FR2962912A1

FR2962912A1 - Composition pharmaceutique d'association destinee a etre utilisee dans un procede pour traiter la maladie d'alzheimer

Info

Publication number: FR2962912A1
Application number: FR1156479A
Authority: FR
Inventors: Oleg Iliich Epshtein
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2010-07-21
Filing date: 2011-07-15
Publication date: 2012-01-27
Also published as: AU2011281252A1; WO2012010978A3; CN103119060A; WO2012010978A2; NZ606969A; DE112011102409T5; US20130058982A1; GB2496801B; UA107836C2; EA029399B1; ITTO20110633A1; CA2805943A1; JP2013535445A; MX2013000808A; GB2496801A; EA201300130A1; EP2596021A2; GB201302929D0

Abstract

La présente invention concerne une composition pharmaceutique d'association destinée à être utilisée dans un procédé pour traiter la maladie d'Alzheimer, ladite composition comprenant une forme activée-potentialisée d'anticorps dirigés contre la protéine spécifique du cerveau S-100 et une forme activée-potentialisée d'anticorps dirigés contre la NO synthase endothéliale.

Description

Composition pharmaceutique d'association destinée à être utilisée dans un procédé pour traiter la maladie d'Alzheimer DOMAINE La présente invention concerne le domaine de la médecine et peut être utilisée pour le traitement de la maladie d'Alzheimer. La maladie d'Alzheimer (AD) est une maladie neurodégénérative et est caractérisée par une dégradation des fonctions cognitives, une perte de la mémoire, une confusion mentale, une détérioration du contrôle émotionnel et une démence (déclin progressif de la mémoire avec inaptitude à se souvenir d'informations qui étaient connues dans le passé ou inaptitude à apprendre de nouvelles informations). La principale cause du développement de l'AD est considérée comme étant l'accumulation d'un amyloïde bêta conduisant à la formation de plaques d'amyloïde bêta et d'amas neurofibrillaires dans les tissus d'un cerveau. L'AD s'accompagne aussi d'une déficience du système cholinergique. Une dégradation de l'apprentissage et de la mémoire peut être induite chimiquement dans des animaux d'expérience par la scopolamine, un antagoniste cholinergique dont on sait qu'il interfère avec la transmission à l'acétylcholine. Le modèle animal expérimental d'amnésie induite par la scopolamine a été utilisé largement pour sélectionner des composés ayant une valeur thérapeutique potentielle pour la démence.

Des médicaments neurotropes basés sur un antisérum dirigé contre la protéine spécifique du cerveau S-100 sont connus dans la technique (RU 2156621 Cl, A61K39/395, 27.09.2000). L'effet thérapeutique d'une forme extrêmement diluée (ou forme ultra-basse) d'anticorps potentialisés par la technologie homéopathique (forme activée potentialisée) a été découvert par l'inventeur de la présente demande de brevet, le Dr. Oleg I. Epshtein. Le brevet US n°. 7 582 294 décrit un médicament pour traiter l'hyperplasie prostatique bénigne ou la prostatite par administration d'une forme activée par voie homéopathique d'anticorps dirigés contre l'antigène prostatique spécifique (PSA). Le brevet US n°. 7 700 096 décrit une forme potentialisée par voie homéopathique d'anticorps dirigés contre la NO-synthase endothéliale.

La protéine S-100 est une protéine liant le calcium acide cytoplasmique trouvée principalement dans la matière grise du cerveau, principalement dans la glie et les cellules de Schwann. La protéine existe sous plusieurs isoformes homo- ou hétérodimériques consistant en deux sous-unités, alpha et bêta, distinctes du point de vue immunologique. L'utilisation de la protéine S-100 a été suggérée comme aide dans le diagnostic et l'évaluation des lésions cérébrales et des détériorations neurologiques dues à une lésion cérébrale, comme dans un accident vasculaire cérébral. Yardan et al., Usefulness of S100B Protein in Neurological Disorders, J Pak Med Assoc Vol. 61, No. 3, Mars 2011. On a montré que des doses ultra-basses d'anticorps dirigés contre la protéine S-100 ont une activité anxiolytique, anti-asthénique, anti-agressive, de protection contre le stress, antihypoxique, anti-ischémique, neuroprotectrice et nootrope. Voir Castagne V. et al., Antibodies to S100 proteins have anxiolytic-like activity at ultra-low doses in the adult rat, J Pharm Pharmacol. 2008, 60(3):309-16; Epstein O. l., Antibodies to calcium-binding S100B protein block the conditioning of long-terni sensitization in the terrestrial snail, Pharmacol Biochem Behav., 2009, 94(1):37-42; Voronina T.A. et ai., Chapter 8. Anticorps to S-100 protein in anxiety-depressive disorders in experimental and clinicat conditions. in "Animal models in biological psychiatry', Ed.

Kalueff A.V. N-Y, "Nova Science Publishers, Inc.", 2006, pp. 137-152. L'oxyde nitrique (NO) est une molécule gazeuse dont il a été montré qu'elle agit dans la signalisation de différents processus biologiques. NO dérivé de l'endothélium est une molécule clé dans la régulation du tonus vasculaire et son association avec la maladie vasculaire a été reconnue depuis longtemps. NO inhibe de nombreux processus dont on sait qu'ils sont impliqués dans la formation de la plaque athéroscléreuse, incluant l'adhésion des monocytes, l'agrégation plaquettaire et la prolifération des cellules des muscles lisses vasculaires. Un autre rôle important de NO endothélial est la protection de la paroi vasculaire contre le stress oxydatif induit par ses propres produits métaboliques et par les produits d'oxydation des lipides et des lipoprotéines. Un dysfonctionnement endothélial survient à des stades très précoces de l'athérosclérose. Il est donc possible qu'une déficience dans la disponibilité de NO local puisse être une voie commune finale qui accélère l'athérogenèse chez les humains. Outre son rôle dans l'endothélium vasculaire, on a montré que la disponibilité de NO module le métabolisme des lipoprotéines. Une corrélation négative a été décrite entre les concentrations plasmatiques de produits métaboliques de NO et les niveaux de cholestérol plasmatique total et dans les lipoprotéines basse densité [LDL], tandis que les lipoprotéines haute densité [HDL] améliorent la fonction vasculaire chez les sujets hypercholestérolémiques. La perte de NO a un effet considérable sur le développement de la maladie. Le diabète sucré est associé avec des taux accrus de morbidité et de mortalité causés principalement par le développement accéléré de la maladie athéroscléreuse. De plus, des articles montrent que les diabétiques ont des fonctions pulmonaires dégradées. II a été proposé que la résistance à l'insuline conduit à une inflammation des voies respiratoires. Habib et al., Nitric Oxide Measurement From Blood To Lungs, ls There A Link? Pak J Physiol 2007; 3(1). L'oxyde nitrique est synthétisé par l'endothélium à partir de la L-arginine par l'oxyde nitrique synthase (NO synthase). La NO synthase existe sous différentes isoformes, incluant une forme constitutive (cNOS) et une forme inductible (iNOS). La forme constitutive est présente dans les cellules endothéliales normales, les neurones et certains autres tissus.

Il existe un besoin continu de nouveaux produits médicamenteux ayant l'efficacité thérapeutique souhaitée pour le traitement des maladies neurodégénératives comme la maladie d'Alzheimer.

RESUME La présente invention fournit un remède plus efficace pour le traitement de la maladie 15 d'Alzheimer. La présente invention fournit une composition pharmaceutique destinée à être utilisée dans un procédé pour traiter la maladie d'Alzheimer, comprenant une forme activée-potentialisée d'anticorps dirigés contre la protéine spécifique du cerveau S-100 et une forme activée-potentialisée d'anticorps dirigés contre la NO synthase endothéliale comme composant 20 renforçant supplémentaire. Dans une variante, la présente invention fournit une composition pharmaceutique d'association comprenant une forme activée-potentialisée d'anticorps dirigés contre la protéine spécifique du cerveau S-100 et une forme activée-potentialisée d'anticorps dirigés contre la NO-synthase endothéliale, où l'anticorps est dirigé contre la protéine S-100 entière ou des fragments de 25 celle-ci. Dans une variante, l'invention fournit une composition pharmaceutique d'association comprenant une forme activée-potentialisée d'anticorps dirigés contre la protéine spécifique du cerveau S-100 et une forme activée-potentialisée d'anticorps dirigés contre la NO-synthase endothéliale, où l'anticorps est dirigé contre la NO-synthase endothéliale entière ou des fragments 30 de celle-ci.

Dans une variante, la composition pharmaceutique d'association de cet aspect de l'invention inclut une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100 qui est sous forme d'un mélange de dilutions homéopathiques (C12, C30, et C50) ou (C12, C30 et C200) imprégnant un support solide. La forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la NO- synthase endothéliale est sous forme de mélange de dilutions homéopathiques (C12, C30, et C50) ou (C12, C30 et C200) peut ensuite imprégner le support solide. Dans une variante, la composition pharmaceutique d'association de cet aspect de l'invention inclut la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la NO-synthase endothéliale qui est sous forme d'un mélange de dilutions homéopathiques (C12, C30, et C50) ou (C12, C30 et C200) imprégnant un support solide. La forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100 est sous forme de mélange de dilutions homéopathiques (C12, C30, et C50) ou (C12, C30 et C200) peut ensuite imprégner le support solide. De préférence, la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100 est un anticorps monoclonal, polyclonal ou naturel, de préférence encore, un anticorps polyclonal.

Dans une variante de cet aspect de l'invention, la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100 est préparée par des dilutions centésimales successives couplées avec une agitation de chaque dilution. Une agitation verticale est envisagée spécifiquement. De préférence, la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la NO synthase est un anticorps monoclonal, polyclonal ou naturel, de préférence encore, un anticorps polyclonal. Dans une variante de cet aspect de l'invention, la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la NO synthase est préparée par dilutions centésimales successives couplées avec une agitation de chaque dilution. Une agitation verticale est envisagée spécifiquement. Ladite composition pharmaceutique d'association peut être fournie pour l'administration sous forme d'une à deux formes galéniques unitaires de la forme activée- potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100 et d'une à deux formes galéniques unitaires de la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la NO synthase endothéliale, chacune des formes galéniques étant administrée d'une fois par jour à six fois par jour. De préférence, la une à deux formes galéniques unitaires de chacune des formes activées-potentialisées d'anticorps est administrée deux fois par jour.30 DESCRIPTION DETAILLEE L'invention est définie en référence aux revendications annexées. Concernant les revendications, le glossaire qui suit fournit les définitions pertinentes. Le terme "anticorps" tel qu'il est utilisé ici est destiné à désigner une immunoglobuline qui se lie spécifiquement à, et est donc définie comme étant complémentaire de, une organisation spatiale et polaire particulière d'une autre molécule. Les anticorps tels que cités dans les revendications peuvent inclure une immunoglobuline complète ou un fragment de celle-ci, peuvent être naturels, polyclonaux ou monoclonaux, et peuvent inclure différentes classes et isotypes, comme IgA, IgD, IgE, IgG1, IgG2a, lgG2b et IgG3, IgM, etc. Leurs fragments peuvent inclure Fab, Fv et F(ab')2, Fab', et analogues. "Anticorps" au singulier inclut « anticorps » au pluriel. Le terme "forme activée-potentialisée" ou "forme potentialisée" respectivement, concernant les anticorps cités ici est utilisé pour désigner un produit de potentialisation homéopathique d'une quelconque solution initiale d'anticorps. "Potentialisation homéopathique" désigne l'utilisation de procédés d'homéopathie pour conférer une activité homéopathique à une solution initiale de substance pertinente. Bien qu'elle ne soit pas ainsi limitée, la « potentialisation homéopathique » peut impliquer, par exemple, des dilutions consécutives répétées combinées avec un traitement externe, en particulier une agitation (mécanique) verticale. En d'autres termes, une solution initiale d'anticorps est soumise à des dilutions répétées consécutives et de multiples agitations verticales de chaque solution obtenue conformément à la technologie homéopathique. La concentration préférée de la solution initiale d'anticorps dans le solvant, de préférence l'eau ou un mélange eau-alcool éthylique, va d'environ 0,5 à environ 5,0 mg/ml. Le processus préféré pour préparer chaque composant, c'est-à-dire la solution d'anticorps, est l'utilisation du mélange de trois dilutions aqueuses ou aqueuses-alcooliques de la solution de matrice primaire (teinture mère) d'anticorps diluée 10012, 10030 et 100200 fois, respectivement, qui équivaut à des dilutions homéopathiques centésimales (C12, C30, et C200) ou l'utilisation du mélange de trois dilutions aqueuses ou aqueuses-alcooliques de la solution de matrice primaire d'anticorps diluée 10012, 10030 et 10050 fois, respectivement, qui équivaut à des dilutions homéopathiques centésimales (C12, C30 et C50). Des exemples de potentialisation homéopathique sont décrits dans les brevets U.S. n°. 7 572 441 et 7 582 294. Tandis que le terme "forme activée-potentialisée" est utilisé dans les revendications, le terme "doses ultra-basses" est utilisé dans les exemples. Le terme "doses ultra-basses" est devenu un terme technique dans le domaine technique créé par l'étude et l'utilisation d'une forme de substance diluée et potentialisée par voie homéopathique. Le terme « dose ultra-basse » ou « doses ultra-basses » est considéré comme soutenant totalement et principalement synonyme du terme forme « activée-potentialisée » utilisé dans les revendications.

En d'autres termes, un anticorps est dans la forme « activée-potentialisée » ou potentialisée » quand trois facteurs sont présents. Tout d'abord, la forme « activée-potentialisée » de l'anticorps est un produit d'un procédé de préparation bien accepté dans la technique homéopathique. Deuxièmement, la forme « activée-potentialisée » de l'anticorps doit avoir une activité biologique déterminée par des procédés bien acceptés en pharmacologie moderne. Et troisièmement, l'activité biologique présentée par la forme « activée potentialiséee » de l'anticorps ne peut pas être expliquée par la présence de la forme moléculaire de l'anticorps dans le produit final du processus homéopathique. Par exemple, la forme activée potentialisée d'anticorps peut être préparée en soumettant un anticorps isolé initial sous une forme moléculaire à de multiples dilutions consécutives couplées avec un impact externe, comme une agitation mécanique. Le traitement externe au cours de la réduction de la concentration peut aussi être accompli, par exemple, par exposition à des facteurs ultrasoniques, électromagnétiques, ou d'autres facteurs physiques. V. Schwabe "Homeopathic medicines", M., 1967, brevets U.S. No. 7 229 648 et 4 311 897, décrit de tels processus qui sont des procédés de potentialisation homéopathique bien acceptés dans la technique homéopathique. Ce processus donne naissance à une diminution uniforme de la concentration moléculaire de la forme moléculaire initiale de l'anticorps. Ce processus est répété jusqu'à ce que l'activité homéopathique souhaitée soit obtenue. Pour l'anticorps individuel, l'activité homéopathique requise peut être déterminée en soumettant les dilutions intermédiaires à des tests biologiques dans le modèle pharmacologique souhaité. Bien qu'elle ne soit pas ainsi limitée, la « potentialisation homéopathique » peut comprendre, par exemple, des dilutions consécutives répétées combinées avec un traitement externe, en particulier une agitation (mécanique) verticale. En d'autres termes, une solution d'anticorps initiale est soumise à des dilutions consécutives répétées et de multiples agitations verticales de chaque solution obtenue selon la technologie homéopathique. La concentration préférée de la solution initiale d'anticorps dans le solvant, de préférence, l'eau ou un mélange eau-alcool éthylique, va d'environ 0,5 à environ 5,0 mgfml. Le processus préféré pour préparer chaque composant, c'est-à-dire la solution d'anticorps, est l'utilisation du mélange de trois dilutions aqueuses ou aqueuses-alcooliques de la solution de matrice primaire (teinture mère) d'anticorps diluée 10012, 10030 et 100200 fois, respectivement, qui équivaut à des dilutions homéopathiques centésimales C12, C30 et C200 ou le mélange de trois dilutions aqueuses ou aqueuses-alcooliques de la solution de matrice primaire (teinture mère) diluée 10012, 10030 et 10050 fois, respectivement, qui équivaut à des dilutions homéopathiques centésimales C12, C30 et C50. Des exemples de la façon d'obtenir l'activité souhaitée sont donnés aussi, par exemple, dans les brevets U.S. n°. 7 229 648 et 4 311 897. Le processus applicable à la forme « activée-potentialisée » des anticorps décrite ici est décrit de manière plus détaillée ci-dessous. II y a eu des controverses considérables concernant le traitement homéopathique de sujets humains. Tandis que la présente invention est basée sur des processus homéopathiques acceptés pour obtenir la forme « activée-potentialisée » d'anticorps, elle n'est pas basée seulement sur l'homéopathie chez des sujets humains pour mettre en évidence une activité. II a été découvert de manière surprenante par l'inventeur de la présente demande et amplement démontré dans les modèles pharmacologiques acceptés que le solvant obtenu finalement à partir de dilutions multiples consécutives d'une forme moléculaire initiale d'un anticorps a une activité définitive non liée à la présence des traces de la forme moléculaire de l'anticorps dans la dilution cible. La forme « activée-potentialisée » de l'anticorps fournie ici est testée pour l'activité biologique dans des modèles pharmacologiques d'activité bien acceptés, dans des expériences in vitro appropriées, ou in vivo dans des modèles animaux appropriés. Les expériences présentées ci-dessous fournissent des indices d'activité biologique dans de tels modèles. Des études cliniques sur des humains fournissent aussi des indices que l'activité observée dans le modèle animal est bien traduite en thérapie humaine. Des études sur des humains ont fourni aussi des indices de disponibilité des formes « activées potentialisées » décrites ici pour traiter des maladies humaines ou troubles humains spécifiques bien acceptées comme états pathologiques dans la science médicale. Egalement, la forme « activée-potentialisée » d'anticorps revendiquée englobe seulement des solutions ou des préparations solides dont l'activité biologique ne peut pas être expliquée par la présence de la forme moléculaire de l'anticorps restant de la solution de départ initiale. En d'autres termes, tandis qu'il est envisagé que la forme « activée-potentialisée » de l'anticorps peut contenir des traces de la forme moléculaire initiale de l'anticorps, l'homme du métier ne pourrait pas attribuer l'activité biologique observée dans les modèles pharmacologiques acceptés à la forme moléculaire de l'anticorps restante avec un quelconque degré de plausibilité du fait des concentrations extrêmement faibles de la forme moléculaire de l'anticorps restant après les dilutions consécutives. Tandis que l'invention n'est pas limitée par une quelconque théorie spécifique, l'activité biologique de la forme « activée-potentialisée » des anticorps de la présente invention n'est pas attribuable à la forme moléculaire initiale de l'anticorps. Est préférée la forme « activée-potentialisée » d'anticorps sous forme liquide ou solide dans laquelle la concentration de la forme moléculaire de l'anticorps est inférieure à la limite de détection des techniques analytiques acceptées, comme l'électrophorèse capillaire et la chromatographie liquide à hautes performances. Est particulièrement préférée la forme « activée-potentialisée » d'anticorps sous forme liquide ou solide dans laquelle ta concentration de la forme moléculaire de l'anticorps est inférieure au nombre d'Avogadro. Dans la pharmacologie des formes moléculaires de substances thérapeutiques, il est de pratique courante de créer une courbe dose-réponse dans laquelle le niveau de réponse pharmacologique est représenté graphiquement en fonction de la concentration du médicament actif administré au sujet ou testé in vitro. Le niveau minimal du médicament qui produit une quelconque réponse détectable est connu comme étant une dose seuil. Il est particulièrement envisagé et préféré que la forme « activée-potentialisée » des anticorps contienne un anticorps moléculaire, s'il y en a, à une concentration inférieure à la dose seuil pour la forme moléculaire de l'anticorps dans le modèle biologique donné.

Dans un aspect, la présente invention fournit une composition pharmaceutique d'association comprenant a) une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la NO synthase endothéliale et b) une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine spécifique du cerveau S-100 destinée à être utilisée dans un procédé pour traiter la maladie d'Alzheimer. Ainsi que cela a été présenté ci-dessus, chacun des composants individuels de l'association est connu généralement pour ses utilisations médicales individuelles. Cependant, les inventeurs de la présente demande ont découvert avec surprise que l'administration de l'association est remarquablement utile pour le traitement de la maladie d'Alzheimer. Le procédé de traitement de la maladie d'Alzheimer comprend une insertion dans un organisme d'une forme activée-potentialisée d'anticorps dirigés contre la protéine spécifique du cerveau S-100 en même temps qu'une forme activée-potentialisée d'anticorps dirigés contre la NO synthase endothéliale à des doses ultra-basses d'anticorps purifiés par affinité. De préférence, dans le but du traitement, la composition pharmaceutique d'association est administrée d'une fois par jour à quatre fois par jour, chaque administration incluant une ou deux formes galéniques unitaires d'association.

La composition pharmaceutique de la présente demande dans le but du traitement de la maladie d'Alzheimer contient les composants actifs en volume principalement dans le rapport 1 : 1. Dans le but du traitement de la maladie d'Alzheimer, les composants de la composition pharmaceutique peuvent être administrés séparément. Cependant, l'administration simultanée des composants associés sous forme de solutions et/ou d'une forme galénique solide (comprimé), qui contient une forme activée-potentialisée d'anticorps dirigés contre la protéine spécifique du cerveau S-100 et, ainsi, une forme activée-potentialisée d'anticorps dirigés contre la NO synthase endothéliale est préférée.

De plus, pendant le traitement de la maladie d'Alzheimer, une application séparée et simultanée (prise dans l'organisme) de la composition pharmaceutique déclarée sous forme de deux médicaments préparés séparément l'un et l'autre sous forme de solutions et de formes galéniques solides (comprimés) contenant chacun une forme activée-potentialisée d'anticorps dirigés contre la NO-synthase endothéliale ou contre la protéine S-100 est possible.

Le produit médical est préparé principalement comme suit. La composition pharmaceutique d'association selon cet aspect de l'invention peut être sous forme liquide ou sous forme solide. Chacune des formes activées potentialisées des anticorps incluses dans la composition pharmaceutique est préparée à partir d'une forme moléculaire initiale de l'anticorps via un processus accepté dans la technique homéopathique. Les anticorps de départ peuvent être des anticorps monoclonaux ou polyclonaux préparés selon des processus connus, par exemple comme décrit dans Immunotechniques, G. Frimel, M., "Meditsyna", 1987, p. 9-33; "Hum. Antibodies. Monoclonal and recombinant antibodies, 30 years after" de Laffly E., Sodoyer R. - 2005 - Vol. 14. - N 1-2. P.33-55. Des anticorps monoclonaux peuvent être obtenus, par exemple, par la technologie des hybridomes. Le stade initial du processus comprend une immunisation basée sur les principes déjà développés au cours de la préparation d'antisérums polyclonaux. Les stades supplémentaires de l'opération comprennent la production de cellules hybrides générant des clones d'anticorps de spécificité identique. Leur isolement séparé est accompli au moyen des mêmes procédés que dans le cas de la préparation d'antisérums polyclonaux.

Des anticorps polyclonaux peuvent être obtenus via l'immunisation active d'animaux. Dans ce but, par exemple, des animaux appropriés (par exemple des lapins) reçoivent une série d'injections de l'antigène approprié : protéine spécifique du cerveau S-100 et NO synthase endothéliale. Le système immunitaire des animaux génère des anticorps correspondants, qui sont recueillis auprès des animaux d'une manière connue. Ce processus permet la préparation d'un sérum riche en anticorps monospécifiques.

Si on le souhaite, le sérum contenant des anticorps peut être purifié, par exemple par chromatographie d'affinité, fractionnement par précipitation de sels, ou chromatographie d'échange d'ions. Le sérum enrichi en anticorps purifié résultant peut être utilisé comme produit de départ pour la préparation de la forme activée-potentialisée des anticorps. La concentration préférée de la solution initiale d'anticorps résultante dans le solvant, de préférence l'eau ou un mélange eau-alcool éthylique, va d'environ 0,5 à environ 5,0 mg/ml. Le processus préféré pour préparer chaque composant est l'utilisation du mélange de trois dilutions aqueuses-alcooliques de la solution de matrice primaire d'anticorps diluée 10012, 10030 et 100200 fois, respectivement, qui équivaut à des dilutions homéopathiques centésimales C12, C30, et C200. Pour préparer une forme galénique solide, un support solide est traité avec la dilution souhaitée obtenue via le processus homéopathique. Pour obtenir une forme galénique unitaire solide de l'association de l'invention, la masse du support est imprégnée de chacune des dilutions. Les deux ordres d'imprégnation sont appropriés pour préparer la forme galénique d'association souhaitée. Dans un mode de réalisation préféré, le produit de départ pour la préparation de la forme activée potentialisée qui comprend l'association de l'invention est des anticorps polyclonaux dirigés contre la protéine spécifique du cerveau S-100 et contre la NO synthase endothéliale une solution (matrice) initiale d'une concentration de 0,5 à 5,0 mg/ml est utilisée pour la préparation subséquente de formes activées-potentialisées. Pour préparer la composition pharmaceutique, de préférence des anticorps polyclonaux 25 dirigés contre la protéine spécifique du cerveau S-100 et la NO synthase endothéliale sont utilisés. Des anticorps polyclonaux dirigés contre la NO synthase endothéliale sont obtenus en utilisant un adjuvant comme immunogène (antigène) pour l'immunisation de lapins et la molécule entière de NO synthase endothéliale bovine de séquence suivante : 30 SEQ.ID. NO. 1

Met Gly Asn Leu Lys Ser Val Gly Gln Glu Pro Gly Pro Pro Cys 1 5 10 15 Gly Leu Gly Leu Gly Leu Gly Leu Gly Leu Cys Gly Lys Gln Gly 16 20 25 30 Pro Ala Ser Pro Ala Pro Glu Pro Ser Arg Ala Pro Ala Pro Ala 31 35 40 45 Thr Pro His Ala Pro Asp His Ser Pro Ala Pro Asn Ser Pro Thr 46 50 55 60 Leu Thr Arg Pro Pro Glu Gly Pro Lys Phe Pro Arg Val Lys Asn 61 65 70 75 Trp Glu Leu GLys er Ile Thr Tyr Asp Thr Leu Cys Ala Gln Ser 76 80 85 90 Gin Gin Asp Gly Pro Cys Thr Pro Arg Cys Cys Leu GLys er Leu 91 95 100 105 Val Leu Pro Arg Lys Leu Gln Thr Arg Pro Ser Pro Gly Pro Pro 106 110 115 120 Pro Ala Glu Gin Leu Leu Ser Gin Ala Arg Asp Phe Ile Asn Gln 121 125 130 135 Tyr Tyr Ser Ser Ile Lys Arg Ser GLys er Gln Ala His Glu Glu 136 140 145 150 Arg Leu Gln Glu Val Glu Ala Glu Val Ala Ser Thr Gly Thr Tyr 151 155 160 165 His Leu Arg Glu Ser Glu Leu Val Phe Gly Ala Lys Gln Ala Trp 166 170 175 180 Arg Asn Ala Pro Arg Cys Val Gly Arg Ile Gin Trp Gly Lys Leu 181 185 190 195 Gln Val Phe Asp Ala Arg Asp Cys Ser Ser Ala Gln Glu Met Phe 196 200 205 210 Thr Tyr Ile Cys Asn His Ile Lys Tyr Ala Thr Asn Arg Gly Asn 211 215 220 225 Leu Arg Ser Ala Ile Thr Val Phe Pro Gln Arg Ala Pro Gly Arg 226 230 235 240 Gly Asp Phe Arg Ile Trp Asn Ser Gln Leu Val Arg Tyr Ala Gly 241 245 250 255 Tyr Arg Gln Gln Asp GLys er Val Arg Gly Asp Pro Ala Asn Val 256 260 265 270 Glu Ile Thr Glu Leu Cys Ile Gln His Gly Trp Thr Pro Gly Asn 271 275 280 285 Gly Arg Phe Asp Val Leu Pro Leu Leu Leu Gln Ala Pro Asp Glu 286 290 295 300 Ala Pro Glu Leu Phe Val Leu Pro Pro Glu Leu Val Leu Glu Val 301 305 310 315 Pro Leu Glu His Pro Thr Leu Glu Trp Phe Ala Ala Leu Gly Leu 316 320 325 330 Arg Trp Tyr Ala Leu Pro Ala Val Ser Asn Met Leu Leu Glu Ile 331 335 340 345 Gly Gly Leu Glu Phe Ser Ala Ala Pro Phe Ser Gly Trp Tyr Met 346 350 355 360 Ser Thr Glu Ile Gly Thr Arg Asn Leu Cys Asp Pro His Arg Tyr 361 365 370 375 Asn Ile Leu Glu Asp Val Ala Val Cys Met Asp Leu Asp Thr Arg 376 380 385 390 Thr Thr Ser Ser Leu Trp Lys Asp Lys Ala Ala Val Glu Ile Asn 391 395 400 405 Leu Ala Val Leu His Ser Phe Gln Leu Ala Lys Val Thr Ile Val 406 410 415 420 Asp His His Ala Ala Thr Val Ser Phe Met Lys His Leu Asp Asn 421 425 430 435 Glu Gln Lys Ala Arg Gly Gly Cys Pro Ala Asp Trp Ala Trp Ile 436 440 445 450 Val Pro Pro Ile Ser GLys er Leu Thr Pro Val Phe His Gln Glu 451 455 460 465 Met Val Asn Tyr Ile Leu Ser Pro Ala Phe Arg Tyr Gln Pro Asp 466 470 475 480 Pro Trp Lys GLy Ser Ala Thr Lys Gly Ala Gly Ile Thr Arg Lys 481 485 490 495 Lys Thr Phe Lys Glu Val Ala Asn Ala Val Lys Ile Ser Ala Ser 496 500 505 510 Leu Met Gly Thr Leu Met Ala Lys Arg Val Lys Ala Thr Ile Leu 511 515 510 525 Tyr Ala Ser Glu Thr Gly Arg Ala Gin Ser Tyr Ala Gln Gln Leu 526 530 535 540 Gly Arg Leu Phe Arg Lys Ala Phe Asp Pro Arg Val Leu Cys Met 541 545 550 555 Asp Glu Tyr Asp Val Val Ser Leu Glu His Glu Ala Leu Val Leu 556 560 565 570 Val Val Thr Ser Thr Phe Gly Asn Gly Asp Pro Pro Glu Asn Gly 571 575 580 585 Glu Ser Phe Ala Ala Ala Leu Met Glu Met Ser Gly Pro Tyr Asn 586 590 595 600 Ser Ser Pro Arg Pro Glu Gln His Lys Ser Tyr Lys Ile Arg Phe 601 605 610 615 Asn Ser Val Ser Cys Ser Asp Pro Leu Val Ser Ser Trp Arg Arg 616 620 625 630 Lys Arg Lys Glu Ser Ser Asn Thr Asp Ser Ala Gly Ala Leu Gly 631 635 640 645 Thr Leu Arg Phe Cys Val Phe Gly Leu GLy Ser Arg Ala Tyr Pro 646 650 655 660 His Phe Cys Ala Phe Ala Arg Ala Val Asp Thr Arg Leu Glu Glu 661 665 670 675 Leu Gly Gly Glu Arg Leu Leu Gln Leu Gly Gln Gly Asp Glu Leu 676 680 685 690 Cys Gly Gln Glu Glu Ala Phe Arg Gly Trp Ala Lys Ala Ala Phe 691 695 700 705 Gln Ala Ser Cys Glu Thr Phe Cys Val Gly Glu Glu Ala Lys Ala 706 710 715 720 Ala Ala Gln Asp Ile Phe Ser Pro Lys Arg Ser Trp Lys Arg Gln 721 725 730 735 Arg Tyr Arg Leu Ser Thr Gln Ala Glu Gly Leu Gln Leu Leu Pro 736 740 745 750 Gly Leu Ile His Val His Arg Arg Lys Met Phe Gln Ala Thr Val 751 755 760 765 Leu Ser Val Glu Asn Leu Gln Ser Ser Lys Ser Thr Arg Ala Thr 766 770 775 780 Ile Leu Val Arg Leu Asp Thr Ala Gly Gln Glu Gly Leu Gln Tyr 781 785 790 795 Gln Pro Gly Asp His Ile Gly Ile Cys Pro Pro Asn Arg Pro Gly 796 800 805 810 Leu Val Glu Ala Leu Leu Ser Arg Val Glu Asp Pro Pro Pro Pro 811 815 820 825 Thr Glu Ser Val Ala Val Glu Gln Leu Glu Lys GLys er Pro Gly 826 830 835 840 Gly Pro Pro Pro Ser Trp Val Arg Asp Pro Arg Leu Pro Pro Cys 841 845 850 855 Thr Leu Arg Gln Ala Leu Thr Phe Phe Leu Asp Ile Thr Ser Pro 856 860 865 870 Pro Ser Pro Arg Leu Leu Arg Leu Leu Ser Thr Leu Ala Glu Glu 871 875 880 885 Pro Ser Glu Gln Gln Glu Leu Glu Thr Leu Ser Gln Asp Pro Arg 886 890 895 900 Arg Tyr Glu Glu Trp Lys Trp Phe Arg Cys Pro Thr Leu Leu Glu 901 905 910 915 Val Leu Glu Gln Phe Pro Ser Val Ala Leu Pro Ala Pro Leu Leu 916 920 925 930 Leu Thr Gln Leu Pro Leu Leu Gln Pro Arg Tyr Tyr Ser Val Ser 931 935 940 945 Ser Ala Pro Asn Ala His Pro Gly Glu Val His Leu Thr Val Ala 946 950 955 960 Val Leu Ala Tyr Arg Thr Gln Asp Gly Leu Gly Pro Leu His Tyr 961 965 970 975 Gly Val Cys Ser Thr Trp Leu Ser Gln Leu Lys Thr Gly Asp Pro 976 980 985 990 Val Pro Cys Phe Ile Arg Gly Ala Pro Ser Phe Arg Leu Pro Pro 991 995 1000 1005 Asp Pro Tyr Val Pro Cys Ile Leu Val Gly Pro Gly Thr Gly Ile 1006 1010 1015 1020 Ala Pro Phe Arg Gly Phe Trp Gln Glu Arg Leu His Asp Ile Glu 1021 1025 1030 1035 Ser Lys Gly Leu Gln Pro Ala Pro Met Thr Leu Val Phe Gly Cys 1036 1140 1145 1050 Arg Cys Ser Gln Leu Asp His Leu Tyr Arg Asp Glu Val Gln Asp 1051 1155 1160 1065 Ala Gln Glu Arg Gly Val Phe Gly Arg Val Leu Thr Ala Phe Ser 1066 1170 1175 1080 Arg Glu Pro Asp Ser Pro Lys Thr Tyr Val Gln Asp Ile Leu Arg 1081 1185 1190 1095 Thr Glu Leu Ala Ala Glu Val His Arg Val Leu Cys Leu Glu Arg 1096 1100 1105 1110 Gly His Met Phe Val Cys Gly Asp Val Thr Met Ala Thr Ser Val 1111 1115 1120 1125 Leu Gln Thr Val Gln Arg Ile Leu Ala Thr Glu Gly Asp Met Glu 1126 1130 1135 1140 Leu Asp Glu Ala Gly Asp Val Ile Gly Val Leu Arg Asp Gln Gln 1141 1145 1150 1155 Arg Tyr His Glu Asp Ile Phe Gly Leu Thr Leu Arg Thr Gln Glu 1156 1160 1165 1170 Val Thr Ser Arg Ile Arg Thr Gln Ser Phe Ser Leu Gln Glu Arg 1171 1175 1180 1185 His Leu Arg Gly Ala Val Pro Trp Ala Phe Asp Pro Pro Gly Pro 1186 1190 1195 1200 Asp Thr Pro Gly Pro 1201 1205 Des anticorps polyclonaux dirigés contre la NO synthase endothéliale peuvent être obtenus en utilisant la molécule entière de NO synthase endothéliale humaine de séquence suivante : SEQ ID NO:2 Met Gly Asn Leu Lys Ser Val Ala Gln Glu Pro Gly Pro Pro Cys 1 5 10 15 Gly Leu Gly Leu Gly Leu Gly Leu Gly Leu Cys Giy Lys Gln Gly 16 20 25 30 Pro Ala Thr Pro Ala Pro Glu Pro Ser Arg Ala Pro Ala Ser Leu 31 35 40 45 Leu Pro Pro Ala Pro Glu His Ser Pro Pro Ser Ser Pro Leu Thr 46 50 55 60 Gln Pro Pro Glu Gly Pro Lys Phe Pro Arg Val Lys Asn Trp Glu 61 65 70 75 Val GLys er Ile Thr Tyr Asp Thr Leu Ser Ala Gln Ala Gln Gln 76 80 85 90 Asp Gly Pro Cys Thr Pro Arg Arg Cys Leu GLys er Leu Val Phe

91 95 100 105 Pro Arg Lys Leu Gin Gly Arg Pro Ser Pro Giy Pro Pro Ala Pro 106 110 115 120 Glu Gln Leu Leu Ser Gln Ala Arg Asp Phe Ile Asn Gln Tyr Tyr

121 125 130 135 Ser Ser Ile Lys Arg Ser GLys er Gin Ala His Glu Gin Arg Leu 136 140 145 150 Gin Glu Val Glu Ala Glu Val Ala Ala Thr Gly Thr Tyr Gln Leu

151 155 160 165 Arg Glu Ser Glu Leu Val Phe Gly Ala Lys Gln Ala Trp Arg Asn

166 170 175 180 Ala Pro Arg Cys Val Gly Arg Ile Gin Trp Gly Lys Leu Gln Val

181 185 190 195 Phe Asp Ala Arg Asp Cys Arg Ser Ala Gln Glu Met Phe Thr Tyr

196 200 205 210 Ile Cys Asn His Ile Lys Tyr Ala Thr Asn Arg Gly Asn Leu Arg 211 215 220 225 Ser Ala Ile Thr Val Phe Pro Gln Arg Cys Pro Gly Arg Gly Asp

226 230 235 240 Phe Arg Ile Trp Asn Ser Gln Leu Val Arg Tyr Ala Gly Tyr Arg

241 245 250 255 Gln Gln Asp GLy Ser Val Arg Gly Asp Pro Ala Asn Val Glu Ile

256 260 265 270 Thr Glu Leu Cys Ile Gln His Gly Trp Thr Pro Gly Asn Gly Arg

271 275 280 285 Phe Asp Val Leu Pro Leu Leu Leu Gln Ala Pro Asp Glu Pro Pro 286 290 295 300 Glu Leu Phe Leu Leu Pro Pro Glu Leu Val Leu Glu Val Pro Leu

301 305 310 315 Glu His Pro Thr Leu Glu Trp Phe Ala Ala Leu Gly Leu Arg Trp

316 320 325 330 Tyr Ala Leu Pro Ala Val Ser Asn Met Leu Leu Glu Ile Gly Gly 331 335 340 345 Leu Glu Phe Pro Ala Ala Pro Phe Ser Gly Trp Tyr Met Ser Thr 346 350 355 360 Glu Ile Gly Thr Arg Asn Leu Cys Asp Pro His Arg Tyr Asn Ile 361 365 370 375 Leu Glu Asp Val Ala Val Cys Met Asp Leu Asp Thr Arg Thr Thr 376 380 385 390 Ser Ser Leu Trp Lys Asp Lys Ala Ala Val Glu Ile Asn Val Ala 391 395 400 405 Val Leu His Ser Tyr Gln Leu Ala Lys Val Thr Ile Val Asp His 406 410 415 420 His Ala Ala Thr Ala Ser Phe Met Lys His Leu Glu Asn Glu Gln 421 425 430 435 Lys Ala Arg Gly Gly Cys Pro Ala Asp Trp Ala Trp Ile Val Pro 436 440 445 450 Pro Ile Ser GLys er Leu Thr Pro Val Phe His Gln Glu Met Val 451 455 460 465 Asn Tyr Phe Leu Ser Pro Ala Phe Arg Tyr Gln Pro Asp Pro Trp 466 470 475 480 Lys Gly Ser Ala Ala Lys Gly Thr Gly Ile Thr Arg Lys Lys Thr 481 485 490 495 Phe Lys Glu Val Ala Asn Ala Val Lys Ile Ser Ala Ser Leu Met 496 500 505 510 Gly Thr Val Met Ala Lys Arg Val Lys Ala Thr Ile Leu Tyr Gly 511 515 510 525 Ser Glu Thr Gly Arg Ala Gin Ser Tyr Ala Gln Gln Leu Gly Arg 526 530 535 540 Leu Phe Arg Lys Ala Phe Asp Pro Arg Val Leu Cys Met Asp Glu 541 545 550 555 Tyr Asp Val Val Ser Leu Glu His Glu Thr Leu Val Leu Val Val 556 560 565 570 Thr Ser Thr Phe Gly Asn Gly Asp Pro Pro Glu Asn Gly Glu Ser 571 575 580 585 Phe Ala Ala Ala Leu Met Glu Met Ser Gly Pro Tyr Asn Ser Ser 586 590 595 600 Pro Arg Pro Glu Gln His Lys Ser Tyr Lys Ile Arg Phe Asn Ser 601 605 610 615 Ile Ser Cys Ser Asp Pro Leu Val Ser Ser Trp Arg Arg Lys Arg 616 620 625 630 Lys Glu Ser Ser Asn Thr Asp Ser Ala Gly Ala Leu Gly Thr Leu 631 635 640 645 Arg Phe Cys Val Phe Gly Leu GLys er Arg Ala Tyr Pro His Phe 646 650 655 660 Cys Ala Phe Ala Arg Ala Val Asp Thr Arg Leu Glu Glu Leu Gly 661 665 670 675 Gly Glu Arg Leu Leu Gln Leu Gly Gln Gly Asp Glu Leu Cys Gly 676 680 685 690 Gln Glu Glu Ala Phe Arg Gly Trp Ala Gln Ala Ala Phe Gln Ala . 691 695 700 705 Ala Cys Glu Thr Phe Cys Val Gly Glu Asp Ala Lys Ala Ala Ala 706 710 715 720 Arg Asp Ile Phe Ser Pro Lys Arg Ser Trp Lys Arg Gln Arg Tyr 721 725 730 735 Arg Leu Ser Ala Gln Ala Glu Gly Leu Gln Leu Leu Pro Gly Leu 736 740 745 750 Ile His Val His Arg Arg Lys Met Phe Gln Ala Thr Ile Arg Ser 751 755 760 765 Val Glu Asn Leu Gln Ser Ser Lys Ser Thr Arg Ala Thr Ile Leu 766 770 775 780 Val Arg Leu Asp Thr Gly Gly Gln Glu Gly Leu Gln Tyr Gln Pro 781 785 790 795 Gly Asp His Ile Gly Val Cys Pro Pro Asn Arg Pro Gly Leu Val 796 800 805 810 Glu Ala Leu Leu Ser Arg Val Glu Asp Pro Pro Ala Pro Thr Glu 811 815 820 825 Pro Val Ala Val Glu Gln Leu Glu Lys Gly Ser Pro Gly Gly Pro 826 830 835 840 Pro Pro Gly Trp Val Arg Asp Pro Arg Leu Pro Pro Cys Thr Leu 841 845 850 855 Arg Gin Ala Leu Thr Phe Phe Leu.Asp Ile Thr Ser Pro Pro Ser 856 860 865 870 Pro Gln Leu Leu Arg Leu Leu Ser Thr Leu Ala Glu Glu Pro Arg 871 875 880 885 Glu Gln Gln Glu Leu Glu Ala Leu Ser Gln Asp Pro Arg Arg Tyr 886 890 895 900 Glu Glu Trp Lys Trp Phe Arg Cys Pro Thr Leu Leu Glu Val Leu 901 905 910 915 Glu Gln Phe Pro Ser Val Ala Leu Pro Ala Pro Leu Leu Leu Thr 916 920 925 930 Gln Leu Pro Leu Leu Gln Pro Arg Tyr Tyr Ser Val Ser Ser Ala 931 935 940 945 Pro Ser Thr His Pro Gly Glu Ile His Leu Thr Val Ala Val Leu 946 950 955 960 :19 Ala Tyr Arg Thr Gin Asp Gly Leu Gly Pro Leu His Tyr Gly Val 961 965 970 975 Cys Ser Thr Trp Leu Ser Gln Leu Lys Pro Gly Asp Pro Val Pro 976 980 985 990 Cys Phe Ile Arg Gly Ala Pro Ser Phe Arg Leu Pro Pro Asp Pro 991 995 1000 1005 Ser Leu Pro Cys Ile Leu Val Gly Pro Gly Thr Gly Ile Ala Pro 1006 1010 1015 1020 Phe Arg Gly Phe Trp Gln Glu Arg Leu His Asp Ile Glu Ser Lys 1021 1025 1030 1035 Gly Leu Gln Pro Thr Pro Met Thr Leu Val Phe Gly Cys Arg Cys 1036 1040 1045 1050 Ser Gln Leu Asp His Leu Tyr Arg Asp Glu Val Gln Asn Ala Gln 1051 1055 1060 1065 Gln Arg Gly Val Phe Gly Arg Val Leu Thr Ala Phe Ser Arg Glu 1066 1070 1075 1080 Pro Asp Asn Pro Lys Thr Tyr Val Gln Asp Ile Leu Arg Thr Glu 1081 1085 1090 1095 Leu Ala Ala Glu Val His Arg Val Leu Cys Leu Glu Arg Gly His 1096 1100 1105 1110 Met Phe Val Cys Gly Asp Val Thr Met Ala Thr Asn Val Leu Gln 1111 1115 1120 1125 Thr Val Gln Arg Ile Leu Ala Thr Glu Gly Asp Met Glu Leu Asp 1126 1130 1135 1140 Glu Ala Gly Asp Val Ile Gly Val Leu Arg Asp Gln Gln Arg Tyr 1141 1145 1150 1155 His Glu Asp Ile Phe Gly Leu Thr Leu Arg Thr Gln Glu Val Thr 1156 1160 1165 1170 Ser Arg Ile Arg Thr Gln Ser Phe Ser Leu Gln Glu Arg Gln Leu 1171 1175 1180 1185 Arg Gly Ala Val Pro Trp Ala Phe Asp Pro Pro Gly Ser Asp Thr 1186 1190 1195 1200 Asn Ser Pro 1201 1203 Pour obtenir des anticorps polyclonaux dirigés contre la NO synthase, il est possible aussi d'utiliser un fragment de NO synthase endothéliale, choisi, par exemple, parmi les séquences suivantes : SEQ ID NO:3 Pro Trp Ala Phe 1192 1195 SEQ ID NO:4

Gly Ala Val Pro 1189 1192 SEQ ID NO:5

Arg 1185 His Leu Arg Gly Ala Val Pro Trp Ala Phe Asp Pro Pro Gly Pro 1186 1190 1195 1200 Asp Thr Pro Gly Pro 1201 1205

SEQ ID NO:6

Ala Phe Asp Pro Pro Gly Pro 11941195 1200 Asp Thr Pro Gly Pro 1201 1205

SEQ ID NO:7

His Leu Arg Gly Ala Val Pro Trp Ala Phe Asp 1186 1190 11951196 SEQ ID NO:8

His Leu Arg Gly Ala Val Pro Trp Ala Phe Asp Pro Pro Gly Pro 1186 1190 1195 1200 Asp Thr Pro Gly Pro 1201 1205 15 Le processus cité à titre d'exemple pour la préparation des anticorps polyclonaux de départ dirigés contre la NO synthase peut être décrit comme suit. 7-9 jours avant le prélèvement d'échantillons sanguins, 1-3 injections intraveineuses de l'antigène souhaité sont faites aux lapins pour augmenter le niveau d'anticorps polyclonaux dans la circulation sanguine 20 des lapins. Lors de l'immunisation, des échantillons sanguins sont prélevés pour tester le niveau d'anticorps. Typiquement, le niveau maximum de réaction immunitaire de l'antigène soluble est obtenu dans un intervalle de 40 à 60 jours après la première injection de l'antigène. A l'achèvement du premier cycle d'immunisation, les lapins ont une période de réhabilitation de 30 jours, après quoi une ré-immunisation est accomplie avec 1-3 injections intraveineuses 25 supplémentaires. Pour obtenir un antisérum contenant les anticorps souhaités, le sang des lapins immunisés est recueilli sur les lapins et placé dans un tube de centrifugeuse de 50 ml. Les caillots de produit formés sur les côtés du tube sont retirés avec une spatule en bois, et une baguette est placée dans le caillot au centre du tube. Le sang est ensuite placé dans un 30 réfrigérateur pendant une nuit à une température d'environ 4°C. Le jour suivant, le caillot sur la spatule est retiré, et le liquide restant est centrifugé pendant 10 min à 13000 tours par minute. Le fluide surnageant est l'antisérum cible. L'antisérum obtenu est typiquement jaune. 20 % de NaN3 (concentration en poids) est ajouté à l'antisérum à une concentration finale de 0,02 % et conservé avant l'utilisation à l'état congelé à la température de -20°C ou sans NaN3 à la température de -70°C. Pour séparer les anticorps cibles dirigés contre l'interféron gamma de l'antisérum, la séquence d'absorption sur une phase solide suivante est appropriée : (a) 10 ml d'antisérum de lapins sont dilués deux fois avec NaCl 0,15 M, après quoi 6,26 g de Na2SO4 sont ajoutés, mélangés et incubés pendant 12-16 heures à 4°C ; (b) le sédiment est retiré par centrifugation, dilué dans 10 ml de tampon phosphate et dialysé contre le même tampon pendant une nuit à la température ambiante ; (c) après le retrait du sédiment, la solution est appliquée à une colonne de DEAE-cellulose équilibrée par du tampon phosphate ; (d) la fraction d'anticorps est déterminée en mesurant la densité optique de l'éluat à 280 10. nm. Les anticorps bruts isolés sont purifiés par le procédé de chromatographie d'affinité en fixant les anticorps obtenus dirigés contre la NO synthase situés sur la matrice insoluble du milieu de chromatographie, avec élution subséquente par des solutions salines aqueuses concentrées. 15 La solution tampon résultante est utilisée comme solution initiale pour le processus de dilution homéopathique utilisé pour préparer la forme activée-potentialisée des anticorps. La concentration préférée de la solution de matrice initiale des anticorps polyclonaux de lapin purifiés sur antigène dirigés contre la NO synthase est 0,5 à 5,0 mg/mi, de préférence 2,0 à 3,0 mg/mi. 20 La protéine spécifique du cerveau S100, exprimée par les neurones et les cellules gliales (astrocytes et oligodendrocytes), directement ou par le biais d'interactions avec d'autres protéines, remplit dans le SNC un certain nombre de fonctions visant à maintenir un fonctionnement normal du cerveau, incluant une action sur les processus d'apprentissage et de mémoire, la croissance et la viabilité des neurones, la régulation de processus métaboliques 25 dans les tissus neuronaux et d'autres. Pour préparer la forme activée-potentialisée d'anticorps dirigés contre la protéine spécifique du cerveau S-100, la protéine spécifique du cerveau S-100 est utilisée, dont les propriétés physiques et chimiques sont décrites dans l'article de M. V. Starostin, S. M. Sviridov, Neurospecific Protein S-100, Progress of Modem Biology, 1977, Vol.5, p. 170-178 ; se trouvant dans le livre de M. B. Shtark, Brain-Specific Protein Antigenes and Functions of Neuron, « Medicine », 1985, p.12-14. La protéine spécifique du cerveau S-100 peut être retiré du tissu cérébral d'un taureau et traité comme suit : - le tissu cérébral de taureau congelé dans l'azote liquide est converti en une poudre au moyen d'un broyeur spécialisé ; - les protéines sont extraites dans le rapport de 1 : 3 (poids/volume) au moyen d'un tampon d'extraction avec homogénéisation : - l'homogénat est chauffé pendant 10 min à 60°C puis refroidi à 4°C dans un bain de glace ; - les protéines thermolabiles sont retirées par centrifugation ; - un fractionnement au sulfate d'ammonium est réalisé par stades, avec retrait subséquent des protéines précipitées ; - la fraction contenant la protéine S-100 est précipitée par précipitation avec du sulfate d'ammonium saturé à 100 % accomplie en abaissant le pH à 4,0 ; la fraction souhaitée est recueillie par centrifugation ; - le précipité est dissous dans un volume minimum de tampon contenant de l'EDTA et du mercaptoéthanol, le précipité est dialysé avec de l'eau désionisée et lyophilisé ; - le fractionnement des protéines acides est suivi par une chromatographie dans un milieu échangeur d'ions, DEAE-cellulose DE-52 puis DEAE-sephadex A-50; - les fractions recueillies et dialysées, qui contiennent la protéine S-100, sont 20 divisées selon la masse moléculaire par gel filtration sur sephadex G-100; - la protéine S-100 purifiée est dialysée et lyophilisée. La masse moléculaire de la protéine spécifique du cerveau S-100 purifiée est 21000 D. Du fait de la grande concentration d'acides asparaginique et glutaminique, la protéine spécifique du cerveau S-100 est très acide et occupe une position anodique extrême pendant 25 l'électroendosmose dans un système tampon discontinu de gel de polyacrylamide, ce qui facilite son identification.

Les anticorps polyclonaux dirigés contre la protéine S-100 peuvent aussi être obtenus par une méthodologie similaire à la méthodologie décrite pour les anticorps dirigés contre la NO synthase endothéliale au moyen d'un adjuvant. La molécule entière de protéine S-100 peut être utilisée comme immunogène (antigène) pour l'immunisation de lapins : S100B bovine (SEQ ID NO:9) Met Ser Glu Leu Glu Lys Ala Val Val Ala Leu Ile Asp Val Phe 1 5 10 15 His Gln Tyr Ser Gly Arg Glu Gly Asp Lys His Lys Leu Lys Lys 16 20 25 30 Ser Glu Leu Lys Glu Leu Ile Asn Asn Glu Leu Ser His Phe Leu 31 35 40 45 Glu Glu Ile Lys Glu Gln Glu Val Val Asp Lys Val Met Glu Thr 46 50 55 60 Leu Asp Ser Asp Gly Asp Gly Glu Cys Asp Phe Gin Glu Phe Met 61 65 70 75 Ala Phe Val Ala Met Ile Thr Thr Ala Cys His Glu Phe Phe Glu 76 80 85 90 His Glu 91 92 S100B humaine (SEQ ID NO:10) Met Ser Glu Leu Glu Lys Ala Met Val Ala Leu Ile Asp Val Phe 1 5 10 15 His Gln Tyr Ser Gly Arg Glu Gly Asp Lys His Lys Leu Lys Lys 16 20 25 30 Ser Glu Leu Lys Glu Leu Ile Asn Asn Glu Leu Ser His Phe Leu 31 35 40 45 Glu Glu Ile Lys Glu Gln Glu Val Val Asp Lys Val Met Glu Thr 46 50 55 60 Leu Asp Asn Asp Gly Asp Gly Glu Cys Asp Phe Gln Glu Phe Met 61 65 70 75 Ala Phe Val Ala Met Val Thr Thr Ala Cys His Glu Phe Phe Glu 76 80 85 90 His Glu 91 92 S100A1 humaine (SEQ ID NO:11) Met Gly Ser Glu Leu Glu Thr Ala Met Glu Thr Leu Ile Asn Val 1 5 10 15 Phe His Ala His Ser Gly Lys Glu Gly Asp Lys Tyr Lys Leu Ser 16 20 25 30 Lys Lys Glu Leu Lys Glu Leu Leu Gln Thr Glu Leu Ser Gly Phe 31 35 40 45 Leu Asp Ala Gln Lys Asp Val Asp Ala Val Asp Lys Val Met Lys 46 50 55 60 Glu Leu Asp Glu Asn Gly Asp Gly Glu Val Asp Phe Gln Glu Tyr 61 65 70 75 Val Val Leu Val Ala Ala Leu Thr Val Ala Cys Asn Asn Phe Phe 76 80 85 90 Trp Glu Asn Ser 91 94 S100A1 bovine (SEQ ID NO:12)

Met Gly Ser Glu Leu Glu Thr Ala Met Glu Thr Leu Ile Asn Val 1 5 10 15 Phe His Ala His Ser Gly Lys Glu Gly Asp Lys Tyr Lys Leu Ser 16 20 25 30 Lys Lys Glu Leu Lys Glu Leu Leu Gln Thr Glu Leu Ser Gly Phe 31 35 40 45 Leu Asp Ala Gln Lys Asp Ala Asp Ala Val Asp Lys Val Met Lys 46 50 55 60 Glu Leu Asp Glu Asn Gly Asp Gly Glu Val Asp Phe Gln Glu Tyr 61 65 70 75 Val Val Leu Val Ala Ala Leu Thr Val Ala Cys Asn Asn Phe Phe 76 80 85 90 Trp Glu Asn Ser 91 94 Pour obtenir un antisérum, la protéine spécifique du cerveau S-100 ou le mélange de protéines S-100 (antigènes) sous la forme d'un complexe avec la sérumalbumine de taureau méthylée comme agent vecteur avec de l'adjuvant complet de Freund est préparée et ajoutée à de la protéine spécifique du cerveau S-100 attribuée qui est injectée par voie hypodermique à un animal de laboratoire -un lapin dans le domaine du dos en une quantité de 1-2 ml. Les 8, 15° jours une immunisation répétée est pratiquée. Un prélèvement d'échantillons sanguins est réalisé (par exemple sur une veine dans l'oreille) le 26 jour et le 28ème jour. Le titre de l'antisérum obtenu est 1 : 500 - 1 : 1000, forme une seule bande de précipitine avec un extrait de tissu nerveux mais ne réagit pas avec des extraits de corps hétérologues et forme un seul pic de précipitine avec la protéine S-100 pure et avec l'extrait de tissu nerveux, ce qui indique que l'antisérum obtenu est monospécifique.

La forme activée potentialisée de chaque composant de l'association peut être préparée à partir d'une solution initiale par potentialisation homéopathique, de préférence en utilisant le procédé de diminution de concentration proportionnelle par dilution successive de 1 partie de chaque solution précédente (en commençant avec la solution initiale) dans 9 parties (pour une dilution décimale), ou dans 99 parties (pour une dilution centésimale), ou dans 999 parties (pour une dilution miliésimale) d'un solvant neutre, en commençant avec une concentration de la solution initiale d'anticorps dans la solvant, de préférence l'eau ou un mélange eau-alcool éthylique, dans la plage d'environ 0,5 à environ 5,0 mg/mi, couplée avec un impact externe. De préférence, l'impact externe comprend de multiples agitations verticales (dynamisation) de chaque dilution. De préférence, des récipients séparés sont utilisés pour chaque dilution subséquente jusqu'au niveau d'activité requis, ou le facteur de dilution requis. Ce procédé est bien accepté dans la technique homéopathique. Voir par exemple V. Schwabe "Homeopathic medicinee, M., 1967, p. 14-29. Par exemple, pour préparer une dilution 12-centésimale (appelée C12), une partie de la solution de matrice initiale d'anticorps dirigés contre la NO synthase d'une concentration de 3,0 mg/ml est diluée dans 99 parties de solvant neutre aqueux ou aqueux-alcoolique (de préférence d'alcool éthylique à 15 %) puis agitée verticalement de nombreuses fois (10 et plus) pour créer la 1" dilution centésimale (appelée Cl). La 2è'e dilution centésimale (C2) est préparée à partir de la 1ère dilution centésimale Cl. Ce processus est répété 11 fois pour préparer la 12è`"e dilution centésimale C12. Ainsi, la 12è`"e dilution centésimale C12 représente une solution obtenue par 12 dilutions successives d'une partie de la solution de matrice d'anticorps initiale d'une concentration de 3,0 mg/mi dans 99 parties d'un solvant neutre dans des récipients différents, ce qui équivaut à la dilution homéopathique centésimale C12. Des processus similaires avec le facteur de dilution pertinent sont accomplis pour obtenir les dilutions souhaitées. Les dilutions intermédiaires peuvent être testées dans un modèle biologique souhaité pour vérifier l'activité. Les formes activées potentialisées préférées pour des anticorps comprenant l'association de l'invention sont des dilutions C12, C30 et C200 pour chaque forme activée-potentialisée. Quand le mélange de différentes dilutions homéopathiques (principalement centésimales) de la substance active est utilisé comme composant liquide biologiquement actif, chaque composant de la composition (par exemple C12, C30, C50, C200) est préparé séparément selon le processus décrit ci-dessus jusqu'à ce que l'avant-dernière dilution soit obtenue (par exemple jusqu'à Cl1, C29, C49 et C199 respectivement), puis une partie de chaque composant est ajoutée dans un récipient selon la composition du mélange et mélangée avec la quantité requise de solvant (par exemple avec 97 parties pour une dilution centésimale). Ainsi, la forme active-potentialisée d'anticorps dirigés contre la protéine spécifique du cerveau S-100 à dose ultra-basse est obtenue par extra atténuation de solution de matrice, ainsi 10012, 10030 and 100200 fois, ce qui équivaut à des solutions C12, C30 and C200 centésimales ou 10012, 10030 and 10050 fois, ce qui équivaut à des solutions C12, C30 and C50 centésimales préparées par la technologie homéopathique. Il est possible d'utiliser la substance active sous forme d'un mélange de différentes solutions par la technologie homéopathique, par exemple décimales et/ou centésimales (C12, C30, C100 ; C12, C30, C50 ; D20, C30, C100 ou D10, C30, M100 etc.). L'efficacité est définie expérimentalement. Le traitement externe au cours de la potentialisation et de la réduction de la concentration peut aussi être réalisé au moyen d'ultrasons, d'une influence électromagnétique ou de toute autre influence physique acceptée dans la technique homéopathique.

De préférence, la composition pharmaceutique d'association de l'invention peut être sous forme d'un liquide ou d'une forme galénique unitaire solide. La forme liquide préférée de la composition pharmaceutique est un mélange, de préférence à un rapport 1 : 1 de la forme activée potentialisée d'anticorps dirigés contre la NO synthase endothéliale et de la forme activée potentialisée d'anticorps dirigés contre la protéine S-100. Le support liquide préféré est l'eau ou un mélange eau-alcool éthylique. La forme galénique unitaire solide de la composition pharmaceutique de l'invention peut être préparée en utilisant l'imprégnation d'un support solide pharmaceutiquement acceptable avec le mélange de la forme activée potentialisée de solutions aqueuses ou aqueuses-alcooliques de composants actifs qui sont mélangés, principalement dans un rapport 1 :1 et utilisés dans une forme galénique liquide. A titre d'alternative, le support peut être imprégné de manière consécutive avec chaque dilution requise. Les deux ordres d'imprégnation sont acceptables. De préférence, la composition pharmaceutique dans la forme galénique unitaire solide est préparée à partir de granules du support pharmaceutiquement acceptable qui a été préalablement saturé avec les dilutions aqueuses ou aqueuses-alcooliques de la forme activée potentialisée d'anticorps. La forme galénique solide peut être sous toute forme connue dans la technique pharmaceutique, incluant un comprimé, une capsule, une pastille, et d'autres. Comme ingrédients pharmaceutiques inactifs on peut utiliser le glucose, le saccharose, le maltose, l'amidon, l'isomaltose, l'isomalt et d'autres mono-, oligo- et polysaccharides utilisés dans la fabrication de produits pharmaceutiques ainsi que des mélanges technologiques des ingrédients pharmaceutiques inactifs mentionnés ci-dessus avec d'autres excipients pharmaceutiquement acceptables, par exemple l'isomalt, la crospovidone, le cyclamate de sodium, la saccharine sodique, l'acide citrique anhydre, etc.), incluant les lubrifiants, les désintégrants, les liants et les agents colorants. Les supports préférés sont le lactose et l'isomalt. La forme galénique pharmceutique peut inclure en outre des excipients pharmaceutiques standard, par exemple la cellulose microcristalline, le stéarate de magnésium et l'acide citrique. L'exemple de préparation de la forme galénique unitaire solide est présenté ci-dessous. Pour préparer la forme orale solide, des granules de 100-300 pm de lactose sont imprégnés de solutions aqueuses ou aqueuses-alcooliques de la forme activée potentialisée d'anticorps dirigés contre l'histamine, la forme activée-potentialisée d'anticorps dirigés contre la NO synthase et la forme activée potentialisée d'anticorps dirigés contre la protéine S-100 dans le rapport de 1 kg de solution d'anticorps pour 5 ou 10 kg de lactose (1 : 5 à 1 : 10). Pour réaliser l'imprégnation, les granules de lactose sont exposés à une irrigation à saturation dans le lit bouillonnant fluidisé dans une installation à lit bouillonnant (par exemple "Hüttlin Pilotlab" de Hüttlin GmbH) avec séchage subséquent via un courant d'air chauffé à une température inférieure à 40°C. La quantité estimée des granules séchés (10 à 34 parties en poids) saturés de la forme activée potentialisée d'anticorps est placée dans le mélangeur, et mélangée avec 25 à 45 parties en poids de lactose pur « non saturé » (utilisé dans le but de réduction des coûts et de simplification et d'accélération du processus technologique sans diminuer l'efficacité du traitement), avec 0,1 à 1 partie en poids de stéarate de magnésium, et 3 à 10 parties en poids de cellulose microcristalline. La masse pour comprimés obtenue est mélangée uniformément, et mise sous forme de comprimés par pressage à sec direct (par exemple dans une presse à comprimés Korsch - XL 400) pour former des pilules rondes de 150 à 500 mg, de préférence de 300 mg. Après la formation des comprimés, des pilules de 300 mg sont obtenues, qui sont saturées de solution aqueuse-alcoolique (3,0-6,0 mg/pilule) de l'association de la forme activée-potentialisée d'anticorps. Chaque composant de l'association utilisée pour imprégner le support est sous forme d'un mélange de dilutions homéopathiques centésimales, de préférence C12, C30 et C200. De préférence, 1-2 comprimés de la composition pharmaceutique revendiquée sont administrés 2-4 fois par jour.

En outre, le médicament déclaré élargit l'assortiment de médications conçues pour le traitement de la maladie d'Alzheimer. De plus, la composition pharmaceutique d'association de la présente invention peut être utilisée pour le traitement de la maladie d'Alzheimer. Pour le traitement dudit trouble, la composition pharmaceutique d'association peut contenir des composants actifs dans le rapport en volume 1 : 1, ainsi, chaque composant est utilisé comme mélange de trois solutions de matrice (teinture mère) d'anticorps diluées 10012, 10030 and 100200 fois, respectivement, ce qui équivaut à des dilutions homéopathiques centésimales (C12, C30 et C200) ou comme mélange de trois solutions de matrice d'anticorps diluées 10012, 10030 and 10050 fois, ce qui équivaut à des dilutions homéopathiques centésimales (C12, C30 et C50). Il est recommandé que la composition pharmaceutique revendiquée soit prise de preference à raison de 1-2 comprimés 2-6 fois (de preference 2-4 fois) par jour. La composition pharmaceutique revendiquée ainsi que ses composants ne possède pas d'effet sedative et myorelaxant, ne provoque pas d'addiction et d'accoutumance.

EXEMPLES Exemple 1. Etude de l'effet d'une préparation complexe contenant des doses ultra-basses (ULD) de formes activées-potentialisées d'anticorps polyclonaux de lapin purifiés par affinité dirigés contre la protéine spécifique du cerveau S-100 (anti-S100) et la NO synthase endothéliale (anti- eNOS), obtenues par super-dilution d'une solution de matrice initiale (concentration : 2,5 mg/mi) (10012, 10030, 100200 fois), ce qui équivaut à un mélange de dilutions homéopathiques centésimales C12, C30, C200 (rapport : 1:1) (ULD anti-S100+anti-eNOS), ainsi que ses composants - forme activée-potentialisée d'anticorps polyclonaux de lapin purifiés par affinité contre des doses ultra-basses (ULD) de protéine spécifique du cerveau S-100 (anti-S100), purifiés sur antigène, obtenues par super-dilution de solution de matrice initiale (10012, 10030, 100200 fois, ce qui équivaut à un mélange de dilutions homéopathiques centésimales C12, C30, C200 et de forme activée-potentialisée d'anticorps polyclonaux de lapin contre une dose ultra-basse de NO-synthase endothéliale (ULD anti-eNOS), obtenues par super-dilution de solution de matrice initiale (10012, 10030, 100200 fois), équivalant à un mélange de dilutions homéopathiques centésimales C12, C30, C200 in vitro sur la liaison du ligand standard [3H]pentazocine au récepteur recombinant humain a1 a été évalué au moyen d'un procédé à radioligand. De l'eau distillée potentialisée (mélange de dilutions homéopathiques C12+C30+C200) a été utilisée comme témoin de préparations test. Le récepteur sigma-1 (a1) - un récepteur intracellulaire qui est localisé dans les cellules du sytème nerveux central, les cellules de la plupart des tissus périphériques et les cellules de composants immunitaires. Les récepteurs présentent une aptitude unique à subir une translocation qui est causée par de nombreux médicaments psychotropes. La dynamique des récepteurs sigma-1 est liée directement à différentes influences qui sont réalisées par des préparations agissant sur les récepteurs sigma-1. Ces effets incluent la régulation de l'activité de canaux, l'écocytose, le transfert de signaux, le remodelage de la membrane plasmique (formation de nacelles) et le transport/métabolisme des lipides. Tout ceci peut contribuer à la plasticité des neurones dans un cerveau. II existe des indices que les récepteurs sigma-1 ont un effet modulateur sur tous les systèmes neuromodulateurs majeurs : les systèmes noradrénergiques, sérotonergiques, dopaminergiques, cholinergiques et des effets de glutamate ajustables par NMDA. Le récepteur sigma-1 joue un rôle important dans la pathophysiologie des maladies neurodégénératives (par exemple maladie d'Alzheimer, Parkinson), les troubles psychiatriques et affectifs et les accidents vasculaires cérébraux ; et il participe aussi aux processus d'apprentissage et de mémoire. A ce sujet, l'aptitude de médicaments à influencer l'efficacité d'interaction de ligands avec le récepteur sigma-1 indique la présence de composants neuroprotecteurs, anti-ischémiques, anxiolytiques, antidépresseurs et anti-asténiques dans le spectre de son activité pharmacologique qui permet de considérer ces médicaments comme des préparations efficaces, en particulier pour le traitement des maladies cérébrovasculaires.

Pendant le test (pour mesurer la liaison totale), 20 pI de préparation complexe de ULD anti-S100 + anti-eNOS ou 10 pl de ULD de AB dirigés contre S100 ou 10 pl de ULD de AB dirigés contre NOS ont été transférés dans le milieu d'incubation. Ainsi, la quantité d'ULD anti-S100 + anti-eNOS, transférée dans le bassin de test lors du test de la préparation complexe était identique à celle d'ULD de AB dirigés contre S100 et d'ULD de AB dirigés contre NOS testés sous forme de monopréparations, ce qui permet de comparer l'efficacité de la préparation à ses composants séparés. 20 pI et 10 pl d'eau potentialisée ont été transférés dans le milieu d'incubation. De plus, 160 pI (environ 200 pg de protéine) d'homogénat de membranes de lignée 10 cellulaire Jurkat (lignée de lymphocytes T leucémique humaine), et finalement 20 pI de radioligand marqué au tritium [3H]pentazocine (15 nm) ont été transférés. Pour mesurer la liaison non spécifique, 20 pi de ligand non marqué halopéridol (10 NM) ont été transférés dans le milieu d'incubation à la place des préparations ou de l'eau potentialisée. 15 La radioactivité a été mesurée au moyen d'un scintillomètre (Topcount, Packard) et d'un mélange de scintillation (Microscint 0, Packard) après l'incubation dans un intervalle de 120 minutes à 22°C dans du tampon Tris-HCI 50 mM (pH 7,4) et filtration avec des filtres en fibres de verre (GF/B, Packard). La liaison spécifique (pendant le test ou témoin) a été calculée comme différence entre la liaison totale (pendant le test ou témoin) et la liaison non spécifique. 20 Les résultats sont représentés en pourcentage d'inhibition de la liaison spécifique dans le témoin (de l'eau distillée a été utilisée comme témoin) (tableau 1).

Tableau 1. % de liaison spécifique de radioligand dans % le témoin d'inhibition Quantité de liaison Groupe test par bassin 1 s' test 2`b test Moyenne de de test radioligand dans le témoin ULD anti- 20 pI 48,4 35,5 42,0 58,0 S100+anti- eNOS ULD anti- 10 pl 67,3 63,1 65,2 34,8 S100 ULD anti- 10 pI 147,5 161,1 154,3 -54,3 eNOS Eau 20 pl 98,1 75,8 86,9 13,1 potentialisée Eau 10 pl 140,1 106,2 123,2 -23,2 potentialisée Effet des préparations et de l'eau potentialisée sur la liaison du ligand standard [3H]pentazocine au récepteur a 1 recombinant humain Note: % de liaison spécifique dans le témoin = (liaison spécifique pendant le test/ liaison spécifique dans le témoin)* 100%; % d'inhibition de liaison spécifique dans le témoin = 100% - (liaison spécifique pendant le test/ liaison spécifique dans le témoin) * 100%). Les résultats reflétant une inhibition au-delà de 50 % représentent des effets significatifs des composés testés ; une inhibition de 25 % à 50 % confirme des effets doux à modérés ; une inhibition inférieure à 25 % est considérée comme étant un effet insignifiant du composé testé et est dans les limites du niveau de fond.

De ce fait, les conditions de ce modèle de test montraient que la préparation complexe d'ULD anti-5100 + anti-eNOS est plus efficace que ses composants séparés (ULD anti-S100 et ULD anti-eNOS) pour inhiber la liaison du radioligand standard [3H]pentazocine au récepteur al recombinant humain ; une ULD anti-S100, transférée dans le bassin de test, à savoir 10 pl, inhibe la liaison du radioligand standard [3H]pentazocine au récepteur al recombinant humain, mais l'intensité de l'effet est inférieure à celle de la préparation complexe d'ULD anti-S100 + anti-eNOS ; une ULD anti-eNOS, transférée dans le bassin de test, à savoir 10 pl, n'avait pas d'effet sur la liaison du radioligand standard [3H]pentazocine au récepteur al recombinant humain; l'eau potentialisée, transférée dans le bassin de test, à savoir 10 pI ou 20 pl, n'avait pas d'effet sur la liaison du radioligand standard [3H]pentazocine au récepteur al recombinant humain.

Exemple 2. Pour étudier les propriétés de la composition pharmaceutique d'association de la présente demande pour le traitement de la maladie d'Alzheimer, des comprimés d'un poids de 300 mg ont été utilisés. Les comprimés ont été imprégnés de composition pharmaceutique contenant des solutions aqueuses-alcooliques (6 mg/comp.) de formes activées - potentialisées d'anticorps polyclonaux de lapin purifiés par affinité spécifiques de la protéine du cerveau S-100 (anti-S100) et de la NO-synthase endothéliale (anti-eNOS) à des doses ultra basses (ULD) obtenues par super dilution de solution initiale (de concentration de 2,5 mg/ml) 100t2, 10030, 100200 fois, de mélange équivalent de dilutions homéopathiques centésimales C12, C30, C200 ("ULD anti-S100 + anti-eNOS"). Les patients du groupe témoin ont reçu des comprimés de 300 mg imprégnés de composition pharmaceutique contenant des solutions aqueuses-alcooliques (6 mg/comprimé) de formes activées - potentialisées d'anticorps polyclonaux de lapin purifiés par affinité spécifiques de la protéine du cerveau S-100 (anti-S100) à des doses ultra basses (ULD) obtenues par super dilution de solution initiale (de concentration de 2,5 mg/ml) 10012, 100, 100200 fois. L'étude incluait des patients diagnostiqués avec la maladie d'Alzheimer. La maladie d'Alzheimer est caractérisée par une démence (démence acquise, dégradation stable de l'activité cognitive avec une certaine perte des connaissances acquises auparavant et de l'habileté pratique, des difficultés ou une impossibilité d'acquérir de nouvelles connaissances). L'étude était un essai clinique comparatif randomisé à marqueur ouvert de l'efficacité et de l'innocuité de la thérapie dans deux groupes parallèles (préparations d'ULD anti-S100 et d'ULD anti-S100+anti-eNOS) dans le traitement de patients ayant une maladie d'Alzheimer atténuée à modérée ; L'étude incluait 6 patients âgés 55 à 64 ans (âge moyen 59,0 ± 3,58) diagnostiqués avec une maladie d'Alzheimer atténuée à modérée. L'adhésion des patients aux critères d'inclusion et d'exclusion suivants a été vérifiée : Les critères d'inclusion sont les suivants : 1. Patients diagnostiqués avec une maladie d'Alzheimer modérée, confirmée par l'histoire médicale, les examens neurologiques et les résultats médicaux. 2. Patient sans changement de thérapie concomitante dans un intervalle d'au moins un mois ayant la visite 1. 3. Pas besoin de changement dans la thérapie concomitante pendant toute la période d'observation. 4. Pas besoin de prescription de médicaments immunomodulateurs pendant les 6 mois suivants. 5. Patients ayant un niveau d'éducation suffisant pour communiquer adéquatement avec le chercheur et le coordinateur de l'étude. 6. Patients évalués par le chercheur comme fiables et prêts à réaliser toutes les visites cliniques programmées, les tests et les processus stipulés dans le protocole. 7. Patients ayant une adresse de domicile valide.

Les critères d'exclusion sont les suivants : 1. Toute chirurgie du cerveau dans l'histoire médicale. 2. Infarctus du myocarde aigu. 3. Accident vasculaire cérébral hémorragique. 4. Diagnostic de psychose, de trouble bipolaire ou de trouble schizoaffectif dans l'histoire médicale. 5. Trouble dépressif majeur selon les critères de module de dépression de mini-entrevue neuropsychiatrique internationale (MINI). 6. Facteurs/conditions de caractère médical ou autre qui, de l'avis du chercheur, peuvent affecter les résultats du test pour les patients dans l'étude. 7. Réponses "2A", "2B", "2C" ou "3" dans la section 'l" du questionnaire de dépression de Beck (idées suicidaires actives avec une certaine intention à agir, sans plan spécifique, ou idées suicidaires actives avec plan et intention spécifiques). 8. Maladie auto-immune dans l'histoire médicale. 9. Lésion aiguë du foie ou cirrhose grave (classe C selon Child-Pugh). 10. Trouble non corrigé de la fonction de la glande thyroïde. 11. Hypertension artérielle décompensée dans l'histoire médicale. 12. Maladie cardiovasculaire grave ou décompensée, maladie du foie, maladie du rein, maladie métabolique, respiratoire ou hématologique, maladie vasculaire périphérique symptomatique ou autre affection médicale ou psychiatrique qui, de l'avis du chercheur, peut affecter la participation du patient à l'étude ou pourrait conduire à une hospitalisation ou ré-hospitalisation prolongée pendant l'étude. 13. Maladies et affections qui, de l'avis du chercheur, peuvent empêcher le patient de participer à l'étude. 14. Prise du médicament contenant une ULD anti-eNOS ou du médicament contenant une ULD anti-S100 avant l'inclusion dans l'étude. 15. Prise d'antidépresseurs de tout groupe incluant les préparations végétales et homéopathiques. 16. Prise d'anxiolytiques de tout groupe incluant les préparations végétales et homéopathiques. 17. Prise d'immodulateurs incluant les préparations végétales et homéopathiques. 18. Traitement avec des stéroîdes systémiques dans un intervalle d'un mois avant la visite 0. 19. Participation à l'étude du médicament contenant ULD anti-eNOS ou du médicament contenant ULD anti-S100 si les patients ont pris au moins une dose de préparation. 20. Participation à d'autres études cliniques dans un intervalle d'un mois avant d'être engagé dans cette étude. 21. Grossesse, allaitement au sein, impossibilité d'utiliser une contraception adéquate pendant la période de l'étude et dans un intervalle d'un mois après la dernière prise du médicament étudié. 22. Présence d'allergie/intolérance à tout composant de médicaments y compris intolérance au lactose. 23. Patients prenant des médicaments narcotiques et des neuroleptiques, dépendance à l'alcool, maladies psychiatriques chez les patients. 24. Les patients sont le personnel du centre lié directement à l'étude conduite et/ou sont des membres de la famille du personnel du centre de recherche qui sont associés directement à l'étude en cours. Les « membres de la famille » sont un mari (femme), les parents, les enfants, les frères (soeurs). 25. Participation à l'essai ou recevant probablement une compensation ou participation au processus judiciaire de l'avis d'un chercheur.

Après la détermination de la conformité des patients aux critères d'inclusion et d'exclusion, les patients ont été randomisés en deux groupes d'étude : un groupe de patients recevant ULD anti-S100 (3 patients, femmes - 100 %, hommes - 0 %, âge moyen - 59,0 ± 3,6 ans), un groupe de patients recevant ULD anti-S100 + anti-eNOS (3 patients, femmes - 66,66 %, hommes - 33,33 %, âge moyen - 59,01-4,36 ans). Pendant cette étude, les cinq visites ont été accomplies. La phase de traitement durait de la visite 1 à la visite 4 pendant 84 ± 5 jours en moyenne. La visite 4 (jour 84 ± 5) était le premier point final de l'étude suivi par une observation de suivi. La phase de suivi continuait de la visite 4 à la visite 5 (jour 168 ± 5 en moyenne). Dans l'analyse de l'innocuité les données de tous les patients participant à l'étude (n = 6) ont été incluses. Pendant l'étude une bonne tolérance au médicament a été notée. Aucun événement indésirable n'a été noté. Tous les patients des groupes étudiés ont achevé le traitement selon le protocole ; aucun abandon précoce.

L'effet d'ULD de préparation anti-S100 + anti-eNOS sur les principaux signes cliniques et symptomes de la maladie d'Alzheimer (inventaire neuropsychiatrique NPI, section intensité) sur l'intensité de détresse concomitante de la personne veillant sur le patient (inventaire neuropsychiatrique NPI, section intensité) ainsi que les fonctions cognitives du patient (miniexamen de l'état mental, MMSE) ont été évalués. Une amélioration a été trouvée dans les symptômes clés de la maladie d'Alzheimer comme une réduction statistiquement significative de la section intensité de l'inventaire neuropsychiatrique NPI (de 24,331-4,73 à 12,0±+3,46, p<0,05) à la visite 4 (Tableau 2). Une tendance à la réduction de la détresse de la personne veillant sur le patient a été trouvée également, ainsi qu'à la réduction d'activité de la vie quotidienne du patient à la fin de la thérapie (cependant, sans aucune différence statistiquement significative, peut-être du fait du petit nombre de patients inclus dans l'étude). En outre, une tendance à l'amélioration des fonctions cognitives a été trouvée, qui se manifestait par une augmentation de la note MMSE de 23,66 ± 3,21 à 26,66 ± 1,53 points, cependant, la différence ne parvenait pas non plus à atteindre des valeurs statistiquement significatives à la fin de la thérapie, ce qui peut être lié également à la petite taille de l'échantillon. Les mêmes points finaux dans le groupe de patients recevant ULD anti-S100, ne présentaient aucune tendance à l'amélioration, sauf une amélioration statistiquement non 5 significative de la note MMSE de 22,66 ± 0,58 à 23,33 ± 0,58 points. Ainsi, une différence entre les groupes de patients dans la note MMSE totale à la fin de la thérapie était statistiquement significative à p<0,05.

Tableau 2 10 NPI (intensité) NPI (détresse) ADCS-ADL MMSE ULD anti-S100+anti- 24,33±4,73 9,66±1,53 71,0±6,56 23,66±3,21 eNOS avant le traitement ULD anti-S100+anti- 12,0±3,46 * 5,0-13,61 74,33±2,51 26,66±1,53# eNOS après le traitement ULD anti-S100 avant 35,66±5,50 22,33±5,50 61,66±5,13 22,66±0,58 le traitement ULD anti-S100 après 38,33±8,5 23,0±5,0 61,33±5,86 23,33±0,58 !e traitement * - p par rapport à la ligne de base <0,05; # - p par rapport au témoin <0,05 Ainsi, dans l'étude clinique conduite, un effet positif de la composition pharmaceutique d'association ULD anti-S100 + anti-eNOS sur les principaux signes cliniques et 15 les principaux symptômes de la maladie d'Alzheimer et la tendance à remplir des fonctions cognitives avec la maladie d'Alzheimer. De plus, une bonne tolérabilité des médicaments a été confirmée. Aucun effet indésirable lié aux médicaments n'a été noté. Exemple 3.

L'efficacité de préparations chez les dats ayant une amnésie à la scopolamine (modèle de maladie d'Alzheimer). La maladie d'Alzheimer (AD) est une maladie neurodégénérative qui est caractérisée par une baisse des fonctions cognitives, une détérioration de la mémoire, une conscience confuse, et des changements émotionnels. Bien que la principale cause de cette pathologie soit considérée actuellement comme étant l'accumulation de bêta amyloïde qui conduit à la formation de plaques de bêta-amyloïde et d'enchevêtrements neurofibrillaires dans les tissus cérébraux ; l'AD s'accompagne aussi d'une déficience du système cholinergique. C'est la base de la voie la plus commune de modélisation de l'AD chez les animaux à l'aide d'un antagoniste du système cholinergique de la scopolamine. L'injection de scopolamine à des animaux d'expérience (habituellement des rongeurss, rats ou souris) interrompt l'aptitude à apprendre et conduit à une détérioration de la mémoire: Différents procédés et tests peuvent être utilisés pour évaluer les fonctions cognitives de rats et de souris, incluant le labyrinthe aquatique de Morris. L'essence de ce test est que les animaux sont libérés dans un récipient avec de l'eau trouble depuis différents points et sont forcés de rechercher une plateforme fixée cachée. L'avantage de ce procédé est qu'il permet au chercheur de suivre le processus d'entraînement des animaux (la formation d'idées concernant l'alignement spatial de la plateforme, quel que soit l'endroit où l'animal a été placé dans l'eau) de manière à évaluer l'acuité de la mémoire (pour ce faire, le test est réalisé quand la plateforme est retirée). Dans l'exempts 3 suivant, l'efficacité chez des rats ayant une amnésie causée par la scopolamine de la préparation médicale revendiquée sous forme de composition contenant des formes activées-potentialisées de polyclonaux purifiés par affinité sur un antigène de protéines spécifiques du cerveau S-100 (anti-S100) de lapin et dirigés contre la NO-synthase endothéliale (anti-eNOS) à des doses ultra-basses (ULD) obtenues par super-dilution d'une solution stock de réserve (d'une concentration de 2,5 mg/ml) 10012, 100, 100200 fois, ce qui équivaut à des dilutions homéopathiques centésimales C12, C30, C200 (ULD anti-S100 + anti-eNOS). Dans une étude de l'efficacité du médicament ULD anti-S100 + anti-eNOS chez des rats ayant une amnésie induite par la scopolamine (un modèle de la maladie d'Alzheimer), 48 rats 30 mâles de la lignée Rj : Wistar (Han) (poids 180-280 g) ont été utilisés. Pendant 4 jours les rats ont subi une injection subdermique de solution saline normale (n = 12, intact) ou de scopolamine à une dose de 0,5 mg/kg (n = 36) (amnésie induite par la scopolamine). Les rats ayant une amnésie induite par la scopolamine ont été divisés en trois groupes et se sont vus administrer de l'eau distillée (7,5 ml ! kg, n = 12, groupe témoin 1), ou ULD anti-S100 (7,5 ml / kg, n = 12, groupe 2) ou ULD anti-S100 + anti-eNOS (7,5 ml / kg, n = 12, groupe 3) par voie intragastrique pendant 9 jours (4 jours avant l'injection de scopolamine, 4 jours contre le fond de scopolamine et 1 jour après la dernière injection de scopolamine). La session d'entraînement dans le labyrinthe aquatique de Morris a été réalisée dans un intervalle de 4 jours de l'injection de scopolamine 60 minutes après l'administration de médicaments testés et 30 minutes après l'administration de scopolamine (4 tests séquentiels à un intervalle de 60 secondes). Le labyrinthe de Morris est un réservoir rond (diamètre - 150 cm, hauteur - 45 cm) rempli d'eau à 30 cm (26-28°C). A 18 cm du bord du récipient, il y a une plateforme cachée (diamètre - 15 cm) immergée à 1,5 cm en dessous du niveau de l'eau. De l'eau trouble produite par addition d'un colorant non toxique (par exemple poudre de lait) rend la plateforme invisible. Pour chaque test, l'animal était placé dans un labyrinthe dans l'un des points initiaux qui sont équidistants de la plateforme cachée et l'animal était amené à trouver la plateforme. Si l'animal ne pouvait pas trouver la plateforme en 120 secondes, l'animal était placé sur la plateforme et laissé pendant 60 secondes et le test était recommencé. Pendant les quatre tests dans un ordre aléatoire les animaux commençaient à marcher dans le labyrinthe deux fois depuis chaque point de départ. Les tests ont été enregistrés sur une bande vidéo puis analysés concernant la distance surmontée dans la recherche de la plateforme dans chaque essai et la période de latence de recherche de la plateforme. Le jour 5 le test a été réalisé : la plateforme a été retirée du labyrinthe et les rats ont pu flotter librement pendant 60 secondes. Le temps passé à l'endroit où la plateforme se trouvait habituellement a été noté. L'administration de scopolamine dégradait sensiblement l'aptitude des animaux à apprendre. Dans le groupe témoin 1, le temps passé par les animaux à chercher les plateformes et la distance sur laquelle les animaux nageaient en cherchant la plateforme, augmentaient sensiblement (tableau 3, 4). Le test montrait que la mémoire des animaux dans le groupe témoin 1 est très dégradée aussi : les animaux dans ce groupe passaient moins de temps à l'endroit où la plateforme se trouvait habituellement que les animaux inacts (tableau 5).

L'administration d'ULD anti-S100 dans le groupe 2 ne conduisait pas à une amélioration des paramètres étudiés (tableaux 3, 4, 5). L'administration d'ULD anti-S100 + anti-eNOS dans le groupe 3 conduisait à une certaine amélioration de l'apprentissage qui se manifestait par un raccourcissement du temps de latence du temps de recherche de la plateforme (tableau 3) et de la distance couverte (tableau 4) en 4 jours d'entraînement et une amélioration de la mémoire comme le reflète l'augmentation du temps passé dans un endroit où la plateforme se trouvait (tableau 5). Tableau 3. Période de latence de recherche de la plateforme, s Groupe Entraînement jour 2~-,e jour 3éme jour 4"e jour Intact, n=12 54,7±6,2 30,8±2,8 26,9±5,1 20,5±3,6 Témoin, n=12 100,1±6,8*** 92,4±9,3*** 81,4±10,7*** 77,7±9,4*** ULD anti-S100, n=12 106,8±7,0 99,3±7,8 95,6±9,0 80,4±11,1 ULD anti-S100 + anti- 94,4±7,2 90,7±8,2 78,3±8,6 60,1±10,2 eNOS, n=12 *** - la différence avec intact est significative, p<0,05

10 Tableau 4. Distance surmontée pour chercher la plateforme, cm Groupe Entraînement lerjour 2emejour 3emejour 4Gmejour Intact, n=12 1055,7±94,6 659,5±62,2 564,8±119,3 406,1±61,2 Témoin, n=12 2587,1±217,2*** 2559,6±250,5*** 2397,9±312,6 2366,1±293,8*** ULD anti-S100, 2797,2±208,9 2865,2±255,1 2857,0±300,8 2457,4±344,4 n=12 ULD anti-S100 + 2434,3±222,8 2529,9±282,7 2344,2±283,0 1905,1±343,7 anti-eNOS, n=12 *** - la différence avec intact est significative, p<0,05

Tableau 5.

15 Temps passé dans un endroit où la plateforme était située habituellement, s.5 Groupe Test 0-30 s. 30-60 s. 0-60 s. Intact, n=12 40,814,1 36,8±3,6 38,5±2,6 Témoin, n=12 18,4±2,8*** 18,8±1,9*** 18,8±1,7*** ULD anti-S100, n=12 13,3±2,1 21,5±2,6 17,6±1,3 ULD anti-S100 + anti-eNOS, n=12 19,1±4,8 23,8±2,2 21,2±2,5 *** - la différence avec intact est significative, p<0,05 Ainsi, dans un modèle de la maladie d'Alzheimer, l'utilisation de la composition pharmaceutique complexe ULD anti-S100 + anti-eNOS était plus efficace que l'administration 5 d'ULD anti-S100 seule.

Claims

REVENDICATIONS1. Composition pharmaceutique d'association destinée à être utilisée dans un procédé pour traiter un trouble choisi dans le groupe consistant en la maladie d'Alzheimer et l'amélioration des fonctions cognitives manifestée par une augmentation de la note MMSE, ladite composition pharmaceutique d'association comprenant a) une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine spécifique du cerveau S-100 et b) une forme activée-potentialisée d'anticorps dirigés contre la NO synthase endothéliale.
2. Composition destinée à être utilisée selon la revendication 1 où la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine spécifique du cerveau S-100 est dirigée contre la protéine spécifique du cerveau S-100 bovine entière.
3. Composition destinée à être utilisée selon la revendication 1 ou 2 où la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine spécifique du cerveau S-100 est dirigée contre la protéine spécifique du cerveau S-100 ayant SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 ou SEQ ID NO: 12.
4. Composition destinée à être utilisée selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 20 où la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la NO synthase endothéliale est dirigée contre la NO synthase bovine entière.
5. Composition destinée à être utilisée selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 où la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la NO synthase endothéliale est dirigée 25 contre la NO synthase humaine entière.
6. Composition destinée à être utilisée selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 où la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine spécifique du cerveau S-100 est sous forme d'un mélange de dilutions homéopathiques C12, C30 et C50 imprégnant un support solide et la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la NO synthase endothéliale est sous forme d'un mélange de dilutions homéopathiques C12, C30 et C50 imprégnant ensuite le support solide.
7. Composition destinée à être utilisée selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 où la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine spécifique du cerveau S- 100 est sous forme d'un mélange de dilutions homéopathiques C12, C30 et C200 imprégnant un support solide et la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la NO synthase endothéliale est sous forme d'un mélange de dilutions homéopathiques C12, C30 et C200 imprégnant ensuite le support solide.
8. Composition destinée à être utilisée selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 où la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la NO synthase endothéliale est sous forme d'un mélange de dilutions homéopathiques C12, C30 et C50 imprégnant un support solide et la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine spécifique du cerveau S-100 est sous forme d'un mélange de dilutions homéopathiques C12, C30 et C50 imprégnant ensuite le support solide.
9. Composition destinée à être utilisée selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 où la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la NO synthase endothéliale est sous forme d'un mélange de dilutions homéopathiques C12, C30 et C200 imprégnant un support solide et la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine spécifique du cerveau S-100 est sous forme d'un mélange de dilutions homéopathiques C12, C30 et C200 imprégnant ensuite le support solide.
10. Composition destinée à être utilisée selon l'une quelconque des revendications 1 à 9 où la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine spécifique du cerveau S-100 et la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la NO synthase endothéliale sont chacune indépendamment un anticorps monoclonal, polyclonal ou naturel.
11. Composition destinée à être utilisée selon l'une quelconque des revendications 1 à où la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine spécifique du cerveau S-100 et la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la NO synthase endothéliale sont chacune indépendamment un anticorps polyclonal. 10
12. Composition destinée à être utilisée selon l'une quelconque des revendications 1 à 11 où la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine spécifique du cerveau S-100 et la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la NO synthase endothéliale sont chacune préparées indépendamment par dilutions centésimales successives couplées avec une agitation de chaque dilution.
13. Composition destinée à être utilisée selon l'une quelconque des revendications 1 à 12 où la composition pharmaceutique d'association est administrée dans une à deux formes galéniques unitaires, chacune des formes galéniques étant administrée d'une fois par jour à six fois par jour, de préférence deux fois par jour.