HU192165B - Process for preparing antibiotic bbm-1644 - Google Patents

Process for preparing antibiotic bbm-1644 Download PDF

Info

Publication number
HU192165B
HU192165B HU832616A HU261683A HU192165B HU 192165 B HU192165 B HU 192165B HU 832616 A HU832616 A HU 832616A HU 261683 A HU261683 A HU 261683A HU 192165 B HU192165 B HU 192165B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
bbm
agar
strain
acid
antibiotic
Prior art date
Application number
HU832616A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT37167A (en
Inventor
Konishi Masataka
Sakai Fumihide
Miyaki Takeo
Kawaguchi Hiroshi
Original Assignee
Bristol Myers Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bristol Myers Co filed Critical Bristol Myers Co
Publication of HUT37167A publication Critical patent/HUT37167A/hu
Publication of HU192165B publication Critical patent/HU192165B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
    • C12P1/06—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using actinomycetales
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/03—Actinomadura
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/825—Actinomadura

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

A találmány tárgya eljárás új tumorgátló antibiotikum előállítására és elválasztására.
A találmány szerinti BBM-1644 jelű tumorgátló antibiotikum a tumorgátló fehérje-antibiotikumok új tagja. Az antibiotikumok e csoportjába tartozik például a neokarzinosztatin, makromomicin és auromomicin.
A neokarzinosztatin (zinosztatin) 10700-as molikulasúlyú savas fehérje-makromolekula, amely 109 aminosavból álló, két diszulfid-híddal összekötött egyetlen polipeptidláncból áll. A neokarzinosztatinnak a Streptomyces carzinostaticusvar. neocarzinostaticus törzs fermentálásával való előállítását a 3,334,022 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban és a J. Antibiotics 18, 68-76 (1965) közleményben ismertetik.
A makromomicin semleges vagy gyengén savas polipeptid, melynek hozzávetőleges molekulasúlya 15000. A makromomicinnek Streptomyces macromomyceticus (NIHJ MC-8-42) fermentálásával való előállítását a 3,595,954 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban és a J. Antibiotics 21, 44-49 (1968) közleményben írják le. A makromomicin tisztítását és a tiszta vegyület jellemzésének adatait a J. Antibiotics 29, 415-423 (1976) közleményben ismertetik.
Az auromomicin gyengén savas polipeptid, melynek molekulasúlya körülbelül 12500 és izoelektromos pontja pH 5,4 16 különböző aminosavból áll. Az auromomicin izolálását a Streptomyces macromomyceticus tenyészlevéből és a tiszta termék jellemző tulajdonságait a J. Antibiotics 32, 330-339 (1979) közleményben írják le.
A BBM-1644 az ismert polipeptid tumorgátló antibiotikumoktól, mint a neokarzinosztatintól, makromomicintől és auromomicintől fizikaikémiai tulajdonságai, mint a molekulasúly, aminosavtartalom, és papír-elektroforézis alapján különböztethető meg.
A találmány szerint BBM-1644-ként megjelölt új tumorgátló fehérje-antibiotikumot állítunk elő, az Actinomadura nemzetség egy új törzsének, az Actinomadura sp. H710-49 törzsnek (ATCC 39144) vizes tápközegben való tenyésztése útján; a tenyésztést asszimilálható szén- és nitrogénforrást tartalmazó vizes tápközegben szubmerz aerob körülmények között folytatjuk, amíg a tápközegben jelentős mennyiségű BBM-1644 képződik, és a BBM1644-et kívánt esetben elválasztjuk a tápközegtől. A találmány magába foglalja a BBM-1644 antibiotikum híg oldatát, nyers kocentrátumát és tisztított szilárd formáját.
Az 1. ábra a BBM-1644 infravörös abszorpciós spektrumát mutatja (KBr tabletta).
A 2. ábra a BBM-1644 ultraibolya abszorpciós spektrumát mutatja (vízben, 0,01 n HCl-ban és 0,01 n NaOH-ban).
A találmány tárgyát a BBM-1644-nek elnevezett új tumorgátló fehérje-antibiotikumnak az Actinomadura nemzetség új törzsének, az Actinomadura sp. H710-49 törzs fermentálása útján való előállítása képezi. A fenti organizmust egy NSzK-ban gyűjtött talajmintáéból izolálták. Az organizmus biológiailag tiszta tenyészetét az „American Type Culture Collection”-nél (Washington, D.C.) deponálták és ATCC 39144 jelzéssel besorolták annak állandó mikroorganizmus-gyűjteményébe.
A BBM-1644 gátolja különböző Gram-pozitív és saválló baktériumok növekedését. Az antibiotikum lizogén baktériumokban fág-indukcióra képes és gátolja limfatikus és szolid tumorok növekedését, így egérnél a P388 leukémiát. Ezért az új antibiotikum baktériumellenes anyagként, vagy emlősöknél daganatgátló szerként alkalmazható.
A mikroorganizmus
A H710-49 számú, Actinomycetaceae családba tartozó törzset talajmintából izolálták és szokásos módon állították elő jellemzésre alkalmas, biológiailag tiszta tenyészet formájában. A H710-49 törzs mind vegetatív (szubsztrát), mind légmicéliumokat képez. A vegetatív micélium hosszú, elágazó és nem fragmentálódik rövid filamentumokká. Rövid spóraláncok képződnek a légmicélium végén vagy monopódiális elágazásán. A spóraláncok egy láncban 2—15 spórát (többnyire 4-8 spórát) tartalmaznak és alakjuk egyenes, horgas vagy hurkos. A spórák szemölcsös felszínűek, ovális - elliptikus alakúak (0,5 ~ 0,6x0,7 ~ l,2pm) kerek vagy hegyes végződéssel. Az érett spórákat gyakran üres hifák választják el egymástól. Czapek-agaron és Bennett-agaron tenyésztve a vegetatív micéliumon a hifák végén esetenként kitüremlés figyelhető meg. Rajzóspórák, sporangiumok vagy szkleróciumszemcsék egyetlen vizsgált táptalajon sem láthatók.
A Streptomyces nemzetség közönséges fajtáitól eltérően a H710-49 törzs kémiailag meghatározott tápközegekben és természetes szerves tápközegekben lassan növekedik és kevés Iégmicéliumot képez. A légmicélium színe fehér, és glicerin-aszparing agarban spóraképzés után pirosas árnyalatú lesz. A vegetatív micéliumtömeg színtelen, sárga, vörösesbarna vagy sötét szürkésbama. Melanoid pigment nem képződik, de glicerin-aszparagin agarban, tirozin agarban és glicerinnel, L-arabinózzal, D-xilózzal, L-ramnózzal, D-glükózzal, D-fruktózzal, trehalózzal vagy D-mannittal kiegészített Pridham-Gottlieb alapagarban citromsárga diffúz pigmentáció látható. A H710-49 törzs 20°, 28° és 37 ’C-on növekedik, de nem nő 10° vagy 41 ’C-on. 10% NaCl-ra érzékeny, de 7%-ra nem, és rezisztens 0,001% lizozimmal (baktériumsejtfal-bontó enzim) szemben. D-galaktózt, D-mannózt, szacharózt, raffinózt és inozitot a törzs nem hasznosít. A H710-49 törzs tenyésztési és fiziológiai jellemzőit az 1. illetve 2. táblázat mutatja. A törzs szén-hasznosítási képe a 3. táblázatban látható.
1. táblázat
A H710-49 törzs tenyésztési jellemzői*
T ripton-élesztőkivonat tápfolyadék (ISP No. 1)
Szacharóz-nitrát (Czapek-agar)
Glükóz-aszparagin agar
G** gyengétől mérsékeltig; pelyhes, leülepedett és nem pigmentált.
G csekély
R színtelentől halvány narancssárgáig (73)***
A csekély; fehér (263)
D nincs.
G gyenge
R sárgásfehértől (92) mély narancssárgáig (69)
A nagyon csekély; fehér (263)
Pepton-élesztőkivonat-vasagar (ISP No. 6)
A nagyon csekély; fehér (263)
D közepes olajbarna (95)
G gyenge
R szürkéssárgától (90) sötét szürkésbarnáig (62)
A gyenge; fehér (263) D nincs, illetve közepes sárgásbarnáig (77) *28 ’C-on való 3 hetes inkubálás után megfigyelve ••Rövidítések: G - növekedés; R - fonák színe; A - légmicélium; D - diffúz pigment **·Α szín és a zárójelben levő szám a következő leírás színszabványának felel meg: „Kelly, K.L. és D.B. Judd: ISCC-NBS color-name charts illustrated with Centroid Colors. U.S. Dept. of Comm. Circ. 553, Washington, D.C., 1975. november”
Glicerin-aszparagin agar (ISP No. 5)
D nincs.
G gyengétől mérsékeltig
Szervetlen sók-keményítő agar (ISP No. 4)
Tirozin agar (ISP No. 7)
Tápagar
Élesztőkivonatmalátakivonat agar (ISP No. 2)
Zabliszt agar (ISP No. 3)
R halványsárgától (89) sötét narancssárgáig (72)
A gyenge; fehértől (263) halvány sárgáspirosig (31)
D ragyogó sárga (83)
G gyengétől mérsékeltig
R színtelentől mély sárgáig (85)
A gyenge; pirosas fehértől (9) halvány sárgáspirosig (31)
D nincs.
G mérsékelt R barnás narancstól (54) közepes pirosasbarnáig (43)
A gyenge; fehértől (263) halvány sárgáig (89)
D erős sárga (84)
G gyengétől mérsékeltig R sárgásfehértől (92) közepes sárgásbarnáig (77)
A gyenge; fehér (263)
D nincs.
G mérsékelt
R sötét sárgától (88) sötét barnáig (59)
A csekély; fehér (263)
D világos olajbarna (94) G gyenge
2. táblázat
A H710-49 törzs fiziológiai jellemzői
Próba
Növekedés hőmérséklet-tartománya
Zselatin-elfolyósítás
Keményítő-hidrolízis
Reakciók sovány tejben
Meianoid képződés
Eredmény
Maximális növekedés 28 ’C-on
Mérsékelt növekedés 20 és 37 ’C-on. Nincs növekedés 10’ és 41 ’C-on Elfolyósodott Hidrolizálódott
Nem koagulálódott és teljesen peptonizálödott Nem képződött
Módszer és közeg Bennett-agar
Glükóz-peptonzselatin tápközeg Keményítő agar lemez „Difco” sovány tej
Nitrát redukció redukálódott
Bennett-agar
Ellenállás NaCl-dal szemben
Lizozim
PH
Mérsékelten ellenálló.
Növekszik 7%-nál, de nem növekszik 10%-nál.
Ellenálló. Növekedés 0,001 %-nél. Növekszik 6,0-nál, de nem növekszik 5,0-nél
Tripton-élesztőkivonat tápleves, tirozin agar és peptonélesztőkivonatvasagar
Czapek-féle glükóznitrát tápfolyadék és glükóz-élesztőkivonat-nitrát tápfolyadék
Tripton-élesztőkivonat agar
Tripton-éles/tőkivonat agar
Triplon-clcszlökivonat agar
3. táblázat
A H710-49 törzs szénforrás-hasznosítása*
R színtelen Glicerin +
A gyenge; fehértől (263) D( - )-Arabinóz —
pirosas fehérig (9) L( 4 )-Arabinóz 4
D nincs. D-Xilóz +
G mérsékelt D-Ribóz +
R szürkés-sárgásbarná- L-Ramnóz +
tól (80) sötét D-Glükóz +
szürkésbarnáig (62) D-Galaktöz -
3. táblázat (folytatás) A H710-49 törzs szénforrás-hasznositása*
D-Fruktóz +
D-Mannóz L( - )-Szorbóz Szacharóz —
Laktóz Cellobióz +
Melibióz _
Trehalóz +
Raffinóz —
D( + )-Melecitóz —
Oldható keményítő +
Cellulóz _
Dulcit —
Inozít —
D-Mannit +
D-Szorbit Szalicin * Megfigyelés 3 hetes 28 C-on való inkubálás után. Alaptáptalaj : Pridham-Gottlieb szervetlen táptalaj
A H710-49 tisztított sejtfala mezo-diaminopimelinsavat tartalmaz, de nem tartalmaz glicint. A teljes sejt-hidrolizátumban maduróz (3-0-metilD-galaktóz), glükóz, ribóz és kevés mannóz mutatható ki. A H710-49 törzs sejtfalösszetétele és a teljes sejt cukor-komponensei arra utalnak, hogy a törzs sejtfala IIIB típusú.
A H71O-49 törzs fent leírt jellemzői az Actinomadura nemzetség jellemzőihez hasonlítanak. Goodfellow és munkatársainak az Actinomadura és rokon Actinomycetaceae családba tartozó fajokra vonatkozó numerikus rendszertana szerint [J. Gén. Microbiol. 112, 95-111 (1979)] a legtöbb talajból származó Actinomadura faj a leírt 14 csoport közül a 7. számú csoportba sorolható be. A H710-49 törzs a 7. csoport fajaihoz áll a legközelebb. Nonomura és Ohara [J. Ferment, Technoi. 49, 904-912 (1971)] az Actinomadura nemzetség 5 szaprofita faját írta le és Nonomura [J. Ferment. Technoi. 52, 71-77 (1974)] és Preobrazhenskaya és munkatársai [Actinomycetes and Related Organisms 12, 30-38 (1977)] az Actinomadura fajok azonosítását és osztályozását írják le. Az irodalomban leírt ismert Actinomadura fajokkal való összehasonlítás alapján a H71O-49 törzset egy új Actinomadura fajhoz tartozónak tartjuk, amely hasonló a Preobrazhenskaya és munkatársai fent idézett közleményében és a „Japanese Kokai” 55/94 391-ben leírt A. roseola, A. salmonea, A. vinacea vagy A. corallina fajokhoz.
Bár a BBM-1644 termelését részletesen az Actinomadura sp. H710-49 törzsre (ATCC 39 144) írtuk le, megjegyzendő, hogy a találmány nem korlátozódik ezen mikroorganizmus vagy az itt részletesen leírt tenyésztési jellemzők által meghatározott mikroorganizmusok felhasználására. Kifejezett szándékunk szerint a találmány magában foglalja a H710-49 törzs és annak valamennyi természetes és mesterséges ΒΒΜ-1644-termelő variánsa és mutánsa felhasználásával történő BBM-1644 előállítást.
Antibiotikum-termelés
A találmány szerinti BBM-1644 antibiotikumot úgy állítjuk elő, hogy az ATCC 39 144 vagy mutánsa azonosító jellemzőivel rendelkező Actinomadura sp. törzset szokványos vizes tápközegben tenyésztjük. A tenyésztéshez használt tápközeg az Actinomycetaceae ismert tápanyag-forrásait tartalmazza, azaz asszimilálható szén- és nitrogénforrásokat, szervetlen sókat és más ismert növekedési faktorokat. Nagy mennyiségű antibiotikum termelését előnyösen szubmerz aerob körülmények között hajtjuk végre, bár korlátozott mennyiségek előállításához felszíni tenyészetek és palackok is használhatók. A találmányhoz más, Actinomyceteaceae családba tartozó törzsek tenyésztéséhez használt általános eljárások alkalmazhatók.
A táptalajnak alkalmas asszimilálható szénforrást kell tartalmaznia, így glicerint, L( + )-arabinózt, D-xilózt, D-ribózt, D-glükózt, D-fruktózt, oldható keményítőt, D-mannitot vagy cellobiózt. Nitrogénforrásként ammónium-klorid, ammónium-szulfát, karbamid, ammónium-nitrát, nátriumnitrát és hasonlók használhatók vagy egyedül, vagy szerves nitrogénforrásokkal, mint peptonnal, húskivonattal, élesztőkivonattal, kukoricalekvárral, szójababporral, gyapotmagliszttel és hasonlókkal együtt. Szükség esetén szervetlen tápsók is alkalmazhatók nátrium-, kálium-, kalcium-, ammónium-, foszfát-, szulfát-, klorid-, bromid-, karbonát-, cink-, magnézium-, mangán-, kobalt-, vasforrásként.
A BBM-1644 antibiotikum termelése az organizmus kielégítő növekedését elősegítő bármely hőmérsékleten végrehajtható, például 20-37 ’C-on, és általában mintegy 27-32 °C hőmérsékleten alkalmazunk. Optimális termelést rázatott lombikokban kapunk 6-7 napi inkubálás után. Ha a fermentálást kádakban kell végrehajtani, valamely tápfolyadékban célszerűen vegetatív inokulumot állítunk elő oly módon, hogy a tenyészfolyadékot beoltjuk az organizmus ferde agaron nőtt tenyészetével vagy liofilezett tenyészetével. Az így kapott aktív inokulumot fertőzésmentes körülmények között átvisszük a fermentáló tartály tápközegébe. Az antibiotikum képződést papírkorong-agardiffúziós próbával követjük, teszt-organizmusként Bacillus subtilis M45-öt használva [rec- mutáns; Mutation Rés. 16, 165-174 (1972)].
Izolálás és tisztítás
Amikor a fermentáció befejeződött és szűréssel vagy centrifugálással a szilárd részt eltávolítottuk, a BBM-1644 főként a fermentlé folyékony részében van jelen. így az összegyűjtött fermentlé centrifugálással micélium-üledékre és tápfolyadék-felülúszóra választható szét. A szűrletet azután koncentráljuk és csapvízzel szemben félig-áteresztő hártya, mint cellofáncső segítségével dializáljuk a hártyán átmenő szennyezések eltávolítása céljából. A cső belsejében visszatartott, ΒΒΜ-1644-et tartalmazó oldatot (az oldhatatlan anyagok eltávolítása után) azután kisózó reagenssel, mint ammónium-41 szulfáttal telíthetjük a BBM-1644 nyers szilárd formában való kicsapása céljából. E szilárd anyagot vízben oldhatjuk és csapvízzel szemben dializálva sómentesítjük.'
A nyers BBM-1644 további tisztítására más savas polipeptidekhez használatos szokványos eljárások alkalmazhatók. Például a ΒΒΜ-1644-et tartalmazó vizes oldatot ion-cserélőn, mint DEAE-cellulózon,. CM-Sephadexen vagy CM-cellulózon adszorbeáltathatjuk és semleges sóoldattal eluálhatjuk. Előnyösen egymást követő kromatográfiás műveleteket hajtunk végre, eluensként gradiens koncentrációjú sóoldatot használva. A tisztított ΒΒΜ-1644-et tartalmazó vizes frakciókat azután koncentráljuk, például liofilezéssel szárítjuk.
A BBM-1644 fizikai-kémiai tulajdonságai
A ΒΒΜ-1644-et liofilezés útján amorf fehér por alakjában izoláljuk. Nagyfeszültségű papír-elektroforézissel (4500 V 0,05M barbitál-pufferben pH
8,6-nál) a BBM-1644 savként vándorol, 1 óra alatt
8,7 cm-t mozdul el az anód irányába. A BBM-1644-nek nincs éles olvadáspontja és 240 ’C felett fokozatosan elbomlik. Vízben oldódik, de gyakorlatilag oldhatatlan szokványos szerves oldószerekben, mint metanolban, etanolban, acetonban, etil-acetátban és «-hexánban. Az antibiotikum optikai forgatóképessége a^6 = = -75,6°, 0,25%-os vizes oldatban. Amint a 2. ábrán látható, a BBM-1644 UV spektruma abszorpciós maximumot mutat 275 nm-nél (Ej^, 8,2) és 310 nm-nél (E)*m 4,6; váll) vizes oldatban. UV spektruma közel azonos vízben és 0,01n HCl-ban, de csak egy maximumot mutat 0,01n NaOH-ban 285 nm-nél (E[*m 8,9). A BBM-1644 KBr-ban mért IR spektrumát az 1. ábra mutatja. A spektrum -NH és -OH csoportok (3300 ~ 2980 cm'1) és amidcsoportok (1650 és 1540 cm1) jelenlétét jelzi. Az antibiotikum pozitív reakciót ad Folin-Lowry, xantoprotein, biuret és ninhidrin reagensekkel és elszínteleníti a kálium-permanganát-oldatot. Negatív antron- és Sakaguchi-reakciót ad. Sephadex G-75 oszlopon ovalbuminnal (molekulasúly 43 000), kimotripszinogénnel (25 000) és libonukleáz A-val (13 700) együtt kromatografálva a BBM-1644 közvetlenül a kimotripszinogén után eluálódik és ezért molekulasúlyát körülbelül 22 000-nek tekintjük. A BBM-1644 elemi analízise 46,60% szenet, 6,45% hidrogént, 13,34% nitrogént és 0,20% kenet mutat ki. Aminosav-analízissel 13 fajta aminosav mutatható ki a BBM-1644 molekulában, a 4. táblázat szerint. Bázikus aminosav, mint lizin, hisztidin és arginin nincs jelen a BBM-1644ben.
4. táblázat
BBM-1644 aminosav-összetétele_
Aminosav
Aminosavak relatív összetétele*
Alanin 8,8
Aszparaginsav 6,0
2 Cisztin** 1,0
Glutaminsav 5,7
Glicin 8,7
Izoleucin 2,3
Leucin 1,0
Fenil-alanin 1,4
Prolin 4,1
Szerin 1,6
Treonin 7,2
Tírozin 0,6
Valin 11,1
* A leucin-tartalmat önkényesen I-nek vettük.
** —S—CHj—CH(NH2)—COOH
A BBM-1644 meglehetősen stabil a 2~ 9 pH tartományban, de stabilitása hirtelen csökken e tartományon kívül. A BBM-1644 vizes oldata 2 óráig stabil 50 °C-on semleges pH-nál. UV-fénynek kitéve a BBM-1644 antibiotikus aktivitása 20 perc alatt elvész.
A BBM-1644 fent leírt fizikai-kémiai tulajdonságai azt mutatják, hogy fehérjetermészetű tumorgátló antibiotikum-csoport tagja, a neokarzinosztatinnal, makromomicinnel és auromomicinnel együtt. A BBM-1644 azonban molekulasúlya, aminosavtartalma és papír-elektroforézise alapján elkülöníthető az ismert fehérjetermesztésű tumorgátló antibiotikumtól. A BBM-1644, neokarzinosztatin és makromomicin elektroforetikus mobolitását az 5. táblázat mutatja.
5. táblázat
Papír-elek troforézis*
Mobilitás (mm __a felvitel pontjától)
BBM-1644 +87
Neokarzinosztatin + 31
Makromomicin - 20 * 4500 V, 1 óra; barbitál-puffer pH 8.6 50
Az antibiotikumok neokarzinosztatin-csoportja általában két UV abszorpciós maximumot mutat 275 és 350 nm körül, míg a BBM-1644 UV-maximuma körülbelül 275 és 310 nm-nél van. Újabban 55 leírták [Biochem. Rés. Commun. 95, 1351-1356 (1980)], hogy a neokarzinosztatin antibiotikumok 350 nm-nél kapott maximumai nem-fehérje kromofóroknak (színhordozó vegyület) tulajdonítható, melyek alapvetőek a biológiai aktivitás szemponljából. A BBM-1644 kromofórja különbözik az ismert neokarzinosztatin antibiotikum-csoport kromofórjaitól.
A BBM1644 biológiai tulajdonságai
A BBM-1644 baktériumellenes hatékonyságát agaron, felező higitási sort alkalmazó módszerrel határozzuk meg. Tápagart használunk Gram-pozitív és Gram-negatív baktériumokhoz; 4% glicerint tartalmazó tápagart használunk saválló baktériumokhoz és Sabouraud-agart gombákhoz. Az aktivitást formájában fejezzük ki és az eredményeket a neokarzinosztatinnal kapottakkal együtt a 6. táblázatban közöljük. A BBM-1644 hatásos gáltó aktivitást az agaron kapott legkisebb gátló koncentráció (MIC) mutat Gram-pozitív és saválló baktériumokkal szemben, de nem gátolja Gram-negatív baktériumok és gombák növekedését. A BBM-1644 baktériumellenes spektruma hasonló a neokarzinosztatinéhoz, azonban egyes kísérleti organizmusok esetében aktivitása felülmúlja a neokarzinosztatinét.
6. táblázat
In vitro mikrobaellenes hatás
MIC (mcg/ml)
Kísérleti organizmus BBM-1644 noSZtatin
Staphylococcus aureus FDA 209P 0,4 1,6
Staphylococcus aureus Smith 0,2 0,8
Streptococcus pyogenes A20 201 6,3 3,1
Micrococcus luteus PCI 1001 1,6 1,6
Micrococcus flavus D12 1,6 1,6
Bacillus subtilis PCI 219 0,8 3,1
Escherichia coli NIHJ >100 >100
Klebsiella pneumoniae D-l 1 >100 >100
Proteus vulgáris A9436 >100 >100
Pseudomonas aeruginosa A9930 >100 >100
Mycobacterium smegmatis 6 07 D87 12,5 50
Mycobacterium flei D88 3,1 12,5
Candida albicans IÁM 4888 >100 >100
A BBM-1644 antibiotikumnak lizogén baktériumokban való profág-indukáló képességét (ILB) Lein és munkatársai szerint [Natúré 196, 783-784 (1962)] határoztuk meg, vonatkoztatási vegyületként karzinosztatint használva. A plakk-számlálást (tarfolt-számlálás) a vizsgálandó anyagot (T) és kontrollt (C) tartalmazó agarlemezeken végezzük el. A plakk-számlálásnál a 3-nál nagyobb T/C arányt fogadjuk el szignifikánsnak és az ILB-aktivitást a vizsgálandó vegyület legkisebb indukáló koncentrációjával fejezzük ki. Amint a 7. táblázat mutatja, a BBM-1644 ILB-aktivitása hasonló a karzinosztatinéhoz; mindkettőnél a legkisebb indukáló koncentráció 1 mcg/ml.
7. táblázat
A BBM-1644 lizogén baktériumokban való fágindukciója
ILB-aktivitás (T/C)* (mcg/ml)
100 10 1 0,1
BBM-1644 10,4 10,3 6,0 1,2
Neokarzinoszta- 28,6 20,4 10,8 0,8
tin
* Szignifikáns aktivitás: T/C >3,0
A BBM-1644 tumorgátló hatásosságát egéren (BDFj törzs) határozzuk meg P388 limfocitás leukémiával szemben. Minden egeret i.p. beoltunk 3 x 105 tumorsejttel. Az antibiotikumot osztott dózisokban i.p. adagoljuk az egereknek 24 órával a daganat beoltása után. A kezelést naponta egyszer alkalmazzuk az 1., 4. és 7. napon (A módszer), vagy 9 egymást követő napon (B módszer). A neokarzinosztatint vonatkoztatási tumorgátló szerként öszszehasonlítás céljából teszteljük és az eredményeket a 8. táblázatban foglaljuk össze. A BBM-1644 igen hatásos az egér-leukémiával szemben 0,03 ~ 1,0 mg/kg/nap dózistartományban, mindkét kezelési rendnél. A BBM-1644 tumorgátló aktivitása körülbelül azonos (B módszer) a karzinosztatinéval, vagy annál 3 x hatásosabb (A módszer), a legkisebb hatásos dózisok összehasonlítása alapján.
8. táblázat
P388 leukémiával szembeni tumorgátló hatás
T/C (%), MST* alapján
Dózis: mg/kg/nap, i.p., A módszer
1 0,3 0,1 0,03
BBM-1644 188 188 138 125
Neokarzinoszta tin 163 150 125 113
T/C (%), MST alapján
Dózis: mg/kg/nap, i.p., B módszer
0,3 0,1 0,03 0,01
BBM-1644 125 175 138 113
Neokarzinoszta- tin 163 138 125 113
* MST - átlagos túlélési idő; szignifikáns aktivitás: T/ C§ 125*
A BBM-1644 tumorgátló hatása P388 egérleukémiával szemben egy másik próbában is kimutatható, melynek eredményeit a 9. táblázat tartalmazza. A próbában alkalmazott módszer részleteit a Cancer Chemother. Rep. 3, 3. rész, 1-87 (1972) írja le.
9. táblázat
BBM-1644 hatása P388 leukémiában
Kezeléji rend Dózis, Hatás AWC Túlélők
Anyag (napok sorszá- ír mg/kg/ inj. IV1O 1 napok MST T/C% g 6. nap 5(30) nap
ma)
Neokar- 1., 4., 7 1,6 8,0 89 -4,8 6/6
zino- 0,8 10,5 117 “4,3 6/6
sztatin 0,4 15,5 172 -3,2 6/6
0,2 15,0 167 -2,5 6/6
0,1 13,5 150 -1,2 6/6
0,05 12,0 133 -1,7 6/6
BBM-1644 1. 2,56 9,0 100 - 4/6
1,28 14,0 156 -4,1 6/6
0,64 14,5 161 -4,9 6/6
0,32 16,5 183 -4,8 6/6
0,16 14,0 156 -4,1 6/6
0,08 12,0 133 -2,8 6/6
0,04 10,5 117 -2,7 6/6
0,02 11,0 122 -2,5 6/6
1.,4., 7. 1,28 23,5 261 -3,3 6/6
0,64 19,0 211 -3,5 6/6
0,32 18,5 206 -4,3 6/6
0,16 14,5 161 -3,8 6/6
0,08 12,0 133 -3,3 6/6
0,04 12,0 133 -2,9 6/6
0,02 10,0 111 -2,5 6/6
0,01 10,0 111 -1,9 6/6
QD 1 - 9 0,64 8,0 89 -5,2 6/6
0,32 10,0 111 -4,2 6/6
0,16 19,0 211 -4,3 6/6
0,08 18,0 200 -4,2 6/6
0,04 15,5 172 -3,5 6/6
0,02 13,0 144 -3,3 6/6
0,01 12,0 133 -2,2 6/6
0,005 11,0 122 -1,1 6/6
Kontroll IO7 sóoldat 8,0 - - 10/10
10® sóoldat 9,0 - -0,3 20/20
I09 sóoldat 11,0 - 10/10
10® sóoldat 14,0 - - 10/10
Tumor inokulum: 10® aszcitesz sejt, i.p. (plusz titrálás) Gazdaállat: CDF, nőstény egér Toxicitás: <4/6 egér él az 5.napon Értékelés: MST = átlagos túlélést idő
Kritérium: a T/C% i 125értéket tekintjük szignifikáns tumorgátló aktivitásnak
AWC = átlagos tömegváltozás („average animal weight change”)
D = nap
QD = naponta
A BBM-1644 akut toxicitását egéren (dd Y törzs) határozzuk meg a vegyület egyszeri i.p. alkalmazásával; az LD50 dózis 5,8 mg/kg.
Mint a fentiekből látható, a BBM-1644 hatásos baktériumellenes hatást fejt ki Gram+ és saválló baktériumokkal szemben és így emlősök és más állatok baktériumok okozta fertőző betegségeinek gyógyászati kezelésére használható. Ezenfelül egyéb baktériumellenes anyagokhoz hasonlóan - a megszokott módon alkalmazható, például orvosi és fogászati felszerelések fertőtlenítésére.
A lizogén sejtekben való profán-indukció és egérnél a P388 leukémiával szemben mutatott jelentős tumorgátló hatásosság azt jelzi, hogy a
BBM-1644 emlősöknél a daganatnövekedés gátlására is használható.
Ezért a találmány szerint eljárással előállított vegyület alkalmas baktériumos fertőzés vagy rosszindulatú daganat által megtámadott gazdaállat gyógyászati kezelésére, mely szerint a gazdaállatnak a BBM-1644 vagy e vegyület hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmény hatásos baktériumellenes vagy tumorgátló dózisát alkalmazzuk.
A találmány körébe tartozik olyan gyógyszerkészítmények előállítása, melyek a BBM-1644 hatásos baktériumellenes vagy tumorgátló mennyiségét tartalmazzák közömbös, gyógyszerészetileg elfogadható hordozóval vagy hígítóval együtt. E készítmények parenterális adagolásra alkalmas bármilyen gyógyszerformában előállíthatok.
A parenterálisan alkalmazandó, találmány szerinti készítmények közé steril vizes vagy nem-vizes oldatok, szuszpenziók vagy emulziók tartoznak. Steril szilárd készítmények is előállíthatok, melyeket közvetlenül a felhasználás előtt steril vízben, fiziológiás konyhasóoldatban vagy más stril, injekció készítésére alkalmas közegben feloldunk.
Nyilvánvaló, hogy a BBM-1644 antibiotikum adott esetben előnyösen részesített mennyiségei változnak az illető készítmény összeállításától, az alkalmazás módjától és a szóban forgó kezelendő gazdaszervezettől és betegségtől függően. A szakembernek a szer hatását befolyásoló számos tényezőt kell figyelembe vennie, például a kort, testtömeget, nemet, étrendet, az alkalmazás idejét és útját, a kiválasztás sebességét, a gazdaszervezet állapotát, szer-kombinációkat, reagálási érzékenységet és a betegség súlyosságát. Az alkalmazás folyamatosan vagy megszakításokkal történhet a maximális tolerált dózistartományon belül. Az adott körülményekhez a szakember az optimális alkalmazási ütemet szokásos dózismeghatározási próbák segítségével állapíthatja meg a fenti irányvonalak figyelembevételével.
A következő példák a találmány ismertetésére szolgálnak, a találmány körének korlátozása nélkül. A DEAE-cellulóz dietil-amino-etil-cellulóz ioncserélő. A sephadex G-50 gélszűrő (Pharmacia Fine Chemicals, Inc.). A DEAE-sephadex A-50 dietil-amino-etil-funkciós csoportokat tartalmazó anioncserélő gél (Pharmacia Fine Chemicals, Inc.). A Sephadex a Pharmacia Fine Chemicals, Inc. védjegyzett termékei.
1. példa
BBM-1644 fermentálása
Actinomadura sp. H71O-49 jól fejlett tenyészetét tartalmazó ferde agart használunk 1% mannitot, 2% peptont és 1% élesztőkivonatot tartalmazó vegetatív tápközeg (100 ml, 500 ml-es Erlenmeyerlombikban) beoltására. Sterilezés előtt a pH-t 7,2re állítjuk be. A tápközeget forgó rázógépen (250 ford/min) 32 °C-on 72 óráig inkubáljuk és a tenyészet 5 ml-ét a fenti vegetatív tápközeggel azonos összetételű második vegetatív tápközegbe (100 ml) visszük át. Az első vegetatív tápközeghez használt körülmények között tenyésztjük. A kapott tenyé7 szét 5 ml-ével indítjuk meg a fermentációt, 2,5% mannit, 0,5% glükóz, 1% szójaliszt, 0,5% pepton, 1 % húskivonat, 0,3% CaCO3 és 0,2% NaCl összetételű 100 ml tenyészlevet tartalmazó 500 ml-es Erlenmeyer-lombikban. A fermentálást 28 ’C-on hajtjuk végre forgó rázógépen (250 ford/min). Az antibiotikum termelést papírkorong-agar diffúziós próbával követjük, kísérleti organizmusként Bacillus subtilis M45-öt (rec mutáns) használva. A tenyészlé antibiotikus aktivitása a fermentáció előrehaladásával fokozatosan növekszik és 6 ~ 7 nap után mintegy 300 mcg/ml-t ér el.
2. példa
Az 1. példában leírt fermentációkból származó fermentlevet (18 liter) centrifugával (Kokusan N° 4A) micéliumlepényre és felülúszó folyadékra választjuk szét. A szűrt levet 40 °C alatti hőmérsékleten eredeti térogatának 1/10-ére koncentráljuk és a koncentrált oldatot cellofán csőben (Union Carbide) csapvizzel szemben dializáljuk. A csőben visszatartott oldatot körülbelül 1,5 literre koncentráljuk és ezt az oldhatatlan anyagok eltávolítása céljából centrifugáljuk (8000xg). A tiszta felülúszót ammónium-szulfáttal telítjük és 5 ’C-on 5 óráig állni hagyjuk. A képződött csapadékot centrifugálással összegyűjtjük, vízben (300 ml) oldjuk és csapvízzel szemben dializálva sómentesítjük. A dializált oldat (700 ml) BBM-1644-ből álló 22 g nyers szilárd anyagot tartalmaz, amint ez az oldat egy részének liofilezése útján megállapítható. Az oldat többi részét a bomlás elkerülése végett koncentrálás nélkül tisztítjuk. Az antibiotikum-oldatot DEAE-cellulóz (Cl, 400 ml) oszlopon bocsátjuk át és az oszlopot vízzel (1 liter) mossuk, majd 0,3M NaCl-ot tartalmazó 1/15M foszfát-pufferrel (pH 7,0) kifejlesztjük. Az aktív frakciókat egyesítjük (300 ml), 18 óráig csapvízzel szemben dializáljuk és 1/15M foszfát-pufferrel (pH 7,5) kiegyensúlyozott DEAEcellulóz oszlopon (400 ml) kromatografáljuk. Az oszlopot növekvő mennyiségű NaCl-ot (0 ~ 0,2M) tartalmazó fenti pufferrel fejlesztjük ki. Az aktív eluátumot dialízissel sómentesítjük és DEAESephadex A-50 oszlopra (17 ml) visszük fel. Az oszlopot gradiens koncentrációjú NaCl-ot (0 ~ 0,3M) tartalmazó 1/15M foszfát-pufferrel fejlesztjük ki. A B. subtilis M45 próbában aktívnak talált frakciókat egyesítjük és folyóvízzel szemben 18 óráig dializáljuk. A sómentesített oldatot DEAE-Sephadex A-50 oszlopon (18 ml) kromatografáljuk, eluensként 1/15M foszfát-puffer (pH 7,0) - NaCl (0 ~ 0,3M) rendszert használva. A megfelelő frakciókat összegyűjtjük, 10 ml-re koncentráljuk és sómentesítés céljából Sephadex G-50 oszlopra visszük fel. Az oszlopot ionmentesített vízzel euláljuk és az aktív frakciókat liofilezve 120 mg fehér port kapunk. Az igy kapott BBM-1644 mintát poliakrilamidgél-elektroforézissel homogénnek találtuk. A termék IR- és UVspeklrumát az 1. és 2. ábra mutatja.

Claims (3)

  1. Szabadalmi igénypontok
    1. Eljárás a BBM-1644 antibiotikum előállítására, melynek jellemzői:
    (a) hatásosan gátolja Gram-pozitív és saválló baktériumok növekedését;
    (b) hatásosan gátolja egérnél a P388 leukémia fejlődését;
    (c) lizogén baktériumokban profág-indukcióra képes;
    (d) oldódik vízben, de gyakorlatilag oldhatatlan metanolban, etanolban, acetonban, etil-acetátban és «-hexánban;
    (e) az 1. ábrán látható infravörös abszorpciós spektrumot mutatja (KBr-pasztillában);
    (í) vízben, 0,01n sósavoldatban és 0,01n nátriumhidroxid-oldatban a 2. ábrán látható ultraibolya abszorpciós spektrumot mutatja;
    (g) fajlagos optikai forgatóképessége αθ = -75,6° 0,25 %-os vizes oldatban;
    (h) nincs éles olvadáspontja, de 240 ’C felett fokozatosan elbomlik;
    (i) 4500 V-on 8,6 pH-jú 0,05 M barbitál-pufferrel 1 óráig folytatott papir-elektroforézis folyamán körülbelül 8,7 cm-t mozdul ez az anód felé;
    (j) elemi analízise: 46,60% szén; 6,45% hidrogén; 13,34% nitrogén; 0,20% kén és - a különbségből 33,41% oxigén;
    (k) nagy molekulasúlyú peptid, melynek molekulasúlya körülbelül 2200;
    (l) elszínteleníti a kálium-permanganát-oldatot és pozitív Folin-Lowry, xantoprotein, biuret és ninhidrin reakciót és negatív antron- és Sakaguchireakciót ad; és (m) hidrolízis után a következő relatív aminosavösszetételt mutatja, ha a leucin-tartalmat önkényesen 1,0-nak vesszük: alanin - 8,8; aszparaginsav 6,0; cisztin j- 1,0; glutaminsav - 5,7; glicin - 8,7; izoleucin - 2,3; leucin - 1,0; fenil-alanin - 1,4; prolin - 4,1; szerin - 1,6; treonin - 7,2; tirozin - 0,6 és valin - 11,1; azzal jellemezve, hogy az Actinomadura sp. ATCC39 144 törzsét vagy annak BBM-1644 termelő mutánsát vagy variánsát asszimilálható szén- és nitrogénforrást tartalmazó vizes tápközegben szubmerz aerob körülmények között tenyésztjük és a BBM-1644-et kívánt esetben kivonjuk a fermentléből.
  2. 2. Eljárás baktériumellenes hatású gyógyszerkészítmények előállítására azzal jellemezve, hogy az 1. igénypont szerinti előállított BBM-1644-et gyógyászatilag elfogadható hordozó- vagy hígítóanyagokkal keverve parenterális dózisformává dolgozzuk fel.
  3. 3. Eljárás daganatgátló hatású gyógyszerkészítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy az 1. igénypont szerint előállított ΒΒΜ-1644-et gyógyászatilag elfogadható hordozó- vagy hígítóanyagokkal keverve parenterális dózisformává dolgozzuk fel.
HU832616A 1982-07-26 1983-07-25 Process for preparing antibiotic bbm-1644 HU192165B (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US40146882A 1982-07-26 1982-07-26

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUT37167A HUT37167A (en) 1985-11-28
HU192165B true HU192165B (en) 1987-05-28

Family

ID=23587892

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU832616A HU192165B (en) 1982-07-26 1983-07-25 Process for preparing antibiotic bbm-1644

Country Status (29)

Country Link
JP (1) JPS5948084A (hu)
KR (1) KR840005484A (hu)
AU (1) AU567105B2 (hu)
BE (1) BE897381A (hu)
CA (1) CA1215337A (hu)
CH (1) CH657778A5 (hu)
CS (1) CS251077B2 (hu)
DD (1) DD210075A5 (hu)
DE (1) DE3326917A1 (hu)
DK (1) DK339683A (hu)
ES (1) ES524405A0 (hu)
FI (1) FI832676A (hu)
FR (1) FR2530663A1 (hu)
GB (1) GB2124234B (hu)
GR (1) GR78648B (hu)
HU (1) HU192165B (hu)
IE (1) IE55800B1 (hu)
IL (1) IL69313A0 (hu)
IT (1) IT1163847B (hu)
LU (1) LU84930A1 (hu)
MY (1) MY8800125A (hu)
NL (1) NL8302610A (hu)
NO (1) NO832689L (hu)
NZ (1) NZ204965A (hu)
OA (1) OA07503A (hu)
PT (1) PT77091B (hu)
SE (1) SE8304132L (hu)
YU (1) YU158583A (hu)
ZA (1) ZA835337B (hu)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NZ208013A (en) * 1983-05-16 1987-07-31 Bristol Myers Co Antitumour antibiotic bbm-1675 and production by cultivating actinomadura verrucosospora
JPS606194A (ja) * 1983-06-23 1985-01-12 Meiji Seika Kaisha Ltd 新規抗生物質ｓｆ−２２８８及びその製造法
GB8425685D0 (en) * 1984-10-11 1984-11-14 Lepetit Spa Antibiotic a 40926 complex
US5304373A (en) * 1991-10-22 1994-04-19 Bristol-Myers Squibb Co. Antitumor antibiotic

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4148882A (en) * 1977-06-24 1979-04-10 Pfizer Inc. Polycyclic ether antibiotics produced by new species of actinomycete
JPS56113791A (en) * 1980-02-15 1981-09-07 Kaken Pharmaceut Co Ltd Novel antibiotic and its preparation
CA1198386A (en) * 1981-10-22 1985-12-24 Donald B. Borders ANTIBACTERIAL AGENTS LL-C23024.beta. AND IOTA AND MICROORGANISM ACTINOMADURA YUMAENSE NRRL 12515
US4578271A (en) * 1982-05-24 1986-03-25 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Biologically active WS 6049 substances, a process for the production thereof and their pharmaceutical compositions
NZ208013A (en) * 1983-05-16 1987-07-31 Bristol Myers Co Antitumour antibiotic bbm-1675 and production by cultivating actinomadura verrucosospora

Also Published As

Publication number Publication date
IL69313A0 (en) 1983-11-30
ES8502161A1 (es) 1984-12-16
IE831740L (en) 1984-01-26
CH657778A5 (de) 1986-09-30
IE55800B1 (en) 1991-01-16
DK339683A (da) 1984-01-27
IT8322219A0 (it) 1983-07-25
GB2124234B (en) 1986-04-03
FR2530663A1 (fr) 1984-01-27
FI832676A0 (fi) 1983-07-22
FI832676A (fi) 1984-01-27
NO832689L (no) 1984-01-27
SE8304132L (sv) 1984-01-27
MY8800125A (en) 1988-12-31
KR840005484A (ko) 1984-11-14
YU158583A (en) 1985-12-31
PT77091A (en) 1983-08-01
BE897381A (fr) 1984-01-26
OA07503A (en) 1985-03-31
JPH0526799B2 (hu) 1993-04-19
CA1215337A (en) 1986-12-16
HUT37167A (en) 1985-11-28
NL8302610A (nl) 1984-02-16
NZ204965A (en) 1986-09-10
DK339683D0 (da) 1983-07-25
LU84930A1 (fr) 1984-03-22
SE8304132D0 (sv) 1983-07-25
ES524405A0 (es) 1984-12-16
GR78648B (hu) 1984-09-27
GB2124234A (en) 1984-02-15
IT1163847B (it) 1987-04-08
GB8320026D0 (en) 1983-08-24
DD210075A5 (de) 1984-05-30
ZA835337B (en) 1984-03-28
PT77091B (en) 1986-06-26
JPS5948084A (ja) 1984-03-19
DE3326917A1 (de) 1984-02-02
AU1720083A (en) 1984-02-02
AU567105B2 (en) 1987-11-12
CS251077B2 (en) 1987-06-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HANADA et al. Maduropeptin, a complex of new macromolecular antitumor antibiotics
CA1171008A (en) Antibiotic a-4696 factors b.sub.1, b.sub.2, b.sub.3, c in1a xx, c.sub.3, and e in1 xx
CA1317900C (en) Antibiotic a 40926 complex and its pure factors pa, pb, a, b, and b
US4328316A (en) Biologically pure culture of actinoplanes capable of producing antibiotic A/16686
US4800157A (en) Process for producing the A-21978C antibiotics
US4495179A (en) A51568 Antibiotic and process for producing thereof
DK153501B (da) Fremgangsmaade til fremstilling af et antitumor antibiotisk kompleks
HU192165B (en) Process for preparing antibiotic bbm-1644
US4546084A (en) Biologically pure culture of Actinomadura Sp.
US4147774A (en) Antibiotic sporamycin
US4764602A (en) Antibiotics, and their production
US4804534A (en) Antibiotic A 42867 and the addition salts thereof
US4529542A (en) Novel proteinous substance KUD-PC and its production
KR860001497B1 (ko) 항생제 a51568 인자 a 및 b의 제조방법
US5681813A (en) Thiodepsipeptide isolated from a marine actinomycete
US4463092A (en) Process for production antibiotic A53868
US4677071A (en) Antibiotic agents from S. coeruleorubidus, rubidus
US4482488A (en) Antibiotic A53868 and process for production thereof
US4499075A (en) Antibiotic agents from S. coeruleorubidus, rubidus
US5165931A (en) Peptifluorin and neopeptifluorin
GB2045231A (en) Antibiotic A/16686 and its preparation from actinoplanes
US4816559A (en) Biologically active peptides TAN-866
Ohba et al. SF-1771, a new antibiotic related to bleomycin
SU1241997A3 (ru) Способ получени антибиотика и штамм @ @ -продуцент антибиотика ввм-1644
EP0261936A2 (en) Process for producing glycopeptide antibiotic