JPH0767673A - ２−ケト−ｌ−グロン酸の製造方法 - Google Patents
２−ケト−ｌ−グロン酸の製造方法Info
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- JPH0767673A JPH0767673A JP15449194A JP15449194A JPH0767673A JP H0767673 A JPH0767673 A JP H0767673A JP 15449194 A JP15449194 A JP 15449194A JP 15449194 A JP15449194 A JP 15449194A JP H0767673 A JPH0767673 A JP H0767673A
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- fermentation
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 従来の２−ケト−Ｌ−グロン酸の微生物的製
造における発酵時間の短縮、回収効率の向上。 【構成】 ２−ケト−Ｌ−グロン酸(以下、２ＫＧＡと
称することもある)生産能力を有する微生物を少なくと
も１種用いた発酵法または菌体反応法による２ＫＧＡの
製造方法において、発酵液または菌体反応液中に蓄積す
る生産物である２ＫＧＡを単独または対イオンとしての
低分子陽イオンと共に電気透析により発酵液または菌体
反応液から抜き取ることを特徴とする２ＫＧＡの製造方
法。 【効果】 同一基質量で従来法にくらべ、発酵時間を著
しく短縮でき、また、基質の高い酸化速度を長時間維持
できる結果、１回の培養で得られる２ＫＧＡ量を著しく
増加できる。
造における発酵時間の短縮、回収効率の向上。 【構成】 ２−ケト−Ｌ−グロン酸(以下、２ＫＧＡと
称することもある)生産能力を有する微生物を少なくと
も１種用いた発酵法または菌体反応法による２ＫＧＡの
製造方法において、発酵液または菌体反応液中に蓄積す
る生産物である２ＫＧＡを単独または対イオンとしての
低分子陽イオンと共に電気透析により発酵液または菌体
反応液から抜き取ることを特徴とする２ＫＧＡの製造方
法。 【効果】 同一基質量で従来法にくらべ、発酵時間を著
しく短縮でき、また、基質の高い酸化速度を長時間維持
できる結果、１回の培養で得られる２ＫＧＡ量を著しく
増加できる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、微生物を用いたＬ−ア
スコルビン酸合成の中間体として有用な２−ケト−Ｌ−
グロン酸(以下、２ＫＧＡと称することもある)の製造方
法に関する。さらに詳しくは、２ＫＧＡを最終生産物と
する発酵または菌体反応を行うに際し、電気透析により
培養液もしくは菌体反応液から、２ＫＧＡ単独または２
ＫＧＡを対イオンとしての低分子陽イオンと共に分離す
る、いわゆる電気透析発酵に関する。なお、以下、「２
ＫＧＡを最終生産物とする発酵または菌体反応」を「２Ｋ
ＧＡ発酵」と称することもあり、「菌体反応」も含めて「発
酵」と称することもあり、また、「菌体反応液」も含めて
「培養液」と称することもある。
スコルビン酸合成の中間体として有用な２−ケト−Ｌ−
グロン酸(以下、２ＫＧＡと称することもある)の製造方
法に関する。さらに詳しくは、２ＫＧＡを最終生産物と
する発酵または菌体反応を行うに際し、電気透析により
培養液もしくは菌体反応液から、２ＫＧＡ単独または２
ＫＧＡを対イオンとしての低分子陽イオンと共に分離す
る、いわゆる電気透析発酵に関する。なお、以下、「２
ＫＧＡを最終生産物とする発酵または菌体反応」を「２Ｋ
ＧＡ発酵」と称することもあり、「菌体反応」も含めて「発
酵」と称することもあり、また、「菌体反応液」も含めて
「培養液」と称することもある。
【０００２】
【従来の技術】Ｌ−アスコルビン酸合成の中間体として
有用な２−ケト−Ｌ−グロン酸は、工業的に確立された
いわゆるライヒシュタイン法(Ｈelvetica Ｃhemica
Ａcta第１７巻、３１１頁、１９３４参照)によって生産
されてきた。しかし、この方法は工程数も多く、多量の
有機溶媒を必要とし、現代の工業技術としては満足すべ
きものではない。一方、ライヒシュタイン法に替わるも
のとして、主に微生物を用いた方法がいくつか提案され
てきている。例えば、Ｄ−グルコースを微生物的に酸化
して２,５−ジケト−Ｄ−グルコン酸にした後、これを
さらに微生物的または化学的に２ＫＧＡへと還元する方
法(特公昭３９−１４４９３号、特公昭５３−２５０３
３、特公昭５６−１５８７７号、特公昭５９−３５９２
号参照)、さらに、コリネバクテリウムの２,５−ジケト
−Ｄ−グルコン酸還元酵素遺伝子を２,５−ジケト−Ｄ
−グルコン酸生産能を有するエルビニアに組換えＤＮＡ
技術により導入し、一段の発酵プロセスでＤ−グルコー
スから２ＫＧＡを得る方法、(サイエンス(Ｓcience)、
第２３０巻、１４４頁(１９８５))、Ｄ−ソルビトール
またはＬ−ソルボースを出発物質とし、これをグルコノ
バクター属細菌を用いて酸化することによって２ＫＧＡ
を得る方法(特開平２−１５０２８７号参照)が報告され
ている。
有用な２−ケト−Ｌ−グロン酸は、工業的に確立された
いわゆるライヒシュタイン法(Ｈelvetica Ｃhemica
Ａcta第１７巻、３１１頁、１９３４参照)によって生産
されてきた。しかし、この方法は工程数も多く、多量の
有機溶媒を必要とし、現代の工業技術としては満足すべ
きものではない。一方、ライヒシュタイン法に替わるも
のとして、主に微生物を用いた方法がいくつか提案され
てきている。例えば、Ｄ−グルコースを微生物的に酸化
して２,５−ジケト−Ｄ−グルコン酸にした後、これを
さらに微生物的または化学的に２ＫＧＡへと還元する方
法(特公昭３９−１４４９３号、特公昭５３−２５０３
３、特公昭５６−１５８７７号、特公昭５９−３５９２
号参照)、さらに、コリネバクテリウムの２,５−ジケト
−Ｄ−グルコン酸還元酵素遺伝子を２,５−ジケト−Ｄ
−グルコン酸生産能を有するエルビニアに組換えＤＮＡ
技術により導入し、一段の発酵プロセスでＤ−グルコー
スから２ＫＧＡを得る方法、(サイエンス(Ｓcience)、
第２３０巻、１４４頁(１９８５))、Ｄ−ソルビトール
またはＬ−ソルボースを出発物質とし、これをグルコノ
バクター属細菌を用いて酸化することによって２ＫＧＡ
を得る方法(特開平２−１５０２８７号参照)が報告され
ている。
【０００３】また、土壌よりＬ−ソルボースを効率よく
２ＫＧＡへと変換する能力を有する細菌シュードグルコ
ノバクター・サッカロケトゲネスが分離され（特開昭６
２−２２８２８８号参照）、さらに、特開昭６４−８５
０８８号には、培地に希土類元素を添加することにより
本菌の２ＫＧＡ生成が著しく促進されるという知見に基
づき上記菌を用いた効率の良いＬ−ソルボースからの２
ＫＧＡ生産プロセスが開示されている。
２ＫＧＡへと変換する能力を有する細菌シュードグルコ
ノバクター・サッカロケトゲネスが分離され（特開昭６
２−２２８２８８号参照）、さらに、特開昭６４−８５
０８８号には、培地に希土類元素を添加することにより
本菌の２ＫＧＡ生成が著しく促進されるという知見に基
づき上記菌を用いた効率の良いＬ−ソルボースからの２
ＫＧＡ生産プロセスが開示されている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】これらの従来の方法で
は、いずれも用いる培養方法は、糖、糖アルコール、糖
酸等の基質を培養開始時に一括添加するか、その一部ま
たは全部を半連続的もしくは連続的に添加して培養し、
生成物である２ＫＧＡが充分量蓄積し、それ以上培養を
続けても効率よく２ＫＧＡへの変換が起こらなくなった
時点で培養を止めて培養液を得る、バッチ培養あるいは
フィード培養と呼ばれる培養法を採用している。しか
し、これらの方法は、変換反応に要する時間、最終反応
液中の生産物濃度の点で、必ずしも満足できるものでは
ない。その原因としては種々考えられるが、例えば、生
成する生産物、あるいは中和剤として添加するアルカリ
塩もしくはこれらの複合効果による阻害等が挙げられ
る。
は、いずれも用いる培養方法は、糖、糖アルコール、糖
酸等の基質を培養開始時に一括添加するか、その一部ま
たは全部を半連続的もしくは連続的に添加して培養し、
生成物である２ＫＧＡが充分量蓄積し、それ以上培養を
続けても効率よく２ＫＧＡへの変換が起こらなくなった
時点で培養を止めて培養液を得る、バッチ培養あるいは
フィード培養と呼ばれる培養法を採用している。しか
し、これらの方法は、変換反応に要する時間、最終反応
液中の生産物濃度の点で、必ずしも満足できるものでは
ない。その原因としては種々考えられるが、例えば、生
成する生産物、あるいは中和剤として添加するアルカリ
塩もしくはこれらの複合効果による阻害等が挙げられ
る。
【０００５】一方、乳酸発酵、酢酸発酵等の有機酸発酵
では、生成する有機酸または中和剤として加えるアルカ
リ塩あるいはこれらの複合効果による阻害を回避するた
めの試みとして、陽極と陰極の間に陽イオン交換膜と陰
イオン交換膜を、必要により、バイポーラー膜を配置し
てなる電気透析槽に培養液を通して通電することによっ
て、培養液中より生成物である有機酸、またはこれらの
有機酸と共に対イオンとしての低分子の陽イオンを分離
し、実質的に培養液中のこれらの濃度を低いレベルに維
持する、いわゆる電気透析発酵を適用することが試みら
れている(特公昭５６−５０９５８号、特開昭６２−１
４６５９５号、日本発酵工学会１９９１年度大会講演要
旨集参照)。また、電気透析槽中で、発酵により得られ
た生成物を電気透析によって発酵液から分離する通電透
析発酵法において、ポリリン酸またはその塩を存在させ
ることを特徴とする通電透析発酵法が特開昭６３−１４
８９７９号に記載されている。しかし、２ＫＧＡを最終
生産物とする発酵においては、現在までにこの技術が適
用されたことはなかった。
では、生成する有機酸または中和剤として加えるアルカ
リ塩あるいはこれらの複合効果による阻害を回避するた
めの試みとして、陽極と陰極の間に陽イオン交換膜と陰
イオン交換膜を、必要により、バイポーラー膜を配置し
てなる電気透析槽に培養液を通して通電することによっ
て、培養液中より生成物である有機酸、またはこれらの
有機酸と共に対イオンとしての低分子の陽イオンを分離
し、実質的に培養液中のこれらの濃度を低いレベルに維
持する、いわゆる電気透析発酵を適用することが試みら
れている(特公昭５６−５０９５８号、特開昭６２−１
４６５９５号、日本発酵工学会１９９１年度大会講演要
旨集参照)。また、電気透析槽中で、発酵により得られ
た生成物を電気透析によって発酵液から分離する通電透
析発酵法において、ポリリン酸またはその塩を存在させ
ることを特徴とする通電透析発酵法が特開昭６３−１４
８９７９号に記載されている。しかし、２ＫＧＡを最終
生産物とする発酵においては、現在までにこの技術が適
用されたことはなかった。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、これらの
事情に鑑み、２ＫＧＡ発酵におけるより有利な培養法を
見出すべく、２ＫＧＡ発酵にこの電気透析発酵を適用す
ることを試み、鋭意検討を重ねた。その結果、本発酵に
おいて電気透析によって培養液中より２ＫＧＡを分離す
ることで、上記の、通常のバッチ培養またはフィード培
養に比べ、同一量の基質を酸化する場合では発酵時間の
著しい短縮を可能とし、さらには、培養時間を延長し、
さらに基質をフィードすることにより、１回の培養で得
られる２ＫＧＡを飛躍的に向上させることを可能となら
しめ、本発明を完成するに至った。
事情に鑑み、２ＫＧＡ発酵におけるより有利な培養法を
見出すべく、２ＫＧＡ発酵にこの電気透析発酵を適用す
ることを試み、鋭意検討を重ねた。その結果、本発酵に
おいて電気透析によって培養液中より２ＫＧＡを分離す
ることで、上記の、通常のバッチ培養またはフィード培
養に比べ、同一量の基質を酸化する場合では発酵時間の
著しい短縮を可能とし、さらには、培養時間を延長し、
さらに基質をフィードすることにより、１回の培養で得
られる２ＫＧＡを飛躍的に向上させることを可能となら
しめ、本発明を完成するに至った。
【０００７】すなわち、本発明は、（１）２−ケト−Ｌ
−グロン酸(以下、２ＫＧＡと称することもある)生産能
力を有する微生物を少なくとも１種用いた発酵法または
菌体反応法による２ＫＧＡの製造方法において、発酵液
または菌体反応液中に蓄積する生産物である２ＫＧＡを
単独または対イオンとしての低分子陽イオンと共に電気
透析により発酵液または菌体反応液から抜き取ることを
特徴とする２ＫＧＡの製造方法、（２）２ＫＧＡ生産能
力を有する微生物がシュードグルコノバクター属、グル
コノバクター属、シュードモナス属、コリネバクテリウ
ム属、エルウィニア属細菌またはこれらの組み合わせで
ある上記（１）記載の方法、（３）２ＫＧＡ生産能力を
有する微生物がシュードグルコノバクター属またはグル
コノバクター属細菌である上記（１）記載の方法、
（４）２ＫＧＡ生産能力を有する微生物がシュードグル
コノバクター属細菌である上記（１）記載の方法、
（５）２ＫＧＡ生産能力を有する微生物がシュードグル
コノバクター・サッカロケトゲネスＫ５９１ｓ（ＦＥＲ
Ｍ ＢＰ−１１３０）、シュードグルコノバクター・サ
ッカロケトゲネスＴＨ１４−８６（ＦＥＲＭ ＢＰ−１
１２８）、シュードグルコノバクター・サッカロケトゲ
ネス１２−５（ＦＥＲＭ ＢＰ−１１２９）、シュード
グルコノバクター・サッカロケトゲネス１２−１５（Ｆ
ＥＲＭＢＰ−１１３２）、シュードグルコノバクター・
サッカロケトゲネス１２−４（ＦＥＲＭ ＢＰ−１１３
１）およびシュードグルコノバクター・サッカロケトゲ
ネス２２−３（ＦＥＲＭ ＢＰ−１１３３）から選ばれ
る上記（１）記載の方法、（６）対イオンとしての低分
子陽イオンが１価または２価の陽イオンである上記
（１）記載の方法、（７）対イオンとしての低分子陽イ
オンがＬi+、Ｎa+、Ｋ+、Ｃa2+、Ｍg2+またはＮＨ4 +で
ある上記（１）記載の方法、（８）発酵液または菌体反
応液中の２ＫＧＡ濃度を８０mg／ml以下に維持しながら
電気透析を行う上記（１）記載の方法、（９）２ＫＧＡ
生産能力を有する微生物を少なくとも１種用いた発酵法
または菌体反応法による２ＫＧＡの製造を他の細菌の存
在下で行う上記（１）記載の方法、（１０）２ＫＧＡ生
産能力を有する微生物を少なくとも１種用いた発酵法ま
たは菌体反応法による２ＫＧＡの製造を、バチルス属、
シュードモナス属、プロテウス属、シトロバクター属、
エンテロバクター属、エルウィニア属、キサントモナス
属またはフラボバクテリウム属に属する細菌の共存下で
行う上記（１）記載の方法、（１１）２ＫＧＡ生産能力
を有する微生物を少なくとも１種用いた発酵法または菌
体反応法による２ＫＧＡの製造を、バチルス・セレウス
ＩＦＯ ３１３１、バチルス・リケニホルミス ＩＦ
Ｏ １２２０１、バチルス・メガテリウムＩＦＯ １２
１０８、バチルス・プミルス ＩＦＯ １２０９０、バ
チルス・アミロリケファシエンス ＩＦＯ ３０２２、
バチルス・スブチリス ＩＦＯ １３７１９、バチルス
・サーキュランス ＩＦＯ ３９６７、シュードモナス
・トリホリ ＩＦＯ １２０５６、シュードモナス・マ
ルトフィリア ＩＦＯ １２６９２、プロテウス・イン
コンスタンス ＩＦＯ １２９３０、シトロバクター・
フロインディ ＩＦＯ １３５４４、エンテロバクター
・クロアカ ＩＦＯ３３２０、エルウィニア・ハービコ
ラ ＩＦＯ １２６８６、キサントモナス・ピシ ＩＦ
Ｏ １３５５６、キサントモナス・シトリ ＩＦＯ ３
８３５、フラボバクテリウム・メニンゴセプティカム
ＩＦＯ １２５３５、ミクロコッカス・バリアンス Ｉ
ＦＯ ３７６５またはエシェリヒア・コリ ＩＦＯ ３
３６６の共存下で行う上記（１）記載の方法に関する。
−グロン酸(以下、２ＫＧＡと称することもある)生産能
力を有する微生物を少なくとも１種用いた発酵法または
菌体反応法による２ＫＧＡの製造方法において、発酵液
または菌体反応液中に蓄積する生産物である２ＫＧＡを
単独または対イオンとしての低分子陽イオンと共に電気
透析により発酵液または菌体反応液から抜き取ることを
特徴とする２ＫＧＡの製造方法、（２）２ＫＧＡ生産能
力を有する微生物がシュードグルコノバクター属、グル
コノバクター属、シュードモナス属、コリネバクテリウ
ム属、エルウィニア属細菌またはこれらの組み合わせで
ある上記（１）記載の方法、（３）２ＫＧＡ生産能力を
有する微生物がシュードグルコノバクター属またはグル
コノバクター属細菌である上記（１）記載の方法、
（４）２ＫＧＡ生産能力を有する微生物がシュードグル
コノバクター属細菌である上記（１）記載の方法、
（５）２ＫＧＡ生産能力を有する微生物がシュードグル
コノバクター・サッカロケトゲネスＫ５９１ｓ（ＦＥＲ
Ｍ ＢＰ−１１３０）、シュードグルコノバクター・サ
ッカロケトゲネスＴＨ１４−８６（ＦＥＲＭ ＢＰ−１
１２８）、シュードグルコノバクター・サッカロケトゲ
ネス１２−５（ＦＥＲＭ ＢＰ−１１２９）、シュード
グルコノバクター・サッカロケトゲネス１２−１５（Ｆ
ＥＲＭＢＰ−１１３２）、シュードグルコノバクター・
サッカロケトゲネス１２−４（ＦＥＲＭ ＢＰ−１１３
１）およびシュードグルコノバクター・サッカロケトゲ
ネス２２−３（ＦＥＲＭ ＢＰ−１１３３）から選ばれ
る上記（１）記載の方法、（６）対イオンとしての低分
子陽イオンが１価または２価の陽イオンである上記
（１）記載の方法、（７）対イオンとしての低分子陽イ
オンがＬi+、Ｎa+、Ｋ+、Ｃa2+、Ｍg2+またはＮＨ4 +で
ある上記（１）記載の方法、（８）発酵液または菌体反
応液中の２ＫＧＡ濃度を８０mg／ml以下に維持しながら
電気透析を行う上記（１）記載の方法、（９）２ＫＧＡ
生産能力を有する微生物を少なくとも１種用いた発酵法
または菌体反応法による２ＫＧＡの製造を他の細菌の存
在下で行う上記（１）記載の方法、（１０）２ＫＧＡ生
産能力を有する微生物を少なくとも１種用いた発酵法ま
たは菌体反応法による２ＫＧＡの製造を、バチルス属、
シュードモナス属、プロテウス属、シトロバクター属、
エンテロバクター属、エルウィニア属、キサントモナス
属またはフラボバクテリウム属に属する細菌の共存下で
行う上記（１）記載の方法、（１１）２ＫＧＡ生産能力
を有する微生物を少なくとも１種用いた発酵法または菌
体反応法による２ＫＧＡの製造を、バチルス・セレウス
ＩＦＯ ３１３１、バチルス・リケニホルミス ＩＦ
Ｏ １２２０１、バチルス・メガテリウムＩＦＯ １２
１０８、バチルス・プミルス ＩＦＯ １２０９０、バ
チルス・アミロリケファシエンス ＩＦＯ ３０２２、
バチルス・スブチリス ＩＦＯ １３７１９、バチルス
・サーキュランス ＩＦＯ ３９６７、シュードモナス
・トリホリ ＩＦＯ １２０５６、シュードモナス・マ
ルトフィリア ＩＦＯ １２６９２、プロテウス・イン
コンスタンス ＩＦＯ １２９３０、シトロバクター・
フロインディ ＩＦＯ １３５４４、エンテロバクター
・クロアカ ＩＦＯ３３２０、エルウィニア・ハービコ
ラ ＩＦＯ １２６８６、キサントモナス・ピシ ＩＦ
Ｏ １３５５６、キサントモナス・シトリ ＩＦＯ ３
８３５、フラボバクテリウム・メニンゴセプティカム
ＩＦＯ １２５３５、ミクロコッカス・バリアンス Ｉ
ＦＯ ３７６５またはエシェリヒア・コリ ＩＦＯ ３
３６６の共存下で行う上記（１）記載の方法に関する。
【０００８】本発明において用いられる２ＫＧＡ生産能
を有する微生物としては、例えば、公知のシュードグル
コノバクター属細菌、グルコノバクター属細菌、シュー
ドモナス属菌、コリネバクテリウム属細菌、２,５−ジ
ケト−Ｄ−グルコン酸還元酵素遺伝子を組み込んだエル
ウィニア属細菌等が挙げられる。もちろん、これらの微
生物に限らず、２ＫＧＡを生産する能力を有する微生物
であれば、どのような微生物でも本発明の方法に用いる
ことができる。特に、シュードグルコノバクター属細菌
が好ましく用いられる。シュードグルコノバクター属の
菌としては、例えば、特開昭６２−２２８２８８号に記
載のシュードグルコノバクター・サッカロケトゲネスＫ
５９１ｓ（ＦＥＲＭ ＢＰ−１１３０）、１２−５（Ｆ
ＥＲＭＢＰ−１１２９）、ＴＨ１４−８６（ＦＥＲＭ
ＢＰ−１１２８）、１２−１５（ＦＥＲＭ ＢＰ−１１
３２）、１２−４（ＦＥＲＭ ＢＰ−１１３１）、２２
−３（ＦＥＲＭ ＢＰ−１１３３）等の菌株が挙げられ
る。
を有する微生物としては、例えば、公知のシュードグル
コノバクター属細菌、グルコノバクター属細菌、シュー
ドモナス属菌、コリネバクテリウム属細菌、２,５−ジ
ケト−Ｄ−グルコン酸還元酵素遺伝子を組み込んだエル
ウィニア属細菌等が挙げられる。もちろん、これらの微
生物に限らず、２ＫＧＡを生産する能力を有する微生物
であれば、どのような微生物でも本発明の方法に用いる
ことができる。特に、シュードグルコノバクター属細菌
が好ましく用いられる。シュードグルコノバクター属の
菌としては、例えば、特開昭６２−２２８２８８号に記
載のシュードグルコノバクター・サッカロケトゲネスＫ
５９１ｓ（ＦＥＲＭ ＢＰ−１１３０）、１２−５（Ｆ
ＥＲＭＢＰ−１１２９）、ＴＨ１４−８６（ＦＥＲＭ
ＢＰ−１１２８）、１２−１５（ＦＥＲＭ ＢＰ−１１
３２）、１２−４（ＦＥＲＭ ＢＰ−１１３１）、２２
−３（ＦＥＲＭ ＢＰ−１１３３）等の菌株が挙げられ
る。
【０００９】また、培地組成、培養温度などの培養条件
は、用いる菌株に適するように調整すればよく、例え
ば、シュードグルコノバクター属細菌を用いる２ＫＧＡ
発酵では、バチラス属細菌等と混合培養することによっ
て、発酵促進効果が得られることが判明しており(特開
昭６２−２２８２８８号)、本発明においてもこれらの
細菌を用いた混合培養を行うこともできる。
は、用いる菌株に適するように調整すればよく、例え
ば、シュードグルコノバクター属細菌を用いる２ＫＧＡ
発酵では、バチラス属細菌等と混合培養することによっ
て、発酵促進効果が得られることが判明しており(特開
昭６２−２２８２８８号)、本発明においてもこれらの
細菌を用いた混合培養を行うこともできる。
【００１０】例えば、本発明においてシュードグルコノ
バクター属細菌をＬ−ソルボースを含有する液体培地に
培養し、２−ケト−Ｌ−グロン酸を培養液中に生成させ
る場合に、シュードグルコノバクター属細菌（以下、酸
化菌または酸化菌株と称することがある）を単独で培養
するよりも、本酸化菌とは別種の細菌を混在させると、
２−ケト−Ｌ−グロン酸の生産量が顕著に増加する。混
在させる菌としては、例えば、バチルス属、シュードモ
ナス属、プロテウス属、シトロバクター属、エンテロバ
クター属、エルウィニア属、キサントモナス属およびフ
ラボバクテリウム属等に属する菌が挙げられ、さらに具
体例として下記に示す菌が挙げられる。
バクター属細菌をＬ−ソルボースを含有する液体培地に
培養し、２−ケト−Ｌ−グロン酸を培養液中に生成させ
る場合に、シュードグルコノバクター属細菌（以下、酸
化菌または酸化菌株と称することがある）を単独で培養
するよりも、本酸化菌とは別種の細菌を混在させると、
２−ケト−Ｌ−グロン酸の生産量が顕著に増加する。混
在させる菌としては、例えば、バチルス属、シュードモ
ナス属、プロテウス属、シトロバクター属、エンテロバ
クター属、エルウィニア属、キサントモナス属およびフ
ラボバクテリウム属等に属する菌が挙げられ、さらに具
体例として下記に示す菌が挙げられる。
【００１１】バチルス・セレウス(Ｂacillus cereus)
ＩＦＯ ３１３１ バチルス・リケニホルミス(Ｂacillus licheniformis)
ＩＦＯ １２２０１ バチルス・メガテリウム(Ｂacillus megaterium) ＩＦ
Ｏ １２１０８ バチルス・プミルス(Ｂacillus pumilus) ＩＦＯ １２
０９０ バチルス・アミロリケファシエンス(Ｂacillus amyloli
quefaciens)ＩＦＯ ３０２２ バチルス・スブチリス(Ｂacillus subtilis) ＩＦＯ
１３７１９ バチルス・サーキュランス(Ｂacillus circulans) Ｉ
ＦＯ ３９６７ シュードモナス・トリホリ(Ｐseudomonas trifolii)
ＩＦＯ １２０５６ シュードモナス・マルトフィリア(Ｐseudomonas maltop
hilia)ＩＦＯ １２６９２ プロテウス・インコンスタンス(Ｐroteus inconstans)
ＩＦＯ １２９３０ シトロバクター・フロインディ(Ｃitrobacter freundi
i)ＩＦＯ １３５４４ エンテロバクター・クロアカ(Ｅnterobacter cloacae)
ＩＦＯ ３３２０ エルウィニア・ハービコラ(Ｅrwinia herbicola) ＩＦ
Ｏ １２６８６ キサントモナス・ピシ(Ｘanthomonas pisi) ＩＦＯ
１３５５６ キサントモナス・シトリ(Ｘanthomonas citri) ＩＦＯ
３８３５ フラボバクテリウム・メニンゴセプティカム(Ｆlavobac
terium meningosepticum) ＩＦＯ １２５３５ ミクロコッカス・バリアンス(Ｍicrococcus varians)
ＩＦＯ ３７６５ エシェリヒア・コリ(Ｅscherichia coli) ＩＦＯ ３
３６６
ＩＦＯ ３１３１ バチルス・リケニホルミス(Ｂacillus licheniformis)
ＩＦＯ １２２０１ バチルス・メガテリウム(Ｂacillus megaterium) ＩＦ
Ｏ １２１０８ バチルス・プミルス(Ｂacillus pumilus) ＩＦＯ １２
０９０ バチルス・アミロリケファシエンス(Ｂacillus amyloli
quefaciens)ＩＦＯ ３０２２ バチルス・スブチリス(Ｂacillus subtilis) ＩＦＯ
１３７１９ バチルス・サーキュランス(Ｂacillus circulans) Ｉ
ＦＯ ３９６７ シュードモナス・トリホリ(Ｐseudomonas trifolii)
ＩＦＯ １２０５６ シュードモナス・マルトフィリア(Ｐseudomonas maltop
hilia)ＩＦＯ １２６９２ プロテウス・インコンスタンス(Ｐroteus inconstans)
ＩＦＯ １２９３０ シトロバクター・フロインディ(Ｃitrobacter freundi
i)ＩＦＯ １３５４４ エンテロバクター・クロアカ(Ｅnterobacter cloacae)
ＩＦＯ ３３２０ エルウィニア・ハービコラ(Ｅrwinia herbicola) ＩＦ
Ｏ １２６８６ キサントモナス・ピシ(Ｘanthomonas pisi) ＩＦＯ
１３５５６ キサントモナス・シトリ(Ｘanthomonas citri) ＩＦＯ
３８３５ フラボバクテリウム・メニンゴセプティカム(Ｆlavobac
terium meningosepticum) ＩＦＯ １２５３５ ミクロコッカス・バリアンス(Ｍicrococcus varians)
ＩＦＯ ３７６５ エシェリヒア・コリ(Ｅscherichia coli) ＩＦＯ ３
３６６
【００１２】これらの菌のいずれかを適当な培地に、２
０℃〜４０℃で１日から４日間培養して得られる培養液
を混合菌の種培養液として、用いることができる。その
移植量は通常、酸化菌（シュードグルコノバクター属）
のそれの１／１０から１／１０００とするのが望まし
い。この程度の移植量で混合菌を酸化菌と混合培養する
と、酸化菌の生育が促進され、それにつれて、酸化菌単
独培養の場合より、より高濃度のＬ−ソルボースが、よ
り短い時間で２−ケト−Ｌ−グロン酸に酸化される。混
合菌として用いられる細菌は、本発明の原料であるＬ−
ソルボースや生産物である２−ケト−Ｌ−グロン酸の資
化性が無いかまたは微弱な菌であることが望ましい。そ
の他の培養条件は、酸化菌の単独培養と特に変わるとこ
ろはない。前記の微生物の培養に用いられる培地は、該
菌株が利用し得る栄養源を含むものなら液状でも固体状
でもよいが、大量のものを得る時には液体培地を用いる
のが好ましい。
０℃〜４０℃で１日から４日間培養して得られる培養液
を混合菌の種培養液として、用いることができる。その
移植量は通常、酸化菌（シュードグルコノバクター属）
のそれの１／１０から１／１０００とするのが望まし
い。この程度の移植量で混合菌を酸化菌と混合培養する
と、酸化菌の生育が促進され、それにつれて、酸化菌単
独培養の場合より、より高濃度のＬ−ソルボースが、よ
り短い時間で２−ケト−Ｌ−グロン酸に酸化される。混
合菌として用いられる細菌は、本発明の原料であるＬ−
ソルボースや生産物である２−ケト−Ｌ−グロン酸の資
化性が無いかまたは微弱な菌であることが望ましい。そ
の他の培養条件は、酸化菌の単独培養と特に変わるとこ
ろはない。前記の微生物の培養に用いられる培地は、該
菌株が利用し得る栄養源を含むものなら液状でも固体状
でもよいが、大量のものを得る時には液体培地を用いる
のが好ましい。
【００１３】該培地には、通常微生物の培養に用いられ
る炭素源、窒素源、無機塩類、有機酸塩および微量栄養
素が用いられる。炭素源としては原料であるＬ−ソルボ
ースがそのまま使用されうるが、その他の補助炭素源と
して、例えば、グルコース、グリセリン、ショ糖、乳
糖、麦芽糖、糖蜜等が使用できる。窒素源としては、例
えば、アンモニウム塩類（例、硫酸アンモニウム、硝酸
アンモニウム、塩化アンモニウム、リン酸アンモニウム
等）、コーン・スティープ・リカー（以下、ＣＳＬと称
することもある）、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、
乾燥酵母、大豆粉、綿実粕、尿素等の無機または有機の
窒素含有物が挙げられる。また無機塩類としては、カリ
ウム、ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、マ
ンガン、コバルト、亜鉛、銅およびリン酸の塩類が用い
られる。微量栄養素としては前記の菌の生育必須因子で
あるＣoＡ、パントテン酸、ビオチン、チアミン、リボ
フラビンは勿論のこと、生育および２−ケト−Ｌ−グロ
ン酸生成に促進的効果を示すフラビンモノヌクレオチド
（以下ＦＭＮと称することもある）、フラビンアデニン
ジヌクレオチド（以下ＦＡＤと称することもある）、そ
の他のビタミン類、Ｌ−システイン、Ｌ−グルタミン
酸、チオ硫酸ナトリウム等が化合物として、または、そ
れらを含むものとして天然物を適宜加えられる。
る炭素源、窒素源、無機塩類、有機酸塩および微量栄養
素が用いられる。炭素源としては原料であるＬ−ソルボ
ースがそのまま使用されうるが、その他の補助炭素源と
して、例えば、グルコース、グリセリン、ショ糖、乳
糖、麦芽糖、糖蜜等が使用できる。窒素源としては、例
えば、アンモニウム塩類（例、硫酸アンモニウム、硝酸
アンモニウム、塩化アンモニウム、リン酸アンモニウム
等）、コーン・スティープ・リカー（以下、ＣＳＬと称
することもある）、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、
乾燥酵母、大豆粉、綿実粕、尿素等の無機または有機の
窒素含有物が挙げられる。また無機塩類としては、カリ
ウム、ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、マ
ンガン、コバルト、亜鉛、銅およびリン酸の塩類が用い
られる。微量栄養素としては前記の菌の生育必須因子で
あるＣoＡ、パントテン酸、ビオチン、チアミン、リボ
フラビンは勿論のこと、生育および２−ケト−Ｌ−グロ
ン酸生成に促進的効果を示すフラビンモノヌクレオチド
（以下ＦＭＮと称することもある）、フラビンアデニン
ジヌクレオチド（以下ＦＡＤと称することもある）、そ
の他のビタミン類、Ｌ−システイン、Ｌ−グルタミン
酸、チオ硫酸ナトリウム等が化合物として、または、そ
れらを含むものとして天然物を適宜加えられる。
【００１４】培養の手段は、静置培養でも、振盪培養あ
るいは通気撹拌培養法等の手段を用いてもよい。大量の
処理には、いわゆる深部通気撹拌培養によるのが望まし
い。培養条件は、勿論菌株の種類、培地の組成、その他
によっても異なり、要するに目的物が最も効率よく生産
されるように個々の場合に応じて選択すればよい。例え
ば、培養温度は２５〜３５℃にて行うのがよく、培地の
pＨは５〜９程度が望ましい。目的物の生成に伴ってpＨ
が低下するのが一般的であるので、適当な塩基性物質、
例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、アンモニア
を添加して常に微生物の２−ケト−Ｌ−グロン酸生成に
最も適したpＨを保持するのもよく、また培地中に適当
な緩衝剤を添加しておいて最適のpＨが維持されるよう
にするのもよい。
るいは通気撹拌培養法等の手段を用いてもよい。大量の
処理には、いわゆる深部通気撹拌培養によるのが望まし
い。培養条件は、勿論菌株の種類、培地の組成、その他
によっても異なり、要するに目的物が最も効率よく生産
されるように個々の場合に応じて選択すればよい。例え
ば、培養温度は２５〜３５℃にて行うのがよく、培地の
pＨは５〜９程度が望ましい。目的物の生成に伴ってpＨ
が低下するのが一般的であるので、適当な塩基性物質、
例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、アンモニア
を添加して常に微生物の２−ケト−Ｌ−グロン酸生成に
最も適したpＨを保持するのもよく、また培地中に適当
な緩衝剤を添加しておいて最適のpＨが維持されるよう
にするのもよい。
【００１５】この他、前記の酸化菌とは別種の細菌の滅
菌培養物を培地成分として有効に利用することもでき
る。利用できる菌としては、例えば、バチルス菌、シュ
ードモナス菌、シトロバクター菌、エシェリヒア菌およ
びエルウィニア菌に属する菌が挙げられ、さらに具体例
として下記に示す菌が挙げられる。 バチルス・セレウス(Ｂacillus cereus) ＩＦＯ ３１
３１ バチルス・スブチリス(Ｂacillus subtilis) ＩＦＯ
３０２３ バチルス・プミルス(Ｂacillus pumilus) ＩＦＯ １２
０８９ バチルス・メガテリウム(Ｂacillus megaterium) ＩＦ
Ｏ １２１０８ バチルス・アミロリケファシエンス(Ｂacillus amyloli
quefaciens)ＩＦＯ ３０２２ シュードモナス・トリホリ(Ｐseudomonas trifolii)
ＩＦＯ １２０５６ シトロバクター・フロインディ(Ｃitrobacter freundi
i)ＩＦＯ １２６８１ エシェリヒア・コリ(Ｅscherichia coli) ＩＦＯ ３
４５６ エルウィニア・ハービコラ(Ｅrwinia herbicola) ＩＦ
Ｏ １２６８６ これらの細菌を、これらが生育しうる培地に、２０℃〜
４０℃で２日間から４日間培養し、得られる培養液を滅
菌し、これを本酸化菌の培地に０.５〜５.０％(v／v)の
割合で加え、酸化菌の生育を促進させることもできる。
菌培養物を培地成分として有効に利用することもでき
る。利用できる菌としては、例えば、バチルス菌、シュ
ードモナス菌、シトロバクター菌、エシェリヒア菌およ
びエルウィニア菌に属する菌が挙げられ、さらに具体例
として下記に示す菌が挙げられる。 バチルス・セレウス(Ｂacillus cereus) ＩＦＯ ３１
３１ バチルス・スブチリス(Ｂacillus subtilis) ＩＦＯ
３０２３ バチルス・プミルス(Ｂacillus pumilus) ＩＦＯ １２
０８９ バチルス・メガテリウム(Ｂacillus megaterium) ＩＦ
Ｏ １２１０８ バチルス・アミロリケファシエンス(Ｂacillus amyloli
quefaciens)ＩＦＯ ３０２２ シュードモナス・トリホリ(Ｐseudomonas trifolii)
ＩＦＯ １２０５６ シトロバクター・フロインディ(Ｃitrobacter freundi
i)ＩＦＯ １２６８１ エシェリヒア・コリ(Ｅscherichia coli) ＩＦＯ ３
４５６ エルウィニア・ハービコラ(Ｅrwinia herbicola) ＩＦ
Ｏ １２６８６ これらの細菌を、これらが生育しうる培地に、２０℃〜
４０℃で２日間から４日間培養し、得られる培養液を滅
菌し、これを本酸化菌の培地に０.５〜５.０％(v／v)の
割合で加え、酸化菌の生育を促進させることもできる。
【００１６】本発明においては、２ＫＧＡ生産のための
培養条件としては、通常の発酵(主発酵培地に少量の種
培養液を移植し、菌体の増殖を伴って２ＫＧＡ生産が起
こる)方法を用いてもよい。また、予め、別の培養で２
ＫＧＡ生成能力を有する菌体を得ておき、これを用いて
実質的に増殖をほとんど伴わない菌体反応法、または両
者を組み合わせた方法を用いてもよい。上記通常の発酵
方法を用いる場合は、十分に菌が増殖した時点で電気透
析を開始するのが望ましいが、菌体反応法または、場合
により発酵方法を用いる場合でも、最初から電気透析を
行い、実質的に培養時間の短縮を図ることもできる。
培養条件としては、通常の発酵(主発酵培地に少量の種
培養液を移植し、菌体の増殖を伴って２ＫＧＡ生産が起
こる)方法を用いてもよい。また、予め、別の培養で２
ＫＧＡ生成能力を有する菌体を得ておき、これを用いて
実質的に増殖をほとんど伴わない菌体反応法、または両
者を組み合わせた方法を用いてもよい。上記通常の発酵
方法を用いる場合は、十分に菌が増殖した時点で電気透
析を開始するのが望ましいが、菌体反応法または、場合
により発酵方法を用いる場合でも、最初から電気透析を
行い、実質的に培養時間の短縮を図ることもできる。
【００１７】本発明の方法は、２ＫＧＡ発酵において、
例えば、培養槽ないしは反応槽からの培養液を、所望に
より、濾過、遠心分離等で菌体を除去した後、イオン交
換膜と、要すればバイポーラー膜を備えた電気透析槽に
導き、通電して電気透析を行い、２ＫＧＡを単独で、ま
たは対イオンとしての培養液中の低分子陽イオン、例え
ば、Ｌi+、Ｎa+、Ｋ+、Ｃa2+、Ｍg2+、ＮＨ4 +等の１価
または２価の低分子陽イオンと共に培養液から分離、濃
縮し、ついで常法により２ＫＧＡを回収することにより
行うことができる。
例えば、培養槽ないしは反応槽からの培養液を、所望に
より、濾過、遠心分離等で菌体を除去した後、イオン交
換膜と、要すればバイポーラー膜を備えた電気透析槽に
導き、通電して電気透析を行い、２ＫＧＡを単独で、ま
たは対イオンとしての培養液中の低分子陽イオン、例え
ば、Ｌi+、Ｎa+、Ｋ+、Ｃa2+、Ｍg2+、ＮＨ4 +等の１価
または２価の低分子陽イオンと共に培養液から分離、濃
縮し、ついで常法により２ＫＧＡを回収することにより
行うことができる。
【００１８】本発明で用いる電気透析槽の一例として
は、例えば、図２に示すような陽極１と陰極２との間に
カチオン交換膜Ｃおよびアニオン交換膜Ａを交互に配置
した装置が挙げられ、通常、一対以上のイオン交換膜を
使用するのがよい。本発明の電気透析に用いるイオン交
換膜は、アニオン交換膜、カチオン交換膜のいずれも公
知のものが使用でき、とりわけ市販品でもよく、例え
ば、ネオセプタ(徳山製)、セレミオン(旭硝子製)等の市
販品から選択して用いることができる。アニオン交換膜
は、目的生産物である２ＫＧＡを透過する大きさまたは
それ以上の大きさのポアを持つ膜で、２ＫＧＡを実質的
に十分効率よく透過するものでよいが、さらには、でき
るだけ基質の洩れが少なく、かつ電気抵抗のなるべく小
さいものを選ぶのが望ましい。
は、例えば、図２に示すような陽極１と陰極２との間に
カチオン交換膜Ｃおよびアニオン交換膜Ａを交互に配置
した装置が挙げられ、通常、一対以上のイオン交換膜を
使用するのがよい。本発明の電気透析に用いるイオン交
換膜は、アニオン交換膜、カチオン交換膜のいずれも公
知のものが使用でき、とりわけ市販品でもよく、例え
ば、ネオセプタ(徳山製)、セレミオン(旭硝子製)等の市
販品から選択して用いることができる。アニオン交換膜
は、目的生産物である２ＫＧＡを透過する大きさまたは
それ以上の大きさのポアを持つ膜で、２ＫＧＡを実質的
に十分効率よく透過するものでよいが、さらには、でき
るだけ基質の洩れが少なく、かつ電気抵抗のなるべく小
さいものを選ぶのが望ましい。
【００１９】電極液としては、目的に応じてＨ2ＳＯ4、
ＨＮＯ3、ＮaＯＨ、ＫＯＨ等の酸、アルカリ等、または
Ｎa2ＳＯ4、Ｋ2ＳＯ4、ＮaＮＯ3、ＫＮＯ3等のアルカリ
金属塩を使用することができる。図２で示される装置を
用いる電気透析には、通常、アルカリ金属塩の溶液を使
用する。発酵液あるいはその濾過液にＣa2+、Ｂa2+等が
存在する場合は、ＮaＮＯ3溶液またはＫＮＯ3溶液を用
いるのが望ましい。用いる電気透析槽も、培養中のpＨ
低下を防ぐために添加する水酸化ナトリウム、アンモニ
ア等のアルカリの使用量を低減するため、培養液または
反応液から２ＫＧＡをフリーの形で分離し、対イオンと
しての低分子陽イオンは培養槽もしくは反応槽に戻せる
構造のものでもよい。工業的には、装置がコンパクトに
でき、構造がシンプルで透析効率が優れている等の特徴
から、添加したアルカリ性陽イオンとともに分離する構
造を持つものが望ましく、例えば、市販品ではマイクロ
アシライザー(旭化成製)等を用いることができる。
ＨＮＯ3、ＮaＯＨ、ＫＯＨ等の酸、アルカリ等、または
Ｎa2ＳＯ4、Ｋ2ＳＯ4、ＮaＮＯ3、ＫＮＯ3等のアルカリ
金属塩を使用することができる。図２で示される装置を
用いる電気透析には、通常、アルカリ金属塩の溶液を使
用する。発酵液あるいはその濾過液にＣa2+、Ｂa2+等が
存在する場合は、ＮaＮＯ3溶液またはＫＮＯ3溶液を用
いるのが望ましい。用いる電気透析槽も、培養中のpＨ
低下を防ぐために添加する水酸化ナトリウム、アンモニ
ア等のアルカリの使用量を低減するため、培養液または
反応液から２ＫＧＡをフリーの形で分離し、対イオンと
しての低分子陽イオンは培養槽もしくは反応槽に戻せる
構造のものでもよい。工業的には、装置がコンパクトに
でき、構造がシンプルで透析効率が優れている等の特徴
から、添加したアルカリ性陽イオンとともに分離する構
造を持つものが望ましく、例えば、市販品ではマイクロ
アシライザー(旭化成製)等を用いることができる。
【００２０】かかる電気透析を行う際に、培養液あるい
は菌体反応液を直接電気透析槽に導入してもよいが、電
気透析膜の性能の低下を防ぐためには、途中に濾過もし
くは遠心分離等の菌体分離工程を加え、菌体は培養槽へ
再循環させ、一方で、清澄液について電気透析を行う方
法が望ましい。菌体分離を濾過で行うには、通常、クロ
スフロー型濾過器、例えば中空糸膜濾過器あるいはセラ
ミック膜濾過器が用いられる。これらは濾過効率を上げ
るために高循環流速を与えることが望ましい。循環流速
を小さくして濾過効率を上げるためには、ボルテックス
フロー濾過装置、例えば市販のベンチマーク（Ｂenchma
rk）あるいはペースセッター（Ｐacesetter)(メンブレ
ックス・インコーポレーティッド、米国）が好ましく用
いられる。添付の図１に、この方法に用いる装置の１例
の概略図を示す。
は菌体反応液を直接電気透析槽に導入してもよいが、電
気透析膜の性能の低下を防ぐためには、途中に濾過もし
くは遠心分離等の菌体分離工程を加え、菌体は培養槽へ
再循環させ、一方で、清澄液について電気透析を行う方
法が望ましい。菌体分離を濾過で行うには、通常、クロ
スフロー型濾過器、例えば中空糸膜濾過器あるいはセラ
ミック膜濾過器が用いられる。これらは濾過効率を上げ
るために高循環流速を与えることが望ましい。循環流速
を小さくして濾過効率を上げるためには、ボルテックス
フロー濾過装置、例えば市販のベンチマーク（Ｂenchma
rk）あるいはペースセッター（Ｐacesetter)(メンブレ
ックス・インコーポレーティッド、米国）が好ましく用
いられる。添付の図１に、この方法に用いる装置の１例
の概略図を示す。
【００２１】この装置を用いて本発明の方法を実施する
には、培養槽からの培養液をポンプ１により、菌体分離
装置、通常、濾過装置に通して濾過する。菌体は培養槽
へ再循環する。濾液をリザーバーに保持し、ついでポン
プ２を介して電気透析槽に導き、電気透析に付す。電気
透析槽からの濃縮液はポンプ３を介して濃縮液槽と電気
透析槽の間を循環させ、後の回収工程に送るのが好まし
い。電気透析槽を通過した培養濾液はリザーバーに戻さ
れ、リザーバー中の濾液および電気透析槽よりの返送液
はポンプ４を介して培養槽へ再循環できる。
には、培養槽からの培養液をポンプ１により、菌体分離
装置、通常、濾過装置に通して濾過する。菌体は培養槽
へ再循環する。濾液をリザーバーに保持し、ついでポン
プ２を介して電気透析槽に導き、電気透析に付す。電気
透析槽からの濃縮液はポンプ３を介して濃縮液槽と電気
透析槽の間を循環させ、後の回収工程に送るのが好まし
い。電気透析槽を通過した培養濾液はリザーバーに戻さ
れ、リザーバー中の濾液および電気透析槽よりの返送液
はポンプ４を介して培養槽へ再循環できる。
【００２２】電気透析による培養液中の２ＫＧＡ濃度の
制御は、用いる菌株の２ＫＧＡ生成を著しく阻害しない
範囲に断続的あるいは連続的にコントロールすればよ
く、例えば、シュードグルコノバクター属細菌を用いる
場合、８０mg／ml以下、望ましくは５０mg／ml以下にな
るように電気透析を行う。基質は一括添加してもよい
が、連続的に添加し、培養液中の残存基質濃度をたえず
低く保持するのが有利である。例えば、シュードグルコ
ノバクター属細菌を用いる場合、２ＫＧＡ生成効率も考
慮すると基質濃度は５〜５０mg／ml、望ましくは１０〜
３０mg／mlに保持するのがよい。上記のごとく、基質は
一括添加してもよいが、２ＫＧＡ生成を阻害しないよう
に、その一部あるいは全量を分割あるいは連続的に添加
することが望ましく、また、培養中に２ＫＧＡ生成を持
続あるいは促進させる物質、例えば、酵母エキス、コー
ン・スティープ・リカー等の有機性栄養物、ビタミン
類、アミノ酸類、核酸類の微量栄養素あるいは無機塩等
を添加することもできる。基質としては糖、糖アルコー
ル、糖酸等が用いられるが、とりわけＬ−ソルボース、
Ｄ−ソルビトール、Ｌ−ソルボソン等に前記の菌を作用
させるのが効率的である。
制御は、用いる菌株の２ＫＧＡ生成を著しく阻害しない
範囲に断続的あるいは連続的にコントロールすればよ
く、例えば、シュードグルコノバクター属細菌を用いる
場合、８０mg／ml以下、望ましくは５０mg／ml以下にな
るように電気透析を行う。基質は一括添加してもよい
が、連続的に添加し、培養液中の残存基質濃度をたえず
低く保持するのが有利である。例えば、シュードグルコ
ノバクター属細菌を用いる場合、２ＫＧＡ生成効率も考
慮すると基質濃度は５〜５０mg／ml、望ましくは１０〜
３０mg／mlに保持するのがよい。上記のごとく、基質は
一括添加してもよいが、２ＫＧＡ生成を阻害しないよう
に、その一部あるいは全量を分割あるいは連続的に添加
することが望ましく、また、培養中に２ＫＧＡ生成を持
続あるいは促進させる物質、例えば、酵母エキス、コー
ン・スティープ・リカー等の有機性栄養物、ビタミン
類、アミノ酸類、核酸類の微量栄養素あるいは無機塩等
を添加することもできる。基質としては糖、糖アルコー
ル、糖酸等が用いられるが、とりわけＬ−ソルボース、
Ｄ−ソルビトール、Ｌ−ソルボソン等に前記の菌を作用
させるのが効率的である。
【００２３】なお、培地および培養手段を含め、培養条
件は使用する細菌および基質に応じて適宜決められる。
例えば、シュードグルコノバクター属の細菌を用いる培
養の場合は、前記特開昭６２−２２８２８８号に記載の
培地や培養条件を採用することができる。また、シュー
ドモナス属の細菌を用いる培養の場合は、例えば特開昭
６３−１１２９８９号に記載の条件またはそれに準じる
条件で培養することができる。
件は使用する細菌および基質に応じて適宜決められる。
例えば、シュードグルコノバクター属の細菌を用いる培
養の場合は、前記特開昭６２−２２８２８８号に記載の
培地や培養条件を採用することができる。また、シュー
ドモナス属の細菌を用いる培養の場合は、例えば特開昭
６３−１１２９８９号に記載の条件またはそれに準じる
条件で培養することができる。
【００２４】培養液に加えた基質が十分に２ＫＧＡに変
換されたところで電気透析を止め、培養液、濃縮液の両
方から２ＫＧＡを回収してもよいが、好ましくは、さら
に電気透析を続けることにより培養液中の２ＫＧＡを全
て濃縮液中に移動させ、ここから回収するほうが、２Ｋ
ＧＡ精製を行うに際してより有利である。培養液あるい
は濃縮液から２ＫＧＡを回収する方法としては通常用い
られる方法、例えば、イオン交換樹脂カラム等のカラム
クロマト類、濃縮あるいは溶媒添加による晶出・再結晶
等が適用できる。
換されたところで電気透析を止め、培養液、濃縮液の両
方から２ＫＧＡを回収してもよいが、好ましくは、さら
に電気透析を続けることにより培養液中の２ＫＧＡを全
て濃縮液中に移動させ、ここから回収するほうが、２Ｋ
ＧＡ精製を行うに際してより有利である。培養液あるい
は濃縮液から２ＫＧＡを回収する方法としては通常用い
られる方法、例えば、イオン交換樹脂カラム等のカラム
クロマト類、濃縮あるいは溶媒添加による晶出・再結晶
等が適用できる。
【００２５】
【実施例】以下、実施例を挙げて本発明をさらに具体的
に説明するが、これらの実施例は本発明を限定するもの
ではない。なお、２ＫＧＡの定量は、下記に示す条件下
で高速液体クロマトグラフィー法によって行った。 高速液体クロマトグラフィー測定条件; カラム: ＳＣＲ１０１Ｈ、３００x７mm(島津製作所
製)、カラム温度３０℃ 移動相: ４mＭ硫酸 検出器: ＲＩ検出器
に説明するが、これらの実施例は本発明を限定するもの
ではない。なお、２ＫＧＡの定量は、下記に示す条件下
で高速液体クロマトグラフィー法によって行った。 高速液体クロマトグラフィー測定条件; カラム: ＳＣＲ１０１Ｈ、３００x７mm(島津製作所
製)、カラム温度３０℃ 移動相: ４mＭ硫酸 検出器: ＲＩ検出器
【００２６】実施例１ １) 対照実験(標準培養) 表２に示す組成の種培地Ａ２０mlを２００ml容三角フラ
スコに入れ、１２０℃にて２０分間滅菌した。これに、
表１に示す組成の斜面培地で３０℃にて３日間生育させ
たシュードグルコノバクター・サッカロケトゲネスＫ５
９１s株(ＩＦＯ１４４６４、ＦＥＲＭ ＢＰ−１１３
０; 以下、単に酸化菌と称することもある)の菌体を一
白金耳植菌し、２８℃で１日間振とう培養することによ
って第１種培養液を得た。同様に、種培地Ａ２００mlを
１リットル容の三角フラスコに入れ、滅菌したものを２
本用意し、これに第１種培養液を１０mlずつ植菌し２８
℃にて２日間振とう培養して第２種培養液を得た。表３
に示す組成の種培地Ｂ２０ｍｌを２００ｍｌ容三角フラ
スコに入れ滅菌したものに、表２に示す組成の斜面培地
で生育させたバチラス・メガテリウム(ＩＦＯ１２１０
８)の菌体を一白金耳植菌して２８℃にて２日間振とう
培養してバチラス・メガテリウム(以下、単に混合菌と
称することもある)の種培養液を得た。
スコに入れ、１２０℃にて２０分間滅菌した。これに、
表１に示す組成の斜面培地で３０℃にて３日間生育させ
たシュードグルコノバクター・サッカロケトゲネスＫ５
９１s株(ＩＦＯ１４４６４、ＦＥＲＭ ＢＰ−１１３
０; 以下、単に酸化菌と称することもある)の菌体を一
白金耳植菌し、２８℃で１日間振とう培養することによ
って第１種培養液を得た。同様に、種培地Ａ２００mlを
１リットル容の三角フラスコに入れ、滅菌したものを２
本用意し、これに第１種培養液を１０mlずつ植菌し２８
℃にて２日間振とう培養して第２種培養液を得た。表３
に示す組成の種培地Ｂ２０ｍｌを２００ｍｌ容三角フラ
スコに入れ滅菌したものに、表２に示す組成の斜面培地
で生育させたバチラス・メガテリウム(ＩＦＯ１２１０
８)の菌体を一白金耳植菌して２８℃にて２日間振とう
培養してバチラス・メガテリウム(以下、単に混合菌と
称することもある)の種培養液を得た。
【００２７】Ｌ−ソルボース５０g、ＣＳＬ６０g、Ｆe
ＳＯ4３g、硫安９g、ビタミンＢ2３mg、ショ糖１.５gを
水道水で１６６０mlにして、ＮaＯＨでpＨを７に調整し
た後、滅菌して主発酵培地を得た。ここに酸化菌の第２
種培養液３００mlと混合菌の種培養液４mlを加え、さら
に０.３gの粗塩化希土(三菱化成工業(株))を１０mlの水
に溶かして滅菌したものを加え、滅菌した５リットル・
ジャーファーメンターに入れ、温度３２℃、撹拌８００
rpm、通気０．５vvmの条件で培養を開始した。pＨセン
サーと連動したペリスタルティックポンプを用いて、３
０％ＮaＯＨを自動的に添加することによってpＨを６.
２に維持した。一方、４００gのＬ−ソルボースを水道
水に溶かして９００mlにしたものを滅菌し、培養液中の
ソルボース濃度が１０〜３０mg／ml前後になるようにこ
れを連続的に添加した。その結果、合計４５０gのソル
ボースを４０時間で全て酸化し、３５４gの２ＫＧＡ(フ
リーとして;以下も同様)が培養液中に蓄積した。
ＳＯ4３g、硫安９g、ビタミンＢ2３mg、ショ糖１.５gを
水道水で１６６０mlにして、ＮaＯＨでpＨを７に調整し
た後、滅菌して主発酵培地を得た。ここに酸化菌の第２
種培養液３００mlと混合菌の種培養液４mlを加え、さら
に０.３gの粗塩化希土(三菱化成工業(株))を１０mlの水
に溶かして滅菌したものを加え、滅菌した５リットル・
ジャーファーメンターに入れ、温度３２℃、撹拌８００
rpm、通気０．５vvmの条件で培養を開始した。pＨセン
サーと連動したペリスタルティックポンプを用いて、３
０％ＮaＯＨを自動的に添加することによってpＨを６.
２に維持した。一方、４００gのＬ−ソルボースを水道
水に溶かして９００mlにしたものを滅菌し、培養液中の
ソルボース濃度が１０〜３０mg／ml前後になるようにこ
れを連続的に添加した。その結果、合計４５０gのソル
ボースを４０時間で全て酸化し、３５４gの２ＫＧＡ(フ
リーとして;以下も同様)が培養液中に蓄積した。
【００２８】２) 電気透析培養 別に用意した滅菌した５リットル・ジャーファーメンタ
ーを培養槽として用い、これに図１に示すように中空糸
膜(マイクローザＰＭＰ１０２、旭化成製)および電気透
析槽(マイクロアシライザーＧ３、旭化成製)を組み付
け、透析膜としてはＡＣ−１２０−８００(同じく旭化
成製)を装着し、上記と同じく主発酵培地、酸化菌種培
養液、混合菌種培養液、および粗塩化希土滅菌水溶液を
滅菌ジャーファーメンターに入れ、同条件で培養を開始
した。上記の方法でpＨコントロールしながら、４００g
のＬ−ソルボースを水道水に溶かし、９００mlにしたも
のを滅菌し、同様に連続的に添加した。培養開始より９
時間までは通常の培養(ポンプ停止)を行い、９時間目よ
りポンプで培養液を中空糸膜濾過器とジャーファーメン
ター間を３リットル／分の流速で循環させ、流出してく
る濾液をリザーバー(０.５リットル容)を介して電気透
析機に循環させ(流速１リットル／分)、０.５リットル
を超えるものについては再びジャーファーメンターに還
流させた。ジャーファーメンター以外の用いたすべての
装置および連結チューブは、前もって、０.５％水酸化
ナトリウムおよび０.５％次亜塩素酸ナトリウムで滅菌
し、滅菌水で洗浄した。電気透析を開始し、培養液中の
２ＫＧＡ濃度が５０mg／mlを超えないように電気透析機
を運転した。その結果、合計４５０gのＬ−ソルボース
を２２時間で全て酸化し、さらに２時間電気透析するこ
とによって、培養液中に生成した２ＫＧＡは実質上ほと
んどすべて濃縮液(最終液量１.８リットル)中に回収さ
れ、３６０gの２ＫＧＡが得られた。
ーを培養槽として用い、これに図１に示すように中空糸
膜(マイクローザＰＭＰ１０２、旭化成製)および電気透
析槽(マイクロアシライザーＧ３、旭化成製)を組み付
け、透析膜としてはＡＣ−１２０−８００(同じく旭化
成製)を装着し、上記と同じく主発酵培地、酸化菌種培
養液、混合菌種培養液、および粗塩化希土滅菌水溶液を
滅菌ジャーファーメンターに入れ、同条件で培養を開始
した。上記の方法でpＨコントロールしながら、４００g
のＬ−ソルボースを水道水に溶かし、９００mlにしたも
のを滅菌し、同様に連続的に添加した。培養開始より９
時間までは通常の培養(ポンプ停止)を行い、９時間目よ
りポンプで培養液を中空糸膜濾過器とジャーファーメン
ター間を３リットル／分の流速で循環させ、流出してく
る濾液をリザーバー(０.５リットル容)を介して電気透
析機に循環させ(流速１リットル／分)、０.５リットル
を超えるものについては再びジャーファーメンターに還
流させた。ジャーファーメンター以外の用いたすべての
装置および連結チューブは、前もって、０.５％水酸化
ナトリウムおよび０.５％次亜塩素酸ナトリウムで滅菌
し、滅菌水で洗浄した。電気透析を開始し、培養液中の
２ＫＧＡ濃度が５０mg／mlを超えないように電気透析機
を運転した。その結果、合計４５０gのＬ−ソルボース
を２２時間で全て酸化し、さらに２時間電気透析するこ
とによって、培養液中に生成した２ＫＧＡは実質上ほと
んどすべて濃縮液(最終液量１.８リットル)中に回収さ
れ、３６０gの２ＫＧＡが得られた。
【００２９】
【表１】
【００３０】
【表２】
【００３１】
【表３】
【００３２】実施例２ １）標準培養 実施例１の１）と同様に標準培養を行った。培養４０時
間で全てのソルボースが酸化し、３５６gの２ＫＧＡが
培養液中に蓄積した。 ２）電気透析培養 電気透析培養は、Ｌ−ソルボースのフィード条件以外に
ついては実施例１の２）と同じ条件で行った。フィード
は１１５０gのＬ−ソルボースを水道水に溶かして２７
００mlにしたものを滅菌し、実施例１と同様に連続的に
添加した。その結果、培養３６時間ですべてのＬ−ソル
ボースが酸化され、この時点でジャーファーメンターの
通気・撹拌を停止した上で、さらに２時間電気透析を続
けることによって、培養液中および中空糸膜濾液中の２
ＫＧＡは実質上ほとんどすべて濃縮液中に回収され、９
６０gの２ＫＧＡが濃縮液(最終液量４.５リットル)中に
得られた。
間で全てのソルボースが酸化し、３５６gの２ＫＧＡが
培養液中に蓄積した。 ２）電気透析培養 電気透析培養は、Ｌ−ソルボースのフィード条件以外に
ついては実施例１の２）と同じ条件で行った。フィード
は１１５０gのＬ−ソルボースを水道水に溶かして２７
００mlにしたものを滅菌し、実施例１と同様に連続的に
添加した。その結果、培養３６時間ですべてのＬ−ソル
ボースが酸化され、この時点でジャーファーメンターの
通気・撹拌を停止した上で、さらに２時間電気透析を続
けることによって、培養液中および中空糸膜濾液中の２
ＫＧＡは実質上ほとんどすべて濃縮液中に回収され、９
６０gの２ＫＧＡが濃縮液(最終液量４.５リットル)中に
得られた。
【００３３】実施例３ １）電気透析−純粋培養 実施例１の２）と同じく電気透析培養装置を準備した。
ただし、実施例１の２）とは異なり、図１に示す菌体分
離装置には中空糸膜濾過器（マイクローザＰＭ１０２）
の代わりにボルテックスフロ−濾過装置（ベンチマーク
システム；メンブレックス・インコーポレーティッド
（Ｍembrex, Ｉnc.）、米国）にウルトラフィリックＭ
Ｘ−１００ウルトラフィルター（メンブレックス・イン
コーポレーティッド、米国）を装着した。Ｌ−ソルボー
ス５０g、ＣＳＬ６０g、ＦeＳＯ4３g、(ＮＨ4)2ＳＯ4９
g、ビタミンＢ2３mg、シュークロース１.５g、イースト
エキス３０gを水道水で１６６０mlにして、ＮaＯＨでp
Ｈを７に調整した後、滅菌して主発酵培地を得た。これ
に、酸化菌種培養液、粗塩化希土水溶液を入れ培養を開
始し、フィード用にはＬ−ソルボースの５０％W／V水溶
液を用いた。培養中のpＨは、実施例１と同じく３０％
ＮaＯＨで６.２に維持した。培養９時間目からポンプに
よってジャーファーメンターとボルテックスフロー濾過
装置の間で培養液を循環させて（循環流速０.２５リッ
トル／分）菌体濾過を行い、得られた濾過液について実
施例１と同様にし電気透析を行った。表４に培養中のジ
ャーファーメンター１基当たりのＬ−ソルボース酸化速
度の推移を示した。効率的な酸化速度を得られなくなっ
た６０時間目に培養、菌体濾過および電気透析を停止さ
せた。その結果、１９２３gのＬ−ソルボースを酸化
し、濃縮液中に１３００gの２ＫＧＡ、培養液と濾過液
中に合計１８７gの２ＫＧＡ、合計で１４８７gの２ＫＧ
Ａが得られた。
ただし、実施例１の２）とは異なり、図１に示す菌体分
離装置には中空糸膜濾過器（マイクローザＰＭ１０２）
の代わりにボルテックスフロ−濾過装置（ベンチマーク
システム；メンブレックス・インコーポレーティッド
（Ｍembrex, Ｉnc.）、米国）にウルトラフィリックＭ
Ｘ−１００ウルトラフィルター（メンブレックス・イン
コーポレーティッド、米国）を装着した。Ｌ−ソルボー
ス５０g、ＣＳＬ６０g、ＦeＳＯ4３g、(ＮＨ4)2ＳＯ4９
g、ビタミンＢ2３mg、シュークロース１.５g、イースト
エキス３０gを水道水で１６６０mlにして、ＮaＯＨでp
Ｈを７に調整した後、滅菌して主発酵培地を得た。これ
に、酸化菌種培養液、粗塩化希土水溶液を入れ培養を開
始し、フィード用にはＬ−ソルボースの５０％W／V水溶
液を用いた。培養中のpＨは、実施例１と同じく３０％
ＮaＯＨで６.２に維持した。培養９時間目からポンプに
よってジャーファーメンターとボルテックスフロー濾過
装置の間で培養液を循環させて（循環流速０.２５リッ
トル／分）菌体濾過を行い、得られた濾過液について実
施例１と同様にし電気透析を行った。表４に培養中のジ
ャーファーメンター１基当たりのＬ−ソルボース酸化速
度の推移を示した。効率的な酸化速度を得られなくなっ
た６０時間目に培養、菌体濾過および電気透析を停止さ
せた。その結果、１９２３gのＬ−ソルボースを酸化
し、濃縮液中に１３００gの２ＫＧＡ、培養液と濾過液
中に合計１８７gの２ＫＧＡ、合計で１４８７gの２ＫＧ
Ａが得られた。
【００３４】
【表４】
【００３５】２）電気透析−混合培養 ボルテックスフロー濾過装置を組み込んだ電気透析培養
装置にて、実施例３の１）と同様にして培養を行った。
ただし、主発酵培地からはイーストエキスを除き、培養
開始時に実施例１と同様に調製した混合菌種培養液４ml
を加えた。上記と同じく９時間目から電気透析培養を行
い、１５０時間目に培養、菌体濾過、電気透析を停止さ
せた。表５に酸化速度の推移を示した。その結果、５７
２０gのＬ−ソルボースを酸化し、濃縮液中に４２７７
g、培養液と菌体濾過液中に合わせて２００g、合計４４
７７gの２ＫＧＡが得られた。
装置にて、実施例３の１）と同様にして培養を行った。
ただし、主発酵培地からはイーストエキスを除き、培養
開始時に実施例１と同様に調製した混合菌種培養液４ml
を加えた。上記と同じく９時間目から電気透析培養を行
い、１５０時間目に培養、菌体濾過、電気透析を停止さ
せた。表５に酸化速度の推移を示した。その結果、５７
２０gのＬ−ソルボースを酸化し、濃縮液中に４２７７
g、培養液と菌体濾過液中に合わせて２００g、合計４４
７７gの２ＫＧＡが得られた。
【００３６】
【表５】
【００３７】上記結果から明らかなように、１）の純粋
培養の場合、Ｌ−ソルボースの高酸化速度が維持できた
のは培養開始後５０時間までであったのに対し、２）の
混合培養では培養開始後１５０時間経過しても高酸化速
度が維持された。
培養の場合、Ｌ−ソルボースの高酸化速度が維持できた
のは培養開始後５０時間までであったのに対し、２）の
混合培養では培養開始後１５０時間経過しても高酸化速
度が維持された。
【００３８】
【発明の効果】本発明によれば、２ＫＧＡ発酵におい
て、電気透析発酵法を用いることにより、従来の発酵法
または菌体反応法に比べ、同一量の基質を酸化する場
合、培養時間を著しく短縮でき、また、基質の高い酸化
速度を長時間維持できる結果、１回の培養で得られる２
ＫＧＡ量を著しく増加できる。
て、電気透析発酵法を用いることにより、従来の発酵法
または菌体反応法に比べ、同一量の基質を酸化する場
合、培養時間を著しく短縮でき、また、基質の高い酸化
速度を長時間維持できる結果、１回の培養で得られる２
ＫＧＡ量を著しく増加できる。
【図１】 本発明の方法に用いる装置の１具体例の概略
図である。
図である。
【図２】 本発明に用いる電気透析槽の１具体例の概略
図である。図中、Ａはアニオンを通しカチオンは通さな
いアニオン交換膜、Ｃはカチオンを通しアニオンは通さ
ないカチオン交換膜、Ｐはポンプを示す。
図である。図中、Ａはアニオンを通しカチオンは通さな
いアニオン交換膜、Ｃはカチオンを通しアニオンは通さ
ないカチオン交換膜、Ｐはポンプを示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｐ 7/60 Ｃ１２Ｒ 1:18） (Ｃ１２Ｐ 7/60 Ｃ１２Ｒ 1:07）
Claims (11)
- 【請求項１】 ２−ケト−Ｌ−グロン酸(以下、２ＫＧ
Ａと称することもある)生産能力を有する微生物を少な
くとも１種用いた発酵法または菌体反応法による２ＫＧ
Ａの製造方法において、発酵液または菌体反応液中に蓄
積する生産物である２ＫＧＡを単独または対イオンとし
ての低分子陽イオンと共に電気透析により発酵液または
菌体反応液から抜き取ることを特徴とする２ＫＧＡの製
造方法。 - 【請求項２】 ２ＫＧＡ生産能力を有する微生物がシュ
ードグルコノバクター属、グルコノバクター属、シュー
ドモナス属、コリネバクテリウム属、エルウィニア属細
菌またはこれらの組み合わせである請求項１記載の方
法。 - 【請求項３】 ２ＫＧＡ生産能力を有する微生物がシュ
ードグルコノバクター属またはグルコノバクター属細菌
である請求項１記載の方法。 - 【請求項４】 ２ＫＧＡ生産能力を有する微生物がシュ
ードグルコノバクター属細菌である請求項１記載の方
法。 - 【請求項５】 ２ＫＧＡ生産能力を有する微生物がシュ
ードグルコノバクター・サッカロケトゲネスＫ５９１ｓ
（ＦＥＲＭ ＢＰ−１１３０）、シュードグルコノバク
ター・サッカロケトゲネスＴＨ１４−８６（ＦＥＲＭ
ＢＰ−１１２８）、シュードグルコノバクター・サッカ
ロケトゲネス１２−５（ＦＥＲＭ ＢＰ−１１２９）、
シュードグルコノバクター・サッカロケトゲネス１２−
１５（ＦＥＲＭ ＢＰ−１１３２）、シュードグルコノ
バクター・サッカロケトゲネス１２−４（ＦＥＲＭ Ｂ
Ｐ−１１３１）およびシュードグルコノバクター・サッ
カロケトゲネス２２−３（ＦＥＲＭ ＢＰ−１１３３）
から選ばれる請求項１記載の方法。 - 【請求項６】 対イオンとしての低分子陽イオンが１価
または２価の陽イオンである請求項１記載の方法。 - 【請求項７】 対イオンとしての低分子陽イオンがＬ
i+、Ｎa+、Ｋ+、Ｃa2+、Ｍg2+またはＮＨ4 +である請求
項１記載の方法。 - 【請求項８】 発酵液または菌体反応液中の２ＫＧＡ濃
度を８０mg／ml以下に維持しながら電気透析を行う請求
項１記載の方法。 - 【請求項９】 ２ＫＧＡ生産能力を有する微生物を少な
くとも１種用いた発酵法または菌体反応法による２ＫＧ
Ａの製造を他の細菌の存在下で行う請求項１記載の方
法。 - 【請求項１０】 ２ＫＧＡ生産能力を有する微生物を少
なくとも１種用いた発酵法または菌体反応法による２Ｋ
ＧＡの製造を、バチルス属、シュードモナス属、プロテ
ウス属、シトロバクター属、エンテロバクター属、エル
ウィニア属、キサントモナス属またはフラボバクテリウ
ム属に属する細菌の共存下で行う請求項１記載の方法。 - 【請求項１１】 ２ＫＧＡ生産能力を有する微生物を少
なくとも１種用いた発酵法または菌体反応法による２Ｋ
ＧＡの製造を、バチルス・セレウス ＩＦＯ３１３１、
バチルス・リケニホルミス ＩＦＯ １２２０１、バチ
ルス・メガテリウム ＩＦＯ １２１０８、バチルス・
プミルス ＩＦＯ １２０９０、バチルス・アミロリケ
ファシエンス ＩＦＯ ３０２２、バチルス・スブチリ
スＩＦＯ １３７１９、バチルス・サーキュランス Ｉ
ＦＯ ３９６７、シュードモナス・トリホリ ＩＦＯ
１２０５６、シュードモナス・マルトフィリア ＩＦＯ
１２６９２、プロテウス・インコンスタンス ＩＦＯ
１２９３０、シトロバクター・フロインディ ＩＦＯ
１３５４４、エンテロバクター・クロアカＩＦＯ ３
３２０、エルウィニア・ハービコラ ＩＦＯ １２６８
６、キサントモナス・ピシ ＩＦＯ １３５５６、キサ
ントモナス・シトリ ＩＦＯ ３８３５、フラボバクテ
リウム・メニンゴセプティカム ＩＦＯ １２５３５、
ミクロコッカス・バリアンス ＩＦＯ ３７６５または
エシェリヒア・コリ ＩＦＯ３３６６の共存下で行う請
求項１記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15449194A JPH0767673A (ja) | 1993-07-09 | 1994-07-06 | ２−ケト−ｌ−グロン酸の製造方法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5-170247 | 1993-07-09 | ||
| JP17024793 | 1993-07-09 | ||
| JP15449194A JPH0767673A (ja) | 1993-07-09 | 1994-07-06 | ２−ケト−ｌ−グロン酸の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0767673A true JPH0767673A (ja) | 1995-03-14 |
Family
ID=26482756
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15449194A Pending JPH0767673A (ja) | 1993-07-09 | 1994-07-06 | ２−ケト−ｌ−グロン酸の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0767673A (ja) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5720865A (en) * | 1995-02-21 | 1998-02-24 | Huels Aktiengesellschaft | Process for the preparation of keto compounds |
| US5834231A (en) * | 1996-10-24 | 1998-11-10 | Archer Daniels Midland Co. | Bacterial strains and use thereof in fermentation process for 2-keto-L-gulonic acid production |
| US6316231B1 (en) | 1998-09-11 | 2001-11-13 | Archer-Daniels-Midland Company | Bacterial strains for the production of 2-keto-L-gulonic acid |
| US6387654B1 (en) | 2000-05-04 | 2002-05-14 | Archer-Daniels-Midland Company | Bacterial strains and fermentation processes for the production of 2-keto-l-gulonic acid |
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| US8886358B2 (en) | 2011-03-30 | 2014-11-11 | Seiko Epson Corporation | Robot controller and robot system |
-
1994
- 1994-07-06 JP JP15449194A patent/JPH0767673A/ja active Pending
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| US6316231B1 (en) | 1998-09-11 | 2001-11-13 | Archer-Daniels-Midland Company | Bacterial strains for the production of 2-keto-L-gulonic acid |
| US7053196B2 (en) | 2000-04-05 | 2006-05-30 | Archer-Daniels-Midland Company | Ketogulonigenium endogenous plasmids |
| US7030233B2 (en) | 2000-04-05 | 2006-04-18 | Archer-Daniels-Midland Company | Ketogulonigenium endogeneous plasmids |
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| US6387654B1 (en) | 2000-05-04 | 2002-05-14 | Archer-Daniels-Midland Company | Bacterial strains and fermentation processes for the production of 2-keto-l-gulonic acid |
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