DK159444B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af derivater af 9-(2-hydroxyethoxymethyl)guanin - Google Patents

Description

DK 159444 B

Den foreliggende opfindelse angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte estere af 9-(2-hydroxyethoxymethyl)guanin med værdifulde anti-virale egenskaber, og nærmere angivet med den i krav 1 5 anførte almene formel I.

9- (2-Hydroxyethoxymethy1)guanin, også betegnet som acyclovir, har potentiel antiviral virkning, navnlig mod herpes-virus (H.J. Schaeffer et al., "Nature", 272, 583-585 (1978)}. Til visse anvendelser har acyclo-10 vir den ulempe, at den kun har en begrænset opløselighed i vand, nemlig 1,23 mg/ml ved 25°C. Denne forholdsvis lave opløselighed kan begrænse formuleringen af medikamentet til vandige farmaceutiske præparater, hvor nogen opløselighed af medikamentet er nødvendig.

15 Det har nu vist sig, at visse esterderivater af acyclovir, som beskrevet nedenfor, overraskende har en forbedret vandopløselighed sammenlignet med acyclovir, hvilket gør det muligt at anvende derivaterne i større udstrækning end acyclovir ved formuleringen af vandige 2 0 præparater.

Ifølge den foreliggende opfindelse tilvejebringes der forbindelser med den almene formel

OH

N Λ ΛΑ»>

H2N I

ce2och2ch2or1 30 hvori R betegner et aminosyre-acylradikal med højst 9 carbonatomer, eller farmakologisk acceptable salte heraf.

Den forbedrede vandopløselighed af de omhandlede forbindelser er særlig udpræget med hensyn til de anførte 35 salte af forbindelserne med formlen I. Således har f.eks.

DK 159444 B

2 de i nedenstående eksempler 1 til 3 beskrevne forbindelser vist sig at have en vandopløselighed på op til ca.

6%, bestemt i en isotonisk phosphatpuffer ved pH 7. De omhandlede forbindelser er således særlig nyttige til 5 formulering af vandige farmaceutiske præparater, såsom øjendråber og injektionspræparater til intramuskulær administrering.

Foruden deres forholdsvis høje vandopløselighed har de omhandlede forbindelser i det væsentlige den 10 samme antivirale virkning som acyclovir in vitro. Den fordelagtige forøgelse i vandopløselighed af forbindelserne opnås således ikke på bekostning af antiviral styrke. Det har faktisk vist sig, at ved visse kliniske anvendelser, f.eks. behandling af stromal keratitis, kan 15 esterne give en bedre terapeutisk virkning end acyclovir.

Fra beskrivelsen til dansk patentansøgning nr.

866/77 (DK fremlæggelsesskrift nr. 147.824) kendes med de her omhandlede forbindelser beslægtede forbindelser 20 med antiviral virkning, nemlig 9-(2-acyloxyethoxymethyl)-puriner med formlen CH2*0*CH2.CH20.g.R^ i 2 hvori R betegner en hydroxy- eller aminogruppe, og R 30 betegner en ligekædet eller forgrenet alkylgruppe med 2-6 carbonatomer, eller salte deraf. Disse kendte forbindelser er alkanoatestere og indeholder således ikke en aminogruppe i 9-sidekæden, sådan som de her omhandlede aminosyreestere gør det. Denne aminogruppe giver en 35 væsentligt forskel i fysiske egenskaber for disse forbindelser, nemlig polaritet, en egenskab som ikke deles af de nævnte kendte forbindelser. Selv om aminosyrer selv er polære forbindelser, er det imidlertid ikke på 3

DK 159444 B

forhånd muligt at bestemme, om der vil indtræde forbedringer med hensyn til et purinderivats vandopløselighed ved tilføjelse af en aminosyreestergruppe til molekylets 9-sidekæde. De omhandlede forbindelser med formlen 5 I har således den dobbelte fordel, at de har høj antiviral virkning (sammenlignet med grundforbindelsen acyclovir in vitro) sammen med meget forbedret vandopløselighed sammenlignet med acyclovir. På baggrund af den kendte teknik kan det på ingen måde udledes, at indføringen 10 af en polær gruppe, og specielt en polær gruppe indeholdende en basisk del, ville forbedre vandopløseligheden af forbindelsen og samtidig lade den kraftige antivi-rale virkning upåvirket.

Med hensyn til det eller de aminosyre-acylradika- 3 15 ler, der repræsenteres af R , er sådanne radikaler fortrinsvis afledt af en alifatisk aminosyre, f.eks. glycin eller a- eller 3-alanin.

De farmakologisk acceptable salte af forbindelserne med formlen I er fortrinsvis syreadditionssalte, 20 afledt af en passende syre, f.eks. saltsyre, svovlsyre, phosphorsyre, maleinsyre, fumarsyre, citronsyre, vinsyre, mælkesyre eller eddikesyre.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen til fremstilling af derivater med den ovenstående almene formel I eller 25 farmakologisk acceptable salte heraf er ejendommelig ved, at man a) omsætter en forbindelse med formlen R1 30 \ L JL >

CH£)CH2CH2OH

35 hvori R er en eventuelt beskyttet hydroxygruppe, og 2 R er en eventuelt beskyttet aminogruppe, med en eventuelt beskyttet aminosyre eller et funktionelt ækvivalent heraf, 4

DK 159444 B

b) omdanner en forbindelse med formlen t N iT^\

I I / III

N / CH2OCH2CH2OR3 3 hvori R har den ovennævnte betydning; og M betegner 10 en hydroxygruppe, og G betegner et atom eller en gruppe, der kan erstattes af eller omdannes til en aminogruppe; eller G betegner en aminogruppe, og M betegner et atom eller en gruppe, der kan erstattes af eller omdannes til en hydroxygruppe, til en forbindelse med formlen I eller 15 et farmakologisk acceptabelt salt heraf, eller c) omsætter en forbindelse med formlen R1 »A^\ 20 i I / iv

R^ I

Q

2 hvori R og R har de ovennævnte betydninger, og Q be-25 tegner et fraspalteligt atom eller en fraspaltelig gruppe, med en forbindelse med formlen

ach2och2ch2or3 V

hvori R3 har den ovennævnte betydning, og A betegner en fraspaltelig gruppe eller et fraspalteligt atom, 30 hvorefter man eventuelt udfører én eller flere af følgende omdannelser i vilkårlig ønsket rækkefølge: i) fjernelse af eventuelle beskyttelsesgrupper, ii) når det opnåede produkt er en forbindelse med formlen I, omdannelse af den nævnte forbindelse til et 35 farmakologisk acceptabelt salt heraf, og iii) når det opnåede produkt er et farmakologisk acceptabelt salt af en forbindelse med formlen I, omdannelse af det nævnte salt til grundforbindelsen.

5

DK 159444 B

Der kan benyttes forskellige hensigtsmæssige udførelsesformer for fremgangsmåden ifølge opfindelsen som angivet i krav 2-12.

Med hensyn til fremgangsmåde a) kan esterifice-5 ringsreaktionen udføres på konventionel måde, f.eks. i et opløsningsmiddel, såsom pyridin, dimethylformamid osv., i nærværelse af en syreacceptor, såsom triethyl-amin eller NjN'-dicyclohexyl-carbodiimid, og eventuelt i nærværelse af en sur katalysator, såsom p-toluensul-10 fonsyre. Det under reaktionen dannede vand kan, om ønsket, fjernes på konventionel måde, f.eks. ved destillation eller ved tilsætning af et vandbindende stof. Derefter kan den som reaktionsprodukt opnåede ester isole-; res på konventionel måde. Som et alternativ til anven-15 delse af den pågældende aminosyre som sådan kan der anvendes et funktionelt ækvivalent af en sådan syre, f. eks. et syrehalogenid, såsom syrechloridet, eller et sy-reanhydrid.

Til undgåelse af uønskede sidereaktioner kan det 20 være fordelagtigt at anvende et amino-beskyttet derivat, idet der som eksempler på foretrukne amino-beskyttende grupper kan nævnes acyl··, f.eks. C^_^-alkanoyl-, såsom acetyl·; aryloxycarbonyl-, f.eks. benzyloxycarbonyl·; og azidogrupper.

25 Omdannelsen af en forbindelse med formlen III

til en forbindelse med formlen I ved fremgangsmåde b) kan gennemføres på forskellige måder. F.eks. kan G betegne en azidogruppe, der kan reduceres

til en aminogruppe ved katalytisk hydrogenering under 30 anvendelse af en passende katalysator, såsom palladium. Alternativt kan .G betegne et halogenatom eller an alkylthio- eller alkylsulfonylgruppe, der kan omdannes til en aminogruppe ved aminolyse under anvendelse af f.eks. ammoniak. Til fremstilling af for-35 bindeiser med formlen I

kan en forbindelse med formlen III,hvori M er en aminogruppe, omdannes ved f.eks. behandling med salpetersyrling. Alternativt kan en forbindelse med formlen III, hvori M er en mercapto- eller alkylthiogruppe, omdannes

DK 159444B

6 til en forbindelse med formlen I ved oxidation og hydrolyse på konventionel måde. Desuden kan en forbindelse med formlen III, hvori M er halogen, omdannes til en forbindelse med formlen I ved behandling med 2-mercapto-5 ethanol og et alkalimetalalkoxid, f.eks. natriummethoxid.

Disse fremgangsmåder er sammen med andre konventionelle fremgangsmåder beskrevet i Fused Pyrimidines, del II, Purines, redigeret af D.J. Brown (1971), Wiley-Interscience.

10 Ved en yderligere alternativ udførelse kan en forbindelse med formlen III, hvori M er en aminogruppe, omdannes til en forbindelse med formlen I ved behandling med et deaminerende enzym, såsom adenosin-deaminase.

Ved fremgangsmåde c) kan gruppen Q i formlen IV 15 f.eks. betegne et hydrogenatom? en acylgruppe, f.eks. en C.j_£alkanoylgruppe, såsom en acetyl gruppe, eller en aroylgruppe, såsom en benzoylgruppe; eller en tri-C^_^-alkylsilylgruppe, såsom en trimethylsilylgruppe. Gruppen A i formlen V kan f.eks. betegne et halogenatom, 20 (f.eks. chlor) eller en acyloxygruppe, hvori acyIdelen f.eks. kan være en _^-alkanoylgruppe, såsom acetyl, eller en aroylgruppe, såsom benzoyl. Omsætningen kan bekvemt foretages i et kraftigt polært opløsningsmiddel, såsom dimethylformamid eller hexamethylphosphor-25 amid, fordelagtigt i nærværelse af en base, såsom tri-ethylamin eller kaliumcarbonat. Alternativt kan der udføres en termisk kondensation ved opvarmning af forbindelserne med formlerne IV og V i nærværelse af en katalytisk mængde af en stærk syre, f.eks. svovlsyre.

30 De som mellemprodukter til fremstillingen af forbindelserne med formlen I anvendte forbindelser med formlerne II til V kan fremstilles på konventionel måde, f.eks. ved de i britisk patentskrift nr. 1.523.865 beskrevne fremgangsmåder. Disse fremgangsmåder beror 35 på mellemprodukter fremstillet ud fra simpelt substituerede puriner, der kan fås i handelen, eller fremstillet efter fremgangsmåder, som er i sig selv velkendte, og som er beskrevet i litteraturen, såsom den ovennævnte 7

DK 159444 B

lærebog. Således kan f.eks. forbindelser med formlen III generelt fremstilles ved anvendelse af en med fremgangsmåde c) analog fremgangsmåde, dvs. ved at omsætte en passende purin med en forbindelse med formlen V.

5 De eventuelle omdannelser i), ii) og iii) kan udføres på konventionel måde. Således kan f.eks. fjernelse af beskyttelsesgrupper ved omdannelse i) udføres ved hydrolyse, solvolyse «eller hydrogenolyse alt efter omstændighederne. Med hensyn til fjernelse af beskyt-1 0 telsesgrupper på aminosyre-acylradikalerne foretrækkes hydrogenolyse, f.eks. af aryloxycarbonyl-beskyttelses-grupper, og omdannelse af azidogrupper, f.eks. ved katalytisk hydrogenering, eksempelvis under anvendelse af en palladiumkatalysator. Med hensyn til beskyttelse af 15 grupperne i 2- og/eller 6-stillingerne i purinkernen, kan beskyttelsesgrupperne f.eks. vælges blandt acylgrup-per, såsom C^^-alkanoylgrupper, f.eks. acetyl, aroyl-grupper, f.eks. benzoyl; arylmethylgrupper, f.eks. benzyl; eller tri-C^_4-alkylsilyl, f.eks. trimethylsilyl.

20 Arylmethyl-blokeringsgrupper kan f.eks. fjernes ved hydrogenolyse, f.eks. ved hydrogenering i nærværelse af Raney-nikkel eller en palladiumkatalysator eller ved anvendelse af natrium i flydende ammoniak. Acyl-bloke-ringsgrupper kan f.eks. fjernes ved hydrolyse under an-25 vendelse af f.eks. en amin, såsom methylamin eller tri-ethylamin, fordelagtigt i et vandigt medium. Trialkyl-silyl-blokeringsgrupper kan f.eks. fjernes ved solvolyse, f.eks. med alkoholisk eller vandig ammoniak, eller ved alkoholyse.

30 Omdannelsen af en forbindelse med formlen I til et farmakologisk acceptabelt salt kan udføres på konventionel måde, f.eks. ved behandling af forbindelsen med en passende syre til dannelse af et syreadditionssalt. Tilsvarende kan omdannelsen af et salt til grund-35 forbindelsen med formlen I udføres på konventionel måde.

Forbindelser med formlen I og farmakologisk acceptable salte heraf (i det følgende betegnet som "de aktive forbindelser") kan anvendes til behandling 8

DK 159444 B

eller forebyggelse af en viral sygdom hos et dyr, f.eks. et matnralia-individ, såsom et menneske. Forbindelserne er specielt nyttige til behandling eller forebyggelse af sygdomme forårsaget af forskellige DNA-virus, såsom her-5pesinfektioner, f.eks. herpes simplex, varicella eller zoster, cytomegalovirus så vel som sygdomme forårsaget af hepatitis B eller Epstein-Barr-virus. De aktive forbindelser kan også anvendes til behandling eller forebyggelse af papilloma-eller vortevirusinfektioner. Ud over 10 deres anvendelse til human medicinsk terapi kan forbindelserne med formlen I administreres til andre dyr til behandling eller forebyggelse af virale sygdomme, f.eks. til andre mammalia-individer. De aktive forbindelser er f.eks. specielt nyttige til behandling af rhinopneumo-T5 nitis hos heste.

De aktive forbindelser kan administreres ad enhver vej, som passer til den tilstand, der skal behandles, idet passende veje indbefatter den orale, rectale, nasale, topiske (herunder buccale og sublinguale), vagi-20 nåle og parenterale (herunder subcutane, intramuskulære, intravenøse, intradermale, intrathecale og epidurale).

Det er klart, at den foretrukne vej kan variere med f. eks. recipientens tilstand.

For hver af de ovenfor anførte anvendelser og 25 indikationer vil denne nødvendige mængde af en aktiv bestanddel (som defineret ovenfor) afhænge af en række faktorer, herunder alvorligheden af den tilstand, der skal behandles, og recipientens identitet, og den vil i sidste instans afhænge af den tilseende læges eller dyr-30 læges skøn. Almindeligvis vil til hver af disse anvendelser og indikationer en passende effektiv dosis imidlertid ligge i området fra 0,1 til 250 mg pr. kg. legemsvægt af recipienten pr. dag, fortrinsvis i området fra 1 til 100 mg pr. kg. legemsvægt pr. dag og mest fore-35 trukket i området fra 5 til 20 mg pr. kg. legemsvægt pr. dag; en optimal dosis er ca. 10 mg pr. kg. legemsvægt pr. dag. (Med mindre andet er angivet, er alle vægtangivelser for aktiv bestanddel beregnet som grundforbindelsen med formlen I: for salte deraf vil tallene for- 9

DK 159444 B

øges proportionalt). Den ønskede dosis præsenteres fortrinsvis som to, tre, fire eller flere underdoser administreret med passende mellemrum gennem hele dagen.

Disse underdoser kan administreres i enhedsdosisformer, 5 der f.eks. indeholder 10 til 1000 mg, fortrinsvis 20 til 500 mg og mest foretrukket 100 til 400 mg aktiv bestanddel pr. enhedsdosisform.

Selv. om det er muligt at administrere de aktive bestanddele alene, foretrækkes det at præsentere dem som 10 farmaceutiske formuleringer. De på opfindelsen baserede formuleringer, både til veterinær og til human anvendelse, omfatter mindst én aktiv bestanddel, som defineret ovenfor, sammen med én eller flere acceptable bærere herfor og eventuelt andre terapeutiske bestanddele. Bæ-15 reren eller bærerne må være "acceptable" i den forstand, at de er forenelige med de andre bestanddele i formuleringen og ikke skadelige for recipienten heraf.

Formuleringerne indbefatter sådanne, der er egnede til oral, rectal, nasal, topisk (herunder buccal 20 og sublingual), vaginal eller parenteral (herunder sub-cutan, intramuskulær, intravenøs, intradermal, intrathecal og epidural) administrering. Formuleringerne kan bekvemt præsenteres i enhedsdosisform og kan fremstilles ved en vilkårlig af de inden for farmacien velkend-25 te fremgangsmåder. Sådanne fremgangsmåder indbefatter det trin, at man bringer den aktive bestanddel sammen med bæreren, der udgøres af en eller flere hjælpebe-standdele. Almindeligvis fremstilles formuleringerne ved, at man på ensartet og intim måde bringer den aktive 30 bestanddel sammen med flydende bærere eller findelte faste bærere eller begge dele og derefter, om nødvendigt, former produktet.

På den foreliggende opfindelse baserede formuleringer, der er egnede til oral administrering, kan præ-35 senteres som adskilte enheder, såsom kapsler, cachetter eller tabletter, der hver indeholder en forud bestemt mængde af den aktive bestanddel; som et pulver eller granulat; som en opløsning eller en suspension i en vandig 10

DK 159444 B

væske eller en ikke-vandig væske; eller som en flydende olie-i-vand emulsion eller en flydende vand-i-olie-emulsion. Den aktive bestanddel kan også præsenteres som en bolus, latværge eller pasta.

5 En tablet kan fremstilles ved komprimering eller formning, eventuelt med en eller flere hjælpebestanddele. Komprimerede tabletter kan fremstilles ved i en passende maskine at komprimere den aktive bestanddel i en fritfly-dende form, såsom som et pulver eller granulat, eventu-10 elt blandet med et bindemiddel, smøremiddel, indifferent fortyndingsmiddel, konserveringsmiddel, overfladeaktivt middel eller dispergeringsmiddel. Formede tabletter kan fremstilles ved i en passende maskine at forme en blanding af den pulveriserede forbindelse befugtet med et in-15 different flydende fortyndingsmiddel. Tabletterne kan om ønsket overtrækkes eller forsynes med kærv, og de kan formuleres, således at de giver en langsom eller reguleret frigivelse af den aktive bestanddel deri.

Til infektioner i øjet eller andre ydre væv, f.

20 eks. munden og huden, påføres formuleringerne fortrinsvis som en topisk salve eller creme indeholdende den aktive bestanddel i en mængde på f.eks. 0,075 til 20 vægt/ vægt%, fortrinsvis 0,2 til 15 vægt/vægt% og mest fore-trukken 0,5 til 10 vægt/vægt%. Når de formuleres i en 25 salve, kan de aktive bestanddele anvendes sammen med enten et paraffinisk eller et med vand blandbart salvegrundlag. Alternativt kan de aktive bestanddele formuleres i en creme med et olie-i-vand-cremegrundlag.

Om ønsket kan den vandige fase i cremegrundlaget 30 indbefatte f.eks. mindst 30 vægt/vægt% af en polyvalent alkohol, dvs. en alkohol med to eller flere hydroxylgrup-per, såsom propylenglycol, butan-1,3-diol, mannitol, sorbitol, glycerol og polyethylenglycol og blandinger heraf. De topiske formuleringer kan hensigtsmæssigt om-35 fatte en forbindelse, som forøger den aktive bestanddels absorption eller penetration gennem huden eller andre angrebne områder. Som eksempler på sådanne dermale penetrationsforøgelsesmidler kan nævnes dimethylsulfoxid og beslægtede analoger.

DK 159444B

11

Formuleringerne, der er egnede til topisk administrering til øjet, indbefatter også øjendråber, hvori den aktive bestanddel er opløst eller suspenderet i en passende bærer, specielt et vandigt opløsningsmiddel for 5 den aktive bestanddel. Den aktive bestanddel er fortrinsvis til stede i sådanne formuleringer i en koncentration fra 0,5 til 20 vægt/vægt%, fordelagtigt fra 0,5 til 10 vægt/vægt%, navnlig på ca. 1,5 vægt/vægt%.

Formuleringerne, der er egnede til topisk admini-10 strering i munden, indbefatter bolsjer, som indeholder den aktive bestanddel i et smagsstof tilsat basis, sædvanligvis saccharose og acåcia eller tragacanth; pastiller, der indeholder den aktive bestanddel i et indifferent basis, såsom gelatine og glycerol, eller saccharose 15 og acacia; og mundskyllevæsker, der indeholder den aktive bestanddel i en passende fLydende bærer.

Formuleringer til rectal administrering kan præsenteres som en stikpille med et passende grundlag, der f.eks. omfatter cacaosmør eller et salicylat.

20 Til nasal administrering egnede formuleringer, hvori bæreren er et fast stof, indbefatter et groft pulver med en partikelstørrelse i f.eks. området fra 20 til 500 mikron, som administreres på den måde, på hvilken man tager snus, dvs. ved hurtig inhalering gennem næsepassa-25 gen fra en beholder med pulver holdt tæt op til næsen.

Egnede formuleringer, hvori bæreren er en væske, til administrering som f.eks. en næsespray eller som næsedråber, indbefatter vandige eller olieholdige opløsninger af den aktive bestanddel.

30 Formuleringer, der er egnede til vaginal admini strering, kan præsenteres som vagitorier, tamponer, cremer, geler, pastaer, skumpræparater eller sprayformuleringer, der foruden den aktive bestanddel indeholder sådanne bærere, som vides at være egnede på det omhand-35 lede område.

Formuleringer, der er egnede til parenteral admi-strering, indbefatter vandige og ikke-vandige sterile injektionsopløsninger, der kan indeholder antioxidanter, puffere, bakteriostater og opløste stoffer, som gør for- 12

DK 159444 B

muleringen isotonisk med blodet hos den pågældende recipient; og vandige og ikke-vandige sterile suspensioner, der kan indeholde suspensionsmidler og fortykkelsesmidler. Formuleringerne kan præsenteres i enhedsdosis- eller mul-5 tidosisbeholdere, f.eks. tæt tillukkede ampuller og hætteglas, og kan oplagres i en frysetørret (lyofiliseret) tilstand, som kun kræver tilsætning af den sterile flydende bærer, f.eks. vand til injektion, umiddelbart før anvendelse. På bestilling fremstillede injektionsopløs-10 ninger og -suspensioner kan fremstilles ud fra sterile pulvere, granulater og tabletter af den tidligere beskrevne, art. Formuleringer til intramuskulær administrering er særlig foretrukne.

Foretrukne enhedsdosisformuleringer er sådanne, 15 som indeholder en daglig dosis eller daglig enhedsunderdosis, som anført ovenfor, eller en passende brøkdel heraf, af en aktiv bestanddel.

-------- Det skal bemærkes, at formuleringerne ifølge den foreliggende opfindelse foruden de specielt ovenfor 20 nævnte bestanddele kan indeholde andre midler, som er konventionelle på området under hensyntagen til den pågældende formuleringstype, f.eks. kan de til oral administrering egnede formuleringer indeholde smagsstoffer.

På basis af den foreliggende opfindelse kan der 25 endvidere tilvejebringes veterinære præparater, som omfatter mindst én aktiv bestanddel som defineret ovenfor 'sammen med en veterinær bærer herfor.

Veterinære bærere er materialer, der er nyttige til administrering af præparatet, og de kan være faste, 30 flydende eller gasformige materialer, der iøvrigt er indifferente eller acceptable på det veterinære område og er forenelige med den aktive bestanddel. Disse veterinære præparater kan administreres oralt, parenteralt eller ad enhver anden ønsket vej.

35 Til oral administrering kan præparaterne være i form af en tablet, et granulat, en "drench", en pasta, en cachet, en kapsel eller et fodertilskud. Granulater kan fremstilles ved den velkendte metode med vådgranulering, forkomprimering eller "slugging". De kan admini- 13

DK 159444 B

streres til dyr i en indifferent flydende bærer, således at de danner en "drench", eller i en suspension med vand-eller oliebasis. Der inkorporeres fortrinsvis yderligere hjælpebestanddele, såsom et dispergeringsmiddel. g Disse formuleringer indeholder fortrinsvis 15 til 85% af den aktive bestanddel.

Eksempler

Opfindelsen belyses nærmere ved hjælp af de efterfølgende eksempler. I de følgende eksempler betegner Ίq XAD-2 et absorbens af polystyrenperler. I de anførte NMR-spektrer er signalerne blevet forkortet som følger: s = singlet, d = dublet, t = triplet, g = quadruplet, m = multiplet, br s = bredt signal.

1 g Eksempel 1

Fremstilling af 9-(2-glycyloxyethoxymethyl)guanin~hydro-chlorid.

(Formel I, hvori R3 = -COCH2NH2.HC1). a) En opløsning af 0,84 ml (8,4 mmol) azidoacetyl-20 chlorid i 5 ml tørt dimethylformamid sattes dråbevis i løbet af 10 minutter til en isafkølet, grundigt omrørt suspension af 1,25 g (5,55 mmol) 9-(2-hydroxyethoxyme-thyl)guanin og 0,78 ml (5,55 mmol) triethylamin i 40 ml tørt dimethylformamid. Efter 45 minutters grundig omrø-25 ring ved 0°C tilsættes der 0,11 ml (1,1 mmol) azidoace-tylchlorid i 1 ml dimethylformamid, og omrøringen fortsattes i 15 minutter. Reaktionen blev afbrudt ved tilsætning af 15 ml 7%'s NaHCO^-opløsning, hvorefter blandingen inddampedes til tørhed i vakuum. Remanensen tri-30 tureredes med 20 ml af en blanding af methylenchlorid: diethylether: ethanol (volumenforhold 5:5:1). Det opnåede faste stof frafiltreredes, vaskedes grundigt med koldt vand og omkrystalliseredes af varmt vand efter behandling med aktivt kul. Der opnåedes 1,02 g (62%) 9-35 (2-azidoacetoxyethoxy-methyl)guanin, smp. 175 - 177 C° (sønderdeling). MS m/e 308 (M+), 151 (base + H); IR (KBr) 2110 (N^), 1745 (COOR)cm S UV (phosphatpuffer, pH = 7) A 253 nm fe 8,42 x 103), 270 (sh); TLC R. 0,27 m&x x (CHCl^-MeOH,8 : 2), Rf0,60 (EtOH-HOAc,8:2).

14

DK 159444 B

b) En blanding af 1,23 g (4 mmol) af det i trin a) beskrevne produkt, 1,0 g 10%'s Pd/C og 4 ml 1,0 N HC1 i 250 ml af en blanding af vand og ethanol (volumenforhold 1:1) hydrogeneredes i 90 minutter ved et hydrogentryk på 5 2,758 bar. Katalysatoren frafiltreredes derefter og vaskedes grundigt med vand. Filtratet hældtes sammen med vaskevandet og inddampedes til tørhed i vakuum. Remanensen omkrystalliseredes to gange af en blanding af vand og ethanol til opnåelse af 0,83 g (65%) 9-(2-gly-10 cyloxyethoxymethyl)guanin-hydrochlorid med smp. 148 -150°C. IR (KBr) 3200-2350 (NH3+), 1750 (COOR) cm"1; UV (0,1 N HC1) /}mav253nm (£8,53 x 101 2), 275 (sh) ? NMR (60 MHz, DMS0-d6/D20) S 3,85 (s,2H, N-CH2-CO), 4,25 (m, 4H, -CH2CH2-), 5,5 (s, 2H, 0-CH2-N), 8,3 (s, 1H, 8-H); 15 TLC Rf0,29 (EtOH-HOAc, 8:2);

Analyse: beregnet for C^H^N^.HCl: C 37,69%, H 4,74%, N 26,87%.

fundet: C 37,84%, H 4,64%, N 26,25%.

0 Eksempel 2

Fremstilling af 9-(2-O-a-alanyloxyethoxymethyl)guanin-hydrochlorid .

(Formel I, hvori R2 = -COCH(CH3)NH2.HC1).

a) En blanding af 0,99 g (4 mmol) 9-(2-hydroxyethoxy-25 methyl)guanin, 1,026 g 4,3 mmol) N-carbobenzyloxy-ot-alanin (Aldrich), 0,04 g vandfri p-toluensulfonsyre og 1,755 g (5,6 mmol) N,N'-dicyclohexylcarbodiimid i 80 ml tørt pyridin omrørtes grundigt i en dag ved stuetemperatur. Derefter tilsattes der 1 ml eddikesyre, og blan-30 dingen omrørtes grundigt i yderligere en time. Reaktionsblandingen filtreredes, og bundfaldet vaskedes grundigt med varmt methanol. Filtratet hældtes sammen med vaskevæskenog inddampedes til tørhed, hvorefter remanensen overførtes til en kolonne af silicagel (50 g) 2 35 og elueredes med en blanding af chloroform:methanol (vo-luménforhold 9:1). Ved krystallisation af methanol opnåedes der 1,15 g (67%) af den beskyttede a-alaninester (formel I, hvori R2 = -COCH(CH3)NHCOOCH2CgH5), smp. 145 - 15

DK 159444 B

147°C.

UV (MeOH) A„ 255nm (69,87 x 103,270(sh); TLC R. 0,40

IlicLX X

(CHCl3-MeOH,8:2).

b) En blanding af 0,662 g (1,54 mmol) af den i trin 5 a) opnåede beskyttede α-alaninester og 3,1 ml 0,5 N HCl i 200 ml af en blanding af vand:methanol (volumenforhold 1:1) hydrogeneredes i to timer ved et hydrogentryk på 2,758 bar i nærværelse af 0,30 g 10% palladium-på-carbon. Derefter frafiltreredes katalysatoren og vaskedes med 10 vand. Filtratet hældtes sammen med vaskevandet og inddampedes til tørhed i vakuum. Den faste remanens omkrystalliseredes af en blanding af vand og ethanol til opnåelse af 0,354 g (71%) 9-(2-0-a-alanyloxyethoxymethyl)-guanin-hydrochlorid med smp. 153 - 155°C.

15 UV (0,1 N EC1U 254nm (61,10 x 104), 273 (sh); NMR

max (100 MHz, DMSO-dg) 1,36 (d,3H, CH3, J = 8Hz), 3,72 (m, 2H, C00CH2-CH2-0), 4,04 (q, 1H, CH, J = 8Hz); 4;26 (m, 2H, COOCH2-), 5,38(s, 2H, 0-CH2-N), 6,74 (s, 2H, 2-NH2), 7,84 (s, 1H, 8-H) 8,56 (br s, 3H, -NH3+), 10,9 (br s, 20 1H, 1-NH)? TLC Rf 0,23 (EtOH-HOAc, 8:2).

Analyse: beregnet for C^H^gO^Ng .HCl: C 39,69%,H5,15%,N25,36% fundet: C 39,52%,H5,06%,N25,18%

Eksempel 3 25 Fremstilling af 9-(2-0-8-alanyloxyethoxymethyl)guanin-hydrochlorid .

(Formel I, hvori R3 = -COCH2CH2NH2.HCl).

a) Fremgangsmåden ifølge eksempel 2a) blev gentaget med 0,99 g (4 mmol) 9-(2-hydroxyethoxymethyl)guanin og 30 1,026 g (4,3 mmol) N-carbobenzyloxy-p-alanin (Aldrich).

Efter krystallisation af methanol opnåedes der 1,24 g (72%) af den beskyttede β-alaninester med smp. 147-148°C.

UVi 254nm (69,91 x 103)(MeOH) 270 (sh) NMR (60 MHz,

IftctX

pyridin-dg) δ 2,65 (t, 2H, -CH2 -COO, J=6Hz), 3,65 (m, 35 4H, N-CH2-CH2 og C00CH2-CH2-0), 4,20 (m, 2H, COOCH2-), 5,20 (s, 2H, 0-CH2-N), 5,50 (s, 2H, PhCH2-0) 7,3 (m, 5H, phenyl), 8,1 (s,1H, 8-H); TLC Rf 0,41 (CHCl3-MeOH, 8,2).

, DK 159444B

16 b) 0,99 g (2,3 mmol) af den i trin a) opnåede beskyttede {Ϊ -alaninester hydrogeneredes på analog måde som i eksempel 2b) i nærværelse af en ækvivalent mængde HC1.

Efter behandling af reaktionsblandingen på den i eksem-5 pel 2b) beskrevne måde opnåedes der 0,590 g (77%) 9-(2-0-3-alanyloxyethoxymethyl)guanin-hydrochlorid med smp. 202-204°C (sønderdeling). UV (0,1 N HC1) λ__ 2,54nm (1,09x10 ), 273 (sh); NMR (100 MHz, DMSO-dg) 62,69 (m,2H, -CH2-COO), 3,01 (m, 2H, H-CH2-CH2, 3,71 (m, 2H, C00CH2-10 CH2-0), 4,15 (m, 2H, COOCH2-), 5,38 (s,2H, 0-CH2-N), 6,71 (s, 2H, 2-NH2), 7,84 (s, 1H, 8-H), 8,08 (br s, 3H, -NH3+), 10,86 (br s, 1H, 1-NH), TLC Rf0,23 (EtOH-HOAc, 8:2) ;

Analyse: 15 Beregnet for C^H^O^g.HCl: C 39,69%, H 5,15%, N 25,36% Fundet: C 39,78%, H 5,23%, N 25,21%

De efterfølgende yderligere eksempler 4-7 er fremstillingseksempler sluttende med opløselighedsdata 20 og virkningsdata med hensyn til antiviral virkning for følgende fire forbindelser: 2-((2-amino-1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)methoxy)-ethyl-L-leucinat-hydrochlorid, 25 2-((2-amino-1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)methoxy-ethyl-L-prolinat-hydrochlorid, 2-((2-amino-1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)methoxy)-ethy1-DL-lys inat-hydrochlor id, 2-((amino-1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)methoxy)-30 ethyl-d,1-phenylalanat-hydrochlorid.

Eksempel 4

Fremstilling af 2-((2-amino-1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-35 9-yl)methoxy)ethyl-L-leucinat-hydrochlorid.

4 g (17,8 mM) acyclovir opløstes i 300 ml tørt dimethylformamid ved opvarmning på et dampbad under 17!

DK 159444 B

manuel omhvirvlhing. Til den afkølede opløsning sattes 0,690 g (5,7 mM) 4-dimethylaminopyridin, 15,0 g (56,5 mM) N-carbobenzyloxy-L-leucin og 14,0 g (67,8 mM) di-cyclohexylcarbodiimid. Opløsningen omrørtes under en 5 nitrogenatmosfære ved stuetemperatur i 18 timer. Dimethyl formamidet fjernedes under vakuum, og den opnåede remanens chromatograferedes på silicagel, idet der elue-redes med 1:10 methanol-dichlormethan, til opnåelse af 6,280 g (75%) af det ønskede mellemprodukt, 2-[(2-ami-10 no-1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)methoxy]ethyl-N-[(benzyloxy)carbonyl]-L-leucinat, som et hvidt fast stof, der ved analyse viste sig at indeholde 1/2 mol vand (CHN og ^H-NMR).

Til en opløsning af det ovennævnte faste stof

15 (2,56 g, 5,4 mM) i 135 ml methanol sattes 15 ml 0,5 N

vandig saltsyre og 324 mg 3% palladium på aktivt kul.

Blandingen rystedes i et Parr-apparat under et begyn- 2 delseshydrogentryk på 2,53 kg/cm ved stuetemperatur i 18 timer. Blandingen filtreredes,idet katalysatoren va-20 skedes med methanol, og sammenhældt vaskevæske og filtrat inddampedes i vakuum ved en badtemperatur < 50°C. Remanensen omkrystalliseredes af methanol-ether til opnåelse af 1,047 g (57%) af den i overskriften anførte forbindelse, der ved analyse viste sig at indeholde 7/4 mol 25 vand (CHN). ^H- og ^C-NMR-spektrene var tilfredsstillende for den ønskede struktur.

Eksempel 5 30 Fremstilling af 2-((2-amino-1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)methoxy) ethyl-L-prolinat-hydrochlorid.

4 g (17,8 mM) acyclovir opløstes i 300 ml tørt dimethylformamid ved opvarmning på et dampbad under 35 manuel omhvirvlning. Til den afkølede opløsning sattes 0,690 g (5,7 mM) 4-dimethylaminopyridin, 14,1 g (56,5 mM) carbobenzyloxy-L-prolin og 14,0 g (67,8 mM) di-cyclohexylcarbodiimid. Opløsningen omrørtes under en . 18

DK 159444 B

nitrogenatmosfære ved stuetemperatur i 18 timer. Dime-thylformamidet fjernedes i vakuum, og remanensen chro-matograferedes på silicagel, idet der elueredes med 1:12 methanol-dichlormethan, til opnåelse af 3,689 g (46%) 5 af det ønskede mellemprodukt, 2-[(2-amino-1,6-dihydro- 6-oxo-9H-purin-9-yl)methoxy]-éthyl-N-[(benzyloxy) carbonyl ]-L-prolinat, som et hvidt fast stof, der ved ana- lyse viste 3/4 mol vand (CHN og H-NMR).

En opløsning af det ovennævnte faste stof (2,70 10 g, 5,8 mM) i 130 ml methanol og 5 ml tetrahydrofuran sattes til 15 ml 0,5 N vandig saltsyre og 324 mg 5% palladium på aktivt kul. Blandingen rystedes i et Parr- 2 apparat under et begyndelseshydrogentryk pa 1,69 kg/cm ved stuetemperatur i 18 timer. Blandingen filtreredes, 15 idet katalysatoren vaskedes med methanol, og sammenhældt vaskevæske og filtrat inddampedes i vakuum ved en badtemperatur <60°C. Remanensen omkrystalliseredes af vand-isopropanol og vaskedes med ether til opnåelse af 0,350 g (17%) af den i overskriften anførte forbindelse, der 20 ved analyse viste sig at indeholde 1,0 mol vand og 0,1 mol HC1 (CHN). ^H- og ^C-NMR-spektrene var tilfredsstillende for den ønskede struktur.

Eksempel 6 25

Fremstilling af 2-((2-amino-1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-methoxy)ethyl-DL-lysinat-hydrochlorid.

4 g (17,8 mM) acyclovir opløstes i 300 ml tørt 30 dimethylformamid ved opvarmning på et dampbad under manuel omhvirvlning. Til den afkølede opløsning sattes 0,690 g (5,7 mM) 4-dimethylaminopyridin, 25,0 g (60,3 mM) N,N*-dicarbobenzyloxy-DL-lysin og 14,0 g (67,8 mM) dicyclohexylcarhodiimid. Opløsningen omrørtes under 35 en nitrogenatmosfære ved stuetemperatur i 18 timer.

Dimethylformamidet fjernedes i vakuum, og remanensen chromatograferedes på silicagel, idet der elueredes med 1:12 methanol-dichlormethan til opnåelse af 2,980 g 19

DK 159444 B

(26%) af det ønskede mellemprodukt, 2-[(2-amino-1,6-di- hydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)methoxy]ethyl-N,N'-[di-(benzyl- oxy)carbonyl]-DL-lysinat, som et hvidt fast stof. Struk- 1 13 turen bekræftedes ved H-NMR og C-NMR.

5 En opløsning af det ovennævnte faste stof (2,40 g, 3,9 mM) i 190 ml methanol og 22 ml tetrahydrofuran sattes til 20 ml 0,5 N vandig saltsyre og 217 mg 5% palladium på aktivt kul. Blandingen rystedes i et Parr-apparat 2 under et begyndelseshydrogentryk pa 2,1 kg/cm ved stue-10 temperatur i 18 timer. Blandingen filtreredes, idet katalysatoren vaskedes med methanol, og sammenhældt vaskevæske og filtrat inddampedes i vakuum ved en badtemperatur <45°C. Remanensen omkrystalliseredes af vand-iso-propanol og vaskedes med acetone til opnåelse af 1,150 g 15 (70%) af den i overskriften anførte forbindelse, der ved analyse viste sig at indeholde 1,11 mol vand og 0,34 mol HC1 (CHN). ^H- og ^C-NMR-spektrene var tilfredsstillende for den ønskede struktur.

20 Eksempel 7

Fremstilling af 2-((2-amino-1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)methoxy)ethy1-d,1-phenylalanat-hydrochlorid.

25 2 g (8,0 mM) acyclovir opløstes i 150 ml tørt dimethylformamid ved opvarmning på et dampbad under manuel omhvirvlning. Til den afkølede opløsning sattes 0,292 g (2,4 mM) 4-dimethylaminopyridin, 7,18 g (24,0 mM) N-carbobenzyloxy-d,1-phenylalanin og 5,92 g (28,7 mM) 30 dicyclohexylcarbodiimid. Opløsningen omrørtes ved stuetemperatur i 48 timer. Bundfaldet af dicyclohexylurin-stof frafiltreredes, idet det faste stof vaskedes med dichlormethan, og filtrat og vaskevæske hældtes sammen og inddampedes i vakuum. Den opnåede remanens krystal-35 liseredes af ethanol til opnåelse af 2,845 g (70%) af et hvidt fast stof, der gav en tilfredsstillende analyse (^H- og ^C-NMR) for det ønskede mellemprodukt, 2—[(2— amino-1,6-dihydro-6-oxo-(9H-purin-9-yl)methoxy]ethyl- .<20

DK 159444 B

N-[(benzyloxy) carbonyl]-d,1-phenylalanat.

Det ovennævnte faste stof opløstes i 100 ml 1:1 methanol-tetrahydrofuran. Til opløsningen sattes 12 ml 0,5 N vandig saltsyre og 260 mg 5% palladium på 5 aktivt kul. Blandingen omrystedes i et Parr-apparat under 2 et begyndelseshydrogentryk på 3,5 kg/cm ved stuetemperatur i 3,5 timer, i løbet af hvilket tidsrum der blev optaget 0,9 kg gas. Blandingen filtreredes, idet katalysatoren vaskedes med opløsningsmiddel (totalt volumen 10 nu 125 ml), og filtratet tilsattes igen 55 mg frisk katalysator. Reduktionen fortsattes i 35 minutter (0,45 kg optagelse), blandingen filtreredes, og filtratet inddampedes i vakuum ved en badtemperatur <35°C. Remanensen opløstes i kogende methanol, en mindre mængde uopløse-15 ligt materiale fjernedes, og methanolekstrakterne gen-inddampedes. Ved triturering med koldt methanol og acetone opnåedes 1,05 g (57%) af den i overskriften anførte forbindelse med smp. 219-220°C, og som ved analyse viste sig at indeholde 3/4 mol vand (CHN).

20 ^ H- og ^C-NMR-spektrene var tilfredsstillende for den ønskede struktur.

Antiviral virkning in vitro Minimal hæmningskoncentration (50%) (IC^q mM) 25 Eksempel HSV1 4 1,2 5 1,0 6 1,4 7 0,9 30

Opløselighed

Eksempel mg/ml i H^O ved stuetemperatur 6 46,8 4 35,08 35 5 39,36 7 28,88 21

DK 159444 B

Eksempel A

Øj endråbeformulering

En øjendråbeformulering fremstilledes ved at oplø-5 se en forbindelse ifølge et vilkårligt af eksemplerne 1-3 i en koncentration på 1 vægt/vol-% i en isotonisk puffer-opløsning, der indeholdt 1,52 g borsyre, 0,0008 g borax og 0,01 g benzalkoniumchlorid pr. 100 ml destilleret vand. Opløsningens pH-værdi var 5,7.

10

Biologisk virkning a) Antiviral virkning in vitro

Ved en række biologiske prøver blev der foretaget en undersøgelse af virkningen af forbindelserne ifølge 15 eksemplerne 1 - 3 i sammenligning med acyclovir mod forskellige vira i cellekulturer af primære kaninnyreceller.

De anvendte vira var: herpes simplex type 1 (stammerne KOS, McIntyre og F) og herpes simplex type 2 (stammerne Lyons, G og 196).

20 Oprindelsen af de seks herpes simplexstammer og metoden til måling af den af viruset fremkaldte retardation af cytopathogeniciteten er beskrevet af E. de Clercg et al. i J. Infect. Dis., U]_r 563 (1980).

Resultaterne af prøverne er anført i nedenstående 25 tabel, hvor de er udtrykt i minimal hæmningskoncentration, dvs. den koncentration (i μg/ml), som er nødvendig til nedsættelse af den af viruset i cellekulturen fremkaldte cytopathogenicitet med 50¾. I alle tilfælde er der angivet middelværdier af 2 eller 3 særskilte bestemmelser.

30 De anvendte forkortelser er: HSV-1: herpes simplex virus, type 1 HSV-2: herpes simplex virus, type 2

DK 159444 B

22

Tabel

Forbindelse Minimal haanningskoncentration (ug/ml) (Eksempel nr.) ____ 5 HSV-1 HSV-T HSV-1 HSV-2 HSCV-2 HSV-2 (KOS) (McIntyre) (F) (Lyons) (G) (196) 1 0,1 0,1 0,1 0,04 0,08 0,07 2 0,4 0,4 0,4 0,07 0,2 0,1 10 3 0,2 0,4 0,5 0,1 0,15 0,1

Acyclovir 0,08 0,1 0,09 0,04 0,06 0,06

Tabellen viser, at den antivirale virkning af forbindelserne ifølge eksemplerne 1 til 3 er i det væ-'15 sentlige den samme som for 9-(2-hydroxyethoxymethyDgua-nin.

b) Antiviral virkning in vivo.

Den antivirale virkning in vivo af forbindelsen ifølge eksempel 1 sammenlignedes med det kendte antivira-20 le middel bromvinyldeoxyuridin.

Der fremstilledes øjendråber indeholdende 0,5 vægt/vol-% bromvinyldeoxyuridin eller 1 vægt/vol-% af forbindelsen ifølge eksempel 1 i en isotonisk boratpuf-fer, der indeholdt 1,52 g borsyre, 0,008 g borax og 0,01 25 g benzalkoniumchlorid i 100 ml destilleret vand. Opløsningens pH-værdi var 5,7. Bæremidlet alene uden nogen antivirale bestanddele anvendtes som placebo. Øjendrå-berne kodedes.

Der anvendtes et krydsningsafkom af California al-30 bino og Dendermonde hvide kaniner af en vægt på mellem 1,5 og 2 kg.

Der anvendtes tredive kaniner til fremkaldelse af stromal keratitis efter den metode, der er angivet af

McNeill og Kaufman (Arch. Ophthalmol. 97: 727-729, 1979).

35 Kaninerne anæsthetiseredes ved en subcutan injektion af fentanylcitrat i en dosis på 1 ml/kg. En 0,2 ml virus- 4 5 suspension, der indeholdt 10 ' plaque-dannende enheder af HSV-1 (stamme McIntyre) pr. ml, injiceredes i det centrale corneale stroma i begge øjne.

23

DK 159444 B

Kaninerne nummereredes rækkefølgevis og fordeltes tilfældigt i tre grupper på 10 kaniner hver. Behandlingen bestod i administrering af øjendråber indeholdende forbindelsen ifølge eksempel 1, bromvinyldeoxyuridin, el-5 ler placebo-øjendråber. Behandlingen startedes én dag efter podningen med virus. Én dråbe af øjendråbeformule-ringen inddryppedes i øjet med mellemrum på en time ni gange pr. dag. Terapien fortsattes i fem på hinanden følgende dage. Begge øjne hos hver kanin modtog den 10 samme modifikation.

Keratitis-bedømmelse

Alvorligheden af den fremkaldte keratitis bedømtes dagligt af den samme person under anvendelse af en 15 spaltelampe. Hvid belysning anvendtes til at undersøge strukturen af den corneale stroma og camera anterior.

Én procent fluoresceinnatrium-øjendråber og et cobaltblå-filter anvendtes til at bedømme den epitheliale keratitis og den corneale ulceration.

20

Resultater Øjendråber med forbindelsen ifølge eksempel 1 og med bromvinyldeoxyuridin var effektive til at undertrykke stromal keratitis. Forskellene i keratitis-tallene 25 mellem placebogruppen og de to aktive forbindelser var statistisk signifikante gennem hele observationsperioden.

Der udvikledes alvorlig keratitis i placebogruppen inden for de første få dage efter infektion. Forbindelsen i-følge eksempel 1 forhindrede den stromale sygdoms frem-30 adskriden, således at keratitis-middeltallene forblev næsten konstante, når først behandlingen med medikamentet var påbegyndt. Bromvinyldeoxyuridin fremkaldte en gradvis helbredelse af stromal keratitis. Den gunstige virkning af bromvinyldeoxyuridin blev signifikant bedre end 35 virkningen af forbindelsen ifølge eksempel 1 fra og med den fjerde behandlingsdag.

Stromal HSV-1 keratitis ved forsøget var ledsaget af iritis. Alvorligheden af denne komplicerende iritis fulgte det samme mønster som keratitis-tallene. Begge forbin-

Claims (12)

1. Analogifremgangsmåde til fremstilling af derivater af 9-(2-hydroxyethoxymethyl)guanin med den almene formel 15 ?H AA.> η h j 20 ce2och2ch2or3 3 hvori R betegner et aminosyre-acylradikal med højst 9 carbonatomer, eller farmakologisk acceptable salte heraf, kendetegnet ved, at man a) omsætter en forbindelse med formlen 25 XX y R | 30' C^G CH2CH2OH hvori R er en eventuelt beskyttet hydroxygruppe, og R er en eventuelt beskyttet aminogruppe, med en eventuelt beskyttet aminosyre eller et funktionelt ækviva-35 lent heraf, DK 159444 B b) omdanner en forbindelse med formlen /l‘>

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1 a)/ k e n d e -tegnet ved, at beskyttelsesgrupperne er valgt blandt C1_4~alkanoyl-, aroyl-, arylmethyl-, aryloxy-carbonyl- og tri-C^^-alkylsilyl-beskyttelsesgrupper.

3. Fremgangsmåde ifølge krav 2, kendeteg net ved, at man fjerner beskyttelsesgrupperne ved hydrolyse eller hydrogenolyse.

4. Fremgangsmåde ifølge krav 1 b), kende -tegnet ved, at G betegner en azido- 10 gruppe, som omdannes til en aminogruppe ved katalytisk hydrogenering.

5. Fremgangsmåde ifølge krav 1 b), kendetegnet ved, at G betegner et halogenatom eller en alkylthio- eller alkylsulfonylgruppe, 15 der omdannes til en aminogruppe ved aminolyse.

5 N ' n / G ch2och2ch2or3 3 hvori R har den ovennævnte betydning, og M betegner en hydroxygruppe, og G betegner et atom eller en gruppe, der kan erstattes med eller omdannes til en aminogruppe; 10 eller G betegner en aminogruppe, og M betegner et atom eller en gruppe, der kan erstattes med eller omdannes til en hydroxygruppe, til en forbindelse med formlen I eller et farmakologisk acceptabelt salt heraf, eller c) omsætter en forbindelse med formlen S 2-j^ X / IV R \ N/

20 I 1 2 hvori R og R har de ovennævnte betydninger, og Q betegner et fraspalteligt atom eller en fraspaltelig gruppe, med en forbindelse med formlen 25 ACH2OCH2CH2OR3 V hvori R3 har den ovennævnte betydning, og A betegner en fraspaltelig gruppe eller et fraspalteligt atom, hvorefter man eventuelt udfører én eller flere af de ef-30 terfølgende omdannelser i vilkårlig ønsket rækkefølge: i) fjernelse af eventuelle beskyttelsesgrupper, ii) når det opnåede produkt er en forbindelse med formlen I, omdannelse af den nævnte forbindelse til et farmakologisk acceptabelt salt heraf, og 35 iii) når det opnåede produkt er et farmakologisk acceptabelt salt af en forbindelse med formlen I, omdannelse af nævnte salt til grundforbindelsen. DK 159444 B

6. Fremgangsmåde ifølge krav 1 c), k ende-tegnet ved, at A betegner et halogenatom eller en acyloxygruppe.

7. Fremgangsmåde ifølge krav 1 c), kende- 20 tegnet ved, at Q betegner et hydrogenatom eller en acyl- eller tri-C1_4-alkylsilylgruppe.

8. Fremgangsmåde ifølge et vilkårligt at kravene 1 c), 6 og 7, kendetegnet ved, at omsætningen udføres i nærværelse af en base.

9. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendeteg net ved, at man fremstiller forbindelser med formlen 3 I, hvori R betegner et glycyl- eller Λ- eller ^3-alanyl-radikal.

10. Fremgangsmåde ifølge krav 9, kendeteg- 30. e t ved, at man fremstiller 9-( 2-0-glycyloxyethoxy- methyl)guanin.

10 PATENTKRAV

11. Fremgangsmåde ifølge krav 9, kendetegnet ved, at man fremstiller 9-( 2-O-oC-alanyloxyethoxy-methyl)guanin.

12. Fremgangsmåde ifølge krav 9, kendeteg- n e t ved, at man fremstiller 9-(2-0-|3-alanyloxyethoxy-methyl)guanin.