FR2760455A1

FR2760455A1 - (-)e-2-(3,4-dichloro-cinnamyl)-1-cyclopropylmethyl- piperidine, son utilite antidiarrheique

Info

Publication number: FR2760455A1
Application number: FR9702713A
Authority: FR
Inventors: Alain Calvet; Maria Chovet; Svein G Dahl; Henry Jacobelli; Pierre Riviere; Vassilia Theodorou
Original assignee: Institut de Recherche Jouveinal
Current assignee: Institut de Recherche Jouveinal
Priority date: 1997-03-05
Filing date: 1997-03-05
Publication date: 1998-09-11
Anticipated expiration: 2017-03-05
Also published as: US20010008897A1; IL130716A; IL130716A0; AU7036798A; BR9808823A; JP2001513802A; ZA981849B; AU749902B2; EP0968187A1; US6440997B2; NZ336575A; CA2277839A1; KR20000075973A; WO1998039296A1; FR2760455B1

Abstract

La (-) E-2- (3, 4-dichloro-cinnamyl) -1-cyclopropylméthyl-pipéridine (I) (CF DESSIN DANS BOPI) son procédé de préparation et ses sels pharmaceutiquement acceptables. Leur utilisation pour la préparation de médicaments antidiarrhéiques. Compositions pharmaceutiques les contenant et leur application aux traitements symptomatiques des diarrhées.

Description

(-)E-2-(3,4-dichloro-cinnamYl)-1-cycloproPolmethyl-piDéridine, son utilité antidiarrhéique - domaine de l'invention
L'invention se rapporte à la (-)E-2-(3 4-dichloro-cinnamyl)-l-cyclopropylméthyl-pipéridine, ses sels, et leur utilité comme médicaments antidiarrhéique chez l'homme.

- état de la technique
Les anomalies sécrétoires du tractus gastro-intestinal sont, avec les troubles de la motricité, responsables de la majorité des diarrhées chroniques ou aiguës qui, en 1990, ont été estimées être la seconde cause de mortalité mondiale, notamment auprès des populations infantiles des pays en cours de développement.

Les diarrhées chroniques sont définies par leur durée persistante généralement au delà de deux semaines. Leurs mécanismes connus et la stratégie diagnostique à tenir devant ces cas a été documentée par M.CERF - Gastroenterol. Clin. Biol, 1992, 16, T 12-T 21. et plus récemment par M.J.G.FARTH1NG - Eur. J. of Gastroenterol. & Hepatol. 1996, 8:157-167.

Les diarrhées aiguës, qui sont en grande majorité d'origine infectieuse, ont été également documentées par M.CERF et M.HAGIAGE Diarrhées aiguës d'origine infectieuse.
Editions Techniques - Encycl. Méd. Chir. (Paris-France), Gastro-entérologie, 9061 A10, 1992, 20p., et H.L.DuPONT - Review article : infectious diarrhoea - Aliment. Pharmacol.

Ther. 1994; 8: p.3-13. Entre autres causes il est développé le rôle important de la toxinogénèse lors de l'infection bactérienne, et, notamment, I'expression du pouvoir pathogène par la synthèse de cytotoxines et d'entérotoxines, thermolabiles ou thermostables, qui sont responsables de diarrhées sécrétoires à composante hydroélectrolytique dont le modèle physiopathologique représentatif est celle du choléra. D'autres agents infectieux sont connus provoquer de telles diarrhées, comme des souches de Salmonella, d'Escherichia coli (E.coli) et de Clostridium difficile (C.difficile).

Ces derniers agents, et plus particulièrement C. difficile sont responsables de diarrhées sécrétoires chroniques et abondantes, souvent d'origine nosocomiale, chez des sujets soumis à une antibiothérapie intensive comme les patients VIH+ . Chez ces derniers, les diarrhées particulièrement invalidantes, sont souvent associées à une malabsorption, et contribuent à établir rapidement un état de dénutrition alarmant.

Pour le traitement des diarrhées sécrétoires, une réhydratation des patients est conseillée et s'avère parfois indispensable. Certains composés ont été montrés actifs (phénothiazine, clonidine, sels de bismuth) mais leur mise en oeuvre délicate à cause de leurs effets secondaires a conduit à renoncer à leur généralisation. Les traitements symptomatiques habituels font appel à des composés adsorbants (smectite), des modulateurs de la flore intestinale et, très largement, à des composés dits "ralentisseurs", qui sont des antidiarrhéiques morphinomimétiques : lopéramide (DCI) et diphénoxylate (DCI), inhibiteurs reconnus de la motilité du tractus et, de ce fait, d'utilité controversée sinon déconseillée pour certaines affections, entre autres raisons par le retard qu'ils apportent à l'évacuation naturelle des germes pathogènes.

Plus récemment il est proposé de traiter ces diarrhées par l'acétorphan (DCI), dipeptide de synthèse inhibiteur d'enképhalinase d'effet antisécrétoire, qui maintient l'effet des enképhalines, neuropeptides endogènes antisécrétoires de la paroi intestinale, qui sont normalement rapidement hydrolysés "in vivo" par les enképhalinases ce qui rend leur effet fugace.

En ce qui concerne la thérapie des diarrhées des patients infectés par VIH il est fréquemment nécessaire d'avoir recours à des méthodes lourdes, qui ne peuvent être pratiquées qu'en milieu hospitalier, comme la réhydratation et la renutrition par voies entérale ou parentérale, auxquelles on associe un traitement symptomatique antidiarrhéique et une antibiothérapie dirigée contre l'éventuel agent pathogène. Les antidiarrhéiques habituels n'ont, le plus souvent, qu'une efficacité relative et épisodique. Depuis peu, pour ces diarrhées et plus généralement les cas réfractaires aux thérapies conventionnelles, on propose des peptides inhibiteurs de la motilité et de la sécrétion gastro intestinale apparentés à la somatostatine (M.CAMILLERI - Digestion 1996;57(suppl 1):90-92 & M.J.G.FARTHlNG - Digestion 1996;57(suppl 1):107-113). Des composés de synthèse substitutifs de ce médiateur endogène sont l'octréotide (DCI) et le valtréotide (DCI), tous deux octapeptides proposés avec certains succès pour le traitement des diarrhées sécrétoires du SIDA. Bien que leur durée d'action soit considérablement plus longue que celle de la somatostatine, ces composés coûteux ne sont actifs que par administrations réitérées par voie parentérale, ce qui conduit à des coûts de traitements prohibitifs et, de par leur mode d'administration, rend leur utilisation pratiquement impossible en milieu extrahospitalier. De plus, leur manque de spécificité qui a été signalé peut entraîner des effets secondaires qui aggravent dramatiquement l'état de dénutrition des patients (troubles de la régulation du métabolisme des hydrocarbones et augmentation de la stéatorrhée).

Par ailleurs certains composés, définis comme ligands spécifiques aux récepteurs sigma ont montré des propriétés antisécrétoires suggérant leur utilité au traitement des diarrhées. Ainsi la (+)-N-cyclopropylméthyl-N-méthyl-diphényl- 1,4-éthyl- 1-butèn-3-yl- -amine ou igmésine (DCI) et son chlorhydrate (code JO 1784) sont révélés entre autres composés au brevet européen publié sous le n 0 362 001. Les composés de cette invention sont définis "in vitroït comme ligands spécifiques aux récepteurs sigma et montrés, "in vivo", chez le rat, inhibiteurs des phénomènes amnésiques provoqués par la scopolamine et également inhibiteurs des ulcères gastro-duodénaux provoqués par l'administration de cystéamine, cette dernière activité étant reliée à leur aptitude à augmenter la sécrétion duodénale alcaline chez l'animal anesthésié. Au sens large, les composés de cette invention sont indiqués utiles au traitement de dysfonctionnements du tractus gastro-intestinal comme les troubles du péristaltisme, de la motricité, les phénomènes de reflux gastro-oesophagiens et gastroduodénaux ainsi que pour les ulcérations gastriques et gastro-duodénales.

Postérieurement à ces travaux, les récepteurs sigma, dont la localisation était connue dans le système nerveux central (SNC) et le système immunitaire, ont été également mis en évidence par F.ROMAN et coll. dans le tractus gastro-intestinal du cobaye (Life Sciences 1988, 42, 2217-2222) puis de l'homme (Gastroenterology 1991, 100, A662).

En relation avec ces localisations, diverses expérimentations, entre autres par J.L. JULIEN et coll. (Neuropharmacology, vol. 30, N" 10, octobre 1991, p. 1119-1124) ont mis en évidence l'action inhibitrice d'igmésine sur l'hypermotilité colique induite par le stress via une libération de corticotropine (CRF) chez l'homme. Par ailleurs P.RIVIERE et cois.

(Gastroenterol. Clin. Biol. 1991, 15 (2B), A70) montrent "in vitro"' qu'igmésine modifie le transport ionique transmembranaire au travers de portions de jéjunum de souris. Cet effet, antagonisé par l'halopéridol, implique la participation de récepteurs sigma.

V.J.CARLISI et coll. (Faseb J. 1992, 6 (4), A1287) étudient "in vivo" chez la souris, sur un modèle expérimental de diarrhée inflammatoire provoquée par PUE2, effet d' igmésine.

A la dose de 30 mg/kg, igmésine, co-administrée par voie i.p avec la PGE2, retarde d'environ 15 minutes l'apparition de la diarrhée, effet inhibiteur antagonisé par l'halopéridol, et qui, recherché par voie per os, s'avère être nul à la dose de 60 mg/kg. Plus récemment G.SHI et coll. (UEGW 1996 - Paris - abstract n"0786) montrent l'effet d'igmésine à la dose de 200mg p.o chez l'homme sur une hypersécrétion intestinale induite par PGE2
D'autre part la demande WO 95/15948 publiée le 15 juin 1995 revendique des dérivés de 2-arylalkényl-azacycloalkanes ligands aux récepteurs Sigma, leur procédé de préparation et leur application en thérapeutique. Les composés, leurs isomères et leurs sels d'addition sont proposés pour la préparation de médicaments antipsychotiques et utiles en gastro-entérologie.

La partie expérimentale décrit à l'exemple 2E la E-2-(3,4-dichloro-cinnamyl)-1- cyclopropylméthyl-pipéridine racémique et son chlorhydrate et, par ailleurs, mentionne sans résultats expérimentaux spécifiques que les composés de la demande sont actifs sur les diarrhées sécrétoires induites chez la souris par le lipopolysaccharide (LPS) de salmonelle, ce qui suggère leur utilité au traitement des diarrhées sécrétoires d'étiologies diverses.

Surmontant les difficultés et incertitudes de l'état de la technique tels qu'exposés, la présente invention propose aux fins de traitement symptomatologique des diarrhées sécrétoires l'utilisation, sous formes médicamenteuses appropriées, d'un composé optiquement actif nouveau, ligand aux récepteurs sigma dont le spectre de propriétés antidiarrhéiques est particulièrement remarquable et le distingue formellement de l'art antérieur.

- sommaire de l'invention
L'invention a pour objet au titre de composé nouveau la (-)E-2-(3,4-dichloro-cinnamyl)-1- cyclopropylméthyl-pipéridine (I) optiquement pure de formule,

<tb> o'
<tb> H
<tb> <SEP> vJ <SEP> H
<tb> <SEP> (I <SEP> Chi <SEP> ral <SEP> ( <SEP> ses sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement acceptables et leur procédé de préparation.

Elle concerne également, à titre de médicaments, la (-)E-2-(3,4-dichloro-cinnamyl)-1- cyclopropylméthyl-pipéridine (I) et ses sels d'addition ainsi que leur utilisation à la préparation de compositions pharmaceutiques destinées au traitement des diarrhées. Elle comprend aussi les compositions médicamenteuses comprenant à titre de principe actif la (-)E-2-(3,4-dichloro-cinnamyl)-1-cyclopropylméthyl-pipéridine (I) et/ou ses sels d'addition en quantité thérapeutiquement efficace.

- description détaillée de l'invention
En premier lieu l'invention vise la (-)E-2-(3 4-dichloro-cinnamyl)- I -cyclopropylméthyl- pipéridine (I) optiquement pure et ses sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement acceptables.

Par pratiquement optiquement pure ,on entend que le produit soit pratiquement exempt de son antipode optique et soit au minimum d'une pureté optique de 95% et de préférence égale ou supérieure à 98% en eutomère lévogyre et ce déterminé par les moyens analytiques appropriés.

Par sels d'addition pharmaceutiquement acceptables, on entend ceux, minéraux ou organiques, y compris leurs éventuels isomères, démontrés atoxiques aux doses thérapeutiques courantes dont, pour exemple, une liste est présentée dans J. Pharm. Sci., 1977, vol. 66, p. 1-19. A titre d'exemples non limitatifs on utilise les acides acétique, benzènesulfonique, camphosulfonique, citrique, éthanesulfonique, bromhydrique, lactique, maléfique malique, méthanesulfonique, mucique, nitrique, pamoique, phosphorique, salicylique, stéarique, succinique, sulfurique, tartrique et l'acide chlorhydrique qui est préféré.

Par un autre aspect, I'invention concerne un procédé de préparation de la (-)E-2-(3,4dichloro-cinnamyl)-l-cyclopropylméthyl-pipéridine (I) optiquement pure qui consiste, soit à dédoubler le composé racémique correspondant décrit à l'exemple 2E de la demande WO 95/15948, soit à en réaliser la synthèse chimique à partir de (+) E-2-(3,4-dichlorocinnamyl)-pipéridine (III) elle même obtenue, selon la demande WO 95/15948, par dédoublement du composé racémique correspondant décrit à la préparation 2E de cette même demande.

Le procédé mettant en oeuvre le dédoublement direct du composé racémique correspondant au produit de l'invention consiste à utiliser un acide optiquement actif pour obtenir avec le composé racémique des sels d'addition diastéréoisomères que l'on sépare par cristallisation et à partir desquels on génère par traitement approprié les deux énantiomères résolus. A cet effet les d'acides couramment utilisés pour la préparation de tels sels sont, pour exemples les plus courant et non limitatifs, les énantiomères de l'a-phénylglycine, l'a-phénylalanine, des acides malique, mandélique, tartrique, de l'acide camphanique ou encore de l'acide a- méthoxy-a-trifluorométhylacétique. Une méthode alternative de dédoublement est la résolution directe du composé racémique par chromatographie liquide de haute performance (CLHP) sur une colonne contenant par exemple pour phase stationnaire un polymère cellulosique greffé par des groupements carbamates comme la phase "CHIRACEL OD" (commercialisation par Daicel) et pratiquant une élution par l'hexane contenant une faible quantité de triéthylamine.

Toutefois, le procédé préféré est une adaptation de la méthodologie décrite à la demande
WO 95/15948 et consiste - à effectuer la résolution de la (+/-) E-2-(3,4-dichloro-cinnamyl)-pipéridine via le sel diastéréoisomère eutomère avec la N-acétyl-L-phénylalanine qui, purifié et traité, conduit à la (+) E-2-(3,4-dichloro-cinnamyl)-pipéridine (III) puis, - à acyler (III) par le chlorure d'acide cyclopropane carboxylique pour obtenir la (+) E-2 (3,4-dichloro-cinnamyl)-1-cyclopropane-carbonyl-pipéridine (II) puis, - à réduire (II) par un hydrure métallique ou organo-métallique pour obtenir la (-)E-2-(3,4dichloro-cinnamyl)- 1 -cyclopropylméthyl-pipéridine (I) de pureté optique conforme et, éventuellement à en effectuer le sel d'addition avec un acide pharmaceutiquement acceptable, comme il est montré au schéma qui suit.

<tb>

<SEP> Ci
<tb> <SEP> y <SEP> Ci
<tb> <SEP> H <SEP> H
<tb> <SEP> Racémique <SEP> a <SEP> que <SEP> t <SEP> + <SEP> I <SEP> - <SEP> )
<tb> RéSOLUTION <SEP> t <SEP> N- <SEP> a <SEP> c <SEP> e <SEP> L <SEP> - <SEP> N-acet <SEP> L-phenylalanine
<tb> <SEP> H
<tb> <SEP> Ci
<tb> <SEP> H <SEP> H
<tb> <SEP> (III) <SEP> Chiral <SEP> + <SEP> )
<tb> <SEP> c <SEP> cycloprop. <SEP> carboxychlor
<tb> <SEP> H
<tb> <SEP> CI
<tb> <SEP> M <SEP> H <SEP> Ch <SEP> | <SEP> r <SEP> rai
<tb> <SEP> reduction <SEP> par <SEP> hydrure
<tb> <SEP> (I)
<tb>
Au stade de la résolution, la récupération et la purification de l'antipode (-) du composé intermédiaire (III) permet selon le même procédé de préparer le distomère du composé de
I'invention à savoir la (+)E-2-(3,4-dichloro-cinnamyl)-1-cyclopropylméthyl-pipéridine synthétisée comme produit de comparaison.

Tel qu'exposé dans ce mémoire le composé objet de l'invention et ses sels présentent des propriétés pharmacologiques remarquables, indicatives de leur utilité, sous forme de médicaments, au traitement des diarrhées sécrétoires chez l'homme.

Bien qu' "in vitro" son affinité aux récepteurs sigma ne soit pas stéréospécifique puis que d'intensité comparable à celle de son antipode, de façon parfaitement inattendue, l'eutomère (-)E-2-(3 , 4-dichloro-cinnamyl)- 1 -cyclopropylméthyl-pipéridine (I) montre "in vivo" dans divers modèles représentatifs des diarrhées sécrétoires toxigéniques une très puissante activité antidiarrhéique stéréosélective.

Ainsi, I'eutomère lévogyre se montre de 4 à plus de 50 fois plus actif par voie per os chez la souris, que son racémique parent sur les modèles de diarrhées sécrétoires provoqués par le lipopolysaccharide de salmonelle (LPS), la toxine thermostable d'E. coli et les toxines A et B de C. difficile, sans pour autant agir sur le transit. Egalement, I'eutomère s'avère près de 50 fois plus actif que le racémique par voie per os, chez le rat, sur l'inhibition de la sécrétion intestinale provoquée par la toxine cholérique.

Chez la souris, par voie per os dans les modèles de diarrhées sécrétoires toxigéniques qui viennent d'être présentés, lorsqu'il est comparé aux composés annoncés ou potentiellement capables de traiter les diarrhées sécrétoires, I'eutomère objet de l'invention s'avère - de 66 à plus de 4000 fois plus actif que le lopéramide, - de 75 à plus de 1400 fois plus actif que l'igmésine, - et, sur la diarrhée provoquée par le LPS, plus de 6000 fois plus actif que l'acétorphan.

Enfin, comparés aux énantiomères décrits à la demande WO 95/15948 et qui s'avèrent également actifs "in vivo" dans la diarrhée provoquée par le LPS, I'étude en fonction de la dose montre, pour les produits de comparaison qui sont la (-)E-2-cinnamyl-1- cyclopropylméthylpyrrolidine (exemple 1.3 du WO) et la (-)E-2-cinnamyl-1- cyclopropylméthylpipéridine (exemple 2A.3 du WO), un effet progressif qui, après un maximum, décroît de façon importante, alors que, différemment, 1' eutomère montre un effet progressif suivi d'un palier auquel cette activité est maintenue, ce qui est démonstratif d'une sécurité d'utilisation médicale et d'un confort thérapeutique contrairement aux produits de comparaison pour lesquels la zone des concentrations actives dite "fenêtre thérapeutique" est étroite et conduit à une posologie délicate à manier et donc à un risque d'inefficacité.

Ces études développées, dans la partie expérimentale, sont probantes de l'activité antidiarrhéique particulièrement intéressante de la (-)E-2-(3 ,4-dichloro-cinnamyl) i cyclopropylméthyl-pipéridine (I) et de ses sels et leur utilité à la préparation de formes pharmaceutiques administrables par les voies appropriées à la pathologie et à l'état du patient. Ainsi les médicaments pourront être administrés par voie parentérale, transdermale ou transmucosale sous des formes classiquement connues. Toutefois les formes pharmaceutiques adaptées aux traitements ambulatoires sont préférées et notamment celles destinées à l'administration par voie orale.

Les compositions pharmaceutiques selon l'invention qui contiennent une quantité thérapeutiquement efficace du composé (I) ou de l'un de ses sels, sont appropriées aux traitements de diarrhées pouvant être banales comme celles du nourrisson ou du voyageur et qu elles soient aiguës ou persistantes et d'étiologies diverses dans lesquelles la composante sécrétoire peut aussi bien résulter d'une diminution d'absorption que d'une hypersécrétion intestinale.

Ainsi, les compositions du composé (I) sont indiquées au traitement des diarrhées d'origines inflammatoires (maladie de Crohn, entérites post-radiothérapiques), ou d'obstructions par hyperplasie lymphoïde ou encore de chimiothérapie anti-cancéreuse.

Egalement ces compositions sont appropriées aux traitements symptomatiques des diarrhées hypersécrétoires comme celles consécutives aux affections tumorales neuroendocriniennes (syndrome de Zolliger- Ellison, VIPome, somatostatinome, syndrome carcinoïde), des infections MIV, virales, bactériennes, ou bien des dysfonctionnements congénitaux ou provoqués par des drogues cathartiques, et lors des hypersécrétions des syndromes inflammatoires intestinaux.

La bonne tolérance au produit montrée dans les essais préliminaires autorise pour des traitements sur deux à trois semaines une posologie journalière de 5 à 50 mg et, exceptionnellement, pour des traitements d'attaque de courte durée jusqu'à 100 mg.

Toutefois la majorité des états diarrhéiques traités sont améliorés par des posologies journalières de 10 à 30 mg, le produit étant administré par voie orale réparties en deux à quatre prises par 24 heures.

Le produit est administré sous des formes pharmaceutiques diverses contenant unitairement de 1,25 à 25 mg du composé (I) ou de l'un de ses sels, notamment de son chlorhydrate, formes qui peuvent être pour exemples non limitatifs des comprimés, dragées, capsules, gélules, poudres, solutions, suspensions, gels.

Pour les formes dites "solides" du composé (I) ou son sel peut représenter de 1 à 90% en poids du total de la forme terminée, les excipients pharmaceutiquement acceptables représentant de 99 à 10%. Pour les formes liquides ou considérées comme telles le principe actif peut représenter de 0,1 à 10% en poids de la forme terminée pour une phase liquide représentant de 99,9 à 90% en poids.

- partie expérimentale Exemple 1: (-)E-2-(3.4-dichloro-cinnamyl!- 1 -cvclopropYlméthyl-pipéridine(I!et son chlorhydrate stade a): (+) E-2-(3,4-dichloro-cinnamyl)-pipéridine (III)
Le composé est préparé par résolution de la (+/-) E-2-(3,4-dichloro-cinnamyl)-pipéridine via le sel diastéréoisomère eutomère obtenu avec la N-acétyl-L-phénylalanine. Dans un ballon de 500ml équipé d'une agitation et d'un réfrigérant en position de reflux on introduit dans 325ml d'acétone, 23,00g (85,lmmol) du composé racémique (préparation E2 de WO 95/15948), 8,82g (42,6mmol) de N-acétyl-L-phénylalanine.

Sous agitation le mélange est chauffé au reflux, on obtient une solution qui est progressivement refroidie puis maintenue à 20"C durant 16 heures sous agitation. Le sel eutomère est filtré (poids sec : 15,50g - F = 134-141"C), le filtrat est alcalinisé et extrait par le dichlorométhane, I'huile résiduelle de concentration (13,60g - 50,2mmol) est de salifiée de la même manière que précédemment dans 200ml d'acétone par 6,25g (30, Immol) de N-acétyl-D-phénylalanine. Le sel distomère est écarté, le filtrat traité par alcalinisation pour obtenir 7,15g (26,5mmol) de produit résiduel que l'on salifie dans 150ml d'acétone par 3,57g (17,2mmol) de N-acétyl-L-phénylalanine. Un second jet de sel eutomère 6,00g
F = 150-152 C est ainsi obtenu après filtration.

Les sels eutomères réunis (21,50g) sont recristallisés pour purification dans 60ml d'eau à l'ébullition; il recristallise à 20"C 4,30g de produit (F = 151-152 C)
L'insoluble est recristallisé dans 60ml d'eau à l'ébullition; il recristallise à 20"C 10,9g de produit (F = 153-154"C). Le sel est mis en suspension dans l'eau, alcalinisé par une solution d'hydroxyde de sodium et extrait par le dichlorométhane. Le solvant est éliminé par distillation sous vide et sur bain-marie. On obtient 6,10g de produit sous forme d'une huile jaune pâle. Rdt = 53% - tl20D = + 9,60 (c = 0,5; dichlorométhane) - CCM & RMN conformes (identiques au produit de départ racémique) stade b) : (+) E-2-(3,4-dichloro-cinnamyl)- 1 -cyclopropane-carbonyl-pipéridine (II)
Dans un réacteur de 250ml équipé d'une agitation et protégé de l'humidité on introduit sous atmosphère d'azote 6,00g (22,2mmol) de (+) E-2-(3,4-dichloro-cinnamyl)-pipéridine (III) obtenue au stade précédent dans 100ml de dichlorométhane déshydraté sur tamis moléculaires. On ajoute à la solution jaune pâle 3,40ml soit 2,47g (24,4 mmol) de triéthylamine et après refroidissement à 10"C on ajoute en 10 minutes 2,20ml soit 2,55g (24,4 mmol) de chlorure de l'acide cyclopropane carboxylique. Le mélange est maintenu sous agitation 30 minutes à 20-25"C puis extrait successivement par 100ml d'ammoniaque à 10%, 100ml d'acide chlorhydrique à 10%, 100ml de solution saturée en bicarbonate de sodium et finalement 100ml d'eau. Après déshydratation sur sulfate de sodium le dichlorométhane est éliminé par distillation sous vide et sur bain marie. On obtient le produit résiduel à l'état pur sous la forme d'une huile jaune. Poids : 7,50g - Rdt = 100% [a]2"D = + 22,60" (c = 0,5; dichlorométhane) - CCM : Rf = 0,90 - 1,00 (dichlorométhane/MeOH ammoniacal à 10% - 90/10 v/v) stade c) : (-!E-2-(3 .4-dichloro-cinnamvl)- 1 -cvclooroPvlméthvl-DiDéridine(I)
Sous atmosphère d'azote, à l'abri de l'humidité et sans dépasser 0 "C on prépare d'une part une suspension de 2,65g (69,5mmol) d'hydrure de lithium aluminium (LAH) dans 40 ml de THF déshydraté sur tamis moléculaire, et d'autre part une solution de 2,99g (22,4m mol) de chlorure d'aluminium dans 40 ml d'éther diéthylique également déshydraté sur tamis.

Après 30 min de contact pour chaque préparation, la suspension LAH/THF est introduite en 10 min à 0 "C dans la solution éthérée de AlCI3, puis on introduit à cette température et en 10 min une solution de 7,40g (21,9mmol) de l'amide (II) obtenu au stade précédent dans 30 ml de THF anhydre. Après 30 min à 0 "C le mélange est porté 10 min au reflux puis refroidi rapidement à 0 "C. On ajoute alors goutte à goutte avec précautions 4,6ml de solution NaOH 15 % (p/v) puis 4,6 ml d'eau. Après 30 min de contact le mélange est filtré sur buchner garni par un lit de terre d'infusoires. Le filtrat est concentré sous vide et sur bain-marie pour obtenir sous forme d'huile jaune la (-)E-2-(3,4-dichloro-cinnamyl)-1- cyclopropylméthyl-pipéridine(I) qui est constatée pure par CCM. Poids 6,10g - Rdt = 85,9%
Poids 3,2 g Rdt : 84,6 % - [a]20D = - 67,2" (MeOH, c = 8,0) - CMM : Rf = 0,65- 0,80 (dichlorométhane/MeOH ammoniacal à 10 % 90/10 v/v).

1H-RMN (CDI3 - TMS) : 6 (ppm) 0,00- 0,20 (m, 2H) , 0,40- 0,70 (m, 2H), 0,70- 1,10 (m, 1H) , 1,10- 1,80 (m, 6H), 2,10- 2,80 (m, 6H) , 2,90- 3,20 (m, 1H) , 6,20- 6,40 (m, 2H)
7,10- 7,50 (m, 3H).

- pureté optique > 98% déterminé par CLPH. Colonne 4,6X1 50 mm "chiracel ODH" 5llm (fournisseur Daicel), élution par hexane à 0,1% de triéthylamine, t" = 30"C.

Chlorhvdrate La base est dissoute dans 60 ml de dichlorométhane, on ajoute 7,0 ml d'éther chlorhydrique 5,5 N, puis élimine les solvants par distillation. Le résidu solide est cristallisé par dissolution dans un mélange isopropanol/éther diéthylique. L'insoluble blanc est filtré, séché sous vide jusqu'à poids constant. Poids 5,40g - Rdt = 68%.

F = 182-183 "C - [a]20D = - 19,20" (c = 0,5; dichlorométhane) - Analyse (Cl8 H24 Cl3 N) % C, H, Cl, N conformes - IR (KBr) 3400, 2900, 2500, 1450, 1130, 1020, 990, 820, 800 cm'
Selon ce procédé, à partir du sel distomère écarté à la résolution au stade a) la récupération et la purification permet de récupérer l'antipode (-) correspondant au composé intermédiaire (III) à partir duquel on prépare le distomère du composé de l'invention à savoir la (+)E-2 (3, 4-dichloro-cinnamyl)- 1 -cyclopropylméthyl-pipéridine synthétisé comme produit de comparaison.

Exemple 2 Etude de toxicité
Chez l'animal l'étude de toxicité a été réalisée chez le souris par voie orale. Aucune mortalité n'est constatée à la plus forte dose étudiée à savoir 300 mg/kg.

Il n'apparaît aucun symptôme toxique aux doses inférieures à 100 mg/kg. A partir de cette dose il est observé des symptômes tels que dépression respiratoire, tremblements, convulsions, état de prostration ou de léthargie qui sont réversibles dans un laps de temps de 24 heures après le traitement.

Exemple 3 : Etude pharmacolonisue "in vitro" affinité aux récepteurs sigma
L'étude de la capacité d'interaction avec les récepteurs sigma de l'eutomère objet de l'invention, de son antipode et de son composé racémique parent, a été réalisée par la détermination de leur fixation, ou binding, sur préparation membranaire de cerveau de rat, préalablement chargée par le ligand marqué spécifique des récepteurs sigma, en l'occurrence le (+)[3H]-SKF 10,047. La technique utilisée est celle décrite par Largent, B.L. et al. dans
J. Pharmacol. Exp. Ther., 1986, vol. 238, p. 739- 748
Elle consiste à incuber, dans des solutions de concentration variable du produit à l'essai, la préparation membranaire préalablement chargée par le (+)[3H]-SKF 10,047. Après filtra tion, on mesure la radioactivité de la solution, qui est représentative du déplacement du ligand par le produit à l'essai.

Les résultats sont exprimés en CI50 du produit à l'essai, qui est la concentration permettant de déplacer le ligand tritié de 50 % de ses sites de liaison dans la préparation membranaire - Résultats Les valeurs obtenues sont présentées au tableau 1 qui suit.

<tb>

<SEP> . <SEP> composé <SEP> à <SEP> l'essai <SEP> affinité <SEP> C <SEP> (CIso <SEP> nM)
<tb> (-)E-2-(3 <SEP> 4-dichloro-cinnamyl)- <SEP> I <SEP> -cyclopropylméthyl- <SEP> 17,9
<tb> pipéridine(I)- <SEP> eutomère
<tb> <SEP> 11
<tb> (+)E-2-(3 <SEP> ,4-dichloro-cinnamyl)- <SEP> 1 <SEP> -cyclopropylméthyl- <SEP> 21,8
<tb> pipéridine <SEP> - <SEP> antipode
<tb> (+/-)E-2-(3 <SEP> ,4-dichloro-cinnamyl)- <SEP> 1 <SEP> -cyclopropylméthyl- <SEP> 44,1
<tb> pipéridine <SEP> - <SEP> racémique
<tb>
table 1 . étude "in vitro" - affinité C
Exemple 4 Etudes pharmacologiques "in vivo" 4-1) - inhibition des diarrhées toxigéniques expérimentales - protocoles a) diarrhée induite par les lipolysaccharides (LPS! de salmonelle . le test est pratiqué sur la souris selon un mode opératoire inspiré de M.J.CANCIO et coll. Gastroenterology Nov.

1992, 103 (5), 1437-43 qui chez le rat induisent par une endotoxine des altérations de transport d'eau et d'électrolytes au niveau du côlon.

- mode opératoire des souris mâles dBA2 (Iffa-credo, les Oncins, France) d'un poids compris entre 20 et 25 g sont placées dans des cages individuelles. Après adaptation des animaux à leur environnement on administre le produit à l'essai par voie orale en solution ou en suspension aqueuse puis une heure après (to de l'essai) on pratique dans la veine de la queue une injection de lipopolysaccharides (LPS) de salmonelle enteriditis (produit
Sigma - réf. L6761) à raison de 15 mg/kg. On place alors un papier filtre prépesé sous chaque cage et détermine le poids de fèces éliminé par les animaux en deux heures (tu20).

L'effet du produit à l'essai est déterminé et est exprimé en pourcentage d'inhibition du poids des fèces à la dose considérée par rapport au poids des fèces d'un lot d'animaux témoins n'ayant reçu dans les mêmes conditions que LPS. Ces résultats permettent de calculer la
DE50 des composés qui est la dose efficace permettant d'inhiber 50% du poids des fèces provoqués par l'administration de l'agent diarrhéique.

b) - diarrhée induite par la toxine thermostable d'E.Coli des souris mâles NMRI (30-35 g) nourries sont pesées et placées dans des cages individuelles préalablement tapissées de papier blanc permettant la visualisation des matières fécales émises. Les fèces sont récupérées aussitôt émises et regroupées par périodes de 30 min, pendant 120 min. Les fèces ainsi regroupées sont pesées avant (poids frais) et après (poids sec) séchage à 120"C pendant 24 h. La quantité d'eau présente dans les fèces est calculée comme la différence (poids frais - poids sec).

La toxine thermostable d'Escherichia Coli (Sigma, E5763) est administrée par voie orale au temps zéro à la dose de 600 U/souris. Les animaux du lot contrôle reçoivent, au temps zéro, une administration orale de sérum physiologique. L'administration des produits à l'essai est effectuée par voie orale une heure avant l'administration des toxines.

Les résultats sont exprimés en quantité d'eau fécale cumulée au temps 120 min. et permettent de calculer la DE50 des composés qui est la dose efficace permettant d'inhiber 50% de poids d'eau des fèces sous l'action du produit à l'essai.

c) - diarrhée induite par les toxines A et B de Clostridium difficile le protocole expérimental, le calcul et l'expression des résultats sont identiques à ceux décrits précédemment. Les toxines A et B de Clostridium difficile sont administrées par voie orale au temps zéro à la dose de 6 ng/souris.

- résultats i) - activité inhibitrice comparée de 1' eutomère (I) lévogyre avec le racémique parent (+/-) chez la souris, administration p.o, DE50 mg/kg (table 2)

<tb> <SEP> diarrhée <SEP> toxine <SEP> eutomère <SEP> (I) <SEP> lévogyre <SEP> racémique <SEP> parent <SEP> (+/-)
<tb> I
<tb> <SEP> LPS <SEP> LPS <SEP> salmonelle <SEP> 0,0056* <SEP> 0,038
<tb> <SEP> E.Coli <SEP> 0,019 <SEP> 0,077
<tb> <SEP> C.difficile <SEP> < 0,001 <SEP> 0,058
<tb> * effet inhibiteur non reversé par la naloxone ii) - activité inhibitrice comparée de l'eutomère (I) lévogyre avec lopéramide (DCI), igmésine (DCI) et acétorphan (DCI) chez la souris, administration p.o, DE50 mg/kg (table

<tb> 3)
<tb> <SEP> |
<tb> <SEP> diarrh. <SEP> tox. <SEP> eutomère <SEP> (I) <SEP> lopéramide <SEP> igmésine <SEP> acétorphan
<tb> <SEP> LPS <SEP> salmon. <SEP> 0,0056 <SEP> 0,37 <SEP> 0,42 <SEP> 34
<tb> <SEP> E.Coli <SEP> 0,019 <SEP> 3,92 <SEP> 1,72 <SEP> N.T
<tb> <SEP> C.difficile <SEP> < <SEP> 0,001 <SEP> 4,27 <SEP> 1,45 <SEP> N.T
<tb>
N.T non testé iii) - diarrhée induite par le LPS de salmonelle, activité inhibitrice comparée de l'eutomère (I) lévogyre avec la (-)E-2-cinnamyl-l -cyclopropylméthylpyrrolidine (ex. 1.3 du WO 95/15948) et la (-)E-2-cinnamyl-1-cyclopropylméthylpipéridine (exemple 2A.3 du WO), chez la souris, administration p.o, (table 4)

<tb> dose <SEP> administrée <SEP> % <SEP> inhibition <SEP> diarrhée
<tb> <SEP> mg/kg <SEP> eutom. <SEP> (I) <SEP> lévogyre <SEP> ex. <SEP> 1 <SEP> .3WO95/.. <SEP> <SEP> ex.2A.3WO95/.. <SEP>
<tb>

<SEP> 0,00001 <SEP> if <SEP> 29
<tb> <SEP> 0,00003 <SEP> / <SEP> 45
<tb> <SEP> 0,0001 <SEP> 65,8
<tb> <SEP> 0,001 <SEP> f <SEP> <SEP> 7,1 <SEP> / <SEP> <SEP> 27,9 <SEP> 1 <SEP> 36,8 <SEP>
<tb> <SEP> 0,003 <SEP> , <SEP> 46,1 <SEP> / <SEP> 63,8
<tb> <SEP> 0,01 <SEP> 59,7 <SEP> 78,8 <SEP> \ <SEP> 29,5
<tb> <SEP> 0,03 <SEP> 59,5 <SEP> \ <SEP> 46,7
<tb> <SEP> 0,1 <SEP> 69,5 <SEP> 1 <SEP> 12,7 <SEP>
<tb> <SEP> DE50 <SEP> mg/kg <SEP> 0,0056 <SEP> 0,002 <SEP> 0,00004
<tb>
Cette étude est probante de l'avantage thérapeutique apporté par le composé de l'invention.

Ainsi celui-ci montre un effet significatif à la dose de 0,003 mg/kg (46,1%), effet qui se poursuit jusqu'à la dose de 0,1 mg/kg et au delà. Différemment les composés de comparaison ne manifestent une activité intéressante que dans d'étroites limites de concentrations - de 0,003 à 0,03 mg/kg (63,8 à 46,7%) pour le composé de l'exemple 1.3, - de 0,00003 à 0,001 mg/kg (45 à 36,8%) pour le composé de l'exemple 2A.3,
I'activité diminuant considérablement aux doses supérieures pour ces deux composés 4-2) - inhibition de la sécrétion intestinale induite par la choléra toxine technique dite "d' enteropooling" .

Des rats femelles Wistar (160-180 g) sont mis à jeun de nourriture solide 24h avant le test.

Au temps zéro, les animaux reçoivent, par voie orale, 0. 1 mg/kg de choléra toxine (Sigma,
C3012). Trois heures après les animaux sont sacrifiés par dislocation cervicale. Après laparotomie médiane, I'intestin est ligaturé au niveau du pylore et de la jonction iléocaecale. Il est ensuite prélevé (du duodénum jusqu'au caecum), pesé plein puis vide.

L'administration des produits à l'essai est effectuée par voie orale une heure avant l'administration de la choléra toxine. Les résultats sont exprimés en poids de contenu intestinal et permettent de calculer la DE50 des composés qui est la dose efficace permettant d'inhiber 50% de poids du contenu intestinal sous l'action du produit à l'essai.

- résultats

<tb> <SEP> eutomère <SEP> (I) <SEP> lévogyre <SEP> racémique <SEP> parent <SEP> (+/-)
<tb> t
<tb> <SEP> | <SEP> 0,038 <SEP> mg/kg <SEP> DE,, <SEP> 1,9 <SEP> mg/kg
<tb>
Exemple 5 : Formes pharmaceutiaues
A titre illustratif il est présenté la formulation et la préparation du chlorhydrate de l'eutomère (I) lévogyre de l'invention sous forme de gélules et de comprimés contenant 40 mg de principe actif par unité.

5 - 1 - formulation unitaire des gélules et préparation:
chlorhydrate de I' eutomère (I) 40,0 mg
lactose 59,3 mg
silice colloïdale 0,2 mg
stéarate de magnésium 0,5 mg
total 100 mg
Les poudres sont intimement mélangées puis réparties à raison de 100 mg par unité dans des gélules de taille appropriée.

5 -2 - formulation unitaire de comprimés et préparation:
chlorhydrate de l'eutomère (I) 40,0 mg
lactose 72,0 mg
hydroxypropylméthylcellulose (HPMC) 3,6 mg
carboxyméthylcellulose réticulée (CMC) 3,6 mg
silice colloïdale 0,24 mg
stéarate de magnésium 0,6 mg
total 120 mg
Le principe actif est mélangé au lactose puis granulé avec I'HPMC en solution. Les grains sont séchés et tamisés sur une grille d'ouverture de 1 mm. La CMC et la silice sont mélangées puis ajoutées aux granulés. On mélange ensuite intimement avec le stéarate de magnésium puis comprime à raison de 120 mg par comprimé sécable.

Claims

REVENDICATIONS

1) La (-)E-2-(3,4-dichloro-cinnamyl)-1-cyclopropylméthyl-pipéridine de formule (I)

<tb> et ses sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement acceptables,

<tb> <SEP> H

<tb> ( <SEP> I <SEP> ) <SEP> Chl <SEP> (G <SEP> irai <SEP> ( <SEP> - <SEP> )

<tb> <SEP> S <SEP> H

<SEP> I <SEP> HCI

2) Le chlorhydrate de (-)E-2-(3,4-dichloro-cinnamyl)-1-cyclopropylméthyl-pipéridine (I),

3) Procédé de préparation de la (-)E-2-(3,4-dichloro-cinnamyl)-l-cyclopropylméthyl- pipéridine (I) qui consiste - à effectuer la résolution de la (+/-) E-2-(3,4-dichloro-cinnamyl)-pipéridine via le sel diastéréoisomère eutomère avec la N-acétyl-L-phénylalanine qui conduit à la (+) E-2-(3,4dichloro-cinnamyl)-pipéridine (III) puis, - à acyler le composé (III) par le chlorure d'acide cyclopropane carboxylique pour obtenir la (+) E-2-(3 ,4-dichloro-cinnamyl)- 1 -cyclopropane-carbonyl-pipéridine (II) puis, - à réduire le composé (11) par un hydrure métallique ou organo-métallique pour obtenir la (-)E-2-(3,4-dichloro-cinnamyl)-1-cyclopropylméthyl-pipéridine (I) et éventuellement à en effectuer le sel d'addition avec un acide pharmaceutiquement acceptable,

4) A titre de médicament, la (-)E-2-(3,4-dichloro-cinnamyl)-1-cyclopropylméthylpipéridine (I) et ses sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement acceptables,

5) Composition thérapeutique contenant à titre de principe actif la (-)E-2-(3,4-dichloro- cinnamyl)-l-cyclopropylméthyl-pipéridine (I) et ses sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement acceptables,

6) Utilisation de la (-)E-2-(3,4-dichloro-cinnamyl)- 1 -cyclopropylméthyl-pipéridine (I) ou d'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, pour la préparation de médicaments antidiarrhéique,

7) A titre de produits industriels nouveaux la (+) E.2-(3,4-dichîoro-cinnamyl) pipéridine (III) et la (+) E-2-(3 4-dichloro-cinnamyl)- 1 -cyclopropane-carbonyl-pipéridine (II) tels que préparés à la revendication 3.