HU218151B - Eljárás lizozim dimert tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására - Google Patents
Eljárás lizozim dimert tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására Download PDFInfo
- Publication number
- HU218151B HU218151B HU9500098A HU9500098A HU218151B HU 218151 B HU218151 B HU 218151B HU 9500098 A HU9500098 A HU 9500098A HU 9500098 A HU9500098 A HU 9500098A HU 218151 B HU218151 B HU 218151B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- dimer
- lysozyme
- tnf
- lysozyme dimer
- pharmaceutical composition
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 15
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims abstract description 9
- 239000000539 dimer Substances 0.000 title claims description 106
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 20
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 13
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 claims abstract description 10
- 230000037125 natural defense Effects 0.000 claims abstract description 8
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 claims description 102
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 claims description 102
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 claims description 102
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 claims description 102
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 claims description 102
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 claims description 102
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 claims description 65
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 claims description 28
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 25
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 24
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 23
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 23
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 claims description 19
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims description 18
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims description 14
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 claims description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 13
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 claims description 12
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 8
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims description 8
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 claims description 7
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 claims description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 7
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 claims description 5
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 claims description 5
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 5
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 claims description 5
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 5
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 5
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 claims description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 4
- 206010006895 Cachexia Diseases 0.000 claims description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims description 3
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 claims description 2
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 claims description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000002674 ointment Substances 0.000 claims description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims 1
- 229940102223 injectable solution Drugs 0.000 claims 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims 1
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 59
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 39
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 29
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 22
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 19
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 19
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 18
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 17
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 16
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 13
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 13
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 13
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 13
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 12
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 10
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 10
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 10
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 9
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 9
- 108010005627 KLP602 Proteins 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 8
- 102000010789 Interleukin-2 Receptors Human genes 0.000 description 8
- 108010038453 Interleukin-2 Receptors Proteins 0.000 description 8
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 8
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 8
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 8
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 8
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 8
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 8
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 8
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 8
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 8
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 8
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 7
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 7
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 7
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 7
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 7
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 7
- 230000004044 response Effects 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 6
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 6
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N zidovudine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](N=[N+]=[N-])C1 HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N 0.000 description 6
- 229960002555 zidovudine Drugs 0.000 description 6
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 5
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 5
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 239000003532 endogenous pyrogen Substances 0.000 description 5
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 5
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 5
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 5
- ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N Erythromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 4
- 102000004083 Lymphotoxin-alpha Human genes 0.000 description 4
- 108090000542 Lymphotoxin-alpha Proteins 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 4
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 4
- 206010044248 Toxic shock syndrome Diseases 0.000 description 4
- 231100000650 Toxic shock syndrome Toxicity 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 244000309466 calf Species 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 4
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 4
- 206010001513 AIDS related complex Diseases 0.000 description 3
- 231100000699 Bacterial toxin Toxicity 0.000 description 3
- 201000004813 Bronchopneumonia Diseases 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 3
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 3
- 241001354013 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Enteritidis Species 0.000 description 3
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 3
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 3
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 3
- 101710101607 Toxic shock syndrome toxin-1 Proteins 0.000 description 3
- BMQYVXCPAOLZOK-UHFFFAOYSA-N Trihydroxypropylpterisin Natural products OCC(O)C(O)C1=CN=C2NC(N)=NC(=O)C2=N1 BMQYVXCPAOLZOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 3
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 3
- 230000036436 anti-hiv Effects 0.000 description 3
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 3
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 3
- 239000000688 bacterial toxin Substances 0.000 description 3
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 3
- 239000000147 enterotoxin Substances 0.000 description 3
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 description 3
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000005104 human peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 3
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 3
- 230000003076 paracrine Effects 0.000 description 3
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 3
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 3
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 3
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 3
- 230000006433 tumor necrosis factor production Effects 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 208000031729 Bacteremia Diseases 0.000 description 2
- 241000701931 Canine parvovirus Species 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 208000037487 Endotoxemia Diseases 0.000 description 2
- 206010015150 Erythema Diseases 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 2
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 2
- 208000007766 Kaposi sarcoma Diseases 0.000 description 2
- 241000191938 Micrococcus luteus Species 0.000 description 2
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 2
- 241000193996 Streptococcus pyogenes Species 0.000 description 2
- 241000194054 Streptococcus uberis Species 0.000 description 2
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 2
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 2
- 206010046793 Uterine inflammation Diseases 0.000 description 2
- 229930003270 Vitamin B Natural products 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 102000015736 beta 2-Microglobulin Human genes 0.000 description 2
- 108010081355 beta 2-Microglobulin Proteins 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 2
- RDLPVSKMFDYCOR-UEKVPHQBSA-N cephradine Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@@H]3N(C2=O)C(=C(CS3)C)C(O)=O)=CCC=CC1 RDLPVSKMFDYCOR-UEKVPHQBSA-N 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 2
- 208000010643 digestive system disease Diseases 0.000 description 2
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 2
- 208000001848 dysentery Diseases 0.000 description 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 2
- -1 eicosanoids (derivatives of arachidonic acid Chemical class 0.000 description 2
- 231100000321 erythema Toxicity 0.000 description 2
- 229960003276 erythromycin Drugs 0.000 description 2
- 239000002095 exotoxin Substances 0.000 description 2
- 231100000776 exotoxin Toxicity 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 2
- 208000021760 high fever Diseases 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000007775 late Effects 0.000 description 2
- 230000005906 menstruation Effects 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- BMQYVXCPAOLZOK-XINAWCOVSA-N neopterin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)C1=CN=C2NC(N)=NC(=O)C2=N1 BMQYVXCPAOLZOK-XINAWCOVSA-N 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000002510 pyrogen Substances 0.000 description 2
- 230000001698 pyrogenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 229940115922 streptococcus uberis Drugs 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 2
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 2
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 2
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 2
- 235000019156 vitamin B Nutrition 0.000 description 2
- 239000011720 vitamin B Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 11-dehydrocorticosterone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000019901 Anxiety disease Diseases 0.000 description 1
- 206010003011 Appendicitis Diseases 0.000 description 1
- 206010053555 Arthritis bacterial Diseases 0.000 description 1
- 241000304886 Bacilli Species 0.000 description 1
- 238000009631 Broth culture Methods 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 229930186147 Cephalosporin Natural products 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- 208000003322 Coinfection Diseases 0.000 description 1
- MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N Cortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 1
- MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N Cortisone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)(O)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010012455 Dermatitis exfoliative Diseases 0.000 description 1
- 206010052804 Drug tolerance Diseases 0.000 description 1
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 description 1
- 101710146739 Enterotoxin Proteins 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 206010061126 Escherichia infection Diseases 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 1
- 206010016936 Folliculitis Diseases 0.000 description 1
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 206010017964 Gastrointestinal infection Diseases 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- 208000031957 HIV carrier Diseases 0.000 description 1
- 102000018713 Histocompatibility Antigens Class II Human genes 0.000 description 1
- 108010027412 Histocompatibility Antigens Class II Proteins 0.000 description 1
- 241000714260 Human T-lymphotropic virus 1 Species 0.000 description 1
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 208000003623 Hypoalbuminemia Diseases 0.000 description 1
- 208000013038 Hypocalcemia Diseases 0.000 description 1
- 206010024971 Lower respiratory tract infections Diseases 0.000 description 1
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 1
- 102000006386 Myelin Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010083674 Myelin Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000008071 Parvoviridae Infections Diseases 0.000 description 1
- BYPFEZZEUUWMEJ-UHFFFAOYSA-N Pentoxifylline Chemical compound O=C1N(CCCCC(=O)C)C(=O)N(C)C2=C1N(C)C=N2 BYPFEZZEUUWMEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000037581 Persistent Infection Diseases 0.000 description 1
- 208000035109 Pneumococcal Infections Diseases 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 1
- 206010053879 Sepsis syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010040844 Skin exfoliation Diseases 0.000 description 1
- 241000191963 Staphylococcus epidermidis Species 0.000 description 1
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 description 1
- 206010051379 Systemic Inflammatory Response Syndrome Diseases 0.000 description 1
- GUGOEEXESWIERI-UHFFFAOYSA-N Terfenadine Chemical compound C1=CC(C(C)(C)C)=CC=C1C(O)CCCN1CCC(C(O)(C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)CC1 GUGOEEXESWIERI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 206010046306 Upper respiratory tract infection Diseases 0.000 description 1
- 241000607598 Vibrio Species 0.000 description 1
- 206010047400 Vibrio infections Diseases 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 201000009840 acute diarrhea Diseases 0.000 description 1
- 230000037006 agalactosis Effects 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000001387 anti-histamine Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 1
- 239000012984 antibiotic solution Substances 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 239000000739 antihistaminic agent Substances 0.000 description 1
- 230000036506 anxiety Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000015294 blood coagulation disease Diseases 0.000 description 1
- 230000036765 blood level Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 229940124587 cephalosporin Drugs 0.000 description 1
- 150000001780 cephalosporins Chemical class 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 229960004544 cortisone Drugs 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 230000000254 damaging effect Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 230000001729 effect on metabolism Effects 0.000 description 1
- 206010014665 endocarditis Diseases 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 208000020612 escherichia coli infection Diseases 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000010429 evolutionary process Effects 0.000 description 1
- 238000004299 exfoliation Methods 0.000 description 1
- 238000002637 fluid replacement therapy Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- PGBHMTALBVVCIT-VCIWKGPPSA-N framycetin Chemical compound N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](N)C[C@@H](N)[C@@H]2O)O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O2)N)O[C@@H]1CO PGBHMTALBVVCIT-VCIWKGPPSA-N 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 208000018685 gastrointestinal system disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 1
- 208000027096 gram-negative bacterial infections Diseases 0.000 description 1
- 208000027136 gram-positive bacterial infections Diseases 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 230000026781 habituation Effects 0.000 description 1
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 230000000705 hypocalcaemia Effects 0.000 description 1
- 230000005965 immune activity Effects 0.000 description 1
- 230000008076 immune mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000019171 interleukin-1 alpha production Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 108010052620 leukocyte endogenous mediator Proteins 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 1
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000002175 menstrual effect Effects 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002864 mononuclear phagocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 208000027531 mycobacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 210000005012 myelin Anatomy 0.000 description 1
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035407 negative regulation of cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 210000004248 oligodendroglia Anatomy 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000001991 pathophysiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007310 pathophysiology Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 206010034674 peritonitis Diseases 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 239000012451 post-reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 208000030279 prolonged fever Diseases 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 201000002765 pyometritis Diseases 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 239000002464 receptor antagonist Substances 0.000 description 1
- 229940044551 receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- 230000002787 reinforcement Effects 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 206010040882 skin lesion Diseases 0.000 description 1
- 231100000444 skin lesion Toxicity 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 229940031000 streptococcus pneumoniae Drugs 0.000 description 1
- 229940124530 sulfonamide Drugs 0.000 description 1
- 150000003456 sulfonamides Chemical class 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 208000012153 swine disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003390 teratogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000012049 topical pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 1
- 230000002227 vasoactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 239000000304 virulence factor Substances 0.000 description 1
- 230000007923 virulence factor Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
- A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
- A61L15/22—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons containing macromolecular materials
- A61L15/32—Proteins, polypeptides; Degradation products or derivatives thereof, e.g. albumin, collagen, fibrin, gelatin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/47—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2), e.g. cellulases, lactases
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2462—Lysozyme (3.2.1.17)
Abstract
Jelen találmány tárgya eljárás olyan gyógyászati készítményekelőállítására, amelyek ember és állatok természetes védekezésimechanizmusának erősítésére alkalmasak. ŕ
Description
Jelen találmány tárgya a lizozim dimer új gyógyászati felhasználásai és ezen dimert tartalmazó készítmények. Az új felhasználás a természetes védekezőmechanizmusok egyes diszfúnkcióinak kezelésével kapcsolatos.
Hosszú idő óta ismeretes, hogy az enzimek monomer formában terápiás hatásúak különböző betegségek kezelésében.
A lizozimot Fleming fedezte fel 1922-ben, de 1950 előtt az enzimatikus hatásait nem ismertették. Azóta a vegyület intenzív kutatás tárgyát képezi, és különböző terápiás hatásait ismertették, mint például az antivirális, antibakteriális gyulladásgátló és antihisztamin hatásait. A lizozim terápiás felhasználása azonban meglehetősen korlátozott a monomer forma káros mellékhatásai miatt.
A lizozim és más terápiásán hatékony enzimek gyakorlati alkalmazásának ilyen jellegű korlátozottsága megváltozott a nyolcvanas évek végén, amikor felfedezték, hogy az enzimek izolált dimer formái az ismert monomer formák minden kedvező hatását megtartották, de nem mutattak káros mellékhatásokat terápiás dózisban alkalmazva. Az aktív résztvevőként lizozim dimert vagy más dimerizált enzimet tartalmazó antivirális és antibakteriális készítményeket a WO 91/10731 és a WO 89/11294 számú bejelentésekben ismertetnek. Az utóbbi bejelentésben ismertetettek szerint a lizozim dimer számos olyan baktériumfajta szaporodását gátolta, amelyeket 5-20 mg/ml kultúrakoncentrációban betegekből nyert mintákon tenyésztettek. Ugyancsak itt ismertették, hogy a dimer hatékony volt kutya-parvovírus-fertőzésekben (CPV) 1-2 mg/testtömeg-kg dózisban naponta kétszer orálisan adagolva.
A feltalálói kutatómunka folytatásának eredményeképpen a lizozim dimereknek további kedvező tulajdonságai váltak ismertté, és a szer új gyógyászati felhasználásai kerültek kifejlesztésre. A lizozim dimer antibakteriális és antivirális hatékonyságának megerősítése céljából végzett klinikai vizsgálatokban meglepő módon az derült ki, hogy a dimer nem várt mértékben hatékony az emésztő- és légzőrendszer akut megbetegedéseinek gyógyításában. Ennek megfelelően újabb vizsgálatokat végeztek a lizozim dimer hatásának meghatározása céljából különböző betegségek okozta olyan állapotokban, amikor a természetes védekezőmechanizmusok károsodtak.
Ismert, hogy baktériumtoxinok alkotják a sok virulenciafaktor egyik csoportját, amelyekkel a baktériumok betegségeket okoznak. A baktériumtoxinok ismerete terén egyes újabb eredmények szerint azok a gazda immunrendszerével lépnek kapcsolatba. Ez az interakció először immunmodulációban mutatkozik meg, másodszor a citokinek és egyéb mediátorok felszabadulásában, ami a toxinok okozta számos fiziológiai zavart megmagyarázza.
A késői hatást különösen az endotoxin hatásaira vonatkozóan vizsgálták, minthogy az lényeges szerepet játszik a Gram-negatív szepszis patogenezisében (Bayston, D. F., Cohen, J.: Bacterial endotoxins and current concepts in the diagnosis and retreatment of endotoxaemia, J. Med. Microbiol. 1990, 31, 73-83). Noha a Staphylococcus aureus és Streptococcus pyogenes okozta fertőzésekben régóta ismert az exotoxinok szerepe, a Staphylococcus-toxin sokk-szindróma felismerése vezetett az ezen organizmusok termelte exotoxinok felé forduló növekvő figyelemhez.
A toxikus sokk súlyos betegség, amit magas láz, alacsony vérnyomás, kapilláris vérzés, diffúz erythroderma (bőrpír), nyálkahártya-erythema, veseelégtelenség, hypocalcaemia, hypoalbuminaemia és a vörös bőrelváltozások hámlása jellemez. A toxikussokk-szindróma sok esetben menstruáció alatti hüvelytampon használatával állt összefüggésben, de a szindrómát egyre többször írják le nem menstruációval kapcsolatos tampon, illetve kötözés esetén mindkét nemben, gyakran sebészeti beavatkozás után, ha a kötözőanyag a helyén marad (például orrtampon orrplasztikát vagy súlyos orrvérzést követően). A toxikussokk-szindrómás (TSS) betegek hüvelyéből izolált Staphylococcus törzsekről kimutatták, hogy toxikussokk-szindrómatoxin-l-et (TSST-1) termelnek, de a TSST-l-et termelő mikroorganizmus eredete lehet nem helyi fertőzés is. A kezdeti bakteriaemia hiányozhat is, de hetekkel vagy hónapokkal később helyi fertőzések kialakulásához vezethet. Ezen fertőzések jelenlétének velejárója lehet szepszisszindróma vagy szeptikus sokk. Ritkább, de di ámaibb bakteriaemia fordulhat elő a behatolás helyén ellenállás hiányában vagy ezzel összefüggő helyi fertőzések esetén, és ezekben az esetekben sokk, endocarditis (szívbelhártya-gyulladás), disszeminált intravascularis coagulopathia és sokszervi megbetegedés fordulhat elő (Stevens, D. L. és munkatársai: Gram-positive shock; Current Opinions in Infectious Diseases, 1992, 5, 355-363).
Más Gram-pozitív baktériumokra vonatkozóan is ismertek hasonló megfigyelések. Például a Streptococcus pyogenes-fertőzéssel kapcsolatos sokk, Pyogenesfertőzéssel kapcsolatos sokk, aminek a mortalitása 30%. A Streptococcus pneumoniae a tüdőgyulladás egyik kórokozója, amiről kimutatott, hogy nagymértékben rezisztens penicillinre, és hajlamos sokkszindróma előidézésére. Továbbá AIDS-es betegek Pneumococcus-fertőzéseinek incidenciája magasabb, mint a populáció egészéé.
Gram-negatív baktériumok okozta fertőzés szepszist és szeptikus sokkot is eredményezhet. A leglényegesebb enterotoxinok a Gram-negatív bacilusokból és vibriókból származnak. Az enterotoxin a Gram-negatív baktériumsejtfal külső membránjának egy lipopoliszacharid(LPS) komponense. Az enterotoxinok elsődlegesen a bélrendszerre hatnak, és általában hasmenést okoznak. A leggyakoribb Gram-negatív baktériummal történő fertőzés állatokban és emberben az Escherichia coli-fertőzés. Az ezekkel a fertőzésekkel együttjáró nagymértékű vízvesztés a fertőzött egyed halálához vezethet. A WHO szerint az akut hasmenés körülbelül 3,2 millió gyerek halálát okozza évente a fejlődő országokban. Az összes szepszises eset körülbelül 30%-át Gram-negatív baktériumok okozzák.
A Gram-pozitív és Gram-negatív baktériumok által okozott szepszis mindig súlyos állapotot jelent egy2
HU 218 151 Β ségesen minden országban. Az USA-ban körülbelül 400 000 eset fordul elő évente, körülbelül 50%-os mortalitási aránnyal.
Az utóbbi években a szepszis és szeptikus sokk sok publikáció tárgya volt. Megfigyelték, hogy a szeptikus sokk kórélettanában a fő szerepet az endotoxaemia és más bakteriális mérgező mediátorok játsszák. Ide tartozik a tumomekrózis-faktor (TNF), az interleukin-1 (IL—1), az interferon (IFN), a trambocitaaktivátorfaktor és az eicosanoidok (az arachidonsav származékai). Ezek közül a leglényegesebb a TNF hatást gyakorol a metabolizmusra csakúgy, mint az immun- és fagocitarendszerekre (Berkowitz, F. E.: Bacterial toxins in pathogenesis of infections; Current Opinions in Infectious Diseases, 1991,4, 332-337). Kimutatták, hogy akik nem élték túl a szeptikus sokkot, azok nagyobb TNF- és interleukin-1-koncentrációval rendelkeztek. Sok szerző számolt be magasabb TNF-a-szintekről a szeptikus sokkban szenvedő betegek plazmájában, illetve vérében. Ugyancsak kimutatták, hogy a TNF-α toxikus hatása nem annyira a TNF koncentrációjától, hanem inkább a testben való perzisztálásától függ. Sok szerző kutatta a citokinkaszkád megváltoztatásának lehetőségét szepszisben és szeptikus sokkban. Az ismertetett sikeres javaslatok közé tartoznak a monoklonális anti-TNF-antitestek használata és a lipopoliszacharidok antilipopoliszacharidokkal történő neutralizálása. Az antitestek azonban nem fokozzák a baktérium mentesítését. Részlegesen jó hatást figyeltek meg olyan szerek, mint a makrofágok TNF-termelését blokkoló dexamethason és pentoxiphyllin alkalmazásakor.
Ismert továbbá, hogy más citokinek is hozzájárulnak szeptikus sokk kialakulásához. Ebben az esetben lehet, hogy azok a kezelések, amelyek a szeptikus sokkban a citokinkaszkádot változtatják meg, gátolják a fertőzés leküzdését, minthogy a gazda védekezőképessége ugyanezen gyulladásos citokinektől függ. A szeptikus sokk megelőzésére szolgáló eszközök megtalálása az elsődleges cél, minthogy ez nagyszámú páciens gyógyítására adna lehetőséget. E célból a TNF-szint ellenőrzése tűnik szükségesnek.
Hasonlóan kényes szerepe van a TNF-nek egy másik védekezőmechanizmus, a láz létrejöttében, ami egy, a fertőzésekre adott jellegzetes válaszreakció gyakorlatilag minden magasabb rendű állatban és az emberben. Öt pirogén citokin (interleukin-1, TNF, interferon, interleukin-2 és interleukin-6) ismert jelenleg mint a lázas állapot főbb endogén mediátorai, amelyek gátolják a preopticus hőérzékeny neuronokat, amelyek normálisan elősegítik a hőleadást, és csökkentik a hőtermelést a humán szervezetben. A láz és annak mediátorai mind a behatoló organizmust, mind a gazdát képesek károsítani. Tekintélyes mennyiségű adat gyűlt össze az utóbbi években arra vonatkozólag, hogy az interleukin-1, a TNF és az interleukin-6 idézik első a fertőzésekkel járó patofiziológiai abnormalitásokat. Minthogy az endogén pirogének hozzájárulnak különböző fertőzések patológiás lefolyásához, mind a mediátorok, mind a láz ártalmas lehet a gazdaszervezetnek. Ebben a tekintetben a legserkentőbb bizonyítékot a Gram-negatív szepszis vizsgálatai szolgáltatták. Ugyancsak nyilvánvaló, hogy az endogén pirogének közvetítik a szepszis szisztémás és helyi manifesztációit Gram-pozitív bakteriális fertőzésekben, AIDS-ben, Spirochalta-fertőzésben, meningitisben, felnőtt respirátoros szorongásos szindrómában, gennyes arthritisben és mycobacteriosisban. Noha a citált adatok ellentétesek azzal a megfigyeléssel, hogy a láz önmagában megnöveli a fertőzésekkel szembeni ellenállást a kísérleti állatokban, azonban inkább a faj kondíciója, mint az egyedek túlélése lényeges az evolúciós folyamatban. Elképzelhető, hogy a pirogén citokinek a súlyos fertőzések (például Gram-negatív szepszis) kimenetelére való káros szisztémás hatásaiból alakult ki a láz jótékony helyi hatása a kevésbé fulmináns fertőzések esetén. A súlyos fertőzéseknél kifejtett hatás révén a természet a reménytelen fertőzött egyedekről való lemondás siettetésével elpusztítja az egyéneket, akik veszélyesek a fajra. Ily módon a faj mint egész védett lehet a fertőző betegségektől (Mckowiak, P. A.: Mechanism of Fever; Current Opinions in Infectious Diseases, 1992, 5, 348-354).
A láz kórokának alapkoncepciója szerint az exogén pirogének - származásuktól és szerkezetüktől függetlenül - okozzák a lázat azáltal, hogy a gazdaszervezet sejtjeit (elsősorban a makrofágokat) endogén pirogének termelésére serkentik. Ennek megfelelően az antiendogén pirogén antitesteken és az endogén pirogének receptorantagonistákon alapuló terápiás eljárások hatékonyak lehetnek. Az egyik lehetőség a TNF-bioszintézis gátlása. Állatokon végzett vizsgálatok szerint a TNF előbb képződhet, mint az IL -1 és más citokinek a fertőzés kiváltotta válaszreakció kaszkádjában. Sok tudós szerint a TNF-bioszintézis gátlása az IL-1-bioszintézis leállítását is jelenti. De a TNF-bioszintézis gátlása néhány fulmináns és reménytelen fertőzés káros hatásainak kiküszöbölését is jelenti.
A TNF a gyulladás folyamatának egyik mediátoraként is ismert. A gyulladás sok esetben az első stádium egy betegség természetes lefolyása során, amiből szeptikus sokk fejlődik ki. Azokban az esetekben, amikor szövetek folytonossága szakad meg, mint például fertőzésnek kitett sérülések, háborús sérülések, különösen a hasi sérülések (hashártyagyulladás) esetén, továbbá a gvomor-bél rendszer betegségeiben, mint például appendicitisszel kapcsolatos akut fertőzések, akut bakteriális és virális fertőzésekben, amelyeket influenzát követően fellépő tüdőgyulladásban észlelünk, daganatos megbetegedésekben, különösen a tumorok szétesési fázisában, és hasonló esetekben gyulladás az első tünete a megnövekedett TNF-termelésnek. A TNF-szint szabályozása emiatt kívánatos kezelési mód lenne ezekben a fertőzésekben.
Egyre többet hangoztatják a TNF szerepét az AIDSben. Az AIDS-reakcióra súlyos immundefektus jellemző. Az AIDS-et a CD4+ limfociták számának csökkenése fémjelzi. A HIV-vírussal - az AIDS etiológiai tényezőjével - fertőzött sejtek száma relatíve csekély (<1/100-1000) az AIDS-es betegek perifériás vérében levő mononukleáris sejtekben (PBMC) is. Míg a CD4+ limfociták előszeretettel fertőződnek, ezek a sejtek nem
HU218 151 Β kitüntetett célpontjai a HIV-fertőzésnek. Ma nyilvánvaló, hogy a HIV-célsejtek skálája elég széles. Egyértelmű különbséget figyeltek meg a HIV-infekció következményében monocita/makrofág, illetve T-limfociták esetén. Míg a T-limfociták károsodásra hajlamosak, a monocita/makrofágok perzisztáló fertőzést tesznek lehetővé. így a HIV-vírus raktározódhat a monocita/makrofág-rendszerben csakúgy, mint a test egyéb sejtjeiben. A HIV-fertőzésre adott monocita/makrofág típusú válasz lehet a felelős a tapasztalt látenciáért a gazdaszervezetben. Ez a válasz a fertőzött sejtek által termelt szolubilis faktorok révén káros következményekkel is járhat (Toshifumi Matsuyama és munkatársai: Cytokines and HÍV infection: Is AIDS a Tumor Necrosis Factor disease? AIDS, 1991, 5:1405-1417). Sok tudós közölte, hogy a HTLV-l-gyel fertőzött humán T-sejtvonalak erősen fogékonyak HIV-fertőzésre, drámai sejtkárosító hatást mutatva a HÍV fokozott replikációjával összefüggésben. A HIV-fertőzött sejtek fogékonyak továbbá ezen sejtek felülúszójának károsító hatására. Ezen felülúszóval történt kezelés után a vírustitert vizsgálva kitűnt, hogy a T-sejtek által termelt faktor (MT-2) megnövelte a HlV-replikációját. A faktort mint TNF-β-ΐ azonosították, és ez a felfedezés megfelel azoknak a közléseknek, amelyek szerint a T-sejtek (MT-2) TNFβ-t termelnek. Ugyanezt a hatást figyelték meg TNF-a alkalmazása esetén. A TNF-α és TNF-β szelektíven elpusztították a HIV-fertőzött sejteket és megnövelték a HIV-replikációját. Ugyancsak ismertetésre került, hogy HIV-fertőzött T-setjvonalak és HIV-fertőzött személyekből frissen izolált PBMC a TNF-re megemelkedett szintekkel reagált. így felmerül, hogy a HÍV expressziójának növekedése in vivő hasonló módon megy végbe. Valójában a TNF serkentő hatása semlegesíthető lenne anti-TNF-antitestekkel. A HIV-replikáció növekedése TNF-a-val és TNF-β-val történő kezelés után 109szeres értéket is elérhet Yakamam, A. és munkatársai: Tumor necrosis factors (α, β) induced by HIV-1 in peripheral blood monocellular cells potentáté vírus replication; AIDS 1990,421-427).
Megerősítést nyert továbbá, hogy különböző citokinek hatást gyakorolhatnak a HÍV szaporodására. Normál perifériás vérből nyert tisztított mononukleáris fagociták alkalmazásakor mind IL-6-, mind TNF-a-indukció volt észlelhető néhány órával a HIV-expozíciót követően. Ez a citokinindukció hővel inaktivált HÍV alkalmazása esetén is megfigyelhető volt. Számos megfigyelés és Toshifumi Matauyama és munkatársai (fentiekben citálva) egyetértenek abban, hogy az AIDS citokin- vagy TNF-betegséget reprezentál. Az AIDS citokinrendszere, a TNF-α és TNF-β tűnnek a döntő molekuláknak, amelyek megnövelik a HÍV replikációját, és indukálják a saját és más citokinek expresszióját. A TNF-a-ról kimutatott, hogy stimulálja más citokinek felszabadulását különböző sejttípusokban, és ezáltal kulcsszerepet tölt be az első védekezőmechanizmus citokinkaszkádjában.
Feltételezések szerint az AIDS-szel kapcsolatos számos tünet magyarázható különböző biológiai funkciójú citokinek felszabadulásával. A két jól ismert pirogén, az
IL — 1 és a TNF-α termelésének növekedése magyarázhatja az AIDS-es betegeknél észlelhető lázat. A TNF-a szerepet játszhat az AIDS-szel összefüggő cachexiában. Mind a TNF-α, mind a TNF-β immunmodulátorként működik, és effektormolekulái a monocita közvetítette citotoxicitásnak. A TNF felelős továbbá az immunválasz aktiválásáért, és képes a HIV-fertőzött sejtek direkt elpusztítására, ezáltal a HIV-replikáció növelésére. Feltehetően ugyancsak egy immunmechanizmus magyarázza a CD4T-sejtek számának csökkenését AIDS-ben (Matsuyama és munkatársai, lásd fent). Ismertették továbbá, hogy az AIDS-szel összefüggő Kaposi-szarkómát ugyancsak a TNF-α indukálja; TNF-α képződhet a keratinocitákban fiziológiás ingerekre, mint például ultraviola sugárzás, ami hozzájárulhat az IL-6 indukciójához a bőrben és Kaposi-szarkóma kifejlődéséhez AIDS-ben. In vitro vizsgálatokban a TNF-α képes a myelin és az oligodendrociták károsítására. Néhány gliomából származó sejtvonal ugyancsak fogékonynak mutatkozott a TNF-α antiproliferatív hatására. Ebből az a következtetés vonható le, hogy az AIDS-es betegek központi idegrendszeri diszfunkciója a TNF-α részvételének következménye. Számos közlemény ismerteti, hogy a TNF-α és IL— 1 szérumszintjei lényegesen emelkedettek az AIDS és az ARC (AIDS related complex) kifejlődésével, míg csökkentek a tünetmentes HÍV-hordozók szérumvizsgálatánal az egészséges kontrollértékek tartományában. Matsuyama és munkatársai (lásd fent) szerint az AIDS legalább annyira TNF-betegség, mint HIV-betegség. Ez azt mutatja, hogyha a TNF-indukció szabályozhatóvá válik, ez lehetővé teszi, hogy az AIDS-es betegek számára hatékony terápia alapjait fektessük le.
A következő alapvető felismerések tették lehetővé a fent ismertetett problémák kezelését és a lizozim dimer új terápiás felhasználásának kidolgozását a fent ismertetett kóros körülmények között:
1. A lizozim dimer gátolja a TNF szintézisét,
2. A lizozim dimer stimulálja az IFN-α szintézisét,
3. A lizozim dimer növeli a fagocitaaktivitást.
Ennek megfelelően a jelen találmány tárgya eljárás hatóanyagként lizozim dimert tartalmazó gyógyászati készítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy a hatóanyagot gyógyászatilag elfogadható hordozóval és adott esetben alkalmazott egyéb segédanyaggal összekeverve állatok és ember természetes védekezési mechanizmusának erősítésére alkalmas gyógyászati készítménnyé alakítjuk.
Jelen találmány tárgya továbbá olyan eljárás gyógyászati készítmények előállítására, amelyek különösen magas TNF-szinttel járó, fentiekben ismertetett betegségek megelőzésére alkalmasak.
Jelen találmány szerint előállított gyógyászati készítmények és higiénés termékek növekvő és különösen magas TNF-szinttel járó megbetegedések gyógyítására és megelőzésére alkalmasak.
A találmány szerint a fent ismertetettek a lizozim dimerizált formájának következő, új felhasználásával valósíthatók meg, továbbá a lizozim dimert aktív résztvevőként tartalmazó, új gyógyászati készítmények révén:
HU 218 151 Β
- lizozim dimer felhasználása egy gyógyszer előállítására, amely gátolja a tumomekrózis-faktor bioszintézisét állatban és emberben;
- lizozim dimer felhasználása egy gyógyászati készítmény előállítására, különösen magas tumornekrózis-faktor-szinttel járó megbetegedések kezelésére;
- lizozim dimer felhasználása egy gyógyászati készítmény előállítására, különösen magas tumornekrózis-faktor-szinttel járó megbetegedések megelőzésére;
- lizozim dimer felhasználása gyógyszer előállítására HIV-indukálta tumomekrózis-faktor-felszabadulás szabályozására tünetmentes hordozókban és komplex AIDS-ben szenvedő betegekben;
- lizozim dimer felhasználása AIDS kezelésére szolgáló gyógyászati készítmények előállítására;
- lizozim dimer felhasználása szepszis és szeptikus sokk megelőzésére és/vagy kezelésére szolgáló gyógyászati készítmény előállítására;
- lizozim dimer felhasználása cachexia megelőzésére és/vagy kezelésére szolgáló gyógyászati készítmény előállítására;
- lizozim dimer felhasználása láz megelőzésére és/vagy kezelésére szolgáló gyógyászati készítmény előállítására;
-lizozim dimert 0,01-10 mg/ml, előnyösen 0,1-1,0 mg/ml koncentrációban tartalmazó injekció, amelyben egy pirogénmentes steril készítmény egy élettanilag alkalmazható oldószert és egy gyógyászatilag engedélyezett tartósítószert tartalmaz;
- a fenti injekció iv. alkalmazásra 0,02 mg/testtömeg-kg egyszeri vagy többszörös adagjában;
- tamponok és antiszeptikus kötszerek, amelyek lizozim dimer hatékony mennyiségét tartalmazó kenőcsökkel vagy gélekkel impregnáltak - szepszis és szeptikus sokk megelőzésére és fertőzött sebek kezelésére;
- hüvelytamponok lizozim dimer hatékony menynyiségével impregnálva menstruáció alatti használatra.
A lizozim dimerizált formájaként az izolált, tisztított lizozim dimer használata előnyös. Néhány alkalmazásnál lehetséges olyan készítmény használata, amely a lizozim dimer mellett kis mennyiségben az enzim trimerjét és magasabb számú oligomerjét is tartalmazza.
A jelen találmány szerinti injekciók alkalmazhatók intramuszkulárisan és szubkután is. Néhány esetben alkalmas lehet ugyanolyan folyékony készítmény alkalmazása (egyidejűleg vagy függetlenül) méhbe vagy emlőbe - vagy helyileg - esetenként más helyi készítménnyel együtt.
Az előnyös pirogénmentes steril készítmények legalább egy élettanilag alkalmazható oldószert és/vagy legalább egy gyógyászatilag engedélyezett tartósítószert tartalmaznak, ahol az oldószer pirogénmentes sterilizált víz vagy PBS vizes oldata, és a proteintartalmú gy ógyászati készítmények számára engedélyezett tartósítószer a tiomersal.
A lizozim dimerizált formája az enzim monomer szabályozott polimerizálási folyamatával nyerhető, amit óvatos tisztítás követ, különösen az ismertetett toxikus mellékhatásokkal rendelkező monomer forma és a reakció utáni keverékben lévő trimerek és magasabb oligomer frakciók eltávolítása. A polimerizáció bármely ismert módja alkalmas az enzim dimer formájának előállítására. Egy ilyen, tisztítási eljárást is tartalmazó előállítási folyamatot ismertetnek a WO 91/10731 számon publikált PCT-bejelentésben.
A lizozim dimer eddigi preklinikai vizsgálatai nem fedtek fel semmilyen mutagén vagy teratogén hatást, és nem volt, vagy csak igen kismértékű hozzászokás. Az egyszeri adag toxicitása orális vagy dermális alkalmazáskor mérhetetlen volt (LD50>2000 mg/kg), iv. adagoláskor az LD5o> 1000 mg/kg volt.
A lizozim dimer jelenleg felfedezett új alkalmazása szilárdan megalapozottnak bizonyult az in vitro vizsgálatokban, és hatékonynak az in vivő klinikai felhasználásban. Néhány összehasonlító vizsgálatot is végeztünk.
Várhatóan a TNF-felszabadulásra gyakorolt gátló hatás hatékonynak bizonyul a lizozim dimer szélesebb hatásspektruma miatt, nevezetesen az INF-felszabadulást indukáló és a fagocitózist növelő hatása miatt. Az itt említett ezen két tulajdonság fontos tényezője a természetes védekezőmechanizmusoknak. Ennek megfelelően a lizozim dimer fent meghatározott új felhasználási területein a terápiás és profilaktikus hatások a természetes védekezőmechanizmusok megerősítésén alapulnak.
A jelen találmányt a továbbiakban példákon keresztül ismertetjük, amelyekben hivatkozunk a kísérő ábrára. amely grafikusan ábrázolja a különösen érdekes vizsgálati eredményeket:
1. ábra a TNF-felszabadulás in vitro visszaszorítását ábrázolja limfocitakultúrában, amely szuboptimálisan ConA-val stimulált, lizozim dimer különböző hígításainak j elenl étében.
1. példa
A lizozim dimer immunhatásának meghatározása céljából vizsgálatot végeztünk humán perifériás vérlimfociták FACS-analízisével.
A humán perifériás limfociták mitogén stimulációja egy jól megalapozott eljárás az immunrendszer legfontosabb sejtjeinek reaktivitási vizsgálatára. A gyógyászati anyagoknak az egészséges véradókból származó limfociták aktiválására és proliferációjára való hatásának vizsgálatára mitogént alkalmazunk szuboptimális dózisban, és a végén a limfocitaválaszt kvantitatíve mérjük immunológiai paraméterekkel. Az eredményeket a gyógyszer alkalmazása nélkül mért kontrollértékekkel hasonlítjuk össze.
A limfociták stimulálása céljából 20 pg/ml ConA-t használtunk a közegben. A kezdeti sejtkoncentráció 106 sejt/ml volt. A rövid távú (short time) kultúrákat CO2-inkubátorban tartottuk egy (a limfocitákon lévő IL-2-receptorok és HLA-Dr) vagy két napig (összes
HU218 151 Β többi vizsgálat). A következő paramétereket mértük a sejtaktiváció kritériumaiként:
- neopterin (az immunaktivitás jelzője),
- β-2-mikroglobulin (ugyancsak aktivitásjelző),
- interleukin-2 (T-helper limfocita eredetű autokrin és parakrin anyag),
- interleukin-6 (sejtdifferenciálódási hormon),
- tumomekrózis-faktor - TNF (vazoaktív, multipotens interleukin),
- interferon-α (differenciálódási faktor, különösen β-limfocitákra vonatkozóan),
- timidin-kináz (enzim, proliferáló sejtekben biológiai szabályozás révén szintézise megnövekszik),
- limfocita-interleukin-2-receptor (akceptormolekula autokrim és parakrin IL-2-re),
- limfocita Ki-67 (aktivált és proliferáló sejtekben expresszálódó antigén),
- limfocita-HLA-Dr (II. osztályú hisztokompatibilitási antigén-immunreakció alatt szintje nő).
A sejtproduktumokra vonatkozóan az alábbi megfigyeléseket tettük a tenyészet felülúszójában.
Neopterin (T-limfociták termelik az immunválasz során és stimulált kultúrákban): a jelen kísérletekben a fenti lizozimdimer-alkalmazás hatására nem emelkedett jelentősen a ConA stimulálta sejteknek a vizsgált dimer hiányában mért kontrollértéke fölé. A vizsgált dimer koncentrációjának emelésével a neopterin-értékek kismértékben emelkedtek.
Hasonló módon a β-2-mikroglobulinértékek a lizozim dimer bármely koncentrációjánál a kontrollérték körül mozogtak.
IL-2-receptorok (a tenyészetben leválnak a limfocita felszínéről, és a teljes IL-2-receptor-tumoverről nyújtanak információt): a limfocitafelszínen levő IL-2-receptorokhoz hasonló szintet mutattak, és egyértelműen visszaszorultak a vizsgált dimer legmagasabb koncentrációjánál.
Interleukin-6 egyértelműen dózisfüggően magasabb értékeket mutatott magasabb koncentrációknál. Ez a molekula nagyon fontos szerepet játszik a hematopoezisben (vérképzésben), a sejtdifferenciálódásban és az immunválaszban. A vizsgálatban az első három értéket extrapolálni kellett, mert a legmagasabb standard érték csak 2000 pg/ml volt.
A fennmaradó molekulákra vonatkozó eredményeket az alábbi 1. táblázat mutatja. Az Interleukin-6-tál ellentétben a TNF-α a kultúra felülúszójában nem várt módon feltűnően csökkent koncentrációban volt jelen, kivéve az utolsó két hígítást, ami hatástalannak bizonyult a TNF-koncentráció csökkentésében.
A timidin-kinázt a limfocita citoplazmájában mérjük a sejtpellet fagyasztása és felengedése után. A timidin-kináz megnövekszik az osztódó sejtekben, ezáltal jó mutatója a sejtproliferációnak. Az 1. táblázat adatai csökkenést mutatnak a legmagasabb vizsgált lizozimdimer-koncentrációknál; a többi hígításnál nem látható világos tendencia. Az interferon-α ellenben ugyanezen körülmények között a csak ConA-t tartalmazó kontrollérték fölötti értékeket mutatott magasabb koncentrációknál. Látható növekedés a második értéktől a harmadik hígításig tapasztalható.
1. táblázat
Lizozim dimer hatása a humán perifériális vérre
| Szám | Minta | HLA- Dr/CD3 | IL-2 Rec | Ki-67/ CD8 | Ki-67/ CD4 |
| Kontroll | 3,3 | 8,9 | 6,0 | 2,7 | |
| 1. | 1 mg/ml | 2,2 | 2,6 | 4,8 | 5,3 |
| 2. | 0,3 mg/ml | 1,9 | 6,3 | 4,1 | 3,0 |
| 3. | 0,1 mg/ml | 3,0 | 6,1 | 6,5 | (6,9) |
| 4. | 33 pg/ml | 3,0 | 5,9 | 6,3 | 3,0 |
| 5. | 10 pg/ml | 3,4 | 6,0 | 7,7 | 3,7 |
| 6. | 3,3 pg/ml | 2,4 | 5,0 | 7,5 | 3,7 |
| 7. | 1 pg/ml | 2,5 | 4,9 | 7,0 | 4,1 |
| 8. | 0,3 pg/ml | 3,3 | 5,8 | 7,5 | 3,9 |
| 9. | 0,1 pg/ml | 2,8 | 4,0 | 7,9 | 3,8 |
| 10. | 33 ng/ml | 3,1 | 4,6 | 8,0 | 4,1 |
Lizozim dimer hatása a humán perifériás vér limfocitáira
| Szám | Minta | TNF | Thym.- Kincse | IFN-a |
| Kontroll | 205,11 | 9 242 | 4,97 | |
| 1. | 1 mg/ml | 38,07 | 923 | 8,81 |
| 2. | 0,3 mg/ml | 17,19 | 10 914 | 9,44 |
| 3. | 0,1 mg/ml | 13,75 | 7 254 | 17,96 |
| 4. | 33 pg/ml | 36,11 | 9 525 | 3,67 |
| 5. | 10 pg/ml | 22,22 | 5 492 | 7,54 |
| 6. | 3,3 pg/ml | 54,91 | 5 198 | 6,26 |
| 7. | 1 pg/ml | 18,47 | 5 840 | 33,91 |
| 8. | 0,3 pg/ml | 14,47 | 6 839 | 10,07 |
| 9. | 0,1 pg/ml | 94,16 | 3 672 | 4,97 |
| 10. | 33 ng/ml | 172,46 | 7312 | 10,07 |
Lizozim dimer hatása a humán perifériás vér limfocitáira
Li mfocitamarkerek
HLA-Dr/CD3: egy hisztokompatibilitási marker az aktivált T-limfocitákon jelentkezik az immunválasz során. A nyert eredmények az aktivált T-sejtek bizonyos százalékát mutatták a kontrolltenyészetben. A kultúrákban különböző koncentrációjú lizozim dimer esetén az értékek a kontrollérték körül mozognak.
IL-2-receptorok a limfocitákon: az interleukin-2 egy citokin, amit T-helper limfociták termelnek aktiválás után, IL-l-en keresztül. Az IL-2 autokrin és parakrin. A T-helper limfociták nem csak termelik az IL -2-t, hanem ez a molekula proliferációra is serkenti őket. A T-helper limfociták felszíni IL-2 receptorai aktiválás során felszaporodnak. Az 1. táblázat azt mutatja,
HU 218 151 Β hogy a lizozim dimer legmagasabb koncentrációjánál a limfocitákon az IL-2-receptor jelentős szuppressziója következik be, míg a többi értékek a biológiai szélső értékeken belül maradnak. Az 1. táblázat a KÍ-67/CD8 és a Ki-67/CD4-gyel kapcsolatos adatokat is tartalmaz. A Ki-67 egy, a proliferációt jelző molekula, ami a mitózissejtekben jelenik meg. A Ki-67 fontos paraméter a stimulált sejtek értékelésében és a tumordiagnosztikában. Az ismertetett eredmények szerint a Ki-67+ szuppresszor (CD-8) sejtekben a sejtproliferáció kismértékű gátlása látható a két legmagasabb lizozim dimerdózis esetén. A helper (CD-4) limfocitában a legmagasabb dózisnál úgy tűnik, hogy nagymértékű növekedés mutatkozik a pozitív sejtek százalékában. Alacsonyabb dózisoknál a Ki-67/CD4-et expresszáló sejtek százalékos aránya valamivel magasabb a kontrollértékeknél.
A TNF jelentős szupresszióját az 1. ábra mutatja.
A fent felsorolt és az immunválaszban betöltött lehetséges fontos szerepük miatt kiválasztott immunológiai paramétereket a vizsgált anyagnak szuboptimálisan ConA-val stimulált humán perifériás limfocitákra kifejtett hatásának mérésén alapuló módszerrel vizsgáltuk, amely módszer megalapozott, érzékeny és sok különböző paraméter értékelését teszi lehetővé. A lizozim dimerek néhány koncentrációjánál a vizsgálati eredmények jelentősen különböztek a csak ConA-val stimulált limfociták vizsgálati értékeitől, míg például a TNF és INF-α esetén a megfigyelt hatások minden vizsgált hígítás esetén egyértelműen a szélső értékek között vannak.
2. példa
Laboratóriumi vizsgálatokat végeztünk a lizozim dimemek a tej és vérsejtek fagocitaaktivitására való hatásának meghatározására in vitro. Korábban megállapítást nyert a standard in vitro vizsgálatban, hogy a lizozim dimer nem gátolja a tehenek gyulladt tőgyéből izolált mikroorganizmusok proliferációját. Klinikai felhasználásként a tőgybe és egyidejűleg intravénásán adott lizozim dimer hatékonyan megszünteti a tehenek tőgyének gyulladását. Ismert volt, hogy a tehéntőgyben a fő antibakteriális mechanizmus a fagocitózis. Ennek megfelelően mind egészséges, mind fertőzött teheneket használtunk az in vitro teszteknél a lizozim dimemek a fagocitózisra kifejtett hatásának meghatározása céljából.
Összehasonlítás céljából a vizsgálatokat a vizsgált anyag azonos koncentrációival végeztük, és azonos volt az inkubációs idő az egészséges és a fertőzött tehenekből származó sejtek vagy akár ugyanazon tehéntőgy gyulladásos és egészséges részéből izolált sejtek vizsgálata esetén az individuális válaszkülönbségek elkerülése végett.
Az elvégzett vizsgálatokban mind a lizozim tisztított dimer formáját, mind a dimer és trimerek, illetve magasabb számú oligomerek kis frakcióinak keverékét adtuk egészséges, illetve fertőzött tehenek véréhez vagy tejéhez 25-0,25 pg/ml koncentrációban, és a keveréket 37 °C-on 0,5-24 óráig inkubáltuk. A fagocitáló sejtek százalékos arányát (fagocitózisindex Wisniewski és munkatársai módszere szerint) és az NBTpozitív granulociták százalékos arányát (Park szerint) minden mintában meghatároztuk.
A lizozim dimer fokozza a leukociták fagocitaaktivitását az in vitro tesztekben. A hatás függ a dózistól és az inkubációs időtől. A lizozim dimer nagyobb koncentrációja szükséges a tejleukociták aktiválásához, mint a vérleukocitákéhoz. A dimer különösen magas koncentrációban kismértékben csökkenti a fagocitaaktivitást in vitro. Szelektált eredmények - többnyire azt mutatják, hogy amíg a posztpolimerizációs reakciókeverék nem tartalmazza a dimer citotoxikus monomer formáját, hasonló eredményeket kapunk az alaposan tisztított és a kevésbé tiszta dimer lizozim esetén - láthatók a 2. és 3. táblázatban, ahol a „lizozim dimer+” elnevezés olyan készítményre vonatkozik, amely lizozim trimerek és magasabb oligomerek kis frakcióját tartalmazzák, a korábbi részletezésben említettek szerint.
2. táblázat
A lizozim dimer hatása egészséges tehenek tejleukocitáinak fagocitaaktivitására (a dimer koncentrációja 20 pg/ml, az inkubálás ideje 3 óra)
| Indikátor | Egészséges tehénből származó tejleukociták | ||
| Készítmény | Tehén száma: 477 | Tehén száma: 463 | |
| fagocitózis (%) | kontroll-lizozim | 77,8 | 80,0 |
| dimer-lizozim | 100 | 100 | |
| dimer | 92,6 | 100 | |
| Fagocitózis- index | kontroll-lizozim | 2,7 | 4,1 |
| dimer+lizozim | 4,4 | 6,4 | |
| dimer | 4,8 | 8,4 | |
| % csökkenés NBT | kontroll-lizozim | 3,4 | 2,5 |
| dimer+lizozim | 5,7 | 3,8 | |
| dimer | 3,4 | 6,8 |
3. táblázat
Lizozim dimer hatása fertőzött tehenek tejleukocitáinak fagocitaaktivitására (dimer koncentrációja 20 pg/ml, inkubációs idő 30 perc)
| Indikátor | Fertőzött tehén (száma: 490) Tejleukociták | ||
| Készítmény | Fertőzött rész* | Egészséges rész | |
| fagocitózis <%) | kontroll-lizozim | 98 | 58 |
| dimer+lizozim | 98 | 90 | |
| dimer | 100 | 100 | |
| Fagocitózis- index | kontroll-lizozim | 10,9 | 2,7 |
| dimer+lizozim | 8,7 | 14,9 | |
| dimer | 10,9 | 8,9 | |
| % csökkenés NBT | kontroll-lizozim | 4,2 | 4,2 |
| dimer+lizozim | 5,9 | 8,4 | |
| dimer | 5,5 | 7,0 |
* = gyulladásos állapot, a tehén kezeletlen
HU 218 151 Β
Egyértelmű, hogy a lizozim dimer tisztaságának foka nem gyakorol jelentős hatást a tej leukociták vizsgált fagocitaaktivitására. Később kitűnhet, hogy az effektorsejtek granulociták lehetnek.
A további példákban in vivő vizsgálatok eredményeit ismertetjük. A klinikai vizsgálatokhoz 10 ml PBSoldatban 2 mg lizozim dimer készítményt használtunk. Ezt a készítményt KLP-602-nek nevezik.
5. példa
Intravénás adagolás esetén a KLP-602 stimulálta a vérgranulociták fagocitaaktivitását egészséges és beteg borjakban és egészséges csikókban csakúgy, mint tejelő tehenekben tőgybe való beadás után. A hatás a neutrofílek megnövekedett számában és Staphilococcus-abszorbeáló képességük fokozódásában és NBTcsökkenésben nyilvánult meg. Ez a tünetegyüttes elsősorban az első 12-24 órában, a készítmény injektálását követően jelentkezik. A KLP-602 fagocitaaktivitásra kifejtett hatása a tőgyben függött a szer dózisától és formájától és az állat individuális válaszkészségétől.
A lizozim dimert szarvasmarha, sertés, ló és kutya fertőzéses megbetegedéseinek kezelésében használtuk. Különböző dózisokban és különböző időintervallumokban alkalmaztuk a készítményt intravénásán, intramuszkulárisan, szubkután, tőgybe és méhbe. A gyógykezelést 346 tehénnél, 274 borjúnál, 110 hím és nőstény sertésnél, 294 malacnál, 709 szopós malacnál, 35 csikónál és 107 kutyánál alkalmaztuk. Alternatív kezelést használtunk kontrollként. A vizsgált állatok természetének köszönhetően egyet sem engedtünk el gyógykezelés nélkül morális okokból. Mindazonáltal a következtetések levonhatók a kezelt megbetegedések állatorvosi szakirodalomból ismert klinikai képével összehasonlítva.
4. példa
A borjakon végzett vizsgálatok során az IFN és TNF vérszintjét határoztuk meg egy-egy csoport egészséges és fertőzött állatban; utóbbiakat a fertőzést követő 12 órában nem kezeltük, majd antibiotikumokat adtunk, és nagy tisztaságú lizozim dimerrel kezeltük őket.
A lizozim dimerrel kezelt csoportban egy vagy két KLP-602 injekció a gasztroenteritiszben gyomor-bél hurutmegbetegedett borjak több mint 90%-át meggyógyította, és az akut bronchopneumoniás esetek több mint 85%-át. Igen jellemző volt az olyan tünetek, mint láz és hasmenés azonnali megszűnése. Ez a gyógykezelés feleslegessé tette a folyadékpótlást az állatoknál. A tőgyógyulási idő és arány meghaladta az antibiotikummal kezelt csoportét.
5. példa
A KLP-602 volt a leghatékonyabb a sertésbetegségek kezelésében. Az állatok 100%-a vagy közel 100%-a gyógyult meg az alábbi betegségekből: post-partum, aga10 lactia (MMA-szindróma, szülés utáni tejtermeléshiány), dizentéria (vérhas), pyometritis (gennyes méhgyulladás), influenza és colibacillosis. A gyógyszer alkalmazása oedema és bronchopneumonia eseteiben valamivel kevésbe prominens, de még így is szignifikánsan jobb eredmé15 nyékét mutatott, mint az alternatív terápiákkal nyert eredmények. Megfigyelhető volt a hasmenés (általában az első 24 órában) és a láz azonnali csökkenése, valamint a tejtermelés újra megjelenése, ami különösen fontos a post partum elő- és méhgyulladások esetén (megmenti a malacok életét). A KLP-602 terápia hatékonyságát az alternatív kezelésekkel összehasonlítva mutatja a 4. táblázat alább.
6. példa
KLP-602-kezelés hatására enteritisben szenvedő csikók 100%-a és bronchopneumoniában megbetegedett csikók 83,3%-a gyógyult gyorsabban az ismert készítményekkel kezelt kontrollcsoportnál.
7. példa
A KLP-602-t néhány kutyamegbetegedés kezelésében vizsgáltuk, mint például folliculitis (100%-os hatékonyság), a felső és alsó légzőtraktus infekciója és hasmenésben megnyilvánuló gyomor-bél rendszeri fertózé35 sek. Ebben a csoportban leggyakoribb a parvovirózis volt, ami tudvalevőleg gyakorlatilag gyógyíthatatlan betegség. Ezzel szemben körülbelül 75%-os gyógyulási arány volt észlelhető a parvovirózisos esetekben.
A természetes úton megkapott, fentiekben ismertetett megbetegedésekben szenvedő állatokkal végzett vizsgálatokban néhány fontos megfigyelést tettünk.
1. A terápia hatékonynak és igen egyszerűnek bizonyult multifaktoriális etiológiájú és patogenezisű betegségek kezelésében (az ilyen betegségek gyakoriak az ál45 latpopulációkban, és nehezen kezelhetők különösen az állattenyésztő farmokon, ahol a betegségek epidémiás terjedése könnyen fordul elő). Ezek az észlelések igazolják a lizozim dimer természetes védekezőmechanizmusokat befolyásoló hatását.
4. táblázat
| K.LP- 602-vcl kezelt állatok | Nem gyógyultak | Más készítménnyel kezelt állatok | |||||||
| Esetszám | Időtartam (napok) | Gyógyultak száma | % | száma | % | Esetszám | A használt készítmény | Időtartam | Gyógyulási arány (%) |
| I. Malacok colibacillosisa | |||||||||
| 434 | 4-2 | 421 | 97 | 13 | 3 | 400* | antibiotikumok, glukóz, B-vitamin | 3-5 | 75-80* |
HU 218 151 Β
4. táblázat (folytatás)
| KLP-602-vel kezelt állatok | Nem gyógyultak | Más készítménnyel kezelt állatok | |||||||
| Esetszám | Időtartam (napok) | Gyógyultak száma | % | száma | % | Esetszám | A használt készítmény | Időtartam | Gyógyulási arány (%) |
| II. Sertésdysenteria | |||||||||
| 29 | 1-2 | 29 | 100 | - | - | 219 | antibiotikumok, STOLMED, RIDOWET | 5-9 | 75 |
| III. Szülés utáni agalactia | |||||||||
| 30 | 1-2 | 30 | 100 | - | - | 40* | antibiotikumok, kortizon, szulfonamid | 3-5 | 80* |
| IV. Malacinfluenza | |||||||||
| 38 | 1-5 | 38 | 100 | - | - | 200* | antibiotikumok (latens formulák) | 3-9 | 60-80* |
| V. Oedemabetegség | |||||||||
| 82 | 1-3 | 78 | 95 | 4 | 5 | 120* | antibiotikumok, penicillin, tetraciklin tetracycline B-vitamin folyadék+glukóz | 3-6 | 60* |
* hozzávetőleges adat
2. A terápia hatékonynak bizonyult olyan betegségekben, amelyeknek természetes lefolyásához tartozik az endotoxin sokk fellépése, vagy egyéb működészavarok, mint a magas és hosszan tartó láz, ami gyógyulás 30 után is hosszú ideig visszaveti az állat állapotát, és így különösen hátrányos a sport-, illetve versenyló-, illetve csikótenyészeteknél, valamint az élelmiszeripart kiszolgáló tenyészeteknél, amely esetekben a termelési költségek képezik a kiadás kritikus részét. A gyors gyógyulás 35 lehetővé teszi ezen betegségek kezelésére fordított kiadások szignifikáns csökkentését.
3. Az in vivő megfigyelt eredmények megerősítették a TNF-szint csökkenését különböző lizozim dimerrel kezelt természetes fertőző megbetegedésekben, ami 40 alátámasztja a jelen találmányt.
8. példa
A lizozim dimer különböző mikroorganizmusokra ható antibiotikumok aktivitására való hatását vizsgáltuk 45 abból a célból, hogy baktériumokat válasszunk ki további vizsgálatokra, amelyekben az antibiotikumok kiválasztott mikroorganizmusok elleni leghatékonyabb dózisait határozzuk meg, és a lizozim dimer azon koncentrációit, amelyeken belül a kívánt hatás észlelhető. A kísérletek- 50 ben két tétel liofilizált tisztított lizozim dimert használtunk, az egyiket 1991-ben, a másikat 1992-ben állították elő. A kísérletekben a lengyel piacról származó antibiotikumokat használtuk, amelyeket a Polfa - egy lengyel gyógyszergyár - szállított, mint például penicillin, neo- 55 mycin, erythromycin, cephalosporin (SEFRIL).
A vizsgálandó antibiotikumokat egy pufferolt NaCloldatban (PBS-Biomed) vagy marhaszérumban szuszpendáltuk. Ezután lizozin dimert adtunk a szérumhoz oly módon, hogy a vizsgálati mintákban a dimer kon- 60 centrációja mindig 5 pg/ml volt. A vizsgálandó antibiotikumok koncentrációja különböző volt minden vizsgálatban, a használt mikroorganizmusok különböző érzékenységének megfelelően.
Az önmagában alkalmazott antibiotikum, illetve a lizozim dimerrel kombinált forma hatékonyságát PBSben vagy marhaszérum-szuszpenzióban vizsgáltuk in vitro, beteg állatokból származó Escherichia coli, Salmonella enteritidis, Staphylococcus aureus és Streptococcus uberis esetén. A kísérletekben Sarcina lutea 9341 ATCC és Staphylococcus aureus 209P laboratóriumi törzseket is felhasználtunk.
A vizsgálatok bevezető jellege folytán minden antibiotikum 1, 2 vagy 3 különböző baktérium elleni hatását teszteltük.
1. A lemezek előállítása
A vizsgálandó baktériumtörzs 18 órás húsleveskultúrájának 0,05 ml-es részét adtuk egy 14 ml-es dúsított agar (Biomed) mintához. A keveréket összekevertük, és egy 10 mm átmérőjű lemezre öntöttük. Az agar hűlése és megszilárdulása után steril csöveket helyeztünk rá, és a csöveket feltöltöttük a vizsgálandó antibiotikumoldatokkal.
2. Az antibiotikumoldatok előállítása
A vizsgálandó antibiotikumból 10 mg-os mintát először PBS-ben oldottunk, majd ezen oldat szükséges mennyiségét adtuk PBS vagy marhaszérum előre meghatározott mennyiségéhez úgy, hogy a kapott antibiotikumkoncentráció a lehető legközelebb legyen a MIChez (minimális inhibíciós koncentráció). Mindig 3 különböző koncentrációjú oldatot állítottuk elő.
3. A lizozim dimer oldat előállítása
Először 10 mg liofilizált lizozim dimert oldottunk 10 ml PBS-ben. További hígításokat állítottunk elő
HU 218 151 Β akár PBS-sel, akár marhaszérummal, és hozzáadtuk a fent ismertetett, korábban előállított antibiotikumoldathoz. A következő kombinációkat vizsgáltuk:
- antibiotikum/PBS,
- antibiotikum/PBS+lizozim dimer,
- antibiotikum/szérum,
- antibiotikum/szérum+lizozim dimer.
Az antibiotikum koncentrációja mindegyik csőben azonos volt, a lizozim dimer koncentrációja 5 pg/ml. Miután a csöveket megtöltöttük az oldatokkal, a lemezeket 2 órán keresztül szobahőmérsékleten tartottuk, majd a kultúrákat 37 °C-on inkubáltuk.
4. Az eredmények leolvasása és az aktivitás értékelése
A lemezeket a melegítőből 18 órai inkubálás után távolítottuk el, és a csövek körül a baktériumnövekedés-mentes zóna (a kolóniák hiánya) átmérőjét mértük.
Nem találtunk különbséget a csövek körüli baktériumnövekedés-mentes zóna méretében, ha azokat 5 mg/ml koncentrációjú lizozim dimert tartalmazó, illetve nem tartalmazó antibiotikum-PBS szuszpenzióval töltöttük meg. A növekedésmentes zóna mérete azonban csökkent az antibiotikum-marhaszérum szuszpenzióval töltött csövek körül, de nőtt azok körül, amelyeket antibiotikum + lizozim dimer-marhaszérum szuszpenzióval töltöttünk fel. A zónák nagyobbak voltak, mint azok, amelyeket a PBS szuszpenziókkal feltöltött csövek körül láttunk, és nagyobbak, mint amelyeket a lizozim dimermentes, csak antibiotikum+szérum szuszpenziókkal feltöltött csövek körül.
Ez a jelenség a penicillinnel végzett kísérleteknél történt, amelyet Sarcina lutea ellen használtunk. Az ampicillin szinergizmust mutatott a lizozim dimerrel kombinálva az Escherichia coli, Salmonella enteritidis és Staphylococcus epidermidis in vitro növekedésgátlásában. Kiderült, hogy az erytrhomycin Staphylococcus aureus 209P és Streptococcus uberis elleni hatása erősödik lizozim dimer jelenlétében, csakúgy, mint a SEFRIL-é Staphylococcus aureus 209P elleni hatása. Az Escherichia coli és a Salmonella enteritidis rezisztensek voltak erre az antibiotikumra.
A vizsgált antibiotikumok antibakteriális hatásának erősödését csak marhaszérum mint oldószer használata esetén észleltük. Általában a hatáserősség-növekedés elérte az 50%-ot, de néhány esetben a lizozim dimer jelenléte az antibiotikumaktivitás 100%-os növekedését eredményezte.
Összefoglalás
A lizozim dimer (tartósítószer nélkül) 5 pg/ml koncentrációban szinergizmust mutat in vitro egyes MICban (minimális inhibíciós koncentrációban) alkalmazott antibiotikumokkal marhaszérum jelenlétében a baktériumnövekedés gátlására nézve. A mostanáig nyert eredmények világossá teszik, hogy további vizsgálatok szükségesek.
9. példa
Szinergizmus ATZ-vel AIDS-es betegek kezelésében
Ito és munkatársai ismertették újabban, hogy a TNFα antagonizálni képes az AZT anti-HIV-aktivitását (Ito, M, és munkatársai: A tumomekrózis-faktor antagonizálja az azidotimidin humán immunodeficiencia-vírus (HÍV) replikációjára kifejtett gátló hatását (Biochem. Biophys. Rés. Commun. 1990, 166.; 1095-1101).
Az AIDS-es betegek előrehaladott stádiumban számos járulékos fertőzésben szenvednek. Egyes fertőző ágensek indukálhatják a TNF-α, IL-6 és más citokinek szintjének emelkedését, ami lehet immunoszuppresszív hatású, vagy elősegítheti a HIV-replikációt.
Ennek megfelelően a csak AZT-vel történő kezelés nem elég hatékony. Az AZT anti-HIV-aktivitásának növelése céljából ajánlott kombinálni az AZT-kezelést lizozim dimer adagolásával, a TNF-szintézis gátlása végett, amely faktor antagonizálja az AZT anti-HIV-aktivitását.
Claims (10)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Eljárás hatóanyagként lizozim dimert tartalmazó gyógyászati készítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy a hatóanyagot gyógyászatilag elfogadható hordozóval és adott esetben alkalmazott egyéb segédanyaggal összekeverve állatok és ember természetes védekezési mechanizmusának erősítésére alkalmas gyógyászati készítménnyé alakítjuk.
- 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy profilaktikus vagy terápiás célú gyógyászati készítményt állítunk elő.
- 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az alábbi immunmodulációs mechanizmusok legalább egyikének aktiválására alkalmas gyógyászati készítményt állítunk elő: tumomekrózis-faktor (TNF) felszabadulás gátlása, TNF-szint csökkentése, fagocitózis elősegítése, interferonkibocsátás erősítése, interleukin-6-kibocsátás erősítése.
- 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 13,75 pg/ml koncentrációnál magasabb TNF-szint kezelésére alkalmas gyógyászati készítményt állítunk elő.
- 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a lizozim dimer egyszeri vagy többszöri, (0,3 pg-1 mg)/106 leukocita dózisban való adagolására alkalmas gyógyászati készítményt állíiunk elő.
- 6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az alábbi betegségek legalább egyikének megelőzésére vagy kezelésére alkalmas gyógyászati készítményt állítunk elő: szepszis, szeptikus sokk, cachexia, AIDS- és AIDS-szel kapcsolatos fertőzések.
- 7. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a lizozim dimert antibiotikummal és/vagy AZT-val kombinációban tartalmazó gyógyászati készítményt állítunk elő.
- 8. Az 1-7. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan, injektálható oldat formájú gyógyászati készítményt állítunk elő, amely a lizo10HU218 151 Β zim dimert 0,01-10 mg/ml mennyiségben tartalmazza apirogén steril készítményként, amely legalább egy fiziológiailag elfogadható oldószert és/vagy legalább egy gyógyászatilag elfogadható konzerválószert tartalmaz.
- 9. A 8. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemez- 5 ve, hogy a lizozim dimer egyszeri vagy többszöri, 0,02 mg/testtömeg dózisban való adagolására alkalmas gyógyászati készítményt alakítunk ki.
- 10. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a gyógyászati készítményt a lizozim dimert hatékony dózisban tartalmazó gél vagy kenőcs formájában állítjuk elő, vagy antiszeptikus fedőanyagot vagy tampont impregnálunk a lizozim dimer hatásos dózisával.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL92295273A PL173978B1 (pl) | 1992-07-13 | 1992-07-13 | Sposób oddziaływania na wydzielanie cytokin w hodowli limfocytów krwi obwodowej |
| PCT/EP1993/001841 WO1994001127A1 (en) | 1992-07-13 | 1993-07-13 | Lysozyme dimer and compositions containing the same |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU9500098D0 HU9500098D0 (en) | 1995-03-28 |
| HUT70973A HUT70973A (en) | 1995-11-28 |
| HU218151B true HU218151B (hu) | 2000-06-28 |
Family
ID=20058087
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9500098A HU218151B (hu) | 1992-07-13 | 1993-07-13 | Eljárás lizozim dimert tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására |
Country Status (31)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6132715A (hu) |
| EP (1) | EP0651654B1 (hu) |
| JP (1) | JPH07508744A (hu) |
| KR (1) | KR100289841B1 (hu) |
| CN (1) | CN1057937C (hu) |
| AT (1) | ATE252392T1 (hu) |
| AU (1) | AU677786B2 (hu) |
| BG (1) | BG63331B1 (hu) |
| BR (1) | BR9306722A (hu) |
| CA (1) | CA2140140A1 (hu) |
| CZ (1) | CZ286725B6 (hu) |
| DE (2) | DE69333258T2 (hu) |
| DK (1) | DK0651654T3 (hu) |
| ES (1) | ES2074037T3 (hu) |
| FI (1) | FI950144A (hu) |
| GE (1) | GEP20012466B (hu) |
| GR (1) | GR950300039T1 (hu) |
| HU (1) | HU218151B (hu) |
| MX (1) | MX9304197A (hu) |
| NZ (2) | NZ254135A (hu) |
| OA (1) | OA10125A (hu) |
| PL (1) | PL173978B1 (hu) |
| PT (1) | PT651654E (hu) |
| RO (1) | RO112580B1 (hu) |
| RU (1) | RU2145875C1 (hu) |
| SG (1) | SG52727A1 (hu) |
| SK (1) | SK282377B6 (hu) |
| TW (1) | TW259710B (hu) |
| UA (1) | UA49789C2 (hu) |
| WO (1) | WO1994001127A1 (hu) |
| ZA (1) | ZA935046B (hu) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6183742B1 (en) | 1992-07-13 | 2001-02-06 | Nika Health Products, Limited | Applications of lysozyme dimer |
| DZ1964A1 (fr) * | 1995-01-13 | 2002-10-15 | Nika Health Products Ltd | Nouvelle applications d'un dimère de lysozyme. |
| WO1996038115A1 (en) * | 1995-05-30 | 1996-12-05 | Lectin Biopharma, Inc. | Method of using lectins for agglutination and collection of menstrual flow |
| US6123937A (en) * | 1997-03-14 | 2000-09-26 | Nika Health Products, Limited | Applications of lysozyme dimer |
| ITMI981148A1 (it) | 1998-05-22 | 1999-11-22 | Therapicon Srl | Utilizzo di lisozima c modificato per preparare composizioni medicinali per il trattamento di alcune gravi malattie |
| EP1174147A1 (en) * | 2000-06-27 | 2002-01-23 | Nika Health Products Limited | Reversal of antibiotic resistance with lysozyme dimer |
| US20050244402A1 (en) * | 2004-04-30 | 2005-11-03 | Villanueva Julie M | Absorption of pain-causing agents |
| RU2472467C2 (ru) * | 2011-04-13 | 2013-01-20 | Государственное научное учреждение Краснодарский научно-исследовательский ветеринарный институт (ГНУ КНИВИ) | Способ профилактики и лечения гастроэнтеритов, обусловленных бактериозами, у телят |
| RU2546911C2 (ru) * | 2013-04-11 | 2015-04-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Донской государственный аграрный университет" | Способ хранения свинины в охлажденном состоянии |
| CN105106626A (zh) * | 2015-09-30 | 2015-12-02 | 成都倍加特生物科技有限公司 | 一种治疗月经期感染的汤剂药物及其制备方法 |
Family Cites Families (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR4020M (hu) * | 1965-01-29 | 1966-03-21 | ||
| FR2215201A1 (en) * | 1973-01-24 | 1974-08-23 | Theranol Lab | Broad-spectrum antibiotic compsns. - contg. antibiotic resistant lactic bacilli and enzyme diffusing-agent |
| JPS5533409A (en) * | 1978-08-30 | 1980-03-08 | Eisai Co Ltd | Carcinostatic agent |
| JPS5533408A (en) * | 1978-08-30 | 1980-03-08 | Eisai Co Ltd | Immunity-increasing agent |
| JPS5543040A (en) * | 1978-09-25 | 1980-03-26 | Eisai Co Ltd | Immunity raising agent |
| US4221794A (en) * | 1979-06-21 | 1980-09-09 | Newport Pharmaceuticals International, Inc. | Method of imparting immunomodulating and antiviral activity |
| US4457919A (en) * | 1980-03-14 | 1984-07-03 | Newport Pharmaceutical International, Inc. | Method of imparting immunomodulating, antiviral or antitumor activity |
| US4510144A (en) * | 1981-08-26 | 1985-04-09 | Newport Pharmaceuticals International | Methods of imparting immunomodulating activity with dihydrothiazolo purine derivatives |
| US4739046A (en) * | 1985-08-19 | 1988-04-19 | Luzio Nicholas R Di | Soluble phosphorylated glucan |
| US4744984A (en) * | 1985-10-08 | 1988-05-17 | Vetrepharm Research, Inc. | Antiviral immunotherapeutic agent and preparation thereof |
| EP0238851B1 (en) * | 1986-02-19 | 1992-12-09 | Imreg, Inc. | A method and means of assaying an immune system |
| JPH0649659B2 (ja) * | 1988-05-26 | 1994-06-29 | ニカヘルス プロダクツ，リミテッド | 抗ウイルス及び抗菌組成物並びに使用方法 |
| DE3817955A1 (de) * | 1988-05-27 | 1989-11-30 | Hoechst Ag | Tnf-inhibitor enthaltendes arzneimittel |
| WO1989011924A1 (en) * | 1988-05-31 | 1989-12-14 | Napp Systems (Usa), Inc. | Apparatus and process for processing printing plates |
| AU6355190A (en) * | 1989-06-13 | 1991-01-17 | Smithkline Beecham Corporation | Inhibition of interleukin-1 and tumor necrosis factor production by monocytes and/or macrophages |
| US5314816A (en) * | 1990-01-08 | 1994-05-24 | Nika Health Products Ltd. | Method of preparing lysozyme dimers |
| SG49871A1 (en) * | 1990-01-08 | 1998-06-15 | Nika Health Products Ltd | Method of preparing lysozyme dimers |
| AU8292091A (en) * | 1990-08-03 | 1992-03-02 | Smithkline Beecham Corporation | Tnf inhibitors |
-
1992
- 1992-07-13 PL PL92295273A patent/PL173978B1/pl not_active IP Right Cessation
-
1993
- 1993-07-13 HU HU9500098A patent/HU218151B/hu not_active IP Right Cessation
- 1993-07-13 EP EP93915903A patent/EP0651654B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-07-13 CZ CZ199585A patent/CZ286725B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1993-07-13 SK SK40-95A patent/SK282377B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1993-07-13 DE DE69333258T patent/DE69333258T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1993-07-13 GE GEAP19932466A patent/GEP20012466B/en unknown
- 1993-07-13 UA UA95018021A patent/UA49789C2/uk unknown
- 1993-07-13 CA CA002140140A patent/CA2140140A1/en not_active Abandoned
- 1993-07-13 NZ NZ254135A patent/NZ254135A/en not_active IP Right Cessation
- 1993-07-13 WO PCT/EP1993/001841 patent/WO1994001127A1/en active IP Right Grant
- 1993-07-13 DE DE0651654T patent/DE651654T1/de active Pending
- 1993-07-13 MX MX9304197A patent/MX9304197A/es not_active IP Right Cessation
- 1993-07-13 KR KR1019940704649A patent/KR100289841B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1993-07-13 RU RU95105517A patent/RU2145875C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1993-07-13 SG SG1996008336A patent/SG52727A1/en unknown
- 1993-07-13 BR BR9306722A patent/BR9306722A/pt not_active Application Discontinuation
- 1993-07-13 CN CN93116771A patent/CN1057937C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1993-07-13 DK DK93915903T patent/DK0651654T3/da active
- 1993-07-13 PT PT93915903T patent/PT651654E/pt unknown
- 1993-07-13 RO RO95-00041A patent/RO112580B1/ro unknown
- 1993-07-13 AU AU45686/93A patent/AU677786B2/en not_active Ceased
- 1993-07-13 JP JP6502985A patent/JPH07508744A/ja active Pending
- 1993-07-13 AT AT93915903T patent/ATE252392T1/de not_active IP Right Cessation
- 1993-07-13 ES ES93915903T patent/ES2074037T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1993-07-13 ZA ZA935046A patent/ZA935046B/xx unknown
- 1993-08-03 TW TW082106180A patent/TW259710B/zh active
-
1994
- 1994-12-22 BG BG99287A patent/BG63331B1/bg unknown
-
1995
- 1995-01-12 FI FI950144A patent/FI950144A/fi unknown
- 1995-01-13 OA OA60604A patent/OA10125A/en unknown
- 1995-06-07 US US08/476,561 patent/US6132715A/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-07-31 GR GR950300039T patent/GR950300039T1/el unknown
-
1996
- 1996-09-13 NZ NZ299377A patent/NZ299377A/en not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0380484B1 (en) | Use of a lysozyme dimer and/or a ribonuclease dimer for th emanufacture of an antiviral or antibiotic drug | |
| RU2305547C2 (ru) | Применение апопротеинов сыворотки молока в профилактике или лечении микробной или вирусной инфекции | |
| US6132715A (en) | Method of inhibiting biosynthesis of tumor necrosis factor | |
| EP0405315B1 (en) | Use of a phagocyte-activating agent : LPS or IL-2 for the manufacture of a medicament for treating staphylococcus aureus infection in cows | |
| US5342612A (en) | Compositions for the treatment of mammalian diseases | |
| HUT67071A (en) | Method of treating or preventing mastitis of animals with involuting hammary glands by administering recombinant citokines | |
| PL176407B1 (pl) | Kompozycja farmaceutyczna zawierająca dimer lizozymu | |
| RU2722161C1 (ru) | Способ профилактики желудочно-кишечных болезней молодняка крупного рогатого скота | |
| KR930004599B1 (ko) | 항바이러스성 또는 항균성 조성물 | |
| MXPA97005246A (en) | New applications of dimero de lisoz |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| DGB9 | Succession in title of applicant |
Owner name: NIKA HEALTH PRODUCTS LTD., LI |
|
| GB9A | Succession in title |
Owner name: NIKA HEALTH PRODUCTS SPOLKA Z.O.O., PL Free format text: FORMER OWNER(S): NIKA HEALTH PRODUCTS LTD., LI; ROSENICH, PAUL, LI; NIKA HEALTH PRODUCTS LTD., LI |
|
| MM4A | Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees |