HU222353B1 - Az N-terminálison szulfonil- vagy szulfamoil-csoportokat tartalmazó dipeptid-(p-amido-benzil)-amidok és alkalmazásuk - Google Patents

Az N-terminálison szulfonil- vagy szulfamoil-csoportokat tartalmazó dipeptid-(p-amido-benzil)-amidok és alkalmazásuk Download PDF

Info

Publication number
HU222353B1
HU222353B1 HU9702107A HU9702107A HU222353B1 HU 222353 B1 HU222353 B1 HU 222353B1 HU 9702107 A HU9702107 A HU 9702107A HU 9702107 A HU9702107 A HU 9702107A HU 222353 B1 HU222353 B1 HU 222353B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
amide
proline
formula
solution
acid
Prior art date
Application number
HU9702107A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT77289A (hu
Inventor
Hans-Joachim Böhm
Wilfried Hornberger
Hans Wolfgang Höffken
Stefan Koser
Helmut Mack
Thomas Pfeiffer
Werner Seitz
Thomas Zierke
Original Assignee
Abbott Gmbh & Co. Kg
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Abbott Gmbh & Co. Kg filed Critical Abbott Gmbh & Co. Kg
Publication of HUT77289A publication Critical patent/HUT77289A/hu
Publication of HU222353B1 publication Critical patent/HU222353B1/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0812—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06026—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atom, i.e. Gly or Ala
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06034—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms
    • C07K5/06043—Leu-amino acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06078—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06104—Dipeptides with the first amino acid being acidic
    • C07K5/06113—Asp- or Asn-amino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Abstract

A találmány tárgyát az (I) általános képletű vegyületek,sztereoizomerjeik és fiziológiailag elviselhető savakkal alkotott sóikképezik, amelyek képletében R1 1–20 szénatomos alkilcsoport, 1–3fluoratommal szubsztituált 1–3 szénatomos alkilcsoport, fenil-,naftil-, tienil-, pi- ridil- vagy hidroxilcsoport vagy egy R3R2N–általános képletű csoport, amely képletben R2 és R3 jelentéseegymástól függetlenül hidrogénatom vagy 1–7 szénatomos alkilcsoport, Aolyan (II) általános képletű ?-aminosavmaradék, amely képletben R5jelentése hidrogénatom, 1–7 szénatomos alkilcsoport, 3–7 szénatomoscikloalkilcsoport, 3–7 szénatomos cikloalkil-, fenil- vagynaftilcsoporttal szubsztituált 1–3 szénatomos alkilcsoport, vagy adottesetben mindkét fenilcsoporton 4-- helyzetben klóratommalszubsztituált difenil-metil-csoport, B olyan (III) általános képletűgyűrűs ?-aminosavmaradék, amely képletben m értéke 2, 3 vagy 4, és agyűrű két vicinális hidrogénatomja helyett egy kötés lehet. Avegyületek felhasználhatók megfelelő készítmények formájában olyanbetegségek kezelésére és megelőzésére, amelyekben a trombin jelentősszerepet játszik. ŕ

Description

A leírás terjedelme 14 oldal (ezen belül 3 lap ábra)
HU 222 353 B1
HU 222 353 Bl
A találmány tárgyát az N-terminálison szulfonil- vagy szulfamoilcsoportokat tartalmazó új dipeptid-(p-amidino-benzil)-amidok és trombininhibitorként történő felhasználásuk képezi.
Az EP 601 459 számú európai szabadalmi leírás olyan heterociklusos trombininhibitorokat ismertet, amelyekben egy szulfonamidcsoport található. A WO 93/11152 számú leírás az (Ί) általános képletnek megfelelő, de a benzil-amidino-csoport helyett amidinocsoportot tartalmazó vegyületeket ismertet, amelyek trombininhibitorok.
A találmány tárgyát az (I) általános képletű vegyületek, sztereoizomeqeik és fiziológiailag elviselhető savakkal alkotott sóik képezik, amelyek képletében R1 1-20 szénatomos alkilcsoport, 1-3 fluoratommal szubsztituált 1-3 szénatomos alkilcsoport, fenil-, naftil-, tienil-, piridil- vagy hidroxilcsoport vagy egy R3R2N- általános képletű csoport, amely képletben R2 és R3 jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy 1-7 szénatomos alkilcsoport,
A olyan (II) általános képletű a-aminosavmaradék, amely képletben
R5 jelentése hidrogénatom, 1-7 szénatomos alkilcsoport, 3-7 szénatomos cikloalkilcsoport, 3-7 szénatomos cikloalkil-, fenil- vagy naftilcsoporttal szubsztituált 1-3 szénatomos alkilcsoport, vagy adott esetben mindkét fenilcsoporton 4-helyzetben klóratommal szubsztituált difenil-metil-csoport,
B olyan (III) általános képletű gyűrűs a-aminosavmaradék, amely képletben m értéke 2,3 vagy 4, és a gyűrű két vicinális hidrogénatomja helyett egy kötés lehet.
Az R1, A és B maradékok az (I) általános képletnek megfelelően kapcsolódhatnak egymáshoz, ahol az A aminosavmaradékok konfigurációja előnyösen (D), míg a B aminosavmaradékoké előnyösen (L).
Előnyösek a következő vegyületek: CF3CH2-SO2-(D)Phe-Pro-NH-pAmb, C4H9-S02-(D)Phe-Pro-NH-pAmb, C8H17-SO2-(D)Phe-Pro-pAmb, C16H33-SO2-(D)Phe-Pro-NH-pAmb, (CH3)2CH-SO2-(D)Phe-Pro-NH-pAmb, fenil-SO2-(D)Phe-Pro-NH-pAmb,
2- naftil-SO2-(D)Phe-Pro-NH-pAmb,
3- piridil-SO2-(D)Phe-Pro-NH-pAmb,
2-tienil-SO2-(D)Phe-Pro-NH-pAmb, piperidino-SO2-(D)Phe-Pro-NH-pAmb,
H2N-SO2-(D)Phe-Pro-NH-pAmb, (CH3)2N-SO2-(D)Phe-Pro-NH-pAmb,
C2H5HN- SO2-(D)Phe-Pro-NH-pAmb,
CH3-SO2-(D)DPa-Pro-NH-pAmb,
CH3-SO2-(L)Dpa-Pro-NH-pAmb,
CH3-SO2-(D)Dpa(4,4’-Cl)-Pro-NH-pAmb,
CH3-SO2-(L)Dpa(4,4’-Cl)-Pro-NH-pAmb,
CH3- SO2-(D)Phe-Aze-NH-pAmb, CH3-SO2-(D)Phe-Pip-NH-pAmb és l-naftil-SO2-Gly-Pro-NH-pAmb.
A felsorolásban használt rövidítések jelentése a következő: Phe=fenil-alanin, pAmb=p-amidino-benzil-,
Pro=prolin, Dpa=difenil-alanin, Phg=fenil-glicin, Asp=aszparaginsav, Aze=azetidin-2-karbonsav, Pip=pipekolinsav.
Az (I) általános képletű vegyületek önmagukban vagy fiziológiailag elviselhető savakkal képezett sók formájában fordulhatnak elő. Ilyen savak például a következők: sósav, citromsav, borkősav, tejsav, foszforsav, metánszulfonsav, ecetsav, hangyasav, maleinsav, fiunársav, borostyánkősav, hidroxi-borostyánkősav, kénsav, glutársav, aszparaginsav, piroszőlősav, benzoesav, glükuronsav, oxálsav, aszkorbinsav és acetil-glicin.
Az (I) általános képletű vegyületeket egy H-A-OH általános képletű α-aminosavból, illetve egy B-OH általános képletű, a N-atomon védett gyűrűs aminosavból az [A], illetve a [B] reakcióvázlat szerint állíthatjuk elő. Az [A] reakcióvázlatban R7 jelentése hidrogénatom vagy 1-4 szénatomos alkilcsoport, R8 jelentése 1-4 szénatomos alkil-, előnyösen metil- vagy terc-butil-csoport, R9 jelentése cianocsoport vagy (u) általános képletű amidíniumcsoport, amely képletben X jelentése klorid-, bromid-, jodid- vagy acetátion, és P jelentése egy védőcsoport, előnyösen terc-butoxi-karbonil- (Boc) vagy (benzil-oxi)-karbonil-csoport (Cbz).
Alternatív módon úgy is eljárhatunk, hogy a P-A-OH és H-B-OR8 általános képletű védett aminosavakat a P-A-B-OR8 általános képletű dipeptiddé összekapcsoljuk, majd a P védőcsoportot eltávolítva a maradékot egy RtSÍ^Cl általános képletű szulfonil-kloriddal, illetve az R8 csoportot p-ciano- vagy p-amidino-benzil-aminnal reagáltatjuk; a reakciók sorrendje tetszőleges lehet.
Az R1SO2-A-OH általános képletű vegyületet közvetlenül is kapcsolhatjuk a para-H-B-NH-CH2C6H4R9 általános képletű reagenssel az (I) általános képletű végtermékké, illetve a (IV) általános képletű köztitermékké.
A szükséges kapcsolási reakciókat a peptidkémiában szokásos standard körülmények között hajthatjuk végre (lásd: M. Bodansky, A. Bodansky „The Practice of Peptide Synthesis”, Springer Verlag, 1984).
A Boc-védőcsoportokat hidrogén-klorid/dioxán vagy trifluor-ecetsav/metilén-diklorid elegyekkel, a Cbzvédőcsoportokat hidrogenolitikusan vagy hidrogén-fluoriddal hasíthatjuk le. Az észtercsoportokat alkoholos oldószerekben, például metanolban vagy etanolban nátrium-hidroxiddal vagy lítium-hidroxiddal, a terc-butilésztereket savakkal, például trifluor-ecetsawal szappanosítjuk el.
Az R!SO2C1 általános képletű szulfonil-kloridokkal végzett reakciókat szerves bázis, például trietil-amin, piridin vagy Ν,Ν-diizopropil-etil-amin jelenlétében szerves oldószerekben, például metilén-diklorid, tetrahidrofurán vagy Ν,Ν-dimetil-formamid oldószerekben hajtjuk végre. Amennyiben a molekulában szabad karbonsavfunkció található, a reakciót vizes alkálifém-hidroxid- vagy -karbonát-oldatban hajtjuk végre.
A cianocsoport amidinocsoporttá történő átalakítása a klasszikus Pinner-szintézis [R. Roger és D. G. Neilson, Chem. Rév. 61, 179 (1969)] vagy előnyösen egy módosított Pinner-szintézis szerint, imino-tioétersó köztiterméken keresztül megy végbe. [H. Vieweg et
HU 222 353 Bl al., Pharmazie 39, 226 (1984)]. A cianocsoport és hidroxil-amin addíciójával nyerhető N-hidroxi-amidinek Raney-Ni, illetve Pd/C katalizátor jelenlétében, alkoholos jellegű oldószerekben végzett katalitikus hidrogénezése ugyancsak amidineket eredményez [B. J. Broughton et al., J. Med. Chem. 18, 1117 (1975)].
Az új vegyületeket megelőzés és terápia céljából minden olyan megbetegedés esetében felhasználhatjuk, amelyekben szerepet játszik a trombin. Ilyenek különösen a tromboembóliás megbetegedések, mint a myocardialis infarktus, a perifériás artériák elzáródásával összefüggő megbetegedés, a mélyvénás trombózis, a tüdőembólia és a szélütés. Ebből eredően felhasználhatók a reokklúzió (ismételt vérrögképződés) megelőzésére olyan esetekben, amikor az elzáródott artériákat mechanikus módon tágítással vagy a vérrög feloldásával (lízis) tették szabaddá.
Az anyagok különlegesen előnyös vonása, hogy szájon át történő beadás esetén is hatékonyak.
A találmány szerinti vegyületeket a szokásos módon orálisan vagy parenterálisan (szubkután, intravénásán, intramuszkulárisan, intraperitoneálisan, rektálisan) egyaránt alkalmazhatjuk. Az adagolás történhet az orrgarat üregen keresztül gőzök vagy permetek formájában is.
Az adagolt mennyiség (dózis) függ a páciensek életkorától, állapotától, testtömegétől és az alkalmazás módjától. A napi hatóanyagdózis személyenként rendszerint 10 mg és 2000 mg közé esik orális adás, és 1 mg 200 mg közé parenterális adás esetén. Ezeket a dózisokat adhatjuk 2-4 adagban vagy napjában egyszer, ha a gyógyszerfonna (depókészítmény) ezt lehetővé teszi.
Az új vegyületeket a szokásos szilárd vagy folyékony galenusi készítmények formájában, azaz tabletták, filmtabletták, kapszulák, porok, granulátumok, drazsék, kúpok, oldatok, kenőcsök, krémek vagy permetek formájában alkalmazhatjuk. Ezeket a szokásos módszerekkel állíthatjuk elő. Az előállítás során a hatóanyagokat a szokásos galenusi segédanyagokkal, tablettakötőanyagokkal, töltőanyagokkal, konzerválószerekkel, a tabletták szétesését elősegítő szerekkel, a folyékonyságot befolyásoló anyagokkal, lágyítókkal, hálósítószerekkel, diszpergálószerekkel, emulgeátorokkal, a felszívódást lassító (retardáló) szerekkel, oldószerekkel, antioxidánsokkal és/vagy hajtógázokkal együtt dolgozhatjuk fel a megfelelő készítményekké (lásd: H. Sucker et al., Pharmazeutische Technologie, Thieme Verlag, Stuttgart, 1978). Az így előállított készítmények rendszerint 0,1-99 tömeg% hatóanyagot tartalmaznak.
1. példa
N-Izopropil-szulfonil-D-fenil-alanil-prolin-(pamidino-benzil)-amid-acetát
a) Boc-D-fenil-alanil-prolin-(p-ciano-benzil)-amid
5,1 g (14,2 mmol) Boc-D-Phe-Pro-OH és 1,53 g (15,2 mmol) N-metil-morfolin 15 ml Ν,Ν-dimetil-formamiddal készített oldatához -15 °C hőmérsékleten 2 perc alatt hozzáadunk 2,0 g (14,6 mmol) izobutil(klór-formiát)-ot, az oldatot 10 percen át keverjük, azt követően pedig 1,9 g (14,2 mmol) p-ciano-benzil-amint [W. Walter et al., Ann. 660, 60 (1962)] és 1,53 g N-metil-morfolint adunk az elegyhez, az utóbbi reagenseket ml Ν,Ν-dimetil-formamidban oldva. 3 órán keresztül keverjük -15 °C-on, ekkor a vékonyréteg-kromatogram szerint (kifejlesztő elegy: metilén-diklorid/metanol 9:1) már nem lehet kimutatni a kiindulási vegyületeket.
A termék elkülönítése céljából az elegyet 200 ml vízzel elegyítjük. Az ekkor leváló és rövid idő alatt megdermedő olajat eldörzsöljük, majd szívatással szűrjük. A még nedves szilárd anyagot feloldjuk 250 ml etil-acetát és 50 ml dietil-éter elegyében, és a kapott oldatot egymást követően 5%-os vizes citromsavoldattal, vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és telített vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk, majd nátrium-szulfáton megszárítjuk. Az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, a maradékot hexánnal elegyítjük és a szilárd anyagot szívatással szűrjük, azután pedig 50 ml etil-acetátból átkristályosítjuk. Kitermelés 5,6 g, amely a vékonyréteg-kromatogram szerint tiszta. Olvadáspont: 156-157 °C.
b) D-Fenil-alanil-prolin-(p-ciano-benzil)-amid-hidroklorid
Az előző vegyületet feloldjuk 100 ml 5 mol/l-es dioxános hidrogén-klorid-oldatban. Az elegyet 3 órán keresztül keverjük, ekkor a hidrokloridsó kiválik az oldatból. Szívatással szűrjük, a szűrőn dietil-éterrel hidrogén-klorid-mentesre kimossuk, és csökkentett nyomáson, kálium-hidroxid mellett megszárítjuk. Kapunk 4,6 g terméket fehér kristályok formájában. Kitermelés az elméleti érték 95%-a. Olvadáspont: 220-222 °C.
c) N-(lzopropil-szulfonil)-D-fenil-alanil-prolin-(pciano-benzil)-amid
2,05 g (6,05 mmol) előző hidrokloridsót szuszpendálunk 50 ml metilén-dikloridban. Hozzáadunk 1,35 g (13,5 mmol) trietil-amint, és az ekkor keletkező oldathoz 0-5 °C közötti hőmérsékleten hozzácsepegtetjük 0,9 g (6,1 mmol) propán-2-szulfonsav-klorid 10 ml metilén-dikloriddal készített oldatát. A reakcióelegyet 5 órán keresztül keverjük szobahőmérsékleten, azután egymást követően 5%-os vizes citromsavoldattal és 5%-os vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal mossuk, végül nátrium-szulfáton megszárítjuk. Az oldószer ledesztillálása után visszamaradó nyúlós, olajos maradékot etil-acetát/dietil-éter (1:1) arányú elegyéből átkristályosítjuk.
d) N-(Izopropil-szulfonil)-D-fenil-alanil-prolin-[(ptiokarbamoil)-benzil]-amid
4,1 g az előzőekben előállított vegyületet feloldunk ml trietil-amin és 40 ml piridin elegyében, és az oldatot 0 °C-on hidrogén-szulfiddal telítjük, és éjjelen át állni hagyjuk szobahőmérsékleten. A vékonyréteg-kromatogram tanúsága szerint (kifejlesztő elegy: metilén-diklorid/metanol 9:1) ekkorra a tioamiddá történő átalakulás teljesen végbemegy. A termék elkülönítése céljából a piridint csökkentett nyomáson lehetőleg teljesen ledesztilláljuk, a maradékot feloldjuk 250 ml etil-acetátban, és a kapott oldatot vizes nátrium-klorid-oldattal, 5%-os citromsavoldattal és vizes nátrium-hidrogén-kar3
HU 222 353 Bl bonát-oldattal mossuk. Nátrium-szulfáton megszárítjuk és az oldószert ledesztilláljuk. Kapunk 4,1 g tiszta tioamidot.
e) N-(Izopropil-szuIfonil)-D-fenil-alanil-prolin-(pamidino-benzil)-amid-acetát A fenti tioamidot feloldjuk 150 ml acetonban, hozzáadunk 7 ml metil-jodidot, és az elegyet éjjelen át állni hagyjuk szobahőmérsékleten. Az oldószert ledesztilláljuk, az amorf maradékot elkeverjük vízmentes dietil-éterrel és megszárítjuk. A metil-(S-metil)-tioimidáthidrojodidot feloldjuk 50 ml etanolban, hozzáadunk 15 ml 10%-os ammónium-acetát-oldatot, és 3 órán keresztül 60 °C-on melegítjük. Az oldószert ledesztilláljuk, a maradékot feloldjuk 100 ml metilén-dikloridban, a nem oldódó anyagot kiszűijük, végül a metilén-dikloridot ledesztilláljuk. A visszamaradó anyagot etil-acetát/dietil-éter eleggyel digeráljuk, ezáltal az abban oldódó szennyeződéseket elválasztjuk a terméktől. A visszamaradó jodid-acetát vegyes sót feloldjuk aceton/víz 3:2 arányú elegyében, és acetát formájú IRA-ioncserélő gyanta segítségével átalakítjuk a tiszta acetátsóvá, amely acetonitrilben történő melegítés után fehér, kristályos porrá alakul át. Olvadáspont: 148-152 °C (bomlás közben).
Tömegspektrum: FAB-MS (M+H)+=500.
2. példa
N-(Tieml-2-szulfonil)-D-fenil-alanil-prolin-(pamidino-benzil)-amid-acetát
a) Boc-D-fenil-alanil-prolin-(p-amidino-benzil)-amid Az 1. példa a) pontja szerint előállított Boc-D-fenilalanil-prolin-(p-ciano-benzil)-amidot az 1. példa c) pontjában leírtak szerint hidrogén-szulfiddal tioamiddá átalakítjuk, azután azt az 1. példa d) pontjában leírtak szerint amidinné alakítjuk át. Az amidin fehér, kristályos anyag. Olvadáspont: 237-239 °C.
Tömegspektrum: FAB-MS (M-H)+=347.
b) D-Fenil-alanil-prolin-(p-amidino-benzil)-amiddihidroklorid
Az 1. példa b) pontjában leírtakkal analóg módon az előző vegyületet 5 mol/l-es dioxános hidrogén-klorid-oldattal kezelve lehasítjuk a Boc-védőcsoportot. A dihidrokloridot erősen higroszkópos por alakjában különítjük el. Olvadáspont: 130-140 °C. Tömegspektrum: FAB-MS (M-H)+=247.
c) N-(Tienil-2-szulfonil)-D-fenil-alanil-prolin-(pamidino-benzil)-amid-acetát
3,9 g (12,6 mmol) N-(tienil-2-szulfonil)-D-fenil-alanin [Egypt. J. Chem., 23, 273 (1981)] 40 ml tetrahidrofuránnal készített oldatához hozzáadunk 1,9 g (12,6 mmol) 1-hidroxi-benztriazolt és 3,3 g (25 mmol) diciklohexilkarbodiimidet, és a reakcióelegyet 4 órán keresztül szobahőmérsékleten keveijük. A kivált diciklohexil-karbamidot szívatással szűqük és a szűrőn kevés tetrahidrofuránnal kimossuk.
A szűrlethez 5 °C-on hozzáadjuk 4,1 g (12,6 mól) N-(p-amidino-benzil)-prolin-amid-dihidroklorid és 1,6 g nátrium-hidrogén-karbonát 6 ml vízzel készített oldatát. Az elegyet szobahőmérsékleten keveijük 48 órán keresztül, azután az oldószert a lehető legteljesebben ledesztilláljuk. A maradékot feloldjuk etanolban, az oldhatatlan anyagot kiszűijük, és az etanolt ledesztilláljuk. A visszamaradó anyagot szilikagél oszlopon, metiléndiklorid/metanol/50%-os ecetsav (45:5:1,5) arányú kifejlesztő eleggyel megtisztítjuk. A megfelelő frakciókat egyesítjük, az oldószert ledesztilláljuk (a desztilláció vége felé toluolt is adunk hozzá), és a maradékot kevés vizet tartalmazó 50 ml acetonból átkristályosítjuk. Kapunk 3,3 g terméket, kitermelés: az elméleti érték 48%a. Az amidin-acetát fehér kristályok alakjában különíthető el. Olvadáspont: 95-98 °C.
Tömegspektrum: FAB-MS (M-H)+=540,5.
3. példa
N-(2-Naftil-szulfonil)-D-fenil-alanil-prolin-(pamidino-benzil)-amid-acetát
a) Boc-Prolin-(p-ciano-benzil)-amid
276 g (0,88 mól) O-(Boc-prolil)-N-hidroxi-szukcinimidet feloldunk 2 liter metilén-dikloridban, és az oldatot lehűtjük 0 °C-ra. Az oldathoz egymást követően hozzáadjuk a következő reagenseket: 163,9 g (0,97 mól) 4-ciano-benzil-amin-hidroklorid, 230 ml (1,34 mól) diizopropil-etil-amin. A szuszpenziót olvadó jeges fürdőben hűtve 48 órán keresztül keverjük, majd leszűrjük. A szűrletet négyszer mossuk 20%-os nátrium-hidrogén-szulfát-oldattal, háromszor nátrium-hidrogénkarbonát-oldattal és kétszer telített nátrium-klorid-oldattal. Az oldatból szárítás után az oldószert ledesztilláljuk. A visszamaradó anyagot metil-(terc-butil)-éterből átkristályosítva 261 g terméket nyerünk fehér kristályok formájában. Kitermelés: az elméleti érték 90%-a. Olvadáspont: 124-125 °C.
b) N-(4-Ciano-benzil)-prolin-amid-hidroklorid
260 g (0,79 mól) fenti Boc-védett vegyületet feloldunk 1 liter dietil-éterben, és fölöslegben vett dietil-éteres hidrogén-klorid-oldatot adva hozzá az elegyet éjjelen át keveijük. A kikristályosodott hidrokloridsót leszűijük, a szűrőn dietil-éterrel hidrogén-kloridmentesre mossuk, végül etanolból átkristályosítjuk. Ekkor 200 g fehér kristályos anyagot kapunk. Kitermelés: az elméleti érték 95%-a. Olvadáspont: 209-211 °C.
c) N-(2-Naftil-szulfonil)-D-fenil-alanil-prolin-(pciano-benzil)-amid
5,9 g (21,3 mmol) fenti prolin-amid-hidrokloridot feloldunk 100 ml Ν,Ν-dimetil-formamidban, majd egymást követően hozzáadunk 7,8 g (21,3 mmol) N-(2-naftil-szulfonil)-D-fenil-alanint (A. Bemat et al., Fr 2593812 számú szabadalmi irat), 2,15 g (21,3 mmol) trietil-amint és 3,25 g (21,3 mmol) 1-hidroxi-benztriazolt (HOBT). Az elegyet lehűtjük 0-5 °C hőmérsékletre, és 30 ml etil-acetátban oldott 4,4 g (21,3 mmol) diciklohexil-karbodiimidet adunk hozzá. A reakcióelegyet ezután 48 órán keresztül keveijük. A kivált diciklohexil-karbamidot kiszűijük, és a szűrletből az oldószert lehetőleg teljesen ledesztilláljuk. A maradékot feloldjuk 200 ml etil-acetátban és az oldatot egymást követően 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, 4%-os citromsavoldattal és vízzel mossuk. Szárítás után az oldószert - az etil-acetátot - ledesztilláljuk és a visszamaradó olajos anyagot feloldjuk 30 ml metilén-diklo4
HU 222 353 BI ridban. Az oldathoz 50 ml dietil-étert adva a termék kristályos formában válik ki. Kitermelés 9,1 g, az elméleti érték 76%-a.
d) N-(2-Naftil-szulfonil)-D-fenil-alanil-prolin-(pamidino-benzil)-amid-acetát A nedvesség kizárása mellett 80 ml metanolt telítünk 0 °C-on hidrogén-klorid-gázzal, amelyben azután feloldunk 5,6 g (10 mmol) fenti vegyületet, és az elegyet 48 órán keresztül állni hagyjuk 0 °C-on. Az oldószert 20 °C-os fürdőhőmérsékleten ledesztilláljuk, a visszamaradó anyagot feloldjuk 20 ml metanolban, és ezt az oldatot hozzáadjuk 80 ml ammóniagázzal telített metanolhoz 0-5 °C közötti hőmérsékleten. Az oldatot 3 órán keresztül visszafolyató hűtő alatt forraljuk, azután lehűtjük és leszűijük. A szűrletből az oldószert ledesztilláljuk, és a visszamaradt anyagot acetát formájú ioncserélő gyantával amidin-acetáttá átalakítjuk. A terméket kevés vizet tartalmazó acetonból átkristályosítjuk. Kapunk 5,1 g cím szerinti vegyületet fehér kristályok alakjában. Kitermelés az elméleti érték 80%-a. Olvadáspont: 221-225 °C.
Tömegspektrum: FAB-MS (M+H)+=584,5.
4. példa
N-(Piridil-3-szulfonil)-D-fenil-alanil-prolin-(pamidino-benzil)-amid-acetát
a) N-(Piridil-3-szulfonil)-D-fenil-alanil-prolin-(pciano-benzil)-amid
Az 1. példa c) pontjában leírtakkal analóg módon a
D-fenil-alanil-prolin-(p-ciano-benzil)-amid-hidrokloridot [melyet az 1. példa a) és b) pontjaiban leírtakkal analóg módon állítunk elő] reagáltatjuk piridin-3szulfonsav-kloriddal. Vékonyréteg-kromatográfiás Rp értéke=0,57 (kifejlesztő elegy: metilén-diklorid/metanol 9:1).
b) N-(Piridil-3-szulfonil)-D-fenil-alanil-prolin-[(p-hidroxi-amidino)-benzil]-amid-acetát g fenti vegyületet, 0,74 g hidroxil-amin-hídrokloridot és 2,2 g trietil-amint feloldunk 30 ml etanolban, és nitrogéngáz-atmoszférában 60-70 °C hőmérsékleten 2 órán keresztül keveijük; ekkor a vékonyréteg-kromatogram szerint már nincs jelen a kiindulási vegyület. A reakcióelegyet vízzel elegyítjük, és az elegy pH-ját ecetsavval 3 és 4 közé állítjuk be. A vizes fázist többször extraháljuk metilén-dikloriddal, az egyesített metilén-dikloridos kivonatot megszárítjuk, és a metiléndikloridot ledesztilláljuk. A még ecetsavat tartalmazó maradékot közvetlenül visszük tovább a következő reakciólépésbe. Rrértéke=0,l (metilén-diklorid/metanol 9:1).
c) N-(Piridil-3-szulfonil)-D-fenil-alanil-prolin-(pamidino-benzil)-amid-acetát
2,4 g (5 mmol) az előző reakcióban előállított vegyületet feloldunk 40 ml metanolban, és 0,4 g 10%-os palládium/aktív szén katalizátor jelenlétében 50 °C-on hidrogénezzük az oldatot 7 órán keresztül. Ezután a katalizátort szívatással szűrjük, az oldószert ledesztilláljuk, a desztillációs maradékot etil-acetáttal elegyítjük és felmelegítjük. Acetont és kevés vizet adva az elegyhez tiszta oldat keletkezik, amelyből lehűtés után az amid-acetát kikristályosodik. Nyerünk 1,3 g fehér kristályos terméket. Kitermelés az elméleti érték 49,5%-a. Olvadáspont: 201-202 °C, Rrértéke=0,28 (metiléndiklorid/metanol/50%-os ecetsav 8:2:0,5).
5. példa
N-(2-Naftil-szulfonil)-glicil-prolin-(p-amidino-benzil)-amid-acetát
a) Boc-Glicil-prolin-(p-ciano-benzil)-amid
7,0 g (40 mmol) Boc-glicin 240 ml metilén-dikloriddal készített oldatához egymást követően, 0 °C-on hozzáadunk 30 ml diizopropil-etil-amint, 10,6 g (40 mmol) N-(p-ciano-benzil)-prolin-amid-hidrokloridot és propil-foszfonsavanhidrid etil-acetáttal készített, 50%-os oldatából 32 ml-t (44 mmol). A reakcióelegyet 0 °C-on még 2 órán keresztül keveijük, azután a szerves fázist 1 mol/l-es nátrium-hidroxid-oldattal, vízzel és telített, vizes nátrium- klorid-oldattal mossuk, megszárítjuk, és az oldószert ledesztilláljuk. Kapunk 14,8 g fehér por alakú terméket. Kitermelés az elméleti érték 96%-a. Rr értéke=0,57 (metilén-diklorid/metanol 9:1).
Ή-NMR-spektrum (DMSO-d^), δ ppm: 1,4 [s, 9H, (CH3)3], 1,7-2,2 (m, 4H, CH2-CH2), 3,3-3,6 (m,
2H, N-CH2 a prolinból), 3,8 (m, 2H, N-CH2 a glicinből), 4,3-4,5 (m, 3H, CH és N-CH2-aril), 6,8 (m, 1H, Boc-csoport), 7,4-7,5 (m, (láthatóan triplett, a két rotamer miatt), 2H, Ar-H), 7,8 (d, 2H, ArH), 8,5 és 8,8 [mindegyik multiplett, ketten együtt ΙΗ-t jelentenek (a két rotamer miatt), NH].
b) H-Glicil-prolin-(p-ciano-benzil)-amid-hidroklorid
Az 1. b) példával analóg módon eljárva az előzőekben előállított vegyületből lehasítjuk a Boc-csoportot. Kapunk 8 g fehér por alakú terméket, a kitermelés az elméleti érték 64%-a.
H-NMR-spektrum (DMSO-d6), δ ppm: 1,7-2,2 (m,
4H, CH2-CH2), 3,4-4,0 (m, 4H, N-CH2 csoport a glicinből és a prolinból), 4,2-4,5 (m, 3H, CH és NCH2-Ar), 7,5 (d, 2H, Ar), 7,8 (d, 2H, Ar), 8,3 (széles s, 3H, NH3 +), 8,9 és 9,2 [mindegyik multiplett, együtt ΙΗ-t jelentenek (a két rotamer miatt), NH].
c) N-(2-Naftil-szulfonil)-glicil-prolin-(p-ciano-benzil)-amid
Az 1. c) példában leírtakkal analóg módon eljárva az előzőekben előállított vegyületet 2-naftil-szulfonilkloriddal reagáltatva 3,3 g fehér porszerű terméket állítunk elő. Rf=0,59 (metilén-diklorid/metanol 9:1). •H-NMR-spektrum (DMSO-d6), δ ppm: 1,6-2,0 (m,
4H, CH2-CH2), 3,3-3,5 (m, 2H, N-CH2 a prolinból), 3,7 (m, 2H, N-CH2 a glicinből), 4,1-4,4 (m, 3H, CH és N-CH2-Ar), 7,4-8,5 (13H, aromás H-ek és 2NH).
d) N-(2-Naftil-szulfonil)-glicil-prolin-(p-tiokarbamoil-benzil)-amid
Az előző lépésben előállított vegyületet az ld) példában leírtakkal analóg módon eljárva alakítjuk át tioamiddá. Kitermelés 3,0 g sárga por alakú termék, az elméleti érték 85%-a.
Ή-NMR-spektrum (DMSO-d6), δ ppm: 1,5-2,0 (m,
4H, CH2-CH2), 3,3-3,5 (m, 2H, N-CH2 a prolinból), 3,7 (m, 2H, N-CH2 a glicinből), 4,1-4,4
HU 222 353 Bl (m, 3H, CH és N-CH2-Ar), 9,5 (s, 1H, tioamid), 9,8 (s, 1H, tioamid).
e) N-(2-Naftil-szulfonil)-glicil-prolin-(p-amidino-benzil)-amid-acetát
Az előállítás az 1. e) példában leírtakkal analóg módon történik. Kapunk 2,5 g hidrojodidsót, kitermelés az elméleti érték 68%-a. Rf=0,09 (metilén-klorid/metanol 9:1). Ezt a sót acetát formájú Amberlite ioncserélő gyantával alakítjuk át a kívánt acetáttá. A termék tisztasága a vékonyréteg-kromatogram szerint 99%. Tömegspektrum FAB-MS (M-H)+=493,5. •H-NMR-spektrum (DMSO-de), δ ppm: 1,6-2,0 (m,
4H, CH2-CH2), ~3,5 [m, 2H, aprolinból, (a vízjele részben elfedi)], 3,7 (m, 2H, CH2 a glicinből), 4,1-4,4 (m, 3H, CH és N-CH2-Ar), 7,3-8,5 (13H, aromás H-ek és NH), ~8,4-9,2 (4H, amidin).
6. példa
N-(l-Naftil-szulfonil)-glicil-prolin-(p-amidino-benzil)-amid
Az 5. példában leírtak szerint eljárva és reagensként 1-naftil-szulfonil-kloridot alkalmazva állítjuk elő a cím szerinti vegyületet.
Tömegspektrum FAB-MS (M-H)+=493.
7. példa
N-(Hexadecil-szulfonil)-D-fenil-alanil-prolin-(pamidino-benzil)-amid-acetát
A vegyületet az 1. példában leírtakkal analóg módon állítjuk elő. A termék fehér por. Olvadáspont: 194-201 °C.
Tömegspektrum FAB-MS (M-H)+=695.
8. példa
N-(Butil-szulfonil)-D-fenil-alanil-prolin-(pamidino-benzil)-amid-acetát
A vegyületet az 1. példában leírtakkal analóg módon állítjuk elő. A termék fehér por. Olvadáspont: 203-211 °C.
Tömegspektrum FAB-MS (M-H)+=526,5.
9. példa
N-(N-Izopropil-szulfamoil)-D-fenil-alanil-prolin(p-amidino-benzil)-amid-acetát
a) N-(N-Izopropil-szulfamoil)-D-fenil-alanil-prolin(p-ciano-benzil)-amid
Az le) példában leírtakkal analóg módon a D-fenilalanil-prolin-(p-ciano-benzil)-amid-hidrokloridotN-izopropil-szulfamoil-kloriddal reagáltatjuk.
b) N-(N-Izopropil-szulfamoil)-D-fenil-alanil-prolin[(p-hidroxi-amidino)-benzil]-amid
A vegyületet a 4. b) példában leírtakkal analóg módon állítjuk elő, azaz a 9. a) példában leírtak szerint előállított vegyületet hidroxil-amin-hidrokloriddal reagáltatjuk.
c) N-(N-Izopropil-szulfamoil)-D-fenil-alanil-prolin(p-amidino-benzil)-amid-acetát
A 9. b) példában leírtak szerint előállított vegyületet metanol/ecetsav/tetrahidrofurán oldószerkeverékben feloldjuk, és palládium/aktív szén katalizátor jelenlétében hidrogénezzük 40 °C-on 13 órán keresztül. Azt követően a katalizátort szívatással szűrjük, a szűrletből az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, és a maradékról többször ledesztillálunk etanolt is. A desztillációs maradékot vízben feloldjuk, a vizes oldatot etil-acetáttal háromszor extraháljuk, azután a vizes fázist, amely a terméket tartalmazza, liofilizáljuk. A liofilizátum fehér, szilárd anyag. Olvadáspont: 199-205 °C.
Tömegspektrum FAB-MS (M+H)+=515.
10. példa
N-(N,N-Dimetil-szulfamoil)-D-fenil-alanil-prolin(p-amidino-benzil)-amid-acetát
Az előállítást a 9. példában leírtakkal analóg módon hajtjuk végre. A fehér, szilárd anyag 90 °C-tól bomlás közben olvad.
Tömegspektrum FAB-MS (M+H)+=501.
11. példa
N-(Hidroxi-szulfonil)-D-fenil-alaml-prolin-(pamidino-benzil)-amid
1,8 g (4,36 mmol) D-fenil-alanil-prolin-(p-ciano-benzil)-amid-hidroklorid és 1,68 g (13,0 mmol) diizopropil-etil-amin 20 ml metilén-dikloriddal készített oldatához 0,58 g 0,33 ml (5 mmol) klór-kénsav 10 ml metilén-dikloriddal készített oldatát adjuk lassan, hűtés közben cseppenként, 20 °C hőmérsékleten. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 30 percig keverjük, azután metilén-dikloriddal 100 ml térfogatra feltöltjük, és az oldatot először 2 mol/l-es vizes sósavoldattal azután pedig kétszer 10 ml vízzel extraháljuk. A szerves fázist magnézium-szulfáton megszárítjuk, és az oldószert ledesztilláljuk. Kapunk 2,0 g N-(hidroxi-szulfonil)-D-fenil-alanilprolin-(p-ciano-benzil)-amid nyersterméket, amelyet további tisztítás nélkül viszünk be a következő reakciólépésbe.
2,0 g fenti nyersterméket, 0,9 g (13 mmol) hidroxilamin-hidrokloridot és 2,5 ml diizopropil-amint 50 ml etanollal együtt éjjelen át keverünk szobahőmérsékleten. Az illékony anyagokat erősen csökkentett nyomáson és 50 °C hőmérsékleten 1 órán keresztül végzett desztillációval eltávolítjuk. Mivel a termék vízben igen jól oldódik, a reakcióelegyet extrakcióval feldolgozni értelmetlen volna, ezért a kapott 1,8 g nyersterméket közvetlenül továbbvisszük a hidrogénezési reakcióba. A nyerstermék hidrogénezését enyhe hidrogéntúlnyomás mellett végezzük; a terméket 40 ml metanol és 10 ml ecetsav elegyében egy spatulahegynyi 10%-os palládium/aktív szén katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. 5,5 óra reakcióidő eltelte után a katalizátort leszűijük, az oldószert ledesztilláljuk, és a maradékról metanol-toluol-elegyet többször is ledesztillálunk. A visszamaradó anyagot metilén-dikloriddal néhányszor átkeverve megkapjuk a tiszta N-(hidroxi-szulfonil)-D-fenil-alanil-prolin-(p-amidino-benzil)-amidot. Mennyisége 1,5 g, és a három reakciólépés együttes kitermelése az elméleti érték 73%-a. A termék az •H-NMR-spektrum szerint bétáin formában van jelen. Olvadáspont 220-224 °C. A termék fehér por. Tömegspektrum FAB-MS (M-H)+ =474.
HU 222 353 Bl
A 4. példában leírtakkal analóg módon állítjuk elő a következő vegyületeket is:
12. példa
N-(Trifluor-metánszulfonil)-D-fenil-alanil-prolin(p-amidino-benzil)-amid-acetát
Fehér kristályos anyag; olvadáspont: 240-242 °C (bomlás közben).
Tömegspektrum FAB-MS (M-H)+=526.
13. példa
N-($,$$-Trifluor-etánszulfonil)-D-fenil-alanil-prolin-(p-amidino-benzil)-amid-acetát Fehér kristályos anyag; olvadáspont: 87-89 °C. Tömegspektiuin FAB-MS (M-H)+=540.
14. példa
N-(Oktil-szulfonil)-D-fenil-alanil-prolin-(pamidino-benzil)-amid-acetát
Fehér amorf anyag. Tömegspektrum FAB-MS (M-H)+=570.
15. példa
N-(Metil-szulfonil)-(D,L)-difenil-alanil-prolin-(pamidino-benzil)-amid-acetát
Fehér amorf anyag. Tömegspektrum FAB-MS (M-H)+=548.
16. példa
N-(Metil-szulfonil)-di(4-ldór-fenil)-alanil-prolin(p-amidino-benzil)-amid-acetát
Fehér amorf anyag. Tömegspektrum FAB-MS (M-H)+=617.
17. példa
Gyógyszerkészítmények
A) példa
A szokásos módon az alábbi összetételű tablettákat préseljük tablettázógépen:
100 mg a 2. példa szerint előállított hatóanyag,
240 mg kukoricakeményítő, mg zselatin, mg tejcukor,
4,5 mg Aerosil® (szubmikroszkóposan fmom eloszlású, kémiailag tiszta kovasav),
0,5 mg magnézium-sztearát,
4,5 mg talkum.
B) példa
A szokásos módon az alábbi összetételű drazsékat állítjuk elő:
200 mg a 3. példa szerint előállított hatóanyag,
300 mg magmassza (magképző massza),
350 mg cukorbevonat-massza.
A magképző massza alkotórészei: 9 rész kukoricakeményítő, 3 rész tejcukor és 1 rész Luviskol® VA 64 [vinil-pirrolidon és vinil-acetát keverékpolimerizátum 60:40 arányban, lásd: Phaim. Ind. 586 (1962)]. A cukorbevonat-massza alkotórészei: 5 rész nyerscukor, 2 rész kukoricakeményítő, 2 rész kalcium-karbonát és 1 rész talkum. Az így előállított drazsékat ellátjuk még egy másik, a gyomomedvnek ellenálló bevonattal is.
C) példa
100 g 1. példa szerint előállított hatóanyagot feloldunk 5000 ml (5 liter) vízben nátrium-klorid egyidejű hozzáadása mellett, és az oldat pH-ját 0,1 mol/l-es nátrium-hidroxid-oldattal 6,0 értékre állítjuk be, ekkor a vérrel izotóniás oldat keletkezik. Ezt az oldatot 5 miértként ampullákba töltjük, és azokat sterilizáljuk. Hatástani vizsgálatok
A találmány szerinti (I) általános képletű vegyületek trombingátló hatását a WO 93/11152 számú leírás 67. példájában ismertetett, klinikai vizsgálati szakaszban lévő Inogatran hatóanyag hatásával hasonlítottuk össze.
A trombingátló hatás vizsgálatát kromogén módszerrel végeztük.
Reagensekként emberi plazmából származó trombint (No. T-8885, Sigma, Deisenhofen, DE), H-D-PhePip-Arg-PNA.2HCl-t (S-2238, Chromogenix, Mölndal, SE) szubsztrátot, 50 mmol/1 trisz és 154 mmol/1 nátrium-klorid-oldatot, 8 pH-értékű puffért használtunk.
A trombinaktivitás kromogén vizsgálatát 96 mélyedést tartalmazó mikrolemezeken hajtottuk végre (No. 650101, Greiner, Nürtingen, DE). DMSO-dal vagy oldószerrel készült, 10 μΐ-nyi vizsgálandó anyag oldatát hozzáadtuk trombint tartalmazó 250 μΐ pufferhez 0,1 NIHegység/ml végkoncentrációig és 5 percig 20-28 °C-on inkubáltuk. A vizsgálatot pufferben lévő 50 μΐ szubsztrát oldatának (végső koncentráció 100 pmol/l) hozzáadásával indítottuk, és 5 perces 20-28 °C-on végzett inkubációs idő után 50 μΐ citromsavval (35%-os) állítottuk elő. Mindegyik mélyedésben az abszorbanciát vakmintához képest mértük 405/630 nm-nél kettős mikrolemez fotométerrel (MR5000, Dynatech, Denkendorf, DE). Az inhibitornak azt az IC50-koncentrációját határoztuk meg, amely a trombin amidolitikus hatékonyságának 50%-os gátlásához szükséges. A koncentráció-hatás görbéket és az IC50-értékeket az adatpontokból többszörös iterációval nemlineáris szigmoid négyzetes regressziós algoritmus használatával határoztuk meg.
Az eredményeket a következő táblázatban ismertetjük. A vegyületeket a képletükkel, valamint az előállításukra vonatkozó példa megadásával azonosítjuk. A példaszám nélküli, képletükkel megadott vegyületek szintén az (I) általános képlet körébe tartoznak.
HU 222 353 Bl
Szerkezet Trombinteszt Példa száma
2.44E-07 Inogatran (ismert)
/ I N^N
Ps • ~OY· N 2,16E-08
α N 3.35E-08 3
a, Ο^δ-γ Ο TU N 2,32E-08
Ok ^N^g-O ° ~<v N 1.28E-08
α o S—< ο o 2.03E-09 8
I N^N
HU 222 353 Β1
Táblázat (folytatás)
Szerkezet Trombinteszt Példa száma
ó °°^N 6.91E-09
a. ° Όγ l,48E-08 2
a ° N 5.23E-09 1
A ·J_ δ 9.13E-09 13
Ok N 3,OOE-O8 4
a, a -á-'X*λ N<XN 3.32E-08 14
HU 222 353 Bl
Táblázat (folytatás)
1 Szerkezet Trombinteszt Példa száma
7 O o 1.32E-08 9
nX
Ok Q /4-ΥΥΪ -(° ° p N^N 1.25E-08 10
O °^-N Υχ\5 2,49E-08
I Q OO o -^N Gs ö o 2.29E-09 15
α n 0 · °-^' „joV-ó o»^=o 6.99E-08 16
^Vy.UO''' A* 7.45E-08
HU 222 353 Bl
Táblázat (folytatás)
Szerkezet Trombinteszt Példa száma
o .o O,C„ N 1.20E-08

Claims (2)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Az (I) általános képletű vegyületek, valamint sztereoizomeijeik és fiziológiailag elviselhető savakkal al- 20 kötött sóik, amelyek képletében a szubsztituensek jelentése a következő:
    R1 1-20 szénatomos alkilcsoport, 1-3 fluoratommal szubsztituált 1-3 szénatomos alkilcsoport, fenil-, naftil-, tienil-, piridil- vagy hidroxilcsoport vagy 25 egy R3R2N- általános képletű csoport, amely képletben R2 és R3 jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy 1-7 szénatomos alkilcsoport,
    A olyan (II) általános képletű a-aminosavmaradék, 30 amely képletben
    R5 jelentése hidrogénatom, 1-7 szénatomos alkilcsoport, 3-7 szénatomos cikloalkilcsoport, 3-7 szénatomos cikloalkil-, fenil- vagy naftilcsoporttal szubsztituált 1-3 szénatomos alkilcsoport, vagy adott esetben mindkét fenilcsoporton 4-helyzetben klóratommal szubsztituált difenil-metil-csoport,
    B olyan (III) általános képletű gyűrűs a-aminosavmaradék, amely képletben m értéke 2,3 vagy 4, és a gyűrű két vicinális hidrogénatomja helyett egy kötés lehet.
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyületek, sztereoizomeijeik és fiziológiailag elfogadható savakkal alkotott sóik alkalmazása trombingátló hatású gyógyszerkészítmények előállítására.
    HU 222 353 Β1 Int. Cl.7: C07K 5/06 (I) (III) (IV)
    R1SO
    HU 222 353 B1 Int. Cl.7: C07K 5/06
    W- Cl, Br, J, CH3C00)
    HU 222 353 BI Int. Cl.7: C 07 K 5/06
    Kiadja a Magyar Szabadalmi Hivatal, Budapest A kiadásért felel: Törőcsik Zsuzsanna főosztályvezető-helyettes Windor Bt., Budapest
HU9702107A 1994-12-06 1995-11-25 Az N-terminálison szulfonil- vagy szulfamoil-csoportokat tartalmazó dipeptid-(p-amido-benzil)-amidok és alkalmazásuk HU222353B1 (hu)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE4443390A DE4443390A1 (de) 1994-12-06 1994-12-06 Neue dipeptidische p-Amidinobenzylamide mit N-terminalen Sulfonyl- bzw. Aminosulfonylresten
PCT/EP1995/004646 WO1996017860A1 (de) 1994-12-06 1995-11-25 Neue dipeptidische p-amidinobenzylamide mit n-terminalen sulfonyl- bzw. aminosulfonylresten

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUT77289A HUT77289A (hu) 1998-03-30
HU222353B1 true HU222353B1 (hu) 2003-06-28

Family

ID=6535046

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9702107A HU222353B1 (hu) 1994-12-06 1995-11-25 Az N-terminálison szulfonil- vagy szulfamoil-csoportokat tartalmazó dipeptid-(p-amido-benzil)-amidok és alkalmazásuk

Country Status (20)

Country Link
US (1) US5852051A (hu)
EP (1) EP0796271B1 (hu)
JP (1) JPH10509727A (hu)
CN (1) CN1168673A (hu)
AT (1) ATE189458T1 (hu)
AU (1) AU699579B2 (hu)
BR (1) BR9509970A (hu)
CA (1) CA2207874A1 (hu)
CZ (1) CZ153797A3 (hu)
DE (2) DE4443390A1 (hu)
ES (1) ES2143666T3 (hu)
FI (1) FI972384A0 (hu)
HU (1) HU222353B1 (hu)
IL (1) IL116231A (hu)
MX (1) MX9704050A (hu)
NO (1) NO972559L (hu)
RU (1) RU2152953C1 (hu)
TW (1) TW336222B (hu)
WO (1) WO1996017860A1 (hu)
ZA (1) ZA9510295B (hu)

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SE9900043D0 (sv) * 1999-01-11 1999-01-11 Astra Ab New use
US5726159A (en) * 1994-03-04 1998-03-10 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5705487A (en) * 1994-03-04 1998-01-06 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5707966A (en) * 1994-03-04 1998-01-13 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5710130A (en) * 1995-02-27 1998-01-20 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5914319A (en) * 1995-02-27 1999-06-22 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
SE9602263D0 (sv) * 1996-06-07 1996-06-07 Astra Ab New amino acid derivatives
AU3496297A (en) * 1996-06-25 1998-01-14 Eli Lilly And Company Anticoagulant agents
US6200967B1 (en) 1996-06-25 2001-03-13 Eli Lilly And Company Anticoagulant agents
AR013084A1 (es) 1997-06-19 2000-12-13 Astrazeneca Ab Derivados de amidino utiles como inhibidores de la trombina, composicion farmaceutica, utilizacion de dichos compuestos para la preparacion demedicamentos y proceso para la preparacion de los compuestos mencionados
SE9704543D0 (sv) 1997-12-05 1997-12-05 Astra Ab New compounds
SK14232001A3 (sk) * 1999-04-09 2002-06-04 Basf Aktiengesellschaft Nízkomolekulové inhibítory komplementárnych proteáz
EP1808440B1 (en) * 2000-08-11 2011-07-27 Wilex AG Non-covalent inhibitors of urokinase and blood vessel formation
NZ518195A (en) * 2000-08-11 2005-04-29 Corvas Int Inc Non-covalent inhibitors of urokinase and blood vessel formation
DE10049937A1 (de) * 2000-10-06 2002-04-11 Knoll Ag Niedermolekulare Inhibitoren von Serinproteasen mit Polyhydroxyalkyl- und Polyhydroxycycloalkylresten
CH695999A5 (de) * 2002-02-28 2006-11-15 Wilex Ag Verfahren zur Herstellung von 3- Amidinophenylalanin-Derivaten.
DE102004029812A1 (de) * 2004-06-19 2006-05-24 Clariant Gmbh Verfahren zur Herstellung von Nitrilen aus Aldehydoximen durch Umsetzung mit Alkylphosphonsäureanhydriden

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SE9103612D0 (sv) * 1991-12-04 1991-12-04 Astra Ab New peptide derivatives
AU675981B2 (en) * 1992-12-02 1997-02-27 Bristol-Myers Squibb Company Guanidinyl-substituted heterocyclic thrombin inhibitors
SE9301916D0 (sv) * 1993-06-03 1993-06-03 Ab Astra New peptides derivatives
CA2140598C (en) * 1994-01-27 2010-03-09 Masahiro Ohshima Prolineamide derivatives
ZA951617B (en) * 1994-03-04 1997-02-27 Lilly Co Eli Antithrombotic agents.

Also Published As

Publication number Publication date
ATE189458T1 (de) 2000-02-15
ZA9510295B (en) 1997-06-05
NO972559D0 (no) 1997-06-05
JPH10509727A (ja) 1998-09-22
IL116231A (en) 2001-01-28
CZ153797A3 (cs) 1998-02-18
US5852051A (en) 1998-12-22
WO1996017860A1 (de) 1996-06-13
ES2143666T3 (es) 2000-05-16
CN1168673A (zh) 1997-12-24
IL116231A0 (en) 1996-03-31
RU2152953C1 (ru) 2000-07-20
DE59507755D1 (de) 2000-03-09
EP0796271B1 (de) 2000-02-02
TW336222B (en) 1998-07-11
BR9509970A (pt) 1997-11-25
FI972384A (fi) 1997-06-05
EP0796271A1 (de) 1997-09-24
AU699579B2 (en) 1998-12-10
NO972559L (no) 1997-08-05
MX9704050A (es) 1997-08-30
HUT77289A (hu) 1998-03-30
DE4443390A1 (de) 1996-06-13
FI972384A0 (fi) 1997-06-05
CA2207874A1 (en) 1996-06-13
AU4255996A (en) 1996-06-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU784007B2 (en) Inhibitors of dipeptidyl peptidase IV
HU222353B1 (hu) Az N-terminálison szulfonil- vagy szulfamoil-csoportokat tartalmazó dipeptid-(p-amido-benzil)-amidok és alkalmazásuk
RU2607045C2 (ru) Бензиламиновые производные как ингибиторы калликреина плазмы
JP3761827B2 (ja) 新規α−アミノ酸スルホニル化合物、その製造法、およびそれらを含む医薬組成物
US20040235752A1 (en) 3-fluoro-pyrrolidines as antidiabetic agents
SK145495A3 (en) Peptide derivatives
AU2002302857A1 (en) 3-fluoro-pyrrolidines as antidiabetic agents
HUT78040A (hu) Trombin inhibitorok, előállításuk és alkalmazásuk
JPH02223543A (ja) Ｎ―ベンゾイル―ｂ―アラニン誘導体及び薬学的製剤
MXPA05004378A (es) Derivados de 2-alquil-(2-amino-3-aril-propionil)-piperazina y compuestos relacionados como ligandos para el receptor de melanocortina para el tratamiento de la obesidad.
KR101469306B1 (ko) 다이사이클로아자알칸 유도체, 이의 제조 방법 및 의학적 용도
JPWO2006070780A1 (ja) Ｐａｒ−２アゴニスト
WO1997015190A1 (en) Thrombin inhibitors
DK171402B1 (da) Tripeptidderivater, fremgangsmåde til deres fremstilling og farmaceutiske præparater deraf, især et antihypertensivt middel
HUT74094A (en) Pyrrolidine derivatives, pharmaceutical compositions containing them and process for producing them
ZA200405802B (en) Heterocyclic compounds having elastase-inhibitory activity and intermediates thereof.
Radau et al. New Cyanopeptide‐Derived Low Molecular Weight Inhibitors of trypsin‐like Serine Proteases
CA2185950A1 (en) Process for preparing intermediates for thrombin inhibitors
KR101862765B1 (ko) N-아릴사이클릭아민 유도체, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 포함하는 유로텐신-ⅱ 수용체 활성 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
FR2765220A1 (fr) Derives de 1-oxo-2-(phenylsulfonyl)aminopentyle, leur preparation et leur application en therapeutique
WO2006009325A1 (ja) メタロプロテアーゼ阻害剤
WO2000055156A1 (en) Substituted aromatic amidine derivative and medicinal composition comprising the same
NZ620271B2 (en) Benzylamine derivatives as inhibitors of plasma kallikrein

Legal Events

Date Code Title Description
HFG4 Patent granted, date of granting

Effective date: 20030408

HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee
HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee