HRP20030975A2 - Lipid-polymer-conjugates - Google Patents
Lipid-polymer-conjugates Download PDFInfo
- Publication number
- HRP20030975A2 HRP20030975A2 HR20030975A HRP20030975A HRP20030975A2 HR P20030975 A2 HRP20030975 A2 HR P20030975A2 HR 20030975 A HR20030975 A HR 20030975A HR P20030975 A HRP20030975 A HR P20030975A HR P20030975 A2 HRP20030975 A2 HR P20030975A2
- Authority
- HR
- Croatia
- Prior art keywords
- polymer
- poly
- lipid
- dodasuc
- conjugate according
- Prior art date
Links
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims abstract description 60
- 229920001308 poly(aminoacid) Polymers 0.000 claims abstract description 6
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 116
- -1 poly(2-hydroxyethyl) Polymers 0.000 claims description 81
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 31
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 21
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 21
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims description 19
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 17
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims description 11
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims description 9
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 claims description 5
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims description 5
- 125000004178 (C1-C4) alkyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 4
- JHCLUTILJRJUHZ-UHFFFAOYSA-N pentatriacontan-18-amine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(N)CCCCCCCCCCCCCCCCC JHCLUTILJRJUHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 3
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 3
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 3
- 229940106189 ceramide Drugs 0.000 claims description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 3
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims description 3
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims description 3
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 claims description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 claims description 2
- 125000003282 alkyl amino group Chemical group 0.000 claims description 2
- 150000001371 alpha-amino acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 claims description 2
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 claims description 2
- 150000003975 aryl alkyl amines Chemical class 0.000 claims description 2
- 150000001783 ceramides Chemical class 0.000 claims description 2
- 108010083763 poly-N(5)-(2-hydroxyethyl)glutamine Proteins 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 87
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 73
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 61
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 48
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 43
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 42
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 36
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 36
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 32
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 31
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 30
- 239000000047 product Substances 0.000 description 29
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 description 28
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 26
- UBQKCCHYAOITMY-UHFFFAOYSA-N pyridin-2-ol Chemical compound OC1=CC=CC=N1 UBQKCCHYAOITMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 25
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 238000000034 method Methods 0.000 description 23
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N Dimethyl sulfoxide Chemical compound [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 17
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 17
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 15
- 238000007098 aminolysis reaction Methods 0.000 description 14
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 14
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 14
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 14
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 14
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 11
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 10
- HKUFIYBZNQSHQS-UHFFFAOYSA-N n-octadecyloctadecan-1-amine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCNCCCCCCCCCCCCCCCCCC HKUFIYBZNQSHQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 10
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 9
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 9
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 9
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 9
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 9
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 8
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 8
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 8
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 8
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 7
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 7
- 229960004786 prednisolone phosphate Drugs 0.000 description 7
- JDOZJEUDSLGTLU-VWUMJDOOSA-N prednisolone phosphate Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)COP(O)(O)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JDOZJEUDSLGTLU-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 7
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 description 6
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 6
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 6
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical compound NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 6
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 6
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 6
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 6
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 6
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 6
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 6
- 235000006109 methionine Nutrition 0.000 description 6
- OAOSXODRWGDDCV-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylpyridin-4-amine;4-methylbenzenesulfonic acid Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1.CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 OAOSXODRWGDDCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- VJZLQIPZNBPASX-OJJGEMKLSA-L prednisolone sodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)COP([O-])([O-])=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VJZLQIPZNBPASX-OJJGEMKLSA-L 0.000 description 6
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- GAWIXWVDTYZWAW-UHFFFAOYSA-N C[CH]O Chemical group C[CH]O GAWIXWVDTYZWAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 5
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 5
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 5
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 5
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 5
- ZFQWJXFJJZUVPI-UHFFFAOYSA-N tert-butyl n-(4-aminobutyl)carbamate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NCCCCN ZFQWJXFJJZUVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 0.000 description 4
- ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 1,3-dicyclohexylurea Chemical compound C1CCCCC1NC(=O)NC1CCCCC1 ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004470 DL Methionine Substances 0.000 description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 4
- YGYAWVDWMABLBF-UHFFFAOYSA-N Phosgene Chemical compound ClC(Cl)=O YGYAWVDWMABLBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 4
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 4
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 4
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 4
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N methionine Chemical compound CSCCC(N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- AXRJZVAJGWBMES-UHFFFAOYSA-N n-heptadecyloctadecan-1-amine Chemical group CCCCCCCCCCCCCCCCCCNCCCCCCCCCCCCCCCCC AXRJZVAJGWBMES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920000835 poly(gamma-benzyl-L-glutamate) polymer Polymers 0.000 description 4
- 108010000222 polyserine Proteins 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 4
- 125000004079 stearyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- FVXWJHWNSKJFAH-YFKPBYRVSA-N (2s)-5-amino-2-(2-hydroxyethylamino)-5-oxopentanoic acid Chemical compound NC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NCCO FVXWJHWNSKJFAH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- IHSNQUNHINYDDN-UHFFFAOYSA-N 2-(benzylamino)pentanedioic acid Chemical compound OC(=O)CCC(C(O)=O)NCC1=CC=CC=C1 IHSNQUNHINYDDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KQIGMPWTAHJUMN-UHFFFAOYSA-N 3-aminopropane-1,2-diol Chemical compound NCC(O)CO KQIGMPWTAHJUMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 3
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IDGQXGPQOGUGIX-UHFFFAOYSA-N O-Benzyl-DL-serine Chemical compound OC(=O)C(N)COCC1=CC=CC=C1 IDGQXGPQOGUGIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- REYJJPSVUYRZGE-UHFFFAOYSA-N Octadecylamine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCN REYJJPSVUYRZGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WUGQZFFCHPXWKQ-UHFFFAOYSA-N Propanolamine Chemical compound NCCCO WUGQZFFCHPXWKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 3
- YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N Tritium Chemical compound [3H] YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 3
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 3
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 3
- 229940000635 beta-alanine Drugs 0.000 description 3
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 3
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 3
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylpyridin-2-amine Chemical compound CN(C)C1=CC=CC=N1 PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 3
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 3
- 108010087948 polymethionine Proteins 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 3
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 3
- 229910052722 tritium Inorganic materials 0.000 description 3
- LVNGJLRDBYCPGB-LDLOPFEMSA-N (R)-1,2-distearoylphosphatidylethanolamine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[NH3+])OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC LVNGJLRDBYCPGB-LDLOPFEMSA-N 0.000 description 2
- OYIFNHCXNCRBQI-UHFFFAOYSA-N 2-aminoadipic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CCCC(O)=O OYIFNHCXNCRBQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000009386 Experimental Arthritis Diseases 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 2
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 2
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 2
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 2
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 2
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 2
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 2
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 2
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 2
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 2
- 239000002088 nanocapsule Substances 0.000 description 2
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 2
- 239000002077 nanosphere Substances 0.000 description 2
- 239000002353 niosome Substances 0.000 description 2
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 2
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 2
- 108010054442 polyalanine Proteins 0.000 description 2
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 2
- 239000003505 polymerization initiator Substances 0.000 description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 238000010926 purge Methods 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 238000007151 ring opening polymerisation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 description 2
- FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N sarcosine Chemical compound C[NH2+]CC([O-])=O FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000003335 secondary amines Chemical group 0.000 description 2
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 2
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M sodium periodate Chemical compound [Na+].[O-]I(=O)(=O)=O JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 2
- 150000003462 sulfoxides Chemical class 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- HLZKNKRTKFSKGZ-UHFFFAOYSA-N tetradecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCO HLZKNKRTKFSKGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 2
- ATCFYQUZTYQTJN-QVDQXJPCSA-N (2r)-2-amino-4-benzylpentanedioic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ATCFYQUZTYQTJN-QVDQXJPCSA-N 0.000 description 1
- IHSNQUNHINYDDN-JTQLQIEISA-N (2s)-2-(benzylamino)pentanedioic acid Chemical group OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NCC1=CC=CC=C1 IHSNQUNHINYDDN-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N -2-Amino-4-hydroxybutanoic acid Natural products OC(=O)C(N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WORJRXHJTUTINR-UHFFFAOYSA-N 1,4-dioxane;hydron;chloride Chemical compound Cl.C1COCCO1 WORJRXHJTUTINR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HXKKHQJGJAFBHI-UHFFFAOYSA-N 1-aminopropan-2-ol Chemical compound CC(O)CN HXKKHQJGJAFBHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N 2,4-diaminobutyric acid Chemical class NCCC(N)C(O)=O OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OZHYQYVJLUUBJD-UHFFFAOYSA-N 2,5-diamino-4-benzyl-5-oxopentanoic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CC(C(N)=O)CC1=CC=CC=C1 OZHYQYVJLUUBJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TXLHNFOLHRXMAU-UHFFFAOYSA-N 2-(4-benzylphenoxy)-n,n-diethylethanamine;hydron;chloride Chemical compound Cl.C1=CC(OCCN(CC)CC)=CC=C1CC1=CC=CC=C1 TXLHNFOLHRXMAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000954 2-hydroxyethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 1
- QOXOZONBQWIKDA-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxypropyl Chemical group [CH2]CCO QOXOZONBQWIKDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SXIFAEWFOJETOA-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxy-butyl Chemical group [CH2]CCCO SXIFAEWFOJETOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N C16 ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@@H](CO)[C@H](O)C=CCCCCCCCCCCCCC YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000000059 Dyspnea Diseases 0.000 description 1
- 206010013975 Dyspnoeas Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- CZWARROQQFCFJB-UHFFFAOYSA-N L-2-Amino-5-hydroxypentanoic acid Chemical group OC(=O)C(N)CCCO CZWARROQQFCFJB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical group 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N L-homoserine Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 1
- CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N N-acetylsphinganine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCC[C@@H](O)[C@H](CO)NC(C)=O CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 1
- 108010077895 Sarcosine Proteins 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNEPTKZEXBPDLF-JDTILAPWSA-N [(3s,8s,9s,10r,13r,14s,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl] carbonochloridate Chemical compound C1C=C2C[C@@H](OC(Cl)=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 QNEPTKZEXBPDLF-JDTILAPWSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 229940093740 amino acid and derivative Drugs 0.000 description 1
- 150000001414 amino alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 229940051868 antimigraine drug corticosteroid derivative Drugs 0.000 description 1
- 239000008365 aqueous carrier Substances 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 239000002473 artificial blood Substances 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001576 beta-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006065 biodegradation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)C(=O)NC(CO)C(O)C=CCCC=C(C)CCCCCCCCC ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000011262 co‐therapy Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 1
- DHQUQYYPAWHGAR-UHFFFAOYSA-N dibenzyl 2-aminopentanedioate Chemical compound C=1C=CC=CC=1COC(=O)C(N)CCC(=O)OCC1=CC=CC=C1 DHQUQYYPAWHGAR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 125000004990 dihydroxyalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 229940115080 doxil Drugs 0.000 description 1
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 1
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- WMWTYOKRWGGJOA-CENSZEJFSA-N fluticasone propionate Chemical compound C1([C@@H](F)C2)=CC(=O)C=C[C@]1(C)[C@]1(F)[C@@H]2[C@@H]2C[C@@H](C)[C@@](C(=O)SCF)(OC(=O)CC)[C@@]2(C)C[C@@H]1O WMWTYOKRWGGJOA-CENSZEJFSA-N 0.000 description 1
- 229960000289 fluticasone propionate Drugs 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000578 graft copolymer Polymers 0.000 description 1
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 1
- FKRKTHDSSJWJJP-UHFFFAOYSA-N hydrazine;pyridine-3-carboxamide Chemical compound NN.NC(=O)C1=CC=CN=C1 FKRKTHDSSJWJJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 125000002768 hydroxyalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 229940102253 isopropanolamine Drugs 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 238000011694 lewis rat Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 150000004668 long chain fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 1
- 150000002668 lysine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- MGJXBDMLVWIYOQ-UHFFFAOYSA-N methylazanide Chemical compound [NH-]C MGJXBDMLVWIYOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940043348 myristyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- KVKFRMCSXWQSNT-UHFFFAOYSA-N n,n'-dimethylethane-1,2-diamine Chemical compound CNCCNC KVKFRMCSXWQSNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N newbouldiamide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(O)C(O)C(CO)NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000012038 nucleophile Substances 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 238000002103 osmometry Methods 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 229920001584 poly(acrylomorpholines) Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 108010052780 polyasparagine Proteins 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 108010040003 polyglutamine Proteins 0.000 description 1
- 229920000155 polyglutamine Polymers 0.000 description 1
- 229920000223 polyglycerol Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000010069 protein adhesion Effects 0.000 description 1
- 239000012217 radiopharmaceutical Substances 0.000 description 1
- 229940121896 radiopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 230000002799 radiopharmaceutical effect Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 229940043230 sarcosine Drugs 0.000 description 1
- 208000013220 shortness of breath Diseases 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G69/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carboxylic amide link in the main chain of the macromolecule
- C08G69/02—Polyamides derived from amino-carboxylic acids or from polyamines and polycarboxylic acids
- C08G69/08—Polyamides derived from amino-carboxylic acids or from polyamines and polycarboxylic acids derived from amino-carboxylic acids
- C08G69/10—Alpha-amino-carboxylic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- General Preparation And Processing Of Foods (AREA)
- Polyamides (AREA)
- Compositions Of Macromolecular Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Biological Depolymerization Polymers (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
Description
Prisutno otkriće odnosi se na lipid-polimer konjugate, njihovu pripravu i na njihove primjene.
Pozadina otkrića
Dobro poznati lipid-polimer konjugati koriste se u nizu različitih primjena. Jedna od njih je uključivanje u pripravke koloidnog nosača kao što su sustavi mjehurića s lipidnim dvoslojem-liposomi, niosomi i obrnuti lipidni mjehurići, sustavi micela, nanokapsule, nanosfere itd. Dobro poznati primjer takvih pripravaka koloidnog nosača formiran je pomoću liposoma. Izuzev spomenutih liposoma, čitatelj bi trebao imati na umu da se rasprava, zaključci i tehnike odnose i na druge pripravke koloidnog nosača.
Liposomi, koji pripadaju skupini čestica koloidnog nosača su mali lipidni mjehurići koji se sastoje od jednog ili više koncentričnih lipidnih dvosloja okruženih vodenim medijem. Brzo je uočen njihov značaj kao sustava isporuke lijekova zbog njihove strukturne svestranosti vezane uz veličinu, površinski naboj, lipidni sastav, dvoslojnu propusnost i zbog njihove sposobnost da enkapsuliraju gotovo bilo koji lijek. Intravenoznim injektiranjem liposoma, mononuklearni fagocitni sustav (MPS) ih prepoznaje kao strane čestice, te ih uklanja iz cirkulacije u organima bogatim fagocitnim stanicama kao što su jetra, slezena i koštana srž. Identificirano je nekoliko mogućnosti za smanjenje takvog učinka, kao što su povećanje veličine čestica liposoma i mijenjanje površinskog naboja liposoma. Još jedna mogućnost odnosi se na površinsku modifikaciju liposoma uvođenjem specifičnih polimernih komponenta na površinu liposoma čije skupine smanjuju proteinsku adsorpciju na površinu čestice. Prema tome, takve liposome ne prepoznaju stanica MPS-a, te imaju produženo vrijeme otpornosti u općoj cirkulaciji. Dobro poznati primjer modifikacije liposomske površine je inkorporiranje tijekom priprave liposomskih pripravaka lipidnog derivata hidrofilnog polimera polietilen-glikola (PEG). Uobičajeno je terminus tog polimera modificiran hidrofobnim dijelom koji je ostatak derivata fosfatidiletanolamina ili dugolančane masne kiseline. Polietilen-glikol per se je prilično stabilan polimer koji odbija proteinsku adheziju i koji u fiziološkim uvjetima nije podložan enzimskoj ili hidrolitičkoj razgradnji. Dobiveni su dobri rezultati praćenjem intravenozne primjene liposoma koji sadrže PEG-cijepljenu površinu s obzirom na produljeno vrijeme poluraspada plazme i smanjeno nakupljanje u organima koji su bogati fagocitnim stanicama kod animalnih vrsta i ljudi (Storm G., Belliot S. O., Daemen T. i Lasic D. D.: Površinska modifikacija nanočestica nasuprot mononuklearnog fagocitnog sustava u Adv. Drug Delivery Rev. 17, 31-48, (1995); Moghimi S. M., Hunter A. C. i Murray J. C.: Dugocirkulirajuće i ciljno specifične nanočestice, teorija u praksi u Pharmacol. Rev. 53, 283-318, (2001); Boerman O. C., Dams E. T., Oyen W. J. G., Corstens F. H. M. I Storm G.: Radiofarmaceutici za scintigrafske prikaze infekcija i upala u Inflamm. Res. 50, 55-64, (2001)). Tržište odobrava takve liposomske preparate koji sadrže doksorubicin.
Međutim, nađeno je nekoliko štetnosti primjene polimernog polietilen-glikola u dugocirkulirajućim liposomima. Značajno je nakupljanje PEG-cijepljenih liposoma u makrofagima i koži usljed nebiorazgradnje. Drugi put je opažen gubitak dugocirkulirajućih svojstava (brzo ukljanjanje) injektiranjem PEG-liposoma (Dams E. T., Laverman P., Oijen W. J., Storm G., Scherphof G. L., Van der Meer J. W., Corstens F. H. i Boerman O. C.: Ubrzano pročišćavanje krvi i preinaka biodistribucije ponavljanih ubrizgavanja sterički stabiliziranih liposoma u J. Pharmacol. Exp. Ther. 292, 1071-1079 (2000)). Nedavna istraživanja pokazuju da PEG-liposomi u pacijenata mogu potaknuti akutne nuspojave (crvenilo lica, stezanje u prsima, skraćivanje daha, promjene u krvnom tlaku) koje se povlače odmah po završetku primjene (infuzije) PEG-liposomskih formulacija. Nedavni podaci ukazuju da u nastanku nuspojava ulogu igra komplementarna aktivacija (Szebeni J., Barany L., Savay S., Lutz H., Jelezarova E., Bunger R. i Alving C. R.: Uloga komplementarne aktivacije u hipersenzitivnosti na PEG-liposomski doksorubicin (Doxil) u J. Liposome Res. 10, 467-481, (2000)). Do sada su preparati bazirani na PEG-liposomima komercijalno bili dostupni u obliku vodenih suspenzija. Dobro je poznato da je rok trajanja preparata liposomskih vodenih suspenzija općenito i PEG-liposoma, prilično ograničen. Poznato je nekoliko tehnika kojima je moguće ukloniti prenosnika ili kontinuiranu fazu takvih preparata kao što su sušenje raspršivanjem, dijafiltracija, rotacijska evaporacija itd. i preferirano sušenje smrzavanjem. Nedavno je predložena metoda sušenja smrzavanjem kojom se produžuje rok trajanja PEG-liposoma koji sadrže tehnicijev kelat, hidrazin-nikotinamid (Laverman P., van Bloois L., Boerman O. C., Oyen W. J. G., Corstenes F. H. M. i Storm G.: Liofilizacija Tc-99m-HYNIC označenih PEG-liposoma u J. Liposome Res. 10(2&3), stranica 117-129 (2000)), no potrebno je izvršiti daljnja ispitivanja rezultata i primjenjivosti te tehnike na liposomske preparate.
Određene štetnosti vezane uz upotrebu polietilen-glikola potiću istraživaće da pronađu alternativne polimere. Mnogi su polimeri predloženi kao prikladni kanditati za derivatiziranje s lipidima (koji stvaraju mjehuriće) za ugrađivanje u liposome (vidi npr. EP-0688207). Hidrofilni polimeri topljivi u vodi (poli(vinilpirolidin), poli(akriloilmorfolin), poli(2-(m)etil-2-oksazolin, poliakrilamid i poliglicerol) do određenog stupnja pokazuju produživanje cirkulacijskog vremena liposoma nakon intravenozne primjene. Do sada takvi lipid-polimer konjugati nisu bili primjenjivani u komercijalno dostupnim preparatima, uglavnom zbog toga što ne pokazuju nikakvu prednost od poznatih lipid-PEG konjugata. Zato je još uvijek potrebno naći polimer koji se može derivatizirati s lipidom i inkorporirati u pripravke koloidnog nosača, kao što su liposomi, takav polimer treba imati dugocirkulirajuća svojstva uz prednosti nad polietilen-glikolom, kao što je biorazgradivost.
Sažetak otkrića
Pripravljeni su lipid-polimer konjugati koji se mogu dobiti iz amfifilnog lipida koji se sastoji od najmanje jednog hidrofobnog, nepolarnog dijela i hidrofilne, polarne glave, te od njegovog polimernog ili monomernog prekursora koji ima N- i C-terminalne krajnje skupine, pri čemu je polimer poli-(aminokiselina), poli-(derivat aminokiseline) i poli-(analog aminokiseline) i pri čemu je lipid kovalentno vezan s N- ili C-terminalnom krajnjom skupinom polimera koji ima slijedeću formulu:
-[NHCHR(CH2)mCO]n-, pri čemu je R: -H, -CH3, -CHCH3OR1, -(CH2)xOR1, -(CH2)x-CO-NHR1, -(CH2)x-NH-CO-R1, -(CH2)x-SOyCH3, ili -(CH2)xCOOH; -R1 je H ili (C1-C4)alkil supstituiran s jednom ili više hidroksilnih skupina ili jednom di(C1-C4)alkilaminskom skupinom; x je 0-4; m=1 ili 0 i y=1 ili 2. Također su osigurane metode priprave takvih konjugata, te njihove primjene.
Legende slika
Slika 1 je grafički opis srednjih vrijednosti za izračunati postotak injektirane doze u krvnim uzorcima u odnosu na vrijeme za liposomske preparate koji sadrže PEG-DSP i koji imaju različitu količinu ukupnog lipida (primjer 22).
Slika 2 je grafički opis srednjih vrijednosti za izračunati postotak injektirane doze u krvnim uzorcima u odnosu na vrijeme za liposomske preparate koji sadrže PHEA-DODASuc i koji imaju različitu količinu ukupnog lipida (primjer 22).
Slika 3 je grafički opis postotka enkapsuliranog prednizolon-fosfata u liposomskim preparatima koji sadrže PEG-DSPE, odnosno PHEA-DODASuc, u odnosu na vrijeme (primjer 23).
Slika 4 je grafički opis koncentracije prednizolon-fosfata koji je enkapsuliran u liposomima koji sadrže PEG-DSPE i PHEA-DODASuc u krvi u odnosu na vrijeme (primjer 24).
Slika 5 je grafički opis rezultata upale šape u odnosu na vrijeme, prije i nakon primjene intravenozne injekcije liposoma (ovijenih s PEG-DSPE, odnosno PHEA-DODASuc) koji sadrže salin i prednizol-fosfat (primjer 24).
Slika 6 je grafički opis postotka injektirane doze liposoma nađenih u jetri, slezeni i jetri+slezeni, nakom intravenozne primjene liposoma kao lipid-polimer konjugata koji sadrže PEG-DSPE, PHEG-diaminobutan, DODASuc, PHPG-diaminobutan-DODASuc, PHBG-diaminobutan-DODASuc, odnosno PHEA-DODASuc i uobičajenih liposoma (bez dodataka) (primjer 21).
Detaljan opis otkrića
Amfifilne lipid-polimer konjugate u pripravcima prisutnog otkrića moguće je dobiti iz amfifilnog lipida i njegovog polimernog ili monomernog prekursora.
Da bi amfifilni lipidi bili upotrebljeni u lipid-polimer konjugatima prema otkriću, mogu biti odabrani iz skupine različitih prirodnih ili sintetskih lipida, koji se sastoje od najmanje jednog hidrofobnog, nepolarnog dijela i hidrofilne, polarne glave, kao što su lipidi koji formiraju lipidne mjehuriće i membranski lipidi.
Da bi amfifilni lipidi bili upotrijebljeni u lipid-polimer konjugatima, lipid mora na polarnoj glavi sadržavati funkcionalnu skupinu koja je prikladna za kovalentno vezanje s polimernim lancem. Skupina polarne glave je na primjer primarna ili sekundarna aminska skupina, hidroksilna skupina, aldehidna skupina, halidna ili karboksilna skupina. Hidrofobni dio lipida, omogućuje inkorporiranje lipid-polimer konjugata u dvoslojne strukture kao što su liposomi i igra ulogu sidra.
Primjeri amfifilnih lipida su fosfolipidi, glikolipidi, ceramidi, kolesterol i derivati, zasićeni ili djelomično nezasićeni, razgranati ili ravnolančani C8-C50 mono- ili di- alkilamini, arilalkilamini, cikloalkilamini, alkanoli, aldehidi, karbohalidi ili alkanske kiseline i njihovi anhidridi, pri čemu je ukupni broj C-atoma preferirano 25 ili veći.
Točnije, primjeri prikladnih amfifilnih lipida su fosfatidilkolin, fosfatidiletanolamin, fosfatidilinozitol, sfingomijelin, stearilamin, miristilalkohol i palmitinska kiselina.
Preferirani amfifilni lipid u lipid-polimer konjugatima je lipid koji ima dva hidrofobna lanca, uobičajeno alkilna lanca, te polarnu glavu koja sadrži fukcionalnu skupinu, kao što je opisano. Derivati fosfatidiletanolamina, a pogotovo distearilfosfatidiletanolamin preferirani su fosfolipidi jer sadrže reaktivnu amino skupinu.
Nadalje preferirani amfifilni lipidi imaju na hidrofilnoj, polarnoj glavi primarnu ili sekundarnu aminsku skupinu i dva zasićena ili nezasićena C8-C50 razgranata ili ravnolančana hidrofobna, nepolarna dijela. Njihovi primjeri su 1-heptadeciloktadecilamin i spojevi koji sadrže distearilamin, kao što su distearilamin i N-sukcinil-dioktadecilamin (DODASuc).
Polimerni dio lipid-polimer konjugata prisutnog otkrića formiran je pomoću poli-(aminokiseline), poli-(derivata aminokiseline) ili poli-(analoga aminokiseline). Poli-(derivat aminokiseline) je polimer koji se sastoji od aminokiselinskih monomera, na koje je vezan jedan ili više supstituenata. Njihov primjer je poli(2-hidroksietil)-1-glutamin. Poli-(analog aminokiseline) je polimer u kojem je duljina lanca atoma ugljika aminokiselinskih monomera reducirana ili prolongirana. Njihovi primjeri su poli(-homoserin) i poli(pentahomoserin).
Polimer je homo-polimer, koji se sastoji od istovrsnih monomera duž polimernog lanca. Također je moguće da se polimerni dio sastoji od blok kopolimera koji su odabrani iz skupine koja se sastoji od poli-(aminokiseline), poli-(derivata aminokiseline) i poli-(analoga aminokiseline) ili je polimerni dio formiran pomoću serije alternirajućih monomera, kontroliranog niza monomera ili pak slučajnom polimerizacijom prikladnih monomera odabranih iz skupine koja se sastoji od jedne ili više aminokiselina, derivata aminokiseline i analoga aminokiseline. Polimeri mogu biti linearni ili razgranati i uključuju cijepljene polimere, no preferirani su linearni.
Korisne aminokiseline su prirodne α-aminokiseline. No, zanimljive su i β-aminokiseline, kao i neproteinske molekule ili aminokiseline koje se ne pojavljuju u prirodi. Može se upotrijebiti i L- i D-konfiguracija aminokiselina i derivata. Kada je aminokiselinski slijed polimera u lipid-polimer konjugatu formiran ostatkom L-aminokiseline, nastali polimer biti će podložan enzimskoj razgradnji. S druge strane, kada je aminokiselinski slijed polimera u lipid-polimer konjugatu ovog otkrića formiran D-aminokiselinom, nastali će polimer vjerovatno biti stabilniji prema djelovanju enzima koji razgrađuju peptide. Smjesa L- i D-aminokiselina također može biti upotrebljena. Uzimajući u obzir različita svojstva polimera, površinska modifikacija čestica koloidnih nosača, u koje su inkorporirani lipid-polimer konjugati otkrića, može biti prilagođena selektivnom upotrebom L- i/ili D-oblika početnih tvari za pripravu konjugata.
Važno svojstvo spojeva poli-(aminokiseline), poli-(derivata aminokiseline) ili poli-(analoga aminokiseline), koji su prikladni za inkorporaciju u lipid-polimer konjugate prisutnog otkrića, je to što su oni topljivi u vodi (najmanje 1 dio u 100 dijelova vode, preferirano 1 dio u 30 dijelova vode, najviše preferirano 1 dio u 10 dijelova vode ili manje). Polimeri također mogu biti okarakterizirani svojim χ-parametrom u vodi. Taj parametar interakcije polimer-otapalo može biti određen npr. membranskom osmometrijom. Polimeri koji mogu biti korisno upotrebljeni u lipid-polimer konjugatima prema otkriću posjeduju vrijednosti χ-parametra ≤0,65, a preferirano ≤0,5 u vodi.
Nadalje, važno je obilježje polimera i to što oni sadrže neznatnu količinu nabijenih skupina unutar (fiziološkog) pH raspona 4-8. Preferirani monomeri neutralnih aminokiselina ili monomeri analoga aminokiselina upotrebljavaju se u pripravi polimera ili monomera derivata aminokiselina, koji su neutralni ili se neutraliziraju. Nabijene skupine mogu biti prisutne u malom postotku bez da narušavaju dugocirkulirajuća svojstva pripravaka koloidnog nosača prema prisutnom otkriću. Kao što je pokazano za kopolimere 2-hidroksietil-1-glutamina i nabijene monomere, pozitivno nabijene skupine mogu biti prisutne u većem postotku od negativno nabijenih skupina.
Prikladni monomeri za pripravu polimera su među ostalim alanin, treonin, valin, sarkosin, α-aminoadipinska kiselina, derivati α,γ-diaminobutirinske kiseline, ornitin, glutamin i derivati, uključujući glutaminsku kiselinu, asparagin i derivati, uključujući asparaginsku kiselinu, derivati lizina, metionin i derivati, serin, njegovi derivati i analozi s dodatnim CH2 skupinama kao što su homoserin i pentahomoserin. Prikladne bočne skupine uključuju (C1-C4)-alkil, hidroksialkil, dihidroksialkil, kiselinske amide i arilne skupine ili njihove kombinacije, koje osiguravaju da polimer ostaje topljiv u vodi. Primjeri tih skupina su 2-hidroksietil, 3-hidroksipropil, 4-hidroksibutil i 2,3-dihidroksipropil. Polimeri koji mogu biti upotrebljeni su npr. poli(D,L-serin) (PDLS), poli(2-hidroksietil)-D,L-glutamin (PDLHEG), poli(2-hidroksibutil)-1-glutamin (PHBG) i kopolimer poli(HEG-co-glutaminska kiselina) 1% glutaminske kiseline (PHEG1%GA). Preferirani polimeri su poli(D,L-glutamin) (PDLG), poli(D,L-asparagin) (PDLA), poli(hidroksipropil)-1-glutamin (PHPG), poli(2-hidroksipropil)-1-glutamin (P2HPG) i kopolimeri beta-alanina i 2-hidroksi-1-glutamina (PbAHEG), poli(HEG-co-dimetilaminoetil-glutamin) koji sadrži 5 i 1% dimetilaminoetilnih bočnih skupina (PHEG5%DG) i (PHEG1%DG). Više preferirani polimeri su homopolimeri poli-[N-(2-hidroksietil)-1-glutamin] (PHEG), poli(2-hidroksietil)-1-asparagin (PHEA) i poli(D,L-metioninsulfoksid) (PDLMS).
Polimerni lanac sadrži između 5 i 500 monomerskih podjedinica, preferirano između 20 i 100. Prosječna molekulska masa polimera varira od 500 do 75 000, preferirano od 2 000 do 15 000. Prosječna molekulska masa može biti određena na različite načine koji su poznati u struci. U primjerima prisutne prijave procjena molekulske mase bazirana je na NMR-podacima.
Za pripravu lipid-polimer konjugata inkorporiranih u pripravke prisutnog otkrića preferirano su upotrebljene manufakturne metode, pri čemu su reaktivne skupine u bočnom lancu aminokiselinskog monomera zaštićene prije polimerizacije i spajanja lipida.
Lipid-polimer konjugati mogu se pripraviti prema metodama poznatim u struci.
Dobro poznata metoda priprave aminokiselinskih polimera obuhvaća polimerizaciju uz otvaranje prstena odgovarajućih aminokiselinskih N-karboksi-anhidrida (NCA), koja je izborno osigurana s jednom ili više zaštitnih skupina i koja je inicirana nukleofilima kao što su (C1-C4)-alkilni, primarni amini. Druga metoda za dobivanje lipid-polimer konjugata obuhvaća upotrebu amina s zaštićenom funkcionalnom skupinom, na primjer N-Boc-1,4-diaminobutana, kao inicijatora polimerizacije uz otvaranje prstena NCA. Iako taj postupak zahtjeva dva dodatna koraka-deprotekciju funkcionalne skupine i naknadno spajanje s lipidom koji sadrži reaktivne skupine, lipid-polimer konjugati pripravljeni tom metodom su također prikladni za inkorporiranje u pripravke koloidnog nosača ovog otkrića. Ako je amfifilni lipid C8-C50 razgranati ili ravnolančani mono- ili di-alkilni, -hidroalkilni ili -alkilenski amid, alkanol ili ceramid, može biti korisno upotrebljen kao inicijator u postupku polimerizacije uz otvaranje prstena. To znači da je tijekom polimerizacije amfifilni lipid spojen s polimerom u jednom koraku. Molekulska masa poliaminokiseline jako ovisi o otapalu ili kombinaciji otapala, o čistoći korištenih kemikalija i o omjeru monomer/inicijator polimerizacije. Općenito, što je veći omjer monomer/inicijator polimerizacije, to će biti veća molekulska masa polimera.
Za pripravu polimera prethodno definiranog pripravka, preferirano se upotrebljava metoda sinteze krute faze peptida.
Zaštitne skupine prisutne u ponavljajućim jedinicama polimera mogu se ukloniti aminolizom uz upotrebu amino-alkohola kao što su 2-aminoetanol, 3-aminopropanol ili 2,3-dihidroksipropilamin.
Lipid-polimer konjugati prisutnog otkrića mogu biti prikladno inkorporirani u pripravke koloidnog nosača otkrića, kao što su sustavi mjehurića s lipidnim dvoslojem-liposomi, niosomi i obrnuti lipidni mjehurići, sustavi micela, nanokapsule, nanosfere itd. Preferirani sustavi koloidnog nosača su sustavi mjehurića s lipidnim dvoslojem.
U pripravi liposoma, lipid-polimer konjugat u skladu s otkrićem pomiješan je s komponentama koje se uobičajeno koriste u preparaciji liposoma, kao što su lipidi koji tvore lipidni mjehurić, stabilizatori itd. Konjugat je uključen pri molarnoj koncentraciji koja je dovoljna da produži cirkulacijsko vrijeme liposoma u krvi nekolika puta u odnosu na odgovarajuće liposome koji nemaju lipid-polimer konjugat. Polimerni konjugat je uobičajeno uključen pri 1-15 molarnom postotku, preferirano pri 3-10 molarnom postotku i najviše preferirano pri 5-7,5 molarnom postotku.
Prosječna veličina liposoma za određivanje tehnikama dinamičnog raspršenja svjetlosti (DLS) je ispod 200 nm, preferirano ispod 150 nm i najviše preferirano ispod 100 nm. Niža granica za tu vrstu čestica koloidnog nosača je 20 nm.
Polimer-lipid konjugati, inkorporirani u nabijene liposome, smanjuju zeta-potencijal što pokazuje da cijepljenje polimera zasijenjuje površinski naboj.
Pripravci mogu biti primjenjeni na nekoliko načina, no preferirana je parenteralna primjena. Ovisno o aktivnom sastojku i medicinskoj indikaciji ili poremećaju koji se treba liječiti, primjena može uključivati intravenozne, potkožne, intramuskularne, intraperitonealne, intra-artikularne itd. injekcije.
Nakon intravenozne primjene liposomskog preparata štakorima prema prisutnom otkriću, cirkulacijsko vrijeme liposoma u krvi može ovisiti o željenom cilju. Cirkulacijsko vrijeme u krvi ovisi o upotrebljenom lipid-polimer konjugatu, posebno o izboru kombinacije lipid/polimer, o molekulskoj masi polimera i o gustoći cijepljenja. Rezultati slični onima dobivenim s odgovarajućim PEG-cijepljenim liposomima opaženi su npr. za lipid-PEG konjugate, lipid-PHEA konjugate i lipid-PDLMS konjugate, pri čemu amfifilni lipid sadrži dvostruki hidrofobni rep (PHEG-diaminobutan-DODASuc, PHEA-DOSASuc i PDLMS-DODASuc).
Stabilnost liposomskih preparata, pripravljenih s lipid-polimer konjugatima prema prisutnom otkriću, općenito je poboljšana u usporedbi s uobičajenim liposomskim preparatima. Osim toga, stabilnost liposomskih preparata može se poboljšati i odgovarajućim odabirom lipid-polimer konjugata. Smatra se da taj odabir ovisi o izboru aktivnog agensa. Npr. enkapsulacija kortikosteroidnih derivata topljivih u vodi umjesto kortikosteroida per se u liposomske preparate rezultirat će povećanom stabilnošću liposomskih preparata. Enkapsulacija prednizol-fosfata u liposom koji sadrži polihidroksietilasparagin-DODASuc konjugat daje malo bolji rezultat nego inkorporacija u liposom koji sadrži poli(2-hidroksietil)-1-glutamin-diaminobutan-DODASuc konjugat. Dalje poboljšanje stabilnosti može se postići uklanjanjem vodenog prenosnika iz liposomskog pripravka metodama poznatim u struci, kao što su sušenje smrzavanjem, sušenje raspršivanjem, rotacijska evaporacija itd.
Lipid-polimer konjugati, inkorporirani u pripravke koloidnog nosača prema prisutnom otkriću, osiguravaju dugocirkulirajuća svojstva tih pripravaka. Pod dugocirkulirajućim svojstvima smatra se povećanje cirkulacijskog vremena pripravka koloidnog nosača u krvi, u odnosu na pripravke koji ne sadrže lipid-polimer konjugate. Dugocirkulirajuća svojstva mogu se odrediti pomoću metoda koje su poznate u struci (Torchilin VP, Shtilman MI, Trubetskoy VS, Whiteman K, Milstein AM: Amfifilni vinil-polimeri djelotvorno produžuju cirkulacijsko vrijeme liposoma in vivo. Biochimica et Biophysica Acta (1994) 1195: 181-184; Torchilin VP, Trubetskoy VS, Whiteman KR, Caliceti P, Ferruti P, Verones FM:
Novi sintetički amfifilni lipidi za steričku protekciju liposoma in vivo. Journal of pharmaceutical sciences (1995) 84 (9): 1049-1053). Metoda za liposome dana je u primjerima. Zato takvi pripravci, pogotovo oni koji koji se sastoje od mjehurića, mogu biti upotrebljeni u nizu primjena. Osim kao rezervoar cirkulirajućeg lijeka, mogu biti upotrebljeni za pasivno ciljanje patoloških područja (tumori, infekcija, upala) i za aktivno ciljanje stanica u krvotoku, endotelija (npr. receptora povezanih s angiogenezom), npr. spajanjem do sredstava za obilježavanje kao što su monoklonalna antitijela. Nadalje, primjene mogu biti umjetan sustav dostave kisika, neinvazivna ispitivanja u kojima se upotrebljavaju radioaktivni markeri za prikazivanje srčanih šupljina i glavnih žila, te prevlake kojima se omogućuje prohodnost biomaterijala, kao što su kateteri i umjetni nadomjesci za krvne žile.
Pored toga, lipid-polimer konjugati su biorazgradivi i zato omogućuju niz prednosti, pogotovo s obzirom na činjenicu da ne postoji rizik od nakupljanja u stanicama ljudskog ili životinjskog tijela.
Nadalje, lipid-polimer konjugati pokazuju smanjenu ovisnost doze lipida u usporedbi s PEG-liposomima.
Druga dodatna, ali vrlo važna prednost može biti to što nije opaženo pojačano uklanjanje nakon druge injekcije pripravka u skladu s otkrićem i što je smanjenje cirkulacijskog vremena u krvi umjereno.
Pripravci koloidnog nosača prema prisutnom otkriću omogućuju različite mogućnosti primjene u terapiji, dijagnostici, preventivnoj medicini itd. Zbog multifunkcionalnosti lipid-polimer konjugata, čije komponente mogu biti odabrane s obzirom na svrhu i raznolikošću sustava koloidnog nosača iz kojeg mogu biti izabrani, pojavit će se mogućnost osmišljavanja svakog aktivnog agensa kao prikladnog pripravka koloidnog nosača. Ako se u prvom stupnju nakon intravenozne primjene pripravka prema otkriću, ne opazi ili se opazi slabi učinak na vrijeme cirkulacije u krvi, stručnjak može promijeniti niz različitih parametara u lipid-polimer konjugatu (npr. molekulsaka masa, izabrana gustoća, polimer, lipid itd.) i u pripravku koloidnog nosača za povećavanje cirkulacijskog vremena u skladu sa standardom. Vrlo zanimljiv učinak u skladu s otkrićem uočava se kada pripravci kao aktivni agens sadrže kortikosteroid topljiv u vodi. U in vivo eksperimentalnom artritisnom modelu, pokazalo se da je jedna jedina intravenozna injekcija takvog pripravka jednako djelotvorna kao i ponavljane injekcije neenkapsulipanog kortikosteroidnog spoja ili kada je isti enkapsuliran u uobičajene liposome. Zanimljivi kortikosteroidi topljivi u vodi su budezonid-fosfat, te derivati flunizolid-propionata i flutikason-propionata, topljivi u vodi. Korisni učinci mogu biti potpuno i dugotrajno smanjenje simptoma koji su povezani s artritisom, dok će nuspojave povezane s terapijom koja je bazirana na kortikosteroidima biti smanjeni, zbog smanjenja količine kortikosteroida koji moraju biti propisani i zato što se sada mogu upotrijebiti kortikosteroidi koji se uobičajeno brzo ukljanjaju iz krvi. Korisni učinci pripravaka u skladu s prisutnim otkrićem biti će brzo prepoznati i kod liječenja drugih bolesti u kojima su kortikosteroidi izborni lijek ili su upotrebljeni kao koterapija. I ostali aktivni agensi također pokazuju zanimljive učinke u pripravcima otkrića.
Iako je prethodno otkriće opisano u nekim detaljima pomoću objašnjenja i primjera u svrhu razumjevanja i jasnoće, stručnjacima će se odmah činiti da u smislu podučavanja ovog otkrića, mogu biti učinjenje određene promjene i modifikacije bez odvajanja od područja dodatnih zahtjeva.
Slijedeći primjeri nadalje objašnjavaju otkriće.
Primjeri
Primjer 1
Poli(γ-benzil-1-glutamat) koji sadrži heptadeciloktadecilaminsku krajnju skupinu (PBLG-
heptadeciloktadecilamin)
0,94 g (3,6 mmola) N-karboksianhidrida (NCA) γ-benzil-1-glutamata otopljeno je u 5 mL suhog DMF, pod atmosferom dušika. Zatim je odjednom dodana otopina 25 mg (0.05 mmola) 1-heptadecil-oktadecilamina (Sigma Aldrich) u 1 mL suhog kloroforma. Gotovo odmah su nastali mjehurići CO2. Otopina je miješana 1 dan pri sobnoj temperaturi i zatim je istaložila u suvišku vode od 10-20 puta. Bijeli talog je sakupljen, te je osušen in vacuo. Dobiveno je 0,75 g produkta.
Karakterizacija:
1H-NMR u CDCl3 (δ u ppm u odnosu na maksimum otapala):
Benzilglutamat: 7,2 (C6H5 ), 5,0 (benzilni CH2), 3,9 (α-CH), 2,8 i 2,2 (β i γ CH2),
Alkilni lanac: 1,2 (CH2 alkilni lanac), 0,85 (CH3)
Primjer 2
Poli[N-(2-hidroksietil)-1-glutamin] koji sadrži heptadeciloktadecilaminsku krajnju skupinu (PHEG-
heptadeciloktadecilamin)
Otopini 0,60 g PBLG-heptadeciloktadecilamina (vidi prije) u 5 mL suhog DMF dodano je 0,15 g 2-hidroksipiridina i 0,80 mL etanolamina. Otopina je miješana 3 dana pri sobnoj temperaturi i pod atmosferom dušika. Otopina je istaložila u suvišku dietiletera od 10-20 puta.
Produkt je sakupljen, te je osušen in vacuo. Polimerni produkt koji je topljiv u vodi dijalizom je odvojen od vode u cjevčicama za dijalizu s celuloznim esterom (MCWO 500) 2 dana. Pročišćeni PHEG koji sadrži heptadecilokta decil aminsku krajnju skupinu dobiven je nakon sušenja smrzavanjem. Dobiveno je 0,30 g produkta.
Karakterizacija:
1H-NMR u CDCl3 (δ u ppm u odnosu na maksimum otapala):
Hidroksietilglutamin: 4,1 (α-CH), 2,2 i 1,8-1,9 (β i γ CH2), 3,4 (CH2-OH), 3,1 (CH2-NH2),
Alkilni lanac: 1,2 (CH2 alkilni lanac), 0,8 (CH3)
Iz omjera integrala stearilnih signala i α-CH signala, PHEG molekulska masa je procijenjena na 12 000.
Primjer 3
Poli-[N-(2-hidroksietil)-1-glutamin] koji sadrži distearilaminsku krajnju skupinu koja je uvedena pomoću N-Boc-1,4-diaminobutana kao inicijatora (PHEG-diaminobutan-DODASuc)
2,5 g (9,5 mmola) N-karboksianhidrida γ-benzil-1-glutamata otopljeno je u smjesi 2,5 mL suhog etilacetata i 12,5 mL suhog diklormetana, te je zatim dodano 0,95 mL (0,95 mmola) 1 molarne otopine N-Boc-1,4-diaminobutana u diklormetanu kao inicijatora. Smjesa je miješana 3 dana pod atmosferom dušika i pri sobnoj temperaturi, te zatim je istaložila u metanolu. Dobiveno je 1,48 g PBLG-N-Boc-diaminobutana.
1H-NMR (CDCl3) spektar pokazao je N-Boc-1,4-diaminobutanske signale pri δ 1,4-1,3.
Maldi TOF ms:
Masa ponavljajuće jedinice benzilglutaminske kiseline: n x 219.
m/z 1417 (n=5), 1636 (n=6), 1855 (n=7), 2074 (n=8), što odgovara masama natrijevog adukta s N-Boc-diaminobutanskom (187 Da) skupinom i krajnjom skupinom cikličkog peptida (112 Da).
m/z 1433 (n=5), 1652 (n=6), 1872 (n=7), što odgovara masama kalijevog adukta s N-Boc-diaminobutanskom (187 Da) skupinom i krajnjom skupinom cikličkog peptida (112 Da).
Deprotekcija PBLG-N-Boc-diaminobutana.
738 mg PBLG-N-Boc-diaminobutana miješano je tijekom 3,5 h u 5 mL otopine 4N HCl u dioksanu. Zatim je reakcijska smjesa uparena rotavapom. Ostatak je otopljen u 5 mL tetrahidrofurana, te je kap po kap dodan u 80 mL otopine NaHCO3 (6,5 g u vodi). Produkt je profiltriran, ispran vodom i osušen in vacuo. Dobiveno je 677 mg PBLG-diaminobutana.
1H-NMR (CDCl3) pokazao je da je zaštitna skupina uspješno uklonjena.
Maldi TOF masena analiza pokazala je željene molmase.
Masa ponavljajuće jedinice benzilglutaminske kiseline: n x 219.
m/z 1318 (n=5), 1537 (n=6), 1756 (n=7), 1976 (n=8), što odgovara masama natrijevog adukta s N-Boc-diaminobutanskom (87 Da) skupinom i krajnjom skupinom cikličkog peptida (112 Da).
Spajanje s DODASuc:
62 mg (0,1 mmola) N-sukcinil-dioktadecilamina (DODASuc, Schmitt i ostali, J. Am. Chem. Soc. 1994, 116, 19, 8485-8491), 13,7 mg (0,12 mmola) N-hidroksisukcinimida i 0,66 mg dimetilaminopiridina (DMAP) otopljeno je u 2 mL diklormetana. Nakon hlađenja do 0 °C dodano je 24,6 mg (0,12 mmola) N,N'-dicikloheksilkarbodiimida (DCC). Otopina je miješana 1 sat pri 0 °C i preko noći pri sobnoj temperaturi. Zatim je profiltrirana netopljiva dicikloheksilurea i filtrat je dodan u otopinu 200 mg PBLG-diaminobutana u 3 mL diklormetana i 14 μL trietilamina. Nakon miješanja preko noći pri sobnoj temperaturi, otopina je kap po kap dodana u metanol, profiltrirana je i osušena. Dobiveno je 135 mg produkta. 1H-NMR (CDCl3) spektar pokazao je prisutnost distearila, CH2 signale pri δ 1,4-1,2 i CH3 signale pri δ 0,9-0,8.
Maldi TOF masena analiza pokazala je željene molmase, što ukazuje da je DODASuc vezan s PBLG-diaminobutanom.
m/z 1922 (n=5), 2141 (n=6), 2360 (n=7), 2580 (n=8), 2799 (n=9), 3018 (n=10), što odgovara masama natrijevog adukta PBLG-diaminobutan-DODASuc s krajnjom skupinom cikličkog peptida (112 Da).
Struktura:
[image]
Aminoliza.
120 mg PBLG-diaminobutan-DODASuc i 10,8 mg 2-HP otopljeno je u 1,3 mL dimetilformamida i zatim je dodano 0,68 mL 2-aminoetanola. Nakon 24 sata miješanja pri 40 °C, pod atmosferom dušika, otopina je kap po kap dodana u kloroform. Produkt je profiltriran i osušen u vakuumu. Dobiveno je 83 mg PHEG-diaminobutan-DODASuc.
1H-NMR (DMSO) pokazao je distearilne signale pri δ 1,2-1,4 (CH2) i δ 0,9-0,8 (CH3).
Iz omjera integrala stearilnih signala i α-CH signala, PHEG molekulska masa je procijenjena na 4 000.
Struktura:
[image]
Primjer 4
Poli-[N-(2-hidroksietil)-1-glutamin] koji sadrži aminsku krajnju skupinu koja je uvedena pomoću distearilamina kao inicijatora (PHEG-distearilamin)
1,0 g (3,8 mmola) N-karboksianhidrida γ-benzil-1-glutamata otopljeno je u smjesi 1 mL suhog etilacetata i 5 mL suhog kloroforma. Zatim je dodano 2 mL (0,19 mmola) otopine 163 g distearilamina u 3,26 mL kloroforma. Na tikvicu je stavljena CaCl2 cjevčica i smjesa je miješana četri dana pod dušikom i pri sobnoj temperaturi. Smjesa je zatim kap po kap dodana metanolu, polimer je izoliran filtracijom i osušen in vacuo. Dobiveno je 757 mg PBLG-distearilamina.
Reakcija:
[image]
1H-NMR (CDCl3) analiza pokazala je distearilne signale u produktu: CH3 signal pri δ 0,9 (t) i CH2 signal pri δ 1,3-1,2.
Maldi TOF ms:
Masa ponavljajuće jedinice benzilglutaminske kiseline: n x 219.
m/z 1971 (n=6), 2190 (n=7), 2410 (n=8), 2629 (n=9), 2848 (n=10), što odgovara masama natrijevog adukta s distearilaminskom (521 Da) skupinom i krajnjom skupinom cikličkog peptida (112 Da).
m/z 2206 (n=7), 2427 (n=8), što odgovara masama kalijevog adukta s distearilaminskom (521 Da) skupinom i krajnjom skupinom cikličkog peptida (112 Da).
Aminoliza
Aminoliza prethodno pripravljenog PBLG-distearilamina (600 mg) s aminoetanolom i 2-hidroksipiridinom kao katalizatorom u dimetilformamidu dala je 430 mg PHEG-distearilamina.
1H-NMR (d6-DMSO) je pokazao distearilaminske signale.
Struktura:
[image]
Primjer 5
Poli-[N-(hidroksialkil)-1-glutamin] koji kao krajnju skupinu sadrži diaminobutan-DODASuc
PBLG-diaminobutanBOC:
U otopinu 3 g N-karboksianhidrida γ-benzil-1-glutamata u 8 mL suhog DMF dodana je otopina 0,1 g N-BOC-1,4-diaminobutana u 1 mL kloroforma. Tijekom prvog sata uočeno je razvijanje plina (ugljični dioksid). Otopina je miješana 1 dan pod atmosferom dušika i pri sobnoj temperaturi. Nakon taloženja u otprilike 100 mL metanola, polimer je profiltriran i osušen, pri čemu je dobiveno 2 g PBLG koji sadrži BOC-zaštićenu amino-skupinu.
1H-NMR (CDCl3)(δ u odnosu na maksimum otapala):
BOC: 1,4 (CH3)
PBLG: 2,2 i 2,6 (β,γ-CH2), 4,0 (α-CH), 5,0 (benzilna CH2), 7,3 (fenil)
PBLG-diaminobutan (uklanjanje zaštitne BOC-skupine):
Otopina 1,1 g PBLG-diaminobutanBOC u 5 mL 4N smjese HCl/dioksan miješana je 3-4 sata i zatim je dodana kap po kap u oko 80 mL otopine NaHCO3 (6,5 g u vodi). Produkt je profiltriran, ispran vodom i osušen in vacuo. Dobiveno je 1 g PBLG-diaminobutana.
1H-NMR (CDCl3) (δ u odnosu na maksimum otapala):
PBLG: 2,2 i 2,6 (β,γ-CH2), 4,0 (α-CH), 5,0 (benzilna CH2), 7,3 (fenil)
Odsutnost BOC signala
PBLG-diaminobutan-DODASuc (DCC spajanje):
170 mg N-sukcinil-dioktadecilamina (DODASuc), 90 mg DCC i 10 mg 4-(dimetilamino)- piridinij 4-toluen sulfonata (DPTS) otopljeno je u 4 mL diklormetana. Otopina je miješana 1 sat pri sobnoj temperaturi. Zatim je dodana otopina 0,73 g PBLG-diaminobutana i 40 μL trietilamina u 3 mL kloroforma. Nakon miješanja preko noći pri sobnoj temperaturi, otopina (koja sadrži talog dicikloheksiluree) dodana je kap po kap u suvišak metanola (otprilike 100 mL). Polimerni produkt je profiltriran i osušen. Dobiveno je 0,5 g produkta.
1H-NMR (CDCl3)(δ u odnosu na maksimum otapala):
distearilni signali pri 0,8-0,9 (CH3) i 1,2-1,4 (metilenski protoni)
PBLG: 2,2 i 2,6 (β,γ-CH2), 4,0 (α-CH), 5,0 (benzilna CH2), 7,3 (fenil)
5.1 PHEG-diaminobutan-DODASuc
PHEG-diaminobutan-DODASuc dobiven je aminolizom PBLG-diaminobutan-DODASuc s etanolaminom na slijedeći način:
0,5 g PHEG-diaminobutan-DODASuc i 15 mg 2-hidroksipiridina otopljeno je u 4 mL DMF. Zatim je dodano 2 mL etanolamina. Nakon 24 sata miješanja pri 40 °C i pod atmosferom dušika, otopina je istaložila u otprilike 100 mL dietiletera. PHEG-diaminobutan-DODASuc je otopljen u vodi, dijaliziran (MWCO 500), te je uz sušenje smrzavanjem dobiveno 0,35 g pročišćenog PHEG-diaminobutan-DODASuc konjugata.
1H-NMR (d6-DMSO) (δ u odnosu na maksimum otapala):
distearilni signali pri 0,8-0,85 (CH3) i 1,2-1,5 (metilenski protoni)
PHEG: 1,7 i 2,2 (β,γ-CH2), 3,1 i 3,3 (hidroksietil), 4,2 (α-CH), 4,7 (OH), 7,8 i 8,2 (NH)
Iz omjera integrala stearilnih signala i α-CH signala, PHEG molekulska masa je procijenjena na oko 4 000.
Maldi-TOF potvrđuje molekulsku strukturu PHEG-diaminobutana-DODASuc konjugata.
Na+-adukt: m/z 3064,5 (n=13), 3236,1 (n=14), 3408,7 (n=15), 3580,6 (n=16), 3752,9 (n=17), 3924,7 (n=18), 4096,7 (n=19), 4268,4 (n=20), 4441,1 (n=21), 4613,3 (n=22), 4785,1 (n=23), itd.
5.2 Poli-[(2-hidroksipropil)-1-glutamin]-diaminobutan-DODASuc
Poli-[(2-hidroksipropil)-1-glutamin]-diaminobutan-DODASuc dobiven je aminolizom PBLG-diaminobutan-DODASuc s 2-propanolaminom (izopropanolaminom) na slijedeći način:
0,15 g PBLG-diaminobutan-DODASuc i 0,05 g 2-hidroksipiridina otopljeno je u 4 mL DMF. Zatim je dodan 1 mL 2-propanolamina. Nakon 24 sata miješanja pri 40 °C i pod atmosferom dušika, otopina je istaložila u otprilike 100 mL dietiletera. Nakon sušenja dobiveno je 0,1 g PHisoPG-diaminobutan-DODASuc. Polimer je otopljen u vodi, dijaliziran (MWCO 500), te je uz sušenje smrzavanjem dobiven pročišćeni poli-[(2-hidroksipropil)-1-glutamin]-diaminobutan-DODASuc.
1H-NMR (d6-DMSO) (δ u odnosu na maksimum otapala):
distearilni signali pri 0,8-0,85 (CH3) i 1,2-1,5 (metilenski protoni)
PHPG: 1,7-2,2 (β,γ-CH2), 1,0 (CH3) i 3,0 i 3,3 i 3,7 (hidroksipropil), 4,2 (α-CH), 4,7 (OH), 7,8 i 8,2 (NH)
Izračunata molekulska masa: oko 4 000.
5.3 Poli-[(3-hidroksipropil)-1-glutamin]-diaminobutan-DODASuc
Poli-[(3-hidroksipropil)-1-glutamin]-diaminobutan-DODASuc dobiven je aminolizom PBLG-diaminobutan-DODASuc s 3-propanolaminom:
0,3 g PBLG-diaminobutan-DODASuc i 0,1 g 2-hidroksipiridina otopljeno je u 4 mL DMF. Zatim su dodana 2 mL 3-propanolamina. Nakon 24 sata miješanja pri 40 °C i pod atmosferom dušika, otopina je istaložila u otprilike 100 mL dietiletera. Nakon sušenja dobiveno je 0,25 g PHPG5000-diaminobutan-DODASuc. Polimer je otopljen u vodi, dijaliziran (MWCO 500), te je uz sušenje smrzavanjem dobiven pročišćeni poli-[(3-hidroksipropil)-1-glutamin]-diaminobutan-DODASuc.
1H-NMR (d6-DMSO) (δ u odnosu na maksimum otapala):
distearilni signali pri 0,8-0,85 (CH3) i 1,2-1,5 (metilenski protoni)
PHPG: 1,7-2,2 (β,γ-CH2), 1,5 i 3,1 i 3,3 (hidroksipropil), 4,2 (α-CH), 4,6 (OH), 7,8 i 8,2 (NH).
Molekulska masa: oko 5 000
Maldi-TOF:
Na+-adukt: m/z 3623 (n=15), 3810 (n=16), 3996 (n=17), 4182 (n=18), 4368 (n=19), 4555 (n=20), itd.
5.4 Poli-[(4-hidroksibutil)-1-glutamin]-diaminobutan-DODASuc
Poli-[(4-hidroksibutil)-1-glutamin]-diaminobutan-DODASuc dobiven je aminolizom PBLG-diaminobutan-DODASuc s 4-butanolaminom:
0,3 g PBLG-diaminobutan-DODASuc i 0,1 g 2-hidroksipiridina otopljeno je u 4 mL DMF. Zatim su dodana 2 mL 4-butanolamina. Nakon 48 sati miješanja pri 40 °C i pod atmosferom dušika, otopina je istaložila u otprilike 100 mL dietiletera. Polimer je otopljen u vodi, dijaliziran (MWCO 500), te je uz sušenje smrzavanjem dobiveno 0,2 g pročišćenog poli-[(4-hidroksibutil)-1-glutamin]-diaminobutan-DODASuc.
1H-NMR (d6-DMSO) (δ u odnosu na maksimum otapala):
distearilni signali pri 0,8-0,85 (CH3) i 1,2-1,5 (metilenski protoni)
PHBG: 1,7-2,2 (β,γ-CH2), 1,4 i 3,1 i 3,3 (hidroksibutil), 4,2 (α-CH), 4,5 (OH), 7,8 i 8,2 (NH).
Molekulska masa: oko 4 000
5.5 Poli-[(2,3-dihidroksipropil)-1-glutamin]-diaminobutan-DODASuc
Poli-[(2,3-dihidroksipropil)-1-glutamin]-diaminobutan-DODASuc dobiven je aminolizom PBLG-diaminobutan-DODASuc s 2,3-dihidroksipropilaminom:
0,15 g PBLG-diaminobutan-DODASuc i 0,06 g 2-hidroksipiridina otopljeno je u 3 mL DMF. Zatim je dodan 1 mL 2,3-dihidroksipropilamina. Nakon 1 dan miješanja pri 40 °C i pod atmosferom dušika, otopina je istaložila u otprilike 100 mL dietiletera. Polimer je otopljen u vodi, dijaliziran (MWCO 500), te je uz sušenje smrzavanjem dobiveno 0,1 g pročišćenog poli-[(2,3-dihidroksipropil)-1-glutamin]-diaminobutan-DODASuc.
1H-NMR (d6-DMSO) (δ u odnosu na maksimum otapala):
distearilni signali pri 0,8-0,85 (CH3) i 1,2-1,5 (metilenski protoni)
Poli(dihidroksipropil)G: 1,7-2,2 (β,γ-CH2), 3,1 i 3,3-3,6 (dihidroksipropil), 4,2 (α-CH), 4,6 i 4,8 (OH), 7,8 i 8,2 (NH).
Molekulska masa: oko 4 000.
Primjer 6
Kolesteril-PHEG
U otopinu 0,2 g PBLG-NH2 i 20 μL trietilamina u 2 mL kloroforma dodana je otopina 0,07 g kolesteril-kloroformata u 1 mL kloroforma. Otopina je miješana oko jedan sat pri sobnoj temperaturi, te je istaložila u dietileteru. Nakon sakupljanja i sušenja dobiveno je 0,13 g polimernog produkta.
Aminolizom s etanolaminom (2-hidroksipiridin u ulozi katalizatora) 1 dan pri 40 °C dobiven je kolesteril-PHEG. Polimerni produkt pročišćen je dijalizom (MWCO 500).
1H-NMR (d6-DMSO) (δ u odnosu na maksimum otapala):
PHEG: 1,7 i 2,2 (β,γ-CH2), 3,1 i 3,3 (hidroksietil), 4,2 (α-CH), 4,7 (OH), 7,8 i 8,2 (NH)
kolesteril: 0,6-1,6.
Molekulska masa: oko 4 000.
Maldi TOF potvrđuje molekulsku strukturu kolesteril-PHEG konjugata.
Na+-adukt: m/z 3046 (n=14), 3218 (n=15), 3390 (n=16), 3562 (n=17), 3735 (n=18), 3907 (n=19), 4080 (n=20), itd.
Primjer 7
Poli(2-hidroksietil)-DL-glutamin-diaminobutan-DODASuc
Sinteza je analogna onoj za poli(2-hidroksietil)-1-glutamin-diaminobutan-DODASuc (primjer 8) uz nekoliko razlika:
γ-benzil-DL-glutaminski NCA sintetiziran je iz smjese 1:1 γ-benzil-1- i γ-benzil-D-glutamata i kristalizirao je iz smjese etilacetat/heksan (otprilike 1:5) (vidi primjer 1).
Poli(benzil-DL-glutamin)-diaminobutan-BOC istaložio je u vodi, a ne u metanolu.
Poli(benzil-DL-glutamin)-diaminobutan-DODASuc istaložio je u metanolu.
NMR spektar je identičan spektru poli(2-hidroksietil)-1-glutamin-diaminobutan-DODASuc (primjer 8.1).
Molekulska masa: oko 3 000.
Primjer 8
PHEG kopolimeri: poli(HEG-ko-glutaminska kiselina)-diaminobutan-DODASuc; 5% glutaminske kiseline
Otopina 0,14 g PBLG-diaminobutan-DODASuc, 0,05 g 2-hidroksipiridina i otprilike 1 mL etanolamina u 1,5 mL DMF miješana je pod atmosferom dušika i pri sobnoj temperaturi jedan dan. Zatim je otopina istaložila u dietileteru. Produkt, djelomično etanolaminom aminolizirani PBLG-diaminobutan-DODASuc (PHEG s 5% bočnih skupina benzilnog estera), sakupljen je i osušen. NMR snimljen u DMSO pokazao je prisutnost 5% benzilnih skupina koje nisu izreagirale.
Navedeni polimer je otopljen u 8,5 mL 1M NaOH i miješan je 4 sata. Otopina je neutralizirana s 1N HCl i zatim je dijalizirana (MWCO 500) nekoliko dana. Negativno nabijeni (pri fiziološkom pH) kopolimer-lipid konjugat (0,1 g) dobiven je nakon sušenja smrzavanjem dijalizirane otopine.
NMR u DMSO pokazao je potpunu konverziju benzil-skupina.
MaldiTOF je upotrebljen za potvrđivanje prisutnosti ponavljajućih jedinica glutaminske kiseline i hidroksietilglutamina.
Molekulska masa: oko 3 500.
Primjer 9
PHEG kopolimer: poli(HEG-ko-dimetilaminoetilglutamin)-diaminobutan-DODASuc; 5% dimetilaminoetilnih bočnih skupina
Otopina 0,25 g PBLG-diaminobutan-DODASuc, 0,08 g 2-hidroksipiridina i 1 mL etanolamina u 2,5 mL DMF miješana je pod atmosferom dušika i pri sobnoj temperaturi jedan dan. Nastala otopina je istaložila u dietileteru. Produkt, djelomično etanolaminom aminolizirani PBLG-diaminobutan-DODASuc (PHEG s 5% bočnih skupina benzilnog estera), je sakupljen i osušen. NMR snimljen u DMSO pokazao je prisutnost 5% benzilnih skupina koje nisu izreagirale.
Otopina 0,16 g PBLG-diaminobutan-DODASuc, djelomično aminoliziranog etanolaminom, 0,06 g 2-hidroksipiridina i 1 mL N,N'-dimetiletilendiamina u 2,5 mL DMF miješana je 1 dan pod atmosferom dušika i pri 40 °C. Taloženje u dietileteru dalo je prašak koji je sakupljen i osušen in vacuo. NMR u DMSO pokazao je potpunu konverziju preostalih benzilnih skupina. Produkt je otopljen u vodi i dijaliziran (MWCO 500) nekoliko dana, a zatim je osušen smrzavanjem. Dobiveno je 0,1 g pozitivno nabijenog PHEG-kopolimer-lipid konjugata.
Molekulska masa: oko 4 000.
Primjer 10
Poli(2-hidroksietil)-1-asparagin (PHEA) koji sadrži stearilaminsku, odnosno hepta-deciloktadecilaminsku krajnju skupinu
N-karboksianhidrid (NCA) β-benzil-1-aspartata:
Suspenzija 5 g β-benzil-1-aspartata u 50 mL destiliranog THF uz oko 16 mL 20 % otopine fosgena u toluenu zagrijavana je pri 60-65 °C (protok dušika nad otopinom). Nakon otprilike 10 minuta dobivena je bistra otopina. Nakon otprilike 1,5 h otopina je polagano dodana u oko 140 mL n-heksana. Gotovo odmah su nastali kristali. Nakon daljnje kristalizacije tijekom noći pri -20 °C izoliran je kristalični produkt. Daljnjim kristalizacijama iz smjese THF/heksan i iz vrućeg kloroforma dobiveno je 4,3 g sitnih, igličastih kristala. (Biopolymers 1976, 15(9) 1869-71).
1H-NMR (CDCl3)(δ u odnosu na maksimum otapala):
benzilna skupina: 7,3 (fenil), 5,1 (CH2)
aspartatni NCA: 2,8 i 3,0 (β-CH2), 4,5 (α-CH), 6,4 (NH)
stearil-PBLA:
U otopinu 0,95 g β-benzil-1-aspartatnog NCA u 2 mL DMF dodana je otopina 0,04 g stearilamina u 0,5 mL kloroforma. Nakon nekoliko sati miješanja pri 60 °C, mutna otopina je istaložila u metanolu. Nakon sušenja dobiveno je 0,56 g poli(benzil-1-aspartat)-stearilamina.
heptadecil-oktadecil-PBLA:
U otopinu 0,5 g β-benzil-1-aspartatnog NCA u 2 mL DMF dodano je 0,1 g 1-heptadecil-oktadecilamina u oko 1 mL kloroforma. Nakon 3 dana miješanja pri sobnoj temperaturi, mutna otopina je istaložila u metanolu. Dobiveno je 0,2 g polimernog produkta PBLA-heptadecil-oktadecilamina.
stearil-/heptadecil-oktadecil-PHEA:
Aminolizom prethodnog PBLA konjugata upotrebom etanolamina i 2-hidroksipiridina kao katalizatora pri 40 °C 1 dan, a zatim taloženjem u dietil-eteru, dobije se poli(hidroksietil)-1-asparagin (PHEA) koji je topljiv u vodi i koji sadrži stearilni, odnosno heptadecil-oktadecilni rep. Lipid-polimer konjugati su pročišćeni dijalizom (MWCO 500).
stearil-PHEA:
Maldi TOF: Na+-adukt: m/z 2823 (n=16), 2981 (n=17), 3139 (n=18), 3297 (n=19), 3455 (n=20), 3613 (n=21), itd.
Podaci dobiveni iz Maldi TOF doveli su do zaključka da svaki PHEA lanac sadrži slobodnu krajnju amino-skupinu.
heptadecil-oktadecil-PHEA:
NMR (d6-DMSO) (δ u odnosu na maksimum otapala):
heptadecil-oktadecil: 0,8 i 1,2.
PHEA: 2,2-2,6 (β-CH2), 3,1 i 3,4 (hidroksietil), 4,5 (α-CH + OH), 7,8 i 8,3 (NH)
Molekulska masa: oko 6 000.
Primjer 11
Poli(2-hidroksietil)-1-asparagin-DODASuc
PBLA-DODASuc:
U otopinu 1,7 g N-karboksianhidrida (NCA) β-benzil-1-aspartata u 5 mL DMF dodano je 0,2 mL 2M otopine metilamina u THF. Bistra otopina je miješana jedan dan i zatim je istaložila u smjesi metanola (oko 100 mL) i vode (oko 250 mL). Dobiveno je 1,3 g PBLA koji sadrži metil-amidnu i krajnju amino-skupinu.
Otopina 0,4 g PBLA, 30 mg DCC, 10 mg DPTS i 100 mg N-sukcinil-distearilamina u 5 mL DMSO i 1 mL kloroforma miješana je jedan dan i zatim je istaložila u vodi. Polimerni produkt je miješan/ispran dietil-eterom i osušen.
PHEA-DODASuc:
Aminolizom PBLA-DODASuc s etanolaminom (upotrebom 2-hidroksipiridina kao katalizatora) u otopini DMF pri 40 °C 1 dan, dobiven je PHEA-DODASuc (0,2 g nakon dijalize i sušenja smrzavanjem).
1H-NMR (d6-DMSO) (δ u odnosu na maksimum otapala):
distearil: 0,8 (CH3), 1,2 (CH2), 1,4 (CH2-N)
PHEA: 2,4-2,8 (β- CH2), 3,2 i 3,4 (hidroksietil), 4,6 (α-CH + OH), 7,8-8,5 (NH)
Izračunata molekulska masa: oko 3 000.
Maldi TOF potvrđuje molekulsku strukturu PHEA-DODASuc konjugata:
Na+-adukt: m/z 2084 (n=9), 2243 (n=10), 2401 (n=11), 2559 (n=12), 2718 (n=13), 2876 (n=14), itd.
[image]
Primjer 12
Poli(2-hidroksietil)-1-asparagin-DSPESuc konjugat
PHEA koji završava amino-skupinom dobiven je nakon aminolize PBLA (polibenzil-1-asparatata) dobivenog polimerizacijom benzil-1-aspartatnog NCA uz metilamin kao inicijator. Sukciniliran DSPE (sinteza analogna onoj koja je opisana za DPPE u JACS, 116, 8485 (1994)) prvo je pretvoren u svoj NHS-ester in situ upotrebom DCC (dicikloheksilkarbodiimida):
Otopina 70 mg sukciniliranog DSP, 20 mg NHS (N-hidroksisukcinimida), 5 mg DMAP i 30 mg DCC (dicikloheksilkarbodiimida) u 2 mL diklormetana miješana je otprilike 3-4 sata. Toj smjesi je dodana otopina 0,13 g PHEA koji završava amino-skupinom (molekulske mase oko 4 000) u 2 mL DMSO. Nakon miješanja preko noći smjesa je istaložila u eteru. Talog je sakupljen i otopljen u vodi, te dijaliziran (MWCO 500) nekoliko dana. Nakon sušenja smrzavanjem dobiveno je oko 80 mg PHEA-DSPE.
1H-NMR (d6-DMSO) (δ u odnosu na maksimum otapala):
DSPE: 0,8 (CH3), 1,2 (CH2), 1,4 (CH2-N)
PHEA: 2,4-2,8 (β- CH2), 3,2 i 3,4 (hidroksietil), 4,6 (α-CH + OH), 7,8-8,4 (NH)
Izračunata molekulska masa: oko 4 000
Primjer 13
Poli(DL-serin)-DODASuc
N-karboksianhidrid (NCA) o-benzil-DL-serin:
Suspenzija 2,5 g o-benzil-DL-serina u 30 mL destiliranog (suhog) THF uz oko 10 mL 20 % otopine fosgena u toluenu zagrijavana je pri 60-65 °C (protok dušika nad otopinom). Nakon otprilike 5 minuta dobivena je bistra otopina. Nakon otprilike 1,5 h otopina je polagano dodana u oko 100 mL n-heksana. Produkt je odijeljen u obliku ulja. Otapalo je dekantirano, a ulje je otopljeno u oko 25 mL etilacetata kojem je zatim polagano dodano 100 mL heksana. Nakon snažnog mućkanja tikvice i hlađenja pri -20 °C počeo je kristalizirati produkt. Sličnom prekristalizacijom iz smjese etilacetat/heksan i/ili iz smjese kloroform/heksan dobiveno je 2 g kristalične tvari. (Biopolymers 1976, 15(9) 1869-71).
1H-NMR (CDCl3) (δ u odnosu na maksimum otapala):
benzil-skupina: 4,5 (CH2), 7,2 (fenil)
serinski NCA: 3,7 (β-CH2), 4,4 (α-CH), 5,8 (NH)
Poli(o-benzil-DL-serin):
U otopinu 0,9 g o-benzil-DL-serinskog NCA u 2,5 mL DMF dodano je 0,08 mL otopine 2M metilamina u THF. Nakon nekoliko sati miješanja pri sobnoj temperaturi, otopina je postala mutna i viskozna. Nakon jednog dana viskozna, "kristalizirana" otopina je pomiješana sa smjesom metanol/voda da potpuno ustaloži polimerni produkt. Dobiveno je 0,6 g polimernog produkta poli(o-benzil-DL-serina).
1H-NMR u d6-DMSO (δ u odnosu na maksimum otapala):
benzil-skupina: 4,4 (CH2), 7,2 (fenil)
poliserin: 3,5 (β-CH2), 4,7 (α-CH), 8,2 (NH)
Poli(o-benzil-DL-serin)-DODASuc:
150 mg N-sukcinil-dioktadecilamina (DODASuc), 80 mg DCC i 5 mg DPTS otopljeno je u 4 mL kloroforma. Otopina je miješana 1 sat pri sobnoj temperaturi. Zatim je dodana otopina 0,6 g poli(o-benzil-DL-serina) i oko 50 μL trietilamina u 5 mL kloroforma. Nakon miješanja preko noći pri sobnoj temperaturi, otopina (koja sadrži talog dicikloheksiluree) dodana je kap po kap u suvišak metanola (oko 100 mL). Polimerni produkt je profiltriran i osušen. Dobiveno je 0,4 g produkta.
1H-NMR u d6-DMSO (δ u odnosu na maksimum otapala):
distearil: 0,8 (CH3), 1,2 (CH2), 1,6 (CH2-N)
benzilna skupina: 4,4 (CH2), 7,2 (fenil)
poliserin: 3,5 (β-CH2), 4,7 (α-CH), 8,2 (NH)
Poli(DL-serin)-DODASuc:
0,1 g poli(o-benzil-DL-serin)-DODASuc otopljeno je u oko 4 mL 33 % HBr/AcOH otopine i miješano 1 sat. Otopina je zatim istaložila u vodi. Polimerni talog je profiltriran, ispran vodom, te zatim otopljen (1-2 sata) u 4 mL NaOH. Nastala otopina je neutralizirana s otopinom 1N HCl, te je zatim dijalizirana (MWCO 500) nekoliko dana. Dijalizirana otopina je osušena smrzavanjem. Dobiveno je 20 mg poli(DL-serin)-DODASuc.
1H-NMR u d6-DMSO (δ u odnosu na maksimum otapala):
distearil: 0,8 (CH3), 1,2 (CH2), 1,6 (CH2-N)
poliserin: 3,6 (β-CH2), 4,3 (OH), 5,0 (α-CH), 8,0 (NH)
Iz omjera integrala distearilnih signala i α-CH signala, molekulska masa poliserina je procijenjena na oko 1 500.
[image]
Primjer 14
Poli-1-treonin-DODASuc
Sinteza je analogna sintezi poli(D,L-serin)-DODASuc i učinjena je preko N-karboksi- anhidrida (NCA) o-benzil-1-treonina, počevši od o-benzil-1-treonina, HCl i fosgena.
Poli-1-treonin-DODASuc (M=oko 2 000):
1H-NMR u d6-DMSO (δ u odnosu na maksimum otapala):
distearil: 0,8 (CH3), 1,2 (CH2), 1,6 (CH2-N)
politreonin: 1,0 (CH3), 4,0 (β-CH), 4,3 (α-CH), 5,0 (OH), 7,8 (NH)
Primjer 15
Poli(D,L-metioin-sulfoksid)-DODASuc
N-karboksianhidrid (NCA) DL-metionina:
Suspenzija 2,5 g DL-metionina u 40 mL destiliranog (suhog) THF s oko 15 mL 20 % otopine fosgena u toluenu zagrijavana je pri 60-65 °C. (Protok dušika nad otopinom). Gotovo odmah je nastala bistra otopina. Nakon otprilike jednog sata, otopina je polagano dodana u oko 140 mL n-heksana. DL-metioninski NCA je kristalizirao pri -20 °C (nekoliko dana). Prekristalizacijom iz smjese etilacetat/heksan dobiveno je oko 0,7 g kristalične tvari. (Biopolymers 1796, 15(9) 1869-71).
1H-NMR (CDCl3) (δ u odnosu na maksimum otapala):
metioninski NCA: 2,0-2,4 (β-CH2 + CH3), 4,5 (α-CH), 6,8 (NH)
Poli(DL-metionin):
U otopinu 0,7 g DL-metioninskog NCA u 2,5 mL DMF dodano je 0,1 mL otopine 2M metilamina u THF. Nakon jednog dana, mutna otopina je istaložila u oko 100 mL metanola i zatim je talog osušen. Dobiveno je 0,33 g polimernog produkta poli(DL-metionina).
1H-NMR u CDCl3/TF-d (δ u odnosu na maksimum otapala):
polimetionin: 2,0-2,3 (CH2 i CH3), 4,7 (α-CH).
Poli(DL-metionin)-DODASuc:
80 mg N-sukcinil-dioktadecilamina (DODASuc), 45 mg DCC i 5 mg DPTS otopljeno je u oko 2 mL kloroforma. Otopina je miješana 1 sat pri sobnoj temperaturi. Zatim je dodana otopina 0,33 g poli(DL-metionina) i oko 20 mL trietilamina u oko 2,5 mL DMSO. Nakon miješanja preko noći pri sobnoj temperaturi, otopina (koja sadrži talog dicikloheksiluree) je dodana, kap po kap, u suvišak metanola (oko 100 mL). Polimerni produkt je profiltriran i osušen. Dobiveno je 0,22 g produkta.
1H-NMR u d6-DMSO (δ u odnosu na maksimum otapala):
distearil: 0,8 (CH3), 1,2 (CH2), 1,4 (CH2-N)
polimetionin: 1,8 (β-CH2), 2,0 (CH3), 2,4 (γ-CH2), 4,4 (α-CH), 8,1 (NH)
Poli(DL-metionin-sulfoksid)-DODASuc:
mono-oksidacija poli(DL-metionin)-DODASuc:
Otopina 0,3 g natrijevog periodata u 2 mL vode polagano je dodana suspenziji 0,22 g poli(DL-metionin)-diaminobutan-DODASuc u oko 6 mL acetatne kiseline. Dobivena narančasto/crvena otopina (nastala nakon nekoliko sati) miješana je jednu noć. Zatim je dodano oko 15 mL vode i dobivena narančasto/crvena otopina je dijalizirana (MWCO 500) nekoliko dana. Nakon sušenja smrzavanjem dobiveno je 0,25 mg produkta.
1H-NMR u D2O (δ u odnosu na maksimum otapala):
distearil: 0,7 (CH3), 1,2 (CH2) (široki maksimum)
polimetionin-sulfoksid: 2,0 (β-CH2), 2,5 (CH3), 2,8 (γ-CH2), 4,3 (α-CH), 8,5 (NH)
Izračunata molekulska masa: oko 4 000.
[image]
Primjer 16
Poli(DL-glutamin)-DODASuc
Poli(DL-glutamin)-DODASuc konjugat sintetiziran je po Ansynth Service B.V. upotrebom metode sinteze krute faze peptida (oko 50 mg). Poli(DL-glutamin) (n=20) vezan je na smolu koja je načinjena korak po korak upotrebom Fmoc-zaštićenih aminokiselina. N-terminus je spojen s N-sukcinil-distearilaminom. C-terminus je pretvoren u amid. 1H-NMR spektar potvrdio je strukturu.
1H-NMR u d6-DMSO (δ u odnosu na maksimum otapala):
distearil: 0,8 (CH3), 1,2 (CH2), 1,4 (CH2-N)
poliglutamin: 1,7-2,2 (β, γ -CH2), 4,2 (CH), 6,8 i 7,3 (NH2), 8,2 (NH)
[image]
Primjer 17
Poli(DL-asparagin)-DODASuc
Poli(DL-asparagin)-DODASuc konjugat sintetiziran je po Ansynth Service B.V. upotrebom metode sinteze krute faze peptida (oko 50 mg). Poli(DL-asparagin) (n=20) vezan je na smolu koja je načinjena korak po korak upotrebom Fmoc-zaštićenih aminokiselina. N-terminus je spojen s N-sukcinil-distearilaminom. C-terminus je pretvoren u amid. 1H-NMR spektar snimljen u DMSO potvrdio je strukturu.
1H-NMR u d6-DMSO (δ u odnosu na maksimum otapala):
distearil: 0,8 (CH3), 1,2 (CH2), 1,4 (CH2-N)
poliasparagin: 2,5 (CH2), 4,5 (CH), 7,0 i 7,4 (NH2), 8,1 (NH)
[image]
Primjer 18
Poli-(D,L-alanin)-DODASuc
95 mg poli-DL-alanina (Sigma, Mr: oko 2 000) otopljeno je u 4 mL DMSO. Otopini je dodano 4 μL trietilamina. Zatim je otopina dodana otopini 0,1 g DODASuc, 70 mg DCC i 5 mg DPTS u 2 mL kloroforma koja je miješana 1 sat. Nakon jednog dana miješanja smjesa je istaložila u smjesi metanol/dietileter. Talog je profiltriran i osušen.
1H-NMR spektar snimljen u DMSO:
distearil: 0,8 (CH3), 1,2 (CH2), 1,4 (CH2-N)
polialanin: 1,2 (CH3), 4,2 (CH), 8,0 (NH).
Primjer 19
Kopolipeptid β-alanina i hidroksietil-1-glutamina
DODASuc-(β-Ala)3-Glu(OBzl)-(β-Ala)4-Glu(OBzl)-(β-Ala)3-Glu(OBzl)-(β-Ala)2-NH2:
Kopolipeprid β-alanina i hidroksietil-1-glutamina sintetiziran je metodom krute faze po Ansynth Service B.V., počevši od Fmoc-zaštićenih monomera.
C-terminus: amid; N-terminus: DODASuc
Kasnije su benzil-glutamatne jedinice prevedene u hidroksietil-glutaminske (HEG) aminolizom (etanolamin) provedenom u DMF.
1H-NMR snimljen u DMSO pokazao je odsutnost/konverziju benzilnih skupina.
Primjer 20
Priprava liposoma koji sadrže PHEG-stearilamin
Odvagano je 33,8 mg fosfatidilkolina iz jajeta (EPC) (Lipoid Ludwigshafen), 9,67 mg kolesterola (Sigma Aldrich) i 30,0 mg poli-[N-(2-hidroksietil)-1-glutamin]-stearilamina (PHEG-stearilamin) (sintetiziranog) i prebačeno u okruglu tikvicu od 50 mL. Dodano je 500 kBq kolesteriloliletera obilježenog tricijem kao lipidnog markera. Lipidi i oznaka su otopljeni u otprilike 10 mL etanola. Nakon uparivanja do suhog u rotavaporu tijekom 1 sata pod vakumom pri 40 °C, slijedilo je ispiranje dušikom tijekom 1 sata.
Suhom lipidnom filmu dodan je PBS, uz mućkanje tijekom 1 sata u prisutnosti staklenih kuglica da se tako omogući potpuna hidracija lipidnog filma.
Liposomska suspenzija je prebačena u uređaj za razdvajanje (Avestin, maksimalan volumen 15 mL) i razdvajana je pod tlakom, upotrebom dušika, 6 puta preko 2 polikarbonatna filtera koji su smješteni jedan iznad drugog i koji imaju veličinu pora od 200 nm, odnosno 100 nm, te 18 puta preko filtera koji imaju pore veličine 100 nm, odnosno 50 nm. Zatim je liposomska suspenzija dijalizirana dva puta u odijeljenom prostoru za dijalizu (Slide-A-Lyzer, 10 000 MWCO) tijekom 24 sata od 1 litre steriliziranog PBS.
Prosječna veličina čestica određena je pomoću raspršenja svijetlosti (Malvern Zeta-sizer) i iznosila je 93,6 ± 0,9 nm, indeks polidisperznosti iznosio je 0,099 ± 0,02. Lipidni gubitak tijekom priprave liposoma iznosio je 25%, te je određen uspoređivanjem konačne radioaktivnosti preparata s aktivnošću prije postupka razdvajanja. Suspenzija liposoma pohranjena je u atmosferi dušika pri 4 °C.
Primjer 21
Priprava liposoma koji sadrže lipid-polimer konjugate
Liposomi su pripravljeni upotrebom metode filma kao što je opisano u primjeru 20. Umjesto fosfatidilkolina iz jajeta upotrebljen je dipalmitoil-fosfatidilkolin. Suhom lipidnom filmu dodano je 5 mL HEPES pufera, uz mućkanje tijekom 5 minuta u prisutnosti staklenih kuglica da se tako omogući potpuna hidracija lipidnog filma. Liposomima je određena veličina razdvajanjem 12 puta preko dvije PC membrane koje imaju pore veličine 100 nm i 200 nm. Dobivena liposomska disperzija je dijalizirana (MWCO 10 000), a prosječna veličina čestica određena je upotrebom tehnike dinamičnog raspršenja svjetlosti. Vidi tablicu 1 o svojstvima liposomskih preparata.
Primjer 22
Usporedna kinetika tricijem označenihlipid-polimer konjugata inkorporiranih u liposome nakon jednostruke intravenozne injekcije štakorima
Ženke štakora (Wistar, Crl: (WI) BR (koje nisu skotne, SPF-svojstvo) (Charles River, Sulzfeld, Njemačka)) imale su slobodan pristup standardnoj, granuliranoj, laboratorijskoj vrsti prehrane (Altronim, kod VRF 1, Lage, Njemačka) i cjevčici za vodu. Intravenozna injekcija jednostruke doze liposomskih preparata, od kojih je svaki sadržavao kolesteriloleileter označen tricijem (Amersham) radioaktivnosti 40-50 kBq (pripravci od 50 μmola lipida prikazani su u tablici 1) dana je u repnu venu. Dano je 5 μmola ukupnog lipida, izuzev u indiciranim slučajevima.
Uzorci krvi sakupljeni su iz repne vene svakog štakora u slijedećim vremenskim intervalima nakon primjene: 5 minuta, 4 sata, 24 sata i 48 sati. Volumen sakupljenog uzorka bio je približno 300 μL po sakupljanju.
Uzorak krvi je prenesen u heparinizirane cjevčice i pohranjen pri -20 °C.
Pojedinačni alikvot od 100 μL razrijeđen je na slijedeći način:
100 μL je premješteno u scintilacijsku posudicu (20 mL).
Dodano je 100 μL sredstva Solvable, uz inkubaciju najmanje 1 sat.
Dodano je 100 μL 1 mM EDTA i 200 μL 30 % H2O2. Smjesa je inkubirana 24 sata pri sobnoj temperaturi i zatim preko noći pri 50 °C.
Dodana je Ultima Gold (10 mL) kao scintilacijska tekućina.
Radioaktivnost je izmjerena LSC-om.
Sva radioaktivna mjerenja izvedena su upotrebom Packard scintilacijskog brojača (1900TR). Brojanje vremena bilo je do statističke točnosti od ± 0,2 % ili maksimuma od 5 minuta, koje god se prvo postigne. Packard 1900TR je programiran tako da automatski oduzima pozadinu i pretvara broj impulsa po minuti (CPM) u broj raspada po minuti (DPM).
Za neke spomenute preparate, jetra i slezena štakora su secirane 48 sati nakon primjene i lokalizacija liposoma je određena prema slijedećoj metodi:
Organi su homogenizirani i homogenati su razrijeđeni do 25 mL (jetra) ili do 5 mL (slezena). 1 mL homogenata je prenesen u scintilacijsku posudicu u koju je zatim dodano:
200 mL sredstva Solvable (pomiješanog i uzorak je inkubiran pri 50 ° preko noći)
200 mL 0,5M otopine EDTA
250 mL otopine H2O2 (30 %) (inkubirano pri 50 °C preko noći)
10 mL scintilacijske tekućine Ultima Gold (promućkane i uzorak je inkubiran 24 sata).
Zatim su uzorci izmjereni beta-scintilacijskim brojačem 10 minuta. Rezultati nekih liposomskih preparata prikazani su na slici 6.
Pripravci liposomskih preparata, pripravljeni po primjeru 21 i rezultati, dobiveni in vivo ispitivanjem tog primjera, prikazani su u tablici 1. Određeno je povećanje cirkulacijskog vremena u krvi, pri čemu:
Dobro znači učinak na cirkulacijsko vrijeme, usporediv s onim koji pokazuju liposomi koji sadrže PEG-DSPE.
Umjereno znači učinak na cirkulacijsko vrijeme među onima koje pokazuju liposomi koji sadrže PEG-DSPE i liposomi bez dodataka, koji nisu ovijeni polimerom.
Slabo znači učinak na cirkulacijsko vrijeme pod gotovo sličnim uvjetima sa onim koji pokazuju liposomi bez dodataka.
Tablica 1
Pripravci liposoma po 50 μmola lipida i svojstva
[image]
* : primjenjeno je 0,5 μmola ukupnog lipida (vidi slike 1 i 2)
** : primjenjeno je 0,05 μmola ukupnog lipida (vidi slike 1 i 2)
*** : primjenjeno je 0,005 μmola ukupnog lipida (vidi slike 1 i 2)
§: kada je nakon 1 tjedan dana druga injekcija (TL 1 μmola), uočeno je smanjenje cirkulacijskog vremena liposoma koji sadrže lipid-polimer konjugat iz primjera 5.1. Liposomi koji sadrže konjugat iz primjera 11, također su pokazali takvo smanjenje, no za dvije životinje taj je učinak bio umjeren.
Primjer 23
Priprava liposoma koji sadrže lipid-polimer konjugat i prednizolon-fosfat
Odvagano je 750 mg dipalmitoil-fosfatidilkolina (DPPC) (Lipoid Ludwigshafen), 220,0 mg kolesterola (Sigma Aldrich) i 270,0 mg lipid-polimer konjugata iz primjera 11, odnosno 750 mg dipalmitoli-fosfatidilkolina, 250,8 mg kolesterola i 267,6 mg PEG-distearilfosfatililetanolamina (PEG-DSPE) (Avanti Polar Lipids), te je pomiješano u okrugloj tikvici od 100 mL. Lipidi su otopljeni u oko 30 mL smjese 1:1 metanola i kloroforma (lipid-polimer konjugat iz primjera 14) ili etanola (PEG-DSPE). Nakon uparivanja do suhog u rotavaporu tijekom 1 sata pod vakumom pri 40 °C, slijedilo je ispiranje dušikom tijekom 1 sata.
Odvagano je 1 200 mg prednizolon-dinatrijevog fosfata (PLP) (OPG Nieuwegein) i otopljeno u 12 mL steriliziranog PBS. Otopina je dodana suhim lipidnim filmovima i mućkana tijekom jednog sata u prisutnosti staklenih kuglica da se tako omogući potpuna hidracija lipidnih filmova.
Liposomske suspenzije su premještene u uređaj za razdvajanje (Avestin, maksimalan volumen 15 mL), te su razdvajane pod tlakom, upotrebom dušika, 6 puta preko 2 filtera sa porama koji su smješteni jedan iznad drugog i koji imaju veličinu pora od 200, odnosno 100 nm, od 100, odnosno 50 nm i od 50, odnosno 50 nm. Zatim su liposomske suspenzije dijalizirane dva puta u odijeljenom prostoru za dijalizu (Slide-A-Lyzer, 10 000 MWCO) tijekom 24 sata od 1 litre steriliziranog PBS.
Prosječna veličina čestica određena je pomoću raspršenja svijetlosti (Malvern Zeta-sizer) i iznosila je oko 85, odnosno 90 nm, indeks polidisperznosti iznosio je < 0,1. Enkapsulacijska sposobnost prednizolon-fosfata određena je pomoću metode HPLC i iznosila je 2,6 %. Suspenzije liposoma su pohranjene u dušikovoj atmosferi pri 4 °C, te je uočeno da su pri tim uvjetima stabilne najmanje 5 tjedana. Liposomski preparati koji sadrže lipid-polimer konjugate iz primjera 14 nešto su stabilniji od liposomskih preparata koji sadrže referentni lipid-polimer konjugat PEG-DSPE (vidi sliku 3).
Primjer 24
Određivanje cirkulacijskog vremena i terapeutske djelotvornosti liposomskih formulacija koje sadrže
prednizolon-fosfat u adjuvantnom modelu artritisa kod štakora
Lewisovi štakori potkožno su imunizirani u područje repa u Freundovom adjuvantu s Mycobacterium tuberculosis koja je inaktivirana toplinom. Upala šape započela je između devetog i dvanaestog dana nakon imunizacije, dosegla je maksimum jačine približno nakon dvadesetog dana i zatim je postepeno slabila.
Određivanje bolesti izvedeno je vizualnim bilježenjem jačine upale šape od 10 do 35 dana nakon imunizacije. Kada su rezultati upale šape otprilike dosezali polovičnu vrijednost maksimalnog rezultata (14-15 dan), svi su štakori podijeljeni u skupine (5 štakora po skupini) s jednakim prosječnim rezultatom i tretirani samo s jednom intravenoznom injekcijom:
10 mg/kg PLP u PHEA-DODASuc liposomima, pripravljenim prema primjeru 23 ili
10 mg/kg PLP u PEG-DSPE liposomima, pripravljenim prema primjeru 23 (referenca)
ili
PBS (kontrola)
Pri t=0, 24 i 48 sati sakupljeni su uzorci krvi, te su ispitani na plazma koncentraciju liposomskog PLP.
Cirkulacijsko ponašanje PHEA- i PEG-liposoma u krvi prikazano je profilima plazma koncentracije PLP, koji su prikazani na slici 4. Oba tipa liposoma ponašaju se jednako dobro s obzirom na cirkulacijski poluraspad.
Slika 5 prikazuje terapeutsku aktivnost 10 mg/kg PLP-PHEA- i 10 mg/kg PLP-PEG-liposoma u adjuvantnom artritisu kod štakora, u odnosu na štakore tretirane salinom kao kontrolama.
Claims (13)
1. Lipid-polimer konjugat, koji se može dobiti iz amfifilnog lipida, koji se sastoji od najmanje jednog hidrofobnog, nepolarnog dijela i hidrofilne, polarne glave, te od njegovog polimernog ili monomernog prekursora koji ima N- i C-terminalnu krajnju skupinu, naznačen time da je pri čemu je polimer poli-(aminokiselina), poli-(derivat aminokiseline) ili poli-(analog aminokiseline) i da je lipid vezan s N- ili C-terminalnom krajnjom skupinom polimera koji ima slijedeću formulu:
-[NHCHR(CH2)mCO]n-
naznačen time:
-R je definiran kao:
-H, -CH3, -CHCH3OR1, -(CH2)xOR1, -(CH2)x-CO-NHR1, -(CH2)x-NH-CO-R1, - (CH2)x-SOyCH3 ili -(CH2)xCOOH;
-R1 je H ili (C1-C4)alkil supstituiran s jednom ili više hidroksilnih skupina ili jednom di(C1-C4)alkilaminskom skupinom;
x je 0-4;
m=1 ili 0 i
y=1 ili 2.
2. Konjugat prema zahtjevu 1, naznačen time da je amfifilni lipid odabran iz skupine koja se sastoji od fosfolipida, glikolipida, ceramida, kolesterola i derivata, zasićenih ili djelomično nezasićenih, razgranatih ili ravnolančanih C8-C100 mono- ili di- alkilamina, arilalkilamina, cikloalkilamina, alkanola, aldehida, karbohalida ili alkanskih kiselina i njihovih anhidrida i naznačen time da je ukupan broj C-atoma preferirano 25 ili veći.
3. Konjugat prema zahtjevu 2, naznačen time da amfifilni lipid sadrži najmanje dva hidrofobna, nepolarna dijela.
4. Konjugat prema zahtjevu 3, naznačen time da je amfifilni lipid odabran iz skupine koja se sastoji od 1-heptadeciloktadecilamina, N-sukcinildioktadecilamina i distearilfosfatidiletanolamina.
5. Konjugat prema bilo kojem od prethodnih zahtjeva, naznačen time da polimer ima χ-parametar ≤ 0,65, preferirano ≤ 0,5 u vodi.
6. Konjugat prema bilo kojem od prethodnih zahtjeva, naznačen time da se polimer sastoji od α-aminokiselina i njihovih derivata ili analoga.
7. Konjugat prema bilo kojem od prethodnih zahtjeva, naznačen time da polimer sadrži neznatnu količinu nabijenih skupina unutar fiziološkog pH od 4-8.
8. Konjugat prema zahtjevu 7, naznačen time da se polimer sastoji od aminokiselinskih monomera, monomera aminokiselinskog analoga ili monomera aminokiselinskog derivata, koji su neutralni ili se neutraliziraju pri fiziološkom pH od 4-8.
9. Konjugat prema bilo kojem od prethodnih zahtjeva, naznačen time da polimer ima molekulsku masu između 500 i 75 000, preferirano između 2 000 i 15 000.
10. Konjugat prema bilo kojem od prethodnih zahtjeva, naznačen time da je polimer biorazgradiv.
11. Konjugat prema zahtjevu 1, naznačen time da je polimer poli[N-(2-hidroksietil)]-1-glutamin.
12. Konjugat prema zahtjevu 1, naznačen time da je polimer poli(2-hidroksietil)-1-asparagin.
13. Konjugat prema zahtjevu 1, naznačen time da je polimer poli(D,L-metionin-sulfoksid).
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP01202107 | 2001-06-01 | ||
| PCT/EP2002/006432 WO2002098951A2 (en) | 2001-06-01 | 2002-06-03 | Lipid-polymer-conjugates |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HRP20030975A2 true HRP20030975A2 (en) | 2005-08-31 |
Family
ID=8180408
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HR20030975A HRP20030975A2 (en) | 2001-06-01 | 2003-11-24 | Lipid-polymer-conjugates |
| HR20030976A HRP20030976A2 (en) | 2001-06-01 | 2003-11-24 | Lipid-polymer-conjugates compositions |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HR20030976A HRP20030976A2 (en) | 2001-06-01 | 2003-11-24 | Lipid-polymer-conjugates compositions |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US20040254352A1 (hr) |
| EP (2) | EP1392755B1 (hr) |
| JP (2) | JP2004527586A (hr) |
| KR (2) | KR100874847B1 (hr) |
| CN (2) | CN1308375C (hr) |
| AT (2) | ATE416214T1 (hr) |
| BR (2) | BR0209695A (hr) |
| CA (2) | CA2448856A1 (hr) |
| CZ (2) | CZ20033479A3 (hr) |
| DE (2) | DE60230137D1 (hr) |
| EE (2) | EE200300598A (hr) |
| ES (2) | ES2318027T3 (hr) |
| HR (2) | HRP20030975A2 (hr) |
| HU (2) | HUP0400171A2 (hr) |
| MX (2) | MXPA03011050A (hr) |
| NO (2) | NO20035264D0 (hr) |
| PL (2) | PL369455A1 (hr) |
| SK (2) | SK15982003A3 (hr) |
| WO (2) | WO2002098951A2 (hr) |
| ZA (2) | ZA200308938B (hr) |
Families Citing this family (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100874847B1 (ko) * | 2001-06-01 | 2008-12-19 | 아스텔라스 파마 유럽 비.브이. | 지질-폴리머-접합체 |
| FR2840614B1 (fr) | 2002-06-07 | 2004-08-27 | Flamel Tech Sa | Polyaminoacides fonctionnalises par de l'alpha-tocopherol et leurs applications notamment therapeutiques |
| EP1393720A1 (en) * | 2002-08-27 | 2004-03-03 | Universiteit Utrecht | Vesicle-encapsulated corticosteroids for treatment of cancer |
| SG113442A1 (en) * | 2002-11-29 | 2005-08-29 | Agency Science Tech & Res | Improved temperature sensitive micelles |
| FR2855521B1 (fr) | 2003-05-28 | 2005-08-05 | Flamel Tech Sa | Polyaminoacides fonctionnalises par au moins un groupement h ydrophobe et leurs applications notamment therapeutiques. |
| EP1481683A1 (en) | 2003-05-30 | 2004-12-01 | Yamanouchi Pharmaceutical Co. Ltd. | P-selectin targeting ligand and compositions thereof |
| SE527505C2 (sv) * | 2003-06-10 | 2006-03-28 | Anna Imberg | Komposita material och partiklar |
| FR2860516B1 (fr) * | 2003-10-03 | 2006-01-13 | Flamel Tech Sa | Homopolyaminoacides telecheliques fonctionnalises par des groupements hydrophobes et leurs applications notamment therapeutiques |
| WO2007129746A1 (ja) * | 2006-05-09 | 2007-11-15 | Osaka University | コレステロールアミン導入ポリ－γ－グルタミン酸誘導体 |
| JP4936312B2 (ja) * | 2006-07-20 | 2012-05-23 | 株式会社島津製作所 | 新規な両親媒性物質、それを用いた薬剤搬送システム及び分子イメージングシステム |
| JP5258189B2 (ja) * | 2006-11-09 | 2013-08-07 | 学校法人 関西大学 | 柔軟性生分解性ポリマー |
| ITRM20070327A1 (it) * | 2007-06-11 | 2008-12-12 | Univ Palermo | Vettori colloidali a struttura poliamminoacidica per il rilascio orale di peptidi e proteine e relativo metodo di produzione. |
| WO2009131672A1 (en) * | 2008-04-22 | 2009-10-29 | University Of Massachusetts | Stabilized liposome compositions and related methods of use |
| KR101695836B1 (ko) * | 2010-04-13 | 2017-01-16 | (주)아모레퍼시픽 | 경피흡수용 고분자-리포좀 나노복합체 조성물 및 그 제조방법 |
| ES2385995B2 (es) * | 2011-01-10 | 2013-05-21 | Universidade De Santiago De Compostela | Nanocápsulas con cubierta polimérica |
| US9993427B2 (en) * | 2013-03-14 | 2018-06-12 | Biorest Ltd. | Liposome formulation and manufacture |
| JPWO2019172362A1 (ja) * | 2018-03-07 | 2021-03-11 | 公益財団法人川崎市産業振興財団 | 刺激応答性ポリマー |
| JPWO2023282296A1 (hr) * | 2021-07-07 | 2023-01-12 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0657722B2 (ja) * | 1986-05-27 | 1994-08-03 | 三菱化成株式会社 | 水溶性ポリマ−組成物 |
| US5149794A (en) * | 1990-11-01 | 1992-09-22 | State Of Oregon | Covalent lipid-drug conjugates for drug targeting |
| US5395619A (en) * | 1993-03-03 | 1995-03-07 | Liposome Technology, Inc. | Lipid-polymer conjugates and liposomes |
| US6333021B1 (en) * | 1994-11-22 | 2001-12-25 | Bracco Research S.A. | Microcapsules, method of making and their use |
| US5972379A (en) * | 1995-02-14 | 1999-10-26 | Sequus Pharmaceuticals, Inc. | Liposome composition and method for administering a quinolone |
| US6197332B1 (en) * | 1997-08-13 | 2001-03-06 | Chiron Corporation | Lipid-conjugated polyamide compounds and related compositions and methods thereof |
| GB9811059D0 (en) * | 1998-05-23 | 1998-07-22 | Univ Strathclyde | Polyamino acid vesicles |
| KR100874847B1 (ko) * | 2001-06-01 | 2008-12-19 | 아스텔라스 파마 유럽 비.브이. | 지질-폴리머-접합체 |
-
2002
- 2002-06-03 KR KR1020037015720A patent/KR100874847B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2002-06-03 DE DE60230137T patent/DE60230137D1/de not_active Expired - Fee Related
- 2002-06-03 HU HU0400171A patent/HUP0400171A2/hu unknown
- 2002-06-03 HU HU0400174A patent/HUP0400174A2/hu unknown
- 2002-06-03 KR KR1020037015722A patent/KR100894852B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2002-06-03 EE EEP200300598A patent/EE200300598A/xx unknown
- 2002-06-03 WO PCT/EP2002/006432 patent/WO2002098951A2/en active IP Right Grant
- 2002-06-03 MX MXPA03011050A patent/MXPA03011050A/es unknown
- 2002-06-03 SK SK1598-2003A patent/SK15982003A3/sk unknown
- 2002-06-03 US US10/479,319 patent/US20040254352A1/en not_active Abandoned
- 2002-06-03 BR BR0209695-1A patent/BR0209695A/pt not_active IP Right Cessation
- 2002-06-03 JP JP2003502070A patent/JP2004527586A/ja active Pending
- 2002-06-03 DE DE60218154T patent/DE60218154T2/de not_active Expired - Fee Related
- 2002-06-03 EP EP02748799A patent/EP1392755B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-03 CN CNB028127358A patent/CN1308375C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2002-06-03 EP EP02754661A patent/EP1392756B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-03 CZ CZ20033479A patent/CZ20033479A3/cs unknown
- 2002-06-03 ES ES02748799T patent/ES2318027T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-03 CA CA002448856A patent/CA2448856A1/en not_active Abandoned
- 2002-06-03 CN CNB02812734XA patent/CN1271116C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2002-06-03 SK SK1597-2003A patent/SK15972003A3/sk not_active Application Discontinuation
- 2002-06-03 CZ CZ20033480A patent/CZ20033480A3/cs unknown
- 2002-06-03 CA CA002448858A patent/CA2448858A1/en not_active Abandoned
- 2002-06-03 JP JP2003502069A patent/JP2004527585A/ja active Pending
- 2002-06-03 AT AT02748799T patent/ATE416214T1/de not_active IP Right Cessation
- 2002-06-03 WO PCT/EP2002/006783 patent/WO2002098952A1/en active Application Filing
- 2002-06-03 ES ES02754661T patent/ES2282439T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-03 EE EEP200300596A patent/EE200300596A/xx unknown
- 2002-06-03 PL PL02369455A patent/PL369455A1/xx not_active Application Discontinuation
- 2002-06-03 US US10/479,031 patent/US20040241222A1/en not_active Abandoned
- 2002-06-03 AT AT02754661T patent/ATE353927T1/de not_active IP Right Cessation
- 2002-06-03 BR BR0209699-4A patent/BR0209699A/pt not_active IP Right Cessation
- 2002-06-03 MX MXPA03011049A patent/MXPA03011049A/es unknown
- 2002-06-03 PL PL02367479A patent/PL367479A1/xx not_active Application Discontinuation
-
2003
- 2003-11-17 ZA ZA200308938A patent/ZA200308938B/en unknown
- 2003-11-17 ZA ZA200308937A patent/ZA200308937B/en unknown
- 2003-11-24 HR HR20030975A patent/HRP20030975A2/hr not_active Application Discontinuation
- 2003-11-24 HR HR20030976A patent/HRP20030976A2/hr not_active Application Discontinuation
- 2003-11-27 NO NO20035264A patent/NO20035264D0/no not_active Application Discontinuation
- 2003-11-27 NO NO20035263A patent/NO20035263D0/no not_active Application Discontinuation
-
2009
- 2009-07-06 US US12/498,080 patent/US20100145018A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20100145018A1 (en) | Lipid-Polymer-Conjugates | |
| Kono et al. | Preparation and cytotoxic activity of poly (ethylene glycol)-modified poly (amidoamine) dendrimers bearing adriamycin | |
| US5720950A (en) | Polymers containing antifibrotic agents, compositions containing such polymers, and methods of preparation and use | |
| JP2010526183A5 (hr) | ||
| JP2020522534A (ja) | カルニチン由来材料に関する方法および組成物 | |
| WO2006003731A1 (ja) | 高分子ミセル型ｍｒｉ造影剤 | |
| EP3318282A1 (en) | Drug delivery carrier, and composition containing same | |
| JP2009519211A (ja) | ヒスチジン誘導体および疎水基で官能化されたポリグルタミン酸類、ならびに特に治療目的のためのそれらの使用 | |
| WO2018038166A1 (ja) | ポリマー、ポリマーの製造方法、及び薬物複合体 | |
| TW201737946A (zh) | 藥物複合化嵌段共聚合體、嵌段共聚合體及藥物複合化嵌段共聚合體之製造方法 | |
| KR100567397B1 (ko) | 온도 감응성과 생체 적합성을 갖는 양친성 고리형포스파젠 삼합체 및 그 제조 방법 | |
| CA3193244A1 (en) | Compositions and methods of manufacturing amphiphilic block copolymers that form nanoparticles in situ | |
| JP7100457B2 (ja) | ブロックコポリマー、ミセル組成物、及び医薬組成物 | |
| AU2002319248A1 (en) | Lipid-polymer-conjugates compositions | |
| AU2002320851A1 (en) | Lipid-polymer-conjugates | |
| JP6924191B2 (ja) | 新規な高分子誘導体、及びそれらを用いた新規な高分子誘導体イメージングプローブ | |
| WO2023227724A1 (en) | Star-shaped graft copolymers | |
| JP2019143083A (ja) | ポリマー、ポリマーの製造方法、薬物複合体及びミセル | |
| TW201039844A (en) | Biodegradable metal-chelating polymers and vaccines |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A1OB | Publication of a patent application | ||
| OBST | Application withdrawn | ||
| PNAN | Change of the applicant name, address/residence |
Owner name: ASTELLAS PHARMA EUROPE B.V., NL |