ES2282439T3 - Nuevos conjugados lipidico-polimericos, su procedimiento de preparacion, y sus aplicaciones. - Google Patents
Nuevos conjugados lipidico-polimericos, su procedimiento de preparacion, y sus aplicaciones. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2282439T3 ES2282439T3 ES02754661T ES02754661T ES2282439T3 ES 2282439 T3 ES2282439 T3 ES 2282439T3 ES 02754661 T ES02754661 T ES 02754661T ES 02754661 T ES02754661 T ES 02754661T ES 2282439 T3 ES2282439 T3 ES 2282439T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- polymer
- poly
- lipid
- amine
- dodasuc
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 38
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 25
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 126
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims abstract description 55
- 229920001308 poly(aminoacid) Polymers 0.000 claims abstract description 20
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims abstract description 10
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims abstract description 8
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims abstract description 4
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims abstract description 4
- 125000005265 dialkylamine group Chemical group 0.000 claims abstract description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 35
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 22
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 21
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 20
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims description 18
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims description 13
- 125000000954 2-hydroxyethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 claims description 11
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 11
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 claims description 7
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims description 6
- QEFRNWWLZKMPFJ-UHFFFAOYSA-N methionine S-oxide Chemical compound CS(=O)CCC(N)C(O)=O QEFRNWWLZKMPFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- JHCLUTILJRJUHZ-UHFFFAOYSA-N pentatriacontan-18-amine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(N)CCCCCCCCCCCCCCCCC JHCLUTILJRJUHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 3
- 229940106189 ceramide Drugs 0.000 claims description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 3
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims description 3
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims description 3
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 claims description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 150000003973 alkyl amines Chemical class 0.000 claims description 2
- 150000001371 alpha-amino acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 claims description 2
- 229940093740 amino acid and derivative Drugs 0.000 claims description 2
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 claims description 2
- 150000003975 aryl alkyl amines Chemical class 0.000 claims description 2
- 150000001783 ceramides Chemical class 0.000 claims description 2
- 125000001316 cycloalkyl alkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 claims 1
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 125000004178 (C1-C4) alkyl group Chemical group 0.000 abstract description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 87
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 75
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 52
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 48
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 48
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 43
- 239000001273 butane Substances 0.000 description 41
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 40
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 36
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N Dimethyl sulfoxide Chemical compound [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 36
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 31
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 30
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 29
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 description 27
- -1 sphingomyelin Chemical compound 0.000 description 27
- UBQKCCHYAOITMY-UHFFFAOYSA-N pyridin-2-ol Chemical compound OC1=CC=CC=N1 UBQKCCHYAOITMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 239000000047 product Substances 0.000 description 22
- DGBJQQBLTDLFMF-UHFFFAOYSA-N L-2-Amino-glutarsaeure-5-(2-hydroxy-aethylamid) Natural products OC(=O)C(N)CCC(=O)NCCO DGBJQQBLTDLFMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 18
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 17
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 17
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 15
- 238000007098 aminolysis reaction Methods 0.000 description 14
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 14
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 14
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 14
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- 229940031098 ethanolamine Drugs 0.000 description 12
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 11
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 11
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 11
- 235000006109 methionine Nutrition 0.000 description 11
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 11
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-aminopropionic acid Natural products NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 229920000835 poly(gamma-benzyl-L-glutamate) polymer Polymers 0.000 description 10
- 239000004470 DL Methionine Substances 0.000 description 9
- IDGQXGPQOGUGIX-UHFFFAOYSA-N O-Benzyl-DL-serine Chemical compound OC(=O)C(N)COCC1=CC=CC=C1 IDGQXGPQOGUGIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 9
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 9
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 9
- FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N methionine Chemical compound CSCCC(N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 9
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 9
- ZFQWJXFJJZUVPI-UHFFFAOYSA-N tert-butyl n-(4-aminobutyl)carbamate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NCCCCN ZFQWJXFJJZUVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- GHWVXCQZPNWFRO-UHFFFAOYSA-N butane-2,3-diamine Chemical compound CC(N)C(C)N GHWVXCQZPNWFRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 8
- GAWIXWVDTYZWAW-UHFFFAOYSA-N C[CH]O Chemical group C[CH]O GAWIXWVDTYZWAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 7
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 7
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 7
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 7
- HKUFIYBZNQSHQS-UHFFFAOYSA-N n-octadecyloctadecan-1-amine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCNCCCCCCCCCCCCCCCCCC HKUFIYBZNQSHQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 7
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 7
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N Alanine Chemical compound CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 description 6
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 6
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 6
- 229910001873 dinitrogen Inorganic materials 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- OAOSXODRWGDDCV-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylpyridin-4-amine;4-methylbenzenesulfonic acid Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1.CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 OAOSXODRWGDDCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229960004786 prednisolone phosphate Drugs 0.000 description 6
- JDOZJEUDSLGTLU-VWUMJDOOSA-N prednisolone phosphate Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)COP(O)(O)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JDOZJEUDSLGTLU-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 6
- VJZLQIPZNBPASX-OJJGEMKLSA-L prednisolone sodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)COP([O-])([O-])=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VJZLQIPZNBPASX-OJJGEMKLSA-L 0.000 description 6
- 229940086542 triethylamine Drugs 0.000 description 6
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 5
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 5
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 5
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 5
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 5
- KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 0.000 description 4
- ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 1,3-dicyclohexylurea Chemical compound C1CCCCC1NC(=O)NC1CCCCC1 ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QOXOZONBQWIKDA-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxypropyl Chemical group [CH2]CCO QOXOZONBQWIKDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- SXIFAEWFOJETOA-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxy-butyl Chemical group [CH2]CCCO SXIFAEWFOJETOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 4
- VGALFAWDSNRXJK-VIFPVBQESA-N L-aspartic acid beta-benzyl ester Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(=O)OCC1=CC=CC=C1 VGALFAWDSNRXJK-VIFPVBQESA-N 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- YGYAWVDWMABLBF-UHFFFAOYSA-N Phosgene Chemical compound ClC(Cl)=O YGYAWVDWMABLBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 4
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 4
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 4
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 4
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 4
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 4
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 4
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 108010000222 polyserine Proteins 0.000 description 4
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 4
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 4
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 4
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- BGGHCRNCRWQABU-JTQLQIEISA-N (2s)-2-amino-5-oxo-5-phenylmethoxypentanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)OCC1=CC=CC=C1 BGGHCRNCRWQABU-JTQLQIEISA-N 0.000 description 3
- LVNGJLRDBYCPGB-LDLOPFEMSA-N (R)-1,2-distearoylphosphatidylethanolamine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[NH3+])OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC LVNGJLRDBYCPGB-LDLOPFEMSA-N 0.000 description 3
- KQIGMPWTAHJUMN-UHFFFAOYSA-N 3-aminopropane-1,2-diol Chemical compound NCC(O)CO KQIGMPWTAHJUMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 3
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- REYJJPSVUYRZGE-UHFFFAOYSA-N Octadecylamine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCN REYJJPSVUYRZGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WUGQZFFCHPXWKQ-UHFFFAOYSA-N Propanolamine Chemical compound NCCCO WUGQZFFCHPXWKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 3
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 3
- 229940000635 beta-alanine Drugs 0.000 description 3
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 3
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 3
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 3
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 3
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 3
- 125000002768 hydroxyalkyl group Chemical group 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylpyridin-2-amine Chemical compound CN(C)C1=CC=CC=N1 PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- AXRJZVAJGWBMES-UHFFFAOYSA-N n-heptadecyloctadecan-1-amine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCNCCCCCCCCCCCCCCCCC AXRJZVAJGWBMES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 3
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- 125000004079 stearyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 3
- YZWSQKAMHRCPRQ-YFKPBYRVSA-N (2s)-5-amino-2-[ethyl(hydroxy)amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound CCN(O)[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O YZWSQKAMHRCPRQ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- GHVGZBRESGTIJT-NSFMYWSZSA-N (3s,8s,9s,10r,13r,14s,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-3-[(e)-octadec-9-enoxy]-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthrene Chemical compound C([C@@H]12)C[C@]3(C)[C@@H]([C@H](C)CCCC(C)C)CC[C@H]3[C@@H]1CC=C1[C@]2(C)CC[C@H](OCCCCCCCC/C=C/CCCCCCCC)C1 GHVGZBRESGTIJT-NSFMYWSZSA-N 0.000 description 2
- UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N -2-Amino-4-hydroxybutanoic acid Natural products OC(=O)C(N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N 2,4-diaminobutyric acid Chemical compound NCCC(N)C(O)=O OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFADERBHOACBAH-UHFFFAOYSA-N 5-amino-2-(benzylamino)-5-oxopentanoic acid butane-2,3-diamine Chemical compound NC(C)C(C)N.C(C1=CC=CC=C1)NC(CCC(N)=O)C(=O)O KFADERBHOACBAH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000009386 Experimental Arthritis Diseases 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- CZWARROQQFCFJB-UHFFFAOYSA-N L-2-Amino-5-hydroxypentanoic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CCCO CZWARROQQFCFJB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N L-homoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 2
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 239000002178 crystalline material Substances 0.000 description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 2
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 2
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 2
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 2
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 2
- 210000000865 mononuclear phagocyte system Anatomy 0.000 description 2
- 239000002088 nanocapsule Substances 0.000 description 2
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 2
- 239000002077 nanosphere Substances 0.000 description 2
- 239000002353 niosome Substances 0.000 description 2
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 2
- 108010054442 polyalanine Proteins 0.000 description 2
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 2
- 108010087948 polymethionine Proteins 0.000 description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 238000007151 ring opening polymerisation reaction Methods 0.000 description 2
- FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N sarcosine Chemical compound C[NH2+]CC([O-])=O FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 2
- JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M sodium periodate Chemical compound [Na+].[O-]I(=O)(=O)=O JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 2
- HLZKNKRTKFSKGZ-UHFFFAOYSA-N tetradecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCO HLZKNKRTKFSKGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- ATCFYQUZTYQTJN-QVDQXJPCSA-N (2r)-2-amino-4-benzylpentanedioic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ATCFYQUZTYQTJN-QVDQXJPCSA-N 0.000 description 1
- FVXWJHWNSKJFAH-YFKPBYRVSA-N (2s)-5-amino-2-(2-hydroxyethylamino)-5-oxopentanoic acid Chemical compound NC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NCCO FVXWJHWNSKJFAH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- ONOURAAVVKGJNM-SCZZXKLOSA-N (2s,3r)-2-azaniumyl-3-phenylmethoxybutanoate Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])[C@@H](C)OCC1=CC=CC=C1 ONOURAAVVKGJNM-SCZZXKLOSA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WORJRXHJTUTINR-UHFFFAOYSA-N 1,4-dioxane;hydron;chloride Chemical compound Cl.C1COCCO1 WORJRXHJTUTINR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HXKKHQJGJAFBHI-UHFFFAOYSA-N 1-aminopropan-2-ol Chemical compound CC(O)CN HXKKHQJGJAFBHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MBNAHLVKLCADIR-UHFFFAOYSA-N 1-octadecylsulfinyloctadecane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCS(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCCC MBNAHLVKLCADIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OZHYQYVJLUUBJD-UHFFFAOYSA-N 2,5-diamino-4-benzyl-5-oxopentanoic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CC(C(N)=O)CC1=CC=CC=C1 OZHYQYVJLUUBJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TXLHNFOLHRXMAU-UHFFFAOYSA-N 2-(4-benzylphenoxy)-n,n-diethylethanamine;hydron;chloride Chemical compound Cl.C1=CC(OCCN(CC)CC)=CC=C1CC1=CC=CC=C1 TXLHNFOLHRXMAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FVXWJHWNSKJFAH-UHFFFAOYSA-N 5-amino-2-(2-hydroxyethylamino)-5-oxopentanoic acid Chemical compound NC(=O)CCC(C(O)=O)NCCO FVXWJHWNSKJFAH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VOVIALXJUBGFJZ-KWVAZRHASA-N Budesonide Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1C[C@H]3OC(CCC)O[C@@]3(C(=O)CO)[C@@]1(C)C[C@@H]2O VOVIALXJUBGFJZ-KWVAZRHASA-N 0.000 description 1
- YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N C16 ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@@H](CO)[C@H](O)C=CCCCCCCCCCCCCC YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010008469 Chest discomfort Diseases 0.000 description 1
- 208000000059 Dyspnea Diseases 0.000 description 1
- 206010013975 Dyspnoeas Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 206010016825 Flushing Diseases 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 1
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 1
- WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N N-Vinyl-2-pyrrolidone Chemical compound C=CN1CCCC1=O WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N N-acetylsphinganine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCC[C@@H](O)[C@H](CO)NC(C)=O CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N 0.000 description 1
- FZDHZCHEZKDBKB-UHFFFAOYSA-N NC(C)C(C)N.NC(CCSC)C(=O)O Chemical compound NC(C)C(C)N.NC(CCSC)C(=O)O FZDHZCHEZKDBKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000297 Rayon Polymers 0.000 description 1
- 108010077895 Sarcosine Proteins 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N Tritium Chemical compound [3H] YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNEPTKZEXBPDLF-JDTILAPWSA-N [(3s,8s,9s,10r,13r,14s,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl] carbonochloridate Chemical compound C1C=C2C[C@@H](OC(Cl)=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 QNEPTKZEXBPDLF-JDTILAPWSA-N 0.000 description 1
- WUYUPTGNISUNMZ-UHFFFAOYSA-N [Tc].C(C1=CN=CC=C1)(=O)N.NN Chemical compound [Tc].C(C1=CN=CC=C1)(=O)N.NN WUYUPTGNISUNMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005189 alkyl hydroxy group Chemical group 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 150000001414 amino alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 239000008135 aqueous vehicle Substances 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 150000001576 beta-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 229960004436 budesonide Drugs 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)C(=O)NC(CO)C(O)C=CCCC=C(C)CCCCCCCCC ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000011262 co‐therapy Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- DHQUQYYPAWHGAR-UHFFFAOYSA-N dibenzyl 2-aminopentanedioate Chemical compound C=1C=CC=CC=1COC(=O)C(N)CCC(=O)OCC1=CC=CC=C1 DHQUQYYPAWHGAR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 125000004990 dihydroxyalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 229940115080 doxil Drugs 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 229960000289 fluticasone propionate Drugs 0.000 description 1
- WMWTYOKRWGGJOA-CENSZEJFSA-N fluticasone propionate Chemical compound C1([C@@H](F)C2)=CC(=O)C=C[C@]1(C)[C@]1(F)[C@@H]2[C@@H]2C[C@@H](C)[C@@](C(=O)SCF)(OC(=O)CC)[C@@]2(C)C[C@@H]1O WMWTYOKRWGGJOA-CENSZEJFSA-N 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical class [H]C(*)=O 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-L glutamate group Chemical group N[C@@H](CCC(=O)[O-])C(=O)[O-] WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-L 0.000 description 1
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 229940102253 isopropanolamine Drugs 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 208000010729 leg swelling Diseases 0.000 description 1
- 238000011694 lewis rat Methods 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 150000002668 lysine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- MGJXBDMLVWIYOQ-UHFFFAOYSA-N methylazanide Chemical compound [NH-]C MGJXBDMLVWIYOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- DILRJUIACXKSQE-UHFFFAOYSA-N n',n'-dimethylethane-1,2-diamine Chemical compound CN(C)CCN DILRJUIACXKSQE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N newbouldiamide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(O)C(O)C(CO)NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000012038 nucleophile Substances 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 238000002103 osmometry Methods 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 229940046159 pegylated liposomal doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 229920001584 poly(acrylomorpholines) Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 108010052780 polyasparagine Proteins 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 108010040003 polyglutamine Proteins 0.000 description 1
- 229920000155 polyglutamine Polymers 0.000 description 1
- 229920000223 polyglycerol Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 229960005205 prednisolone Drugs 0.000 description 1
- OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N prednisolone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N putrescine Chemical group NCCCCN KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MIXMJCQRHVAJIO-TZHJZOAOSA-N qk4dys664x Chemical class O.C1([C@@H](F)C2)=CC(=O)C=C[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2C[C@H]3OC(C)(C)O[C@@]3(C(=O)CO)[C@@]2(C)C[C@@H]1O.C1([C@@H](F)C2)=CC(=O)C=C[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2C[C@H]3OC(C)(C)O[C@@]3(C(=O)CO)[C@@]2(C)C[C@@H]1O MIXMJCQRHVAJIO-TZHJZOAOSA-N 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012217 radiopharmaceutical Substances 0.000 description 1
- 229940121896 radiopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 230000002799 radiopharmaceutical effect Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000002940 repellent Effects 0.000 description 1
- 239000005871 repellent Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 229940043230 sarcosine Drugs 0.000 description 1
- 150000003335 secondary amines Chemical group 0.000 description 1
- 208000013220 shortness of breath Diseases 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052722 tritium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G69/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carboxylic amide link in the main chain of the macromolecule
- C08G69/02—Polyamides derived from amino-carboxylic acids or from polyamines and polycarboxylic acids
- C08G69/08—Polyamides derived from amino-carboxylic acids or from polyamines and polycarboxylic acids derived from amino-carboxylic acids
- C08G69/10—Alpha-amino-carboxylic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- General Preparation And Processing Of Foods (AREA)
- Polyamides (AREA)
- Compositions Of Macromolecular Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Biological Depolymerization Polymers (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Un conjugado de lípido-polímero que puede ser obtenido a partir de un lípido anfifílico, compuesto de al menos una parte apolar hidrofóbica y un grupo de cabeza polar hidrofílico, así como un polímero o un precursor monomérico para lo mismo, que tiene un grupo extremo N- y C-terminal, caracterizado porque el polímero es un poli-(aminoácido), un derivado de poli-(aminoácido) o un análogo de poli-(aminoácido) y porque el lípido está unido al grupo extremo N- o C-terminal del polímero, teniendo el polímero la fórmula siguiente: -[NHCHR(CH2)mCO]n- en la cual -R es definido como: -H, -CH3, -CHCH3OR1, -(CH2)xOR1, -(CH2)x-CO-NHR1, -(CH2)x-NH-CO-R1, -(CH2)x-SOyCH3, OR -(CH2)xCOOH; -R1 es H o alquilo (C1-C4), sustituido por uno o más grupos hidroxilo o un grupo dialquil-amina (C1-C4); x es 0-4; m = 1 ó 0, e
Description
Nuevos conjugados
lipídico-poliméricos, su procedimiento de
preparación, y sus aplicaciones.
La presente invención se refiere a conjugados de
lípidos-polímeros, a su preparación y sus
utilizaciones.
Los conjugados de
lípidos-polímeros son bien conocidos y son
utilizados para una variedad de distintas aplicaciones. Una de éstas
es su inclusión en composiciones de soporte coloidal, tales como los
sistemas bicapas vesiculares, como los liposomas, niosomas y
vesículas inversas, sistemas micelares, nanocápsulas, nanosferas,
etc. Un representante bien conocido de estas composiciones de
soporte coloidal es formado por liposomas. Aunque se mencionen
especialmente los liposomas a continuación, el lector debe tener en
cuenta que las discusiones, revelaciones y enseñanzas se refieren
también a otras composiciones de soporte coloidal.
Los liposomas que pertenecen al grupo de
partículas de soporte coloidal, son pequeñas vesículas que se
componen de una o más bicapas lipídicas concéntricas que encierran
un espacio acuoso. Debido a su versatilidad estructural en términos
de tamaño, carga superficial, composición lipídica, fluidez de las
bicapas y debido a su capacidad para encapsular casi cada
medicamento, su importancia como sistemas de suministro de
medicamento ha sido inmediatamente valorada. Sin embargo, a la
inyección intravenosa de liposomas, éstos son reconocidos como
partículas extrañas por el Sistema Fagocito Mononuclear (SFM) y son
sacados rápidamente de la circulación hacia los órganos ricos en
células fagocíticas, como el hígado, bazo y médula. Se han
identificado varias posibilidades para reducir este efecto, tal como
disminuir el tamaño de partículas de los liposomas y cambiar la
carga superficial de los liposomas. Otro desarrollo se refiere a la
modificación superficial de los liposomas mediante la introducción
de componentes poliméricos hidrofílicos específicos en la superficie
liposomal, grupos que reducen la adsorción proteica en la superficie
de las partículas. En consecuencia, estos liposomas están protegidos
contra el reconocimiento por las células del SFM y tienen un tiempo
de estancia prolongado en la circulación general. Un ejemplo bien
conocido de modificación de la superficie liposomal es la
incorporación durante la preparación de las composiciones
liposomales de un derivado lipídico del
polietilén-glicol (PEG) del polímero hidrofílico.
Normalmente este polímero es de terminal modificado con una parte
hidrofóbica, que es el residuo de un derivado de
fosfstidil-etanol-amina o un ácido
graso de cadena larga. El polietilén-glicol en sí es
un polímero más bien estable, que es un repelente de la adhesión de
proteínas y que no está sujeto a la degradación enzimática o
hidrolítica en condiciones fisiológicas.
Se han obtenido buenos resultados con respecto a
la extensión de la vida media del plasma y a la disminución de su
acumulación en los órganos ricos en células fagocíticas después de
la administración intravenosa de liposomas, con una superficie
injertada de PEG, a varias especies animales y también a seres
humanos (Storm G., Belliot S.O., Daemen T. and Lasic D.D.: Surface
modification of nanoparticles to oppose uptake by the mononuclear
phagocyte system in Adv. Drug Delivery Rev. 17,
31-48, (1995); Moghimi S.M., Hunter A.C. and Murray
J.C.: Long-circulating and
target-specific nanoparticles; theory to practice in
Pharmacol. Rev. 53, 283-318, (2001); Boerman
O.C., Dams E.T., Oyen W.J.G., Corstens F.H.M. and Storm G.:
Radiopharmaceuticals for scintigraphic imaging of infection and
inflammation in Inflamm. Res. 50, 55-64,
(2001)). Se han obtenido las aprobaciones comerciales para estas
preparaciones liposomales que contienen doxorubicina.
Mientras tanto se han encontrado varios
inconvenientes a la utilización del polímero
polietilén-glicol en los liposomas de larga
circulación. La acumulación de liposomas injertados con PEG en los
macrófagos y la piel es algo preocupante debido a la
no-biodegradabilidad. Se ha observado la pérdida de
la propiedad de larga circulación (eliminación rápida) al inyectar
PEG-liposomas una segunda vez (Dams E.T., Laverman
P., Oijen W.J., Storm G., Scherphof G.L., Van der Meer J.W.,
Corstens F.H. and Boerman O.C.: Accelerated blood clearance and
altered biodistribution of repeated injections of sterically
stabilized liposomes in J. Pharmacol. Exp. Ther. 292,
1071-1079, (2000)). Unos estudios recientes con
PEG-liposomas en pacientes han mostrado que los
PEG-liposomas pueden inducir efectos secundarios
agudos (rubor facial, opresión de pecho, falta de aliento, cambios
en la presión sanguínea), que se resuelven inmediatamente cuando
termina la administración (infusión) de la formulación de
PEG-liposoma. Unos datos recientes señalan un papel
de activación complementaria en la inducción de efectos secundarios
(Szebeni J., Baranyi L., Savay S., Lutz H., Jelezarova E., Bunger
R., and Alving C.R.: The role of complement activation in
hypersensitivity to Pegylated liposomal doxorubicin (Doxil) in J.
Liposome Res. 10, 467-481, (2000)). Hasta
ahora las preparaciones comercialmente disponibles basadas en los
PEG-liposomas son preparaciones acuosas de
suspensión. Es bien conocido que la vida útil en depósito de las
preparaciones acuosas liposomales de suspensión en general y también
de PEG-liposomas es más bien limitada. Se conocen
varias técnicas sobre cómo eliminar el vehículo o fase continua de
estas preparaciones, tales como secado por aspersión, diafiltración,
evaporación rotacional, etc., y preferentemente liofilización.
Recientemente, se propuso un método de liofilización, que mejora la
vida útil en depósito a largo plazo de los
PEG-liposomas, que contiene el quelante de tecnecio
hidrazín-nicotín-amida (Laverman P.,
van Bloois L., Boerman O.C., Oyen W.J.G., Corstens F.H.M. and Storm
G.: Lyophilisation of Tc-99m-HYNIC
labelled PEG-liposomes in J. Liposome Res.
10(2&3), page 117-129 (2000)), pero son
necesarias más investigaciones sobre los resultados y aplicabilidad
de esta técnica para preparaciones liposomales.
Los inconvenientes inherentes a la utilización
del polietilén-glicol instaron a los investigadores
a buscar polímeros alternativos. Numerosos polímeros han sido
sugeridos como candidatos adecuados para derivatizarlos con lípidos
(formadores de vesículas) para su incorporación en los liposomas
(véase por ejemplo la EP-0688207). Los polímeros
hidrofílicos solubles en agua,
poli-(vinil-pirrolidona),
poli-(acriloil-morfolina),
poli-(2-(m)etil)-2-oxazolina,
poliacril-amida y poliglicerol han demostrado
prolongar hasta cierto punto el tiempo de circulación de los
liposomas después de la administración intravenosa. Sin embargo,
hasta ahora estos conjugados de lípidos-polímeros no
han sido aplicados en preparaciones de medicamentos comercialmente
disponibles, principalmente debido a que no han mostrado ventajas
con respecto a los conjugados conocidos de
lípidos-PEG. Por lo tanto, sigue existiendo la
necesidad de encontrar un polímero, que pueda ser derivatizado con
un lípido para permitir su incorporación dentro de composiciones de
soporte coloidal, tales como los liposomas, teniendo este polímero
propiedades de larga circulación y además de esto teniendo ventajas
con respecto al PEG, tal como la biodegradabilidad.
Se proporcionan conjugados de
lípidos-polímeros, los cuales pueden ser obtenidos a
partir de un lípido anfifílico, compuesto de al menos una parte
apolar hidrofóbica y un grupo de cabeza polar hidrofílico, así como
un polímero o un precursor monomérico para lo mismo, que tiene un
grupo extremo N- y C-terminal, en el cual el
polímero es un poli-(aminoácido), un derivado de poli-(aminoácido) o
un análogo de poli-(aminoácido) y en el cual el lípido está unido
covalentemente al grupo extremo N- o C-terminal del
polímero, teniendo el polímero la fórmula siguiente:
\vskip1.000000\baselineskip
-[NHCHR(CH_{2})_{m}CO]_{n}-,
en la
cual:
- R es definido como: -H, -CH_{3},
-CHCH_{3}OR_{1}, -(CH_{2})_{x}OR_{1},
-(CH_{2})_{x}-CO-NHR_{1},
-(CH_{2})_{x}-NH-CO-R_{1},
-(CH_{2})_{x}-SO_{y}CH_{3}, OR
-(CH_{2})_{x}COOH;
- R_{1} es H o alquilo
(C_{1}-C_{4}), sustituido por uno o más grupos
hidroxilo o un grupo dialquil-amina
(C_{1}-C_{4});
x es 0-4; m = 1 ó 0 e y = 1 ó
2.
También se proporcionan los métodos para
preparar estos conjugados y utilizaciones de los conjugados.
- La Figura 1 es una representación gráfica de
los valores principales para la dosis inyectada de un porcentaje
calculado en las muestras de sangre con respecto al tiempo para las
preparaciones liposomales que contienen PEG-DSPE, la
cual tiene una cantidad diferente de Lípido Total (Ejemplo 22).
- La Figura 2 es una representación gráfica de
los valores principales para la dosis inyectada de un porcentaje
calculado en las muestras de sangre con respecto al tiempo para las
preparaciones liposomales que contienen
PHEA-DODASuc, la cual tiene una cantidad diferente
de Lípido Total (Ejemplo 22).
- La Figura 3 es una representación gráfica del
porcentaje encapsulado de fosfato de prednisolona respectivamente en
PEG-DSPE y PHEA-DODASuc, que
contiene preparaciones liposomales con respecto al tiempo (Ejemplo
23).
- La Figura 4 es una representación gráfica de
la concentración de fosfato de prednisolona encapsulada en los
liposomas que contienen PEG-DSPE y
PHEA-DODASuc en la sangre con respecto al tiempo
(Ejemplo 24).
- La Figura 5 es una representación gráfica del
punto de inflamación de una pata con respecto al tiempo antes y
después de un única inyección intravenosa de una solución salina y
liposomas que contienen fosfato de prednisolona (recubiertos de
PEG-DSPE y PHEA-DODASuc
respectivamente) (Ejemplo 24).
- La Figura 6 es una representación gráfica de
la dosis inyectada de un porcentaje de liposomas encontrados en el
hígado, bazo e hígado-bazo después de la
administración intravenosa de liposomas, que contienen como
conjugados de lípidos-polímeros respectivamente
PEG-DSPE,
PHEG-diamino-butano DODASuc, PHPG
diamino-butano
DODASuc, PHBG diamino-butano DODASuc y PHEA-DODASuc, y los liposomas convencionales (BARE)
(Ejemplo 21).
DODASuc, PHBG diamino-butano DODASuc y PHEA-DODASuc, y los liposomas convencionales (BARE)
(Ejemplo 21).
Los conjugados anfifílicos de
lípidos-polímeros en las composiciones de la
presente invención pueden obtenerse a partir de un lípido y un
polímero anfifílicos o un precursor monomérico para los mismos.
Los lípidos anfifílicos que han de ser
utilizados en el conjugado de lípidos-polímeros de
acuerdo con la invención pueden seleccionarse a partir de una
variedad de lípidos naturales o sintéticos, compuestos de al menos
una cola apolar hidrofóbica y un grupo de cabeza polar hidrofílico,
tales como los lípidos formadores de vesículas y los lípidos de
membrana.
Una característica importante del lípido
anfifílico que ha de utilizarse en el conjugado de
lípidos-polímeros es que el lípido contiene un grupo
funcional en su grupo de cabeza polar, adecuado para la unión
covalente a una cadena polimérica. El grupo de cabeza polar es por
ejemplo un grupo amina primaria o secundaria, un grupo hidroxilo, un
grupo aldehído, un grupo haluro o carboxílico. La parte hidrofóbica
del lípido permite la incorporación de los conjugados de
lípidos-polímeros en las estructuras bicapas, como
los liposomas y actúa como ancla.
Los ejemplos de lípidos anfifílicos son los
fosfolípidos, glicolípidos, ceramidas, colesterol y derivados, mono-
o di-alquil-aminas
C_{8}-C_{50},
aril-alquil-aminas,
cicloalquil-alquil-aminas,
alcanoles, aldehídos, carbohaluros o ácidos alcanoicos y los
anhídridos de los mismos saturados o parcialmente insaturados, de
cadena lineal o ramificada, en los cuales el número total de
átomos-C es preferentemente de 25 o más.
De forma más específica, los ejemplos de lípidos
anfifílicos adecuados son la fosfatidil-colina,
fosfatidil-etanol-amina,
fosfatidil-inositol, esfingomielina,
estearil-amina, alcohol mirístico, colesterol y
ácido palmítico.
Un lípido anfifílico preferido en el conjugado
de lípidos-polímero es un lípido que tiene dos
cadenas hidrofóbicas, típicamente las cadenas de alquilo, y un grupo
de cabeza polar, que contiene un grupo funcional, tal como se ha
descrito anteriormente. Los derivados de
fosfatidil-etanol-amina y en
particular la
diestearil-fosfatidil-etanol-amina,
son los fosfolípidos preferidos ya que contienen un grupo amino
reactivo.
Los lípidos anfifílicos también preferidos
tienen como grupo de cabeza polar hidrofílico una amina primaria o
secundaria y dos partes apolares hidrofóbicas de cadena lineal o
ramificada C_{8}-C_{50} saturadas o insaturadas.
Los ejemplos de los mismos son la
1-heptadecil-octadecil-amina
y los compuestos que contienen diestearil-amina,
como la diestearil-amina y la
N-succinil-dioctadecil-amina
(DODASuc).
La parte polimérica de los conjugados de
lípidos-polímeros de la presente invención está
formada de un poli-(aminoácido), un derivado de poli-(aminoácido) o
un análogo de poli-(aminoácido). Un derivado de poli-(aminoácido) es
un polímero que se compone de monómeros aminoácidos, a los cuales
están unidos uno o más sustituyentes. Un ejemplo del mismo es la
poli-(2-hidroxi-etil)-L-glutamina.
Un análogo de poli-(aminoácido) tal como se revela aquí es un
polímero, en el cual la longitud de cadena del átomo de carbono de
los monómeros aminoácidos es reducida o prolongada. Los ejemplos de
los mismos son la poli-(homoserina) y la poli-(pentahomoserina).
El polímero es un homo-polímero
que se compone de monómeros que son los mismos a lo largo de toda la
cadena polimérica. También es posible que la parte polimérica se
componga de copolímeros en bloque seleccionados a partir del grupo
compuesto de poli-(aminoácidos), derivado de poli-(aminoácidos) y
análogo de poli-(aminoácidos) o que la parte polimérica esté formada
de una serie de monómeros alternantes o un orden controlado de
monómeros o por polimerización aleatoria de los monómeros adecuados
seleccionados a partir del grupo compuesto de uno o más aminoácidos,
derivados de aminoácidos y análogos de aminoácidos. Los polímeros
pueden ser lineales o ramificados e incluyen los polímeros de
injerto, pero son preferentemente lineales.
Los aminoácidos útiles son los
\alpha-aminoácidos naturales. Sin embargo, son
también de interés los \beta-aminoácidos así como
los aminoácidos no-proteicos o
no-naturales. Se puede utilizar la configuración
tanto L- como D- de los aminoácidos y derivados. Cuando la secuencia
de aminoácidos del polímero en el conjugado de
lípidos-polímeros está formada de residuos del
aminoácido L, el polímero resultante estará sometido a la
degradación enzimática. Por otro lado, cuando la secuencia de
aminoácidos del polímero en el conjugado de
lípidos-polímeros de esta invención está formada por
el aminoácido D, es probable que el polímero resultante sea estable
hacia las enzimas de degradación de péptidos. Asimismo, se pueden
utilizar mezclas de los aminoácidos L y D. Teniendo en cuenta las
distintas propiedades de los polímeros, la modificación superficial
de las partículas del soporte coloidal, en las cuales están
incorporados los conjugados de lípidos-polímeros de
la invención, puede ajustarse mediante la utilización selectiva de
la forma L y/o D de los materiales de partida para la preparación de
los conjugados.
Una propiedad importante de los compuestos de
poli-(aminoácidos), derivado de poli-(aminoácidos) y análogo de
poli-(aminoácidos), que son adecuados para su incorporación dentro
de los conjugados de lípidos-polímeros de la
presente invención, es que son solubles en agua (al menos 1 parte en
100 partes de agua, preferentemente 1 parte en 30 partes de agua y
todavía con más preferencia 1 parte en 10 partes de agua o menos).
Los polímeros pueden ser caracterizados también por su
\chi-parámetro en el agua. Se puede determinar
este parámetro de interacción polímero-disolvente
por ejemplo mediante la osmometría de membrana. Los polímeros que
pueden ser utilizados ventajosamente en los conjugados
lípidos-polímeros de acuerdo con esta invención
tienen un \chi-parámetro de \leq0,65,
preferentemente de \leq0,5 en agua.
Otra característica importante de los polímeros
es que no contienen cantidad sustancial alguna de grupos cargados
dentro de un rango de pH (fisiológico) de 4-8.
Preferentemente, se utilizan los monómeros de aminoácidos neutros o
los monómeros de análogos de aminoácidos en la preparación de los
polímeros o monómeros de derivados de aminoácidos, que son neutros o
han sido neutralizados. Tal como apareció, se puede dejar que los
grupos cargados estén presentes en un porcentaje bajo sin perturbar
las propiedades de larga circulación de las composiciones de soporte
coloidal de acuerdo con la presente invención. Tal como se ha
demostrado para los copolímeros de
2-hidroxi-etil-L-glutamina
y los monómeros cargados, se puede dejar que los grupos cargados
positivamente estén presentes en un porcentaje más amplio que los
grupos cargados negativamente.
Entre los monómeros adecuados para la
preparación del polímero se encuentran entre otros la alanina,
treonina, valina, sarcosina, ácido
\alpha-amino-adípico, los
derivados del ácido
\alpha,\gamma-diamino-butírico,
ornitina, glutamina y sus derivados, incluidos el ácido glutámico,
la asparagina y sus derivados, incluidos el ácido aspártico, los
derivados de lisina, la metionina y sus derivados, serina, sus
derivados y análogos con los grupos CH_{2} adicionales, como la
homoserina y pentahomoserina. Los grupos laterales adecuados
incluyen el alquilo (C_{1}-C_{4}),
hidroxi-alquilo, dihidroxi-alquilo,
amidas ácidas y grupos arilo o las combinaciones de los mismos,
siempre que el polímero permanezca soluble en agua. Los ejemplos de
estos grupos son el 2-hidroxi-etilo,
3-hidroxi-propilo,
4-hidroxi-butilo y
2,3-dihidroxi-propilo. Los polímeros
que se pueden utilizar son por ejemplo la
poli-(D,L-serina) (PDLS),
poli-(2-hidroxi-etil)-D,L-glutamina
(PDLHEG),
poli-(2-hidroxi-butil)-L-glutamina
(PHBG) y el copolímero de poli-(HEG-co-ácido
glutámico) 1% ácido glutámico (PHEG 1% GA). Los polímeros preferidos
son la poli-(D,L-glutamina) (PDLG),
poli-(D,L-asparagina) (PDLA),
poli-(hidroxi-propil)-L-glutamina
(PHPG),
poli-(2-hidroxi-propil)-L-glutamina
(P2HPG) y los copolímeros de beta-alanina y
2-hidroxi-etil-L-glutamina
(PbAHEG),
poli-(HEG-co-dimetil-amino-etil-glutamina)
que contienen un 5 y un 1% de grupos laterales de
dimetil-amino-etilo (PHEG 5% DG y
PHEG 1% DG). Los polímeros más preferidos son los homopolímeros
poli-[N-(2-hidroxi-etil)-L-glutamina]
(PHEG),
poli-(2-hidroxi-etil)-L-asparagina
(PHEA) y
poli-(D,L-metionín-sulfóxido)
(PDLMS).
La cadena polimérica contiene entre 5 y 500
subunidades monoméricas, preferentemente entre 20 y 100. El peso
molecular medio del polímero oscila entre 500 y 75.000,
preferentemente entre 2.000 y 15.000. El peso molecular medio puede
evaluarse de distintas formas según se conoce en el arte. En los
ejemplos de la presente solicitud se ha realizado una estimación del
peso molecular sobre la base de los datos de NMR.
Para la preparación de los conjugados de
lípidos-polímeros incorporados en las composiciones
de la presente invención se han utilizado preferentemente unos
métodos de fabricación, en los cuales los grupos reactivos en las
cadenas laterales de los monómeros de aminoácidos estaban protegidos
antes de la polimerización y acoplamiento del lípido.
Los conjugados de
lípidos-polímeros pueden ser preparados conforme los
métodos conocidos en el arte. Un método bien conocido para preparar
los polímeros de aminoácidos implica la polimerización por apertura
de anillo del aminoácido correspondiente
N-carboxi-anhídrido (NCA)s,
opcionalmente provisto de uno o más grupos protectores, iniciado por
los nucleófilos como las aminas primarias de alquilo
(C_{1}-C_{4}). Otro método para obtener los
conjugados de lípidos-polímeros comprende la
utilización de una amina con un grupo funcional protegido, por
ejemplo
N-Boc-1,4-diamino-butano,
como iniciador en la polimerización por apertura de anillo de NCA.
Aunque se requieran en este proceso dos etapas suplementarias, a
saber la desprotección del grupo funcional y posteriormente el
acoplamiento a un lípido con un grupo reactivo, los conjugados de
lípidos-polímeros preparados por este método son
también adecuados para su incorporación en las composiciones de
soporte coloidal de esta invención.
Si el lípido anfifílico es un mono- o
di-alquilo C_{8}-C_{50} de
cadena lineal o ramificada,
hidroxi-alquil-amina o
hidroxi-alquilén-amina, un alcanol o
una ceramida, esto puede ser utilizado ventajosamente como iniciador
en el proceso de polimerización por apertura de anillo. Esto
significa que durante la polimerización el lípido anfifílico se
acopla al polímero en una etapa. El peso molecular de los
poli-aminoácidos depende mucho del disolvente o de
la combinación de disolventes, de la pureza de los productos
químicos utilizados y del coeficiente de monómero/iniciador de
polimerización. Hablando en términos generales, cuanto más alto es
el coeficiente de monómero/iniciador de polimerización, más alto es
el peso molecular del polímero.
Cuando se tenga que preparar un polímero de
composición predefinida, se utilizará preferentemente el método de
síntesis de péptidos en fase sólida.
Los grupos protectores presentes en las unidades
de repetición del polímero pueden ser eliminados por aminolisis
mediante un amino-alcohol como el
2-amino-etanol,
3-amino-propanol o
2,3-dihidroxi-propil-amina.
Los conjugados de
lípidos-polímeros de la presente invención pueden
ser incorporados ventajosamente en las composiciones de soporte
coloidal de la invención, tal como los sistemas vesiculares bicapas,
como los liposomas, niosomas y vesículas inversas, sistemas
micelares, nanocápsulas, nanosferas, etc. Los sistemas de soporte
coloidal preferidos son los sistemas vesiculares bicapas.
A la preparación de los liposomas, el conjugado
de lípidos-polímeros de acuerdo con la invención, se
mezcla con los componentes normalmente utilizados en la preparación
de los liposomas, tales como los lípidos formadores de vesículas,
estabilizadores, etc. El conjugado está incluido a una concentración
molar suficiente para ampliar el tiempo de circulación en la sangre
de los liposomas varias veces por encima del de los liposomas
correspondientes que carecen de conjugado de
lípidos-polímeros. El conjugado polimérico está
incluido típicamente al 1-15 por ciento molar,
preferentemente al 3-10 por ciento molar y todavía
con más preferencia al 5-7,5 por ciento molar.
El tamaño medio de los liposomas, que debe ser
determinado por las técnicas de Difusión de Luz Dinámica (DLS), se
encuentra por debajo de 200 nm, preferentemente por debajo de 150 nm
y todavía con más preferencia por debajo de 100 nm. El límite
inferior para este tipo de partículas de soporte coloidal es de 20
nm.
Los conjugados de
lípidos-polímeros, cuando están incorporados en
liposomas cargados, muestran la capacidad de reducir el potencial
zeta, demostrando así que el injerto de polímero protege la carga
superficial.
Se pueden administrar las composiciones de
distintas maneras, pero se prefiere la administración parenteral.
Según el ingrediente activo y la indicación médica o el trastorno
que se deba tratar, la administración puede ser realizada por
inyección intravenosa, subcutánea, intramuscular, intraperitoneal,
intraarticular, etc.
Después de la administración intravenosa en
ratas de las preparaciones liposomales de acuerdo con la presente
invención, se ha mostrado que el tiempo de circulación en sangre de
los liposomas puede variar según el objetivo deseado. El tiempo de
circulación en sangre depende del conjugado de
lípidos-polímeros utilizado, en particular de la
elección de la combinación de lípidos/polímeros, del peso molecular
del polímero y de la densidad de injertos. Se han observado
resultados similares a los obtenidos con los correspondientes
liposomas injertados con PEG, por ejemplo para los conjugados de
lípidos-PHEG, conjugados de
lípidos-PHEA y conjugados de
lípidos-PDLMS, en los cuales el lípido anfifílico
contiene una doble cola hidrofóbica
(PHEG-diamino-butano DODASuc,
PHEA-DODASuc y PDLMS-DODDASuc).
La estabilidad de las preparaciones liposomales,
preparadas con los conjugados lípidos-polímeros de
acuerdo con la presente invención, se mejora generalmente en
comparación con la de las preparaciones liposomales convencionales.
Además de esto, la estabilidad de las preparaciones liposomales
puede mejorar además mediante la selección adecuada del conjugado
lípido-polímero. Se valorará que esta selección
dependa también de la elección del agente activo. Por ejemplo, la
encapsulación de un derivado soluble en agua de un corticosteroide
en lugar del corticosteroide en sí en una preparación liposomal
resultará en una estabilidad aumentada de la preparación liposomal.
La encapsulación del fosfato de prednisolona en un liposoma que
contenía el conjugado de
polihidroxi-etil-asparagina-DODASuc
produjo un resultado ligeramente superior que la incorporación en un
liposoma que contenía el conjugado de
poli-(2-hidroxi-etil)-L-glutamín-diamín-butano-DODASuc.
Otra mejora de la estabilidad puede ser alcanzada mediante la
eliminación del vehículo acuoso de la composición liposomal por
medio de los métodos bien conocidos en el arte, tales como secado
por aspersión, liofilización, evaporación rotacional, etc.
Los conjugados de
lípidos-polímeros, incorporados dentro de las
composiciones de soporte coloidal de acuerdo con la presente
invención, proporcionan propiedades de larga circulación a estas
composiciones. Por propiedades de larga circulación se tiene que
entender un aumento en el tiempo de circulación en la sangre de la
composición de soporte coloidal, en comparación con la composición,
que no contiene el conjugado de lípidos-polímeros.
Las propiedades de larga circulación pueden ser determinadas de
acuerdo con los métodos conocidos en el arte (Torchilin VP, Shtilman
MI, Trubetskoy VS, Whiterman K, Milstein AM.: Amphiphilic vinyl
polymers effectively prolong liposome circulation time in
vivo. Biochimica et Biophysica Acta (1994) 1195:
181-184; Torchilin VP, Trubetskoy VS, Whiterman KR,
Caliceti P, Ferruti P, Verones FM.: New synthetic amphiphilic
polymers for steric protection of liposomes in vivo. Journal
of pharmaceutical sciences (1995) 84 (9):
1049-1053). Para los liposomas, se ha proporcionado
un método en los ejemplos. Por lo tanto, se pueden utilizar estas
composiciones y especialmente las vesiculares, para una variedad de
aplicaciones. Excepto como depósito de medicamento circulante,
pueden utilizarse como objetivo pasivo hacia los sitios de patología
(tumores, infección, inflamación) y como objetivo activo hacia las
células en el flujo sanguíneo, hacia el endotelio (por ejemplo hacia
los receptores asociados a la angiogénesis), por ejemplo mediante el
acoplamiento a los dispositivos de guiado, como los anticuerpos
monoclonales. Otras aplicaciones pueden ser un sistema de suministro
de oxígeno artificial, formación de imágenes de la colección de
sangre y un recubrimiento antivegetativo para biomateriales, como
los catéteres y prótesis de vasos sanguíneos.
Además, los conjugados de
lípidos-polímeros son biodegradables y por lo tanto
proporcionan numerosas ventajas, en particular debido al hecho de
que no existe riesgo alguno de acumulación en las células del cuerpo
humano o animal.
Además, los conjugados de
lípidos-polímeros han mostrado que existe una
dependencia reducida a la dosis de lípidos en comparación con los
liposomas con PEG.
Otra ventaja adicional, pero muy importante,
puede ser que no se observa siempre una eliminación incrementada
después de la segunda inyección de las composiciones de acuerdo con
la invención y que la reducción del tiempo de circulación en la
sangre es moderada. Esto significaría una ventaja significativa en
comparación con las composiciones de soporte coloidal, recubiertas
de PEG.
Las composiciones de soporte coloidal de acuerdo
con la presente invención proporcionan una variedad de posibilidades
para su utilización en terapia, diagnóstico, profilaxis, etc. Debido
a la versatilidad de los conjugados de
lípidos-polímeros, cuyos componentes pueden
seleccionarse según el objetivo, y a la variedad de sistemas de
soporte coloidal a partir de los cuales uno puede elegir, se
evidenciará inmediatamente que en general será posible que cada
agente activo diseñe una composición adecuada de soporte coloidal.
Si en primer lugar, después de la administración intravenosa de las
composiciones de acuerdo con la invención se observara ningún efecto
o solamente un ligero efecto sobre el tiempo de circulación en la
sangre, una persona especialista en el arte puede variar muchos
parámetros diferentes en el conjugado de
lípido-polímero (por ejemplo, el peso molecular,
densidad de injerto, polímero, lípido, etc.) y en la composición del
soporte coloidal para incrementar el tiempo de circulación según el
estándar establecido. Se ve un efecto muy interesante cuando las
composiciones de acuerdo con la invención contienen un
corticosteroide soluble en agua como agente activo. En un modelo
experimental de artritis in vivo, se manifestó que una sola
inyección intravenosa de esta composición era tan eficaz como las
inyecciones repetidas del compuesto corticosteroide
no-encapsulado o cuando estaba encapsulado en
liposomas convencionales. Los corticosteroides solubles en agua
interesantes son el fosfato de budesonida y los derivados solubles
en agua de la flunisolida y propionato de fluticasona. Los efectos
favorables pueden ser una remisión completa y duradera de los
síntomas asociados a la artritis, mientras que se reducirán los
efectos secundarios asociados a la terapia basada en
corticosteroides, debido a una reducción en la cantidad de
corticosteroides que debe ser administrada y debido a que los
corticosteroides, que muestran normalmente una eliminación rápida de
la sangre, ahora pueden ser utilizados. También en otras
enfermedades, en las cuales los corticosteroides son los
medicamentos de elección o son utilizados como
co-terapia, se reconocerán inmediatamente los
efectos beneficiosos de las composiciones de acuerdo con la presente
invención. Sin embargo, otros agentes activos muestran también unos
efectos interesantes en las composiciones de la invención. Los
siguientes ejemplos ilustran también la invención.
Se disolvió 0,94 g (3,6 mmol) de
N-carboxi-anhídrido (NCA) de
\gamma-bencil-L-glutamato
en 5 ml de DMF seco en un medio de nitrógeno. Se añadió en una vez
una solución de 25 mg (0,05 mmol) de
1-heptadecil-octadecil-amina
(Sigma Aldrich) en 1 ml de cloroformo seco. Casi inmediatamente se
formaron burbujas de gas (CO_{2}). Se agitó la solución durante 1
día a temperatura ambiente y luego se precipitó en un exceso de
10-20 veces de agua. Se recogió el precipitado
blanco y se secó al vacío. Producción: 0,75 g.
Caracterización:
^{1}H-NMR en CDCl_{3}
(\delta en ppm con respecto al máximo de disolvente):
Bencil-glutamato: 7,2
(C_{6}H_{5}), 5,0 (CH_{2} bencílico), 3,9
(\alpha-CH), 2,8 & 2,2 (\beta & \gamma
CH_{2}),
Cadena de alquilo: 1,2 (cadena de alquilo
CH_{2}), 0,85 (CH_{3})
A una solución de 0,60 g de
PBLG-heptadecil-octadecil-amina
(véase arriba) en 5 ml de DMF seco se añadió 0,15 g de
2-hidroxi-piridina y 0,8 ml de
etanol-amina. Se agitó esta solución durante 3 días
a temperatura ambiente en un medio de nitrógeno. Se precipitó la
solución en un exceso de 10-20 veces de dietil-éter.
Se recogió el producto y se secó al vacío. El producto polimérico
soluble en agua fue dializado contra agua en tubos de diálisis de
éster de celulosa (MWCO 500) durante 2 días. Se obtuvo después de
liofilización, PHEG purificado con el grupo terminal
heptadecil-octadecilo. Producción: 0,30 g.
Caracterización:
^{1}H-NMR en
DMSO-d6 (\delta en ppm con respecto al máximo de
disolvente):
Hidroxi-etil-glutamina:
4,1 (\alpha-CH), 2,2 & 1,8-1,9
(\beta & \gamma CH_{2}), 3,4
(CH_{2}-OH), 3,1
(CH_{2}-NH_{2}),
Cadena de alquilo: 1,2 (cadena de alquilo
CH_{2}), 0,8 (CH_{3})
A partir del coeficiente de los números enteros
de las señales estearilo y la señal \alpha-CH, se
estimó que el peso molecular de PHEG era de 12.000.
Se disolvieron 2,5 g (9,5 mmol) de
N-carboxi-anhídrido de
\gamma-bencil-L-glutamato
en una mezcla de 2,5 ml de acetato de etilo seco y 12,5 ml de
diclorometano seco, y se añadió 0,95 ml (0,95 mmol) de una solución
de 1 mol de
N-Boc-1,4-diamino-butano
en diclorometano como iniciador. Se agitó la mezcla durante 3 días
en nitrógeno a temperatura ambiente y luego se precipitó en metanol.
Producción: 1,48 g de
PBLG-N-Boc-diamino-butano.
El espectro de ^{1}H-NMR
(CDCl_{3}) mostró señales
N-Boc-1,4-diamino-butano
en \delta 1,4-1,3.
Maldi TOF ms:
Masa de la unidad de repetición de ácido
bencil-glutámico: n x 219.
m/z 1417 (n=5), 1636 (n=6), 1855 (n=7),
2074 (n=8), correspondiente a las masas del aducto de sodio con un
grupo
N-Boc-1,4-diamino-butano
(187 Da) y un grupo terminal péptido cíclico (112 Da).
m/z 1433 (n=5), 1652 (n=6), 1872 (n=7),
correspondiente a las masas del aducto de potasio con un grupo
N-Boc-1,4-diamino-butano
(187 Da) y un grupo terminal péptido cíclico (112 Da).
Se agitaron durante 3,5 horas 738 mg de
PBLG-N-Boc-diamino-butano
en 5 ml de una solución de 4N HCl en dioxano. Posteriormente, se
evaporó la mezcla de reacción en un rotavapor. Se disolvió el
residuo en 5 ml de tetrahidro-furano y se añadió
gota a gota a 80 ml de una solución de NaHCO_{3} (6,5 g en agua).
Se quitó por filtración el producto, se lavó con agua y se secó al
vació. Producción: 677 mg de
PBLG-diamino-butano.
^{1}H-NMR (CDCl_{3}) mostró
que el grupo protector se había eliminado con éxito.
El análisis de masas Maldi TOF mostró las masas
molares deseadas.
Masa de la unidad de repetición de ácido
bencil-glutámico: n x 219.
m/z 1318 (n=5), 1537 (n=6), 1756 (n=7),
1976 (n=8), correspondiente a las masas del aducto de sodio con un
grupo 1,4-diamino-butano (87 Da) y
un grupo terminal péptido cíclico (112 Da).
Se disolvieron en 2 ml de diclorometano, 6,2 mg
(0,1 mmol) de
N-succinil-dioctadecil-amina
(DODASuc, Schmitt et al., J. Am. Chem. Soc. 1994, 116,
19, 8485-8491), 13,7 mg (0,12 mmol) de
N-hidroxi-succinimida y 0,66 mg de
dimetil-amino-piridina (DMAP).
Después de su enfriamiento a 0ºC, se añadieron 24,6 mg (0,12 mmol)
de N,N'-diciclohexil-carbodiimida
(DCC). Se agitó la solución durante 1 hora a 0ºC y durante toda la
noche a temperatura ambiente. Luego se quitó por filtración la
diciclohexil-urea insoluble, y se añadió el filtrado
a una solución de 200 mg de
PBLG-diamino-butano en 3 ml de
diclorometano y 14 \mul de trietil-amina. Después
de su agitación durante toda la noche a temperatura ambiente se
añadió la solución gota a gota al metanol, se filtró y se secó.
Producción: 135 mg.
El espectro ^{1}H-NMR
(CDCl_{3}) mostró que había diestearilo, señales de CH_{2} en
\delta 1,4-1,2 y señales de CH_{3} en \delta
0,9-0,8.
El análisis de masas Maldi TOF mostró que las
masas molares deseadas indicaban que DODASuc estaba acoplado a
PBLG-diamino-butano.
m/z 1922 (n=5), 2141 (n=6), 2360 (n=7),
2580 (n=8), 2799 (n=9), 3018 (n=10), correspondiente a las masas del
aducto de sodio de
PBLG-diamino-butano-DODASuc,
con un grupo terminal péptido cíclico (112 Da).
120 mg de
PBLG-diamino-butano-DODASuc
y 10,8 mg de 2-HP se disolvieron en 1,3 ml de
dimetil-formamida y se añadió 0,68 ml de
2-amino-etanol. Después de su
agitación durante 24 horas a 40ºC en nitrógeno, se añadió gota a
gota la solución al cloroformo. Se quitó por filtración el producto
y se secó al vacío. Producción: 83 mg de
PHEG-diamino-butano-DODASuc.
^{1}H-NMR (CDCl_{3}) mostró
señales de diestearilo en \delta 1,2-1,4
(CH_{2}) y \delta 0,8-0,9 (CH_{3})
A partir del coeficiente de los números enteros
de las señales de estearilo y la señal de
\alpha-CH, se estimó que el peso molecular de PHEG
era de 4.000.
Se disolvió 1,0 g (3,8 mmol) de
N-carboxi-anhídrido de
\gamma-bencil-L-glutamato
en una mezcla de 1 ml de acetato de etilo seco y 5 ml de cloroformo
seco. Posteriormente, se añadieron 2 ml (0,19 mmol) de una solución
de 163 mg de diestearil-amina en 3,26 ml de
cloroformo. El matraz estaba provisto de un tubo de CaCl_{2} y se
agitó la mezcla en nitrógeno durante 4 días a temperatura ambiente.
Se añadió gota a gota la mezcla a metanol, se aisló por filtración
el polímero y se secó al vacío. Producción: 757 mg de
PBLG-diestearil-amina.
El análisis ^{1}H-NMR
(CDCl_{3}) mostró señales de diestearilo en el producto: señal de
CH_{3} en \delta 0,9 (t) y señal de CH_{2} en \delta
1,3-1,2.
Maldi TOF ms:
Masa de la unidad de repetición de ácido
bencil-glutámico: n x 219.
m/z 1971 (n=6), 2190 (n=7), 2410 (n=8),
2629 (n=9), 2848 (n=10) correspondiente a las masas del aducto de
sodio con un grupo diestearil-amina (521 Da) y un
grupo terminal péptido cíclico (112 Da).
m/z 2206 (n=7), 2427 (n=8),
correspondiente a las masas del aducto de potasio con un grupo
diestearil-amina (521 Da) y un grupo terminal
péptido cíclico (112 Da).
La aminolisis de la
PBLG-diestearil-amina (600 mg)
preparada más arriba con amino-etanol y
2-hidroxi-piridina como catalizador
en dimetil-formamida produjo 430 mg de
PHEG-diestearil-amina.
^{1}H-NMR
(DMSO-d6) mostró señales de
diestearil-amina:
\vskip1.000000\baselineskip
A una solución de 3 g de
N-carboxi-anhídrido (NCA) de
bencil-L-\gamma-glutamato
en 8 ml de DMF seco se añadió una solución de 0,1 g de
N-BOC-1,4-diamino-butano
en 1 ml de cloroformo. Se observó la formación de gas (dióxido de
carbono) durante las primeras horas. Se agitó la solución durante 1
día en un medio de nitrógeno a temperatura ambiente. Después de la
precipitación en 100 ml ca. de metanol, se quitó por filtración el
polímero y se secó, produciendo 2 g de PBLG que contenía un grupo
amino BOC-protegido
^{1}H-NMR (CDCl_{3})
(\delta relativo al máximo de disolvente):
BOC: 1,4 (CH_{3})
PBLG: 2,2 & 2,6
(\beta,\gamma-CH_{2}), 4,0
(\alpha-CH), 5,0 (bencilo CH_{2}), 7,3
(fenilo)
Una solución de 1,1 g de
PBLG-diamino-butanoBOC en 5 ml de 4N
HCl/dioxano fue agitada durante 3-4 horas y luego
fue añadida gota a gota a una solución de 80 ml ca. de NaHCO_{3}
(6,5 g en agua). Se quitó por filtración el producto, se lavó con
agua y se secó al vacío. Producción: 1 g de
PBLG-diamino-butano.
^{1}H-NMR (CDCl_{3})
(\delta relativo al máximo de disolvente):
PBLG: 2,2 & 2,6
(\beta,\gamma-CH_{2}), 4,0
(\alpha-CH), 5,0 (bencilo CH_{2}), 7,3
(fenilo)
Señales de BOC ausentes.
Se disolvieron en 4 ml de diclorometano 170 mg
de
N-succinil-dioctadecil-amina
(DODASuc), 90 mg de DCC y 10 mg de
4-(dimetil-amino)-piridín-4-tolueno-sulfonato
(DPTS). Se agitó la solución durante 1 hora a temperatura ambiente.
Se añadió una solución de 0,73 g de
PBLG-diamino-butano y 40 \mul de
trietil-amina en 3 ml de cloroformo. Después de su
agitación durante toda la noche a temperatura ambiente la solución
(que contenía el precipitado de diciclohexil-urea)
fue añadida gota a gota a un exceso de metanol (100 ml ca.). Se
quitó por filtración el producto polimérico y se secó. Producción
0,5 g.
\newpage
^{1}H-NMR (CDCl_{3})
(\delta relativo al máximo de disolvente):
Señales de diestearilo en
0,8-0,9 (CH_{3}) y 1,2-1,4
(protones de metileno)
PBLG: 2,2 & 2,6
(\beta,\gamma-CH_{2}), 4,0
(\alpha-CH), 5,0 (bencilo CH_{2}), 7,3
(fenilo)
El
PHEG-diamino-butano DODASuc se
obtuvo por aminolisis de
PBLG-diamino-butano DODASuc con
etanol-amina como sigue:
Se disolvieron en 4 ml de DMF 0,5 g de
PBLG-diamino-butano DODASuc y 15 mg
de 2-hidroxi-piridina. Luego se
añadieron 2 ml de etanol-amina. Después de su
agitación durante 24 horas a 40ºC en un medio de nitrógeno, la
solución se precipitó en 100 ml ca. de dietil-éter. El
PHEG-diamino-butano DODASuc se
disolvió en agua, se dializó (MWCO 500) y posteriormente se
liofilizó produciendo 0,35 g de conjugado purificado de
PHEG-diamino-butano DODASuc.
^{1}H-NMR
(DMSO-d6) (\delta relativo al máximo de
disolvente):
Señales de diestearilo en
0,8-0,85 (CH_{3}) y 1,2-1,5
(protones de metileno)
PHEG: 1,7 & 2,2
(\beta,\gamma-CH_{2}), 3,1 & 3,3
(hidroxi-etilo), 4,2 (\alpha-CH),
4,7 (OH), 7,8 & 8,2 (NH).
A partir del coeficiente de los números enteros
de las señales de diestearilo y la señal de
\alpha-CH, se calculó que el peso molecular de
PHEG era de 4000 ca.
Maldi-TOF confirma la estructura
molecular del conjugado de
PHEG-diamino-butano DODASuc.
Na^{+}-aducto: m/z 3064,5
(n=13), 3236,1 (n=14), 3408,7 (n=15), 3580,6 (n=16), 3752,9 (n=17),
3924,7 (n=18), 4096,7 (n=19) 4268,4 (n=20), 4441,1 (n=21), 4613,3
(n=22), 4785,1 (n=23), etc.
El
poli-[(2-hidroxi-propil)-L-glutamín]-diamino-butano
DODASuc fue obtenido por aminolisis de
PBLG-diamino-butano DODASuc con
2-propanol-amina
(isopropanol-amina) como sigue:
Se disolvieron en 4 ml de DMF 0,15 g de
PBLG-diamino-butano DODASuc y 0,05 g
de 2-hidroxi-piridina. Luego se
añadió 1 ml de 2-propanol-amina.
Después de su agitación durante 24 horas a 40ºC en un medio de
nitrógeno, la solución se precipitó en 100 ml ca. de dietil-éter. Se
obtuvo 0,1 g de
PHisoPG-diamino-butano DODASuc
después del secado. Se disolvió el polímero en agua, se dializó
(MWCO 500) y posteriormente se liofilizó produciendo
poli-[(2-hidroxi-propil)-L-glutamín]-diamino-butano
DODASuc purificado.
^{1}H-NMR
(DMSO-d6) (\delta relativo al máximo de
disolvente):
Señales de diestearilo en
0,8-0,85 (CH_{3}) y 1,2-1,5
(protones de metileno)
PHPG: 1,7 & 2,2
(\beta,\gamma-CH_{2}), 1,0 (CH_{3}) &
3,0 & 3,3 & 3,7 (hidroxi-propilo), 4,2
(\alpha-CH), 4,7 (OH), 7,8 & 8,2 (NH).
Peso molecular calculado: 4000 ca.
Se obtuvo
poli-[(3-hidroxi-propil)-L-glutamín]-diamino-butano
DODASuc mediante aminolisis de
PBLG-diamino-butano DODASuc con
3-propanol-amina:
Se disolvieron en 4 ml de DMF 0,3 g de
PBLG-diamino-butano DODASuc y 0,1 g
de 2-hidroxi-piridina. Luego se
añadieron 2 ml de 3-propanol-amina.
Después de su agitación durante 24 horas a 40ºC en un medio de
nitrógeno, la solución se precipitó en 100 ml ca. de dietil-éter. Se
obtuvo 0,25 g de
PHPG5000-diamino-butano DODASuc
después del secado. Se disolvió el polímero en agua, se dializó
(MWCO 500) y posteriormente se liofilizó produciendo
poli-[(3-hidroxi-propil)-L-glutamín]-diamino-butano
DODASuc purificado.
^{1}H-NMR
(DMSO-d6) (\delta relativo al máximo de
disolvente):
Señales de diestearilo en
0,8-0,85 (CH_{3}) y 1,2-1,5
(protones de metileno)
PHPG: 1,7-2,2
(\beta,\gamma-CH_{2}), 1,5 & 3,1 & 3,3
(hidroxi-propilo), 4,2
(\alpha-CH), 4,6 (OH), 7,8 & 8,2 (NH).
Peso molecular calculado: 5000 ca.
Maldi-TOF:
Na^{+}-aducto: m/z 3623
(n=15), 3810 (n=16), 3996 (n=17), 4182 (n=18), 4368 (n=19), 4555
(n=20), etc.
Se obtuvo
poli-[(4-hidroxi-butil)-L-glutamín]-diamino-butano
DODASuc mediante aminolisis de
PBLG-diamino-butano DODASuc con
4-butanol-amina:
Se disolvieron en 4 ml de DMF 0,3 g de
PBLG-diamino-butano DODASuc y 0,1 g
de 2-hidroxi-piridina. Luego se
añadieron 2 ml de 4-butanol-amina.
Tras su agitación durante 48 horas a 40ºC en un medio de nitrógeno,
la solución se precipitó en 100 ml ca. de dietil-éter. Se disolvió
el polímero en agua, se dializó (MWCO 500) y posteriormente se
liofilizó produciendo 0,2 g de
poli-[(4-hidroxi-butil)-L-glutamín]-diamino-butano
DODASuc purificado.
^{1}H-NMR
(DMSO-d6) (\delta relativo al máximo de
disolvente):
Señales de diestearilo en
0,8-0,85 (CH_{3}) y 1,2-1,5
(protones de metileno)
PHBG: 1,7-2,2
(\beta,\gamma-CH_{2}), 1,4 & 3,1 & 3,3
(hidroxi-butilo), 4,2 (\alpha-CH),
4,5 (OH), 7,8 & 8,2 (NH).
Peso molecular: 4000 ca.
Se obtuvo
poli-[(2,3-dihidroxi-propil)-L-glutamín]-diamino-butano
DODASuc mediante aminolisis de
PBLG-diamino-butano DODASuc con
2,3-dihidroxi-propil-amina:
Se disolvieron en 3 ml de DMF 0,15 g de
PBLG-diamino-butano DODASuc y 0,06 g
de 2-hidroxi-piridina. Luego se
añadió 1 ml de
2,3-dihidroxi-propil-amina.
Después de su agitación durante 1 día a 40ºC en un medio de
nitrógeno, la solución se precipitó en 100 ml ca. de dietil-éter. Se
disolvió el polímero en agua, se dializó (MWCO 500) y posteriormente
se liofilizó produciendo 0,1 g de
poli-[(2,3-dihidroxi-propil)-L-glutamín]-diamino-butano
DODASuc purificado.
^{1}H-NMR
(DMSO-d6) (\delta relativo al máximo de
disolvente):
Señales de diestearilo en
0,8-0,85 (CH_{3}) y 1,2-1,5
(protones de metileno)
Poli-(dihidroxi-propil)-G:
1,7-2,2 (\beta,\gamma-CH_{2}),
3,1 & 3,3-3,6
(dihidroxi-propilo), 4,2
(\alpha-CH), 4,6 & 4,8 (OH), 7,8 & 8,2
(NH).
Peso molecular: 4000 ca.
A una solución de 0,2 g de
PBLG-NH_{2} y 20 \mul de
trietil-amina en 2 ml de cloroformo se añadió una
solución de 0,07 g de cloroformiato de colesterilo en 1 ml de
cloroformo. Se agitó la solución durante una hora ca. a temperatura
ambiente y luego se precipitó en dietil-éter. Después de la recogida
y secado, se obtuvo 0,13 g de producto polimérico.
La aminolisis con etanol-amina
(2-hidroxi-piridina como
catalizador) durante 1 día a 40ºC produjo
colesteril-PHEG. El producto polimérico fue
purificado por diálisis (MWCO 500).
^{1}H-NMR
(DMSO-d6) (\delta relativo al máximo de
disolvente):
PHEG: 1,7-2,2
(\beta,\gamma-CH_{2}), 3,1 & 3,3
(hidroxi-etilo), 4,2 (\alpha-CH),
4,7 (OH), 7,8 & 8,2 (NH) colesterilo:
0,6-1,6.
Peso molecular: 4000 ca.
Maldi-TOF confirma la estructura
molecular del conjugado de colesteril-PHEG.
Na^{+}-aducto: m/z 3046
(n=14), 3218 (n=15), 3390 (n=16), 3562 (n=17), 3735 (n=18), 3907
(n=19), 4080 (n=20), etc.
La síntesis es análoga a la de
poli-(2-hidroxi-etil)-L-glutamín-diamino-butano
DODASuc (ejemplo 8), sin embargo difiere en algunos detalles:
Se sintetizó
\gamma-bencil-DL-glutamina
NCA a partir de una mezcla al 1:1 de
\gamma-bencil-L- y
\gamma-bencil-D-glutamato
y se cristalizó a partir de acetato de etilo/hexano (1:5 ca.) (véase
el Ejemplo 1).
Se precipitó el
poli-(bencil-DL-glutamín)-diamino-butano
BOC en agua en lugar de metanol.
Se precipitó el
poli-(bencil-Dl-glutamín)-diamino-butano
DODASuc en metanol.
El espectro NMR es virtualmente idéntico al de
poli-(2-hidroxi-etil)-L-glutamín-diamino-butano
DODASuc (Ejemplo 8.1).
Peso molecular: 3000 ca.
\vskip1.000000\baselineskip
Una solución de 0,14 g de PBLG
diamino-butano DODASuc, 0,05 g de
2-hidroxi-piridina, 1 ml ca. de
etanol-amina en 1,5 ml de DMF fue agitada en un
medio de nitrógeno durante un día a temperatura ambiente. Entonces
se precipitó la solución en dietil-éter. El producto, PBLG
diamino-butano DODASuc parcialmente aminolizado por
etanol-amina (PHEG con un 5% de grupos laterales
bencil-éster), se recogió y secó. El NMR registrado en DMSO reveló
la presencia de un 5% de grupos bencilo no sometidos a reacción.
Se disolvió dicho polímero en 8,5 ml de 1M de
NaOH y se agitó durante 4 horas. Se neutralizó la solución con 1 N
de HCl, y luego se dializó (MWCO 500) durante unos días. Se obtuvo
el conjugado de copolímero-lípido (0,1 g) cargado
negativamente (al pH fisiológico) después de la liofilización de la
solución dializada.
El NMR en DMSO mostró la conversión total de los
grupos bencilo.
Se utilizó Maldi TOF para confirmar la presencia
tanto del ácido glutámico como de las unidades de repetición de
hidroxi-etil-glutamina.
Peso molecular: 3500 ca.
\vskip1.000000\baselineskip
Una solución de 0,25 g de PBLG
diamino-butano DODASuc, 0,08 g de
2-hidroxi-piridina, y 1 ml de
etanol-amina en 2,5 ml de DMF fue agitada en un
medio de nitrógeno durante dos días a temperatura ambiente. Se
precipitó la solución resultante en dietil-éter. El PBLG
diamino-butano DODASuc parcialmente aminolizado por
etanol-amina (PHEG con un 5% de grupos laterales
bencil-éster), se recogió y secó. El NMR registrado en CDCl_{3}
reveló la presencia de un 5% de grupos bencilo no sometidos a
reacción.
Una solución de 0,16 g de este PBLG
diamino-butano DODASuc parcialmente aminolizado por
etanol-amina, 0,06 g de
2-hidroxi-piridina, 1 ml de
N,N-dimetil-etilén-diamina
en 2,5 ml de DMF se agitó durante 1 día en un medio de nitrógeno a
40ºC. La precipitación en dietil-éter dio un polvo que se recogió y
secó al vacío. El NMR en DMSO mostró la conversión total de los
grupos bencilo restantes. Se disolvió el producto en agua y se
dializó (MWCO 500) durante unos días y posteriormente se liofilizó.
Producción: 0,1 g de conjugado de copolímero
PHEG-lípido cargado positivamente.
Peso molecular: 4000 ca.
\newpage
Una suspensión de 5 g de
\beta-bencil-L-aspartato
en 50 ml de THF destilado que contenía 16 ml ca. de una solución de
fosgeno al 20% se calentó a 60-65ºC (corriente de
gas de nitrógeno sobre la solución). Después de 10 minutos ca. se
obtuvo una solución transparente. Después de 1,5 horas ca., se
vertió lentamente la solución en 140 ml ca. de
n-hexano. Se formaron cristales casi inmediatamente.
Después de otra cristalización durante una noche a -20ºC, se aisló
el producto cristalino de NCA. Otras cristalizaciones a partir de
THF/hexano y de cloroformo caliente produjeron 4,3 g de finas
agujas. (Biopolymers 1976, 15(9)
1869-71).
^{1}H-NMR (CDCl_{3})
(\delta relativo al máximo de disolvente):
grupo bencilo: 7,3 (fenilo), 5,1 (CH_{2}).
NCA de aspartato: 2,8 & 3,0
(\beta-CH_{2}), 4,5
(\alpha-CH), 6,4 (NH).
A una solución de 0,95 g de
\beta-bencil-L-aspartato
NCA en 2 ml de DMF se añadió una solución de 0,04 g de
estearil-amina en 0,5 ml de cloroformo. Después de
su agitación durante varias horas a 60ºC se precipitó la solución
opaca en metanol. Después del secado, se obtuvo 0,56 g de
poli-(bencil-L-aspartato)-estearil-amina.
A una solución de 0,5 g de
\beta-bencil-L-aspartato
NCA en 2 ml de DMF se añadió 0,1 g de
1-heptadecil-octadecil-amina
en 1 ml ca. de cloroformo. Después de su agitación durante 3 días a
temperatura ambiente, se precipitó la solución opaca en metanol.
Producción: 0,2 g del producto polimérico
PBLA-heptadecil-octadecil amina.
La aminolisis de los conjugados PBLA mediante la
utilización de etanol-amina y
2-hidroxi-piridina como catalizador
a 40ºC durante 1 día, seguido de la precipitación en dietil-éter,
produce
poli-(hidroxi-etil)-L-asparagina
(PHEA) soluble en agua, que contiene respectivamente una cola de un
estearilo o un heptadecil-octadecilo. Los conjugados
de lípidos-polímeros fueron purificados por diálisis
(MWCO 500).
Maldi TOF: Aducto de Na^{+} m/z 2823
(n=16), 2981 (n=17), 3139 (n=18), 3297 (n=19), 3455 (n=20), 3613
(n=21), etc.
A partir de Maldi TOF se concluyó que cada
cadena de PHEA contiene un grupo terminal libre amino.
Heptadecil-octadecil-PHEA:
NMR (DMSO-d6) (\delta relativo
al máximo de disolvente):
heptadecil-octadecil: 0,8 &
1,2.
PHEA: 2,2-2,6
(\beta-CH_{2}), 3,1 & 3,4
(hidroxi-etilo), 4,5 (OH +
\alpha-CH), 7,8 & 8,3 (NH)
Pesos moleculares: 6000 ca.
\vskip1.000000\baselineskip
A una solución de 1,7 g de
\beta-bencil-L-aspartato-N-carboxi-anhídrido
(NCA) en 5 ml de DMF se añadió 0,2 ml de una 2M solución de
metil-amina en THF. Se agitó la solución
transparente durante un día y luego se precipitó en una mezcla de
metanol (100 ml ca.) y agua (250 ml). Producción de 1,3 g de PBLA,
que contiene una amida de metilo y un grupo terminal amino.
Una solución de 0,4 g de PBLA, 30 mg de DCC, 10
mg de DPTS y 100 mg de
N-succinil-diestearil-amina
en 5 ml de DMSO y 1 ml de cloroformo se agitó durante un día y luego
se precipitó en agua. Se agitó/lavó el producto polimérico con
dietil-éter y se secó.
La aminolisis de PBLA DODASuc con
etanol-amina (con
2-hidroxi-piridina como catalizador)
en la solución de DMF a 40ºC durante 1 día produjo PHEA DODASuc (0,2
g después de la diálisis y liofilización).
^{1}H-NMR
(DMSO-d6) (\delta relativo al máximo de
disolvente):
diestearilo: 0,8 (CH_{3}), 1,2 (CH_{2}), 1,4
(CH_{2}-N)
PHEA: 2,4-2,8
(\beta-CH_{2}), 3,2 & 3,4
(hidroxi-etilo), 4,6 (\alpha-CH +
OH), 7,8 & 8,5 (NH)
Peso molecular calculado: 3000 ca.
Maldi TOF confirma la estructura molecular del
conjugado PHEA DODASuc:
Na^{+} -aducto: m/z 2084 (n=9), 2243
(n=10), 2401 (n=11), 2559 (n=12), 2718 (n=13), 2876 (n=14), etc.
Se obtuvo PHEA amino-terminado
después de la aminolisis de PBLA
(polibencil-L-aspartato), obtenido a
partir de la polimerización iniciada por metil-amina
de bencil-L-aspartato NCA. Se
convirtió primero el DSPE succinilado (síntesis análoga a la
descrita para el DPPE en JACS, 116, 8485 (1994)) en su éster de NHS
in situ mediante la utilización de DCC
(diciclohexil-carbodiimida):
Una solución de 70 mg de DSPE succinilado, 20 mg
de NHS (N-hidroxi-succinimida), 5 mg
de DMAP y 30 mg de DCC (diciclohexil-carbodiimida)
en 2 ml de diclorometano se agitó durante 3-4 ca.
horas. Se añadió a esta mezcla una solución de 0,13 g de PHEA
amino-terminado (peso molecular de 4000 ca.) en 2 ml
de DMSO. Después de su agitación durante toda la noche, se precipitó
la mezcla en éter. Se recogió el precipitado, se disolvió en agua y
se dializó (MWCO 500) durante unos días. Después de la
liofilización, se obtuvieron 80 mg ca. de
PHEA-DSPE.
^{1}H-NMR
(DMSO-d6) (\delta relativo al máximo de
disolvente):
DSPE: 0,8 (CH_{3}), 1,2 (CH_{2}), 1,4
(CH_{2}-N)
PHEA: 2,4-2,8
(\beta-CH_{2}), 3,2 & 3,4
(hidroxi-etilo), 4,6 (\alpha-CH +
OH), 7,8 & 8,5 (NH)
Peso molecular calculado: 4000 ca.
Una suspensión de 2,5 g de
O-bencil-DL-serina
en 30 ml de THF destilado (seco) que contenía 10 ml ca. de una
solución de fosgeno al 20% en tolueno se calentó a
60-65ºC (corriente de gas de nitrógeno sobre la
solución). Después de 5 minutos ca. se obtuvo una solución
transparente. Después de 1,5 horas ca., se vertió lentamente la
solución en 100 ml ca. de n-hexano. El producto se
separó como aceite. Se decantó el disolvente y se disolvió el aceite
en 25 ml ca. de acetato de etilo al cual se añadieron lentamente 100
ml de hexano. Después de agitar fuertemente el matraz y refrigerarlo
a -20ºC,
O-bencil-DL-serina
NCA empezó a cristalizarse. Unas recristalizaciones similares a
partir de acetato de etilo/hexano y/o a partir de cloroformo/hexano
produjeron 2 g de material cristalino. (Biopolymers 1976,
15(9) 1869-71).
^{1}H-NMR (CDCl_{3})
(\delta relativo al máximo de disolvente):
grupo bencilo: 4,5 (CH_{2}), 7,2 (fenilo).
NCA de serina: 3,7
(\beta-CH_{2}), 4,4
(\alpha-CH), 5,8 (NH).
A una solución de 0,9 g de
O-bencil-DL-serina
NCA en 2,5 ml de DMF se añadió 0,08 ml de una solución de 2 M de
metil-amina en THF. Después de su agitación durante
varias horas a temperatura ambiente, la solución se volvió opaca y
viscosa. Después de 1 día, la solución viscosa, "cristalizada"
se mezcló con metanol/agua para precipitar completamente el producto
polimérico. Producción: 0,6 g del producto polimérico
poli-(O-bencil-DL-serina).
^{1}H-NMR en
DMSO-d6 (\delta relativo al máximo de
disolvente):
grupos bencilo: 4,4 (CH_{2}), 7,2 (fenilo)
poliserina: 3,5
(\beta-CH_{2}), 4,7
(\alpha-CH), 8,2 (NH).
Se disolvieron en 4 ml de cloroformo 150 mg de
N-succinil-dioctadecil-amina
(DODASuc), 80 mg de DCC y 5 mg de DPTS. Se agitó la solución durante
1 hora a temperatura ambiente. Se añadió una solución de 0,6 g de
poli-(O-bencil-DL-serina)
y 50 \mul ca. de trietil-amina en 5 ml ca. de
cloroformo. Después de su agitación durante toda la noche a
temperatura ambiente se añadió la solución (que contenía el
precipitado de diciclohexil-urea) gota a gota a un
exceso de metanol (100 ml ca.). Se quitó por filtración el producto
polimérico y se secó. Producción: 0,4 g.
^{1}H-NMR en
DMSO-d6 (\delta relativo al máximo de
disolvente):
diestearilo: 0,8 (CH_{3}), 1,2 (CH_{2}), 1,6
(CH_{2}-N)
grupos bencilo: 4,4 (CH_{2}), 7,2 (fenilo)
poliserina: 3,5
(\beta-CH_{2}), 4,7
(\alpha-CH), 8,2 (NH).
Se disolvió 0,1 g de
poli-(O-bencil-DL-serina)
DODASuc en 4 ml ca. de una solución de HBr/AcOH al 33% y se agitó
durante 1 hora. Entonces se precipitó la solución en agua. Se quitó
por filtración el precipitado polimérico, se lavó con agua, se
recogió y se disolvió posteriormente (1-2 horas) en
4 ml de 1M de NaOH. Se neutralizó la solución resultante con 1 N de
la solución de HCl, y luego se dializó (MWCO 500) durante varios
días. La solución dializada fue liofilizada. Producción: 20 mg de
poli-(DL-serina) DODASuc.
^{1}H-NMR en
DMSO-d6 (\delta relativo al máximo de
disolvente):
diestearilo: 0,8 (CH_{3}), 1,2 (CH_{2}), 1,6
(CH_{2}-N)
poliserina: 3,6
(\beta-CH_{2}), 4,3 (OH), 5,0
(\alpha-CH), 8,0 (NH).
A partir del coeficiente de los números enteros
de las señales de diestearilo y la señal de
\alpha-CH, se calculó que el peso molecular de la
poliserina era de 1500 ca.
La síntesis es análoga a la síntesis de
poli-(D,L-serina) DODASuc y se realizó a través de
O-bencil-L-treonina-N-carboxi-anhídrido
(NCA), a partir de
O-bencil-L-treonina,
HCl y fosgeno.
Poli-L-treonina
DODASuc (M = 2000 ca.):
^{1}H-NMR en
DMSO-d6 (\delta relativo al máximo de
disolvente):
diestearilo: 0,8 (CH_{3}), 1,2 (CH_{2}), 1,6
(CH_{2}-N)
politreonina: 1,0 (CH_{3}), 4,0
(\beta-CH), 4,3 (\alpha-CH), 5,0
(OH), 7,8 (NH).
Una suspensión de 2,5 g de
DL-metionina en 40 ml de THF destilado (seco) que
contenía 15 ml ca. de una solución de fosgeno al 20% en tolueno se
calentó a 60-65ºC (corriente de gas de nitrógeno
sobre la solución). Casi inmediatamente, se formó una solución
transparente. Después de 1 hora ca., se vertió lentamente la
solución en 140 ml ca. de n-hexano. Se cristalizó el
DL-metionina NCA a -20ºC (lleva varios días). La
recristalización a partir de acetato de etilo/hexano produjo 0,7 g
ca. de material cristalino. (Biopolymers 1976, 15(9)
1869-71).
^{1}H-NMR (CDCl_{3})
(\delta relativo al máximo de disolvente):
metionina NCA: 2,0-2,4
(\beta-CH_{2} + CH_{3}), 4,5
(\alpha-CH), 6,8 (NH).
A una solución de 0,7 g de
DL-metionina NCA en 2,5 ml de DMF se añadió 0,1 ml
de una solución de 2 M de metil-amina en THF.
Después de 1 día, la solución opaca se precipitó en 100 ml ca. de
metanol y posteriormente se secó. Producción: 0,33 g del producto
polimérico poli-(DL-metionina).
^{1}H-NMR en
CDCl_{3}/TF-d (\delta relativo al máximo de
disolvente):
polimetionina: 2,0-2,3 (CH_{2}
& CH_{3}), 2,6 (CH_{2}), 4,7
(\alpha-CH).
Se disolvieron en 2 ml de cloroformo 80 mg de
N-succinil-dioctadecil-amina
(DODASuc), 45 mg de DCC y 5 mg de DPTS. Se agitó la solución durante
1 hora a temperatura ambiente. Se añadió una solución de 0,33 g de
poli-(DL-metionina) y 20 \mul ca. de
trietil-amina en 2,5 ml ca. de DMSO. Después de su
agitación durante toda la noche a temperatura ambiente se añadió la
solución (que contenía el precipitado de
diciclohexil-urea) gota a gota a un exceso de
metanol (100 ml ca.). Se quitó por filtración el producto polimérico
y se secó. Producción: 0,22 g.
^{1}H-NMR en
DMSO-d6 (\delta relativo al máximo de
disolvente):
diestearilo: 0,8 (CH_{3}), 1,2 (CH_{2}), 1,4
(CH_{2}-N)
polimetionina: 1,8
(\beta-CH_{2}), 2,0 (CH_{3}), 2,4
(\gamma-CH_{2}), 4,4
(\alpha-CH), 8,1 (NH).
Se añadió lentamente una solución de 0,3 g de
peryodato sódico en 2 ml de agua a una suspensión de 0,22 g de
poli-(DL-metionín)-diamino-butano
DODASuc en 6 ml ca. de ácido acético. Se agitó durante 1 noche la
solución de color naranja/rojo resultante (que se formó después de
varias horas). Luego se añadieron 15 ml ca. de agua y la solución de
color naranja/rojo resultante fue dializada (MWCO 500) durante
varios días. Después de la liofilización se obtuvo 0,25 g de
producto.
^{1}H-NMR en D_{2}O
(\delta relativo al máximo de disolvente):
diestearilo: 0,7 (CH_{3}), 1,2 (CH_{2})
(máximos amplios)
sulfóxido de diestearilo: 2,0
(\beta-CH_{2}), 2,5 (CH_{3}), 2,8
(\gamma-CH_{2}), 4,3
(\alpha-CH), 8,5 (NH).
Peso molecular calculado: 4000 ca.
Un conjugado de
poli-(DL-glutamina) DODASuc fue sintetizado por
Ansynth Service B.V. por medio de un método de síntesis de péptidos
en fase sólida (escala de 50 mg ca.). La
poli-(DL-glutamina) (n=20) unida a una resina fue
elaborada paso a paso mediante aminoácidos
Fmoc-protegidos. Al N-terminal se
acopló la
N-succinil-diestearil-amina.
El C-terminal se transformó en una amida. El
espectro de ^{1}H-NMR confirmó la estructura.
^{1}H-NMR en
DMSO-d6 (\delta relativo al máximo de
disolvente):
diestearilo: 0,8 (CH_{3}), 1,2 (CH_{2}), 1,4
(CH_{2}-N)
poliglutamina: 1,7-2,2
(\beta,\gamma-CH_{2}), 4,2 (CH), 6,8 & 7,3
(NH_{2}), 8,2 (NH).
Un conjugado de
poli-(DL-asparagina) DODASuc fue sintetizado por
Ansynth Service B.V. por medio de un método de síntesis de péptidos
en fase sólida a partir de aminoácidos
Fmoc-protegidos (escala de 50 mg ca.). La
poli-(DL-asparagina) (n=20) unida a una resina fue
elaborada paso a paso. Al N-terminal se acopló la
N-succinil-diestearil-amina.
El C-terminal se transformó en una amida. El
espectro de ^{1}H-NMR registrado en DMSO confirmó
la estructura.
^{1}H-NMR en
DMSO-d6 (\delta relativo al máximo de
disolvente):
diestearilo: 0,8 (CH_{3}), 1,2 (CH_{2}), 1,4
(CH_{2}-N)
poliasparagina: 2,5 (CH_{2}), 4,5 (CH), 7,0
& 7,4 (NH_{2}), 8,1 (NH).
Se disolvieron en 4 ml de DMSO 95 mg de
poli-DL-alanina (Sigma; MW: 2000
ca.). Se añadieron 40 \mul de trietil-amina a esta
solución. Posteriormente, se añadió esta solución a una solución de
0,1 g de DODASuc, 70 mg de DCC y 5 mg de DPTS en 2 ml de cloroformo
que había sido agitado durante 1 hora. Después de su agitación
durante 1 día, se precipitó la mezcla en una mezcla de
metanol/dietil-éter. Se quitó por filtración el precipitado y se
secó.
^{1}H-NMR registrado en
DMSO:
diestearilo: 0,8 (CH_{3}), 1,2 (CH_{2}), 1,4
(CH_{2}-N)
polialanina: 1,2 (CH_{3}), 4,2 (CH), 8,0
(NH).
el copolipéptido de
\beta-alanina y
bencil-L-glutamato fue sintetizado
por medio de un método en fase sólida por Ansynth Service B.V. a
partir de los monómeros Fmoc-protegidos.
C-terminal: amida;
N-terminal: DODASuc.
Después de lo cual las unidades de glutamato de
bencilo fueron convertidas en unidades de glutamina de
hidroxi-etilo (HEG) por reacción de aminolisis
(etanol-amina) llevada a cabo en DMF.
^{1}H-NMR registrado en DMSO
reveló la ausencia/conversión de los grupos bencilo.
Se pesaron 33,8 mg de
fosfatidil-colina de huevo (EPC) (Lipoid
Ludwigshafen), 9,67 mg de colesterol (Sigma Aldrich) y 30,0 mg de
poli-[N-(2-hidroxi-etil)-L-glutamín]-estearil-amina
(PHEG-estearil-amina) (sintetizada)
y se trasladaron a un matraz de fondo redondo de 50 ml. Se añadieron
500 kBq de colesteril-oleil-éter marcado con tritio
como marcador lipídico. Los lípidos y la marca fueron disueltos en
aproximadamente 10 ml de etanol. A continuación tuvo lugar la
evaporación hasta sequedad seguida de una limpieza con gas de
nitrógeno durante 1 hora.
Se añadió PBS a la película lipídica seca y se
agitó durante una hora en presencia de perlas de vidrio para
permitir la hidratación completa de la película lipídica.
Se trasladó la suspensión liposomal a un
extrusor (Avestin, volumen máximo de 15 ml) y se extruyó bajo
presión, mediante la utilización de gas de nitrógeno, 6 veces a
través de 2 filtros de policarbonato, uno colocado encima del otro,
con un tamaño de poros respectivamente de 200 y 100 nm, y 18 veces a
través de filtros que tenían respectivamente un tamaño de poros de
100 nm y 50 nm. Posteriormente, la suspensión liposomal fue
dializada en un compartimento de diálisis
(Slide-A-Lyzer, 10.000 MWCO) 2 veces
durante 24 horas contra 1 litro de PBS esterilizado.
El tamaño medio de partículas de los liposomas
fue determinado por medio de difusión de luz (Malvern
Zeta-sizer) y se descubrió que era de 93,6 \pm 0,9
nm, siendo el índice de polidispersidad de 0,099 \pm 0,02. La
pérdida de lípidos durante la preparación de los liposomas fue del
25%, determinada mediante la comparación de la radioactividad final
de la preparación con la actividad antes del procedimiento de
extrusión. Se almacenó la suspensión de liposomas en un medio de
nitrógeno a 4ºC.
Se prepararon los liposomas por medio del método
de película, tal como se describe en el Ejemplo 20. En lugar de
fosfatidil-colina de huevo se utilizó
dipalmitoil-fosfatidil-colina. Se
añadieron 5 mM de tampón HEPES a la película lipídica seca y se
agitó durante 5 minutos en presencia de perlas de vidrio con el fin
de permitir la hidratación completa de la película lipídica. Los
liposomas fueron dimensionados por extrusión 12 veces a través de 2
membranas PC estiradas que tenían un tamaño de poros de 100 y 200
nm. Las dispersiones resultantes de liposomas fueron dializadas
(MWCO 10.000) y los tamaños medios de partículas fueron determinados
por medio de la técnica de difusión de luz dinámica. Véase el Cuadro
1 para las propiedades de las preparaciones liposomales.
Las ratas macho (Wistar, Crl: (WI) BR
(reproducción exterior, Calidad-SPF) (Charles River,
Sulzfeld, Alemania)) tuvieron libre acceso a la dieta en bolitas
estándar para animales de laboratorio (Altromin, código VRF 1, Lage,
Alemania) y a agua de grifo. Se administró en la vena de la cola una
inyección intravenosa de una sola dosis de las preparaciones
liposomales, conteniendo cada una
colesteril-oleil-éter marcado ^{3}H (Amersham) que
tenía 40-50 kBq de radioactividad, (se muestran en
el Cuadro 1 las composiciones por cada 50 \mumol de lípido). El
lípido total administrado fue de 5 \mumol, excepto en los casos
indicados.
Se recogieron muestras de sangre de la vena de
la cola de cada rata en las referencias de tiempo siguientes después
de la dosis: 5 minutos y 4, 24 y 48 horas. La cantidad de muestra
recogida fue de aproximadamente 300 \mul por prueba de
muestreo.
Se trasladó la sangre muestreada en tubos
heparinizados y se almacenó a -20ºC.
Una parte alícuota única de 100 \mul se
solubilizó de acuerdo con el siguiente método:
- -
- Se transfirieron 100 \mul a un frasco de centelleo (20 ml).
- -
- Se añadieron 100 \mul de Solvable. Esto fue incubado durante al menos 1 hora.
- -
- Se añadieron 100 \mul de 1 mM de EDTA y 200 \mul de H_{2}O_{2} al 30%. Se incubó esta mezcla durante 24 horas a temperatura ambiente y después a 50ºC durante toda la noche.
- -
- Se añadió Ultima Gold (10 ml) como fluido de centelleo.
- -
- La radioactividad fue medida por LSC.
Todas las mediciones radioactivas se realizaron
mediante un contador de centelleo Packard (1900TR). El tiempo de
conteo fue hasta una precisión estadística del \pm 0,2% o un
máximo de 5 minutos, el que llegara primero. El Packard 1900TR fue
programado para sustraer automáticamente el efecto de fondo y
convertir los conteos por minuto (CPM) en desintegraciones por
minuto (DPM).
Para algunas preparaciones mencionadas el hígado
y el bazo de las ratas fueron diseccionados 48 horas después de la
inyección y se evaluó la localización de los liposomas según el
método siguiente:
Los órganos fueron homogeneizados y los
homogenatos fueron diluidos a 25 ml (hígado) o 5 ml (bazo). Se
trasladó 1 ml de los homogenatos a los frascos de centelleo a los
cuales se añadieron posteriormente:
- -
- 200 ml de Solvable (mezclado y muestra incubada a 50ºC durante toda la noche)
- -
- 200 ml de 0,5 M de solución de EDTA
- -
- 250 ml de solución de H2O2 (al 30%) (incubada a 50ºC durante toda la noche)
- -
- 10 ml de líquido de centelleo Ultima Gold (agitación rotacional y muestra incubada durante 24 horas).
A continuación, se contaron las muestras en un
contador de beta-centelleo durante 10 minutos. Se
muestran en la Figura 6 los resultados para algunas preparaciones
liposomales.
Se muestran en el Cuadro 1 las composiciones de
las preparaciones liposomales, preparadas según el Ejemplo 21 y los
resultados obtenidos en la prueba in vivo de este ejemplo. Se
evaluó el aumento del tiempo de circulación en la sangre, en el
cual:
- -
- Buen efecto medio en el tiempo de circulación en comparación con él que muestran los liposomas que contienen PEG-DSPE.
- -
- Efecto medio moderado en el tiempo de circulación en comparación entre los que muestran los liposomas que contienen PEG-DSPE y los liposomas sencillos sin recubrimiento polimérico.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Cuadro pasa a página
siguiente)
\newpage
- *:
- 0,5 \mumol de Lípido Total administrado (véase Figuras 1 y 2)
- **:
- 0,05 \mumol de Lípido Total administrado (véase Figuras 1 y 2)
- ***:
- 0,005 \mumol de Lípido Total administrado (véase Figuras 1 y 2)
- \NAK:
- Cuando se dio una segunda inyección (TL 1 \mumol) después de 1 semana, se observó una reducción en el tiempo de circulación para los liposomas que contenían el conjugado de lípido-polímero del Ejemplo 5.1. Los liposomas que contenían el conjugado del Ejemplo 11, mostraron también esta reducción, pero se observó para 2 animales que este efecto era moderado.
750 mg de
dipalmitoil-fosfatidil-colina (DPPC)
(Lipoid Ludwigshafen), 220,0 mg de colesterol (Sigma
Aldrich) y 270,0 mg del conjugado de lípido-polímero del Ejemplo 11 así como 750 mg de dipalmitoil-fosfatidil-colina, 250,8 mg de colesterol y 267,6 mg de PEG-diestearoil-fosfatidil-etanol-amina (PEG-DSPE) (Avanti Polar Lipids) respectivamente fueron pesados y mezclados en un matraz de fondo redondo de 100 ml. Se disolvieron los lípidos en aproximadamente 30 ml de una mezcla al 1:1 de metanol y cloroformo (conjugado de lípido-polímero del Ejemplo 14) o etanol (PEG-DSPE). A continuación tuvo lugar la evaporación hasta sequedad seguida del lavado con gas de nitrógeno durante 1 hora.
Aldrich) y 270,0 mg del conjugado de lípido-polímero del Ejemplo 11 así como 750 mg de dipalmitoil-fosfatidil-colina, 250,8 mg de colesterol y 267,6 mg de PEG-diestearoil-fosfatidil-etanol-amina (PEG-DSPE) (Avanti Polar Lipids) respectivamente fueron pesados y mezclados en un matraz de fondo redondo de 100 ml. Se disolvieron los lípidos en aproximadamente 30 ml de una mezcla al 1:1 de metanol y cloroformo (conjugado de lípido-polímero del Ejemplo 14) o etanol (PEG-DSPE). A continuación tuvo lugar la evaporación hasta sequedad seguida del lavado con gas de nitrógeno durante 1 hora.
1200 mg de prednisolona - fosfato disódico (PLP)
(OPG Nieuwegein) fueron pesados y disueltos en 12 ml de PBS
esterilizado. Se añadió la solución a las películas lipídicas secas
y se agitó durante una hora en presencia de perlas de vidrio para
permitir la hidratación completa de las películas lipídicas.
Se trasladaron las suspensiones liposomales a un
extrusor (Avestin, volumen máximo de 15 ml) y se extruyeron bajo
presión, utilizando gas de nitrógeno, 6 veces a través de 2 filtros
porosos uno colocado encima del otro, que tenían un tamaño de poro
respectivamente de 200 y 100 nm, respectivamente de 100 y 50 nm y
respectivamente de 50 y 50 nm. Posteriormente, se dializaron las
suspensiones liposomales en un compartimento de diálisis
(Slide-A-Lyzer, 10.000 MWCO) 2 veces
durante 24 horas contra 1 litro de PBS esterilizado.
El tamaño medio de partículas de los liposomas
fue determinado por medio de difusión de luz (Malvern
Zeta-sizer) y se descubrió que era aproximadamente
de 85 y 90 nm respectivamente, siendo el índice de polidispersidad
< 0,1. Se determinó la eficacia de encapsulación del fosfato de
prednisolona por medio de un método HPLC y se descubrió que era del
2,6%. Se almacenaron las suspensiones de liposomas en un medio de
nitrógeno a 4ºC y se descubrió que eran estables durante al menos 5
semanas, donde las preparaciones liposomales que contenían el
conjugado de lípido-polímero del Ejemplo 14,
cumplían un poco mejor que las preparaciones liposomales que
contenían el conjugado de lípido-polímero de
referencia PEG-DSPE (véase la Figura 3).
Las ratas Lewis fueron inmunizadas
subcutáneamente en la base de la cola con Mycobacterium
tuberculosis inactivado por calor en adyuvante de Freund
incompleto. La inflamación de la pata empezó entre 9 y 12 días
después de la inmunización, alcanzó su gravedad máxima
aproximadamente a los 20 días, y luego se resolvió gradualmente.
La valoración de la enfermedad se realizó
tomando nota visualmente de la gravedad de la inflamación de la pata
a partir del día 10 hasta el día 35 después de la inmunización.
Cuando la importancia de la inflamación de la pata estaba a punto de
alcanzar valores a medio camino del grado máximo (día
14-15), todas las ratas fueron divididas en grupos
de 5 con grados medios iguales y fueron tratadas con una sola
inyección intravenosa de:
- 1.
- 10 mg/kg de PLP en los liposomas de PHEA-DODASuc, según se preparan en el Ejemplo 23, o
- 2.
- 10 mg/kg de PLP en los liposomas de PEG-DSPE, según se preparan en el Ejemplo 23 (referencia), o
- 3.
- PBS (control).
En t=0, 24 y 48 horas, se recogieron muestras de
sangre y se sometieron a prueba en cuanto a la concentración de
plasma del PLP liposomal. El comportamiento en la circulación de los
liposomas tanto PHEA como PEG en la sangre se muestra mediante los
perfiles de concentración de plasma de PLP, que están descritos en
la Figura 4. Ambos tipos de liposomas cumplen igualmente bien con
respecto a la vida media de la circulación.
La Figura 5 muestra la actividad terapéutica en
la artritis adyuvante en ratas de 10 mg/kg de liposomas
PLP-PHEA y 10 mg/kg de liposomas
PLP-PEG con respecto a las ratas tratadas con
solución salina como controles.
Claims (13)
1. Un conjugado de
lípido-polímero que puede ser obtenido a partir de
un lípido anfifílico, compuesto de al menos una parte apolar
hidrofóbica y un grupo de cabeza polar hidrofílico, así como un
polímero o un precursor monomérico para lo mismo, que tiene un grupo
extremo N- y C-terminal, caracterizado porque
el polímero es un poli-(aminoácido), un derivado de
poli-(aminoácido) o un análogo de poli-(aminoácido) y porque el
lípido está unido al grupo extremo N- o C-terminal
del polímero, teniendo el polímero la fórmula siguiente:
-[NHCHR(CH_{2})_{m}CO]_{n}-
en la
cual
- R es definido como:
- \quad
- - H, -CH_{3}, -CHCH_{3}OR_{1}, -(CH_{2})_{x}OR_{1}, -(CH_{2})_{x}-CO-NHR_{1}, -(CH_{2})_{x}-NH-CO-R_{1}, -(CH_{2})_{x}-SO_{y}CH_{3}, OR -(CH_{2})_{x} {}\hskip0,17cm COOH;
- R_{1} es H o alquilo
(C_{1}-C_{4}), sustituido por uno o más grupos
hidroxilo o un grupo dialquil-amina
(C_{1}-C_{4});
x es 0-4;
m = 1 ó 0, e
y = 1 ó 2.
2. El conjugado según la Reivindicación 1,
caracterizado porque el lípido anfifílico está seleccionado a
partir del grupo compuesto de fosfolípidos, glicolípidos, ceramidas,
colesterol y derivados, mono- o
di-alquil-aminas
C_{8}-C_{50},
aril-alquil-aminas,
cicloalquil-alquil-aminas,
alcanoles, aldehídos, carbohaluros o ácidos alcanoicos y los
anhídridos de los mismos saturados o insaturados, de cadena lineal o
ramificada, y caracterizado porque el número total de
átomos-C es preferentemente de 25 o más.
3. El conjugado según la Reivindicación 2,
caracterizado porque el lípido anfifílico contiene al menos
dos partes apolares hidrofóbicas.
4. El conjugado según la Reivindicación 3,
caracterizado porque el lípido anfifílico está seleccionado a
partir del grupo compuesto de
1-heptadecil-octadecil-amina,
N-succinil-dioctadecil-amina
y
diestearil-fosfatidil-etanol-amina.
5. El conjugado según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el polímero
tiene un \chi-parámetro de \leq 0,65,
preferentemente \leq 0,5 en agua.
6. El conjugado según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el polímero
consiste en \alpha-aminoácidos y los derivados o
análogos de los mismos.
7. El conjugado según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el polímero
no contiene cantidad sustancial alguna de grupos cargados dentro de
un pH fisiológico de 4-8.
8. El conjugado según la Reivindicación 7,
caracterizado porque el polímero se compone de monómeros de
aminoácidos, monómeros análogos de aminoácidos o monómeros derivados
de aminoácidos, que son neutros o que han sido neutralizados a un pH
fisiológico de 4-8.
9. El conjugado según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el polímero
tiene un peso molecular situado entre 500 y 75.000, preferentemente
entre 2.000 y 15.000.
10. El conjugado según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el polímero
es biodegradable.
11. El conjugado según la Reivindicación 1,
caracterizado porque el polímero es
poli-[N-(2-hidroxi-etil)]-L-glutamina.
12. El conjugado según la Reivindicación 1,
caracterizado porque el polímero es
poli-(2-hidroxi-etil)-L-asparagina.
13. El conjugado según la Reivindicación 1,
caracterizado porque el polímero es
poli-(D,L-metionina sulfóxido).
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP01202107 | 2001-06-01 | ||
| EP01202107 | 2001-06-01 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2282439T3 true ES2282439T3 (es) | 2007-10-16 |
Family
ID=8180408
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES02754661T Expired - Lifetime ES2282439T3 (es) | 2001-06-01 | 2002-06-03 | Nuevos conjugados lipidico-polimericos, su procedimiento de preparacion, y sus aplicaciones. |
| ES02748799T Expired - Lifetime ES2318027T3 (es) | 2001-06-01 | 2002-06-03 | Composiciones de conjungados lipido-polimero. |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES02748799T Expired - Lifetime ES2318027T3 (es) | 2001-06-01 | 2002-06-03 | Composiciones de conjungados lipido-polimero. |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US20040254352A1 (es) |
| EP (2) | EP1392755B1 (es) |
| JP (2) | JP2004527585A (es) |
| KR (2) | KR100894852B1 (es) |
| CN (2) | CN1308375C (es) |
| AT (2) | ATE416214T1 (es) |
| BR (2) | BR0209695A (es) |
| CA (2) | CA2448856A1 (es) |
| CZ (2) | CZ20033479A3 (es) |
| DE (2) | DE60230137D1 (es) |
| EE (2) | EE200300598A (es) |
| ES (2) | ES2282439T3 (es) |
| HR (2) | HRP20030975A2 (es) |
| HU (2) | HUP0400174A2 (es) |
| MX (2) | MXPA03011049A (es) |
| NO (2) | NO20035263D0 (es) |
| PL (2) | PL367479A1 (es) |
| SK (2) | SK15972003A3 (es) |
| WO (2) | WO2002098952A1 (es) |
| ZA (2) | ZA200308937B (es) |
Families Citing this family (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE60230137D1 (de) * | 2001-06-01 | 2009-01-15 | Astellas Pharma Europ B V | Zusammensetzungen enthaltend lipid-polymer konjugate |
| FR2840614B1 (fr) | 2002-06-07 | 2004-08-27 | Flamel Tech Sa | Polyaminoacides fonctionnalises par de l'alpha-tocopherol et leurs applications notamment therapeutiques |
| EP1393720A1 (en) * | 2002-08-27 | 2004-03-03 | Universiteit Utrecht | Vesicle-encapsulated corticosteroids for treatment of cancer |
| SG113442A1 (en) * | 2002-11-29 | 2005-08-29 | Agency Science Tech & Res | Improved temperature sensitive micelles |
| FR2855521B1 (fr) | 2003-05-28 | 2005-08-05 | Flamel Tech Sa | Polyaminoacides fonctionnalises par au moins un groupement h ydrophobe et leurs applications notamment therapeutiques. |
| EP1481683A1 (en) * | 2003-05-30 | 2004-12-01 | Yamanouchi Pharmaceutical Co. Ltd. | P-selectin targeting ligand and compositions thereof |
| SE527505C2 (sv) * | 2003-06-10 | 2006-03-28 | Anna Imberg | Komposita material och partiklar |
| FR2860516B1 (fr) * | 2003-10-03 | 2006-01-13 | Flamel Tech Sa | Homopolyaminoacides telecheliques fonctionnalises par des groupements hydrophobes et leurs applications notamment therapeutiques |
| WO2007129746A1 (ja) * | 2006-05-09 | 2007-11-15 | Osaka University | コレステロールアミン導入ポリ－γ－グルタミン酸誘導体 |
| JP4936312B2 (ja) | 2006-07-20 | 2012-05-23 | 株式会社島津製作所 | 新規な両親媒性物質、それを用いた薬剤搬送システム及び分子イメージングシステム |
| JP5258189B2 (ja) * | 2006-11-09 | 2013-08-07 | 学校法人 関西大学 | 柔軟性生分解性ポリマー |
| ITRM20070327A1 (it) * | 2007-06-11 | 2008-12-12 | Univ Palermo | Vettori colloidali a struttura poliamminoacidica per il rilascio orale di peptidi e proteine e relativo metodo di produzione. |
| US20090285882A1 (en) * | 2008-04-22 | 2009-11-19 | Jochen Weiss | Stabilized Liposome Compositions and Related Methods of Use |
| KR101695836B1 (ko) * | 2010-04-13 | 2017-01-16 | (주)아모레퍼시픽 | 경피흡수용 고분자-리포좀 나노복합체 조성물 및 그 제조방법 |
| ES2385995B2 (es) * | 2011-01-10 | 2013-05-21 | Universidade De Santiago De Compostela | Nanocápsulas con cubierta polimérica |
| US9993427B2 (en) * | 2013-03-14 | 2018-06-12 | Biorest Ltd. | Liposome formulation and manufacture |
| JPWO2019172362A1 (ja) * | 2018-03-07 | 2021-03-11 | 公益財団法人川崎市産業振興財団 | 刺激応答性ポリマー |
| JPWO2023282296A1 (es) * | 2021-07-07 | 2023-01-12 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0657722B2 (ja) * | 1986-05-27 | 1994-08-03 | 三菱化成株式会社 | 水溶性ポリマ−組成物 |
| US5149794A (en) * | 1990-11-01 | 1992-09-22 | State Of Oregon | Covalent lipid-drug conjugates for drug targeting |
| US5395619A (en) * | 1993-03-03 | 1995-03-07 | Liposome Technology, Inc. | Lipid-polymer conjugates and liposomes |
| US6333021B1 (en) * | 1994-11-22 | 2001-12-25 | Bracco Research S.A. | Microcapsules, method of making and their use |
| US5972379A (en) * | 1995-02-14 | 1999-10-26 | Sequus Pharmaceuticals, Inc. | Liposome composition and method for administering a quinolone |
| US6197332B1 (en) * | 1997-08-13 | 2001-03-06 | Chiron Corporation | Lipid-conjugated polyamide compounds and related compositions and methods thereof |
| GB9811059D0 (en) * | 1998-05-23 | 1998-07-22 | Univ Strathclyde | Polyamino acid vesicles |
| DE60230137D1 (de) * | 2001-06-01 | 2009-01-15 | Astellas Pharma Europ B V | Zusammensetzungen enthaltend lipid-polymer konjugate |
-
2002
- 2002-06-03 DE DE60230137T patent/DE60230137D1/de not_active Expired - Fee Related
- 2002-06-03 CA CA002448856A patent/CA2448856A1/en not_active Abandoned
- 2002-06-03 CZ CZ20033479A patent/CZ20033479A3/cs unknown
- 2002-06-03 EP EP02748799A patent/EP1392755B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-03 CN CNB028127358A patent/CN1308375C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2002-06-03 JP JP2003502069A patent/JP2004527585A/ja active Pending
- 2002-06-03 US US10/479,319 patent/US20040254352A1/en not_active Abandoned
- 2002-06-03 EE EEP200300598A patent/EE200300598A/xx unknown
- 2002-06-03 BR BR0209695-1A patent/BR0209695A/pt not_active IP Right Cessation
- 2002-06-03 BR BR0209699-4A patent/BR0209699A/pt not_active IP Right Cessation
- 2002-06-03 HU HU0400174A patent/HUP0400174A2/hu unknown
- 2002-06-03 EE EEP200300596A patent/EE200300596A/xx unknown
- 2002-06-03 US US10/479,031 patent/US20040241222A1/en not_active Abandoned
- 2002-06-03 MX MXPA03011049A patent/MXPA03011049A/es unknown
- 2002-06-03 ES ES02754661T patent/ES2282439T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-03 KR KR1020037015722A patent/KR100894852B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2002-06-03 PL PL02367479A patent/PL367479A1/xx not_active Application Discontinuation
- 2002-06-03 ES ES02748799T patent/ES2318027T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-03 WO PCT/EP2002/006783 patent/WO2002098952A1/en active Application Filing
- 2002-06-03 AT AT02748799T patent/ATE416214T1/de not_active IP Right Cessation
- 2002-06-03 EP EP02754661A patent/EP1392756B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-03 AT AT02754661T patent/ATE353927T1/de not_active IP Right Cessation
- 2002-06-03 WO PCT/EP2002/006432 patent/WO2002098951A2/en active IP Right Grant
- 2002-06-03 SK SK1597-2003A patent/SK15972003A3/sk not_active Application Discontinuation
- 2002-06-03 CZ CZ20033480A patent/CZ20033480A3/cs unknown
- 2002-06-03 SK SK1598-2003A patent/SK15982003A3/sk unknown
- 2002-06-03 JP JP2003502070A patent/JP2004527586A/ja active Pending
- 2002-06-03 KR KR1020037015720A patent/KR100874847B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2002-06-03 PL PL02369455A patent/PL369455A1/xx not_active Application Discontinuation
- 2002-06-03 DE DE60218154T patent/DE60218154T2/de not_active Expired - Fee Related
- 2002-06-03 CA CA002448858A patent/CA2448858A1/en not_active Abandoned
- 2002-06-03 HU HU0400171A patent/HUP0400171A2/hu unknown
- 2002-06-03 MX MXPA03011050A patent/MXPA03011050A/es unknown
- 2002-06-03 CN CNB02812734XA patent/CN1271116C/zh not_active Expired - Fee Related
-
2003
- 2003-11-17 ZA ZA200308937A patent/ZA200308937B/en unknown
- 2003-11-17 ZA ZA200308938A patent/ZA200308938B/en unknown
- 2003-11-24 HR HR20030975A patent/HRP20030975A2/hr not_active Application Discontinuation
- 2003-11-24 HR HR20030976A patent/HRP20030976A2/hr not_active Application Discontinuation
- 2003-11-27 NO NO20035263A patent/NO20035263D0/no not_active Application Discontinuation
- 2003-11-27 NO NO20035264A patent/NO20035264D0/no not_active Application Discontinuation
-
2009
- 2009-07-06 US US12/498,080 patent/US20100145018A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2282439T3 (es) | Nuevos conjugados lipidico-polimericos, su procedimiento de preparacion, y sus aplicaciones. | |
| ES2407979T3 (es) | Copolímeros de bloques de poli(éter-anhídrido) funcionalizados | |
| ES2937113T3 (es) | Macromolécula modificada | |
| US6586559B2 (en) | Polyamide oligomers | |
| US9295734B2 (en) | Branched amphipathic block polymer and molecular aggregate and drug delivery system using same | |
| US11912829B2 (en) | Cationic polyphosphazene compound, polyphosphazenes-drug conjugate compound and method for preparing same | |
| AU751434B2 (en) | Polyamide oligomers | |
| BRPI0616877A2 (pt) | copolìmero em bloco biocompatìvel, micela, particulado, compósito, composição farmacêutica, método para fabricar uma micela, particulado ou compósito, e, uso de um copolìmero em bloco biocompatìvel | |
| Nag et al. | Liposomes modified with superhydrophilic polymer linked to a nonphospholipid anchor exhibit reduced complement activation and enhanced circulation | |
| WO2014084378A1 (ja) | 環状ｒｇｄ配列含有ペプチドを含む抗癌剤 | |
| ES2560810T3 (es) | Composición medicinal particulada | |
| AU2002319248A1 (en) | Lipid-polymer-conjugates compositions | |
| AU2002320851A1 (en) | Lipid-polymer-conjugates | |
| JP2019123805A (ja) | ブロックコポリマー、ミセル組成物、及び医薬組成物 | |
| US20210138074A1 (en) | Polymer | |
| AU2773902A (en) | Polyamide oligomers |