HU187103B

HU187103B - Process for preparing an additive for antitumoral agents

Info

Publication number: HU187103B
Application number: HU832112A
Authority: HU
Inventors: Masaki Aburada; Shigefumi Takeda; Eiko Itoh; Moe Matsushita; Eikichi Hosoya
Original assignee: Tsumura Juntendo Kk
Priority date: 1982-08-23
Filing date: 1983-06-14
Publication date: 1985-11-28
Also published as: GB2126085A; BE897403A; IT1169771B; GB2126085B; DE3328263C2; NL8302391A; FR2531864B1; JPS5936619A; JPH0256329B2; GB8322663D0; IT8322616A0; US4613591A; FR2531864A1; DE3328263A1; CH659948A5

Description

A találmány tárgya eljárás a mitomicin C és a doxorubícin-hidroklorid hatását kiegészítő adalék előállítására. Pontosabban, a találmány tárgya a mitomicin C és a doxorubícin-hidroklorid daganatellenes aktivitását növelő és mellékhatásaikat csők- 5 ken tő adalék (adminiculum) előállítása, melynek hatékony komponense a következő gyógynövények vizes vagy vizes-szerves oldószeres kivonata: Astragalus gyökér, Cinnamomum kéreg, Rehmannia gyökér, Paeonia gyökér, Cnidium gyökértörzs, 10 Atractylodes lanceae gyökértörzs, Angelica gyökér, Ginseng gyökér, Poria cocos kéregtelenítétt szár és Glycyrrhiza gyökér.

A mitomicin C-melynek képlete C, 5H_1SN₄O₅ -, kékesibolya színű kristályokból vagy kristályos 15 porból áll. A daganatsejtek DNS-ével kombinálódva a DNS lebomlását okozza, továbbá gátolja a DNS szintézisét, és ezáltal a daganatsejtek osztódását [Shibata, S. és munkatársai: Biken’s J., 1, 193. (1958); Szybalski, W. és munkatársai: Proc. Nat. 29 Acad. Sci., 50, 355. (1963)]. A doxorubicin-hidroklorid - melynek képlete C^HjgNOn HCI -, narancspiros színű kristályos por, mely gátolja a daganat-, illetve a sejt-DNS szintézisének útját, és a daganatsejtek osztódását. Főképpen az RNS-poli- 25 merázt gátolja, a DNS-sel történő kombinálódása révén [Tatsumi, K. és munkatársai: GANN, 65,

237, (1974)].' Közismert, hogy a mitomicin C és a Doxorubícin-hidroklorid erősen daganatellenes aktivitásúak, azonban klinikai alkalmazásuk kor- 30 látozott, súlyos mellékhatásaik - leukopenia és thrombocytopenia - miatt.

Megállapítottuk, hogy az Astragalus membranaceus Bunge (Leguminosae) gyökér, Cinnamomum cassia Blume (Lauraceae) kéreg, Rehmannia glutinosa Liboschitz var. purpurea Makino (Scrophulariaceae) gyökér, Paeonia lactiflora Pallas (Paeonia albiflora Pallas var. trichocarpa Bunge) (Paeoniaceae) gyökér, Cnidium officinale Makino (Umbelliferae) gyökértörzs, Atractylodes lancea De Candolle (Compositae) gyökértörzs, Angelica acutiloba Kitagawa (Umbelliferae) gyökér, Panax ginseng C. A. Meyer (Araliaceae) gyökér, Poria cocos Wolf (Pachyma holen Rumph) (Polyporaceae) kéregtelenített szár (Hoelen) és Glycyrrhiza glabra Linné var. glandulifera Regei et Herder vagy Glycyrrhiza uralensis Fischer (Leguminosae) gyökér vizes vagy vizes-savas oldószeres kivonata serkenti a mitomicin C, illetve a doxorubicin-hidroklorid daganatellenes hatását és csökkenti a mellékhatásokat (leukopéniát).

A gyógynövények ismertetése a Commentary of Pharmacopoeia Japonica Editio Deca kézikönyvben található.

Pontosabban: 2,0-4,0 rész Astragalus gyökér, 2,0-4,0 rész Cinnamomum kéreg, 2,0-4,0 rész Rehmannia gyökér, 2,0-4,0 rész Paenonia gyökér, 2,0-4,0 rész Cnidium gyökértörzs, 2,0-4,0 rész Atractylodes lanceae gyökértörzs, 2,0-4,0 rész Angelica gyökér, 2,0-4,0 rész Ginseng gyökér, 2,0-4,0 rész Hoelen és 0,5-2,5 rész Glycyrrhiza gyökér alkalmazandó. Előnyös kombinációként megemlíthető a hagyományosan is ismert kínai gyógynövény-kombináció, a Juzentaihoto. A vizsgálatoknál összehasonlító anyagnak használtuk. (7.-13. áblák.)

A találmány szerinti kiegészítő adalék előállítható úgy is, hogy elkészítjük a fent említett tízféle nyers gyógynövény vizes vagy vizes-szerves oldószeres - előnyösen alkoholos - kivonatát, majd az így nyert kivonatot megszűrjük, és a szokásos szárítási eljárásokkal szárítjuk, amilyen például a porlasztásos szárítás, a liofilizálás vagy a besűritéses szárítás.

A találmány szerinti kiegészítő adalék úgy készíthető, hogy a fenti tízféle nyers gyógynövény keveré- „ kéből állítunk elő kivonatot, vagy pedig az egyes nyers gyógynövények kivonatait keverjük össze.

Az extrakciót szobahőmérsékleten vagy magasabb hőmérsékleten végezhetjük, előnyösen 50-100 ’C-on.

A találmány szerinti kiegészítő adalék használható eredeti alakjában, vagy pedig por, granulátum, tabletta vagy kapszulás készítmény formájában, a szokásos vivőanyagok, illetve adalékanyagok hozzátételével. A kivonatokat tetszés szerint tisztíthatjuk a szokásos módszerekkel, amilyen például a dialízis, a kromatográfia és egyéb módszerek.

A találmányt a továbbiakban a megvalósítási lehetőségeket bemutató példák révén ismertetjük:

1. példa

285 ml vizet adunk 3 g Astragalus gyökérből, 3 g Cinnamomum kéregből, 3 g Rehmannia gyökérből, 3 g Paeonia gyökérből, 3 g Cnidium gyökér'örzsből, 3 g Atractylodes lanceae gyökértörzsből, g Angelica gyökérből, 3 g Ginseng gyökérből, 3 g Hoelenből és 1,5 g Glycyrrhiza gyökérből álló nyers gyógynövénykeverékhez, és 100 ’C-on egy órán át extraháljuk. A kivonatot szűrjük, és por’asztásos szárítással nyerjük a 2,3 g száraz, por alakú kivonatot.

2. példa

142,5 ml vizes alkoholt adunk az 1. példában leírt összetétel szerinti nyers gyógynövények keverékéhez, és 70 ’C-on 30 percig visszafolyatás közben extraháljuk. A kivonatot szűrjük, és az 1,9 g száraz kivonat előállítása céljából szárítjuk.

A következő kísérleti adatok a találmány szerinti kiegészítő adalék hatását mutatják, azaz a mitomicin C és a doxorubícin-hidroklorid daganatellenes aktivitásának növelését, és a leukopenia enyhítését. Ezen adatok azt is szemléltetik továbbá, hogy a találmány szerinti kiegészítő adalék meggátolja a testsúlyvesztést, és csökkenti a toxicitás okozta halálozást.

1. kísérlet

4-4,5 hetes, hím, BDF, (C57BL/6 DBA/2) fajtájú egereket intraperitoneálisan 1 x 10® mennyiségű, Ρ-388-as leukémia-sejtekkel oltottunk be a 0. napon. Az 1. és a 2. példában leírtak szerint nyert találmány szerinti kiegészítő adalék élettartamot növelő hatását összevetettük a mitomicin C és a

187 103 doxorubicin-hidroklorid hasonló hatásával, illetve azok és a kiegészítő adalék együttes hatásával.

Fiziológiás nátrium-klorid-oldatban oldott 3 mg/kg mitomicin C-t, illetve 2,5 mg/kg doxorubicin-hidrokloridot adtunk intraperitoneálisan az 1. és a 7. napon. Az 1. és a 2. példa szerint nyert kiegészítő adalékot desztillált vízben oldva adagoltuk gyomorszondán át, 2 g/kg napi adagban, naponta egyszer, az 1. naptól kezdve, a kísérlet egész tartama alatt.

Az eredményeket az 1. és a 2. táblázat szemlélte-. ti.

Az 1. táblázat a mitomicin C, az 1. és a 2. példa szerint nyert kiegészítő adalék és ezek kombinációjának hatását mutatja a Ρ-388-as leukémia-sejtekkel beoltott egerek átlagos élettartamára. A 2. táblázat a doxorubicin-hidroklorid hasonló hatását mutatja.

Amint azt az 1. és a 2. táblázatból láthatjuk, a találmány szerinti kiegészítő adalék önmagában nem rendelkezik daganatellenes hatással, azonban rendkívül megnöveli a mitomicin C és a doxorubicin-hidroklorid daganatellenes aktivitását, kombinált kezelés esetén.

1. táblázat

A mitomicin C, az 1. és a 2. példa szerint nyert, találmány szerinti kiegészítő adalék és ezek kombinációjának hatása a Ρ-388-as leukémia-sejtekkel beoltott egerekre.

Kezelt csoport	Átlagos élettartam (napok)	T/C* (%)
kontroll	9,8	100
az 1. példa szerint nyert, találmány szerinti kiegészítő adalék (1)	10,6	108
a 2. példa szerint nyert, találmány szerinti kiegészítő adalék (2)	10,1	103
mitomicin C (MMC)	14,4	147
MMC+(1)	21,0	214
MMC + (2)	19,8	202
^XT/C(%)
átlagos élettartam (kezelt csoport)	xlOO
átlagos élettartam (kontroll csoport)

2. táblázat

A doxorubicin-hidroklorid, az 1. és 2. példa szerint nyert, találmány szerinti kiegészítő adalék és ezek kombinációjának hatása a Ρ-388-as leukémiasejtekkel beoltott egerekre.

Kezelt csoport	Átlagos élettartam (napok)	T/C* (7o)
kontroll	11,4	100
az 1. példa szerint nyert, találmány szerinti kiegészítő adalék (1)	11,0	96
a 2. példa szerint nyert, találmány szerinti kiegészítő adalék (2)	11,2	98
doxorubici n-hidroklorid (DHC1)	18,3	161
DHC1 + (1)	24,0	211
DHCl + (2)	22,4	196
^XT/C(%) ⁼ átlagos élettartam (kezelt csoport)	xlOO
átlagos élettartam (kontroll csoport)

2. kísérlet

Az 1. és 2. példa szerint nyert, szárított gyógynövénykivonat hatását vizsgáltuk a mitomicin C okozta leukopeniára és testsúlycsökkenésre} 4-4,5 hetes, BDFj fajtájú, hím egereken, melyek fehérvérsejtszáma a normál tartományon belül volt.

A mitomicin C-t 3 mg/kg-os adagban intraperitoneálisan adtuk az 1. és a 7. napon. Az 1. és 2. példa szerint nyert, por alakú gyógynövénykivonatot 2 g/kg napi adagban, szájon át adtuk, az 1. naptól kezdve 17 napon keresztül, naponta egyszer. A kísérlet tartama alatt naponta mértük a fehérvérsejtszámot és a testsúlyt.

Az eredményeket az 1. és a 2. ábra szemlélteti. Az 1. ábra az 1. és 2. példa szerint nyert gyógynövénykivonat hatását mutatja a mitomicin C által okozott leukopeniára. A 2. ábra az 1. és 2. példa szerint nyert gyógynövénykivonat hatását szemlélteti a mitomicin C által okozott testsúlycsökkenésre. Amint azt az 1 és a 2. ábrából láthatjuk, a mitomicin C és a találmány szerinti kiegészítő adalék kombinációja hatékonyan enyhíti a leukopeniát és a testsúlycsökkenést.

3. kísérlet

Az 1. és 2. példa szerint nyert, szárított gyógynövénykivonat hatását vizsgáltuk 5 mg/kg egyszeri adagban, önmagában adott doxorubicin-hidroklorid által okozott leukopeniára és testsúlycsökkenésre, 4-4,5 hetes, BDF_X fajtájú, hím egereken, melyek fehérvérsejtszáma a normál tartományon belül volt. Az 1. és 2. példa szerint nyert gyógynövényeket szájon át adtuk, 2 g/kg-os napi adagban, naponta egyszer, a kísérlet egész tartama alatt.

Az eredményeket a 3. ábra szemlélteti. A 3. ábra az 1. és 2. példa szerint nyert gyógynövénykivonat hatása; mutatja a doxorubicin-hidroklorid által okozolt leukopeniára. Amint azt a 3. ábrából láthatjuk, a találmány szerinti kiegészítő adalék elősegíti a doxorubicin-hidroklorid által okozott leukopenia javulását.

187 03

4. kísérlet

A mítomicín C és a találmány szerinti kiegészítő adalék kombinációjának hatásait vizsgáltuk 4-4,5 hetes, BDFj fajtájú, hím egereken. A mitomicin C-t egyetlen, 9 mg/kg-os intraperitoneális adagban, vagy pedig az 1., a 4. és 7. napon ismételt, 3 mg/kgos napi intraperitoneális adagban alkalmaztuk. A fenti 1. és 2. példa szerint nyert, száraz gyógynövénykivonatot 2 g/kg-os napi adagban, szájon át alkalmaztuk, az 1. naptól kezdve, a kísérlet egész tartama alatt, naponta egyszer.

Az eredményeket a 4. és az 5. ábra szemlélteti. A 4. ábra az 1, és 2. példa szerint nyert gyógynövénykivonat hatását mutatja az egyetlen, 9 mg/kg dózisú mitomicin C utáni túlélés görbéjére. Az 5. ábra a gyógynövénykivonat hatását szemlélteti az ismételten adagolt, 3 mg/kg dózisú mitomicin C utáni túlélés görbéjére. Amint azt a 4. és az 5. ábrából láthatjuk, a mitomicin C-vel és a találmány szerinti kiegészítő adalékkal végzett kezelés hatékonyan késlelteti vagy csökkenti a mitomicin C toxicitása miatti halálozást.

A találmány szerinti kiegészítő adalék akut toxicitását ddY fajtájú, hím egereken és Wistar fajtájú, hím patkányokon vizsgáltuk. Az 1. és 2, példa szerint nyert gyógynövénykivonat 15 mg/kg-os adagban, szájon át alkalmazva nem okozott halálos szövődményt. Következésképpen, a találmány szerinti kiegészítő adalék toxicitása igen alacsony, tehát biztonságos szernek tekinthető.

Tekintetbe véve a kísérleti adatokat és az akut toxicitást, a találmány szerinti kiegészítő adalék hatékony adagja felnőtteknek általában 2-10 g, naponta háromszor, szájon át alkalmazva, de a dózis függ az életkortól, a testsúlytól és a betegség súlyosságától is. A találmány szerinti kiegészítő adalék alkalmazható külön, vagy adható mitomicin C-vel, illetve doxorubicin-hidrokloriddal együtt.

Klinikai vizsgálat

A találmány szerinti kiegészítő adalék klinikai vizsgálatát rákos betegek sebészeti műtété után végeztük.

A vizsgálat célja az volt, hogy megfigyeljük a találmány szerinti kiegészítő adalék hatását a fizikai erőnlét műtét utáni helyreállására és a rákellenes kemoterápiás szerek mellékhatásainak megelő zésére.

Kettős vak-tesztet, úgynevezett borítékos mód szert alkalmaztuk, a találmány szerinti kiegészítő adalékot és daganatellenes szert együtt adva A csoport -, illetve a daganatellenes szert önmagában alkalmazva, a találmány szerinti kiegészítő adalék nélkül - B csoport

A találmány szerinti kiegészítő adalékot a rákműtét után 1-2 héttel kezdtük alkalmazni, amikor már a szájon át vagy a végbélen keresztül történő adagolás lehetséges^ 7,5 g napi dózisban, 3 külön alkalommal, étkezés előtt, 12 héten keresztül. Ugyanezen időszak alatt mitomicin C és egyéb kezelés is folyt. Mindegyik klinikai tünetet ellenőriztük a műtét előtt és után, valamint a gyógynövény4 kivonat adásának 0. napján, majd ezután minden

4. héten, 20 héten keresztül. A kontroll B csoport kezelése ugyanilyen módon történt.

3. táblázat

Betegség	A csoport B csoport
nyelőcsőrák	2	2
gyomorrák	4(1)	3
Vater-papilla-rák	1
hasnyálmirigyrák		1*
vastagbélrák	1	2
emlőrák		1
bélelzáródás	1
krónikus hasnyálmirigy-		1
gyulladás összesen:	9 (1)	10

( ) = kizárt eset * — nem-kifekélyesedő forma

A 4. táblázat a betegek életkorát mutatja.

4. táblázat

	A csoport (9 eset)	B csoport (10 eset)
életkor	53-77	38-83
átlag	64	61
Az 5. táblázat a nemek szerinti megoszlást mu-
tatja.	5. táblázat
A csoport B csoport
férfi	8	5
nő	1	5

Klinikai hatások

1. Szubjektív és objektív tünetek (6. táblázat).

6. táblázat

A csoport B csoport (9 eset) (10 eset) étvágynővekedés 9 (100) 7 (70) bágyadtság csökkenése 8 (89) 6 (60) bőrkiütés 2 (22) 3 (30) szájnyálkahártya gyulla- 4 (44) 6 (60) dás szomjúság 2 (22) 5 (50) szívdobogás-érzés 1 (11) 2 (20) szédülés 1 (11) 4 (40)

0-'7o

Amint azt a 6. táblázatból láthatjuk, az A csoportnál javulás figyelhető meg.

187 103

2. Testsúly változás (10. ábra)

A B csoportban lassú testsúlynövekedés volt megfigyelhető a műtét utáni 4. héttől kezdődően, azonban a 20. hét után sem nyerték vissza a betegek a műtét előtti testsúlyukat. Ezzel ellentétben, az A csoportban a találmány szerinti segítő adalék alkalmazásának kezdete utáni 12. héten a betegek testsúlya visszatért a műtét előtti szintre. Tehát a találmány szerinti kiegészítő adalék hatékonyan védi ki a mitomicin C és más daganatellenes kemoterapeutikumok által okozott testsúlycsökkenést.

3. összfehérje és albumin (11. ábra)

Az összfehérjében és az albumin mennyiségében nem volt különbség az A és a B csoport között.

4. Elektrolit-változások (12. ábra)

Az elektrolit-változások tekintetében az A csoportnál a nátrium-szint magasabb, a kálium-szint pedig alacsonyabb volt.

J. Vér-kreatinin (13. ábra)

A vér kreatinin-szintje mind az A, mind pedig a B csoportban emelkedetta műtét után, de nem volt különbség a két csoport között.

, 6. A GOT és a GPTváltozása (6. ábra)

A GOT-t és a GPT-t a májfunkció vizsgálata céljából határoztuk meg. Egyik csoportnál sem volt megfigyelhető jelentős változás.

7. Vörösvér sejtszám és hemoglobulin-szint (7. ábra)

A vörösvérsejtszám és a hemoglobulin-szint mind az A, mind a B csoportban magasabb volt, de különbség nem volt a két csoport között.

8. Fehérvérsejtszám és thrombocy faszám (8. ábra)

A fehérvérsejtszám a kemoterapeutikumok adásának időszakában a B csoportban csökkent, az A csoportban enyhe csökkenés volt megfigyelhető. Az eredmények alapján úgy tűnik, hogy a találmány szerinti kiegészítő adalék kivédi a leukopeniát.

A Thrombocytaszámban nem volt különbség a két csoport között.

9. Lymphocytaszám és y-globulin-szint (9. ábra) t .

A lymphocytaszám enyhén emelkedett volt az A csoportban, a B csoporthoz képest. A γ-globulin-szintben nem figyeltünk meg jellegzetes változásokat.

A köve tkező példáink a találmány szerinti készítményeken szemléltetik, de nem korlátozó jellegűek.

I. példa

Az 1. és 2. példa szerint nyert 200 g gyógynövénykészítményt - a továbbiakban egyszerűen gyógynövény készítménynek nevezzük -, összekevertük 89 g tejcukorral és 1 g magnézium-sztearáttal. A keverékből 1-1 tablettát előállító (kézi) tablettázó gép segítségével olyan durva (natív) tablettákat állítottunk elő, melyekből azután oszcillációs géppel granulátumokat sajtoltunk, majd ezeket megszitáltuk, hogy 20-50-es szemcsenagyságú granulátumokat nyerjünk.

A granulátumokat a mitomicin C-vel, illetve a doxorubicin-hidrokloriddal végzett kezelés kiegészítő adalékaként alkalmaztuk, 3-15 g-os egyszeri adagbar - ami 2,07-10,34 g találmány szerinti gyógynövénykészítménynek felel meg -,' napi 3 alkalomul al, szájon át, a kezelés egész tartama alatt.

II. példa

200 g gyógynövénykészítményt összekevertünk 20 g finom kristályos cellulózzal és 5 g magnéziumsztearáttal. A keverékből 1-1 tablettát előállító (kézi) tablettázó gép segítségével 7 mm átmérőjű, 225 mg súlyú tablettákat készítettünk. Egy tabletta 200 mg gyógynövénykészítményt tartalmaz. Egyszeri adagként 10-50 tablettát alkalmazunk szájon át, naponta háromszor.

III.'példa

500 mg gyógynövénykészítményt kemény kapszulába helyeztünk. Ebből a kapszulából egyszerre

4-20 darabot adtunk, naponta három alkalommal.

IV. példa

200 g gyógynövénykészítményt összekevertünk 100 mg mitomicin C-vel, 20 g finom kristályos cellulózzal és 5 g magnézium-sztearáttal. A keverékből 1-1 tablettát előállító tablettázó gép segítségével 7 mm átmérőjű, 225 mg súlyú tablettákat készítettünk. Egy tabletta 200 mg gyógynövénykészítményt és 0,1 mg mitomicin C-t tartalmaz.

Egyszeri adagként 10-50 tablettát adtunk, naponta három alkalommal.

Claims

Szabadalmi igénypontok

1. Eljárás a mitomicin C és a doxorubicinhidroklorid daganatellenes aktivitását növelő és mellékhatásukat csökkentő gyógyászati adalék előállítására azzal jellemezve, hogy 2,0-4,0 súlyrész Astragalus membranaceus gyökeret, 2,0-4,0 súly5

-5187 103 rész Cinnamomum cassia kérget, 2,0-4,0 súlyrész Rehmannia glutinosa gyökeret, 2,0-4,0 súlyrész Paeonia lactiflora gyökeret, 2,0-4,0 súlyrész Cnidium officinale gyökértől zset, 2,0-4,0 súly rész Atractylodes lancea gyökértörzset, 2,0-4,0 súlyrész ⁵Angelica acutiloba gyökeret, 2,0-4,0 súlyrész Panax ginseng gyökeret, 2,0-4,0 súlyrész Poria cocos kéregtelenített szárat és 0,5-2,5 súlyrész Glycyrrhiza glabra vagy uralensis gyökeret vagy keveréküket vízzel vagy vizes szerves oldószerrel, előnyösen vizes etanollal, legfeljebb 100 °C-on extrahálunk, majd - szükséges esetben az egyes növényrészek kivonatainak összekeverése után - az egyesített kivonatot adott esetben szárítás után a gyógyszerkészítésben szokásos hordozó-, hígító-, töltő- és/vagy ¹ θ egyéb segédanyagokkal együtt készítménnyé feldolgozzuk.
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy 2,5-3 súlyrész Astragalus membranaceus gyökeret, 3 súlyrész Cinnamomum cassia kérget, 3 súlyrész Rehmannia glutinosa gyökeret, 3 súlyrész Paeonia lactiflora gyökeret, 3 súlyrész Cnidium officinale gyökértörzset, 3 súlyrész Atractylodes lancea gyökértörzset, 3 súlyrész Angelica acutiloba gyökeret, 3 súlyrész Panax ginseng gyökeret, 3 súlyrész Poria cocos szárat és 1,5 súlyrész Glycyrrhiza glabra vagy uralensis gyökeret extrahálunk.
3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy az extrahálást vizes etanollal végezzük.