HU198216B - Process for producing sialosyl-cholesterin and pharmaceutical compositions containing them as active components - Google Patents

Process for producing sialosyl-cholesterin and pharmaceutical compositions containing them as active components Download PDF

Info

Publication number
HU198216B
HU198216B HU872932A HU293287A HU198216B HU 198216 B HU198216 B HU 198216B HU 872932 A HU872932 A HU 872932A HU 293287 A HU293287 A HU 293287A HU 198216 B HU198216 B HU 198216B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
compound
formula
priority
cholesterol
sialosyl
Prior art date
Application number
HU872932A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT46039A (en
Inventor
Hauro Ogura
Shingo Sato
Yoshiyasu Shitori
Kimio Furuhata
Masayoshi Ito
Yoshitaka Nagai
Original Assignee
Kanto Ishi Pharma Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from JP10822886A external-priority patent/JPH0696535B2/ja
Priority claimed from JP61208380A external-priority patent/JPH07116216B2/ja
Application filed by Kanto Ishi Pharma Co Ltd filed Critical Kanto Ishi Pharma Co Ltd
Publication of HUT46039A publication Critical patent/HUT46039A/hu
Publication of HU198216B publication Critical patent/HU198216B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J41/0033—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005
    • C07J41/0055—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 the 17-beta position being substituted by an uninterrupted chain of at least three carbon atoms which may or may not be branched, e.g. cholane or cholestane derivatives, optionally cyclised, e.g. 17-beta-phenyl or 17-beta-furyl derivatives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J51/00—Normal steroids with unmodified cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton not provided for in groups C07J1/00 - C07J43/00

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

A találmány tárgya eljárás szialozil koleszterin előállítására, amely a perifériás és központi idegek sérülései következtében előállott különféle megbetegedések gyógyításában használatos.
Ismeretes, hogy a szialinsav, másnéven acil-neuraminsav (neuraminsav acilezett származékai, Bruckner 1/2, 1098-1099 o.) jelen van sok állati szervezetben és bizonyos baktériumok sejtfelületén szialilezett molekulakomplex formájában, ilyen például a glikoprötéin, glikolipid, oligoszacharid vagy poliszáé harid.
Napjainkban ezt a vegyületet fontosnak tartják gyógyászati hatása szempontjából, ami különösen az idegi funkciókra, daganatokra, gyulladásra, immunitásra, vírusfertőzésre, bizonyos hormon receptorokra gyakorolt hatásban nyilvánul meg. Igen nagy figyelmet érdemel a vegyület mint a sejtfelületen lokalizált igen aktiv vegyület. Mindazonáltal a szialinsavnak a szialilezett molekulakomplexben játszott szerepe még nem tisztázott.
Napjainkig sok szerveskémikus foglalkozott a vegyülettel és sokféle származékát állították eló, de ezek közül egyik sem bizonyult jelentős fiziológiai aktivitásúnak.
Az emberi életet jelentősen meg lehet hosszabbítani gyógyszeres kezeléssel a vérképző szervek rosszindulatú tumorjai, sokféle daganat, valamint kollagén betegségek esetében is. Ezek a kezelések azonban elkerülhetetlenül olyan gyógyszerek szedését teszi szükségessé, mint a mellékvesekéreg hormon, az immunszupresszánsok stb. Azonban sokféle nemkivánatos mellékhatás is fellép, így például az immunológiai alkalmasság csökkenése.
Munkánk során különös figyelmet szenteltünk a szialinsavnak, amely biológiailag saját, természetes komponens. Olyan immun-szabályozó szert kerestünk, amely mellékhatás nélkül, a szialinsav kémiai módosításával fejti ki az immunrendszerre gyakorolt hatását. Azt találtuk, hogy a találmány szerinti eljárással előállított szialozil-koleszterin farmakológiailag hatásos, a neuropátia gyógyszerként használható. Mindez azon a felismerésen alapul, hogy a szialozil-koleszterin elősegíti a neuroblastoma sejtek neuritjainak növekedését egérből származó neuroblastoma sejtek (Neuro 2a) esetében.
A találmány tárgya tehát eljárás új, szialozil-koleszterin előállítására és eljárás az ezen hatóanyagot tartalmazó neuropátia elleni új gyógyszerkészítmény előállítására.
Annak következtében, hogy a találmány szerinti eljárással előállított szialozil koleszterin nátrium-só formában van jelen, a koleszterin kiváló vizoldékonyságú, s ez kiszélesíti a koleszterin hasznosságát.
A találmány tárgya eljárás a (IV) vagy (V) általános képletű vegyületek előállítására, oly módon, hogy valamely (I) általános képletű vegyületet koleszterinnel reagáltatunk és a kapott (II) vagy (III) általános képietü vegyületeket hidrolizáljuk.
A (IV) képletű 2-alfa(5-koleszten-3-béta-il-oxi)-N-acetil-neuraminsav nátriumsó és az (V) képletű 2-béta(5-koleszten-3-béta-il-oxi)-N-acetil-neuraminsav nátriumsó előállítását az 1. reakcióvázlat szemlélteti. Az eljárásnál kiindulási vegyületként a 2-béta-klór-4,7,8,9— -tetra-O-acetil-N-acetil-neuraminsav metilésztert alkalmazunk.
A találmány szerinti eljárásban kiindulási anyagként használt [(I) képletű] vegyület ismert, a kereskedelemben hozzáférhető vegyület.
Az előbb ismertetett reakcióban az (I) képietü vegyületet koleszterinnel reagáltatjuk Koenigs-Knorr katalizátor jelenlétében, 20-25 °C hőmérsékleten, normál nyomáson, körülbelül 1-7 napig. A reakcióban körülbelül
1-5 mól koleszterin reagál 1 mól (I) általános képletű vegyülettel.
Katalizátorként higany-bromidot, higany-cianidot, ezüst-perklorátot, ezüst-tetrafluor-metánszulfonétot, ezüst-trifluor-acetátot stb. alkalmazhatunk. Az alkalmazott katalizátor mennyisége körülbelül 1,0-1,2 ekvivalens, az (I) képietü vegyület 1 ekvivalensnyi mennyiségére számítva.
A talál inány szerinti eljárásban oldószerként acetonitrilt, nitrometánt, acetont, benzolt, tetrahidrofuránt, diklór-metánt, előnyösen tetrahidrofuránt alkamazunk. A reakcióban alkalmazhatunk száritószert is, például Drieritet vagy 4A molekulaszürót.
A kapott (11) és (III) képletű vegyületeket elválasztjuk és ismert módszerekkel, igy például oszlopkromatográfiával tisztítjuk.
A vegyületeket ezután hidrolizáljuk, igy metoxi-karbonil-csoportjaikat átalakítjuk nátrium-karbonil-cso portokká és acetil-csoportjaikat hidrogénatomokká. Ezzel a hidrolízissel a (IV) és (V) képletű vegyületeket állíthatjuk elő. A hidrolízist általában közönséges ismert módokon hajtjuk végre. Például, a vegyületeket valamilyen, körülbelül 1-3 N koncentrációjú lúgos oldattal kezeljük, körülbelül 15-25 °C hőmérsékleten, körülbelül 5-15 óráig.
A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek beadhatók orálisan is. Előnyösebb azonban ha a vegyületeket a szembe cseppentve, inhalálással, intramuszkuláris, szubkután vagy intravénás injekció formájában adjuk be. A beadott mennyiség a betegség súlyosságától és a kezelendő páciens súlyától függ. Előnyösen 0,001-10 mg mennyiséget adunk be.
Az alább következő példák a találmány szerinti eljárást szemléltetik anélkül, hogy igényünket ezekre a példákra korlátoznánk.
1. példa
0,77 g előzőleg teljesen megszáritott koleszterint (2 mmol) 10 ml száraz metilén-kloridban feloldunk. Ezután 0,5 g, előzőleg ma-33
HU 198216 Β gas hőmérsékleten, vákuumban kiszárított 4A molekulaszűrőt adunk a koleszterin oldathoz éa a kapott keveréket 30 perc és 1 óra közti időtartamig keverjük szobahőmérsékleten, argon áramban. Ehhez a keverékhez 1,02 g (2 5 mmol) (I) képletű vegyületet adunk, majd 2 - 2,4 mmol ezüst-tetrafluoro-metánszulfonátot. Ezt a kapott keveréket egy éjszakán át keverjük szobahőmérsékleten, ferdén irányított fényben (incüned light). 10
A reakcióelegyet ezután Celiten leszűrjük. Az ezüstsót telitett sóoldattal eltávolítjuk. Az elegyet vizmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk, majd az oldószert vákuumban lepéroljuk, s Így fehér szilárd anyagot ka- 15 púnk.
Ezt a fehér szilárd anyagot oszlopkromatográfiával (szilikagél) a (II) képletű 2-alfa(5-koleszten-3-béta-il-oxi)-4,7,8,9-tetra-0-acetil-N-acetil-neuraminsav metil-észterre és 20 a (III) képletű 2-béta(5-koleszten-3-béta-il-oxi )-4,7,8,9-tetra-O-acetil-N-acetil-neuraminsav metil-észterre választjuk szét és tisztítjuk őket. Ily módon 0,56 g (33%) (II) képletű vegyületet és 0,55 g (32%) (III) képletű ve- 25 gyületet kapunk.
A (II) képletű vegyület fizikai tulajdonságai:
Tömeg (El) m/z 860 (M+l),800 (M-59)
Elemanalizis (%) a C47H73O13N képletű ve- 30
gyületre: számított: C = 65,63, N = 1,63 H = 8,55,
talált: C = 65,41, N = 1,60 H = 8,61, 35
[oC]d25 -23,8° (C = 1, kloroform)
Olvadáspont: 113-115 °C
IR J film 3250, 2940, 1745, 1660 és 1540 cm’1 m&x LH NMR CDCL3 δ (TMS) 400 MHz
0,669 3H, s, CH3-I8 40
0,985 3H, s, CH3-19
1,883 3H, s, NAc
2,026, 2,031, 2,126, 2,145, 3H x 4, s x 4, OAc x 4
2,596 IH, dd, J = 5,2, 12,8 Hz, 2’Heq 45 3,650 IH, m, H-3 3,790 3H, s, COOMe 4,02-4,09 2H, m, H-4’, H-5’
4,166 IH, dd, J = 5,8, 12,5 Hz, Ha-8’
4,347 IH, dd, J = 2,5, 12,8 Hz, Hb-8’ 50
4,854 IH, ddd, J = 5,2, 9,8, 12,0 Hz, H-3’
5,205 IH, d, J = 10,1 Hz, NH 5,33-5,37 2H, m, H-6’, 7’
A (III) képletű vegyület fizikai tulaj- 55 donságai:
Tömeg (El) m/z 860 (M+l), 800 (M-59)
Elemanalízis (%) a C47H73O13N összegképletű vegyületre:
számított: C = 65,63, H = 8,55, N = 1,63 60 talált: C = 65,89, H = 8,58, N = 1,66 [cC]»0 -40,2° (C = 1, kloroform)
Olvadáspont: 138-140 °C
IR VfU 3420, 3250, 2930, 1740, 1660 és 1540 , niax 2Η NMR CDCL3 δ (TMS) 400 MHz
0,670 3H, s, CH3-I8
0,999 3H, s, CH3-19
1,871 3H, s, NAc
2,021, 2,021, 2,077, 2,130, 3H x 4, s x 3 OAc x 4
2,525 IH, dd, J = 4,9, 13,1 Hz, Heq-2’
3,572 IH, ni, H-3
3,798 3H, s, COOCHs
4,04-4,13 2H, m, H-4’, 5’
4,146 IH, dd, J = 7,6, 12,5 Hz, Ha-8’
4,888 IH, dd, J = 1,8, 12,5 Hz, Hb-8’
5,07 IH, tt, J = 2,0, 8,2 Hz, H-7’
5,22-5,27 IH, m, H-3’
5,34-5,38 2H, m, NH, H-6’
2. példa
Az 1. példában kapott (II) képletű vegyületet 2 ml metanolban feloldjuk. Az oldathoz 3 ml IN nátrium-hidroxid oldatot adunk, majd egy éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük az elegyet. A kapott oldathoz 2 ml vizet adunk, az oldatot Dowex 50 (H*) segítségével semlegesítjük. A kapott kevés csapadékot leszűrjük, a szűrletet vákuumban szárítjuk, így 31,4 mg (79,7%) (IV) képletű vegyületet kapunk, fehér por formájában.
A (III) képletű vegyűletből hasonló módon eljárva 30,0 mg (76,1%) (V) képletű vegyületet kapunk.
A (IV) képletű vegyület fizikai tulajdonságai: IR Q *Br 2750, 1570 cm4 2Η NM$ CDCL.3 (TMS) 90 MHz
0,71 3H, s, CH3-18
0,84 és 0,91 6H, CH3-26 és CH3-27
0,95 3H, d, J = 4,5 Hz, CH3-21
1,00 3H, s, CH3-19
2,01 3H, s, NAc
2,43 IH, dd, J = 4,5 és 12,6 Hz, 3-Heq [oClo22 -12,58° (C = 0,41, metanolban)
Az (V) képletű vegyület fizikai tulajdonságai: ÍR 9*’^ 2870, 1620 és 1550 cnr1 *H NMR CD3OD δ (TMS) 90 MHz
0,71 3H, s, CHs-18
0,86 és 0,92 6H, CH3-26 és CHs-27
0,95 3H, d, J = 4,5 Hz, CH3-21
1,00 3H, s, CHa-19
2,00 3H, s, NAc
2,39 IH, dd, J = 4,5 és 12,6 Hz, 3-Heq [oCjn20 -31,77° (C = 0,78, metanolban)
3. példa mg (II) képletű metilésztert 100 ml metanolban feloldunk. Ehhez az oldathoz körülbelül 20 ml 2 N nátrium-hidroxid vizes oldatot adunk cseppenként, keverés közben, s a kapott körülbelül 2 N nétrium-hidroxid/metanol oldatot ezután egy éjszakán át keverjük szobahőmérsékleten a termék elszappanositása céljából.
Ezután Dowex 50 W (H*) gyantát adunk az oldathoz keverés közben. Miután a pH-t körülbelül 4 értékre állítottuk be, a gyantát eltávolítjuk. Ezt kővetően az oldatot vákuum-45 bán szárítjuk, igy fehér por formájában 5-acetamido-2-0-acetil-(5-koleszten-3-ű-il>-3,5-didezoxi-oC-D-glicero-D-galakto-2-nonulopiranozonsavat kapunk. Ezt a port 0,02 N vizes nátrium-hidroxid oldatban feloldjuk. A kapott oldatot Dianon HP 20 gyantával töltött oszlopon vezetjük át, majd az oszlopot vizzel mossuk. Ezután 75%-os vizes metanolos oldattal eluálunk, a metanolt ledesztilláljuk, s fagyasztásos szárítás után 37 mg (91%) fehér port kapunk, amely a IV képletü vegyület. A (IV) képletü vegyület fizikai tulajdonságai azonosak a 2. példában megadottakkal.
4. példa mg (II) képletü vegyületet feloldunk 100 ml metanolban, s az oldathoz 20 ml 2 N nátrium-hidroxid oldatot adunk. A kapott oldatot egy éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük, a termék elszappanosítása céljából. Ezután Dowex 50 W (H*) gyantát adunk az oldathoz és az elegyet keverjük, a pH-t pedig 7-8 között tartjuk. Az elegyet szívatással szűrjük, majd metanollal mossuk, igy eltávolítjuk a gyantát. A szűrletet és a mosóiéból származó metanolt egyesítjük és a metanolt ledesztilláljuk. A kivált fehér nem oldódó anyagot szűrjük, majd fagyasztásos szárítás után 39 mg (96%) fehér port kapunk (IV) képletü vegyület. A (IV) képletü vegyület fizikai tulajdonságai:
Tömeg (FD) m/z 722 (M+Na), 700 (M+l), 386, 336 és 314
Elemanalizis (%) a C38H620íNNa. 2ΗςΟ képletü vegyületre:
számított: C: 61,96, H: 8,42, N: 1,90 talált: C: 61,92, H: 8,71, N: 2,04 [oC]d24 + 2,2° (C = 1,0, metanol)
IR 3250, 2940 és 1605 cm*1 XH NMR CD3OD á (TMS) 400 MHz
0,704 3H, s, CH3-I8
0,870 és 0,885 3H x 2, d, J = 1,7 Hz,
CH3-26, CH3-27
0,936 3H, d, J = 6,5 Hz, CH3-21
0,992 3H, s, CH3-19
2,010 3H, s, NAc
2,839 1H, dd, J = 4,2 és 12,0 Hz, 2’-Heq
5,332 1H, d, J = 5,5 Hz, 6-H UC NMR CD3OD 5 (TMS) 100 MHz
175,91 NAc,
17^26 l’-COONa
142,87 C-5
122,59 C-6
102,57 C-l’
70,50 C-3
41,00 C-2
5. példa
A 3. példában leírtak szerint járunk el, azzal a különbséggel, hogy a (II) képletü vegyület helyett (III) képletü metilésztert alkalmazunk. igy 36 mg (88%) (V) képletü vegyületet kapunk. Az (V) képletü vegyület fizikai tulajdonságai azonosak a 2. példában leirt vegyület fizikai tulajdonságaival.
6. példa
A 4. példában leírtak szerint járunk el, de a (II) képletü vegyület helyett (ΙΠ) képletü vegyületet alkalmazunk. Ily módon 40 mg (98%) (V) képletü vegyületet kapunk.
Az (V) képletü vegyület fizikai tulajdonságai: Tömeg (FD) m/z 722 (M+Na), 700 (M+l) és 386 Elemanalizis (%) a C3sH62O9NNa. H2O képletü vegyületre:
számított: C: 63,52, H: 8,91, N: 1,95 talált: C: 63,81, H: 9,25, N: 2,13 (oC]d24 -10,6° (C = 1,0, metanol)
ÍR ú 3270, 2950 és 1608 cnr1 4H NMR CD3OD í (TMS) 400 MHz
0,700 3H, s, CH3-I8
0,861 és 0,880 3H x 2, d, J = 1,5 Hz,
CH3-26, CHs-27
0,928 3H, d, J = 6,5 Hz, CHa-21
0,991 3H, s, CH3-19
1,972 3H, s, NAc
2,482 1H, dd , J = 4,5 es 13,0 Hz
5,282 1H, d, J = 5,3 Hz, 6-H
UC NMR CD3OD 6 (TMS) 100 MHz
176,95 NAc,
174,51 1 ’-COONa
143,08 C-5
122,46 C-6
101,37 C-l’
72,37 C-3
43,82 C-2,
7. példa mg (II) képletü vegyületet 100 ml vízmentes metanolban feloldunk. Ehhez az oldathoz 0,02 ml 28%-os nátrium-metilát oldatot adunk, majd körülbelül 1 óra hosszat keverjük szobahőmérsékleten, ily módon végbemegy a dezacetilezödés. Ezt követően Dowex 50 Wx8 (H+) gyantát adunk a kapott oldathoz, majd összekeverjük és semlegesítjük az oldatot. Semlegesítés után a gyantát szívással kiszűrjük, mosásra metanolt használunk. A szűrletet és a metanolos mosólúgot egyesítjük, majd 20 ml 2 N vizes nátrium-hidroxid oldatot adunk hozza és egy éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük, az elszappanositás céljából. Ezután Amberlite IRC-50 (H+) gyantát adunk az oldathoz, összekeverjük, a pH-t 5-7 értékek közé állítjuk be. Az oldatból ezután szívással kiszűrjük a gyantát, metanollal mossuk a szűrőt. A szűrletet és a metanolos mosóoldatot egyesítjük, majd vákuumde&ztillác ióval eltávolítjuk a metanolt. A kicsapódott kevés fehér oldhatatlan csapadékot kiszűrjük, fagyasztással szárítjuk, így 38 mg (93%) fehér port kapunk, amely a (IV) képletü vegyület. A vegyület fizikai tulajdonságai azonosak a 2. példa szerinti vegyület tulajdonságaival.
8. példa
A 7. példában leírtak szerint járunk el, de a (II) képletü vegyület helyett (III) kép-57
HU 198216 Β letű vegyületet alkalmazunk, s ily módon 35 mg (86%) (V) képletü vegyületet kapunk. A vegyület fizikai tulajdonságai azonosak a 2. példa szerinti vegyület tulajdonságaival.
9. példa
Injekciós készítmény előállítása
Egy ampullába az alábbi összetételű oldatot töltjük:
hatóanyag 2,5 mg nátrium-dihidrogénfoszfát dihidrát 3 mg di-nátrium-hidrogén-foszfát 12HzO 3 mg desztillált vízi ml össztérfogatig
10. példa
Felhasználás . előtt feloldandó injekciós készítmény
A készítmény előállításánál 0,5 mg hatóanyagot 1 ml fiziológiás sóoldattal összekeverünk, majd a keveréket fagyasztással szárítjuk és egy ampullába töltjük. Az injekciós készítmény feloldásakor 1 ml desztillált vizet adunk az ampullához.
11. példa
Készítmény szemben történő alkalmazás céljára
Egy ampullába az alábbi összetételű oldatot töltjük:
hatóanyag l>mg bórsav 52,5 mg borax 14,5 mg benzalkonikum-klorid megfelelő mennyiségben szolubilizáló oldat 5 ml össztérfogatig
12. példa
Inhalációs készítmény
A hatóanyagot egy achát dörzscsészében
1-20 μ átmérőjű finom porrá dörzsöljük. Ehhez a porhoz laktózt adunk, s a keveréket tovább porítjuk és keverjük. Még további laktózt adunk a keverékhez kis részletekben és tovább keverjük, finomítjuk 20-40-es trituralás eléréséig. A porból 20-40 mg-ot egy kapszulába töltjük vagy ismert módon egy por-papirba hajtogatjuk. A kapszulát poraeroszol céljára használjuk, a hajtogatott papírban lévő port pedig folyékony aeroszol céljára.
A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek farmakológiai hatását az alábbi kísérletekkel bizonyítottuk.
1. kísérlet
A neuroblastoma sejt, Neuro 2a törzs szaporodására gyakorolt hatás
Neuro 2a sejteket a következő összetételű tépkőzegre helyeztük: 90% Dulbecco’s Modified Eagle’s Midiurn, 10% magzati borjúszérium (FCS), 100 egység/ml penicillin G, 100 ug/ml streptomycin szulfát. A tenyészetet 37 °C-on inkubáljuk inkubátorban, amelybe 5% szén-dioxidot. vezetünk be. A használt edény egy 60 mm átmérőjű polistirol csésze. Minden csészébe 1-2 · 10» neuroblastoma sejtet helyeztünk és 48 óráig tenyésztettük. Az FCS-tartalinú kultúrát eltávolítottuk a kapott sejtkultúrából. A maradék kultúrákhoz, amelyek nem tartalmaztak FCS-t (100% MEM-et tartalmaztak és az antibiotikumok koncentrációja azonos volt az FCS eltávolítás előttivel) adtuk hozzá a vizsgálandó vegyületeket, amelyek a következők voltak: a (IV) képletű vegyület (1. táblázat), az (V) képletű vegyület (2. táblázat), Gál (fll-3) GalNac <01—4) < < NacNeu-(oC2-3) > Gál (01—4) Glc (βΙ-Ι,-Ceramide (a későbbiekben GQib-nek nevezzük) (3. táblázat), és <NAcNeu (oC 2-8) NAcNeu (oC
2-3) > Gál (0 1-3) GalNAc (β l/4)-NAcNeu-(oC
2-8) < NAcNeu-(oC 2-3, > Gál (β 1-4) Glc (β 1-1-) Ccramide (a későbbiekben Gqib-nek nevezzük) (4. táblázat), a leirt mennyiségekben és folytattuk a tenyésztést. 24 és 48 óra múlva az élő sejtek száma és a neuritek száma megnövekedett a kultúrában, s mértük a neuritek hosszúságát. A kísérletet minden koncenLráció esetében három csészében végeztük. A kapott adatok: átlagértékek -í+ standard hiba (S.E.).
Eredmények:
A (IV) képletű vegyület, GMi és GQib minimális hatásos koncentrációi 48 órával a gyógyszerek hozzáadása után 10 ng/ml, 10 Pg/ml és 10 pg/ml volt. Az anyagok molekulasúlyait tekintetbe véve a (IV) képletű vegyület aktivitása 420-szor nagyobb mint a GMi aktivitása és 270-szer nagyobb mint a GQib aktivitása. Az (V) vegyület minimális hatásos koncentrációja 100 ng/ml 48 órával a hatóanyag hozzáadása után és az (V) képletű vegyület 42-szer hatásosabb volt mint a GMi, és 27-szer hatásosabb mint a GQib.
Később, a tenyésztést 24 óráig folytatva, a GMi és GQib nem mutatott semmi aktivitást. A (IV) és (V) képletű vegyület aktivitása 24 óra múlva is megmaradt, ha ezeket a vegyületeket 10 ng/ml koncentrációban vizsgáltuk. Az eredmények világosan mutatják, hogy a (IV) és (V) képletű vegyületek erősen hatásosak a neuritek szaporodása szempontjából.
Akut toxicitási vizsgálatok
Az akut toxicitási vizsgálatokhoz a hatóanyagokat intravénásán adtuk be 45 hetes ddy hím egerekbe. Az eredmények azt mutatják, hogy a (IV) és (V) vegyületek LDso értékei 93 mg/kg és 291 mg/kg, megfelelőleg.
HU 198216 Β
1. táblázat óra
Vizsgálati minta összes sejtszám A sejtszaporulat neurit- száma A neurit szaporodás sebessége (%> Neurit hosszúság ± S.E. (nm/sejt) Neuritek száma ± S.E. (szám/sejt)
Kontroll 417 169 40,5 79,4 ± 2,43 1,3 ± 0,04
(IV) vegyület 10 ng/ml 416 131 31,5 92,4 ± 5,31““ 1,2 í 0,04
(IV) vegyület 100. ng/ml 427 177 41,5 96,7 ± 4,12« 1,2 ± 0,03
(IV, vegyület 1 ng/ml 373 190 50,9 130,4 ± 6,12« 1,2 ± 0,03
(IV) vegyület 10 ng/ml U.C. U.C. - U.C. U.C.
óra
Kontroll 483 206 42,7 103,6 ± 4,08 1,2 ± 0,03
(IV, vegyület 10 ng/ml 467 219 46,9 121,9 ± 5,18“ 1,2 ± 0,03
(IV) vegyület 100 ng/ml 404 193 47,8 126,0 ± 6,10« 1,2 ± 0,04
(IV) vegyület 1 ng/ml 369 182 49,3 156,3 ± 8,32* 1,2 ± 0,04
(IV) vegyület 10 ng/ml U.C. U.C. - U.C. U.C.
U.C.: nem mérhető
*p < 0,001, «p < 0,01, «*p < 0,05
24 óra 2. táblázat
Összes A sejtszapo- A neurit Neurit Neuritek
Vizsgálati minta sejtszám rulat neurit- szaporodás hosszúság száma
száma sebessége ± S.E. ± S.E.
w (nm/sejt) (szám/sejt)
Kontroll (V) vegyület 417 169 40,5 79,4 ± 2,43 1,3 ± 0,04
10 ng/ml 361 124 34,3 89,4 ± 4,23«* 1,3 ± 0,05
(V) vegyület 100 ng/ml (V) vegyület 384 156 40,6 116,4 ± 5,59* 1,2 ± 0,03
1 ng/ml 396 213 53,8 130,8 ± 5,16* 1,2 ± 0,04
(V, vegyület
10 ng/ml U.C. U.C. - U.C. U.C.
48 óra
Kontroll 483 206 42,7 103,6 ± 4,08 1,2 ± 0,03
(V, vegyület
10 ng/ml 472 226 47,9 110,6 ± 4,93 1,2 ± 0,04
(V) vegyület
100 ng/ml 422 212 50,2 135,1 + 6,23* 1,2 ± 0,04
-711
HU 198216 Β
Vizsgálati minta összes sejtszém A sejtszaporulat neurit- s zárna A neurit szaporodás sebessége (%) Neurit hosszúság ± S.E. (pm/sejt) Neuritek száma ± S.E. (szám/sejt)
(V) vegyület 1 pg/ml 454 252 55,5 138,9 ± 5,39* 1,2 ± 0,03
(V) vegyület 10 Mg/ml U.C. U.C. - U.C. U.C.
U.C.: nem mérhető »p < 0,001, “p < 0,01, »“p < 0,05
3. táblázat óra
Vizsgálati minta Összes sejtszam A sejtszaporulat neurit- s zárna A neurit szaporodás sebessége (%) Neurit hosszúság ± S.E. (pm/sejt) Neuritek száma ± S.E. (szám/sejt)
Kontroll 320 146 45,6 101,0 ± 6,04 1,3 ± 0,05
GMi 10 ng/ml 334 145 43,4 94,9 ±6,64 1,4 ± 0,05
GMi 100 ng/ml 297 142 47,8 101,1 ± 5,09 1,4 ± 0,06
GMi 1 pg/ml 332 140 42,2 109,7 ± 6,44 1,4 ± 0,06
GMi 10 pg/ml 325 149 45,8 89,3 ± 4,77 1,4 ± 0,05
GMi 100 pg/ml 310 172 55,5 90,5 ± 3,88 1,8 ± 0,06
48 óra
Kontroll 383 184 48,0 95,8 ± 4,61 1,4 ± 0,05
GMi 10 ng/ml 333 194 58,3 93,7 ±5,07 1,4 ± 0,05
GMi 100 ng/ml 349 156 44,7 108,8 ± 5,97 1,4 ± 0,06
GMi 1 pg/ml 352 211 59,9 109,2 ± 6,09 1,3 ± 0,04
GMi 10 pg/ml 330 205 62,1 113,8 ± 5,49”“ 1,3 ± 0,04
GMi 100 pg/ml 317 193 60,9 98,9 ± 5,22 1,5 ± 0,05
““p < 0,05
4. táblázat óra
Vizsgálati minta összes sejtszam A sejtszaporulat neurit- száma A neurit szaporodás sebessége (%) Neurit hosszúság ± S.E. (pm/sejt) Neuritek száma ± S.E. (szám/sejt)
Kontroll 320 146 45,6 101,0 ± 6,04 1,3 ± 0,05
CQlb 10 ng/ml 336 174 51,8 88,5 ± 5,00 1,3 ± 0,05
CQlb 100 ng/ml 331 159 48,0 86,0 ± 4,72 1,3 ± 0,04
CQib 1 pg/ml 308 157 51,0 97,6 ± 4,95 1,4 ± 0,05
CQlb 10 pg/ml 321 205 63,9 114,9 ± 5,98 1,4 ± 0,06
CQlb y 100 pg/ml U.C. U.C. U.C. U.C.
HU 198216 Β óra
Vizsgálati minta összes sejtszám A sejtszaporulat neurit- s zárna A neurit szaporodás sebessége (%) Neurit hosszúság ± S.E. (um/sejt) Neuritek száma ± S.E. (szám/sejt)
Kontroll 383 184 48,0 95,8 ± 4,61 1,4 ± 0,05
CQib 10 ng/ml 371 158 42,6 100,4 ± 5,76 1,5 ± 0,06
CQib 100 ng/ml 347 153 44,1 90,4 ± 6,06 1,2 ± 0,04
CQib 1 pg/ml 384 182 47,4 106,5 ± 6,40 1,3 ± 0,04
CQib 10 pg/ml 346 214 61,8 122,5 ± 6,99“ 1,3 ± 0,04
CQib 100 Mg/ml U.C. U.C. - U.C. U.C.
U.C.: nem mérhető ““p < 0,01
A találmány szerinti eljárással előállított szialozil-koleszterin alkalmazható a neuropátia gyógyításában.

Claims (9)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Eljárás (IV) vagy (V) képletű szialozilkoleszterin, ahol Ac jelentése acetil-csopo'-t, előállítására, azzal jellemezve, hogy az (I) képletű vegyületet - ahol Ac jelentése a 30 fenti - koleszterinnel reagáltatjuk Koénigs-Knorr katalizátor jelenlétében és a kapott (II) vagy (III) képletű vegyületet - ahol Ac jelentése a fenti - hidrolizáljuk.
    (Elsőbbsége: 1986.05.12.)
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy Koenigs-Knorr katalizátorként higany-bromidot, higany-cianidot, ezüst-perklorátot, ezűst-trifluor-metán- 40 szulfonátot vagy ezüst-trifluor-acetátot alkalmazunk.
    (Elsőbbsége: 1986.05.12.)
  3. 3. A 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a reakciót 20-25 °C közötti 45 hőmérsékleten, normál nyomáson, 1-7 napig vezetjük.
    (Elsőbbsége: 1986.05.12.)
  4. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 1-
  5. 5 mól koleszterint al- 50 kalmazunk az (I) képletű vegyület 1 móljára vonatkoztatva.
    (Elsőbbsége: 1985.05.12.)
    20 5. A 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a Koenigs-Knorr katalizátort 1,0-1,2 ekvivalensnyi mennyiségben alkalmazzuk 1 ekvivalensnyi (I) képletű vegyületre vonatkoztatva.
    25 (Elsőbbsége: 1986.05.12.)
  6. 6. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy oldószerként benzolt, diklór-metánt vagy tetrahidrofuránt alkalmazunk.
    (Elsőbbsége: 1986.05.12.)
  7. 7. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a (II) képletű vegyületet 1-3 N koncentrációjú lúgos oldattal kezeljük, 15-25 °C hőmérsékleten, 5-15
    35 óra hosszat.
    (Elsőbbsége: 1986.05.12.)
  8. 8. Eljárás neuropátia elleni hatású gyógyszerkészítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy az 1. igénypont szerinti eljárással előállított (IV) vagy (V) képletű vegyületet mint hatóanyagot ahol Ac jelentése acetil-csoport - a gyógyszeriparban szokásos hordozó és/vagy segédanyagokkal összekeverve gyógyszerkészítménnyé alakítjuk.
    (Elsőbbsége: 1986.09.14.)
  9. 9. A 8. igénypont szerinti neuropátia elleni gyógyszerkészítmény, azzal jellemezve, hogy a hatóanyagot szemcsepp vagy inhalációs készítmény, intravénás injekció, intramuszkuláris injekció vagy szubkután injekció formában szereljük ki.
HU872932A 1986-05-12 1987-05-11 Process for producing sialosyl-cholesterin and pharmaceutical compositions containing them as active components HU198216B (en)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP10822886A JPH0696535B2 (ja) 1986-05-12 1986-05-12 シアロシルコレステロ−ルの神経障害疾患治療剤
JP61208380A JPH07116216B2 (ja) 1986-09-04 1986-09-04 シアロシルコレステロ−ルの製造方法
JP8700289 1987-05-11

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUT46039A HUT46039A (en) 1988-09-28
HU198216B true HU198216B (en) 1989-08-28

Family

ID=26448165

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU872932A HU198216B (en) 1986-05-12 1987-05-11 Process for producing sialosyl-cholesterin and pharmaceutical compositions containing them as active components

Country Status (9)

Country Link
US (2) US5023239A (hu)
EP (1) EP0267297B1 (hu)
AU (1) AU594468B2 (hu)
CA (1) CA1324603C (hu)
DE (1) DE3787437T2 (hu)
DK (1) DK170648B1 (hu)
FI (1) FI91071C (hu)
HU (1) HU198216B (hu)
WO (1) WO1987006936A1 (hu)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1324603C (en) * 1986-05-12 1993-11-23 Haruo Ogura Sialosyl cholesterol, process for producing the same, and neuropathy remedy comprising the same
WO1992001664A1 (en) * 1990-07-17 1992-02-06 European Colour Plc Synthesis of carminic acid and principal intermediates
US5438125A (en) * 1991-03-06 1995-08-01 Nippon Zoki Pharmaceutical Co., Ltd. Sialic acid derivatives
WO1994015947A1 (en) * 1993-01-08 1994-07-21 Astra Aktiebolag Novel colon- or ileum-specific steroid derivatives
USRE39300E1 (en) 1993-01-28 2006-09-19 Virginia Commonwealth University Medical College Of Virginia Inhibiting the development of tolerance to and/or dependence on an addictive substance
US5352683A (en) * 1993-03-05 1994-10-04 Virginia Commonwealth University Medical College Of Virginia Method for the treatment of chronic pain
US5783564A (en) * 1993-12-24 1998-07-21 Mitsubishi Chemical Corporation Sialic acid derivatives
JP4094662B2 (ja) 1995-06-23 2008-06-04 三菱化学株式会社 シアル酸誘導体
EP1070725B9 (en) * 1998-04-10 2011-02-23 Mitsubishi Chemical Corporation Solid dispersion containing sialic acid derivative
WO2007059514A2 (en) * 2005-11-15 2007-05-24 Oxonica, Inc. Sers-based methods for detection of bioagents

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4229441A (en) * 1978-12-01 1980-10-21 Merck & Co., Inc. Immunologic adjuvant
JPS5735598A (en) * 1980-08-08 1982-02-26 Nippon Shinyaku Co Ltd Sterylglucoside derivative
JPS60190791A (ja) * 1984-03-09 1985-09-28 Kanto Ishi Pharma Co Ltd シアル酸誘導体およびその製造法
IT1177863B (it) * 1984-07-03 1987-08-26 Fidia Farmaceutici Una miscela gangliosidica come agente terapeutico capare di eliminare il dolore nele neuropatie periferiche
JPS62209094A (ja) * 1986-03-10 1987-09-14 Nippon Zoki Pharmaceut Co Ltd 新規シアル酸誘導体及びその製造方法
CA1324603C (en) * 1986-05-12 1993-11-23 Haruo Ogura Sialosyl cholesterol, process for producing the same, and neuropathy remedy comprising the same
JPS6344590A (ja) * 1986-08-12 1988-02-25 Mect Corp シアル酸誘導体の製造方法

Also Published As

Publication number Publication date
FI91071C (fi) 1994-05-10
DK170648B1 (da) 1995-11-20
AU594468B2 (en) 1990-03-08
EP0267297A1 (en) 1988-05-18
CA1324603C (en) 1993-11-23
EP0267297A4 (en) 1988-08-29
US5023239A (en) 1991-06-11
FI91071B (fi) 1994-01-31
FI880103A (fi) 1988-01-11
EP0267297B1 (en) 1993-09-15
FI880103A0 (fi) 1988-01-11
DE3787437T2 (de) 1994-01-20
US5126330A (en) 1992-06-30
HUT46039A (en) 1988-09-28
DK12388A (da) 1988-03-14
AU7394387A (en) 1987-12-01
DK12388D0 (da) 1988-01-12
DE3787437D1 (de) 1993-10-21
WO1987006936A1 (en) 1987-11-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU707779B2 (en) Substituted liposaccharides useful in the treatment and prevention of endotoxemia
KR100281264B1 (ko) 신규한 스핀고당 지질 및 그의 사용
CA2344652C (en) Carboxymethylgalactose derivatives
HU193151B (en) Process for producing ganglyoside derivatives and pharmaceutical compositions containing them as active agents
US4228274A (en) 1-Substituted glycopyranosides
HU198216B (en) Process for producing sialosyl-cholesterin and pharmaceutical compositions containing them as active components
WO1993015098A1 (en) Lewis-type sugar chain derivative
CN100469783C (zh) 一种寡糖及其硫酸化产物和寡糖集簇物以及它们的用途
FR2949114A1 (fr) OCTASACCHARIDES N-ACYLES ACTIVATEURS DES RECEPTEURS DES FGFs, LEUR PREPARATION ET LEUR APPLICATION EN THERAPEUTIQUE
KR890004136B1 (ko) 시 알로실 콜레스테롤 및 그의 제조 방법 및 시알로실 콜레스테롤로 이루어지는 신경성 질환 치료제
Bulusu et al. Acyclic analogs of lipid A: synthesis and biological activities.
NZ226888A (en) Sialocylglycerolipids and their method of preparation
HU205129B (en) Process for producing lysoganglioside derivatives, as well as pharmaceutical compositions comprising such derivatives as active ingredient
EP0655457A1 (en) Moranoline derivative
JPH03218391A (ja) 新規ジ―リゾガングリオシド誘導体
JPH0482836A (ja) 癌転移抑制剤
HU202245B (en) Process for producing phsophono-oxy-alkyl-derivatives of mitomycin-c, their corresponded sulfur-analogues and pharmaceutical compositions containing them
CN115611964B (zh) 具有炎症性肠病治疗作用的乌苏酸皂苷、其衍生物及制备方法和应用
JPH0560474B2 (hu)
FR2970969A1 (fr) Oligosaccharides 3-o-alkyles activateurs des recepteurs des fgfs, leur preparation et leur application en therapeutique
KR920002143B1 (ko) 5-치환 우리딘 유도체 및 그의 제조 중간체
JP3578474B2 (ja) 糖結合蛋白
JPS61243096A (ja) シアル酸誘導体及びその製造方法
JPH0696535B2 (ja) シアロシルコレステロ−ルの神経障害疾患治療剤
EP1140961A1 (en) Process for the preparation of ganglioside gm3 by acid hydrolysis of ganglioside inner esters and its use in the pharmaceutical field

Legal Events

Date Code Title Description
HU90 Patent valid on 900628
HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee