、各回１００mlの酢酸エチルで抽出した。 有機相を
蒸発させて５０mlにし、２５mlのトルエンで希釈した。
冷却した（０〜１０℃）後、標題化合物を濾過し、乾
燥した。 １４．３ｇの製品が得られた。収率は６３％
であった。
【０１７６】融点：１２６−１２７℃1 Ｈ−ＮＭＲ （DMSO-d6）：δ［ppm］ １．１４（ｓ，９Ｈ） ４００ＭＨｚ １．７０（ｍ，１Ｈ）； ２．４０（ｍ，１Ｈ）； ３．４０（ｍ，１Ｈ）； ４．４７（ｍ，１Ｈ）； ５．７０（ｔ，１Ｈ）； ４．８７（ｔ，１Ｈ）； ６．８８（ｄ，１Ｈ）； １２．３０（ｄ，１Ｈ）。
【０１７７】［実施例２７］ （±）−１−ＢＯＣ−アミノ−２−シクロペンテン−４
−カルボン酸からの（±）−１−ＢＯＣ−アミノ−４−
（ヒドロキシメチル）−２−シクロペンテンの製造 ２５０mlのテトラヒドロフランと１０．０２ｇ（０．１
６４mmol）のＬｉＡｌＨ3とを、５００mlの撹拌機つき
容器に入れ、３０．０ｇ（０．１３２mol）の（±）−
１−ＢＯＣ−アミノ−２−シクロペンテン−４−カルボ
ン酸のテトラヒドロフラン７５ml中の溶液を、−１０℃
で、１時間かけて計量して入れた。 つぎに、１０ｇの
水、１０ｇの濃度１５％ＮａＯＨ溶液、および水２０ｇ
をこれに添加し、濾過した。 残渣を２回、各回１００
mlのｔ−ブチルメチルエーテルで洗浄し、一体にした有
機相を、蒸発乾固させた。 ヘキサン８０mlを添加した
のち、実施例１０で製造した化合物を接種したところ、
標題化合物が、結晶性の固体として分離された。 収量
は１５．８４ｇ（５６％）であった。 生成物の分光光
学的および物理的データは、実施例１０と同じであっ
た。
【０１７８】［実施例２８］ （１Ｒ，４Ｓ）−１−ＢＯＣ−アミノ−２−シクロペン
テン−４−カルボン酸からの（１Ｒ，４Ｓ）−１−ＢＯ
Ｃ−アミノ−４−（ヒドロキシメチル）−２−シクロペ
ンテンの製造 ８０mlのテトラヒドロフランと、１１．３８ｇ（５０．
０７mmol）の（１Ｒ，４Ｓ）−１−ＢＯＣ−アミノ−２
−シクロペンテン−４−カルボン酸（Ｔｅｔｒａｈｅｄ
ｒｏｎ：Ａｓｙｍｍｅｔｒｙ、１９９３，４，１１１７
に記載のようにして製造）とを、５００mlの撹拌機つき
容器に入れ、５mlのボラン／ジメチルサルファイド錯体
を、−１５℃で、１時間かけて計量して入れ、混合物を
この温度で３時間撹拌した。 ４ｇのＮａＯＨを水６０
mlに溶解した溶液を加え、室温まで温めた。 トルエン
を用いた抽出、シリカゲルを通す濾過、およびそれに続
く酢酸エチル／ｎ−ヘキサン１：１中の再結晶によっ
て、収率５７％に相当する５．４ｇの標題化合物が、白
色の結晶状固体として得られた。 生成物の分光光学的
および物理的データは、実施例１０と同じであった。
ｅｅは９９％（同じキラルＨＰＬＣカラム）。
【図面の簡単な説明】
【図１】 実施例１６のデータであって、ロドコッカス
・エリスロポリスＣＢ１０１（ＤＳＭ１０６８６）から
のＮ−アセチルアミノアルコール・ハイドロラーゼ（細
胞を含有しないエキス）の、ｐＨを関数とする活性を示
すグラフ。
【図２】 やはり実施例１６のデータであって、ロドコ
ッカス・エリスロポリスＣＢ１０１（ＤＳＭ１０６８
６）からのＮ−アセチルアミノアルコール・ハイドロラ
ーゼ（細胞を含有しないエキス）の、温度を関数とする
活性を示すグラフ。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:06） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:09） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:38） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:01） Ｃ０７Ｍ 7:00 (72)発明者 オルウェン メアリ バーチ スイス国 ヴィスプ ＣＨ−3930 ヴァイ ンガルテンヴェク 16 (72)発明者 クルト ブルクドルフ スイス国 リート・ブリック ＣＨ−3911 リングヴルム 23 (72)発明者 フランク ブルックス スイス国 ラロン ＣＨ−3942 ハウス フォルメス（番地なし) (72)発明者 ケイ・サラ エッター スイス国 ニーダーガンペル ＣＨ−3945 オーベルドルフ（番地なし) (72)発明者 ピエール ボサール スイス国 オネックス（カントン・ゲン フ） ＣＨ−1213 アヴェニュー・ドウ・ グロ・シェーヌ 31 (72)発明者 ヴァルター ブリーデン スイス国 ブリック・グリス ＣＨ−3902 グルントビールシュトラーセ ９ (72)発明者 ローラン デュク スイス国 シェルミニヨン ＣＨ−3971 ラ・バラッツ (72)発明者 ジョン ゴードン スイス国 ナーテアス ＣＨ−3904 フル カシュトラーセ 39 (72)発明者 コルム オマーチュ スイス国 ヴィスプ ＣＨ−3930 ゲブラ イテンヴェク ４Ｂ (72)発明者 イヴ グッギスベルク スイス国 シエール ＣＨ−3960 ロトー ン 11

Claims (18)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 下式ＩまたはIIの（１Ｓ，４Ｒ）−また
    は（１Ｒ，４Ｓ）−４−（２−アミノ−６−クロロ−９
    Ｈ−プリン−９−イル）−２−シクロペンテン−１−メ
    タノールまたはその塩を製造する方法であって、 【化１】 第一段階において、式IIIの（±）−２−アザビシクロ
    ［２．２．１］ヘプト−５−エン−３−オン 【化２】 をアシル化して、一般式IVの（±）−２−アザビシクロ
    ［２．２．１］ヘプト−５−エン−３−オン誘導体と
    し、 【化３】 （式中、Ｒ1 はＣ1-4アルキル、Ｃ1-4アルコキシ、アリ
    ールまたはアリロキシを表す。） 第二段階において、後者を還元して、一般式Ｖのシクロ
    ペンテン誘導体とし、 【化４】 （式中、Ｒ1 は前記した意味を有する。） 第三段階において、後者を、一般式Ｖのシクロペンテン
    誘導体を唯一の窒素源として、唯一の炭素源として、ま
    たは唯一の窒素源および唯一の炭素源として資化する能
    力をもった微生物を利用するか、Ｎ−アセチルアミノア
    ルコール・ヒドロラーゼ活性またはペニシリンＧアシラ
    ーゼ活性を有する酵素を利用するかして、一般式VIまた
    はVII の（１Ｓ，４Ｒ）−または（１Ｒ，４Ｓ）−１−
    アミノ−４−（ヒドロキシメチル）−２−シクロペンテ
    ン誘導体とし、 【化５】 第四段階において、後者を、式VIIIのＮ−（２−アミノ
    −４、６−ジクロロ−５−ピリミジニル）フォルムアミ
    ドを用いて、 【化６】 式IXまたはＸの（１Ｓ，４Ｒ）−または（１Ｒ，４Ｓ）
    −４−［（２−アミノ−６−クロロ−５−フォルムアミ
    ド−４−ピリミジニル）アミノ］−２−シクロペンテン
    −１−メタノールとし、 【化７】 第五段階において、後者を既知の手法により環化して、
    最終生成物である式ＩまたはIIの化合物を得ることを特
    徴とする製造方法。
  2. 【請求項２】 第一段階のアシル化を、一般式XIのハロ
    ゲン化カルボニル 【化８】 （式中、Ｒ1 は前記した意味を有し、Ｘはハロゲン原子
    を表す。） または一般式XIIのカルボン酸無水物 【化９】 を使用して実施することを特徴とする請求項１の製造方
    法。
  3. 【請求項３】 第一段階のアシル化を、アプロティック
    な溶媒を使用して実施することを特徴とする請求項１ま
    たは２の製造方法。
  4. 【請求項４】 第二段階の還元を、アルカリ金属または
    アルカリ土類金属のボロハイドライド、アルカリ金属ま
    たはアルカリ土類金属のアルミニウムハイドライド、ま
    たはビトライド（Vitride）を使用して実施することを
    特徴とする請求項１ないし３のいずれかの製造方法。
  5. 【請求項５】 第二段階の還元を、プロティックな溶媒
    を使用して実施することを特徴とする請求項１ないし４
    のいずれかの製造方法。
  6. 【請求項６】 第三段階の反応を、ロドコッカス(Rhodo
    coccus) 、ゴルドナ(Gordona)、アースロバクター(Arth
    robacter)、アルカリゲネス(Alcaligenes)、アグロバク
    テリウム／リゾビウム(Agrobacterium/Rhizobium)、バ
    チルス(BAcillus)、シュードモナス(Pseudomonas)また
    はアルカリゲネス／ボルデテラ(Alcaligenes/Brodetell
    a)属の微生物を利用して実施することを特徴とする請求
    項１ないし５のいずれかの製造方法。
  7. 【請求項７】 第三段階の反応を、バチルス・メガテリ
    ウム(Bacillus megaterium) またはエシェリチア・コリ
    (Escherichia coli)からのペニシリンＧアシラーゼを使
    用して実施することを特徴とする請求項１ないし６のい
    ずれかの製造方法。
  8. 【請求項８】 第三段階の生物学的変換を、温度２０な
    いし４０℃、およびｐＨ５ないし９において実施するこ
    とを特徴とする請求項１ないし７のいずれかの製造方
    法。
  9. 【請求項９】 第四段階の反応を、塩基の存在下に実施
    することを特徴とする請求項１ないし８のいずれかの製
    造方法。
  10. 【請求項１０】 第四段階の反応を、プロティックな溶
    媒中で実施することを特徴とする請求項１ないし９のい
    ずれかの製造方法。
  11. 【請求項１１】 一般式XVI またはXVIIの（１Ｒ，４
    Ｓ）−または（１Ｓ，４Ｒ）−１−アミノ−４−（ヒド
    ロキシメチル）−２−シクロペンテン誘導体のエナンチ
    オマーを製造する方法であって、 【化１０】 （式中、Ｒ1 は前記した意味を有する。） 第一段階において、一般式Ｖのシクロペンテン誘導体
    を、 【化１１】 （式中、Ｒ1 は前記した意味を有する。） 一般式Ｖのシクロペンテン誘導体を唯一の窒素源とし
    て、唯一の炭素源として、または唯一の窒素源および唯
    一の炭素源として資化する能力をもった微生物を利用す
    るか、Ｎ−アセチルアミノアルコール・ヒドロラーゼ活
    性またはペニシリンＧアシラーゼ活性を有する酵素を利
    用するかして、式VIまたはVII の（１Ｒ，４Ｓ）−また
    は（１Ｓ，４Ｒ）−１−アミノ−４−（ヒドロキシメチ
    ル）−２−シクロペンテン 【化１２】 に変換し、後者を第二段階においてアシル化して、式XV
    I またはXVIIの化合物を得ることを特徴とする製造方
    法。
  12. 【請求項１２】 請求項１１の方法によって得られ、０
    ％を超えるエナンチオマー・アクセスの状態にある、式
    XVIII の（１Ｒ，４Ｓ）−１−ブチリルアミノ−４−
    （ヒドロキシメチル）−２−シクロペンテンのエナンチ
    オマー。 【化１３】
  13. 【請求項１３】 請求項１１の方法によって得られ、少
    なくとも８０％のエナンチオマー・アクセスの状態にあ
    る請求項１２のエナンチオマー。
  14. 【請求項１４】 請求項１１の方法によって得られ、少
    なくとも９０％のエナンチオマー・アクセスの状態にあ
    る請求項１２のエナンチオマー。
  15. 【請求項１５】 請求項１１の方法によって得られ、少
    なくとも９５％のエナンチオマー・アクセスの状態にあ
    る請求項１２のエナンチオマー。
  16. 【請求項１６】 請求項１１の方法によって得られ、少
    なくとも９８％のエナンチオマー・アクセスの状態にあ
    る請求項１２のエナンチオマー。
  17. 【請求項１７】 １−ブチルアミノ−４−（ヒドロキシ
    メチル）−２−シクロペンテン誘導体のラセミ体。
  18. 【請求項１８】 式XIIIの４−（ヒドロキシメチル）−
    ２−シクロペンテン誘導体 【化１４】 （式中、Ｒ1 は前記した意味を有する。）のラセミ体ま
    たは光学活性体の製造方法であって、第一段階におい
    て、式XIV のシクロペンテン−４−カルボン酸 【化１５】 のラセミ体または光学活性な異性体のいずれか一つを、
    一般式XIのカルボン酸ハロゲン化物 【化１６】 （式中、Ｒ1 およびＸは、前記した意味を有する。）で
    アシル化して、一般式XVのシクロペンテン−４−カルボ
    ン酸誘導体とし、 【化１７】 第二段階において後者を還元して、目的とする式XIIIの
    化合物を得ることを特徴とする製造方法。
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