FR2963562A1 - Composition pharmaceutique et son utilisation dans un procede pour inhiber la production de ou amplifier l'elimination de la proteine p24 - Google Patents

Abstract

La présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre le récepteur CD4, et son utilisation dans un procédé pour inhiber la production de ou amplifier l'élimination de la protéine P24.

Description

COMPOSITION PHARMACEUTIQUE ET SON UTILISATION DANS UN PROCEDE POUR INHIBER LA PRODUCTION DE OU AMPLIFIER L'ELIMINATION DE LA PROTEINE P24 DOMAINE La présente invention concerne une composition pharmaceutique et son utilisation dans un procédé pour inhiber la production de ou amplifier l'élimination de la protéine P24.

ARRIERE-PLAN L'invention concerne le domaine de la médecine et peut être utilisée pour inhiber la production de ou amplifier l'élimination de la protéine P24. La protéine P24 détectée dans le corps humain est connue dans la technique (voir Papadopulos-Eleopulos E, Turner VF, Papadimitriou JM. Is a positive western blot proof of HIV infection ? Biotechnology (NY). 1993 Jun ; 11 (6) : 696-707). L'utilisation d'anticorps dirigés contre les molécules CD4 conjuguées avec des récepteurs anti-chimiokines pour le traitement de VIH-1 est connue dans la technique (WO 01/43779 A2, A61K 47/48, 2001). Cependant, des données expérimentales concernant l'efficacité thérapeutique de ce médicament dans la source mentionnée sont manquantes. L'effet thérapeutique d'une forme extrêmement diluée (ou forme ultra-faible) d'anticorps potentialisés par la technologie homéopathique (forme activée-potentialisée) a été découvert par le Dr. Oleg I. Epshtein. Par exemple, le brevet U.S. n° 7 582 294 décrit un médicament pour traiter l'hyperplasie prostatique bénigne ou la prostatite par administration d'une forme activée par voie homéopathique d'anticorps dirigés contre l'antigène prostatique spécifique (PSA). Des doses ultra-faibles d'anticorps dirigés contre l'interféron gamma se sont révélées être utiles dans le traitement et la prophylaxie du traitement de maladies d'étiologie virale (voir le brevet US n° 7 572 441). CD4 (classe de différenciation 4), ou récepteur CD4 de cellules immunitaires, est une glycoprotéine exprimée sur la surface des cellules immunitaires comme les leucocytes, les cellules T auxiliaires et les cellules T régulatrices, les monocytes, les macrophages et les cellules dendrytiques. De même que de nombreux récepteurs/marqueurs de la surface cellulaire, CD4 est un membre de la superfamille des immunoglobulines. CD4 est un co-récepteur qui assiste le récepteur des cellules T (TCR) avec une cellule présentatrice d'antigène. En utilisant sa partie qui est située à l'intérieur de la cellule T, CD4 amplifie le signal produit par le TCR en recrutant une enzyme, connue comme étant la protéine tyrosine kinase spécifique des lymphocytes, qui est essentielle pour activer de nombreuses molécules impliquées dans la cascade de signalisation d'une cellule T activée. CD4 interagit aussi directement avec des molécules du CMH de classe Il sur la surface de la cellule présentatrice d'antigène en utilisant son domaine extracellulaire. VIH-1 utilise CD4 pour parvenir dans les cellules T hôtes et obtient ceci en liant la protéine d'enveloppe virale connue comme étant gp120 à CD4. La liaison à CD4 créée un déplacement dans la conformation de gp120, ce qui permet à VIH-1 de se lier à un co-récepteur exprimé sur la cellule hôte. Ces co-récepteurs sont des récepteurs de chimiokines CCR5 ou CXCR4, celui de ces corécepteurs qui est utilisé pendant une infection dépend de ce que le virus infecte un macrophage ou une cellule T auxiliaire. A la suite d'un changement structural dans une autre protéine virale (gp4l), VIH insère un peptide de fusion dans la cellule hôte, ce qui permet à la membrane externe du virus de fusionner avec la membrane cellulaire. Voir Miceli MC, Pames JR (1993). "Role of CD4 and CD8 in T cell activation and differentiation". Adv. Immunol. 53 : 59-122.

La présente invention concerne une composition pharmaceutique et son utilisation dans un procédé pour inhiber la production de ou amplifier l'élimination de la protéine P24. La solution au problème existant est présentée sous forme d'une composition pharmaceutique pour inhiber la production de ou 30 amplifier l'élimination de la protéine P24, qui comprend une forme activée- potentialisée d'anticorps dirigés contre le récepteur CD4.

RESUME Dans un aspect, l'invention fournit une composition pharmaceutique comprenant une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre le récepteur CD4. Dans un mode de réalisation, la composition pharmaceutique comprend en outre un support solide, où ladite forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre le récepteur CD4 imprègne ledit support solide. Dans une variante, la composition pharmaceutique est sous forme d'un comprimé. De préférence, la composition pharmaceutique incluant ladite forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre le récepteur CD4 est sous forme d'un mélange de dilutions homéopathiques C12, C30 et C200. Il est spécifiquement envisagé que ledit mélange de dilutions homéopathiques C12, C30 et C200 imprègne un support solide. De préférence, la composition pharmaceutique incluant ladite forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre le récepteur CD4 est sous forme d'un mélange de dilutions homéopathiques C12, C30 et C50. Il est spécifiquement envisagé que ledit mélange de dilutions homéopathiques C12, C30 et C50 imprègne un support solide. La forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre le récepteur CD4 peut être un anticorps monoclonal, polyclonal ou naturel. Il est spécifiquement envisagé que la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre le récepteur CD4 soit un anticorps polyclonal. L'invention fournit des formes activées-potentialisées d'anticorps dirigés contre un ou des antigènes ayant des séquences décrites dans la description et revendiquées dans les revendications annexées. Dans une variante, la composition pharmaceutique inclut une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre le récepteur CD4 préparée par dilutions centésimales successives couplées avec une agitation de chaque dilution. Une agitation verticale est spécifiquement envisagée. Dans un autre aspect, l'invention fournit une composition pharmaceutique destinée à être utilisée dans un procédé pour inhiber la production de ou amplifier l'élimination de la protéine P24, ledit procédé comprenant l'administration d'une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre le récepteur CD4 pour inhiber ainsi la production ou amplifier l'élimination de la protéine P24. De préférence, la forme activée- potentialisée d'un anticorps dirigé contre le récepteur CD4 est administrée sous forme de composition pharmaceutique. Dans un mode de réalisation, la composition pharmaceutique est administrée sous forme d'une forme galénique orale solide qui comprend un support pharmaceutiquement acceptable et ladite forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre le récepteur CD4 imprégnant ledit support. Dans une variante, ladite forme galénique orale solide est un comprimé. Des variantes et des modes de réalisation sont fournis.

Selon cet aspect de l'invention, la composition pharmaceutique peut être administrée dans une à deux formes galéniques unitaires, chacune des formes galéniques étant administrée de une fois par jour à quatre fois par jour. Dans une variante, la composition pharmaceutique est administrée deux fois par jour, chaque administration consistant en deux formes galéniques orales. Dans une variante, la composition pharmaceutique est administrée dans une à deux formes galéniques unitaires, chacune des formes galéniques étant administrée deux fois par jour. Toutes les variantes et tous les modes de réalisation décrits au sujet de l'aspect composition de l'invention peuvent être utilisés avec cet autre aspect de l'invention.

DESCRIPTION DETAILLEE L'invention est définie en référence aux revendications annexées. 25 Concernant les revendications, le glossaire qui suit fournit les définitions pertinentes. Le terme "anticorps" tel qu'il est utilisé ici est destiné à désigner une immunoglobuline qui se lie spécifiquement à, et est donc définie comme étant complémentaire de, une organisation spatiale et polaire particulière 30 d'une autre molécule. Les anticorps tels que cités dans les revendications peuvent inclure une immunoglobuline complète ou un fragment de celle-ci, peuvent être naturels, polyclonaux ou monoclonaux, et peuvent inclure différentes classes et isotypes, comme IgA, IgD, IgE, IgG1, IgG2a, IgG2b et IgG3, IgM, etc. Leurs fragments peuvent inclure Fab, Fv et F(ab')2, Fab', 35 et analogues. "Anticorps" au singulier inclut « anticorps » au pluriel.

Le terme "forme activée-potentialisée" ou "forme potentialisée" respectivement, concernant les anticorps cités ici est utilisé pour désigner un produit de potentialisation homéopathique d'une quelconque solution initiale d'anticorps. "Potentialisation homéopathique" désigne l'utilisation de procédés d'homéopathie pour conférer une activité homéopathique à une solution initiale de substance pertinente. Bien qu'elle ne soit pas ainsi limitée, la « potentialisation homéopathique » peut impliquer, par exemple, des dilutions consécutives répétées combinées avec un traitement externe, en particulier une agitation (mécanique) verticale. En d'autres termes, une solution initiale d'anticorps est soumise à des dilutions répétées consécutives et de multiples agitations verticales de chaque solution obtenue conformément à la technologie homéopathique. La concentration préférée de la solution initiale d'anticorps dans le solvant, de préférence l'eau ou un mélange eau-alcool éthylique, va d'environ 0,5 à environ 5,0 mg/ml. Le processus préféré pour préparer chaque composant, c'est-à-dire la solution d'anticorps, est l'utilisation du mélange de trois dilutions aqueuses ou aqueuses-alcooliques de la solution de matrice primaire (teinture mère) d'anticorps diluée 10012, 10& et 100200 fois, respectivement, qui équivaut à des dilutions homéopathiques centésimales (C12, C30, et C200) ou l'utilisation du mélange de trois dilutions aqueuses ou aqueuses-alcooliques de la solution de matrice primaire d'anticorps diluée 10012, 0030 et 0050 fois, respectivement, qui équivaut à des dilutions homéopathiques centésimales (C12, C30 et C50). Des exemples de potentialisation homéopathique sont décrits dans les brevets U.S. n°. 7 572 441 et 7 582 294. Tandis que le terme "forme activée-potentialisée" est utilisé dans les revendications, le terme "doses ultra-faibles" est utilisé dans les exemples. Le terme "doses ultra-faibles" est devenu un terme technique dans le domaine technique créé par l'étude et l'utilisation d'une forme de substance diluée et potentialisée par voie homéopathique. Le terme « dose ultra-faible » ou « doses ultra-faibles » est considéré comme soutenant totalement et principalement synonyme du terme forme « activée-potentialisée » utilisé dans les revendications. En d'autres termes, un anticorps est dans la forme « activée- potentialisée » ou « potentialisée » quand trois facteurs sont présents. Tout d'abord, la forme « activée-potentialisée » de l'anticorps est un produit d'un procédé de préparation bien accepté dans la technique homéopathique. Deuxièmement, la forme « activée-potentialisée » de l'anticorps doit avoir une activité biologique déterminée par des procédés bien acceptés en pharmacologie moderne. Et troisièmement, l'activité biologique présentée par la forme « activée potentialisée » de l'anticorps ne peut pas être expliquée par la présence de la forme moléculaire de l'anticorps dans le produit final du processus homéopathique. Par exemple, la forme activée potentialisée d'anticorps peut être préparée en soumettant un anticorps isolé initial sous une forme moléculaire à de multiples dilutions consécutives couplées avec un impact externe, comme une agitation mécanique. Le traitement externe au cours de la réduction de la concentration peut aussi être accompli, par exemple, par exposition à des facteurs ultrasoniques, électromagnétiques, ou d'autres facteurs physiques. V. Schwabe "Homeopathic medicines", M., 1967, brevets U.S. No. 7 229 648 et 4 311 897, décrit de tels processus qui sont des procédés de potentialisation homéopathique bien acceptés dans la technique homéopathique. Ce processus donne naissance à une diminution uniforme de la concentration moléculaire de la forme moléculaire initiale de l'anticorps. Ce processus est répété jusqu'à ce que l'activité homéopathique souhaitée soit obtenue. Pour l'anticorps individuel, l'activité homéopathique requise peut être déterminée en soumettant les dilutions intermédiaires à des tests biologiques dans le modèle pharmacologique souhaité. Bien qu'elle ne soit pas ainsi limitée, la « potentialisation homéopathique » peut comprendre, par exemple, des dilutions consécutives répétées combinées avec un traitement externe, en particulier une agitation (mécanique) verticale. En d'autres termes, une solution d'anticorps initiale est soumise à des dilutions consécutives répétées et de multiples agitations verticales de chaque solution obtenue selon la technologie homéopathique. La concentration préférée de la solution initiale d'anticorps dans le solvant, de préférence, l'eau ou un mélange eau-alcool éthylique, va d'environ 0,5 à environ 5,0 mg/ml. Le processus préféré pour préparer chaque composant, c'est-à-dire la solution d'anticorps, est l'utilisation du mélange de trois dilutions aqueuses ou aqueuses-alcooliques de la solution de matrice primaire (teinture mère) d'anticorps diluée 10012, 10030 et 100200 fois, respectivement, qui équivaut à des dilutions homéopathiques centésimales C12, C30 et C200 ou le mélange de trois dilutions aqueuses ou aqueuses-alcooliques de la solution de matrice primaire (teinture mère) diluée 10012, 10030 et 10050 fois, respectivement, qui équivaut à des dilutions homéopathiques centésimales C12, C30 et C50. Des exemples de la façon d'obtenir l'activité souhaitée sont donnés aussi, par exemple, dans les brevets U.S. n°. 7 229 648 et 4 311 897. Le processus applicable à la forme « activée-potentialisée » des anticorps décrite ici est décrit de manière plus détaillée ci-dessous. Il y a eu des controverses considérables concernant le traitement homéopathique de sujets humains. Tandis que la présente invention est basée sur des processus homéopathiques acceptés pour obtenir la forme « activée-potentialisée » d'anticorps, elle n'est pas basée seulement sur l'homéopathie chez des sujets humains pour mettre en évidence une activité. II a été découvert de manière surprenante par l'inventeur de la présente demande et amplement démontré dans les modèles pharmacologiques acceptés que le solvant obtenu finalement à partir de dilutions multiples consécutives d'une forme moléculaire initiale d'un anticorps a une activité définitive non liée à la présence des traces de la forme moléculaire de l'anticorps dans la dilution cible. La forme « activée-potentialisée » de l'anticorps fournie ici est testée pour l'activité biologique dans des modèles pharmacologiques d'activité bien acceptés. Les expériences présentées ci- dessous fournissent des indices d'activité biologique dans de tels modèles ; elle est associée à une action antivirale et, peut-être, immunotrope plus importante, une intensification de l'activation des lymphocytes CD4 et un accroissement du nombre de récepteurs sur la surface des cellules CD4. Egalement, la forme « activée-potentialisée » d'anticorps revendiquée englobe seulement des solutions ou des préparations solides dont l'activité biologique ne peut pas être expliquée par la présence de la forme moléculaire de l'anticorps restant de la solution de départ initiale. En d'autres termes, tandis qu'il est envisagé que la forme « activée-potentialisée » de l'anticorps peut contenir des traces de la forme moléculaire initiale de l'anticorps, l'homme du métier ne pourrait pas attribuer l'activité biologique observée dans les modèles pharmacologiques acceptés à la forme moléculaire de l'anticorps restante avec un quelconque degré de plausibilité du fait des concentrations extrêmement faibles de la forme moléculaire de l'anticorps restant après les dilutions consécutives. Tandis que l'invention n'est pas limitée par une quelconque théorie spécifique, l'activité biologique de la forme « activée-potentialisée » des anticorps de la présente invention n'est pas attribuable à la forme moléculaire initiale de l'anticorps. Est préférée la forme « activée-potentialisée » d'anticorps sous forme liquide ou solide dans laquelle la concentration de la forme moléculaire de l'anticorps est inférieure à la limite de détection des techniques analytiques acceptées, comme l'électrophorèse capillaire et la chromatographie liquide à hautes performances. Est particulièrement préférée la forme « activée-potentialisée » d'anticorps sous forme liquide ou solide dans laquelle la concentration de la forme moléculaire de l'anticorps est inférieure au nombre d'Avogadro. Dans la pharmacologie des formes moléculaires de substances thérapeutiques, il est de pratique courante de créer une courbe dose-réponse dans laquelle le niveau de réponse pharmacologique est représenté graphiquement en fonction de la concentration du médicament actif administré au sujet ou testé in vitro. Le niveau minimal du médicament qui produit une quelconque réponse détectable est connu comme étant une dose seuil. II est particulièrement envisagé et préféré que la forme « activée-potentialisée » des anticorps contienne un anticorps moléculaire, s'il y en a, à une concentration inférieure à la dose seuil pour la forme moléculaire de l'anticorps dans le modèle biologique donné. La présente invention fournit une composition pharmaceutique qui inclut une forme activée-potentialisée d'anticorps dirigés contre le récepteur CD4, préparée selon la technologie homéopathique de potentialisation par dilution constante répétée et action externe intermédiaire d'agitation comme décrit de manière plus détaillée ci-dessous. La composition pharmaceutique de l'invention est particulièrement utile pour inhiber la production de ou amplifier l'élimination de la protéine P24. Comme le montrent les exemples, la composition pharmaceutique de l'invention possède un effet thérapeutique inattendu, qui se manifeste dans une efficacité thérapeutique particulière dans le traitement de maladies associées avec une augmentation de la production de protéine P24.

La composition pharmaceutique de l'invention élargit l'arsenal de préparations disponibles pour inhiber la production de ou amplifier l'élimination de la protéine P24. La composition pharmaceutique d'association selon cet aspect de l'invention peut être sous forme liquide ou sous forme solide. Chacune des formes activées potentialisées des anticorps incluses dans la composition pharmaceutique est préparée à partir d'une forme moléculaire initiale de l'anticorps via un processus accepté dans la technique homéopathique. Les anticorps de départ peuvent être des anticorps monoclonaux ou polyclonaux préparés selon des processus connus, par exemple comme décrit dans Immunotechniques, G. Frimel, M., "Meditsyna", 1987, p. 9-33; "Hum. Antibodies. Monoclonal and recombinant antibodies, 30 years alter" de Laffly E., Sodoyer R. - 2005 - Vol. 14. - N 1-2. P.33-55. Des anticorps monoclonaux peuvent être obtenus, par exemple, par la technologie des hybridomes. Le stade initial du processus comprend une immunisation basée sur les principes déjà développés au cours de la préparation d'antisérums polyclonaux. Les stades supplémentaires de l'opération comprennent la production de cellules hybrides générant des clones d'anticorps de spécificité identique. Leur isolement séparé est accompli au moyen des mêmes procédés que dans le cas de la préparation d'antisérums polyclonaux. Des anticorps polyclonaux peuvent être obtenus via l'immunisation active d'animaux. Dans ce but, par exemple, des animaux appropriés (par exemple des lapins) reçoivent une série d'injections de l'antigène approprié (récepteur CD4). Le système immunitaire des animaux génère des anticorps correspondants, qui sont recueillis auprès des animaux d'une manière connue. Ce processus permet la préparation d'un sérum riche en anticorps monospécifiques. Si on le souhaite, le sérum contenant des anticorps peut être purifié, par exemple par chromatographie d'affinité, fractionnement par précipitation de sels, ou chromatographie d'échange d'ions. Le sérum enrichi en anticorps purifié résultant peut être utilisé comme produit de départ pour la préparation de la forme activée-potentialisée des anticorps. La concentration préférée de la solution initiale d'anticorps résultante dans le solvant, de préférence l'eau ou un mélange eau-alcool éthylique, va d'environ 0,5 à environ 5,0 mg/ml. Le processus préféré pour préparer chaque composant du médicament d'association selon la présente invention est l'utilisation du mélange de trois dilutions aqueuses-alcooliques de la solution de matrice primaire d'anticorps diluée 10012, 10030 et 10050 fois, respectivement, qui équivaut à des dilutions homéopathiques centésimales C12, C30, et C50 ou diluée 10012, 10030 et 100200 fois, respectivement, qui équivaut à des dilutions homéopathiques centésimales C12, C30 et C200. Pour préparer une forme galénique solide, un support solide est traité avec la dilution souhaitée obtenue via le processus homéopathique. Pour obtenir une forme galénique unitaire solide de l'association de l'invention, la masse du support est imprégnée de chacune des dilutions. Les deux ordres d'imprégnation sont appropriés pour préparer la forme galénique d'association souhaitée. Dans un mode de réalisation préféré, le produit de départ pour la préparation de la forme activée potentialisée qui comprend la composition pharmaceutique de l'invention est un anticorps polyclonal produit dans des animaux dirigé contre l'antigène correspondant, à savoir le récepteur CD4. Pour obtenir la forme activée-potentialisée d'anticorps polyclonaux dirigés contre le récepteur CD4, l'antigène souhaité peut être injecté comme immunogène à un animal de laboratoire, de préférence des lapins. Des anticorps polyclonaux dirigés contre le récepteur CD4 peuvent être obtenus au moyen de la molécule entière de récepteur CD4 humain de séquence suivante :

SEQ ID NO: 1 Met Asn Arg Gly Val Pro Phe Arg His Leu Leu Leu Val Leu Gln 1 5 10 15 Leu Ala Leu Leu Pro Ala Ala Thr Gln Gly Lys Lys Val Val Leu 16 20 25 30 Gly Lys Lys Gly Asp Thr Val Glu Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gln 31 35 40 45 Lys Lys Ser Ile Gln Phe His Trp Lys Asn Ser Asn Gln Ile Lys 46 50 55 60 Ile Leu Gly Asn Gln Gly Ser Phe Leu Thr Lys Gly Pro Ser Lys 61 65 70 75 Leu Asn Asp Arg Ala Asp Ser Arg Arg Ser Leu Trp Asp Gln Gly 76 80 85 90 Asn Phe Pro Leu Ile Ile Lys Asn Leu Lys Ile Glu Asp Ser Asp 91 95 100 105 Thr Tyr Ile Cys Glu Val Glu Asp Gln Lys Glu Glu Val Gln Leu 106 110 115 120 Leu Val Phe Gly Leu Thr Ala Asn Ser Asp Thr His Leu Leu Gln 121 125 130 135 Gly Gln Ser Leu Thr Leu Thr Leu Glu Ser Pro Pro Gly Ser Ser 136 140 145 150 Pro Ser Val Gln Cys.Arg Ser Pro Arg Gly Lys Asn Ile Gln Gly 151 155 160 165 Gly Lys Thr Leu Ser Val Ser Gln Leu Glu Leu Gln Asp Ser Gly 166 170 175 180 Thr Trp Thr Cys Thr Val Leu Gln Asn Gln Lys Lys Val Glu Phe 181 185 190 195 Lys Ile Asp Ile Val Val Leu Ala Phe Gln Lys Ala Ser Ser Ile 196 200 205 210 Val Tyr Lys Lys Glu Gly Glu Gln Val Glu Phe Ser Phe Pro Leu 211 215 220 225 Ala Phe Thr Val Glu Lys Leu Thr Gly Ser Gly Glu Leu Trp Trp 226 230 235 240 Gln Ala Glu Arg Ala Ser Ser Ser Lys Ser Trp Ile Thr Phe Asp 241 245 250 255 Leu Lys Asn Lys Glu Val Ser Val Lys Arg Val Thr Gln Asp Pro 256 260 265 270 Lys Leu Gln Met Gly Lys Lys Leu Pro Leu His Leu Thr Leu Pro 271 275 280 285 Gln Ala Leu Pro Gln Tyr Ala Gly Ser Gly Asn Leu Thr Leu Ala 286 290 295 300 Leu Glu Ala Lys Thr Gly Lys Leu His Gln Glu Val Asn Leu Val 301 305 310 315 Val Met Arg Ala Thr Gln Leu Gln Lys Asn Leu Thr Cys Glu Val 316 320 325 330 Trp Gly Pro Thr Ser Pro Lys Leu Met Leu Ser Leu Lys Leu Glu 331 335 340 345 Asn Lys Glu Ala Lys Val Ser Lys Arg Glu Lys Ala Val Trp Val 346 350 355 360 Leu Asn Pro Glu Ala Gly Met Trp Gln Cys Leu Leu Ser Asp Ser 361 365 370 375 Gly Gln Val Leu Leu Glu Ser Asn Ile Lys Val Leu Pro Thr Trp 376 380 385 390 Gln Pro Met Ala Leu Ile Val 395 400 Leu Phe Ile Gly Leu Gly Ile 410 415 Arg Arg Arg Gln Ala Glu Arg 425 430 Ser Glu Lys Lys Thr Cys Gln Cys 440 445 Les anticorps polyclonaux dirigés contre le récepteur CD4 peuvent être obtenus au moyen d'un fragment polypeptidique de récepteur CD4 choisi, par exemple, parmi les séquences d'aminoacides suivantes : 15 SEQ ID NO: 2 Ser Thr Pro Val 391 Ala Gly Leu Leu 406 Arg Cys Arg His 421 Lys Arg Leu Leu 436 Phe Gln Lys Thr Cys Ser Pro Ile 10 451 445 458 Leu Gly Gly Val 405 Phe Phe Cys Val 420 Met Ser Gln Ile 435 Pro His Arg 450 Gly Lys Lys 31 20 Lys Lys Ser 46 Ile Leu Gly 61 Leu Asn Asp 25 76 Asn Phe Pro 91 Thr Tyr Ile 106 30 Leu Val Phe 121 Gly Gln Ser 136 Pro Ser Val 35 151 Gly Asp Thr 35 Ile Gln Phe 50 Asn Gin Gly 65 Arg Ala Asp 80 Leu Ile Ile 95 Cys Glu Val 110 Gly Leu Thr 125 Leu Thr Leu 140 Gln Cys Arg 155 Gly Lys 25 Val Glu Leu Thr Cys 40 His Trp Lys Asn Ser 55 Ser Phe Leu Thr Lys 70 Ser Arg Arg Ser Leu 85 Lys Asn Leu Lys Ile 100 Glu Asp Gln Lys Glu 115 Ala Asn Ser Asp Thr 130 Thr Leu Glu Ser Pro 145 Ser Pro Arg Gly Lys 160 Lys Val Val Leu 30 Thr Ala Ser Gln 45 Asn Gln Ile Lys 60 Gly Pro Ser Lys 75 Trp Asp Gln Gly 90 Glu Asp Ser Asp 105 Glu Val Gln Leu 120 His Leu Leu Gln 135 Pro Gly Ser Ser 150 Asn Ile Gln Gly 165 Gly Lys Thr Leu Ser Val Ser Gln Leu Glu Leu Gln Asp Ser Gly 166 170 175 180 Thr Trp Thr Cys Thr Val Leu Gln Asn Gln Lys Lys Val Glu Phe 181 185 190 195 Lys Ile Asp Ile Val Val Leu Ala Phe Gln Lys Ala Ser Ser Ile 196 200 205 210 Val Tyr Lys Lys Glu Gly Glu Gin Val Glu Phe Ser Phe Pro Leu 211 215 220 225 Ala Phe Thr Val Glu Lys Leu Thr Gly Ser Gly Glu Leu Trp Trp 226 230 235 240 Gln Ala Glu Arg Ala Ser Ser Ser Lys Ser Trp Ile Thr Phe Asp 241 245 250 255 Leu Lys Asn Lys Glu Val Ser Val Lys Arg Val Thr Gln Asp Pro 256 260 265 270 Lys Leu Gin Met Gly Lys Lys Leu Pro Leu His Leu Thr Leu Pro 271 275 280 285 Gln Ala Leu Pro Gln Tyr Ala Gly Ser Gly Asn Leu Thr Leu Ala 286 290 295 300 Leu Glu Ala Lys Thr Gly Lys Leu His Gln Glu Val Asn Leu Val 301 305 310 315 Val Met Arg Ala Thr Gln Leu Gln Lys Asn Leu Thr Cys Glu Val 316 320 325 330 Trp Gly Pro Thr Ser Pro Lys Leu Met Leu Ser Leu Lys Leu Glu 331 335 340 345 Asn Lys Glu Ala Lys Val Ser Lys Arg Glu Lys Ala Val Trp Val 346 350 355 360 Leu Asn Pro Glu Ala Gly Met Trp Gln Cys Leu Leu Ser Asp Ser 361 365 370 375 Gly Gln Val Leu Leu Glu Ser Asn Ile Lys Val Leu Pro Thr Trp 376 380 Ser Thr Pro Val Gln Pro 391 395 Ala Gly Leu Leu Leu Phe 406 410 Arg Cys Arg His Arg Arg Arg Gln Ala 421 425 385 390 Met Ala Leu Ile Val Leu Gly Gly Val 400 405 Ile Gly Leu Gly Ile Phe Phe Cys val 415 420 Glu Arg Met Ser Gln Ile 430 435 Lys Arg Leu Leu Ser Glu Lys Lys Thr Cys Gln Cys Pro His Arg 436 440 445 450 Phe Gln Lys Thr Cys Ser Pro Ile 451 455 458 SEQ ID NO: 3 Ile Gly Leu Gly Ile Phe Phe Cys Val 412 415 420 Arg Cys Arg His Arg Arg Arg Gln Ala Glu Arg Met Ser Gln Ile 10 421 425 430 435 Lys Arg Leu Leu Ser Glu Lys Lys Thr Cys Gln Cys Pro His Arg 436 440 445 450 Phe Gln Lys Thr Cys Ser Pro Ile 451 455 458 15 SEQ ID NO: 4 Gly Lys Lys Val Val Leu 26 30 Gly Lys Lys Gly Asp Thr Val Glu Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gin 20 31 35 40 45 Lys Lys Ser Ile Gln Phe His Trp Lys Asn Ser Asn Gln Ile Lys 46 50 55 60

SEQ ID NO: 5 25 Asp 105 Thr Tyr Ile Cys Glu Val Glu Asp Gln Lys Glu Glu Val Gln 106 110 115 119

30 SEQ ID NO: 6 Lys Glu Glu Val Gln Leu 115 120 Leu Val Phe Gly Leu Thr Ala Asn Ser Asp Thr His Leu Leu Gln 121 125 130 135 35 Gly pin Ser Leu 136 1395 Le processus cité à titre d'exemple pour la préparation des anticorps polyclonaux de départ dirigés contre le récepteur CD4 peut être décrit comme suit. 7-9 jours avant le prélèvement d'échantillons sanguins, 1-3 injections intraveineuses de l'antigène souhaité sont faites aux lapins pour augmenter le niveau d'anticorps polyclonaux dans la circulation sanguine des lapins. Lors de l'immunisation, des échantillons sanguins sont prélevés pour tester le niveau d'anticorps. Typiquement, le niveau maximum de réaction immunitaire de l'antigène soluble est obtenu dans un intervalle de 40 à 60 jours après la première injection de l'antigène. A l'achèvement du premier cycle d'immunisation, les lapins ont une période de réhabilitation de 30 jours, après quoi une ré-immunisation est accomplie avec 1-3 injections intraveineuses supplémentaires. Pour obtenir un antisérum contenant les anticorps souhaités, le sang des lapins immunisés est recueilli sur les lapins et placé dans un tube de centrifugeuse de 50 ml. Les caillots de produit formés sur les côtés du tube sont retirés avec une spatule en bois, et une baguette est placée dans le caillot au centre du tube. Le sang est ensuite placé dans un réfrigérateur pendant une nuit à une température d'environ 40°C. Le jour suivant, le caillot sur la spatule est retiré, et le liquide restant est centrifugé pendant 10 min à 13000 tours par minute. Le fluide surnageant est l'antisérum cible. L'antisérum obtenu est typiquement jaune. 20 % de NaN3 (concentration en poids) est ajouté à l'antisérum à une concentration finale de 0,02 % 'et conservé avant l'utilisation à l'état congelé à la température de -20°C ou sans NaN3 à la température de -70°C. Pour séparer les anticorps cibles dirigés contre l'interféron gamma de l'antisérum, la séquence d'absorption sur une phase solide suivante est appropriée : 10 ml d'antisérum de lapins sont dilués deux fois avec NaCl 0,15 M, après quoi 6,26 g de Na2SO4 sont ajoutés, mélangés et incubés pendant 12-16 heures à 4°C. Le sédiment est retiré par centrifugation, dilué dans 10 ml de tampon phosphate et dialysé contre le même tampon pendant une nuit à la température ambiante. Après le retrait du sédiment, la solution est appliquée à une colonne de DEAE-cellulose équilibrée par du tampon phosphate. La fraction d'anticorps est déterminée en mesurant la densité optique de l'éluat à 280 nm.

Les anticorps bruts isolés sont purifiés par le procédé de chromatographie d'affinité en fixant les anticorps obtenus dirigés contre le récepteur CD4 situés sur la matrice insoluble du milieu de chromatographie, avec élution subséquente par des solutions salées aqueuses concentrées. La solution tampon résultante est utilisée comme solution initiale pour le processus de dilution homéopathique utilisé pour préparer la forme activée-potentialisée des anticorps. La concentration préférée de la solution de matrice initiale des anticorps polyclonaux de lapin purifiés sur antigène dirigés contre le récepteur CD4 est 0,5 à 5,0 mg/ml, de préférence 2,0 à 3,0 mg/ml. La forme activée potentialisée d'un anticorps dirigé contre le récepteur CD4 peut être préparée à partir d'une solution initiale par potentialisation homéopathique, de préférence en utilisant le procédé de diminution de concentration proportionnelle par dilution successive de 1 partie de chaque solution précédente (en commençant avec la solution initiale) dans 9 parties (pour une dilution décimale), ou dans 99 parties (pour une dilution centésimale), ou dans 999 parties (pour une dilution millésimale) d'un solvant neutre, en commençant avec une concentration de la solution initiale d'anticorps dans la solvant, de préférence l'eau ou un mélange eau-alcool éthylique, dans la plage d'environ 0,5 à environ 5,0 mg/ml, couplée avec un impact externe. De préférence, l'impact externe comprend de multiples agitations verticales (dynamisation) de chaque dilution. De préférence, des récipients séparés sont utilisés pour chaque dilution subséquente jusqu'au niveau d'activité requis, ou le facteur de dilution requis. Ce procédé est bien accepté dans la technique homéopathique. Voir par exemple V. Schwabe "Homeopathic medicines", M., 1967, p. 14-29. Par exemple, pour préparer une dilution 12-centésimale (appelée C12), une partie de la solution de matrice initiale d'anticorps dirigés contre le récepteur CD4 d'une concentration de 3,0 mg/ml est diluée dans 99 parties de solvant neutre aqueux ou aqueux-alcoolique (de préférence d'alcool éthylique à 15 %) puis agitée verticalement de nombreuses fois (10 et plus) pour créer la 1ère dilution centésimale (appelée Cl). La 2ème dilution centésimale (C2) est préparée à partir de la 1 ère dilution centésimale Cl. Ce processus est répété 11 fois pour préparer la 1 2gme dilution centésimale C12. Ainsi, la 12eme dilution centésimale C12 représente une solution obtenue par 12 dilutions successives d'une partie de la solution de matrice initiale d'anticorps contre l'interféron gamma d'une concentration de 3,0 mg/ml dans 99 parties d'un solvant neutre dans des récipients différents, ce qui équivaut à la dilution homéopathique centésimale C12. Des processus similaires avec le facteur de dilution pertinent sont accomplis pour obtenir les dilutions C30, C50 et C200. Les dilutions intermédiaires peuvent être testées dans un modèle biologique souhaité pour vérifier l'activité. Les formes activées potentialisées préférées pour des anticorps comprenant l'association de l'invention sont un mélange des dilutions C12, C30 et C50 ou C12, C30 et C200 pour chaque forme activée-potentialisée. Quand le mélange de différentes dilutions homéopathiques (principalement centésimales) de la substance active est utilisé comme composant liquide biologiquement actif, chaque composant de la composition (par exemple C12, C30, C50, C200) est préparé séparément selon le processus décrit ci-dessus jusqu'à ce que l'avant-dernière dilution soit obtenue (par exemple jusqu'à C11, C29 et C199 respectivement), puis une partie de chaque composant est ajoutée dans un récipient selon la composition du mélange et mélangée avec la quantité requise de solvant (par exemple avec 97 parties pour une dilution centésimale). Il est possible d'utiliser la substance active sous forme d'un mélange de différentes dilutions homéopathiques, par exemple décimales et/ou centésimales (D20, C30, C100 ou C12, C30, C50 ou C12, C30, C200, etc.), dont l'efficacité est déterminée expérimentalement en testant la dilution dans un modèle biologique approprié, par exemple dans des modèles décrits dans les présents exemples. Au cours de la potentialisation et de la diminution de la concentration, l'agitation verticale peut être remplacée par une exposition externe à des ultrasons, un champ électromagnétique ou tout processus d'impact externe similaire accepté dans la technique homéopathique. De préférence, la composition pharmaceutique de l'invention peut être sous forme d'une forme galénique unitaire liquide ou solide. Le support liquide préféré est l'eau ou un mélange eau-alcool éthylique. La forme galénique unitaire solide de la composition pharmaceutique de l'invention peut être préparée par imprégnation d'un support pharmaceutiquement acceptable solide avec le mélange de solutions aqueuses ou aqueuses-alcooliques de composant actif sous forme activée-potentialisée. A titre d'alternative, le support peut être imprégné successivement avec chaque dilution requise. Les deux ordres d'imprégnation sont acceptables.

De préférence, la composition pharmaceutique dans la forme galénique unitaire solide est préparée à partir de granules du support pharmaceutiquement acceptable qui a été préalablement saturé avec les dilutions aqueuses ou aqueuses-alcooliques de la forme activée-potentialisée d'anticorps contre le récepteur CD4. La forme galénique solide peut être sous toute forme connue dans la technique pharmaceutique, incluant un comprimé, une capsule, une pastille et d'autres. Comme ingrédients pharmaceutiques inactifs, on peut utiliser le glucose, le saccharose, le maltose, l'amidon, l'isomaltose, l'isomalt et d'autres mono-, oligo- et polysaccharides utilisés dans la fabrication des produits pharmaceutiques ainsi que des mélanges technologiques des ingrédients pharmaceutiques inactifs mentionnés ci-dessus avec d'autres excipients pharmaceutiquement acceptables, par exemple l'isomalt, la crospovidone, le cyclamate de sodium, la saccharine sodique, l'acide citrique anhydrique, etc.), incluant les lubrifiants, les désintégrants, les liants et les agents colorants. Les supports préférés sont le lactose et l'isomalt. La forme galénique pharmaceutique peut inclure en outre des excipients pharmaceutiques standards, par exemple la cellulose microcristalline, le stéarate de magnésium et l'acide citrique. Pour préparer la forme orale solide, des granules de 100- 300 µm de lactose sont imprégnées de solutions aqueuses ou de solutions aqueuses-alcooliques de la forme activée-potentialisée d'anticorps dirigés contre le récepteur CD4 dans le rapport de 1 kg de solution d'anticorps pour 5 ou 10 kg de lactose (1 : 5 à 1 : 10). Pour réaliser l'imprégnation, les granules de lactose sont exposées à une irrigation à saturation dans le lit bouillonnant fluidisé dans une installation à lit bouillonnant (par exemple "Hüttlin Pilotlab" de Hüttlin GmbH) avec séchage subséquent via un courant d'air chauffé à une température inférieure à 40°C. La quantité estimée des granules séchés (10 à 34 parties en poids) saturés de la forme activée-potentialisée d'anticorps est placée dans le mélangeur, et mélangée avec 25 à 45 parties en poids de lactose pur "non saturé" (utilisée pour réduire les coûts et simplifier et accélérer le processus technologique sans diminuer l'efficacité du traitement), ainsi qu'avec 0,1 à 1 partie en poids de stéarate de magnésium, et 3 à 10 parties en poids de cellulose microcristalline. La masse de comprimés obtenue est mélangée uniformément, et transformée en comprimés par compression à sec directe (par exemple dans une presse à comprimés Korsch - XL 400) pour former des pilules rondes de 150 à 500 mg, de préférence de 300 mg. Après la production des comprimés, des pilules de 300 mg sont obtenues, qui sont saturées de solution aqueuse-alcoolique (3,0-6,0 mg/pilule) de la forme activée- potentialisée d'anticorps dirigés contre le récepteur CD4 sous forme d'un mélange de dilutions homéopathiques centésimales C12, C30 et C50 ou d'un mélange de dilutions homéopathiques centésimales C12, C30 et C200. Tandis que l'invention n'est pas limitée à une quelconque théorie spécifique, on considère que la forme activée-potentialisée des anticorps décrite ici ne contient pas la forme moléculaire de l'anticorps en une quantité suffisante pour avoir l'activité biologique attribuée à une telle forme moléculaire. L'activité biologique du médicament d'association (composition pharmaceutique) de l'invention est amplement démontrée dans les exemples annexés. De préférence, l'association de l'invention est administrée de une fois par jour à quatre fois par jour, de préférence deux fois par jour, chaque administration incluant une ou deux formes galéniques unitaires d'association.

L'invention est illustrée plus précisément en se référant aux exemples non limitatifs annexés.

EXEMPLES Exemple 1.

L'évaluation de l'efficacité de l'inhibition de la production ou de l'amplification de l'élimination de la protéine P24 par une dose ultra-faible d'anticorps polyclonaux de lapin dirigés contre le récepteur CD4 (un mélange de dilutions homéopathiques C12+C30+C50) (ULD Ab CD4)), a été réalisée en utilisant des cellules mononucléées de sang périphérique humain infectées avec la souche HIV-1 LAI in vitro.

Des cellules mononucléées du sang périphérique humain ont été isolées à partir du sang d'un donneur sain séronégatif par centrifugation sur un gradient de densité Ficoll-Hypaque. Les cellules ont été stimulées pendant 3 jours avec 1 pg/mL de phytohémagglutinine P et 5 UI/mL d'interleukine-2 humaine recombinante. Pour évaluer l'efficacité de l'inhibition de la production ou de l'amplification de l'élimination de la protéine P24, les produits ont été placés dans un puits contenant 100 pL de cellules mononucléées activées 24 heures avant ou 15 minutes après l'infection des cellules avec la souche HIV-1-LAI à la dose de 100 TCID50 (inoculum de 50 pL de la souche HIV-1-LAI). Avant l'addition à un puits, ULD Ab CD4 (12,5 µL) ont été mélangés avec du milieu RPMI1640 (DIFCO) pour obtenir un volume d'échantillon final de 50 µL. Les liquides sumageants ont été recueillis le jour 7 après l'infection des cellules. L'activité des produits a été mesurée par le niveau d'inhibition de la protéine P24 de nucléocapside dans le liquide surnageant provenant de cellules mononucléées du sang périphérique humain avec le kit Elisa Retrotek. II a été montré que ULD Ab CD4 inhibait la protéine P24 à raison de 86 ± 10 % quand elle est ajoutée à un puits 24 heures avant l'infection, et à raison de 51 ± 3 % quand elle est ajoutée à un puits 15 minutes après l'infection des cellules avec la souche HIV-1LAI. Ainsi, ce modèle expérimental démontrait l'activité de doses ultra-faibles d'anticorps polyclonaux de lapin dirigés contre CD4 (un mélange de dilutions homéopathiques C12+C30+C50) dans l'inhibition de la production ou l'amplification de l'élimination de la protéine P24.

Claims (7)

1. REVENDICATIONS. 1. Composition pharmaceutique pour inhiber la production de ou amplifier l'élimination de la protéine P24, comprenant une forme activée- potentialisée d'un anticorps dirigé contre le récepteur CD4.
2. 2. Composition pharmaceutique selon la revendication 1, où la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre le récepteur CD4 est dirigée contre le récepteur CD4 entier de SEQ ID NO:1.
3. 3. Composition pharmaceutique selon la revendication 1, où la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre le récepteur CD4 est dirigée contre un fragment du récepteur CD4 ayant des séquences choisies dans le groupe consistant en SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6.
4. 4. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, où la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre le récepteur CD4 est préparée par dilutions centésimales successives couplées avec une agitation de chaque dilution.
5. 5. Composition pharmaceutique selon la revendication 4, où la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre le récepteur CD4 est sous forme d'un mélange de dilutions homéopathiques C12, C30 et C50 imprégnant un support solide.
6. 6. Composition pharmaceutique selon la revendication 4, où la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre le récepteur CD4 est sous forme d'un mélange de dilutions homéopathiques C12, C30 et C200 imprégnant un support solide.
7. 7. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, destinée à être utilisée dans le traitement de maladies associées avec une augmentation de la production de protéine P24.30