FR2962652A1 - Composition pharmaceutique d'association et son utilisation dans des procedes pour traiter les maladies ou affections associees a des maladies neurodegeneratives - Google Patents

Abstract

La présente invention concerne une composition pharmaceutique d'association comprenant une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'interféron gamma, et une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100 et son utilisation dans un procédé pour traiter la sclérose en plaques et d'autres maladies neurodégénératives, ainsi que les maladies et affections associées avec les neuroinfections.

Description

COMPOSITION PHARMACEUTIQUE D'ASSOCIATION ET SON UTILISATION DANS DES PROCEDES POUR TRAITER LES MALADIES OU AFFECTIONS ASSOCIEES A DES MALADIES NEURODEGENERATIVES DOMAINE La présente invention concerne une composition pharmaceutique d'association et son utilisation dans un procédé pour traiter la sclérose en plaques et d'autres maladies neurodégénératives, ainsi que les maladies et affections associées à des neuroinfections.

1Q ARRIERE-PLAN La sclérose en plaques ou SP est une maladie chronique touchant le cerveau et la moelle épinière qui conduit à la perte de commande musculaire, d'équilibre et de sensation (comme l'engourdissement). Actuellement, la cause exacte de la SP demeure inconnue, mais les chercheurs pensent qu'une combinaison de plusieurs 15 facteurs peut être impliquée. On considère que la SP apparaît chez des individus génétiquement prédisposés, éventuellement en présence de facteurs externes spécifiques qui conduisent au développement de la SP. Il est maintenant généralement accepté que la SP implique un processus auto-immun - une réponse anormale du système immunitaire de l'organisme qui est dirigée contre la myéline (la gaine grasse 20 qui entoure et isole les fibres nerveuses) dans le système nerveux central (SNC - le cerveau, la moelle épinière et les nerfs optiques). La SP conduit à un amincissement ou à une perte complète de myéline, et, quand la maladie évolue, à la coupure (transection) des extensions ou axones du neurone. Quand la myéline est perdue, un neurone ne peut plus conduire efficacement les signaux électriques. Un processus de 25 réparation, appelé remyélinisation, a lieu dans les phases précoces de la maladie, mais la gaine de myéline de la cellule ne peut pas être totalement reconstruite. Des attaques répétées conduisent à des remyélinisations progressivement moins efficaces, jusqu'à ce qu'une plaque analogue à une cicatrice se forme autour des axones endommagés. Outre la démyélinisation, l'autre trait pathologique de la maladie est 30 l'inflammation. Selon une explication strictement immunologique, le processus inflammatoire est causé par les cellules T, un type de lymphocytes. Les lymphocytes sont des cellules qui jouent un rôle important dans les défenses de l'organisme. Dans la

2 SP, les cellules T parviennent à pénétrer dans le cerveau via la barrière hématoencéphalique. On pense que les cellules T reconnaissent la myéline comme étrangère et l'attaquent, ce qui déclenche des processus inflammatoires, en stimulant d'autres cellules immunitaires et des facteurs solubles comme les cytokines et les anticorps.

En plus des troubles auto-immuns, certains chercheurs pensent que les infections peuvent d'une certaine manière déclencher l'attaque des cellules nerveuses par le système immunitaire. En fait, on pense que le virus (ou bactérie) qui provoque une infection initiale « ressemble » à une cellule nerveuse. Le système immunitaire développe des cellules T pour repousser le virus. Ces cellules T demeurent dans l'organisme après l'infection et se trompent quand elles « voient » une cellule nerveuse, en la considérant à tort comme un envahisseur. Le résultat est que votre système immunitaire attaque le système nerveux. Il existe quatre variétés principales de SP. 1. Récurrente/Rémittente (SPRR) : caractérisée par des rechutes pendant lesquelles de nouveaux symptômes peuvent apparaître et d'anciens réapparaître ou s'aggraver. 2. Progressive secondaire (SPPS) : caractérisée par une aggravation progressive de la maladie entre des rémissions. 3. Sclérose en plaques récurrente progressive (SPRS) : cette forme de SP suit un cours progressif depuis le déclenchement, ponctué par des rechutes. 4. Progressive primaire (SPPP) : ce type de SP est caractérisé par une progression graduelle de la maladie depuis son déclenchement sans aucune rémission. Actuellement, il n'y a pas de traitement connu pour la SP. Cependant, il existe des thérapies qui peuvent ralentir la maladie. Le but du traitement est de maîtriser les symptômes. Des médicaments qui altèrent le système immunitaire, par exemple les interférons, ont été utilisés pour traiter la sclérose en plaques. Les interférons sont des messagers protéiques que les cellules du système immunitaire produisent et utilisent pour communiquer entre elles. II y a différents types d'interférons, comme les interférons alpha, bêta et gamma. Tous les interférons ont la capacité de réguler le système immunitaire et jouent un rôle important dans la protection contre les envahisseurs y compris les virus. Chaque interféron fonctionne différemment, mais les fonctions se chevauchent. Les interférons bêta se sont révélés utiles dans le traitement de la sclérose en plaques. Il existe un besoin continu de nouveaux produits médicamenteux ayant une efficacité thérapeutique souhaitée pour le traitement de la SP et des symptômes 5 apparentés. L'effet thérapeutique d'une forme extrêmement diluée (ou forme ultra-faible) d'anticorps potentialisés par la technologie homéopathique (forme activée potentialisée) a été découvert par l'inventeur de la présente demande de brevet, le Dr. Oleg I. Epshtein. Le brevet US n°. 7 582 294 décrit un médicament pour traiter l'hyperplasie 10 prostatique bénigne ou la prostatite par administration d'une forme activée par la technologie homéopathique d'anticorps dirigés contre l'antigène prostatique spécifique (PSA). La protéine S-100 est une protéine liant le calcium acide cytoplasmique trouvée principalement dans la matière grise du cerveau, principalement dans la glie et les 15 cellules de Schwann. La protéine existe sous plusieurs isoformes homo- ou hétérodimériques consistant en deux sous-unités, alpha et bêta, distinctes du point de vue immunologique. L'utilisation de la protéine S-100 a été suggérée comme aide dans le diagnostic et l'évaluation des lésions cérébrales et des détériorations neurologiques dues à une lésion cérébrale, comme dans l'accident vasculaire cérébral. Yardan et al., 20 Usefulness of S100B Protein in Neurological Disorders, J Pak Med Assoc Vol. 61, No. 3, Mars 2011. On a montré que des doses ultra-faibles d'anticorps dirigés contre la protéine S-100 ont une activité anxiolytique, anti-asthénique, anti-agressive, de protection contre le stress, anti-hypoxique, anti-ischémique, neuroprotectrice et nootrope. Voir Castagne 25 V. et al., "Antibodies to S100 proteins have anxiolytic-like activity at ultra-low doses in the adult rat", J Pharm Pharmacol. 2008, 60(3):309-16; Epstein O. I., "Antibodies to calcium-binding S100B protein block the conditioning of long-terni sensitization in the terrestrial snail", Pharmacol Biochem Behav., 2009, 94(1):37-42; Voronina T.A. et al., chapitre 8. Antibodies to S-100 protein in anxiety-depressive disorders in experimental 4 and clinicat conditions. ln "Animal models in biological psychiatry", Ed. Kalueff A.V. N-Y, "Nova Science Publishers, Inc.", 2006, pp. 137-152. On a montré que des doses ultra-faibles d'anticorps dirigés contre l'interféron gamma sont utiles dans le traitement et la prophylaxie de traitement de maladies 5 d'origine virale. Voir le brevet US n°. 7 572 441.

RESUME Selon un aspect, l'invention fournit une composition pharmaceutique d'association comprenant a) une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'interféron 10 gamma, et b) une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100. Selon une variante, la présente invention fournit une composition pharmaceutique d'association comprenant a) une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'interféron gamma, et b) une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100, dans laquelle l'anticorps est dirigé contre l'interféron gamma entier ou des 15 fragments de celui-ci. Selon une variante, l'invention fournit une composition pharmaceutique d'association comprenant a) une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'interféron gamma, et b) une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100, dans laquelle l'anticorps dirigé contre la protéine S-100 est un anticorps 20 dirigé contre la protéine S-100 entière ou des fragments de celle-ci. Selon une variante, la composition pharmaceutique d'association de cet aspect de l'invention inclut une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'interféron gamma qui est sous forme d'un mélange de dilutions homéopathiques (C12, C30, et C50) ou (C12, C30 et C200) imprégnant un support solide. La forme activée-potentialisée d'un 25 anticorps dirigé contre la protéine S-100 est sous forme d'un mélange de dilutions homéopathiques (C12, C30, et C50) ou (C12, C30 et C200) qui peut ensuite imprégner le support solide. Selon une autre variante, la composition pharmaceutique d'association de cet aspect de l'invention inclut la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la 30 protéine S-100 qui est sous forme de mélange de dilutions homéopathiques (C12, C30, et C50) ou (C12, C30 et C200) imprégnant un support solide. La forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'interféron gamma est sous forme de mélange de dilutions homéopathiques (C12, C30, et C50) ou (C12, C30 et C200) qui peut ensuite imprégner le support solide.

De préférence, la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'interféron gamma est un anticorps monoclonal, polyclonal ou naturel, de préférence encore, un anticorps polyclonal. Selon une variante de cet aspect de l'invention, la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'interféron gamma est préparée par des dilutions centésimales successives couplées avec une agitation de chaque dilution.

De préférence, la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100 est un anticorps monoclonal, polyclonal ou naturel, de préférence encore, un anticorps polyclonal. Selon une variante de cet aspect de l'invention, la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100 est préparée par dilutions centésimales successives couplées avec une agitation de chaque dilution. Une agitation verticale est envisagée spécifiquement. Selon un autre aspect, l'invention fournit un procédé de traitement d'un patient souffrant de sclérose en plaques par administration de a) une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'interféron gamma, et b) une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100. De préférence, la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'interféron gamma et la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100 sont administrées sous forme de composition pharmaceutique d'association. Selon un autre aspect, l'invention fournit un procédé pour retarder de manière significative le déclenchement de symptômes chez un patient souffrant de sclérose en plaques par administration d'une composition pharmaceutique d'association dans lequel la composition comprend a) une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'interféron gamma, et b) une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100. Selon un autre aspect, la présente invention fournit en outre un procédé de 30 réduction de la fréquence d'apparition de rechutes chez un patient souffrant de sclérose en plaques par administration d'une composition pharmaceutique d'association dans lequel la composition comprend a) une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'interféron gamma, et b) une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100.

Selon une variante de l'invention, il est fourni l'administration de une à deux formes galéniques unitaires de la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'interféron gamma, et de une à deux formes galéniques unitaires de la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100, chaque forme galénique étant administrée de une fois par jour à quatre fois par jour. De préférence, les une à deux formes galéniques unitaires de chacune des formes activées-potentialisées d'anticorps sont administrées deux fois par jour. Selon une variante préférée de cet aspect de l'invention, il est fourni l'administration de une à deux formes. galéniques unitaires, de la composition d'association comprenant a) la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'interféron gamma, et b) la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100, chaque forme galénique étant administrée de une fois par jour à quatre fois par jour. De préférence, une à deux formes galéniques unitaires sont administrées deux fois par jour. Selon une autre variante de cet aspect de l'invention, qui est préférée, l'association est administrée sous forme d'une forme galénique unitaire comprenant a) la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'interféron gamma, et b) la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100, de préférence deux fois par jour. Selon un autre aspect, la présente invention fournit en outre une composition pharmaceutique destinée à être utilisée pour le traitement d'un patient souffrant de sclérose en plaques, ladite composition ayant été obtenue en fournissant une forme activée- potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100, préparée par dilutions répétées consécutives et multiples agitations de chaque solution obtenue selon la technologie homéopathique, puis en combinant les solutions potentialisées en les mélangeant, ou, à titre d'alternative, en imprégnant une masse de support avec ladite solution combinée ou avec les solutions séparément.

BREVE DESCRIPTION DES DESSINS FIG. 1 - Illustre la réponse immunitaire dans ta pathogenèse de la sclérose en plaques FIG. 2 - montre le jour moyen de déclenchement des symptômes cliniques FIG. 3 - montre la gravité de la maladie (points) FIG. 4 - montre la gravité de la maladie à différents stades (points) FIG. 5 - montre la fréquence d'apparition de rechute

DESCRIPTION DETAILLEE L'invention est définie en référence aux revendications annexées. Concernant les revendications, le glossaire qui suit fournit les définitions pertinentes.

Le terme "anticorps" tel qu'il est utilisé ici désigne une immunoglobuline qui se lie spécifiquement à, et est donc définie comme étant complémentaire d'une organisation spatiale et polaire particulière d'une autre molécule. Les anticorps tels que cités dans les revendications peuvent inclure une immunoglobuline complète ou un fragment de celle-ci, peuvent être naturels, polyclonaux ou monoclonaux, et peuvent inclure différentes classes et isotypes, comme les IgA, IgD, IgE, IgG1, IgG2a, IgG2b et IgG3, IgM, etc. Leurs fragments peuvent inclure les fragments Fab, Fv et F(ab')2, Fab', et analogues. "Anticorps" au singulier inclut « anticorps » au pluriel. Le terme "forme activée-potentialisée" ou "forme potentialisée" respectivement, concernant les anticorps cités ici, est utilisé pour désigner un produit de potentialisation homéopathique d'une quelconque solution initiale d'anticorps. "Potentialisation homéopathique" désigne l'utilisation de procédés d'homéopathie pour conférer une activité homéopathique à une solution initiale de substance pertinente. Bien qu'elle ne soit pas ainsi limitée, la « potentialisation homéopathique » peut impliquer, par exemple, des dilutions consécutives répétées combinées avec un traitement externe, en particulier une agitation (mécanique) verticale. En d'autres termes, une solution initiale 8 d'anticorps est soumise à des dilutions répétées consécutives et de multiples agitations verticales de chaque solution obtenue conformément à la technologie homéopathique. La concentration préférée de la solution initiale d'anticorps dans le solvant, de préférence l'eau ou un mélange eau-alcool éthylique, va d'environ 0,5 à environ s 5,0 mg/ml. Le processus préféré pour préparer chaque composant, c'est-à-dire la solution d'anticorps, est l'utilisation du mélange de trois dilutions aqueuses ou aqueuses-alcooliques de la solution de matrice primaire (teinture mère) d'anticorps diluée 10012, 0030 et 100200 fois, respectivement, qui équivaut à des dilutions homéopathiques centésimales (C12, C30, et C200) ou l'utilisation du mélange de trois 10 dilutions aqueuses ou aqueuses-alcooliques de la solution de matrice primaire d'anticorps diluée 10012, 0030 et 10050 fois, respectivement, qui équivaut à des dilutions homéopathiques centésimales (C12, C30 et C50). Des exemples de potentialisation homéopathique sont décrits dans les brevets US n° 7 572 441 et 7 582 294. Tandis que le terme "forme activée-potentialisée" est utilisé dans les revendications, le terme 15 "doses ultra-faibles" est utilisé dans les exemples. Le terme "doses ultra-faibles" est devenu un terme technique dans le domaine technique créé par l'étude et l'utilisation d'une forme de substance diluée et potentialisée par voie homéopathique. Le terme « dose ultra-faible » ou « doses ultra-faibles » est considéré comme support total et principalement synonyme du terme forme « activée-potentialisée » utilisé dans les 20 revendications. En d'autres termes, un anticorps est sous la forme « activée-potentialisée » ou « potentialisée » quand trois facteurs sont présents. Tout d'abord, la forme « activée-potentialisée » de l'anticorps est un produit d'un procédé de préparation bien accepté dans la technique homéopathique. Deuxièmement, la forme « activée-potentialisée » de 25 l'anticorps doit avoir une activité biologique déterminée par des procédés bien acceptés en pharmacologie moderne. Et troisièmement, l'activité biologique présentée par la forme « activée potentialiséee » de l'anticorps ne peut pas être expliquée par la présence de la forme moléculaire de l'anticorps dans le produit final du processus homéopathique. 9 Par exemple, la forme activée potentialisée d'anticorps peut être préparée en soumettant un anticorps isolé initial sous une forme moléculaire à de multiples dilutions consécutives couplées avec un impact externe, comme une agitation mécanique. Le traitement externe au cours de la réduction de la concentration peut s aussi être accompli, par exemple, par exposition à des facteurs ultrasoniques, électromagnétiques ou d'autres facteurs physiques. V. Schwabe "Homeopathic medicines", M., 1967, brevets US n° 7 229 648 et 4 311 897, décrivent de tels processus qui sont des procédés de potentialisation homéopathique bien acceptés dans la technique homéopathique. Ce processus donne naissance à une diminution uniforme de la 10 concentration moléculaire de la forme moléculaire initiale de l'anticorps. Ce processus est répété jusqu'à ce que l'activité homéopathique souhaitée soit obtenue. Pour l'anticorps individuel, l'activité homéopathique requise peut être déterminée en soumettant les dilutions intermédiaires à des tests biologiques dans le modèle pharmacologique souhaité. Bien qu'elle ne soit pas ainsi limitée, la « potentialisation homéopathique » peut comprendre, par 15 exemple, des dilutions consécutives répétées combinées avec un traitement externe, en particulier une agitation (mécanique) verticale. En d'autres termes, une solution d'anticorps initiale est soumise à des dilutions consécutives répétées et à de multiples agitations verticales de chaque solution obtenue selon la technologie homéopathique. La concentration préférée de la solution initiale d'anticorps dans le solvant, de préférence, l'eau ou un mélange 20 eau-alcool éthylique, va d'environ 0,5 à environ 5,0 mg/ml. Le processus préféré pour préparer chaque composant, c'est-à-dire la solution d'anticorps, est l'utilisation du mélange de trois dilutions aqueuses ou aqueuses-alcooliques de la solution de matrice primaire (teinture mère) d'anticorps diluée 100i2, 10030 et 100200 fois, respectivement, qui équivaut à des dilutions homéopathiques centésimales C12, C30 et C200 ou le mélange de trois 25 dilutions aqueuses ou aqueuses-alcooliques de la solution de matrice primaire (teinture mère) diluée 10012, 10030 et 10050 fois, respectivement, qui équivaut à des dilutions homéopathiques centésimales C12, C30 et C50. Des exemples de la façon d'obtenir l'activité souhaitée sont donnés aussi, par exemple, dans les brevets US n°. 7 229 648 et 4 311 897. Le processus applicable à la forme « activée-potentialisée » des anticorps décrite 30 ici est décrit de manière plus détaillée ci-dessous.

Il y a eu un nombre considérable de controverses concernant le traitement homéopathique de sujets humains. Bien que la présente invention s'appuie sur des processus homéopathiques acceptés pour obtenir la forme « activée-potentialisée » d'anticorps, elle ne s'appuie pas seulement sur l'homéopathie chez des sujets humains pour mettre en évidence l'activité. II a été découvert de manière surprenante par l'inventeur de la présente demande et amplement démontré dans les modèles pharmacologiques acceptés que la solution obtenue finalement à partir de dilutions multiples consécutives d'une forme moléculaire initiale d'un anticorps a une activité définitive non liée à la présence de traces de la forme moléculaire de l'anticorps dans la dilution cible. La forme « activée-potentialisée » de l'anticorps fournie ici est testée pour l'activité biologique dans des modèles pharmacologiques d'activité bien acceptés, dans des expériences in vitro appropriées, ou in vivo dans des modèles animaux appropriés. Les expériences présentées ci-dessous prouvent l'activité biologique dans de tels modèles. Des études cliniques sur des humains prouvent aussi que l'activité observée dans le modèle animal est bien traduite en thérapie humaine. Des études sur des humains ont aussi prouvé la disponibilité des formes « activées potentialisées » décrites ici pour traiter des maladies humaines ou troubles humains spécifiques bien acceptés comme états pathologiques dans la science médicale. Egalement, la forme « activée-potentialisée » d'anticorps revendiquée englobe seulement des solutions ou des préparations solides dont l'activité biologique ne peut pas être expliquée par la présence de la forme moléculaire résiduelle de l'anticorps de la solution de départ initiale. En d'autres termes, bien qu'il pourrait être envisagé que la forme « activée-potentialisée » de l'anticorps peut contenir des traces de la forme moléculaire initiale de l'anticorps, l'homme du métier ne pourra pas attribuer l'activité biologique observée dans les modèles pharmacologiques acceptés à la forme moléculaire résiduelle de l'anticorps avec un quelconque degré de plausibilité du fait des concentrations extrêmement faibles de la forme moléculaire résiduelle de l'anticorps après les dilutions consécutives. Bien que l'invention ne soit pas limitée par une quelconque théorie spécifique, l'activité biologique de la forme « activée-potentialisée » des anticorps de la présente invention n'est pas attribuable à la forme moléculaire initiale de l'anticorps. Est préférée la forme « activée-potentialisée » d'anticorps sous forme liquide ou solide dans laquelle la concentration de la forme

11 moléculaire de l'anticorps est inférieure à la limite de détection des techniques analytiques acceptées, comme l'électrophorèse capillaire et la chromatographie liquide à haute performance. Est particulièrement préférée la forme « activée-potentialisée » d'anticorps sous forme liquide ou solide dans laquelle la concentration de la forme moléculaire initiale de l'anticorps est inférieure au nombre d'Avogadro. Dans la pharmacologie des formes moléculaires de substances thérapeutiques, il est de pratique courante de créer une courbe dose-réponse dans laquelle le niveau de réponse pharmacologique est représenté graphiquement en fonction de la concentration du médicament actif administré au sujet ou testé in vitro. Le niveau minimal du médicament qui produit une quelconque réponse détectable est connu comme étant une dose seuil. II est particulièrement envisagé et préféré que la forme « activée-potentialisée » des anticorps contienne un anticorps moléculaire, s'il y en a, à une concentration inférieure à la dose seuil pour la forme moléculaire de l'anticorps dans le modèle biologique donné. Des modèles animaux expérimentaux de sclérose en plaques sont connus. Par exemple, l'encéphalomyélite auto-immune expérimentale, parfois l'encéphalomyélite allergique expérimentale (EAE) est un modèle animal de maladies démyélinisantes inflammatoires du système nerveux central. Il est principalement utilisé avec des rongeurs et des souris knockout. Ce modèle expérimental est largement étudié comme modèle animal des maladies démyélinisantes du système nerveux central humain, comme la sclérose en plaques. Il est possible d'induire une EAE chez des animaux sensoriels par un homogénat de tissu cérébral homologue ou hétérologue, de myéline purifiée ou de protéines introduites dans la composition de l'animal (Raine, et al., Ann. NY Acad. Sci., 1984, 436: 33-51; McCombe, et al., J. Neuroimmunol. 1994; 51 (2): 153-167).

Actuellement, plus de 20 protéines de myéline qui possèdent des propriétés immunogènes ont été décrites et le plus fréquemment sont utilisées pour induire une EAE (Baumann, et al., Physiol. Rev. 2001, 81(2): 871-927). Des exemples incluent : la protéine de myéline basique ("MBP") (Hashim, Immunol. Rev., 1978, 39:60-107); la protéine protéolipidique ("PLP") (Bradl et al., Brain Pathol., 1996, 6(3): 303-311; Tuohy, Neurochem. Res., 1994, 19(8): 935-944); les glycoprotéines : la glycoprotéine associée 12 à la myéline ("MAG") (Weerth et al, 1999); la glycoprotéine des oligodendrocytes à myéline ("MOG"); et la protéine spécifique des oligodendrocytes ("OSP") (Stevens et al., J Immunol., 1999; 162 (12): 7501-7509). Il est admis que, non seulement les protéines entières, mais aussi des fragments spécifiques de ces protéines sont capables de s provoquer une EAE quand ils sont introduits chez des animaux. Les antigènes les plus communément utilisés chez les rongeurs sont un homogénat de moelle épinière (SCH), la myéline purifiée, une protéine de myéline comme MBP, PLP ou MOG ou des peptides de ces protéines, tous conduisant à des modèles distincts ayant des caractéristiques de maladies différentes concernant l'immunologie et la pathologie. 10 Le modèle de SP le plus adéquat est causé chez des modèles de EAE en introduisant un homogénat de moelle épinière (Gilerovich et al, 2010; Zhabotinskiy, Joffe, 1975; Zhitnukhin et al, 2008; Sinha et aI, 2009). Dans ce modèle, comme avec la maladie initiale, une réponse immunitaire est produite à tous les composants de la myéline : une inflammation est induite avec une démyélinisation subséquente, une 15 dégénérescence des axones puis des cellules nerveuses elles-mêmes (Gilerovich et al, 2010; Sinha et al, 2009). Une chaîne pathologique d'événements est manifestée avec le développement de parésies, de paralysies et d'autres symptômes de maladie. Dans le développement de la EAE, il a été possible de distinguer quatre stades : 1. Sensibilisation de lymphocytes T sur la périphérie sous l'effet d'un antigène cérébral 20 avec CFA et augmentation de la perméabilité de GEB. 2. Migration de cellules T activées jusqu'au SNC et activation de cellules antigènes (astrocytes et microglie) directement dans le cerveau. Ces deux stades correspondent à la période de latence (induction) quand des manifestations cliniques ne sont pas observées. 3. Développement de réactions auto-immunes et inflammatoires dans le cerveau, ce qui 25 conduit à une démyélinisation des fibres nerveuses (période clinique). 4. Suppression des processus pathologiques et réparation des tissus endommagés (phase de guérison). Pendant cette période, les troubles neurologiques et moteurs sont atténués dans la majorité des animaux et il se produit une guérison partielle ou complète, après quoi les animaux sont résistants à l'induction répétée d'une EAE. La durée moyenne de

13 la EAE est de 30 jours : stade de latence, stade clinique et stade de guérison. La durée de chaque stade est habituellement de 7-10 jours. Des phases analogues de développement du processus pathologique dans le SNC sont observées aussi avec la sclérose en plaques. Voir la figure 1 - réponse immunitaire dans la pathogenèse de la sclérose en plaques (Wiendl & Kieseier, 2003). La présente invention fournit une composition pharmaceutique d'association comprenant a) une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'interféron gamma, et b) une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100. Comme indiqué ci-dessus, chacun des composants individuels de l'association est généralement connu pour ses propres utilisations médicales individuelles. Cependant, les inventeurs de la présente demande de brevet ont découvert de manière surprenante que l'administration de l'association retarde remarquablement le déclenchement de symptômes et réduit la probabilité de rechute chez les patients ayant une sclérose en plaques.

La composition pharmaceutique d'association selon cet aspect de l'invention peut être sous forme liquide ou sous forme solide. Chacune des formes activées potentialisées des anticorps incluses dans la composition pharmaceutique est préparée à partir d'une forme moléculaire initiale de l'anticorps via un processus accepté dans la technique homéopathique. Les anticorps de départ peuvent être des anticorps monoclonaux ou polyclonaux préparés selon des processus connus, par exemple comme décrit dans Immunotechniques, G. Frimel, M., "Meditsyna", 1987, p. 9-33; "Hum. Antibodies. Monoclonal and recombinant antibodies, 30 years alter" de Laffly E., Sodoyer R. - 2005 - Vol. 14. - N 1-2. P.33-55. Des anticorps monoclonaux peuvent être obtenus, par exemple, par la technologie des hybridomes. Le stade initial du processus comprend une immunisation basée sur les principes déjà développés au cours de la préparation d'antisérums polyclonaux. Les stades supplémentaires de l'opération comprennent la production de cellules hybrides générant des clones d'anticorps de spécificité identique. Leur séparation est accomplie au moyen des mêmes procédés que dans le cas de la préparation d'antisérums polyclonaux.

14 Des anticorps polyclonaux peuvent être obtenus via l'immunisation active d'animaux. Dans ce but, par exemple, des animaux appropriés (par exemple des lapins) reçoivent une série d'injections de l'antigène approprié, soit la protéine S-100 soit l'interféron gamma. Le système immunitaire des animaux génère des anticorps correspondants, qui sont recueillis chez des animaux d'une manière connue. Ce processus permet la préparation d'un sérum riche en anticorps monospécifiques. Si on le souhaite, le sérum contenant des anticorps peut être purifié, par exemple par chromatographie d'affinité, fractionnement par précipitation de sels, ou chromatographie d'échange d'ions. Le sérum enrichi en anticorps purifié résultant peut être utilisé comme produit de départ pour la préparation de la forme activée-potentialisée des anticorps. La concentration préférée de la solution initiale d'anticorps résultante dans le solvant, de préférence l'eau ou un mélange eau-alcool éthylique, va d'environ 0,5 à environ 5,0 mg/ml. Le processus préféré pour préparer chaque composant du médicament d'association selon la présente invention est l'utilisation du mélange _de trois dilutions aqueuses-alcooliques de la solution de matrice primaire d'anticorps diluée 10012, 10030 et 10050 fois, respectivement, qui équivaut à des dilutions homéopathiques centésimales C12, C30, et C50 ou diluée 10012, 10030 et 100200 fois, respectivement, qui équivaut à des dilutions homéopathiques centésimales C12, C30 et C200. Pour préparer une forme galénique solide, un support solide est traité avec la dilution souhaitée obtenue via le processus homéopathique. Pour obtenir une forme galénique unitaire solide de l'association de l'invention, la masse du support est imprégnée de chacune des dilutions. Les deux ordres d'imprégnation sont appropriés pour préparer la forme galénique d'association souhaitée.

Dans un mode de réalisation préféré, le produit de départ pour la préparation de la forme activée potentialisée qui comprend l'association de l'invention est un anticorps polyclonal produit chez des animaux, dirigé contre l'antigène correspondant, à savoir l'interféron gamma ou la protéine S-100. Pour obtenir la forme activée-potentialisée d'anticorps polyclonaux dirigés contre l'interféron gamma, l'antigène souhaité peut être injecté comme immunogène à un animal de laboratoire, de préférence des lapins. Des anticorps polyclonaux dirigés contre l'interféron gamma peuvent être obtenus au moyen de la molécule entière de l'interféron gamma de séquence suivante : SEQ. ID. NO. 1.

Met Lys Tyr Thr Ser Tyr Ile Leu Ala Phe Gln Leu Cys Ile Val

1 5 10 15 Leu Gly Ser Leu Gly Cys Tyr Cys Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu

16 20 25 30 Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn Ala Gly His Ser Asp Val 31 35 40 45 Ala Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile Leu Lys Asn Trp Lys

46 50 55 60 Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln Ile Val Ser Phe

61 65 70 75 Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln Ser Ile Gln

76 80 85 90 Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys Phe Phe

91 95 100 105 Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr Asn 106 110 115 120 Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ife His Glu

121 125 130 135 Leu Ile Gin Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly

136 140 145 150 Lys Arg Lys Arg Ser Gin Met Leu Phe Arg Gly Arg Arg Ala Ser

155 160 165 151 Gln 16630 Des anticorps polyclonaux dirigés contre l'interféron gamma peuvent être obtenus en utilisant la molécule entière de l'interféron gamma de séquence suivante : SEQ. ID. NO. 2 Met Lys Tyr Thr Ser Tyr Ile Leu Ala Phe Gln Leu Cys Ile Val

1 5 10 15 Leu Gly Ser Leu Gly Cys Tyr Cys Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu

16 20 25 30 Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn Ala Gly His Ser Asp Val 31 35 40 45 Ala Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile Leu Lys Asn Trp Lys

46 50 55 60 Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln Ile Val Ser Phe

61 65 70 75 Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln Ser Ile Gln

76 80 85 90 Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys Phe Phe

91 95 100 105 Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr Asn 106 110 115 120 Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His Glu

121 125 130 135 Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly

136 140 145 150 Lys Arg Lys Arg Ser Gin Met Leu Phe Gin Gly Arg Arg Ala Ser

155 160 165 151 Gln 16630 L'utilisation de fragments de l'interféron gamma comme antigène est envisagée aussi. La séquence appropriée pour un tel antigène est la suivante : SEQ. ID. NO 3 Ile Leu Ala Phe Gln Leu Cys Ile Val

7 10 15 Leu Gly Ser Leu Gly Cys Tyr Cys Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu

16 20 25 30 Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn Ala Gly His Ser Asp Val 31 35 40 45 Ala Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile

46 50 55 SEQ. ID. NO 4 Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu

24 30 Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn Ala Gly His Ser Asp Val

31 35 40 45 Ala Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile Leu Lys Asn Trp Lys 46 50 55 60 Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln Ile Val Ser Phe

61 65 70 75 Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln Ser Ile Gln

76 80 85 90 Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys Phe Phe 91 95 100 105 Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr Asn

106 110 115 120 Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gin Arg Lys Ala Ile His Glu 121 125 130 135 Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly

136 140 145 150 Lys Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly Arg Arg Ala Ser 151 5 Gln 155 160 165 166 SEQ. ID. NO 5 Gin Asp Pro Tyr Val Lys Glu

10 24 30 Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn Ala Gly His Ser Asp Val

31 35 40 45 Ala Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile Leu Lys Asn Trp Lys

46 50 55 60 15 Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln Ile Val Ser Phe

61 65 70 75 Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln Ser Ile Gln

76 80 85 90 Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys Phe Phe

20 91 95 100 105 Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr Asn

106 110 115 120 Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His Glu

121 125 130 135 25 Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly

136 140 145 150 Lys Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Gln Gly Arg Arg Ala Ser

155 160 165 151 Gln 30 166 SEQ. ID. NO 6 Gln Ser Gln Ile Val Ser Phe

69 75 Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln Ser Ile Gln 76 80 85 90 Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys Phe Phe 91 95 100 105 Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr Asn

106 110 115 120 Tyr Ser Val

121 123 SEQ. ID. NO 7 Met Asn Val Lys Phe Phe 100 105 Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr Asn

106 110 115 120 Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His Glu

121 125 130 135 Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro

136 140 145 SEQ. ID. NO 8 Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys Phe Phe 92 95 100 105 Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr Asn

106 110 115 120 19 Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg 121 125 130 SEQ. ID. NO 9 Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His Glu

123 125 130 135 Leu Ile Gin Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala

136 140 145 147 SEQ. ID. NO 10 Ser Tyr Ile Leu Ala Phe Gln Leu Cys Ile Val

5 10 15 Leu Gly Ser Leu Gly Cys Tyr Cys Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu

16 20 25 30 Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn Ala Gly His Ser Asp Val

31 35 40 45 SEQ. ID. NO 11 Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys Phe Phe

94 100 105 Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp

106 110 114 Des anticorps polyclonaux dirigés contre l'interféron gamma peuvent être obtenus en utilisant la molécule d'interféron gamma recombinant de l'une des séquences suivantes : SEQ. ID. NO 12 Met Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu

24 30 Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn Ala Gly His Ser Asp Val 31 35 40 45 Ala Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile Leu Lys Asn Trp Lys

46 50 55 60 Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln Ile Val Ser Phe

61 65 70 75 Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln Ser Ile Gln

76 80 85 90 Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys Phe Phe

91 95 100 105 Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr Asn 106 110 115 120 Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His Glu

121 125 130 135 Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly

136 140 145 150 Lys Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Gin Gly Arg Arg Ala Ser 155 160 165 166 SEQ. ID. NO 13

Met Gln Asp Pro Tyr Val Lys Glu 24 30 Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn Ala Gly His Ser Asp Val 31 35 40 45 21 151 Gln30 Ala Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile Leu Lys Asn Trp Lys

46 50 55 60 Glu Glu Ser Asp Arg Lys Ile Met Gln Ser Gln Ile Val Ser Phe

61 65 70 75 Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp Asp Gln Ser Ile Gln

76 80 85 90 Lys Ser Val Glu Thr Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys Phe Phe

91 95 100 105 Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe Glu Lys Leu Thr Asn 106 110 115 120 Tyr Ser Val Thr Asp Leu Asn Val Gln Arg Lys Ala Ile His Glu

121 125 130 135 Leu Ile Gln Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly

136 _ 140 145 150 Lys Arg Lys Arg Ser Gln Met Leu Phe Arg Gly Arg Arg Ala Ser

155 160 165 166 Le processus cité à titre d'exemple pour la préparation des anticorps polyclonaux de départ dirigés contre l'interféron gamma humain peut être décrit comme suit. 7-9 jours avant le prélèvement d'échantillons sanguins, 1-3 injections intraveineuses de l'antigène souhaité sont faites aux lapins pour augmenter le niveau d'anticorps polyclonaux dans la circulation sanguine des lapins. Lors de l'immunisation, des échantillons sanguins sont prélevés pour tester le niveau d'anticorps. Typiquement, le niveau maximum de réaction immunitaire de l'antigène soluble est obtenu dans un intervalle de 40 à 60 jours après la première injection de l'antigène. A l'achèvement du premier cycle d'immunisation, les lapins ont une période de réhabilitation de 30 jours, après quoi une ré-immunisation est réalisée avec 1-3 injections intraveineuses supplémentaires. 151 Gln Pour obtenir un antisérum contenant les anticorps souhaités, le sang des lapins immunisés est recueilli sur les lapins et placé dans un tube de centrifugeuse de 50 ml. Les caillots de produit formés sur les côtés du tube sont éliminés avec une spatule en bois, et une baguette est placée dans le caillot au centre du tube. Le sang est ensuite s placé dans un réfrigérateur pendant une nuit à une température d'environ 4°C. Le jour suivant, le caillot sur la spatule est éliminé, et le liquide restant est centrifugé pendant 10 min à 13000 tours par minute. Le fluide surnageant est l'antisérum cible. L'antisérum obtenu est généralement jaune. 20 % de NaN3 (concentration en poids) est ajouté à l'antisérum à une concentration finale de 0,02 % et conservé avant l'utilisation à l'état 10 congelé à la température de -20°C ou sans NaN3 à la température de -70°C. Pour séparer les anticorps cibles dirigés contre l'interféron gamma de l'antisérum, la séquence d'absorption sur une phase solide suivante est appropriée : 10 ml d'antisérum de lapins sont dilués deux fois avec NaCI 0,15 M, après quoi 6,26 g de Na2SO4 sont ajoutés, mélangés et incubés pendant 12-16 heures à 4°C. Le 15 sédiment est éliminé par centrifugation, dilué dans 10 ml de tampon phosphate et dialysé contre le même tampon pendant une nuit à la température ambiante. Après l'élimination du sédiment, la solution est passée sur une colonne de DEAE-cellulose équilibrée par du tampon phosphate. La fraction d'anticorps est déterminée en mesurant la densité optique de l'éluat à 280 nm. 20 Les anticorps bruts isolés sont purifiés par le procédé de chromatographie d'affinité par fixation à la matrice insoluble du milieu de chromatographie des anticorps obtenus dirigés contre l'interféron gamma, avec élution subséquente par des solutions salines aqueuses concentrées. La solution tampon résultante est utilisée comme solution initiale pour le 25 processus de dilution homéopathique utilisé pour préparer la forme activée-potentialisée des anticorps. La concentration préférée de la solution de matrice initiale des anticorps polyclonaux de lapin dirigés contre l'interféron gamma purifiés sur un antigène est 0,5 à 5,0 mg/mi, de préférence 2,0 à 3,0 mg/ml.

24 La protéine spécifique du cerveau S100, exprimée par les neurones et les cellules gliales (astrocytes et oligodendrocytes), directement ou par le biais d'interactions avec d'autres protéines, remplit dans le SNC un certain nombre de fonctions visant à maintenir un fonctionnement normal du cerveau, incluant une action sur les processus d'apprentissage et de mémoire, la croissance et la viabilité des neurones, la régulation de processus métaboliques dans les tissus neuronaux et d'autres. Pour préparer la forme activée-potentialisée d'anticorps, un antisérum contre la protéine spécifique du cerveau S-100 peut être prélevé du tissu cérébral d'un taureau et traité comme suit : so - le tissu cérébral de taureau congelé dans de l'azote liquide est converti en une poudre au moyen d'un broyeur spécialisé ; - les protéines sont extraites dans le rapport de 1 : 3 (poids/volume) au moyen d'un tampon d'extraction avec homogénéisation : - l'homogénat est chauffé pendant 10 min à 60°C puis refroidi à 4°C dans 15 un bain de glace ; - les protéines thermolabiles sont éliminées par centrifugation ; - un fractionnement au sulfate d'ammonium est réalisé par étapes, avec retrait subséquent des protéines précipitées ; - la fraction contenant la protéine S-100 est précipitée en utilisant du 20 sulfate d'ammonium saturé à 100 % et en abaissant le pH à 4,0 ; la fraction souhaitée est recueillie par centrifugation ; - le précipité est dissous dans un volume minimum de tampon contenant de l'EDTA et du mercaptoéthanol, le précipité est dialysé avec de l'eau désionisée et lyophilisé ; 25 - le fractionnement des protéines acides est suivi par une chromatographie sur des milieux échangeurs d'ions, DEAE-cellulose DE-52 puis DEAE-sephadex A-50; - les fractions recueillies et dialysées, qui contiennent la protéine S-100, sont divisées selon la masse moléculaire par filtration sur gel Sephadex G-100; 30 - la protéine S-100 purifiée est dialysée et lyophilisée.

La masse moléculaire de la protéine spécifique du cerveau S-100 purifiée est de 21000 D. Les anticorps polyclonaux dirigés contre la protéine S-100 peuvent aussi être obtenus par une méthodologie similaire à la méthodologie décrite pour les anticorps dirigés contre l'interféron gamma au moyen d'un adjuvant. La molécule entière de la protéine S-100 peut être utilisée comme immunogène (antigène) pour l'immunisation de lapins.

S100B bovine (SEQ. ID. NO. 14) Met Ser Glu Leu Glu Lys Ala Val Val Ala Leu Ile Asp Val Phe 1 5 10 15 His Gln Tyr Ser Gly Arg Glu Gly Asp Lys His Lys Leu Lys Lys 16 20 25 30 Ser Glu Leu Lys Glu Leu Ile Asn Asn Glu Leu Ser His Phe Leu 31 35 40 45 Glu Glu Ile Lys Glu Gln Glu Val Val Asp Lys Val Met Glu Thr 46 50 55 60 Leu Asp Ser Asp Gly Asp Gly Glu Cys Asp Phe Gln Glu Phe Met 61 65 70 75 Ala Phe Val Ala Met Ile Thr Thr Ala Cys His Glu Phe Phe Glu 76 80 85 90 His Glu 91 92 S100B humaine (SEQ. ID. 15) Met Ser Glu Leu Glu Lys Ala Met Val Ala 1 5 10 His Gln Tyr Ser Gly Arg Glu Gly Asp Lys 16 20 25 Ser Glu Leu Lys Glu Leu Ile Asn Asn Glu 31 35 40 Glu Glu Ile Lys Glu Gln Glu Val Val Asp 46 50 55 Leu Asp Asn Asp Gly Asp Gly Glu Cys Asp 61 65 70 Ala Phe Val Ala Met Val Thr Thr Ala Cys 76 80 85 His Glu 91 92 Leu Ile Asp Val Phe 15 His Lys Leu Lys Lys 30 Leu Ser His Phe Leu 45 Lys Val Met Glu Thr 60 Phe Gln Glu Phe Met 75 His Glu Phe Phe Glu 9040 S100A1 humaine (SEQ. ID. No. 16) Met Gly Ser Glu Leu Glu Thr Ala Met Glu Thr Leu Ile Asn Val 1 5 10 15 Phe His Ala His Ser Gly Lys Glu Gly Asp Lys Tyr Lys Leu Ser 16 20 25 30 Lys Lys Glu Leu Lys Glu Leu Leu Gln Thr Glu Leu Ser Gly Phe 31 35 40 45 Leu Asp Ala Gln Lys Asp Val Asp Ala Val Asp Lys Val Met Lys 46 50 55 60 Glu Leu Asp Glu Asn Gly Asp Gly Glu Val Asp Phe Gln Glu Tyr 61 65 70 75 Val Val Leu Val Ala Ala Leu Thr Val Ala Cys Asn Asn Phe Phe 76 80 85 90 Trp Glu Asn Ser 15 91 94 S100A1 bovine (SEQ. ID. NO. 17) Met Gly Ser Glu Leu Glu Thr Ala Met Glu Thr Leu Ile Asn Val 1 5 10 15 20 Phe His Ala His Ser Gly Lys Glu Gly Asp Lys Tyr Lys Leu Ser 16 20 25 30 Lys Lys Glu Leu Lys Glu Leu Leu Gln Thr Glu Leu Ser Gly Phe 31 35 40 45 Leu Asp Ala Gln Lys Asp Ala Asp Ala Val Asp Lys Val Met Lys 25 46 50 55 60 Glu Leu Asp Glu Asn Gly Asp Gly Glu Val Asp Phe Gln Glu Tyr 61 65 70 75 Val Val Leu Val Ala Ala Leu Thr Val Ala Cys Asn Asn Phe Phe 76 80 85 90 30 Trp Glu Asn Ser 91 94 Pour obtenir un antisérum spécifique du cerveau dirigé contre la protéine spécifique du cerveau S-100 séparée, un mélange de protéine S-100 purifiée (antigène) 35 peut être préparé sous forme de complexe par la sérumalbumine de taureau méthylée comme milieu avec de l'adjuvant complet de Freund, qui est ensuite injecté par voie sous-cutanée à l'animal de laboratoire, un lapin, dans le domaine de la colonne vertébrale en une quantité de 1-2 ml. L'antisérum peut avoir un titre de 1:500 - 1:1000. La forme activée potentialisée de chaque composant de l'association peut être 40 préparée à partir d'une solution initiale par potentialisation homéopathique, de

27 préférence en utilisant le procédé de diminution de concentration proportionnelle par dilution successive de 1 partie de chaque solution précédente (en commençant avec la solution initiale) dans 9 parties (pour une dilution décimale), ou dans 99 parties (pour une dilution centésimale), ou dans 999 parties (pour une dilution millésimale) d'un solvant neutre, en commençant avec une concentration de la solution initiale d'anticorps dans le solvant, de préférence l'eau ou un mélange eau-alcool éthylique, dans la plage d'environ 0,5 à environ 5,0 mg/mi, couplée avec un impact externe. De préférence, l'impact externe comprend de multiples agitations verticales (dynamisation) de chaque dilution. De préférence, des récipients séparés sont utilisés pour chaque dilution subséquente jusqu'au niveau d'activité requis, ou le facteur de dilution requis. Ce procédé est bien accepté dans la technique homéopathique. Voir par exemple V. Schwabe "Homeopathic medicines", M., 1967, p. 14-29. Par exemple, pour préparer une dilution 12-centésimale (appelée C12), une partie de la solution de matrice initiale d'anticorps dirigés contre l'interféron gamma d'une concentration de 3,0 mg/ml est diluée dans 99 parties de solvant neutre aqueux ou aqueux-alcoolique (de préférence d'alcool éthylique à 15 %) puis agitée verticalement de nombreuses fois (10 et plus) pour créer la 1 ère dilution centésimale (appelée Cl). La 2ème dilution centésimale (C2) est préparée à partir de la 1 ère dilution centésimale Cl. Ce processus est répété 11 fois pour préparer la 12ème dilution centésimale C12. Ainsi, la 12ème dilution centésimale C12 représente une solution obtenue par 12 dilutions successives d'une partie de la solution de matrice d'anticorps initiale d'une concentration de 3,0 mg/ml dans 99 parties d'un solvant neutre dans des récipients différents, ce qui équivaut à la dilution homéopathique centésimale C12. Des processus similaires avec le facteur de dilution pertinent sont accomplis pour obtenir les dilutions C30, C50 et C200. Les dilutions intermédiaires peuvent être testées dans un modèle biologique souhaité pour vérifier l'activité. Les formes activées potentialisées préférées pour les deux anticorps comprises dans l'association de l'invention sont un mélange des dilutions C12, C30 et C50 ou des dilutions C12, C30 et C200. Quand le mélange de différentes dilutions homéopathiques (principalement centésimales) de la substance active est utilisé comme composant liquide biologiquement actif, chaque

28 composant de la composition (par exemple C12, C30, C50, C200) est préparé séparément selon le processus décrit ci-dessus jusqu'à ce que l'avant-dernière dilution soit obtenue (par exemple jusqu'à Cl 1, C29 et C199 respectivement), puis une partie de chaque composant est ajoutée dans un récipient selon la composition du mélange et mélangée avec la quantité requise de solvant (par exemple avec 97 parties pour une dilution centésimale). Il est possible d'utiliser la substance active sous forme d'un mélange de différentes dilutions homéopathiques, par exemple décimales et/ou centésimales (D20, C30, C100 ou C12, C30, C50 ou C12, C30, C200, etc.), dont l'efficacité est déterminée expérimentalement en testant la dilution dans un modèle biologique approprié, par exemple dans des modèles décrits dans les présents exemples. Au cours de la potentialisation et de la diminution de la concentration, l'agitation verticale peut être remplacée par une exposition externe à des ultrasons, un champ élecromagnétique ou tout processus d'impact externe similaire accepté dans la technique homéopathique. De préférence, la composition pharmaceutique de l'invention peut être sous forme d'un liquide ou d'une forme galénique unitaire solide. La forme liquide préférée de la composition pharmaceutique est un mélange, de préférence à un rapport 1 : 1 de la forme activée potentialisée d'anticorps dirigés contre l'interféron gamma et de la forme activée potentialisée d'anticorps dirigés contre la protéine S-100. Le support liquide préféré est l'eau ou un mélange eau-alcool éthylique. La forme galénique unitaire solide de la composition pharmaceutique de l'invention peut être préparée par imprégnation d'un support solide pharmaceutiquement acceptable avec le mélange de solutions aqueuses ou aqueuses- alcooliques de la forme activée potentialisée de composants actifs qui sont mélangés, de préférence dans un rapport 1 :1. A titre d'alternative, le support peut être imprégné de manière consécutive avec chaque dilution requise. Les deux ordres d'imprégnation sont acceptables. De préférence, la composition pharmaceutique dans la forme galénique unitaire 30 solide est préparée à partir de granules du support pharmaceutiquement acceptable qui 29 a été préalablement saturé avec les dilutions aqueuses ou aqueuses-alcooliques de la forme activée potentialisée d'anticorps dirigés contre l'interféron gamma et de la forme activée potentialisée d'anticorps dirigés contre la protéine S-100. La forme galénique solide peut être sous toute forme connue dans la technique pharmaceutique, incluant s un comprimé, une capsule, une pastille, et d'autres. Comme ingrédients pharmaceutiques inactifs on peut utiliser le glucose, le saccharose, le maltose, l'amidon, l'isomaltose, l'isomalt et d'autres mono-, oligo- et polysaccharides utilisés dans la fabrication de produits pharmaceutiques ainsi que des mélanges technologiques des ingrédients pharmaceutiques inactifs mentionnés ci-dessus avec 10 d'autres excipients pharmaceutiquement acceptables, par exemple l'isomalt, la crospovidone, le cyclamate de sodium, la saccharine sodique, l'acide citrique anhydre, etc.), incluant les lubrifiants, les désintégrants, les liants et les agents colorants. Les supports préférés sont le lactose et l'isomalt. La forme galénique pharmaceutique peut inclure en outre des excipients pharmaceutiques standard, par exemple la cellulose 15 microcristalline et le stéarate de magnésium. Pour préparer la forme orale solide, des granules de 100-300 pm de lactose sont imprégnés de solutions aqueuses ou aqueuses-alcooliques de la forme activée potentialisée d'anticorps dirigés contre l'histamine, la forme activée-potentialisée d'anticorps dirigés contre l'interféron gamma et la forme activée potentialisée 20 d'anticorps dirigés contre la protéine S-100 dans le rapport de 1 kg de solution d'anticorps pour 5 ou 10 kg de lactose (1 : 5 à 1:10). Pour réaliser l'imprégnation, les granules de lactose sont exposés à une irrigation à saturation dans le lit bouillonnant fluidisé dans une installation à lit bouillonnant (par exemple "Hüttlin Pilotlab" de Hüttlin GmbH) avec séchage subséquent via un courant d'air chauffé à une température 25 inférieure à 40°C. La quantité estimée des granules séchés (10 à 34 parties en poids) saturés de la forme activée potentialisée d'anticorps est placée dans le mélangeur, et mélangée avec 25 à 45 parties en poids de lactose pur « non saturé » (utilisé dans le but de réduction des coûts et de simplification et d'accélération du processus technologique sans diminuer l'efficacité du traitement), avec 0,1 à 1 partie en poids de 30 stéarate de magnésium, et 3 à 10 parties en poids de cellulose microcristalline. La

30 masse pour comprimés obtenue est mélangée uniformément, et mise sous forme de comprimés par pressage à sec direct (par exemple dans une presse à comprimés Korsch - XL 400) pour former des pilules rondes de 150 à 500 mg, de préférence de 300 mg. Après la formation des comprimés, des pilules de 300 mg sont obtenues, qui sont saturées de solution aqueuse-alcoolique (3,0-6,0 mg/pilule) de l'association de la forme activée potentialisée d'anticorps dirigés contre l'interféron gamma et de la forme activée potentialisée d'anticorps dirigés contre la protéine S-100. Chaque composant de l'association utilisée pour imprégner le support est sous forme d'un mélange de dilutions homéopathiques centésimales C12, C30 et C50 ou d'un mélange de dilutions homéopathiques centésimales C12, C30 et C200. Bien que l'invention ne soit pas limitée à une quelconque théorie spécifique, on considère que la forme activée potentialisée des anticorps décrits ici ne contient pas la forme moléculaire de l'anticorps en une quantité suffisante pour avoir l'activité biologique attribuée à une telle forme moléculaire. L'activité biologique du médicament d'association (composition pharmaceutique d'association) de l'invention est amplement démontrée dans les exemples ci-après. La présente invention fournit en outre un procédé pour retarder de manière significative le déclenchement de symptômes de la sclérose en plaques, ledit procédé comprenant l'administration d'une composition pharmaceutique d'association comprenant a) une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'interféron gamma et b) une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100. La présente invention fournit en outre un procédé pour réduire la probabilité de rechute d'épisodes chez un patient souffrant de sclérose en plaques par administration d'une composition pharmaceutique d'association comprenant a) une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'interféron gamma et b) une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100. De préférence, pour les besoins du traitement, l'association de l'invention est administrée d'une fois par jour à quatre fois par jour, de préférence deux fois par jour, 30 chaque administration incluant une ou deux formes galéniques unitaires d'association.

31 L'invention est illustrée encore en se référant aux exemples non limitatifs ci-après. EXEMPLES Exemple 1 Dans cette étude, des rats femelles de la lignée Wistar (200-220 g) ont été utilisés. Une EAE a été induite chez eux par une seule inoculation d'un mélange encéphalitogène (EGS) constitué de 100 mH d'homogénat de moelle épinière homologue, 0,2 ml de CFA (teneur en mycobactéries tuées 5 mg/ml) et 0,2 ml de solution physiologique à un animal. Le EGS a été administré par voie sous-cutanée (à la base de la queue le long de la veine caudale) sous une légère anesthésie à l'éther en la quantité de 0,4 ml (0,2 ml à droite et à gauche) (Abdurasuiova, I.N., et ai, 2004; Zhitnukhin, Y.L., et al, 2008; Serebryanaya, N.B., et al, 2010). Ce qui suit a été administré par voie intra-gastrique 2 fois par jour à des intervalles de 7 heures sur 30 jours, en commençant le jour de l'induction d'une EAE : (a) dose ultra-faible d'anticorps dirigés contre la protéine S-100 (dans la suite « ULD Abs contre la protéine S-100 ») (n=10, 2,5 ml/kg/jour); (b) dose ultra-faible d'anticorps dirigés contre l'interféron gamma (dans la suite "ULD Abs contre IFN-y") (n=10, 2,5 ml/kg/jour); (c) l'association d'ULD Abs contre la protéine S-100 et ULD Abs contre IFN-y (dans la suite « l'association complexe") (n=10, 5 mVkg/jour) et (d) l'eau distillée (témoin; n=10, 5 ml/kg/jour). Comme préparation de référence, l'immunomodulateur Copaxone® (Teva, Israel) a été utilisé, qui a été administré par voie intramusculaire à la dose de 4 mg/kg, du 28me au 25ème jour suivant l'induction d'EAE. Les résultats sont montrés sur les figures 2-5. Les symptômes cliniques d'encéphalomyélite auto-immune expérimentale (EAE) ont été évalués quotidiennement pendant 30 jours à partir du jour de l'induction d'une encéphalomyélite auto-immune expérimentale (EAE). L'examen de chaque rat a été réalisé immédiatement avant l'administration de médicaments étudiés. En cas d'évolution rapide de la maladie, les symptômes cliniques ont été évalués deux fois par jour.

32 La gravité des anomalies neurologiques a été évaluée par points : présence de faiblesse musculaire, tremblement (0,5 point) ; parésie résistante (1 point) ; paralysie (1,5 point). L'indice clinique (CI) a été calculé comme étant la somme des symptômes pour 4 membres. De plus, le Cl était considéré comme zéro si des signes cliniques visibles d'anomalies neurologiques étaient absents, et considéré comme 6 en cas de mort des animaux. La valeur Cl maximale a été prise en compte tous les jours. L'indice cumulatif pour chaque rat calculé comme étant la somme des Cl individuels sur la période de maladie totale (30 jours) a été noté. La période de maladie de 30 jours a été divisée en les phases suivantes : phase de latence (1-10 jours) ; phase de manifestation clinique (11-18 jours) ; et phase de guérison (19-30 jours). Pour évaluer l'efficacité des médicaments étudiés dans le modèle d'encéphalomyélite auto-immune expérimentale (EAE), les paramètres suivants ont été évalués dans chaque groupe de l'étude : 1) temps de déclenchement de la maladie (jours) ; 2) changements de gravité moyenne de la maladie au cours du temps (Cl, points) ; 3) gravité moyenne de la maladie à différentes phases (Cl, points) 4) nombre total de rechutes, retour de symptômes de la maladie (°/a) ULD Abs contre la protéine S-100 a fait reculer le déclenchement de manifestation de symptômes cliniques de périodes de maladie, par rapport au témoin négatif (p<0,05) et par rapport à Copaxone (p>0,05). Le déclenchement de la maladie dans deux groupes qui ont reçu ULD Abs contre IFN-y et dans un groupe qui a reçu la Copaxone ne différait pas du témoin. Voir la figure 2. En même temps, chez les animaux auxquels l'association complexe a été administrée, la tendance au raccourcissement de la période d'apparition de signes cliniques de sclérose en plaques par rapport au témoin a été observée. On doit noter que des différences statistiquement significatives ont été révélées pendant la période de déclenchement de la maladie entre le groupe recevant ULD Abs contre la protéine S-100 et le groupe recevant l'association complexe. La proportion d'animaux ayant un cours de maladie grave (> 3 points) a été aussi plus faible dans le groupe recevant ULD Abs contre la protéine S-100. Dans les

33 groupes qui ont reçu l'association complexe le pourcentage d'animaux ayant un cours grave a été plus élevé que dans les autres groupes étudiés dans toutes les périodes de maladie. Voir la figure 3. En liaison avec le fait que, à différentes phases dans le développement de la sclérose en plaques, différents mécanismes de pathogenèse de EAE ont été activés, l'effet des préparations sur la gravité de la maladie dans la période de latence, dans le développement de la phase de signes cliniques et dans la phase de guérison a été analysé. L'administration de ULD Abs contre la protéine S-100 a contribué de manière significative à la réduction des points moyens de manifestation de signes cliniques de maladie au stade de manifestation clinique et au stade de guérison, tandis que la Copaxone et ULD Abs contre IFN-y ont réduit de manière significative la gravité des symptômes cliniques seulement dans la dernière phase. L'association complexe, par rapport au témoin et aux groupes recevant ULD Abs contre IFN-y seule ou ULD Abs contre la protéine S-100 seule, a augmenté de manière statistiquement significative les points moyens de l'affection des animaux au stade d'apparition de signes cliniques de la maladie et au stade de la guérison. Voir la figure 4. On doit noter que, pour une partie des animaux, après disparition totale des signes cliniques de la maladie, une certaine similarité de rechute, a été notée, c'est-à- dire le retour de manifestations cliniques de EAE. Dans le groupe de ULD Abs contre la protéine S-100, malgré son effet bénéfique sur le cours clinique de la EAE (période de déclenchement de la maladie plus tardive, moindre gravité de la manifestation de signes cliniques), le plus grand nombre d'animaux (25 %) ayant des rechutes a été noté. En même temps, dans le groupe d'association complexe, qui a été caractérisé par un déclenchement de maladie précoce et une plus grande manifestation du processus pathologique, aucun animal n'a présenté le développement de rechutes. Voir la figure 5.

Conclusions: Dans le modèle d'encéphalomyélite auto-immune expérimentale (EAE), ULD Abs contre la protéine S-100 a eu un effet bénéfique sur le cours de la maladie. ULD Abs contre la protéine S-100 a diminué les signes cliniques de la maladie pendant un

34 épisode et a réduit la gravité des symptômes. Les préparations comparatives d'ULD Abs contre IFN-y et Copaxone n'ont pas eu d'effet sur le cours de la maladie dans le modèle expérimental de sclérose en plaques choisi, c'est-à-dire que, pour ces substances, l'ampleur des signes cliniques des périodes de maladie et la gravité des symptômes n'ont pas différés du témoin (eau distillée). La manifestation des effets des préparations dépendait du stade de développemment de la EAE (phase de latence, phase de signes cliniques, phase de guérison). L'effet de l'association complexe a différé de l'effet des composants, à savoir de ULD Abs contre la protéine S-100 ou ULD Abs contre IFN-y seules. L'utilisation de l'association complexe a conduit à un renforcement de la réponse immunitaire. L'association complexe a conduit à un déclenchement plus précoce de la maladie, une augmentation de la fraction d'animaux malades et de la gravité de la maladie. 25 % des animaux dans le groupe de ULD Abs contre la protéine S-100 et 15% des animaux dans le groupe de ULD Abs contre IFN-y ont présenté une rechute pendant la période de l'étude (30 jours). En même temps, aucune rechute a été notée chez les animaux dans le groupe d'association complexe. Le cours de sclérose en plaque le plus commun est le sous-type de rechute-rémission, qui est caractérisé par des attaques imprévisibles (rechutes), suivies par des périodes de rémission relative sans nouveaux signes d'activité de la maladie. Les buts primaires de la thérapie de la sclérose en plaques sont la réduction de la détérioration neuronale pendant une attaque aiguë et le retour de la fonction après une attaque, ainsi que la prévention de nouvelles attaques conduisant à une invalidité. ULD Abs contre la protéine S100 seule a été capable d'améliorer les symptômes cliniques de l'EAE pendant toutes les phases de maladie expérimentale, ce qui la rend potentiellement utile dans le traitement des attaques de sclérose en plaques. L'association d'ULD Abs contre la protéine S100 + ULD Abs contre IFN-y a totalement empêché le retour de symptômes cliniques de l'EAE, de sorte qu'elle peut être utilisée dans le traitement de la sclérose en plaques chez les humains comme moyen de prévention des rechutes. Ainsi, l'association de ULD Abs contre la protéine S-100 +

35 ULD Abs contre IFN-y est une préparation prometteuse pour traiter la sclérose en plaques, dont on considère qu'elle peut contribuer à une réhabilitation plus efficace et à une prévention des rechutes en renforçant la réponse immunitaire au pic de développement de la maladie.

Exemple 2 Le récepteur sigma-1 est un récepteur intracellulaire localisé dans les cellules du système nerveux central, les cellules de la plupart des tissus périphériques, et les cellules immunitaires. On considère que ce récepteur, par la commande de l'homéostase du calcium intracellulaire, régule les événements de signalisation intracellulaires conduisant à l'activation des facteurs de transcription correspondants et à la transcription de toute une famille de gènes. Le récepteur sigma-1 est impliqué dans la pathogenèse de différentes maladies incluant les affections lémiques et neurodégénératives. A ce sujet, les médicaments influençant ce récepteur et l'efficacité de l'interaction de ligands avec ce récepteur peuvent être considérés comme des médicaments efficaces pour le traitement des maladies neuro-infectieuses et neurodégénératives. L'effet de l'association complexe dont la combinaison inclut des doses ultra-faibles d'anticorps dirigés contre la protéine S100 (mélange de dilutions homéopathiques C12 + C30 + C50) et des doses ultra-faibles d'anticorps dirigés contre l'interféron gamma (mélange de dilutions homéopathiques C12 + C30 + C50) dans le rapport 1 : 1, et aussi de composants de la composition (doses ultra-faibles d'anticorps dirigés contre la protéine S100 (mélange de dilutions homéopathiques C12 + C30 + C50) (ULD Abs contre la protéine S-100) et doses ultra-faibles d'anticorps dirigés contre l'interféron gamma (mélange de dilutions homéopathiques C12 + C30 + C50) (ULD Abs contre IFN-y), a été examiné in vitro sur la liaison du ligand standard [3H]pentazocine avec le récepteur sigma 1 humain recombinant et évalué par le procédé à radioligand. Comme témoin, de l'eau distillée potentialisée (mélange de dilutions homéopathiques C12 + C30 + C50) (eau potentialisée) a été testée. 36 20 pl de l'association complexe ou 10 pI d'ULD Abs contre la protéine S100 ou d'ULD Abs contre IFN-y ont été introduits dans le milieu d'incubation. Ainsi, la quantité d'ULD Abs contre la protéine S100 et d'ULD Abs contre IFN-y introduite dans le puits expérimental pendant le test de l'association complexe était identique à la quantité s d'ULD Abs contre la protéine S100 et d'ULD Abs contre IFN-y testées sous forme de monopréparations, ce qui permet de comparer l'efficacité de l'association complexe avec les composants séparés qui constituent l'association complexe. De l'eau potentialisée a été introduite dans le milieu d'incubation en la quantité de 20 pI et 10 pl. Puis, 160 pl (- 200 pg de protéine) d'homogénat de membranes de cellules de la 10 lignée Jurkat (lignée de lymphocytes T leucémiques humains) ont été introduits, suivis par 20 pI de radioligand marqué au tritium [3H]pentazocine (15 nM). Pour mesurer la liaison non spécifique, à la place des préparations ou de l'eau potentialisée, 20 pl de ligand non marqué Halopéridol (10 pM) ont été introduits dans le milieu d'incubation. 15 La radioactivité a été mesurée sur un compteur de scintillation (Topcount, Packard) avec utilisation d'un mélange de scintillation (Microscint 0, Packard) après incubation pendant 120 minutes à 22°C dans du tampon Tris-HCL 50 mM (pH = 7,4) et filtration sur des filtres en fibres de verre (GF/B, Packard). La liaison spécifique (dans l'expérience ou le témoin) a été calculée comme étant la différence entre la liaison 20 covalente (dans l'expérience ou le témoin) et la liaison non spécifique. Les résultats (dans la mesure de la liaison covalente) sont représentés sous forme de pourcentage d'inhibition de la liaison spécifique dans le témoin (de l'eau potentialisée a été utilisée comme témoin) (voir le tableau 4). 25

37 Tableau 4 Effet de préparations test et de l'eau potentialisée sur la liaison du radioligand standard [3H]pentazocine avec le récepteur sigma 1 humain recombinant Groupe Quantité % de liaison spécifique % d'inhibition expérimental introduite dans de radioligand dans le témoin de la liaison le puits du radioligand expérimental dans le témoin ère 2ème mesure Valeur 1"e mesure moyenne Association 20 µl 44,2 46,2 45,2 54,8 complexe ULD Abs contre la 10 µl 70,9 62,9 66,9 33,1 protéine S-100 ULD Abs contre 10 µl 158,9 149,8 154,3 -54,3 IFN-y Eau potentialisée 20 µl 98,1 75,8 86,9 13,1 Eau potentialisée 10 µl 140,1 106,2 123,2 -23,2 0/0 de liaison spécifique dans le témoin = (liaison spécifique dans l'expérience/liaison spécifique dans le témoin) *x 100%; % d'inhibition de la liaison spécifique dans le témoin = 100% - (liaison spécifique dans l'expérience/liaison spécifique dans le témoin).x 100%).

Une inhibition de plus de 50 % montre qu'il existe un effet significatif sur la liaison. Une inhibition de 25 % à 50 % montre des effets faibles à modérés. Une inhibition inférieure à 25 % est considérée comme non significative en termes d'effet sur la liaison, et est dans les limites de l'arrière-plan. Conclusion : L'association complexe inhibe la liaison du radioligand standard [3H]pentazocine avec le récepteur sigma 1 humain recombinant plus efficacement que ses composants séparés (ULD Abs contre la protéine S100 ou ULD Abs contre IFN y). ULD Abs contre la protéine S100, introduite dans un puits expérimental en la quantité de 10 pl, inhibe plus efficacement la liaison du radioligand standard [3H]pentazocine avec le récepteur sigma 1 humain recombinant, mais l'expression de l'effet est inférieure à l'expression de l'effet avec l'association complexe. ULD Abs contre contre IFN-y, introduite dans un puits expérimental en la quantité de 10 pI, n'avait pas d'effet sur la liaison du radioligand standard [3H]pentazocine avec le récepteur sigma 1 humain.recombinant.

38 De l'eau potentialisée, introduite dans un puits expérimental en la quantité de 10 pI ou 20 pI, n'avait pas d'effet sur la liaison du radioligand standard [3H]pentazocine avec le récepteur sigma 1 humain recombinant.

Claims (14)

1. REVENDICATIONS1. Composition pharmaceutique d'association comprenant a) une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'interféron gamma et b) une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100.
2. 2. Composition pharmaceutique d'association selon la revendication 1, caractérisée en ce que la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'interféron gamma est dirigée contre l'interféron gamma entier de SEQ ID NO 1 ou SEQ ID N0 2.
3. 3. Composition pharmaceutique d'association selon la revendication 1, caractérisée en ce que la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'interféron gamma est dirigée contre un fragment de l'interféron gamma ayant des séquences choisies dans un groupe consistant en SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, SEQ ID NO. 5, SEQ ID NO. 6, SEQ ID NO. 7, SEQ ID NO. 8, SEQ ID NO. 9, SEQ ID NO. 10, SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12 et SEQ ID NO. 13.
4. 4. Composition pharmaceutique d'association selon la revendication 1, caractérisée en ce que la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100 est dirigée contre la protéine S-100 bovine entière.
5. 5. Composition pharmaceutique d'association selon la revendication 1, caractérisée en ce que la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100 est dirigée contre la protéine S-100 entière ayant la séquence SEQ ID NO 14 ou la séquence SEQ ID NO 17.
6. 6. Composition pharmaceutique d'association selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'interféron gamma est sous forme d'un mélange de dilutions homéopathiques C12, C30 et C50 imprégnant un support solide et la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100 est sous forme de mélange de dilutions homéopathiques C12, C30 et C50 imprégnant ensuite le support solide.
7. 7. Composition pharmaceutique d'association selon l'une quelconque des 30 revendications 1 à 5, caractérisée en ce que la forme activée-potentialisée d'un anticorps 40 dirigé contre l'interféron gamma est sous forme d'un mélange de dilutions homéopathiques C12, C30 et C200 imprégnant un support solide et la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100 est sous forme de mélange de dilutions homéopathiques C12, C30 et C200 imprégnant ensuite le support solide.
8. 8. Composition pharmaceutique d'association selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100 est sous forme de mélange de dilutions homéopathiques C12, C30 et C50 imprégnant un support solide et la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'interféron gamma est sous forme de mélange de dilutions homéopathiques C12, C30 et C50 imprégnant ensuite le support solide.
9. 9. Composition pharmaceutique d'association selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100 est sous forme de mélange de dilutions homéopathiques C12, C30 et C200 imprégnant un support solide et la forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'interféron gamma est sous forme de mélange de dilutions homéopathiques C12, C30 et C200 imprégnant ensuite le support solide.
10. 10. Composition pharmaceutique d'association selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisée en ce que a) ladite forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'interféron gamma et b) ladite forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100 sont chacune indépendamment un anticorps monoclonal, polyclonal ou naturel.
11. 11. Composition pharmaceutique d'association selon la revendication 10, caractérisée en ce que a) ladite forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'interféron gamma et b) ladite forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100 sont chacune indépendamment un anticorps polyclonal.
12. 12. Composition pharmaceutique d'association selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, caractérisée en ce que a) ladite forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'interféron gamma et b) ladite forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100 sont préparées par dilutions centésimales successives couplées avec une agitation de chaque dilution. 41
13. 13. Composition pharmaceutique destinée à être utilisée dans le traitement d'un patient souffrant de sclérose en plaques, ladite composition ayant été obtenue par la fourniture de a) une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre l'interféron gamma et b) une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100, préparées chacune par dilutions répétées consécutives et agitations multiples de chaque solution obtenue selon la technologie homéopathique, puis combinaison des solutions potentialisées par mélange de celles-ci, ou, à titre d'alternative, imprégnation d'une masse de support avec ladite solution combinée ou avec les solutions séparément.
14. 14. Composition pharmaceutique destinée à être utilisée dans le traitement d'un patient souffrant de sclérose en plaques, ladite composition ayant été obtenue par la fourniture d'une forme activée-potentialisée d'un anticorps dirigé contre la protéine S-100, préparée par dilutions répétées consécutives et agitations multiples de chaque solution obtenue selon la technologie homéopathique, puis combinaison des solutions potentialisées par mélange de celles-ci, ou, à titre d'alternative, imprégnation d'une masse de support avec ladite solution combinée ou avec les solutions séparément.