CN114891771A - 一种保护血管内皮的组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提出了一种保护血管内皮的组合物及其制备方法和应用，属于生物工程技术领域。所述组合物中含有枯草芽孢杆菌纤溶酶，所述枯草芽孢杆菌纤溶酶由菌种Bacillus subtilis QK02发酵制得，所述菌种保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO:M203078。本发明提供了一种保护血管内皮的组合物，利用药食同源黄芪、葛根、丹参与具有功效作用的保护血管内皮的组合物作为原料，原料安全，无毒无害，制备成本低。

Description

一种保护血管内皮的组合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及一种保护血管内皮的组合物及其制备方法和应用。
背景技术
血管内皮是一类具有重要功能的细胞群，可分泌大量生物活性物质，广泛参与血管收缩与舒张，血小板功能的调节，血液抗凝与促凝等复杂的生理病理过程。血管内皮细胞(vascular endothelial cells,VECs)可调节血管张力，维持正常的血液流动，维持血管稳态。VECs受到某些因素如高血压、糖尿病、高血脂等的刺激而发生损伤后，会引起VECs功能发生改变及渗透性升高，导致血液中脂质在内皮下沉积。VECs损伤是诸多心脑血管疾病的始动因素，单核细胞会在受损的血管内皮细胞处粘附，并深入到内皮下吞噬沉积的脂质颗粒，成为泡沫细胞，进而形成早期动脉粥样硬化(AS)脂肪斑块。因此，保护VECs成为防治心脑血管疾病的一种有效策略。
枯草芽孢杆菌纤溶酶是一种安全有效、成本低廉、可用于防治心血管疾病的纯天然蛋白酶。可降低血粘度，改善血液循环，软化和增加血管弹性等作用从而间接保护血管内皮。目前还没有以枯草芽孢杆菌纤溶酶为主要成分，且搭配合理，效果好的组合物应用于血管内皮保护的保健品领域的报道。
发明内容
本发明的目的在于提出一种保护血管内皮的组合物及其制备方法和应用，利用药食同源黄芪、葛根、丹参与具有功效作用的保护血管内皮的组合物作为原料，原料安全，无毒无害，制备成本低；同时将保护血管内皮的组合物与具有补气活血功效的黄芪、葛根、丹参进行复配，具有显著的协同作用。
本发明的技术方案是这样实现的：
本发明提供一种保护血管内皮的组合物，所述组合物中含有枯草芽孢杆菌纤溶酶，所述枯草芽孢杆菌纤溶酶由菌种Bacillus subtilis QK02发酵制得，所述菌种保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO:M 203078。
作为本发明的进一步改进，所述枯草芽孢杆菌纤溶酶的制备方法如下：
S1.培养基的制备：将无水葡萄糖，脱脂大豆粉，Na2HPO4·12H2O，NaH2PO4·H2O，MgSO4·7H2O，CaCl2，原料与水按照一定比例配比后在发酵罐中灭菌；
S2.枯草芽孢杆菌纤溶酶的制备：将培养基冷却后加入发酵罐内，接种保藏号为CCTCC NO：M 203078的枯草芽孢杆菌种子液，于发酵设备中发酵；所述接种Bacillussubtilis QK02菌种，发酵后的发酵液经过离心去除菌体，收集上清液，超滤浓缩，浓缩液进行喷雾干燥，得到枯草芽孢杆菌纤溶酶粉末。
作为本发明的进一步改进，由以下原料制备而成：枯草芽孢杆菌纤溶酶，黄芪提取物粉，葛根提取物粉，丹参提取物粉。
作为本发明的进一步改进，由以下原料按重量份制备而成：枯草芽孢杆菌纤溶酶35-45份，黄芪提取物粉20-35份，葛根提取物粉10-25份，丹参提取物粉10-20份。
作为本发明的进一步改进，所述黄芪提取物粉的制备方法具体包括以下步骤：取黄芪原料，加入8-12倍重量的水，80-105℃提取1-3次，每次提取时间2-4小时，提取液过滤，合并，加入4-8倍的70％-90％的乙醇，于60-80℃下回流提取1-3h，提取2-3次；趁热抽滤，合并滤液，减压浓缩得到无醇味浸膏，经过干燥处理，得到黄芪提取物粉。
作为本发明的进一步改进，所述葛根提取物粉的制备方法具体包括以下步骤：取葛根原料，加入8-15倍重量的50％-90％的乙醇，70-100℃提取1-3次，每次提取时间1-6小时，提取液过滤，合并，减压浓缩得到无醇味浸膏，得经过干燥处理，得到葛根提取物粉。
作为本发明的进一步改进，所述丹参提取物粉的制备方法具体包括以下步骤：取丹参原料，加入2-10倍重量的水，60-100℃提取2-6次，每次提取时间0.5-2小时，提取液过滤，合并浓缩，得到丹参提取浓缩液，将丹参提取浓缩液经过干燥处理，得到丹参提取物粉。
本发明进一步保护一种上述保护血管内皮的组合物的制备方法，包括以下步骤：将枯草芽孢杆菌纤溶酶、黄芪提取物粉、葛根提取物粉、丹参提取物粉按比例混合，即得所述保护血管内皮的组合物。
本发明进一步保护一种上述保护血管内皮的组合物在制备血管内皮保护功效的保健食品及药品中的应用。
本发明进一步保护一种枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis QK02菌种，所述菌种保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO:M 203078。
保护血管内皮的组合物是由枯草芽孢杆菌细胞外分泌的高活性纤溶蛋白酶，保护血管内皮的组合物成熟蛋白是275个氨基酸组成的单链蛋白，不含二硫键，分子量为27.7kDa，该酶具有很好的溶栓效果，主要通过直接特异性降解血栓中交联纤维蛋白溶解血栓。也可通过其他间接途径发挥溶栓作用，如刺激组织型纤溶酶原激活剂的释放、激活尿激酶原转化为尿激酶间接发挥溶栓功效、抑制纤溶酶原激活剂抑制剂激发纤溶系统。
黄芪的主要化学成分有黄酮类化合物、皂苷类化合物、黄芪多糖(astragalusmembranaceuspolysaccharide，AMWP)、生物碱、葡萄糖醛酸及多种微量元素等，黄芪多糖和黄芪皂苷均可通过上调紧密连接(tight junctions，TJ)相关蛋白表达、下调细胞黏附分子(cell adhesion molecules，CAM)表达来增加内皮细胞连接的完整性，还可通过抑制细胞内皮素(ET)分泌、增加NO释放、抑制细胞凋亡和促进血管生成中内皮细胞的增殖和迁移等保护内皮细胞功能。
葛根的主要成分有异黄酮类、三萜类、皂苷类和多糖类等，其主要药理活性成分为葛根异黄酮类，包括葛根素(C21H20O9)，3-甲氧基葛根素(C22H22O10)，3′-羟基葛根素(C21H20O10)，大豆素(4,7-二羟基异黄酮，C15H10O4)，大豆苷(C21H20O9)，3′-甲氧基大豆素(C16H12O5)等。葛根素可促进内皮细胞增殖，使血管内皮细胞产生NO增多和血管紧张素转换酶(ACE)活性降低，同时可有效降低血粘度，抑制血小板聚集，改善微循环。
丹参活性成分有脂溶性的二萜类成分如丹参酮I、ⅡA、ⅡB、V、VI，隐丹参酮等和水溶性的酚酸成分如丹参酸A、B、C，原儿茶醛等，有抗氧化，抗血小板集聚，改善微循环等药理学作用。
本发明具有如下有益效果：本发明提供了一种保护血管内皮的组合物，利用药食同源黄芪、葛根、丹参与具有功效作用的保护血管内皮的组合物作为原料，原料安全，无毒无害，制备成本低；同时将保护血管内皮的组合物与具有补气活血功效的黄芪、葛根、丹参进行复配，具有显著的协同作用。通过细胞实验研究表明，本发明的一种保护血管内皮的组合物，可对多种原因造成的血管内皮细胞损伤发挥有效的保护作用，预防心脑血管疾病具有显著功效。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为各组高糖损伤的HUVECs细胞活力的影响；
图2为各组细胞培养液中NO的含量；
图3为各组细胞培养液中SOD的含量；
图4为各组对ox-LDL损伤的HUVECs细胞活力的影响；
图5为各组对ox-LDL诱导的HUVECs氧化应激相关分子水平的影响。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
黄芪，葛根，丹参均购于湖北同济堂药房有售。
枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis QK02菌种，所述菌种保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地点为中国武汉武汉大学，其保藏编号为CCTCC NO:M 203078，保藏日期为2003年11月17日。
枯草芽孢杆菌纤溶酶通过如下方式制得：按以下培养基配方配制发酵液无水葡萄糖(30g/L)，大豆蛋白胨(20g/L)，Na2HPO4·12H2O(5g/L)，NaH2PO4·H2O(1g/L)，MgSO4·7H2O(0.5g/L)，CaCl2(0.2g/L)，在发酵罐中110℃灭菌20分钟；发酵罐内的发酵液冷却至40℃后按照1％(V/V)的接种量接种保藏号为CCTCC NO：M203078的枯草芽孢杆菌种子液，于发酵设备中发酵24h，其中发酵设备温度控制在40℃、发酵罐压为0.07Mpa、设定溶氧水平为30％；发酵后的发酵液通过管式离心机对发酵液进行离心；离心好的发酵液经过0.45um滤膜过滤处理；滤膜过滤后的滤液进行喷雾干燥，原料的进风温度140℃、出风温度为70℃，喷雾干燥得到的固体粉末即为枯草芽孢杆菌纤溶酶。
黄芪提取粉通过如下方式制得：取黄芪原料，加入10倍重量的水，100℃提取3次，每次提取时间2小时，提取液过滤，合并，加入5倍的90％的乙醇，于80℃下回流提取1h，提取2次；趁热抽滤，合并滤液，减压浓缩得到无醇味浸膏，经过干燥处理，得到黄芪提取物粉。
葛根提取粉通过如下方式制得：取葛根原料，加入9倍重量的75％的乙醇，85℃提取2次，每次提取时间1小时，提取液过滤，合并，减压浓缩得到无醇味浸膏，得经过干燥处理，得到葛根提取物粉。
丹参提取物粉通过如下方式制得：取丹参原料，加入2倍重量的水，80℃提取3次，每次提取时间1小时，提取液过滤，合并浓缩，得到丹参提取浓缩液，将丹参提取浓缩液经过干燥处理，得到丹参提取物粉。
本发明实施例还提供一种保护血管内皮的组合物在制备血管内皮保护的保健食品或药品上的应用。上述保护血管内皮的组合物除制成干粉外还可以通过添加辅料制成颗粒、片剂、胶囊等剂型。
实施例1
一种保护血管内皮的组合物由以下质量分数组成：枯草芽孢杆菌纤溶酶35份，黄芪提取物粉30份，葛根提取物粉25份，丹参提取物粉10份，将混合物于三维混合机中混合20min，至色泽均匀一致，无色差，即得到具有血管内皮保护功效的保健组合物。
实施例2
一种保护血管内皮的组合物由以下质量分数组成：枯草芽孢杆菌纤溶酶40份，黄芪提取物粉25份，葛根提取物粉20份，丹参提取物粉15份，将混合物于三维混合机中混合20min，至色泽均匀一致，无色差，即得到具有血管内皮保护功效的保健组合物。
实施例3
一种保护血管内皮的组合物由以下质量分数组成：枯草芽孢杆菌纤溶酶45份，黄芪提取物粉20份，葛根提取物粉15份，丹参提取物粉20份，将混合物于三维混合机中混合20min，至色泽均匀一致，无色差，即得到具有血管内皮保护功效的保健组合物。
对比例1
本对比例组合物，由单组份组成：枯草芽孢杆菌纤溶酶35份。
对比例2
本对比例组合物，由以下质量份数的各组分组成：枯草芽孢杆菌纤溶酶50份，黄芪提取物粉40份，葛根提取物粉5份，丹参提取物粉5份，将混合物于三维混合机中混合20min，至色泽均匀一致，无色差，即得到具有血管内皮保护功效的保健组合物。
实验例1
将本发明实施例1-3和对比1-2对高糖损伤血管内皮细胞的保护效果进行检测
1)试验材料
HUVECs(人脐静脉内皮细胞株)，DMEM培养基，胎牛血清，D-(+)-葡萄糖溶液，CCK-8试剂盒，一氧化氮检测试剂盒、总超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活性检测试剂盒。
2)细胞培养
内皮细胞用含10％胎牛血清的DMEM培养基于37℃，5％二氧化碳恒温培养箱中进行培养。当细胞融合生长达到约90％，用0.25％胰酶消化按1：2传代，取对数生长期细胞接种24h后换液，进行后续实验。
3)试验分组
取对数生长期的第3-5代细胞接种于96孔培养板(密度为1×104个/孔)，分为以下几组，每组随机设不低于3个复孔。
正常对照组：细胞在含5.5mmol/L葡萄糖DMEM培养基，于37℃、5％的二氧化碳培养箱中继续培养48h。
模型组：细胞在含5.5mmol/L葡萄糖DMEM培养基中培养24h，然后加入葡萄糖使终浓度为33mmol/L，于37℃、5％的二氧化碳培养箱中继续培养24h。
干预组1：在细胞中添加1mg/ml的实施例1组合物于37℃、5％的二氧化碳的培养箱中培养24h，然后加入葡萄糖使终浓度为33mmol/L，于37℃、5％的二氧化碳培养箱中继续培养24h。
干预组2：在细胞中添加1mg/ml的实施例2组合物于37℃、5％的二氧化碳的培养箱中培养24h，然后加入葡萄糖使终浓度为33mmol/L，于37℃、5％的二氧化碳培养箱中继续培养24h。
干预组3：在细胞中添加1mg/ml的实施例3组合物于37℃、5％的二氧化碳的培养箱中培养24h，然后加入葡萄糖使终浓度为33mmol/L，于37℃、5％的二氧化碳培养箱中继续培养24h。
比较组1：在细胞中添加1mg/ml的比较例1于37℃、5％的二氧化碳的培养箱中培养24h，然后加入葡萄糖使终浓度为33mmol/L，于37℃、5％的二氧化碳培养箱中继续培养24h。
比较组2：在细胞中添加1mg/ml的比较例2于37℃、5％的二氧化碳的培养箱中培养24h，然后加入葡萄糖使终浓度为33mmol/L，于37℃、5％的二氧化碳培养箱中继续培养24h。
4)CCK-8法检测各组对高糖损伤的HUVECs细胞活力的影响
向各组每孔加入10ul CCK8溶液，继续在37℃下孵育1-4h，用酶标仪在450nm处测定吸光度值。以正常对照组为参照(细胞活力100％)，计算其他各组细胞活力＝[其他组OD(450)/正常对照组OD(450)]×100％。
结果如图1所示。其中，a为与正常组相比，P<0.05，b为与模型组相比，P<0.05。
如图1所示，与正常对照组相比，葡萄糖作为刺激物，导致模型组HUVECs细胞活力降低；而与模型组相比，干预组和比较组可升高HUVECs细胞活力，并且干预组对细胞存活率的提升效果优于比较组，说明本发明保护血管内皮的组合物组方的组成及相对含量需要在限定范围内才可达到所述的协同增效的作用。
5)细胞上清一氧化氮浓度检测
用一氧化氮检测试剂盒进行操作，取细胞培养上清液，离心后用于测定NO含量。各项操作严格按照试剂盒说明书的方法进行。
结果如图2所示。其中，a为与正常组相比，P<0.05，b为与模型组相比，P<0.05。
如图2所示，与正常对照组相比，高糖明显降低了NO的分泌量，与模型组相比，干预组和比较组的NO分泌量明显升高，且干预组的效果优于比较组。说明本发明保护血管内皮的组合物组方的组成及相对含量需要在限定范围内才可达到所述的协同增效的作用。
6)超氧化物歧化酶活性检测
按照试剂盒说明书推荐的操作步骤收集细胞，氮蓝四唑(NBT)显色法测定SOD活性(U/mL)，37℃孵育30min后用酶标仪在波长560nm处测定各孔吸光度值并计算SOD相对活性。
结果如图3所示。其中，a为与正常组相比，P<0.05，b为与模型组相比，P<0.05。
如图3所示，与正常组相比高糖处理的HUVECs培养上清液中SOD活性降低，与模型组相比，干预组和比较组SOD活性显著上升，且保护血管内皮的组合物含量越高，效果越好，但比较组的效果逊色于干预组的效果，说明本发明保护血管内皮的组合物组方的组成及相对含量需要在限定范围内才可达到所述的协同增效的作用。
实验例2
将本发明实施例1-3和比较例1-2对ox-LDL损伤血管内皮细胞的保护功效的检测
1)试验材料
HUVECs(人脐静脉内皮细胞株)，DMEM培养基，胎牛血清，CCK-8试剂盒，总超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活性检测试剂盒，过氧化氢酶(CAT)测试盒，丙二醛(MDA)含量测定试剂盒，谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性测试盒，ox-LDL。
2)细胞培养
内皮细胞用含10％胎牛血清的DMEM完全培养基于37℃，5％二氧化碳恒温培养箱中进行培养。当细胞融合生长达到约90％，用0.25％胰酶消化按1：2传代，取对数生长期细胞接种24h后换液，进行后续实验。
3)试验分组
取对数生长期的第3-5代细胞接种于96孔培养板(密度为1×104个/孔)，分为以下几组，每组随机设不低于3个复孔。
正常对照组：细胞在DMEM培养基中，于37℃、5％的二氧化碳培养箱中继续培养48h。
模型组：细胞在DMEM培养基中培养24h，然后加入ox-LDL至终浓度为75μmol/L，于37℃、5％的二氧化碳培养箱中继续培养24h。
干预组1：在细胞中添加1mg/ml的实施例1组合物于37℃、5％的二氧化碳的培养箱中培养24h，然后加入ox-LDL至终浓度为75μmol/L，于37℃、5％的二氧化碳培养箱中继续培养24h。
干预组2：在细胞中添加1mg/ml的实施例2组合物于37℃、5％的二氧化碳的培养箱中培养24h，然后加入ox-LDL至终浓度为75μmol/L，于37℃、5％的二氧化碳培养箱中继续培养24h。
干预组3：在细胞中添加1mg/ml的实施例3组合物于37℃、5％的二氧化碳的培养箱中培养24h，然后加入ox-LDL至终浓度为75μmol/L，于37℃、5％的二氧化碳培养箱中继续培养24h。
比较组1：在细胞中添加1mg/ml的比较例1组合物于37℃、5％的二氧化碳的培养箱中培养24h，然后加入ox-LDL至终浓度为75μmol/L，于37℃、5％的二氧化碳培养箱中继续培养24h。
比较组2：在细胞中添加1mg/ml的比较例2组合物于37℃、5％的二氧化碳的培养箱中培养24h，然后加入ox-LDL至终浓度为75μmol/L，于37℃、5％的二氧化碳培养箱中继续培养24h。
4)CCK-8法检测各组对ox-LDL损伤的HUVECs细胞活力的影响
各组每孔加入10ul CCK8溶液，继续在37℃下孵育1-4h，用酶标仪在450nm处测定吸光度值，实验重复三次。以正常对照组为参照(细胞活力100％)，计算其他各组细胞活力＝[其他组OD(450)/正常对照组OD(450)]×100％。
结果如图4所示。其中，a为与正常组相比，P<0.05，b为与模型组相比，P<0.05。
图4所示，与正常对照组相比，ox-LDL作为刺激物，导致模型组HUVECs细胞活力降低；而与模型组相比，干预组和比较组可升高HUVECs细胞活力，并且干预组对细胞存活率的提升效果优于比较组，说明本发明保护血管内皮的组合物组方的组成及相对含量需要在限定范围内才可达到所述的协同增效的作用。
5)细胞上清液中氧化应激相关因子的水平检测
收集上述分组的细胞上清液，严格按试剂盒说明书方法，检测细胞内SOD、MDA、CAT和GSH的水平。
结果如图5所示。其中，a为与正常组相比，P<0.05，b为与模型组相比，P<0.05。
如图5所示，与正常对照组相比，ox-LDL刺激后，模型组HUVECs中SOD、GSH水平显著下降(p<0.05)，MDA水平明显上升(p<0.05)。与模型组相比，经过干预组和比较组干预后的细胞SOD、GSH水平显著上升(p<0.05)，MDA水平明显下降(p<0.05)，说明对于本组合物对ox-LDL总成的血管内皮细胞的氧化损伤有保护作用。但干预组效果明显优于比较组，说明本发明保护血管内皮的组合物组方的组成及相对含量需要在限定范围内才可达到所述的协同增效的作用。
综合上述试验结果，本发明的保护血管内皮的组合物保健组分配伍合理、功效显著，各组方之间具有协同增效的作用，需在本发明组方的限定范围内才可达到本发明所述的保护血管内皮的功效；如仅仅使用一种组分(比较例1)，或者不在各组分不在组方的限定范围内(比较例2)，尽管也可有一定的功效，但效果明显差于本发明。因此，本发明的一种具有血管内皮保护功效的保护血管内皮的组合物组合物及其制备方法具有创造性。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种保护血管内皮的组合物，其特征在于，所述组合物中含有枯草芽孢杆菌纤溶酶，所述枯草芽孢杆菌纤溶酶由菌种Bacillus subtilis QK02发酵制得，所述菌种保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO:M 203078。
2.根据权利要求1所述保护血管内皮的组合物，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌纤溶酶的制备方法如下：
S1.培养基的制备：将无水葡萄糖，脱脂大豆粉，Na2HPO4·12H2O，NaH2PO4·H2O，MgSO4·7H2O，CaCl2，原料与水按照一定比例配比后在发酵罐中灭菌；
S2.枯草芽孢杆菌纤溶酶的制备：将培养基冷却后加入发酵罐内，接种保藏号为CCTCCNO：M 203078的枯草芽孢杆菌种子液，于发酵设备中发酵；所述接种Bacillus subtilisQK02菌种，发酵后的发酵液经过离心去除菌体，收集上清液，超滤浓缩，浓缩液进行喷雾干燥，得到枯草芽孢杆菌纤溶酶粉末。
3.根据权利要求1所述保护血管内皮的组合物，其特征在于，由以下原料制备而成：枯草芽孢杆菌纤溶酶，黄芪提取物粉，葛根提取物粉，丹参提取物粉。
4.根据权利要求1所述保护血管内皮的组合物，其特征在于，由以下原料按重量份制备而成：枯草芽孢杆菌纤溶酶35-45份，黄芪提取物粉20-35份，葛根提取物粉10-25份，丹参提取物粉10-20份。
5.根据权利要求3或4所述保护血管内皮的组合物，其特征在于，所述黄芪提取物粉的制备方法具体包括以下步骤：取黄芪原料，加入8-12倍重量的水，80-105℃提取1-3次，每次提取时间2-4小时，提取液过滤，合并，加入4-8倍的70％-90％的乙醇，于60-80℃下回流提取1-3h，提取2-3次；趁热抽滤，合并滤液，减压浓缩得到无醇味浸膏，经过干燥处理，得到黄芪提取物粉。
6.根据权利要求3或4所述保护血管内皮的组合物，其特征在于，所述葛根提取物粉的制备方法具体包括以下步骤：取葛根原料，加入8-15倍重量的50％-90％的乙醇，70-100℃提取1-3次，每次提取时间1-6小时，提取液过滤，合并，减压浓缩得到无醇味浸膏，经过干燥处理，得到葛根提取物粉。
7.根据权利要求3或4所述保护血管内皮的组合物，其特征在于，所述丹参提取物粉的制备方法具体包括以下步骤：取丹参原料，加入2-10倍重量的水，60-100℃提取2-6次，每次提取时间0.5-2小时，提取液过滤，合并浓缩，得到丹参提取浓缩液，将丹参提取浓缩液经过干燥处理，得到丹参提取物粉。
8.一种如权利要求1-7任一项所述保护血管内皮的组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将枯草芽孢杆菌纤溶酶、黄芪提取物粉、葛根提取物粉、丹参提取物粉按比例混合，即得所述保护血管内皮的组合物。
9.一种如权利要求1-7任一项所述保护血管内皮的组合物在制备血管内皮保护功效的保健食品及药品中的应用。
10.一种枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis QK02菌种，其特征在于，所述菌种保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO:M 203078。
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