CN1745769A - 一种含有黄芪的药物组合物的新用途 - Google Patents
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Abstract
本发明属医药领域，具体而言是涉及一种药物组合物在制备抗氧化药物中的应用。该药物组合物是由黄芪、丹参、三七、降香制成。本发明经过体外抗氧化活性试验，结果证实该药物组合物在一定浓度条件下，具有较强的抗氧化活性，抗氧化的新用途可用于冠心病、心绞痛的治疗，其不但可以“治标”，如增加冠脉流量、缓解心肌缺血等，而且还可“治本”即通过抗氧化作用减轻自由基对血管内皮细胞和心肌细胞的损伤等。
Description
技术领域
本发明属医药领域，具体而言是涉及一种药物组合物在制备抗氧化药物中的应用。
背景技术
冠心病、心绞痛是我国的常见病。氧化压力和高血压是引起冠状动脉损害，从而导致冠心病、心绞痛甚至心肌梗塞的重要原因。冠心病、心绞痛的临床表现属于今医学“胸痹’、“真心痛”等范畴，中医认为其发病机制有数种，有为“心虚邪干而痛者”；有为“阳气郁伏而痛者”；有为“血因邪泣在络不行而痛者”；有为“血虚而痛者，有为痰湿阻抑而痛者”；总之，都属于“气虚血瘀，血行不畅”所致。根据这一特点，有人研制了由黄芪、丹参、三七、降香等四味中药组成的药物组合物制剂。
黄芪是中医补气要药，味甘，微温，具有补气固表，托疮生肌、利水的功效，主治气血虚弱、自汗、久泻脱肛、子宫脱垂、肾炎浮肿、蛋白尿、糖尿病、慢性溃疡等症。近年来临床用来治疗高血压和急慢性肾炎。现代研究发现，黄芪的这种“补气”作用主要表现在增强免疫力、改善心功能和血液微循环等方面。近来国内外研究表明，黄芪具有降血压的作用。黄芪化学成分复杂，包括皂苷类、多糖类、黄酮类以及各种氨基酸、微量元素和胆碱、β-谷甾醇、甜菜碱等。以往的研究结果表明，黄芪对血压有一定的影响，且黄芪的降压作用同血管的扩张、影响肾素-血管紧张素-醛固酮系统以及利尿、增加一氧化氮释放等有关，并且目前认为β-氨酪酸、β-氨基丁酸、黄芪皂苷等是其主要的降压成分。
丹参(Salvia miltiorrhiza bunge)为唇形科多年生草本植物，药用其根茎部，药用成份大略分为两大部分：脂溶性成份和水溶性成份。中药理血药，特别是活血化瘀类药物是历代医家所常用的药物，本类药物具有活血调经、破血消癥、化瘀止痛、消肿生肌的功效，现代药理学证实，理血药具有扩展冠状动脉、增加冠脉流量，降低心肌耗氧，降低外周血管阻力，抑制血小板聚集，改善微循环，抑制血栓形成，增强纤维蛋白溶解活性，抗凝血系统，改善微循环，降压，缓解平滑肌痉挛等作用。
三七属于止血类中药。中医学认为其具有散淤止血，消肿定痛的功能，既止血又活血。现代药理研究证明三七既有止血作用又有抗凝血作用。止血作用包括缩短出凝血时间、增加血小板数量并使其出现伸展伪足、聚集、脱颗粒等现象，还能降低毛细血管通透性。显示抗凝血作用的是三七中的部分成分：三七根总皂式、三七人参二醇型皂求和三醇型皂式，它们均能抑制人和兔血小板的聚集。三七总皂式可促进血管内皮细胞分泌组织型纤溶酶原(t-N)，阻止血栓的形成。
降香味辛，温，归心、肝经。具有活血散瘀，止痛定痛的功效；其化学成分主要含挥发油、油中主成分有β-没药烯、反式-β-金合欢烯、反式-苦橙油醇等。目前主要应用于行气活血，止痛，止血。用于脘腹疼痛、肝郁胁痛、胸痹刺痛、跌扑损伤、外伤出血。
由上述四味中药组成的药物组合物具有行气活血，化淤止痛的功能；其临床适应症为冠心病、心绞痛。目前关于该药物组合物的研究主要集中在冠心病、心绞痛的研究上，关于由黄芪、丹参、三七、降香组成的药物组合物在抗氧化药物中的应用尚无报道。本发明正是在此基础上对该药物组合物进行试验，以发现该药物的新用途。
发明内容
本发明的目的在于提供一种药物组合物的新用途，具体而言是提供一种药物组合物在制备抗氧化药物中的新用途。
大量实验研究已证明氧化压力能导致心血管系统的损伤。对心脏而言，主要表现为损害冠状动脉内皮细胞，导致其功能障碍，并促进冠状动脉粥样硬化的发生，使冠状动脉管腔狭窄，引起心绞痛甚至心肌梗塞；氧化压力还可直接引起心肌细胞损伤，其主要机制是通过加强心肌细胞膜两侧的Na+/ca2+交换，引起细胞内ca2+超载和心肌细胞过度挛缩。
体内氧化压力主要来源于超氧阴离子的生成。在生理情况下，血管内皮细胞、平滑肌细胞以及单核细胞均可产生一定量的超氧阴离子以及羟基(OH·)、过氧化氢等自由基。在高血压及内皮细胞功能障碍时，体内自由基生成增多，与其他致病因素共同作用于冠状动脉及心肌，引起冠心病。
本发明经体外抗氧化活性实验，证实本发明药物组合物在冠心病、心绞痛的治疗中不但能“治标”，如增加冠脉流量、缓解心肌缺血等，又能“治本”，即通过抗氧化作用减轻自由基对血管内皮细胞和心肌细胞的损伤等。
所述的本发明药物组合物的组成为：黄芪、丹参、三七、降香；优选的本发明药物组合物的组成为配比为：黄芪22.2％～66.8％、丹参11.6％～33.4％、三七2.5％～13.5％、降香14.5％～44.3％；进一步优选的本发明药物组合物的组成为配比为：黄芪30.8％～57.2％、丹参15.4％～28.6％、三七3.5％～6.5％、降香20.6％～38.2％。；最佳的本发明药物组合物的组成为配比为：黄芪44.7％、丹参26.7％、三七6.3％、降香22.3％；最佳的本发明药物组合物的组成为配比还可以为：黄芪42.2％、丹参23.8％、三七4.5％、降香30.5％。
本发明药物可以采用中药制剂常规方法制备。本发明药物有效成分的制备可以采用以下方法：水提法、水提醇沉法、萃取法、浸渍法、渗漉法、回流提取法、连续回流提取法、大孔树脂吸附法制备。例如，可将这些原料药研成粉末混合均匀制成散剂冲服；也可以将这些药物一起水煎，然后浓缩水煎液，制成口服液；但是为了使该药物各原料药更好地发挥药效，优选对原料采用如下工艺提取，但是这不能限制本发明的保护范围。
本发明药物组合物的制备方法如下：
(1)按重量百分比称量出下列原料：黄芪22.2％～66.8％，丹参11.6％～33.4％，三七2.5％～13.5％，降香14.5％～44.3％；
(2)取经粉碎的丹参、三七，用水煎煮，过滤，滤液浓缩后醇沉，从上清液中回收乙醇，浓缩成浸膏，即丹参三七浸膏；
(3)另取经粉碎的黄芪，用水煎煮、过滤，滤液浓缩后醇沉，上清液浓缩后再醇沉，从上清液中回收乙醇，浓缩成浸膏，即黄芪浸膏；
(4)再取降香，加水，回流提取，收集挥发油；
(5)取上述丹参三七浸膏、黄芪浸膏及挥发油和适当辅料混和均匀后，制成本发明的中药制剂。
本发明药物组合物可制成口服制剂和注射剂和外用剂形式；优选制成口服制剂形式，所制成的剂型可以是：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、溶液剂、软膏剂、硬膏剂、喷雾剂、滴丸剂；优选的是滴丸、胶囊、片剂、冲剂、散剂、口服液制剂形式。
以上各组成中的单味中药，尤其是佐药、使药或佐药与使药，可以单独或同时被适当的具有相同药性、功效的中药替换，如该药物组合物中的黄芪可以用人参、党参、山药、薯蓣、太子参、黄精、甘草、白术替换；丹参或三七可以用川芎、红花、葛根、银杏叶、水蛭、灯盏花、黄山药、赤芍、刺五加、半夏、益母草、桃仁、当归中的一种或几种替换；降香可以用冰片或苏合香替换。替换后中药制剂及其药物作用不变。
本发明的药物在使用时可根据病人的情况确定用法用量，每日各生药用量以国家药典用药量为准，不超过药典规定量。
为了更好地理解本发明，下面用本发明药物组合物抗氧化活性测定的试验结果，说明其在制药领域中的新用途。本发明药物组合物按照实施例1方法制备，为方便叙述，以下将本发明药物组合物称为芪参益气滴丸。
一、邻苯三酚红(pyrogallol red，PR)试验
1.实验材料
药物及试剂：芪参益气滴丸，天津天士力集团研究院提供；邻苯三酚红：Sigma公司；次氯酸钠：Sigma公司
2)实验仪器：紫外分光光度计，Beckman Du6408型。
2、实验方法
精确称取4mg PR溶于100mM PH7.4的磷酸缓冲液(K2HPO4-KH2PO4)中即成1mM的PR溶液，再用上述磷酸缓冲液按1∶10的比例稀释1mM的PR溶液，即得100μM PR溶液。在试管中按下列方案分别加入各种试剂及待测药物：
空白管：1ml磷酸缓冲液
PR溶液管：1ml 100μM PR溶液
样品对照管：100ul 1mM PR溶液+900μl磷酸缓冲液
样品管：100ul 1mM PR溶液+800ul磷酸缓冲液+100μl待测药物溶液(样品管备同样的2管，分别加入待测药物)
在室温下放置10分钟后，在样品对照管c和样品管d中分别加入125μM次氯酸钠混匀(a、b管中分别加入等体积的磷酸缓冲液)，然后从所有试管(a，b，c，d)中各取250ul溶液分别加入750μl磷酸缓冲液，混匀后测定在542nm波长处的紫外吸收值(Abs542)。
待测药物为浓度为2mg/ml或10mg/ml的芪参益气滴丸水溶液。
3.计算
PR试验值＝(样品管Abs542-样品对照管Abs542)/(PR溶液管Abs542-样品对照管Abs542)×100％
(PR试验值代表抗氧化活性强弱，其确切合义为某待测药物在某浓度时可使PR分子免于被氧化的百分比。例如：某药物的PR值为40％，则表示该药物在某浓度时具有使40％的PR分子免于被氧化的抗氧化活性。)
4.实验结果：
芪参益气滴丸在浓度为0.2mg/ml及1mg/ml时其PR值分别为39％和65.5％，呈现较强的抗氧化活性。
表1为芪参益气滴丸PR试验数据
| 0.2mg/ml芪参益气滴丸 | 1mg/ml芪参益气滴丸 | ||||||||||
| Abs542 | Abs542 | PR试验值 | Abs542 | PR试验值 | |||||||
| 1 | 2 | 1 | 2 | 均值 | 1 | 2 | 1 | 2 | 均值 | ||
| 空白管 | 0.046 | ||||||||||
| PR溶液管 | 0.718 | ||||||||||
| 样品管 | 0.308 | 0.309 | 0.39 | 0.39 | 39％ | 0.485 | 0.487 | 0.65 | 0.66 | 65.5％ | |
二、ABTS试验
1.实验材料
药物及试剂芪参益气滴丸(按实施例1方法制备)：天津天士力集团研究院提供
ABTS(2，2’-azinobis[3-ethylbenzothiazoline 6-sulphonatel]、Trolox、K2SO7：Sigma公司
实验仪器：紫外分光光度计，Beckman DU6408型。
2.实验方法
称取5mg Trolox溶于10ml三蒸水中得2nM Trolox标准溶液(或取0.0176g维生素C(vit C)溶于100ml三蒸水中得1mM vitC标准溶液)；取0.03841g ABTS溶于10ml三蒸水中得7mM ABTS溶液；取0.03311g K2SO7溶于5ml水中得2.45mM K2SO7。取0.2ml 2.45mM K2SO7加入9.8ml 7mMABTS中，混匀后避光置室温中12小时，取上述混合液1ml加入79ml PH 7.4的磷酸缓冲液中，即为ABTS+溶液。按以下方案在733nm波长处测定紫外吸收值(Abs733)：
空白管：2ml磷酸缓冲液
基础吸收管：在1960μl或1980μl或1990μl ABTS+溶液中分别加入40ul或20μl或10ul磷酸缓冲液
标准管：在1960μl或1980μl或1990μl ABTS+溶液中分别加入40μl或20μl或10ul 1mM Trolox(或1mM VitC)
样品管：在1960μl或1980μl或1990μl ABTS+溶液分别加入40μl或20μl或10μl 1mg/ml的芪参益气滴丸溶液
各管均在管内溶液总量达2ml后的3分钟时测定Abs733。样品管备同样的二管，分别测定从Abs733。
待测药物约请除自由基能力以“与Trolox相当的抗氧化活性(Trolox equivalentantioxidant capacity，TEAC)”表示。
3.计算
I＝1-[(样品管Abs733-空白管Abs733)/基础吸收管Abs733]
II＝1-[(标准管Abs733-空白管Abs733)/基础吸收管Abs733]
TEAC＝(I/II)×药物的稀释系数，本实验的药物稀释系数为5。
4.实验结果
在上述实验条件下，当芪参益气滴丸的终浓度为0.05mg/ml、0.1mg/ml和0.2mg/ml时，其抗氧化活性分别是已知抗氧化剂Vitc的3.94倍、7.09倍和12.3倍，是Trolox的2.81倍、5.05倍和8.77倍，呈一定的量效关系。
表2为芪参益气滴丸ABTS试验结果
| Abs733 | 样品值 | 标准品值 | TEAC | ||||||
| 1 | 2 | 1 | 2 | 平均值 | VitC | Trolox | |||
| 基础吸收管 | 0.8021 | ||||||||
| 标准管(VitC) | 40ul | 0.2879 | 0.647 | ||||||
| 标准管(Trolox) | 40ul | 0.2901 | 0.644 | ||||||
| 空白管 | 40ul | 0.005 | |||||||
| 样品管 | 40ul | 0.5082 | 0.5094 | 0.373 | 0.371 | 0.372 | 12.32 | 8.77 | |
| 标准管(VitC) | 20ul | 0.5412 | 0.331 | ||||||
| 标准管(Trolox) | 20ul | 0.5470 | 0.323 | ||||||
| 空白管 | 20ul | 0.0043 | |||||||
| 样品管 | 20ul | 0.6314 | 0.6389 | 0.218 | 0.209 | 0.214 | 7.09 | 5.05 | |
| 标准管(VitC) | 10ul | 0.6851 | 0.151 | ||||||
| 标准管(Trolox) | 10ul | 0.6360 | 0.212 | ||||||
| 空白管 | 10ul | 0.0041 | |||||||
| 样品管 | 10ul | 0.7010 | 0.7021 | 0.131 | 0.130 | 0.131 | 4.34 | 3.09 | |
上述体外抗氧化活性实验结果证实，芪参益气滴丸在一定的浓度条件下，具有较强的抗氧化活性，而正其抗氧化活性分别是已知抗氧化剂VitC的4至12倍，是Trolox的3至9倍。本发明复方丹参滴丸抗氧化新用途可用于冠心病、心绞痛的治疗，其不但能“治标”如增加冠脉流量、缓解心肌缺血等，而且能“治本”即通过抗氧化作用减轻自由基对血管内皮细胞和心肌细胞的损伤等。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做一步说明，下述各实施例仅用于说明本发明而并非对本发明的限制。
实施例1
取黄芪86.5g(65.6％)、丹参21.3g(16.1％)、三七3.5g(2.7％)、降香20.6g(15.6％)、辅料聚乙二醇-6000 30g；将经粉碎的丹参、三七，水煎煮2次，每次加7倍量水，每次2小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至900ml，加入95％乙醇，使醇浓度达到70％，静置12～24小时，滤过，回收乙醇，浓缩成相对密度为1.32～1.38(50～60℃)的浸膏；
将经粉碎的黄芪，加水煎煮2次，每次加6倍量水，依次提取2小时、1小时，合并滤液，浓缩至1500ml左右时，加95％乙醇使醇浓度为60％，静置12～24小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至400ml左右时，加95％乙醇使醇浓度为80％，静置12～24小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩成相对密度为1.32～1.38(50～60℃)的浸膏；取降香，加5倍量水，回流提取5小时，收集挥发油；取上述丹参三七浸膏、黄芪浸膏及浸膏总重量2.5倍的聚乙二醇-6000，水浴溶化，化匀后，加入降香挥发油，混匀，即制成本发明的中药制剂。若要制成滴丸，可将上述制剂移至滴丸机中，保温75～85℃，制成1000粒滴丸。
实施例2
取黄芪40.6g(30.0％)、丹参44.8g(33.1％)、三七11.2g(8.3％)、降香38.6g(28.6％)，按常规片剂制备方法制成本发明的中药制剂。
实施例3
取黄芪77.3g(57.1％)、丹参22.8g(16.8％)、三七4.8g(3.6％)、降香30.5g(22.5％)、辅料聚乙二醇-6000 28g。按实施例1的制备工艺制成本发明的中药制剂。
实施例4
取黄芪42.3g(31.0％)、丹参39.2g(28.7％)、三七8.2g(6.0％)、降香46.8g(34.3％)、辅料聚乙二醇-6000 25g。按实施例1的制备工艺制成本发明的中药制剂。
实施例5
取黄芪65.2g(44.7％)、丹参38.9g(26.7％)、三七9.3g(6.3％)、降香32.5g(22.3％)、辅料聚乙二醇-6000 40g。按实施例1的制备工艺制成本发明的中药制剂。
实施例6
取黄芪56.2g(42.2％)、丹参32.5g(23.8％)、三七6.2g(4.5％)、降香41.6g(30.5％)、辅料聚乙二醇-6000 22g。按实施例1的制备工艺制成本发明的中药制剂。
实施例7
取黄芪36.5g(31.3％)、丹参32.4g(27.7％)、三七6.2g(5.3％)、降香41.7g(35.7％)、辅料聚乙二醇-6000 22g。按实施例1的制备工艺制成本发明的中药制剂。
实施例8
取黄芪65.6g(44.5％)、丹参25.8g(17.5％)、三七9.5g(6.5％)、降香46.4g(31.5％)，按常规颗粒剂制备方法制成本发明的中药制剂。
实施例9
取黄芪35.5g(22.9％)、丹参50.8g(32.8％)、三七16.3g(10.5％)、降香52.3g(33.8％)、辅料聚乙二醇-6000 35g。按实施例1的制备工艺制成本发明的中药制剂。
实施例10
取黄芪35.5g(22.9％)、丹参50.8g(32.8％)、三七16.3g(10.5％)、降香52.3g(33.8％)粉碎，加入适量辅料，制成散剂。
实施例11
取黄芪30g、丹参55g、三七17g、降香50g、淀粉35g，按实施例1的制备工艺制成本发明的中药制剂，加入适量辅料，按胶囊制备工艺制成胶囊制剂。
实施例12
取黄芪80g、丹参25g、三七2g、冰片2g辅料聚乙二醇-6000 30g；
将经粉碎的丹参、三七，水煎煮2次，每次加5倍量水，每次1.5小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至800ml，加入85％乙醇，使醇浓度达到60％，静置15～24小时，滤过，回收乙醇，浓缩成相对密度为1.25～1.38(40～60℃)的浸膏；
将经粉碎的黄芪，加水煎煮2次，每次加6倍量水，依次提取2小时、1小时，合并滤液，浓缩至1500ml左右时，加95％乙醇使醇浓度为60％，静置12～24小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至400ml左右时，加85％乙醇使醇浓度为80％，静置15～24小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩成相对密度为1.25～1.38(50～60℃)的浸膏；取冰片细粉；取上述丹参三七浸膏、黄芪浸膏及浸膏总重量3倍的聚乙二醇-6000，水浴溶化，化匀后，加入冰片，混匀，即制成本发明的中药制剂。若要制成滴丸，可将上述制剂移至滴丸机中，保温75～85℃，制成1000粒滴丸。
实施例13
取人参40g、丹参50g、三七8g、降香35g，以上四味药物，人参提取方法如同实施例1黄芪的提取方法，其余三味药物提取方法如同实施例的方法，按常规片剂制备方法制成本发明的中药制剂。
Claims (10)
1、一种药物组合物在制备抗氧化药物中的应用，其中所述的药物组合物的组成为：黄芪、丹参、三七、降香。
2、如权利要求1所述的应用，其中所述的药物组合物的组成配比为：黄芪22.2％～66.8％、丹参11.6％～33.4％、三七2.5％～13.5％、降香14.5％～44.3％。
3、如权利要求2所述的应用，其中所述的药物组合物的组成配比为：黄芪30.8％～57.2％、丹参15.4％～28.6％、三七3.5％～6.5％、降香20.6％～38.2％。
4、如权利要求3所述的应用，其中所述的药物组合物的组成配比为：黄芪44.7％、丹参26.7％、三七6.3％、降香22.3％。
5、如权利要求3所述的应用，其中所述的药物组合物的组成配比为：黄芪42.2％、丹参23.8％、三七4.5％、降香30.5％。
6、如权利要求1所述的应用，其特征在于所述的药物组合物是以下述方法制备的：
(1)按重量百分比称量出下列原料：黄芪22.2％～66.8％，丹参11.6％～33.4％，三七2.5％～13.5％，降香14.5％～44.3％；
(2)取经粉碎的丹参、三七，用水煎煮，过滤，滤液浓缩后醇沉，从上清液中回收乙醇，浓缩成浸膏，即丹参三七浸膏；
(3)另取经粉碎的黄芪，用水煎煮、过滤，滤液浓缩后醇沉，上清液浓缩后再醇沉，从上清液中回收乙醇，浓缩成浸膏，即黄芪浸膏；
(4)再取降香，加水，回流提取，收集挥发油；
(5)取上述丹参三七浸膏、黄芪浸膏及挥发油和适当辅料混和均匀后，制成本发明的中药制剂。
7、如权利要求6所述的应用，其中该药物组合物可以是口服制剂和注射剂和外用剂。
8、如权利要求7所述的应用，其中该药物组合物可以是滴丸剂、片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、溶液剂、软膏剂、硬膏剂、喷雾剂。
9、如权利要求1所述的应用，其特征在于该药物组合物是在制备减轻自由基对血管内皮细胞损伤药物中的应用。
10、如权利要求1所述的应用，其特征在于该药物组合物是在制备减轻自由基对心肌细胞损伤药物中的应用。
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