FR2962651A1 - Composition pharmaceutique d'association et son utilisation dans des procedes pour traiter les maladies ou affections fonctionnelles du tractus gastro-intestinal - Google Patents

Abstract

La présente invention fournit une composition pharmaceutique d'association comprenant a) une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre une protéine S-100, b) une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'histamine, et c) une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre TNF-alpha. Différents modes de réalisation et différentes variantes sont fournis. La présente invention fournit un procédé de traitement d'une maladie ou affection d'étiologie fonctionnelle du tractus gastro-intestinal, ledit procédé comprenant l'administration à un patient qui en a besoin d'une composition pharmaceutique d'association comprenant a) une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre une histamine, b) une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100 et c) une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre TNF-alpha. Différents modes de réalisation et différentes variantes sont fournis.

Description

1 COMPOSITION PHARMACEUTIQUE D'ASSOCIATION ET SON UTILISATION DANS DES PROCÉDÉS POUR TRAITER LES MALADIES OU AFFECTIONS FONCTIONNELLES DU TRACTUS GASTRO-INTESTINAL DOMAINE La présente invention concerne des compositions pharmaceutiques d'association et leur utilisation dans un procédé pour traiter les maladies ou affections fonctionnelles du tractus gastro-intestinal.

ARRIERE-PLAN L'invention concerne le domaine de la médecine et peut être utilisée pour le traitement de troubles ou affections fonctionnels du tractus gastro-intestinal (GIT), incluant le syndrome du côlon irritable et les troubles de la fonction motrice d'évacuation du GIT, incluant les intestins.

Le traitement des maladies érosives et inflammatoires du tractus gastro-intestinal à l'aide de doses ultra-faibles d'anticorps contre l'histamine est connu dans la technique (RU 2197266 Cl). Cependant, cette préparation pharmaceutique ne peut pas garantir dans tous les cas une efficacité thérapeutique suffisante pour le traitement des troubles intestinaux fonctionnels.

L'effet thérapeutique d'une forme extrêmement diluée (ou forme ultra-faible) d'anticorps potentialisés par la technologie homéopathique (forme activée potentialisée) a été découvert par le Dr. Oleg I. Epshtein. Par exemple, le brevet US n° 7 582 294 décrit un médicament pour traiter l'hyperplasie prostatique bénigne ou la prostatite par administration d'une forme activée par la technologie homéopathique d'anticorps dirigés contre l'antigène prostatique spécifique (PSA). On a montré que des doses ultra-faibles d'anticorps dirigés contre l'interféron gamma sont utiles dans le traitement et la prophylaxie de maladies d'étiologie virale. Voir le brevet US n° 7 572 441. La protéine S-100 est une protéine liant le calcium acide cytoplasmique trouvée principalement dans la matière grise du cerveau, principalement dans la glie et les cellules de Schwann. La protéine existe sous plusieurs isoformes homo- ou hétérodimériques consistant en deux sous-unités, alpha et bêta, distinctes du point de

2 vue immunologique. L'utilisation de la protéine S-100 a été suggérée comme aide dans le diagnostic et l'évaluation des lésions cérébrales et des détériorations neurologiques dues à une lésion cérébrale, comme dans l'accident vasculaire cérébral. Yardan et al., Usefulness of S100B Protein in Neurological Disorders, J. Pak. Med. Assoc. Vol. 61, N°3, Mars 2011. On a montré que des doses ultra-faibles d'anticorps dirigés contre la protéine S-100 ont une activité anxiolytique, anti-asthénique, anti-agressive, de protection contre le stress, anti-hypoxique, anti-ischémique, neuroprotectrice et nootrope. Voir Castagne V. et al., "Antibodies to S100 proteins have anxiolytic-like activity at ultra-low doses in the adult rat', J. Pharm. Pharmacol. 2008, 60(3):309-16; Epstein O. I., "Antibodies to calcium-binding S 100B protein block the conditioning of long-term sensitization in the terrestrial snail"; Pharmacol. Biochem. Behav., 2009, 94(1):37-42; Voronina T.A. et al., Chapter 8. "Antibodies to S-100 protein in anxiety-depressive disorders in experimental and clinicat conditions, in `Animal models in biological psychiatry , Ed. Kalueff A.V. N-Y, "Nova Science Publishers, Inc.", 2006, pp. 137-152. La présente invention concerne une composition pharmaceutique d'association et des procédés l'utilisant dans le traitement de troubles fonctionnels du tractus gastro-intestinal, incluant le syndrome du côlon irritable et les troubles de la fonction motrice d'évacuation.

La solution au problème existant est présentée sous la forme d'une composition pharmaceutique d'association pour le traitement et la prophylaxie de maladies ou affections d'étiologie fonctionnelle du tractus gastro-intestinal qui comprend une forme activée-potentialisée d'anticorps dirigés contre l'histamine, une forme activée-potentialisée d'anticorps dirigés contre le facteur alpha de nécrose des tumeurs (TNF-a) et une forme activée-potentialisée d'anticorps dirigés contre la protéine spécifique du cerveau S-100.

RESUME Selon un aspect, l'invention fournit une composition pharmaceutique 30 d'association comprenant a) une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100, b) une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'histamine, et c) une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre TNF-alpha. Dans un mode de réalisation, la composition pharmaceutique d'association comprend en outre un support solide, où ladite forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100, ladite forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'histamine, et ladite forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre TNF-alpha imprègnent ledit support solide. Selon une variante, la composition pharmaceutique d'association est sous forme d'un comprimé. De préférence, la composition pharmaceutique d'association inclut ladite forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100 sous forme d'un mélange de dilutions homéopathiques C12, C30 et C200. II est spécifiquement envisagé que ledit mélange de dilutions homéopathiques C12, C30 et C200 imprègne un support solide. De préférence, la composition pharmaceutique d'association inclut ladite forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'histamine sous forme d'un mélange de dilutions homéopathiques C12, C30 et C200. II est spécifiquement envisagé que ledit mélange de dilutions homéopathiques C12, C30 et C200 imprègne un support solide. De préférence, la composition pharmaceutique d'association inclut ladite forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre TNF-alpha sous forme d'un mélange de dilutions homéopathiques C12, C30 et C200. Il est spécifiquement envisagé que ledit mélange de dilutions homéopathiques C12, C30 et C200 imprègne un support solide. La forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'histamine peut être un anticorps monoclonal, polyclonal ou naturel. Il est spécifiquement envisagé que la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'histamine est un anticorps polyclonal. La forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100 peut être un anticorps monoclonal, polyclonal ou naturel. Il est spécifiquement envisagé que la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100 est un anticorps polyclonal. La forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre

4 TNF-alpha peut être un anticorps monoclonal, polyclonal ou naturel. Il est spécifiquement envisagé que la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre TNF-alpha est un anticorps polyclonal. L'invention fournit des formes activées-potentialisées d'anticorps dirigés contre un ou des antigènes ayant des séquences décrites dans la description et revendiquées dans les revendications annexées. Selon une variante, la composition pharmaceutique d'association inclut une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'histamine préparée par dilutions centésimales successives couplées avec une agitation de chaque dilution. Selon une variante, la composition pharmaceutique d'association inclut une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100 préparée par dilutions centésimales successives couplées avec une agitation de chaque dilution. Selon une variante, la composition pharmaceutique d'association inclut une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre TNF-alpha préparée par dilutions centésimales successives couplées avec une agitation de chaque dilution. Une agitation verticale est envisagée spécifiquement. Selon un autre aspect, l'invention fournit un procédé de traitement d'une maladie ou affection d'étiologie fonctionnelle du tractus gastro-intestinal, ledit procédé comprenant l'administration à un patient qui en a besoin a) d'une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'histamine, b) d'une forme activée- potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100 et c) d'une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre TNF-alpha. De préférence, la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'histamine, la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100 et la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre TNF-alpha sont administrées sous la forme d'une composition pharmaceutique d'association. II est envisagé que ladite maladie ou affection d'étiologie fonctionnelle du tractus gastro-intestinal est de nature psychosomatique. De préférence, ladite maladie ou affection d'étiologie fonctionnelle du tractus gastro-intestinal est le syndrome du côlon irritable. II est envisagé que ladite maladie ou affection d'étiologie fonctionnelle du tractus gastro-intestinal est la douleur abdominale. Il est envisagé que ladite maladie ou affection d'étiologie fonctionnelle du tractus gastro-intestinal est la diarrhée. Il est envisagé que ladite maladie ou affection d'étiologie fonctionnelle du tractus gastro-intestinal est la constipation. Il est envisagé que ladite maladie ou affection d'étiologie fonctionnelle du tractus gastro-intestinal est une distorsion de la fonction motrice d'évacuation du tractus gastro-intestinal. Selon un mode de réalisation, la composition pharmaceutique d'association est administrée sous forme d'une forme galénique orale solide qui comprend un support pharmaceutiquement acceptable et ladite forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'histamine imprégnant ledit support, ladite forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100 imprégnant ledit support, et ladite forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre TNF-alpha imprégnant ledit support. Selon une variante, ladite forme galénique orale solide est un comprimé. Des variantes et des modes de réalisation sont fournis. Selon le procédé de l'invention, la composition pharmaceutique d'association peut être administrée en une à deux formes galéniques unitaires, chacune des formes galéniques étant administrée de une fois par jour à quatre fois par jour. Selon une variante, la composition pharmaceutique d'association est administrée deux fois par jour, chaque administration consistant en deux formes galéniques orales. Selon une variante, la composition pharmaceutique d'association est administrée dans une à deux formes galéniques unitaires, chacune des formes galéniques étant administrée deux fois par jour. Toutes les variantes et tous les modes de réalisation décrits au sujet de la composition de l'invention peuvent être utilisés avec le procédé de l'invention. Concernant l'aspect procédé de l'invention, il est spécifiquement envisagé que l'administration de l'association de l'invention peut être accompagnée d'une réduction statistiquement significative du score HADS dans la population représentative de patients. La co-administration de la composition pharmaceutique d'association avec un ingrédient actif supplémentaire est spécifiquement envisagée. Selon une variante, l'ingrédient actif supplémentaire est autorisé pour le traitement du syndrome du côlon irritable. Des variantes et des modes de réalisation sont envisagés.

DESCRIPTION DETAILLEE L'invention est définie en référence aux revendications annexées. Concernant les revendications, le glossaire qui suit fournit les définitions pertinentes.

Le terme "anticorps" tel qu'il est utilisé ici désigne une immunoglobuline qui se lie spécifiquement à, et est donc définie comme étant complémentaire d'une organisation spatiale et polaire particulière d'une autre molécule. Les anticorps tels que cités dans les revendications peuvent inclure une immunoglobuline complète ou un fragment de celle-ci, peuvent être naturels, polyclonaux ou monoclonaux, et peuvent inclure différentes classes et isotypes, comme les IgA, IgD, IgE, IgG1, IgG2a, IgG2b et IgG3, IgM, etc. Leurs fragments peuvent inclure les fragments Fab, Fv et F(ab')2, Fab', et analogues. "Anticorps" au singulier inclut « anticorps » au pluriel. Le terme "forme activée-potentialisée" ou "forme potentialisée" respectivement, concernant les anticorps cités ici, est utilisé pour désigner un produit de potentialisation homéopathique d'une quelconque solution initiale d'anticorps. "Potentialisation homéopathique" désigne l'utilisation de procédés d'homéopathie pour conférer une activité homéopathique à une solution initiale de substance pertinente. Bien qu'elle ne soit pas ainsi limitée, la « potentialisation homéopathique » peut impliquer, par exemple, des dilutions consécutives répétées combinées avec un traitement externe, en particulier une agitation (mécanique) verticale. En d'autres termes, une solution initiale d'anticorps est soumise à des dilutions répétées consécutives et de multiples agitations verticales de chaque solution obtenue conformément à la technologie homéopathique. La concentration préférée de la solution initiale d'anticorps dans le solvant, de préférence l'eau ou un mélange eau-alcool éthylique, va d'environ 0,5 à environ 5,0 mg/ml. Le processus préféré pour préparer chaque composant, c'est-à-dire la solution d'anticorps, est l'utilisation du mélange de trois dilutions aqueuses ou aqueuses-alcooliques de la solution de matrice primaire (teinture mère) d'anticorps diluée 10012, 1003° et 100200 fois, respectivement, qui équivaut à des dilutions homéopathiques centésimales (C12, C30, et C200) ou l'utilisation du mélange de trois dilutions aqueuses ou aqueuses-alcooliques de la solution de matrice primaire d'anticorps diluée 10012, 1003Ô et 10050 fois, respectivement, qui équivaut à des dilutions homéopathiques centésimales (C12, C30 et C50). Des exemples de potentialisation homéopathique sont décrits dans les brevets U.S. n° 7 572 441 et 7 582 294. Tandis que le terme "forme activée-potentialisée" est utilisé dans les revendications, le terme "doses ultra-faibles" s est utilisé dans les exemples. Le terme "doses ultra-faibles" est devenu un terme du domaine technique créé par l'étude et l'utilisation d'une forme de substance diluée et potentialisée par voie homéopathique. Le terme « dose ultra-faible » ou « doses ultra-faibles » est considéré comme support total et principalement synonyme du terme forme « activée-potentialisée » utilisé dans les revendications. 10 En d'autres termes, un anticorps est sous la forme « activée-potentialisée » ou « potentialisée » quand trois facteurs sont présents. Tout d'abord, la forme « activée-potentialisée » de l'anticorps est un produit d'un procédé de préparation bien accepté dans la technique homéopathique. Deuxièmement, la forme « activée-potentialisée » de l'anticorps doit avoir une activité biologique déterminée par des procédés bien acceptés 15 en pharmacologie moderne. Et troisièmement, l'activité biologique présentée par la forme « activée potentialiséee » de l'anticorps ne peut pas être expliquée par la présence de la forme moléculaire de l'anticorps dans le produit final du processus homéopathique. Par exemple, la forme activée potentialisée d'anticorps peut être préparée en 20 soumettant un anticorps isolé initial sous une forme moléculaire à de multiples dilutions consécutives couplées avec un impact externe, comme une agitation mécanique. Le traitement externe au cours de la réduction de la concentration peut aussi être accompli, par exemple, par exposition à des facteurs ultrasoniques, électromagnétiques, ou d'autres facteurs physiques. V. Schwabe "Homeopathic 25 medicines", M., 1967, brevets U.S. n° 7 229 648 et 4 311 897, décrivent de tels processus qui sont des procédés de potentialisation homéopathique bien acceptés dans la technique homéopathique. Ce processus donne naissance à une diminution uniforme de la concentration moléculaire de la forme moléculaire initiale de l'anticorps. Ce processus est répété jusqu'à ce que l'activité homéopathique souhaitée soit obtenue. Pour l'anticorps 30 individuel, l'activité homéopathique requise peut être déterminée en soumettant les dilutions

8 intermédiaires à des tests biologiques dans le modèle pharmacologique souhaité. Bien qu'elle ne soit pas ainsi limitée, la « potentialisation homéopathique » peut comprendre, par exemple, des dilutions consécutives répétées combinées avec un traitement externe, en particulier une agitation (mécanique) verticale. En d'autres termes, une solution d'anticorps initiale est soumise à des dilutions consécutives répétées et à de multiples agitations verticales de chaque solution obtenue selon la technologie homéopathique. La concentration préférée de la solution initiale d'anticorps dans le solvant, de préférence, l'eau ou un mélange eau-alcool éthylique, va d'environ 0,5 à environ 5,0 mgiml. Le processus préféré pour préparer chaque composant, c'est-à-dire la solution d'anticorps, est l'utilisation du mélange de trois dilutions aqueuses ou aqueuses-alcooliques de la solution de matrice primaire (teinture mère) d'anticorps diluée 10012, 10030 et 100200 fois, respectivement, qui équivaut à des dilutions homéopathiques centésimales C12, C30 et C200 ou le mélange de trois dilutions aqueuses ou aqueuses-alcooliques de la solution de matrice primaire (teinture mère) diluée 10012, 10030 et 10050 fois, respectivement, qui équivaut à des dilutions homéopathiques centésimales C12, C30 et C50. Des exemples de la façon d'obtenir l'activité souhaitée sont donnés aussi, par exemple, dans les brevets U.S. n° 7 229 648 et 4 311 897. Le processus applicable à la forme « activée-potentialisée » des anticorps décrit ici est décrit de manière plus détaillée ci-dessous. Il y a eu un nombre considérable de controverses concernant le traitement homéopathique de sujets humains. Bien que la présente invention s'appuie sur des processus homéopathiques acceptés pour obtenir la forme « activée-potentialisée » d'anticorps, elle ne s'appuie pas seulement sur l'homéopathie chez des sujets humains pour mettre en évidence une activité. Il a été découvert de manière surprenante par l'inventeur de la présente demande et amplement démontré dans les modèles pharmacologiques acceptés que la solution obtenue finalement à partir de dilutions multiples consécutives d'une forme moléculaire initiale d'un anticorps a une activité définitive non liée à la présence de traces de la forme moléculaire de l'anticorps dans la dilution cible. La forme « activée-potentialisée » de l'anticorps fournie ici est testée pour l'activité biologique dans des modèles pharmacologiques d'activité bien acceptés, dans des expériences in vitro appropriées, ou in vivo dans des modèles animaux appropriés. Les expériences présentées ci-dessous

9 prouvent l'activité biologique dans de tels modèles. Des études cliniques sur des humains prouvent aussi que l'activité observée dans le modèle animal est bien traduite en thérapie humaine. Des études sur des humains ont aussi prouvé la disponibilité des formes « activées potentialisées » décrites ici pour traiter des maladies humaines ou troubles humains spécifiques bien acceptés comme états pathologiques dans la science médicale. Egalement, la forme « activée-potentialisée » d'anticorps revendiquée englobe seulement des solutions ou des préparations solides dont l'activité biologique ne peut pas être expliquée par la présence de la forme moléculaire de l'anticorps résiduelle de la solution de départ initiale. En d'autres termes, bien qu'il pourrait être envisagé que la forme « activée-potentialisée » de l'anticorps peut contenir des traces de la forme moléculaire initiale de l'anticorps, l'homme du métier ne pourrait pas attribuer l'activité biologique observée dans les modèles pharmacologiques acceptés à la forme moléculaire résiduelle de l'anticorps avec un quelconque degré de plausibilité du fait des concentrations extrêmement faibles de la forme moléculaire résiduelle de l'anticorps après les dilutions consécutives. Bien que l'invention ne 15 soit pas limitée par une quelconque théorie spécifique, l'activité biologique de la forme « activée-potentialisée » des anticorps de la présente invention n'est pas attribuable à la forme moléculaire initiale de l'anticorps. Est préférée la forme « activée-potentialisée » d'anticorps sous forme liquide ou solide dans laquelle la concentration de la forme moléculaire de l'anticorps est inférieure à la limite de détection des techniques analytiques 20 acceptées, comme l'électrophorèse capillaire et la chromatographie liquide à haute performance. Est particulièrement préférée la forme « activée-potentialisée » d'anticorps sous forme liquide ou solide dans laquelle la concentration de la forme moléculaire de l'anticorps est inférieure au nombre d'Avogadro. Dans la pharmacologie des formes moléculaires de substances thérapeutiques, il est de pratique courante de créer une courbe 25 dose-réponse dans laquelle le niveau de réponse pharmacologique est représenté graphiquement en fonction de la concentration du médicament actif administré au sujet ou testé in vitro. Le niveau minimal du médicament qui produit une quelconque réponse détectable est connu comme étant une dose seuil. Il est particulièrement envisagé et préféré que la forme « activée-potentialisée » des anticorps contienne un anticorps moléculaire, s'il y

10 en a, à une concentration inférieure à la dose seuil pour la forme moléculaire de l'anticorps dans le modèle biologique donné. Le terme "maladie ou affection d'étiologie fonctionnelle du tractus gastro-intestinal" ou "trouble intestinal fonctionnel" doit être compris comme englobant les maladies ou affections du GIT, incluant l'intestin, quand il existe un trouble dans la fonction du GIT qui interfère avec le fonctionnement du patient à un degré notable quelconque. Mais en particulier, ce terme est destiné à définir les troubles ou affections qui sont observés et subis non pas par suite d'une lésion organique, mais en termes de perturbation nerveuse, psychosomatique et/ou humorale dans la régulation de l'activité du tube digestif (par exemple quand une lésion intestinale organique est totalement absente ou joue un rôle secondaire dans l'étiologie des maladies et/ou l'expérience du patient). Les troubles intestinaux fonctionnels sont caractérisés par l'absence de changements morphologiques (au moyen desquels il aurait été possible d'expliquer les symptômes cliniques) et par leur liaison, premièrement, avec une excitabilité accrue, deuxièmement, avec une hypersensibilité sensorielle et, troisièmement, avec une réaction inadéquate des organes internes aux signaux du système nerveux central sous l'influence de facteurs psychosociaux. Les troubles intestinaux fonctionnels sont la forme la plus fréquente de pathologie fonctionnelle du tractus gastro-intestinal et sont notés chez 40-70 % des patients ayant un profil gastro-entérologique. Le développement de troubles intestinaux fonctionnels est considéré comme étant affecté par des facteurs génétiques, des facteurs environnementaux, des facteurs psychosociaux, une hypersensibilité viscérale et les infections. Les troubles intestinaux fonctionnels font partie du grand groupe des maladies du tractus gastro-intestinal qui sont liées à une pathologie fonctionnelle et, selon la classification des troubles intestinaux fonctionnels (Roman Consensus, 1999), ils incluent des affections cliniques comme le syndrome du côlon irritable (IBS), la flatulence fonctionnelle, la constipation fonctionnelle, la diarrhée fonctionnelle et les troubles intestinaux fonctionnels non spécifiques. Dans la pathogenèse de ces maladies, les perturbations de la fonction motrice 30 de l'estomac et de l'intestin sont considérées comme jouant un rôle essentiel. Une caractéristique particulière des patients ayant des troubles intestinaux fonctionnels est une augmentation de la ou des réactions motrices et sensorielles, et l'apparition d'une douleur abdominale en réponse aux stress. Les symptômes des troubles intestinaux fonctionnels incluent les plaintes de douleur abdominale (diminuant habituellement après une défécation), la flatulence, le grondement, la sensation de vidange incomplète de l'intestin, les besoins impératifs de déféquer, la constipation, les diarrhées ou leur alternance et/ou leur combinaison. Les traits cliniques caractéristiques de tous les troubles fonctionnels du tractus gastro-intestinal incluent le cours prolongé (habituellement de nombreuses années) de la maladie sans évolution notable ; l'ampleur et la variété dans la présentation du tableau clinique (combinaison de douleurs de l'estomac, de troubles dyspeptiques et de perturbations des fonctions intestinales avec des maux de tête de type migraine, des troubles du sommeil, une sensation de coma avec ingestion, une insatisfaction d'inhalation, l'impossibilité de dormir sur le côté gauche, une miction plus fréquente, différentes réactions 1s spasmodiques du côlon et d'autres troubles végétatifs) ; la nature variable des plaintes ; la liaison de la santé détériorée avec des facteurs psycho-émotionnels. Le syndrome du côlon irritable (IBS) est l'un des troubles intestinaux fonctionnels les plus fréquemment rencontrés, trouvé, comme le montrent les observations des dernières années, aussi bien dans les pays du tiers monde que dans les pays 20 développés. La prévalence de l'IBS dans la majorité des pays dans le monde est, en moyenne, 20 %, et varie, selon les données de différentes études, de 9 à 48 %. La morbidité atteint un maximum pendant les premières années de travail, 30 - 40 ans. Le rapport des femmes aux hommes varie de 1 : 1 à 2 : 1. Parmi les hommes de plus de 50 ans, l'IBS est aussi répandu que parmi les femmes. L'âge moyen des patients est 25 24-41 ans. Le syndrome du côlon irritable (IBS) est l'une des maladies de l'homme moderne les plus fréquemment rencontrées. L'étiologie et la pathogenèse de l'IBS sont complexes et ne sont pas totalement comprises. La plupart des chercheurs admettent que le stress psycho-émotionnel joue un rôle important dans le développement de l'IBS. Selon le ou les symptômes 30 prédominants, trois types d'IBS possibles peuvent être distingués : avec des douleurs

12 abdominales et une flatulence prédominantes, avec une diarrhée prédominante, et avec une constipation prédominante. Jusqu'en 1988, l'IBS était désigné par différents noms, comme la colite spastique, la colite muqueuse, la diarrhée nerveuse, le gros intestin irrité, le syndrome de détresse intestinale fonctionnelle et d'autres. Ces noms reflétaient différents symptômes de la maladie et ne reflétaient pas une compréhension uniforme du problème. En 1988 à Rome, le groupe d'étude international pour les troubles fonctionnels du tractus gastro-intestinal (GIT) a confirmé officiellement pour la première fois l'expression "syndrome du côlon irritable," a donné sa définition et a développé des critères pour la formulation du diagnostic, qui ont été appelés ensuite « critères romains pour l'IBS ». En 1999, les critères ont été complétés et appelés « critères romains II pour l'IBS ». Selon les « critères romains II pour l'IBS » l'IBS est un ensemble ferme de troubles fonctionnels durant au moins 12 semaines au cours des 12 derniers mois qui manifestent une douleur de l'estomac et/ou un inconfort, qui passent après défécation, s'accompagnent de changements dans la fréquence et la consistance des selles, et se combinent pendant 25 % de la durée de la maladie avec pas moins de deux symptômes stables de perturbation de la fonction intestinale - par des changements dans la fréquence des selles, la consistance des fèces, l'acte de défécation proprement dit (besoins impératifs, ténesme, une sensation d'évacuation intestinale incomplète, un effort supplémentaire lors de la défécation), par la sécrétion de mucus avec les fèces et la flatulence. Dans le traitement de ce syndrome, parmi les autres préparations utilisées activement, il y a les régulateurs de l'activité motrice de l'intestion et les agents spasmolytiques.

La présente invention fournit une composition pharmaceutique d'association qui inclut des formes activées-potentialisées d'anticorps dirigés contre l'histamine, TNF-a et la protéine spécifique du cerveau S-100, pouvant être préparées chacune selon la technologie homéopathique de potentialisation par dilution constante répétée et action externe intermédiaire d'agitation comme décrit de manière plus détaillée ci-dessous. La composition pharmaceutique d'association de l'invention est particulièrement utile dans

13 le traitement des troubles intestinaux fonctionnels. Comme le montrent les exemples, la composition pharmaceutique d'association de l'invention possède un effet thérapeutique synergique inattendu qui se manifeste par une efficacité thérapeutique particulière dans le traitement des troubles intestinaux fonctionnels, en particulier le syndrome du côlon irritable, les troubles de la fonction motrice d'évacuation du GIT, incluant l'intestin, la constipation, la diarrhée et d'autres troubles d'étiologie similaire. L'effet de la composition pharmaceutique d'association, comme cela est montré dans des modèles expérimentaux bien acceptés et adéquats, se manifeste, par exemple, dans la normalisation de la régulation nerveuse, psychosomatique et humorale de la fonction intestinale, dans la réduction de l'hypersensibilité viscérale à une distension de récepteurs du gros intestin, qui conduit à un rétablissement de la perturbation du système locomoteur intestinal, une réduction de la sensation de bombement abdominal et de surremplissage de l'estomac, des manifestations réduites du syndrome de douleur abdominale. En même temps, il se produit un affaiblissement des muscles lisses, une diminution du tonus de la paroi du tractus gastro-intestinal (GIT), une baisse de la pression intra-ouverture, une normalisation de la consistance des selles, de leur fréquence et des symptômes associés (réduction des besoins impératifs, des faux besoins de déféquer, de la sensation de vidange incomplète de l'intestin, des efforts supplémentaires lors de la défécation et d'autres).

Il est spécifiquement envisagé que la composition pharmaceutique d'association de l'invention peut être utilisée en association avec d'autres ingrédients actifs, en particulier ceux utilisés pour le traitement de maladies ou affections du GIT. Des exemples non limitatifs d'ingrédients actifs supplémentaires appropriés incluent les antagonistes de 5-HT3, tels que Alosetron, Cilansetron, Ramosetron, les antagonistes de 5-HT4, tels que Tegaserod, les agonistes de 5-HT4/antagonistes de 5-HT3 mixtes, tels que Renzapride et Mosapride, les agents opioïdes, tels que alvimopan et asimadoline, les antagonistes de récepteur de CRH (hormone libérant la corticotropine), les activateurs de canaux chlorures, tels que Lubiprostone, les antagonistes de CCK (cholécystokinine), tels que Dexloxiglumide, les antagonistes de neurokinine, les antidépresseurs, incluant les antidépresseurs tricycliques, tels que Amitriptyline,

14 Clomipramine, Demexiptiline, Imipramine, Lofepramine, Metapramine, Nitroxazepine, Nortriptyline, Pipofezine, Propizepine, Protriptyline, et Quinupramine, les SSRI, tels que citalopram, dapoxetine, escitalopram, fluoxetine, fluvoxamine, paroxetine, sertraline, vilazodone, les antispasmodiques, les agents anticholinergiques/antimuscariniques (par exemple hyoscyamine, dicyclomine, cimetropium), les agents de relaxation directe des muscles lisses (par exemple mebeverine, pinaverine, bromure d'octylonium), les antidiarrhéiques, par exemple, loperamide, les benzodiazépines, par exemple, bextofisopam, et les antibiotiques, tels que lincosamides, céphalosporines, ansamycines, aminoglycosides, pénicillines, quinolones, sulfonamides, tétracyclines, macrolides, lincosamides, monobactams, et nitrofuranes. La composition pharmaceutique de l'invention étend l'arsenal des préparations disponibles pour le traitement et la prophylaxie des troubles intestinaux fonctionnels. Des anticorps polyclonaux dirigés contre l'histamine, qui est une amine biogène (4(2- aminoéthyl)-imidazole ou bêta-imidazolyléthylamine de formule chimique C5H9N3), peuvent être obtenus en utilisant un adjuvant et le dichlorhydrate d'histamine produit industriellement comme immunogène (antigène) pour l'immunisation de lapins. Avant de prélever du sang, 1-3 injections intraveineuses sont faites en 7-9 jours pour augmenter le niveau d'anticorps. Dans le processus d'immunisation chez des lapins, de petits échantillons sanguins sont prélevés pour évaluer la quantité d'anticorps. Le niveau maximum de réponse immunitaire à l'introduction de la majorité des antigènes solubles est atteint 40-60 jours après la première injection. Après la fin du premier cycle d'immunisation des lapins, au cours de 30 jours, la santé est amenée à être rétablie et une ré-immunisation est opérée, qui inclut 1-3 injections intraveineuses. Pour obtenir un antisérum auprès de lapins immunisés, du sang est recueilli dans un tube à essais de centrifugeuse en un volume de 50 ml. A l'aide d'une spatule en bois, les caillots formés sont retirés des parois du tube à essais, et une baguette est placée dans le caillot formé au centre du tube à essais. Le sang est placé dans un refroidisseur (température 4°C) pendant une nuit. Le jour suivant, le caillot qui s'est fixé à la spatule est retiré, et le fluide restant est centrifugé pendant 10 min à 13000 g. Le surnageant (fluide surnageant) est l'antisérum. L'antisérum obtenu devrait

15 être de couleur jaune. Du NaN3 à 20 % (concentration en poids) est ajouté à l'antisérum jusqu'à une concentration finale de 0,02 % et il est conservé jusqu'à l'utilisation à l'état congelé à une température de -20°C ou sans NaN3 à une température de -70°C. Pour séparer l'antisérum des anticorps dirigés contre l'histamine, une absorption sur une phase solide est réalisée dans l'ordre suivant : 1. 10 ml d'antisérum de lapin sont dilués deux fois avec NaCl 0,15 M, 6,26 g de Na2SO4 sont ajoutés, mélangés et incubés pendant 12-16 heures à 4°C ; 2. Le précipité sédimenté est retiré par centrifugation, dissous dans 10 ml de tampon phosphate et dialysé contre le même tampon pendant une nuit à la 10 température ambiante ; 3. Après le retrait du précipité par centrifugation, la solution est passée sur une colonne de DEAE-cellulose équilibrée par du tampon phosphate ; 4. La fraction d'anticorps est déterminée en mesurant la densité optique de l'éluat à 280 nm. 15 Puis, les anticorps sont purifiés par le procédé de chromatographie d'affinité par fixation des anticorps obtenus à l'histamine, qui est située dans la matrice non dissoute, avec élution subséquente par les solutions salines concentrées. La solution tampon d'anticorps polyclonaux de lapin dirigés contre l'histamine ainsi obtenue, purifiée sur un antigène, d'une concentration de 0,5 à 5,0 mg/ml, de 20 préférence 2,0 à 3,0 mg/ml, est utilisée comme solution de matrice (primaire) pour la préparation subséquente de la forme activée-potentialisée. Des anticorps polyclonaux dirigés contre le facteur a de nécrose des tumeurs (TNF-a) peuvent être obtenus par le procédé mentionné ci-dessus d'obtention d'anticorps polyclonaux contre l'histamine au moyen d'une molécule entière de facteur 25 alpha de nécrose des tumeurs de séquence suivante : 30 SEQ. ID. NO. 1 Met Ser Thr Glu Ser Met Ile Arg Asp Val Glu Leu Ala Glu Glu 1 5 10 15 Ala Leu Pro Lys Lys Thr Gly Gly Pro Gln Gly Ser Arg Arg Cys 16 20 25 30 Leu Phe Leu Ser Leu Phe Ser Phe Leu Ile Val Ala Gly Ala Thr 31 35 40 45 Thr Leu Phe Cys Leu Leu His Phe Gly Val Ile Gly Pro Gin Arg 46 50 55 60 Glu Glu Phe Pro Arg Asp Leu Ser Leu Ile Ser Pro Leu Ala Gln 61 65 70 75 Ala Val Arg Ser Ser Ser Arg Thr Pro Ser Asp Lys Pro Val Ala 76 80 85 90 His Val Val Ala Asn Pro Gln Ala Glu Gly Gln Leu Gln Trp Leu 91 95 100 105 Asn Arg Arg Ala Asn Ala Leu Leu Ala Asn Gly Val Glu Leu Arg 106 110 115 120 Asp Asn Gln Leu Val Val Pro Ser Glu Gly Leu Tyr Leu Ile Tyr 121 125 130 135 Ser Gln Val Leu Phe Lys Gly Gln Gly Cys Pro Ser Thr His Val 136 140 145 150 Leu Leu Thr His Thr Ile Ser Arg Ile Ala Val Ser Tyr Gln Thr 151 155 160 165 Lys Val Asn Leu Leu Ser Ala Ile Lys Ser Pro Cys Gln Arg Glu 166 170 175 180 Thr Pro Glu Gly Ala Glu Ala Lys Pro Trp Tyr Glu Pro Ile Tyr 181 185 190 195 Leu Gly Gly Val Phe Gln Leu Glu Lys Gly Asp Arg Leu Ser Ala 196 200 205 210 Glu Ile Asn Arg Pro Asp Tyr Leu Asp Phe Ala Glu Ser Gly Gln 211 215 220 225 Val Tyr Phe Gly Ile Ile Ala Leu 226 230 233 Pour obtenir des anticorps polyclonaux dirigés contre le facteur alpha de nécrose des tumeurs (TNF-a), il est possible aussi d'utiliser un fragment polypeptidique du facteur de nécrose des tumeurs, choisi, par exemple, parmi les séquences suivantes :

SEQ. ID. NO. 2 Pro Ser Asp Lys Pro 84 88 SEQ. ID. NO. 3 Val Ala Asn Pro Gln 93 97 SEQ. ID. NO. 4 Arg Asp Leu Ser Leu Ile Ser Pro Leu Ala Gin 65 70 75 Ala Val Arg Ser Ser Ser Arg Thr Pro Ser Asp Lys Pro Val Ala 76 80 85 90 His Val Val Ala Asn Pro Gln Ala Glu Gly Gln Leu Gln Trp Leu 91 95 100 105 Asn Arg Arg Ala Asn Ala Leu Leu Ala Asn Gly Val Glu Leu Arg 106 110 115 120 Asp Asn Gln Leu Val Val Pro Ser Glu Gly Leu Tyr Leu Ile Tyr 121 125 130 135 Ser Gln Val Leu Phe Lys Gly Gln Gly Cys Pro Ser Thr His Val 136 140 145 150 Leu Leu Thr His Thr Ile Ser Arg Ile Ala Val Ser Tyr Gln Thr 151 155 160 165 Lys Val Asn Leu Leu Ser Ala Ile Lys Ser Pro Cys Gln Arg Glu 166 170 175 180 Thr Pro Glu Gly Ala Glu Ala Lys Pro Trp Tyr Glu Pro Ile Tyr 181 185 190 195 Leu Gly Gly Val 196 199 SEQ. ID. NO. 5 Val Arg Ser Ser Ser Arg Thr Pro Ser Asp Lys Pro Val Ala 77 80 85 90 His Val Val 91 93 SEQ. ID. NO. 6 Phe Leu Ser Leu Phe Ser Phe Leu Ile Val Ala Gly Ala Thr 32 35 40 45 Thr Leu Phe Cys Leu Leu His Phe Gly 46 50 5440 SEQ. ID. NO 7. 56-73 Ile Gly Pro Gln Arg 56 60 Glu Glu Phe Pro Arg Asp Leu Ser Leu Ile Ser Pro Leu 61 65 70 73

SEQ. ID. NO 8. 123-160 Gln Leu Val Val Pro Ser Glu Gly Leu Tyr Leu Ile Tyr 123 125 130 135 Ser Gln Val Leu Phe Lys Gly Gln Gly Cys Pro Ser Thr His Val 136 140 145 150 Leu Leu Thr His Thr Ile Ser Arg Ile Ala 151 155 160

SEQ. ID. NO 9. 176-190 Pro Cys Gln Arg Glu 176 180 Thr Pro Glu Gly Ala Glu Ala Lys Pro Trp 181 185 190 SEQ. ID. NO 10. 5-45 Ser Met Ile Arg Asp Val Glu Leu Ala Glu Glu 5 10 15 Ala Leu Pro Lys Lys Thr Gly Gly Pro Gln Gly Ser Arg Arg Cys 16 20 25 30 Leu Phe Leu Ser Leu Phe Ser Phe Leu Ile Val Ala Gly Ala Thr 31 35 40 45

SEQ. ID. NO 11. 150-184 Val 150 Leu Leu Thr His Thr Ile Ser Arg Ile Ala Val Ser Tyr Gln Thr 151 155 160 165 Lys Val Asn Leu Leu Ser Ala Ile Lys Ser Pro Cys Gin Arg Glu 166 170 175 180 Thr Pro Glu Gly 181 184 1845 SEQ. ID. NO 12. 77-233 Val Arg Ser Ser Ser Arg Thr Pro Ser Asp Lys Pro Val Ala 77 80 85 90 His Val Val Ala Asn Pro Gln Ala Glu Gly Gin Leu Gln Trp Leu 91 95 100 105 Asn Arg Arg Ala Asn Ala Leu Leu Ala Asn Gly Val Glu Leu Arg 106 110 115 120 Asp Asn Gin Leu Val Val Pro Ser Glu Gly Leu Tyr Leu Ile Tyr 121 125 130 135 Ser Gln Val Leu Phe Lys Gly Gln Gly Cys Pro Ser Thr His Val 136 140 145 150 Leu Leu Thr His Thr Ile Ser Arg Ile Ala Val Ser Tyr Gin Thr 151 155 160 165 Lys Val Asn Leu Leu Ser Ala Ile Lys Ser Pro Cys Gln Arg Glu 166 170 175 180 Thr Pro Glu Gly Ala Glu Ala Lys Pro Trp Tyr Glu Pro Ile Tyr 181 185 190 195 Leu Gly Gly Val Phe Gln Leu Glu Lys Gly Asp Arg Leu Ser Ala 196 200 205 210 Glu Ile Asn Arg Pro Asp Tyr Leu Asp Phe Ala Glu Ser Gly Gln 211 215 220 225 Val Tyr Phe Gly Ile Ile Ala Leu 226 230 233 La protéine spécifique du cerveau S100, exprimée par les neurones et les cellules gliales (astrocytes et oligodendrocytes), directement ou par le biais d'interactions avec d'autres protéines, remplit dans le SNC un certain nombre de fonctions visant à maintenir un fonctionnement normal du cerveau, incluant une action 3o sur les processus d'apprentissage et de mémoire, la croissance et la viabilité des neurones, la régulation de processus métaboliques dans les tissus neuronaux et d'autres. Pour préparer la forme activée-potentialisée d'anticorps, un antisérum contre la protéine spécifique du cerveau S-100 peut être prélevé du tissu cérébral d'un taureau et traité comme suit : 35 - le tissu cérébral de taureau congelé dans de l'azote liquide est converti en une poudre au moyen d'un broyeur spécialisé ; - les protéines sont extraites dans le rapport de 1 : 3 (poids/volume) au moyen d'un tampon d'extraction avec homogénéisation : - l'homogénat est chauffé pendant 10 min à 60°C puis refroidi à 4°C dans un bain de glace ; - les protéines thermolabiles sont éliminées par centrifugation ; - un fractionnement au sulfate d'ammonium est réalisé par étapes, avec 5 retrait subséquent des protéines précipitées ; - la fraction contenant la protéine S-100 est précipitée en utilisant du sulfate d'ammonium saturé à 100 % et en abaissant le pH à 4,0 ; la fraction souhaitée est recueillie par centrifugation ; - le précipité est dissous dans un volume minimum de tampon contenant 10 de I'EDTA et du mercaptoéthanol, le précipité est dialysé avec de l'eau désionisée et lyophilisé ; - le fractionnement des protéines acides est suivi par une chromatographie dans un milieu échangeur d'ions, DEAE-cellulose DE-52 puis DEAE-sephadex A-50; 15 - les fractions recueillies et dialysées, qui contiennent la protéine S-100, sont divisées selon la masse moléculaire par filtration sur gel Sephadex G-100; - la protéine S-100 purifiée est dialysée et lyophilisée. La masse moléculaire de la protéine spécifique du cerveau S-100 purifiée est de 21000 D. 20 Les anticorps polyclonaux dirigés contre la protéine S-100 peuvent aussi être obtenus par une méthodologie similaire à la méthodologie décrite pour les anticorps dirigés contre l'histamine au moyen d'un adjuvant. La molécule entière de protéine S-100 peut être utilisée comme immunogène (antigène) pour l'immunisation de lapins. 25 S100B bovine (SEQ. ID. NO. 13) Met Ser Glu Leu Glu Lys Ala Val Val Ala Leu Ile Asp Val Phe 1 5 10 15 His Gln Tyr Ser Gly Arg Glu Gly Asp Lys His Lys Leu Lys Lys 30 16 20 25 30 Ser Glu Leu Lys Glu Leu Ile Asn Asn Glu Leu Ser His Phe Leu 31 35 40 45 Glu Glu Ile Lys Glu Gln Glu Val Val Asp Lys Val Met Glu Thr 46 50 55 60 Leu Asp Ser Asp Gly Asp Gly Glu Cys Asp Phe Gin Glu Phe Met 61 65 70 75 Ala Phe Val Ala Met Ile Thr Thr Ala Cys His Glu Phe Phe Glu 76 80 85 90 His Glu 91 92 S100B humaine (SEQ. ID. 14) Met Ser Glu Leu Glu Lys Ala Met Val Ala Leu Ile Asp Val Phe 1 5 10 15 His Gln Tyr Ser Gly Arg Glu Gly Asp Lys His Lys Leu Lys Lys 16 20 25 30 Ser Glu Leu Lys Glu Leu Ile Asn Asn Glu Leu Ser His Phe Leu 31 35 40 45 Glu Glu Ile Lys Glu Gln Glu Val Val Asp Lys Val Met Glu Thr 46 50 55 60 Leu Asp Asn Asp Gly Asp Gly Glu Cys Asp Phe Gln Glu Phe Met 61 65 70 75 Ala Phe Val Ala Met Val Thr Thr Ala Cys His Glu Phe Phe Glu 76 80 85 90 His Glu 91 92 25 S100A1 humaine (SEQ. ID. No. 15) Met Gly Ser Glu Leu Glu Thr Ala Met Glu Thr Leu Ile Asn Val 1 5 10 15 30 Phe His Ala His Ser Gly Lys Glu Gly Asp Lys Tyr Lys Leu Ser 16 20 25 30 Lys Lys Glu Leu Lys Glu Leu Leu Gin Thr Glu Leu Ser Gly Phe 31 35 40 45 Leu Asp Ala Gin Lys Asp Val Asp Ala Val Asp Lys Val Met Lys 35 46 50 55 60 Glu Leu Asp Glu Asn Gly Asp Gly Glu Val Asp Phe Gln Glu Tyr 61 65 70 75 Val Val Leu Val Ala Ala Leu Thr Val Ala Cys Asn Asn Phe Phe 76 80 85 90 40 Trp Glu Asn Ser 91 94 S100A1 bovine (SEQ. ID. NO. 16) Met Gly Ser Glu Leu Glu Thr Ala Met Glu Thr Leu Ile Asn Val 1 5 10 15 Phe His Ala His Ser Gly Lys Glu Gly Asp Lys Tyr Lys Leu Ser 16 20 25 30 Lys Lys Glu Leu Lys Glu Leu Leu Gln Thr Glu Leu Ser Gly Phe 31 35 40 45 Leu Asp Ala Gin Lys Asp Ala Asp Ala Val Asp Lys Val Met Lys 46 50 55 60 Glu Leu Asp Glu Asn Gly Asp Gly Glu Val Asp Phe Gln Glu Tyr 61 65 70 75 Val Val Leu Val Ala Ala Leu Thr Val Ala Cys Asn Asn Phe Phe 76 80 85 90 Trp Glu Asn Ser 91 94

Pour obtenir un antisérum spécifique du cerveau dirigé contre la protéine spécifique du cerveau S-100 séparée, un mélange de protéine S-100 purifiée (antigène) peut être préparé sous forme de complexe par la sérumalbumine de taureau méthylée comme milieu avec de l'adjuvant complet de Freund, qui est ensuite injecté par voie sous-cutanée à l'animal de laboratoire, un lapin, dans le domaine de la colonne vertébrale en une quantité de 1-2 ml. L'antisérum peut avoir un titre de 1:500 - 1:1000. Pour préparer les composants de la composition pharmaceutique d'association, it est préférable d'utiliser des anticorps polyclonaux dirigés contre l'histamine, TNF-a et la protéine spécifique du cerveau S-100 en utilisant la solution de matrice (primaire) initiale avec une concentration de 0,5 = 5,0 mg/ml (de préférence, 2.0 = 3.0 mg/ml). Ensuite, la solution de matrice est diluée comme décrit de manière plus détaillée ci-dessous pour préparer la forme activée-potentialisée du composant. La composition pharmaceutique d'association peut être sous forme liquide ou sous forme solide. Chacune des formes activées potentialisées des anticorps incluses dans la composition pharmaceutique est préparée à partir d'une forme moléculaire initiale de l'anticorps via un processus accepté dans la technique homéopathique. Les anticorps de départ peuvent être des anticorps monoclonaux ou polyclonaux préparés selon des processus connus, par exemple comme décrit dans Immunotechniques, G. Frimel, M., "Meditsyna", 1987, p. 9-33; "Hum. Antibodies. Monoclonal and 23 recombinant antibodies, 30 years after" de Laffly E., Sodoyer R. - 2005 - Vol. 14. - N 1-2. P.33-55. Des anticorps monoclonaux peuvent être obtenus, par exemple, par la technologie des hybridomes. Le stade initial du processus comprend une immunisation s basée sur les principes déjà développés au cours de la préparation d'antisérums polyclonaux. Les stades supplémentaires de l'opération comprennent la production de cellules hybrides générant des clones d'anticorps de spécificité identique. Leur séparation est accomplie au moyen des mêmes procédés que dans le cas de la préparation d'antisérums polyclonaux. 10 Des anticorps polyclonaux peuvent être obtenus via l'immunisation active d'animaux. Dans ce but, par exemple, des animaux appropriés (par exemple des lapins) reçoivent une série d'injections de l'antigène approprié. Le système immunitaire des animaux génère des anticorps correspondants, qui sont recueillis sur des animaux d'une manière connue. Ce processus permet la préparation d'un sérum riche en 15 anticorps monospécifiques. Si on le souhaite, le sérum contenant des anticorps peut être purifié, par exemple par chromatographie d'affinité, fractionnement par précipitation de sels, ou chromatographie d'échange d'ions. Le sérum enrichi en anticorps purifié résultant peut être utilisé comme produit de départ pour la préparation de la forme activée- 20 potentialisée des anticorps. La concentration préférée de la solution initiale d'anticorps résultante dans le solvant, de préférence l'eau ou un mélange eau-alcool éthylique, va d'environ 0,5 à environ 5,0 mg/ml. Le processus préféré pour préparer chaque composant du médicament d'association selon la présente invention est l'utilisation du mélange de trois dilutions 25 aqueuses-alcooliques de la solution de matrice primaire d'anticorps diluée 10012, 10030 et 10050 fois, respectivement, qui équivaut à des dilutions homéopathiques centésimales C12, C30, et C50 ou diluée 10012, 0030 et 100200 fois, respectivement, qui équivaut à des dilutions homéopathiques centésimales C12, C30 et C200. Pour préparer une forme galénique solide, un support solide est traité avec la dilution souhaitée 30 obtenue via le processus homéopathique. Pour obtenir une forme galénique unitaire

24 solide de l'association de l'invention, la masse du support est imprégnée de chacune des dilutions. Chaque ordre d'imprégnation du support solide pour préparer la combinaison souhaitée est envisagé spécifiquement, incluant l'imprégnation séquentielle du support selon n'importe quelle séquence avec la dilution finale ou le mélange de dilutions aussi bien que l'imprégnation du support avec le mélange liquide de tous les composants. Dans un mode de réalisation préféré, le produit de départ pour la préparation de la forme activée potentialisée qui comprend l'association de l'invention est un anticorps polyclonal produit chez des animaux dirigé contre l'antigène correspondant.

Le processus cité à titre d'exemple pour la préparation des anticorps polyclonaux de départ peut être décrit comme suit. 7-9 jours avant le prélèvement d'échantillons sanguins, 1-3 injections intraveineuses de l'antigène souhaité sont faites aux lapins pour augmenter le niveau d'anticorps polyclonaux dans la circulation sanguine des lapins. Lors de l'immunisation, des échantillons sanguins sont prélevés pour tester le niveau d'anticorps. Typiquement, le niveau maximum de réaction immunitaire de l'antigène soluble est obtenu dans un intervalle de 40 à 60 jours après la première injection de l'antigène. A l'achèvement du premier cycle d'immunisation, les lapins ont une période de réhabilitation de 30 jours, après quoi une ré-immunisation est accomplie avec 1-3 injections intraveineuses supplémentaires. Pour obtenir un antisérum contenant les anticorps souhaités, le sang des lapins immunisés est recueilli sur les lapins et placé dans un tube de centrifugeuse de 50 ml. Les caillots de produit formés sur les côtés du tube sont retirés avec une spatule en bois, et une baguette est placée dans le caillot au centre du tube. Le sang est ensuite placé dans un réfrigérateur pendant une nuit à une température d'environ 4°C. Le jour suivant, le caillot sur la spatule est retiré, et le liquide restant est centrifugé pendant 10 min à 13000 tours par minute. Le fluide surnageant est l'antisérum cible. L'antisérum obtenu est typiquement jaune. Du NaN3 à 20 % (concentration en poids) est ajouté à l'antisérum jusqu'à une concentration finale de 0,02 % et conservé avant l'utilisation à l'état congelé à la température de -20°C ou sans NaN3 à la température de -70°C. Pour

25 séparer les anticorps cibles dirigés de l'antisérum, la séquence d'absorption sur une phase solide suivante est appropriée : 10 ml d'antisérum de lapins sont dilués deux fois avec NaCl 0,15 M, après quoi 6,26 g de Na2SO4 sont ajoutés, mélangés et incubés pendant 12-16 heures à 4°C. Le sédiment est retiré par centrifugation, dilué dans 10 ml de tampon phosphate et dialysé contre le même tampon pendant une nuit à la température ambiante. Après le retrait du sédiment, la solution passée sur une colonne de DEAE-cellulose équilibrée par du tampon phosphate. La fraction d'anticorps est déterminée en mesurant la densité optique de l'éluat à 280 nm.

Les anticorps bruts isolés peuvent être purifiés par le procédé de chromatographie d'affinité en fixant les anticorps obtenus à la matrice insoluble du milieu de chromatographie, avec élution subséquente par des solutions salines aqueuses concentrées. La solution tampon résultante est utilisée comme solution initiale pour le 15 processus de dilution homéopathique utilisé pour préparer la forme activée-potentialisée des anticorps. La forme activée potentialisée de chaque composant de l'association peut être préparée à partir d'une solution initiale par potentialisation homéopathique, de préférence en utilisant le procédé de diminution de concentration proportionnelle par 20 dilution successive de 1 partie de chaque solution précédente (en commençant avec la solution initiale) dans 9 parties (pour une dilution décimale), ou dans 99 parties (pour une dilution centésimale), ou dans 999 parties (pour une dilution millésimale) d'un solvant neutre, en commençant avec une concentration de la solution initiale d'anticorps dans le solvant, de préférence l'eau ou un mélange eau-alcool éthylique, dans la plage 25 d'environ 0,5 à environ 5,0 mg/mi, couplée avec un impact externe. De préférence, l'impact externe comprend de multiples agitations verticales (dynamisation) de chaque dilution. De préférence, des récipients séparés sont utilisés pour chaque dilution subséquente jusqu'au niveau d'activité requis, ou le facteur de dilution requis. Ce procédé est bien accepté dans la technique homéopathique. Voir par exemple 30 V. Schwabe "Homeopathic medicines", M., 1967, p. 14-29.

26 Par exemple, pour préparer une dilution 12-centésimale (appelée C12), une partie de la solution de matrice initiale d'anticorps dirigés contre l'histamine d'une concentration de 3,0 mg/ml est diluée dans 99 parties de solvant neutre aqueux ou aqueux-alcoolique (de préférence d'alcool éthylique à 15 %) puis agitée verticalement de nombreuses fois (10 et plus) pour créer la lère dilution centésimale (appelée Cl). La 2ème dilution centésimale (C2) est préparée à partir de la -ère dilution centésimale Cl. Ce processus est répété 11 fois pour préparer la 12ème dilution centésimale C12. Ainsi, la 12ème dilution centésimale C12 représente une solution obtenue par 12 dilutions successives d'une partie de la solution de matrice d'anticorps initiale d'une concentration de 3,0 mg/ml dans 99 parties d'un solvant neutre dans des récipients différents, ce qui équivaut à la dilution homéopathique centésimale C12. Des processus similaires avec le facteur de dilution pertinent sont accomplis pour obtenir les dilutions souhaitées. Les dilutions intermédiaires peuvent être testées dans un modèle biologique souhaité pour vérifier l'activité. Les formes activées potentialisées préférées pour des anticorps comprenant l'association de l'invention sont des dilutions C12, C30 et C200 pour chaque forme activée-potentialisée. Quand le mélange de différentes dilutions homéopathiques (principalement centésimales) de la substance active est utilisé comme composant liquide biologiquement actif, chaque composant de la composition (par exemple C12, C30, C50, C200) est préparé séparément selon le processus décrit ci-dessus jusqu'à ce que l'avant-dernière dilution soit obtenue (par exemple jusqu'à C11, C29 et C199 respectivement), puis une partie de chaque composant est ajoutée dans un récipient selon la composition du mélange et mélangée avec la quantité requise de solvant (par exemple avec 97 parties pour une dilution centésimale).

II est possible d'utiliser la substance active sous forme d'un mélange de différentes dilutions homéopathiques, par exemple décimales et/ou centésimales (D20, C30, C100 ou C12, C30, C50 ou C12, C30, C200, etc.), dont l'efficacité est déterminée expérimentalement en testant la dilution dans un modèle biologique approprié, par exemple dans des modèles décrits dans les présents exemples.

27 Au cours de la potentialisation et de la diminution de la concentration, l'agitation verticale peut être remplacée par une exposition externe à des ultrasons, un champ électromagnétique ou . tout processus d'impact externe similaire accepté dans la technique homéopathique.

La forme galénique unitaire solide de la composition pharmaceutique de l'invention peut être préparée en utilisant l'imprégnation d'un support solide pharmaceutiquement acceptable avec le mélange de la forme activée potentialisée de solutions aqueuses ou aqueuses-alcooliques de composants actifs qui sont mélangés, principalement dans un rapport 1 :1 :1 et utilisés dans une forme galénique liquide. A titre d'alternative, le support peut être imprégné de manière consécutive avec chaque dilution requise. De préférence, la composition pharmaceutique dans la forme galénique unitaire solide est préparée à partir de granules du support pharmaceutiquement acceptable qui a été préalablement saturé avec les dilutions aqueuses ou aqueuses-alcooliques de la forme activée potentialisée d'anticorps. La forme galénique solide peut être sous toute forme connue dans la technique pharmaceutique, incluant un comprimé, une capsule, une pastille, et d'autres. Comme ingrédients pharmaceutiques inactifs on peut utiliser le glucose, le saccharose, le maltose, l'amidon, l'isomaltose, l'isomalt et d'autres mono-, oligo- et polysaccharides utilisés dans la fabrication de produits pharmaceutiques ainsi que des mélanges technologiques des ingrédients pharmaceutiques inactifs mentionnés ci-dessus avec d'autres excipients pharmaceutiquement acceptables, par exemple l'isomalt, la crospovidone, le cyclamate de sodium, la saccharine sodique, l'acide citrique anhydre, etc.), incluant les lubrifiants, les désintégrants, les liants et les agents colorants. Les supports préférés sont le lactose et l'isomalt. La forme galénique pharmaceutique peut inclure en outre des excipients pharmaceutiques standard, par exemple la cellulose microcristalline et le stéarate de magnésium. L'exemple de préparation de la forme galénique unitaire solide est présenté ci-dessous. Pour préparer la forme orale solide, des granules de 100-300 pm de lactose sont imprégnés de solutions aqueuses ou aqueuses-alcooliques de la forme activée potentialisée d'anticorps dirigés contre l'histamine, la forme activée-potentialisée

28 d'anticorps dirigés contre TNF-a et la forme activée potentialisée d'anticorps dirigés contre la protéine S-100 dans le rapport de 1 kg de solution d'anticorps pour 5 ou 10 kg de lactose (1 : 5 à 1:10). Pour réaliser l'imprégnation, les granules de lactose sont exposés à une irrigation à saturation dans le lit bouillonnant fluidisé dans une installation à lit bouillonnant (par exemple "Hüttlin Pilotlab" de Hüttlin GmbH) avec séchage subséquent via un courant d'air chauffé à une température inférieure à 40°C. La quantité estimée des granules séchés (10 à 34 parties en poids) saturés de la forme activée potentialisée d'anticorps est placée dans le mélangeur, et mélangée avec 25 à 45 parties en poids de lactose pur « non saturé » (utilisé dans le but de réduction des coûts et de simplification et d'accélération du processus technologique sans diminuer l'efficacité du traitement), avec 0,1 à 1 partie en poids de stéarate de magnésium, et 3 à 10 parties en poids de cellulose microcristalline. La masse pour comprimés obtenue est mélangée uniformément, et mise sous forme de comprimés par pressage à sec direct (par exemple dans une presse à comprimés Korsch - XL 400) pour former des pilules rondes de 150 à 500 mg, de préférence de 300 mg. Après la formation des comprimés, des pilules de 300 mg sont obtenues, qui sont saturées de solution aqueuse-alcoolique (3,0-6,0 mg/pilule) de l'association de la forme activée-potentialisée d'anticorps. Chaque composant de l'association utilisée pour imprégner le support est sous forme d'un mélange de dilutions homéopathiques centésimales, de préférence C12, C30 et C200. Tandis que l'invention n'est pas limitée par une quelconque théorie spécifique, on considère que la forme activée-potentialisée des anticorps décrits ici ne contient pas la forme moléculaire de l'anticorps en une quantité suffisante pour avoir l'activité biologique attribuée à une telle forme moléculaire. L'activité biologique du médicament d'association (composition pharmaceutique d'association) de l'invention est amplement démontrée dans les exemples annexés. De préférence, pour les besoins du traitement, l'association de l'invention est administrée d'une fois par jour à quatre fois par jour, de préférence deux fois par jour, chaque administration incluant une ou deux formes galéniques unitaires d'association.

29 L'invention est illustrée encore en se référant aux exemples non limitatifs annexés.

EXEMPLES Exemple 1 Trois études expérimentales ont examiné les effets i) des doses ultra-faibles d'anticorps dirigés contre l'histamine (His Ab), purifiés par affinité sur un antigène, obtenues par hyper-dilution de la solution de matrice initiale (mélange de dilutions 10012, 0030, 100200 (C12, C30 et C200), et ii) d'une association de a) des doses ultra-faibles d'anticorps dirigés contre l'histamine (His Ab), purifiés par affinité sur un antigène, obtenues par hyper-dilution de la solution de matrice initiale (mélange de dilutions 10012, 10030, 100200 (C12, C30 et C200) avec b) des doses ultra-faibles d'anticorps dirigés contre la protéine S-100 (S-100 Ab), purifiés par affinité sur un antigène, obtenues par hyper-dilution de la solution de matrice initiale (mélange de 15 dilutions 10012, 0030, 100200 (C12, C30 et C200)) et c) des doses ultra-faibles d'anticorps dirigés contre le facteur alpha de nécrose des tumeurs (TNF Ab), purifiés par affinité sur un antigène, obtenues par hyper-dilution de la solution de matrice initiale (mélange de dilutions 10012, 10030, 100200 (C12, C30, et C200)) (S100 Ab + TNF Ab + His Ab). 20 Etude 1. Effet sur la fonction motrice d'évacuation du tractus gastro-intestinal (GIT) de souris 31 souris mâles non consanguines (masse 17,5-26,3 g, âge 1,5-2 mois) ont subi des injections intragastriques d'eau distillée (témoin, 15 mvkg) ou de His Ab (15 ml/kg), ou de S100 Ab + TNF Ab + His Ab (15 ml/kg) pendant 5 jours. L'état de la fonction 25 motrice d'évacuation de l'estomac et de l'intestin a été étudié par le procédé aux « marqueurs » [Coopman, G.P., Kennis, H.M.,, Two Methods to Assess the gastrointestinal transit-time in mice// Z. Vershuchstierk, Vol. 19, No. 5, pp. 298-303, 1977]. Une heure après la dernière injection, une suspension à 10 % de charbon actif, préparée sur amidon de pomme de terre visqueux à 2 %, en la quantité de 0,5 mVsouris 30 a été injectée dans les voies digestives des souris comme « marqueur ». Dans un

30 intervalle de 10 minutes après l'injection du « marqueur », l'estomac et les intestins ont été recueillis et étalés sur une plaque de verre. La longueur totale de l'intestin rempli de marqueur a été mesurée (c'est-à-dire le rapport de la longueur de la partie de l'intestin remplie de charbon actif à la longueur totale, exprimé en pourcentages).

Il a été établi que l'injection de l'association S100 Ab + TNF Ab + His Ab à la dose de 15 mlkg a conduit à une augmentation statistiquement significative de la longueur de trajet totale du charbon actif le long de l'intestin de 1,3 et 1,2 fois par rapport aux valeurs correspondantes des groupes de His Ab et d'eau distillée (témoin), respectivement (tableau 1). Pour l'association S100 Ab + TNF Ab + His Ab, le rapport de la longueur de la partie remplie de charbon à la longueur totale de l'intestin dépassait aussi les indicateurs analogues dans le groupe de His Ab (p < 0,05) et le groupe témoin (p < 0,05). Ainsi, on a montré que l'association S100 Ab + TNF Ab + His Ab renforce l'activité motrice d'évacuation du GIT de souris avec un effet dépassant l'efficacité de 15 His Ab.

Tableau 1. Effet des préparations testées sur l'activité motrice d'évacuation du GIT de souris mâles non consanguines Groupe expérimental (nombre Longueur de la partie Rapport de la longueur d'animaux) de l'intestin remplie de de la partie remplie de charbon par souris charbon à la longueur (M±m), cm totale de l'intestin (M±m), Eau distillée. (n=10) 25,4±1,49 44,1±2,77 His Ab (n=11) 24,1±1 ,92 44,9±3,65 S100 Ab + TNF Ab + His Ab 31,1±2,09*# 54,4±3,24*# (n=10) 20 ` les différences sont statistiquement significatives par rapport au témoin (p<0,05) # les différences sont statistiquement significatives par rapport au groupe de His Ab (p<0,05). 25 31 Etude 2. Effet sur la fonction sécrétoire du GIT de souris 33 souris mâles non consanguines (masse 17,5-26,3 g, âge 1,5-2 mois) ont subi des injections intragastriques quatre fois avec de l'eau distillée (témoin, 15 ml/kg), ou avec His Ab (15 ml/kg) ou avec S100 Ab + TNF Ab + His Ab (15 mvkg). L'état de la s fonction sécrétoire de l'intestin a été étudié avec le procédé de G.V. Obolentsev (G.V. Oboletsev, Y. I. Hadzhai, Pharmacological investigation of plantagluside, Pharmacology and toxicology (en russe), No. 4, pp. 469-472, 1996). Chaque préparation test a été injectée en même temps que du charbon actif à la dose de 10 mg/kg. L'apparition de fèces colorées avec le charbon de couleur noire était considérée comme positive. Des 10 mesures ont été faites 3, 6 et 24 heures après le début de l'expérience. L'ampleur et/ou la nature de l'effet pour chaque animal ont été désignées de la manière suivante : "+" - apparition de fèces assombries bien formées ; "++" -apparition de fèces assombries molles ; "+++" - apparition de fèces assombries liquides. L'activité laxative a été évaluée par les points totaux dans le groupe selon le pourcentage d'animaux ayant une 15 réaction positive.

Tableau 2. Effet des préparations testées sur la fonction excrétoire des intestins chez des souris mâles non consanguines Groupe Ampleur de l'effet (points/% d'animaux ayant une réaction) d'observation (nombre d'animaux) 3 h 6 h 24 h Injection des préparations quatre fois Témoin (n=11) 22/100 18/100 7/55 His Ab (n=11) 18/100 18/100 6/55 S100Ab+ 25/100 24/100 6/55 TNF Ab + His Ab (n=11) 20 Un certain renforcement du péristaltisme a été observé dans les 3 premières heures suivant l'injection de S100 Ab + TNF Ab + His Ab comme suit : 25 points pour l'association contre 18 points dans le groupe de His Ab et 22 points dans le groupe 32 témoin (tableau 2). L'effet a été maintenu pour le groupe S100 Ab + TNF Ab + His Ab pendant 6 heures d'observation ; 24 points pour l'association contre 18 points pour les groupes de His Ab et témoin. Dans un intervalle de 24 heures, on a noté une réduction notée de l'activité excrétoire dans les trois groupes expérimentaux, y compris l'absence s de défécation chez 45 % des animaux. Ainsi, on a montré que l'association S100 Ab + TNF Ab + His Ab possède un effet laxatif qui dépasse l'effet de His Ab.

Etude 3. Activité spasmolytique 10 Trente souris mâles non consanguines (masse 17,5-26,3 g, âge 1,5-2 mois) ont subi des injections intragastriques pendant 5 jours avec, soit de l'eau distillée (témoin, 15 m1/kg), ou soit de His Ab (15 mVkg), ou soit de S100 Ab + TNF Ab + His Ab (15 ml/kg). L'activité spasmolytique des préparations a été évaluée selon le procédé de J. Setnicar (1959) [Senticar J., Da Re P., 3-methyl-6-(N-diethyl-amino-methyl)-Flavone-a 15 new smooth muscle relaxant//Arzneimittel-Forsch, No. 9, pp. 653-697 (1959)]. Une heure après la dernière injection, les souris ont subi des injections intrapéritonéales de 0,2 ml de solution de BaCl2 à 0,1 % et intragastriques de 0,5 ml d'une suspension à 10 0/0 de charbon actif préparée sur de l'amidon de pomme de terre visqueux à 2 %. Au bout de 10 minutes, les animaux ont été sacrifiés. Le rapport entre la longueur totale de 20 l'intestin et la partie remplie de charbon a ensuite été déterminé. Le rapport a été exprimé en pourcentages et considéré comme le résultat expérimental primaire. Dans le groupe qui a reçu l'association S100 Ab + TNF Ab + His Ab, la distance maximale sur laquelle le charbon a progressé dans l'intestin était 1,3 fois plus grande que dans le groupe de His Ab et le groupe témoin (tableau 3). Le spasme du GIT causé 25 par l'injection de BaCl2 conduisant à la réduction de la vitesse de progression du charbon actif dans l'intestin a été le moins exprimé dans le groupe de S100 Ab + TNF Ab + His Ab.

33 Tableau 3. Evaluation de l'effet spasmolytique de préparations test par le procédé aux « marqueurs de carbone » (avec BaCl2) Groupe d'observation (nombre Longueur de la partie Rapport de la longueur de d'animaux) de l'intestin remplie de la partie remplie de charbon par souris charbon à la longueur (Mtm), cm totale de l'intestin (Merl), % Témoin, (n=10) 23,3±2,20 42,4±3,49 His Ab, (n=10) 22,3±2,09 40,1±3,81 S100 Ab + TNF Ab + His Ab, 30,0±2,42*# 56,4±4,50*# (n=10) *les différences sont statistiquement significatives par rapport au témoin (p<0,05) # les différences sont statistiquement significatives par rapport au groupe de His Ab (p<0,05) Ainsi, on a montré que l'association S100 Ab + TNF Ab + His Ab possède un effet spasmolytique qui dépasse l'efficacité de His Ab.

Exemple 2 Des comprimés de 300 mg ont été préparés par imprégnation du support lactose avec des solutions aqueuses-alcooliques (6 mg/comprimé) de doses ultra-faibles d'anticorps polyclonaux de lapin purifiés par affinité dirigés contre le facteur alpha de nécrose des tumeurs humain (TNF Ab), la protéine spécifique du cerveau S-100 (S100 Ab) et l'histamine (His Ab). Chacun des components utilisés pour l'imprégnation a été obtenu par hyper-dilution de la solution de matrice initiale d'une concentration de 2,5 mg/ml 10012, 10030, 100200 fois (mélanges de dilutions homéopathiques centésimales C12, C30, C200). Pour le groupe comparatif, d'autres comprimés de 300 mg ont été utilisés, saturés d'une solution aqueuse-alcoolique (3 mg/comprimé) des doses ultra-faibles d'anticorps polyclonaux de lapin dirigés contre l'histamine, purifiés sur un antigène, (Fis Ab), obtenues par hyper-dilution de la solution de matrice initiale d'une concentration de 2,5 mg/mi 10012, 10030, 100200 fois (mélange de dilutions homéopathiques centésimales C12, C30, C200). 52 patients participant à l'étude avaient un diagnostic vérifié de syndrome du 25 côlon irritable (IBS) selon les critères romains III (2006). Les patients engagés dans

34 l'étude ont participé à une cure externe d'observation et de thérapie sur 12 semaines. 24 participants de l'étude étaient inclus dans le groupe de préparation test (TNF Ab+ S100 Ab + His Ab, 2 comprimés 2 fois par jour). 28 patients étaient inclus dans le groupe comparatif (His Ab, 2 comprimés 2 fois par jour). Les deux groupes de patients étaient comparables concernant les indicateurs démographiques, anthropométriques et de laboratoire clinique pertinents. 18 patients avaient un IBS avec constipation (les selles solides ou agglomérées constituaient plus de 25 %, et les selles liquides moins de 25 %, de toutes les évacuations de l'intestin), 14 patients avaient un IBS avec diarrhée (selles pâteuses ou liquides constituant plus de 25 %, et selles solides moins de 25 %, de toutes les évacuations de l'intestin), et 20 patients avaient une version mixte d'IBS (les selles agglomérées et les selles liquides constituaient plus de 25 % de toutes les évacuations de l'intestin). Les critères d'efficacité de la thérapie ont pris en compte les paramètres suivants : la réduction de l'intensité de la douleur/inconfort (valeur moyenne par semaine, de 0 à 10 points) par rapport à l'état initial, la dynamique des autres symptômes dyspepsiques sur l'échelle VAS-IBS (Visual Analogue Scale Irritable Bowel Syndrom (VAS-IBS): Guidance for Industry Irritable Bowel Syndrom - Clinical Evaluation of Products for Treatment. U.S. Department of Health and Human Services, Food and Drug Administration; Center for Drug Evaluation and Research (CDER) - Mars 2010; Muller-Lissner, S., Koch, G., Talley, N.J., et al., 2004, Subject's Global Assessment of Relief: An Appropriate Method to Assess the Impact of Treatment on IBS-Related Symptoms in Clinicat Trials, J Clin. Epidemiol, 56:310-316; CPMP/EWP/785/97, 2003, Points to Consider on the Evaluation of Medicinal Products for 483 the Treatment of Irritable Bowel Syndrom, London, disponible à : 484 http://www.emea.europa.eu/pdfs/human/ewp/078597en.pdf.); le changement dans l'indice de sensibilité viscérale (le pire - 15, le meilleur - 90) sur l'échelle VSI (Visceral Sensitivity Index (VSI): Labus, S. Jennifer, et al. The Central Rote of Gastrointestinal-Specific Anxiety in Irritable Bowel Syndrom: Further Validation of the Visceral Sensitivity Index. Psychomotor Medicine, 2007; 69:89-98.), et l'évaluation sur l'échelle HADS (Hospital Anxiety and Depression Scale (HADS): Snaith, R. Philip. The Hospital Anxiety and Depression Scale. Health and Quality of Life Outcomes 2003, 1:1-4,

35 http://www.hglo.com/content/1/1/29.). Chez les patients ayant un IBS avec prédominance de diarrhée, la fraction des patients ayant un changement dans le type de selles a été calculée sur l'échelle de Bristol des formes de selles (Bristol scale of stool forma Guidance for Industry Irritable Bowel Syndrom - Clinical Evaluation of Products for Treatment. U.S. Department of Health and Human Services, Food and Drug Administration; Center for Drug Evaluation and Research (CDER) - Mars 2010.) jusqu'à 5 (mais pas inférieure à 52 en moyenne pendant la semaine); chez les patients dans le sous-groupe IBS avec prédominance de constipation, le pourcentage de patients ayant une augmentation du nombre d'actes de défécation en moyenne d'une fois par semaine par rapport à l'état initial des patients. Dans le tableau clinique de la maladie dans les deux groupes, le syndrome de douleur abdominale était prédominant (moyenne de 7,56±0,26 points pour le groupe d'association et de 7,21±0,24 pour le groupe comparatif par VAS-IBS) (voir le tableau). Ce symptôme était rencontré chez 100 % des patients à l'examen initial. Parmi les manifestations dyspepsiques, étaient également fréquentes la diarrhée (chez 54 % des patients dans le groupe de préparation active et 57 % des patients dans le groupe comparatif) et la constipation (62 % et 57 %, respectivement), un estomac bombé et une flatulence (chez 46 % et 36%, respectivement), dont la manifestation était approximativement identique dans les deux groupes (voir le tableau). Une nausée et des vomissements ont été rencontrés plus rarement (30 % et 32 %, respectivement). Les valeurs moyennes de l'indice de sensibilité viscérale (VSI) et de l'indicateur d'échelle HADS étaient similaires pour les deux groupes (voir le tableau), ce qui indique l'effet significatif d'une perturbation du système nerveux central dans le développement de l'IBS. Les patients des deux groupes ont été autorisés à prendre le laxatif Guttalax® et le médicament antidiarrhéique Smecta® pour la constipation ou la diarrhée, respectivement. La préparation No-shpa® pour réduire la manifestation de douleurs spastiques dans l'estomac a été autorisée aussi. Ces préparations ont été prises par les patients selon les besoins. Tous les patients des groupes étudiés ont achevé le traitement dans les périodes établies par le protocole de l'étude, aucun patient n'a abandonné précocement.

Tableau 4. Dynamique des indicateurs de base selon la forme de thérapie Période TNF-a Ab+ S100 Ab + His Ab His Ab (n=24; M±SE) (n=28; M±SE) VAS-1BS: douleur/Inconfort, points Initiale 7,561-0,26 7,21±0,24 12 3,32±0,13* ** 5,64±0,24 ** semaines VAS-IBS: diarrhée, points Initiale 5,52±0,18 5,731-0,34 12 3,341-0,22* 4,86±0,22 semaines VAS-IBS: constipation, points Initiale 5,791-0,26 4,98±0,34 12 4,41±0,33 ** 4,25±0,26 semaines VAS-IBS: estomac bombé et flatulence, points Initiale 4,98±0,34 4,571-0,31 12 3,84±0,24 ** 4,04±0,31 semaines VAS-IBS: vomissements et nausée, points Initiale 3,94±0,31 3,56±0,24 12 2,87±0,12* 3,03±0,27 semaines Indice de sensibilité viscérale (VSI-IBS), points Initiale 22,3±1,6 25,4±1,8 12 68,7±2,4* ** 33,9±1,7 semaines Hospital Anxiety et Depression Scale (HADS), points Initiale 19,3±1,4 18.9±1.5 12 12,8±0,6* ** 14.4±1.3 semaines * les différences entre les groupes de TNF-a Ab+S100 Ab+His Ab et His Ab sont statistiquement significatives avec p<0,05. s ** la différence avec l'indicateur initial est statistiquement significative avec p<0,05.

37 L'analyse des données a montré que, pendant la thérapie de 12 semaines, l'expression de la manifestation clinique de base d'IBS, le syndrome de douleur abdominale, a été réduite chez les patients du groupe prenant l'association His Ab + S100 Ab + TNF Ab de plus de 50 % par rapport à l'état initial des patients (3,321-0,13 points). Cette réduction était significativement différente des résultats du traitement obtenus par l'utilisation de His Ab seul, qui favorisait aussi une diminution de la manifestation de douleur/inconfort, mais à un degré significativement inférieur (moins de 30 %). L'association testée a affecté favorablement d'autres troubles dyspepsiques chez les patients, incluant la diarrhée (réduction par rapport aux valeurs initiales de 5,52 ±0,18 points à 3,34±0,22 points à la fin de la thérapie), la constipation (5,79±0,26 et 4,41±0,33 points, respectivement), l'estomac bombé et la flatulence (4,981-0,34 et 3,84±0,24 points, respectivement). De plus, l'efficacité concernant les deux derniers symptômes était statistiquement significative par rapport à l'état initial des patients et l'efficacité de His Ab seul. Dans le sous-groupe de patients ayant un IBS avec prédominance de diarrhée (n = 14), la fraction des patients qui présentaient un changement dans le type de selles sur l'échelle de forme des selles de Bristol de jusqu'à 5 points ou moins était de 57 0/0 pour le groupe d'association ; dans le sous-groupe d'IBS avec prédominance de constipation (n = 18), le pourcentage de patients ayant une augmentation du nombre d'actes de défécation en moyennne d'une fois par semaine atteignait 94 % ; parmi les patients ayant une version mixte d'IBS (n = 20), les indicateurs analogues étaient 45 % et 75 %, respectivement. Parmi les patients du groupe comparatif, les indicateurs étudiés ne pouvaient pas être considérés comme significatifs.

L'efficacité du traitement avec la préparation d'association s'est manifestée dans l'effet positif sur l'hypersensibilité viscérale, qui a été réduite significativement sur les 12 semaines, l'indice VSI augmentant de 22,3±1,6 à 68,7±2,4 (contre 25,4±1,8 et 33,9±1,7, respectivement, dans le groupe comparatif). Les changements positifs observés avec la préparation d'association se sont manifestés aussi dans la diminution 38 des points totaux sur l'échelle HADS (de 19,3±1,4 à 12,8±0,6), qui a attesté la réduction de l'anxiété et de la dépression exprimées initialement de manière sub-clinique. L'évaluation de l'innocuité de la thérapie, conduite sur la base du relevé des événements indésirables dans la période de traitement et l'étude de suivi des s indicateurs de laboratoire, a montré la bonne tolérance des préparations. L'analyse de l'innocuité a inclus les données de tous les patients qui ont participé à l'étude (n = 52). Pendant les 12 semaines de traitement, aucun patient d'aucun groupe n'a manifesté un quelconque événement indésirable ayant un lien « possible » ou « évident » avec la prise du médicament. Les études au laboratoire, incluant des analyses sanguines 10 générales et biochimiques et une analyse d'urine clinique, n'a revelé aucun écart pathologique au cours de la thérapie. Ainsi, l'étude a montré l'efficacité et l'innocuité de l'association de doses ultra-faibles de TNF Ab + S100 Ab + His Ab dans le traitement de patients ayant un IBS. Il a été montré qu'une prise de l'association pendant 12 semaines favorisait une réduction 15 du syndrome de douleur abdominale et aussi une diminution significative de l'expression des manifestations dyspepsiques chez les patients ayant un IBS. L'effet du traitement a été confirmé par le haut pourcentage de patients qui avaient des indicateurs d'évacuation de l'intestin améliorés. Outre la dynamique positive des symptômes de base sur la partie du tractus gastro-intestinal, on a noté une 20 normalisation naturelle de l'état somatique et mental du patient, qui s'est exprimée par des changements positifs dans la sensibilité viscérale et la stabilisation des symptômes d'anxiété et de dépression. Les effets de la thérapie avec l'association de doses ultra-faibles de TNF Ab + S100 Ab + His Ab présentaient des différences significatives par rapport à l'état initial des patients et His Ab seul. 25

Claims (17)

1. REVENDICATIONS1. Composition pharmaceutique d'association comprenant a) une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100, b) une forme s activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'histamine, et c) une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre TNF-alpha.
2. 2. Composition pharmaceutique d'association selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre un support solide, où ladite forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100, ladite forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'histamine, et ladite forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre TNF-alpha imprègnent ledit support solide.
3. 3. Composition pharmaceutique d'association selon la revendication 2, caractérisée en ce qu'elle est sous forme d'un comprimé.
4. 4. Composition pharmaceutique d'association selon l'une quelconque des 15 revendications 1 à 3, caractérisée en ce que a) ladite forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100, b) ladite forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'histamine, et c) ladite forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre TNF-alpha sont chacune sous forme d'un mélange de dilutions homéopathiques C12, C30 et C200. 20
5. 5. Composition pharmaceutique d'association selon la revendication 4, caractérisée en ce que lesdits mélanges de dilutions homéopathiques C12, C30 et C200 imprègnent un support solide.
6. 6. Composition pharmaceutique d'association selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que a) ladite forme activée-potentialisée d'un 25 anticorps dirigé contre la protéine S-100, b) ladite forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'histamine, et c) ladite forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre TNF-alpha sont chacune indépendamment un anticorps monoclonal, polyclonal ou naturel.
7. 7. Composition pharmaceutique d'association selon la revendication 6, 30 caractérisée en ce que a) ladite forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre 40 la protéine S-100, b) ladite forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'histamine, et c) ladite forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre TNF-alpha sont chacune indépendamment un anticorps polyclonal.
8. 8. Composition pharmaceutique d'association selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre TNF-alpha est dirigée contre la molécule entière de TNF-alpha ayant la séquence SEQ ID NO. 1.
9. 9. Composition pharmaceutique d'association selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre TNF-alpha est dirigée contre un fragment de TNF-alpha ayant les séquences choisies dans le groupe consistant en les séquences SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, SEQ ID NO. 5, SEQ ID NO. 6, SEQ ID NO. 7, SEQ ID NO. 8, SEQ ID NO. 9, SEQ ID NO. 10, SEQ ID NO. 11 et SEQ ID NO. 12.
10. 10. Composition pharmaceutique d'association selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100 est un anticorps dirigé contre la protéine S-100 bovine.
11. 11. Composition pharmaceutique d'association selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100 est dirigée contre la protéine S-100 entière ayant la séquence SEQ ID NO 13 ou la séquence SEQ ID NO 16.
12. 12. Composition pharmaceutique d'association selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, caractérisée en ce que lesdites formes activées-potentialisées d'un anticorps sont préparées par dilutions centésimales successives couplées avec une agitation de chaque dilution.
13. 13. Composition pharmaceutique d'association selon la revendication 2, caractérisée en ce que ledit support solide est le lactose ou l'isomalt.
14. 14. Composition pharmaceutique destinée à être utilisée dans le traitement d'un patient souffrant d'une maladie ou affection d'étiologie fonctionnelle du tractus 30 gastro-intestinal, ladite composition ayant été obtenue en fournissant a) une forme41 activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'histamine, b) une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100 et c) une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre TNF-alpha, préparées chacune par des dilutions consécutives répétées et des agitations multiples de chaque solution obtenue s selon la technologie homéopathique, puis en combinant les solutions potentialisées par mélange de celles-ci, ou, à titre d'alternative, imprégnant une masse de support avec ladite solution combinée ou avec les solutions séparément.
15. 15. Composition pharmaceutique selon la revendication 14, caractérisée en ce que ladite maladie ou affection d'étiologie fonctionnelle du tractus gastro-intestinal 10 est de nature psychosomatique, une distortion de la fonction motrice d'évacuation du tractus gastro-intestinal ou le syndrome du côlon irritable.
16. 16. Composition pharmaceutique selon la revendication 15, caractérisée en ce que ledit syndrome du côlon irritable est caractérisé principalement par une douleur abdominale et une flatulence, une diarrhée, une constipation. 15
17. 17. Composition pharmaceutique selon la revendication 14, caractérisée en ce que chacune desdites formes activées-potentialisées d'anticorps est un mélange de dilutions homéopathiques C12, C30 et C200.