HU189709B

HU189709B - Process for preparing ester derivatives of 9-/2-hydroxy-ethoxy-methyl/-guanine

Info

Publication number: HU189709B
Application number: HU832337A
Authority: HU
Inventors: Clercq Erik D De; Der Haegen Hubert J Van; Roger H Busson
Original assignee: The Wellcome Foundation Ltd,Gb
Priority date: 1982-06-29
Filing date: 1983-06-28
Publication date: 1986-07-28
Also published as: GB2122618B; IL69095A; GB2122618A; FI832355L; MY102248A; DK159444C; US4548819A; DK159444B; NL8202626A; ATE45580T1; FI832355A0; IL69095A0; FI76087C; DE3380410D1; JPS5910587A; GB8317504D0; DK297483A; EP0099493B1; FI76087B; DK297483D0

Description

A találmány tárgya eljárás a 9-(2-hldroxl-etoxi-metil)-guanin új észter-származékainak előállítására. Az új vegyületek értékes vírusölő hatással rendelkeznek.

A 9-(2-hidroxi-etoxl-metil)-guanln — másnéven acyclovir — vírusölő hatású, különösen a herpes vírussal szemben (H. J. Schaeffer et al., Natúré 272 (1978), 583—585), de bizonyos felhasználásoknál hátránya, hogy vízben való oldhatósága korlátozott (1,23 mg/ml 25°C-on). Ez a viszonylagosan alacsony oldhatóság korlátozza alkalmazását olyan vizes gyógyszer-készítményekben, ahol a hatóanyag bizonyos mértékű oldhatósága kívánatos lenne.

Felismertük, hogy az acyclovir bizonyos észterszármazékai meglepően nagyobb vízoldhatósággal rendelkeznek, ami lehetővé teszi e hatóanyag szélesebbkörű felhasználását vizes gyógyszerkészítményekben. E nagyobb oldhatóság különösen jellemző a találmány szerinti eljárással előállított vegyületek bizonyos sóira. így például a későbbiekben ismertetésre kerülő 1. és 2. példák szerint előállított vegyületek vízoldhatósága a 6%-ot is eléri (7 pH-jú foszfát pufferben meghatározva). A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek így különösen alkalmasak vizes gyógyszerkészítmények, mint például szemcseppek és intramuszkuláris injekciókészítményekben való felhasználásra.

A relatíve nagy vízoldhatóságon túlmenően a találmány szerinti eljárással előállított vegyületek in vitro vírusölő hatása lényegében azonos az acyclovir hatásával, így kimondható, hogy a nagyobb vízoldhatóság nem befolyásolja a vírusölő képességet. Sőt, azt találtuk, hogy bizonyos klinikai alkalmazásoknál, például stroma keratitis kezelésénél a találmány szerinti eljárással előállított észterek hatása felülmúlta az acyclovir hatását.

A találmány szerinti eljárásnál az (I) általános képletű vegyületek — a képletben X jelentése oxigénatom,

R* jelentése hidroxil-csoport,

R³ jelentése amino-(l-4 szénatoinos alkil)-karbonilcsoport - és fiziológiailag elfogadható sóik előállításánál egy (II) általános képletű vegyületet — a képletben X jelentése a fenti,

R¹ jelentése hidroxilcsoport,

R⁴ jelentése adott esetben védett aminocsoport a megfelelő — adott esetben védett — aminosawal vagy funkcionális származékával reagáltatunk, és a kapott vegyületet egy vagy több következő átalakításnak vetjük alá a tetszés szerinti sorrendben:

i) eltávolítjuk a védőcsoportokat, ii) a kapott (I) általános képletű vegyületet átalakítjuk fiziológiailag elfogadható sójává.

A találmány szerinti eljárással előállított (I) általános képletű vegyületek azok a vegyületek, amelyekben R¹ jelentése hidroxilcsoport, és X jelentése oxigénatom, azaz az acyclovir aminosav-észterei és azok gyógyászatilag elfogadható sói. R³ jelentései közül előnyösek azok az amlno-alkfl-karbonilcsoportok, amelyek alifás aminosavak ból, például glicínből vagy a- vagy 0-alaninből származnak.

A találmány szerinti eljárással előállított (I) általános képletű vegyületek gyógyászatilag elfogadható sói előnyösen savaddiciós sók, például a sósavval, kénsavval, foszforsavval, maleinsawal, fumársavval, citromsawal, bórkősawal vagy ecetsawal elóállított sók.

A találmány szerinti eljárás az észterezési reakciót ismert módon végezzük, például oldószerben, mint piridín vagy dimetilformamid stb., savmegkötöszer — mint például trietil-amin vagy N,N-diciklohexII-karbodiimid — és adott esetben savas katalizátor — mint például - p-toluol-szulfonsav - jelenlétében. A reakció alatt képződő vizet kívánt esetben ismert módon - mint például desztillációval vagy vízmegkötő anyaggal — távolítjuk el. Végül a képződött észtert mint reakcióterméket szintén ismert módszer szerint nyerjük ki.

Az aminosav helyett, funkciójában vele azonos származékot, például savhalogenidet (például savldoridot) vagy savanhidridet is alkalmazhatunk.

A káros mellékreakciók elkerülése érdekében általában előnyös, ha az alkalmazott savszármazék aminocsportját védjük, előnyösen acilcsoport tál, például

1- 4 szénatoinos allanollcsoporttal, mint például ace tilcsoporttal, aril-oxi-csoporttal, mint például benzil-oxi-csoport vagy azidocsoporttal.

A találmány szerinti eljárásnál alkalmazott (II) általános képletű intermedierek előállítását ismert módszerek szerint végezzük, például az 1 523 865 számú nagy-britanniai szabadalmi leírásban közzétettek szerint. Ezek az eljárások szubsztituált purinokból előállított intermedierekre vonatkoznak. Az alkalmazott purinok vagy kereskedelemben kaphatók, vagy olyan ismert módszerekkel állíthatók elő, amelyeket a fentiekben hivatkozott könyvben ismertetnek.

Az i), ii) reakciólépéseket ismert módon vihetjük végbe. így például az i) lépés szerinti védőcsoport-eltávolítást hidrolízissel, szolvolízissel vagy hidrogenolízissel végezhetjük. Ha például a védőcsoport acilcsoport, a hidrogenolizis, ha azidocsoport, a tótalitikus hidrogénezés — például palládium katalizátorral végezve — az előnyös módszer. A purin molekula

2- es és 6-os helyzetében lévő csoportok előnyös védőcsoportjai acilcsoport — mint például 14 szénatomos alkilcsoport, például acetilcsoport, arilcsoport, például benzoílcsoport, aril-metil-csoport, például benzilcsoport vagy tri-(14 szénatomos alkil)· -szilil-csoport, például trimetil-szilil-csoport. Az aril-metil védőcsoportok eltávolítását végezhetjük hidrogenolízissel, például Raney-nikkel vagy palládium katalizátor jelenlétében végzett hidrogénezéssel, vagy nátrium- és folyékony ammónia jelenlétében. Az acil védőcsoportok eltávolítását hidrolízissel, például aminok, mint például metil-amin vagy trietil-amin jelenlétében, előnyösen vizes közegben végezzük. A trialkil-szilil védőcsoportok eltávolítását például szolvolízissel, például vizes vagy alkoholos ammóniával, vagy alkoholizissel végezzük.

Az (I) általános képletű vegyületek gyógyászatilag elfogadható sókká való átalakítását ismert módon végezhetjük, például a megfelelő sawal kezelve, savaddiciós sókat állíthatunk elő.

A találmány szerint előállított (I) általános képletű vegyületek és gyógyászatilag elfogadható sóik (a továbbiakban aktív vegyületek) vírusfertőzések kezelésére és megelőzésére alkalmazhatók emlősöknél, mint például embereknél. A vegyületek különösen alkalmasak különböző DNA vírusok, mint például herpes simplex, varicella vagy zoster, cytomegaovírus, valamint heptatitis B vagy Epstein-Barr vírus okozta megbetegedések kezelésére vagy papilloma

189 709 vagy wart vírusok okozta fertőzések megelőzésére. A humán gyógyászatban való alkalmazáson kívül a találmány szerinti eljárással előállított (I) általános képletű vegyületek alkalmazhatók emlős állatok vírusfertőzéseinek kezelésére vagy megelőzésére, így például az aktív vegyületek különösen allalmasak lovaknál rhinopneumonitis lezelésére. nyösen 0,2 és 15 súly%, még előnyösebben 0,5 és 10 súly% közötti érték. A kenőcs készítményeknél a hatóanyagot parafinnal vagy vízzel keverendő kenőccsel, a krémeknél olaj-a-vízben típusú krémmel keverjük el. Kívánt esetben a krémek vizes Lizisa tartalmazhat például 30 súly% mennyiségben többértékű alkoholokat, például propilén-glikolt, bután-l,3-diolt, mannitolt, szorbitolt, glicerolt, polietilénglikolt vagy ezek keverékét. A helyi alkalmazású készítmények tartalmazhatnak még a hatóanyag bőrön keresztüli felszívódását, abszorpcióját elősegítő segédanyagokat, például dimetil-szuífoxidot vagy hasonlókat is.

Szemfertőzések kezelésére alkalmas készítmények a szemcseppek is. Ezeknél a hatóanyagot alkalmas hordozóanyagban, különösen vizes oldószerekben oldjuk vagy szuszpendáljuk. A készítmények hatóanyag-tartalma 0,5 és 20 súly% közötti, előnyösen 0,5 és 10 súly% közötti, különösen 1,5 súly% körüli érték.

A szájfertőzések kezelésére alkalmas készítményeket, mint például a tablettákat, általában ízjavító anyagokkal - például szacharóz, akácmézga, tragantmézga —, a pasztillákat zselatinnal, gliverinnel, akácmézgával vagy szacharózzal, a szájöblítőszereket alkalmas folyékony hordozóanyaggal elkevert hatóanyaggal készítjük.

A rektális készítményeket kúpok formájában készítjük, a hatóanyagot alkalmas hordozóanyaggal, például kakaóvajjal vagy szaliciláttal elkeverve.

Az ónban alkalmazható szilárd készítményeknél a hordozóanyag 20-500 mikron szemcsefinomságú por. Ezeket az orrba történő felszippantással használjuk. Folyékony készítményeknél a hordozóanyag vizes vagy olajos folyadék, és a készítményt spray-k vagy orrcseppek formájában használjuk.

Hüvelyi alkalmazásra a készítményeket pesszáriumok, tamponok, krémek, gélek, paszták, habok vagy spray-k formájában állíthatjuk elő, az erre a célra alkalmas inért hordozóanyagokkal.

A parenterális készítményeket előállíthatjuk vizes vagy nem-vizes steril injekciózható oldatok formájában, amelyek még antioxidánsokat, puffereket, bakteriosztatikumokat és különböző oldott anyagokat tartalmazhatnak az izotóniás oldatok előállítása érdekében, vizes vagy nem-vizes szuszpenziók formájában, amelyek még szuszpendáló- és sűrítőanyagokat tartalmazhatnak. A készítmények egységnyi vagy ennél nagyobb dózisokban szerelhetők ki, ampulla, fiola vagy liofilizált formában. Ez utóbbiakat közvetlenül felhasználás előtt alkalmas steril folyadékban, például vízben vesszük fel. Az azonnal felhasználható injekció készítményeket steril porokból, granulátumokból, tablettákból is előállíthatjuk. Az intarmuszkuláris készítmények különösen előnyösek.

A készítmények előnyös kiszerelése, ha azok egy adagban tartalmazzák a szükséges napi adagot vagy annak megfelelő törtrészét.

A találmány szerinti készítmények előállításánál a fentiekben említett hordozó- és segédanyagokon kívül más szokásosan alkalmazott ismert anyagokat is használhatunk.

A találmány szerinti készítmények közé tartoznak továbbá még az állatgyógyászati készítmények, amelyek legalább egy találmány szerinti hatóanyagot tartalmaznak az állatgyógyászati készítményeknél szokásos, a hatóanyaggal kompatibilis, szilárd, folyékony vagy gázalakú hordozóanyaggal elkeverve. A készítményeket orális, parenterális vagy más kívánt, adagolásra alkalmas formában állíthatjuk elő.

Az orális készítmények lehetnek tabletták, granulátumok, oldatok, paszták, kapszulák vagy tápanyag-kiegészítők. A granulátumokat ismert módon, például nedves granulálással, elősajtolással készíthetjük. Adagolásul oldatok vagy szuszpenziók formájában történhet. A készítmények tartalmazhatnak még előnyösen további segédanyagokat, például diszpergálószereket is. A készítmények hatóanyag-tartalma előnyösen 15-85 súly%.

A következő példákban a találmányt ismertetjük. A példákban alkalmazott XAD-2 jelölés polisztirolgyöngy abszorbenst jelent. Az NMR spektrumoknál a rövidítések a következőket jelentik: a = szingulatt, d = dublett, t = triplett, q = kvadruplett, m = multiplett, br s = széles jel.

1. példa

9-(2-Glicil-oxi-etoxi-metil)-guanin-hidroklorid előállítása /(I) általános képletű vegyület, R^s jelentése -CO€H₂NH₂ . HCI)

a) 0,84 ml (8,4 mmól) azido-acetil-kloridot 5 ml vízmentes dimetil-formamidban oldunk, és keverés közben cseppenként 1,25 g (5,55 mmól) 9-(2-hidroxi-etoxi-metil)-guanin 0,78 ml (5,55 mmól) trietil-aminnal és 40 ml vízmentes dimetil-formamiddal készített, jéggé hűtött szuszpenziójához adagoljuk. A keveréket 45 percig 0°C-on erőteljesen keveijük, majd hozzáadunk 0,11 ml (1,1 mmól) azido-acetil-kloridot 1 ml dimetil-formatnidban oldva és a keverést további 15 percen át folytatjuk. Ezután a reakciót 15 ml 7%-os nátrium-hidrogén-karbonát oldat hozzáadásával megállítjuk, majd a keveréket vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot 20 ml metilén-klorid : dietil-éter : etanol 5:5:1 térfogatarányú elegy ével elpépesítjük, a szilárd részt leszűrjük, hideg vízzel alaposan átmossuk, majd aktív szenes kezelés után meleg vízből átkristályosítjuk. Ily módon 1,02 g (62%) 9-(2-azido-acetoxi-metil)-guanint nyerünk, olvadáspontja 175-177°C (bomlik).

MS m/e 308 (M⁺), 151 (bázis ♦ H),

IR(KBr)2110(N₃), 1745 (COOR) cm’l,

UV (foszfát puffer, pH = 7) 253 nm (e 8,42 xl0^T),270(sh),

Vékonyréteg kromatográfia:

R_f 0,27 (CHCl₃-MeOH, 8 : 2), R_f 0,60 (EtOH-HOAc, 8:2).

b) Az a) lépés szerint előállított termék 1,23 g-ját (4 mmól) 1,0 g 10%-os szénhordozós palládium katalizátoron 4 ml n HCI és 250 ml vizes etanol (1:1 térfogatarányú elegy) jelenlétében 90 percig 2,758 bar hidrogénnyomáson hidrogénezzük. Ezután a katalizátort leszűrjük, vízzel alaposan átmossuk, majd a szürletet a mosóvízzel egyesítve vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot víz-etanol elegyből kétszer átkristályosítjuk, a kapott termék 0,83 g

189 709 (65%) 9-(2-glicil-oxi-etoxi-metil)-guanin-hidroklorid, olvadáspontja 148—150°C.

IR (KBr) 3200 - 2350 (NH₃+), 1750 (COOR) cm'¹,

UV (0,1 n HCI) λ_ηιαν 253 nm (e 8,53 x 10*), 275 (sh), ^mf*

NMR (60 MHz, DMSO-d₆/D₂O) δ 3,85 (s, 2H, N-CH₂-C0), 4,25 (m, 4H, - CH₂CH₂ ), 5,5 (s, 2H,

O-CHj-N), 8,3 (s, 1H,8H),

TLC R_f 0,29 (EtOH-HOAc, 8 :2),

Elemanalízis Ci₀Hi4N_óO₄. HCI összegképlet alapján:

számított:

C = 37,69%, H = 4,74%, N = 2687%, talált:

C = 37,84%, H » 4,64%, N = 26,25%.

9-(2-0-a-Alanil oxi-etoxí-metil)-guanin-hidroklorid előállítása /(I) általános képletű vegyület, R ⁴ jelentése -CHCH<CH₃)NH₂ .HCI)

a) 0,99 g (4 mmól) 9-(2-hídroxi-etoxi-metiI)-guanin1,026 g (4,3 mmól) N-benzil-oxi-karbonil-a-alanin (Aldrich), 0,04 g vízmentes p-toluol-szulfonsav és 1,755 g (5,6 mmól) N.N -diciklohexil-karbo-diimid keverékét 80 ml vízmentes piridinben 1 órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd hozzáadunk 1 ml ecetsavat és a keverést további egy órán át folytatjuk. Ezután a keveréket leszűrjük, a csapadékot meleg metanollal alaposan átmossuk, a szűrletet a mosófolyadékkal egyesítjük, szárazra pároljuk és a maradékot 50 g szilikagél töltetű oszlopon kromatografáljuk, az eluálást kloroform: metanol 9 : 1 arányú elegyével végezve. Metanolos átkristályositás után 1,15 g (67%) védett α-alanin-észtert nyerünk /(I) általános képletű vegyület, R³ jelentése -COCH-(CH₃)NHCOOCH₂C«H_S csoport), olvadáspontja 145-147°C.

UV (MeOH) V_v 255 mm (e 9,87 x 10*), 270 (sh),

Vékonyréteg kromatográfia:

Rj 0,40 (CHC1₃ -MeOH, 8 :2) bj 0,662 g (1,54 mmól) a) pont szerint előállított védett α-alanin-észtert 3,1 ml 0,5 n sósavval és 200 ml víz-metanol eleggyel (1:1 térfogatarány) elkeverünk és 2 órán át 2,758 bar hidrogénnyomáson 03 g szénhordozós 10%-os palládium-katalizátor jelenlétében hidrogénezünk. Ezután a katalizátort leszűrjük és vízzel átmossuk. A szűrletet a mosóvízzel egyesítjük és vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot víz-metanol elegyből átkristályosítjuk, ily módon 0,354 g (71%) 9-(2-0-a-alanin-oxi-etoxi-metil)-guanin-hidrokloridot nyerünk, olvadáspontja 153-155°C.

UV (0,1 n HCI) X_max 254 nm (e 1,10 x 10⁴), 273 (sh),

NMR (100 MHz, DMSO-d„) 1,36, (d, 3H, CH₃, J = 8 Hz), 3,72 (m, 2H, COOCH₂-CH₂-O), 4,04 (q, 1H, CH, J = 8 Hz), 4,26 (m, 2H, COOCH₂), 53 (s, 2H 0-CHj-N), 6,74 (s, 2H, 2-NH₂), 7,84 (s, 1H, 8-H), 8,56 (széles jel, 3H, -NH³),

10,9 (brs, IH, 1-NH),

Vékonyréteg kromatográfia:

R_f 0,23 (EtOH-HOAc, 8 : 2),.

Elemanalizis a CiiHigO₄N₆ . HCI összegképlet alapján;

számított:

C> 39,69%, H = 5,15%, N = 25,36%, talált:

C = 39,52%, H = 5,06%, N = 25,18%.

3. példa

9-(2-O-0-Alanil-oxi-etoxi-meül)-guanin-hidroklorid előállítása /(Γ) általános képletű vegyület, R³ = -COCH₂CH₂-NH₂-. HC. csoport)

a) A 2a) példa szerinti eljárást követjük, csak kiindulási anyagként 0,99 g (4 mmól) 9^2-hidroxi-etoxi-metil)-guanint és 1,026 g (4,3 mmól) N-benzil-oxi-karbonil-0-alanint (Aldrich) alkalmazunk. A kajg pott terméket metanolból átkristályosítva 1,24 g (72%) védett 0-alanin-észtert nyerünk, olvadáspontja 147-148°C.

UV 254 nm (e 9,91 x 10³) MeOH) 270 (sh), NMR W MHz, piridin-d«) δ 2,65 (t, 2H -CH₂-COO,

J = 6 Hz); 3,65 (m, 4H, N-CH₂-CH₂ és COOCH₂20 <Η₂Ό), 4,20 (m, 2H, COOCH_r), 5,20 (s, 2H,

O-CH₂-N), 5,50 (s, 2H, PhCH₂-O), 7,3 (m, 5H, fenil), 8,1 (s, IH, 8H),

TLC Rr 0,41 (CHCl₃-MeOH, 8,2).

c) 0,99 g (2,3 mmól) a) lépés szerint előállított védett β-alanin-észtert a 2 b) lépésnél leírtak szerint ekvivalens mennyiségű sósav jelenlétében hidrogénezünk. A tennék kinyerését a 2 b) eljárás szerint végezve, 0,59 g (77%) 9-(2-O-0-alanil-oxi-etoxi-metil)-guanin-hidrokloridot nyerünk, olvadáspontja 202 204°C.

UV (0,1 n HCI) 2,54 nm (e 1,09 x 10*), ³⁰ 273 (sh),

NMR (100 MHz, DMSO-dJ δ 2,69 (m, 2H, -€H_r-COO), 3,01, (m, 2H, ΝΤΗ,ΐΗ,), 3,71 (m, 2H, C00CH₉-CH₉-0), 4,15 (fn, 2H, COOCHJ. 3,71 (nf, 2H, COOCH₇-CH~-O), 4,15 (m, 2H, ₃₅ COOCH_r), 5,38 (s, 2Hf 0-CTU-N), 6,71 (s, 2H, 2-Nlk),V,84 (s, IH, 8-H), 8,0r(brs, 3H, -NH?). 10,8o(brs, IH, 1-NH), ³

Vékonyréteg kromatográfia:

Rí-0,23 (EtOH-HOAc, 8 :2),

Elemanalizis a Cj jHj^O^N- . HCI Összegképlet alap40 ján:

számított:

C = 39,69%, H = 5,15%, N- 25,36%, .

talált:

C = 39,79%, H = 5,23%, N = 25,21%.

A) példa

Szemcsepp-készítmény előállitása összetétel:

1,00 g 1,2 vagy 3. példa szerinti hatóanyag 1,52 g bórsav gQ 0,0008 g borax ^ou 0,01 g benzalkonium-klorid 100 ml desztillált víz

A megadott mennyiségű anyagokat a vízben feloldjuk, az izotóniás pufferoldat pH-ja 5,7.

Biológiai hatás vizsgálata

a) Vírusölő képesség in vitro

A vizsgálatok során az 1-3. példák szerint előállított vegyületek különböző vírusokkal szemben kifejtett hatását vizsgáltuk, összehasonlító anyagként acyclovirt alkalmaztunk. A vizsgálatok primer nyúl60 vese sejt-tenyészetében végeztük.

189 709

Alkalmazott vírusok: Herpes simplex type 1 (NOS, Mc Intyre és F. törzsek) és Herpes Simplex type 2 (Lyons, G és 196 törzsek). A hat Herpes simplex törzset valamint a sejtkárosodás retardációjának meghatározási módszerét E. de Clercq et al., (J. Infect. Dis., 141,563 (1980) ismertetik.

A vizsgálati eredményeket a minimum gátló koncentráció értékével kifejezve a következő táblázatban foglaljuk össze. A minimum gátló koncentráció (pg/ml) azt az anyagmennyiséget jelenti, amely a vírusok által a sejtkultúrában okozott sejtkároso5 dás értékét az 50%-ára csökkenti. A közölt értékek minden esetben 2-3 párhuzamos vizsgálat átlagát jelentik.

Alkalmazott rövidítések:

HSV-1: herpes simplex vírus, Type 1 HSV-2: herpes simplex vírus, Type 2

Táblázat

Vegyület Minimum gátló koncentráció (μ g/ml) példaszám___________ __________________________

	'HSV-1	HSV-1	HSV-1	HSV-2	HSCV-2	HSV-2
1.	0,10	0.10	0,10	0,04	0,08	0,07
2.	0,40	0 40	0,40	0,07	0,20	0,10
3.	0,20	0,08	030	0,10	0,15	0,10
acyclovir	0,08	0,10	0,09	0,04	0,06	0,06

A táblázat adataiból kitűnik, hogy az 1-3. példák szerinti vegyületek vírusölő képessége lényegében azonos a S>-(2-hidroxi-etoxi-metil)-guanin hatásával- 30

b) Vírusölő képesség in vivő '^?v

Az 1. példa szerinti vegyület in vivő vírusölő hatását az ismert vírusölő bróm-vinil-dezoxi-uridin hatásával hasonlítottuk össze.

A vizsgálatnál alkalmazott szemcseppek 0,5% (s/tf) bróm-vinil-dezoxi-uridint ill. 1% (s/tf) 1. példa 35 szerinti vegyületet tartalmaztak, 1,52 g bórsav,

0.008 g borax és 0,01 g benzalkonium-klorid (+

100 ml desztillált víz) összetételű izotóniás borát puffer oldatban (pH = 5,7). Placeboként a hatóanyag nélküli oldatot alkalmaztuk.

Kísérleti állatként 1,5-2,0 kg súlyú keresztezett 40 California albínó és Dendermonde fehér nyulakat alkalmaztunk.

A vizsgálatoknál NcNeill és Kaufman (Arch. Ophthalmol. 97. 727—729 (1979) eljárása szerint idéztük elő a stroma keratitist. A nyulakat (30 db) ml/kg fentanil-citrát szubkután adagolásával elal- 45 tattuk, majd 0,2 ml 10 ,5 egység/ml koncentrációjú HSV-1 (Mclntyre) vírus-szuszpenziót injekcióztunk mindkét szem szaruhártya-stromájába.

A nyulakat három csoportba osztottuk és egyegy csoportot az 1. példa szerinti vegyületet, a bróm-vjnil-dezoxi-uridint tartalmazó, illetve placebó szem- ^υcseppel kezeltünk. A kezelést egy nappal a vírussal történt fertőzés után kezdtük és 5 egymást követő napon át végeztük oly módon, hogy 1 órás intervallumban naponta 9 alkalommal 1—1 cseppet cseppentettünk mindkét szembe. gg

Kialakult keratitis becslése

A keratitis kifejlődésének mértékét naponta ugyanaz a személy állapította meg, rés-lámpa (slitlamp) alkalmazásával. Fehérfényű megvilágítással vizsgáltuk a szaruhártya stromát és a külső kamrák struktúráját. 1%-os fluoreszcein nátrium és ko- 60 baltkék szűrő alkalmazásával az epithelialis keratitis és a szaruhártya ulceratio mértékét becsültük. Eredmények

A stroma keratitis leküzdésében az 1. példa szerinti vegyületet illetve a bróm-vinil-bezoxi-uridint tartalmazó szemcseppek egyaránt hatásosak voltak, míg a keratitis kialakulásának mértékében az egész vizsgálati periódusban igen jellegzetes különbség mutatkozott a két aktív vegyülettel illetve a placébóval kezelt kísérleti állatoknál. A placebónál kezelt állatoknál már a fertőzést követő első napokban komoly mértékű keratitis alakult ki. Az 1. példa szerinti hatóanyag megakadályozta a stroma károsodását, úgy, hogy a keratitis mértéke közel azonos maradt egyszeri kezelés után. A bróm-vinil-dezoxi-uridin a stroma keratitis fokozatos javulását eredményezte és hatása a 4. naptól kezdve felülmúlta az 1. példa szerinti hatóanyagét.

A HSV-1 stroma keratitist a kísérleteknél iriíis kifejlődése is kísérte, amelynek szintén jelentős javulását eredményezte mindkét vizsgált vegyület. A placebóval illetve az 1. példa szerinti vegyülettel kezelt állatoknál a 2—8 napon volt megállapítható, jelentős különbség, de hasonló különbség mutatkozott a bróm-vinil-dezoxi-uridin., kezelt állatok javára is.

Claims

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

1. Eljárás új (I) általános képletű 9-(2-hidroxi-etoxi-metil)-guanin-észterek - a képletben X jelentése oxigénatom,

R¹ jelentése hidroxilcsoport,

R* jelentése amino-(l-4 szénatomos alkil)-karbonil-csopr'r* és fiziológiailag elfogadható savaddiciós sóik előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely (II) általános képletű vegyületet - a képletben

189 709

X jelentése a fenti,

R’_a jelentése hidroxilcsoport,

R* jelentése adott esetben védett aminocsoport a megfelelő - adott esetben védett - aminosawal, vagy funkcionális származékával, előnyösen klorid vagy anhidrid-származékával reagáltatunk, és a kapott vegyületet tetszés szerinti sorrendben egy vagy több következő átalakításnak vetjük alá:

i) eltávolítjuk a védőcsoportokat ii) a kapott (I) általános képletű vegyületet fiziológialag elfogadható savaddíciós sójává alakítjuk.

(Elsőbbsége: 1983. június 28.)
2. Eljárás új (I) általános képletű 9-2-hidroxi-etoxi-metíl)-guanin-észterek - a képletben X jelentése oxigénatom,

R* jelentése hidroxilcsoport,

R* jelentése amino-(l-4 szénatomos alkil)-karbonil-csoport, és fiziológiailag elfogadható savaddíciós sóik előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely (II) általános képletű vegyületet - a képletben X jelentése a fenti,

R* jelentése hidroxilcsoport,

R⁴ jelentése aminocsoport a megfelelő — adott esetben védett - aminosawal, vagy funkcionális származékával, előnyösen klorid vagy anhidrid-származékával reagáltatunk, és a kapott vegyületet tetszés szerinti sorrendben egy vagy több következő átalakításnak vetjük alá:

1) eltávolítjuk a védőcsoportokat ii) a kapott (I) általános képletű vegyületet fiziológiailag elfogadható savaddiciós sójává alakítjuk.

(Elsőbbsége: 1982, június 29.)
3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy 1-4 szénatomos alkanoil-, aroil-, aril-metil-, aril-oxi-karbonil- vagy tri(l-4 szénatomos alkil)-szüil-csoporttal védett aminosavat használunk.

(Elsőbbsége: 1983. június 28.)
4. Az 2. igénypont szerinti eljárás, azzá jellemezve, hogy 1-4 szénatomos alkanoil-, aroil-, aril-metil-, aril-oxi-karbonil- vagy tri-(l-4 szénatomos alkil)-szilil-csoporttal védett aminosavat liasználunk.

(Elsőbbsége: 1982. június 29.)
5. A 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jelleme zve, hogy a védőcsoportok eltávolítását hidrolízissel vagy hidrogenolízissel végezzük.

(Elsőbbsége: 1983. június 28.)
6. A 4. igénypont szerinti eljárás azzal jelleme zve, hogy a védőcsoportok eltávolítását hidrolízissel vagy hidrogenolízissel végezzük.