BG63331B1 - Лизозимен димер и състави, които го съдържат - Google Patents
Лизозимен димер и състави, които го съдържат Download PDFInfo
- Publication number
- BG63331B1 BG63331B1 BG99287A BG9928794A BG63331B1 BG 63331 B1 BG63331 B1 BG 63331B1 BG 99287 A BG99287 A BG 99287A BG 9928794 A BG9928794 A BG 9928794A BG 63331 B1 BG63331 B1 BG 63331B1
- Authority
- BG
- Bulgaria
- Prior art keywords
- lysozyme
- tnf
- lysozyme dimer
- dimer
- dimerized
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 14
- 239000000539 dimer Substances 0.000 title description 98
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 claims abstract description 107
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 claims abstract description 107
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 claims abstract description 107
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 claims abstract description 107
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 claims abstract description 107
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 claims abstract description 107
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 25
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 24
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 24
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 claims abstract description 20
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 19
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 16
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 claims abstract description 15
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 claims abstract description 13
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 6
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract description 5
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- 239000002674 ointment Substances 0.000 claims abstract description 3
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 claims description 55
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 claims description 55
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 30
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 claims description 27
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims description 17
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims description 17
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 15
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 claims description 11
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims description 9
- 230000037125 natural defense Effects 0.000 claims description 9
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 claims description 8
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 claims description 8
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 claims description 8
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 claims description 8
- HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N zidovudine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](N=[N+]=[N-])C1 HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N 0.000 claims description 7
- 229960002555 zidovudine Drugs 0.000 claims description 7
- ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N Erythromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N 0.000 claims description 6
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 claims description 6
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 claims description 6
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 claims description 6
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 claims description 6
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 claims description 4
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 claims description 4
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 claims description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims description 3
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 claims description 3
- 229960003276 erythromycin Drugs 0.000 claims description 3
- 206010006895 Cachexia Diseases 0.000 claims description 2
- 229930186147 Cephalosporin Natural products 0.000 claims description 2
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 claims description 2
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 claims description 2
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 claims description 2
- 229940124587 cephalosporin Drugs 0.000 claims description 2
- 150000001780 cephalosporins Chemical class 0.000 claims description 2
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 claims description 2
- 229940102223 injectable solution Drugs 0.000 claims 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 11
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 abstract description 5
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 abstract description 5
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 abstract description 4
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 abstract description 4
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000002956 necrotizing effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 abstract 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 abstract 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 39
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 30
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 23
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 21
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 19
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 19
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 18
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 16
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 16
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 12
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 10
- 108010005627 KLP602 Proteins 0.000 description 9
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 9
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 8
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 8
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 8
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 8
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 8
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 8
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 8
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 8
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 7
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 7
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 7
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 7
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 7
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 7
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 7
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 7
- 102000010789 Interleukin-2 Receptors Human genes 0.000 description 6
- 108010038453 Interleukin-2 Receptors Proteins 0.000 description 6
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 6
- 230000004044 response Effects 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 5
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 5
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 5
- 231100000650 Toxic shock syndrome Toxicity 0.000 description 5
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 244000309466 calf Species 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 210000005104 human peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 5
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 5
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 5
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 5
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 5
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 5
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 4
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 4
- 206010044248 Toxic shock syndrome Diseases 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 4
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- 231100000699 Bacterial toxin Toxicity 0.000 description 3
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 3
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 3
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 3
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 3
- 241001354013 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Enteritidis Species 0.000 description 3
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 3
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 3
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 3
- 230000036436 anti-hiv Effects 0.000 description 3
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 3
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 3
- 239000000688 bacterial toxin Substances 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 230000034994 death Effects 0.000 description 3
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 239000003532 endogenous pyrogen Substances 0.000 description 3
- 239000000147 enterotoxin Substances 0.000 description 3
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 description 3
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 3
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000005965 immune activity Effects 0.000 description 3
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 3
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 3
- 230000003076 paracrine Effects 0.000 description 3
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 3
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 3
- 230000001698 pyrogenic effect Effects 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 3
- 206010001513 AIDS related complex Diseases 0.000 description 2
- 208000031729 Bacteremia Diseases 0.000 description 2
- 201000004813 Bronchopneumonia Diseases 0.000 description 2
- 241000701931 Canine parvovirus Species 0.000 description 2
- 208000037487 Endotoxemia Diseases 0.000 description 2
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 2
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 2
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000193996 Streptococcus pyogenes Species 0.000 description 2
- 241000194054 Streptococcus uberis Species 0.000 description 2
- BMQYVXCPAOLZOK-UHFFFAOYSA-N Trihydroxypropylpterisin Natural products OCC(O)C(O)C1=CN=C2NC(N)=NC(=O)C2=N1 BMQYVXCPAOLZOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000037006 agalactosis Effects 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N arachidonic acid Chemical class CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 description 2
- 102000015736 beta 2-Microglobulin Human genes 0.000 description 2
- 108010081355 beta 2-Microglobulin Proteins 0.000 description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- RDLPVSKMFDYCOR-UEKVPHQBSA-N cephradine Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@@H]3N(C2=O)C(=C(CS3)C)C(O)=O)=CCC=CC1 RDLPVSKMFDYCOR-UEKVPHQBSA-N 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 2
- 208000001848 dysentery Diseases 0.000 description 2
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 239000002095 exotoxin Substances 0.000 description 2
- 231100000776 exotoxin Toxicity 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 208000021760 high fever Diseases 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 description 2
- 230000005906 menstruation Effects 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- BMQYVXCPAOLZOK-XINAWCOVSA-N neopterin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)C1=CN=C2NC(N)=NC(=O)C2=N1 BMQYVXCPAOLZOK-XINAWCOVSA-N 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000002510 pyrogen Substances 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 229940115922 streptococcus uberis Drugs 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 2
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 2
- 230000006433 tumor necrosis factor production Effects 0.000 description 2
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 101001023095 Anemonia sulcata Delta-actitoxin-Avd1a Proteins 0.000 description 1
- 206010003011 Appendicitis Diseases 0.000 description 1
- 101000641989 Araneus ventricosus Kunitz-type U1-aranetoxin-Av1a Proteins 0.000 description 1
- 206010053555 Arthritis bacterial Diseases 0.000 description 1
- 241000304886 Bacilli Species 0.000 description 1
- 101001028691 Carybdea rastonii Toxin CrTX-A Proteins 0.000 description 1
- 101000685083 Centruroides infamatus Beta-toxin Cii1 Proteins 0.000 description 1
- 101000685085 Centruroides noxius Toxin Cn1 Proteins 0.000 description 1
- 101001028688 Chironex fleckeri Toxin CfTX-1 Proteins 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- 241000761389 Copa Species 0.000 description 1
- 101000644407 Cyriopagopus schmidti U6-theraphotoxin-Hs1a Proteins 0.000 description 1
- 206010012455 Dermatitis exfoliative Diseases 0.000 description 1
- 206010014824 Endotoxic shock Diseases 0.000 description 1
- 206010015150 Erythema Diseases 0.000 description 1
- 208000010201 Exanthema Diseases 0.000 description 1
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 1
- 206010016936 Folliculitis Diseases 0.000 description 1
- 208000005577 Gastroenteritis Diseases 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- 208000031957 HIV carrier Diseases 0.000 description 1
- 241000714260 Human T-lymphotropic virus 1 Species 0.000 description 1
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 1
- 208000003623 Hypoalbuminemia Diseases 0.000 description 1
- 208000013038 Hypocalcemia Diseases 0.000 description 1
- 208000001953 Hypotension Diseases 0.000 description 1
- 208000007766 Kaposi sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 206010024774 Localised infection Diseases 0.000 description 1
- 206010024971 Lower respiratory tract infections Diseases 0.000 description 1
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 1
- 241000191938 Micrococcus luteus Species 0.000 description 1
- 102000006386 Myelin Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010083674 Myelin Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- BYPFEZZEUUWMEJ-UHFFFAOYSA-N Pentoxifylline Chemical compound O=C1N(CCCCC(=O)C)C(=O)N(C)C2=C1N(C)C=N2 BYPFEZZEUUWMEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000679608 Phaeosphaeria nodorum (strain SN15 / ATCC MYA-4574 / FGSC 10173) Cysteine rich necrotrophic effector Tox1 Proteins 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 208000035109 Pneumococcal Infections Diseases 0.000 description 1
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 1
- 206010062237 Renal impairment Diseases 0.000 description 1
- 208000013616 Respiratory Distress Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000018569 Respiratory Tract disease Diseases 0.000 description 1
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 1
- 241000192023 Sarcina Species 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 241000191963 Staphylococcus epidermidis Species 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 206010044250 Toxic shock syndrome staphylococcal Diseases 0.000 description 1
- 206010046306 Upper respiratory tract infection Diseases 0.000 description 1
- 206010046793 Uterine inflammation Diseases 0.000 description 1
- 241000607598 Vibrio Species 0.000 description 1
- 206010047400 Vibrio infections Diseases 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 201000009840 acute diarrhea Diseases 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 208000011341 adult acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 201000000028 adult respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 1
- 229940125715 antihistaminic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000739 antihistaminic agent Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 229940114079 arachidonic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000021342 arachidonic acid Nutrition 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000015294 blood coagulation disease Diseases 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000010411 cooking Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 208000010643 digestive system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 230000001729 effect on metabolism Effects 0.000 description 1
- 206010014665 endocarditis Diseases 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 208000001780 epistaxis Diseases 0.000 description 1
- 231100000321 erythema Toxicity 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000010429 evolutionary process Effects 0.000 description 1
- 201000005884 exanthem Diseases 0.000 description 1
- 238000013213 extrapolation Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 208000027096 gram-negative bacterial infections Diseases 0.000 description 1
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 230000000705 hypocalcaemia Effects 0.000 description 1
- 230000036543 hypotension Effects 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000007233 immunological mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000035987 intoxication Effects 0.000 description 1
- 231100000566 intoxication Toxicity 0.000 description 1
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000002132 lysosomal effect Effects 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 210000004216 mammary stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000011278 mitosis Effects 0.000 description 1
- 210000002864 mononuclear phagocyte Anatomy 0.000 description 1
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 208000027531 mycobacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 210000005012 myelin Anatomy 0.000 description 1
- 210000004457 myocytus nodalis Anatomy 0.000 description 1
- 230000035407 negative regulation of cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 210000004248 oligodendroglia Anatomy 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 230000004796 pathophysiological change Effects 0.000 description 1
- 230000007310 pathophysiology Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229960001476 pentoxifylline Drugs 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 206010034674 peritonitis Diseases 0.000 description 1
- 206010034754 petechiae Diseases 0.000 description 1
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002399 phagocytotic effect Effects 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 230000006461 physiological response Effects 0.000 description 1
- 239000012451 post-reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000011403 purification operation Methods 0.000 description 1
- 201000002765 pyometritis Diseases 0.000 description 1
- 206010037844 rash Diseases 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 208000020029 respiratory tract infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000011268 retreatment Methods 0.000 description 1
- 238000002435 rhinoplasty Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 231100000046 skin rash Toxicity 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 1
- 230000008023 solidification Effects 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 208000017756 staphylococcal toxic-shock syndrome Diseases 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- NVBFHJWHLNUMCV-UHFFFAOYSA-N sulfamide Chemical compound NS(N)(=O)=O NVBFHJWHLNUMCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008093 supporting effect Effects 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000003390 teratogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960004906 thiomersal Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 1
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 1
- 230000002227 vasoactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
- A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
- A61L15/22—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons containing macromolecular materials
- A61L15/32—Proteins, polypeptides; Degradation products or derivatives thereof, e.g. albumin, collagen, fibrin, gelatin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/47—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2), e.g. cellulases, lactases
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2462—Lysozyme (3.2.1.17)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Virology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретението се отнася до ново приложение на димеризирана форма на лизозим за производството на лекарствено средство за потискане биосинтезата на тумор некротизиращ фактор при животни и хора, по-специално за лечение и профилактика на заболявания, свързани със свръхвисоки нива на туморонекротизиращфактор. Изобретението се отнася още и до фармацевтични състави, прилагани по-специално под формата на инжекции, съдържащи димеризирана форма на лизозим в количество 0,01-10 mg/ml в апирогенен стерилен състав, включващ най-малко един физиологично приемлив разтворител и най-малко един фармацевтично одобрен консервант, или под формата на тампони и антисептични облекла, импрегнирани с тях, мехлеми или гелове, съдържащи ефективна доза димеризирана форма на лизозим за предотвратяване и/или лечение насепсис и септичен шок, по-специално при инфектирани рани.
Description
Нови приложения на лизозимния димер и състави^които го съдържат
Настоящото изобретение се отнася до ново използване на лизозимен димер и съдържащи го състави за медицински цели.
Новите приложения са свързани с лекуването на определени дисфункции на естествения защитен механизъм.
Ензимите в тяхната мономерна форма са известни от дълго време с терапевтичния си ефект при лечение на различни болести.
Лизозимът е открит през 1922 год. от Флеминг, но неговите ензимни свойства са разкрити през 1950 год. Оттогава съединението е подложено на интензивно изследване, в резултат на което са установени различни терапевтични ефекти, между които са и неговите антивирусни, антибактериални, антивъзпалителни и антихистаминови свойства. Терапевтичното използване на лизозима обаче, е силно ограничено, поради отрицателните странични ефекти на мономерната форма.Това ограничение в практическото използване на лизозима и на други терапевтично активни ензими беше преодоляно в края на осемдесетте години, когато беше открито, че отделни димеризирани форми на ензимите, запазващи положителните свойства на мономерните форми, не проявяват никакви негативни странични ефекти, когато се използват в терапевтични дози. Антивирусните и антибактериални състави, съдържащи като активен елемент лизозимен димер или други димеризирани ензими, са описани в WO 89/11294. В тази заявка се разкрива, че при тестове in vitro лизозимният димер потиска размножаването на редица бактериални видове, култивирани в проби, взети от пациенти в концентрации от 5 до 20 mg/ml от културата. Също се разкрива, че димерът е ефективен за лечение на кучешки парвовирусни / вируси, съдържащи ДНК / ( CPV) инфекции, когато се приема перорално два пъти на ден в дози от 1-2 mg на килограм телесно тегло.
С продължаване на изследователската работа на изобретателя се откриват и други атрактивни свойства на лизозимните димери, както и нови терапевтични приложения.
При извършване на клинични тестове с цел да се потвърди антибактериалният и антивирусен ефект на лизозимния димер, изненадващо беше открито, че димерът е неочаквано потентен при лечение на остри форми на заболявания на храносмилателния и дихателен тракт. Съответно, бяха направени нови изследвания с цел да бъде установен ефектът от лизозимния димер в онези стадии на различните заболявания, в които естествените защитни механизми отпадат.
Известно е, че бактериалните токсини съставляват една група от много вирулентни фактори, чрез които бактериите причиняват заболявания. Някои последни достижения в познанията за бактериалните токсини засягат тяхното взаимодействие с имунната система на гостоприемника. Това взаимодействие първо резултира в имуномодулация и второ - в освобождаване на цитокини и други медиатори, което важи за много физиологични смущения, причинени от токсини.
Страничният ефект беше изследван специално по отношение на патогенезата на грам - отрицателния сепсис ( виж Bayston, D.F.,Cohen, J.: Bacterial endotoxins and current consepts in the diagnosis and retreatment of endotoxaemia; J. Med. Microbiol. 1990,31:73-83 ).Въпреки, че от дълго време е известна ролята на екзотоксините при инфекци^причинени от
Staphylococcus aureus и Staphylococcus pyogenes, установяването на стафилококовия токсичен шоков синдром доведе до увеличаване на интереса към екзотоксините, продуцирани от тези организми.
Токсичният шок е тежко заболяване, характеризиращо се с висока температура, хипотония, капилярни кръвоизливи, дифузна еритродерма, мукозна еритема, бъбречно увреждане, хипокалцемия, хипоалбуминемия и лющене на червен кожен обрив. Много случаи на токсичен шоков синдром са свързани с употребата на вагинални тампони по време на менструация, но напоследък синдромът все по-често се описва при други случаи и при двата пола след хирургически процедури, когато на място се поставят тампони ( например тампони за нос след ринопластика или тежък епистаксис ).Стафилококовите щамове, изолирани от вагината на пациентки с токсичен шоков синдром ( TSS ), показват продуциране на токсин 1 ( TSST-1 ), но източникЯГна продуцирания от микроорганизми TSST-1 може също да бъде и една скрита инфекция. Първоначалната бактеремиа може да бъде скрита, но седмици или месеци по-късно може да доведе до развитие на локални инфекции. Едновременно с появата на такива инфекции може да се прояви септичен синдром или септичен шок. По-рядка, но по-драматична бактеремия може да протече в отсъствието на каквато и да било входяща или свързани локализирани инфекции и в тези ситуации шокът, ендокардитът, разсеяната интраваскуларна коагулопатия и отпадане на функциите на множество органи, могат да бъдат ясно изразени ( виж Stevens, D.L. et al. : Grampositive shock; Current opinions in Infectious Diseases 1992, 5: 355-363 ).
Подобни наблюдения са известни също и при други грампозитивни бактерии. Например, инфекцията, причинена от Staphylococcus pyogenes^e свързана с шок и нивото на смъртния изход е
30%. Staphylococcus pneumoniae е причина за прневмония, която е документирана с висока степен на резистентност към пеницилина и тенденция на развиване на шоков синдром. Освен това, при пациенти със СПИН има много повече случаи на пневмококови инфекции, отколкото сред населението като цяло.
Инфекциите с грам-отрицателни бактерии могат също да предизвикат сепсис или септичен шок. Грам-негативните бацили и вибриони са източник на повечето важни ентеротоксини.
Ентеротоксините са липополизахаридни ( LPS ) компоненти на външната мембрана на клетъчните стени на грам-отрицателните бактерии.Ентеротоксините предимно засягат чревния тракт и обикновено причиняват диария.Най-често срещаните инфекции, причинени от грам-отрицателни бактерии при хора и животни? са инфекциите, причинени от Escherichia coli. Значителната дехидратация, придружаваща тези инфекции, може да предизвика смъртта на инфектирания индивид.Съгласно данни на Световната здравна организация, острата диария убива приблизително 3.2 милиона деца в развиващите се страни всяка година.Около 30% от всички случаи на сепсис са причинени от грам-отрицателни бактерии.
Сепсис, дължащ се на инфекции с грам-положителни и грамотрицателни бактерии, винаги е тежко състояние във всички страни. В САЩ има приблизително около 400000 случая, 50% от които са със смъртен изход.
В последно време сепсисът и септичния шок са обект на много публикации. Забелязано е, че в патофизиологията на септичния шок, ендотоксемията и други бактериални интоксикации, важна роля играят медиаторите.Те включват туморонекротизиращият фактор (TNF), интерлевкин-1 (IL -1 ), интерферон (IFN ), фактор на тромбоцидната активност и ейкозаноиди ( деривати на арахидоновата киселина ); най важният от тях е TNF, който има ефект върху метаболизма, както и върху имунната и фагоцитната система ( виж Berkowitz, F.E. : Bacterial toxins in pathogenesis of infections; Current Opinions in Infectious Diseases, 1991 4: 332-337). Беше доказано, че непреживвлите септичния шок имат по-висока концентрация на TNF и интерлевкин -1. Много автори докладват за повишени нива на алфа- TNF в плазмата на пациенти със септичен шок и в тяхната кръв. Посочва се също, че токсичният ефект на алфа- TNF може да не зависи толкова много от концентрацията му, колкото от неговото запазване в тялото.
Много автори са проучвали възможността за модулация на цитокиновата каскада при сепсис и септичен шок. Докладваните успешни предложения включват използването на моноклонални анти TNF антитела и неутрализация на липополизахарида с антилипополизахарид. Антителата обаче не повишават бактериалната чистота. Частичен положителен ефект се наблюдава също, когато се използват агенти като дексаметазон и пентоксифилин, блокиращи продуцирането на TNF чрез макрофаги.
Известно е също, че и други цитокини допринасят за септичния шок. В тази ситуация, лечения, които модулират цитокиновата каскада, при септичния шок имат способността да противодействат на инфекцията, тъй като защитата на гостоприемника е зависима от същите тези възпаляващи цитокини. Намирането на начин за предотвратяване на септичния шок е от огромно значение за голям брой пациенти.Контролът върху нивото на TNF изглежда е съществен за тази цел.
Също критична е ролята на TNF и за друг защитен механизъм, какъвто е високата температура, която е физиологична реакция спрямо инфекцията, типична за почти всички висши животни и хората. Пет пирогенни цитокина ( интерлевкин -1, TNF, интерферон, интерлевкин и интерлевкин- 6 ) се определят като принципни ендогенни медиатори на фебрилната реакция, потискащи предзрителните топлочувствителни неврони, които нормално улесняват загубата и потискат произвеждането на топлина от човешкия организъм.Високата температура и нейните медитиатори имат способността да увреждат, както организманашественик, така и гостоприемника. В последно време бяха натрупани значителен брой данни, предполагащи ?че интерлевкин-1, TNF и интерлевкин-6 опосредствяват патофизиологичните изменения при инфекциите. Тъй-като ендогенните пирогени допринасят за патологичния процес при различните инфекции, медиаторите и фебрилната реакция са потенциално вредни за организмагостоприемник. Най-убедителни доказателства в този аспект се получиха от изучаването на грам-отрицателния сепсис. Също има и доказателства, че ендогенните пирогени опосредствяват системните и локални прояви на сепсис, причинен от грам-положителните бактерии, СПИН, спирохетни инфекции, менингити, синдром разстройващ дишането при възрастни, гнойни артрити и микобактериози. Въпреки че цитираните данни са в противоречие с наблюденията, че фебрилната реакция сама по себе си повишава резистентностга спрямо инфекцията при експерименталните животни, запазването на видовете е същността на еволюционния процес в по-голяма степен от преживяването на индивида. Може би, системното вредно въздействие на пирогенните цитокини върху изхода на скоротечните инфекции ( напр. Грамнегативен сепсис ) се приспособява като положителен локален ефект от температурата при по-малко скоротечните инфекции. За това, чрез ускоряване смъртта на безнадеждно инфектираните индивиди, природата убива индивидите, които са опасни за вида. По този начин, видовете като цяло могат да бъдат предпазени от епидемични болести
Ί (виж Mackowiak, P.A. : Mechanism of Fever; Current Opinions in Infectious Diseases, 1992, 5 : 348-354).
Фундаментална концепция за патогенезата на температурата е , че екзогенни пирогени , независимо от техния произход или структура, причиняват повишаването на температурата чрез индуктиране на клеткигостоприемници ( главно макрофаги ), които да продуцират ендогенни пирогени.Съответно, терапевтични методи, базирани на антиендогенно пирогенни антитела и антагонисти на ендогенните пирогенни рецептори, биха могли да бъдат ефективни. Една от възможностите е да се блокира биосинтезата на TNF. Изследванията при животни показват, че TNF би могъл да се продуцира преди IL-1 и други цитокини в каскадната реакция спрямо инфекцията. Съгласно много учени, инхибирането на биосинтезата на TNF също означава и спиране на биосинтезата на JL-1. Но инхибирането на биосинтезата на TNF също е известен и като един от медитиаторите при възпалителните процеси. Възпалението в много случаи е първия етап на заболяването в естествения ход на развитие на септичния шок. В ситуации, при които се нарушава целостта на тъканите : при рани, податливи на инфекции, военновременни наранявания, специално коремни рани ( перитонит ) ; болести на стомашно чревния тракт като острите инфекции, съпътстващи апендицита ; остри бактериални и вирусни инфекции, като тези , които се наблюдават при постгрипозна пневмония, неопластични заболявания, по - специално във фазата на декомпозиция на туморите и тумуроподобните образования, възпалението е първия симптом на увеличеното продуциране на TNF. Следователно контролът върху нивото на TNF би било желано лечение на такива инфекции.
Още по-важна е ролята на TNF при СПИН. СПИН-ът се характеризира с дълбока имунна недостатъчност. Отличителен белег на
СПИН е увеличеният брой на CD4+ лимфоцитите. Броят на инфектираните с HIV клетки, етиологичният агент на СПИН, е относително малък (< 1 на 100 - 1000 ) дори в периферните кръвни мононуклеарни клетки ( РВМС ) на пациентите със СПИН. Макар, че CD4+ лимфоцитите се инфектират преференциално, тези клетки не се оказват изключителна мишена при HIV инфекция. Последните данни показват, че спектърът от клетки, поразявани от HIV може да бъде много по-широк. Ясни разлики се наблюдават при реакцията на моноцитите/ макрофагите в сравнение с Т- лимфоцитите спрямо HIV инфекцията. Докато Т- лимфоцитите показват тенденция към разрушанане, моноцитите / макрофагите позволяват продължителна инфекция. По този начин HIV намира убежище в моноцитите / макрофагите, както и в други клетки на тялото. Моноцитният / макрофагов тип реакция спрямо HIV инфекцията, може би е отговорен за установената латентност у гостоприемника; тази реакция може би също причинява патогенни усложнения, получени от разтворими фактори, продуцирани от инфектираните клетки ( виж Toshifumi Matsuyama et al. : Cytokines and HIV infection : Is AIDS a Tumor Necrosis Factor disease?; AIDS 1991, 5 : 1405-1417 ). Беше доказано от много учени, че човешки Т-клетъчни линии, инфектирани с HTLV-1 са силно податливи на HIV инфекция и демонстрират драматичен цитопатичен ефект, придружен с повишена репликация на HIV. В допълнение, инфектираните с HIV клетки са податливи на разрушаване чрез филтрата от тези клетки. Тестването на висусния титър след третиране с този филтрат показва, че факторът, продуциран от Т-клетките (МТ-2), повишава репликирането на HIV. Факторът беше идентифхициран като бета - TNF и това откритие съвпада с публикацията, че Т- клетките (МТ-2), продуцират бета - ΤΝΈ. Същият ефект се наблюдава при използване на алфа - TNF. Алфа - TNF и бета - TNF селективно убиват инфектирани с HI V клетки и повишават репликирането на HIV. Също беше докладвано, че инфектирани с HIV Тклетъчни линии и прясно изолиран РВМС от инфектирани с HIV индивиди реагират чрез увеличаване нивото на TNF. Това предполага, че същото повишаване на репликацията на HIV вероятно протича и на живо. На практика, чрез повишената активност на TNF би могла да бъде неутрализирана чрез анти-TNF антитела. Повишаването на репликацията на HIV след третиране с алфа - TNF и бета - TNF е 10 пъти ( виж Yakamam, A. et al: Tumor necrosis factors (alfa, beta) induced by HIV-1 in peripheral blood monocellular cells potentiate virus replication; AIDS 1990, 421-427).
Също беше потвърдено, че различни цитокини могат да влияят върху продуцирането на HIV. При използване на пречистени мононуклеарни фагоцити от нормална периферна кръв, се наблюдава индукция на IL-6 и алфа - TNF до няколко часа след излагане на вируса HIV.
На базата на много наблюдения , Тошифуми Матцуяма и колектив ( Toshifumi Matsuyama et al.- цит. по-горе) са убедени , че СПИН представлява цитокиново или TNF заболяване .В цитокиновата мрежа на СПИН , алфа - ΤΝΈ и бета - TNF се явяват критични молекули, които повишават репликацията на HIV, както и индуктират собственото си присъствие и това на други цитокини. Беше демонстрирано как алфа TNF стимулира освобождаването на други цитокини в различните типове клетки и поради това се явява ключов цитокин от цитокиновата каскада на първия защитен механизъм.
Това предполагаше, че много от асоциираните със СПИН синдроми могат да бъдат обяснени чрез освобождаване на цитокини от различни биологични функции. Повишеното продуциране на цитокини от IL-1 и алфа - TNF, двата добре известни пирогена, би могло да обясни повишената температура, наблюдавана при пациенти със СПИН. Алфа TNF може би е замесен при асоциираната със СПИН кахексия. И двата TNF, алфа и бета, действат като имуномодулатори и молекулиастиватори в моноцитно - медиаторната цитотоксикоза.Освен това, TNF е отговорен за активирането на имунната реакция и може директно да убие заразените с HIV клетки, като по този начин усилва репликирането на HIV. Също така, беше предложен имунологичен механизъм за обясняване на изтощаването на CD-4T клетките при СПИН (Matsuyama et al.,- цит. по-горе). Беше обявено още, че свързаната със СПИН саркома на Капоши също се индуктира от алфа - TNF: алфа - TNF може да бъде продуциран от кератиноцити чрез физиологични стимулатори като ултравиолетовата светлина, което може да допринесе за индукцията на IL-6 в кожата и развитието на саркома на Капоши при СПИН. Тестовете in vitro показват, че алфа - TNF може да разруши миелин и олигодендроцитите ; също някои глиома-дериватни клетъчни линии показват чувствителност спрямо антипролиферационния ефект на алфа TNF. Това може да доведе до заключението , че дисфункцията на централната нервна система при пациентите със СПИН е резултат от въздействието на алфа - TNF. Няколко публикации показват , че серумните нива на алфа - TNF и IL-1 значително се повишават с развитието на СПИН и ARC ( комплекс, свързан със СПИН ), докато при тестване на серум от здрави носители на HIV, тези нива попадат в границите на нормалните при здравен контрол. Съгласно Matsuyama et al.( цит. по-горе), СПИН е дотолкова заболяване причинено от TNF, доколкото е от ШУ.Това показва, че установяването на контрол върху индукцията на TNF може да доведе до създаването на ефективна терапия за пациентите със СПИН.;
Следните основни констатации позволяват да бъдат решени гореописаните проблеми и лизозимният димер да намери ново терапевтично приложение при гореописаните патологични състояния :
1. Лизозимният димер потиска синтеза на TNF;
2. Лизозимният димер стимулира синтеза на алфа - IFN;
3. Лизозимният димер повишава фагоцитната активност.
Съответно предмет на настоящото изобретение е да се създадат лекарствени средства , терапевтично приложими за лечение на болести; свързани със свръхвисоки нива на TNF (туморонекротизиращ фактор), както е описано по-горе.
Следващ предмет на настоящото изобретение е създаването на лекарствени средства и хигиенни продукти, приложими за терапия и превенция на заболявания, свързани с повишаването и свръхвисоките нива на TNF.
Съгласно изобретението, задачите, изложени по-горе , могат да бъдат осъществени чрез следните нови приложения на димеризираната форма на лизозима и следните нови лекарствени средства, съдържащи лизозимен димер като активна съставка :
- приложение на лизозимния димер за производство на медикаменти за потискане на биосинтезата на туморонекротизиращ фактор при хора и животни;
- приложение на лизозимния димер за производство на лекарствено средство за лечение на заболявания, свързани със свръхвисоки нива на туморонекротизиращ фактор ;
- приложение на лизозимния димер за производство на лекарствено средство за профилактика на заболявания, свързани със свръхвисоки нива на туморонекротизиращ фактор ;
- приложение на лизозимния димер за производство на медикамент за контрол върху индуктираното от HIV освобождаване на туморонекротизиращ фактор при асимптоматични носители и пациенти със КОС (комплекс, обособен от СПИН);
- приложение на лизозимния димер за производство на лекарствени състави за лечение на СПИН ;
- приложение на лизозимния димер за производство на лекарствено средство за превенция и/или лечение на сепсис и септичен шок ;
- приложение на лизозимния димер за производство на лекарствено средство за превенция и/или лечение на повишена температура;
- инжекции, съдържащи лизозимен димер в количество 0,001-10 mg/ml , за предпочитане 0,1-10 mg/ml в апирогенен стерилен състав, съдържащ физиологично приемлив разтворител и фармакологично одобрен консервант;
- инжекции, съгласно гореописаното, за интравенозна администрация на еднокатна или повтаряща се доза от 0,02 mg на килограм телесно тегло;
- тампони и антисептични облекла, импрегнирани с мехлем или гел, съдържащи ефективни дози лизозимен димер за превенция на сепсис и септичен шок и за третиране на инфектирани рани ;
- вагинални тампони, импрегнирани с ефективна доза лизозимен димер за употреба по време на менструация.
Като димеризирана форма на лизозима е за предпочитане да се използва изолиран пречистен лизозимен димер. За някои приложения е възможно да се използват състави, които освен лизозимен димер съдържат също и малки фракции тример и висши олигомери на ензима.
Инжекциите, съгласно настоящото изобретение могат също да бъдат приложени мускулно или подкожно. При някои приложения би могло да бъде подходящо прилагане на същия течен състав (едновременно или независимо) вътрематочно и в млечната жлеза или локално - евентуално съвместно с други подходящи препарати.
Предпочитаните апирогенни стерилни състави съдържат наймалко един фармацевтично одобрен консервант, състоящ се от апирогенна стерилна вода или PBS воден разтвор като разтворител и тиомерсал като утвърден консервант за белтъчни лекарствени препарати.
Димеризираната форма на лизозима може да бъде получена чрез метод за управляема полимеризация от ензимен мономер, последван от пречистване, в часност отнемане на мономерната форма, имаща известни токсични странични ефекти, тримерните и висшите олигомерни фракции от постреакционната смес. Всеки от известните методи на полимеризация може да бъде използван за получаване на димерна форма на ензима. Един такъв производствен метод , включващ операции за пречистване , е описан в WO 91/10731.
Предварителните предклинични тестове на лизозимния димер не са показали никакви мутагенни или тератогенни ефекти и никакви или съвсем слаби странични ефекти. Токсичността на единична доза при орално/кожно приложение LD 50 е неизмерима ( > 2000 mg/kg ), а при интравенозно приложение LD 50 е > 1000 mg/kg.
Тук описаното ново приложение на лизозимния димер намери солидно потвърждение чрез тестове in vitro и се оказва ефективно в клинични изпитания на живо . Бяха направени също и някои сравнителни изследвания.
Предполага се, че инхибиращия ефект спрямо освобождаването на TNF се оказва толкова ефективен благодарение на широкия спектър на действие на лизозимния димер, а именно неговата способност да индуктира освобождаване на IFN и усилващият му ефект върху фагоцитите. Двете току-що споменати свойства са важни фактори в естествените защитни механизми. Съответно, терапевтичният и профилактичен ефект на горепосочените нови приложения на лизозимния димер се подкрепят от естествените защитни механизми, като едновременно с това последните се подсилват от лизозимния димер.
Настоящото изобретение ще бъде подробно изяснено чрез дадените примери и придружаващите ги графични изображения, илюстриращи резултатите от по-важните тестове:
Приложената фиг. 1 илюстрира потискането на освобождаването на TNF in vitro в лимфоцитна култура, субоптимално стимулирана с СопА в присъствието на лизозимен димер в различни концентрации;
Пример 1:
За да се определи имунната активност в лизозимния димер, последният се тества в човешки периферни кръвни лимфоците чрез FACS анализ.
Митогенната стимулация на човешки периферни кръвни лимфоците е добре изпитан метод за тестване реактивната способност на най-важните клетки на имунната система. За да се тества влиянието на терапевтичните субстанции върху активирането и пролиферацията на лимфоците от здрави кръвни донори, митогенът се добавя в субоптимална доза и реакцията на лимфоцита се измерва количествено чрез имунорелевантни параметри. Резултатите се сравняват с контролната стойност, измерена без намесата на медикаменти.
За стимулиране на лимфоцитите се използва СопА в концентрация 20 g/ml. Първоначалната концентрация на клетки е била 10 клетки на ml. Кратковременните култури се инкубират в СО2 инкубатори в продължение на един ден ( IL-2 рецептори върху лимфоцита и HLA-Dr) или два дни (всички останали тестове). Следните параметри са измерени като критерии за клетъчна активност:
- неоптерии (маркер за имунна активност);
- бета 2-микроглобулин ( също маркер за имунна активност);
- интерлевкин-2 ( Т-хелпер извлечена от лимфоцити автокринна и паракринна субстанция);
- интерлефкин-6 ( клетъчен диференциален хормон);
- туморонекротизиращ фактор - TNF ( вазоактивен, мощен интерлевкин);
- алфаинт ерферон ( разграничаващ фактор специално за Б лифоцити );
- тамидин киназа ( ензим, чийто синтез е повишен при пролиферация на клетките);
- лимфоцит рецептор на интерлевкин-2 ( молекула акцептор за автокринен и паракринен IL-2);
- лимфоцит Ki-67 ( антиген, изразен в активирани и профилиращи клетки);
- лимфоцит HLA-Dr ( антиген на клетъчна съвместимост от клас П, чийто синтез е повишен по време на имунна реакция).
Следните резултати са установени при наблюдението на клетъчните продукти от филтрата на културата:
Неоптерин - продуциран в Т-лимфоцитите по време на имунната реакция и в стимулираните култури - в настоящите експерименти не се покачва значително под влияние на лизозимния димер над контролните стойности в стимулираните чрез СопА клетки без изпитвания димер. С повишаване концентрацията на димера, нивото на неоптерина слабо се покачва.
Стойностите на бета-2-микроглобулина при всички концентрации на лизозимния димер също се колебаят около контролните стойности.
IL-2 рецепторите - паднали от лимфоцитната повърхност по време на култивиране и даващи информация за пълното обновяване (оборот) на IL-2 рецепторите, бяха на сравнимо ниво с IL-2 рецепторите върху лимфоцитната повърхност ( посочена по-долу) и показаха ясно потискане при по-високи концентрации на тествания димер.
Интерлевкин - 6 показва ясна тенденция към по-високи стойности в зависимост от дозата при по-високи концентрапии.Тази молекула е много важна в хемапоезата, клетъчната диференциация и имунната реакция. В теста се налага екстраполация на първите три стойности, тъй като най-високия стандарт е само 2000 pg/ml.
Резултатите, отнасящи се до останалите молекули} са дадени в Таблица 1 по-долу. За разлика от интерлевкин - 6, алфатуморонекротизиращият фактор неочаквано показва драматично ниски концентрации във филтрата на културата, с изключение на последните две нива на разреждане, които се оказаха неефективни спрямо концентрацията на TNF.
Таблица 1 :
Влияние на лизозимния димер върху човешки периферни кръвни лимфоцити
| № | Проба | HLA-Dr/CD3 | IL-2 рец. | Ki-67/CD8 | Ki-67/CD4 |
| Контролна | 3.3 | 8.9 | 6.0 | 2.7 | |
| 1. | 1 mg/ml | 2.2 | 2.6 | 4.8 | 5.3 |
| 2. | 0,3 mg/ml | 1.9 | 6.3 | 4.1 | 3.0 |
| 3. | 0,1 g/ml | 3.0 | 6.1 | 6.5 | (6.9) |
| 4. | 33 g/ml | 3.0 | 5.9 | 6.3 | 3.0 |
| 5. | 10 g/ml | 3.4 | 6.0 | 7.7 | 3.7 |
| 6. | 3,3 g/ml | 2.4 | 5.0 | 7.5 | 3.7 |
| 7. | 1 g/ml | 2.5 | 4.9 | 7.0 | 4.1 |
| 8. | 0,3 g/ml | 3.3 | 5.8 | 7.5 | 3.9 |
| 9. | 0,1 g/ml | 2.8 | 4.0 | 7.9 | 3.8 |
| 10. | 33 ng/ml | 3.1 | 4.6 | 8.0 | 4.1 |
Влияние на лизозимния димер върху човешки периферни кръвни лимфоцити
Влияние на лизозимния димер върху човешки периферни кръвни лимфоцити
| № | Проба | TNF | Тимидин киназа | алфа-IFN | |
| Контролна | 205.11 | 9242 | 4.97 | ||
| 1. | 1 | mg/ml | 38.07 | 923 | 8.81 |
| 2. | о,з | mg/ml | 17.19 | 10914 | 9.44 |
| 3. | ο,ι | mg/ml | 13.75 | 7254 | 17.96 |
| 4. | 33 | g/ml | 36.11 | 9525 | 3.67 |
| 5. | 10 | g/ml | 22.22 | 5492 | 7.54 |
| 6. | 3.3 | g/ml | 54.91 | 5198 | 6.26 |
| 7. | 1 | g/ml | 18.47 | 5840 | 33.91 |
| 8. | 0.3 | g/ml | 14.47 | 6839 | 10.07 |
| 9. | 0.1 | g/ml | 94.16 | 3672 | 4.97 |
| 10. | 33 | ng/ml | 172.46 | 7312 | 10.07 |
Тимидин киназата е измерена в лимфоцитната цитоплазма след замразяване и размразяване на клетъчната пелета. Синтезът на тимидин киназата се повишава при делене на клетките, което я прави добър маркер за клетъчна полиферация. Данните от таблица 1 показват спадане при най-високата концентрация на изпитвания лизозимен димер ; на другите нива на разреждане не може да се види никаква ясна тенденция . Алфаинтеферонът обратно, при същите условия показва стойности над контролната само с СопА при високи концентрации. Видимо повишаване се получава между второто и третото разреждане.
Лимфоцитни маркери:
HLA-Dr/CD3, бидейки маркер за клетъчна съвместимост, се проявява в активиране на Т-лимфоцитите по време на имунната реакция. Получените резултати показват известно процентно увеличение на активираните Т-клетки в контролната проба; при различна концентрация на лизозимния димер в култури, стойностите варират около контролната.
IL-2 рецептори върху липфоцитите : интерлевкин - 2 е цитокин, продуциран от Т-хелпер липфоцити след активация чрез интерлевкин -
1. IL-2 е автокринен и паракринен . Т-хелпер лимфоцитите не само продуцират IL-2, но също така са и стимулирани към пролиферация от тази молекула. Рецепторите за IL-2 на повърхността на Т-хелпер лимфоцитите са с повишен синтез под влияние на активацията. Таблица 1 показва , че при най-високата концентрация на лизозимен димер има язно изразено потискане на IL-2 рецепторите на повърхността на лимфоицитите, докато при останалите концентрации стойностите не се различават от биологично нормалния диапазон. Таблица 1 също съдържа данни за K1-67/CD8 и Ki-67/CD4. Ki-67 е пролиферационна молекула, проявяваща се в клетки, които претърпяват митоза. Ki-67 е важен параметър за определяне на стимулирани клетки и диагностициране на тумори. От представените резултати може да се види слабо потискане на клетъчната пролиферация в клетките с Ki-67 + инхибитор (CD8) при двете най-високи дози лизозимен димер. При хелпер (CD4) лимфоцитите , при най-високата доза, имаме значително покачване на процента позитивни молекули. При по-ниски дози, процентът на клетките , изразяващ K1-67/CD4, е малко по-висок , отколкото при контролната стойност.
Ясно изразеното потискане на TNF е показано на фиг. 1.
Имунологичните параметри , изброени по-горе и избрани по тяхната потенциална важност в имунната реакция, са анализирани с метод, базиращ се на измерване влиянието на тестваната субстанция върху субоптимално стимулирани с СопА човешки перифени лимфоцити - метод ? добре известен, чувствителен и позволяващ определянето на много различни параметри. При някои концентрации на лизозимния димер се наблюдават забележителни разлики между резултатите от теста и съответните стойности при лимфоцитите, стимулирани само с ConA , а по отношение например на TNF и алфа IFN, наблюдаваните ефекти са ясно изразени за целия диапазон на изпитваните концентрации.
Пример 2
Бяха проведени лабораторни изпитания за определяне на въздействието на лизозимния димер върху фагоцитната активност на млечни и кръвни клетки in vitro. По-рано беше установено, че при стандартния тест in vitro, лизозимният димер не потиска пролиферацията на микроорганизмите, използвани от инфектирани млечни жлези на крави. Тъй като при клинично използване , вътревименното и интравенозно прилагане на лизозимен димер успешно йлиминира инфекцията на млечните жлези при кравите, стана ясно?че основният антибактериален механизъм в млечните жлези на кравите е фагоцитозата. Съответно използва се кръв и мляко от здрави и инфектирани крави за тестове in vitro, целящи да се определи въздействието на лизозимния димер върху фагоцитозата. За да бъдат сравними, експериментите се провеждат при еднаква концентрация на изпитваната субстанция и еднакъв период на инкубация, като се използват клетки, изолирани от здрави и инфектирани крави или даже от инфектирани и здрави участъци от млечната жлеза на една и съща крава с цел да се преодолеят индивидуалните разлики на имунната реакция.
В проведения тест пречистената димерна форма и смес от димер с малки фракции тримери и висши олигомери на лизозима се добавят към кръв или мляко от здрави и инфектирани крави в концентрация от 25 0,25 g/ml и сместа се инкубира при температура 37 0 С за 0,5 - 24 часа. Процентът на фагоцитозиращите клетки ( фагоцитозен индекс съгласно метода на Wisniewski et al.) и процентът на NBT - позитивните гланулоцити ( съгласно Park) се определят за всяка проба.
Лизозимният димер повишава фагоцитната активност на левкоцитите при тестове in vitro. Ефектът е зависим от дозата и продължителността на инкубацията. За да се активират млечните левкоцити са необходими по-високи концентрации на лизозимния димер, отколкото за активиране на кръвните левкоцити. Прекадено високите концентрации на димера слабо намаляват фагоцитната активност in vitro.
Подбраните резултати, доколкото постполимеризационната реакционна смес не съдържа никакви цитотоксични мономерни форми на димера, са сравними за високо пречистен и не толкова високо пречистен лизозимен димер и са дадени в Таблици 2 и 3, в които терминат “лизозимен димер +” се използва за означаване на състав, съдържащ малки фракции тримери и висши олигомери на лизозима, както беше посочено по-рано в описанието.
Таблица 2:
Въздействие на лизозимния димер върху фагоцитната активност на млечни левкоцити от здрави крави ( концентрация на димера 20 g/ml, период на инкубиране 3 часа)
| Индикатор | Препарат от млечни левкоцита на здрави | ||
| крави : | Крава № 477 | Крава № 463 | |
| контролна проба | 77.8 | 80.0 | |
| % фагоцитоза | лизозимен димер + | 100 | 100 |
| лизозимен димер | 92.6 | 100 | |
| контролна проба | 2.7 | 4.1 | |
| фагоцитозен индекс | лизозимен димер + | 4.4 | 6.4 |
| лизозимен димер | 4.8 | 8.4 | |
| контролна проба | 3.4 | 2.5 | |
| % редукция на NBT | лизозимен димер + | 5.7 | 3.8 |
| лизозимен димер | 3.4 | 6.8 |
Таблица 3 :
Въздействие на лизозимния димер върху фагоцитната активност на млечни левкоцити от инфектирани крави ( концентрация на димера 20 g/ml, период на инкубиране 30 минути )
| Индикатор | Препарат от млечни левкоцита на здрави | ||
| крави : | Крава № 477 | Крава № 463 | |
| контролна проба | 77.8 | 80.0 | |
| % фагоцитоза | лизозимен димер + | 100 | 100 |
| лизозимен димер | 92.6 | 100 | |
| контролна проба | 2.7 | 4.1 | |
| фагоцитозен индекс | лизозимен димер + | 4.4 | 6.4 |
| лизозимен димер | 4.8 | 8.4 | |
| контролна проба | 3.4 | 2.5 | |
| % редукция на NBT | лизозимен димер + | 5.7 | 3.8 |
| лизозимен димер | 3.4 | 6.8 |
Ясно е, че степента на пречистване на лизозимния димер няма значителен ефект върху наблюдаваната фагоцитна активност на млечните левкоцити. Освен това може да се окаже, че въздействащите клетки са гранулоцити.
В следващите примери са посочени резултатите от изпитанията in vitro. При тях е използван 2 mg лизозимен димер в 10 ml PBS разтвор. Този препарат е означен с KLP-602.
Пример 3
При интравенозно прилагане KLP - 602 показва стимулиращ ефект върху фагоцитната активност на кръвните гранулоцити при здрави и болни телета, при здрави кончета, както и при млечни крави след вътревименно прилагане. Ефектът се проявява в увеличения брой неутрофили, повишена способност за абсорбиране на стафилококи и редуциране на NTB. Тези явления протичат предимно през първите 1224 часа след инжектиране на препарата. Ефектът на KLP - 602 върху фагоцитната активност във вимето зависи от дозата и формата на медикамента и индивидуалната реакция на отделните животни.
Лизозимният димер беше използван за лечение на инфекциозни заболявания при телета, прасета, коне и кучета. Препаратът беше приложен в различни дози и през различни интервали от време венозно, мускулно, подкожно, вътревименно и вътрематочно. Медикаментът беше приложен на 346 крави, 274 телета, 110 мъжки и женски прасета, 294 малки прасенца, 709 прасета - сукалчета, 35 жребчета и 107 кучета. За контрол беше приложено алтернативно лечение. Имайки предвид природата на опитните животни , нито едно от тях не беше оставено без лечение по морални причини . Независимо от това, заключения могат да се направят чрез сравнение с клиничната картина на лекувани болести, известни от литературата по ветеринарна медицина.
Пример 4
При тестове, проведени с телета^нивото на INF и TNF в кръвта беше определено за група здрави и инфектирани животни, като последните не се третират през първите 12 часа от инфекцията, след което се третират с антибиотици и лекуват с лизозимен димер във високо пречистена форма.
В групата, третирана с лизозимен димер, една или две инжекции с KLP - 602 лекуват 90 % от телетата, страдащи от гастроентерит и над 85 % от случаите с остра бронхопневмония. Бързото изчезване на такива симптоми като температура и диария е много показателно. Третирането с този медикамент не изисква вкарването на допълнителни течности в животните. Времето за възстановяване и степента му превъзхождат контролната група, третирана с антибиотици.
Пример 5
KLP - 602 се оказва най-ефективен за лечение на заболявания, засягащи прасета. 100 % или почти 100% от животните се възстановяват при следните заболявания : post-partum agalactia ( ММА синдром ), дизентерия, пиометрит, инфлуенца и колибацилоза. Прилагането на медикамента в случаи с едемно заболяване и бронхопневмония дава малко по-ниски резултати, но доста по-добри от тези, получени чрез алтернативни терапии. Би могло да се наблюдава бързото спиране на диарията ( обикновено през първите 24 часа ) и понижаване на температурата, както и възстановяване на млечната секреция, което е от особена важност (запазване живота на малките прасенца) в случаите на послеродово виме и маточни възпаления. Ефективността на KLP-602 в сравнение с алтернативните лечения е показана в Таблица 4 по - долу.
Пример 6
При лечение с KLP-602 100 % от жребчетата, страдащи от бпонхопневмониЯуСе възстановяват по-бързо , отколкото контролната група, третирана с познати препарати.
Пример 7
KLP- 602 беше тестван за лечение на някои заболявания при кучета, като например фоликулит ( 100 % ефективност ), инфекция на горните и долни дихателни пътища и инфекция на стомашночревния тракт, проявяващи се чрез диария.
Преобладаваща в тази група е парвовирусозата , известна като практически нелечимо заболяване . Въпреки това беше наблюдавано 75 % възстановяване в случаите с парвовирусоза.
При проведените тестове с животни, засегнати от заболявания по естествен път, както беше описано по-горе, бяха извършени следните важни наблюдения:
1.Терапията доказа своята ефективност и простота при лечението на заболявания, които имат мултифакторна етиология и патогенеза ( тези заболявания са широко разпространени при животинските популации и са трудни за овладяване, особено в развъдните ферми, където епидемичното им разпространение е много лесно ). Тези констатации доказват модулиращият ефект на лизозимния димер върху естествените защитни механизми.
Таблица 4
| Животни, третирани с KLP-602 | Животни, третирани с други препарати |
| № на Продължи Излекувани Неизлекувани случая телност(дни) брой % Брой % | № на случая Използван Продължи Излекувани препарат телност(дни) % |
| ГКолибацилоза при прасенца 434 1—2 421 97 13 3 400* антибиотици, 3-5 75-80 * глюкоза, Vit В | |
| П.Дизентерия при свине 29 1 — 2 29 100 - - 219 антибиотици, 5-9 75 STOLMED, RIDOWED | |
| Ш.Послеродова агалактия 30 1-2 30 100 - - 40* антибиотици, 3-5 80 * коргизон, сулфамид | |
| ГУ.Инфлуенца при прасенца 38 1 — 5 38 100 - - 200* антибиотици 3-9 60-80* (латентна формула) | |
| V.Morbus oedematosus 82 1 — 3 78 95 4 5 120* антибиотици, 3-6 60 * пенилитин тетрациклин, Vit. В, течности+ глюкоза |
* приблизителни данни
2.Терапията се оказва ефективна при болести, които включват в своя естествен ход ендотоксичен шок или други анормални състояния, като продължителна висока температура, разтройващи статуса на животното за дълго време след възстановяването, с което са изключително вредни за животни като конете ( жребците ) - порода за надбягвания или други спортове, както и онези породи, предназначени главно за хранителната промишленост, като в тези случаи цената на продукцията е критичен въпрос. Бързото възстановяване ще позволи значително намаляване на разходите за лечение на тези заболявания.
3.Резултатите ^получени in vitro ^потвърждават понижени нива на TNF при различните естествено протичащи инфекции, третирани с лизозимен димер, с което се подкрепят претенциите на изобретението.
Пример 8
Ефектът на лизозимния димер върху активността на антибиотиците срещу различни микроорганизми беше изследван с цел да се подберат бактерии за бъдещи тестове, с които да се определят найефективните дози антибиотици за отделните микроорганизми и диапазонът от концентрации на лизозимния димер, за който е налице очакваният ефект. В експериментите са използвани две партиди лиофизиран пречистен димер, едната произведена 1991 год., а другата 1992 год.. Използваните антибиотици за експериментите са тези, които се намират на полския пазар, производство на Polfa, полски производител на лекарствени средства, такива като пеницилин, неомицин, еритромицин, цефалоспорин (SEFRIL).
Антибиотиците, подлежащи на тестуване ? се суспендират в буфериран разтвор на натриев хлорид (PBS - Biomed) или във волски серум. След това към суспензията се добавя лизозимен димер по такъв начин, че в тестваните проби неговата концентрация да бъде винаги g/ml. Концентрацията на тестваните антибиотици е различна във всеки тест, поради различната чувствителност на използваните микроорганизми. Ефектът само от антибиотика или в комбинация с лизозимен димер беше изпитан в суспензия от PBS или волски серум in vitro върху Escherichia coli, Salmonella enteritidis, Staphylococcus aureus и Streptococcus uberis, изолирани от болни животни. В експериментите са използвани също и лабораторни щамове от Sarcina Lutea 9341 и АТСС Staphylococcus aureus 209 Р.
Поради предварителния характер на тестовете, всеки антибиотик се изпитва спрямо 1, 2 или 3 различни видове бактерии, както следва:
1. Приготвяне на тарелките
Порция 0,05 ml от отгледаната в хранителен разтвор 18 часова култура на бактериалния щам, подлежащ на тестване, се добавя към 14 ml проба обогатен абагар ( Biomed ). Сместта се разбърква и се излива върху тарелка с диаметър 10 mm. След охлаждане и втвърдяване на абагара, отгоре се поставят стерилни цилиндри, които се пълнят с разтвор от подлежащия на тестване антибиотик.
2.Приготвяне на антибиотиковите разтвори
Първоначално 10 ml проба от подлежащия на тестване антибиотик се разтваря в PBS; след това необходимият обем от този разтвор се добавя към определен обем PBS или волски серум с цел да се осигури концентрация на антибиотика колкото е възможно по-близка до MIC ( минимална инхибираща концентрация ); винаги се приготвят три разтвора с различна концентрация.
3. Приготвяне на разтвор от лизозимния димрр
Първоначално 10 mg лиофилизиран лизозимен димер се разтваря в lOmlPBS.
След това се приготвят разтвори или с PBS, или с волски серум и се добавят към антибиотиковите разтвори, предварително приготвени, както е описано по-горе. Тествани са следните комбинации :
- антибиотик / PBS
- антибиотик / PBS + лизозимен димер
- антибиотик / серум
- антибиотик / серум + лизозимен димер
Концентрацията на антибиотика е една и съща във всички цилиндри. Концентрацията на лизозимния димер е 5 g / ml . След като цилиндрите се напълнят с разтворите, тарелките се съхраняват при стайна температура в продължение на 2 часа; след това културите се инкубират при температура 37 0 С.
4. Отчитане на резултатите и оценка на активността .
Тарелките се отстраняват от нагревателя след 18 часова инкубация и диаметърът на зоната на инхибирания бактериален разтеж ( липса на колонии) се измерва около цилиндрите.
Не беше установена разлика в размера на зоните на инхибиран бактериален разтеж около цилиндрите, пълни с антибиотикови суспензии в PBS със или без добавка на лизозимен димер в концентрация 5 g / ml. Размерът на инхибираната зона обаче намалява около цилиндрите, пълни с антибиотикова суспензия във волски разтвор, но се увеличава около тези, пълни със суспензии от антибиотик + лизозимен димер във волски серум. Зоните са по-големи от тези, наблюдавани около цилиндрите 5 пълни със серумна суспензия само от антибиотици, без лизозимен димер.
Явлението протича при тестовете на Sarcina Iutea с пеницилин. Ампицилинът показва синергизъм в комбинация с лизозимен димер при инхибиране in vitro, разтеж на Escherichia coli, Salmonella enteritidis и Staphylococcus epidermidis. Беше забелязано повишаване на активността на еритромицина в присъствието на лизозимен димер спрямо Staphylococcus aureus 209 Р и Streptococcus uberis, както и тази на SEFRIL спрямо Staphylococcus aureus 209 Р. Escherichia coli, Salmonella enteritidis са резистентни спрямо този антибиотик.
Повишаването на антибактериалната активност на тестваните антибиотици се наблюдава само когато като разтворител се използва волски серум. Като правило, увеличението на активността е средно 50 %, а в някои случаи, присъствието на лизозимния димер резултира в 100 % но увеличение на активността на антибиотиците.
Заключения:
Лизозимниягдимер ( без никакви консерванти ) в концентрации от 5 g / ml показва in vitro синергизъм с някои антибиотици в MIC ( минимална инхибираща концентрация ) в присъствието на волски серум при инхибиране на бактериалния растеж.
Получените резултати досега изясняват необходимостта от допълнителни проучвания.
Пример 9 :
ГГО и съавтори напоследък съобщават , че алфа - TNF може да противодейства на анти - HIV активността на AZT (ГГО at. al. : “Tumor necrosis factor antagonizes inhibitory effect of azidothymidine on human immunodeficiency virus (HIV) replication in vitro ; Biochem. Biophys. Res. Commun. 1990, 166 ; 1095 - 1101 ). Пациентите със СПИН в напреднал стадий страдат от различни случайни инфекции. Някои инфекциозни агенти могат да индуктират повишаване на алфа - TNF, IL - 6 и други цитокини, които биха могли да бъдат имуносупресивни или да стимулират репликирането на HIV.
Съответно, лечението само с AZT е недостатъчно ефективно. За да се увеличи анти - HIV активността на AZT, се предлага лечението с AZT да се комбинира с приемането на лизозимен димер за потискане синтеза на TNF - факторът, противодействащ на анти - HIV активността на AZT.
Claims (10)
- ПАТЕНТНИ ПРЕТЕНЦИИ1. Димеризирана форма на лизозим за производство на медикамент за модулиране естествените защитни механизми на организма, характеризиращ се с това, че инхибира тумор некротизиращия фактор (TNF ), понижава нивото на TNF, подобрява фагоцитозата, повишава освобождаването на интерферон и повишава стойностите на интерлевкин-6 при животински или човешки индивиди.
- 2. Димеризирана форма на лизозим съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че засилва защитните механизми.
- 3. Димеризирана форма на лизозим съгласно претенции 1 и 2, характеризиращ се с това, че регулира нивото на TNF до 13.75 pg/ml.'
- 4. Приложение на димеризирана форма на лизозим съгласно претенции от 1 до 3, за производството на медикамент за модулиране естествените защитни механизми на организма чрез единични или повтарящи се дози от 0.3 pg до 1 mg за 106 левкоцита.
- 5. Приложение на димеризирана форма на лизозим съгласно претенция 1, за профилактика или лечение на заболявания от групата 7 включваща сепсис, септичен шок, кахексия, СПИН, инфекции, свързани със СПИН.
- 6. Фармацевтичен състав за модулиране естествените защитни механизми на организма съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че включва димеризирана форма на лизозим и антибиотик , за предпочитане избран от групата ? включваща пеницилин, ампицилин, неомицин, еритромицин, цефалоспорин.
- 7. Фармацевтичен състав съгласно претенция 6, характеризиращ се с това, че включва и азидотимидин .
- 8. Фармацевтичен състав съгласно претенция 1, характеризеращ се с това, че представлява инжекционен разтвор, вкючващ 0.01-10 mg-ml димеризиран лизозим, за предпочитане 0.01-1 mg-ml апирогенен стерилен състав ? съдържащ най-малко един физиологично приемлив разтворител и/или най-малко един фармацевтично одобрен стабилизатор.
- 9. Фармацевтичен състав съгласно претенция 8, характеризеращ се с това, че се прилага в единични или повтарящи се дози от 0.02 mg/kg телесно тегло.
- 10. Димеризирана форма на лизозим за производство на медикамент за модулиране естествените защитни механизми на организма, характеризиращ се с това, че представлява гел или мехлем? включващ ефективно количество от димеризирана форма на лизозим, или във форма на антисептична превръзка или тампон? импрегнирай с ефективйа доза от димеризирана форма на лизозим.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL92295273A PL173978B1 (pl) | 1992-07-13 | 1992-07-13 | Sposób oddziaływania na wydzielanie cytokin w hodowli limfocytów krwi obwodowej |
| PCT/EP1993/001841 WO1994001127A1 (en) | 1992-07-13 | 1993-07-13 | Lysozyme dimer and compositions containing the same |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| BG99287A BG99287A (bg) | 1995-08-28 |
| BG63331B1 true BG63331B1 (bg) | 2001-10-31 |
Family
ID=20058087
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| BG99287A BG63331B1 (bg) | 1992-07-13 | 1994-12-22 | Лизозимен димер и състави, които го съдържат |
Country Status (31)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6132715A (bg) |
| EP (1) | EP0651654B1 (bg) |
| JP (1) | JPH07508744A (bg) |
| KR (1) | KR100289841B1 (bg) |
| CN (1) | CN1057937C (bg) |
| AT (1) | ATE252392T1 (bg) |
| AU (1) | AU677786B2 (bg) |
| BG (1) | BG63331B1 (bg) |
| BR (1) | BR9306722A (bg) |
| CA (1) | CA2140140A1 (bg) |
| CZ (1) | CZ286725B6 (bg) |
| DE (2) | DE651654T1 (bg) |
| DK (1) | DK0651654T3 (bg) |
| ES (1) | ES2074037T3 (bg) |
| FI (1) | FI950144A (bg) |
| GE (1) | GEP20012466B (bg) |
| GR (1) | GR950300039T1 (bg) |
| HU (1) | HU218151B (bg) |
| MX (1) | MX9304197A (bg) |
| NZ (2) | NZ254135A (bg) |
| OA (1) | OA10125A (bg) |
| PL (1) | PL173978B1 (bg) |
| PT (1) | PT651654E (bg) |
| RO (1) | RO112580B1 (bg) |
| RU (1) | RU2145875C1 (bg) |
| SG (1) | SG52727A1 (bg) |
| SK (1) | SK282377B6 (bg) |
| TW (1) | TW259710B (bg) |
| UA (1) | UA49789C2 (bg) |
| WO (1) | WO1994001127A1 (bg) |
| ZA (1) | ZA935046B (bg) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6183742B1 (en) | 1992-07-13 | 2001-02-06 | Nika Health Products, Limited | Applications of lysozyme dimer |
| DZ1964A1 (fr) * | 1995-01-13 | 2002-10-15 | Nika Health Products Ltd | Nouvelle applications d'un dimère de lysozyme. |
| EP0793472A4 (en) * | 1995-05-30 | 2000-12-27 | Lectin Biopharma Inc | METHOD FOR USING LECTINES FOR AGGLUTINATION AND FOR COLLECTING MENSTRUATION FLUIDS |
| US6123937A (en) * | 1997-03-14 | 2000-09-26 | Nika Health Products, Limited | Applications of lysozyme dimer |
| ITMI981148A1 (it) | 1998-05-22 | 1999-11-22 | Therapicon Srl | Utilizzo di lisozima c modificato per preparare composizioni medicinali per il trattamento di alcune gravi malattie |
| EP1174147A1 (en) * | 2000-06-27 | 2002-01-23 | Nika Health Products Limited | Reversal of antibiotic resistance with lysozyme dimer |
| US20050244402A1 (en) * | 2004-04-30 | 2005-11-03 | Villanueva Julie M | Absorption of pain-causing agents |
| RU2472467C2 (ru) * | 2011-04-13 | 2013-01-20 | Государственное научное учреждение Краснодарский научно-исследовательский ветеринарный институт (ГНУ КНИВИ) | Способ профилактики и лечения гастроэнтеритов, обусловленных бактериозами, у телят |
| RU2546911C2 (ru) * | 2013-04-11 | 2015-04-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Донской государственный аграрный университет" | Способ хранения свинины в охлажденном состоянии |
| CN105106626A (zh) * | 2015-09-30 | 2015-12-02 | 成都倍加特生物科技有限公司 | 一种治疗月经期感染的汤剂药物及其制备方法 |
Family Cites Families (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR4020M (bg) * | 1965-01-29 | 1966-03-21 | ||
| FR2215201A1 (en) * | 1973-01-24 | 1974-08-23 | Theranol Lab | Broad-spectrum antibiotic compsns. - contg. antibiotic resistant lactic bacilli and enzyme diffusing-agent |
| JPS5533408A (en) * | 1978-08-30 | 1980-03-08 | Eisai Co Ltd | Immunity-increasing agent |
| JPS5533409A (en) * | 1978-08-30 | 1980-03-08 | Eisai Co Ltd | Carcinostatic agent |
| JPS5543040A (en) * | 1978-09-25 | 1980-03-26 | Eisai Co Ltd | Immunity raising agent |
| US4221794A (en) * | 1979-06-21 | 1980-09-09 | Newport Pharmaceuticals International, Inc. | Method of imparting immunomodulating and antiviral activity |
| US4457919A (en) * | 1980-03-14 | 1984-07-03 | Newport Pharmaceutical International, Inc. | Method of imparting immunomodulating, antiviral or antitumor activity |
| US4510144A (en) * | 1981-08-26 | 1985-04-09 | Newport Pharmaceuticals International | Methods of imparting immunomodulating activity with dihydrothiazolo purine derivatives |
| US4739046A (en) * | 1985-08-19 | 1988-04-19 | Luzio Nicholas R Di | Soluble phosphorylated glucan |
| US4744984A (en) * | 1985-10-08 | 1988-05-17 | Vetrepharm Research, Inc. | Antiviral immunotherapeutic agent and preparation thereof |
| EP0238851B1 (en) * | 1986-02-19 | 1992-12-09 | Imreg, Inc. | A method and means of assaying an immune system |
| AU624331B2 (en) * | 1988-05-26 | 1992-06-11 | Nika Health Products Ltd. | A composition having as its active ingredient lysozyme or ribonuclease dimer in a pharmaceutically acceptable carrier |
| DE3817955A1 (de) * | 1988-05-27 | 1989-11-30 | Hoechst Ag | Tnf-inhibitor enthaltendes arzneimittel |
| AU3765689A (en) * | 1988-05-31 | 1990-01-05 | Napp Systems (U.S.A.) Inc. | Apparatus and process for processing printing plates |
| WO1991000092A1 (en) * | 1989-06-13 | 1991-01-10 | Smithkline Beecham Corporation | Inhibition of interleukin-1 and tumor necrosis factor production by monocytes and/or macrophages |
| RO114805B1 (ro) * | 1990-01-08 | 1999-07-30 | Nika Health Products Ltd Vaduz | Dimer de lizozim purificat si procedeu de obtinere a acestuia |
| US5314816A (en) * | 1990-01-08 | 1994-05-24 | Nika Health Products Ltd. | Method of preparing lysozyme dimers |
| US5420154A (en) * | 1990-08-03 | 1995-05-30 | Smithkline Beecham Corp. | TNF inhibitors |
-
1992
- 1992-07-13 PL PL92295273A patent/PL173978B1/pl not_active IP Right Cessation
-
1993
- 1993-07-13 AT AT93915903T patent/ATE252392T1/de not_active IP Right Cessation
- 1993-07-13 DE DE0651654T patent/DE651654T1/de active Pending
- 1993-07-13 EP EP93915903A patent/EP0651654B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-07-13 UA UA95018021A patent/UA49789C2/uk unknown
- 1993-07-13 ZA ZA935046A patent/ZA935046B/xx unknown
- 1993-07-13 JP JP6502985A patent/JPH07508744A/ja active Pending
- 1993-07-13 RU RU95105517A patent/RU2145875C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1993-07-13 ES ES93915903T patent/ES2074037T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1993-07-13 AU AU45686/93A patent/AU677786B2/en not_active Ceased
- 1993-07-13 CZ CZ199585A patent/CZ286725B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1993-07-13 CA CA002140140A patent/CA2140140A1/en not_active Abandoned
- 1993-07-13 BR BR9306722A patent/BR9306722A/pt not_active Application Discontinuation
- 1993-07-13 RO RO95-00041A patent/RO112580B1/ro unknown
- 1993-07-13 WO PCT/EP1993/001841 patent/WO1994001127A1/en active IP Right Grant
- 1993-07-13 CN CN93116771A patent/CN1057937C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1993-07-13 DK DK93915903T patent/DK0651654T3/da active
- 1993-07-13 HU HU9500098A patent/HU218151B/hu not_active IP Right Cessation
- 1993-07-13 DE DE69333258T patent/DE69333258T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1993-07-13 GE GEAP19932466A patent/GEP20012466B/en unknown
- 1993-07-13 SG SG1996008336A patent/SG52727A1/en unknown
- 1993-07-13 NZ NZ254135A patent/NZ254135A/en not_active IP Right Cessation
- 1993-07-13 PT PT93915903T patent/PT651654E/pt unknown
- 1993-07-13 MX MX9304197A patent/MX9304197A/es not_active IP Right Cessation
- 1993-07-13 SK SK40-95A patent/SK282377B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1993-07-13 KR KR1019940704649A patent/KR100289841B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1993-08-03 TW TW082106180A patent/TW259710B/zh active
-
1994
- 1994-12-22 BG BG99287A patent/BG63331B1/bg unknown
-
1995
- 1995-01-12 FI FI950144A patent/FI950144A/fi unknown
- 1995-01-13 OA OA60604A patent/OA10125A/en unknown
- 1995-06-07 US US08/476,561 patent/US6132715A/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-07-31 GR GR950300039T patent/GR950300039T1/el unknown
-
1996
- 1996-09-13 NZ NZ299377A patent/NZ299377A/en not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2092183C1 (ru) | Антивирусный или антибактериальный состав и способ его употребления | |
| EP0520021A1 (en) | PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS. | |
| EP0651654B1 (en) | Use of lysozyme dimer for the manufacture of a medicament for modulating natural defensive mechanisms | |
| BG62239B1 (bg) | Приложение на лизозимен димер | |
| HUT63335A (en) | Process for producing pharmaceutical compositions for treating diseases of mammals | |
| Weinstein et al. | Effect of Paromomycin on the Bacterial Flora of the Human Intestine: Studies of Total Numbers and Specific Components | |
| KR930004599B1 (ko) | 항바이러스성 또는 항균성 조성물 | |
| PL176407B1 (pl) | Kompozycja farmaceutyczna zawierająca dimer lizozymu | |
| RU2202356C2 (ru) | Способ стимуляции репаративных процессов длительно незаживающих ран и трофических язв |