HU215126B - Eljárás pentosztatin tisztítására - Google Patents
Eljárás pentosztatin tisztítására Download PDFInfo
- Publication number
- HU215126B HU215126B HU9400257A HU9400257A HU215126B HU 215126 B HU215126 B HU 215126B HU 9400257 A HU9400257 A HU 9400257A HU 9400257 A HU9400257 A HU 9400257A HU 215126 B HU215126 B HU 215126B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- pentostatin
- resin
- anion exchange
- styrene
- water
- Prior art date
Links
- FPVKHBSQESCIEP-UHFFFAOYSA-N (8S)-3-(2-deoxy-beta-D-erythro-pentofuranosyl)-3,6,7,8-tetrahydroimidazo[4,5-d][1,3]diazepin-8-ol Natural products C1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NCC2O)=C2N=C1 FPVKHBSQESCIEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 39
- FPVKHBSQESCIEP-JQCXWYLXSA-N pentostatin Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(N=CNC[C@H]2O)=C2N=C1 FPVKHBSQESCIEP-JQCXWYLXSA-N 0.000 title claims abstract description 39
- 229960002340 pentostatin Drugs 0.000 title claims abstract description 39
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 claims abstract description 19
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims abstract description 13
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 29
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 29
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- CHRJZRDFSQHIFI-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.C=CC1=CC=CC=C1C=C CHRJZRDFSQHIFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 11
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 11
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical group OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 6
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 claims description 2
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N trimethylamine Chemical group CN(C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- URSLCTBXQMKCFE-UHFFFAOYSA-N dihydrogenborate Chemical group OB(O)[O-] URSLCTBXQMKCFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 235000010633 broth Nutrition 0.000 description 7
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 7
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- FZQSLXQPHPOTHG-UHFFFAOYSA-N [K+].[K+].O1B([O-])OB2OB([O-])OB1O2 Chemical compound [K+].[K+].O1B([O-])OB2OB([O-])OB1O2 FZQSLXQPHPOTHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical group Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical group [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 3
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 125000001453 quaternary ammonium group Chemical group 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical group C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 2
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 2
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- JPPREFOETTUXDK-UHFFFAOYSA-N 1h-1,3-diazepine Chemical compound N1C=CC=CN=C1 JPPREFOETTUXDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YKBGVTZYEHREMT-KVQBGUIXSA-N 2'-deoxyguanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O1 YKBGVTZYEHREMT-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 1
- YKBGVTZYEHREMT-UHFFFAOYSA-N 2'-deoxyguanosine Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1CC(O)C(CO)O1 YKBGVTZYEHREMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940080778 Adenosine deaminase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- -1 C-8 epimer) Chemical compound 0.000 description 1
- YOOVTUPUBVHMPG-UHFFFAOYSA-N Coformycin Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NCC2O)=C2N=C1 YOOVTUPUBVHMPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940121710 HMGCoA reductase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000186988 Streptomyces antibioticus Species 0.000 description 1
- OIRDTQYFTABQOQ-UHTZMRCNSA-N Vidarabine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-UHTZMRCNSA-N 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N acrylic acid group Chemical group C(C=C)(=O)O NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002487 adenosine deaminase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012435 analytical chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000063 antileukemic agent Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 150000001491 aromatic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 150000001642 boronic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000001246 bromo group Chemical group Br* 0.000 description 1
- 239000003610 charcoal Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- YOOVTUPUBVHMPG-LODYRLCVSA-O coformycin(1+) Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C([NH+]=CNC[C@H]2O)=C2N=C1 YOOVTUPUBVHMPG-LODYRLCVSA-O 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- VGONTNSXDCQUGY-UHFFFAOYSA-N desoxyinosine Natural products C1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 VGONTNSXDCQUGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N diammonium hydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].[NH4+].OP([O-])([O-])=O MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 125000000118 dimethyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical group [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000005325 percolation Methods 0.000 description 1
- 239000002952 polymeric resin Substances 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000012265 solid product Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- VABRZWDEEDQLRD-UHFFFAOYSA-N streptomyces antibiotic uk-63052 Chemical compound CN1C(=O)C(N(C)C(=O)C(C)NC(=O)C(COC(=O)C2(C(C2)C)N(C)C2=O)NC(=O)C=3C(=CC4=CC=CC=C4N=3)O)C(SC(C)CC)SCC2N(C)C(=O)C(C)NC(=O)C(NC(=O)C=2C(=CC3=CC=CC=C3N=2)O)COC(=O)C21CC2C VABRZWDEEDQLRD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012607 strong cation exchange resin Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000010414 supernatant solution Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 description 1
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 1
- 229960003636 vidarabine Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/65—Tetracyclines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/05—Dipeptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
- C07H19/052—Imidazole radicals
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Description
A találmány tárgya eljárás 99,7%-osnál nagyobb tisztaságú pentosztatinnak egy fermentlének nyers, ismert módon előtisztított koncentrátumából történő kromatográfiás elkülönítésére, azzal jellemezve, hogy (i) a nyers koncentrátumot felviszik egy erős bázisú borát formában lévő anioncserélő gyantára, majd (ii) az erős bázisú borát formában lévő anioncserélő gyantáról a pentosztatint vízzel eluálják, majd (iii) az eluátumot vizes etanollal előmosott sztirol-divinil-benzol gyantaágyra viszik fel, majd (iv) a sztirol-divinil-benzol gyantaágyat vízzel mossák, majd (v) etanol/víz oldószereleggyel eluálják róla a pentosztatint, majd (vi) az így nyert pentosztatin-tartalmú frakciókat egyesítik, majd (vii) a pentosztatint vizes metanolból átkristályosítják és termékként kinyerik.
A leírás terjedelme 6 oldal (ezen belül 1 lap ábra)
HU 215 126 B
HU215 126Β
A találmány tárgya eljárás pentosztatin kromatográfiás elkülönítésére, illetve tisztítására.
A pentosztatin az I képlettel jellemezhető szerkezettel rendelkező (7?)-3-(2-dezoxi-P-D-eritro-pentofúranozil)-3,6,7,8-tetrahidroimidazo[4,5-d][l,3]diazepin-8-ol.
A vegyület hatásos adenozin-dezamináz inhibitor, s jól alkalmazható antileukémiás ágensként. A pentosztatin előállítását a 3,923,785 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (1975. 12. 02.) ismerteti. Az eljárás során egy NRRL 3238 számon letétbe helyezett Streptomyces antibioticus törzs fermentációjával termelik a vegyületet. A 3,923,785 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás ismerteti a pentosztatinnak a fermentléből történő elkülönítését és tisztítását is.
A jelen találmány egy jelentős mértékben javított eljárást ismertet a pentosztatin elkülönítésére és tisztítására. Az ioncserélő gyanták és a Sepabeads SP207 kombinációjának találmány szerinti alkalmazása drámai módon megnöveli a fermentléből kinyert tiszta vegyület mennyiségét. A találmány szerinti, javított kinyerési eljárás nélkül - a vegyület tiszta formában történő előállításának rendkívül magas költségei miatt - a pentosztatin kereskedelmi forgalmazása gyakorlatilag megvalósíthatatlan volna.
A találmány tárgya új eljárás a pentosztatin elkülönítésére, illetve tisztítására. Közelebbről a találmány eljárás pentosztatinnak egy nyers koncentrátumból kromatográfiás úton történő elkülönítésére, amelynek során a koncentrátumot előbb egy erősen bázikus borátanioncserélő gyantára, majd ezt követően Sepabeads SP207 vagy egy ekvivalensének aktivált ágyára visszük fel, és a pentosztatint tartalmazó frakciókat összegyűjtjük. így nagyobb mint 99,7%-os tisztaságú terméket állítunk elő.
Amint azt a fentiekben már említettük, a pentosztatin előállításának fermentációs eljárását a 3,923,785 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás ismerteti.
A nyers fermentációs koncentrátumot úgy állítjuk elő, hogy a fermentléből egy erős kationcserélő gyantán visszatartjuk a pentosztatint, majd ammónium-hidroxiddal eluáljuk, és az eluátumot a kiindulási fermentlé térfogatának hozzávetőleg 1/200 részére betöményítjük. A számos ismert szennyezőanyagot, például a pentosztatin S-izomerét (azaz a C-8 epimert), coformycint, 2’-dezoxi-guanozint, vidarabine-t és citozint tartalmazó nyers koncentrátumot ezt követően három szakaszban dolgozzuk fel:
1. precipitációs lépés a nagyméretű szennyezőanyagok eltávolítására;
2. kromatográfiás lépés egy borátformában lévő erősen bázikus anioncserélő gyanta, majd Sepabeads SP207 alkalmazásával; és
3. kristályosítási lépés.
A találmány szerinti eljárás lényegét a kromatográfiás lépés jelenti. Azt találtuk, hogy egy erős bázisú anioncserélő gyanta és Sepabeads (Mitsubsihi védjegy) SP207 kombinációjának alkalmazásával a tiszta terméket olyan magas hozammal nyeljük, amilyen hozamot a korábbiakban még nem sikerült elérni.
A találmány szerinti eljárás során alkalmazható anioncserélő gyanták kvatemer ammóniumcsoportot tartalmaznak, és az erős bázisú anioncserélő gyanták osztályába tartoznak. Számos ilyen gyanta beszerezhető a kereskedelmi forgalomban. A találmány szerinti eljárás során alkalmazható erős bázisú anioncserélő gyanták jellegzetes képviselője a Purolite A—425 (Purolite védjegy) és a különféle Dowex (Dow Chemical Company védjegy) gyanták sorozata. Ezek az anioncserélő gyanták sztirol-divinil-benzol (S-DVB) gerinccel és trimetil-ammónium- vagy dimetil-etanolammónium-oldallánccal rendelkeznek. Az ilyen típusú anioncserélő gyanták szerkezetének vázlatos bemutatása az 1. és 2. ábrán látható.
--CH2N+(CH3)3 x~
S-DVB polimeren gyanta
--CH2N+(CH3)3 X“
1. ábra
CH2N+(CH3)3 ch2ch2oh
CH2N+(CH3)3
CH2CH20H
X
X
A fenti anioncserélő gyanták a kereskedelmi forgalomban Dowex-lXl, Dowex-lX2, Dowex-lX4 stb. néven vásárolhatók meg, és szokásosan kloridformában, ahol a képletekben X jelentése kloridion, illetve hidroxidformában, ahol a képletekben X jelentése hidroxidion, vannak.
Az anioncserélő gyanták kereskedelmi forgalomban beszerezhető Amberlite (Rohm and Haas védjegy) sorozata ugyancsak felhasználható a találmány szerinti eljárás megvalósítása során. Ezek a gyanták kvatemer ammóniumcsoportot tartalmaznak, s két fő típusba sorolhatók. Ezek egyikét a gél típus képezi, míg a másikat a makroretikuláris típus. Mindkettő erős bázisú jellegű. A gyanták Amberlite sorozatát a szakirodalom úgy jellemzi, hogy azokban kvatemer ammóniumcsoportok kapcsolódnak sztirol vagy akril jellegű gerinchez.
A kereskedelemben számos további, a fentiekben említettekkel ekvivalens gyanta kapható. A szakterületen járatos szakember könnyen ki tudja választani a jelen találmány oltalmi körébe tartozó eljárásban felhasználható anioncserélő gyantákat.
A kereskedelmi forgalomból beszerezhető, erős bázisú anioncserélő gyantában az anion (X-) jelentése általában kloridion. A találmány szerinti megoldás során történő alkalmazás céljából az ilyen gyantát egy borátsóval, például kálium-tetraboráttal végzett kezeléssel
HU215 126Β átalakíthatjuk a megfelelő borátformába. Ennek a módosításnak az elvégzéséhez a kereskedelmi forgalomban kapható gyantát behelyezzük egy oszlopba, amelyen keresztül az ágytérfogat többszörösének megfelelő mennyiségű vizes kálium-tetraborát-oldatot folyatunk át (perkolálunk). Ezt követően a borát feleslegének eltávolítását úgy végezzük, hogy többszörös térfogatú ionmentesített vizet áramoltatunk keresztül az oszlopon. Használat után a gyantát előbb híg hidrogén-klorid-oldattal, majd vízzel, végül kálium-tetraboráttal végzett átmosással regenerálhatjuk.
A most igényelt eljárásban alkalmazott Diaion Sepabeads (Mitsubishi védjegy) SP207-et a kereskedelmi katalógusok a gyanták csoportjának sztirol-divinilbenzol típusaként adják meg. A Sepabeads SP207 affinitást mutat az aromás vegyületekkel szemben. A termék vázlatos szerkezetét a II általános képlet mutatja be. AII általános képletben
X jelentése brómatom.
A következő példa a találmány szerinti eljárás bemutatását szolgálja. A példa magában foglalja a kezdeti koncentrátum előállítását, precipitációját, valamint a végső tisztítási kromatográfiás és kristályosítási lépést. Az alábbiakban ismertetendő elkülönítési (izolációs) és tisztítási lépések során az egyes műveletek nyomonkövetését úgy végeztük, hogy igen sok frakció pentosztatintartalmát nagynyomású folyadékkromatográfiás úton meghatároztuk. A nagynyomású folyadékkromatográfiás elemzések esetén a következő rendszert használtuk:
Kolonna: 250^4,6 mm Phenomenex, Ultremex
C-8 kolonna;
Mozgófázis: 2,5 rész metanol 2,5 rész acetonitril
95,0 rész 0,05 M vizes ammónium-hidrogén-foszfát [(NH4)2HPO4], foszforsavval beállítva pH 7,4 értékre;
Áramlási sebesség: 1 ml/perc;
Detektálás: 270 nm (a végtermék pentosztatin tisztaságának meghatározására 282 nm hullámhosszúságot alkalmaztunk);
Retenciós idő: 10,7 perc.
Amint az az analitikai kromatográfiás módszerek területén jártas szakember számára jól ismert, a fenti paraméterek az alkalmazott kolonna jellegének, illetve állapotának megfelelően módosíthatók.
Az alábbi példában a Purolite A425 gyantát alkalmazzuk, amely egy erős bázisú anion gél, s ekvivalens például a 100 mesh méretű Dowex 1X2 gyantával. A gyantát kloridformában vásároljuk meg, és a következők szerint alakítjuk át borátformába.
A Purolite A425 (klorid) gyantát betöltjük egy oszlopba, majd úgy alakítjuk át borátformába, hogy 15-16 ágytérfogatnak megfelelő mennyiségű 0,7 M kálium-tetraborát-oldattal (K2B4O7) perkoláljuk. A kálium-tetraborát feloldását legcélszerűbb meleg (60 °C hőmérsékletű) ionmentesített vízben végezni, majd az így kapott oldatot szobahőmérsékletre hűtjük. A borát feleslegét (7-10 ágytérfogatnak megfelelő mennyiségű) ionmentesített vízzel öblítjük le az oszlopról. Az öblögetést addig végezzük, amíg az eluátum már nem tartalmaz oldott anyagot. Ezt követően a törmelékek eltávolítása érdekében az oszopot ionmentesített vízzel visszamossuk. A fenti műveletek végrehajtása után az oszlop felhasználásra kész állapotban van.
Az alábbi példában alkalmazott „ágytérfogat” kifejezés az oszlopban lévő gyantának az új gyanta vizes szuszpenziójának a betöltését követő körülbelül egy órás ülepítése utáni látszólagos térfogatát jelenti. Valamennyi további hivatkozás erre a térfogatra történik. A Purolite A425 gyantát kloridformában árusítják. A borátformába történő átalakítás, majd az öblítés és a visszatöltés, majd végül a körülbelül egy órás ülepítés az ágytérfogat hozzávetőleg 20%-os növekedéséhez vezet.
Példa
A Streptomyces antibioticus NRRL 3238 által termelt, pentosztatint tartalmazó fermentleveket a 3,923,785 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (1975. 12. 02.) által ismertetett eljárásnak megfelelően állítottuk elő.
Egy jellegzetes sarzsban 50000 liter fermentlé pHját 8,5 értékre állítottuk be, +15 °C vagy ez alatti hőmérsékleten körülbelül 20 órán keresztül tároltuk a fermentlét, majd ezt követően Celite 545 segítségével leszűrtük. A hideg szűrlet pH-ját 6,0 értékűre állítottuk be, majd a szűrletet áteresztettük egy 5000 liter, előzetesen hideg (körülbelül 15 °C hőmérsékletű) vízzel kondicionált Dowex 50X4 (NH4) gyantát tartalmazó oszlopon. A Dowex 50 gyantát ezt követően vízzel mostuk, majd előbb 0,1 M ammónium-hidroxiddal, utána 0,2 M ammónium-hidroxiddal eluáltuk. Az elúciós lépés és az ezt követő izolációs és tisztítási lépés során a művelet lefútását a fentiekben ismertetett nagynyomású folyadékkromatográfiás módszerrel követtük nyomon. A legnagyobb rész pentosztatint tartalmazó ammónium-hidroxid-eluátumokat összeöntöttük, és vákuumban 50 °C alatti hőmérsékleten 250 literes térfogatra betöményítettük.
Precipitáció
A fenti lépésben kapott sötét, viszkózus koncentrátumnak egy 50 literes mintáját 3 Á molekulaszűrővel szárított etanol 500 literes mennyiségével és 250 liter acetonnal kevertetjük. A felülúszó oldatot óvatosan eltávolítjuk a sötét, kátrányos maradékról, Celite 545-tel bevont szűrőn átszűrjük, majd vákuum alatt 28 °C-nál alacsonyabb hőmérsékleten betöményitjük. Kromatográfia
A fenti, sötét színű koncentrátumot (20 liter) felvisszük egy 135 liter, a fentiekben ismertetett módon elkészített Purolite A425 (borát) gyantát tartalmazóű oszlopra. A sarzsnak az oszlopon történő átjuttatása során az oszlop eltávolítja a szín legnagyobb részét, ami visszamarad az oszlopon. A gyantát ezt követően 7 ágytérfogatnak megfelelő mennyiségű ionmentesített vízzel mossuk. Egy körülbelül egy ágytérfogatnyi mennyiségű előfrakció után a pH váratlanul megemelkedik, és egy sárga szín jelenik meg. A gyantára felvitt pento3
HU215 126Β sztatin mennyiségének körülbelül 90%-a a következő 3 ágytérfogatnyi oldatban eluálódik. A pentosztatinban dús frakciókat összeöntjük, majd az oldatot egy 120 liter, előzetesen vizes etanollal, s ezt követően vízzel mosott Diaion Sepabeads SP207 gyantát tartalmazó oszlopra visszük. Miután a pentosztatin egész mennyiségét felvittük, a Sepabeads SP207 gyantát 3-4 ágytérfogatnyi mennyiségű vízzel mossuk, s ezt követően 10:90 tömegarányú etanol/víz oldószereleggyel eluáljuk. Körülbelül egy ágytérfogatnyi előfrakció után megjelenik a pentosztatin, és a következő 2,5-3,0 ágytérfogatnyi mennyiségű eluátumban lényegében teljesen lejön az oszlopról. A pentosztatin legnagyobb részét tartalmazó említett frakciókat összeöntjük, és vákuum alatt betöményítjük úgy, hogy a pentosztatin 12-13 tömeg%-os oldatát kapjuk. Az így nyert koncentrátumot a pentosztatin tömegére vonatkoztatva 5 tömeg% csontszénnel derítjük, majd előbb Celite 545 szűrőn, s ezt követően 0,45 mikrométeres, végül 0,22 mikrométeres membránszűrőn szűrjük.
Kristályosítás
Az utolsó szűrletet vákuum alatt egy 60 tömeg% pentosztatint tartalmazó szuszpenzióvá töményítjük be, amelyhez a víz mennyiségére vonatkoztatva 10 térfogatrész metanolt adunk. Az így nyert szuszpenziót két órán keresztül 0 °C hőmérsékleten kevertetjük, a szilárd terméket kiszűrjük, a kiszűrt anyagot metanollal mossuk, majd 24 órán keresztül 50 °C hőmérsékleten szárítjuk. A nagynyomású folyadékkromatográfiás elemzés azt mutatta, hogy a termék a pentosztatin, amelyet 1,1% mennyiségben a pentosztatin C-8 epimere szennyez. A termék átkristályosítását úgy végezzük, hogy az anyagot feloldjuk 1,2-1,5 tömegrész forró (82 °C hőmérsékletű) vízben, majd keveretés közben meghígítjuk 10 térfogatnyi metanollal. A kapott keveréket hagyjuk lehűlni, két órán keresztül 0 °C hőmérsékleten tartjuk, majd szűrjük. A kiszűrt szilárd anyagot metanollal mossuk, és 50 °C hőmérsékleten vákuum alatt szárítjuk. Ily módon a pentosztatint 648,5 g mennyiségben nyerjük. A termék tisztasága nagyobb, mint 99,7%. A végtermék pirogénmentes és a vegyület ultraibolya-, infravörös- és NMR-spektruma tökéletesen megegyezik a pentosztatinnak a következő szakirodalmi helyen közölt megfelelő spektrumaival: Ann. Ν. Y. Acad. Sci.,
284:21-29(1977).
Claims (6)
1. Eljárás 99,7%-osnál nagyobb tisztaságú pentosztatinnak egy fermentlének nyers, ismert módon előtisztított koncentrátumából történő kromatográfiás elkülönítésére, azzal jellemezve, hogy (i) a nyers koncentrátumot felvisszük egy erős bázisú borát formában lévő anioncserélő gyantára, majd (ii) az erős bázisú borát formában lévő anioncserélő gyantáról a pentosztatint vízzel eluáljuk, majd (iii) az eluátumot vizes etanollal előmosott sztiroldivinil-benzol gyantaágyra visszük fel, majd (iv) a sztirol-divinil-benzol gyantaágyat vízzel mossuk, majd (v) etanol/víz oldószereleggyel eluáljuk róla a pentosztatint, majd (vi) az így nyert pentosztatin-tartalmú frakciókat egyesítjük, majd (vii) a pentosztatint vizes metanolból átkristályosítjuk és termékként kinyerjük.
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az (i) lépésben anioncserélő gyantaként sztirol-divinil-benzol vázzal és kovalensen kötött trimetil-ammónium oldallánccal rendelkező gyantát alkalmazunk.
3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az (i) lépésben anioncserélő gyantaként PUROLITE Α-426-ot alkalmazunk.
4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az (iii)—(vi) lépésben sztirol-divinil-benzol gyantaként SEPABEADS SP207-et alkalmazunk.
5. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az (ii) lépésben az anioncserélő gyantát hét ágytérfogatnyi ionmentesített vízzel eluáljuk.
6. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az (iv) lépésben a sztirol-divinil-benzol gyantát 3,5-4 ágytérfogatnyi etanol/víz oldószereleggyel eluáljuk.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US73871591A | 1991-07-31 | 1991-07-31 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU9400257D0 HU9400257D0 (en) | 1994-05-30 |
| HUT65981A HUT65981A (en) | 1994-08-29 |
| HU215126B true HU215126B (hu) | 1998-09-28 |
Family
ID=24969187
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9400257A HU215126B (hu) | 1991-07-31 | 1992-07-16 | Eljárás pentosztatin tisztítására |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5463035A (hu) |
| EP (1) | EP0596943B1 (hu) |
| JP (1) | JP3141029B2 (hu) |
| AT (1) | ATE145404T1 (hu) |
| AU (1) | AU2381792A (hu) |
| DE (1) | DE69215375T2 (hu) |
| DK (1) | DK0596943T3 (hu) |
| ES (1) | ES2094919T3 (hu) |
| GR (1) | GR3022387T3 (hu) |
| HU (1) | HU215126B (hu) |
| IE (1) | IE80618B1 (hu) |
| MX (1) | MX9204460A (hu) |
| PT (1) | PT100755B (hu) |
| WO (1) | WO1993003048A1 (hu) |
| ZA (1) | ZA925732B (hu) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1439220B1 (en) * | 2003-01-16 | 2007-08-22 | Adorkem Technology SpA | Immobilized biocatalysts usable for the manufacture of natural nucleosides and modified analogues through enzymatic transglycosylation reactions |
| ITMI20052516A1 (it) * | 2005-12-29 | 2007-06-30 | Evultis Sa | PROCESSO PER L'ISOLAMENTO DI PèRINCIPI FARMACOLOGICAMENTE ATTIVI DI ORIGINE VEGETALE ED ANIMALE |
| CN101792722B (zh) * | 2009-02-04 | 2013-04-10 | 杭州华东医药集团生物工程研究所有限公司 | 一种链霉菌及其应用 |
| CN101798330A (zh) * | 2009-02-06 | 2010-08-11 | 杭州华东医药集团生物工程研究所有限公司 | 一种喷司他丁的提取纯化方法 |
| US20100261666A1 (en) * | 2009-04-14 | 2010-10-14 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Compositions and methods for the treatment of myocardial dysfunction associated with sirs or sepsis |
| CN102453065B (zh) * | 2010-10-29 | 2014-12-17 | 上海医药工业研究院 | 一种去除喷司他丁发酵液中杂质的方法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3923785A (en) * | 1974-04-22 | 1975-12-02 | Parke Davis & Co | (R)-3-(2-deoxy-{62 -D-erythro-pentofuranosyl)-3,6,7,8-tetrahydroimidazo{8 4,5-d{9 {8 1,3{9 diazepin-8-ol |
| US4713372A (en) * | 1984-03-16 | 1987-12-15 | Warner-Lambert Company | 2-chloropentostatin compound having adenosine diaminase inhibitory activity |
| IT1182764B (it) * | 1985-06-26 | 1987-10-05 | Pietro Crocoli | Water closet, particolarmente adatto per veicoli |
| US4935342A (en) * | 1986-12-01 | 1990-06-19 | Syngene, Inc. | Method of isolating and purifying nucleic acids from biological samples |
| US4908441A (en) * | 1988-07-19 | 1990-03-13 | Warner-Lambert Company | Deoxyadenosine compounds and methods of making and using the same |
-
1992
- 1992-07-16 EP EP92916090A patent/EP0596943B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-07-16 WO PCT/US1992/005946 patent/WO1993003048A1/en active IP Right Grant
- 1992-07-16 ES ES92916090T patent/ES2094919T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-07-16 DE DE69215375T patent/DE69215375T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-07-16 JP JP05503590A patent/JP3141029B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1992-07-16 AU AU23817/92A patent/AU2381792A/en not_active Abandoned
- 1992-07-16 AT AT92916090T patent/ATE145404T1/de active
- 1992-07-16 DK DK92916090.1T patent/DK0596943T3/da active
- 1992-07-16 HU HU9400257A patent/HU215126B/hu unknown
- 1992-07-30 MX MX9204460A patent/MX9204460A/es unknown
- 1992-07-30 IE IE922507A patent/IE80618B1/en not_active IP Right Cessation
- 1992-07-30 ZA ZA925732A patent/ZA925732B/xx unknown
- 1992-07-31 PT PT100755A patent/PT100755B/pt not_active IP Right Cessation
-
1995
- 1995-02-28 US US08/396,443 patent/US5463035A/en not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-01-29 GR GR960403293T patent/GR3022387T3/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ZA925732B (en) | 1994-01-31 |
| DE69215375D1 (de) | 1997-01-02 |
| HU9400257D0 (en) | 1994-05-30 |
| EP0596943B1 (en) | 1996-11-20 |
| DK0596943T3 (da) | 1997-04-21 |
| PT100755B (pt) | 1999-07-30 |
| HUT65981A (en) | 1994-08-29 |
| JPH06509355A (ja) | 1994-10-20 |
| ATE145404T1 (de) | 1996-12-15 |
| ES2094919T3 (es) | 1997-02-01 |
| PT100755A (pt) | 1993-10-29 |
| WO1993003048A1 (en) | 1993-02-18 |
| IE80618B1 (en) | 1998-10-21 |
| EP0596943A1 (en) | 1994-05-18 |
| IE922507A1 (en) | 1993-02-10 |
| DE69215375T2 (de) | 1997-03-13 |
| AU2381792A (en) | 1993-03-02 |
| GR3022387T3 (en) | 1997-04-30 |
| JP3141029B2 (ja) | 2001-03-05 |
| MX9204460A (es) | 1993-04-01 |
| US5463035A (en) | 1995-10-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4861870A (en) | Process for purifying anthracyclinone glycosides by selective adsorption on resins | |
| US4440753A (en) | Purification of glycopeptide antibiotics using non-functional resins | |
| HU215126B (hu) | Eljárás pentosztatin tisztítására | |
| KR100470524B1 (ko) | 모에노마이신a의제조방법 | |
| CA2076067C (en) | Vancomycin precipitation process | |
| CA2133644C (en) | Process for making vancomycin | |
| US6649755B1 (en) | Process for preparing acarbose with high purity | |
| GB2137201A (en) | Process for the isolation of tylosin | |
| US2702263A (en) | Process for recovering vitamin b12 | |
| EP0533115B1 (en) | Process for production of hydroxocobalamin | |
| KR100274787B1 (ko) | 독소루비신및이의염산염의제조정제방법 | |
| KR920000102B1 (ko) | 안트라시클리논 글리코시드의 정제방법 | |
| WO1998026085A1 (fr) | Procedes de fabrication de vancomycine | |
| JPH0737434B2 (ja) | ７−ジメチルアミノ−６−デメチル−６−デオキシテトラサイクリンの採取法 | |
| JPS5896089A (ja) | 抗生物質ネオスラマイシンの精製法 | |
| HU192775B (en) | Process for separating aminocyclitols, aminocyclitolaminogly-coside antibiotics and derivatives thereof | |
| JP2000511878A (ja) | １１β―２１―ジヒドロキシ―２’―メチル―５’βＨ―プレグナ―１，４―ジエノ［１７，１６―Ｄ］オキサゾール―３，２０―ジオンの精製方法 | |
| HU183192B (en) | Improved process for preparing corrinoide derivatives bearing a substituent in position co-aeta | |
| JPS597318B2 (ja) | ホ−テイマイシンａの精製法 | |
| HU204570B (en) | Process for purifying adriamycin-hydrochloride | |
| JPH0372638B2 (hu) | ||
| HU193812B (en) | Process for separating corrinoides | |
| IE922601A1 (en) | Improved vancomycin precipitation process |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| GB9A | Succession in title |
Owner name: MAYNE PHARMA PLC, GB Free format text: FORMER OWNER(S): WARNER-LAMBERT CO., US |