HU216646B - Eljárás Medicago Sativa regenerálására és idegen DNS expresszálására - Google Patents
Eljárás Medicago Sativa regenerálására és idegen DNS expresszálására Download PDFInfo
- Publication number
- HU216646B HU216646B HU9300016A HU9300016A HU216646B HU 216646 B HU216646 B HU 216646B HU 9300016 A HU9300016 A HU 9300016A HU 9300016 A HU9300016 A HU 9300016A HU 216646 B HU216646 B HU 216646B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- cells
- cotyledons
- dna
- immature
- alfalfa
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
- A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8201—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation
- C12N15/8206—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation by physical or chemical, i.e. non-biological, means, e.g. electroporation, PEG mediated
- C12N15/8207—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation by physical or chemical, i.e. non-biological, means, e.g. electroporation, PEG mediated by mechanical means, e.g. microinjection, particle bombardment, silicon whiskers
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Botany (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
A találmány a lűcerna, Medicagő sativa javítőtt transzfőrmálására ésregenerálására vőnatkőzik. A módszert lűcerna transzfőrmálásárahasználják részecskebőmbázási módszerrel. Az érett sziklevelekalkalmazásával akkőr kapják az őptimális eredményeket, ha a bőmbázást24–120 órás vízben való áztat ssal végzik. A lűcerna regenerálása éstranszfőrmálása nagymértékben javűl, ha éretlen szikleveleket, illetveéretlen embrióit használják a transzfőrmáláshőz és regeneráláshőz. Azéretlen sziklevelek azők, amelyek a bepőrzás űtán maximűm 25 nappalvannak, és előnyösen őlyan sziklevelek tartőznak ide, amelyeket 10–15nappal a bepőrzás űtán vágnak ki. Ezek a sziklevelek világőszöldszínűek, illetve áttetszőek. Az éretlen sziklevelek szőmatikűsembrióinak bőmbázásából származó növények megtartják aregenerálóképességüket. ŕ
Description
A növények transzformálása a biotechnológia egyik nagy eredménye, és hozzájárulását a nagyobb termőképességű növények, a jobb termés termesztéséhez, és ennek következtében az egész világban az élelmiszerellátás javításához széles körben elismerik. Bizonyos növényekben azonban különösen nehéz a transzformációt végrehajtani, és az értékes takarmánynövény, a lucerna (Medicago sativa) transzformálását erősen gátolták a növény tulajdonságai.
A lucerna transzformálását elsődlegesen két fő korlát gátolta: az alkalmazott transzformációs módszer, valamint az, hogy számos lucemafaj nagyon gyengén regenerálódik a szövetekből és a sejttenyészetekből.
Az első korlát abból származik, hogy a lucernát jelenleg elsődlegesen az Agrobacterium tumefaciens alkalmazásával transzformálják. Az Agrobacterium gazdatörzs specifitást mutat, és csak bizonyos Agrobacterium törzsek fertőznek néhány lucerna-genotípust. Ennek következtében a lucerna nagyon korlátozott mértékben transzformálható. A lucerna transzformálásának második fő akadálya az, hogy nagyon alacsony a regenerációs frekvenciája. Csak néhány variáns mutat közepes regenerációs frekvenciát, és azok a kiváló variánsok, amelyek nagyon jó termést adnak a szántófóldön, azok következetesen nagyon rosszul regenerálódnak. Ennek a két problémának a kombinációja egy nagyon komoly szűk keresztmetszetet jelentett a növény transzformálásában.
A lucerna más tulajdonságokat is mutat, amelyek megkülönböztetik egyéb takarmánynövényektől. Ha önmagával termékenyítik meg, akkor a virágpor esetleg nem csírázik ki, illetve ha mégis csírázik, később abbahagyja a csírázást. Tehát nem lehetséges egy igazi tenyészszülő előállítása a hibridek számára, ami lényegesen bonyolítja a nemesítést.
Megállapították, hogy a lucernának kilenc fő variánsa van: az M. falcata, Ládák, M. varia, Turkistan, Flamand, Chilei, Perui, Indiai és az Afrikai. A kiemelt szövetforrások, például az érett sziklevelek és hipokotilok azt mutatják, hogy a legtöbb termesztett variáns genotípusában a regenerációs frekvencia csak 10 százalék [Seitz-Rris, Μ. H. and E. T. Bingham, In vitro Cellular and Developmental Biology, 24(10), 1047-1052 (1988)]. Erőfeszítések történtek a regenerálás javítására, például oly módon hogy megpróbálkoztak az aszexuális szaporítással, abból a célból, hogy fenntartsák azokat a kivételes genotípusokat, amelyek rendelkeztek a regenerálódás képességével. Azonban az aszexuális módszerekkel végzett szaporításnak nincs gyakorlati jelentősége, ha számos genotípust érint. Bingham és mások megpróbálták megkerülni ezt a problémát, oly módon hogy újból és újból szelekciót végeztek. Az első ciklusban a regenerálódó genotípusokat választották ki, keresztezték, és új ciklusba vitték, egészen addig, amíg a regenerálódás elérte a 60%-ot vagy többet. Ennek a munkának volt az eredménye a Regen-S, amelyben a növények kétharmada volt képes a kalluszszövetből regenerálódni [E. T. Bingham et al., Crop Science, 15, 719-721 (1975)].
Emellett a kutatók úgy vélik, hogy a szomatikus embriogenezis a lucernában öröklődik, és csak viszonylag kis számú gén szabályozza. Ezért a regenerálás javítására tett erőfeszítéseket az embriogenezis genetikai kontrolljának izolálására fordították, valamint olyan nemesítési programokra, amelyekbe ez az információ bevihető [lásd például Μ. M. Hemandez-Femandez és B. R. Christie, Genome, 32, 318-321 (1989); I. M. Ray and E. T. Bingham, Crop Science, 29, 1545-1548 (1989)]. Ezt bonyolítják a lucerna előzőkben említett jellemzői.
A jelen találmány tárgyát az előző megközelítésektől eltérő, a lucerna transzformálásának és regenerálásának javítása képezi. A DNS közvetlen bejuttatását mikrorészecskebombázással hajtjuk végre. A belövés eredménye az, hogy az Agrobacterium rendszer korlátáit sikerül leküzdeni.
Emellett, a lucerna regenerálásának korlátáit azzal kerüljük meg, hogy éretlen szikleveleket választunk a transzformáláshoz és a regeneráláshoz. Azt találtuk, hogy ha a lucerna éretlen szikleveleit használjuk, akkor a regenerálás gyakorisága jelentősen megnő, és ennek a módszernek a következtében nincsenek a lucerna típusából származó korlátok a regenerálásban. Még a kiváló termőképességű variánsok is regenerálhatok és transzformálhatok.
A találmány tárgya tehát a Medicago sativa transzformációs gyakoriságának javítása.
A jelen találmány tárgya továbbá a Medicago sativa regenerálódásának j avítása.
A jelen találmány tárgya továbbá, hogy lehetővé tegyük bármely Medicago sativa-variáns regenerálódását.
A találmány további tárgyai az alábbi leírásból lesznek nyilvánvalóak.
Mikrorészecskebombázást használunk abból a célból, hogy DNS-sel transzformáljuk a Medicago sativa-t, ennek eredménye pedig az, hogy bármely Medicago sativa-variánsba be tudunk juttatni DNS-t.
A találmány szerinti eljárásban a Medicago sativa éretlen szikleveleit használjuk bármely Medicago sativa-variáns transzformálására és regenerálására.
Az alábbiakban röviden ismertetjük a mellékelt ábrákat.
Az 1. ábra a pPHI251 plazmid térképe.
A 2. ábra a pPHI256 plazmid térképe.
A 3. ábra egy grafikon, amely a terméseredmények időbeli lefutását mutatja, az x tengelyen a sziklevél korát, az y tengelyen a regenerációs választ ábrázolva.
A 4. ábra egy regenerálási grafikon, a variánsokból az éretlen sziklevelek (üres oszlopok) és érett sziklevelek (fekete oszlopok) alkalmazásával kapott eredményeket ábrázolva.
Az 4. ábra a pPHI413 plazmid térképe.
Mikrorészecskebombázás
A növényi sejtek transzformálására használt mikrorészecskebombázás ismert a szakterületen jártas szakember számára. Az általános eljárást T. M. Klein és munkatársai írták le [Proceedings of the National Academy of Sciences, USA, 85, 4305-4309 (1988)]. Ez az idézet, valamint a későbbiekben említett idézetek a szakterületen jártas szakemberek tudását mutatják be, és mindegyi2
HU 216 646 Β két azzal a céllal idézzük, hogy referenciaként szolgáljanak. Az alapeljárások közé tartozik a nagy sűrűségű kis részecskék, mikrorészecskék beborítása DNS-sel, amelyeket azután a részecskepisztolyba vagy héliumpisztoly-berendezésbe helyezünk, és nagy sebességre gyorsítunk, azzal a céllal, hogy áthatoljanak a sejtfalakon, és a DNS-t vagy más anyagot a bombázott sejt belsejébe juttassuk.
A korábbi munkákban idegen géneket juttattak ezzel a módszerrel dohányszövet érintetlen növényi sejtjeibe, de ennek alkalmazása a gazdaságilag fontos lucemanövényre nem volt sikeres [Tömés et al., Plánt Molecular Biology, 14, 261-268 (1990)]. A lucerna bombázását a transzformálás kivitelezése céljából korábban nem közölték.
A DNS bejutását a növényi sejtbe először a tranziens expresszióval lehet igazolni. A rövid idejű expresszió azt a célt szolgálja, hogy a bombázás után 24-48 órával igazolja a DNS jelenlétét a növényi sejtekben. Ha a bombázás után 72 órával még expresszálódik, akkor ez azt mutatja, hogy a DNS-t sikerült bejuttatni a részecskepisztoly segítségével vagy más módszerrel, és a DNSvektor működik. Ha a bombázás után kettő-nyolc héttel még tovább expresszálódik, akkor azt a következtetést lehet levonni, hogy a DNS állandóan jelen van, és valószínűleg integrálódott a növényi genomba. Ennél a pontnál a túlélési képesség azt mutatja, hogy túlélte a nukleázok támadását, amelyek tipikusan a védelem nélküli idegen DNS-eket támadják meg. Az Ro növényekben való további expresszió azt mutatja, hogy a növényi sejtben stabil expresszió játszódott le. Ezt Southem-blot elemzéssel lehet megerősíteni. Ha keresztezést végzünk, és az R| generációt elemezzük, akkor ezzel a DNS expresszióját és örökölhetőségét tovább is megerősíthetjük.
Számos különböző növény sejtforrást használhatunk arra, hogy mikrorészecskebombázással transzformáljuk. Az érett magvak hipokotiljai, sziklevelei és a levélnyelek olyan növényi szövetek, amelyek a bombázás alanyai lehetnek. A bejelentő felfedezte, hogy ha szikleveleket használunk, akkor kielégítő transzformációt kapunk. Nem szándékunk semmilyen elmélethez ragaszkodni, de az a véleményünk, hogy a sziklevelek valószínűleg jobb forrásai a bombázáshoz használt sejteknek, mivel a bombázandó sejtek azok a sejtek, amelyek képesek teljes növényekké regenerálódni. Az érett sziklevelek emellett kényelmes szövetfonások, és könnyen kivághatok a magból.
Az érett magvakról származó sziklevelek használhatók a transzformálásban, vagyis azok a magvak, amelyek elérték a pihenő állapotot. Ezt a magot vízbe helyezzük, tipikusan egy vagy több napra, a gyökér áttöri a mag burkát, és a sziklevelet kivágjuk. Az éretlen sziklevelek használatát az alábbiakban részletesebben tárgyaljuk.
Azt találtuk, hogy az érett sziklevelek transzformálásának optimális állapota akkor következik be, ha a bombázás a vízbe helyezés után 24-120 órával történik. Felfedeztük, hogy ennél a pontnál a regenerálás, a tranziens transzformáció és a kapott transzformáció az optimumnál van. 24 óránál korábban gyakorlati okokból nehezebb eltávolítani a mag burkát anélkül, hogy megsértenénk a sziklevelet. 120 óra után a növényt nehezebb regenerálni.
A szövetet egyszer vagy kétszer kell bombázni, az ennél több bombázás valószínűleg elpusztítja a sejteket.
A szövettenyészeteket is optimalizáltuk a maximális regenerációs lehetőségek irányába. Az alábbiakban ismertetett kísérletekben a Regen-S-t használtuk. Amint azt az előzőkben megjegyeztük, a Regen-S a jobb regenerációs potenciáljáról ismert. A továbbiakban a használt szövettenyészeteket ismertetjük. A regenerálásra optimalizált szövettenyészetnél a legfontosabb faktor a 2,4-diklór-fenoxi-ecetsav (2,4-D) magas koncentrációja a kinetin alacsony koncentrációjával szemben. A szövet/szerv tenyészetet általánosságban Atanassov és Brown írják le [Plánt Cell Tissue Organ Culture, 4,
111-122 (1985)].
Az alábbiakban ismertetjük a transzformált és transzformálatlan lucerna regenerálására használt táptalajokat. A szakterületen jártas szakember számára nyilvánvaló, hogy más, az ezektől a táptalajoktól lényegesen eltérő táptalajok is használhatók, és ezek is a találmány oltalmi körébe tartoznak. A leírást példákon keresztül adjuk meg.
Gamborg-féle alaptáptalaj
A Gamborg-féle B5 táptalaj széles körben használt táptalaj a növényi fajok tenyésztésében. A szakterületen jártas szakember számára jól ismert, és részletesen publikálták is [O. L. Gamborg, R. A. Miller, K. Ojima, Exp. Cell. Rés., 50, 151-158 (1968)]. Ez egy komponense az alábbiakban felsorolt táptalajoknak.
Módosított B5 táptalaj
Ezt a táptalajt Atanassov, A. és Brown, D. C. W. írja le (Plánt Cell Tissue Organ Culture, 3, 149-162 (1984)]. Egy tipikus összetételt írnak le a GIBCO Laboratories-nál, ez az alábbi: 1 mg/1 2,4-D, 0,2 mg/1 kinetin, 30 g/1 szacharóz, 3000 mg/1 KNO3, 895 mg/1 CaCl2, 800 mg/1 L-glutamin, 500 mg/1 MgSO4x7H2O, 100 mg/1 szerin, 10 mg/1 L-glutation, 1 mg/1 adenin, és azzal a módosítással, hogy az Atanassov által leírt gelrite helyett 9 g/1 Bacto Agart használnak. Ez az alábbiakban felsorolt táptalajoknak egy komponensét képezi.
Módszer táptalaj
Ez a táptalaj jól ismert a szakterületen jártas szakember számára, részletes leírását publikálták [T. Murashige and F. Skoog, PhysiologiaPlantarum, 75,473-497 (1962)]. Egy, a Gibco Láb által előállított készítmény összetétele az alábbi:
Komponens | mg/1 |
NH4NO3 | 1650,0 |
kno3 | 1900,0 |
CaCl2 x 2H2O | 440,0 |
MgSO4 x 7H2Ob | 370,0 |
KH2PO4 | 170,0 |
Na2-EDTA | 37,3 |
FeSO4 x 7H2O | 27,8 |
HU 216 646 Β
Komponens | mg/1 |
H3BO3 | 6,2 |
MnSO4 x H2O | 16,9 |
ZnSO4 x 7H2O | 8,6 |
KI | 0,83 |
Na2MoO7 x 2H2O | 0,25 |
CuSO4 x 5H2O | 0,025 |
CoC12 x 6H2O | 0,025 |
Blaydes-táptalaj és módosításai
Ezt a szakterületen jártas szakember számára jól ismert táptalajt D. F. Blaydes publikálta [Physiol. Plánt. 19, 748-753 (1966)].
A BO (alap Blaydes-táptalaj) az alábbi anyagokat tartalmazza literenként: 300 mg KH2PO4, 100 mg KN03, 1 g NH4NO3, 347 mg Ca(NO3)2x4H2O, 35 mg MgSO4x7H2O, 65 mg KC1, 0,8 mg KI, 1,5 mg ZnO4x7H2O, 1,6 mg H3BO3, 4,4 mg MnSO4xH2O, 2 mg glicin, 0,1 mg tiamin-hidroklorid, 30 g szacharóz, 10 g (5,57 g FeSO4x7H2O 500 ml forró desztillált vízben oldva 7,45 g Na2EDTA jelenlétében, pH=5,9-6,0).
A BI1 táptalaj összetétele ugyanaz, mint a BO összetétele, azzal a különbséggel, hogy 2-2 mg/1 NAA-t, Kinetint és 2,4-D-t tartalmaz.
A BOi2Y táptalaj ugyanaz, mint a BO összetétele, azzal a különbséggel, hogy még 100 mg/1 inozitot és 2 g/1 Bacto Yeast Extractot is tartalmaz. Az embrióindukció után a kiültetett növényi részeket el kell távolítani a 2,4-D hatása alól. A 2,4-D láthatóan gátolja az embrió fejlődését.
Schenk- és Hildebrandt- (SH) táptalaj
Ez a táptalaj a szakterületen jártas szakember számára jól ismert, részletesen Β. V. Schenk és A. C. Hildebrandt írta le [Can. J. Bot., 50, 199-204 (1975)]. Az SHII 9,05 pmol/l 2,4-diklór-fenoxi-ecetsavat (2,4D) és 9,30 μιηοΐ/ΐ kinetint tartalmaz.
Módosított SH-táptalaj
Ez a táptalaj a szakterületen jártas szakember számára jól ismert. Részletesen D. H. Mitten, S. J. Sato és T. A. Skokut írta le [Crop Sci. 24, 943-945 (1984)]. A módosított SH-táptalaj tartalmaz: 25 pmol/l a-naftalin-ecetsavat (NAA) és 10 pmol/l kinetint, a kalluszt az 50 μιηοΐ/ΐ 2,4-D-t és 5 μιηοΐ/ΐ kinetint tartalmazó SH táptalajra visszük át, majd 3 nappal később a BOi2Y-t tartalmazó regeneráló táptalajra viszszük át.
Az alábbiakat csak példaként említjük meg, és nem célunk, hogy ezekkel a találmány oltalmi körét szűkítsük.
Az alábbiakban említett összes kísérletben a már említett Regen-S-t használtuk. Ennek a variánsnak ismert a magas regenerációs potenciálja. Az Alfafa Vírus coat proteint (lucerna mozaikvírus burokfehérje, AMVcp), a foszfinotricinacetil-transzferázt (BAR), a neomicin-foszfotranszferázt (NPTII) és a βglükuronidázt (GUS) kódoló géneket transzformáljuk ebbe a genotípusba, a DuPont PDS 1000 részecskefegyver alkalmazásával. A lucerna mozaikvírus burokfehérje megvédheti a növényeket az AMV patogénektől, a BAR inaktiválja a nem szelektív foszfinotricin herbicidet, amely a Basta-táptalajban található, és végül az NPTII inaktiválja a kanamicint. Az NPTII-t és az AMVcp-t kódoló pPHI251 plazmidot használtuk. Ennek a plazmidnak a térképe az 1. ábrán látható. A pPHI256 plazmidot az alábbiakban jelzett módon külön használtuk BAR, AMVcp és GUS kódolására. Ennek a plazmidnak a térképét a 2. ábrán láthatjuk.
1. példa
Lucerna érett sziklevél transzformálása mikrorészecskebombázással, Basta-szelekcióval
Kiültetett növényrész: Regen-S érett sziklevelei
Plazmid: pPHI256 (GUS, AMVcp, BAR)
Bombázás: Lemezenként (8 lemez) 8 sziklevelet bombázunk kétszer, 1,8 pm átmérőjű volfrámrészecskékkel.
Tenyészet: 2 napig csíráztatott mag, az embrionális tengelyt eltávolítva a sziklevélből. A szikleveleket 0,25 mol/1 szorbitba áztatott szűrőlapokra helyezzük, és az adaxiális felszínt kétszer bombázzuk. Módosított B5 táptalajon 2 napig tenyésztjük.
nappal a bombázás után a szikleveleket módosított B5 táptalajon tenyésztjük, amely 2,5 mg/1 Bastát tartalmaz, az alábbi időtartamokig:
hét hét kalluszképzés/embriogenezis (B5 alap, 1 mg/12,4-D és 0,2 mg/1 kinetin) hét embriogenezis/embriófejlődés (B5 alap, 0,1 mg/1 NAA) hét embrióérés (BOÍ2Y alap, nincsenek hormonok)
Gyökereztetés 5 mg/1 Bastában Hajtáscsúcstenyészetek indítása
Eredmények: 60 embrió kinyerése megbámult és elpusztult a szelekció során abnormálist feláldoztunk a GUS hisztokémiai festéshez (mindegyik negatív) abnormálist újra tenyésztettünk kalluszképzés céljából (szintén GUS-negatív) normálisból 5 túlélte a magasabb szelekciót
Ebben a kísérletben öt növényt lehetett kinyerni a bombázott érett sziklevelek tenyészetéből módosított B5 táptalajon, amely 2,5 mg/1 Bastát tartalmazott. Mindegyik növényről kimutatható volt a polimeráz láncreakció alkalmazásával, hogy tartalmazza az AMVcp és a BAR géneket, amint az az 1. táblázatban látható. A β-glükuronidáz enzim aktivitása is kimutatható volt az öt növényben a GUS-vizsgálattal [Rao, G., Flynn, P., BioTechniques, 8 (1), 38-40 (1990)].
HU 216 646 Β
1. táblázat
Basta-szelekcióval kinyert lucemanövények
Növény | PCR | GUS» | ||||
AMVcpb | BARC | Hajtás | Gyökér | |||
Vizsgálat 1 | Vizsgálat 2 | Vizsgálat 1 | Vizsgálat 2 | |||
El | + | 3 | - | 2 | 2 | |
E2 | + | + | - | - | 2 | 1 |
E3 | + | + | - | 1 | - | NA |
E4 | + | 2 | - | 2 | NA | |
E5 | + | + | - | - | - | - |
a Fluorimctriás GUS-vizsgálat, pg/pg összfehérje formájában kifejezve b Az AMVcp kódolórégió belsejét célzó oligonukleotidok c A CaMV promotert és a BAR kódolórégiót célzó oligonukleotidok
Az alábbiakban a szülők és az utódok PCR-elemzését mutatjuk be, ez azt mutatja, hogy 50% pozitív a BAR-ra. Az első három növény utódnövény, ezeket követi egy anyanövény, amelyben van BAR-expresszió, majd egy apai negatív kontroll, BAR-ra pozitív anyai növény, és kontrollok.
2. táblázat
A szülő és utódnövények PCR-elemzése
Minta | Forrás | BAR | AMV |
B001E2xYAE92 | Utód | + | - |
B001E2xYAE92 | Utód | - | - |
BOOlE3xYAE92 | Utód | - | - |
Anyai BOO1E2 | Anyai | + | - |
YAE92 Apai | Apai | - | - |
Anyai BOO1E3 | Anyai | + | - |
RA3 11-5 +kontroll’ | NPTII+AMV | - | + |
RA3 C308 - kontroll | - | - |
• Ennek a pozitív kontrollnak a leírását Hill és munkatársai adták meg [Bio/Tcchnology, 9, 373-377 (1991)].
Southem-blot elemzést végeztünk azokon a szülői növényeken, amelyeket kiónoknak találtunk, és amelyek PCR-módszerrel a BAR és az AMPVcp génekre pozitívoknak bizonyultak. Ebből látható tehát, hogy a növények öröklődő transzformációját értük el.
Összefoglalva, az látható, hogy a lucernából származó érett sziklevelek transzformációja elvégezhető a mikrorészecskebombázással. Azonban, amint azt megjegyeztük, a regeneráció tipikusan igen alacsony. A regenerációt jelentősen javítani lehet éretlen sziklevelek alkalmazásával a transzformálás és a regenerálás során. Éretlen sziklevelek
A szomatikus embriogenezis lehet közvetlen, amikor az embriók közvetlenül jönnek létre a sejtekből, 60 illetve lehet közvetett, amikor a kallusz képződik, amely dedifferenciálódáson megy keresztül.
Míg a múltban a kutatás arra irányult, hogy egy adott csíraplazmaforrást használjanak, olyan genotípu25 sokat válasszanak ki, amelyek jobb regenerálódóképességgel rendelkeznek, jobb regenerálódóképesség alapján szelektáljanak ki új variánsokat, illetve a növénynemesítési technikákban olyan génekre szelektáljanak, amelyek jobb regenerálódóképességgel rendel30 kező sejtvonalakat eredményeznek, ebben a találmányban egy teljesen eltérő megközelítést használunk [lásd például Mitten et al., Crop Science, 24, 943 (1984); Seitz, Kris and Bingham, In Vitro, 24, 1047 (1988); Brown and Atanassov, Plánt Cell Tissue Organ Cul35 tűre, 4, 111-122 (1985)]. A találmány tehát arra vonatkozik, hogy az éretlen szikleveleket használjuk arra, hogy a lucerna regenerálódását és ezzel a transzformálását megjavítsuk.
Az éretlen sziklevelek használata lényeges faktor40 nak bizonyult a regenerálásban. Ahogy a mag fejlődik, a beporzás után 0-5 nappal a magembrió alakja gömbszerű, általában nincs formája, színesen áttetsző. Körülbelül az ötödik napon szív alakú a megjelenése. Az embrió ezután rotáción esik át, és körülbelül a tizedik napon látható sziklevele van. A színe áttetszőtől világoszöldig változik, és ha egy szikét helyezünk a sziklevél mögé, akkor az majdnem látható. Körülbelül 15 nap elteltével a mag részeinek differenciálódása sokkal érzékelhetőbb, és a 20. napon sötétzöld a megjelenése.
A 25. naptól kezdődően a sötétzöld szín sárgába megy át. A 30. napon krémes fehér színű. Ennél a pontnál van a pihenési periódus.
A bejelentő azt találta, hogy azok az éretlen sziklevelek adnak jobb regenerálást, amelyek a beporzás után 55 25 nappal képződnek. A beporzás után 5-7 nappal a szív fázis látható, azonban gyakorlati szempontból nehéz kivágni a sziklevélrészt ebben a fázisban, és megkülönböztetni az embrió többi részétől. A sziklevelet könnyebben lehet izolálni a 10. nap körül, amikor átlátszó, illetve nagyon világos zöld színű. Előnyös a
HU 216 646 Β
10-15. nap közötti periódus, és ekkor jelentősen jobb regenerálódást kapunk. A sziklevél kivágásának legelőnyösebb időpontja a beporzás utáni körülbelül 10. nap és/vagy a sziklevél áttetsző, illetve világoszöld színű. A világoszöld színt a Pánton Color Chart PHS372 számhoz hasonlíthatjuk.
Az ismertetett módon használva az éretlen szikleveleket lehetséges olyan variánsok regenerálása, amelyek azelőtt soha nem voltak képesek a transzformációra és a regenerálódásra. Tehát, míg a múltban a regenerálható növények nem mindig az előnyös fenotípust hordozták, ma már a lucerna egészen kiváló vonalai is regenerálhatok. Ezek a kiváló vonalak tipikusan a kívánt terméstulajdonságokkal rendelkeznek, de nagyon gyengén regenerálódnak.
További eredmény, hogy ha éretlen szikleveleket használunk, akkor olyan kiváló vonalakat tudunk transzformálni, amelyeket korábban a DNS bejuttatása után nem lehetett regenerálni. A transzformálás elvégezhető bombázással, illetve a már korábban ismert Agrobacterium módszerrel, azzal, hogy a regenerálás most már lehetséges.
2. példa
A tipikus protokoll szerint az éretlen sziklevelet módosított B5 táptalajra visszük. 21-28 nap elteltével a szomatikus embriókat MS-táptalajra visszük, és hagyjuk, hogy megérjenek. A szakterületen jártas szakember számára természetesen számos ismert variánsa létezik ennek a protokollnak, és ezt csak példaként adjuk meg.
Az alábbiakban megjavított regenerálódást kapunk, ami a kiültetett növényrész korával korrelál.
Két variánsból származó növényeket három csoportba osztunk. Az első csoportba hat növényt tettünk az YAE92-ből, a második csoportba öt növényt tettünk az YAE92-ből, a harmadik csoportba pedig öt növényt tettünk az YAM93-ból. Az alábbiakban következő 3. táblázatban látható az egyes variánsok háttere. Mindegyik csoportot kizárólag a csoporton belül keresztez10 zük. A kapott növények közül az egyes racémot egyenként azonosítjuk, és az integritását fenntartjuk. A betakarítást a beporzás után adott időpontokban, 0-30 nap között végezzük, korábbi betakarítást végezve egy adott racémon és késői betakarítást végezve ugyanazon a racémon. A csoport integritását fenntartva, és a számozott racémokból végezve a betakarítást a kísérlet során, igazolható, hogy egy adott variánson belül is a genotípus variációja nem befolyásolja a regenerálódást, amíg a regenerálást az éretlen sziklevélből végezzük. Az adott időtartam alatt kinyert mindegyik sziklevél regenerálódott. A 3. ábra grafikonján az eredmények láthatók, az x tengelyen a sziklevél beporzás utáni korát ábrázoljuk, az y tengelyen pedig a regenerációs válaszokat. Az eredmények azt mutatják, hogy még ugyan25 annak a racémnak az esetében is jobb a regeneráció közvetlenül a beporzás után, egészen a 15. napig, és a regeneráció csökken egészen az érettségig.
A 4. táblázatban az időbeli lefutás értékelése látható. Azaz, az világos, hogy a kivágott sziklevél kora a kriti30 kus faktor, ami a regenerálást érinti.
3. táblázat
A csíraplazma százalékos hozzájárulása
Yaria | Ládák | Turk | Falc | Chil | Peru | Indián | African | Flemish | Unk | |
YAE92 | 27 | 8 | 4 | 6 | 8 | - | - | - | 47 | - |
YAM93 | 23 | 8 | 10 | 8 | 7 | 2 | - | - | 42 | - |
4. táblázat 40
Regenerálás százalékos válaszként bemutatva, három lucemanövény-csoporton belüli kontrollált keresztezésből származó éretlen sziklevelekből
KOR (Beporzás utáni napok) | Az értékelt sziklevelek száma | Százalékos válasz |
6 | 44 | 48 |
7 | 38 | 53 |
8 | 42 | 52 |
9 | 39 | 64 |
10 | 52 | 60 |
11 | 44 | 61 |
12 | 51 | 57 |
13 | 53 | 62 |
14 | 38 | 55 |
15 | 42 | 43 |
16 | 38 | 34 |
KOR (Beporzás utáni napok) | Az értékelt sziklevelek száma | Százalékos válasz |
17 | 42 | 27 |
18 | 49 | 22 |
19 | 59 | 17 |
20 | 56 | 14 |
21 | 30 | 7 |
22 | 45 | 9 |
23 | 41 | 7 |
24 | 19 | 5 |
25 | 68 | 1 |
26 | 73 | 1 |
27 | 18 | 0 |
28 | 9 | 0 |
29 | 17 | 0 |
30 | 17 | 0 |
HU 216 646 Β
4. táblázat (folytatás)
KOR (Beporzás utáni napok) | Az értékelt sziklevelek száma | Százalékos válasz |
31 | 15 | 0 |
32 | 11 | 0 |
33 | 15 | 0 |
34 | 9 | 0 |
35 | 10 | 0 |
36 | 17 | 0 |
37 | 18 | 0 |
38 | 14 | 0 |
39 | 11 | 0 |
40 | 12 | 0 |
Az tehát látható, hogy ha éretlen szikleveleket használunk a lucerna regenerálására, akkor jelentősen jobb eredményeket kapunk.
3. példa
Ez a kísérlet megerősíti, hogy az éretlen sziklevelek használata az, ami a magjavított regenerálódást eredményezi, és bármely csíraplazmaforrásra használható. Számos variánst, beleértve azokat is, amelyek nagyon gyengén regenerálódnak, sikerült az éretlen sziklevelek alkalmazásával regenerálni. Az 5. táblázatban felsorolt variánsok közül mindegyikből minimum tizenkét növényt ültettünk el, beporoztuk, azzal a különbséggel, hogy a Grimm (Pi 452472)-ből 15 növényt, a Mesa
Sirsa-variánsból 30 növényt, és a RA3 klónból 1 növényt ültettünk el és poroztunk be. Mindegyik azonosított racémot a beporzás után 10-15 nappal a beporzás után, illetve érett (körülbelül 30 nap) betakarítunk. Az éretlen és az érett szikleveleket a 2. példában leírtak alapján regeneráljuk.
Az alábbi 5. táblázatban bemutatott adatok azt mutatják, hogy az éretlen sziklevelek használata jelentősen megnöveli a regenerálást még azoknál a variánsoknál is, amelyek eladdig nagyon gyenge regenerá15 lást mutattak, illetve egyáltalán nem regenerálódtak. A 4. ábrán grafikusan mutatjuk be a regenerálásbeli különbségeket azoknál a variánsoknál, amelyeket nagyon nehéz regenerálni. A kiválasztott variánsok, és főleg azok, amelyek kiemelkedően rosszul regenerá20 lódnak, láthatók a fekete oszlopokban az érett sziklevelek százalékos regenerálódását figyelembe véve, illetve a csíkozott oszlopokban az éretlen sziklevelek regenerálódását figyelembe véve. Az éretlen sziklevelek használata minden esetben javított regenerálást eredményezett, beleértve azokat a variánsokat is, amelyek az érett sziklevelek alkalmazása esetén nem regenerálódtak.
5. táblázat
A százalékos regenerálás összehasonlítása a beporzás után 30 nappal levő érett sziklevelek, illetve a beporzás után 10-15 nappal levő éretlen sziklevelek esetében
Lucerna jele | A vizsgált érett sziklevelek száma | A regenerálódó érett sziklevevelek százaléka | A vizsgált éretlen sziklevelek száma | A regenerálódó éretlen sziklevevelek százaléka |
Grimm (Pi 452472) | 206 | 0 | 223 | 15 |
Norseman | 152 | 28 | 198 | 37 |
Lahontan | 167 | 2 | 184 | 30 |
Turkistan (Pi 86696) | 176 | 8 | 186 | 18 |
Tetőn | 145 | 3 | 175 | 16 |
ΡΪ251689 | 140 | 0 | 129 | 21 |
Caliverde65 | 138 | 0 | 167 | 27 |
Buffalo | 127 | 1 | 158 | 20 |
Cody | 161 | 0 | 183 | 31 |
Hairy Peruvian | 147 | 4 | 166 | 18 |
Hairy Peruvian (BIG-PLH) | 150 | 0 | 173 | 22 |
Mesa Sirsa | 243 | 0 | 262 | 17 |
Sonora | 110 | 11 | 127 | 23 |
DuPuits | 138 | 6 | 145 | 24 |
Iroquois | 143 | 0 | 158 | 26 |
Vemal | 152 | 22 | 161 | 34 |
Culver | 170 | 0 | 173 | 23 |
Agate | 135 | 0 | 155 | 19 |
Ramsey | 121 | 0 | 181 | 24 |
HU 216 646 Β
5. táblázat (folytatás)
Lucerna jele | A vizsgált érett sziklevelek száma | A regenerálódó érett sziklcvcvclck százaléka | A vizsgált éretlen sziklevclck száma | A regenerálódó éretlen sziklcvcvclck százaléka |
El Unico | 149 | 0 | 190 | 28 |
Regen-S/RA3 | 43 | 54 | 63 | 72 |
YAM93 | 164 | 0 | 196 | 34 |
YAE92 | 179 | 0 | 187 | 27 |
4. példa
Három különböző vizsgálatot végeztünk annak meghatározására, hogy az éretlen embriók transzformálhatók-e.
Az első vizsgálatban a szikleveleket pPHI413 plazmiddal bombázzuk (lásd 5. ábra) a fentiek szerint, és a GUS-expresszió szintjét vizsgáljuk. Negyvenkét mintát bombáztunk. Az optimális expresszió a bombázás után 48-72 órával volt, mikor is a 42 mintából 26 expresszálta a GUS-t 1,7 pg/μΐ összfehérje értékben. Öt nappal a bombázás után 30 mintából hatban volt átlagban 2 pg/pg aktivitás, a bombázás után 17 nappal 30 mintából háromban volt átlagban 2 pg/^g összfehérjeakti vitás.
A második vizsgálatban a bombázásnak a szelekció alatt végzett lucemaregenerálásra gyakorolt hatását vizsgáltuk. A Regen-S éretlen szikleveleit a beporzás után 11 nappal gyűjtjük be. A szikleveleket kivágjuk az embrióból, háromszor bombázzuk volfrámrészecskékre adszorbeált pPHI251 plazmiddal (1. ábra), majd 25 mg/1 kanamicin-szulfátot tartalmazó módosított B5 táptalajon tenyésztjük. A szomatikus embriókat a kezelés után körülbelül két hónappal nyerjük ki, két hónapig hagyjuk száradni MS-táptalajon, majd 100 mg/1 kanamicin-szulfátot tartalmazó MS-táptalajon csíráztatjuk. A levélszöveteket kinyerjük, és vizsgáljuk a neomicin-foszfotranszferáz-aktivitásukat. Az eredmények a 6. táblázatban találhatók.
6. táblázat
Növény | NPTII-aktivitás pg'pg összfehérje | AMVcp (elisa) |
CBX106 | 3 | + |
CBX107 | 2 | - |
CBY107 | 5 | - |
CBY108 | 4 | - |
CBZ108 | 1 | - |
CBX1I2 | I | + |
CBY112 | 3 | - |
CBZ112 | 1 | - |
CBA112 | 1 | - |
CBX115 | 2 | - |
CBX116 | 2 | + |
CBY116 | 3 | - |
Növény | NPTII-aktivitás pg'pg összfehérje | AMVcp (elisa) |
CBX117 | 3 | - |
1 Regen-S 3-11 | 13 | - |
2 Regen- S 3-11 | 10 | - |
3 Regen-S 3-11 | 9 | - |
Regen-S negatív kontroll11 | 0 | - |
Rambler pozitív kontrollb | 4 | + |
a A negatív kontrollt TE-puffcrrel kezelt volfrámrészecskékkel bombáztuk, és kanamicint nem tartalmazó táptalajon regeneráltuk. b A Rambler pozitív kontroll egy korábban azonosított transzgenikus lucemanövcny, amelyről igazolták, hogy a neomicinfoszfotranszferáz gént tartalmazza és expresszálja [Hill ct al.,
3Q Bio/Technology, 9, 373-377 (1991)].
A harmadik vizsgálatban a találmánynak egy további megvalósítási módját mutatjuk be, és a bombázás hatását vizsgáljuk a transzformált kiváló lucernavariánsok regenerálására. Az éretlen szikleveleket a beporzás után 11 nappal levő embriókból vágjuk ki. A szomatikus embriókat regeneráljuk. A szomatikus embriókat ötször bombázzuk volfrámrészecskékkel, amelyekre a pPHI251 plazmidot adszorbeáltuk (1. ábra), majd 25 mg/1 kanamicin-szulfátot tartalmazó mó40 dosított B5 táptalajon tenyésztjük. Az embriókat 20 nappal a bombázás után 25 mg/1 kanamicin-szulfátot tartalmazó friss, módosított B5 táptalajra visszük át. A zöld szomatikus embriókat a bombázás után 50 nappal levesszük, és 100 mg/1 kanamicin-szulfátot tar45 talmazó MS-táptalajon hagyjuk megérni. A bombázás után 80 nappal levélmintákat veszünk, és vizsgáljuk a neomicin-foszfotranszferáz-aktivitásukat. Az eredmények a 7. táblázatban láthatók.
7. táblázat
Yam93 regeneráns | NPTII-aktivitás (pg'pg összfehérje) |
CB93.1 | 11 |
CB93.2 | 13 |
CB93.3 | 3 |
CB93.4 | 8 |
CB93.5 | 4 |
CB93.6 | 9 |
HU 216 646 Β
7. táblázat (folytatás)
Yam93 rcgcncráns | NPTIl-aktivitás (pg/pg összfehérje) |
Yam93 negatív kontroll | 0 |
Rambler 10-1 -lb | 2 |
A negatív kontroll növényt ΤΠ-puffcrrcl kezelt volfrámrészecskékkcl bombázott éretlen sziklevelekből regeneráltuk. b A Rambler pozitív kontroll egy korábban azonosított transzgenikus luccmanövény, amelyről igazolták, hogy a ncomicinfoszfotranszferáz gént tartalmazza cs expresszálja [Hill ct al., Bio/Tcchnology, 9, 373-377 (1991)].
Az utóbbi vizsgálat azt igazolta, hogy ha éretlen embriókat használunk szomatikus embriók kialakítására, majd ezeket az embriókat bombázzuk, akkor még több növény nyerhető ki. Továbbá, azt találtuk, hogy a keletkező növény megtartja a regenerálóképességét. Az elit variánsok nemcsak regenerálhatok, hanem meg is tartják ezt a képességüket.
Az is látható továbbá, hogy az éretlen embriók vagy szomatikus embriók bombázása nem érinti hátrányosan a regenerálást, és a DNS expresszálódik ezekben a regenerálható sejtekben és növényekben.
A fentiekben igazoltuk a Medicago sativa transzformálását, részecskebombázásos transzformálását, valamint azt, hogy éretlen sziklevelek alkalmazásával lehetséges a Medicago sativa javított regenerálása. Olyan variánsok regenerálását sikerült elérni, amelyek korábban nem regeneráltak, vagy nagyon gyengén regeneráltak. Tehát ezeknek a variánsoknak a transzformációja is lehetséges.
A találmány tehát a megjelölt célkitűzéseit elérte.
Claims (28)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Eljárás lucerna regenerálására, azzal jellemezve, hogy a lucerna éretlen sziklevele sejtjeinek szomatikus embriógenezisét iniciáljuk.
- 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az éretlen sziklevélsejtek legfeljebb 25 nappal beporzás utániak.
- 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az éretlen sziklevélsejtek 10-15 nappal beporzás utániak.
- 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az éretlen sziklevélsejtek 10 nappal beporzás utániak.
- 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a sziklevél áttetsző vagy világoszöld színű.
- 6. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a lucernának egy kiváló variánsát regeneráljuk.
- 7. A 6. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a variánst az 5. táblázatban felsoroltak közül választjuk.
- 8. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az éretlen sziklevelet a lucerna magembrióiból kivágjuk, a sziklevelet egy auxinnal érintkezésbe hozzuk, ezáltal a sejtosztódást és -növekedést indukáljuk, és így az éretlen sziklevél szomatikus embriógenezisét váltjuk ki.
- 9. Eljárás egy lucemanövény regenerációs képességének javítására, azzal jellemezve, hogy a növény éretlen szikleveleinek sejtjeiben szomatikus embriógenezist indukálunk, majd a szomatikus embriót érett lucemanövénnyé neveljük.
- 10. A 9. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a szomatikus embriógenezist nem regenerálható lucemanövény-variánsok éretlen sziklevelei sejtjeiben iniciáljuk, majd az embriót regenerálható növénnyé neveljük.
- 11. Eljárás idegen DNS expresszálására lucemasejtekben, azzal jellemezve, hogy:a DNS-t éretlen sziklevelekből nyert szomatikus embriók sejtjeiben expresszáljuk oly módon, hogy az idegen DNS-t hordozórészecskékhez kötjük; a részecskéket fizikailag a sejtek irányában felgyorsítjuk, és a sejteket így olyan részecskékkel bombázzuk, amelyeken úgy van rajta az idegen DNS, hogy annak legalább egy része bejut legalább a sejtek egy részének a belsejébe;majd igazoljuk az idegen DNS expresszióját a sejtekben.
- 12. A 11. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az idegen DNS-t lucernába transzformáljuk.
- 13. A 11. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a sejteket egyszer vagy kétszer bombázzuk.
- 14. A 11. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy legfeljebb 25 nappal beporzás utáni sziklevelek sejtjeit bombázzuk.
- 15. All. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a sejteket a sziklevelek 24-120 órás vízfelszívását követően bombázzuk.
- 16. A 11. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 10-15 nappal beporzás utáni sziklevelek sejtjeit bombázzuk.
- 17. A 11. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 10 nappal beporzás utáni sziklevelek sejtjeit bombázzuk.
- 18. A 11. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy áttetsző vagy világoszöld színű sziklevelek sejtjeit bombázzuk.
- 19. Eljárás idegen DNS lucemanövényekbe történő transzformálására, azzal jellemezve, hogy a DNS-t éretlen lucemasziklevelek sejtjeibe juttatjuk, és az idegen DNS-t tartalmazó sejteket lucemanövényekké neveljük.
- 20. A 19. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a DNS-t 10-15 nappal beporzás utáni sziklevelek sejtjeibe juttatjuk.
- 21. A 19. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a DNS-t 10 nappal beporzás utáni sziklevelek sejtjeibe juttatjuk.
- 22. A 19. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a DNS-t áttetsző vagy világoszöld színű sziklevelek sejtjeibe juttatjuk.
- 23. A 19. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az idegen DNS-t egy hordozórészecskéhez kötjük, a részecskét egy éretlen sziklevélbe lőjük, oly módon, hogy a DNS legalább egy része az éretlen szik9HU 216 646 Β levélsejtek belsejébe kerül, a szövetet növekedést elősegítő táptalajon tenyésztjük, majd a kapott megnövekedett szövetet olyan érett lucemanövénnyé neveljük, amely tartalmazza a bejuttatott DNS-t.
- 24. A 19. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az idegen gént Agrobacterium tumefaciensben fennmaradó plazmidba juttatjuk, majd az Agrobacterium tumefaciens sejteket az éretlen lucemasejtekkel úgy kombináljuk, hogy az idegen DNS a lucemasejtekbe transzformálódik.
- 25. A 19. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a DNS-t a lucerna kiváló termóképességű variánsába transzformáljuk.
- 26. Eljárás idegen DNS transzformálására lucernanövényekbe, azzal jellemezve, hogy az idegen DNS-t hordozórészecskéhez kötjük, a részecskét felgyorsítva éretlen sziklevélbe juttatjuk úgy, hogy a DNS legalább egy része a sziklevélsejtek belsejébe kerül, a szövetet növekedést elősegítő táptalajon tenyésztjük, majd a kapott megnövekedett szövetet olyan érett lucemanövénnyé neveljük, amely tartalmazza a bejuttatott DNS-t.
- 27. A 26. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a sziklevelet kivágjuk, és hagyjuk, hogy a sziklevél vizet szívjon magába 24-120 óra hosszat, a DNS-t bejuttatjuk a sziklevél sejtjeibe, majd a sejteket a DNS-t tartalmazó lucemanövényekké neveljük.
- 28. Eljárás idegen DNS lucemanövényekbe történő transzformálására, azzal jellemezve, hogy lucerna éretlen szikleveleinek a szomatikus embriógenezisét iniciáljuk, a DNS-t az embrió sejtjeibe juttatjuk be, majd a DNS-t tartalmazó sejteket lucemanövényekké neveljük.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US07/817,205 US5324646A (en) | 1992-01-06 | 1992-01-06 | Methods of regeneration of Medicago sativa and expressing foreign DNA in same |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
HU9300016D0 HU9300016D0 (en) | 1993-04-28 |
HUT66716A HUT66716A (en) | 1994-12-28 |
HU216646B true HU216646B (hu) | 1999-07-28 |
Family
ID=25222572
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
HU9300016A HU216646B (hu) | 1992-01-06 | 1993-01-06 | Eljárás Medicago Sativa regenerálására és idegen DNS expresszálására |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US5324646A (hu) |
EP (1) | EP0561082B1 (hu) |
JP (2) | JPH0698781A (hu) |
AT (1) | ATE176928T1 (hu) |
AU (2) | AU3026092A (hu) |
CA (1) | CA2084347C (hu) |
DE (1) | DE69228471T2 (hu) |
ES (1) | ES2129435T3 (hu) |
GR (1) | GR3030201T3 (hu) |
HU (1) | HU216646B (hu) |
NZ (1) | NZ245216A (hu) |
Families Citing this family (264)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6034298A (en) * | 1991-08-26 | 2000-03-07 | Prodigene, Inc. | Vaccines expressed in plants |
US5612487A (en) * | 1991-08-26 | 1997-03-18 | Edible Vaccines, Inc. | Anti-viral vaccines expressed in plants |
US5484719A (en) | 1991-08-26 | 1996-01-16 | Edible Vaccines, Inc. | Vaccines produced and administered through edible plants |
US20010053367A1 (en) * | 1991-08-26 | 2001-12-20 | Prodigene, Inc. | Vaccines expressed in plants |
US5324646A (en) * | 1992-01-06 | 1994-06-28 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Methods of regeneration of Medicago sativa and expressing foreign DNA in same |
EP0766743A2 (en) | 1994-06-10 | 1997-04-09 | Danisco A/S | Transformation of guar |
CA2232023A1 (en) * | 1995-09-15 | 1997-03-20 | John A. Howard | Expression cassettes and methods for delivery of animal vaccines |
WO1999000487A1 (en) | 1997-06-27 | 1999-01-07 | The Penn State Research Foundation | Methods and tissue culture media for inducing somatic embryogenesis, agrobacterium-mediated transformation and efficient regeneration of cacao plants |
US5990385A (en) * | 1997-11-10 | 1999-11-23 | Her Majesty The Queen In Right Of Canada, As Represented By The Minister Of Agriculture And Agri-Food | Protein production in transgenic alfalfa plants |
US6143951A (en) * | 1997-12-23 | 2000-11-07 | Agribio Tech., Inc. | Alfalfa line called WL-C290 and method for producing same |
US5973227A (en) * | 1998-05-06 | 1999-10-26 | University Of Saskatchewan | Flax transformation |
US6359195B1 (en) | 1999-07-01 | 2002-03-19 | W-L Research, Inc. | Alfalfa line called WL-W316 and method for producing same |
AU6677400A (en) | 1999-08-20 | 2001-03-19 | University Of Guelph | Improved method for the transformation and regeneration of plants |
GB0002814D0 (en) | 2000-02-09 | 2000-03-29 | Univ York | Nucleic acids and their uses |
WO2012030759A1 (en) | 2010-09-01 | 2012-03-08 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Vacuole targeting peptides and methods of use |
WO2003000863A2 (en) | 2001-06-22 | 2003-01-03 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Defensin polynucleotides and methods of use |
US7534934B2 (en) | 2002-02-20 | 2009-05-19 | J.R. Simplot Company | Precise breeding |
EP1585384B1 (en) | 2002-02-20 | 2012-07-11 | J.R. Simplot Company | Precise breeding |
AU2003254052B2 (en) | 2002-07-19 | 2008-06-12 | University Of South Carolina | Compositions and methods for the modulation of gene expression in plants |
CN101328484B (zh) | 2003-02-20 | 2012-08-08 | 阿则耐克斯公司 | δ-内毒素基因及其使用方法 |
CA2662092C (en) | 2003-04-29 | 2012-07-17 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Novel glyphosate-n-acetyltransferase (gat) genes |
US20060218673A9 (en) | 2003-10-09 | 2006-09-28 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Gene silencing |
US7015661B2 (en) * | 2004-03-15 | 2006-03-21 | Steris Inc. | Method and apparatus for accelerating charged particles |
BRPI0512904A (pt) | 2004-06-30 | 2008-04-15 | Pioneer Hi Bred Int | método para o aumento da resistência de plantas a patógenos de fungo |
BR122015026849C8 (pt) | 2004-07-02 | 2017-06-20 | Du Pont | cassete de expressão, microorganismo transformado, método para indução de resistência a patógeno de planta em uma planta, composição anti-patogênica e método para proteção de uma planta contra um patógeno de planta |
EP2003205B1 (en) | 2004-12-28 | 2013-05-01 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Improved grain quality through altered expression of seed proteins |
ES2692594T1 (es) | 2005-03-02 | 2018-12-04 | Instituto Nacional De Tecnologia Agropecuaria | Plantas de arroz resistentes a herbicidas, polinucleótidos que codifican proteínas de la subunidad grande de la acetohidroxiácido sintasa resistentes a herbicidas y métodos para su uso |
US7772464B2 (en) * | 2005-05-20 | 2010-08-10 | Cal/West Seeds | Agronomically adapted alfalfa plants with high levels of somatic embryogenesis |
US20060277618A1 (en) * | 2005-06-06 | 2006-12-07 | Dairyland Seed Co., Inc. | Methods for producing a hybrid seed product |
JP5265356B2 (ja) | 2005-07-01 | 2013-08-14 | ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア | 除草剤耐性ヒマワリ植物、除草剤耐性のアセトヒドロキシ酸シンターゼ大サブユニットタンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び使用方法 |
CN102174085A (zh) | 2005-11-10 | 2011-09-07 | 先锋高级育种国际公司 | Dof(具有一指的dna结合)序列和使用方法 |
CA2636070A1 (en) * | 2006-01-06 | 2007-08-02 | North Carolina State University | Cyst nematode resistant transgenic plants |
EP2007799A2 (en) | 2006-04-19 | 2008-12-31 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Isolated polynucleotide molecules corresponding to mutant and wild-type alleles of the maize d9 gene and methods of use |
ATE497539T1 (de) | 2006-05-16 | 2011-02-15 | Pioneer Hi Bred Int | Antimykotische polypeptide |
BRPI0712398A2 (pt) | 2006-05-17 | 2012-10-16 | Pioneer Hi-Bred International | minicromossomo artificial de planta, planta de milho, polinucleotìdeo isolado, construção recombinante, planta transgênica de milho e método para produzir uma planta transgênica de milho compreendendo um minicromossomo artificial de planta tendo centrÈmero funcional |
WO2008045460A2 (en) | 2006-10-05 | 2008-04-17 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Maize microrna sequences |
US8153863B2 (en) | 2007-03-23 | 2012-04-10 | New York University | Transgenic plants expressing GLK1 and CCA1 having increased nitrogen assimilation capacity |
NZ580107A (en) | 2007-04-04 | 2012-08-31 | Basf Se | Herbicide-resistant brassica plants and methods of use |
EP2561749A1 (en) | 2007-04-04 | 2013-02-27 | BASF Plant Science GmbH | AHAS mutants |
BRPI0811242A2 (pt) | 2007-05-25 | 2014-11-04 | Cropdesign Nv | Polinucleotídeo isolado, cassete de expressão, planta, métodos para aumentar o nível de um polipeptídeo em uma planta, e para aumentar o rendimento em uma planta, e, polipeptídeo isolado |
US8912392B2 (en) | 2007-06-29 | 2014-12-16 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Methods for altering the genome of a monocot plant cell |
US8937217B2 (en) | 2007-12-18 | 2015-01-20 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Down-regulation of gene expression using artificial microRNAs |
US8115055B2 (en) | 2007-12-18 | 2012-02-14 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Down-regulation of gene expression using artificial microRNAs |
US8367895B2 (en) | 2008-01-17 | 2013-02-05 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods for the suppression of target polynucleotides from the family aphididae |
US8847013B2 (en) | 2008-01-17 | 2014-09-30 | Pioneer Hi Bred International Inc | Compositions and methods for the suppression of target polynucleotides from lepidoptera |
US8487159B2 (en) * | 2008-04-28 | 2013-07-16 | Metabolix, Inc. | Production of polyhydroxybutyrate in switchgrass |
US8431775B2 (en) | 2008-12-04 | 2013-04-30 | Pioneer Hi Bred International Inc | Methods and compositions for enhanced yield by targeted expression of knotted1 |
US20120058523A1 (en) | 2009-02-17 | 2012-03-08 | Edenspace Systems Corporation | Tempering of cellulosic biomass |
CN102439032B (zh) | 2009-05-04 | 2015-07-22 | 先锋国际良种公司 | 通过调节ap2转录因子增加植物中的产量 |
US20120079627A1 (en) | 2009-05-29 | 2012-03-29 | Edenspace Systems Corporation | Plant gene regulatory elements |
MX2011013224A (es) | 2009-06-09 | 2012-06-01 | Pioneer Hi Bred Int | Promotor de endospermo temprano y metodos de uso. |
EP2462222B1 (en) | 2009-08-05 | 2017-05-24 | Chromocell Corporation | Improved plants, microbes, and organisms |
WO2011021171A1 (en) | 2009-08-21 | 2011-02-24 | Beeologics, Llc | Preventing and curing beneficial insect diseases via plant transcribed molecules |
EP2470662B1 (en) | 2009-08-28 | 2016-08-10 | E. I. du Pont de Nemours and Company | Compositions and methods to control insect pests |
BR112012005591A2 (pt) | 2009-09-15 | 2015-09-01 | Metabolix Inc | Geração de sementes oleaginosas produzindo alto poliidroxibutirato. |
US8778672B2 (en) | 2009-10-26 | 2014-07-15 | Pioneer Hi Bred International Inc | Somatic ovule specific promoter and methods of use |
US20110167516A1 (en) | 2009-12-30 | 2011-07-07 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Methods and compositions for the introduction and regulated expression of genes in plants |
CN102939383B (zh) | 2009-12-30 | 2015-04-29 | 先锋国际良种公司 | 用于靶向多核苷酸修饰的方法和组合物 |
CA2788198C (en) | 2010-01-26 | 2021-01-19 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Hppd-inhibitor herbicide tolerance |
AU2011243085A1 (en) | 2010-04-23 | 2012-10-11 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Gene switch compositions and methods of use |
AR080745A1 (es) | 2010-05-06 | 2012-05-02 | Du Pont | Gen y proteina acc (acido 1-aminociclopropano-1-carboxilico) sintasa 3 de maiz y sus usos |
FR2961375B1 (fr) | 2010-06-16 | 2016-05-13 | Inst De Rech Pour Le Dev (Ird) | Surproduction d'acide jasmonique dans des plantes transgeniques |
BR112012032907A2 (pt) | 2010-06-25 | 2017-06-13 | Du Pont | métodos para selecionar e identificar uma planta de mais e planta de mais |
CN103237894A (zh) | 2010-08-13 | 2013-08-07 | 先锋国际良种公司 | 包含具有羟基苯丙酮酸双加氧酶(hppd)活性的序列的组合物和方法 |
CA2807785A1 (en) | 2010-08-23 | 2012-03-01 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Novel defensin variants and methods of use |
WO2012037324A2 (en) | 2010-09-15 | 2012-03-22 | Metabolix, Inc. | Increasing carbon flow for polyhydroxybutyrate production in biomass crops |
MX2013007087A (es) | 2010-12-22 | 2013-07-29 | Du Pont | Promotor viral, truncamientos de este y metodos de uso. |
US8895716B2 (en) | 2010-12-22 | 2014-11-25 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Viral promoter, truncations thereof, and methods of use |
US8822762B2 (en) | 2010-12-28 | 2014-09-02 | Pioneer Hi Bred International Inc | Bacillus thuringiensis gene with lepidopteran activity |
US20140137292A1 (en) | 2011-01-14 | 2014-05-15 | University Of Florida Research Foundation Inc. | Citrus trees with resistance to citrus canker |
EP2670231A4 (en) | 2011-02-01 | 2015-04-29 | Colorado Wheat Res Foundation Inc | HERBICIDE-RESISTANT PLANTS WITH ACTIVITY OF ACETYL-COENZYME TO CARBOXYLASE |
WO2012109515A1 (en) | 2011-02-11 | 2012-08-16 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Synthetic insecticidal proteins active against corn rootworm |
WO2012112411A1 (en) | 2011-02-15 | 2012-08-23 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Root-preferred promoter and methods of use |
US8878007B2 (en) | 2011-03-10 | 2014-11-04 | Pioneer Hi Bred International Inc | Bacillus thuringiensis gene with lepidopteran activity |
EA201391373A1 (ru) | 2011-03-23 | 2014-07-30 | Пайонир Хай-Бред Интернэшнл, Инк. | Способы получения сложного локуса трансгенных признаков |
BR112013030638A2 (pt) | 2011-03-30 | 2018-08-07 | Univ Mexico Nac Autonoma | polipeptídeo cry mutante, polinucleotídeo, cassete de expressão, célula hospedeira, planta, semente transgênica, método para proteger uma planta contra uma praga de inseto, composição pesticida, micro-organismo, método para controlar uma praga de inseto de uma área de cultivo |
CN103597080B (zh) | 2011-04-15 | 2017-07-21 | 先锋国际良种公司 | 自繁殖的杂交植物 |
US9062317B2 (en) | 2011-05-09 | 2015-06-23 | E I Du Pont De Nemours And Company | Methods and compositions for silencing gene families using artificial microRNAs |
US9150625B2 (en) | 2011-05-23 | 2015-10-06 | E I Du Pont De Nemours And Company | Chloroplast transit peptides and methods of their use |
WO2013066423A2 (en) | 2011-06-21 | 2013-05-10 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Methods and compositions for producing male sterile plants |
US20130097734A1 (en) | 2011-07-12 | 2013-04-18 | Two Blades Foundation | Late blight resistance genes |
WO2013019411A1 (en) | 2011-08-03 | 2013-02-07 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Methods and compositions for targeted integration in a plant |
US11377663B1 (en) | 2011-08-30 | 2022-07-05 | Monsanto Technology Llc | Genetic regulatory elements |
AU2012301912A1 (en) | 2011-08-31 | 2014-03-06 | E. I. Dupont De Nemours & Company | Methods for tissue culture and transformation of sugarcane |
WO2013063344A1 (en) | 2011-10-28 | 2013-05-02 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Engineered pep carboxylase variants for improved plant productivity |
CA2850390A1 (en) | 2011-10-28 | 2013-05-02 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Methods and compositions for silencing genes using artificial micrornas |
US20140182011A1 (en) | 2011-11-03 | 2014-06-26 | The University Of Hong Kong | Methods Using Acyl-Coenzyme A-Binding Proteins to Enchance Drought Tolerance in Genetically Modified Plants |
FR2984076A1 (fr) | 2011-12-15 | 2013-06-21 | Inst Rech Developpement Ird | Surproduction de jasmonates dans des plantes transgeniques |
CA2860692A1 (en) | 2012-01-06 | 2013-07-11 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | A method to screen plants for genetic elements inducing parthenogenesis in plants |
US9006515B2 (en) | 2012-01-06 | 2015-04-14 | Pioneer Hi Bred International Inc | Pollen preferred promoters and methods of use |
EP2800816A1 (en) | 2012-01-06 | 2014-11-12 | Pioneer Hi-Bred International Inc. | Ovule specific promoter and methods of use |
CA2860611A1 (en) | 2012-01-06 | 2013-07-11 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods for the expression of a sequence in a reproductive tissue of a plant |
CA2862117A1 (en) | 2012-01-23 | 2013-08-01 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Down-regulation of gene expression using artificial micrornas for silencing fatty acid biosynthestic genes |
WO2013111018A1 (en) | 2012-01-26 | 2013-08-01 | Norfolk Plant Sciences, Ltd. | Methods for increasing the anthocyanin content of citrus fruit |
AR089793A1 (es) | 2012-01-27 | 2014-09-17 | Du Pont | Metodos y composiciones para generar locus de rasgos transgenicos complejos |
BR112014027468A2 (pt) | 2012-05-04 | 2017-06-27 | Du Pont | polinucleotídeo isolado ou recombinante, construção de dna recombinante, célula, planta, explante vegetal, semente transgênica, polipeptídeo isolado, composição, métodos de produção de meganuclease, de introdução de rompimento e de integração de um polinucleotídeo. |
US20150119325A1 (en) | 2012-05-29 | 2015-04-30 | North Carolina Central University | Methods for the production of cytoprotective asialo-erythropoietin in plants and its purification from plant tissues |
US9347105B2 (en) | 2012-06-15 | 2016-05-24 | Pioneer Hi Bred International Inc | Genetic loci associated with resistance of soybean to cyst nematode and methods of use |
WO2013188291A2 (en) | 2012-06-15 | 2013-12-19 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Methods and compositions involving als variants with native substrate preference |
US9587247B2 (en) | 2012-08-16 | 2017-03-07 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Plants with altered phytochromes |
US20150240253A1 (en) | 2012-08-30 | 2015-08-27 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Long intergenic non-coding rnas in maize |
WO2014059155A1 (en) | 2012-10-11 | 2014-04-17 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Guard cell promoters and uses thereof |
CN104884625A (zh) | 2012-10-15 | 2015-09-02 | 先锋国际良种公司 | 增强cry内毒素的活性的方法和组合物 |
CA2891989A1 (en) | 2012-11-23 | 2014-05-30 | Nicole Van Der Weerden | Anti-pathogenic methods |
US20140173781A1 (en) | 2012-12-13 | 2014-06-19 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Methods and compositions for producing and selecting transgenic wheat plants |
US20150351390A1 (en) | 2012-12-21 | 2015-12-10 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods for auxin-analog conjugation |
CN105473722A (zh) | 2013-03-11 | 2016-04-06 | 先锋国际良种公司 | 用于改善植物中化学信号扩散的方法及组合物 |
CA2905399A1 (en) | 2013-03-11 | 2014-10-09 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Methods and compositions employing a sulfonylurea-dependent stabilization domain |
US9273322B2 (en) | 2013-03-12 | 2016-03-01 | Pioneer Hi Bred International Inc | Root-preferred promoter and methods of use |
US9803214B2 (en) | 2013-03-12 | 2017-10-31 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Breeding pair of wheat plants comprising an MS45 promoter inverted repeat that confers male sterility and a construct that restores fertility |
RU2694686C2 (ru) | 2013-03-12 | 2019-07-16 | Е.И.Дюпон Де Немур Энд Компани | Способы идентификации вариантных сайтов распознавания для редкощепящих сконструированных средств для индукции двунитевого разрыва, и композиции с ними, и их применения |
US9243258B2 (en) | 2013-03-12 | 2016-01-26 | Pioneer Hi Bred International Inc | Root-preferred promoter and methods of use |
US9416368B2 (en) | 2013-03-13 | 2016-08-16 | E I Du Pont De Nemours And Company | Identification of P. pachyrhizi protein effectors and their use in producing Asian soybean rust (ASR) resistant plants |
AU2014236154A1 (en) | 2013-03-14 | 2015-09-17 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions having dicamba decarboxylase activity and methods of use |
CN108998471B (zh) | 2013-03-14 | 2022-11-04 | 先锋国际良种公司 | 用以防治昆虫害虫的组合物和方法 |
BR112015023286A2 (pt) | 2013-03-14 | 2018-03-06 | Arzeda Corp | polipeptídeo recombinante com atividade da dicamba descarboxilase, construto de polinucleotídeo, célula, método de produção de uma célula hospedeira compreendendo um polinucleotídeo heterólogo que codifica um polipeptídeo tendo atividade da dicamba descarboxilase, método para descarboxilar dicamba, um derivado de dicamba ou um metabolito de dicamba, método para a detecção de um polipeptideo e método para a detecção da presença de um polinucleotideo que codifica um polipeptideo tendo atividade da dicamba descarboxilase |
US10023877B2 (en) | 2013-03-15 | 2018-07-17 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | PHI-4 polypeptides and methods for their use |
US20140380524A1 (en) | 2013-06-19 | 2014-12-25 | The University Of Hong Kong | Methods of using 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coa synthase to enhance growth and/or seed yield of genetically modified plants |
US11459579B2 (en) | 2013-07-09 | 2022-10-04 | Board Of Trustees Of Michigan State University | Transgenic plants produced with a K-domain, and methods and expression cassettes related thereto |
WO2015006105A1 (en) | 2013-07-09 | 2015-01-15 | Board Of Trustees Of Michigan State University | Transgenic plants produced with a k-domain, and methods and expression cassettes related thereto |
CA3184796A1 (en) | 2013-08-08 | 2015-02-12 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal polypeptides having broad spectrum activity and uses thereof |
EA030896B1 (ru) | 2013-08-16 | 2018-10-31 | Пайонир Хай-Бред Интернэшнл, Инк. | Инсектицидные белки и способы их применения |
AU2014308898B2 (en) | 2013-08-22 | 2020-05-14 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Genome modification using guide polynucleotide/Cas endonuclease systems and methods of use |
CA2923629A1 (en) | 2013-09-11 | 2015-03-19 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Plant regulatory elements and methods of use thereof |
ES2937045T3 (es) | 2013-09-13 | 2023-03-23 | Pioneer Hi Bred Int | Proteínas insecticidas y métodos para su uso |
WO2015057600A1 (en) | 2013-10-18 | 2015-04-23 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Glyphosate-n-acetyltransferase (glyat) sequences and methods of use |
WO2015066011A2 (en) | 2013-10-29 | 2015-05-07 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Self-reproducing hybrid plants |
US20170166920A1 (en) | 2014-01-30 | 2017-06-15 | Two Blades Foundation | Plants with enhanced resistance to phytophthora |
CN117903266A (zh) | 2014-02-07 | 2024-04-19 | 先锋国际良种公司 | 杀昆虫蛋白及其使用方法 |
CN114763376A (zh) | 2014-02-07 | 2022-07-19 | 先锋国际良种公司 | 杀昆虫蛋白及其使用方法 |
CN103843663B (zh) * | 2014-03-14 | 2015-07-15 | 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 | 一种促进苜蓿组培苗生根的方法 |
WO2015153932A1 (en) | 2014-04-02 | 2015-10-08 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Improved strategy to engineer phytochromes with improved action in crop fields |
WO2015150465A2 (en) | 2014-04-03 | 2015-10-08 | Basf Se | Plants having increased tolerance to herbicides |
WO2015171603A1 (en) | 2014-05-06 | 2015-11-12 | Two Blades Foundation | Methods for producing plants with enhanced resistance to oomycete pathogens |
US20170145353A1 (en) * | 2014-07-08 | 2017-05-25 | Novozymes A/S | Co-Granulate of Enzyme and Bleach Catalyst |
US11060101B2 (en) | 2014-07-10 | 2021-07-13 | Benson Hill, Inc. | Compositions and methods for increasing plant growth and yield |
AU2015288157A1 (en) | 2014-07-11 | 2017-01-19 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Compositions and methods for producing plants resistant to glyphosate herbicide |
CA2955828A1 (en) | 2014-08-08 | 2016-02-11 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Ubiquitin promoters and introns and methods of use |
US11560568B2 (en) | 2014-09-12 | 2023-01-24 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Generation of site-specific-integration sites for complex trait loci in corn and soybean, and methods of use |
US20170247719A1 (en) | 2014-09-17 | 2017-08-31 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods to control insect pests |
BR112017007932A2 (pt) | 2014-10-16 | 2018-01-23 | Du Pont | proteínas inseticidas e métodos para uso das mesmas |
BR112017007818B1 (pt) | 2014-10-16 | 2022-12-13 | Pioneer Hi-Bred International, Inc | Molécula de ácido nucleico isolada, construto de dna, célula hospedeira, método para a obtenção de uma célula vegetal, método para a obtenção de uma planta, polipeptídeo isolado, composição, método para controlar uma população de pragas de lepidóptero ou coleóptero, método para exterminar uma praga de lepidóptero, método para produzir um polipeptídeo com atividade pesticida, método para proteger uma planta contra uma praga |
CA2963555A1 (en) | 2014-10-16 | 2016-04-21 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal polypeptides having improved activity spectrum and uses thereof |
CA2971425A1 (en) | 2014-12-16 | 2016-06-23 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Restoration of male fertility in wheat |
BR112017012900A2 (pt) | 2014-12-19 | 2018-02-06 | Agbiome Inc | polinucleotídeo isolado ou um dna recombinante, célula de planta, planta, explante, semente, método para produzir uma célula de planta, método para controlar ervas daninhas, célula hospedeira |
EA201791613A1 (ru) | 2015-01-21 | 2017-12-29 | Басф Се | Растения с повышенной устойчивостью к гербицидам |
CA2985991A1 (en) | 2015-02-25 | 2016-09-01 | Andrew Mark CIGAN | Composition and methods for regulated expression of a guide rna/cas endonuclease complex |
US10876132B2 (en) | 2015-03-11 | 2020-12-29 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal combinations of PIP-72 and methods of use |
CN107429258A (zh) | 2015-03-19 | 2017-12-01 | 先锋国际良种公司 | 用于加速的性状渐渗的方法和组合物 |
WO2016164810A1 (en) | 2015-04-08 | 2016-10-13 | Metabolix, Inc. | Plants with enhanced yield and methods of construction |
WO2016182847A1 (en) | 2015-05-08 | 2016-11-17 | Benson Hill Biosystems, Inc. | Methods for increasing plant growth and yield by using an ictb sequence |
CN107709564B (zh) | 2015-05-09 | 2021-11-02 | 双刃基金会 | 来自少花龙葵的抗晚疫病基因及使用方法 |
WO2016186946A1 (en) | 2015-05-15 | 2016-11-24 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Rapid characterization of cas endonuclease systems, pam sequences and guide rna elements |
WO2016186986A1 (en) | 2015-05-19 | 2016-11-24 | Pioneer Hi Bred International Inc | Insecticidal proteins and methods for their use |
BR112017027382A2 (pt) | 2015-06-16 | 2018-08-28 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | elemento de silenciamento, construto de dna, construto de expressão, cassete de expressão, célula hospedeira, composição, célula vegetal, planta ou parte de planta, semente transgênica, método para controlar um inseto-praga de planta, kit para controlar insetos-praga |
CN116003550A (zh) | 2015-08-06 | 2023-04-25 | 先锋国际良种公司 | 植物来源的杀昆虫蛋白及其使用方法 |
WO2017062790A1 (en) | 2015-10-09 | 2017-04-13 | Two Blades Foundation | Cold shock protein receptors and methods of use |
WO2017066175A1 (en) | 2015-10-12 | 2017-04-20 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Protected dna templates for gene modification and increased homologous recombination in cells and methods of use |
WO2021257206A1 (en) | 2020-06-17 | 2021-12-23 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Generating maize plants with enhanced resistance to northern leaf blight |
WO2017066597A1 (en) | 2015-10-16 | 2017-04-20 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Generating maize plants with enhanced resistance to northern leaf blight |
JP2018531024A (ja) | 2015-10-20 | 2018-10-25 | パイオニア ハイ−ブレッド インターナショナル, イン | マーカーフリーゲノム改変のための方法および組成物 |
WO2017070458A2 (en) | 2015-10-23 | 2017-04-27 | Donald Danforth Plant Science Center | Genes encoding c4 transporter proteins for use in increasing crop plant yield |
WO2017079026A1 (en) | 2015-11-06 | 2017-05-11 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Generation of complex trait loci in soybean and methods of use |
BR112018011174A2 (pt) | 2015-11-30 | 2018-11-21 | Du Pont | polinucleotídeo recombinante, construto de dna, célula heteróloga, planta transgênica ou célula de planta, semente da planta transgênica, método para expressar um polinucleotídeo em uma planta e método para aprimorar a transcrição de um polinucleotídeo em uma célula hospedeira |
DK3387134T3 (da) | 2015-12-11 | 2020-12-21 | Danisco Us Inc | Fremgangsmåder og sammensætninger til øget nukleasemedieret genommodifikation og reducerede virkninger uden for målstedet |
US20200263165A1 (en) | 2015-12-18 | 2020-08-20 | Danisco Us Inc. | Methods and compositions for polymerase ii (pol-ii) based guide rna expression |
EP3708665A1 (en) | 2015-12-18 | 2020-09-16 | Danisco US Inc. | Methods and compositions for t-rna based guide rna expression |
WO2017112006A1 (en) | 2015-12-22 | 2017-06-29 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Tissue-preferred promoters and methods of use |
US20190338302A1 (en) | 2016-02-04 | 2019-11-07 | Yield10 Bioscience, Inc. | Transgenic land plants comprising a putative transporter protein of an edible eukaryotic algae |
US9896696B2 (en) | 2016-02-15 | 2018-02-20 | Benson Hill Biosystems, Inc. | Compositions and methods for modifying genomes |
WO2017155715A1 (en) | 2016-03-11 | 2017-09-14 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Novel cas9 systems and methods of use |
EP3699280A3 (en) | 2016-03-11 | 2020-11-18 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Novel cas9 systems and methods of use |
WO2017155714A1 (en) | 2016-03-11 | 2017-09-14 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Novel cas9 systems and methods of use |
BR112018070754A2 (pt) | 2016-04-14 | 2019-02-12 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | polipeptídeos, polinucleotídeos, construção de dna, célula hospedeira, plantas ou célula vegetal, semente, composição, método para controlar uma população de pragas lepidópteras, método para exterminar uma praga de lepidóptero, método para produzir um polipeptídeo com atividade pesticida e método para proteger uma planta contra uma praga de inseto |
AR108284A1 (es) | 2016-04-19 | 2018-08-08 | Pioneer Hi Bred Int | Combinaciones insecticidas de polipéptidos que tienen espectro de actividad mejorado y usos de éstas |
EP3451837B1 (en) | 2016-05-04 | 2021-08-25 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
WO2017216704A1 (en) | 2016-06-13 | 2017-12-21 | Benson Hill Biosystems, Inc. | Increasing plant growth and yield by using a phenylalanine ammonia lyase sequence |
WO2017218185A1 (en) | 2016-06-14 | 2017-12-21 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Use of cpf1 endonuclease for plant genome modifications |
CA3022858A1 (en) | 2016-06-16 | 2017-12-21 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods to control insect pests |
US20190100745A1 (en) | 2016-06-20 | 2019-04-04 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Novel cas systems and methods of use |
CA3028946A1 (en) | 2016-06-22 | 2017-12-28 | Benson Hill Biosystems, Inc. | Increasing plant growth and yield by using an adp-glucose pyrophosphorylase sequence |
EP3475428A1 (en) | 2016-06-23 | 2019-05-01 | Benson Hill Biosystems, Inc. | Increasing plant growth and yield by using a psan sequence |
EP3475430B1 (en) | 2016-06-24 | 2022-06-01 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Plant regulatory elements and methods of use thereof |
CN109563519A (zh) | 2016-06-29 | 2019-04-02 | 本森希尔生物系统股份有限公司 | 使用硫氧还蛋白序列增加植物生长和产量 |
WO2018005411A1 (en) | 2016-07-01 | 2018-01-04 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins from plants and methods for their use |
WO2018013333A1 (en) | 2016-07-12 | 2018-01-18 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods to control insect pests |
CA3030803A1 (en) | 2016-07-15 | 2018-01-18 | Basf Se | Plants having increased tolerance to herbicides |
WO2018083584A1 (en) | 2016-10-31 | 2018-05-11 | Benson Hill Biosystems, Inc. | Increasing plant growth and yield by using an erf transcription factor sequence |
EP4050021A1 (en) | 2016-11-01 | 2022-08-31 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
BR112019012339A2 (pt) | 2016-12-14 | 2019-11-26 | Pioneer Hi Bred Int | polipeptídeo inseticida recombinante, composição, construto de dna, célula hospedeira, planta transgênica, método para inibir o crescimento ou extermínio de uma praga de inseto ou população de praga, polipeptídeo ipd093 quimérico e proteína de fusão |
EP3555299A1 (en) | 2016-12-16 | 2019-10-23 | Two Blades Foundation | Late blight resistance genes and methods of use |
MX2019007469A (es) | 2016-12-20 | 2020-02-07 | Basf Agro Bv | Plantas que tienen una mayor tolerancia a herbicidas. |
MX2019007491A (es) | 2016-12-22 | 2019-09-06 | Pioneer Hi Bred Int | Proteinas insecticidas y metodos para su uso. |
WO2018140214A1 (en) | 2017-01-24 | 2018-08-02 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Nematicidal protein from pseudomonas |
WO2018148001A1 (en) | 2017-02-08 | 2018-08-16 | Pioneer Hi-Bred International Inc | Insecticidal combinations of plant derived insecticidal proteins and methods for their use |
AU2018224065B2 (en) | 2017-02-22 | 2021-11-11 | Yield10 Bioscience, Inc. | Transgenic land plants comprising enhanced levels of mitochondrial transporter protein |
WO2018202800A1 (en) | 2017-05-03 | 2018-11-08 | Kws Saat Se | Use of crispr-cas endonucleases for plant genome engineering |
UA126807C2 (uk) | 2017-05-11 | 2023-02-08 | Піонір Хай-Бред Інтернешнл, Інк. | Інсектицидний білок і спосіб його застосування |
WO2018209209A1 (en) | 2017-05-12 | 2018-11-15 | Two Blades Foundation | Methods for screening proteins for pattern recognition receptor function in plant protoplasts |
WO2018215915A1 (en) | 2017-05-22 | 2018-11-29 | Benson Hill Biosystems, Inc. | Increasing plant growth and yield by using an abc transporter sequence |
EP3630982A1 (en) | 2017-05-26 | 2020-04-08 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal polypeptides having improved activity spectrum and uses thereof |
CN111164206A (zh) | 2017-07-13 | 2020-05-15 | 本森希尔股份有限公司 | 使用铁氧还蛋白-硫氧还蛋白还原酶增加植物生长和产量 |
US11261458B2 (en) | 2017-07-28 | 2022-03-01 | Two Blades Foundation | Potyvirus resistance genes and methods of use |
KR20240017981A (ko) | 2017-08-09 | 2024-02-08 | 라이스텍, 인크. | 게놈을 변형시키기 위한 조성물 및 방법 |
CN111108206A (zh) | 2017-08-17 | 2020-05-05 | 本森希尔股份有限公司 | 使用谷氧还蛋白增进植物生长和产量 |
EP3675623A1 (en) | 2017-08-29 | 2020-07-08 | KWS SAAT SE & Co. KGaA | Improved blue aleurone and other segregation systems |
CN111328347A (zh) | 2017-09-11 | 2020-06-23 | R.J.雷诺兹烟草公司 | 通过与p21共表达来增加植物中感兴趣基因的表达的方法和组合物 |
BR112020006045A2 (pt) | 2017-09-25 | 2020-10-06 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | molécula de ácido nucleico, cassete de expressão, vetor, célula vegetal, planta, semente da planta, método para produzir uma planta transgênica, planta transgênica, semente da planta transgênica, método para aprimorar a eficiência de maturação de embrião somático e método para produzir uma planta dicotiledônea transgênica ou uma planta gimnosperma transgênica |
BR112020007343A2 (pt) | 2017-10-13 | 2020-10-06 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | método para gerar um embrião de planta haploide, micrósporo embriogênico, embrioide ou tecido embriogênico, célula vegetal compreendendo um cassete de expressão, população de células vegetais |
US20200165626A1 (en) | 2017-10-13 | 2020-05-28 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Virus-induced gene silencing technology for insect control in maize |
US20200291416A1 (en) | 2017-11-21 | 2020-09-17 | Benson Hill, Inc. | Increasing plant growth and yield by using a quinone oxidoreductase |
WO2019108619A1 (en) | 2017-11-28 | 2019-06-06 | Two Blades Foundation | Methods and compositions for enhancing the disease resistance of plants |
US20210002658A1 (en) | 2017-12-19 | 2021-01-07 | Benson Hill, Inc. | Modified agpase large subunit sequences and methods for detection of precise genome edits |
CN111630061A (zh) | 2017-12-19 | 2020-09-04 | 先锋国际良种公司 | 杀昆虫多肽及其用途 |
US11732271B2 (en) | 2018-01-12 | 2023-08-22 | The Sainsbury Laboratory | Stem rust resistance genes and methods of use |
CA3087460A1 (en) | 2018-01-17 | 2019-07-25 | Basf Se | Plants having increased tolerance to herbicides |
US20210002657A1 (en) | 2018-03-02 | 2021-01-07 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Plant health assay |
EP3768845A1 (en) | 2018-03-23 | 2021-01-27 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Methods of identifying, selecting, and producing disease resistant crops |
WO2019203942A1 (en) | 2018-04-18 | 2019-10-24 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Methods of identifying, selecting, and producing bacterial leaf blight resistant rice |
WO2019215648A1 (en) | 2018-05-09 | 2019-11-14 | Benson Hill Biosystems, Inc. | Increasing plant growth and yield by using a duf2996 domain-containing protein |
BR112020023800A2 (pt) | 2018-05-22 | 2021-02-23 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | elementos reguladores de planta e métodos de uso dos mesmos |
BR112020024837A2 (pt) | 2018-06-06 | 2021-03-02 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | métodos de identificação, seleção e produção de safras resistentes à ferrugem polissora |
WO2019239373A1 (en) | 2018-06-14 | 2019-12-19 | Benson Hill Biosystems, Inc. | Increasing plant growth and yield by using a ring/u-box superfamily protein |
EP3833747A1 (en) | 2018-06-28 | 2021-06-16 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Methods for selecting transformed plants |
WO2020005667A1 (en) | 2018-06-29 | 2020-01-02 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods for editing an endogenous nac gene in plants |
AU2019332792A1 (en) | 2018-08-29 | 2021-01-28 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
AU2019335193B2 (en) | 2018-09-04 | 2023-04-20 | Yield10 Bioscience, Inc. | Genetically engineered land plants that express an increased seed yield protein and/or an increased seed yield RNA |
CN113412333A (zh) | 2019-03-11 | 2021-09-17 | 先锋国际良种公司 | 用于克隆植物生产的方法 |
EP3947425A1 (en) | 2019-03-27 | 2022-02-09 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Plant explant transformation |
US20220154193A1 (en) | 2019-03-28 | 2022-05-19 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Modified agrobacterium strains and use thereof for plant transformation |
CA3131547A1 (en) | 2019-04-18 | 2020-10-22 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Embryogenesis factors for cellular reprogramming of a plant cell |
US20220251595A1 (en) | 2019-06-27 | 2022-08-11 | Two Blades Foundation | Engineered atrlp23 pattern recognition receptors and methods of use |
US20210071193A1 (en) | 2019-07-12 | 2021-03-11 | The Regents Of The University Of California | Plants with enhanced resistance to bacterial pathogens |
CN114269934A (zh) | 2019-08-23 | 2022-04-01 | 先锋国际良种公司 | 鉴定、选择和产生炭疽茎腐病抗性作物的方法 |
EP4025697A1 (en) | 2019-09-05 | 2022-07-13 | Benson Hill, Inc. | Compositions and methods for modifying genomes |
CN111153974A (zh) | 2020-01-15 | 2020-05-15 | 华中农业大学 | 玉米抗病基因和分子标记及其应用 |
BR112022020714A2 (pt) | 2020-04-15 | 2022-12-20 | Pioneer Hi Bred Int | Identificação de gene efetor de patógeno vegetal e de resistência à doença, composições e métodos de uso |
CA3186978A1 (en) | 2020-07-14 | 2022-01-20 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
WO2022035653A2 (en) | 2020-08-10 | 2022-02-17 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Compositions and methods for enhancing resistance to northern leaf blight in maize |
BR112023002603A2 (pt) | 2020-08-10 | 2023-04-04 | Pioneer Hi Bred Int | Elementos reguladores de plantas e métodos de uso dos mesmos |
US20240002870A1 (en) | 2020-09-30 | 2024-01-04 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Rapid transformation of monocot leaf explants |
CN116635529A (zh) | 2020-10-21 | 2023-08-22 | 先锋国际良种公司 | 双单倍体诱导物 |
EP4231816A1 (en) | 2020-10-21 | 2023-08-30 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Parthenogenesis factors and methods of using same |
AR124108A1 (es) | 2020-11-20 | 2023-02-15 | Agbiome Inc | Composiciones y métodos para la incorporación de adn en el genoma de un organismo |
JP2024508844A (ja) | 2021-02-26 | 2024-02-28 | シグナルケム・プランテック・コーポレイション | レッドレタスからポリフェノールを大量に生成する方法及びその使用 |
CN115216554A (zh) | 2021-04-16 | 2022-10-21 | 华中农业大学 | 植物病原体效应子和疾病抗性基因鉴定、组合物和使用方法 |
CN117917951A (zh) | 2021-05-11 | 2024-04-23 | 双刃基金会 | 用于抗病性功能测试的植物抗病基因文库的制备方法 |
CN113349057B (zh) * | 2021-07-12 | 2022-11-29 | 锡林郭勒职业学院 | 一种盐碱地提高牧草幼苗耐盐生长能力的方法 |
WO2023012342A1 (en) | 2021-08-06 | 2023-02-09 | Kws Vegetables B.V. | Durable downy mildew resistance in spinach |
CA3233104A1 (en) | 2021-09-21 | 2023-03-30 | Benson Hill, Inc. | Compositions and methods comprising plants with reduced lipoxygenase and/or desaturase activities |
AU2022356378A1 (en) | 2021-09-30 | 2024-05-02 | Two Blades Foundation | Plant disease resistance genes against stem rust and methods of use |
WO2023067574A1 (en) | 2021-10-21 | 2023-04-27 | Benson Hill, Inc. | Compositions and methods comprising plants with modified sugar content |
CA3237962A1 (en) | 2021-11-09 | 2023-05-19 | Benson Hill, Inc. | Promoter elements for improved polynucleotide expression in plants |
WO2023111961A1 (en) | 2021-12-15 | 2023-06-22 | Benson Hill, Inc. | Spatio-temporal promoters for polynucleotide expression in plants |
WO2023119135A1 (en) | 2021-12-21 | 2023-06-29 | Benson Hill, Inc. | Compositions and methods for modifying genomes |
EP4234700A3 (en) | 2022-02-25 | 2023-11-08 | Benson Hill, Inc. | Compositions and methods comprising plants with modified anthocyanin content |
WO2023183918A1 (en) | 2022-03-25 | 2023-09-28 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Methods of parthenogenic haploid induction and haploid chromosome doubling |
WO2023187758A1 (en) | 2022-04-01 | 2023-10-05 | Benson Hill, Inc. | Compositions and methods comprising plants with modified organ size and/or protein composition |
WO2023187757A1 (en) | 2022-04-01 | 2023-10-05 | Benson Hill, Inc. | Compositions and methods comprising plants with modified saponin content |
CN114667932A (zh) * | 2022-04-28 | 2022-06-28 | 蒙草生态环境(集团)股份有限公司 | 一种用于诱导扁蓿豆愈伤组织的方法 |
WO2024023763A1 (en) | 2022-07-27 | 2024-02-01 | Benson Hill, Inc. | Decreasing gene expression for increased protein content in plants |
WO2024023764A1 (en) | 2022-07-27 | 2024-02-01 | Benson Hill, Inc. | Increasing gene expression for increased protein content in plants |
WO2024023578A1 (en) | 2022-07-28 | 2024-02-01 | Institut Pasteur | Hsc70-4 in host-induced and spray-induced gene silencing |
WO2024052856A1 (en) | 2022-09-09 | 2024-03-14 | Friedrich Alexander Universität Erlangen-Nürnberg | Plant regulatory elements and uses thereof |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5015580A (en) * | 1987-07-29 | 1991-05-14 | Agracetus | Particle-mediated transformation of soybean plants and lines |
US5322783A (en) * | 1989-10-17 | 1994-06-21 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Soybean transformation by microparticle bombardment |
EP0442174A1 (en) * | 1990-02-13 | 1991-08-21 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Stable transformation of plant cells |
NZ239977A (en) * | 1990-11-14 | 1993-08-26 | Pioneer Hi Bred Int | Transforming plants by the use of agrobacterium |
US5324646A (en) * | 1992-01-06 | 1994-06-28 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Methods of regeneration of Medicago sativa and expressing foreign DNA in same |
-
1992
- 1992-01-06 US US07/817,205 patent/US5324646A/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-11-23 NZ NZ24521692A patent/NZ245216A/xx not_active IP Right Cessation
- 1992-12-02 CA CA002084347A patent/CA2084347C/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-12-07 AT AT92311126T patent/ATE176928T1/de not_active IP Right Cessation
- 1992-12-07 ES ES92311126T patent/ES2129435T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-12-07 EP EP92311126A patent/EP0561082B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-12-07 DE DE69228471T patent/DE69228471T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1992-12-17 AU AU30260/92A patent/AU3026092A/en not_active Abandoned
-
1993
- 1993-01-06 HU HU9300016A patent/HU216646B/hu not_active IP Right Cessation
- 1993-01-06 JP JP5000852A patent/JPH0698781A/ja active Pending
-
1995
- 1995-06-30 US US08/497,597 patent/US5731202A/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-30 US US08/496,996 patent/US5994626A/en not_active Expired - Lifetime
-
1996
- 1996-08-22 AU AU64204/96A patent/AU6420496A/en not_active Abandoned
-
1997
- 1997-02-06 JP JP9024184A patent/JPH09224512A/ja active Pending
-
1999
- 1999-05-13 GR GR990401286T patent/GR3030201T3/el unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU3026092A (en) | 1993-07-08 |
JPH0698781A (ja) | 1994-04-12 |
CA2084347A1 (en) | 1993-07-07 |
DE69228471D1 (de) | 1999-04-01 |
ATE176928T1 (de) | 1999-03-15 |
HUT66716A (en) | 1994-12-28 |
US5324646A (en) | 1994-06-28 |
NZ245216A (en) | 1994-07-26 |
US5994626A (en) | 1999-11-30 |
DE69228471T2 (de) | 1999-06-24 |
AU6420496A (en) | 1996-10-31 |
HU9300016D0 (en) | 1993-04-28 |
ES2129435T3 (es) | 1999-06-16 |
CA2084347C (en) | 2004-04-13 |
EP0561082B1 (en) | 1999-02-24 |
JPH09224512A (ja) | 1997-09-02 |
US5731202A (en) | 1998-03-24 |
GR3030201T3 (en) | 1999-08-31 |
EP0561082A1 (en) | 1993-09-22 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
HU216646B (hu) | Eljárás Medicago Sativa regenerálására és idegen DNS expresszálására | |
US5990387A (en) | Stable transformation of plant cells | |
Mithila et al. | Recent advances in Pelargonium in vitro regeneration systems | |
WO1997012512A2 (en) | Transformation of cotton plants | |
Maruyama et al. | Embryogenic cell culture, protoplast regeneration, cryopreservation, biolistic gene transfer and plant regeneration in Japanese cedar (Cryptomeria japonica D. Don) | |
WO1992000371A1 (en) | Rose plants and methods for their production and genetic transformation | |
US6150587A (en) | Method and tissue culture media for inducing somatic embryogenesis, Agrobacterium-mediated transformation and efficient regeneration of cacao plants | |
WO1996025504A1 (en) | Genetic modification of plants | |
CA2320008C (en) | Brassica transformation via microprojectile bombardment | |
US6133035A (en) | Method of genetically transforming banana plants | |
US7897838B2 (en) | Methods for high efficiency transformation and regeneration of plant suspension cultures | |
Rathore et al. | Cotton (Gossypium hirsutum L.) | |
Nora et al. | Melon regeneration and transformation using an apple ACC oxidase antisense gene | |
Swennen et al. | Biotechnological approaches for the improvement of Cavendish bananas | |
WO1997042332A2 (en) | Genetically transformed cassava cells and regeneration of transgenic cassava plants | |
AU715536B2 (en) | Method of regeneration of medicago sativa and expressing foreign DNA in same | |
US6566137B1 (en) | Method of regeneration of Medicago sativa and expressing foreign DNA in same | |
AU730704B2 (en) | Method of regeneration of medicago sativa and expressing foreign DNA in same | |
US20020199220A1 (en) | Methods to propagate plants via somatic embryogenesis and to transfer genes into ornamental statice and other members of the family plumbaginaceae | |
US20100251415A1 (en) | Composition and Method for Modulating Plant Transformation | |
Al-Ramamneh | Somatic embryogenesis and transformation studies in Schlumbergera and Rhipsalidopsis | |
Filippone et al. | Recent advances in cell and tissue culture¹ | |
Santana et al. | III. 1 Coffee | |
PUGLIESI et al. | II. 7 Transgenic Sunflower (Helianthus annuus) |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
HMM4 | Cancellation of final prot. due to non-payment of fee |