HU203787B - Process for producing 2-keto-1-gulonic acid - Google Patents

Process for producing 2-keto-1-gulonic acid Download PDF

Info

Publication number
HU203787B
HU203787B HU883117A HU311788A HU203787B HU 203787 B HU203787 B HU 203787B HU 883117 A HU883117 A HU 883117A HU 311788 A HU311788 A HU 311788A HU 203787 B HU203787 B HU 203787B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
keto
gulonic acid
medium
culture
ifo
Prior art date
Application number
HU883117A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT47322A (en
Inventor
Ikou Nogami
Takamasa Yamaguchi
Masahide Oka
Hideo Shirafuji
Original Assignee
Takeda Chemical Industries Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Takeda Chemical Industries Ltd filed Critical Takeda Chemical Industries Ltd
Publication of HUT47322A publication Critical patent/HUT47322A/hu
Publication of HU203787B publication Critical patent/HU203787B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
    • C12P7/58—Aldonic, ketoaldonic or saccharic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
    • C12P7/58—Aldonic, ketoaldonic or saccharic acids
    • C12P7/60—2-Ketogulonic acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/38—Chemical stimulation of growth or activity by addition of chemical compounds which are not essential growth factors; Stimulation of growth by removal of a chemical compound
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

A találmány tárgya fermentációs eljárás 2-keto-L-gulonsav előállítására. A 2-keto-L-gulonsav fontos közbenső tennék az L-aszkorbinsav szintézisénél.
A 2-keto-L-gulonsavat, amely az L-aszkorobinsav szintézisénél fontos közbenső termék, ipari méretekben az úgynevezett Reichstein-eljárással állítják elő [Helvetica Chimica Acta 17, 311 (1934)]. Ez az eljárás azonban több lépésből áll és igen nagy mennyiségű oldószert igényel, ezért modem ipari eljárásként már nem megfelelő.
A Reichstein-módszeren kívül más módszerek is ismeretesek, amelyek mikroorganizmusok alkalmazásán alapulnak. Ismert például a 2 421 611 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásból egy eljárás, amely abból áll, hogy a D-glukózt mikrobiológiai oxidációnak vetjük alá, így 5-keto-D-glukonsav keletkezik, azt kémiai vagy mikrobiológiai úton redukálva kapjuk az L-idonsavat, ebből mikrobiológiai oxidálással nyerhető a 2-keto-L-gulonsav. A 39 14 493,53 25 033,56 15 877 és 59 35 920 számú japán közzétett szabadalmi leírásból ismeretes egy eljárás, amely abból áll, hogy D-glukózt mikrobiológiai úton oxidálnak és így 2,5-diketo-D-glukonsavat kapnak, amelyet mikrobiológiai vagy kémiai úton redukálva nyerik a 2-keto-L-gulonsavat
Ezen eljárások hátránya, hogy kémiai redukciós lépéseket alkalmaznak, nevezetesen az első eljárásban az 5-keto-D-glukonsavat redukálják idonsavvá, a második eljárásban a 2,5-diketo-D-glukonsavat redukálják 2keto-L-gulonsawá, ezért feltétlenül jelentkeznek a sztereospecifikusság problémái, valamint különféle melléktermékek, így D-glukonsav és 2-keto-D-glukonsav keletkezése, ami a kitermelést csökkenti. Amikor pedig a redukciót mikrobiológiai úton végzik, a mikroorganizmus számára redukciós energiaforrásként igen nagy feleslegben kell alkalmazni cukrot. Ez szintén a kitermelést csökkentő tényező. Amikor a kiindulási anyag L-szorbóz, a 2-keto-L-gulonsavat egyetlen oxidációs lépéssel elő lehet állítani.
Számos kísérlet is történt ennek az előnynek a kihasználására bizonyos, hogy a Gluconobacter, Pseudomonas, Serratia, Achromobacter és Alcaligenes nemzetséghez tartozó baktériumtörzsek felhasználásával [lásd: Biotechnology and Bioengineering, 14, 799 (1972); 41-159 és 41-160 számú japán közzétett szabadalmi bejelentések; 3 043 749 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás; 526 660 számú szovjet szabadalmi leírás; 49-39 838 számú japán közzétett szabadalmi bejelentés; Acta Microbiological Sinica 20, 246 (1980); 21,185 (1981); 62-48 389 számú japán közzétett szabadalmi bejelentés].
Mindazonáltal az ismertetett törzsek felhasználásával a kitermelés kicsi, ezért ezek az eljárások ipari méretekben nem alkalmazhatók
A közelmúltban ismertettek egy eljárást 2-keto-L-gulonsav előállítására D-glukózból. Az eljárás baktériumtörzset alkalmaz, amelyet úgy állítanak elő, hogy egy Corynebacterium nemzetséghez tartozó mikroorganizmus 2,5-diketo-L-glukonsav-reduktáz génjét egy Erwinia mikroorganizmusba építik be a DNS-rekombinációs technika szerint [lásd: Science, 230, 144 (1985)]. Azonban ezzel az eljárással sem lehet ipari méretekben elegendő mennyiségű 2-keto-L-gulonsavat előállítani.
A találmány célja: az ismertetett körülmények miatt kísérleteket végeztünk iparilag alkalmazható előnyös eljárásra 2-keto-L-gulonsav előállítására. Ennek eredményeképpen már korábban is azt találtuk, hogy a talajból izolált és Pseudogluconobacter saccharoketogens-nek nevezett baktériumok jelentékeny mennyiségű 2-keto-L-gulonsavat képesek termelni L-szorbózból Qásd: a 221 707 számú európai közzétett szabadalmi leírást). A későbbiekben ennek az eljárásnak a javításán dolgozva nem várt módon azt tapasztaltuk, hogy 2-keto-L-gulonsav L-szorbózból történő előállítása során a fermentációs idő lerövidíthető és a kitermelés lényegesen megnő, ha a baktériumtörzset olyan tápközegben tenyésztjük, amelyhez ritkaföldfémet adunk. Korábban a ritkaföldfémek ilyen fermentációt elősegítő tulajdonságát nem ismerték.
A találmány tárgya tehát javított eljárás 2-keto-L-gulonsav előállítására L-szorbózból.
A találmányunk tárgyát és előnyeit a következő leírásból a szakterületen jártas szakember könnyen megértheti.
A találmány szerinti javított eljárást 2-keto-L-gulonsav előállítására úgy végezzük, hogy egy, a Pseudogluconobacter saccharoketogenes fajhoz tartozó mikroorganizmust, amely az L-szorbózt 2-keto-L-gulonsavvá képes oxidálni, L-szorbóz jelenlétében olyan tápközegben tenyésztünk, amely 0,000001-0,1 t/tf% ritkaföldfémet is tartalmaz.
Ha ezt a Pseudogluconobacter saccharoketogenes fajhoz tartozó mikroorganizmust, amely az L-szorbózt 2-keto-L-gulonsavvá képes oxidálni, ritkaföldfém jelenlétében tenyésztjük, akkor hatékonyabban tudjuk előállítani a 2-keto-L-gulonsavat, amely fontos kiindulási anyag az L-aszkorbinsav szintézisénél.
A találmány szerint alkalmazott, a Pseudogluconobacter saccharoketogenes fajhoz tartozó mikroorganizmusok közül példaként megemlítjük a következő mikroorganizmus törzseket, amelyeket már a 221 707 számú európai szabadalmi közzétételi iratban is ismertettünk:
Pseudogluconobacter saccharoketogenes K591s: FERM BP-1130, IFO 14 464;
Pseudogluconobacter saccharoketogenes 12-5: FERM BP-1129, IFO 14 465;
Pseudogluconobacter saccharoketogenes TH14-86: FERM BP-1128, IFO 14 466;
Pseudogluconobacter saccharoketogenes 12-15: FERM BP-1132, IFO 14 482;
Pseudogluconobacter saccharoketogenes 12-4: FERM BP-1131, IFO 14 483;
Pseudogluconobacter saccharoketogenes 22-3: FERM BP-1133, IFO 14 484.
A továbbiakban ezeket a Pseudogluconobacter saccharoketogenes baktériumokat mint oxidációs baktériumokat említjük.
A találmány szerinti eljárásban alkalmazott ritkaföldfémek közül példaként megemlítjük a szkandiumot
HU 203 787 Β (Se), tóriumot (Y), lantánt (La), cériumot (Ce), prazeodímiumot (Pr), neodímiumot (Nd), szamáriumot (Sm), europiumot (Eu), gadolíniumot (Gd), terbiumot (Tb), diszpróziumot (Dy), holmiumot (Ho), erbiumot (Er), túliumot (Tm), itterbiumot (Yb), és lutéciumot (Lu). Ezeket a ritkaföldfém-elemeket alkalmazhatjuk fémpor vagy fémtömb formájában, vagy vegyületformában is adhatjuk a tápközeghez, így például-kloridjuk, karbonátjuk, szulfátjuk, nitrátjuk, oxidjuk vagy oxalátjuk formájában. Az egyes ritkaföldfémeket alkalmazhatjuk önmagukban vagy két vagy több ritkaföldfémet kombinálhatunk. Például cérium-kaibonátot és lantán-kloridot együttesen is alkalmazhatunk. Ezenkívül a megfelelő elemek izolálása és tisztítása során kapott nyerstermékeket is alkalmazhatjuk.
A tápközeghez adagolt ritkaföldfém mennyiségét úgy kell megválasztani, hogy az semmiképpen se gátolja az alkalmazott mikroorganizmus növekedését. Általában hatékony mennyiségként 0, 000001 és 0,1% (tömeg/térfogat), előnyösen 0,0001 és 0,05% (tömeg/térfogat) adható meg. Ami a ritkaföldfém-elemnek a táptalajhoz való hozzáadásának módját illeti, adagolhatjuk az elemet előzetesen a táptalajhoz, adagolhatjuk időszakosan vagy a tenyésztés alatt folyamatosan. A találmány szerinti eljárásban a kiindulási anyagot, vagyis az L-szorbózt adagolhatjuk a táptalajhoz teljes mennyiségében a tenyésztés kezdetekor, vagy adagolhatjuk több részletben vagy folyamatosan a folyékony táptalajhoz. Az L-szorbóz koncentrációja a táptalajban a táptalajhoz viszonyítva 2 és 40% (tömeg/térfogat), előnyösen 5-30% (tömeg/térfogat) közötti. A fenti oxidációs baktériumok tenyésztéséhez a táptalajban olyan tápforrásokat lehet alkalmazni, amelyeket a baktréiumtörzsek fel tudnak használni, vagyis szén-, nitrogénforrásokat, szervetlen sókat, szerves sókat és nyomelemeket. Szénforrásként az L-szorbóz önmagában is alkalmazható. Ezenfelül kiegészítő szénforrásként például alkalmazhatunk glukózt, fruktózt, glicerint, szacharózt, laktózt, maltózt, melaszt és hasonlókat.
A felhasználható nitrogénforrások között megemlítjük például a különböző ammóniumsókat (például ammónium-szulfát, ammónium-nitrát, ammónium-klorid, ammónium-foszfát), szervetlen vagy szerves nitrogéntartalmú vegyületeket, például kukoricaáztató folyadékot (ezt a továbbiakban CSL-nek nevezzük), peptont, húskivonatot, élesztőkivonatot, szárított élesztőt, szójabablisztet, őrölt gyapotmagot, karbamidot és hasonlókat.
Szervetlen sóként a fentebb említett ritkaföldfémeken kívül kálium-, nátrium-, kalcium-, magnézium-, vas-, mangán-, kobalt-, cink-, réz- és foszforsav-sókat alkalmazhatunk.
Nyomokban alkalmazandó tápelemként természetesen koenzim A-t, pantoténsavat, biotint, tiamint és ríboflavint adagolhatunk, ezek az anyagok lényeges növekedési faktorok a fent említett baktériumok számára. Ezenkívül adhatunk még a táptalajhoz flavinmononukleotidot (a továbbiakban FMN-nek nevezzük), amely elősegíti a növekedést és a 2-keto-L-gulonsav termelését, egyéb vitaminokat, L-ciszteint, L-glutaminsavat, nátrium-tioszulfátot és hasonlókat, akár vegyület, akár a vegyületeket tartalmazó természetes anyag formájában.
Ezeket a táptalaj-komponenseket hozzáadhatjuk a táptalajhoz egyszerre előzetesen, vagy egy részüket, vagy a teljes mennyiséget adagolhatjuk időszakosan vagy folyamatosan a folyékony táptalajhoz.
Ami a tenyésztés módját illeti, alkalmazhatunk stacionárius kultúrát, rázott kultúrát vagy kevert kultúrát, vagy hasonlót. Nagy mennyiségű termeléshez azonban az úgynevezett süllyesztett kultúra a legelőnyösebb.
A tenyésztési körülmények természetesen függenek az adott baktériumtörzstől, az adott táptalaj-összetételtől és hasonlóktól, vagyis minden egyes esetre úgy kell őket megválasztani, hogy a célterméket a legnagyobb hatékonysággal lehessen előállítani. Például a tenyésztési hőmérséklet előnyösen 25-35 ’C közötti, és a táptalaj pH-ja előnyöen 5 és 9 közötti.
Ha ilyen körülmények között végezzük a tenyésztést mintegy 10-120 órán keresztül, a 2-keto-L-gulonsav a legnagyobb koncentrációban képes felhalmozódni. Ebben az esetben, mivel a pH a céltermék felhalmozódásával csökken, megfelelő bázikus anyagot, például nátrium-hidroxidot, kálium-hidroxidot vagy ammóniát adagolhatunk, hogy a pH-t mindig a 2-keto-L-gulonsav mikrobiológiai előállításához szükséges optimális értéken tartsuk. Az optimális pH-érték fenntartása érdekében megfelelő puffért is adagolhatunk a táptalajhoz.
A találmány szempontjából, ha a Pseudogluconobacter saccharoketogenes fajhoz tartozó mikroorganizmust ritkaföldfém jelenlétében folyékony L-szorbózt tartalmazó táptalajban tenyésztünk annak érdekében, hogy 2-keto-L-gulonsavat termeljünk és halmozzunk fel a talajban, a felhalmozott 2-keto-L-gulonsav menynyisége lényegesen nagyobb lesz, ha a fent említett oxidációs baktériumot más mikroorganizmussal együtt használjuk, mintha a Pseudogluconobacter saccharoketogenes fajhoz tartozó mikroorganizmust egyedül alkalmazzuk. Az együttes alkalmazásra megfelelő baktériumok közül példaként megemlítjük a Bacillus, Pseudomonas, Proteus, Citrobacter, Enterobacter, Erwinia, Xanthomonas, Flavobacterium, Micrococcus, Escherichia nemzetséghez tartozó baktériumokat és hasonlókat Közelebbről a következő baktréiumokat nevezzük meg példaként:
Bacillus cereus IFO 3131,
Bacillus licheniformls IFO 12 201,
Bacillus megaterium IFO 12 108,
Bacillus pumilus IFO 12 090,
Bacillus amyloliquefaciens IFO 3022,
Bacillus subtilis IFO 13 719,
Bacillus circulans IFO 3967,
Pseudomonas trifolii IFO 12 056,
Pseudomonas maltophilia IFO 12 692,
Protens inconstans IFO 12 930,
Citrobacter freundii IFO 13 544,
Enterobacter cloacae IFO 3320,
Erwinia herbicola IFO 12 686,
Xanthomonas pisi IFO 13 556,
HU 203 787 Β
Xanthomonas citri IFO 3835,
Flavobacterium meningosepticum IFO 12 535,
Micrococcus variáns IFO 3765,
Escherichia coli IFO 3366.
Ha bármelyik felsorolt baktériumot megfelelő tápközegben 20-40 ’C közötti hőmérsékleten 1-4 nap időtartamig tenyésztünk, a folyékony tenyészet oltókultúraként alkalmazható a keverendő mikrooiganizmushoz. Általában oltóanyagként a Pseudogluconobacter saccharoketogenes fajhoz tartozó oxidációs baktériumnak előnyösen 1/10—1/1000 részét alkalmazzuk. Ha tehát vegyes kultúrát készítünk a felsorolt keverőmikroorganizmusból és az oxidációs baktériumból a megjelölt arányban, ezzel elősegítjük az oxidációs baktérium növekedését és ezáltal az L-szorbóz 2-keto-Lgulonsavvá történő oxidációja gyorsabban és nagyobb kitermeléssel megy végbe, mint amikor az oxidációs baktériumot egyedül alkalmazzuk. Lényeges, hogy a bekeverendő mikroorganizmus ne, vagy csak kismértékben asszimilálja az L-szorbózt, amely a jelen találmány kiindulási anyaga, vagy a 2-keto-L-gulonsavat, amely a találmány célvegyülete. A tenyésztés egyéb körülményei megegyeznek azzal, amikor az oxidációs baktériumot egyedül alkalmazzuk.
A fent említett oxidációs baktériumokon kívül bizonyos más baktériumfajták sterilizált tenyészetét is hatékonyan alkalmazhatjuk mint a tápközeg egyik alkotórészét. Ilyen baktériumokra példaként megemlítjük a Bacillus, Pseudomonas, Citrobacter, Escherichia és Erwinia nemzetséghez tartozó baktériumokat. Pontosabban a következő baktériumokat nevezzük meg:
Bacillus cereus IFO 3131,
Bacillus subtilis IFO 3023,
Bacillus pumilus IFO 12 089,
Bacillus megaterium IFO 12 108,
Bacillus amyloliquefaciens IFO 3022,
Pseudomonas trifolii IFO 12 056,
Citrobacter ffeundii IFO 12 681,
Escherichia coli IFO 3546,
Erwinia herbicola IFO 12 686.
Ezeket a baktériumokat 20-40 ’C közötti hőmérsékleten 2-4 nap közötti időtartamig tenyésztjük egy tápközegben. A kapott tenyészetet sterilizáljuk és az említett oxidációs baktériumok táptalajához adjuk 0,5-5,0 térfogat% arányban, ezzel elősegítjük az oxidációs baktériumok növekedését.
A táptalajban így előállított és felhalmozott 2-ketoL-gulonsavat ismert módon nyerjük ki és tisztítjuk.
A 2-keto-L-gulonsavat izolálhatjuk, mint szabad savat, vagy izolálhatjuk például nátrium-, kálium-, kalcium- vagy ammóniumsóként is.
Izolációs módszerként alkalmazhatjuk például azt az eljárást, amely szerint a baktériumsejteket a táptalajtól szűréssel, vagy szükség szerint centrifugálással választjuk el és a fennmaradó oldatot adott esetben aktív szénnel történő kezelés után besűrítjük, a kivált kristályokat szűréssel elválasztjuk és átkristályosítás után kapjuk a célterméket Alkalmazhatunk ezenkívül oldószeres extrakciót kromatográfíát, kisózást és hasonló eljárásokat. Ezeket az eljárásokat önmagukban vagy alkalmas kombinációjukban esetleg ismételve is alkalmazhatjuk.
Amikor a 2-keto-L-gulonsavat szabad sav formájában nyerjük ki, átalakíthatjuk például nátrium-, kálium-, kalcium-, ammónium- vagy hasonló sójává, amikor pedig sóként nyerjük ki, megfelelő módszerekkel átalakíthatjuk szabad savvá vagy egyéb sójává.
A táptalajban előállított 2-keto-L-gulonsavat nagy teljesítményű folyadék kromatográfiával határozzuk meg a következő körülmények között:
A nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás mérés körülményei:
HPLC: 655A rendszer (Hitachi Seisakusho, Japán terméke),
Oszlop: SCR 101H (szulfonált polisztirolgén), 300*7,9 mm (Simadzu Seisakusho, Japán terméke),
Áramlási sebesség: 0,8 ml/perc (nyomás 50 kg/cm2),
Mozgó fázis: híg kénsav (pH-2,1),
Detektor. UV (214 nm) és differenciális refraktométer.
Retenciós idő: 7,20 perc a 2-keto-L-gulonsavnál és 8,33 perc az L-szorbóznál.
A továbbiakban néhány példán keresztül közelebbről is bemutatjuk a találmányt A példákban a táptalajra alkalmazott %-ok tömeg/térfogat%-ot jelentenek, kivéve, ha másként adjuk meg. A kitermelés az L-szorbóz 2-keto-L-gulonsavvá történő moláris konverzióját jelenti.
1. példa
1. táblázat
Ferde táptalaj (g/1)
D-szorbit 25
Pepton 10
Élesztőkivonat 10
CaCOs 2
Agar 20
pH-7,0.
ml oltótáptalajt, amelynek összetétele 2,0% D-glukóz, 1,0% pepton, 1,0% szárított élesztő és 2,0% CaCO3 (Akadama, Shiraishi Calcium Κ. K., Japán terméke), 200 ml-es Erlenmeyer-lombikba helyezünk és 120 ‘C-on 20 percig autoklávban kezeljük azt. A lombikot egy kacsnyi Pseudogluconobacter saccharoketogenes K591s törzzsel beoltjuk (IFO 14 464, FERM BP1130), amelyet előzőleg az 1. táblázat szerinti ferde táptalajon növesztettünk 30 ‘C-on 3 napon keresztül, és rázással (200 fordulat/perc) tenyésztünk tovább 30 ’Con 2 napon keresztül. A kapott 2 ml tenyészetet a fentebb már ismertetett tápközegbe visszük és azonos körülmények között tenyésztjük, így egy második oltótenyészetet kapunk.
ml fermentációs tápközeget, amelynek összetétele 2,0% CSL, 0,5% szárított élesztő, 0,3% ammóniumszulfát, 0,05% Na2S2O3*5H2O, 0,1% FeSO4*7H2O, 0,005% CeCl3*7H20,3,5% CaCO3 (Akadama) és 9,5% L-szorbóz (amelyet külön sterilizáltunk), egy 200 mles Erlenmeyer-lombikba teszünk, és azt 120 ‘C-on 20 percig autoklávban kezeljük.
HU 203 787 Β
A lombikot 1,25 ml fentiekben elkészített második oltótenyészettel beoltjuk és rázással tenyésztjük 30 ’Con 2 napon keresztül. Az így kapott fermentációs oldat a nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás vizsgálat alapján 86,4 mg/ml 2-keto-L-gulonsavat tartalmaz (kitermelés: 84,4%).
Ha ugyanilyen módon elvégezzük a tenyésztést azzal a különbséggel, hogy cérium-kloridot nem adagolunk a táptalajhoz, akkor a fermetnációs oldat 51,0 mg/ml 2-teto-L-gulonsavat tartalmaz (kitermelés: 49,8%).
2. példa
Pseudogluconobacter saccharoketogenes 12-4 (1FO 14 483, FERM BP-1131), 12-5 (IFO 14 465, FERM BP-1129), 12-15 (IFO 14 482, FERM BP-1132) és 22-3 (IFO 14 484, FERM BP-1133) törzseket ugyanolyan módon tenyésztünk, mint ahogyan azt az 1. példában leírtuk és így második oltótenyészetet állítunk elő.
ml fermentációs közeget, amelynek összetétele 2,0% CSL, 0/5% szántott élesztő, 0,3% ammóniumszulfát, 0,05% Na2S2O3*5H2O, 0,01% FeSO4«7H2O, 0,05% OaíCOifrniiO, 35% CaCO3 (Akadama) és 9,5% külön sterilizált L-szorbőz, egy 200 ml-es Erlenmeyer-lombikba helyezünk és 120 *C-on 20 percig autoklávban kezeljük.
1,25 ml-t a fentebb említett oltótenyészetekből a fermentációs táptalajt tartalmazó Erlenmeyer-lombikba helyezünk és rázással 30 *C-on 3 napon keresztül tenyésztjük. Az így kapott fermentációs oldatot nagy teljesítményű folyadékkromtográfiával határozzuk meg. Az eredményeket a 2. táblázatban tüntetjük fel. Megadjuk a keletkezett 2-keto-L-gulonsav mennyiségét (mg/ml-ben), valamint a Ce2(CO3)3*8H2O nélküli táptalajban végzett tenyésztéssel kapott 2-keto-L-gulonsav mennyiségét
2. táblázat
Törzs Cérium-karbonát
nélkül hozzáadott
12-4 51,0 (49,8%) 63,0(61,5%)
12-5 75,9 (74,1%) 87,6 (85,6%)
12-15 45,2 (44,1%) 67,3 (65,7%)
22-3 69,8 (68,1%) 88,1 (86,1%)
A zárójelben feltüntetett számok kitermelést jelentenek.
3. példa
Pseudogluconobacter saccharoketogenes TH 14-86 (IFO 14 466, FERM BP-1128)-t tenyésztünk ugyanolyan módon, mint az 1. példában és így egy második oltótenyészetet nyerünk.
ml fermentációs közeget, amelynek összetétele 2,0% CSL, 05% szárított élesztő, 0,3% ammónium-szulfát, 0,05% Na2S2O3«5H2O,0,1% FeSO4«7H2O,5% Ca -CO3 (Akadama) és 10,5% külön sterilizált L-szorböz, egy 200 ml-es Erlenmeyer-lombikba helyezünk és 120‘C-on 20 percig autoklávban kezeljük. 1,25 ml-t a fent említett oltótenyésztből az Erlenmeyer-lombikba teszünk, amely a fermentációs közeget tartalmazza és ezt rázással 30 'C-on 2 napig tenyésztjük. Ugyanilyen körülmények között 30 ’C-on 2 napon keresztül rázással végezzük a tenyészetet, úgy, hogy a táptalajhoz a következő adalékokat adjuk: 0,01% ittrium-klorid, ugyanennyi lantán-klorid, cérium-klorid, neodímium-klorid, szamárium-klorid, europium-klorid, gadolínium-klorid, teibiumklorid, diszprózium-klorid, holmium-klorid, erbium-klorid, és ittrium-klorid, vagy ugyanennyi prazeodíniumoxid vagy 0,05% szkandium-oxid. Az így kapott fermentációs oldatot nagy teljesítményű folyadékkromatográfiával vizsgáljuk. A kapott 2-keto-L-gulonsav mennyiségét (mg/ml táptalaj) a 3. táblázatban tüntetjük fel.
3. táblázat
Ritkaföldfém Keletkezett 2-keto-L-gulonsav
nélkül 78,5 (69,4%)
YC13«6H2O 86,9 (76,8%)
LaCl3«7H2O 97,6 (86,3%)
CeCl3«7H2O 97,6 (86,3%)
NdCl3»6H2O 90,1 (79,6%)
SmCl3«6H2O 84,1 (74,3%)
EuCl3»6H2O 83,0 (73,4%)
GdCI3*6H2O 81,9 (72,4%)
TbCl3«nH2O 82,0 (72,5%)
DyCl3»6H2O 82,1 (72,6%)
HoCl3.6H2O 81,9 (72,4%)
ErCl3«6H2O 82,2 (72,6%)
YbCl3»6H2O 82,2 (72,6%)
Pr6On 94,6 (83,6%)
Sc2O3 80,6 (71,2%).
A zárójelben feltüntetett adatok kitermelést jelentenek
4. példa
Az 1. példában leirtákkal megegyező módon Pseudoglukonobacter saccharoketogenes TH 14-86 törzset tenyésztünk az 1. példában leírt fermentációs közeg alkalmazásával, amelyhez a 4. táblázatban feltüntetett mennyiségben lantán-oxidot, lantán-kloridot, lantánkarbonátot, lantán-nitrátot, lantán-oxalátot, cériumoxidot, cérium-kloridot, cérium-szulfátot vagy cériumkarbonátot adunk. Ebben az esetben a tenyésztési periódus 30 óra. A fermentációs oldatban keletkezett 2-keto-L-gulonsav mennyiségét (mg/ml) nagy teljesítményű folyadékkromatográfiával határozzuk meg. Az eredményeket a 4. táblázatban tüntetjük fel.
4. táblázat
Ritkaföldfém Hozzáadott (%) Keletkezett 2-keto-L-gulonsav
nélkül 0 60,8 (59,4%)
LaCl3«7H2O 0,002 74,3 (72,6%)
La2(CO3)3 0,002 74,0 (72,3%)
La(NO3)3*6H2O 0,002 73,6 (71,9%)
HU 203 787 Β
Ritkaföldfém Hozzáadott (%) Keletkezett 2-keto-L-gulonsav
La2 (C2O4)3*9H2O 0,002 73,1 (71,4%)
La2O3 0,05 74,5 (72,8%)
CeCl3’7H2O 0,002 73,1 (71,4%)
Ce2(CO3)3*8H2O 0,002 73,8 (72,1%)
Ce2(SO4)3*nH2O 0,002 73,2(71,5%)
Ce(SO4)2*nH2O 0,002 75,1 (73,4%)
CeO2 0,05 64,5 (63,0%)
Ugyanitt megadjuk a ritkaföldfém-adalék nélkül végzett tenyésztésseel kapott 2-keto-L-gulonsav mennyiségét is.
A zárójelben feltüntetett adatok kitermelést jelentenek.
5. példa
Bacillus megaterium (IFO 12 108) mikrobasejteket, amelyeket az 1. táblázatban megadott ferde táptalajban szaporítottunk 28 ’C-on 2 napig, 10 ml sterilizált vízben szuszpendálunk, és az egészet egy Sakaguchi-lombikba tesszük, amely az 1. példában ismertetett 500 ml tenyésztőközeget tartalmaz és ide-oda rázással (85 rázás/perc) 28 ’C-on 2 napig tenyésztjük, így a Bacillus megaterium oltótenyészetét kapjuk. 30 liter táptalajt, amelynek pH-ja-7,0 és összetétele: 4,0% szacharóz, 4,0% őrölt gyapotmag, 0,65% K2HPO4, 0,55% KH2PO4, 0,05% ammónium-szulfát, 0,05% NaCl, 0,05% MgSO4*7H2O és 0,05% pantoténsav-kalcium-só egy 50 literes fermentorba helyezünk és 125 ’C-on 20 percig autoklávban kezeljük. A fermentort egy liter Bacillus megaterium oltótenyészettel beoltjuk és 4 napig tenyésztjük a következő feltételekkel:
Keverés: 200 fordulat/perc
Levegőzés: 24 liter/perc
Belső nyomás: l.Okg/cm2
Hőmérséklet: 28 ’C.
A kapott tenyészetet 120 ’C-on 20 percig autoklávban kezeljük, hideg helyen tároljuk és ezt a Bacillus megaterium sterilizált tenyészetet (a továbbiakban ezt megatáptalajnak nevezzük) a fermentációs közeg egyik komponenseként használjuk. 20 ml-t az 1. példában leírt oltótenyészetből egy 200 ml-es Erlenmeyer-lombikba helyezünk és 120 ’C-on 20 percig autoklávban kezeljük. Az 1. táblázatban ismertetett ferde közegen 28 ’C-on 4 napig szaporított Pseudogluconobacter saccharoketogenes TH14-86 törzsből egy kacsnyi mikrobasejtet a fenti lombikba oltunk és rázással 30 ’C-on 2 napig tenyésztjük. A kapott tenyészetből 20 ml-t egy egyliteres Erlenmeyerlombikba helyezünk, amely 200 ml táptalajt tartalmaz. Összetétele: 2,0% D-glukóz, 3,0 térfogat% megatáptalaj, 1,0% CSL, 0(5% élesztőkivonat, 0,1% pepton, 0,3% ammónium-szulfát, 2,0% CaCÖ3 (Akadama) és azt rázással 30 ’C-on 2 napig tenyésztjük és így a TH14-86 törzsből egy második oltótenyészetet nyerünk.
Ettől függetlenül egy 200 ml-es Erlenmeyer-lombikot, amely 20 ml 2. példában leírt oltótenyészetet tartalmaz, beoltunk egy huroknyi ferde közegen 28 ’C-on napig szaporított Bacillus megaterium IFO 12 108 mikrobasejttel és rázással tenyésztjük 28 ’C-on 2 napig. így egy oltótenyészetet kapunk a bekeverendő mikroorganizmusból.
g L-szorbózt annyi vízben oldunk, hogy az oldat térfogata 300 ml legyen. Ezután 60 g CSL-t, 6 g szárított élesztőt, 9 g ammónium-szulfátot, 3 g FeSO4*7H2O-t, 3 mg FMN-t, 3 mg tiamint, 1,5 mg biotint, és 0,5 g Actocolt (a Takeda Chemical Industries Ltd. Japán terméke) annyi vízben oldunk vagy szuszpendálunk, hogy az oldat térfogata 800 ml legyen. Külön szuszpendálunk 240 g CaCO3-t (Akadama) és 150 mg Ce2(CO3)3*8H2O-t annyi vízben, hogy a szuszpenzió térfogata 1000 ml legyen. Miután valamennyi táptalajt 120 ’C-on 20 percig autoklávban kezelünk, ezeket egy 5 literes fermentorba helyezzük, amelyet előzetesen sterilizálunk. 300 ml fentiekben leírt TH14-86 törzs második oltótenyészetet és 4 ml bekeverendő mikroorganizmus oltótenyészetet ebbe a fermentorba oltunk és a tenyésztést a következő körülmények között végezzük:
Hőmérséklet: 30 ’C
Levegőztetés: 2,4 liter/perc
Keverés: 800 fordulat/perc
Külön feloldunk 528 g L-szorbózt és 150 mg LaCl3’7H2O-t annyi vízben, hogy az oldat térfogata 900 ml legyen. 6 g ammónium-szulfátot és 3 g FeSO4*7H2O-t annyi vízben oldunk, hogy az oldat térfogata 100 ml legyen. Mindkét oldatot 120 'C-on 20 percig autoklávban kezeljük és aszeptikusán összekeverjük. A tenyészet elkezdésétől számított hatodik órától kezdve ezt a keveréket folyamatosan a fermentorba adagoljuk és az adagolást 24 óra alatt fejezzük be. Az adagolás befejezése után a tenyésztést további 8 órán keresztül folytatjuk (a teljes tenyésztési időszak 38 óra), ezalatt az L-szorbőz teljesen felhasználódik a tenyészetben és 3,16 liter fermentációs oldatot kapunk. A fermentációs oldat 176,0 mg/ml 2-keto-L-gulonsavat tartalmaz (kitermelés: 86,0%).
A tenyésztést elvégezzük ugyanilyen körülmények mellett, azzal a különbséggel, hogy nem alkalmazunk Ce2(CO3)3*8H2O-t és LaCl3»7H2O-t. Ebben az esetben a tenyésztést további 22 órán keresztül folytatjuk a keverék hozzáadása után és így az L-szorbőz teljesen elfogy. (Teljes tenyésztési periódus: 52 óra)
Az így nyert fermentációs oldatban (3,09 liter) 161,4 mg/ml 2-keto-L-gulonsav mutatható ki. (Kitermelés: 77,1%)
6. példa
260 ml 6 n kénsavat keverés közben hozzáadunk 1 liter 5. példában előállított fermentációs oldathoz, amely 176,0 mg/ml 2-keto-L-gulonsavat tartalmaz. A keletkezett oldhatatlan részeket, például gipszet és sejteket cetrifugálással elválasztjuk. A kapott felülúszót (1,150 ml) IR 120B típusú (Hv típusú, a Rohm and Haas, USA terméke) kationcserélő gyantát tartalmazó oszlopon keresztülbocsátjuk (200 ml), majd az oszlopot 150 ml desztillált vízzel mossuk. Az eluátumot és a mosóoldatokat egyesítjük és egy olyan oszlopra visszük, amely 200 ml Shirasagi-61
HU 203 787 Β szenet (a Takeda Chemical Industries Ltd., Japán terméke, kromatogiáfia céljára) tartalmaz és az oszlopot 150 ml desztillált vízzel mossuk. Az eluátumot és a mosóoldatokat egyesítjük, így 1450 ml oldatot kapunk, amelyet 250 ml-re sűrítünk csökkentett nyomáson, 50'C hő- 5 mérsékleten. A koncentrátumot 5 ’C- on egy éjszakán át pihentetjük, így kiválik a 2-keto-L-gulonsav, A kapott kristályokat szűréssel elválasztjuk és kevés hűtött vízzel, 50%-os hideg metanollal és hideg metanollal mossuk. A kapott terméket foszfor-pentoxid felett vákuumban szá- 10 rítjuk, és így 156 g 2-keto-L-gulonsav-monohidrátot kapunk, amely színtelen kristály. Kitermelés: 81,1%. Olvadáspont 171 ’C (bomlik).
Elemanalízis a CeHjoOrHzO összegképlet alapján: számított C 33,97% H 5,62%. 15 talált C 33,91% H 5,65%.
Fajlagos forgatóképesség: [a]j?—48’ (c-1,0 H2Oban).
7. példa 20
200 ml-es Erlenmeyer-lombikba 20 ml következő összetételű táptalajt teszünk: 2,0% D-glukóz, 3,0 térfogat% megatáptalaj, 1,0% CSL, 0,5% élesztőkivonat, 0,1% pepton, 0,3% ammónium-szulfát és 2,0% CaCOj (Super 1700, Maruo Calcium Κ. K., Japán 25 terméke) és azt a Pseudogluconobacter saccharoketogenes TH14-86 törzs mikrobasejtjeivel beoltjuk. Rázókultúrával tenyésztjük 30 ’C-on 2 napig. A kapott tenyészetből 2 ml-t egy 200 ml-es Erlenmeyer-lombikba helyezünk, amely 20 ml azonos táptalajt tártál- 30 máz és ugyanolyan módon végezzük a tenyésztést, hogy az oxidációs baktériumból egy második oltótenyészetet nyerjünk.
ml fermentációs közeget, amelynek összetétele 2,0% CSL, 05% szárított élesztő, 0,3% ammónium- 35 szulfát, 0,05% Na2S2O3»5H2O, 0,1% FeSO4«7H2O,
5% Ca-CO3 (Super 1700, a Maruo Calcium Κ. K., Japán terméke), és 12,5% külön sterilizált L-szorbózt egy 200 ml-es Erlenmeyer-lombikba helyezünk és 120 ’C-on 20 percig autoklávban kezelünk. A 40 CeCl3»7H2O-t külön sterilizáljuk és különböző mennyiségben az Erlenmeyer-lombikba adjuk, majd azt 1,25 ml fentebb leírt második oltótenyészettel és 0,1 ml, 5. példában ismertetett bekeverendő mikroorganizmus oltótenyészettel beoltjuk. A tenyésztést rá- 45 zókultúrával 30 *C-on 3 napig végezzük, a fermentációs oldatban kapott 2-keto-L-gulonsav mennyiségét mg/ml-ben az 5. táblázatban tüntetjük fel.
5. táblázat 50
8. példa
A TH 14-86 oxidáló baktériumtörzsből a 7. példában leírt módon másodlagos oltótenyészetet készítünk. 25 ml fermentációs közeget, amelynek összetétele 2,0% CSL, 0,5% szárított élesztő, 0,3% ammónium-szulfát, 0,05% Na2S2O3*5H2O, 0,1% Fe -SO4*7H2O, 25% CaCOs (a Wako Pure Chemical Industries, Japán, garantált reagense) és 75% előzetesen sterilizált L-szorbózt egy 200 ml-es Erlenmeyer-lombikba helyezünk és sterilizálunk. Különböző mennyiségű, külön sterilizált CeCl3*7H2O-t adunk a fermentációs közeget tartalmazó Erlenmeyer-lombikba és 1,25 ml fentebb ismertetett második oltótenyészettel beoltjuk. A tenyésztést rázással 30 *C-on 3 napon keresztül folytatjuk, a fermentációs oldatban kapott 2-keto-L-gulonsav mennyiségét mg/ml-ben a 6. táblázatban tüntetjük fel.
6. táblázat
Hozzáadott CeCl3-7H2O (%) Keletkezett 2-keto-L-gulonsav
0 30,0(37,1%)
0,00001 61,2 (75,7%)
0,0001 67,1 (83,0%)
0,001 70,7 (875%)
0,01 70,6 (87,4%)
0,1 70,5 (87,2%)
A zárójelben feltüntetett adatok kitermelést jelentenek.
9. példa
A TH14-86-OS oxidáló baktériumtörzsből a 7. példában leírt módon második oltótenyészetet készítünk. Egy 200 ml-es Erlenmeyer-lombikba belehelyezünk 20 ml fermentációs közeget, amelynek összetétele 2,0% CSL, 0,5% szárított élesztő, 0,3% ammonium-szulfát, 0,05% Na2S2O3»5H2O, 0,1% FeSO4*7H2O, 5,0% CaCO3 (Super 1700), valamint 12,0% külön sterilizált L-szorbózt és a 7. táblázatban feltüntetett nehézségű és fajtájú adalékanyagot, majd az egészet sterilizáljuk. A táptalajt ezután 1 ml fentebb készített második oltótenyészettel beoltjuk és rázótenyésztést végzünk 30 ’C-on 2 napig. Az így kapott 2-keto-Lgulonsav mennyiségét nagy teljesítményű folyadékkromatográfiával állapítjuk meg. Az eredményeket a 7. táblázatban tüntetjük fel. Ugyanitt megadjuk az adalékanyag nélkül végzett tenyésztés eredményét is.
Hozzáadott Keletkezett CeCl3«7H2O (%) 2-keto-L-gulonsav
0 105,3 (78,2%)
0,002 116,3 (86,3%)
0,01 119,7(88,9%)
0,05 118,2 (87,8%)
A zárójelben feltüntetett adatok kitermelést jelentenek. 60
7. táblázat
Adalék Hozzáadott (%) Keletkezett
2-keto-L-gulonsav nincs
LaCl3»7H2O
NdCl3»6H2O
CeCl3«7H2O
85,1 (65,8%)
0,005 105,4(81,5%)
0,005
0,005
HU 203 787 Β
Adalék Hozzáadott (%) Keletkezett
2-keto-L-gulonsav
NdCl3«6H2O 0,005 105,8 (81,8%)
HoCl3*6H2O 0,005
Lantán1· (darabos) 0,005 102,9 (79,6%)
Neodímium2· (fém) 0,005 99,4(79,6%)
Nyers ritkaföldfém-
-klorid3· 0,005 103,6 (80,1%)
Vegyes ritkaföldfém-
-oxid4· 0,005 101,9 (78,8%)
Megjegyzések:
*· és 1 - a Wako Pure Chemical Industries, Japán gyártmánya.
3· - nyers ritkaföldfém-klorid (a Mitsubishi Kaséi K. K., Japán terméke), amely a következő ritkaföldfémelemeket tartalmazza: 18,3% Ce, 10% La, 7,1% Nd és 2,0% Pr.
4· -kevert ritkafőldfém-oxid (a Santoku Kinzoku Kogyo Κ. K., Japán terméke), amelynek összetétele a következő: 29,5% LaíOj, 50% CeO2, 4,9% PreOn, 16,0% Nd2O3 és 0,03%-nál kevesebb Sm2O3.
A zárójelben feltüntetett adatok kitermelést jelentenek.

Claims (5)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Eljárás 2-keto-L-gulonsav előállítására valamely Pseudogluconobacter saccharoketogenes fajhoz tartozó mikroorganizmus L-szorbózt tartalmazó tápközegben történő fermentálásával, azzal jellemezve, hogy a tápközeghez viszonyítva 0,000001-0,1 tömeg/térfogat% ritkaföldfémet is tartalmazó tápközegben tenyésztünk.
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy ritkaföldfémként szkandiumot, ittriumot, lantánt, cériumot, prazeodíniumot, neodímiumot, szamáriumot, európiumot, gadolíniumot, terbiumot, diszpróziumot, holmiumot, erbiumot, túliumot, itteibiumot, és/vagy lutéciumot alkalmazunk.
  3. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a ritkaföldfémet fémpor, fémtömb, klorid, karbonát, szulfát, nitrát, oxid vagy oxalát alakban adjuk a tápközeghez.
  4. 4. Az 1.igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a ritkaföldfémet a tápközeghez viszonyítva 0,000ΙΟ,05 tömeg/térfogat%-nyi mennyiségben alkalmazzuk.
  5. 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy mikroorganizmusként Pseudogluconobacter saccharoketogenes K591s (FERM BP-1130)-t, 12-5 (FERM BP-1129)-t, ΊΉ14-86 (FERM BP-1128)-t, 1215 (FERM BP-1132)-t, 12-4 (FERM BP-1131)-t vagy 22-3 (FERM BP-1133)-t alkalmazunk.
HU883117A 1987-06-19 1988-06-17 Process for producing 2-keto-1-gulonic acid HU203787B (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP15410087 1987-06-19

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUT47322A HUT47322A (en) 1989-02-28
HU203787B true HU203787B (en) 1991-09-30

Family

ID=15576917

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU883117A HU203787B (en) 1987-06-19 1988-06-17 Process for producing 2-keto-1-gulonic acid

Country Status (12)

Country Link
US (1) US4877735A (hu)
EP (1) EP0295861B1 (hu)
KR (1) KR960015455B1 (hu)
CN (1) CN1025049C (hu)
AT (1) ATE86304T1 (hu)
CA (1) CA1308051C (hu)
DE (1) DE3878747T2 (hu)
DK (1) DK171713B1 (hu)
ES (1) ES2053735T3 (hu)
HU (1) HU203787B (hu)
IE (1) IE63092B1 (hu)
RU (1) RU1788967C (hu)

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4933289A (en) * 1986-06-05 1990-06-12 Takeda Chemical Industries, Ltd. Biologically pure cultures of Pseudomonas sorbosoxidans useful for producing 2-keto-L-gulonic acid
TW293036B (hu) * 1992-11-27 1996-12-11 Takeda Pharm Industry Co Ltd
CN1048282C (zh) * 1993-07-09 2000-01-12 武田药品工业株式会社 生产2－酮－l－古洛糖酸的方法
CN1080761C (zh) * 1993-12-24 2002-03-13 Basf公司 2－酮基－l－古洛糖酸的改良性生产方法
US5834231A (en) * 1996-10-24 1998-11-10 Archer Daniels Midland Co. Bacterial strains and use thereof in fermentation process for 2-keto-L-gulonic acid production
AU736422B2 (en) * 1997-01-31 2001-07-26 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Method for producing an oxide with a fermentation process
BR9913563A (pt) 1998-09-11 2001-05-22 Archer Daniels Midland Co Cepas bacterianas para produção de ácido 2-ceto-l-gulÈnico
US6153791A (en) * 1999-08-02 2000-11-28 Archer-Daniels-Midland Company Process for purifying 2-keto-L-gulonic acid
US6902917B1 (en) * 1999-08-03 2005-06-07 Archer-Daniels-Midland Company Process for recovery of organic acids from fermentration broths
US7033824B2 (en) * 2000-04-05 2006-04-25 Archer-Daniels-Midland Company Ketogulonigenium shuttle vectors
WO2001077348A2 (en) * 2000-04-05 2001-10-18 Archer-Daniels-Midland Company Ketogulonigenium endogenous plasmids
US6387654B1 (en) 2000-05-04 2002-05-14 Archer-Daniels-Midland Company Bacterial strains and fermentation processes for the production of 2-keto-l-gulonic acid
US7381428B2 (en) * 2003-08-26 2008-06-03 Shire International Licensing B.V. Stabilized lanthanum carbonate compositions
EP2792363B1 (en) * 2003-08-26 2016-06-29 Shire Biopharmaceuticals Holdings Ireland Limited Pharmaceutical formulation comprising lanthanum compounds

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB228273A (en) * 1923-11-03 1925-02-03 Simeon Collinson Improvements in and relating to trolley or the like collector shoes for electric traction
US2421612A (en) * 1945-05-04 1947-06-03 Byron E Gray Preparation of 2-keto gulonic acid and its salts
US4013789A (en) * 1974-01-09 1977-03-22 Pfizer Inc. Mixture of antibiotics produced by new species of micromonospora
US3914218A (en) * 1974-01-09 1975-10-21 Pfizer 3-Methylthiorifamycins
JPS5135486A (en) * 1974-09-20 1976-03-25 Shionogi Seiyaku Kk 22 keto ll guronsan no seizohoho
US4155812A (en) * 1977-11-30 1979-05-22 Pfizer Inc. Fermentation process for converting L-gulonic acid to 2-keto-L-gulonic acid
DK171869B1 (da) * 1985-10-22 1997-07-21 Takeda Chemical Industries Ltd Fremgangsmåde til fremstilling af 2-keto-L-gulonsyre samt biologisk ren mikroorganismekultur til anvendelse ved fremgangsmåden

Also Published As

Publication number Publication date
DK328488A (da) 1988-12-20
DE3878747D1 (de) 1993-04-08
EP0295861B1 (en) 1993-03-03
US4877735A (en) 1989-10-31
ES2053735T3 (es) 1994-08-01
HUT47322A (en) 1989-02-28
CN1025049C (zh) 1994-06-15
DK328488D0 (da) 1988-06-16
DE3878747T2 (de) 1993-06-09
KR960015455B1 (ko) 1996-11-14
ATE86304T1 (de) 1993-03-15
EP0295861A2 (en) 1988-12-21
KR890000668A (ko) 1989-03-16
IE881846L (en) 1988-12-19
CN1030789A (zh) 1989-02-01
IE63092B1 (en) 1995-03-22
CA1308051C (en) 1992-09-29
EP0295861A3 (en) 1989-06-28
RU1788967C (ru) 1993-01-15
DK171713B1 (da) 1997-04-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU203787B (en) Process for producing 2-keto-1-gulonic acid
JP3192487B2 (ja) 発酵方法
JP3016883B2 (ja) 発酵法による５’−キサンチル酸の製造法
KR910002857B1 (ko) 폴리-d-(-)-3-하이드록시부티르산의 제조방법
CA1152917A (en) Preparation of 2-keto-l-gulonic acid
US5747306A (en) Process for producing 2-keto-L-gulonic acid using electrodialysis
JPH0767673A (ja) ２−ケト−ｌ−グロン酸の製造方法
US6387654B1 (en) Bacterial strains and fermentation processes for the production of 2-keto-l-gulonic acid
US5466588A (en) Production of high optical purity D-lactic acid
US3087863A (en) Amino acid synthesis
US3296089A (en) Process for the production of ribosylphosphates of 8-azapurine derivatives by fermentation
EP1043400B1 (en) Process for producing ¬s,s|-ethylenediamine-n,n'-disuccinic acid
WO2001083798A1 (en) Bacterial strains and fermentation processes for the production of 2-keto-l-gulonic acid
CA1119981A (en) Process for preparing 2,5-diketogluconic acid
CN100560728C (zh) 2-kga的生产方法
JPH0568576A (ja) コハク酸の製造法
JPH0523748B2 (hu)
US4430429A (en) Production of vitamin B12 -activity substances
JPH0561912B2 (hu)
WO2004029262A2 (en) Production of 2 - keto - l - gulonic acd
US2968594A (en) Amino acid and process
JPH0337918B2 (hu)
JPH0559706B2 (hu)
CN117106631A (zh) 辅酶q10发酵培养基、混合补料液及低成本、清洁发酵工艺
JPH05268991A (ja) Ｄ−リンゴ酸の製造法

Legal Events

Date Code Title Description
HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee