FI61687C - Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara ala-metyl-3,4-dihydroxifenylalaninderivat - Google Patents

Description

>, — t fol ,44, KUULUTUSJULKAISU A o o.

2|3Γα m 01) UTLÄGGNINCSSKRIFT 6Ί60/ C (45)Patentti myönetty 10 09 1932 Patent roeddlelat

(51) K».ik?/intxi.3 c 07 C 101/77, C 07 D 207AO

§^Q|W| |_p| L.AN O (21) P*t*nttlhak«miM — Patwitmattknlnx 2680/74 (22) HakcmltpUvi — AiwSknlnpdftf 13.09*74 ^ ^ (23) Alkupllvi—GHtlghttsdag 13.09. 74 (41) Tullut |uikiMk*i — Biivit ofr«itii( 26.03.73 (»•tentti- j· rekisterihän itu* NlhtMk.lp»on |. kuuL|ullu*un pvm.-

Patent- och registerstyrelsen ' ' Antekan utiajd och uti.*krifc*n publkmd 31.03.82 (32)(33)(31) Pyn«ty «tuoikuui —B«|lrd prtortm 25 · 09 · 73 25-06.74 USA (US) U00609, 482102 (71) Merck & Co., Inc., 126 E. Lincoln Avenue, Rahway, New Jersey, USA(US) (72) Walfred Spencer Saari, Lansdale, Pennsylvania, USA(US) (74) Oy Kolster Ab (54) Menetelmä terapeuttisesti käytettävien 04-metyyli~3,4-dihydroksifenyyli-alaniinijohdannaisten valmistamiseksi - Förfarande för framställning av terapeutiskt användbara c*-metyl-3,4-dihydroxifenylalaninderivat

Esillä oleva keksintö koskee menetelmää uusien ok-metyyli- 3,4-dihydroksifenyylialaniinijohdannaisten valmistamiseksi, jotka ovat käyttökelpoisia korkean verenpaineen hoidossa.

Aikaisemmin on ehdotettu erilaisten alaniiniyhdisteiden olevan käyttökelpoisia korkean verenpaineen hoidossa (katso US-patentti 2 868 818). Lisäksi on alalla tunnettua, että korkeata verenpainetta edullisemmin hoidetaan L-°( -metyyli-3,4-dihydroksi:-Penyylialaniinilla, koska yhdisteen D-muoto on terapeuttisesti inaktiivi. D-muodon poistaminen vähentää siten myrkyllisyyttä ja lisää tehoa (katso US-patentti 3 344 023 ja brittiläinen patentti 936 074), o4-metyyli-3,4-dihydroksifenyy1 ialaniinin L-isomeeristä käytetään yleensä nimitystä L-c<-metyldopa tai metyldopa. Edelleen f 1 6 8 7 alalla tunnetaan, että L- tai DL- X -metyyli-3,4-dihyroksifenyyli-alaniinin ulkyy lies terit ovat hyödyllisiä korkean verenpaineen hätätilakäsittelyssä parenteraalissa lääkeannossa (katso US-patentti 3 230 143). Nyt on keksitty, että määrätyn rakenteen omaavat DL- tai L-^-metyyli-3,4-dihydroksifenyylialaniinin muut esterit ja johdannaiset ovat myös aktiivisia korkean verenpaineen käsittelyssä ja ovat siten vaihtoehtoisesti käytettäviä yhdisteitä tässä käsittelyssä. On myös havaittu, että joillakin uusista yhdisteistä on paljon suurempi aktiviteetti, ja niitä tarvitaan siten alempia annoksia kuin tunnettujen yhdisteiden ollessa kysymyksessä.

Siten tämän keksinnön kohteena on menetelmä uusien kaavan

CH„ 0 R

i 3 y i1

- C - fc - o - c - <CH2,m - r3 I

H0—nh2 R2 mukaisten 0( -metyyli-3,4-dihydroksifenyylialaniinijohdannaisten ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien happoadditiosuolojen valmistamiseksi, jossa kaavassa m on 0, 1 tai 2, R1 ja R2 tarkoittavat vetyä tai 1-3 hiiliatomia sisältävää alkyyliä ja R» on pivaloyyli-

O

oksi- tai sukkinimidoryhmä.

L-isomeerin suhteen on huomattava, että asymmetrinen hiili-atomi on molekyylin happo-osassa oleva aminoryhmä ja metyyliryhmän sisältävä hiiliatomi. Puhuttaessa L-konfiguraatiosta tarkoitetaan molekyylin tätä osaa. On huomattava, että L-konfiguraatio tarkoittaa stereokonfiguraatiota eikä optista kiertokykyä, vaikka tässä tapauksessa L-stereokonfiguraatio on optisen isomeerin 1- eli levo-muoto. On kuitenkin huomattava, että joissakin tapauksissa, kun ja R2 ovat eri ryhmiä, myös hiiliatomi, johon ne ovat liittyneet, on asymmetrinen ja voi siten esiintyä joko L- tai D-konfiguraatiossa. Kuten jäljempänä osoitetaan, molemmat yhdisteen tämän osan isomeerit ovat aktiivisia. Kuten lisäksi esitetään, molemmat nämä isomeerit on erotettu, mutta niiden stereokonfiguraatiota ei määritetty, joten merkitään pelkästään et, - ja β —isomeereiksi. Joka tapauksessa ,,,8.pW ^ ~ että β -isomeerit ovat aktiivisia riippumatta stereokonfi-guraatiostaan.

3 616 8 7

Kaavan I mukaiset yhdisteet valmistetaan keksinnön mukaisesti siten, että

(a) hydrolysoidaan tai pelkistetään kaavan II

CH„ 0 R, ^ 1 3 li i1

r5°_^\_CH2 - C - C - 0 - CC-CH2)m - R3 [T

V-VJ f R2 R 7 mukaisen happojohdannaisen tai sen happoadditiosuolan suojaryhrriät Rg , Rg ja R^, jossa kaavassa m, R^ , R2 ja Rg tarkoittavat samaa kuin edellä, ja Rg, Rg ja R? ovat vetyatomeja tai suojaryhmiä, jolloin ainakin yksi niistä on suojaryhmä, tai

(b) esteröidään happojohdannainen, jonka kaava on III, IV

tai V

CH0 I 3

HO—- CH2— C—Y JIT

nO-NH2 CH0 0

^ I 3 II

.10 —^ \-0Ho-C- C

j I I iv

HO—L 1 NH JO

II

o r - - CH~ I I d

I HO — — CH0 - C - CO,,-- S —>0 V

I 2 I 2 H0_ NH2 J 2 61 687

tai sen happoadditiosuola yhdisteellä, jonka kaava on VT

b x1-c-(-ai«) vt I I L. m o R2 joissa kaavoissa Y on -COOK tai -CO-halogeeni, m, R1, R2 ja Rg tarkoittavat samaa kuin edellä ja on hydroksyyli, halogeeni, tai (c) pelkistetään kaavan I mukainen yhdiste, jossa sisältää yhden tai useamman pelkistettävän ryhmän, joka on -HC = CH-, -C = C, halogeeni, N02 tai CN, tai (d) saatetaan yhdiste, jonka kaava on

CH„ H

„ i 3 i

H0—— CH9- C - C0o - C(-CH0 ) - OH

2 I 2 | 2 m vn HO-l,^ nh2 h jossa m tarkoittaa samaa kuin edellä reagoimaan asylointiaineen kanssa, jonka kaava on (CH3)3C-C-X2, jossa X2 on Cl tai Br 0 (e) syklisoidaan yhdiste, jonka kaava on CH, R, 0

I 3 I1 H

H0—hl—CH,-C-CO,-C(-CH,)-NHCCH,(CH,> -CO,H

ti 2 m 2 2 n^ 2

H0—L J NH R

* VIIT

jossa n^ on 1, 2 tai 3 ja , R2 ja m tarkoittavat samaa kuin edellä ja haluttaessa stereoisomeerit erotetaan (1) fraktiokiteyttämä1-lä toinen s tereoisomeeri liuoksesta tai (2) muodostamalla diastereo-meerit. optisesti aktiivisen hapon kanssa ja kiteyttämällä toinen diastereomeereista liuoksesta.

Sanonta "farmaseuttisesti hyväksyttävä happoadditiosuola" on alalla hyvin tunnettu ilmaisu, joka käsittää sellaiset yhdisteet, jotka on valmistettu vapaan emäksen reaktiossa epäorgaanisen tai 61687 orgaanisen hapon kanssa. Se käsittää hydrokloridin , hydrobromidin rikkihapon ym. suolat.

Sanonta "olennaisesti aminohapon D-isomeerista vapaa L-iso-meeri tarkoittaa, että D—isomeeriä on läsnä määriä, jotka eivät ylitä noin 10 %. On kuitenkin toivottavaa, että D-isomeeria ei käytännöllisesti katsoen ole lainkaan koostumuksessa. Esitetyissä esimerkeissä L-isomeeri11a tarkoitetaan, että yhdiste on olennaisesti 100 %:sesti (so. selvästi yli 99 %) L-konfiguraatiossa.

Ilmaisulla "suojaryhmä" tarkoitetaan mitä tahansa ryhmää, joka suojaa amino- tai hydroksyyliryhmiä reaktion aikana. Sopivia typpiatomin suojaryhmiä ovat karbobentsyylioksi, para-metoksikarbo-bentsyylioksi, trifluoriasetyyli , HC1 tms. Sopivia hydroksyyli ryhmän suojaryhmiä ovat difenyyliketaali molemmille hydroksyyliryhmille ja asetyyli ja karbobentsyylioksi yksittäisille hydroksyyli ryhmi lle ja muut samankaltaiset radikaalit. Substituentti "substituoidussa -SO,,- w ryhmässä" voi olla melkein mikä tahansa radikaali, koska nämä ryhmät lohkeavat helposti esteröintireaktiossa ja ryhmän laatu ei ole lainkaan kriittinen.

Kun esillä olevan keksinnön synteesin mukaan valmistetaan raseemisia seoksia, on joskus toivottua erottaa seokset L- ja D-lso-meereiksi. Isomeerit voidaan erottaa synteesin missä tahansa vaiheessa ja useimmissa tapauksissa on toivottua erottaa ne ennen lopullisen tuotteen muodostamista. Muissa tapauksissa (kuten :n ja R2 :n ollessa eri ryhmiä ja happo-osan ollessa L-konfiguraatiossa) lopputuote muodostuu diastereomeerien seoksena ja nämä voidaan erottaa suoraan toisistaan kiteyttämällä tai muodostamalla yksinkertaisia johdannaisia sekä kiteyttämällä. On kuitenkin huomattavasti edullisempaa käyttää lähtöaineena haluttua isomeeriä (so. L-isomeeria), kun halutaan erillistä isomeeriä. Erottaminen voidaan myös suorittaa muodostamalla esillä olevan keksinnön mukaan saaduista raseemisista seoksista diastereomeerit. Tällaisessa tapauksessa voidaan käyttää optisesti aktiivista happoa, kuten viinihappoa, 10-kamferisulfoni.happoa, omenahappoa, pyroglutaamihappoa, metoksietikkahappoa tms. Happo voidaan valita halun mukaan ja alan ammattimiehelle tämä ei tuota vaikeuksia.

Korkean verenpaineen hoidossa uusia yhdisteitä annetaan yleensä lääkkeeksi noin 0,005 - noin 300 mg eläimen kehonpaino-kg:a kohti i·1 6 61687 ja edullisesti noin 0,05 - noin 100 mg/kg. Vielä edullisemmassa tapauksessa yhdisteitä annetaan määrinä noin 0,1-25 mg/eläimen kehon-paino-kg. Tämän suhteen on huomattava, että annos tulee säätää yhdisteen aktiviteetin mukaan, halutun vaikutuksen mukaan verenpaineeseen ja myös eläimen painon mukaan. Yllä olevista annostus-rajoista aktiivisempia yhdisteitä voitaisiin antaa alempina annoksina ja vähemmän aktiivisia yhdisteitä korkeampina annoksina.

Kun kaavan I mukaista L-isomeeria annetaan lääkkeeksi olennaisesti vapaana D-isomeerista, tarvittava L-isomeerin annos on suunnilleen puolet tarvittavasta rasemaatin annoksesta, koska D-isomeeri on terapeuttisesti vaikuttamaton. Kuitenkin uusien yhdisteiden aktiviteetti vaihtelee jossakin määrin, ja siten vähemmän aktiivisen yhdisteen rasemaattia voidaan tarvita moninkertaisesti se annos, joka tarvitaan aktiivisempaa yhdistettä. Yleensä yhdisteitä annetaan lääkkeeksi yllä olevien annosten rajoissa.

Yksittäismuodossa aktiivista yhdistettä on yleensä koostumuksessa määrinä noin 1 - noin 2,000 mg, edullisemmin noin 5 - noin 1,000 mg. Vielä edullisemmassa tapauksessa aktiivista yhdistettä on läsnä noin 10 - noin 500 mg. Yhdisteen yksittäisannosmuoto voidaan antaa lääkkeeksi yhtenä hitaasti vaikuttavana annoksena tai se voidaan antaa jaettuna useammaksi pieneksi annokseksi useamman kerran päivässä yleensä 2-8 erillisenä annoksena.

Kuten edellä todettiin, tarvitaan L-isomeeria, joka on olennaisesti vapaa D-isomeeristä, alempia annoksia rasemaatin annoksiin verrattuna, Kuitenkin eri yhdisteiden erilainen aktiviteetti vaatii käyttämään erilaisia annoksia. Joissakin tapauksissa jotkut yhdisteet ovat moninkertaisesti aktiivisempia kuin toiset, ja niinpä jonkin yhdisteen rasemaattia voidaan tarvita jopa pienempi annos kuin toisen yhdisteen L-isomeeria. Yleensä annokset kuitenkin ovat yllä olevissa rajoissa.

Kaavan I mukaisia yhdisteitä voidaan käyttää koostumuksina, joita annetaan lääkkeeksi edullisesti yksikköannoksina, kuten tabletteina, pillereinä, kapseleina, jauheina, granuleina, steriileinä parenteraaleina liuoksina tai suspensioina, oraaleina liuoksina tai suspensioina ym. Kiinteiden koostumusten, kuten tablettien valmistamiseksi pääasiallinen aktiivinen aineosa sekoitetaan tavanomaisten tabletointiaineiden kanssa, kuten maissitärkkelyksen, laktoosin, 7 61687 sakkaroosin, sorbitolin, talkin, steariinihapon, magnesiumstearaatin, dikalsiumfosfaatin, kumien ja osittain samankaltaistun materiaalien kuin mitä käytetään farmaseuttisina laimennus- ja kantoaineina.

Koostumusten tabletit ja pillerit voidaan tehdä kerroksittaisiksi tai muuten koota sellaisiksi, että niiden etuna on pitkittynyt tai hidastettu vaikutus tai etukäteen määrätty jatkuvasti tapahtuva lääkkeen vapautuminen. Tabletti tai pilleri voi esimerkiksi koostua sisemmästä ja ulommasta annoskomponentista, jolloin jälkimmäinen on kuorena edellisen päällä. Molempia komponentteja voi erottaa enterokerros, jonka tarkoituksena on kestää hajoamatta mahassa ja sallia sisemmän komponentin kulkeutua muuttumattomana pohjukais-suoleen tai vapautua hidastetusti. Tällaisiin enterokerroksiin tai -päällysteisiin voidaan käyttää monia eri materiaaleja, joita ovat useat polymeeriset hapot tai polymeeristen happojen seokset sellaisten aineiden kanssa kuin shellakka ja setyylialkoholi, sellu-loosa-asetaatti ym. Erityisen edullinen enteropää1lys koostuu styreenimaleiinihappokopolymeerista yhdessä tunnettujen materiaalien kanssa, jotka osaltaan parantavat enteropää1lysteen ominaisuuksia. Yhdisteitä voidaan myös käyttää hyödyksi antamalla niitä supposito-rien muodossa tai yhdessä sellaisen läpäisevän aineen kanssa kuin dimetyylisulfoksi.

Nestemäiset muodot, joihin koostumus voidaan sisällyttää, käsittävät sopivasti maustettuja emulsioita syötävien öljyjen kanssa, kuten puuvi1lasiemenö1jyn, seesamiö1jyn, kookosrasvan, maapähkinäöljyn ym. kanssa sekä eliksiirejä ja muita senkaltaisia farmaseuttisia väliaineita. Sopivia dispergointi- tai suspendointiaineita vesipitoisille suspensioille ovat esim. synteettiset ja luonnonkumit, kuten tragantti, akaasiakumi, alginaatti, dekstraani, natriumkarboksi-metyyliselluloosa, metyylise1luloosa, polyvinyylipyrrolidoni, gelatiini tms. Parenteraaliin käyttöön on suspensioiden tai liuosten oltava steriilejä. Injektiokäyttöön ovat myös erittäin toivottuja isotoniset valmisteet, jotka sisältävät sopivia säilöntäaineita.

Ilmaisu yksittäisannosmuoto tarkoittaa fysikaalisesti erillisiä yksiköitä, jotka sopivat jakamattomiksi annoksiksi lämminverisille eläinpotilaille, jolloin jokainen yksikkö sisältää etukäteen määrätyn määrän aktiivista ainetta, jonka määrän on laskettu : 8 61 687 aiheuttavan halutun terapeuttisen vaikutuksen, yhdessä tarvittavan farmaseuttisen laimennus-, kanto- tai väliaineen kanssa. Yksittäis-annosmuotojen määritelmät ovat suoraan riippuvaisia ja määräytyvät (a) aktiivimateriaalin ainutlaatuisista ominaisuuksista ja saadusta erityisestä terapeuttisesta vaikutuksesta, ja (b) rajoituksista, jotka liittyvät tällaisen aktiivimateriaalin saattamiseen lääkemuotoon käytettäväksi lämminverisille eläimille, kuten tässä patentissa yksityiskohtaisesti kuvataan. Esimerkkejä sopivista oraaleista yksit-täisannosmuodoista ovat tabletit, kapselit, pillerit, jauheoakkaukset, rakeet, oblaatit, tärkkelyskapselit, pehmeäkapselit, teelusikalliset, ampullit, pienet lääkepullot, minkä tahansa edellä olevan lääkemuodon erotetut moninkertaistetut muodot ja muut tässä kuvatut muodot.

Seuraavassa taulukossa on esitetty eräiden:L-3-(3,4-dihydroksifenyyli)-2-metyylialaniinin (L-metyylidopa) estereiden suhteelliset verenpainetta alentavat aktiivisuudet spontaanisesti kohonneeseen verenpaineeseen rotissa, verrattuna L-metyylidopan aktiivisuuteen.

CH0 ^ I ^0

HO—CH.-C - C

2 | ^0R

HO —NH2

Suhteellinen verenpainetta alentava teho

Esimerkki R Painon perus- Molaarisuuden tee 11a_perustee 11a

Kontrolli H(metyylidopa) 1 1

Tunnettu “C2H5 1,2 1 ,2 0 tt 6 -CH2-0-C-C(CH3)3 1,4 1,9 CH ~ 0

I 3 M

5 -CH-0-C-C(CH3)3 1,6 2,3 p .

616 8 7

Suhteellinen verenpaine t:ta alentava teho

Esimerkki R Paineen perus- Molaarisuuden 'qj q tee 11a_ perus tee 1 ia » 3 n 5 ( -isomeeri) -CH-0-C-C(CH3) 3 1,9 2,7 0 10 -CH0-N 2,5 3,i|

V

o o CH3 L-, i 3 / 12 B ( ck-isomeeri ) -CH—N 3,1 4,4

V

0 «3 I—, I 3 / 12 A( β -isomeeri) -CH—N 2,3 3,2

V

Seuraavat esimerkit kuvaavat keksintöä. Kaikki osat tarkoittavat paino-osia, jollei muuta ilmoiteta. Seuraavissa esimerkeissä käytetty "alennettu paine" on 15-25 mm Hg 25-35°C:ssa (jollei muuta ilmoiteta). Kun alennettua painetta käytetään liuottimien poistamiseen, tulokseksi saatu tuote on useimmiten solvaatti, ja siten esimerkissä tarkoitetaan "väkevöityä" tuotetta, vaikka kaikki muu osa liuottimesta on poistettu paitsi tuotteeseen sidottu osa.

ίο 61687

Esimerkki 1 A. L-3-(3,4-difenyleenimetyleenidioksifenyyli)-2-metyyli-alaniinihydrokloridin valmistus

Seos, jossa on 19,3 g (0,0777 moolia) L-3-(3,4-dihydroksi-fenyyli)-2-metyylialaniinihyd ro kloridia £L- o<.-me tyy 1 iriopahydrok lo -ridi7 ja 37 g (0,156 moolia) diklooridifenyylimetaania, upotetaan 190°C:seen esilämmitettyyn öljyhauteeseen samalla hitaasti sekoittaen. Reaktion alettua, mitä osoittaa kiivas kaasunkehitys, seosta sekoitetaan nopeasti 6 minuuttia 190°C:ssa, se poistetaan kuumasta öljyhauteesta ja sen annetaan jäähtyä 25-30°C: seen . 12 ajon raaka-tuotteet yhdistetään, lietetään 3 litraan dietyylieetteriä, suodatetaan, pestään vielä 2 litralla dietyylieetteriä ja kuivataan 30°C:ssa 50 mm paineessa. Uudelleenkiteytys suoritetaan liuottamalla tuote etanoliin ja lisäämällä etyyliasetaattia tuotteen saostamiseksi. Menetelmässä saadaan 255 g (66,4 %) L-3-(3,4-difenyylimetyleenidioksifenyyli)-2-metyylialaniinihydro kloridia, sp. 267-268°C, hajoaa.

Analyysi laskettu kaavasta NO4CHL: c 67,07 H 5,39 N 3,40 Löydetty: C 66,91 H 5,29 N 3,34 B. L-N-karbobentsyylioksi-3-(3,4-difenyylimetyleenidioksi-fenyyli)-2-metyylialaniinin valmistus

Seosta, jossa on 175 g (0,325 moolia) L-3-(3,4-difenyylimety-leenidioksifenyy1i)-2-metyylialaniinihydrokloridia, 1750 ml asetonia ja 1750 ml vettä, sekoitetaan typpiatmosfäärissä alle 10°C:n lämpötilassa, pH säädetään samalla 12,0:aan hitaasti lisäämällä 10 %:sta natriumhydroksidiliuosta. Reaktioseokseen lisätään tipoittain 20-30°C:ssa 5-7 minuutin kuluessa 93 g (0,545 moolia) karbo-bentsyylioksikloridia samalla lisäten 10 %:sta natriumhydroksidiliuosta pH:n pitämiseksi 12,0-12,2:ssa. Kun karbobentsyylioksi-kloridin lisäys on päättynyt, reaktioseosta sekoitetaan 25-30°C:ssa 3 tuntia. Suurin osa asetonista poistetaan sitten alennetussa paineessa 25-35°C:ssa, jolloin halutun N-karbobentsyy1ioksi-johdannaisen natriumsuola saostuu. Natriumsuola uute- ΐϊ 61687 tetaan 1,5 litraan etyyliasetaattia, pestään 200 ml:lla 5 %:sta nat riumhydroksidiliuosta ja 200 ml:lla kyllästettyä natriumkloridiliuosta ja kuivataan sitten magnesiumsulfaatilla. Lisätään 17,5 g värinpoisto-hiiltä ja suodatetaan magnesiumsulfaattitukon lävitse, sitten liuottimet poistetaan alennetussa paineessa 25-35°C.ssä. Jäännös lietetään 2 kertaa 1 litraan 20 ! etyylieetteriä-80 %-heksaania-seokseen (tilavuus-!) ja suodatetaan, jolloin saadaan halutun IM-karboben tsyy 1 i oks i -johdannaisen natriumsuola. Tämä natriumsuola liuotetaan 1,5 litraan etyyliasetaattia, liuos jäähdytetään 10°C:hen ja tehdään happameksi pH 2:een 6-n kloorivetyhapolla. Etyyliasetaattiuutos pestään 200 ml:lla kyllästettyä natriumkloridi1iuosta, kuivataan magnesiumsulfaatilla, o suodatetaan ja väkevöidään alennetussa paineessa 25-35 C:ssa. IM-kar-bobentsyy1ioksijohdannaista kuivataan edelleen 25-30°C:ssä 0,2-0,3 mm Hg, jolloin saadaan 169 g (76,0 !) L-N-karbobentsyylioksi-3-(3,4-di-fenyy1imetyleenidioksifenyyli)-2-metyylialaniinia.

C. Sukkinimidometyyli-L-N-karbobentsyylioksi-3-(3,4-difenyyli - metyleen idioksifenyyli)-2-metyylialaninaatin valmistus._

Liuosta, jossa on 13,5 g (0,0265 moolia) L-N-karbobentsyy1ioksi-3-(3,4-difenyylimetyleenidioksifenyyli)-2-metyylialaniinia, 2,7 g (0,027 moolia) trietyyliamiinia ja 5,19 g (0,029 moolia) IM-bromimetyy-lisukkinimidia 35 ml:ssa kuivaa dimetyy1 iformamidia, sekoitetaan 25-30°C:ssä 16 tuntia. Reaktioseos kaadetaan 400 ml:aan jäävettä ja tuote-uutetaan 200 ml:aan 50 % kloroformia-50 % dietyylieetteriä-seokseen (tilavuus-!). Orgaaninen uutos pestään 50 ml:lla laimeata (5 !) natriumkarbonaatti 1 iuosta ja 50 ml:lla kyllästettyä natriumkloridi1iuosta ja kuivataan vedettömällä magnesiumsulfaatilla veden poistamiseksi. Suodattamisen ja väkevöinnin jälkeen alennetussa paineessa jäännös kiteytetään uudelleen. Uudelleenkiteytys suoritetaan liuottamalla tuote etanoliin ja lisäämällä heksaania tuotteen saostamiseksi. Menetelmässä saadaan 12,1 g (73,6 !) sukkinimidometyyli-L-N-karbobentsyylioksi-3-(3,4-difenyy1imetyleenidioksifenyyli)-2-metyylialaninaattia, soi 143,0-145,0°C.

Analyysi laskettu kaavasta C H 5,20 N 4,51 Löydetty: C 69,83 H 5,14 N 4,52 D, Sukkinimidometyyli-L-3-(3,4-dihydröksifenyyli)-2-metyyliala- ninaattihydrokloridi hydraatin valmistus_

Suspensiota, jossa on 6,6 g (0,0106 moolia) sukkinimidometyyli-L-N-karbo;bentsyylioksi-3 - (3,4-difenyylimetyleenidioksifenyyli)-2-metyy-.lialtaninaattia 180 ml:ssa absoluuttista etanolia ja 9 ml:ssa 9,6-n kloo-rivetyhapon (vedetön) etanoliliuosta, hydrataan 3,3 g: 11a 10 !:sta 1? 61687 palladiumhiilikatalysaattoria alkupaineella 2,11 kg/cm eli kunnes vedyn sitoutuminen on lakannut. Katalysaattori poistetaan suodattamalla ja suodos väkevöidään alennetussa paineessa. Jäännös uutetaan 50 ml:lla bentseeniä ja sitten 50 ml:lla etyyliasetaattia. Liukenematon kiinteä aines ravistellaan sitten 10 %:lla etanolia-90 % etyyliasetaat tia-seoksen (50 ml, tilavuus-%) ja kyllästetyn natriumkarbonaattiliuak-sen (10 ml) kanssa. Suodatuksen jälkeen suodos kuivataan vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatetaan ja väkevöidään alennetussa paineessa. Jäännös liuotetaan 25 ml:aan absoluuttista etanolia, liuosta käsitellään 5 ml:lla 9,6-n kloorivedyn (vedetön) etano1i1iuosta ja väkev öidään alennetussa paineessa, jolloin saadaan 2,5 (62,7 %) sukkinimidometyyli -L-3-(3,4-dihydroksifenyyli)-2-metyylialaninaattihydrokloridihydraattia, joka on homogeeninen ohutlevykromatografialla Z?luoresoiva piigeelile-vy, 30 %-metanolia-70 % bentseeniä-liuotin tilavuus-|7» havaittu Rf=0,5. Analyysi laskettu kaavasta C^gH^g^Og. HOI. h^O: C 47,81 H 5,62 N 7,44 Löydetty: C 48,09 H 5,74 N 7,42

Esimerkki 2 A. N-(1-kloorietyyli)-sukkinimidin valmistus 50,0 g (0,40 moolia) N-vinyylisukkinimidia liuotetaan 1000 ml:aan hiilitetrakloridia, lisätään 5,20 g (0,020 moolia) stannikloridia ja seosta sekoitetaan samalla kyllästäen sitä kloorivedyllä 6 tunnin ajan 20-30°C:ssä. 24 tunnin kuluttua seosta kyllästetään jälleen 1,5 tuntia kloorivedyllä. 48 tunnin kuluttua liuos dekantoidaan ja kumimainen jäännös pestään 10:11ä 100 ml:n annoksella hiilitetrakloridia. Yhdistettyihin uutoksiin lietetään 10 g diatomiittia, suodatetaan ja suodos väkevöidään alennetussa paineessa noin 400 ml:ksi. N-(1-kloorietyyli)-sukkinimidi suodatetaan ja kuivataan 20-30°C:ssä alennetussa paineessa, jolloin saadaan 38,4 g (59 %) valkeata kiinteätä ainetta, jolla on sulamispiste 83,5-84,5°C.

B. °£-sukkinimidoetyyli-L-N-karbobentsyylioksi-3-(3,4-difenyyli- metyleenidioksifenyyli)-2-metyyljalaninaatin valmistus_

Seosta, jossa on 30,66 g (0,060 moolia) L-N-karbobentsyy1ioksi - 2-(3,4-difenyylimetyleenidioksifenyyli)-2-metyylialaniinia, 9,70 g (0,060 moolia) N-(1-kloorietyyli)-sukkinimidia, 6,07 g (0,060 moolia) trietyyliamiinia ja 75 ml kuivaa dimetyyliformamidia, sekoitetaan 95°C:-ssä 19 tuntia. Reaktioseos kaadetaan 750 ml:aan vettä ja tuote uutetaan 3:11a 500 ml:n annoksella etyyliasetaattia. Yhdistetyt orgaaniset uutokset pestään 3:11a 300 ml:n annoksella 5 %:sta natriumhydroksidi- |V.

liuosta, sitten 3 kertaa 300 ml:lla kyllästettyä natriumkloridi1iuosta 13 61 687 ja kuivataan vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Suodattamisen jälkeen liuosta käsitellään 5 g:lla hiiltä, suodatetaan ja liuotin haihdutetaan alennetussa paineessa, jolloin saadaan 37,90 g (99 %) oC-sukkinimido-etyyli-L-N-karbobentsyylioksi-3-(3,4-difenyylimetyleenidioksifenyyli ) - 2-metyylialaninaattia diastereomeeristen isomeerien (oi ja /3) seoksena.

C.oC-sukkinimidoetyyli-L-3-(3,4-dihydroksifenyyli)-2-meiyyliaia-ninaattihydrokloridin valmistus_

Suspensiota, jossa on 20,IB g (0,032 moolia)°<.-sukkinimidoetyyli-L-N-karbobentsyylioksi-3-(3,4-difenyylimetyleenidioksifenyyli)-2-metyy-lialaninaattia 275 ml:ssa 25 % absoluuttista etanolia-75 % etyyliase-taattia-seosta (tilavuus-%) hydrataan 8,5 g:lla 10 %:sta palladiumhii-likatalysaattoria alkupaineella 2,81 kg/cm huoneen lämpötilassa 23 tuntia. Katalysaattori suodatetaan pois ja suodos haihdutetaan alennetussa paineessa 30-40°C:ssä. Jäännös liuotetaan 250 ml:aan 10 % etano-lia-90 % etyyliasetaattia-seokseen (tilavuus-%) ja liuosta sekoitetaan kyllästetyn natriumkarbonaatti 1iuoksen (20 ml) vedettömän natriumkarbonaatin (noin 30 g) kanssa. Suodatuksen jälkeen suodos kuivataan vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa. Jäännös liuotetaan 130 ml:aan kuivaa kloroformia, liuos jäähdytetään jäähauteessa ja kyllästetään kloorivedyllä 15 minuutin ajan. Kiinteä aine otetaan talteen, pestään suspendoimalla 3 kertaa 100 ml:aan vedetöntä eetteriä ja lietetään sitten 300 ml:aan etyyliasetaattia ja pidetään N2-atmosfäärissä suljetussa pullossa huoneen lämpötilassa yli yön. o6-sukkinimidoetyy1i-L-3-(3,4-dihydroksifenyyli)-2-metyylialaninaat-tihydrokloridi otetaan talteen, sitä sekoitetaan 300 ml:ssa heksaania 2 tuntia ja se kuivataan tyhjiöeksikkaattorissa CaCl2:lla, jolloin saadaan 0,32 g (62 %) hydrokloridia<X- ja ^-isomeerien seoksena, havaittu Rf = 0,7 ohutlevykromatografialla Z?luoresoiva piigee 1 ilevy, 50 % rne~ tanolia-50 % bentseeniä-liuotin (tilavuus-% \7.

Analyysi laskettu kaavasta ci5H20N2°6·HC1.1/2 CH3C02C2H5: C 51,86 H 6,05 N 6,7 Löydetty: C 51,98 H 5,87 N 6,65

Esimerkki 3 A. 06-sukkinimidoetyyli-L-N-karbobentsyylioksi-3-(3,4-dihydrok-sifenyylimetyleenidioksifenyyli)-2-metyylialaninaatin isomeerien erottaminen_

Esimerkin 2 diastereomeeristen isomeerien seos (150,5 g) liuotetaan kiehuvaan bentseeniin (1200 ml) ja absoluuttisen metanolin y*1 (100 ml) seokseen, suodatetaan ja suodos väkevöidään noin 700 ml:n ti- 14 61687 lavuuteen. Lisätään 10D ml absoluuttista metanolia liuokseen, joka sitten laimennetaan 1000 mlslla heksaania, kunnes se alkaa samentua, kiteytys saadaan alkuun ymppäämällä ja raapimalla. Seosta jäähdytetään 5°C:ssä noin 15 tuntia ja sitten raaka kiteinen oL-isomeeri kootaan, pestään suspendoimalla 200 mlraan bentseeniin ja heksaanin 50:50-seos-ta (tilavuus) ja kuivataan 70°C:ssä. Tuote painee 68,1 g ja sulaa 185,5-191°C:ssä. Analyyttinen näyte sulaa kahden uudelleenkiteytyksen jälkeen 199,5-201,5°C:ssä.

Analyysi laskettu kaavasta £37^34^(^: C 70,02 H 5,40 N 4,41 Löydetty: C 70,22 H 5,52 N 4,29 OL - isomeerin yhdistetyt emäliuokset ja pesunesteet haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa 60°C:ssä, jolloin saadaan 79,3 g ^-isomeeriä erittäin paksuna öljynä.

B.®(.-sukkinimidoetyyli-L-3-(3,4-dihydroksifenyyli)-2-metyyli-alaninaattihydroklorididihydraatin (^-isomeeri) valmistus_

Liuosta, jossa on 10,0 g (0,016 moolia] ^-sukkinimidoetyyli-L-N-karbobentsyylioksi-3-(3,4-difenyylimetyleenidioksifenyyli)-2-metyyli-alaninaattia ( -isomeeri) 140 mlsssa 25 % absoluuttista etanolia-75 % etyyliasetaattia-seoksessa (tilavuus-%), hydrataan 4,2 g:lla 10 %:sta pa 1ladiumhii1ikatalysaattoria alkupaineella 2,81 kg/cm ja huoneen lämpötilassa 20 tuntia, eli kunnes vedyn sitoutuminen on päättynyt. Katalysaattori suodatetaan typpiatmosfäärissä, suodos tehdään happameksi 2,0 ml:lla 9,4-n kloorivedyn etanoliliuosta ja haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa 30-40°C:ssä. Amorfinen kiinteä jäännös liuotetaan 50 ml:aan lämmintä 95 %:sta etanolia (5 % vettä), suodatetaan ja suodos laimennetaan vedettömällä eetterillä (58 ml), kunnes se alkaa samentua, sitten ympätään ja raavitaan kiteytymisen alkuunsaamiseksi. Tuote kootaan ja sekoitetaan 300 ml:aan vedetöntä eetteriä mahdollisen difenyylimetaanin poistamiseksi. Tunnin kuluttua kiinteä aine kootaan ja kuivataan 70°C:ssä yli yön, jolloin saadaan 3,7 g ainetta, jolla on sulamispiste 123-126°C (hajoaa). Uudelleenkiteyttämällä 20 ml:sta 95 %:sta etanolia saadaan 3,36 g (51 %)°^-sukkinimidoetyyli-L-3-(3,4-dihydroksifenyyli)-2-metyylialaninaattihydroklorididihydraattia (/?-isomeeri), joka sulaa 129-131°C:ssä (hajoaa) (kuivattu 70°C:ssä yli yön), ja joka on homogeeninen ohutlevykromatografialla Z"fluoresoiva piigeeli-levy, 50 % metanolia-50 % bentseeniä-liuotin (ti lavuus-% )_7, Rf = 0,7. Analyysi laskettu kaavasta ^gh^g^Og .HC1.26^0: C 47,00 H 6,16 N 6,85 Löydetty: C 46,85, 47,09 H 6,12, 6,16 N 6,76, 6,61 + 33,46° (c = 1,5 CH30H) 15 616 8 7

Esimerkki 4 A. X -s ukkini mi doe tyy li-L-'3- (3,4-dihydroksifenyy li.) -2-rnetyy l.iala-ninaattihydroklorididin (ok-isomeeri) valmistus Liuosta, jossa on 10,0 g (0,016 moolia) b<.-sukkinimidoe tyy li-L-N-karbobentsyylioksi-3-(3,4-difenyylimetyleenidioksifenyyli)-2-metyyli -alaninaattia (X-isomeeri) 140 ml:ssa 25 % absoluuttista etanoli-75 % etyyliasetaattia-seosta (tilavuus-%) hydrataan 4,2 g:11a 10 %:sta pal-ladiumhiilikatalysaattoria alkupainee11a 2,81 kg/cm ja huoneen lämpötilassa 27 1/2 tuntia eli kunnes vedyn sitoutuminen on päättynyt. Lisätään 2 ml 9,4-n vedettömän kloorivedyn etanoli liuosta ja katalysaattori poistetaan suodattamalla diatomiittitukon lävitse. Liuos väkevöidään alennetussa paineessa ja jäännös uutetaan ravistelemalla sitä dietyyli-eetterin (200 ml) kanssa, kahdesti bentseenin (200 ml) kanssa ja lopuksi kahdesti dietyylieetterin (200 ml) kanssa. Näiden uuttamisten jälkeen jäänyt materiaali on haluttu tX. -sukkinimidoetyyli-L-3-(3,4-dihyd-roksifenyyli)-2-metyylialaninaattihydrokloridi ( Ol-isomeeri) dietyyli-eetterisolvaattina, Rf = 0,7 Zohutlevykromatografia fluoresoivalla piigeeli levyllä, 50 % metanolia-50 % bentseeniä-liuotin (tilavuus-% )7 , jossa on epäpuhtautena 12 % difenyylimetaania.

- 18,75 (c = 1,68, CHgOH) .

Esimerkki 5 A. CX -kloorietyylipivalaatin valmistus 400 mg sinkkikloridia sulatetaan 0,2-0,5 mm paineessa ja jäähdytetään 25-30°C:een typpiatmosfäärissä. Sulaan sinkk.ikloridiin lisätään pivaloyylikloridia 48 g (0,40 moolia) ja sitten asetaldehydiä 19,2 g (0,44 moolia). Asetaldehydin lisäyksen aikana, mikä suoritetaan mahdollisimman nopeasti, reaktioseosta sekoitetaan ja jäähdytetään reaktion eksotermisesta luonteesta johtuvien asetaldehydihäviöiden estämiseksi. Kuumennetaan palauttaen tunnin ajan, sitten tislataan, jolloin saadaan 36 g (55 %) <X -kloorietyylipivalaattia, sp. 32-34°C/4 mm.

B. -pivaloyylioksietyyli-L-N-karbobentsyylioksi-3-(3,4-difenyy- limetyleenidioksifenyyli)-2-metyylialaninaatin valmistus_

Sekoitettuun liuokseen, jossa on 9,0 g (0,018 moolia) L-N-karbo- bentsyylioksi-3-(3,4-difenyylimetyleenidioksifenyyli)-2-metyylialanii-nia 25 ml:ssa kuivaa dimetyyliformamidia, lisätään 1,80 g (0,018 moolia) trietyyliamiinia ja sitten 2,96 g (0,01 8-moolia) o( -kloorietyy li -valaattia. Sekoitetaan 90—95 C:ssa 20 tuntia, sitten reaktioseos kaadetaan 350 ml:aan vettä ja tuote uutetaan 3 kertaa 100 ml :11a etyy-·. M eetteriä. Eetteri uutokset yhdistetään, pestään 50 ml: 11a 5 %:sta natriumhydroksidiliuosta, 50 ml :11a vettä ja kuivataan vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Suodatuksen jälkeen liuottimet poistetaan alennetussa paineessa, jolloin saadaan 7,9 g (68,9 %) raakaa ¢5(.-pi valoyy li- 18 61 687 oksietyyli-L-N-karbobentsyylioksi-3-(3,4-difenyylimetyleenid ioks ife nyy-li)-2-metyylialaninaattia.

C. DC-pivaloyylioksietyyli-L-3-(3,4-dihydroksifenyy1i)-2-metyy1i-alaninaattihydrokloridin valmistus_

Liuosta, jossa on 7,8 g «k--pivaloyylioksietyyli-L-N-karbobent-syylioksi-3-(3,4-difenyy1imetyleenidioksifenyy1i)-2-metyylialaninaattia 140 ml:ssa absoluuttista etanolia ja 11 ml 8-n vedettömän kloorivedyn etanoliliuosta, hydrataan 3,7 g:lla 10 %:sta palladiumhiilikatalysaatto-ria 20-25°C:ssä lähtöpaineella 2,46 kg/crn 19 tuntia, eli kunnes vedyn sitoutuminen on päättynyt. Katalysaattorin poistamisen jälkeen suo* dattamalla etanoli poistetaan alennetussa paineessa. Jäännöstä sekoitetaan yli yön bentseenin (80 ml) kanssa. Bentseeni poistetaan dekan-toimalla, lisätään tilalle 80 ml heksaania, sekoitetaan ja heksaani dekantoidaan pois. Jäännös liuotetaan 300 ml:aan etyyliasetaattia, liuosta sekoitetaan lyhyesti seoksen kanssa, jossa on 5 g kiinteätä natriumkarbonaattia ja 5 ml kyllästettyä natriumkarbonaatti1iuosta ja kuivataan vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Suodatuksen jälkeen lisätään 3 ml 9,6-n vedettömän kloorivedyn etanoliliuosta, ja liuos väkevöidään alennetussa paineessa kuiviin. Kuivaamalla edelleen 65°C:ssä ja 0,2 mm paineessa saadaan 2,16 g (47,2 %) oL-pivaloyy1ioksietyyliesterihydro -kloridia.

Analyysi laskettu kaavasta C^^H2gN0g.HC1: C 54,32 H 6,97 N 3,73 Löydetty: C 54,47 H 7,36 N 3,39

Esimerkki 6 A. L-N-karbobentsyylioksi-3-(3,4-dihydroksifenyyli)-2-metyyliala- niinin valmistus_

Sekoitettuun liuokseen, jossa on 3,0 g (0,0126 moolia) L-3-(3,4-dihydroksifenyyli)-2-metyylialaniiniseskvihydraattia 20 ml:ssa 2-n nat-riumhydroksidiliuosta, lisätään typpiatmosfäärissä 0°C:ssä liuos, jossa on 3 ml karbobentsyylioksikloridia 10 ml:ssa dietyylieetteriä. Sekoitetaan tunnin ajan 0°C:ssä ja sitten tunnin ajan 25°C:ssä, ja reaktio-seos uutetaan 50 ml:lla dietyylieetteriä. Vesifaasi tehdään happameiksi pH 3-4:ään 6-n kloorivetyhappoliuoksella, ja raakatuote uutetaan 100 ml:aan etyyliasetaattia ja pestään 3 kertaa 25 mltlla vettä. Kuivaamisen jälkeen magnesiumsulfaatilla suodatetaan ja liuotin poistetaan alennetussa paineessa, jolloin saadaan 1,5 (34,5 %) L-N-karbobentsyyli-oksi-3-(3,4-dihydroksifenyyli)-2-metyylialaniinia viskoosina öljynä.

B. Pivaloyylioksimetyy1i-L-3-(3,4-dihydroksifenyyli)-2-metyyli- * alaninaattihydrokloridin valmistus_ •^-•' Seosta, jossa on 2,1 g (6,1 mmoolia) L-N-karbobentsyylioksi-3-(3,4-dihydroksifenyy1i)-2-metyy1ialaniinia, 0,93 g (6,2 mmoolia) kloo-rimetyylipivalaattia, 0,63 g (6,3 mmoolia) kaliumkarbonaattia ja 0,15 17 61637 g kaliumjodidia 60 ml:ssa asetonia ja 4 ml:ssa vettä, sekoi tetaan keittäen palauttaen typpiatmosfäärissä 18 tuntia. Liuoksen väkevöi-misen jälkeen alennetussa paineessa siihen lisätään 50 ml vettä ja halutun esterin N-karbobentsyy lioksi johdannainen uutetaan 3 : ] la 50 ml: n annoksella dietyylieetteriä. Eetteriuutos pestään 50 ml :11a vettä kuivataan vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja väkevöidään alennetussa naineessa. öljymäinen jäännös liuotetaan 100 ml:aan absoluuttista etanolia ja H ml:aan 9,6-n vedettömän kloorivedyn etanoliliuosta ja hydrataan 1 g:11a 10 %:sta palladiumhiilikatalysaattoria alkupaineella 2,74 kg/cm2 24 tuntia. Katalysaattorin poistamisen jälkeen suodattamalla suodos väkevöidään alennetussa paineessa. Jäännös liuotetaan 5 ml:aan vettä, liuos tehdään emäksiseksi pH 8:aan kyllästetyllä natriumkarbonaattiliuokse1-la, ja liukenematon tuote uutetaan 25 ml:aan etyyliasetaattia. Kuivataan vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatetaan ja liuokseen lisätään 1 ml 9,6-n vedettömän kloorivedyn etanoli liuosta, liuos väkevöidään alennetussa paineessa, jolloin saadaan 0,50 g (22,6 %) pivaloyyli-oksimetyyli-L-3-(3,4-dihydroksifenyyli)-2-metyylialaninaattihydroklo-ridia, Rf = 0,86 ohutlevykromatografiällä /fluoresoiva piigeelilevy kehitetty 5:2:3-seokse11a (tilavuus) n-butanoli:etikkahappo:vesi/. Analyysi laskettu kaavasta C1gH2gNOg.HC1: C 53,11 H 6,69 N 3,87 Löydetty: C 5 3,76 H 6,64 N 3,69

Esimerkki 7 A. 1,kloori-1-sukkinimidopropaanin valmistus

Johdetaan vedetöntä kloorivetyä 6 tuntia seoksen lävitse, jossa on 10 g (0,072 moolia) N-propenyylisukkinimidia ja 1,04 g s tann :i k lor t-dia. Liuoksen annetaan seistä huoneen lämpötilassa 10 vrk, jolloin liuos kyllästetään jälleen kloorivetykaasulla 3:n ja 4:n vrk:n jälkeen. Liuottimet poistetaan alennetussa paineessa 30-40°C:ssa, jolloin saadaan 1-kloori-1-sukkinimidopropaania keltaisena öljynä.

B . 0( -sukkinimidopropyy li-L-N-karbobentsyy lioks i- 3 - ( 3,4-di f e nyy- limetyleenidioksifenyyli)-2-metyylialaninaatin valmistus_____

Liuosta, jossa on 10,2 g (0,0 20 moolia) L-N-karbobentsyyli oks i - 3- (3,4-difenyy limety leenidioksifenyy li)-me tyy lialaniini a, 2,1 g, (0,021 moolia) trietyyliamiinia ja 3,51 g (0,020 moolia) 1-kloori-1-sukkinimi-dopropaania 20 ml:ssa dimetyyliformamidia, kuumennetaan 90°C:ssa 10 tuntia, sitten liuos kaadetaan 200 ml:aan vettä. Tuote uutetaan 3:11a 100 ml:n annoksella etyylieetteriä ja pestään 50 ml:11a 5 %:sta nat-riumhydroksidia, 50 ml :11a vettä ja 50 ml:11a kyllästettyä natriumklo- 61 687 18 ridiliuosta. Kuivaamisen jälkeen vedettömällä magnesiumsulfaatilla suodatetaan, liuottimet poistetaan alennetussa paineessa, jolloin saadaan 8,6 g (6 8 %) (X-sukkinimidopropyy li-L-N-karbobentsyy lioksi-3-( 3,4-di -fenyylimetyleenidioksifenyyli)- 2-metyylialaninaatti a, Rf = 0,2 ohutle-vykromatografialla /^fluoresoiva piigee li le vy, kehitys kloroformi lla7 .

C. ο^-sukkinimidopropyyli-L-3-(3,4-dihydroksifenyyli)-2-metyyli - alaninaattihydrokloridin valmistus__

Liuosta, jossa on 8,6 g (0,014 moolia) 0(,-sukkini midopropyy li-L-N-karbobentsyylioksi-3-(3,4-difenyylimetyleenidioksi fenyyli)-2-metyy-lialaninaattia 120 ml:ssa 25 % etanolia-75 % etyyliasetaattia-seokses- sa (tilavuus-%), hydrataan 4 g:11a palladiumhiilikatalysaattoria alku-• 2 paineella 2,81 kg/cm 18 tuntia, eli kunnes vedyn sitoutuminen on päät-tynyt. Katalysaattorin poistamisen jälkeen suodattamalla liuottimet poistetaan alennetussa paineessa 30-40°C:ssä. Jäännös liuotetaan 10 % etanolia-90 % etyyli-asätaattia-seokseen (tilavuus-%) ja liuosta sekoitetaan kyllästetyn natriumkarbonaattiliuoksen (5 ml) ja kiinteä natrium-karbonaatin (ylimäärin) kanssa 2 minuuttia. Lisätään 10 g vedetöntä magnesiumsulfaattia, ja seos suodatetaan ja suodos tehdään happameksi 2 ml :11a 9,6-n kloorivedyn etanoli liuosta. Liuos haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa, lisätään 100 ml etyyliasetaattia ja seos haihdutetaan jälleen kuiviin alennetussa paineessa. Lisätään 100 ml etyyliasetaattia, sekoitetaan 25°C:ssa tunnin ajan, ja tuote poistetaan suodattamalla ja kuivataan alennetussa paineessa, jolloin saadaan 3,0 g (51,0 % ) -sukkinimidopropyy li-L-3-( 3,4-dihydroks.i fenyy li ) -2 metyylialaninaattihydrokloridia etanolisolvaattina, Rf = 0,63 ohut-levykromatografiällä ^fluoresoiva piigeeli levy, kehitys 30 % metanolia-70 % bentseeniä-seokse11a (tilavuus-% )7 .

Analyysi laskettu kaavasta C1?H22N20g.HC1C2H50H: C 52,71 H 6,75 N 6,47 Löydetty: C 53,62 H 6,51 N 6,32

Esimerkki 8 A. 2-sukkinimidoetyyli-L-N-karbobentsyylioksi-3-(3,4-difenyy- limety leenidioksifenyy li ) -2-me tyyli alaninaat in valmis tus_

Liuosta, jossa on 4,5 g (8,8 mmoolia) L-N-karbobentsyylioksi- 3-(3,4-difenyylimetyleenidioksifenyyli)-2-metyylialaniinia, 0,90 g (9 mmoolia) trietyyliamiinia ja 1,85 g (9,3 mmoolia) N-(2-bromietyyli )-sukkinimidiä 15 ml:ssa dimetyyliformamidia, kuumennetaan 95°C:ssa 19 tuntia, sitten liuos jäähdytetään ja kaadetaan 150 ml:aan vettä.

Tuote uutetaan 3:11a 100 ml:n annoksella etyylieetteriä, uutos pes- 61687 19 tään 50 ml:11a 5 %:sta natriumhydroksidiliuosta, 50 ml :11a vet tä ja 50 ml: 11a kyllästettyä natriumkloridi liuosta ja kuivataan vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Suodattamisen jälkeen liuottimet poistetaan alennetussa paineessa, jolloin saadaan 4,8 g (86 %) 2-sukkinimi.doetyy-li-L-N-karbobentsyylioksi-3-(3,4-difenyylimetyleenidioksifenyyli) - 2-metyylialaninaattia, joka on homogeenista ohutlevykromatografi.alla /fluoresoiva piigeeli levy, kehitys kloroformilla7, Rf = 0,2 7.

B . 2-sukkinimidoetyyli-L-3- (3 ,4-dihydroksifenyy li )-2-metyyli- alaninaattihydrokloridihemihydraatin valmistus_

Suspensiota, jossa on 2,5 g (3,94 mmoolia) 2-sukkinimidoetyy-li-L-N-karbobentsyylioksi-3-(3,4-difenyylimetyleenidioksifenyy1i)-2-metyylialaninaattia 75 ml:ssa metanolia, 75 ml:ssa etanolia ja 3 ml:ssa 7,6-n vedettömän kloorivedyn etanoliliuosta, hydrataan 1,2 g:11a 10 %:sta palladiumhiilikatalysaattoria alkupaineen ollessa 1,41 kg/cm^ 20 tuntia. Katalysaattorin poistamisen jälkeen suodattamalla liuottimet poistetaan alennetussa paineessa, ja jäännöstä sekoitetaan bentseenin (25 ml) ja sitten etyyliasetaatin (25 ml) kanssa. Liukenematonta materiaalia käsitellään 100 ml:11a 10 % etanolia-90 % etyy-liasetaattia-seokse11a (tilavuus-%), 5 ml:11a kyllästettyä natrium-karbonaatti liuos ta ja 5 g:11a kiinteätä natriumkarbonaatti a. Orgaaninen uutos kuivataan vedettömällä magnesiumsulfaatilla, sitten suodatetaan ja väkevöidään alennetussa paineessa. Lisätään 1 ml 9,6-n vedettömän kloorivedyn etanoliliuosta. Kaikki liuottimet poistetaan alennetussa paineessa, jolloin saadaan 0,5 g (33 %) 2-sukkin.imido- etyyli-L-3-(3,4-dihydroksifenyyli)-2-metyylialaninaattihydroklori di- hemihydraattia, joka on homogeenista ohut levy k roinat ograf i alla /{.fluoresoiva piigeelilevy, kehitys 30 % metanolia-70 % bentseeniä-seok-sella (ti lavuus-% )2 , Rf = 0,4.

Analyysi laskettu kaavasta C1gH2QN20g.1/2H20: C 50,33 H 5,54 N 7,34 Löydetty: C 50,89 H 5,65 N 7,22

Esimerkki 9 A. Raseemisen N-karbobentsyylioksi-3-(3,4-dihydroksifenyyli)- 2-metyylialaninaatin valmistus________

Sekoitettuun liuokseen, jossa on 8,0 g (0,0378 moolia) rasee-mista DL-3-(3,4-dihydroksifenyyli)-2-metyylialaniinia 60 ml:ssa 2-n natriumhydroksidiliuosta typpiatmosfäärissä, lisätään liuos, jossa on 9 ml karbobentsyylioksikloridia 25 ml:ssa dietyylieetteriä. Sekoitetaan tunnin ajan 0°C:ss'ä, sitten tunnin ajan 25°C:ssa, sitten reaktioseos 20 616 8 7 uutetaan 50 ml:11a dietyylieetteriä. Vesifaasi tehdään happameksi pH 3:een 6-n kloorivetyhapolla, ja raakatuote uutetaan 100 ml:aan etyyliasetaattia, pestään 3 kertaa 35 ml:11a vettä, kuivataan vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja suodatetaan, sitten liuotin poistetaan alennetussa paineessa, jolloin saadaan 4,5 g (34 %) raseemista N-kar-bobentsyylioksi-3-(3,4-dihydroksifenyyli)-2-me tyylialani in ia viskoosina öljynä.

B. Raseemisen pivaloyylioksimetyyli-3-(3,4-dihydroksi fenyyli)- 2-metyylialaninaattihydrokloridin valmistus_

Liuosta, jossa on 4,2 g (0,012 moolia) raseemista N-karbobent-syylioksi-3-(3,4-dihydroksifenyyli)-2-metyylialaniinia, 1,3 g (0,013 moolia) trietyyliamiinia ja 1,26 g (0,013 moolia) kloorimetyylipiva-laattia 20 ml:ssa dimetyyliformamidia, sekoitetaan 90°C:ssa 20 tuntia, sitten seos kaadetaan 200 ml:aan vettä. Tuote uutetaan 100 ml:ssa etyyliasetaattia ja pestään 25 ml:11a kyllästettyä natriumbikarbonaatti liuos ta ja 25 ml:lla vettä. Liuos kuivataan vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatetaan ja suodos väkevöidään alennetussa paineessa, jolloin saadaan halutun esterin N-karbobentsyylioksijohdannainen. Tämä materiaali liuotetaan 100 ml:aan absoluuttista etanolia, joka sisältää 10 ml 9,6-n vedettömän kloorivedyn etanoli liuosta, ja hydrataan 3 g:11a 10 %:sta palladiumhiilikatalysaattoria alkupainee11a 2 2,46 kg/cm 24 tuntia. Katalysaattorin poistamisen jälkeen suodattamalla, suodos väkevöidään alennetussa paineessa. Jäännös liuotetaan 25 ml:aan vettä, tehdään emäksiseksi kyllästetyllä natriumkarbonaat-tiliuoksella pH 8:aan, ja liukenematon tuote uutetaan 100 ml :11a etyyliasetaattia. Liuos kuivataan vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja suodatetaan, siihen lisätään 5 ml 9,6-n vedettömän kloorivedyn etanoli liuosta ja liuos väkevöidään alennetussa paineessa, jolloin saadaan 1,5 g (22,6 %) raseemisen pivaloyylioksimetyyli - 3-(3,4-dihydroksifenyy li)-2-metyylialaninaatin hydrokloridia homogeenisena ohut-le vykromatograf iällä /fluoresoiva piigee li levy, kehitys 5 ^^-seoksella (tilavuusosia) n-butanoli-etikkahappo-vesi7, Rf = 0,86.

Esimerkki 10 A. D,L-3-(3,4-difenyylimetyleenidioksi fenyyli)-2-metyyli ala- niinihydrokloridin valmistus_

Seos, jossa on 38,6 g (0,155 moolia) raseemista 3-(3,4-dihyd-rok,sifenyyli )-2-metyy li alani inihydrok lori dia ja 74 g (0,312 moolia) diklooridifenyylimetaania, upotetaan öljyhauteeseen, joka on esiläm-initetty 190°C:een, ja seosta sekoitetaan siinä hitaasti. Reaktion alkamisen jälkeen reaktioseosta sekoitetaan nopeasti 6 minuuttia ?Λ 616 8 7 190°C:ssä, se poistetaan kuumalta öljyhauteeita ja sen annetaan jäähtyä 25-30°C:hen. 6:n ajon raakatuotteet yhdistetään, lietetäan 2 litraan dietyylieetteriä, suodatetaan, pestään vielä 2 litralla dietyy-lieetteriä ja kuivataan 30°C:ssä 50 mm:n paineessa. Kiinteä aine uu-delleenkiteytetään liuottamalla se etanoliin ja lisäämällä etyyliasetaattia, jolloin saostuu D,L-3-(3,4-difenyy1 imetyleenidiok silenyyIi )- 2-metyylialaniinihydrokloridi.

B. D. L-N-karbobentsyy 1 ioksi-3-(3, 4-di f enyy 1 iraetyleenidioksi-fenyyli)-2-metyy1ialaniinin valmistus

Seosta, jossa on 175 g (0,425 moolia) raseemista 3-(3,4-dife-nyylimetyleenidioksi fenyyli)-2-metyylialaniinihydrokloridia, 1750 ml asetonia ja 1750 ml vettä, sekoitetaan typpiatmosfäärissä lämpötilassa alle 10°C samalla säätäen pH 12,0:aan hitaasti lisäämällä 10 '«:stu natriumhydroksidiliuosta. Reaktioseokseen lisätään tipottain 5-7 minuutin aikana 20-30°C:ssä 94 g (0,5^5 moolia) karbobentsyylioksiklo-ridia ja samanaikaisesti 10 %:sta natriumhydroksidiliuosta pH:n pitämiseksi 12,0-12,2:ssa. Kun karbobentsyylioksikloridilisäys on päättynyt, reaktioseosta sekoitetaan 25-30°C:ssä, 3 tuntia. Sitten poistetaan suuri osa asetonista alennetussa paineessa 25-35°C:ssä, jolloin saostuu halutun N-karbobentsyylioksijohdannaisen natriumsuola. Nat-riumsuola uutetaan 1,5 litraan etyyliasetaattia, liuos pestään 200 ml:lla 5 %:sta natriumhydroksidiliuosta ja 200 ml :11a kyllästettyä natriumkloridi liuosta, sitten kuivataan vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Lisätään 17,5 g värinpoistohiiltä, suodatetaan magnesiumsul-faattitukon lävitse, liuottimet poistetaan alennetussa paineessa 25-35 C:ssä. Jäännös lietetään 2 kertaa 1 litraan 20 %-etyylieetteriä-80 % heksaania-seokseen (tilavuus-%) ja suodatetaan, jolloin saadaan halutun N-karbobentsyylioksijohdannaisen natriumsuola. Natriumsuola liuotetaan 1,5 litraan etyyliasetaattia, liuos jäähdytetään 10°0:hen ja tehdään happameksi pH 2:een 6-n kloorivetyhapolla. Etyy1iasetaat-tiuutos pestään 200 ml:lla kyllästettyä natriumkloridi 1iuosta, kuivataan magnesiumsulfaatilla, suodatetaan ja väkevöidään alennetussa paineessa 25-35°C:ssä. N-karbobentsyylioksijohdannaisen kuivataan vielä 25-30°C:ssä/θ,2-0,3 mm Hg, jolloin saadaan D ,L-N-karbobentsyy-lioksi-3-(3,4-difenyylimetyleenidioksifenyy1i)-2-me tyy1ialani inia.

C. D,L-sukkinimidometyyli-N-karbobentsyylioksi-3-(3,4-dife- nyylimetyleenidioksifenyyli)-2-metyylialaninaatin valmistus_

Liuosta, jossa on 13,5 g (0,0265 moolia) l),L-N-karbobentsyyli-oksi-3-( 3,4-d i f eny y 1 ime ty le e nidi oksi f enyy li )-2-me tyy li ai aniini a , g (0,027 moolia) trietyyliamiinia ja 5,19 g (0,029 moolia) N-bro-raietyylisukkinimidia 35 ml:ssa kuivaa dimetyyliformamidia, sekoitetaan 61 687 22 25“30°C:ssä 16 tuntia. Reaktioseos kaadetaan 400 mlraan jäävättä ja tuote uutetaan 200 ml:aan 50 % kloroformia-50 % dietyylieetteriä-seok-seen (tilavuus-^»). Orgaaninen uutos pestään 50 ml :11a laimeata (5 %) natriumkarbonaattiliuosta ja 50 ml :11a kyllästettyä natriumkloridi-liuosta ja kuivataan sitten vedettömällä magnesiumsulfaatilla veden poistamiseksi. Suodatuksen ja väkevöinnin jälkeen alennetussa paineessa saatu jäännös kiteytetään uudelleen, kiteytys suoritetaan liuottamalla tuote etanoliin ja lisäämällä heksaania D,L-sukkinimidometyyli-N-karbobentsyy1ioksi-3-(3,4-difenyy1imetyleenidioksifenyy1i )-2-metyy-1ialaninaatin saostamiseksi.

D. D,L-sukkinimidometyyli-3-(3»4-dihydroksifenyyli )-2-metyyli- alaninaattihydrokloridihydraatin valmistus_

Suspensiota, jossa on 6,6 g (0,0106 moolia) raseemista sukkin-i mi dome tyyli-N-karbobentsyy lioksi-3-( 3,4-difenyylimetyleeni dioksife-nyyli)-2-metyy1ialaninaattia 180 ml:ssa absoluuttista etanolia ja 9 ml:ssa 9,6-n vedettömän kloorivetyhapon etanoliliuosta, hydrataan 3,3 g:lla 10 %:sta. palladiumhiilikatalysaattoria alkupainee 1 la 2,11 kg/cm2, kunnes vedyn sitoutuminen on päättynyt. Katalysaattorin poistamisen jälkeen suodattamalla suodos väkevöidään alennetussa paineessa. Jäännös uutetaan 50 ml :11a bentseenlä ja sitten 50 ml :11a etyyliasetaattia. Liukenematonta ainetta ravistellaan 10 % etanolia-90 % etyyliasetaattia-seoksen (tilavuus-#)(50 ml) ja kyllästetyn natriumkarbonaatti 1 iuoksen (10 ml) kanssa. Suodatetaan ja suodos kuivataan vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatetaan ja väkevöidään alennetussa paineessa, jolloin saadaan D,L-sukkinimidometyyli-3-(3,4-dihyd-roksifenyyli )-2-metyy1ialaninaattia emäksenä.

E. Sukkiniraidometyyli-L-3-(3,4-dihydroksifenyyli)-2-metyy1i- alaninaattihydrokloridihydraatin valmistus diastereomeeristen suolo-jen kiteytyksellä_

Liuos, jossa on 0,47 g (3,1 mmoolia) (-)-viinihappoa 10 ml:ssa 50 $ absoluuttista etanolia-50 % etyyliasetaattia-seoksessa (tilavuus-/®), lisätään typpi atmosfäärissä 20-25°C:ssä liuokseen, jossa on 1,0 g (3,1 mmoolia) D,L-sukkinimidometyy1i-3-(3,4-dihydroksifenyyli)- 2-metyylialaninaattia 10 ml:ssa absoluuttista etanolia. Liuos lämmitetään 40-60°C:hen, siihen lisätään etyyliasetaattia, kunnes se alkaa samentua, sitten jäähdytetään hitaasti 25°C:hen ja lopuksi annetaan seistä 5-10°C:ssäl2 tuntia. Liukenematon raaka tartraattisuola poistetaan suodattamalla ja kuivataan 20-25°C:ssä/θ,2-0,5 mm paineessa.

Tämä uudelleenkiteytys toistetaan, kunnes tartraattisuolan sulamin- \ '' ' £l‘Ste ja optinen kääntökyky ovat käytännöllisesti katsoen vakiot.

' Alkuperäisen kiteytyksen emäliuos väkevöidään 15-20 mm painees- 61 6 8 7 23 sa 40-50°C:ssä. Jäännös ravistellaan 10 # etanolia-90 # etyy1iasetaat-tia-seoksen (tilavuus-#)(25 ml) ja kyllästetyn natriumkarbonaatti1iuok-sen (10 ml) kanssa. Suodatuksen jälkeen suodos kuivataan vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatetaan ja väkevöidään 40°C:ssä 15-20 mm, saadaan kumimainen tuote. Jäännös liuotetaan 5 ml:aan absoluuttista etanolia ja liuos lisätään typpiatmosfäärissä liuokseen, jossa on 0,3 g (+)-viinihappoa 10 ml:ssa 50 # absoluuttista etanolia-50 % etyy-1iasetaattia-seoksessa (tilavuus-#). Liuosta lämmitetään 40-60°C:hen, lisätään etyyliasetaattia, kunnes liuos alkaa samentua, sitten jäähdytetään hitaasti 25°C:hen ja säilytetään 5-10°C:ssä 14 tuntia. Liukenematon raaka tartraattisuola poistetaan suodattamalla. Toistamalla tämä uudelleenkiteytys saadaan sukkinimidometyy1i—3—(3,4-dihydroksi-fenyyli)-2-metyylialaninaatin toinen optinen antipodi tartraattisuo-lana.

Optisesti aktiiviset tartraattisuolat muutetaan optisesti aktiivisiksi hydrokloridisuoloiksi seuraavalla menetelmällä. Sukkinimi-do-L-3-(3,4-dihydroksifenyyli)-2-metyyliaianinaatin tarLraattisuolaa ravistellaan 10 # etanolia-90 # etyy1iasetaattia-seoksen (tilavuus-#) (50 ml) ja kyllästetyn natriumkarbonaatti liuoksen (10 ml) kanssa. Suodatuksen jälkeen suodos kuivataan vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatetaan ja väkevöidään alennetussa paineessa. Jäännös liuotetaan uudelleen 25 ml:aan absoluuttista etanolia, liuosta käsitellään 5 mlrlla 9,6-n vedettömän kloorivedyn etanoliliuosta ja liuos väkevöidään alennetussa paineessa, jolloin saadaan sukkinimidometyyli-L-3-(3,4-dihydroksifenyyli)-2-metyy1ialaninaattihydrokloridi hydraat-tia, joka on homogeeninen ohutlevykromatografiällä /fluoresoiva pii-geelilevy, kehitys 30 # metanolia-70 # bentseeniä-seoksel1 a (tilavuus-#)/, havaittu Rf = 0,5.

Esimerkki 11

Raseemi sen pivaloyylioksimetyyli-3-(3,4-dihydroksifenyyli)-2-metyylialaninaatin resoluutio suoraan kiteyttämällä

Raseeminen pivaloyylioksimetyyli-3-(3,4-dihydroksifenyyli)-2-metyylialaninaattihydrokloridi valmistetaan kuten esimerkissä 23.

Lietetään 30 g raeeemista pivaloyylioksimetyyli-3-(3,4-dihyd-roksifenyyli)-2-metyylialaninaattihydrokloridia 35°C:ssä 100 ml:aan 1,0-n kloorivetyhappoa. Ylimääräinen kiinteä aine suodatetaan, kyllästetty liuos ympätään sitten 35°C:ssä pivaloyylioksimetyyli-D-3-(3,4-dihydroksifenyy1i)-2-metyylisiäninaattihydrokloridihydraati11a. Sees jäähdytetään 20°C:hen 30 minuutissa ja pidetään 20°C:ssä 0,5 tuntia. Erottunut materiaali suodatetaan, pestään kahdesti 5 ml :11a kylmää 2* 61687 vettä ja kuivataan 20-25°C:ssä/O,1-0,5 mm 20 tuntia, jolloin saadaan pivaloyylioksimetyy1i-D-3-(3, 4-dihydroksifenyyli)-2-metyy1i ai ani naatti hydroklor id ihydraatti a .

o

Edellisestä vaiheesta saatu emäliuos kuumennetaan 35 C:hen ja ympätään 35°C:ssä pi valoyy lioksimetyy li-L-3-( 3 , *»-d ihydroksi fenyyli )-2-metyylialaninaattihydrokloridilla. Sitten seos jäähdytetään 20°C:hen 30 minuutissa ja sen annetaan seistä 20°C:ssä 0,5 tuntia. Saostunut materiaali suodatetaan, pestään kahdesti 5 ml :11a kylmää vettä ja kuivataan 20-25°C:ssä/θ,1-0,5 mm 20 tuntia, jolloin saadaan pivaloyy-1 i oks ime tyy 1 i-L-3-( 3, i»-d ihydroksi f enyyl i )-2-me tyyli ai ani naatti hydroklor id ihydraatt ia.

Esimerkki 12 A. oL-sukkinimidoetyyli-L-3-(3,^-dihydroksifenyyli)-2-metyyli- alaninaatti-hydrokloridihydraatin (β -isomeeri) valmistus fraktioki-teytykse1lä_

Liuotetaan 10 g esimerkissä 2 saatua o6-sukkinimidoetyyli-L-3-(3,4-dihydroksifenyyli )-2-metyylialaninaattihydrokloridia (CC- ja fl -isomeerien seos) 50 ml:aan lämmintä 95 %:sta etanolia (5 % vettä), liuos laimennetaan vedettömällä eetterillä, kunnes se alkaa sumentua, ympätään ja raaputetaan kiteytymisen alkuunsaamiseksi. Jäähdytetään 5-10°C:ssä 12 tuntia, saostunut kiinteä aine kootaan ja kuivataan 70°C:ssä. Suoritetaan vielä samankaltaisia kiteytyksiä 95 f» etanolia-5 % vettä-seoksesta (tilavuus-%) etyylieetterillä, jolloin saadaan materiaali, joka sulaa 123-126°C (hajoaa). Lopullisella kiteytyksellä 95 ^:sesta etanolista saadaan «^-sukkinimidoetyy1i-L-3-(3,^-dihydroksi-fenyyli )-2-metyylialaninaattihydroklorididihydraatti (β -isomeeri), jeka sulaa 129-131°C (hajoaa) (kuivattu 70°C:ssä yli yön), ja joka on homogeeninen ohutlevykromatorgrafiällä /fluoresoiva piigeelilevy, 50 % metanolia-50 % bentseeniä-liuotin)(tilavuus-%)/, Itf = 0,7.

B. o^-sukkinimidoetyy li-L-3-(3,4-dihydroks ifenyy1i )-2-metyyli» alaninaattihydrokloridihydraatin (06-isomeeri ) valmistus_ <fc-sukkinimidoe tyy1i-L-3-(3,4-dihydroks i fenyyli)-2-metyy1iala-ninaattihydrokloridihydraatin /ö-isomeerin ensimmäisestä kiteytyksestä saatu emäliuos, jossa on paljon vastaavaa c^-isomeeria, väkevöi-dään 40-/i5OC: ssä/l 5-20 mm. Jäännös liuotetaan 20 ml:aan lämmintä 95 #:sta etanolia (5 % vettä), liuos laimennetaan etyyliasetaatilla kunnes se alkaa samentua, ympätään ja raaputetaan rikastetun oi—sukkin„ imidoe tyyli-L-3-(3,4-dihydroks ifenyyli)-2-metyylialani naatti hydro-kloridihydraatin o6-isomeerin saostaraiseksi. Lisäsaostuksi1 la 95 %:ses^a etanolista (5 c/<> vettä) ja etyyliasetaatilla saadaan ρί-isomeeri etyyjj^ 25 61 687 asetaattisolvaattina, Rf = 0,7 /öhutlevykromotografia, fluoresoiva piigeelilevy , 50 % metanolia-50 % bentseenia-seos (tilavuus-^)/.

Esimerkki 13

Pivaloyylioksimetyyli-L-3-(3,4-dihydroksifenyy1i)-2-metyyli-alani naattihydrokloridin valmistus

Liuosta, jossa on 0,95 mmoolia) L-3-(3,4-dihydroksifenyyli )-2-metyylialaninaattiseskvihydraattia ja 0,61 g (4,06 mmoolia) pivalo-yylioksimetyylikloridia 5 ml:ssa dimetyylisulfoksidia, sekoitetaan 20-25°C:ssä 23 tuntia. Liuos laimennetaan 10 ml :11a tislattua vettä ja se ajetaan patsaan lävitse, jossa on 5 g heikosti emäksistä anio-ninvaihtohartsia emäksisessä vaiheessa. Eluutio suoritetaan vesifrak-tiolla ja fraktiot, joilla saadaan positiivinen ferrikloridikoe, yhdistetään ja lisätään patsaaseen, jossa patsaaseen, jossa on 3 g heikosti hapanta kationinvaihtohartsia happamessa vaiheessa. Reagoimaton L-3-(3,4-dihydroksifenyyli)-2-metyylialaniini eluoidaan tislatulla vedellä, kunnes saadaan negatiivinen ferrikloridikoe, sitten esteri eluoidaan 1-n etikkahapolla. Esteri fraktio, 50 ml (pH 3,2), tehdään happameksi pH 2,0:aan 1-n kloorivetyhapolla ja lyofilisoidaan 0,ΙΟ,3 mmrssä 20 tuntia, jolloin saadaan pivaloyylioksimetyyli L-3-(3,4-di-hydroksifenyyli)-2-metyylialaninaattihydrokloridia etikkahapposolvaattina. Analyysi laskettu kaavasta C^Hg^NO^.HCl · l/^HCgH^Og: C 52,11 H 6,69 N 3,58 Löydetty: C 52,11 H 6,94 N 3,73

Esimerkki 14 od>-sukkinimidoetyyli-L-3-( 3,4-dihydroksifenyy 1 i )-2-me tyyl iala-ninaattihydrokloridin valmistus

Liuosta, jossa on 0,95 g (4,0 mmoolia) L-3-(3,4-dihydroksife-nyyli )-2-metyylialaniiniseskvihydraattia ja 0,65 g (4,0 mmoolia) N-( 06-kloorietyyli)-sukkinimidia 5 mlrssa dimetyylisulfoksidia , sekoitetaan 20-25°C:ssä 23 tuntia. Liuos laimennetaan 10 ml:lla tislattua vettä ja viedään patsaan lävitse, joka sisältää 5 g heikosti emäksistä anioninvaihtohartsia emäksisessä vaiheessa. Eluoidaan vesifraktioiila ja yhdistetään fraktiot, jotka antavat positiivisen tuloksen ferri-kloridikokeessa, ja viedään ne 3 g heikosti hapanta kationinvaihtohartsia happamessa vaiheessa sisältävään patsaaseen. Reagoimaton L-3-(3,4-dihydroksifenyyli)-2-metyylialaniini eluoidaan tislatulla vedellä, kunnes saadaan negatiivinen ferrikloriditestitulos, ja esteri eluoidaan sitten 1-n etikkahapolla. Esterifraktio, 55 ml (pH 3,2), säädetään 1-n kloorivetyhapolla pH 2,0:aan ja lyofi1isoidaan 0,1-0,3 x A : • nimissä ,20 tuntia, jolloin saadaan ού-sukkinimidoe tyy 1 i-L- 3-( 3,4-di - 61 687 26 hydroksifenyyli ) -2-metyy lialaninaattihydrok loridia etikkahapposolvaattina. Analyysi laskettu kaavasta C16H20N2°6,HC1 .1/3C?H4C>2: C 60,96 H 6,73 N 7,13 Löydetty: C 5 0,48 H 6,13 N 6,77

Esimerkki 15 A. L- 3 - (3, 4-di ase toksi fenyyli) - 2-metyy li alani inihydnoklorl din valmistus Seokseen, jossa on 320 ml jääetikkaa ja 24 ml asetyylikioridi a, lisätään yhtenä annoksena 69,4 g (0,291 moolia) L-3-(3,4-di.hydroksi-fenyyli)-2-metyylialaniiniseskvihydraattia. Reaktioseoksen lämpöti la kohoaa noin 50°C: en ja saadaan kirkas liuos. Tässä lämpötilassa lisätään vielä 10 minuutin kuluessa 85 ml asetyylikloridi a. Saadun kirkkaan vaaleankeltaisen liuoksen annetaan seistä 20-25°C:ssa 14 tuntia. Lisätään 15 minuutin kuluessa 400 ml vedetöntä etyylieetteriä. Kun lisäys on melkein lopussa alkaa muodostua valkea sakka. Seosta sekoitetaan 20-25°C:ssä 30 minuuttia, 5-10°C:ssa tunnin ajan ja sitten seosta jäähdytetään -10°C:ssa 2 tuntia. Kiinteä aine poistetaan suodattamalla, se sus-pendoidaan 150 ml:aan 30 % etikkahappoa-70 % etyylieetteriä-seokseen (tilavuus-%), suodatetaan ja pestään 500 ml:11a etyylieetteriä. 2 tunnin kuivaamisen jälkeen 70°C:ssä saadaan 83,7 g (88 %) L-3-(3,4-diase-toksifenyyli)-2-metyylialaniinihydrokloridia, sp. 196,0-197,0°C.

B. L-3-(3,9-diasetcksifenyy]a)-2-metyy lialanyy Hkloridihydrckloridin valmistus Seosta, jossa on 6,60 g (0,020 moolia) L-3-( 3,4-di asetoks i. fenyy- li )-2-metyy li alaniinihydroklori dia ja 40 ml tionyy liklori dia, sekoitetaan 60°C:ssa 2 tuntia, kunnes liukeneminen on tapahtunut. Ylimäärä tionyy liklori dia poistetaan 15-20 mm:ssä 40-50°C:ssa. Lisätään 50 ml mety-leeniklori dia ja seos väkevöidään uudelleen 40-5 0°C:ssä 15-20 mm. Tämä toistetaan vielä kerran uudella 50 ml:n määrällä mety leenik lori di a. Kuivataan 40°C:ssa/0,2-0,5 mm 30 minuuttia, jolloin saadaan L-3-(3,4-di-asetoksi fenyyli)-2-metyylialanyylikloridia.

C. S ukk in i mi dome tyyli-L-3-(3,4-dihydroksifenyyli)-2-metyyliala- ninaattihydrokloridihydraatin valmistus_

Liuos, jossa on 3,50 g (10 mmoolia) L- 3-( 3,4-diase toksi fenyy li ) -2-metyylialanyylikloridihydrokloridia 20 ml:ssa kloroformia, lisätään 25°C:ssa liuokseen, jossa on 3,87 g (30 mmoolia) N-hydroksimetyylisukki-nimidiä 20 mlrssa kloroformia. Sekoitetaan palautustislauslämpötilassa 20 tuntia, suurin osa kloroformista poistetaan 30-40°C:ssä 15-20 mm paineessa. Jäännös laimennetaan 10 ml:lla 1-n kloorivetyhappoa ja uutetaan 2:11a 20 ml:n annoksella etyylieetteriä. Vesifaasia sekoitetaan typpiat-mosfäärissä 20-25°C:ssä 5 tuntia. Lyofilisoidaan 0,1-0,3 mm:n paineessa 20 tuntia, jäännöstä käsitellään 50 ml: 11a 10 % etanolia-90 % etyyliasetaattia-seoksella (tilavuus-%), 5 ml :11a kyllästettyä natriumkarbonaatti liuosta ja 5 g: 11a kiinteätä 27 61 687 natriumkarbonaattia. Suodatuksen jälkeen suodos kuivataan vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatetaan ja väkevöidään 30-/i0°C : ssä/l5-20 mm. Jäännös liuotetaan 25 ml:aan absoluuttista etanolia, liuosta käsitellään 5 ml :11a 9,6-n vedettömän kloorivedyn etanoli liuosta ja väkevöidään alennetussa paineessa, jolloin saadaan sukkinimidometyyli-L-3-(3,4-dihydroksifenyyli)-2-metyy1ialaninaattihydrok1oridihydraa t-tia, joka on homogeeninen ohutlevykromatografialla /fluoresoiva pii— geelilevy, 30 % metanolia-70 % bentseeniä (tilavuus-^)/, havaittu Kf = 0,5.

Esimerkki 16 A. L-3-(3,4-dihydroksifenyyli)-2-metyylialaniinin N-karboksi-anhydridin valmistus

Fosgeenikaasua johdetaan seokseen, jossa on 9,0 g (0,038 moolia) L— 3—(3,4-dihydroksifenyyli)-2-metyylialani ini seskvihydraattia 500 ial:ssa tetrahydrof uraania, 25 minuutin ajan, kunnes liuos on kyllästetty. Lisäyksen aikana reaktioseoksen lämpötila nousee ^5°C:hen. Liuosta sekoitetaan vielä 50 minuuttia johtaen liuoksen lävitse typpikaasua. Liukenematon aines poistetaan suodattamalla diatmiittitukon lävitse ja suodos väkevöidään öljyksi 30-35°0:ssä/l5-20 mm. Jäännös liuotetaan 75 ml:aan etyyliasetaattia, ja liuokseen lisätään heksaa-nia, kunnes sameneminen alkaa. Jäähdytetään useampia päiviä 0-5°C:ssä, sitten saostunut kiinteä aine poistetaan suodattamalla ja kuivataan 25°C:ssä/0,1-0,3 mm, jolloin saadaan L-3-(3,it-dihydroksil'enyyli )-2-metyylialaniinin N-karboksianhydridi.

B. Sukkinimidometyyli-L-3-(3,/»-dihydroksifenyyli )-2-metyyli- alaninaattihydrokloridihydraatin valmistus_

Liuosta, jossa on 2,37 g (10 mmoolia) L-3-( 3,4-dihyd roks i 1'enyy-li)-2-metyylialaniinin N-karboksianhydridiä ja 1,29 g (10 mmoolia) N-hydroksimetyy1isukkinimidia, kuumennetaan palautustisla us lämpöti -lassa, kunnes kaikki N-karboksianhydridi on reagoinut. Väkevöidään 30-40°C:ssä/l5-20 mm paineessa, jäännös uutetaan 50 ml :11a bentseeniä ja sitten 50 ml:lla etyyliasetaattia. Liukenematonta kiinteätä ainetta ravistellaan sitten 10 % etanolia-90 % etyyliasetaattia-seoksen (tilavuus-1;®) (50 ml) ja kyllästetyn natriumkarbonaatti liuoksen (10 ml) kanssa. Suodatuksen jälkeen suodos kuivataan vedettömällä magnesium-sulfaatilla, suodatetaan ja väkevöidään alennetussa paineessa. Jäännös liuotetaan 25 ml:aan absoluuttista etanolia, liuosta käsitellään 5 ml :11a 9,6-n vedetöntä kloorivedyn etanoli liuosta, sitten väkevöi-dfcäri'· Alennetussa paineessa, jolloin saadaan sukkinimidome tyy 1 i -L-3-(3,A-dihydroksi fenyyli)-2-metyylialaninaatti hydroklori di hydraatti a, 28 616 87 joka on homogeeninen ohutlevykromatografiällä /fluoresoiva piigeeli-levy , 30 % metanolia-70 % bentseeniä-seos (tilavuus-^)/7, havaittu Hf = 0,5.

Esimerkki 17 A. L-3-(3,A-difenyylimetyleenidioksifenyyli)-2-metyylialanii-nihydrokloridin valmistus

Seos, jossa on 19,3 g (0,0777 moolia) L-3-(3,A-dihydroksifenyy-li)-2-metyylialaniinihydrokloridia ja 37 g (0,156 moolia) dikloori-difenvylimetaania, upotetaan samalla hitaasti sekoittaen 190°C:hen kuumennettuun öljyhauteeseen. Reaktion alettua, mikä ilmenee kiivaasta kaasunkehityksestä, reaktioseosta sekoitetaan voimakkaasti 6 minuuttia 190°C:ssä, seos poistetaan kuumasta öljyhauteesta ja sen annetaan jäähtyä 25-30°C:hen. Yhdistetään 12 ajon raakatuotteet, lie-tetään ne 3 litraan dietyylieetteriä, suodatetaan ja pestään vielä 2 litralla dietyylieetteriä, sitten kuivataan 30°C:ssä/50 mm paineessa, budelleenkiteytys suoritetaan liuottamalla tuote etanoliin ja lisäämällä etyyliasetaattia tuotteen saostamiseksi. Menetelmällä saadaan 255 g (66,A %) L-3-(3,A-difenyylimetyleenidioksifenyyli )-2-metyy1i-alaniinihydrokloridia, sp. 267-268°C, hajoaa.

B. <-sukkinimidoetyyli-L-3-(3,4-difenyylimetyleenidi oksifenyy- li)-2-metyylialaninaatin valmistus_

Liuosta, jossa on 1,A g (4 ,0 mmoolia) L-3-(3,A-difenyylimety-leenidioksifenyyli )-2-metyylialaniinia ja 0,65 g (4,0 mmoolia) N-(o6-kloorietyyli)-sukkinimidia 5 ml:ssa dimetyylisulfoksidia, sekoitetaan 20-25°C:ssä 23 tuntia. Lisätään 150 ml vettä ja sitten kyllästettyä natriumkarbonaattiliuosta, kunnes saadaan pH 8. Tuote uutetaan 500 ml:aan etyy1ieetteriä, uutos pestään 4:llä 25 ml:n annoksella vettä, kuivataan vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja suodatetaan. Väkevöimällä 35-40°C:ssä 15-20 mm paineessa saadaan raakaa o6-sukkin-imidoetyyli-L-3-(3,A-di fenyy1imetyleenid ioks ifenyy1i)-2-me tyylialni-naattia, joka on riittävän puhdasta käytettäväksi seuraavassa vaiheessa .

C. oC- sukkinimidoetyyli-L-3~(3,4-dihydroksifenyyli )-2-metyyli- alaninaattihydrokloridin valmistus_

Suspensiota, jossa on 1,0 g (2,0 mmoolia) ot-sukkinirai doe tyyli-L-3-(3,4-difenyylimetyleenidioksifenyyli)-2-metyylialaninaattj a 25 roltssa 25 %:sta absoluuttista etanolia-75 % etyyliasetaattia-seok-sessa (tilavuus-%), hydrataan 1,0 g:lla 10 %:sta palladiumhiilikata-ly^^ättoria alkupaineella 2,81 kg/cm huoneen lämpötilassa 25 tuntia, katalysaattori suodatetaan ja suodos haihdutetaan alennetussa paineessa 616 8 7 29 30-40°Crssä. Jäännös liuotetaan 50 mlraan 10 > etanolia-90 '<> etyyli-asetaattia-seokseen (tilavuus-#) ja sekoitetaan kyllästetyn natrium-karbonaattiliuoksen (5 ml) ja vedettömän natriumkarbonaatin (noin 5 g) kanssa 10 minuuttia. Suodatuksen jälkeen suodos kuivataan vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatetaan ja haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa. Jäännös liuotetaan 20 ml:aan kuivaa kloroformia, liuos jäähdytetään jäähauteessa ja kyllästetään kloorivetykaasul1 a 15 minuutin ajan. Kiinteä aine kootaan, pestään suspendoimal1 a 3 kertaa 25 mlraan vedetöntä eetteriä, sitten suspendoidaan 25 mlraan etyyliasetaattia ja annetaan seistä Ng-atmosfäärissä suljetussa pullossa huoneen lämpötilassa yli yön. Liukenematon kiinteä aine poistetaan suodattamalla, sitä sekoitetaan heksaanin (30 ml) kanssa 2 tuntia, se kuivataan tyhjöeksikkaattorissa CaClgrn yllä, jolloin saadaan o6-suk-kinimidoetyy1i-L-3-(3,4-dihydroksifenyyli)-2-me tyy1ialaninaa11 i hydro-kloridia 06- ja someerien seoksena, havaittu Rf = 0,7 ohutlevykro-matografiällä /fluoresoiva piigeelilevy, 50 # metanolia-50 # bentsee-niä-seos (tilavuus-#)].

Esimerkki IB

A. L-3-(3,4-diasetoksi fenyy1i)-2-metyy1ialani inihydrokloridin valmistus_

Seokseen, jossa on 320 ml jääetikkaa ja 24 ml asetyylikloridia, lisätään yhtenä annoksena 69,4 g (0,291 moolia) L-3-(3,4-dihydroksi-fenyyli)-2-metyylialaniiniseskvihydraattia. Reaktioseoksen lämpötila kohoaa noin 50°C:hen ja saadaan kirkas liuos. Tässä lämpötilassa lisätään vielä 85 ml asetyylikloridia 10 minuutin kuluessa. Tuloksena olevan vaaleankeltaisen liuoksen annetaan seistä 2Q-25°Crssä 14 tuntia. Lisätään 400 ml vedetöntä etyylieetteriä 15 minuutin kuluessa, kun lisäys on lähes päättynyt, alkaa muodostua valkea sakka. Seosta sekoitetaan 20-25°C:ssä 30 minuuttia, 5-10°C:ssä tunnin ajan, ja annetaan seistä 2 tuntia -10°C:ssä. Kiinteä aine suodatetaan, se suspendoidaan 150 mlraan 30 #:sta etikkahappoa-70 % etyylieetteriä-seokseen (tilavuus-^), suodatetaan ja pestään 500 ml :11a etyylieetteriä. Kuivataan 70°C:ssä 2 tuntia, jolloin saadaan 83,7 g (88 #) L-3-(3,4-diasetoksi-fenyyli)-2-metyylialaniinihydrokloridia, sp. 196,0-197,0°C.

13. oC -sukkinimidoetyyli-L-3-( 3,4-d i ase t oksi fenyy li )-2-metyyI i- alaninaattihydrokloridin valmistus_

Liuosta, jossa on 1,66 g (5 mmoolia) L—3—(3,4—diasetoksifenyy-li)-2-metyyliai aniinihydrokloridi a, 0,51 g (5 mmoolia) trietyyliamii-hi a ja 0,8l g (5 mmoolia) N-( 06 -kloorietyyli)-sukkinimidia 5 mlrssa dimetyylisulfoksidia, sekoitetaan 20-25°C:ssä 20-24 tuntia. Dimetyyli-sulfqksddi poistetaan sekoittamalla seosta etyyl ieetteri n (20 ml) 61687 30 kanssa useamman minuutin ajan ja sitten dekantoimalla etyyJieetteri. Tämä uutosprosessi suoritetaan 3 kertaa. Jäännös liuotetaan 10 ml:aan absoluuttista etanolia ja tuote saostetaan lisäämällä ylimäärin etyy-lieetteriä. Saostusprosessi toistetaan vielä 2 kertaa, jolloin saadaan puhdasta 0&-sukkinimidoetyyli-L-3-(3,4-diasetoksifenyyli )-2-metyylialaninaattihydrokloridia.

Esimerkki 19 0t-sukkinimidoetyyli-L-3-(3,4-dihydroksifenyyli)-2-metyyli-alaninaattihydrokloridin valmistus_

Liuosta, jossa on 1,8 g (3*9^ mmoolia) 06-sukkiniraidoetyyli-L-3-( 3, 4-diasetoksi fenyy li )-2-metyylialaninaattihydroklori dia (esimerkistä 37) 10 ml:ssa 1-n kloorivetyhappoa, sekoitetaan typpiatmos-fäärissä 20-25°C:ssä 5 tuntia. Lyofilisoidaan 0,1-0,3 mmtssä 20 tuntia, jäännöstä käsitellään 50 mltlla 10 sta etanolia-90 % et.yyliase-taattia-seoksella (tilavuus-%), 5 ml:lla kyllästettyä natriumkarbo-naattiliuosta ja 5 g:lla kiinteätä natriumkarbonaattia. Suodatuksen jälkeen suodos kuivataan vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatetaan ja haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa. Jäännös liuotetaan 20 mlraan kuivaa kloroformia, liuos jäähdytetään jäähauteessa ja kyllästetään kloorivetykaasulla 15 minuutin ajan. kiinteä aine kootaan, pestään suspendoimalla 3 kertaa 25mL:aan vedetöntä etyyli-eetteriä ja sitten liettämällä 25 ml:aan etyyliasetaattia ja pitämällä siinä ^-atmosfäärissä suljetussa pullossa huoneen lämpötilassa yli yön. CC-sukkinimidoe tyy 1 i-L-3- ( 3, 4-dihydroksif envy li )-2-metyyli-alaninaattihydrokloridi kootaan ja kuivataan tyhjöeksikkaattorissa CaClgin yllä, jolloin saadaan hydrokloridi 06- ja -isomeerien seoksena, havaittu Rf = 0,7 ohutlevykromatografialla /fluoresoiva piigee-lilevy, 50 % metanolia-50 % bentseeniä-liuotin (tilavuus-%)/.

Esimerkki 20 A. N-(1-kloorietyyli)-maleimidin valmistus

Stannikloridia, 5,20 g (0,020 moolia), lisätään liuokseen, jossa on '*9,2 g (0,40 moolia) n-vinyylimaleimidia 1 litrassa hiili-tetrakloridia, jo seosta sekoitetaan samalla kyllästäen sitä kloori-vedyllä 6 tuntia 20-30°C:ssä, 24 tunnin kuluttua seosta kyllästetään uudelleen kloorivedyllä 1,5 tuntia. 48 tunnin kuluttua liuos dekan-toidaan ja kumimainen jäännös pestään 10:llä 100 ml:n annoksella hii-litetrakloridia. Yhdistettyihin Uutoksiin lietetään di atomiittia (10 g) suodatetaan ja suodos väkevöidään alennetussa paineessa noin 400 mlrksi. N-(1-kloorietyyli )-maleimidi suodatetaan ja kuivataan 20-30°€:ssa.

. V ?·"

, i i . .'I

31 616 8 7 B. Qtf-male imi doe tyy 1 i-L-3- ( 3 , 4-di hydro k s i fe nyy M )-2-me t.yy 1 i i i j — ninaattihydroklori di n valmistus_

Liuosta, jossa on 0,93 g (4,0 mmoolia) L-3-(3,4-dihydroksi-fenyyli)-2-metyylialaniiniseskvihydraattia ja 0,64 g (4,0 mmoolia) N-(i5i_kloori etyyli )-maleimidia 5 ml:ssa dimetyy 1 isul f oks id i a , sekoitetaan 20-25°C:ssä 23 tuntia. Liuos laimennetaan 10 ml :11a tislattua vettä ja viedään patsaan lävitse, jossa on 3 g heikosti emäksistä anioninvaihtohartsia emäksisessä vaiheessa. Eluoidaan vedellä fraktioita, ja positiivisen ferrikloridikokeen antavat fraktiot yhdistetään ja viedään patsaaseen, joka sisältää 3 g heikosti hapanta kationinvaihtohartsia happamessa vaiheessa. Reagoimaton L-3-(3,4-dihydroksi-fenyyli)-2-metyylialaniini eluoidaan tislatulla vedellä, kunnes saadaan negatiivinen ferrikloridikoe, ja esteri eluoidaan sitten i-n etikkahapolla. Esterifraktiota, 55 ml (pH 3,2), käsitellään 1-n kloori vetyhapolla pH 2,0:aan ja lyofilisoidaan 0,1-0,3 mmrssä 20 tuntia, jolloin saadaan o6-maleimido-L-3-( 3,4-dihydroksi fenyyli )-2-met.yy 1 i -aianinaattihydroklorid ia.

C. OC-sukkinimidoe tyyli-L-3-(3,4-dihydroksifenyyli)-2-me tyy1i-alanaattihydrokloridin valmi s tus

Liuosta, jossa on 1,0 g (2,7 mmoolia) öfi-mal. eimidoelyyl i-L-3-(3,4-d i hydroksi fenyyli)-2-metyylialaninaat ti hydroklorid ia 2 5 ml:ssa absoluuttista etanolia, hydrataan 1,0 g:lla 10 %:sta palladiumhii1i-katalysaattoria normaalipaineessa 25°C:ssä, kunnes vetyä on sitoutunut 1 ekvivalentti. Katalysaattori suodatetaan ja suodos haihdutetaan alennetussa paineessa 30-4O°C:ssä. Jäännös liuotetaan 50 ml:aan 10 '0:sta etanolia-90 % etyyliasetaattia-seokseen (tilavuus-^) ja liuosta sekoitetaan kyllästetyn natriumkarbonaatti 1iuoksen (5 ml) ja vedettömän natriumkarbonaatin (noin 5 g) kanssa 10 minuuttia. Suodatuksen jälkeen suodos kuivataan vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatetaan ja haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa. Jäännös liuotetaan 20 ml:aan kuivaa kloroformia, liuos jäähdytetään jäähau-teessa ja sitä kyllästetään kloorivedyllä 15 minuuttia. Kiinteä aine kootaan, pestään suspendoimalla 3 kertaa 25 mliaan vedetöntä eetteriä, sitten se lietetään etyyliasetaattiin (25 ml) ja sen annetaan seistä typpiatmosfäärissä suljetussa pullossa 20-25°C:ssä yli yön. Liukenematon kiinteä aine poistetaan suodattamalla, sitä sekoitetaan heksaanin (30 ml) kanssa 2 tuntia ja se kuivataan tyhjoeksikkaattorissa CaClgin yllä, jolloin saadaan 06-sukkinimidoetyy1i-L-3-(3,4- dihyckroks ifenyyli )-2-metyy lialaninaatti hydrokloridia o£-ja /^-isomee- '*v ' /- . rien seoksena, havaittu Rf = 0,7 ohutlevykromatografialla /fluoresoi- 616 8 7 3? va piigeelilevy , 50 c/0 inetanol ia-50 % beritseenia-1 iuoti n ( U ) avnus-5 )J .

Esimerkki 21 Λ. oc-kl oorietyyl 1-3-kl oori -2,2-di metyy J i propi unau t i n valmistus 400 mg sinkkikloridia sulatetaan 0,2-0,5 mm pa j noessa .ja jäähdytetään 25-30°C:hen typpiutmosfäärissä. Sulaan sinkki k ) or i di i n lisätään fc>2 g (0,40 moolia) 3-kloori-2,2-dimetyy1ipropionyyjik 1 oridia ja senjälkeen 19,2 g (0,44 moolia) asetaldehydiä. Asetaldehydin lisäyksen aikana, mikä suoritetaan mahdollisimman nopeasti, reaktioseosta sekoitetaan ja jäähdytetään reaktion eksotermisestä luonteesta johtuvan asetaldehydihäviön estämiseksi. Seosta kuumennetaan tunnin ajan palauttaen, sitten erotetaan tislaamalla öd-kloorietyyl i-3-kioori-2,2-dime tyylipropionaatti.

B. 0i-(3-k loori-2,2-di rae tyyli propi onyy li oksi )-e tyyl i-L-3- ( 3 ,— dihydroksi fenyyli )-2-metyylialaninaattihydrokloridin valmistus_

Liuosta, jossa on 0,95 g (4,0 mmoolia) L-3-(3,4-dihydroksife-nyyli )-2-metyy 1 ial ani ini se skvihydraattia ja 0,81 g (4,00 tnraoolia) o(-kloorietyyli-3-kloori-2,2-dimetyylipropionaattia 5 ml:ssa dimelyy-.1 i sulfoksi dia , sekoitetaan 20-25°C:ssä 23 tuntia. Liuos 1 ai menne taan 10 ml :11a tislattua vettä ja viedään patsaaseen, joka sisältää 5 g heikosti emäksistä anioninvaihtohartsia emäksisessä vaiheessa, hluoi-daan vesi fraktioita ja fraktiot, joilla on positiivinen i'ervi kl or idi -koe, yhdistetään ja viedään patsaaseen, jossa on 3 g heikosti hapanta ka t i oni nvai ht ohar t. s ia happamessa vaiheessa. Reagoimaton L-3~(3,4-di-hydroksifenvy 1i)-2-metyy1ialaniini eluoidaan tislatulla vedellä, kunnes saadaan negatiivinen ferrikloridikoe, sitten esteri eluoidaan i-n etikkahapo1]a. Lsterifraktio, 50 ml (pH 3,2) tehdään happameksi pH 2,0:aam 1-n kloorivetyhapolla ja lyofili soidaan o,1-0,3 mm:ssä 20 tuntia, jolloin saadaan o£-(3-kloori-2,2-dimetyylipropionvylioksi)-e tyyli-L-3-(3,4-dihydroksifenyy1i)-2-metyylialaninaatt i hyd roklori dia etikkahapposolvaattina.

L. Ot-pivaloyyli oks ietyyli-L-3-(3,4-dihydroks i fenvy 11)-2-me tyyli ai ani naatti hyd rokloridin valmistus

Liuosta, jossa on 1,5 g (3,66 mmoolia) 0d-( 3-kloori-2,2-d ime-tyylipropionyyli oksi)-etyy1i-L-3-(3,4-dihydroksifenyyli)-2-metyyIi-alaninaattihydrokloridia 20 ml:ssa absoluuttista etanolia, hydratuan 1,0 g:11a 10 %:sta palladiumhiilikatalysaattoria 20-25°L:ssä ja normaalipaineessa, kunnes 1 ekvivalentti vetyä on sitoutunut. Kun katalysaattori on poistettu suodattamalla, etanoli poistetaan 30-35°C:ssä/ 15-26 mm. Jäännös liuotetaan 40 ml:aan etyyliasetaattia, liuosta sekoitetaan lyhyen aikaa kiinteän natriumkarbonaatin (2 g) ja ky Mas- 61687 33 tetyn natriumkarbonaatti liuoksen (2 ml) kanssa ja se kuivataan vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Suodatuksen jälkeen lisätään 1 ml y,0-n vedettömän kloorivedyn etanoliliuosta ja liuos haihdutetaan alennetussa paineessa kuiviin. Lisäkuivaamalla 65°C:ssä/0,2 mm paineessa saadaan «t-pivaloyylioksietyyliesterihydrokloridi.

Esimerkki 22 A. Bentsyylisukkinamaatin valmistus

Seosta, jossa on 23,4 g (0,20 moolia) sukkinaamihappoa, 25,4 g (0,20 moolia) bentsyy1ikloridia, 29,2 g (0,20 moolia) trietyyliamii-nia ja 250 ml dimetyyliformamidia, sekoitetaan 95°C:ssä 20 tuntia. Reaktioseos laimennetaan 500 ml :11a vettä ja tuote uutetaan kahdella 200 ml:n annoksella etyylieetteriä. Yhdistetyt eetteriuutokset pestään kahdella 50 ml:n annoksella kyllästettyä natriumkarbonaattiliuos-ta, sitten kahdella 50 ml:n annoksella vettä ja kuivataan vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Suodatuksen jälkeen liuos väkevöidään 15-20 mm paineessa ja 40°C:ssä, jolloin saadaan bentsyyIisukkinamaat-tia.

B. Bentsyyli-N-hydroksimetyylisukkinamaatin valmistus

Sekoitettuun liuokseen, jossa on 20,7 g (0,10 moolia) bentsyy- lisukkinamaattia 150 ml:ssa etyyliasetaattia, lisätään 25°C:ssä 3,0 g paraformaldehydiä ja 1 ml 20 %:sta (paino-*>&) kaliumhydroksidin etanoliliuosta. Sekoitetaan 25°C:ssä 20 tuntia, sitten lisätään heksaa-nia, kunnes liuos alkaa samentua ja seosta jäähdytetään 5°C:ssä 24 tuntia. Liuottimet dekantoidaan pois ja jäännös pestään 25 ml:ila heksaania, jolloin saadaan bentsyyli-N-hydroksimetyylisukkinamaattia.

C. Bentsyyli-N-kloorimetyylisukklnamaatin valmistus

Liuosta, jossa on 24,2 g (0,10 moolia) bentsyy1i-N-hydroksi- metyylisukkinmaattia ja 28,9 g (0,11 moolia) trifenyylifos fi1nia 500 ml:ssa hiilitetrakloridia, sekoitetaan palautustislaten 12 tuntia. Suodatuksen ja sakan pesun jälkeen bentseenillä orgaaniset liuokset poistetaan 30-40°C:ssä/l5-20 mm, jolloin saadaan bentsyyli-N-kloorimetyylisukkinamaattia riittävän puhtaana käytettäväksi seuraa-vassa vaiheessa.

D. Bentsyy1 isukkinamidometyyli-L-N-karbobentsyyli oksi-3-(3,4- difenyylimetyleenidioksifenyyli)-2-metyylialaniinin valmistus_

Liuosta, jossa on 10,2 g (0,020 moolia) L-N-karbobentsyy1iok-si-3-(3,4-difenyylimetyleenidioksifenyyli)-2-metyy1ialani ini a, 2,02 g (0,020sn^olia) trietyyliamiinia ja 5,12 g (0,020 moolia) bentsyyli-N-kloorimetyylisukkinamaattia 20 ral:ssa dimetyyJiformamidi a, sekoite- 61687 34 taan 70°C:ssä 5 tuntia, sitten 20-30°C:ssä 5 tuntia, ja lopuksi liuos kaadetaan 200 mlraan vettä. Tuote uutetaan 3:11a 100 ml:n annoksella etyyliasetaattia, uutos pestään 50 ml:lla 5 $:sta natriumhydroksidi -liuosta 50 ml:1la vettä ja 50 ralilla kyllästettyä natriumkloridi1iuos-ta ja kuivataan vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Suodatuksen jälkeen liuottimet poistetaan 30-ä0°C: ssä/15-20 mm, jolloin saadaan bent syy 1 isukki nimi dome tyyl i-L-N-karbobe n t syy 1 i ok s i -3-( 3,4-di fen.yy .1 j -metyleenidioksifenyyli)-2-metyyli alani i nia.

F. Sukki nami dome tyyl i -L-3- ( 3,4-d ihy d rok s i fenvy li )-2-me tyy 1 i -aianinaattihydrokloridi n valmis tus _

Liuosta, jossa on 13,8 g (0,0189 moolia) bent, syy 1 i sukk i nami dome tyy li-L-N-karbobentsyy Iloksi - 3-( 3,4-di f enyy limety 1 eenid i ok ,s i fenyy-li )-2-metyylialaniinia 130 mlrssa 25 % absoluuttista etanolia-75 '/« etyyliasetaattia-seoksessa (tilavuus-'^), hydrataan 5 g:lla 10 ^:sta palladiumhii1ikatalysaattoria 20-25°C:ssä alkupaineessa 2,81 kg/cm^ 18 tuntia, eli kunnes vedyn sitoutuminen lakkaa, katalysaattorin poistamisen jälkeen suodattamalla liuos haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa, jäännös liuotetaan 200 ml:aan 10 % absoluuttista etanolia-90 5» etyyliasetaattia-seokseen (tilavuus-%) ja liuosta sekoitetaan kyllästetyn natriurakarbonaatti1iuoksen (5 ml) ja kiinteän natriumkarbonaatin (ylimäärin) kanssa 2 minuuttia. Lisätään 10 g vedetöntä magnesiumsulfaattia ja se poistetaan joidenkin minuuttien kuluttua suodattamalla. Liuottimet poistetaan alennetussa paineessa, jäännös pestään 25 ml :11a heksaania ja sitten 25 mljlla etyyliasetaattia ja kuivataan alennetussa paineessa. Jäännöstä käsitellään uudelleen natriumkarbonaatilla kuten edellä, jotta saataisiin poistetuksi viimeiset j äl je t at -me tyy li-3, ^-dihydroksi f enyy 1 ialani inia , sitten se muutetaan hydrokloridisuolaksi 3 ml :11a 9,ö-n vedettömän kloorivedyn etanoliliuosta, jolloin saadaan sukkinamidometyyli-L-3-(3,4-dihydrok-si fenyyli)-2-raetyylialaninaattihydrokloridia.

F. Sukkin iroidometyyli-L-3-(3,^-dihydroksifenyy1i)-2-metyy1i-alani naattihydrokloridihydraatin valmistus__

Seosta, jossa on 3,95 g (10 ramoolia) sukkinamidometyyli-L-3-(3,4-dihydroksifenyyli)-2-metyylialaninaattihydrokloridia ja JOO ml asetyylikloridia, sekoitetaan 25°C:ssä 6 tuntia. Liuos väkevöidään 35°C:ssä/15-20 mm, ja jäännös liuotetaan 25 ml ml:aan 1-n kloorivety-happoa, ja liuosta sekoitetaan tvppiatmosfäärissä 20-25°C:ssä 5 tuntia. Liuos lyofilisoidaan 0,1-0,3 mm:ssä 20 tuntia, jäännöstä käsi-telTään 50 ml:lla 10 % etanolia-90 % etyyliasetaattia-seoksella (ti-t ' 4aVuus-$), 5 ml :11a kyllästettyä natriumkarbonaattil iuosta ja 5 Ktlla 616 8 7 35 kiinteätä natriumkarbonaattia. Suodatuksen jälkeen suodos kuivataan vedettömällä magnesiumsulfaatilla, liuos suodatetaan ja väkevöidään 30-40°C:ssa/15-20 mm. Jäännös liuotetaan 25 ml:aan absoluuttista etanolia, sitä käsitellään 5 ml: 11a 9,6-n vedettömän kloorivedyn etanoli liuos ta ja liuos väkevöidään alennetussa paineessa, jolloin saadaan sukkinimidometyyli-L-3-(3,4-dihydroksifenyyli)-2-metyyli-alaninaattihydrokloridihydraattia, joka on homogeenista ohutlevy-kromatografialla /fluoresoiva piigee li levy, 30 % metanolia-'70 % bentseeniä-li uotin (ti lavuus-% )_7 , havaittu Rf = 0,5.

Claims (2)

61 687 36

1. Menetelmä terapeuttisesti käytettävien kaavan I CHq O R, ^ l 3 II I1 HO—^\_0Ηο-0 - C-O-C- ( CH„ ) -R_ t- | I l m 3 I H0-k^ NH2 R2 mukaisten -metyyli-3,ä-dihydroksifenyylialaniini johdannaisten ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien happoadditiosuolojen valmistamiseksi, jossa kaavassa m on 0, 1 tai 2, R^ ja R2 tarkoittavat vetyä tai 1-3 hiiliatomia sisältävää alkyyliä, ja R3 on pivaloyyli-oksi- tai sukkinimidoryhmä, tunnettu siitä, että (a) hydrolysoidaan tai pelkistetään kaavan II CH0 0 R, l 3 II 11 R,0-C - C-0-C(-CHo) -R„ ö 2 | | 2 m 3 «5o_L nh <2 R7 mukaisen nappojohdannaisen tai sen happoadditiosuolan suojaryhmät ^5’ ^6 3a ^7» 3ossa kaavassa m, R^, R^ ja R^ tarkoittavat samaa kuin edellä, ja R^, Rg ja R? ovat vetyatomeja tai suojaryhmiä, jolloin ainakin yksi niistä on suojaryhmä, tai (b) esteröidään happojohdannainen, jonka kaava on III, IV tai V CH0 | 3 HO —\—CH -c - Y I i H0-_^ 1J NH III 61 687 37 CH„ O I II II TV N^c/° II 0 CH„ ai CH2-C -C02--s -VO V NH2 J 2 tai sen happoaddi tiosuola yhdisteellä, jonka kaava on VI ?1 ΧΓ?-(-σΐ2^>m-R3 VI R2 joissa kaavoissa Y on -COOH tai -CO-halogeeni, m, R., R0 ja R„ tarkoittavat samaa kuin edellä ja on hydroksyyli, halogeeni, tai (c) pelkistetään sellainen kaavan I mukainen yhdiste, jossa Rg sisältää yhden tai useamman pelkistettävän ryhmän, joka on -HC = CH, - C = C- halogeeni N02 tai CN, tai (d) saatetaan yhdiste, jonka kaava on VII CH- H I 3 i HO—^ \_CH -C - CO„-C( -CH0 ) -OH VII i j 2 I L m HO-J^^J NH2 h jossa m tarkoittaa samaa kuin edellä, reagoimaan asylointiaineen kanssa, jonka kaava on (CH3)3C-C-X2, jossa X2 on Cl tai Br, tai > ‘v II 0 616 8 7 38 (e) syklisoidaan yhdiste, jonka kaava on VIII 9H3 Rt 0 I |1 || I '=H2'|‘C02'(j:('CH2)m'NHCCH2<cH2)n 'C02H 7111 NH2 R2 1 jossa n^ on 1, 2 tai 3 ja R^, R2 ja m tarkoittavat samaa kuin edellä, ja haluttaessa erotetaan stereoisomeerit (1) fraktiokiteyttämällä toinen s tereoisomeeri liuoksesta tai (2) muodostamalla di astereoiso-meerit optisesti aktiivisen hapon kanssa ja kiteyttämällä toinen di-astereomeereistä liuoksesta.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan kaavan I mukainen L- -metyyli-3,ä-dihyd-roksifenyylialaniinijohdannainen, jossa R1 ja R2 merkitsevät vetyä tai metyyliä, R3 on pivaloyylioksi- tai sukkinimidoryhmä ja m on 0. 61687 39