CZ2013159A3 - Kombinovaná farmaceutická kompozice a zpusoby lécby a prevence infekcních chorob - Google Patents
Kombinovaná farmaceutická kompozice a zpusoby lécby a prevence infekcních chorob Download PDFInfo
- Publication number
- CZ2013159A3 CZ2013159A3 CZ20130159A CZ2013159A CZ2013159A3 CZ 2013159 A3 CZ2013159 A3 CZ 2013159A3 CZ 20130159 A CZ20130159 A CZ 20130159A CZ 2013159 A CZ2013159 A CZ 2013159A CZ 2013159 A3 CZ2013159 A3 CZ 2013159A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- leu
- ser
- glu
- gin
- light
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2815—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD8
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/40—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum bacterial
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/42—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum viral
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
- A61K41/0004—Homeopathy; Vitalisation; Resonance; Dynamisation, e.g. esoteric applications; Oxygenation of blood
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/04—Drugs for disorders of the respiratory system for throat disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/241—Tumor Necrosis Factors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/249—Interferons
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2812—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD4
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
- A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
Abstract
Resení se týká kombinované farmaceutické kompozice, jez zahrnuje a) aktivovanou a potencovanou formu protilátky proti alespon jednomu cytokinu a b) aktivovanou a potencovanou formu protilátky proti alespon jednomu receptoru. Kombinované podávání techto protilátek je vhodné pro lécbu a prevenci infekcních chorob vcetne bakteriálních infekcí zpusobených ruznými infekcními agens jako je pseudotuberkulóza, cerný kasel, yersinióza, pneumonitida s ruznou etiologií, a akutních a chronických virových infekcí jako je akutní infekce dýchacího traktu, chripka ruzných typu, akutní virová hepatitida A, B, C a jiné typy hepatitidy, choroby a stavy zpusobené HIV nebo spojené s HIV vcetne AIDS.
Description
Kombinovaná farmaceutická kompozice a způsoby léčby a prevence infekčních chorob
Oblast techniky
Tento vynález se týká farmaceutické kompozice a způsobu léčby a prevence infekčních chorob včetně bakteriálních infekcí způsobených různými infekčními agens, jako je pseudotuberkulóza, černý kašel, yersinióza, pneumonitida s rozmanitou etiologií a akutní a chronické virové infekce, jako jsou akutní infekce dýchacího traktu, chřipka různých typů, akutní virový zánět jater A, B, C a jiné typy hepatitidy, choroby a stavy způsobené HIV nebo s HIV spojené včetně AIDS.
Dosavadní stav techniky
Vynález se týká oblasti medicíny a může se použít pro léčbu a prevenci infekčních chorob včetně bakteriálních infekcí způsobených různými infekčními faktory, jako je pseudotuberkulóza, černý kašel, yersinióza, pneumonitida s rozmanitou etiologií a akutní a chronické virové infekce, jako jsou akutní infekce dýchacího traktu, chřipka různých typů, akutní virový zánět jater A, B, C a jiné typy hepatitidy, choroby a stavy způsobené HIV nebo s HIV spojené, včetně AIDS.
Léčba virových onemocnění pomocí extrémně nízkých dávek protilátek proti interferonu je v oboru známa (RU 2192888 C1, A61K39/395, 11/20/2002). Avšak dnes běžně nabízený léčebný preparát nemůže být dost účinný pro léčbu nemocí spojených s HIV.
Terapeutický účinek extrémně zředěné formy protilátek (nebo v ultranízké koncentraci) potencovaných homeopatickou technologií (aktivovaná a potencovaná forma) byl objeven Dr. Olegem Epshteinem. Například patent USA č. 7,582.294 popisuje lék pro léčbu benigní hyperplazie prostaty (prostatitidy) podáváním homeopaticky aktivované formy protilátek proti prostatickému specifickému antigenu (PSA). Bylo zjištěno, že ultranízké dávky protilátek proti gama- interferonu jsou použitelné při léčbě a profylaxi chorob s virovou etiologií. Viz USA patent č. 7,572.441, zde zařazený ve své úplnosti jako odkaz.
Tento vynález je zaměřen na farmaceutickou kompozici a způsoby jejího použití při léčbě a prevenci infekčních chorob včetně bakteriálních infekcí způsobených různými infekčními agens, jako je pseudotuberkulóza, černý kašel, yersinióza, pneumonitida s rozmanitou etiologií a akutní a chronické virové infekce, jako jsou akutní infekce dýchacího traktu, chřipka různých typů, akutní virový zánět jater A, B, C a jiné typy hepatitidy, choroby a stavy způsobené HIV nebo s HIV spojené, včetně AIDS.
Řešení tohoto problému se nabízí ve formě farmaceutické kompozice pro léčbu a profylaxi (prevenci) infekčních chorob, jež zahrnuje a) aktivovanou a potencovanou formu protilátek proti cytokinů a b) aktivovanou a potencovanou formu protilátek proti receptoru.
Podstata vynálezu
V jednom ohledu vynález poskytuje kombinovanou farmaceutickou kompozici zahrnující a) aktivovanou a potencovanou formu protilátky proti alespoň jednomu cytokinů a b) aktivovanou a potencovanou formu protilátky proti alespoň jednomu receptoru. V jednom provedení farmaceutická kompozice dále zahrnuje pevný nosič, přičemž jsou uvedené aktivované a potencované formy protilátek impregnovány na uvedený pevný nosič. V jedné variantě je farmaceutická kompozice ve formě tablety.
Je výhodné, aby farmaceutická kompozice včetně uvedených aktivovaných a potencovaných forem protilátek byla ve formě směsi homeopatických zředění C12, C30 a C200. Zejména se předpokládá, že se uvedená směs homeopatických zředění C12, C30 a C200 impregnuje na pevný nosič.
Aktivované a potencované formy uvedených protilátek mohou být aktivované a potencované formy monoklonálních, polyklonálních nebo přírodních protilátek. Specificky se předpokládá, že aktivovaná a potencované forma uvedených protilátek je aktivovaná a potencované forma polyklonální protilátky. Vynález nabízí aktivované a potencované formy protilátek proti antigenu nebo antigenům se sekvencemi popsanými v této specifikaci a nárokované v připojených nárocích.
V jedné variantě zahrnuje farmaceutická kompozice aktivované a potencované formy protilátek připravené sérií po sobě jdoucích centesimálních zředění v kombinaci s třepáním každého zředění. Zvláště přichází v úvahu vertikální třepání.
V jiném ohledu poskytuje vynález způsob léčby a prevence nakažlivých nemocí, přičemž uvedený způsob zahrnuje podání pacientovi, který to potřebuje, a) aktivované a potencované formy protilátky proti alespoň jednomu cytokinu a b) aktivované a potencované formy protilátky proti alespoň jednomu receptoru. Je výhodné, když se aktivované a potencované formy protilátek podávají ve formě farmaceutické kompozice.
V jednom provedení se farmaceutická kompozice podává ve formě pevné dávkové formy pro orální podání zahrnující farmaceuticky přijatelný nosič a aktivovanou a potencovanou formu protilátky proti alespoň jednomu cytokinu a aktivovanou a potencovanou formu protilátky proti alespoň jednomu receptoru, přičemž jsou uvedené aktivované a potencované formy impregnovány na uvedený nosič. V jedné variantě představuje uvedené dávkování v pevné fázi pro orální podání tableta. Jsou dovoleny varianty a různá provedení.
V souladu se způsobem podle vynálezu se farmaceutická kompozice může podávat v jedné až třech jednotkových dávkovačích formách, přičemž se každá dávkovači forma podává jednou až šestkrát denně. V jedné variantě se farmaceutická kompozice podává dvakrát denně, přičemž každé podání tvoří dvě orální dávkovači formy. V jedné variantě se farmaceutická kompozice podává v jedné až dvou jednotkových dávkovačích formách, přičemž se každá z dávkovačích forem podává dvakrát denně. V jedné variantě se farmaceutická kompozice podává v jedné až dvou jednotkových dávkovačích formách, přičemž se každá z dávkovačích forem podává čtyřikrát denně. Všechny varianty a provedení popsaná pro provedení vynálezu jako kompozice se mohou použít v případě způsobu podle vynálezu.
Vynález je definován odkazem na připojené nároky. Se zřetelem k nárokům poskytuje příslušný výklad definic následující slovníček.
Zde používaný termín “protilátka“ znamená imunoglobulin, který se specificky váže na zvláštní prostorové a polární uspořádání jiné molekuly a proto je s ní považován za komplementární. Protilátky uváděné v nárocích mohou zahrnovat kompletní imunoglobulin nebo jeho fragment, mohou být přírodní, polyklonální nebo monoklonální a mohou zahrnovat různé třídy a izotypy jako IgA, IgD, IgE, lgG1, lgG2a, lgG2b a lgG3, IgM aj. Jejich fragmenty mohou zahrnovat Fab, Fv a F(ab')2, Fab' a podobně. Singulár “protilátka” zahrnuje plurál “protilátky”.
Zde uváděný termín “aktivovaná potencovaná forma” nebo “potencovaná forma”, týkající se protilátek, se používá pro označení produktu homeopatického potencování jakéhokoliv počátečního roztoku protilátek. “Homeopatické potencování” znamená použití homeopatických způsobů dodání homeopatické potence počátečnímu roztoku příslušné látky. “Homeopatické potencování” může mimo jiné zahrnovat například opakované sériové a po sobě jdoucí rozpouštění spojené s vnějším působením, zvláště vertikálním třepáním (mechanickým). Jinými slovy, počáteční roztok protilátky je podroben opakovanému a po sobě následujícímu ředění a mnohonásobnému vertikálnímu třepání každého vzniklého roztoku v souladu s homeopatickou technologií. Doporučená koncentrace počátečního roztoku protilátky v roztoku, zvláště ve vodě nebo ve směsi voda-ethylalkohol, je v rozmezí od asi 0,5 do asi 5,0 mg/ml. Výhodný způsob přípravy každé složky, tedy roztoku protilátky, je použití směsi tří zředění vodou nebo směsí vody a alkoholu primárního matečného roztoku (matečné tinktury) pro protilátky zředěné 10012, 10030 a 1002°°krát, což je ekvivalent centesimálních homeopatických zředění (C12, C30 a C200), nebo použití tří zředění vodou nebo směsí voda-alkohol primárního matečného roztoku protilátek zředěných 10012, 10030 a 10050 krát, což je ekvivalent centesimálních homeopatických zředění (C12, C30 a C50). Příklady homeopatického potencování se popisují v USA patentech č. 7,572,441 a 7,582,294, které jsou zde zařazeny jako odkazy v jejich úplnosti a pro daný účel. Zatímco v nárocích se používá termín “aktivovanápotencovaná forma”, v příkladech se používá termín “dávky ultranízké koncentrace” (“ultra-low doses”). Termín “dávky ultranízké koncentrace - (ultranízké dávky) (“ultralow doses”)” se stal odborným termínem v oboru vytvořeném výzkumem a používáním homeopaticky zředěných a potencovaných forem látek. Termín “ultranízké dávka” nebo “ultranízké dávky” se používá jako primárně synonymní a plně zástupný pro termín “aktivovaný a potencovaný” používaný v nárocích.
Jinými slovy je protilátka v „aktivované a potencované” nebo “potencované” formě, když jsou splněny tři podmínky. Za prvé je „aktivovaná a potencovaná” forma protilátky produkt postupu přípravy, který je v homeopatickém oboru dobře přijímán. Za druhé musí mít “aktivovaná a potencovaná” forma protilátky biologickou aktivitu stanovenou způsoby dobře přijímanými v soudobé farmakologii. A za třetí se biologická aktivita vykazovaná ’’aktivovanou a potencovanou” formou protilátky nemůže vysvětlovat přítomností molekulární formy protilátky ve finálním produktu homeopatického postupu.
Například aktivovaná a potencované forma protilátek se může připravit tak, že se počáteční izolovaná protilátka v molekulární formě podrobí opakovaným mnohonásobným zředěním spojeným s vnějšími nárazy jako například mechanickým otřesům (třepání). Vnější působení v průběhu snižování koncentrace se také může provést například expozicí ultrazvukovým, elektromagnetickým nebo jiným fyzikálním faktorům. V. Schwabe Homeopathic medicines, Μ., 1967, U.S. patenty č. 7,229,648 a 4,311,897, jež jsou ve své úplnosti zahrnuty ve formě odkazu a pro tento účel popisují tyto postupy, jež představují dobře přijímané způsoby homeopatického potencování v oboru homeopatie. Tento postup vede k rovnoměrnému snižování molekulární koncentrace počáteční molekulární formy protilátky. Tento postup se opakuje, dokud se nedosáhne požadované homeopatické potence. Pro jednotlivé protilátky je možno stanovit požadovanou homeopatickou potenci podrobením průběžných zředění biologickému testování v požadovaném farmakologickém modelu. I když to není takto vymezeno, může „homeopatické potencování“ zahrnovat například opakované za sebou jdoucí sériové zřeďování kombinované s vnějším působením zejména vertikálním (mechanickým) třepáním. Jinými slovy je počáteční roztok protilátky podroben po sobě jdoucímu opakovanému zřeďování a mnohonásobnému vertikálnímu třepání každého průběžně získaného roztoku v souladu s homeopatickou technologií. Výhodná koncentrace počátečního roztoku protilátky v rozpouštědle, výhodně vodě nebo směsi vody a ethylalkoholu, je v rozmezí od 0,5 do asi 5,0 mg/ml. Výhodný způsob přípravy každé složky, tedy roztoku protilátky, je použití směsi tří zředění vodou nebo směsí vody a alkoholu primárního matečného roztoku (matečné tinktury) pro protilátky zředěné 10012, 10030 a 100200 krát, což je ekvivalent centesimálních homeopatických zředění (C12, C30, a C200), nebo použití tří zředění vodou nebo směsí voda-alkohol primárního matečného roztoku protilátek zředěných 10012, 10030 a 1005°krát, což je ekvivalent centesimálních homeopatických zředění C12, C30 a C50. Příklady homeopatického potencování se popisují v USA Patentech č. 7,229.648 a 4,311.897, které jsou zde zařazeny jako odkazy pro daný účel. Postup použitelný pro “aktivovanou a potencovanou“ formu popsané protilátky se níže popisuje podrobněji.
Ohledně homeopatické léčby lidských pacientů existuje mnoho rozdílných názorů. I když tento vynález je založen na přijímaných homeopatických postupech pro získání “aktivované a potencované” formy protilátek, nespoléhá výhradně na homeopatii lidských subjektů pro dokázání své účinnosti. Vynálezcem této aplikace bylo překvapivě zjištěno a plně demonstrováno na přijímaných farmakologických modelech že roztok získávaný po mnohonásobném opakovaném a sériovém zředění výchozí molekulární formy protilátky má konečnou aktivitu, jež není dána přítomností stop molekulární formy protilátky v cílovém zředění. Zde dosahovaná “aktivovaná a potencovaná” forma protilátky je z hlediska biologické aktivity testována v dobře přijímaných farmakologických modelech aktivity, buď ve vhodných experimentech in vitro, nebo ve vhodných živočišných modelech in vivo. Experimenty uváděné v dalším poskytují důkaz biologické aktivity v takových modelech. Klinický výzkum na lidech také poskytuje důkaz, že aktivita pozorovaná při použití živočišných modelů je dobře přenosná do lidské terapie. Výzkum na lidech také poskytl důkaz dosažitelnosti zde popsaných “aktivovaných a potencovaných” forem pro léčbu specifikovaných lidských chorob nebo poruch v lékařské vědě dobře přijímaných jako patologické stavy.
“Aktivovaná a potencovaná forma protilátky uváděná v nárocích také zahrnuje jen roztoky nebo pevné preparáty, jejichž biologickou aktivitu nelze vysvětlit přítomností molekulární formy protilátky zbývající z počátečního výchozího produktu. Jinými slovy, i když se připouští, že “aktivovaná a potencovaná” forma protilátky může obsahovat stopy počáteční molekulární formy protilátky, odborník by nemohl s jakýmkoliv stupněm věrohodnosti připisovat pozorovanou biologickou aktivitu v přijímaných farmakologických modelech reziduální molekulární formě protilátky protože po sériových zředěních má zbývající molekulární forma protilátky extrémně nízkou koncentraci. I když není vynález limitován specifickou teorií, nelze biologickou aktivitu “aktivované a potencované” formy protilátek v tomto vynálezu přisuzovat počáteční molekulární formě protilátky. Přednost se dává “aktivované a potencované” formě protilátky v kapalné nebo pevné fázi, ve které je koncentrace molekulární formy pod hranicí detekce obvyklými analytickými technikami jako je kapilární elektroforéza a vysokoúčinná kapalná chromatografie. Zvláště se preferuje “aktivovaná a potencovaná” forma protilátky v kapalné nebo pevné formě, ve které je koncentrace molekulární formy protilátky pod Avogadrovým číslem. Ve farmakologii molekulárních forem terapeutických látek je běžnou praxí zkonstruovat křivku závislosti účinku na koncentraci, v níž se úroveň farmakologické reakce vynáší proti koncentraci aktivního léku podávaného pacientovi nebo testovaného in vitro.
Minimální množství léku, jež vede k detekovatelnému účinku, je známo jako prahová dávka. Specificky se předpokládá a upřednostňuje aby “aktivovaná a potencovaná” forma protilátek obsahovala molekulární protilátku - pokud vůbec nějakou v koncentraci, jež je pod prahovou dávkou pro molekulární formu protilátky v daném biologickém modelu.
Tento vynález nabízí kombinovanou farmaceutickou kompozici zahrnující aktivovanou a potencovanou formu protilátek proti cytokinu a aktivovanou a potencovanou formu protilátek proti receptoru připravenou homeopatickou technologii potencování opakovaným a trvalým zřeďováním a současně probíhajícím externím působením pomocí třepání jak se podrobněji popisuje níže. Farmaceutická kompozice podle vynálezu je zvláště užitečná při léčbě a profylaxi infekčních chorob včetně bakteriálních infekcí způsobených různými infekčními agens, jako je pseudotuberkulóza, černý kašel, yersinióza, pneumonitida s různou etiologií a akutní a chronické virové infekce jako jsou akutní infekce dýchacího traktu, chřipka různých typů, akutní virová hepatitida A, B, C a jiné typy hepatitidy, choroby a stavy způsobené HIV nebo spojené s HIV, včetně AIDS. Jak se ukazuje v příkladech, farmaceutická kompozice vynálezu má nečekaný synergický terapeutický efekt, který se projevuje mimořádnou terapeutickou účinností při léčbě a prevenci infekčních chorob včetně bakteriálních infekcí způsobených různými infekčními agens, jako je pseudotuberkulóza, černý kašel, yersinióza, pneumonitida s různou etiologií a akutní a chronické virové infekce jako jsou akutní infekce dýchacího traktu, chřipka různých typů, akutní virová hepatitida A, B, C a jiné typy hepatitidy, choroby a stavy způsobené HIV nebo spojené s HIV, včetně AIDS.
Farmaceutická kompozice podle vynálezu rozšiřuje arzenál preparátů dostupných pro léčbu a profylaxi infekčních onemocnění včetně bakteriálních infekcí a akutních a chronických virových infekcí.
Kombinovaná farmaceutická kompozice v souladu s tímto aspektem vynálezu může být v kapalné nebo pevné formě. Aktivovaná a potencovaná forma protilátek zahrnutá ve farmaceutické kompozici se připravuje z počáteční molekulární formy protilátky postupem v homeopatickém oboru přijímaným. Výchozí protilátky mohou být monoklonální nebo polyklonální protilátky připravené známými postupy, například jak se popisuje v: Immunotechniques, G. Frimel, M., “Meditsyna”, 1987, p. 9-33; “Hum. Antibodies. Monoclonal and recombinant antibodies, 30 years after” by Laffly E., Sodoyer R. - 2005 -Vol. 14.-N 1-2. P.33-55, jež jsou zde oba zahrnuty ve formě odkazu.
Monoklonální protilátky je možno získat například hybridomovou technologií. Počáteční stupeň postupu zahrnuje imunizaci založenou na principech, jež byly vyvinuty již během přípravy polyklonálního antiséra. Další stupně přípravy zahrnují produkci hybridních buněk generujících klony protilátek s identickou specifičností. Jejich oddělená izolace se provádí za použití týchž způsobů jako v případě přípravy polyklonálního antiséra.
Polyklonální protilátky je možno získat s využitím aktivní imunizace zvířat. Pro tento účel dostanou vhodná zvířata (například králíci) sérii injekcí vhodného antigenu (cytokin a receptor). Imunitní systém zvířat vytvoří odpovídající protilátky, jež se známým způsobem ze zvířat.odeberou. Tento postup umožňuje přípravu monospecifického séra s bohatým obsahem protilátek.
V případě potřeby se může sérum obsahující protilátky přečistit, například afinitní chromatografií, frakcionaci pomocí vysrážení solí nebo iontoměničovou chromatografií. Výsledné přečištěné sérum obohacené protilátkami se může použít jako výchozí materiál pro přípravu aktivované a potencované formy protilátek. Vhodná koncentrace výsledného výchozího roztoku protilátek v rozpouštědle, jímž je výhodně voda nebo směs vody a ethylalkoholu je v rozmezí od asi 0,5 do asi 5,0 mg/ml.
Výhodná procedura přípravy všech složek kombinovaného léku podle tohoto vynálezu spočívá v použití směsi tří zředění primárního matečného roztoku protilátek ve vodě a alkoholu zředěného 10012, 10030 a 10050 krát, což je ekvivalent centesimálních homeopatických zředění C12, C30, a C50, nebo zředěných 10012, 10030 a 100200 krát, což je ekvivalent centesimálních homeopatických zředění C12, C30, a C200. Pro přípravu pevné dávkovači formy se pevný nosič upraví požadovaným roztokem získaným homeopatickým postupem. Pro získání pevné jednotkové dávkovači formy v kombinované jednotce podle vynálezu se hmota nosiče impregnuje každým z těchto zředění. Obě pořadí impregnace jsou vhodná pro přípravu potřebné kombinované dávkovači formy.
Ve výhodném provedení je výchozím materiálem pro přípravu aktivované a potencované formy zahrnující kombinovanou farmaceutickou kompozici podle vynálezu polyklonální protilátka živočišného původu proti odpovídajícímu antigenu. Pro získání aktivované a potencované formy polyklonálních protilátek proti cytokinu nebo receptoru se potřebný antigen může injikovat jako imunogen do laboratorních zvířat, výhodně králíků.
Polyklonální protilátky proti CD4 lze získat užitím celé molekuly lidského receptoru CD4 s následující sekvencí.
SEQ. ID. NO. 1
Met Asn Arg | Gly Val | Pro | Phe | Arg | His | Leu | Leu | Leu | Val | Leu | Gin | ||||
10 | 1 Leu | Ala | Leu | Leu | 5 Pro | Ala | Ala | Thr | Gin | 10 Gly | Lys | Lys | Val | Val | 15 Leu |
16 Gly | Lys | Lys | Gly | 20 Asp | Thr | Val | Glu | Leu | 25 Thr | Cys | Thr | Ala | Ser | 30 Gin | |
15 | 31 Lys | Lys | Ser | Ile | 35 Gin | Phe | His | Trp | Lys | 40 Asn | Ser | Asn | Gin | Ile | 45 Lys |
46 Ile | Leu | Gly | Asn | 50 Gin | Gly | Ser | Phe | Leu | 55 Thr | Lys | Gly | Pro | Ser | 60 Lys | |
61 Leu | Asn | Asp | Arg | 65 Ala | Asp | Ser | Arg | Arg | 70 Ser | Leu | Trp | Asp | Gin | 75 Gly | |
20 | 76 Asn | Phe | Pro | Leu | 80 Ile | Ile | Lys | Asn | Leu | 85 Lys | Ile | Glu | Asp | Ser | 90 Asp |
91 Thr | Tyr | Ile | Cys | 95 Glu | Val | Glu | Asp | Gin | 100 Lys | Glu | Glu | Val | Gin | 105 Leu | |
25 | 106 Leu | Val | Phe | Gly | 110 Leu | Thr | Ala | Asn | Ser | 115 Asp | Thr | His | Leu | Leu | 120 Gin |
121 Gly | Gin | Ser | Leu | 125 Thr | Leu | Thr | Leu | Glu | 130 Ser | Pro | Pro | Gly | Ser | 135 Ser | |
136 Pro | Ser | Val | Gin | 140 Cys | Arg | Ser | Pro | Arg | 145 Gly | Lys | Asn | Ile | Gin | 150 Gly | |
30 | 151 Gly | Lys | Thr | Leu | 155 Ser | Val | Ser | Gin | Leu | 160 Glu | Leu | Gin | Asp | Ser | 165 Gly |
166 Thr | Trp | Thr | Cys | 170 Thr | Val | Leu | Gin | Asn | 175 Gin | Lys | Lys | Val | Glu | 180 Phe | |
35 | 181 Lys | Ile | Asp | Ile | 185 Val | Val | Leu | Ala | Phe | 190 Gin | Lys | Ala | Ser | Ser | 195 Ile |
196 Val | Tyr | Lys | Lys | 200 Glu | Gly | Glu | Gin | Val | 205 Glu | Phe | Ser | Phe | Pro | 210 Leu | |
211 Ala | Phe | Thr | Val | 215 Glu | Lys | Leu | Thr | Gly | 220 Ser | Gly | Glu | Leu | Trp | 225 Trp | |
40 | 226 Gin | Ala | Glu | Arg | 230 Ala | Ser | Ser | Ser | Lys | 235 Ser | Trp | Ile | Thr | Phe | 240 Asp |
241 Leu | Lys | Asn | Lys | 245 Glu | Val | Ser | Val | Lys | 250 Arg | Val | Thr | Gin | Asp | 255 Pro | |
45 | 256 Lys | Leu | Gin | Met | 260 Gly | Lys | Lys | Leu | Pro | 265 Leu | His | Leu | Thr | Leu | 270 Pro |
271 | 275 | 280 | 285 |
Gin Ala Leu 286 Leu Glu Ala 301 | Pro Lys | Gin Tyr Ala 290 | Gly Leu | Ser Gly Asn Letí 295 | Thr Asn | Leu Leu | Ala 300 Val 315 | ||||||||
Thr 305 | Gly | Lys | His | Gin 310 | Glu Val | ||||||||||
5 | Val | Met | Arg | Ala | Thr | Gin | Leu | Gin | Lys | Asn | Leu | Thr | Cys | Glu | Val |
316 | 320 | 325 | 330 | ||||||||||||
Trp | Gly | Pro | Thr | Ser | Pro | Lys | Leu | Met | Leu | Ser | Leu | Lys | Leu | Glu | |
331 | 335 | 340 | 345 | ||||||||||||
Asn | Lys | Glu | Ala | Lys | Val | Ser | Lys | Arg | Glu | Lys | Ala | Val | Trp | Val | |
10 | 346 | 350 | 355 | 360 | |||||||||||
Leu | Asn | Pro | Glu | Ala | Gly | Met | Trp | Gin | Cys | Leu | Leu | Ser | Asp | Ser | |
361 | 365 | 370 | 375 | ||||||||||||
Gly | Gin | Val | Leu | Leu | Glu | Ser | Asn | Ile | Lys | Val | Leu | Pro | Thr | Trp | |
376 | 380 | 385 | 390 | ||||||||||||
15 | Ser | Thr | Pro | Val | Gin | Pro | Met | Ala | Leu | Ile | Val | Leu | Gly | Gly | Val |
391 | 395 | 400 | 405 | ||||||||||||
Ala | Gly | Leu | Leu | Leu | Phe | Ile | Gly | Leu | Gly | Ile | Phe | Phe | Cys | Val | |
406 | 410 | 415 | 420 | ||||||||||||
Arg | Cys | Arg | His | Arg | Arg | Arg | Gin | Ala | Glu | Arg | Met | Ser | Gin | Ile | |
20 | 421 | 425 | 430 | 435 | |||||||||||
Lys | Arg | Leu | Leu | Ser | Glu | Lys | Lys | Thr | Cys | Gin | Cys | Pro | His | Arg | |
436 | 440 | 445 | 450 | ||||||||||||
Phe | Gin | Lys | Thr | Cys | Ser | Pro | Ile | ||||||||
451 | 445 | 458 |
Polyklonální protilátky proti receptoru CD4 lze získat za použití zvoleného polypeptidového fragmentu receptoru CD4 například z následujících sekvencí aminokyselin:
SEQ. ID. NO. 2
Gly | Lys | Lys | Gly | Asp | Thr | Val | Glu | Leu | Gly 26 Thr | Lys Cys | Lys Thr | Val Ala | Val Ser | Leu 30 Gin | |
35 | 31 Lys | Lys | Ser | Ile | 35 Gin | Phe | His | Trp | Lys | 40 Asn | Ser | Asn | Gin | Ile | 45 Lys |
46 Ile | Leu | Gly | Asn | 50 Gin | Gly | Ser | Phe | Leu | 55 Thr | Lys | Gly | Pro | Ser | 60 Lys | |
40 | 61 Leu | Asn | Asp | Arg | 65 Ala | Asp | Ser | Arg | Arg | 70 Ser | Leu | Trp | Asp | Gin | 75 Gly |
76 Asn | Phe | Pro | Leu | 80 Ile | Ile | Lys | Asn | Leu | 85 Lys | Ile | Glu | Asp | Ser | 90 Asp | |
91 Thr | Tyr | Ile | Cys | 95 Glu | Val | Glu | Asp | Gin | 100 Lys | Glu | Glu | Val | Gin | 105 Leu | |
45 | 106 Leu | Val | Phe | Gly | 110 Leu | Thr | Ala | Asn | Ser | 115 Asp | Thr | His | Leu | Leu | 120 Gin |
121 | 125 | 130 | 135 |
Gly 136 Pro 151 | Gin Ser | Ser Leu Thr | Leu Arg | Thr Ser | Leu Pro | Glu Arg | Ser 145 Gly 160 | Pro Lys | Pro Asn | Gly lie | Ser Gin | Ser 150 Gly 165 | |||
Vai | Gin | 140 Cys 155 | |||||||||||||
5 | Gly 166 | Lys | Thr | Leu | Ser 170 | Vai | Ser | Gin | Leu | Glu 175 | Leu | Gin | Asp | Ser | Gly 180 |
Thr 181 | Trp | Thr | Cys | Thr 185 | Vai | Leu | Gin | Asn | Gin 190 | Lys | Lys | Vai | Glu | Phe 195 | |
10 | Lys 196 | lie | Asp | lie | Vai 200 | Vai | Leu | Ala | Phe | Gin 205 | Lys | Ala | Ser | Ser | lie 210 |
Vai 211 | Tyr | Lys | Lys | Glu 215 | Gly | Glu | Gin | Vai | Glu 220 | Phe | Ser | Phe | Pro | Leu 225 | |
Ala 226 | Phe | Thr | Vai | Glu 230 | Lys | Leu | Thr | Gly | Ser 235 | Gly | Glu | Leu | Trp | Trp 240 | |
15 | Gin 241 | Ala | Glu | Arg | Ala 245 | Ser | Ser | Ser | Lys | Ser 250 | Trp | lie | Thr | Phe | Asp 255 |
Leu 256 | Lys | Asn | Lys | Glu 260 | Vai | Ser | Vai | Lys | Arg 265 | Vai | Thr | Gin | Asp | Pro 270 | |
20 | Lys 271 | Leu | Gin | Met | Gly 275 | Lys | Lys | Leu | Pro | Leu 280 | His | Leu | Thr | Leu | Pro 285 |
Gin 286 | Ala | Leu | Pro | Gin 290 | Tyr | Ala | Gly | Ser | Gly 295 | Asn | Leu | Thr | Leu | Ala 300 | |
Leu 301 | Glu | Ala | Lys | Thr 305 | Gly | Lys | Leu | His | Gin 310 | Glu | Vai | Asn | Leu | Vai 315 | |
25 | Vai 316 | Met | Arg | Ala | Thr 320 | Gin | Leu | Gin | Lys | Asn 325 | Leu | Thr | Cys | Glu | Vai 330 |
Trp 331 | Gly | Pro | Thr | Ser 335 | Pro | Lys | Leu | Met | Leu 340 | Ser | Leu | Lys | Leu | Glu 345 | |
30 | Asn 346 | Lys | Glu | Ala | Lys 350 | Vai | Ser | Lys | Arg | Glu 355 | Lys | Ala | Vai | Trp | Vai 360 |
Leu 361 | Asn | Pro | Glu | Ala 365 | Gly | Met | Trp | Gin | Cys 370 | Leu | Leu | Ser | Asp | Ser 375 | |
Gly 376 | Gin | Vai | Leu | Leu 380 | Glu | Ser | Asn | lie | Lys 385 | Vai | Leu | Pro | Thr | Trp 390 | |
35 | Ser 391 | Thr | Pro | Vai | Gin 395 | Pro | Met | Ala | Leu | lie 400 | Vai | Leu | Gly | Gly | Vai 405 |
Ala 406 | Gly | Leu | Leu | Leu 410 | Phe | lie | Gly | Leu | Gly 415 | lie | Phe | Phe | Cys | Vai 420 | |
40 | Arg 421 | Cys | Arg | His | Arg 425 | Arg | Arg | Gin | Ala | Glu 43 0 | Arg | Met | Ser | Gin | lie 435 |
45 | Lys 436 Phe 451 SEQ | Arg Gin . ID. 1 | Leu Lys NO. 3 | Leu Thr | Ser 440 Cys 445 | Glu Ser | Lys Pro lie 412 | Lys lie 458 Gly | Thr Leu | Cys 445 Gly 415 | Gin lie | Cys Phe | Pro Phe | His Cys | Arg 450 Vai 420 |
50 | Arg 421 | Cys | Arg | His | Arg 425 | Arg | Arg | Gin | Ala | Glu 430 | Arg | Met | Ser | Gin | lie 435 |
Lys Arg Leu Leu | Ser Glu Lys Lys Thr Cys Gin Cys | Pro His Arg 450 | ||||
436 Phe Gin Lys 451 | Thr | 440 Cys 445 | Ser | 445 | ||
Pro | Ile 458 | |||||
SEQ. ID. NO. 4 | Gly Lys Lys 26 | Val Val Leu 30 | ||||
Gly Lys Lys 31 | Gly | Asp 35 | Thr | Val | Glu Leu Thr Cys Thr 40 | Ala Ser Gin 45 |
Lys Lys Ser 46 SEQ. ID. NO. 5 91 | Ile | Gin 50 95 | Phe | His | Trp Lys Asn Ser Asn 55 100 | Gin Ile Lys 60 Asp 105 |
Thr Tyr Ile 106 SEQ. ID. NO. 6 | Cys | Glu 110 | Val | Glu | Asp Gin Lys Glu Glu 115 Lys Glu Glu 115 | Val Gin 119 Val Gin Leu 120 |
Leu Val Phe 121 Gly Gin Ser 136 | Gly Leu 139 | Leu 125 | Thr | Ala | Asn Ser Asp Thr His 130 | Leu Leu Gin 135 |
Vzorová procedura přípravy počátečních polyklonálních protilátek proti receptoru CD4 se může popsat takto. 7-9 dní před odběrem krevních vzorků dostanou králíci 1-3 nitrožilní injekce požadovaných antigenů pro zvýšení hladiny polyklonálních protilátek v krevním řečišti králíků. Po imunizaci se odeberou vzorky krve pro testování koncentrace protilátek. Maximální úrovně imunitní reakce na rozpustný atigen se typicky dosáhne do 40 až 60 dní po první injekci antigenů. Po dokončení prvního cyklu imunizace králíci dostanou 30 dní na rehabilitaci, po které následuje reimunizace dalšími 1 až 3 nitrožilními injekcemi.
Při přípravě antiséra obsahujícího potřebné protilátky se imunizovaná králičí krev králíkům odebere a umístí do 50ml trubky odstředivky. Výsledná sraženina vytvořená na stranách trubky se odstraní dřevěnou stěrkou a do sraženiny ve středu trubky se umístí tyčinka. Potom se krev na jednu noc přenese do ledničky s teplotou asi 40 °C. Další den se sejme sraženina z tyčinky a zbývající kapalina se odstřeďuje minut při 13.000 otáčkách za minutu. Tekutina supernatantu je cílové antisérum. Získané antisérum je typicky žluté. K získanému antiséru se přidá 20 % hmotn. NaNs do finální koncentrace 0,02 % a do použití se uchovává ve zmraženém stavu při teplotě -20 °C nebo bez užití NaNs při teplotě -70 °C. Pro oddělení cílových protilátek proti gama-interferonu z antiséra je vhodný tento sled absorpčních operací v pevné fázi:
ml králičího antiséra se dvakrát zředí 0,15 M NaCI, potom se přidá 6,26 g NaaSCú, míchá se a 12 až 16 hodin inkubuje při 4 °C. Sediment se odstraní odstředěním, zředí v 10 ml fosfátového pufru a dialyzuje proti témuž pufru během jedné noci při teplotě prostředí. Po odstranění sedimentu se roztok zpracuje v koloně s DEAE celulózovou náplní po úpravě pH fosfátovým pufrem. Frakce protilátky se stanoví změřením optické hustoty eluátu na vlnové délce 280 nm.
Izolované surové protilátky se přečistí afinitní chromatografií vázáním získaných protilátek na antigen CD4 umístěný na nerozpustné matrici chromatografického média s následnou elucí koncentrovanými vodnými roztoky soli.
Výsledný pufrovaný roztok se používá jako počáteční roztok v postupu homeopatického ředění používaném pro přípravu aktivované a potencované formy protilátek. Výhodná koncentrace počátečního matečného roztoku polyklonálních antigenem přečištěných králičích protilátek proti receptoru CD4 je 0,5 až 5,0 mg/ml, výhodně 2,0 až 3,0 mg/ml.
Polyklonální protilátky proti gama-interferonu lze též získat podobným způsobem, který byl popsán pro protilátky proti receptoru CD4 za použití vhodného adjuvans. Polyklonální protilátky proti gama-interferonu lze získat za použití celé molekuly gama-interferonu s následující sekvencí:
SEQ ID NO: 7
Met | Lys | Tyr | Thr | Ser Tyr | Ile | Leu | Ala | Phe | Gin | Leu | Cys | Ile | Val |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||
Leu 16 | Gly | Ser | Leu | Gly Cys 20 | Tyr | Cys | Gin | Asp 25 | Pro | Tyr | Val | Lys | Glu 30 |
Ala 31 | Glu | Asn | Leu | Lys Lys 35 | Tyr | Phe | Asn | Ala 40 | Gly | His | Ser | Asp | Val 45 |
Ala 46 | Asp | Asn | Gly | Thr Leu 50 | Phe | Leu | Gly | Ile 55 | Leu | Lys | Asn | Trp | Lys 60 |
Glu 61 | Glu | Ser | Asp | Arg Lys 65 | Ile | Met | Gin | Ser 70 | Gin | Ile | Val | Ser | Phe 75 |
Tyr 76 | Phe | Lys | Leu | Phe Lys 80 | Asn | Phe | Lys | Asp 85 | Asp | Gin | Ser | Ile | Gin 90 |
Lys 91 | Ser | Val | Glu Thr 95 | Ile | Lys | Glu | Asp | Met 100 | Asn | Val | Lys | Phe | Phe 105 | |
Asn 106 | Ser | Asn | Lys | Lys 110 | Lys | Arg | Asp | Asp | Phe 115 | Glu | Lys | Leu | Thr | Asn 120 |
Tyr 121 | Ser | Val | Thr | Asp 125 | Leu | Asn | Val | Gin | Arg 130 | Lys | Ala | Ile | His | Glu 135 |
Leu 136 | Ile | Gin | Val | Met 140 | Ala | Glu | Leu | Ser | Pro 145 | Ala | Ala | Lys | Thr | Gly 150 |
Lys 151 | Arg | Lys | Arg | Ser 155 | Gin | Met | Leu | Phe | Arg 160 | Gly | Arg | Arg | Ala | Ser 165 |
Gin
166
Polyklonální protilátky proti gama-interferonu lze získat použitím celé molekuly gama-interferonu s následující sekvencí:
SEQ ID NO: 8
Met | Lys | Tyr Thr | Ser | Tyr | Ile | Leu Ala | Phe | Gin | Leu | Cys | Ile | Val | ||
1 | 5 | 10 | 15 | |||||||||||
Leu 16 | Gly | Ser | Leu | Gly 20 | Cys | Tyr | Cys | Gin | Asp 25 | Pro | Tyr | Val | Lys | Glu 30 |
Ala 31 | Glu | Asn | Leu | Lys 35 | Lys | Tyr | Phe | Asn | Ala 40 | Gly | His | Ser | Asp | Val 45 |
Ala 46 | Asp | Asn | Gly | Thr 50 | Leu | Phe | Leu | Gly | Ile 55 | Leu | Lys | Asn | Trp | Lys 60 |
Glu 61 | Glu | Ser | Asp | Arg 65 | Lys | Ile | Met | Gin | Ser 70 | Gin | Ile | Val | Ser | Phe 75 |
Tyr 76 | Phe | Lys | Leu | Phe 80 | Lys | Asn | Phe | Lys | Asp 85 | Asp | Gin | Ser | Ile | Gin 90 |
Lys 91 | Ser | Val | Glu | Thr 95 | Ile | Lys | Glu | Asp | Met 100 | Asn | Val | Lys | Phe | Phe 105 |
Asn 106 | Ser | Asn | Lys | Lys 110 | Lys | Arg | Asp | Asp | Phe 115 | Glu | Lys | Leu | Thr | Asn 120 |
Tyr 121 | Ser | Val | Thr | Asp 125 | Leu | Asn | Val | Gin | Arg 130 | Lys | Ala | Ile | His | Glu 135 |
Leu 136 | Ile | Gin | Val | Met 140 | Ala | Glu | Leu | Ser | Pro 145 | Ala | Ala | Lys | Thr | Gly 150 |
Lys 151 | Arg | Lys | Arg | Ser 155 | Gin | Met | Leu | Phe | Gin 160 | Gly | Arg | Arg | Ala | Ser 165 |
Gin
166
Rovněž přichází v úvahu použití fragmentů gama-interferonu jako antigenu. Pro tento antigen je vhodná tato sekvence:
SEQ ID NO: 9
Ile Leu Ala Phe Gin Leu Cys Ile Val
Leu | Gly | Ser | Leu | Gly | Cys | Tyr | Cys | Gin | Asp | Pro | Tyr | Val | Lys | Glu | |
16 | 20 | 25 | 30 | ||||||||||||
Ala | Glu | Asn | Leu | Lys | Lys | Tyr | Phe | Asn | Ala | Gly | His | Ser | Asp | Val | |
31 | 35 | 40 | 45 | ||||||||||||
5 | Ala | Asp | Asn | Gly | Thr | Leu | Phe | Leu | Gly | Ile | |||||
46 | 50 | 55 |
SEQ ID NO: 10 | Gin Asp | Pro | Tyr | Val | Lys | Glu | |||||||||
10 | Ala | Glu | Asn | Leu | Lys | Lys | Tyr | Phe | 24 Asn | Ala | Gly | His | Ser | Asp | 30 Val |
31 Ala | Asp | Asn | Gly | 35 Thr | Leu | Phe | Leu | Gly | 40 Ile | Leu | Lys | Asn | Trp | 45 Lys | |
15 | 46 Glu | Glu | Ser | Asp | 50 Arg | Lys | Ile | Met | Gin | 55 Ser | Gin | Ile | Val | Ser | 60 Phe |
61 Tyr | Phe | Lys | Leu | 65 Phe | Lys | Asn | Phe | Lys | 70 Asp | Asp | Gin | Ser | Ile | 75 Gin | |
76 Lys | Ser | Val | Glu | 80 Thr | Ile | Lys | Glu | Asp | 85 Met | Asn | Val | Lys | Phe | 90 Phe | |
20 | 91 Asn | Ser | Asn | Lys | 95 Lys | Lys | Arg | Asp | Asp | 100 Phe | Glu | Lys | Leu | Thr | 105 Asn |
106 Tyr | Ser | Val | Thr | 110 Asp | Leu | Asn | Val | Gin | 115 Arg | Lys | Ala | Ile | His | 120 Glu | |
25 | 121 Leu | Ile | Gin | Val | 125 Met | Ala | Glu | Leu | Ser | 130 Pro | Ala | Ala | Lys | Thr | 135 Gly |
136 Lys | Arg | Lys | Arg | 140 Ser | Gin | Met | Leu | Phe | 145 Arg | Gly | Arg | Arg | Ala | 150 Ser | |
30 35 | 151 Gin 166 SEQ ID NO: 11 Ala Glu Asn Leu | 155 Lys | Lys | Tyr | Phe | Gin 24 Asn | 160 Asp Ala | Pro Gly | Tyr His | Val Ser | Lys Asp | 165 Glu 30 Val | |||
31 Ala | Asp | Asn | Gly | 35 Thr | Leu | Phe | Leu | Gly | 40 Ile | Leu | Lys | Asn | Trp | 45 Lys | |
46 Glu | Glu | Ser | Asp | 50 Arg | Lys | Ile | Met | Gin | 55 Ser | Gin | Ile | Val | Ser | 60 Phe | |
40 | 61 Tyr | Phe | Lys | Leu | 65 Phe | Lys | Asn | Phe | Lys | 70 Asp | Asp | Gin | Ser | Ile | 75 Gin |
76 Lys | Ser | Val | Glu | 80 Thr | Ile | Lys | Glu | Asp | 85 Met | Asn | Val | Lys | Phe | 90 Phe | |
45 | 91 Asn | Ser | Asn | Lys | 95 Lys | Lys | Arg | Asp | Asp | 100 Phe | Glu | Lys | Leu | Thr | 105 Asn |
106 Tyr | Ser | Val | Thr | 110 Asp | Leu | Asn | Val | Gin | 115 Arg | Lys | Ala | He | His | 120 Glu | |
121 Leu | Ile | Gin | Val | 125 Met | Ala | Glu | Leu | Ser | 130 Pro | Ala | Ala | LyS | Thr | 135 Gly | |
50 | 136 Lys | Arg | Lys | Arg | 140 Ser | Gin | Met | Leu | Phe | 145 Gin | Gly | Arg | Arg | Ala | 150 Ser |
151 | 155 | 160 | 165 |
Gin
166
SEQ ID NO: 12
5 | Gin 69 | Ser | Gin | He | Vai | Ser | Phe 75 | |||||||
Tyr 76 | Phe | Lys | Leu | Phe 80 | Lys | Asn Phe | Lys | Asp 85 | Asp | Gin | Ser | He | Gin 90 | |
10 | Lys 91 | Ser | Vai | Glu | Thr 95 | He | Lys Glu | Asp | Met 100 | Asn | Vai | Lys | Phe | Phe 105 |
15 | Asn 106 Tyr 121 | Ser Ser | Asn Vai 123 | Lys | Lys 110 | Lys | Arg Asp | Asp | Phe 115 | Glu | Lys | Leu | Thr | Asn 120 |
SEQ ID NO: 13 | ||||||
Met 100 | Asn | Vai | Lys | Phe | Phe 105 | |
20 | Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe 106 110 115 | Glu | Lys | Leu | Thr | Asn 120 |
25 | Tyr Ser Vai Thr Asp Leu Asn Vai Gin Arg 121 125 130 Leu He Gin Vai Met Ala Glu Leu Ser Pro 136 140 145 | Lys | Ala | He | His | Glu 135 |
SEQ ID NO: 14 | |||||||||||||||
Ser 92 | Vai | Glu Thr 95 | He | Lys Glu | Asp | Met 100 | Asn | Vai | Lys | Phe | Phe 105 | ||||
30 | Asn 106 Tyr 121 | Ser Ser | Asn Vai | Lys Thr | Lys 110 Asp 125 | Lys Leu | Arg Asn | Asp Vai | Asp Gin | Phe 115 Arg 130 | Glu | Lys | Leu | Thr | Asn 120 |
35 | SEQ ID NO: 15 |
40 | Val Thr Asp Leu Asn Vai Gin Arg Lys Ala He His Glu 123 125 130 135 Leu He Gin Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala 136 140 145 147 SEQ ID NO: 16 Ser Tyr He Leu Ala Phe Gin Leu Cys He Val 5 10 15 |
45 | Leu Gly Ser Leu Gly Cys Tyr Cys Gin Asp Pro Tyr Val Lys Glu 16 20 25 30 |
Ala Glu Asn Leu Lys Lys Tyr Phe Asn Ala Gly His Ser Asp Val 31 35 40 45 |
SEQ ID NO: 17
Glu Thr lie Lys Glu Asp Met Asn Vai Lys Phe Phe
100 105
Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp
106 110 114
Polyklonální protilátky proti gama-interferonu lze získat za použití molekuly rekombinantního gama-interferonu s následující sekvencí.
SEQ | ID NO: 18 | ||||||||||||||
Met | Gin 24 | Asp | Pro | Tyr | Val | Lys | Glu 30 | ||||||||
15 | Ala 31 | Glu | Asn | Leu | Lys 35 | Lys | Tyr | Phe | Asn | Ala 40 | Gly | His | Ser | Asp | Val 45 |
Ala 46 | Asp | Asn | Gly | Thr 50 | Leu | Phe | Leu | Gly | lie 55 | Leu | Lys | Asn | Trp | Lys 60 | |
Glu 61 | Glu | Ser | Asp | Arg 65 | Lys | lie | Met | Gin | Ser 70 | Gin | lie | Val | Ser | Phe 75 | |
20 | Tyr 76 | Phe | Lys | Leu | Phe 80 | Lys | Asn | Phe | Lys | Asp 85 | Asp | Gin | Ser | lie | Gin 90 |
Lys 91 | Ser | Val | Glu | Thr 95 | lie | Lys | Glu | Asp | Met 100 | Asn | Val | Lys | Phe | Phe 105 | |
25 | Asn 106 | Ser | Asn | Lys | Lys 110 | Lys | Arg | Asp | Asp | Phe 115 | Glu | Lys | Leu | Thr | Asn 120 |
Tyr 121 | Ser | Val | Thr | Asp 125 | Leu | Asn | Val | Gin | Arg 130 | Lys | Ala | lie | His | Glu 135 | |
Leu 136 | lie | Gin | Val | Met 140 | Ala | Glu | Leu | Ser | Pro 145 | Ala | Ala | Lys | Thr | Gly 150 | |
30 35 | Lys Arg Lys Arg 151 Gin 166 SEQ ID NO: 19 | Ser 155 | Gin | Met | Leu Met | Phe Gin 24 | Gin 160 Asp | Gly Pro | Arg Tyr | Arg Val | Ala Lys | Ser 165 Glu 30 | |||
Ala 31 | Glu | Asn | Leu | Lys 35 | Lys | Tyr | Phe | Asn | Ala 40 | Gly | His | Ser | Asp | Val 45 | |
40 | Ala 46 | Asp | Asn | Gly | Thr 50 | Leu | Phe | Leu | Gly | lie 55 | Leu | Lys | Asn | Trp | Lys 60 |
Glu 61 | Glu | Ser | Asp | Arg 65 | Lys | lie | Met | Gin | Ser 70 | Gin | lie | Val | Ser | Phe 75 | |
45 | Tyr 76 | Phe | Lys | Leu | Phe 80 | Lys | Asn | Phe | Lys | Asp 85 | Asp | Gin | Ser | Tle | Gin 90 |
Lys 91 | Ser | Val | Glu | Thr 95 | lie | Lys | Glu | Asp | Met 100 | Asn | Val | Lys | Phe | Phe 105 | |
Asn 106 | Ser | Asn | Lys | Lys 110 | Lys | Arg | Asp | Asp | Phe 115 | Glu | Lys | Leu | Thr | Asn 120 | |
50 | Tyr 121 | Ser | Val | Thr | Asp 125 | Leu | Asn | Val | Gin | Arg 130 | Lys | Ala | lie | His | Glu 135 |
Leu He Gin Val Met Ala Glu Leu Ser Pro Ala Ala Lys Thr Gly
136 140 145 150
Lys Arg Lys Arg Ser Gin Met Leu Phe Arg Gly Arg Arg Ala Ser
151 155 160 165
Gin
166
Polyklonální protilátky proti alfa-interferonu lze získat způsobem podobným způsobu popsanému pro protilátky proti receptoru CD4 za použití vhodného adjuvans. Polyklonální protilátky proti alfa-interferonu lze získat za použití celé molekuly lidského alfa-interferonu typu 8 následující sekvence.
SEQ ID NO: 20
Met | Ala Leu Thr | Phe | Tyr Leu | Leu Val | Ala Leu | Val | Val | Leu | Ser | ||||||
15 | 1 Tyr | Lys | Ser | Phe | 5 Ser | Ser | Leu | Gly | Cys | 10 Asp | Leu | Pro | Gin | Thr | 15 His |
16 Ser | Leu | Gly | Asn | 20 Arg | Arg | Ala | Leu | Ile | 25 Leu | Leu | Ala | Gin | Met | 30 Arg | |
20 | 31 Arg | Ile | Ser | Pro | 35 Phe | Ser | Cys | Leu | Lys | 40 Asp | Arg | His | Asp | Phe | 45 Glu |
46 Phe | Pro | Gin | Glu | 50 Glu | Phe | Asp | Asp | Lys | 55 Gin | Phe | Gin | Lys | Ala | 60 Gin | |
61 Ala | Ile | Ser | Val | 65 Leu | His | Glu | Met | Ile | 70 Gin | Gin | Thr | Phe | Asn | 75 Leu | |
25 | 76 Phe | Ser | Thr | Lys | 80 Asp | Ser | Ser | Ala | Ala | 85 Leu | Asp | Glu | Thr | Leu | 90 Leu |
91 Asp | Glu | Phe | Tyr | 95 Ile | Glu | Leu | Asp | Gin | 100 Gin | Leu | Asn | Asp | Leu | 105 Glu | |
30 | 106 Ser | Cys | Val | Met | 110 Gin | Glu | Val | Gly | Val | 115 Ile | Glu | Ser | Pro | Leu | 120 Met |
121 Tyr | Glu | Asp | Ser | 125 Ile | Leu | Ala | Val | Arg | 130 Lys | Tyr | Phe | Gin | Arg | 135 Ile | |
136 Thr | Leu | Tyr | Leu | 140 Thr | Glu | Lys | Lys | Tyr | 145 Ser | Ser | Cys | Ala | Trp | 150 Glu | |
35 | 151 Val | Val | Arg | Ala | 155 Glu | Ile | Met | Arg | Ser | 160 Phe | Ser | Leu | Ser | Ile | 165 Asn |
166 Leu 181 | Gin | Lys | Arg | 170 Leu 185 | Lys | Ser | Lys | Glu 189 | 175 | 180 |
Polyklonální protilátky proti alfa-interferonu lze získat za použití celé molekuly lidského alfa-interferonu typu 2 následující sekvence:
SEQ ID NO: 21
Met Ala Leu Thr Phe Ala Leu Leu Val Ala Leu Leu Val Leu Ser
10 15
Cys Lys Ser Ser Cys Ser Val Gly Cys Asp Leu Pro Gin Thr His
20 25 30
Ser 31 Lys 46 | Leu Ile | Gly Ser | Ser Arg Arg Thr | Leu Met | Leu 40 Asp 55 | Leu Ala Gin | Mefc Phe | Arg 45 Gly 60 | |||||||
Leu | 35 Phe 50 | Ser | Cys | ||||||||||||
Leu | Lys | Arg | His | Asp | |||||||||||
5 | Phe 61 | Pro | Gin | Glu | Glu 65 | Phe | Gly | Asn | Gin | Phe 70 | Gin | Lys | Ala | Glu | Thr 75 |
Ile 76 | Pro | Val | Leu | His 80 | Glu | Met | Ile | Gin | Gin 85 | Ile | Phe | Asn | Leu | Phe 90 | |
10 | Ser 91 | Thr | Lys | Asp | Ser 95 | Ser | Ala | Ala | Trp | Asp 100 | Glu | Thr | Leu | Leu | Asp 105 |
Lys 106 | Phe | Tyr | Thr | Glu 110 | Leu | Tyr | Gin | Gin | Leu 115 | Asn | Asp | Leu | Glu | Ala 120 | |
Cys 121 | Val | Ile | Gin | Gly 125 | Val | Gly | Val | Thr | Glu 130 | Thr | Pro | Leu | Met | Lys 135 | |
15 | Glu 136 | Asp | Ser | Ile | Leu 140 | Ala | Val | Arg | Lys | Tyr 145 | Phe | Gin | Arg | Ile | Thr 150 |
Leu 151 | Tyr | Leu | Lys | Glu 155 | Lys | Lys | Tyr | Ser | Pro 160 | Cys | Ala | Trp | Glu | Val 165 | |
20 | Val 166 Gin 181 | Arg Glu | Ala Ser | Glu Leu | Ile 170 Arg 185 | Met Ser | Arg Lys | Ser Glu 188 | Phe | Ser 175 | Leu | Ser | Thr | Asn | Leu 180 |
Polyklonální protilátky proti alfa-interferonu lze získat za použití celé molekuly lidského alfa-interferonu typu 17 následující sekvence.
SEQ ID NO: 22
Met | Ala | Leu Ser | Phe | Ser | Leu | Leu | Met Ala | Val | Leu | Val | Leu | Ser | |||
30 | 1 Tyr | Lys | Ser | Ile | 5 Cys | Ser | Leu | Gly | Cys | 10 Asp | Leu | Pro | Gin | Thr | 15 His |
16 Ser | Leu | Gly | Asn | 20 Arg | Arg | Ala | Leu | Ile | 25 Leu | Leu | Ala | Gin | Met | 30 Gly | |
35 | 31 Arg | Ile | Ser | Pro | 35 Phe | Ser | Cys | Leu | Lys | 40 Asp | Arg | His | Asp | Phe | 45 Gly |
46 Leu | Pro | Gin | Glu | 50 Glu | Phe | Asp | Gly | Asn | 55 Gin | Phe | Gin | Lys | Thr | 60 Gin | |
61 Ala | Ile | Ser | Val | 65 Leu | His | Glu | Met | Ile | 70 Gin | Gin | Thr | Phe | Asn | 75 Leu | |
40 | 76 Phe | Ser | Thr | Glu | 80 Asp | Ser | Ser | Ala | Ala | 85 Trp | Glu | Gin | Ser | Leu | 90 Leu |
91 Glu | Lys | Phe | Ser | 95 Thr | Glu | Leu | Tyr | Gin | 100 Gin | Leu | Asn | Asn | Leu | 105 Glu | |
45 | 106 Ala | Cys | Val | Ile | 110 Gin | Glu | Val | Gly | Met | 115 Glu | Glu | Thr | Pro | Leu | 120 Met |
121 Asn | Glu | Asp | Ser | 125 Ile | Leu | Ala | Val | Arg | 130 Lys | Tyr | Phe | Gin | Arg | 135 Ile | |
136 Thr | Leu | Tyr | Leu | 140 Thr | Glu | Lys | Lys | Tyr | 145 Ser | Pro | Cys | Ala | Trp | 150 Glu | |
50 | 151 Val | Val | Arg | Ala | 155 Glu | Ile | Met | Arg | Ser | 160 Leu | Ser | Phe | Ser | Thr | 165 Asn |
166 Leu | Gin | Lys | Ile | 170 Leu | Arg | Arg | Lys | Asp | 175 | 180 |
181
185
189
Polyklonální protilátky proti alfa-interferonu lze získat za použití celé molekuly lidského alfa-interferonu typu 4 následující sekvence.
SEQ ID NO: 23
Met Ala Leu Ser Phe Ser Leu Leu Met Ala Val Leu Val Leu Ser 15 1015
Tyr Lys Ser He Cys Ser Leu Gly Cys Asp Leu Pro Gin ThrHis
20 2530
Ser Leu Gly Asn Arg Arg Ala Leu He Leu Leu Ala Gin MetGly
35 4045
Arg He Ser His Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Asp PheGly
50 5560
Phe Pro Glu Glu Glu Phe Asp Gly His Gin Phe Gin Lys AlaGin
65 7075
Ala Ile Ser Val Leu His Glu Met Ile Gin Gin Thr Phe Asn Leu 76 80 8590
Phe Ser Thr Glu Asp Ser Ser Ala Ala Trp Glu Gin Ser LeuLeu
95 100105
Glu Lys Phe Ser Thr Glu Leu Tyr Gin Gin Leu Asn Asp Leu Glu 106 110 115120
Ala Cys Val Ile Gin Glu Val Gly Val Glu Glu Thr Pro LeuMet
121 125 130135
Asn Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gin ArgIle
136 140 145150
Thr Leu Tyr Leu Thr Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala TrpGlu
151 155 160165
Val Val Arg Ala Glu lie Met Arg Ser Leu Ser Phe Ser ThrAsn
166 170 175180
Leu Gin Lys Arg Leu Arg Arg Lys Asp 181 185189
Polyklonální protilátky proti alfa-interferonu lze získat za použití celé molekuly lidského alfa-interferonu typu 21 následující sekvence.
SEQ ID NO: 24
Met Ala Leu Ser Phe Ser Leu Leu Met Ala Val Leu Val Leu Ser 1 5 1015
Tyr Lys Ser He Cys Ser Leu Gly Cys Asp Leu Pro Gin ThrHis
20 2530
Ser Leu Gly Asn Arg Arg Ala Leu He Leu Leu Ala Gin MetGly
35 4045
Arg He Ser Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Asp PheGly
50 5560
Phe Pro Gin Glu Glu Phe Asp Gly Asn Gin Phe Gin Lys AlaGin
65 7075
Ala Ile Ser Val Leu His Glu Met Ile Gin Gin Thr Phe AsnLeu
80 8590
Phe | Ser | Thr | Lys | Asp | Ser | Ser | Ala | Thr | Trp | Glu | Gin | Ser | Leu | Leu |
91 | 95 | 100 | 105 | |||||||||||
Glu | Lys | Phe | Ser | Thr | Glu | Leu | Asn | Gin | Gin | Leu | Asn | Asp | Leu | Glu |
106 | 110 | 115 | 120 | |||||||||||
Ala | Cys | Val | Ile | Gin | Glu | Val | Gly | Val | Glu | Glu | Thr | Pro | Leu | Met |
121 | 125 | 130 | 135 | |||||||||||
Asn | Val | Asp | Ser | Ile | Leu | Ala | Val | Lys | Lys | Tyr | Phe | Gin | Arg | Ile |
136 | 140 | 145 | 150 | |||||||||||
Thr | Leu | Tyr | Leu | Thr | Glu | Lys | Lys | Tyr | Ser | Pro | Cys | Ala | Trp | Glu |
151 | 155 | 160 | 165 | |||||||||||
Val | Val | Arg | Ala | Glu | Ile | Met | Arg | Ser | Phe | Ser | Leu | Ser | Lys | Ile |
166 | 170 | 175 | 180 | |||||||||||
Phe | Gin | Glu | Arg | Leu | Arg | Arg | Lys | Glu | ||||||
181 | 185 | 189 |
Polyklonální protilátky proti alfa-interferonu lze získat za použití celé molekuly lidského alfa-interferonu typu 1/13 následující sekvence.
SEQ ID NO: 25
Met | Ala Ser | Pro | Phe | Ala | Leu | Leu | Met | Val | Leu | Val | Val | Leu | Ser | |
1 | 5 | 10 | 15 | |||||||||||
Cys | Lys | Ser | Ser | Cys | Ser | Leu | Gly | Cys | Asp | Leu | Pro | Glu | Thr | His |
16 | 20 | 25 | 30 | |||||||||||
Ser | Leu | Asp | Asn | Arg | Arg | Thr | Leu | Met | Leu | Leu | Ala | Gin | Met | Ser |
31 | 35 | 40 | 45 | |||||||||||
Arg | Ile | Ser | Pro | Ser | Ser | Cys | Leu | Met | Asp | Arg | His | Asp | Phe | Gly |
46 | 50 | 55 | 60 | |||||||||||
Phe | Pro | Gin | Glu | Glu | Phe | Asp | Gly | Asn | Gin | Phe | Gin | Lys | Ala | Pro |
61 | 65 | 70 | 75 | |||||||||||
Ala | Ile | Ser | Val | Leu | His | Glu | Leu | Ile | Gin | Gin | Ile | Phe | Asn | Leu |
76 | 80 | 85 | 90 | |||||||||||
Phe | Thr | Thr | Lys | Asp | Ser | Ser | Ala | Ala | Trp | Asp | Glu | Asp | Leu | Leu |
91 | 95 | 100 | 105 | |||||||||||
Asp | Lys | Phe | Cys | Thr | Glu | Leu | Tyr | Gin | Gin | Leu | Asn | Asp | Leu | Glu |
106 | 110 | 115 | 120 | |||||||||||
Ala | Cys | Val | Met | Gin | Glu | Glu | Arg | Val | Gly | Glu | Thr | Pro | Leu | Met |
121 | 125 | 130 | 135 | |||||||||||
Asn | Ala | Asp | Ser | Ile | Leu | Ala | Val | Lys | Lys | Tyr | Phe | Arg | Arg | Ile |
136 | 140 | 145 | 150 | |||||||||||
Thr | Leu | Tyr | Leu | Thr | Glu | Lys | Lys | Tyr | Ser | Pro | Cys | Ala | Trp | Glu |
151 | 155 | 160 | 165 | |||||||||||
Val | Val | Arg | Ala | Glu | Ile | Met | Arg | Ser | Leu | Ser | Leu | Ser | Thr | Asn |
166 | 170 | 175 | 180 | |||||||||||
Leu | Gin | Glu | Arg | Leu | Arg | Arg | Lys | Glu | ||||||
181 | 185 | 189 |
Polyklonální protilátky proti alfa-interferonu lze získat za použití celé molekuly lidského alfa-interferonu typu 10 následující sekvence.
SEQ ID NO: 26
Met 1 Tyr | Ala Leu | Ser Ile | Phe 5 Cys | Ser Ser | Leu Leu | Met Ala 10 | Val Leu | Leu Pro | Val Gin | Leu Thr | Ser 15 His | ||||
Lys | Ser | ||||||||||||||
Leu | Gly | Cys | Asp | ||||||||||||
5 | 16 Ser | Leu | Gly | Asn | 20 Arg | Arg | Ala | Leu | Ile | 25 Leu | Leu | Gly | Gin | Met | 30 Gly |
31 Arg | Ile | Ser | Pro | 35 Phe | Ser | Cys | Leu | Lys | 40 Asp | Arg | His | Asp | Phe | 45 Arg | |
10 | 46 Ile | Pro | Gin | Glu | 50 Glu | Phe | Asp | Gly | Asn | 55 Gin | Phe | Gin | Lys | Ala | 60 Gin |
61 Ala | Ile | Ser | Val | 65 Leu | His | Glu | Met | Ile | 70 Gin | Gin | Thr | Phe | Asn | 75 Leu | |
76 Phe | Ser | Thr | Glu | 80 Asp | Ser | Ser | Ala | Ala | 85 Trp | Glu | Gin | Ser | Leu | 90 Leu | |
15 | 91 Glu | Lys | Phe | Ser | 95 Thr | Glu | Leu | Tyr | Gin | 100 Gin | Leu | Asn | Asp | Leu | 105 Glu |
106 Ala | Cys | Val | Ile | 110 Gin | Glu | Val | Gly | Val | 115 Glu | Glu | Thr | Pro | Leu | 120 Met | |
20 | 121 Asn | Glu | Asp | Ser | 125 Ile | Leu | Ala | Val | Arg | 130 Lys | Tyr | Phe | Gin | Arg | 135 Ile |
136 Thr | Leu | Tyr | Leu | 140 Ile | Glu | Arg | Lys | Tyr | 145 Ser | Pro | Cys | Ala | Trp | 150 Glu | |
151 Val | Val | Arg | Ala | 155 Glu | Ile | Met | Arg | Ser | 160 Leu | Ser | Phe | Ser | Thr | 165 Asn | |
25 | 166 Leu 181 | Gin | Lys | Arg | 170 Leu 185 | Arg | Arg | Lys | Asp 189 | 175 | 180 |
Polyklonální protilátky proti alfa-interferonu lze získat za použití celé molekuly lidského alfa-interferonu typu 5 následující sekvence.
SEQ ID NO: 27
Met Ala 1 | Leu | Pro | Phe 5 | Val | Leu Leu | Met | Ala 10 | Leu | Val | Val | Leu | Asn 15 | |
35 | Cys Lys 16 | Ser | Ile | Cys 20 | Ser | Leu Gly | Cys | Asp 25 | Leu | Pro | Gin | Thr | His 30 |
Ser Leu 31 | Ser | Asn | Arg 35 | Arg | Thr Leu | Met | Ile 40 | Met | Ala | Gin | Met | Gly 45 | |
40 | Arg Ile 46 | Ser | Pro | Phe 50 | Ser | Cys Leu | Lys | Asp 55 | Arg | His | Asp | Phe | Gly 60 |
Phe Pro 61 | Gin | Glu | Glu 65 | Phe | Asp Gly | Asn | Gin 70 | Phe | Gin | Lys | Ala | Gin 75 | |
Ala Ile 76 | Ser | Val | Leu 80 | His | Glu Met | Ile | Gin 85 | Gin | Thr | Phe | Asn | Leu 90 | |
45 | Phe Ser 91 | Thr | Lys | Asp 95 | Ser | Ser Ala | Thr | Trp 100 | Asp | Glu | Thr | Leu | Leu 105 |
Asp Lys 106 | Phe | Tyr | Thr 110 | Glu | Leu Tyr | Gin | Gin 115 | Leu | Asn | Asp | Leu | Glu 120 | |
50 | Ala Cys 121 | Met | Met | Gin 125 | Glu | Val Gly | Val | Glu 130 | Asp | Thr | Pro | Leu | Met 135 |
Asn Val 136 | Asp | Ser | Ile 140 | Leu | Thr Val | Arg | Lys 145 | Tyr | Phe | Gin | Arg | Ile 150 |
Thr Leu Tyr Leu Thr Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu
151 155 160165
Val Vai Arg Ala Glu lie Met Arg Ser Phe Ser Leu Ser AlaAsn
166 170 175180
Leu Gin Glu Arg Leu Arg Arg Lys Glu 181 185189
Polyklonální protilátky proti alfa-interferonu lze získat za použití celé molekuly lidského alfa-interferonu typu 7 následující sekvence.
SEQ ID NO: 28
Met 1 | Ala | Arg | Ser | Phe 5 | Ser | Leu Leu Met | Val 10 | Val | Leu | Val | Leu | Ser 15 | ||
Tyr 16 | Lys | Ser | Ile | Cys 20 | Ser | Leu | Gly | Cys | Asp 25 | Leu | Pro | Gin | Thr | His 30 |
Ser 31 | Leu | Arg | Asn | Arg 35 | Arg | Ala | Leu | Ile | Leu 40 | Leu | Ala | Gin | Met | Gly 45 |
Arg 46 | Ile | Ser | Pro | Phe 50 | Ser | Cys | Leu | Lys | Asp 55 | Arg | His | Glu | Phe | Arg 60 |
Phe 61 | Pro | Glu | Glu | Glu 65 | Phe | Asp | Gly | His | Gin 70 | Phe | Gin | Lys | Thr | Gin 75 |
Ala 76 | Ile | Ser | Val | Leu 80 | His | Glu | Met | Ile | Gin 85 | Gin | Thr | Phe | Asn | Leu 90 |
Phe 91 | Ser | Thr | Glu | Asp 95 | Ser | Ser | Ala | Ala | Trp 100 | Glu | Gin | Ser | Leu | Leu 105 |
Glu 106 | Lys | Phe | Ser | Thr 110 | Glu | Leu | Tyr | Gin | Gin 115 | Leu | Asn | Asp | Leu | Glu 120 |
Ala 121 | Cys | Val | Ile | Gin 125 | Glu | Val | Gly | Val | Glu 130 | Glu | Thr | Pro | Leu | Met 135 |
Asn 136 | Glu | Asp | Phe | Ile 140 | Leu | Ala | Val | Arg | Lys 145 | Tyr | Phe | Gin | Arg | Ile 150 |
Thr 151 | Leu | Tyr | Leu | Met 155 | Glu | Lys | Lys | Tyr | Ser 160 | Pro | Cys | Ala | Trp | Glu 165 |
Val 166 Leu 181 | Val Lys | Arg Lys | Ala Gly | Glu 170 Leu 185 | Ile Arg | Met Arg | Arg Lys | Ser Asp 189 | Phe 175 | Ser | Phe | Ser | Thr | Asn 180 |
Polyklonální protilátky proti alfa-interferonu lze získat za použití celé molekuly lidského alfa-interferonu typu 14 následující sekvence.
SEQ ID NO: 29
Met | Ala | Leu | Pro | Phe | Ala | Leu | Met | Met | Ala | Leu | Val | Val | Leu | Ser |
1 | 5 | 10 | 15 | |||||||||||
Cys | Lys | Ser | Ser | Cys | Ser | Leu | Gly | Cys | Asn | Leu | Ser | Gin | Thr | His |
16 | 20 | 25 | 30 | |||||||||||
Ser | Leu | Asn | Asn | Arg | Arg | Thr | Leu | Met | Leu | Met | Ala | Gin | Met | Arg |
31 | 35 | 40 | 45 | |||||||||||
Arg | Ile | Ser | Pro | Phe | Ser | Cys | Leu | Lys | Asp | Arg | His | Asp | Phe | Glu |
46 | 50 | 55 | 60 |
Phe 61 Ala 76 | Pro Gin Glu | Glu Phe Asp Gly Asn 65 | Gin Phe 70 | Gin Thr | Lys Ala | Gin 75 Leu 90 | ||||||||
Phe | Asn | |||||||||||||
Ile | Ser | Val | Leu His 80 | Glu | Met | Met | Gin 85 | Gin | ||||||
5 | Phe | Ser | Thr | Lys | Asn Ser | Ser | Ala | Ala | Trp | Asp | Glu | Thr | Leu | Leu |
91 | 95 | 100 | 105 | |||||||||||
Glu | Lys | Phe | Tyr | Ile Glu | Leu | Phe | Gin | Gin | Met | Asn | Asp | Leu | Glu | |
106 | 110 | 115 | 120 | |||||||||||
Ala | Cys | Val | Ile | Gin Glu | Val | Gly | Val | Glu | Glu | Thr | Pro | Leu | Met | |
10 | 121 | 125 | 130 | 135 | ||||||||||
Asn | Glu | Asp | Ser | Ile Leu | Ala | Val | Lys | Lys | Tyr | Phe | Gin | Arg | Ile | |
136 | 140 | 145 | 150 | |||||||||||
Thr | Leu | Tyr | Leu | Met Glu | Lys | Lys | Tyr | Ser | Pro | Cys | Ala | Trp | Glu | |
151 | 155 | 160 | 165 | |||||||||||
15 | Val | Val | Arg | Ala | Glu Ile | Met | Arg | Ser | Leu | Ser | Phe | Ser | Thr | Asn |
166 | 170 | 175 | 180 | |||||||||||
Leu | Gin | Lys | Arg | Leu Arg | Arg | Lys | Asp | |||||||
181 | 185 | 189 |
Polyklonální protilátku proti receptoru CD8 lze získat podobným způsobem, který byl popsán pro protilátky proti receptoru CD4 za použití adjuvans. Polyklonální protilátky proti receptoru CD8 lze získat za použití celé molekuly receptoru CD8 následující sekvence:
SEQ ID NO: 30
Met Ala | Leu Ala | Pro Val 5 | Thr Ala | Leu Leu Leu Pro 10 | Leu Ser | Ala Pro | Leu Leu | Leu 15 Asp 30 | |||||||
1 Leu 16 | His | ||||||||||||||
Ala | Arg 20 | Pro | Ser | Gin | Phe | Arg 25 | Val | ||||||||
30 | Arg 31 | Thr | Trp | Asn | Leu 35 | Gly | Glu | Thr | Val | Glu 40 | Leu | Lys | Cys | Gin | Val 45 |
Leu 46 | Leu | Ser | Asn | Pro 50 | Thr | Ser | Gly | Cys | Ser 55 | Trp | Leu | Phe | Gin | Pro 60 | |
35 | Arg 61 | Gly | Ala | Ala | Ala 65 | Ser | Pro | Thr | Phe | Leu 70 | Leu | Tyr | Leu | Ser | Gin 75 |
Asn 76 | Lys | Pro | Lys | Ala 80 | Ala | Glu | Gly | Leu | Asp 85 | Thr | Gin | Arg | Phe | Ser 90 | |
Gly 91 | Lys | Arg | Leu | Gly 95 | Asp | Thr | Phe | Val | Leu 100 | Thr | Leu | Ser | Asp | Phe 105 | |
40 | Arg 106 | Arg | Glu | Asn | Glu 110 | Gly | Tyr | Tyr | Phe | Cys 115 | Ser | Ala | Leu | Ser | Asn 120 |
Ser 121 | Ile | Met | Tyr | Phe 125 | Ser | His | Phe | Val | Pro 130 | Val | Phe | Leu | Pro | Ala 135 | |
45 | Lys 136 | Pro | Thr | Thr | Thr 140 | Pro | Ala | Pro | Arg | Pro 145 | Pro | Thr | Pro | Ala | Pro 150 |
Thr 151 | Ile | Ala | Ser | Gin 155 | Pro | Leu | Ser | Leu | Arg 160 | Pro | Glu | Ala | Cys | Arg 165 | |
Pro 166 | Ala | Ala | Gly | Gly 170 | Ala | Val | His | Thr | Arg 175 | Gly | Leu | Asp | Phe | Ala 180 | |
50 | Cys 181 | Asp | Ile | Tyr | Ile 185 | Trp | Ala | Pro | Leu | Ala 190 | Gly | Thr | Cys | Gly | Val 195 |
Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile 196200
Arg Arg Arg Val Cys Lys Cys 211215
Asp Lys Pro Ser Leu Ser Ala
226230
Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn
205210
Pro Arg Pro Val Val Lys Ser Gly
220225
Arg Tyr Val
235
Rovněž přichází v úvahu použití fragmentů receptoru CD8 jako antigenu.
Vhodné sekvence pro tento antigen jsou tyto:
SEQ ID NO: 31
Pro Leu Ala Leu Leu
15
Leu His Ala Ala Arg Pro Ser Gin Phe Arg Val Ser Pro Leu Asp
16 20 25 30
SEQ ID NO: 32 | Ala Glu Gly Leu Asp Thr Gin Arg Phe Ser | ||
20 | Gly Lys Arg Leu 91 | Gly 95 | 81 85 90 Asp Thr Phe Val Leu 100 |
SEQ ID NO: 33 | ||||||||||||
25 | Ser lie Met Tyr 121 Lys Pro Thr Thr 136 | Phe 125 Thr 140 | Ser | His | Phe | Val | Pro 130 | Val | Phe | Leu | Pro | Ala 135 |
SEQ ID NO: 34 | ||||||||||||
30 | SEQ ID NO: 35 | Val 201 | Ile | Thr | Leu | Tyr 205 | Cys | Asn | His | Arg | Asn 210 | |
35 | Asp Lys Pro Ser 226 | Leu 230 | Ser | Ala | Arg | Tyr | Val 235 | Val 221 | Val | Lys | Ser | Gly 225 |
Polyklonální protilátky proti faktoru alfa (TNF-α) nekrózy tumoru lze získat výše 40 uvedeným způsobem získávání protilátek proti receptoru CD4 za použití celé molekuly faktoru alfa nekrózy tumoru (nádorové nekrózy) následující sekvence.
SEQ ID NO: 36
Met 1 | Ser Thr | Glu | Ser Met 5 | Ile Arg | Asp | Val 10 | Glu | Leu Ala | Glu | Glu 15 | |
5 | Ala | Leu Pro | Lys | Lys Thr | Gly Gly | Pro | Gin | Gly | Ser Arg | Arg | Cys |
16 | 20 | 25 | 30 | ||||||||
Leu | Phe Leu | Ser | Leu Phe | Ser Phe | Leu | Ile | Val | Ala Gly | Ala | Thr | |
31 | 35 | 40 | 45 | ||||||||
Thr | Leu Phe | Cys | Leu Leu | His Phe | Gly | Val | Ile | Gly Pro | Gin | Arg | |
10 | 46 | 50 | 55 | 60 | |||||||
Glu | Glu Phe | Pro | Arg Asp | Leu Ser | Leu | Ile | Ser | Pro Leu | Ala | Gin | |
61 | 65 | 70 | 75 | ||||||||
Ala | Val Arg | Ser | Ser Ser | Arg Thr | Pro | Ser | Asp | Lys Pro | Val | Ala | |
76 | 80 | 85 | 90 | ||||||||
15 | His | Val Val | Ala | Asn Pro | Gin Ala | Glu | Gly | Gin | Leu Gin | Trp | Leu |
91 | 95 | 100 | 105 | ||||||||
Asn | Arg Arg | Ala | Asn Ala | Leu Leu | Ala | Asn | Gly | Val Glu | Leu | Arg | |
106 | 110 | 115 | 120 | ||||||||
Asp | Asn Gin | Leu | Val Val | Pro Ser | Glu | Gly | Leu | Tyr Leu | Ile | Tyr | |
20 | 121 | 125 | 130 | 135 | |||||||
Ser | Gin Val | Leu | Phe Lys | Gly Gin | Gly | Cys | Pro | Ser Thr | His | Val | |
136 | 140 | 145 | 150 | ||||||||
Leu | Leu Thr | His | Thr Ile | Ser Arg | Ile | Ala | Val | Ser Tyr | Gin | Thr | |
151 | 155 | 160 | 165 | ||||||||
25 | Lys | Val Asn | Leu | Leu Ser | Ala Ile | Lys | Ser | Pro | Cys Gin | Arg | Glu |
166 | 170 | 175 | 180 | ||||||||
Thr | Pro Glu | Gly | Ala Glu | Ala Lys | Pro | Trp | Tyr | Glu Pro | Ile | Tyr | |
181 | 185 | 190 | 195 | ||||||||
Leu | Gly Gly | Val | Phe Gin | Leu Glu | Lys | Gly | Asp | Arg Leu | Ser | Ala | |
30 | 196 | 200 | 205 | 210 | |||||||
Glu | Ile Asn | Arg | Pro Asp | Tyr Leu | Asp | Phe | Ala | Glu Ser | Gly | Gin | |
211 | 215 | 220 | 225 | ||||||||
Val | Tyr Phe | Gly | Ile Ile | Ala Leu | |||||||
226 | 230 | 233 |
Pro získání polyklonálních protilátek proti faktoru alfa (TNF-α) nekrózy tumoru je možné použít polypeptidový fragment faktoru nekrózy tumoru zvolený například z následujících sekvencí:
SEQ ID NO: 37
Pro Ser Asp Lys Pro 84 88
SEQ ID NO: 38
Val Ala Asn Pro Gin 93 97
SEQ ID NO: 39
Ala Vai | Arg | Ser | Arg Asp Leu Ser 65 | Leu He Ser Pro 70 | Leu Ala | Gin 75 Ala | |||||
Pro | Val | ||||||||||
Ser Ser Arg | Thr | Pro | Ser | Asp Lys | |||||||
5 | 76 His Vai | Val | Ala | 80 Asn Pro Gin | Ala | Glu | 85 Gly | Gin Leu | Gin | Trp | 90 Leu |
91 Asn Arg | Arg | Ala | 95 Asn Ala Leu | Leu | Ala | 100 Asn | Gly Val | Glu | Leu | 105 Arg | |
10 | 106 Asp Asn | Gin | Leu | 110 Val Val Pro | Ser | Glu | 115 Gly | Leu Tyr | Leu | He | 120 Tyr |
121 Ser Gin | Val | Leu | 125 Phe Lys Gly | Gin | Gly | 130 Cys | Pro Ser | Thr | His | 135 Val | |
136 Leu Leu | Thr | His | 140 Thr He Ser | Arg | He | 145 Ala | Val Ser | Tyr | Gin | 150 Thr | |
15 | 151 Lys Vai | Asn | Leu | 155 Leu Ser Ala | He | Lys | 160 Ser | Pro Cys | Gin | Arg | 165 Glu |
166 Thr Pro | Glu | Gly | 170 Ala Glu Ala | Lys | Pro | 175 Trp | Tyr Glu | Pro | He | 180 Tyr | |
20 25 | 181 Leu Gly Gly Vai 196 199 SEQ ID NO: 40 Val Arg Ser 77 His Val Val 91 93 | 185 Ser Ser Arg 80 | Thr | Pro | 190 Ser 85 | Asp Lys | Pro | Val | 195 Ala 90 |
30 | SEQ ID NO: 41 Phe Leu Ser 32 | Leu Phe Ser Phe Leu 35 | He Val Ala Gly Ala Thr | |||||
40 | 45 | |||||||
Thr Leu Phe 46 | Cys | Leu 50 | Leu | His Phe | Gly 54 | |||
35 40 | SEQ ID NO: 42 Glu Glu Phe Pro 61 SEQ ID NO: 43 | Arg 65 | Asp | Leu Ser | Leu | He 56 He Ser 70 | Gly Pro Gin Arg 60 Pro Leu 73 | |
Gin 123 | Leu | Val 125 | Val | Pro Ser | Glu | Gly Leu 130 | Tyr Leu lie Tyr 135 | |
45 | Ser Gin Val 136 Leu Leu Thr 151 | Leu His | Phe 140 Thr 155 | Lys He | Gly Gin Ser Arg | Gly lie | Cys Pro 145 Ala 160 | Ser Thr His Val 150 |
SEQ ID NO: 44
Pro Cys Gin Arg Glu
176 180
Thr Pro Glu Gly Ala | Glu Ala | Lys | Pro | Trp 190 | |
181 185 | |||||
5 | SEQ ID NO: 45 Ser | Met Ile | Arg | Asp | Val Glu Leu Ala Glu Glu |
5 Ala Leu Pro Lys Lys | Thr Gly | Gly | Pro | 10 15 Gin Gly Ser Arg Arg Cys | |
16 20 Leu Phe Leu Ser Leu | Phe Ser | Phe | Leu | 25 30 Ile Val Ala Gly Ala Thr | |
10 15 | 31 35 SEQ ID NO: 46 Leu Leu Thr His Thr | Ile Ser | Arg | Ile | 40 45 Val 150 Ala Val Ser Tyr Gin Thr |
151 155 Lys Val Asn Leu Leu | Ser Ala | Ile | Lys | 160 165 Ser Pro Cys Gin Arg Glu | |
20 | 166 170 Thr Pro Glu Gly 181 184 SEQ ID NO 47 Val Arg Ser Ser | Ser Arg | Thr | Pro | 175 180 Ser Asp Lys Pro Val Ala |
25 | 77 80 His Val Val Ala Asn | Pro Gin | Ala | Glu | 85 90 Gly Gin Leu Gin Trp Leu |
91 95 Asn Arg Arg Ala Asn | Ala Leu | Leu | Ala | 100 105 Asn Gly Val Glu Leu Arg | |
30 | 106 110 Asp Asn Gin Leu Val | Val Pro | Ser | Glu | 115 120 Gly Leu Tyr Leu Ile Tyr |
121 125 Ser Gin Val Leu Phe | Lys Gly | Gin | Gly | 130 135 Cys Pro Ser Thr His Val | |
136 140 Leu Leu Thr His Thr | Ile Ser | Arg | Ile | 145 150 Ala Val Ser Tyr Gin Thr | |
35 | 151 155 Lys Val Asn Leu Leu | Ser Ala | Ile | Lys | 160 165 Ser Pro Cys Gin Arg Glu |
166 170 Thr Pro Glu Gly Ala | Glu Ala | Lys | Pro | 175 180 Trp Tyr Glu Pro Ile Tyr | |
40 | 181 185 Leu Gly Gly Val Phe | Gin Leu | Glu | Lys | 190 195 Gly Asp Arg Leu Ser Ala |
196 200 Glu He Asn Arg Pro | Asp Tyr | Leu | Asp | 205 210 Phe Ala Glu Ser Gly Gin | |
45 | 211 215 Val Tyr Phe Gly Ile 226 230 | Ile Ala | Leu 233 | 220 225 |
Polyklonální protilátky proti histaminu, což je biogenní amin (4(2- aminoethyl)-imidazol nebo beta-imidazolylethylamin s chemickým vzorcem C5H9N3) se může získat výše zmíněným způsobem získávání protilátek proti CD4 s použitím adjuvas a průmyslově 50 vyráběného histamin-dihydrochloridu jako imunogenu (antigen) pro imunizaci králíků.
Aktivovaná a potencovaná forma protilátky proti cytokinů nebo receptoru se může připravit z počátečního roztoku homeopatickým potencováním, výhodně použitím způsobu úměrného snižovaní koncentace sériovým zřeďováním 1 dílu z každého předchozího roztoku (počínaje počátečnm roztokem) do 9 dílů (pro decimální zředění) nebo do 99 dílů (pro cenzezimální zředění) nebo 999 dílů (pro milezimální zředění) neutrálního rozpouštědla, počínaje koncentrací počátečního roztoku protilátky v rozpouštědle, výhodně ve vodě nebo směsi vody s ethylalkohlem, v rozmezí od asi 0,5 mg/ml do asi 5 mg/ml ve spojení s externě prováděnými otřesy. Je výhodné když externí rázy zahrnují mnohonásobné vertikální třepání (dynamizaci) každého zředění. Je výhodné když se používají oddělené nádoby pro každé následující zředění až do dosažení potřebné úrovně účinnosti nebo zředění. Tento způsob je v oboru homeopatie dobře přijímám. Viz například V. Schwabe Homeopathic medicines, Μ., 1967, ρ. 14-29, zde zařazeno jako odkaz pro stanovený účel.
Například pro přípravu 12-centesimálního zředění (označovaného C12) se jeden díl počátečního matečného roztoku protilátek proti receptoru CD4 s koncentrací 3,0 mg/ml zředí v 99 dílech neutrálního rozpouštědla jako je voda nebo voda s alkoholem (výhodně 15% ethylalkohol) a potom se mnohokrát vertikálně třepe (desetkrát i více) za vzniku prvního centesimálního zředění označovaného jako C1. Druhé centesimální zředění (C2) se připraví z prvního centesimálního zředění C1. Tato procedura se opakuje 11 krát a tím se připraví dvanácté centesimální zředění C12. Takto představuje dvanácté centesimální zředění C12 roztok získaný 12 postupnými (sériovými) zředěními jednoho dílu počátečního matečného roztoku protilátek proti gama-interferonu s koncentrací 3,0 mg/ml v 99 dílech neutrálního rozpouštědla v různých nádobách, což je ekvivalent centesimálního homeopatického zředění C12. Podobné postupy s odpovídajícími zřeďovacími faktory se realizují pro získání zředění C30, C50 a C200. Průběžná mezizředění se mohou testovat na požadovaných biologických modelech pro kontrolu aktivity. Výhodnou aktivovanou a potencovanou formu pro kompozici podle vynálezu představuje směs zředění C12, C30 a C50, nebo zředění C12, C30 a C200. Když se použije směs různých homeopatických zředění (zvláště centesimálních) aktivní látky jako biologicky aktivní kapalné složky, připraví se každá složka kompozice (například C12, C30, C50, C200) odděleně podle výše popsané procedury až se získá předposlední zředění (například
C11, C29 a C199) a potom se přidá jeden díl každé složky do jedné nádoby podle kompozice směsi a smísí se s potřebným množstvím rozpouštědla (například pro centesimální zředění s 97 díly).
Je možné použít aktivní látku jako směs různých homeopatických zředěni, například decimálních a/nebo centizimálních (D20, C30, C100 nebo C12, C30, C50 nebo C12, C30, C200 ap.), jejichž účinnost se určuje experimentálně testováním zředění na vhodném biologickém modelu, například na modelech popsaných v následujících příkladech.
V průběhu potencování a snižování koncentrace je možno nahradit vertikální třepání externím vystavením ultrazvuku, elektromagnetickému poli nebo jakékoliv podobné vnější rázové proceduře přijímané v homeopatickém oboru.
Je výhodné, když je farmaceutická kompozice podle vynálezu ve formě kapaliny nebo ve formě pevných dávkovačích jednotek. Výhodný kapalný nosič je voda nebo směs voda-ethylalkohol.
Forma pevných dávkovačích jednotek farmaceutické kompozice podle vynálezu se může připravit impregnováním pevného farmaceuticky přijatelného nosiče směsí aktivovaných a potencovaných forem roztoků aktivní složky ve vodě nebo směsi vody s alkoholem. Alternativně je možno impregnovat nosič postupně každým z požadovaných zředění. Oba způsoby impregnace jsou přijatelné.
Je výhodné když se farmaceutická kompozice ve formě pevné dávkovači jednotky připraví z granulí farmaceuticky přijatelného nosiče, který byl předem nasycen zředěnými roztoky ve vodě nebo směsi vody a alkoholu aktivované a potencované formy protilátek proti alespoň jednomu cytokinů a aktivované a potencované formy protilátek proti alespoň jednomu receptoru. Pevná dávkovači forma může být jakákoliv ve farmacii známá forma včetně tablet, kapslí, pastilek aj. Jako neaktivní farmaceutické přísady lze použít glukózu, sacharózu, maltózu, škrob, isomaltózu, isomalt a jiné mono-, oligo- a polysacharidy používané při výrobě léků stejně jako technologické směsí výše uvedených inaktivních farmaceutických přísad s jinými farmaceuticky přijatelnými excipienty, jako jsou například isomalt, krospovidon, cyklamát sodný, sacharin sodný, bezvodá kyselina citrónová aj. včetně maziv, dezintegračních činidel, pojidel a barviv. Preferované nosiče jsou laktóza a izomalt. Farmaceutická dávkovači forma může dále zahrnovat standardní farmaceutické excipienty, například mikrokrystalickou celulózu, stearát hořečnatý a citrónovou kyselinu ap.
Pro přípravu pevné formy pro orální podání se impregnují granule laktózy (100 až 300 pm) roztoky aktivovaných a potencovaných forem protilátky ve vodě a směsi vody s alkoholem v poměru 1 kg roztoku protilátky na 5 nebo 10 kg laktózy (1:5 až 1:10). Pro realizaci impregnace se granule laktózy vystaví saturačnímu skrápění ve fluidním loži v příslušném zařízení (například Huttlin Pilotlab od Huttlin GmbH) s následným sušením v proudu horkého vzduchu při teplotě pod 40 °C. Odhadnuté množství sušených granulí (10 až 34 hmot, dílů) nasycených aktivovanou potencovanou formou protilátek umístěných v mixéru se smíchá s 25 až 45 hmotn. díly “nenasycené” čisté laktózy (použité pro snížení nákladů, zjednodušení a urychlení technologického postupu bez snížení účinnosti úpravy) společně s 0,1 až 1 hmotn. dílem stearátu hořečnatého a 3 až 10 hmotn. díly mikrokrystalické celulózy. Získaná hmota pro tabletování se zhomogenizuje mícháním a tabletuje přímým lisováním za sucha (například v tabletovacím lisu Korsch - XL 400) na kulaté pilulky po 150 až 500 mg, výhodně 300 mg. Tabletováním se získají pilulky hmotnosti 300 mg nasycené roztokem vody a alkoholu (3,0 až 6,0 mg/pilulka) aktivované a potencované formy protilátek ve formě směsi centesimálních homeopatických zředění C12, C30 a C50 nebo směsi centesimálních homeopatických zředění C12, C30 a C200.
I když tento vynález není limitován žádnou specifickou teorií, soudí se, že aktivovaná a potencovaná forma zde popisovaných protilátek neobsahuje molekulární formu protilátky v množství, jež by postačovalo k tomu, aby měla biologickou aktivitu přisuzovanou její molekulární formě. Biologická aktivita kombinovaného léku (farmaceutické kompozice) podle vynálezu je plně demonstrována v připojených příkladech.
Pro účely léčby je výhodné aby se kombinace podle vynálezu podávala v dávkovacím režimu od jednou denně do šestkrát denně, výhodně dvakrát denně nebo čtyřikrát denně, přičemž každé podání zahrnuje jednu nebo tři kombinované formy dávkovači jednotky.
Vynález je v dalším ilustrován s odkazem na připojené nelihnitující příklady.
Příklady provedení vynálezu
PŘÍKLAD 1
Výzkum účinku komplexního preparátu obsahujícího ultranízké dávky aktivovaných a potencovaných forem polyklonálních králičích afinitně přečištěných protilátek proti receptoru CD4 (anti-CD4) a proti gama-interferonu (anti-IFN-y) získaných z počátečního matečného roztoku (koncentrace: 2.5 mg/ml) extrémním zředěním (superzředěním) (10012,10030, 1005°krát), jež je ekvivalentní se směsí centesimálních homeopatických zředění C12, C30, C50 („anti-CD4+anti-IFN-y“) (poměr: 1:1) a jeho složek: aktivované a potencované formy polyklonálních afinitně přečištěných králičích protilátek proti receptoru CD4 přečištěných antigenem a získaných superzředěním počátečního matečného roztoku (10012,10030, 10050 krát), jež je ekvivalentní vůči směsi centesimálních homeopatických zředění C12, C30, C50 (“anti-CD4”) a aktivovaných a potencovaných forem polyklonálních králičích protilátek proti gama-interferonu získaných superzředěním počátečního matečného roztoku (10012,10030, 1005°krát), jež je ekvivalentní vůči směsi centesimálních homeopatických zředění C12, C30, C50 (“anti-IFN-γ”), na vazbu in vitro standardního ligandu [3H]pentazocinu na lidský rekombinantní receptor σ1 byl hodnocen s využitím radioligandu. Potencované destilovaná voda (směs homeopatických zředění C12+C30+C50) se použila jako kontrola zkušebních preparátů.
Receptor sigma-1 (σ1) je nitrobuněčný a je lokalizován v buňkách centrálního nervového systému, v buňkách většiny periferních tkání a imunologicky kompetentních buňkách. Tento receptor reguluje řízením homeostázy nitrobuněčného vápníku průběh nitrobuněčné signalizace, což vede k aktivaci odpovídajících transkripčních faktorů a transkripci kódování celé genové rodiny, zejména faktorů určujících odolnost vůči infekčním agens (patogenům) a cytokinům. Z tohoto hlediska naznačuje schopnost léků ovlivňovat účinost interakce ligandů s receptorem sigma-1 přítomnost protivirových a imunomodulačních složek ve spektru jejich farmakologické aktivity, což umožňuje považovat tyto preparáty za účinné pro léčbu a profylaxi různých infekčních nemocí.
Během testu (pro měření celkové vazby) bylo 20 pl komplexního preparátu antiCD4+anti-IFN-y nebo 10 μΙ anti-CD4 nebo 10 μΙ anti-IFN-γ přidáno do inkubačního média. Množství ULD anti-CD4+anti-IFN-Y přeneseného do zkušební nádobky pn testování komplexního preparátu bylo stejné jako množství ULD anti-CD4 a ULD antiIFN-γ testovaných jako monopreparáty, což umožňuje srovnání účinnosti preparátu a jeho oddělených složek. 20 μΙ a 10 μΙ potencované vody bylo přeneseno do inkubačního média.
Dále bylo přeneseno 160 μΙ (asi 200 pg proteinu) homogenátu membrán Jurkatovy buněčné linie (linie lidských leukemických T-lymfocytů) a nakonec bylo přeneseno 20 μΙ tritiem značeného radioligandu [3H]pentazocinu (15 nm).
S úmyslem změřit nespecifickou vazbu bylo 20 μΙ neznačeného ligandhaloperidolu (10 μΜ) přeneseno do inkubačního média místo preparátů nebo potencované vody.
Radioaktivita se měřila scintilometrem (Topcount, Packard) a scintilační směsí (Microscint 0, Packard) po inkubaci po dobu 120 minut při 22 °C v 50 mM pufru TrisHCI (pH = 7.4) a fitraci filtrem ze skleněných vláken (GF/B, Packard). Specifická vazba (během testu nebo kontroly) byla vypočtena jako rozdíl mezi celkovou (během testu nebo kontroly) a nespecifickou vazbou.
Výsledky se prezentují jako procenta inhibice specifické vazby v kontrole (jako kontrola byla použita destilovaná voda) (tabulka 1).
Tabulka 1
Zkušební skupina | Množství na zkušební nádobku | % specifické vazby radioligandu v kontrole | % inhibice vazby radioligand u | ||
1. test | 2. test | Průměr | |||
anti-CD4+antiIFN-y | 20 μΙ | 50,8 | 49,1 | 49,9 | 50,1 |
anti-CD4 | 10 μΙ | 74,0 | 76,2 | 75,1 | 24,9 |
anti-IFN-γ | 10 μΙ | 158,9 | 149,8 | 154,3 | -54,3 |
Potencovaná voda | 20 μΙ | 98,1 | 75,8 | 86,9 | 13,1 |
Potencovaná voda | 10 μΙ | 140,1 | 106,2 | 123,2 | -23,2 |
Účinek preparátů a potencované vody na vazbu standardního ligandu [3H]pentazocinu na lidský rekombinantní receptor σ 1
Poznámka:
% specifické vazby v kontrole = (specifická vazba během testu/specifická vazba v kontrole)* 100 %;
% inhibice specifické vazby =100 % - (specifická vazba během testu/specifická vazba v kontrole)* 100 %;
Výsledky konstatující inhibici nad 50 % představují významné účinky testovaných sloučenin; inhibice od 25 do 50 % potvrzuje mírné až nevýrazné účinky; inhibice menší než 25 % se považuje za bezvýznamný účinek zkoušené sloučeniny a je zanedbatelná.
Proto tento zkušební model ukázal, že komplexní preparát anti-CD4+anti-IFN-y je účinnější než jeho jednotlivé složky (anti-CD4 a anti-IFN-γ) při inhibici vazby standardního radioligandu [3H]pentazocinu k lidskému rekombinantnímu receptoru o1; anti-CD4 přenesený do zkušební nádobky v množství 10 μΙ inhibuje vazbu standardního radioligandu [3H]pentazocinu k lidskému rekombinantnímu receptoru o1, ale výsledná intenzita je nižší než inhibice komplexním preparátem antiCD4+anti-IFN-y; anti-IFN-γ přenesená do testovací jamky v množství 10 μΙ nemá žádný účinek na vazbu standardního radioligandu [3H]pentazocinu na lidský reakombinantní receptor σ1; potencovaná voda, přenesená do zkušební nádobky v množství 10 μΙ nebo 20 μΙ nemá žádný účinek na vazbu standardního radioligandu [3H]pentazocinu na lidský rekombinantní receptor o1.
PŘÍKLAD 2 (mononukleární buňky; reverzní transkriptáza; režim “léčba”)
Seznam zkratek:
TCID50 označuje dávku infekční pro 50 % tkáňové kultury
Vyhodnocení antiretrovirové aktivity komplexního léku obsahujícího ultranízké dávky králičích polyklonálních protilátek proti CD4 (směs homeopatických zředění C12+C30+C50) a ultranízké dávky králičích polyklonálních protilátek proti gamainterferonu (směs homeopatických zředění C12+C30+C50) v poměru1:1 (v dalším označovaného jako komplexní lék) a složek tvořících jeho část (ultranízkých dávek králičích polyklonálních protilátek proti CD4) (směs homeopatických zředění C12+C30+C50) (v dalším nazývaná ULD AB proti CD4) a (ultranízkých dávek králičích polyklonálních protilátek proti gama-interferonu) (směsi homeopatických zředění C12+C30+C50) (v dalším nazývaná ULD AB proti gama-interferonu) bylo provedeno za použití mononukleárních buněk lidské periferní krve infikované kmenem HIV-1-LAI in vitro. Jako komparativní lék byl použit azidothymidin (Sigma AZ169-100mg, lot 107 K1578).
Mononukleární buňky lidské periferní krve byly odděleny od krve zdravého séronegativního dárce odstředěním v gradientu hustoty ficcol-gipaque. Buňky byly aktivovány během 3 dnů za použití 1 mkg/ml fytohemagglutininu P a 5 ME/ml lidského rekombinantního interleukinu-2 v médiu RPMI1640 (DIFCO) s 10 % fetálního telecího séra (komplement byl odstraněn zahříváním po dobu 45 minut při teplotě 56 °C), 1 % roztoku antibiotik (PSN Gibco obsahující 50 pg/ml penicilinu, 50 pg/ml streptomycinu a 100 μ/ml neomycinu).
Pro vyhodnocení antiretrovirové aktivity se do jamek uváděla kombinace léků 15 až 30 minut po kontaminaci buněk kmenem HIV-1-LAI v dávce 100 TCID50 (50 mkl inokula kmene HIV-1-LAI). Sedmého dne po infekci byl odebrán supernatant použitý pro zjištění vlivu léku na inhibici replikace HIV.
Před vnesením do jamky obsahující 150 μΙ buněčné kultury byly léky zředěny médiem RPMI1640 (DIFCO) do dosažení objemu 50 μΙ. ULD AB proti CD4 a ULD AB proti IFN gama byly zředěny v médiu RPMI1640 (DIFCO) 8 krát (stupeň zředění 1/4). Množství ULD AB proti CD4 a ULD AB proti IFN gama vnášených do experimentální jamky při testování komplexního léku podobné jako množství ULD AB proti CD4 a ULD AB proti IFN gama testovaných jako monokomponenta tak umožňuje srovnávat účinnost komplexního léku se samostatnými komponentami. Azidothymidin byl zředěn médiem RPMI1640 (DIFCO) do koncentrace 8 nM.
Účinnost léků byla definována na inhibici replikace HIV vyhodnocovanou enzymatickou aktivitou HlV-reverzní transkriptázy v supernatantech makrofágů v lidské periferní krvi za použití HIV RT RetroSys komerční soupravy INNOVAGEN (šarže 10-059C). Pro výpočet % inhibice replikace HIV byl jako kontrola použit supernatant buněk, které nepřišly do styku s testovanými léky (viz tabulka 2).
Tabulka 2
Antiretrovirová aktivita léků za použití mononukleárních buněk z lidské periferní krve (dárce 1) infikované in vitro kmenem HIV-1 -LAI
Léky | Stupeň zředění v médiu RPMI1640 (DIFCO) | Inhibice enzymatické aktivity HIV reverzní transkriptázy (% z kontroly) |
7. den | ||
ULD AB proti IFN gama | 1/8 | 0±5 |
ULD AB proti CD4 | 1/8 | 67±22 |
Komplexní lék (ULD AB proti IFN gama a ULD AB proti CD4, poměr 1:1) | % | 85±1 |
Azidothymidin (8 nM) | — | 58±7 |
Je tedy zřejmé, že v podmínkách tohoto experimentálního modelu antiretrovirová aktivita komplexního léku překračuje antiretrovirovou aktivitu jeho jednotlivých složek (ULD AB proti IFN gama a ULD AB proti CD4).
PŘÍKLAD 3 (makrofágy; reverzní transkriptáza; režim „profylaxe“)
Seznam zkratek:
TCID50 - dávka infikující 50 % tkáňové kultury
Vyhodnocení antiretrovirové aktivity komplexního léku obsahujícího ultranízké dávky králičích polyklonálních protilátek proti CD4 (směs homeopatických zředění C12+C30+C50) a ultranízké dávky králičích polyklonálních protilátek proti gamainterferonu (směs homeopatických zředění C12+C30+C50) v poměru1:1 (zde v dalším označovaná jako komplexní lék), a složek tvořících jeho část (ultranízkých dávek králičích polyklonálních protilátek proti CD4) (směs homeopatických zředění C12+C30+C50) (v dalším nazývaná ULD AB proti CD4) a ultranízkých dávek králičích polyklonálních protilátek proti IFN gama (směs homeopatických zředění C12+C30+C50) (zde v dalším nazývaná ULD AB proti IFN gama), bylo provedeno za použití makrofágů odebraných z mononukleárních buněk lidské periferní krve infikované kmenem HIV-1-LAI in vitro. Jako komparativní lék byl použit azidothymidin (Sigma - AZ169-100mg, lot 107 K1578).
Makrofágy z dárcovské periferní krve přijaté z mononuklárních buněk lidské periferní krve byly izolovány z krve dvou zdravých seronegativních dárců odstředěním v gradientu hustoty ficcol-gipaque. Mononukleární buňky lidské periferní krve byly 3 dny pěstovány v médiu RPMI1640 (DIFCO) k němuž bylo přidáno 10 % fetálního telecího séra (komplement byl odstraněn zahříváním po dobu 45 minut při teplotě 56 °C, 1 % roztoku antibiotik (PSN Gibco obsahující 50 pg /ml penicilinu, 50 pg/ml streptomycinu a 100 pg /ml neomycinu), 15 ng/ml GM-CSF (granulocytové a makrofágové kolonie stimulující faktor- CSF). Potom byly buňky umístěny na kultivační destičky (150.000 buněk/jamka u 48-jamkové destičky), pěstovány 7 dní společně s 1 ng/ml GM-CSF a 10 ng/ml M-CSF (makrofágové kolonie stimulující faktor) takže se buňky mohou zcela diferencovat na makrofágy.
Pro vyhodnocení antiretrovirové aktivity byly kombinované léky vneseny do jamky 24 hodin před kontaminací buněk kmenem HIV-1-LAI v dávce 1000 TCID50 (100 mkl inokul kmene HIV-1-Ba-L) a pak 3., 7., 10., 14., 17. den po kontaminaci. Supernatant pro vyhodnocení vlivu léků na inhibici replikace HIV byl odebrán 3., 7., 10., 14., 17. den po infekci buněk.
Před vnesením do jamky obsahující 750 pl buněčné kultury byly léky zředěny médiem RPMI1640 (DIFCO) do dosažení objemu 250 pl. ULD AB proti CD4 a ULD AB proti IFN gama byly zředěny v médiu RPMI1640 (DIFCO) 8 krát (stupeň zředění 1/4). Množství ULD AB proti CD4 a ULD AB proti IFN gama vnášených do experimentální jamky při testování komplexního léku podobné jako množství ULD AB proti CD4 a ULD AB proti IFN gama testovaných jako monokomponenta tak umožňuje srovnávat účinnost komplexního léku s jeho individuálními komponentami. Azidothymidin byl zředěn médiem RPMI1640 (DIFCO) do koncentrace 8nM.
Účinnost léků se definovala pomocí inhibice replikace HIV, jež byla vyhodnocována enzymatickou aktivitou HlV-reverzní transkriptázy v supernatantech z makrofágů v supernatantu lidské periferní krve za použití HIV RT RetroSys komerční soupravy INNOVAGEN (šarže 10-059C). Pro výpočet % inhibice replikace
HIV byl jako kontrola použit supernatant buněk, které nepřišly do styku s testovanými léky nebo azothymidinem (viz tabulka3 a 4).
Tabulka 3.
Antiretrovirová aktivita léků za použití makrofágů lidské periferní krve (dárce č. 1) infikované in vitro kmenem HIV-1-Ba-L
Lék | Stupeň zředění médiem RPMI1640 (DIFCO) | Inhibice enzymatické aktivity HlV-reverzní transkriptázy (% z kontroly) | ||
14. den | 17. den | 21. den | ||
ULD AB proti IFN gama | 1/8 | 24±4 | 24±4 | 0±0 |
ULD AB proti CD4 | 1/8 | 53±1 3 | 37±7 | 0+0 |
Komplexní lék (ULD AB proti IFN gama a ULD AB proti CD4 v poměru 1 : 1) | 7 | 69±1 | 74±9 | 37±3 |
Azidothymidin (8 nM) | — | 97±1 | 97±0 | 98±2 |
Tabulka 4 Antiretrovirová aktivita léků za použití makrofágů lidské periferní krve (dárce č.
2) infikované in vitro kmenem HIV-1-Ba-L
Lék | Stupeň zředění v médiu RPMI1640 (DIFCO) | Inhibice enzymatické aktivity HlV-reverzní transkriptázy (% z kontroly) | ||
14. den | 17. den | 21. den | ||
ULD AB proti IFN gama | 1/8 | 39±20 | 0±0 | 0±0 |
ULD AB proti CD4 | 1/8 | 0±0 | 0±0 | 0±0 |
Komplexní lék (ULD AB proti IFN gama a ULD AB proti CD4 v poměru 1:1) | 74 | 50+5 | 42±4 | 30±6 |
Azidothymidin (8 nM) | — | 82±2 | 54±1 | 41±1 |
V podmínkách tohoto experimentálního modelu je tedy zřejmé že:
1. Antiretrovirová aktivita komplexního léku je větší než antiretrovirová aktivita jeho oddělených složek (ULD AB proti IFN gama a ULD AB proti CD4).
2. Antiretrovirová aktivita komplexního léku trvala po celý experiment na rozdíl od antiretrovirové aktivity jeho oddělených složek (ULD AB proti IFN gama a ULD AB proti CD4).
3. Pouze komplexní lék vykázal antiretrovirovou aktivitu v modelu in vitro infikovaných makrofágů z lidské periferní krve přijaté od různých seronegativních dárců, což je důkaz výraznějšího antiretrovirového účinku komplexního léku ve srovnání s jeho komponentami (ULD AB proti IFN gama a ULD AB proti CD4), jehož antiretrovirová aktivita byla zaznamenána v modelu in vitro infikovaných makrofágů z lidské periferní krve přijaté pouze od jednoho seronegativního dárce.
PŘÍKLAD 4 (mononukleární buňky reverzní transkriptáza; terapeutický režim)
Seznam zkratek:
« TCID50 znamená infekční dávku pro 50 % tkáňové kultury
Hodnocení antiretrovirové aktivity komplexního léku, který sestává z ultranízkých dávek králičích polyklonálních protilátek proti alfa-interferonu, ultranízkých dávek králičích polyklonálních protilátek proti gama-interferonu, ultranízkých dávek králičích polyklonálních protilátek proti CD4 a ultranízkých dávek králičích polyklonálních protilátek proti CD8 v poměru 1:1:1:1 (směs homeopatických zředění C12+C30+C50), v dalším označovaná jako komplexní produkt, bylo provedeno s využitím mononukleárních buněk z lidské periferní krve infikovaných in vitro kmenem HIV-1LAI. Jako komparační výrobek byl použit Azidpthymidin (Sigma AZ169-100 mg, šarže 107 K1578).
Mononukleární buňky z lidské periferní krve byly izolovány z krve zdravého seronegativního dárce odstředěním s využitím gradientu hustoty Ficoll-Hypaque. Buňky byly tři dny stimulovány 1 pg/ml fytohemagglutininu P a 5 lU/ml lidského rekombinantního interleukinu-2 v médiu RPMI1640 (DIFCO), jež doplnilo 10 % telecího fetálního séra (komplement byl odstraněn zahříváním po dobu 45 minut při 56 °C), 1 % roztoku antibiotik (PSN Gibco obsahující 50 pg/ml penicilinu, 50 pg/ml streptomycinu a 100 pg/ml neomycinu).
Pro zjištění antiretrovirové aktivity byly produkty umístěny v jamce 15 až 30 minut po provedeném infikování buněk kmenem HIV-1- LAI v dávce 100 TCID50 (50 pl inokula kmene HIV-1- LAI). Tekuté supernatanty použité pro hodnocení účinků produktů na inhibici replikace HIV byly také odebrány 7. den po infekci buněk.
Před vložením do jamky, jež obsahovala 150 pl buněčné kultury, byl komplexní produkt zředěn médiem RPMI1640 (DIFCO) při čtyřnásobném zředění (1/4 zředění) na finální objem 50 pl. Azidothymidin byl zředěn médiem RPMI1640 (DIFCO) na koncentraci 8 nM.
Účinnost produktů byla stanovena podle inhibice replikace HIV hodnocené podle aktivity HIV reverzní transkriptázy v tekutině supematantu z mononukleárních buněk z lidské periferní krve s využitím soupravy HIV RT RetroSys od firmy INNOVAGEN (šarže 10-059C). Jako kontroly pro výpočet procentuální inhibice replikace HIV bylo použito tekutiny supematantu z buněk, jimž nebyly inokulovány zkušební produkty nebo azidothymidin (viz tabulka 5).
Tabulka 5.
Antiretrovirová aktivita komplexního produktu s využitím mononukleárních buněk z lidské periferní krve infikovaných kmenem HIV-1-LAI in vitro
Produkt | Poměr při zředění médiem RPMI1640 (DIFCO) | Inhibice aktivity HIV reverzní transkriptázy (% z kontroly) |
7. den | ||
Komplexní produkt (ultranízké dávka protilátek proti alfa-IFN, ultranízké dávka protilátek proti gama-IFN, ultranízké dávka protilátek proti CD4 a ultranízké dávka protilátek proti CD8 v poměru 1:1:1:1) | 74 | 81+11 |
Azidothymidin (8 nM) | — | 58+7 |
Tento experimentální model tedy demonstroval antiretrovirovou aktivitu komplexního produktu, který tvoří ultranízké dávka protilátek proti alfa-interferonu, ultranízké dávka protilátek proti gama-interferonu, ultranízké dávka protilátek proti CD4 a ultranízké dávka protilátek proti CD8 v poměru 1:1:1:1 (směs homeopatických zředění C12+C30+C50).
PŘÍKLAD 5 (mononukleární buňky nukleokapsidový protein p24; režim prevence a terapie)
Hodnocení antiretrovirové aktivity ultranízké dávky králičích polyklonálních protilátek proti alfa-interferonu (směs homeopatických zředění C12+C30+C50), ultranízké dávky králičích polyklonálních protilátek proti gama-interferonu (směs homeopatických zředění C12+C30+C50) (ULD IFN-γ)), ultranízké dávky králičích polyklonálních protilátek proti receptoru CD4 (směs homeopatických zředění C12+C30+C50) a ultranízké dávky králičích polyklonálních protilátek proti receptoru CD8 (směs homeopatických zředění C12+C30+C50) (ULD Ab IFN-a+ IFNY+CD4+CD8) byla provedena s použitím mononukleárních buněk z lidské periferní krve infikovaných in vitro kmenem HIV-1LAI.
Mononukleární buňky z lidské periferní krve byly izolovány z krve zdravých seronegativních dárců odstředěním gradientem hustoty Ficoll-Hypaque. Buňky byly stimulovány 3 dny 1 pg/ml fytohemagglutininu P a 5 lU/ml lidského rekombinantního interleukinu-2.
Pro hodnocení antiretrovirové aktivity byly produkty vloženy do jamky obsahující 100 pl mononukleárních buněk 24 hodin před nebo 15 minut po infekci buněk kmenem HIV-1- LAI v dávce 100 TCID50 (50 pl inokul kmene HIV-1-LAI). Před přidáním do jamky se ULD Ab IFN-a+ IFN-y+CD4+CD8 (12.5 pl) nebo referenční azidotimidin (1000 nM) smíchaly s médiem RPMI1640 (DIFCO) do dosažení finálního objemu vzorku 50 pl.
Tekutiny supernatantu se odebraly 7. den po infikování buněk. Aktivita produktu byla změřena podle inhibice replikace HIV, jež se zjišťovala koncentrací proteinu p24 z nukleokapsidu pocházejícího z buněčného jádra v tekutině supernatantu z mononukleárních buněk lidské periferní krve za použití soupravy Retrotek Elisa.
Bylo ukázáno, že ULD Ab IFN-a+ IFN-y+CD4+CD8 inhibitovaly replikaci HIV z 94 ± 6 %, když se přidaly 24 hodiny před infikováním, a z 46 ± 13 %, když se přidaly do jamky 15 minut po infikování buněk kmenem HIV-1LAI. Azidotimidin v dávce 1000 nM inhiboval replikaci HIV z 99 ± 0 a 99 ± 1 %, když se přidal do jamky 24 hodin před a 15 minut po infikování buněk kmenem HIV-1LAI.
Tento experimentální model tedy ukázal antiretrovirovou aktivitu ultranízkých dávek králičích polyklonálních protilátek proti ULD Ab IFN-a+ IFN-y+CD4+CD8 (směs homeopatických zředění C12+C30+C50).
PŘÍKLAD 6
Bylo provedeno zjišťování účinnosti kombinovaného užití ultranízkých dávek protilátek proti alfa-interferonu (směs homeopatických zředění C12+C30+C50) (zde v dalším označovaných jako ULD AB proti IFNalfa) a ultranízkých dávek protilátek proti CD4 (směs homeopatických zředění C12+C30+C50) (zde v dalším označovaných jako ULD AB proti CD4) a odděleně ULD AB proti IFNalfa a ULD AB proti CD4 v kontextu infekce chřipkou na samicích myší linie Balb/c na na základě FSBI “SRI of influenza” Ministerstvem pro zdraví a sociální vývoj Ruska (Petrohrad) ve dvou stupních. V prvním stupni se zjišťovala účinnost ULD AB proti IFNalfa a ULD AB proti CD4, ve druhém stupni účinnost kombinovaného užití ULD AB proti IFNalfa a ULD AB proti CD4 (v poměru 1:1) (v dalším označovaná jako kombinovaná medikace). Při testování kombinovaného léku a při testování ULD AB proti IFNalfa a ULD AB proti CD4 byl jako komparativní lék použit oseltamivir.
Infekční proces byl simulován nazální introdukcí chřipkového viru A/California/07/2009swl (H1N1) v dávce 10LD50.
ULD AB proti IFNalfa, ULD AB proti CD4 a kombinovaný lék byl myším dodáván intragastrickou cestou (v každé skupině platilo n = 20) při dávce 0,2 ml/myš dvakrát denně (denní dávka byla 0.4 ml/myš) během 5 dní před infekcí a během 10 dní po infekci. Potom se do napájecích misek zvířat v odpovídajících experimentálních skupinách přidaly ULD AB proti IFNalfa, ULD AB proti CD4 a kombinovaný lék (byl umožněn volný přístup).
Referenční lék oseltamivir byl do myší (n=20) intragastricky přiváděn dvakrát denně v dávce 10 mg/kg (denní dávka 20 mg/kg) počínaje 1 hodinou před infekcí. Oseltamivir byl přiváděn během 5 dní po infekci. Během 4 dní před infekcí a od 6. dne po infekci se intragastricky vnášela do myší této experimentální skupiny místo oseltamiviru destilovaná voda v množství 0,2 ml/myš (denně dávka 0,4 ml/myš). Destilovaná voda se intragastricky přiváděla myším kontrolní skupiny (n=20) dvakrát denně v dávce 0,2 ml/myš (denní dávka 0,4ml/myš). Během celé experimentální periody nápojové misky zvířat těchto dvou expermentálních skupin obsahovaly destilovanou vodu, ke které byl volný přístup.
Účinnost léků byla hodnocena podle množství přeživších zvířat. Výsledky výzkumu antivirové aktivity ULD AB proti IFNalfa, ULD AB proti CD4 (stupeň 1) jsou v tabulce 6, výsledky výzkumu antivirové aktivity kombinované medikace (stupeň 2) je v tabulce 7. Statistický význam rozdílů mezi experimentální skupinou a kontrolou (destilovaná voda) byl vypočten s využitím neparametrického kritéria chí-kvadrát.
Tabulka 6
Antivirová aktivita ULD AB proti IFNalfa a ULD AB proti CD4 v modelu infekce chřipky samic myší Balb/c intranazálně infikovaných virem chřipky
A/California/07/2009swl) (H1N1) v dávce 10LD50 (10. den po infekci).
č. | Experimentální skupina | % přežití | Rozdíl mezi % přežití skupiny, jež dostala lék, a skupiny, jež dostala destilovanou vodu |
10LD50 | |||
1. | ULD AB proti IFNalfa | 25 | +5% |
2. | ULD AB proti CD4 | 30 | +10% |
3. | Oseltamivir | 80* | +60% |
4. | Destilovaná voda | 20 | — |
* | - p < 0.05 vs. kontro | a |
Tabulka 7.
Antivirová aktivita kombinovaného léku obsahujícího ULD AB proti IFNalfa a ULD AB proti CD4 v modelu infekce chřipky samic myši Balb/c infikovaných intranazální introdukcí chřipkového viru A/California/07/2009swl (H1N1) v dávce 10LD50 (10. den po infekci).
č. | Experimentální skupina | Přežití, % | Rozdíl mezi % přežití skupiny, jež dostala lék, a skupiny, jež dostala destilovanou vodu |
10LD50 | |||
1 | Kombinovaný lék (ULD AB proti IFNalfa+ULD AB proti CD4 v poměru 1:1) | 30* | +25% |
2 | Oseltamivir | 70* | +65% |
3 | Destilovaná voda | 5 | — |
* - p < 0.05 vs. kontrola.
Bylo ukázáno, že přežití myší infikovaných chřipkou A/California/07/2009swl (H1N1)v dávce 10LD50 bylo vyšší ve stupni 1 než ve stupni 2: přežití ve skupině, jež ·· · · · · * · • · · * · · •··· λ *· ··· ··· dostala destilovanou vodu, bylo 20 % a 5 %; přežití ve skupině, jež přijala komparativní lék oseltamivir, bylo 80 % a 70 %. Je to důkaz výraznějšího letálního účinku indukovaného intranazálním vnesením viru chřipky A/California/07/2009swl (H1N1) v dávce 10LD50 ve 2. stupni výkumu.
Kombinovaný lék však zvýšil o 25 % přežití experimentálních zvířat infikovaných virem chřipky A/California/07/2009swl (H1N1) v dávce 10LD50 ve srovnání s kontrolou. Přitom přežití ve skupině, jež dostala ULD AB proti IFNalfa bylo jen o 5 % vyšší než přežití v kontrolní skupině a přežití ve skupině, jež přijala ULD AB proti CD4 bylo jen o 10 % vyšší než přežití v kontrolní skupině.
Výsledek provedeného výzkumu tedy ukázal, že spojené použití ULD AB proti IFNalfa a ULD AB proti CD4 (kombinovaný lék) dává výraznější antivirový účinek než oddělené složky a to vzdor skutečnosti že dávka ULD AB proti IFNalfa a ULD AB proti CD4 jako část kombinovaného léku je dvakrát menší než dávka ULD AB proti IFNalfa a dávka ULD AB proti CD4 zkoušené jako oddělené léky.
PŘÍKLAD 7
Výzkum účinnosti kombinovaného použití ultranízkých dávek protilátek proti faktoru alfa nádorové nekrózy (směs homeopatických zředění C12+C30+C50) (v dalším zde označovaných jako ULD Ab to TNFalfa) a ultranízkých dávek protilátek proti CD4 (směs homeopatických zředění C12+C30+C50) (v dalším zde označovaných jako ULD Ab proti CD4) a ULD AB proti TNFalfa a ULD AB proti CD4 odděleně v kontextu infekce chřipky u samičích myší linie Balb/c se prováděl na základě FSBI “SRI of influenza” Ministry of health of social development of Russia (Saint Petersburg) ve dvou stupních. V prvním stupni se studovala účinnost ULD Ab proti TNFalpha a ULD Ab proti CD4 a ve druhém stupni účinnost kombinovaného použití ULD AB proti TNFalfa a ULD Ab proti CD4 (v poměru 1:1) zde v dalším označovaného jako kombinovaný lék. V obou příadech se při testování kombinovaného léku a během testování ULD AB proti TNFalfa a ULD AB proti CD4 použil jako komparativní lék oseltamivir.
Infekční proces byl simulován intranazální introdukcí viru chřipky A/California/07/2009swl (H1N1) v dávce 10LD50.
ULD Ab proti TNFalfa, ULD Ab proti CD4 a kombinovaný lék byly intragastricky zavedeny do myší (v každé skupině n=20) v dávce 0,2 ml/myš dvakrát denně (denní dávka 0,4 ml/myš) během 5 dní před infekcí a během 10 dní po infekci. Dodatečně se přidaly ULD AB proti TNFalfa, ULD AB proti CD4 a kombinovaný lék do napájecích misek zvířat odpovídajících experimentálních skupin (byl umožněn volný přístup).
Referenční lék oseltamivir byl do myší (n=20) uváděn intragastricky dvakrát denně v dávce 10 mg/kg (denní dávka 20 mg/kg) počínaje 1 hodinu před infekcí. Oseltamivir byl introdukován během 5 dní po infekci. Během 4 dnů před infekcí a prvních 6 dnů po infekci se intragastricky přiváděla destilovaná voda v dávce 0,2 ml/myš dvakrát denně (denní dávka byla 0,4 ml/myš) místo oseltamivir myším této kontrolní skupiny. Destilovaná voda se intragastricky přiváděla myším kontrolní skupiny (n=20) dvakrát denně v dávce 0,2 ml/myš, (denní dávka 0,4 ml/myš). Během celé doby experimentu obsahovaly nápojové misky zvířat těchto dvou experimentálních skupin destilovanou vodu (byl umožněn volný přístup).
Účinnost léků byla hodnocena podle množství přeživších zvířat. Výsledky výzkumu antivirové aktivity ULD Ab proti TNFalfa a ULD Ab proti CD4 (stupeň 1) jsou v tabulce 8, výsledky výzkumu antivirové aktivity kombinované medikace (stupeň 2) je v tabulce 9. Statistický význam rozdílů mezi expermentálními skupinami a kontrolou (destilovaná voda) byl vypočten s využitím neparametrického kritéria chi-square.
Tabulka 8
Antivirová aktivita ULD AB proti TNFalfa a ULD AB proti CD4 v modelu infekce chřipky u myších samic Balb/c infikovaných intranazální introdukcí viru chřipky A/California/07/2009swl) (H1N1) v dávce 10LD50 (10. den po infekci).
č. | Experimentální skupina | % přežití | Rozdíl mezi % přežití skupiny, jež dostala lék, a skupiny, jež dostala destilovanou vodu |
10LD50 | |||
1. | ULD AB proti TNFalfa | 25 | +5% |
2. | ULD AB proti CD4 | 30 | +10% |
3. | Oseltamivir | 80* | +60% |
4. | Destilovaná voda | 20 | — |
* - p < 0.05 vs. kontro | a |
Tabulka 9
Antivirová aktivita kombinovaného léku obsahujícího ULD AB proti TNFalfa a ULD AB proti CD4 v modelu infekce chřipky samic myši Balb/c infikovaných intranazální introdukcí chřipkového viru A/California/07/2009swl (H1N1) v dávce 10LD50 (10. den po infekci).
č. | Experimentální skupina | Přežití, % 10LD50 | Rozdíl mezi % přežití skupiny, jež dostala lék, a skupiny, jež dostala destilovanou vodu |
1 | Kombinovaný lék (ULD AB proti TNFalfa+ULD AB proti CD4 v poměru 1:1) | 30* | +25% |
2 | Oseltamivir | 70* | +65% |
3 | Destilovaná voda | 5 | — |
• - p < 0.05 vs. kontrola.
Bylo ukázáno, že přežití myší infikovaných chřipkou A/California/07/2009swl (H1N1) v dávce 10LD50 bylo vyšší ve stupni 1 než ve stupni 2: přežití ve skupině, jež dostala destilovanou vodu, bylo 20 % a 5 %; přežití ve skupině, jež přijala komparativní lék oseltamivi.r bylo 80 % a 70 %. Je to důkaž výraznějšího letálního účinku indukovaného intranazálním vnesením viru chřipky A/California/07/2009swl (H1N1) v dávce 10LD50 ve stupni 2 výkumu.
Kombinovaný lék však zvýšil o 25 % přežití experimentálních zvířat infikovaných virem chřipky A/California/07/2009swl (H1N1) v dávce 10LD50 ve srovnání s kontrolou. Přitom přežití ve skupině, jež dostala ULD AB proti TNFalfa, bylo jen o 5 % vyšší než přežití v kontrolní skupině a přežití ve skupině, jež přijala ULD AB proti CD4 bylo jen o 10 % vyšší než přežití v kontrolní skupině.
Výsledek provedeného výzkumu tedy ukázal, že kombinované použití ULD AB proti TNFalfa a ULD AB proti CD4 (kombinovaný lék) dává výraznější antivirový účinek než oddělené složky a to vzdor skutečnosti že dávka ULD AB proti TNFalfa a ULD AB proti CD4 jako část kombinovaného léku je dvakrát menší než dávka ULD AB proti TNFalfa a ULD AB proti CD4 zkoušená ve formě oddělených léků.
PŘÍKLAD 8
Při výzkumu byla použita farmaceutická kompozice v tabletách obsahující aktivované a potencované ultranízké dávky (ULD) protilátek proti gama-interferonu (Ab IFNgama), protilátek proti CD4 (Ab CD4), protilátek proti histaminu (Ab His), impregnované na laktózu ve formě vodně-alkoholického roztoku směsi homeopatických zředění C12, C30, C200 každé z nich (Ab IFNgama + Ab CD4 + Ab proti His).
Výzkum s dvojitě slepou kontrolou placebem byl prováděn současně s muži a ženami ve věku 18 až 60 roků s virovou URI doprovázenou intoxikací a příznaky kataru. Do výzkumu byli zařazeni pacienti s tělesnou teplotou 37,8 °C a vyšší (za podmínky, že byla zaznamenána na počátku choroby), přičemž trvání choroby nepřekračovalo při zahájení terapie 48 hodin, kteří neměli vážné komplikace. Byly provedeny expresní testy pro zjištění antigenu viru chřipky. Do výzkumu nebyli připuštěni pacienti s pozitivními výsledky testu. Před zahájením procedur pacienti podepsali Informovaný souhlas s účastí na výzkumu. Pacienti dostali diář, ve kterém zaznamenávali dvakrát denně tělesnou teplotu, souběžné terapie ap. Pacientům byla 1. den podána kombinace Ab IFNgama + Ab CD4 +Ab His nebo placebo v dávce 8 tablet denně a 2. až 5. den v dávce 3 tablety denně. Podle potřeby bylo pacientům povoleno brát antipyretika. Nebylo dovoleno brát antivirové a imunomodulační léky ani antihistaminy a antibiotika. Před počátkem terapie a při poslední návštěvě byly odevzdány vzorky moči a krve pro hodnocení laboratorních parametrů potřebných pro monitorování bepečnosti prováděné terapie. Celkové trvání terapie bylo 5 dní, doba následné etapy pozorování byla 2 dny. Je tedy doba účasti každého pacienta na výzkumu 7 dní.
Doba do snížení tělesné teploty na 37,0 °C a nižší byla považována za kritérium účinnosti terapie; vedle toho se srovnával počet spotřebovaných antipyretik.
Během provádění těchto analýz dokončilo 78 pacientů terapii (40 pacientů dostalo Ab IFNgama + Ab CD4 + Ab His, 38 pacientů placebo). Podíl pacientů s teplotou sníženou na 37,0 °C a nižší ukazuje obrázek 1. Obrázek ukazuje, že podání Ab IFNgama + Ab CD4 + Ab His do konce 2. dne od nástupu terapie mělo za následek snížení tělesné teploty pacientů o 17,4 % ve srovnání se skupinou, která dostala placebo (p<0.05). Přesto spotřeba antipyretik v této skupině byla výrazně nižší než ve skupině anti- Ab IFNgama + Ab CD4 + Ab His (3.5±0,25 spotřebovaných antipyretik do konce 2. dne léčby proti 3,9±0,32 ve skupině která dostala placebo, p<0.05). Nadřazenost aplikace Ab IFNgama + Ab CD4 + Ab His nad aplikací skupiny, která dostala placebo, byla zřemá již ráno 2. dne léčby a udržela se přes celou etapu léčby.
Údaje všech 78 pacientů zahrnutých do výzkumu, kteří v termínu dokončili léčbu, byly zpracovány v analýze bezpečnosti; nebyla zaznamenána žádná ztráta pacientů. Během celé doby pozorování byla konstatována dobrá tolerance vůči lékům. Při podávání Ab IFNgama + Ab CD4 + Ab His nebyly zaznamenány žádné nežádoucí příhody. Krevní testy prováděné na začátku léčby a na jejím konci neukázaly žádné patologické odchylky od normy. Analýzy moči prováděné první den a poslední den výzkumu také neodhalily žádné patologické změny v žádném pacientovi.
Při srovnání těchto údajů s výsledky získanými během dvojitě slepého placebem kontrolovaného randomizovaného výkumu klinické účinnosti a bepečnosti podání Ab IFNgama při chřipce a jiných virových URI prováděného v r. 2005 (Influenza RI, RAMS, Saint-Petersburg, 2005) bylo zjištěno, že Ab IFNgama + Ab CD4 + Ab His snižuje tělesnou teplotu účinněji než Ab IFNgama (obrázek 1, tabulka 10 a tabulka 11).
TabulkalO. Podíl pacientů s tělesnou teplotou sníženou na 37,0 °C a nižší účinkem podání jednak Ab IFNgama + Ab CD4 + Ab His, jednak placeba.
Den 1-, ráno | Den 1-, večer | Den 2., ráno | Den 2., večer | Den 3., ráno | Den 3., večer | Den 4., ráno | ||
AbtGI+ Ab proti Cd4+ Ab proti H Ab IFNgama + Ab CD4 + Ab His, n=40 | Celkový počet pacientů | 40 | 40 | 40 | 40 | 40 | 40 | 40 |
Počet pacientů s normální teplotou | 19 | 20 | 24 | 28 | 27 | 30 | 31 | |
Podíl pacientů s normální teplotou, % | 47,5 | 50,0 | 60,0 | 70,0 | 67,5 | 75,0 | 77,5 | |
Placebo n =38 | Celkový počet pacientů | 38 | 38 | 38 | 38 | 38 | 38 | 38 |
Počet pacientů s normální teplotou | 18 | 17 | 19 | 20 | 23 | 24 | 27 | |
Podíl pacientů s normální teplotou, % | 47,4 | 44,7 | 50,0 | 52,6 | 60,5 | 63,2 | 71,1 |
Ab IFNgama*, n=30 | Celkový počet pacientů | 30 | 30 | 30 | 30 | 30 | 30 | 30 |
Počet pacientů s normální teplotou | 0 | 3 | 14 | 12 | 18 | 19 | 25 | |
Podíl pacientů s normální teplotou, % | 0 | 10,0 | 46,7 | 40,0 | 60,0 | 63,3 | 83,3 | |
Placebo*, n=30 | Celkový počet pacientů | 30 | 30 | 30 | 30 | 30 | 30 | 30 |
Počet pacientů s normální teplotou | 0 | 0 | 10 | 7 | 16 | 15 | 28 | |
Podíl pacientů s normální teplotou, % | 0 | 0 | 33,3 | 23,3 | 53,3 | 50,0 | 93,3 |
Tabulka 10 - Pokračování
Den 4., večer | Den 5., ráno | Den 5., večer | Den 6-, ráno | Den 6., večer | Den 7., ráno | ||
Ab t Gl + Ab proti Cd4 + Ab proti H Ab IFNgama + Ab CD4 + Ab His, n=40 | Celkový počet pacientů | 40 | 40 | 40 | 40 | 40 | 40 |
Počet pacientů s normáln teplotou | 33 | 36 | 38 | 40 | 40 | 40 | |
Podíl pacientů s normální teplotou, % | 82,5 | 90,0 | 95,0 | 100,0 | 100,0 | 100,0 | |
Placebo n =38 | Celkový počet pacientů | 38 | 38 | 38 | 38 | 38 | 38 |
Počet pacientů s normální teplotou | 24 | 29 | 30 | 33 | 37 | 38 | |
Podíl pacientů s normální teplotou, % | 63,2 | 76,3 | 78,9 | 86,8 | 97,4 | 100,0 | |
Ab IFNgama*, n=30 | Celkový počet pacientů | 30 | 30 | 30 | 30 | 30 | 30 |
Počet pacientů s normální teplotou | 29 | 29 | 30 | 29 | 30 | 29 | |
Podíl pacientů s normální teplotou, % | 96,7 | 96,7 | 100 | 96,7 | 100 | 96,7 | |
Placebo*, n=30 | Celkový počet pacientů | 30 | 30 | 30 | 30 | 30 | 30 |
Počet pacientů s normální teplotou | 28 | 28 | 30 | 30 | 30 | 30 | |
Podíl pacientů s normální teplotou, % | 93,3 | 93,3 | 100 | 100 | 100 | 100 _ |
* Podle výsledků dvojitě slepého placebem kontrolovaného randomizovaného výzkumu klinické účinnosti a bezpečnosti podání Ab IFNgama při chřipce a jiných virových URI prováděného v r. 2005 (Influenza RI, RAMS, SaintPetersburg, 2005)
Tabulka 11. Střední hodnoty tělesné teploty pacientů podle terapeutických skupin, °C, M ± SD
Den 1., ráno | Den 1., večer | Den 2., ráno | Den 2., večer | Den 3., ráno | Den 3., večer | Den 4., ráno | |
Ab IFNgama + Ab CD4 + Ab His, n=40 | 37,5±0, 54 | 37,7+ 0,56 | 37,2± 0,67 | 37,1± 0,53 | 36,8± 0,43 | 36,8± 0,49 | 36,7± 0,31 |
Placebo, n=38 | 37,6± 0,71 | 37,6± 0,63 | 37,2± 0,48 | 37,1± 0,49 | 36,9± 0,41 | 36,9± 0,36 | 36,8± 0,49 |
Ab IFNgama , n=30 | 38,1± 0,62 | 38,0± 0,58 | 37,4± 0,80 | 37,3± 0,61 | 37,1± 0,50 | 37,0± 0,47 | 36,8± 0,35 |
Placebo ,* n=30 | 38,0± 0,48 | 38,0± 0,50 | 37,4± 0,60 | 37,4± 0,47 | 3.7,0± 0,37 | 37,0± 0,42 | 36,8± 0,23 |
Tabulka 11 - Pokračování
Den 4., večer | Den 5., ráno | Den 5., večer | Den 6., ráno | Den 6., večer | Den 7., ráno | |
Ab IFNgama + Ab CD4 + Ab His, n=40 | 36,6± 0,33 | 36,6± 0,25 | 36,6± 0,23 | 36,6± 0,22 | 36,6± 0,15 | 36,6± 0,18 |
• · ···· · · » · · · · · · · ·
Placebo, n=38 | 36,7± 0,37 | 36,6± 0,32 | 36,6± 0,21 | 36,6± 0,28 | 36,5± 0,18 | 36,5± 0,18 |
Ab IFNgama , n=30 | 36,6± 0,32 | 36,6± 0,21 | 36,5± 0,26 | 36,6± 0,21 | 36,6± 0,26 | 36,6± 0,26 |
Placebo ,* n=30 | 36,6± 0,34 | 36,6± 0,28 | 36,6± 5.42 | 36,6± 0,21 | 36,5± 0,24 | 36,6± 0,18 |
• Podle výsledků dvojitě slepého placebem kontrolovaného randomizovaného výzkumu klinické účinnosti a bezpečnosti podání Ab IFNgama při chřipce a jiných virových URI prováděného v r. 2005 (Influenza RI, RAMS, SaintPetersburg, 2005.
PŘÍKLAD 9
Při tomto výzkumu bylo použito farmaceutické kompozice (tablet) obsahujících aktivované potencované formy ultranízkých dávek (ULD) protilátek proti gamainterferonu (Ab IFNgama), protilátek proti CD4 (Ab proti CD4), protilátek proti histaminu (Ab proti His) impregnovaných na laktózu ve formě vodně-alkoholické směsi jejich homeopatických zředění C12, C30, C200 (Ab IFNgama + Ab CD4 +Ab His.
V open-label komparativním klinickém výzkumu účinků Ab IFNgama + Ab CD4 + Ab His a Tamiflu® (F.Hoffmann-La Roche Ltd - Switzerland, Oseltamivir) prováděném současně na mužích i ženách ve věku 18 až 60 let trpících chřipkou provázenou intoxikací byly zahrnuty případy s příznaky kataru. Do výzkumu byli zařazeni pacienti s tělesnou teplotou 37,8 °C a vyšší (s podmínkou, že byla zaznamenána na počátku choroby), pokud trvání choroby nepřekračovalo 48 hodin při zahájení terapie, kteří neměli vážné komplikace. Byly provedeny expresní testy pro zjištění antigenu viru chřipky. Do výzkumu nebyli připuštěni pacienti s pozitivními výsledky testu. Před zahájením pacienti podepsali Informovaný souhlas s účastí na • I · · · · « · »1 · · * · ··«· · · a·· a a a výzkumu. Pacienti dostali diář, ve kterém zaznamenávali dvakrát denně tělesnou teplotu, souběžné terapie ap. Pacientům byla 1. den podána kombinace Ab IFNgama + Ab CD4 + Ab His v dávce 8 tablet denně a 2. až 5. den v dávce 3 tablety denně. Pokud to potřebovali, bylo pacientům povoleno brát antipyretika. Nebylo dovoleno brát antivirové a imunomodulační léky ani antihistaminy a antibiotika. Před počátkem terapie a při poslední návštěvě byly odevzdány vzorky moči a krve pro hodnocení laboratorních parametrů potřebných pro monitorování bepečnosti prováděné terapie. Celkové trvání terapie je 5 dní, doba následné etapy pozorování je 2 dny. Je tedy doba účasti každého pacienta na výzkumu 7 dní.
Doba do snížení tělesné teploty na 37,0 °C a nižší byla považována za kritérium účinnosti terapie; vedle toho se srovnával počet spotřebovaných antipyretik.
Během provádění této analýzy 17 pacientů ukončilo terapii (6 pacientů ve skupině Ab IFNgama + Ab CD4 + Ab His a 11 pacientů ve skupině Oseltamivir). V průběhu terapie se podíly pacientů s poklesem tělesné teploty na 37 °C a níže ve skupinách podstatně nelišily. Do 4. dne léčby se pacienti obou skupin prakticky uzdravili (viz obrázek 2). Do 2. dne léčby byla u 1/3 pacientů obou skupin zaznamenána normalizace tělesné teploty. Rozdíl průměrného počtu přijatých antipyretik také nebyl významný a do rána 4. dne terapie byl 7,6±0,8 ve skupině přijímající Ab IFNgama + Ab CD4 +Ab His a 7,4±0,90 ve skupině léčené Oseltamivirem.
Údaje všech 17 pacientů zahrnutých do výzkumu, kteří v termínu dokončili léčbu, byly zpracovány v analýze bezpečnosti; nebylo zaznamenáno žádné vyřazení pacientů. Během celé doby pozorování byla konstatována dobrá tolerance vůči lékům. Při podávání Ab IFNgama + Ab CD4 + Ab His nebyly zaznamenány žádné nežádoucí příhody. Krevní testy prováděné na začátku léčby a na jejím konci neukázaly žádné patologické odchylky od normy. Analýza moči prováděná první den a poslední den výzkumu také neodhalily žádné patologické změny u žádného pacienta.
Při srovnání těchto údajů s výsledky získanými během dvojitě slepého placebem kontrolovaného randomizovaného výkumu klinické účinnosti a bepečnosti podání při chřipce a jiných virových URI prováděného v r. 2005 (Influenza Rl, RAMS, Saint-Petersburg, 2005) bylo zjištěno, že Ab IFNgama + Ab CD4 + Ab His snižuje tělesnou teplotu účinněji než Ab IFNgama (obrázek 2, tabulka 12 a tabulka 13).
Tabulka 12. Podíl pacientů, u kterých se tělesná teplota snížila na 37,0 °C a níže při podání Ab IFNgama + Ab CD4 + Ab His /Oseltamivir
Den 1., ráno | Den 1-, veče r | Den 2., ráno | Den 2„ veče r | Den 3., ráno | Den 3., veče r | Den 4., ráno | Den 4., večer | ||
Ab IFNgama + Ab CD4 + Ab His, n=6 | Celkový počet pacientů | 6 | 6 | 6 | 6 | 6 | 6 | 6 | 6 |
Počet pacientů s normální teplotou | 0 | 0 | 2 | 3 | 4 | 4 | 6 | 5 | |
Podíl pacientů s normální teplotou, % | 0 | 0 | 33,3 | 50,0 | 66,7 | 66,7 | 100,0 | 83,3 | |
Ab IFNgama *, Oseltamivir, n=30 n=11 | Celkový počet pacientů | 11 | 11 | 11 | 11 | 11 | 11 | 11 | 10 |
Počet pacientů s normální teplotou | 0 | 1 | 4 | 5 | 5 | 6 | 10 | 8 | |
Podíl pacientů s normální teplotou, % | 0 30 | 9,1 30 | 36,4 30 | 45,5 30 | 45,5 30 | 54,5 30 | 90,9 30 | 80,0 30 | |
Celkový počet pacientů | |||||||||
Počet pacientů s normální teplotou | 0 | 3 | 14 | 12 | 18 | 19 | 25 | 29 | |
Podíl pacientů s normální teplotou, % | 0 | 10,0 | 46,7 | 40,0 | 60,0 | 63,3 | 83,3 | 96,7 | |
Placebo*, n=30 | Celkový počet pacientů | 30 | 30 | 30 | 30 | 30 | 30 | 30 | 30 |
Počet pacientů s normální teplotou | 0 | 0 | 10 | 7 | 16 | 15 | 28 | 28 | |
Podíl pacientů s normální teplotou, % | 0 | 0 | 33,3 | 23,3 | 53,3 | 50,0 | 93,3 | 93,3 |
Tabulka 12. Pokračování
Den 5., ráno | Den 5., večer | Den 6., ráno | Den 6., večer | Den 7., ráno | Den 7., večer | Den 8., ráno | ||
+ X) Q + ro < O ·<· | Celkový počet pacientů | 6 | 6 | 5 | 5 | 4 | 4 | N/A |
Počet pacientů s normální teplotou | 6 | 6 | 5 | 5 | 4 | 4 | N/A | |
Podíl pacientů s normální teplotou. % | 100,0 | 100,0 | 100,0 | 100,0 | 100,0 | 100,0 | N/A | |
Ab IFNgama *, Oseltamivir, n=30 n=11 | Celkový počet pacientů | 10 | 10 | 9 | 7 | 5 | 4 | 3 |
Počet pacientů s normální teplotou | 9 | 9 | 9 | 7 | 5 | 4 | 3 | |
Podíl pacientů s normální teplotou, % | 90,0 30 | 90,0 30 | 100,0 30 | 100,0 30 | 100,0 30 | 100,0 30 | 100,0 30 | |
Celkový počet pacientů | ||||||||
Počet pacientů s normální teplotou | 29 | 30 | 29 | 30 | 29 | 30 | 30 | |
Podíl pacientů s normální teplotou, % | 96,7 | 100 | 96,7 | 100 | 96,7 | 100 | 100 | |
Placebo*, n=30 | Celkový počet pacientů | 30 | 30 | 30 | 30 | 30 | 30 | 30 |
Počet pacientů s normální teplotou | 28 | 30 | 30 | 30 | 30 | 30 | 30 | |
Podíl pacientů s normální teplotou, % | 93,3 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
• Podle výsledků dvojitě slepého placebem kontrolovaného randomizovaného výzkumu klinické účinnosti a bezpečnosti podání Ab IFNgama při chřipce a jiných URI (Influenza RI, RAMS, Saint-Petersburg, 2005).
Tabulka 13. Střední hodnoty tělesné teploty pacientů podle terapeutických skupin, °C, M ± SD
Den 1., ráno | Den 1-, večer | Den 2., ráno | Den 2., večer | Den 3., ráno | Den 3., večer | Den 4., ráno | Den 4., večer | |
Ab IFNgama + Ab IFNgama + Ab CD4 + Ab His , n=6 | 38,5± 0,49 | 38,1± 0,62 | 37,2± 1,01 | 37,2± 0,67 | 36,5± 0,61 | 36,8± 0,47 | 36,5± 0,37 | 36,6± 0,46 |
Oseltamivir, n=11 | 38,1± 0,82 | 37,3± 0,71 | 37,3± 0,72 | 36,9± 0,53 | 36,9± 0,47 | 36,7± 0,46 | 36,8± 0,37 | 36,5± 0,38 |
Ab IFNgama*, n=30 | 38,1± 0,62 | 38,0+ 0,58 | 37,4± 0,80 | 37,3± 0,61 | 37,1± 0,50 | 37,0± 0,47 | 36,8± 0,35 | 36,6± 0,32 |
Placebo,* n=30 | 38,0± 0,48 | 38,0± 0,50 | 37,4± 0,60 | 37,4± 0,47 | 37,0± 0,37 | 37,0± 0,42 | 36,8± 0,23 | 36,6+ 0,34 |
Tabulka 13. Pokračování
Den 5., ráno | Den 5., večer | Den 6., ráno | Den 6., večer | Den 7., ráno | Den 7., večer | Den 8., ráno | |
Áb IFNgama + Ab IFNgama + Ab CD4 + Ab His , n=6 | 36,5± 0,26 | 36,6± 0,28 | 36,4± 0,35 | 36,5± 0,20 | 36,4± 0,26 | 36,5± 0,22 | ND |
Oseltamivir, n=11 | 36,7± 0,25 | 36,5± 0,21 | 36,6± 0,21 | 36,3± 0,19 | 36,5± 0,10 | 36,6± 0,12 | 36,5± 0,14 |
Ab IFNgama*, n=30 | 36,6± 0,21 | 36,5± 0,26 | 36,6± 0,21 | 36,6± 0,26 | 36,6± 0,26 | 36,5± 0,27 | 36,5± 0,23 |
Placebo,* n=30 | 36,6± 0,28 | 36,6± 5,42 | 36,6± 0,21 | 36,5± 0,24 | 36,6± 0,18 | 36,5± 0,19 | 36,4± 0,21 |
.·;·:< : · : .
*·4« ··«·· · · · · * Podle výsledků dvojitě slepého placebem kontrolovaného randomizovaného výzkumu klinické účinnosti a bezpečnosti podání Ab IFNgama při chřipce a jiných URI (Influenza RI, RAMS, Saint-Petersburg, 2005)
PŘÍKLAD 10
Při tomto výzkumu bylo použito farmaceutické kompozice (tablet) obsahujících aktivované potencované formy ultranízkých dávek (ULD) protilátek proti gamainterferonu (Ab IFNgama), protilátek proti CD4 (Ab proti CD4), protilátek proti histaminu (Ab proti His) impregnovaných na laktózu ve formě vodné alkoholické směsi jejich homeopatických zředění C12, C30, C200 (Ab IFNgamma + Ab CD4 + Ab His).
V tomto dvojitě slepém placebem kontrolovaném výzkumu účinnosti a bezpečnosti Ab IFNgama + Ab CD4 + Ab His ve virových URI (příklad 8) a v tomto open-label komparativním výzkumu účinosti a bezpečnosti Ab IFNgama + Ab CD4 + Ab His pro chřipku (příklad 9) byl navíc zjišťován počet komplikací včetně bakteriálních (bakteriální pneumonie, tracheitida, otitida, glomerulonefritida atd.), jež se vyvinuly v souvislosti s průběhy akutních infekcí.
Jestliže tělesný obranný systém funguje správně, mohou být infekční postupy zastaveny nebo lokalizovány, takže nevedou k vývinu zřejmých klinických symptomů, to znamená, že přiměřená obranná reakce způsobí rychlou inaktivaci nositele infekce, zachování nezhoršených tělesných funkcí a jejich regeneraci. U subjektů s vysokou citlivostí vůči infekčním agens lze nalézt odlišnou situaci a neexistenci potřebného mechanismu specifické a nespecifické obrany (imunokompromitovaní pacienti). V těchto případech mohou zvýšenou měrou replikovaní infekční agens a produkty jejich interakcí s epitelovými a imunitními buňkami stejně jako poškozené buňky vnikat do krve a vést k vývoji nepříznivého průběhu choroby, vývoji komplikací a možnému špatnému výsledku.
Použití Ab IFNgama + Ab CD4 + Ab His při chřipce a virové URI způsobilo značné zmenšení četnosti bakteriálních komplikací ve srovnání s užitím placeba (tabulka 14), a proto i omezení antibakteriální terapie. Zdá se, že tento lék brání vývoji sekundárního imunitního deficitu ve stupni uplatňování imunomodulačního efektu a zlepšování přirozené tělesné obrany. Schopnost Ab IFNgama + Ab CD4 + Ab His zmenšit frekvenci vývoje bakteriálních komplikací bylo větší než u Ab IFNgama.
Tabulka 14. Četnost bakteriální infekce (komplikace)
Lék | Počet pacientů | Bakteriální komplikace (infekce) | |||
Otitida n/% | Tracheiti da n/% | Pneumoni e n/% | Celkem/ % ’ | ||
Ab IFNgama + Ab CD4 + Ab His (virová URI) | 40 | 0/0 | 1 /2,5 | 0/0 | 1/2,5 |
Placebo (virová URI) | 38 | 3/7,9 | 7/18,4 | 0/0 | 10/26,3 |
Ab IFNgama + Ab CD4 + Ab His (chřipka) | 6 | 0/0 | 0/0 | 0/0 | 0/0 |
Oseltamivir (chřipka) | 11 | 0/0 | 2/18,2 | 1/9,1 | 3 / 27,2 |
Ab IFNgama (chřipka a virová URI)* | 30 | 1/3,3 | 2/6,7 | 0/0 | 3/10,0 |
Placebo (chřipka a virová URI)* | 30 | 4/13,3 | 5/16,7 | 0/0 | 9/30 |
* Podle výsledků dvojitě slepého placebem kontrolovaného randomizovaného výzkumu klinické účinnosti a bezpečnosti podání Ab IFNgama při chřipce a jiných URI (Influenza RI, RAMS, Saint-Petersburg, 2005)
PŘÍKLAD 11
Pro výzkum aktivity farmaceutických kompozic pro léčbu pacientů skupiny č. 1 byly použity tablety hmotnosti 300 mg impregnované farmaceutickou kompozicí obsahující vodně-alkoholické roztoky (6 mg/tableta) aktivovaných a potencovaných forem králičích polyklonálních afmitně přečištěných protilátek proti lidskému gamainterferonu (anti-IFN-γ) a CD4 (anti-CD4) v ultranízkých dávkách (ULD) získaných ultrazředěním počátečního matečného roztoku 10012,10030, 10050 krát, což odpovídá směsi centesimálních homeopatických zředění C12, C30, C50; pro léčbu pacientů skupiny č. 2 byly použity tablety hmotnosti 300 mg impregnované farmaceutickou kompozicí obsahující vodně-alkoholické roztoky (6 mg/tableta) aktiyovaných a potencovaných forem králičích polyklonálních afinitně přečištěných jprotilátek proti lidskému gama-interferonu (anti-IFN-γ) a CD4 (anti-CD4) a histamlnu (anti-His) v ultranízkých dávkách (ULD) získaných ultrazředěním počátečního matečného roztoku 100 ,10030,10050 krát, což odpovídá směsi centesimálních homeopatických zředění C12, C30, C50; pro léčbu pacientů skupiny č.3 byly použity tablety hmotnosti 300 mg impregnované farmaceutickou kompozicí obsahující vodně-alkoholické roztoky (3 mg/tableta) aktivovaných a potencovaných forem králičích polyklonálních afinitně přečištěných protilátek proti lidskému gama-interferonu (ariti-IFN-y) v ultranízkých dávkách (ULD) získaných ultrazředěním počátečního matečného roztoku 10012,10030,10050 krát, což odpovídá směsi centesimálních homeopatických zředění C12, C30, C50.
Antiretrovirová aktivita farmaceutických kompozic ULD anti-lpN-γ + anti-CD4 a ULD anti-IFN-γ + anti-CD4 + anti-His byla vyhodnocována během komparativního klinického pokusu za účasti pacientů infikovaných virem lidské imunodeficience (HIV) v Local Centre for Prevention and Fight Against AIDS and Infectious Diseases. Výzkum zahrnoval 97 pacientů (65 mužů a 32 žen) ve věku 18 až 48 let s virovou zátěží HIV-1 RNA >150 kopií/ml v krevním plazmatu a počty lymfocytů >250 buněk/μΙ (or >0,25*109/l). Třicetčtyri z 97 účastníků léčby dosud nebylo léčeho. Šedesáttři z 97 účastníků výzkumu již bylo jeden nebo dva roky podrobeno antiretrovirové terapii (ART). Do skupiny, na níž se prováděl výzkum, nebyli přijati pacienti s cirhózou, virovou hepatitidou C, závažnou průvodní chorobou ve stádiu zhoršení, těhotné ženy a osoby, jež nitrožilně užívají narkotika. Testy byly prováděny v období podzim-zima, v němž je sezónní vzestup chřipky a akutních respiračních onemocnění běžný.
Sedmdesátpět účastníků výzkumu bylo náhodně rozděleno do tří skupin, jimž byla předepsána buď studovaná farmaceutická kompozice (skupiný 1 a 2) nebo referenční farmaceutická kompozice (skupina č. 3) v režimu odpovídajícím profylaxi ARVI - 1 tableta denně po dobu 6 týdnů:
• pacienti skupiny č. 1 (n=25) měli s ULD předepsaný anti-IFN-γ + antiCD4 (podskupina 1A: dosud neléčení pacienti, n=12), nebo předepsaný s ULD antiIFN-γ + anti-CD4 + ART (podskupina 1B, n=13);
• pacienti skupiny č. 2 (n=23) měli s ULD předepsaný anti-IFN-γ + antiCD4 + anti-His (podskupina 2A: dosud neléčení pacienti, n=11) nebo předepsaný s ULD anti-IFN-γ + anti-CD4 + anti-His + ART (podskupina 2B, n=12);
• pacienti skupiny č. 3 (n=27) měli s ULD předepsaný anti-IFN-y (podskupina 3A: dosud neléčení pacienti, n=11) nebo předepsaný s ULD anti-IFN-γ + ART (podskupina 3B, n=16);
Kontrolní skupina (skupina č. 4, n=22) zahrnovala pacienty, kteří pokračovali v přijímání samotného ART podle dřívějšího předpisu (skupina ART).
Při zahájení a po 6 týdnech terapie se u všech pacientů zkoušelo virové zatížení, počty lymfocytů CD4 a CD8 a CD4/CD8 imunoregulační index. Pro detekci kopií HIV-1 RNA v krevní plazmě byla použita souprava COBAS AMPLICOR HIV-1 MONITOR (verze1,5 pro atomatický analyzátor PCR COBAS AMPLICOR, Roche, Switzerland). Fenotypování lymfocytů cirkulujících v periferní krvi bylo provedeno průtokovým cytofluorometrem FACSCount (Becton Dickinson, USA) za pomoci soupravy FACSCount Reagent Kit obsahující FITC PE fluorochromem značených protilátek proti CD3, CD4, CD8.
Údaj o virové zátěži (počet kopií HCV RNA) se uvádí v tabulce 15 jako medián (Me), stejně jako rozpětí mezi prvním a třetím kvartilem [Q1-Q3]. Výsledky výzkumu prokázaly, že šestiměsíční léčba ULD anti-IFN-γ + anti-CD4 snížila počet RNA HIV-1 kopií u 58 % pacientů skupiny, jež se léčila poprvé (7 osob z 12 podskupiny 1A), přičemž průměrný pokles virové zátěže byl 16,9 %. Kombinace ULD anti-IFN-γ + antiCD4 a ART vykázala srovnatelnou účinnost, počet kopií HIV-1 RNA poklesl u 62 pacientů (u 8 z 13 v podskupině 1B) a průměrná virová zátěž klesla od zahájení výkumu o 18,2 %. Podobné výsledky byly získány u pacientů, kteří brali ULD antiIFN-y + anti-CD4 + anti-His: protivirová aktivita byla zjištěna u 55 % pacientů nakažených HIV, kteří ještě nebyli léčeni (u 6 z 11 osob podskupiny 2A), a u 67 % pacientů kteří přijali kombinaci ULD anti-IFN-γ + anti-CD4 + anti-His a ART (u 8 z 12 osob v podskupině 2B); pokles průměrné virové zátěže byl 17,3 % a 18,9 %. Antiretrovirová aktivita pozorovaná u prvních dvou skupin byla o něco vyšší ve srovnání s výsledky léčby u kontrolní skupiny. Monoterapie ULD anti-IFN-γ snížila během 6 měsíců počet kopií HIV-1 RNA u 36 pacientů léčených poprvé (u 4 z 11 osob v podskupině 3A), přičemž průměrný pokles virové zátěže byl 9,5 %. Kombinace ULD anti-IFN-γ a ART zlepšila účinnost terapie: pokles virové zátěže byl zaznamenán u 50 % pacientů (u 8 z 16 v podskupině 3B), přičemž byl průměrný pokles virové zátěže 14,2 %. U pacientů, kteří dostávali jen ART (skupina č. 4) byl detekován pokles virové zátěže u 32 % pacientů (u 7 z 22 pacientů) a průměrný pokles virové zátěže byl 13,3 %.
Vyhodnocení subpopulace cirkulujícících lymfocytů během Výzkumu (tabulka 16) zjistilo výraznější vzrůst počtu lymfocytů CD4 ve srovnání s kontrolní skupinou po šestitýdenní terapii ULD anti-IFN-γ + anti-CD4, ULD anti-IFN-γ + apti-CD4 + anti-His a ULD anti-IFN-γ jako monoterapii při léčbě dříve neléčených pacientů (skupiny 1A, 2A a 3A) nebo v kombinaci s ART (podskupiny 1B, 2B a 3B). Počet CD8 lymfocytů po šestitýdenní terapii (bez kombinace nebo v kombinaci s ART) zůst&l u všech studovaných skupin nezměněný. Pozitivní dynamika v počtu CD4 lymfocytů v průběhu léčby měla za následek zvětšení imunoregulačního indexu CD4/CD8, což bylo nejvýraznější v poskupinách pacientů, kteří dostávali ULD anti-IFN-γ + anti-CD4 a ULD anti-IFN-γ + anti-CD4 + anti-His (bez ART nebo v kombinaci s ART, to znamená ve skupinách 1 a 2) a ULD anti-IFN-γ + ART (podskupina 3B).
Během výzkumu nebyly zaznamenány žádné nežádoucí příhody způsobené léky, což svědčí o tom, že jsou dobře snášeny. Bezpečnost léčby potvrdila neexistence patologických změn při analýze krve a moči včetně známek ledvinové a jaterní insuficience.
Tento výzkum tedy ukázal antiretrovirovou aktivitu farmaceutických kompozic s ULD anti-IFN-γ + anti-CD4 a ULD anti-IFN-γ + anti-CD4 + anti-His, pravděpodobně zprostředkovanou změnou funkční aktivity receptorů CD4, jež blokuje pronikání HIV do buněk a také potlačuje replikaci HIV v buňce účinkem aktivace transkripce mRNA antivirových proteinů. Bylo ukázáno, že pokles virové zátěže po šestitýdenní aplikaci ULD anti-IFN-γ + anti-CD4 a ULD anti-IFN-γ + anti-CD4 + anti-Hisi v dávce 1 tableta denně byl zřetelnější než šestitýdení léčba ULD anti-IFN-γ v téže (lávce nebo u pacientů, kteří pokračovali v braní samotného ARTpodle dřívějšíhp předpisu. Kombinace léku (léčby) ULD anti-IFN-γ + anti-CD4, ULD anti-IFN-γ + anti-CD4 + antiHis nebo ULD anti-IFN-γ s ART poněkud zvýšila antivirovou aktivitu ART, což se po 6 týdnech projevilo u větší části pacientů jako pokles průměrné virové zátěže.
Byl demonstrován vliv ULD anti-IFN-γ + anti-CD4 a ULD anti-IFN-γ + anti-CD4 + anti-His na poměr lymfocytů CD4/CD8 u pacientů infikovaných HIV (v důsledku poklesu počtu buněk CD4), který byl nejzřetelnější u kombinací s ART. Při uvážení současného poklesu virové zátěže u pacientů přijímajících ULD anjti-IFN-γ + anti-CD4 a ULD anti-IFN-γ + anti-CD4 + anti-His lze předpokládat, že vzrůst počtu buněk CD4 je spojen s nárůstem populace na úkor zdravých (neinfikovaných) buněk. Kombinace ART s ULD anti-IFN-γ + anti-CD4, ULD anti-IFN-γ + anti-CD4 + anti-His nebo ULD anti-IFN-γ efektivněji zlepšuje imunoregulační index CD4/CD8 než samotný ART.
Pozorovaná antiretrovirová aktivita farmaceutických komposic obsahujících ULD anti-IFN-γ + anti-CD4 a ULD anti-IFN-γ + anti-CD4 + anti-His jumožňuje použít je pro léčbu a profylaxi infekce HIV při léčbě jak dosud neléčených pacientů infikovaných HIV, tak i pacientů léčených ART.
Tabulka 15
Dynamika virové zátěže v závislosti na terapii
Virová zátěž, kopie/ml | Průměrný pokles virové zátěže, % | |
ULD anti-IFN-γ + anti-CD4 (Me [Q1-Q3]) | ||
Počáteční stav | 5769 [368-62584] | 16,9 |
Po 6 týdnech léčby | 4575 [337-58526] | |
ART a ULD anti-IFN-γ + anti-CD4 (Me [Q1-Q3]) | ||
Počáteční stav | 5238 [385-59695] | 18,2 |
Po 6 týdnech léčby | 4408 [320-50197] | |
ULD anti-IFN-γ + anti-CD4 + anti-H (Me [Q1-Q3]) | ||
Počáteční stav | 5638 [385-61742] | 17., |
Po 6 týdnech léčby | 4754 [278-57426] | |
ART a ULD anti-IFN-γ + anti-CD4 + anti-H (Me [Q1-Q3]) | ||
Počáteční stav | 5189 [350-59798] | 18,9 |
Po 6 týdnech léčby | 46108 [269-47987] | |
ULD anti-IFN-γ (Me [Q1-Q3]) | ||
Počáteční stav | 5813 [150-33356] | 9,5 |
Po 6 týdnech léčby | 5786 [150-38359] | |
ART a ULD anti-IFN-γ (Me [Q1-Q3]) |
Počáteční stav | 4680 [274-9838] | 14,2 |
Po 6 týdnech léčby | 4652 [272-8874] | |
ART (Me [Q1-Q3]) | ||
Počáteční stav | 5547 [385-58996] | 13,3 |
Po 6 týdnech léčby | 5308 [338-57709] |
Tabulka 16
Koncentrace subpopulace cirkulujících lymfocytů u pacientů studované skupiny
Etapa pozorování | CD4. cl/mcl (M ±SE) | CD41CD8 (M 1SE) |
ULD anti-IFN-γ + anti-CD4 (n=12) | ||
Počáteční stav | 516133 | 0,4610,09 |
Po 6 týdnech léčby | 712124 | 0,5810,07* |
ART a ULD anti-IFN-γ + anti-CD4 (n=13) | ||
Počáteční stav | 499141 | 0,5010,08 |
Po 6 týdnech léčby | 728129 | 0,6010,06* |
ULD anti-IFN-γ + anti-CD4 + anti-H (n=11) | ||
Počáteční stav | 509145 | 0,4910,06 |
Po 6 týdnech léčby | 706127 | 0,5810,08* |
ART a ULD anti-IFN-γ + anti-CD4 + anti-H (n=12) | ||
Počáteční stav | 521137 | 0,4810,09 |
Po 6 týdnech léčby | 734122 | 0,6210,10* |
ULD anti-IFN-γ (n=11) | ||
Počáteční stav | 513198 | 0,3810,19 |
Po 6 týdnech léčby | 563 i 26 | 0,4410,12 |
ART a ULD anti-IFN-γ (n=16) | ||
Zpočátku | 491 ± 49 | 0,55 ± 0,06 |
Po 6 týdnech léčby | 623 ± 45 | 0,67 ± 0,05* |
ART (n=22) | ||
Zpočátku | 510 ±29 | 0,44 ± 0,06 |
Po 6 týdnech léčby | 595 ± 35 | 0,50 ±0,12 |
• rozdíl proti počátečnímu stavu je významný při p<0,05
PŘÍKLAD 12
Pro výzkum aktivity farmaceutických kompozic pro léčbu pacientů skupiny č. 1 byly použity tablety hmotnosti 300 mg impregnované farmaceutickou kompozicí obsahující vodně-alkoholické roztoky (6 mg/tableta) aktivovaných a potencovaných forem králičích polyklonálních afinitně přečištěných protilátek proti lidskému gamainterferonu (anti-IFN-γ) a CD4 (anti-CD4) v ultranízkých dávkách (ULD) získaných ultrazředěním počátečního matečného roztoku 10012,10030,10050 krát, což odpovídá směsi centesimálních homeopatických zředění C12, C30, C50; pro léčbu pacientů skupiny č. 2 byly použity tablety hmotnosti 300 mg impregnované farmaceutickou kompozicí obsahující vodně-alkoholické roztoky (6 mg/tableta) aktivovaných a potencovaných forem králičích polyklonálních afinitně přečištěných protilátek proti lidskému gama-interferonu (anti-IFN-γ) a CD4 (anti-CD4) a histaminu (anti-His) v ultranízkých dávkách (ULD) získaných ultrazředěním počátečního matečného roztoku 10012,10030, 10050 krát, což odpovídá směsi centesimálních homeopatických zředění C12, C30, C50; pro léčbu pacientů skupiny č. 3 byly použity tablety hmotnosti 300 mg impregnované farmaceutickou kompozicí obsahující vodně-alkoholické roztoky (3mg/tableta) aktivovaných a potencovaných forem králičích polyklonálních afinitně přečištěných protilátek proti lidskému gama-interferonu (anti-IFN-y) v ultranízkých dávkách (ULD) získaných ultrazředěním počátečního matečného roztoku 10012,10030,10050 krát, což odpovídá směsi centesimálních homeopatických zředění C12, C30, C50,
Hodnocení účinnosti tří farmaceutických kompozic obsahujících ULD anti- IFN-γ + anti-CD4, ULD anti-IFN-γ + anti-CD4 + anti-His a ULD anti-IFN-γ při léčbě chronické virové hepatitidy C bylo provedeno v průběhu komparativního paralelního skupinového výzkumu. Zahrnul osmnáct pacientů,(14 mužů a 4 ženy) ve věku 27 až 52 let. Diagnóza hepatitidy C byla potvrzena sérovými márkery (anti-HCV a HCV RNA). Všichni pacienti přijatí do tohoto výzkumu měli druhou nebo třetí genotypovou HCV, mírný a slabě progresivní průběh chronické hepatitidy C s nízkou aktivitou choroby (sérové aminotransferázy < trojnásobek normálních hodnot nebo <100 U/l); žádný z pacientů předtím nepodstoupil specifickou antivirovou terapii. Do zkoumané skupiny nebyli přijati pacienti s pozitivními nálezy serologické analýzy zjišťující HIV, RW, anti-HCA, HBsAg nebo HBcorAg Ab, s cirhózou, závažnými průvodními chorobami ve zhoršujícím se stavu, talasémií nebo jinou hemoglobinopatií, závislostí na alkoholu a/nebo na lécích nebo na drogách, pacienti po transplantaci orgánů trvale odkázaní na imunosupresivní léky a také těhotné a kojící ženy. Pacienti rozdělení do tří studovaných skupin dostávali farmaceutické kompozice v následujícím režimu: 1 tableta třikrát denně po dobu 24 týdnů: pacienti první skupiny (n=5) - ULD anti-IFNY+anti-CD4; pacienti 2. skupiny (n=4) - ULD anti- IFN-γ + anti-CD4 + anti-His; Pacienti třetí skupiny (n=4) - ULD anti-IFN-γ. Kontrolní skupina tvořená 5 pacienty s trvalou virémií a trvale normálními hladinami aminotransferázy (<20 U/l) neměli žádnou specifickou terapii. Během výzkumu se prováděly pravidelné prohlídky, kontrola virové zátěže a laboratorní testy, a zaznamenávala se souběžná terapie stejně jako nežádoucí negativní příhody. Účinnost terapie byla hodnocena 24. týdne podle virové zátěže s HCV RNA a aktivity alanin-aminotransferázy (ALT).
Údaj o virové zátěži (počet kopií HCV RNA) uvedený v tabulce jako medián (Me) a rozpětí mezí prvním a třetím kvartilem [Q1-Q3] dokazuje kladný účinek terapie u pacientů skupin 1 až 3 na konci 24-týdenní léčby. Příjem farmaceutické kompozice ULD anti-IFN-γ + anti-CD4 způsobil snížení počtu kopií HCV RNA u 2 z 5 osob v první skupině a průměrné změnšení virové zátěže bylo 75 %. Podobné výsledky byly získány u pacientů, jimž se podávala farmaceutická kompozice ULD anti-IFN-γ + anti-CD4 + anti-His: její antivirová účinnost byla zaznamenána u všech pacientů (čtyř ze čtyř subjektů ve skupině 2) a průměrné snížení virové zátěže bylo 70 %. Kromě toho bylo u dvou pacientů pozorováno úplné vymizení virů do ukončení terapie (jednoho ze skupiny 1 a jednoho ze skupiny 2). Antivirová aktivita monokomponentní ULD anti-IFN-γ byla o něco nižší a snížení počtu kopií HCV RNA bylo zjištěno u 3 ze 4 pacientů 3. skupiny, přičemž průměrné snížení virové zátěže bylo 55 %. V kontrolní skupině nebyly pozorovány žádné pozitivní změny ve virové zátěži.
Antivirová aktivita zkoumaných farmaceutických kompozic byla provázena pozitivními změnami hladiny ALT zaznamenanými u pacientů ve skupinách 1 až 3 na konci 24týdenní terapie. Normalizace hladiny ALT byla shledána u 2 pacientů skupiny léčených ULD anti-IFN-γ + anti-CD4, u 1 pacienta ve skupině ULD anti- IFN-γ + antiCD4 + anti-His a u 1 pacienta ve skupině ULD anti- IFN-γ. U jednoho pacienta v kontrolní skupině překročila hladina ALT horní hranici normy (>20 U/l) v důsledku vzrůstu virové zátěže na konci 24týdenní doby výzkumu.
Během výzkumu nebyly zaznamenány nepříznivé události, což dokládá, že jsou dobře tolerovány. Bezpečnost léčby potvrdila neexistence patologických změn při analýze krve a moči včetně márkerů ledvinové a jaterní nedostatečnosti.
Takto byl proveden výzkum účinnosti a bezpečnosti farmaceutických kompozic obsahujících ULD anti-IFN-γ + anti-CD4, ULD anti-IFN-Y+anti-CD4+anti-His a ULD anti-IFN-γ u pacientů s chronickou hepatitidou C. Nejsilnější antivirový efekt byl zaznamenán u ULD anti-IFN-γ + anti-CD4, ULD anti-IFN-Y+anti-CD4+anti-His a ULD anti-IFN-γ, který byl potvrzen pozitivní dynamikou virové zátěže a vymizením virů na konci 24týdenní léčby u dvou pacientů. Antivirová účinnost ULD anti-IFN-γ + antiCD4, ULD anti-IFN-Y+anti-CD4+anti-His a ULD anti-IFN-γ byla provázena snížením aktivity chronické hepatitidy C, což bylo potvrzeno snížením a dokonce normalizací hladiny ALT u některých pacientů na konci 24týdenní léčby.
Tabulka 17
Dynamika virové zátěže u studovaých skupin
HCV RNA, kopie/ml | Průměrné snížení virové zátěže, % | |
ULD anti-IFN-Y+anti-CD4 (Me [Q1-Q3]) | ||
Počáteční stav | 66200 [450-181400] | 75 |
Po 24 týdnech léčby | 12500 [50-30560] | |
ULD anti-IFN-Y+anti-CD4+anti-His (Me [Q1-Q3]) | ||
Počáteční stav | 58900 [600-124500] | 70 |
Po 24 týdnech léčby | 15600 [50-45700] | |
ULD anti-IFN-γ (Me [Q1-Q3]) | ||
Počáteční stav | 84700 [350-172800] | 55 |
Po 24 týdnech léčby | 22400 [150-58500] | |
Kontrolní skupina (Me [Q1-Q3]) | ||
Počáteční stav | 79500 [300-155600] | — |
Po 24 týdnech léčby | 87900 [450-164300] |
Claims (30)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Kombinovaná farmaceutická kompozice, vyznačující se tím, že zahrnuje a) aktivovanou a potencovanou formu protilátky proti alespoň jednomu cytokinů a b) aktivovanou a potencovanou formu protilátky proti alespoň jednomu receptoru.
- 2. Kombinovaná farmaceutická kompozice podle nároku 1, vyznačující se tím, že aktivovaná a potencovaná forma protilátky proti alespoň jednomu cytokinů je připravena postupným sériovým centesimálním zřeďováním, jež je při každém zředění spojeno s třepáním.
- 3. Kombinovaná farmaceutická kompozice podle nároku 1, vyznačující se tím, že aktivovaná a potencovaná forma protilátky proti alespoň jednomu receptoru je připravena postupným sériovým centesimálním zřeďováním, jež je při každém zředění spojeno s třepáním.
- 4. Kombinovaná farmaceutická kompozice podle nároku 1, vyznačující se tím, že aktivovaná a potencovaná forma protilátky proti alespoň jednomu cytokinů je ve formě směsi homeopatických zředění C12, C30, a C50, impregnované na pevný nosič, a aktivovaná a potencovaná forma protilátky proti alespoň jednomu receptoru je ve formě směsi homeopatických zředění C12, C30 a C50, impregnované na uvedený pevný nosič.
- 5. Kombinovaná farmaceutická kompozice podle nároku 1, vyznačující se tí m, že aktivovaná a potencovaná forma protilátky proti alespoň jednomu cytokinů je ve formě směsi homeopatických zředění C12, C30, a C200, impregnované na pevný nosič, a aktivovaná a potencovaná forma protilátky proti alespoň jednomu receptoru je ve formě směsi homeopatických zředění C12, C30 a C200 impregnované na uvedený pevný nosič.
- 6. Kombinovaná farmaceutická kompozice podle nároku 5, vyznačující se tí m, že uvedený nosič je impregnován směsí uvedených zředění.
- 7. Kombinovaná farmaceutická kompozice podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedená protilátka je monoklonální, polyklonální nebo přírodní protilátka.
- 8. Kombinovaná farmaceutická kompozice podle nároku 7,vyznačující se tí m, že uvedená protilátka je polyklonální protilátka.
- 9. Kombinovaná farmaceutická kompozice podle nároku 1, vyznačující se tí m, že uvedený alespoň jeden cytokin je gama-interferon a že uvedený alespoň jeden receptor je receptor CD4.
- 10. Kombinovaná farmaceutická kompozice podle nároku 9, vyznačující se tím, že dále obsahuje aktivovanou a potencovanou formu protilátky proti histaminu.
- 11. Kombinovaná farmaceutická kompozice podle nároku 1,vyznačující se tí m, že uvedený alespoň jeden cytokin je gama-interferon a alfa-interferon a uvedený alespoň jeden receptor je CD4 receptor a CD8 receptor.
- 12. Kombinovaná farmaceutická kompozice podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedený alespoň jeden cytokin je alfa-interferon a uvedený alespoň jeden receptor je receptor CD4.
- 13. Kombinovaná farmaceutická kompozice podle nároku 1,vyznačující se tím, že uvedený alespoň jeden cytokin je faktor alfa nádorové nekrózy a uvedený alespoň jeden receptor je receptor CD4.
- 14. Způsob léčby infekčních chorob, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání pacientovi, který to potřebuje, v podstatě současně a) aktivované a potencované formy protilátky proti alespoň jednomu cytokinu a b) aktivované a potencované formy protilátky proti alespoň jednomu receptoru.
- 15. Způsob podle nároku 14, vyznačující se tím, že se uvedené aktivované a potencované formy protilátek podávají ve formě kombinované farmaceutické kompozice.
- 16. Způsob podle nároku 14, vyznačující se tím, že uvedená infekční choroba je virová infekční choroba.
- 17. Způsob podle nároku 16, vyznačující se tím, že uvedená virová infekční choroba je choroba nebo stav způsobený HIV nebo spojený s HIV.
- 18. Způsob podle nároku 17, vyznačující se tím, že uvedená choroba a stav způsobený HIV nebo spojený s HIV je AIDS.
- 19. Způsob podle nároku 16, vyznačující se tím, že uvedená virová infekční choroba je virová hepatitida.
- 20. Způsob podle nároku 19, vyznačující se tím, že uvedená virová hepatitida je chronická hepatitida C..
- 21. Způsob podle nároku 16, vyznačuj ící se tím, že uvedená virová infekční choroba je chřipka.ft
- 22. Způsob podle nároku 16, vyznačující se tím, že uvedená virová infekční choroba je akutní infekce dýchacího traktu.
- 23. Způsob podle nároku 14, vyznačující se tím, že uvedená infekční choroba je bakteriální infekční choroba.
- 24. Způsob podle nároku 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22 nebo 23, vyznačující se tím, ž e uvedenému pacientovi se podává farmaceutická kompozice podle nároku 9.
- 25. Způsob podle nároku 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22 nebo 23, vyznačující se tím, že uvedenému pacientovi se podává farmaceutická kompozice podle nároku 10.
- 26. Způsob podle nároku 14, 15, 16,17,18, 19, 20, 21, 22 nebo 23, vyznačující se tím, že uvedenému pacientovi se podává farmaceutická kompozice podle nároku 11.
- 27. Způsob podle nároku 14, 15, 16, 17,18, 19, 20, 21, 22 nebo 23, vyznačující se tím, že uvedenému pacientovi se podává farmaceutická kompozice podle nároku 12.
- 28. Způsob podle nároku 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22 nebo 23, vyznačující se tím, ž e uvedenému pacientovi se podává farmaceutická kompozice podle nároku 13.
- 29. Způsob podle nároku 15, vyznačující se tím, že se kombinovaná farmaceutická kompozice podává v jedné až třech jednotkových dávkovačích formách, přičemž každá z dávkovačích forem se podává jednou až šestkrát denně.
- 30. Farmaceutická kompozice pro použití při léčbě pacienta, který trpí infekční chorobou, vyznačující se tím, že kompozice je připravena vytvořením a) aktivované a potencované formy protilátky proti alespoň jednomu cytokinu a b) aktivované a potencované formy protilátky proti alespoň jednomu receptoru, přičemž každá z nich je připravena sériovým opakovaným zřeďováním a vícenásobným třepáním každého vytvořeného roztoku v souladu s homeopatickou technologií a potom buď spojením potencovaných roztoků jejich smícháním nebo alternativně impregnováním hmoty nosiče uvedeným spojeným roztokem nebp odděleně jednotlivými roztoky.
Applications Claiming Priority (8)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2010133052/15A RU2500422C2 (ru) | 2010-08-06 | 2010-08-06 | Комплексное лекарственное средство для лечения вирусных инфекций и способ лечения вирусных инфекций |
RU2010133041/15A RU2010133041A (ru) | 2010-08-06 | 2010-08-06 | Комплексное лекарственное средство и способ профилактики инфицирования вич, профилактики и лечения заболеваний, вызываемых вич или ассоциированных с вич, в том числе спида |
RU2010133043/15A RU2519862C2 (ru) | 2010-08-06 | 2010-08-06 | Комплексное лекарственное средство и способ профилактики и лечения инфекционных вирусных заболеваний |
RU2010133047/15A RU2517085C2 (ru) | 2010-08-06 | 2010-08-06 | Комплексное лекарственное средство и способ профилактики инфицирования вич, профилактики и лечения заболеваний, вызываемых вич или ассоциированных с вич, в том числе спида |
RU2010133053/15A RU2521392C2 (ru) | 2010-08-06 | 2010-08-06 | Комплексное лекарственное средство для лечения вирусных заболеваний и способ лечения вирусных заболеваний |
RU2010133051/15A RU2505312C2 (ru) | 2010-08-06 | 2010-08-06 | Комплексное лекарственное средство для лечения гриппа различных типов |
RU2010133050/15A RU2502521C2 (ru) | 2010-08-06 | 2010-08-06 | Комплексное лекарственное средство для лечения бактериальных инфекций и способ лечения бактериальных инфекций |
RU2011127226/15A RU2577299C2 (ru) | 2011-07-04 | 2011-07-04 | Способ лечения инфекционных заболеваний и комплексное лекарственное средство для лечения инфекционных заболеваний |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CZ2013159A3 true CZ2013159A3 (cs) | 2013-06-12 |
Family
ID=45507292
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CZ20130159A CZ2013159A3 (cs) | 2010-08-06 | 2011-07-15 | Kombinovaná farmaceutická kompozice a zpusoby lécby a prevence infekcních chorob |
Country Status (19)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US20130045237A1 (cs) |
EP (1) | EP2601219A2 (cs) |
JP (3) | JP2013537532A (cs) |
KR (1) | KR20140012021A (cs) |
CN (1) | CN103154030A (cs) |
AU (1) | AU2011287292B2 (cs) |
BR (1) | BR112013002296A2 (cs) |
CZ (1) | CZ2013159A3 (cs) |
DE (1) | DE112011102640T5 (cs) |
EA (1) | EA030513B1 (cs) |
ES (1) | ES2510940R1 (cs) |
FR (1) | FR2963563A1 (cs) |
GB (2) | GB2548034B (cs) |
IL (1) | IL224545A (cs) |
MX (1) | MX368313B (cs) |
NZ (1) | NZ606993A (cs) |
PE (1) | PE20131185A1 (cs) |
SG (2) | SG187732A1 (cs) |
WO (1) | WO2012017328A2 (cs) |
Families Citing this family (16)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2181297C2 (ru) | 2000-06-20 | 2002-04-20 | Эпштейн Олег Ильич | Способ лечения патологического синдрома и лекарственное средство |
UA76638C2 (en) * | 2002-08-02 | 2006-08-15 | Oleh Illich Epshtein | Homeopathic medication based on anti-interferon antibodies and method for treating a pathological syndrome associated with interferon |
RU2309732C1 (ru) * | 2006-03-13 | 2007-11-10 | Олег Ильич Эпштейн | Спрессованная твердая оральная форма лекарственного препарата и способ получения твердой оральной формы лекарственного препарата |
CA2804967A1 (en) | 2010-07-15 | 2012-02-09 | Oleg Iliich Epshtein | Combination pharmaceutical composition and methods of treating diseases or conditions associated with neurodegenerative diseases |
US9308275B2 (en) | 2010-07-15 | 2016-04-12 | Oleg Iliich Epshtein | Method of increasing the effect of an activated-potentiated form of an antibody |
CA2805978C (en) | 2010-07-21 | 2016-06-28 | Oleg Iliich Epshtein | Combination pharmaceutical composition and methods of treating diseases or conditions associated with respiratory disease or condition |
US8987206B2 (en) | 2010-07-21 | 2015-03-24 | Oleg Iliich Epshtein | Method of treating attention deficit hyperactivity disorder |
RU2535033C2 (ru) * | 2010-08-06 | 2014-12-10 | Олег Ильич Эпштейн | Лекарственное средство и способ профилактики инфицирования вич, профилактики и лечения заболеваний, вызываемых вич или ассоциированных с вич, в том числе спида |
US20130045237A1 (en) * | 2010-08-06 | 2013-02-21 | Oleg Iliich Epshtein | Combination pharmaceutical composition and methods of treating and preventing the infectious diseases |
RU2013111961A (ru) | 2013-03-18 | 2014-09-27 | Олег Ильич Эпштейн | Способ определения выраженности модифицирующей активности, ассоциированной с носителем |
RU2013111962A (ru) | 2013-03-18 | 2014-09-27 | Олег Ильич Эпштейн | Способ определения выраженности модифицирующей активности, ассоциированной с носителем |
RU2603623C2 (ru) * | 2014-06-06 | 2016-11-27 | Олег Ильич Эпштейн | Ветеринарная композиция и способ улучшения жизнеспособности животных, стимуляции прироста живой массы млекопитающих и птиц, повышения эффективности иммунизации, профилактики и/или лечения инфекционных заболеваний (варианты) |
BR112022001472A2 (pt) * | 2019-08-29 | 2022-03-22 | Iliich Epshtein Oleg | Medicamentos e métodos para curar doenças infecciosas |
DE102020007979A1 (de) | 2020-12-29 | 2022-06-30 | Charité Universitätsmedizin Institut für Mikrobiologie und Infektionsimmunologie | Zusammensetzung zur Behandlung von lnfektionen mit Coronaviren |
WO2023230249A1 (en) * | 2022-05-25 | 2023-11-30 | Baruch S. Blumberg Institute | Novel hepatoselective polyadenylating polymerases inhibitors and their method of use |
WO2023230566A2 (en) * | 2022-05-25 | 2023-11-30 | Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc | Compositions and methods for modulating cytokines |
Family Cites Families (18)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4311897A (en) | 1979-08-28 | 1982-01-19 | Union Carbide Corporation | Plasma arc torch and nozzle assembly |
RU2181297C2 (ru) * | 2000-06-20 | 2002-04-20 | Эпштейн Олег Ильич | Способ лечения патологического синдрома и лекарственное средство |
RU2192888C1 (ru) | 2001-02-15 | 2002-11-20 | Эпштейн Олег Ильич | Лекарственное средство и способ лечения патологического синдрома |
RU2001134982A (ru) * | 2001-12-26 | 2004-02-20 | Олег Ильич Эпштейн | Способ коррекции иммунного ответа и лекарственное средство |
UA76640C2 (uk) * | 2002-08-02 | 2006-08-15 | Олєг Ільіч Епштєйн | Спосіб корекції патологічних імунних реакцій та гомеопатичний лікарський засіб |
UA76641C2 (uk) | 2002-08-02 | 2006-08-15 | Олєг Ільіч Епштєйн | Гомеопатичний лікарський засіб та спосіб лікування захворювань передміхурової залози |
UA76638C2 (en) * | 2002-08-02 | 2006-08-15 | Oleh Illich Epshtein | Homeopathic medication based on anti-interferon antibodies and method for treating a pathological syndrome associated with interferon |
CA2518965C (en) | 2003-03-14 | 2018-10-30 | Nutrition Research Inc. | Homeopathic formulations useful for treating pain and/or inflammmation |
RU2309732C1 (ru) * | 2006-03-13 | 2007-11-10 | Олег Ильич Эпштейн | Спрессованная твердая оральная форма лекарственного препарата и способ получения твердой оральной формы лекарственного препарата |
AU2007261782A1 (en) * | 2006-06-06 | 2007-12-27 | Oleg Iliich Epshtein | Medicinal agent for treating fatness, diabetes, and diseases associated with impaired glucose tolerance |
EP2094300B1 (en) * | 2006-12-22 | 2012-12-26 | Rajesh Shah | Medicinal formulation for the treatment for hepatitis c |
RU2332236C1 (ru) * | 2007-02-02 | 2008-08-27 | Олег Ильич Эпштейн | Лекарственное средство для лечения гриппа у птиц |
CZ2013104A3 (cs) * | 2010-07-15 | 2013-05-29 | Iliich Epshtein@Oleg | Farmaceutické prípravky a metody lécby |
CA2804967A1 (en) * | 2010-07-15 | 2012-02-09 | Oleg Iliich Epshtein | Combination pharmaceutical composition and methods of treating diseases or conditions associated with neurodegenerative diseases |
CA2805978C (en) * | 2010-07-21 | 2016-06-28 | Oleg Iliich Epshtein | Combination pharmaceutical composition and methods of treating diseases or conditions associated with respiratory disease or condition |
SG10201505676RA (en) * | 2010-07-21 | 2015-08-28 | Oleg Iliich Epshtein | Combination pharmaceutical compositions and method of treatment of vertigo, kinetosis and vegetative-vascular dystonia |
PE20130815A1 (es) * | 2010-07-21 | 2013-07-18 | Oleg Iliich Epshtein | Una composicion de combinacion farmaceutica y metodos para tratar la diabetes y los trastornos metabolicos |
US20130045237A1 (en) * | 2010-08-06 | 2013-02-21 | Oleg Iliich Epshtein | Combination pharmaceutical composition and methods of treating and preventing the infectious diseases |
-
2011
- 2011-07-15 US US13/135,899 patent/US20130045237A1/en not_active Abandoned
- 2011-07-15 CN CN201180048456XA patent/CN103154030A/zh active Pending
- 2011-07-15 WO PCT/IB2011/002470 patent/WO2012017328A2/en active Application Filing
- 2011-07-15 JP JP2013522318A patent/JP2013537532A/ja active Pending
- 2011-07-15 SG SG2013008974A patent/SG187732A1/en unknown
- 2011-07-15 PE PE2013000216A patent/PE20131185A1/es not_active Application Discontinuation
- 2011-07-15 DE DE112011102640T patent/DE112011102640T5/de not_active Withdrawn
- 2011-07-15 BR BR112013002296A patent/BR112013002296A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2011-07-15 ES ES201390022A patent/ES2510940R1/es active Pending
- 2011-07-15 MX MX2013001451A patent/MX368313B/es active IP Right Grant
- 2011-07-15 EA EA201300135A patent/EA030513B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2011-07-15 AU AU2011287292A patent/AU2011287292B2/en not_active Ceased
- 2011-07-15 KR KR1020137005740A patent/KR20140012021A/ko not_active Application Discontinuation
- 2011-07-15 CZ CZ20130159A patent/CZ2013159A3/cs unknown
- 2011-07-15 NZ NZ606993A patent/NZ606993A/en not_active IP Right Cessation
- 2011-07-15 GB GB1707875.9A patent/GB2548034B/en not_active Expired - Fee Related
- 2011-07-15 FR FR1156483A patent/FR2963563A1/fr not_active Withdrawn
- 2011-07-15 GB GB1303867.4A patent/GB2503066B8/en not_active Expired - Fee Related
- 2011-07-15 EP EP11778688.9A patent/EP2601219A2/en not_active Ceased
- 2011-07-15 SG SG10201403870XA patent/SG10201403870XA/en unknown
-
2013
- 2013-02-03 IL IL224545A patent/IL224545A/en active IP Right Grant
-
2014
- 2014-07-07 US US14/324,575 patent/US20150023972A1/en not_active Abandoned
- 2014-07-08 US US14/325,455 patent/US20150023980A1/en not_active Abandoned
-
2016
- 2016-07-01 JP JP2016131741A patent/JP2016216478A/ja active Pending
-
2018
- 2018-04-26 JP JP2018085391A patent/JP2018135370A/ja not_active Withdrawn
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CZ2013159A3 (cs) | Kombinovaná farmaceutická kompozice a zpusoby lécby a prevence infekcních chorob | |
AU2011286486B9 (en) | Drug and method for the prophylaxis of HIV infection and for the prophylaxis and treatment of diseases caused by or associated with HIV, including aids | |
US20120294899A1 (en) | Pharmaceutical composition and methods of treating and preventing the diseases caused by HIV or associated with HIV | |
US20120263725A1 (en) | Pharmaceutical composition and methods of treating and preventing the diseases caused by HIV or associated with HIV | |
US20120263726A1 (en) | Pharmaceutical composition and method of inhibiting of production or amplifying of elimination of P24 protein | |
RU2577299C2 (ru) | Способ лечения инфекционных заболеваний и комплексное лекарственное средство для лечения инфекционных заболеваний | |
RU2521392C2 (ru) | Комплексное лекарственное средство для лечения вирусных заболеваний и способ лечения вирусных заболеваний | |
RU2500422C2 (ru) | Комплексное лекарственное средство для лечения вирусных инфекций и способ лечения вирусных инфекций | |
RU2595807C2 (ru) | Лекарственное средство для лечения инфекционных заболеваний | |
CA2807529A1 (en) | Combination pharmaceutical composition and methods of treating and preventing the infectious diseases | |
RU2517085C2 (ru) | Комплексное лекарственное средство и способ профилактики инфицирования вич, профилактики и лечения заболеваний, вызываемых вич или ассоциированных с вич, в том числе спида | |
RU2519862C2 (ru) | Комплексное лекарственное средство и способ профилактики и лечения инфекционных вирусных заболеваний | |
RU2523451C2 (ru) | Способ лечения хронической сердечной недостаточности и фармацевтическая композиция для лечения хронической сердечной недостаточности | |
RU2505312C2 (ru) | Комплексное лекарственное средство для лечения гриппа различных типов | |
EA032021B1 (ru) | Фармацевтическая композиция и способ лечения и профилактики заболеваний, вызванных и/или ассоциированных с вич |