NO145690B

NO145690B - Analogifremgangsmaate ved fremstilling av terapeutisk aktive derivater av alfa-methyl-3,4-dihydroxyfenylalanin.

Info

Publication number: NO145690B
Application number: NO743274A
Authority: NO
Inventors: Walfred Spencer Saari
Original assignee: Merck & Co Inc
Priority date: 1973-09-25
Filing date: 1974-09-12
Publication date: 1982-02-01
Also published as: FI268074A; IL45669A0; BG25790A3; DD116454A5; RO69156A; SE421789B; YU37117B; NO743274L; IE40256L; FI61687B; IE40256B1; HU171136B; EG11695A; YU251474A; YU50381A; SU620204A3; IL45669A; AR210248A1; ZM14074A1; ES430320A1

Description

Foreliggende oppfinnelse angår en analogifremgangsmåte

ved fremstilling av en ny og nyttig gruppe terapeutisk aktive forbindelser som er derivater av a-methyl-3,4-dihydroxyfenyl-

alanin.

Det har vært foreslått i faget at forskjellige alaninfor-bindelser kan være nyttige ved behandling av hypertensjon (se US patent 2.868-818). Det er videre kjent i faget at hypertensjon fortrinnsvis behandles med L-a-methyl-3,4-dihydroxyfenylalanin da D-formen av forbindelsen er terapeutisk inert og bare L-formen er terapeutisk aktiv. Fjernelsen av D-formen minsker derved toksi-siteten og øker effektiviteten (se US patent 3-344-023 og britisk patent 936.074)• L-isomeren av a-methyl-3,4-dihydroxyfenylalanin betegnes vanligvis som L-a-methyldopa eller methyldopa. Det er videre kjent i faget at alkylesterne av L- eller DL-a-methyl-3,4-dihydroxyfenylalanin er nyttige ved nødstilfellebehandling av hypertensjon ved parenteral administrasjon (se US patent 3.230.143). Det har nu vist seg at andre estere og derivater av DL- eller L-a-methyl-3,4-dihydroxyfenylalanin med spesifikke strukturer også er virksomme ved behandling av hypertensjon, hvorved man får alternative forbindelser for slik behandling. Det har også vist seg at noen av de nye forbindelser har en meget høyere aktivitet og således krever en lavere dosering enn de kjente forbindelser.

Det er følgelig et mål ved foreliggende oppfinnelse å fremskaffe en ny og nyttig gruppe forbindelser som er mere aktive ved behandling av hypertensjon enn tidligere kjente forbind-

elser.

Foreliggende oppfinnelse angår således en analogifrem-

gangsmåte ved fremstilling av terapeutisk aktive forbindelser som angitt i overbegrepet til krav 1,

De alternative analogifremgangsmåter fremgår av karak-teristikken til krav 1.

I en foretrukken utførelsesform av foreliggende oppfinnelse er n og m O eller 1, A1 og A2 er hydrogen, R1 og R2 er hydrogen eller methyl, og R^ er den heterocycliske ring:

som kan være substituert med lavere alkylgrupper med 1-3 carbonatomer, eller R^ er -X-R^ hvor X er -0- eller -NH-, og R^ er en acylgruppe av en alkansyre med 2-5 carbonatomer.

Ved foreliggende fremgangsmåte fremskaffes videre estere av L-isomeren av en aminosyre, i det vesentlige fri for D-isomeren, med formelen:

eller farmasøytisk godtagbare syreaddisjonssalter derav, hvor n, m, R^, R^ og Rg er som ovenfor angitt. Med hensyn til L-isomeren bør det merkes at det asymmetriske carbonatom er det som bærer amino- og methylgruppene i syredelen av molekylet. Det er denne del av molekylet som betegnes som værende i L-konfigurasjonen. Merk at L-konfigurasjonen refererer seg til romkonfigurasjonen og ikke til den optiske dreining, skjønt i dette tilfelle er L-romkonfigurasjonen 1- eller levo-formen av den optiske isomer.

Det bør imidlertid merkes at i noen tilfelle når R^ og R2 er forskjellige grupper, er det carbonatom til hvilket de er bundet, også et asymmetrisk carbonatom, og kan således foreligge i enten L- eller D-konfigurasjonen. Som det nedenfor vil bli påpekt, er begge isomerene av denne del av forbindelsen aktive. Som det videre påpekes, er disse stereoisomerer blitt adskilt, men deres stereokonfigurasjon er ikke blitt bestemt slik at de bare betegnes som a- og p-isomeren. i ethvert fall er både a- og (3-isomerene aktive uten hensyn til deres romkonfigurasjon.

Ved behandling av hypertensjon administreres fremgangsmåteforbindelsene i alminnelighet i mengder fra 0,005 til 300 mg/kg legemsvekt av dyret, og fortrinnsvis fra 0,05 til 100 mg/kg. Ved en enda mere foretrukken utførelsesform administreres forbindelsene i mengder fra 0,1 til 25 mg/kg legemsvekt av dyret. I denne forbindelse bør det merkes at dosen må avpasses avhengig av forbindelsens aktivitet, responsen som ønskes i reduksjon av blodtrykk, og også vekten av dyret. I de ovenfor angitte områder ville de mere aktive forbindelser bli gitt i de lavere doser, og de mindre aktive forbindelser i de høyere doser.

Når L-isomeren av en av fremgangsmåteforbindelsene gies i

i det vesentlige fravær av D-isomeren, er den nødvendige dose av L-isomeren ca. halvparten av den for racematet, da D-isomeren er terapeutisk inaktiv. Fremgangsmåteforbindelsene varierer imidlertid med hensyn til aktivitet i noen grad, og således kan racematet av en mindre aktiv fremgangsmåteforbindelse kreve flere ganger dosen av.en mere aktiv forbindelse. I alminnelighet vil imidlertid forbindelsene bli administrert innen de ovenfor angitte doser.

I en enkeltdoseform av preparater av fremgangsmåteforbindelsene er den aktive forbindelse i alminnelighet tilstede i preparatet i mengder fra 1 mg til 2000 mg, og mere foretrukket 5. mg til 1000 mg. I en enda mere foretrukken utførelsesform er den aktive forbindelse tilstede i mengder fra 10 mg til 500 mg. Enkeltdoseformen av forbindelsen kan administreres i en enkelt langsomtvirkende dose eller den kan administreres i flere små

doser i løpet av døgnet, i alminnelighet 2 til 8 individuelle doser.

Reduserte doser av L-isomeren i det vesentlige fri for D-isomer kreves sammenlignet med racematet. Forskjellen i aktivitet hos forskjellige forbindelser nødvendiggjør imidlertid anvendelsen av forskjellige doser. I noen tilfelle er forbindelsene mange ganger mere aktive enn andre, og således kan racematet av en kreve en enda mindre dose enn den for L-isomeren av en annen. I alminnelighet vil imidlertid dosene ligge innenfor de ovenfor angitte områder.

Ved en foretrukken utførelsesform av oppfinnelsen utføres fremgangsmåten med en aminosyredel av molekylet som er i L-romkonfigurasjon.

Ved en foretrukken utførelsesform av oppfinnelsen utføres fremgangsmåten med en aminosyredel av molekylet som er i L-rom-konf igurasjon.

Uttrykkene <M>(-CH2)n" og "(-CH2)m" omfatter også de forgrenede alkylengrupper som

Fortrinnsvis er n og m 0 eller 1.

i

Uttrykket "en monocyclisk eller bicyclisk ..... 5 til 6 ledd" betyr at forbindelsene inneholder ett eller to ring-nitrogenatomer med eventuelt et ring-svovelatom og fra 3 til 12 ring-carbonatomer. Forbindelsene inneholder videre 1 eller 2 ringer med 5 eller 6 ledd

i hver ring, og ringene kan være substituert med slike grupper som halogen, hydroxyl, amino eller andre slike grupper.

Uttrykket "L-isomeren av en aminosyre, i det vesentlige fri for D-isomeren" betyr at D-isomeren er tilstede i mengder som ikke overstiger 10%. Det er imidlertid ønskelig at D-isomeren er i det vesentlige fraværende fra preparatet. I eksemplene som følger, er, når L-isomeren angies , i det vesentlige 100% (dvs. godt over 99%) i L-konfigurasjonen.

Uttrykket "blokkerende gruppe" betegner en hvilken som helst gruppe som vil beskytte amino- eller hydroxylgruppene under reaksjonen. Blant passende blokkerende grupper for nitrogenatomet er carbobenzyloxy, p-methoxy-carbobenzyloxy, trifluoracety1, HCl og lignende. Passende blokkerende grupper for hydroxylgruppen er difenylketal for begge hydroxylgrupper og acetyl og carbobenzyloxy for de individuelle hydroxylgrupper såvel som andre slike grupper. Substituenten i den "substituerte -SO^-gruppe" kan stort sett være en hvilken som helst gruppe da disse grupper lett avspaltes under forestringsreaksjonen og naturen av gruppen er slett ikke kritisk.

Når racemiske blandinger dannes ved foreliggende fremgangsmåte, er det av og til ønskelig å skille blandingene i deres L-

og D-isomerer. Isomerene kan skilles på et hvilket som helst punkt i syntesen,og i de fleste tilfelle er det ønskelig å skille dem før dannelsen av sluttproduktet. I andre tilfelle (som når R^ og er forskjellige grupper, og syredelen er i L-konfigurasjonen), dannes en blanding av diastereomerer som sluttprodukt, og disse kan skilles direkte ved krystallisasjon eller dannelsen av enkle derivater med krystallisasjon. Det er imidlertid langt foretrukket å gå ut fra den ønskede isomer (dvs. L-isomeren) når en enkelt isomer ønskes. Det er også mulig å danne en diastereomer av den racemiske blanding fremstilt ifølge oppfinnelsen for å bevirke adskillelse.

I slike tilfelle kan en optisk aktiv syre som vinsyre, lO-kamfer-sulfonsyre, malinsyre, pyroglutamsyre, menthoxyeddiksyre og lignende anvendes. Valget av den spesielle syre kan skje efter ønske og vil være åpenbar for en fagmann.

Fremgangsmåteforbindelsene kan anvendes i form av preparater som fortrinnsvis administreres i enhetsdoseformer som tabletter, piller, kapsler, pulvere, granuler, sterile parenterale oppløs-ninger eller suspensjoner, orale oppløsninger eller suspensjoner og lignende. Slike preparater fremstilles på konvensjonelt vis. Tablettene eller pillene av fremgangsmåteforbindelsene kan være laminert eller på annen måte sammensatt for- å fremskaffe en dose som gir fordelen ved forlenget eller forsinket virkning eller forutbestemt suksessiv virkning av det inneholdte medikament. Eksempelvis kan tablettene eller pillen omfatte en indre dose og en ytre dosekomponent, idet sistnevnte er i form av et hylle over den førstnevnte.

De følgende eksempler er gitt for å belyse oppfinnelsen.

Alle deler er angitt i vektdeler hvor annet ikke uttrykkelig er anført. Uttrykket "nedsatt trykk" anvendt i de følgende eksempler er 15 til 25 mm Hg ved 25 - 35°C (hvor annet ikke er anført). Når nedsatt trykk anvendes for å fjerne et oppløsningsmiddel, er det erholdte produkt ofte et solvat og således refererer eksemplene til dannelsen av et "konsentrert" produkt, skjønt alt oppløsnings-middel er fjernet med unntagelse av det som er bundet i produktet.

Eks empel 1

A. Fremstilling av L-3-(3>4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methyl-alanin- hydroklorid

En blanding av 19,3 9 (O,0777 mol) L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalanin-hydroklorid [L-a-methyldopa-hydroklorid] og 37 g.

(0,156 mol) diklordifenylmethan neddykkes under langsom omrøring

i et foropphetet oljebad ved 190°C. Efter at reaksjonen har begynt, som det fremgår av kraftig gassutvikling, omrøres reaksjonsblandingen hurtig i 6 minutter ved 190°C, taes ut av det varme oljebad og får lov til å avkjøles til 25 - 30°C. Det rå produkt fra 12 for-søk forenes, oppslemmes med 3 1 diethylether, filtreres, vaskes med ytterligere 2 1 diethylether og tørres ved 30°C under 50 mm trykk.

Omkrystallisasjon utføres ved å oppløse produktet i ethanol og tilsette ethylacetat for å felle produktet. Fremgangsmåten gir 255 g (66,4%) L-3-(3,4-difenyImethylendioxyfenyl)-2-methylalanin-hydroklorid, smp. 267 - 268°C (spaltn.y

Anal. beregn, for C^H^NO^HCL: C 67,07; H 5,39; N 3,40

Funnet: C 66,91; H 5,29; N 3,34

B. Fremstilling av L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxy-f enyl1) - 2- methylalanin

En blanding av 175 g (0,425 mol) L-3-(3,4-difenylmethylen-dioxyf enyl)-2-methylalanin-hydroklorid, 1750 ml aceton og 1750 ml vann omrøres under nitrogen ved en temperatur under 10 C mens pH innstilles på 12,0 ved langsom tilsetning av en 10%-ig natrium-hydroxydoppløsning. 93 9 (0,545 mol) carbobenzyloxyklorid tilsettes dråpevis i løpet av 5 - 7 minutter til reaksjonsblandingen ved 20 - 30°C under samtidig tilsetning av en 10%-ig natriumhydroxyd-oppløsning for å opprettholde en pH på 12,0 - 12,2. Ef ter at tilsetningen av carbobenzyloxykloridet er avsluttet, omrøres reaksjonsblandingen ved 25 - 30°C i 3 timer. Det meste av acetonet fjernes så under nedsatt trykk ved 25 - 35°C for å felle natriumsaltet av det ønskede N-carbobenzyloxyderivat. Natriumsaltet ekstraheres i 1,5 1 ethylacetat, vaskes med 200 ml 5%-ig natriumhydroxydoppløs-ning og 200 ml av en mettet nat riumkloridoppløsning og tørres så over magnesiumsulfat. Efter tilsetning av 17,5 g avfarvende carbon og filtrering gjennom en magnesiumsulfatplate, fjernes opp-løsningsmidlene under nedsatt trykk ved 25 - 35°C. Residuet oppslemmes to ganger med 1 1 av en 20 volum% ethylether-80 volum% hexanoppløsning og filtreres, hvorved man får natriumsaltet av det ønskede N-carbobenzyloxyderivat. Dette natriumsalt oppløses i 1,5 1 ethylacetat, avkjøles til 10°C og syres til pH 2 med 6 N saltsyre. Ethylacetatekstraktet vaskes med 200 ml av en mettet natriumkloridoppløsning, tørres over magnesiumsulfat, filtreres og inndampes under nedsatt trykk ved 25 - 35°C. N-carbobenzyloxyderivatet tørres ytterligere ved 25 - 30°C og 0,2 - 0,3 mm Hg, hvorved man får 169 g (78,0%) L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenyl-methylendioxyfenyl)-2-methylalanin.

C> Fremstilling av succinimidomethyl-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)- 2- methylalaninat

En oppløsning av 13,5 g (0,0265 mol) L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalanin, 2,7 g (0,027 mol) triethylamin og 5,19 9 (0,029 mol) N-brommethylsuccinimid i 35 ml tørt dimethylformamid omrøres ved 25 - 30°C i 16 timer. Reaksjonsblandingen helles i 400 ml isvann, og produktet ekstraheres i 200 ml av en 50 volum% kloroform-50 volum% diethyletherblanding.

Det organiske ekstrakt vaskes med 50 ml fortynnet (5%-ig) natrium-carbonatoppløsning og 50 ml mettet nat riumkloridoppløsning og tørres over vannfritt magnesiumsulfat for å fjerne vann. Efter filtrering og inndampning under nedsatt trykk omkrystalliseres residuet. Omkrystallisasjon utføres ved å oppløse produktet i ethanol og tilsette hexan for å felle produktet. Fremgangsmåten gir 12,1 g (73,6) succinimidomethyl-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4~di-fenylmethylendioxy—fenyl)-2-methylalaninat, smp. 143,0 - 145,0 C.

Anal. beregn, for C^ H^ N^^ : C 69,66; H 5,20; N 4,51

Funnet: C 69,83; H 5,14» N 4,52

D. Fremstilling av succinimidomethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat- hydroklorid- hydrat

En suspensjon av 6,6 g (0,0106 mol) succinimidomethyl-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalaninat i 180 ml absolutt ethanol og 9 ml 9,6 N ethanolisk-vannfri hydrogen-kloridoppløsning hydrogeneres med 3,3 9 av en 10%-ig palladium-på-carbonkatalysator ved et begynnelsest rykk på o 2,1 kg/cm 2 inntil hydrogenopptageIsen er fullstendig. Efter fjernelse av katalysatoren ved filtrering inndampes filtratet under nedsatt trykk. Residuet ekstraheres med 50 ml benzen og derpå med 50 ml ethylacetat. Det uoppløselige faste stoff rystes så med 50 ml av en 10 volum% ethanol-90 volum% ethylacetatblanding og IO ml mettet natriumcarbonatoppløsning. Efter filtrering tørres filtratet over vannfritt magnesiumsulfat, filtreres og inndampes under nedsatt trykk. Residuet oppløses i 25 ml absolutt ethanol, behandles med 5 ml 9,6 N ethanolisk-vannfri hydrogenkloridoppløsning og inndampes under nedsatt trykk, hvorved man får 2,5 9 (62,7%) succinimidomethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat-hydroklorid-hydrat, homogent ved tynnskiktskromatografi (fluorescerende silicagelplate, 30 volum% methanol-70 volum% benzen-oppløsningsmiddel) med en iakttatt Rf = 0,5.

Anal. beregn, for ^ 1^ 1^ 206'HC1-H20: C ^7'ol> H 5,62-, N 7,44 Funnet: C 48,09; H 5,74; N 7,42

Eksempel 2

A. Fremstilling av N-( l- klorethyl)- succinimid

50,0 g (0,40 mol) N-vinylsuccinimid oppløses i 1000 ml carbontetraklorid, 5,20 g (0,020 mol) stanniklorid tilsettes, og blandingen omrøres mens den mettes med hydrogenklorid i 6 timer ved 20 - 30°C. Efter 24 timer mettes blandingen igjen med hydrogenklorid i 1,5 timer. Ved utløpet av 48 timer dekanteres oppløsningen, og det gummiaktige residuum vaskes med 10 x 100 ml carbontetraklorid.

De forenede ekstrakter oppslemmes med 10 g diatoméjord, filtreres, og filtratet inndampes under nedsatt trykk til ca. 400 ml. N-(l-klorethyl)-succinimidet frafiltreres og tørres ved 20 - 30°C under nedsatt trykk, hvorved man får 38,4 g (59%) av hvitt, fast stoff som smelter ved 83,5 - 84,5°C.

B. Fremstilling av a-succinimidoethyl-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4~

difenylmethylendioxyfenyl)- 2- methylalaninat

En blanding av 30,66 g (0,o6o mol) L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-dif enylmethylendioxyf enyl ) -2-methylalanin , 9,70 g (0,o6o mol) N-(l-klorethyl)-succinimid, 6,07 g (0,060 mol) triethylamin og 75 ml tørt dimethylformamid omrøres ved 95°C i 19 timer. Reaksjonsblandingen helles i 750 ml vann, og produktet ekstraheres i 3 x 500 ml ethylacetat. De forenede organiske ekstrakter vaskes med 3 x 300 ml 5%-ig natriumhydroxydoppløsning, derpå med 3 x 300 ml mettet natriumkloridoppløsning, og tørres over vannfritt magnesiumsulfat. Efter filtrering behandles oppløsningen med 5 g trekull, filtreres, og oppløsningsmidlet fordampes under nedsatt trykk, hvorved man får 37,90 g (99%) a-succinimidoethyl-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenyl-methylendioxyfenyl)-2-methylalaninat som en blanding av diastereomere isomerer (a og (3) .

C Fremstilling av a-succinimidoethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat- hydroklorid

En suspensjon av 20,18 9 (0,032 mol) a-succinimidoethyl-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalaninat i 275 ml 25 volum% absolutt ethanol-75 volum% ethylacetat-oppløsning hydrogeneres med 8,5 g 10%-ig palladium-på-carbonkatalysator ved et begynnelsestrykk på 2,8 kg/cm og værelsetemperatur i 23 timer. Katalysatoren frafiltreres, og filtratet inndampes under nedsatt trykk ved 30 - 40°C. Residuet oppløses i 250 ml lo volum% ethanol-90 volum% ethylacetat-oppløsning og omrøres med 20 ml mettet nat-riumcarbonatoppløsning og ca. 30 g. vannfritt natriumcarbonat i

10 minutter. Efter filtrering tørres filtratet over vannfritt mag-nesiumsulf at, filtreres og inndampes til tørrhet under nedsatt trykk. Residuet oppløses i 130 ml tørr kloroform, oppløsningen av-kjøles på isbad og mettes med hydrogenklorid i 15 minutter. Det faste stoff oppsamles, vaskes ved å suspendere det i 100 ml vannfri ether tre ganger og derpå oppslemme det i 300 ml ethylacetat under nitrogen i en korket kolbe ved værelsetemperatur over natten. a-succinimidoethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat-hydrokloridet oppsamles, omrøres i 300 ml hexan i 2 timer og tørres i vakuumekssikator over calciumklorid, hvorved man får 8,32 g (62%)

av hydrokloridet av en blanding av a- og p-isomerer, iakttatt Rf =0,7 ved tynnskiktskromatografi (fluorescerende silicagelplate, 50 volum% methanol-50 volum% benzen-oppløsningsmiddel).

Anal. beregn, for <C>l<6H>20N206.HC1.1/2 CH3C02C2H^: C 51,86; H 6,05;

N 6,7 Funnet: C 51,98; H 5,87;

N 6,65

Eksempel 3

A. Separasjon av a-succinimidoethyl-L-N-carbobenzyloxy-3-(3>4-dihydroxyfenylmethylendioxyfenyl)- 2- methylalaninat- isomerer

En blanding av 150,5 g av de diastereomere isomerer fra eksempel 2 oppløses i en kokende blanding av 1200 ml benzen og 100 ml absolutt methanol, filtreres, og filtratet inndampes til et volum på ca. 700 ml. 100 ml absolutt methanol tilsettes til oppløsningen som så fortynnes til blakning med lOOO ml hexan, podes og skrapes for å bevirke krystallisasjon. Blandingen avkjøles ved 5°C i ca. 16 timer, og den rå krystallinske a-isomer oppsamles så, vaskes ved suspendering i 200 ml av en 50:50 blanding (volum) av benzen og hexan og tørres ved 70°C. Produktet veier 68,1 g og smelter ved 185,5 - 191°C. En analyseprøve smelter ved 199,5 - 201,5°C efter ytterligere to omkrystallisasjoner.

Anal. beregnet for C^H^I^Og: C 70,02; H 5,40; N 4,4l

Funnet: C 70,22; H 5,52; N 4,29

De forenede morluter og vaskinger fra a-isomeren inndampes til tørrhet under nedsatt trykk ved 6o°C, hvorved man får 79,3 g av (3-isomeren som en meget viskøs olje.

B. Fremstilling av a-succinimidoethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methy lalaninat - hydroklor id- dihydrat (( 3- isomer)

En oppløsning av 10,0 g (0,016 mol) a-succinimidoethyl-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalaninat ((3-isomer) i 140 ml 25 volum% absolutt ethanol-75 volum% ethylacetat-oppløsning hydrogeneres med 4,2 g 10%-ig palladium-på-carbonkatalysator ved et begynnelsestrykk på 2,8 kg/cm<2> og værelsetemperatur i 20 timer inntil hydrogenopptagelsen er fullstendig. Katalysatoren frafiltreres under nitrogen, filtratet syres med 2,0 ml 9,4 N ethanolisk hydrogenklorid og inndampes til tørrhet under nedsatt trykk ved 30 - 40°C. Det amorfe, faste residuum oppløses i 50 ml varm 95%-ig ethanol (5% vann), filtreres, og filtratet fortynnes til begynnende blakning med 68 ml vannfri ether, podes og skrapes for å bevirke krystallisasjon. Produktet oppsamles og omrøres i 300 ml vannfri ether for å fjerne eventuell difenylmethan. Efter 1 time oppsamles det faste stoff og tørres ved 70°C over natten, hvorved man får 3,7 g materiale som smelter ved 123 - 126°c (spaltn.). Omkrystallisasjon fra 20 ml 95%-ig ethanol gir 3,36 g (51%) a-succin-imidoethyl -L-3- (3 ,4-dihydroxyf enyl) -2-methylalaninat -hydroklorid-dihydrat (|3-isomer) som dihydrat som smelter ved 129 - 131 C (spaltn.)

(tørret ved 70°C over natten), som er homogent ved tynnskiktskromatografi (fluorescerende silicagelplate, 50 volum% methanol-50 volum% benzen-oppløsningsmiddel), Rf = 0,7-

Anal. beregn, for C^H^r^Og .HC1.2H20: C 47,00; H 6,l6; N 6,85 Funnet: C 46,85, 47,09; H 6,12, 6,l6;

N 6,76, 6,61

[a]2/* = + 33,46°(C = 1,5 CH30H)

Eksempel 4

A. Fremstilling av a-succinimidoethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat - hydroklorid fg- isomer)

En oppløsning av 10,0 g (0,016 mol) a-succinimidoethyl-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalaninat (a-isomer) i 140 ml 25 volum% absolirtt ethanol-75 volum% ethylacetat-oppløsning hydrogeneres med 4,2 g 10%-ig palladium-på-carbonkatalysator ved et begynnelsest rykk på o 2,8 kg/cm 2 og værelsetemperatur i 27,5 timer inntil hydrogenopptagelsen er fullstendig. 2 ml av en 9,4 N ethanolisk oppløsning av vannfritt hydrogenklorid tilsettes,

og katalysatoren fjernes ved filtrering gjennom en plate diatoméjord. Efter inndampning under nedsatt trykk ekstraheres residuet ved rystning med 200 ml diethylether, to ganger med 200 ml benzen og til slutt med 200 ml diethylether. Materialet som er tilbake efter disse ekst raksjoner, er det ønskede a-succinimidoethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat-hydroklorid-diethylether-solvat (a-isomer), Rf = 0,7 (tynnskiktskromatografi, fluorescerende silicagelplate, 5o volum% methanol-50 volum% benzen-oppløsnings-middel) forurenset med 12% difenylmethan.

[a]24 = -18,75 (C = 1,68, CHgOH) .

Eksempel 5

A. Fremstilling av 2-trifluoracetamidoethyl-L-N-carbobenzyloxy-3-( 3, 4- difenylmethylendioxyfenyl)- 2- methylalaninat

En oppløsning av 5,09 9 (0,010 mol) L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-dif enylmethylendioxyf enyl) -2-methylalanin , 1,01 g (0,010 mol) triethylamin, og 1,7° g (0,010 mol) N-(2-klorethyl)-2,2,2-trifluoracet - amid i 20 ml tørt dimethylformamid omrøres ved 110°C i 20 timer under nitrogen. Den avkjølte reaksjonsblanding helles i 500 ml isvann,

og produktet ekstraheres i 3 x 500 ml ethylacetat. De forenede ekstrakter vaskes med 200 ml vann, tørres over magnesiumsulfat, filtreres og inndampes til en olje under nedsatt trykk. Den gjenværende olje oppløses i 100 ml ethylacetat, ekstraheres med 2 x 50 ml 5%-ig natriumhydroxydoppløsning, vaskes med 50 ml vann og tørres over magnesiumsulfat. Filtrering og inndampning under nedsatt trykk gir 4,92 g av en olje. Kromatografi av denne olje på 200 g silicagel og eluering med en 5%-ig oppløsning av methanol i kloroform gir 4,11 g (63,4%) 2-trifluoracetamidoethyl-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difeny1-.. methylendioxyf enyl) -2-methylalaninat som en olje, homogen ved tynnskiktskromatografi (fluorescerende silicagelplate utviklet med 5 volum% methanol-95 volum% kloroform) Rf = 0,8-

B. Fremstilling av 2-trifluoracetamidoethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2- methylalaninat- hydroklorid

En oppløsning av 2,0 g (0,0031 mol) 2-trifluoracetamidoethyl-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalaninat i 125 ml absolutt ethanol og 1,0 g 10%-ig palladium-på-carbonkatalysator hydrogeneres ved værelsetemperatur og et begynnelsestrykk på 2.5 kg/cm i 5 timer og 40 minutter inntil hydrogenopptagelsen er fullstendig. Katalysatoren fjernes ved filtrering under nitrogen gjennom en diatoméjord filterplate, og filtratet inndampes under nedsatt trykk ved en temperatur på 20 - 30°C. Residuet oppløses i 25 ml absolutt ethanol, overføres til hydrokloridet ved tilsetning av 2 ml 7.6 N ethanolisk vannfri hydrogenkloridoppløsning og inndampes så under nedsatt trykk. Residuet felles to ganger ved oppløsning i ethanol og tilsetning av tilstrekkelig ethylether til å felle produktet, hvorved man får 800 mg (66,6%) 2-trifluoracetamidoethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat-hydroklorid som et ethanol-solvat , homogent ved tynnskiktskromatografi (fluorescerende silicagel-^1 «te utviklet med 50 v ;^um% methanol-50 volum% kloroform) Rf = 0,8-

Anal. beregn, for C^H-^F^C^.HC1 .C^OH: C 44,40; H 5,59; N 6,47 Funnet: C 44,55; H 5,29; N 6,72

Eksempel 6

A. Fremstilling av 2-nicotinamidoethyl-L-N-carbobenzyloxy-3-(3 ,4-difenylmethylendioxyfenyl)- 2- methylalaninat

En oppløsning av 5,84 g (0,015 mol) L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalanin, 1,52 g (0,015 mol) triethylamin og 2,77 9 (0,015 mol) N-(2-klorethyl)-nicotinamid i 20 ml tørt dimethylformamid omrøres under nitrogen ved 95°C i 20 timer.

Den avkjølte reaksjonsblanding helles i 200 ml isvann, og produktet ekstraheres i 3 x 175 ml ethylacetat. De forenede ekstrakter vaskes med 100 ml mettet natriumbicarbonatoppløsning, 100 ml vann og tørres over magnesiumsulfat. Efter filtrering fjernes oppløsningsmidlene under nedsatt trykk, hvorved man får 6,28 9 (85%) 2-nicotinamido-ethyl-L-N -carbobenzyloxy -3- (3 ,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalaninat , homogent ved tynnskiktskromatografi (fluorescerende silicagelplate utviklet med en 20 volum% methanol-80 volum% benzen-oppløs-ning) iakktatt Rf = 0,45.

B. Fremstilling av 2-nicotinamiiroethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat- dihydrobromid

En blanding av 1,0 g (2,0 mmol) 2-nicotinamidoethyl-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalaninat og 10 ml 30 - 32%-ig oppløsning av vannfritt hydrogenbromid i eddiksyre hensettes ved 20 - 25°C i 30 minutter inntil gassutviklingen er avsluttet. Den homogene oppløsning inndampes under nedsatt trykk ved 20 - 25°C,

og residuet omrøres med 50 ml diethylether i 3 dager. Det nesten hvite, faste stoff oppsamles, vaskes med 50 ml vannfri ethylether og tørres under høyvakuum (0,1 - 0,3 mm Hg) ved 20 - 25°C, hvorved man får 800 mg (77%) 2-nicotinamidoethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat-dihydrobromid, iakttatt Rf = 0,5 ved tynnskiktskromatografi (fluorescerende silicagelplate utviklet med en oppløsning inneholdende like volumdeler n-butanol, eddiksyre, 1%-ig vandig nat riumbisulfit, benzen og aceton).

Anal. beregn, for C^H^N^. 2HBr. 2H20: C 38,79; H 4,88; N 7,54 Funnet: C 38,79; H 4,56; n 7,37 Eks empel 7

A. Fremstilling av g- klorethylpivalat

400 mg zinkklorid smeltes ved 0,2 - 0,5 mm trykk og avkjøles

til 25 - 30°C under nitrogen. 48 g (0,40 mol) pivaloylklorid tilsettes til det smeltede zinkklorid fulgt av 19,2 g (0,44 mol) acetaldehyd. Under tilsetningen av acetaldehydet som skjer så hurtig som mulig, omrøres reaksjonsblandingen og avkjøles for å forhindre tap av acetaldehyd på grunn av reaksjonens eksoterme natur. Efter oppvarmning under tilbakeløp i 1 time gir destillasjon 3° 9 ( 55%) a-klorethylpivalat, kp. 32 - 34°C ved 4 mm.

B. Fremstilling av a-pivaloyloxyethyl-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4~

difenylmethylendioxyfenyl)- 2- methylalaninat

Til en omrørt oppløsning av 9,0 g (0,018 mol) L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalanin i 25 ml tørt dimethylformamid tilsettes 1,80 g (0,018 mol) triethylamin fulgt av 2,96 g (0,018 mol) a-klorethylpivalat. Efter omrøring ved 90 - 95°C

i 20 timer helles reaksjonsblandingen i 350 ml vann, og produktet ekstraheres med 3 x lOO ml ethylether. Etherekstraktene forenes,

vaskes med 50 ml 5%-ig natriumhydroxydoppløsning, 50 ml vann og tørres over vannfritt magnesiumsulfat. Efter filtrering fjernes oppløsningsmidlene under nedsatt trykk, hvorved man får 7,9 9

(68,9%) rått a-pivaloyloxyethyl-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenyl-methylendioxyf enyl)-2-methylalaninat.

C. Fremstilling av a-pivaloyloxyethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat- hydroklorid

En oppløsning av 7,8 g a-pivaloyloxyethyl-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalaninat i 140 ml absolutt ethanol og 11 ml 8 N ethanolisk vannfri hydrogenkloridoppløsning hydrogeneres med 3,7 9 10%-ig palladium-på-carbonkatalysator ved 20 - 25°C og et begynnelsestrykk på 2,46 kg/cm<2> i 19 timer inntil hydrogenopptagelsen opphører. Efter fjernelse av katalysatoren ved filtrer-

ing fjernes ethanolen under nedsatt trykk. Residuet omrøres over natten med 80 ml benzen. Benzenet fjernes ved dekantering, erstattes med 80 ml hexan, omrøres og hexanet fradekanteres. Residuet opp-

løses i 30O ml ethylacetat, omrøres kort med en blanding av 5 g fast natriumcarbonat og 5 ml mettet natriumcarbonatoppløsning, og tørres over vannfritt magnesiumsulfat. Efter filtrering tilsettes 3 ml 9,6 N ethanolisk vannfritt hydrogenklorid, og oppløsningen inndampes under nedsatt trykk til tørrhet. Videre tørring ved 65°C og 0,2 mm trykk gir 2,16 g (47,2%) av a-pivaloyloxyethylester-h'ydrokloridet.

Anal. beregn, for C1?H25N06.HC1: C 54,32; H 6,97; N 3,73

Funnet: C 54,47; H 7,36; n 3,39

Eksempel 8

A. Fremstilling av L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalanin

Til en omrørt oppløsning av 3,0 g (0,0126 mol) L-3-(3,4-di-hydroxyf enyl ) -2 -methylalanin-seskvihydrat i 20 ml 2 N natriumhydroxyd-oppløsning holdt ved 0°C under en nitrogenatmosfære, tilsettes en oppløsning av 3 ml carbobenzyloxyklorid i 10 ml diethylether. Efter omrøring ved 0°C i 1 time, fulgt av 1 time ved 25°C, ekstraheres reaksjonsblandingen med 50 ml diethylether. Den vandige del syres til pH 3 - 4 med 6 N saltsyreoppløsning, og det urene produkt ekstraheres i 100 ml ethylacetat og vaskes tre ganger med 25 ml vann.

Efter tørring over vannfritt magnesiumsulfat og filtrering fjernes oppløsningsmidlet under nedsatt trykk, hvorved man får 1,5 g (34,5%) L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalanin som en viskøs olje.

B. Fremstilling av pivaloyloxymethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat- hydroklorid

En blanding av 2,1 g (6,1 mmol) L-N-carbobenzyloxy-3~(3,4-dihydroxyf enyl ) -2-methylalanin , 0,93 g (6,2 mmol) klormethylpivalat, 0,63 g (6,3 mmol) kaliumbicarbonat og 0,15 g kaliumjodid i 60 ml aceton og 4 ml vann omrøres ved tilbakeløp under nitrogen i 18 timer. Efter inndampning under nedsatt trykk tilsettes 50 ml vann, og N-carbobenzyloxyderivatet av den ønskede ester ekstraheres med 3 x 50 ml diethylether. Etherekst raktet vaskes med 50 ml vann, tørres over vannfritt magnesiumsulfat og inndampes under nedsatt trykk. Det olje-aktige residuum oppløses i 100 ml absolutt ethanol og 4 ml 9,6 N ethanolisk vannfri hydrogenkloridoppløsning og hydrogeneres med 1 g 10%-ig palladium-på-carbonkatalysator ved et begynnelsestrykk på 2,74 kg/cm i 24 timer. Efter fjernelse av katalysatoren ved filtrering inndampes filtratet under nedsatt trykk. Residuet oppløses i 5 ml vann, gjøres basisk til pH 8 med en standard natriumcarbonat-oppløsning, og det uoppløselige produkt ekstraheres i 25 ml ethylacetat. Efter tørring over vannfritt magnesiumsulfat og filtrering tilsettes 1 ml 9,6 N éthanolisk vannfri hydrogenkloridoppløsning, og oppløsningen inndampes under nedsatt trykk, hvorved man får 0,50 g (22,6%) av hydrokloridet av pivaloyloxymethyl-L-3-(3,4-dihydroxy-fenyl)-2-methylalaninat-hydroklorid, Rf = 0,86 ved tynnskiktskromatografi (fluorescerende silicagelplate utviklet med en 5:2:3 i volum blanding av n-butanol:eddiksyre:vann).

Anal. beregn, for C-^H^NOg.HC1: C 53,11; H 6,69; N 3,87

Funnet: C 53,76; H 6,64; N 3,69

Eksempel 9

A. Fremstilling av 1,2-ethylen-bis-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-di-hydroxyf enyl) - 2- methylalaninat

En oppløsning av 7,8 g (0,023 mol) L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-dihydroxyf enyl ) -2-methylalanin , 1,88 9 (0,01 mol) 1,2-dibromethan og 2,1 g (0,021 mol) triethylamin i 20 ml dimethylformamid oppvarmes ved 85 - 90°C i 10 timer og helles så i 200 ml vann. Den blokkerte bis-ester ekstraheres med 3 x 100 ml ethylacetat og vaskes med 100 ml mettet natriumbicarbonatoppløsning og lOO ml mettet natriumklorid-oppløsning. Efter tørring over vannfritt magnesiumsulfat og inndampning under nedsatt trykk ved 30 - 40°C fåes 5,3 9 (74%) 1,2-ethylen-bis-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat .

B. Fremstilling av 1,2-ethylen-bis-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat- dihydroklorid

En oppløsning av 5,0 g (6,98 mmol) 1,2-ethylen-bis-L-N-carbobenzyloxy -3- (3 ,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat i 120 ml av en 25 volum% methanol-75 volum% ethylacetat-blanding hydrogeneres ved et begynnelsest rykk på o 2,46 kg/cm 2 med 2 g 10%-ig palladium-påo-carbonkatalysator inntil hydrogenopptagelsen er fullstendig. Efter filtrering for å fjerne katalysator fjernes oppløsningsmidlene under nedsatt trykk. Residuet oppløses i en lo volum% ethanol-90 volum% ethylacetat-blanding, omrøres med 5 ml mettet natriumcarbonatoppløs-ning og 5 g fast natriumcarbonat. Vannfritt magnesiumsulfat tilsettes, blandingen filtreres, og filtratet syres med 1 ml 9,6 N ethanolisk vannfri hydrogenkloridoppløsning. Oppløsningsmidlene fjernes under nedsatt trykk ved en temperatur på 20 - 30°C, hvorved man får 1,2-ethylen-bis-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat-dihydroklorid som ethylacetatsolvatet.

Anal. beregn, for C^H^N^g . 2HC1. 2C^Hg02 : C 51,65; H 6,65> N 4,07 Funnet: C 50,91; H 6,69; N 4,27

Eksempel IO

A. Fremstilling av 1,3-propylen-bis-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-di-hydroxyfenyl)- 2- methylalaninat

En oppløsning av 7,8 g (0,023 mol) L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-dihydroxyf enyl)-2-methylalaninat, 2,1 g (0,020 mol) triethylamin og 2,02 g (0,010 mol) 1,3-dibrompropan i 20 ml dimethylformamid oppvarmes under nitrogen i 15 timer ved 95°C og helles så i 200 ml vann. Produktet ekstraheres med 3 x 100 ml ethylacetat og vaskes med 50 ml fortynnet (5%) natriumbicarbonatoppløsning, 50 ml vann og til slutt 50 ml mettet nat riumkloridoppløsning. Efter tørring over vannfritt magnesiumsulfat og inndampning under nedsatt trykk fåes 5,4 9 (73,8%) 1,3-propylen-bis-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-dihydroxy-fenyl)-2-methylalaninat.

B. Fremstilling av 1,3-propylen-bis-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat- dihydroklorid

En oppløsning av 5,4 9 (7,39 mmol) 1,3-propylen-bis-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat i 100 ml 25 volum% ethanol-75 volum% ethylacetat hydrogeneres ved et begynnelsestrykk på 2,46 kg/cm med 255 g lO%-ig palladium-på-carbonkatalysator ved 25°C inntil hydrogenopptagelsen opphørte. Efter fjernelse av katalysatoren ved filtrering, fjernes oppløsningsmidlene under nedsatt trykk. Residuet oppløses i 10 volum% methanol-90 volum% ethylacetat, omrøres med 5 ml mettet natriumcarbonatoppløsning og 5 g fast natriumcarbonat. 5 9 vannfritt magnesiumsulfat tilsettes, blandingen filtreres, og filtratet gjøres surt med 1 ml 9,6 N ethanolisk vannfri hydrogenkloridoppløsning. Oppløsningen inndampes under nedsatt trykk til ca. 50 - 6o ml volum og dekanteres fra en uoppløselig gummi. Gummien omrøres med 25 ml ethylacetat, filtreres og tørres, hvorved man får 1,74 9 (33%) 1,3-propylen-bis-L-3-(3,4-dihydroxy-fenyl)-2-methylalaninat-dihydroklorid som ethylacetatsolvatet ,

Rf = 0,56, tynnskiktskromatografi (fluorescerende silicagelplate utviklet med en oppløsning inneholdende like volumdeler n-butanol, aceton, eddiksyre, vann og benzen).

Eksempel 11

A. Fremstilling av 1- klor- l- succinimidopropan

Vannfritt hydrogenklorid bobles gjennom en blanding av lo g (0,072 mol) N-propenylsuccinimid og 1,04 9 stanniklorid i 6 timer. Oppløsningen hensettes ved værelsetemperatur i 10 dager, idet oppløs-ningen igjen mettes med hydrogenkloridgass efter 3 og 4 dager. Opp-løsningsmidlene fjernes under nedsatt trykk ved 30 - 40°C, hvorved man får 1-klor-l-succinimidopropan som en. gul olje.

B. Fremstilling av a-succinimidopropyl-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-dif enylmethylendioxyf enyl )- 2- methylalaninat

En oppløsning av 10,2 g (0,020 mol) L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-3-methylalanin, 2,1 g (0,021 mol) triethylamin og 3,51 g (0,020 mol) 1-klor-l-succinimidopropan i 20 ml dimethylformamid oppvarmes ved 90°C i 10 timer og helles så i 200 ml vann. Produktet ekstraheres med 3 x 100 ml ethylether og vaskes med 50 ml 5%-ig natriumhydroxyd, 50 ml vann og 50 ml av en mettet oppløs-ning av natriumklorid. Efter tørring over vannfritt magnesiumsulfat og filtrering fjernes oppløsningsmidlene under nedsatt trykk, hvorved man får 8,6 g (68%) a-succinimidopropyl-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-dif enylmethylendioxyfenyl)-2-methylalaninat, Rf =0,2, tynnskikt-kromatografi (fluorescerande silicagelplate utviklet med kloroform). •

C. Fremstilling av a-succinimidopropyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat- hydroklorid

En oppløsning av 8,6 g (0,014 mol) a-succinimidopropyl-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalaninat i 120 ml 25 volum% ethanol-75 volum% ethylacetat-oppløsning hydrogeneres med 4 g 10%-ig palladium-på-carbonkatalysator ved et begynnelsestrykk på o 2,81 kg/cm 2 i 18 timer inntil hydrogenopptagelsen opphører. Efter fjernelse av katalysatoren ved filtrering, fjernes oppløsnings-midlene under nedsatt trykk ved 30 - 4o°C. Residuet oppløses i 10 volum% ethanol-90 volum% ethylacetat og omrøres med 5 ml mettet natriumcarbonatoppløsning og overskudd av fast natriumcarbonat i

2 minutter. 10 g vannfritt magnesiumsulfat tilsettes, blandingen filtreres, og filtratet gjøres surt med 2 ml 9,6 N ethanolisk hydro-genkloridoppløsning. Oppløsningen inndampes til tørrhet under nedsatt trykk, lOO ml ethylacetat tilsettes, og blandingen inndampes igjen til tørrhet under nedsatt trykk. lOO ml ethylacetat tilsettes, og efter omrøring ved 25°C i 1 time fjernes produktet ved filtrering og tørres under nedsatt trykk, hvorved man får 3,0 g (51,0%) a-succin-imidopropyl-L-3- (3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat-hydroklorid som ethanolsolvatet, Rf =0,63, tynnskiktskromatografi (fluorescerende silicagelplate utviklet med 30 volum% methanol-70 volum% benzen) Anal. beregn, for C-^H^N.^ .HC1 .C^OH: C 52,71; H 6,75-, N 6,47 Funnet: C 53,62; H 6,51* N 6,32

Eksempel 12

A. Fremstilling av N- klormethylglutarimid

8,35 9 (0,070 mol) thionylklorid tilsettes langsomt til en oppløsning av 9,0 g (0,063 mol) N-hydroxymethylglutarimid i 50 ml benzen ved 4o°C. Efter at tilsetningen er avsluttet, omrøres oppløs-ningen under tilbakeløp i 1,5 timer og så ved værelsetemperatur i ytterligere 1,5 timer. Benzenet fjernes under nedsatt trykk ved 30 - 40°C, og residuet destilleres, hvorved man får 5,4 9 (53%) N-klormethylglutarimid, kp. 97 - 100°C ved 0,1 mm.

B. Fremstilling av glutarimidomethyl-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)- 2- methylalaninat

En oppløsning av 10,2 g (0,020 mol) L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalanin, 2,02 g (0,020 mol) triethylamin og 3,23 g (0,020 mol) N-klormethylglutarimid i 20 ml dimethylformamid omrøres ved 70°C i 5 timer, derpå.ved 20 - 30°C i 5 timer, og til slutt helles blandingen i 200 ml vann. Produktet ekstraheres med 3 x 100 ml ethylacetat, vaskes med 50 ml 5%-ig natriumhydroxydoppløsning, 50 ml vann og 50 ml mettet natriumklorid-oppløsning og tørres over vannfritt magnesiumsulfat. Efter filtrering fjernes oppløsningsmidlene under nedsatt trykk, hvorved man får 12,1 g (95%) glutarimidomethyl-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenyl-methylendioxyfenyl)-2-methylalaninat, Rf = 0,14 ved tynnskiktskromatografi (fluorescerende silicagelplate utviklet med kloroform).

C. Fremstilling av glutarimidomethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat- hydroklorid

En oppløsning av 12 g (0,0189 mol) glutarimidomethyl-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalaninat i 130 ml 25 volum% absolutt ethanol-75 volum% ethylacetat hydrogeneres med 5 g 10%-ig palladium-på-carbonkatalysator ved 20 - 25°C og et begynnelsestrykk på 2,81 kg/cm i 18 timer inntil hydrogenopptagelsen opp-hører. Efter fjernelse av katalysatoren ved filtrering og inndampning til tørrhet under nedsatt trykk oppløses residuet i 200 ml 10 volum% absolutt ethanol-90 volum% ethylacetat-oppløsning og om-røres med 5 ml av en mettet natriumcarbonatoppløsning og overskudd

av fast carbonat i 2 minutter. lo g vannfritt magnesiumsulfat tilsettes og fjernes efter noen få minutter ved filtrering. Oppløsnings-midlene fjernes under nedsatt trykk, residuet vaskes med 25 ml hexan og derpå med 25 ml ethylacetat og tørres under nedsatt trykk. Resi-duet behandles igjen med natriumcarbonat som ovenfor for å fjerne de

siste spor av a-methyl-3,4-dihydroxyfenylalanin og overføres til hydrokloridsaltet med 3 ml 9,6 N ethanolisk vannfritt hydrogenklorid, hvorved man får 3,0 g (36%) glutarimidomethyl-L-3"(3,4-dihydroxy-fenyl)-2-methylalaninat-hydroklorid som ethylacetatsolvatet, homogent ved tynnskiktskromatografi (fluorescerende silicagelplate utviklet med 30 volum% methanol-70 volum% benzen), Rf = 0,56.

Anal. beregn, for Cl6H2oN206.HCl. 3/4 C^H^: C 51,99; H 6,20; N 6,38 Funnet: C 52,15; H 6,45; N 6,53

Eksempel 13

A. Fremstilling av 2-[L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylen-dioxyf enyl)-2-methylalanyloxymethyl]-1,2-benzisothiazol-3(2H)-on- 1, 1- dioxyd

En oppløsning av 7,65 g (0,015 mol) L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalanin, 1,5 g (0,015 mol) triethylamin og 3,0 g (0,015 mol) N-klormethylsaccharin i 15 ml dimethylformamid oppvarmes ved 75 - 80°C i 17 timer og helles derpå i 150 ml vann. Produktet ekstraheres med 3 x lOO ethylacetat, vaskes med 50 ml mettet natriumbicarbonatoppløsning, 50 ml vann og 50 ml mettet nat riumkloridoppløsning og tørres over vannfritt magnesiumsulfat.

Efter filtrering fjernes oppløsningsmidlene under nedsatt trykk,

hvorved man får 9,3 g (100%) 2-[L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenyl-methylendioxyfenyl)-2-methylalanyloxymethyl]-1,2-benzisothiazol-3(2H)-on-1,1-dioxyd, Rf = 0,32, tynnskiktskromatografi (fluorescer-

ende silicagelplate utviklet med kloroform).

B. Fremstilling av 2-[L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalanyloxy-methyl]- l, 2- benzisothiazol- 3( 2H)- on- 1, 1- dioxyd- hydroklorid

En oppløsning av 3,0 g (0,0043 mol) 2-[L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalanyloxymethyl]-1,2-benz-isothiazol-3(2H)-on-1,1-dioxyd i 100 ml absolutt ethanol og 5 ml 8 N ethanolisk vannfri hydrokloridoppløsning hydrogeneres med 1,5 g lO%-ig palladium-på-carbonkatalysator ved 20 - 25°C og et begynnelsestrykk på o 2,46 kg/cm 2 i 20 timer inntil hydrogenopptagelsen opphører. Efter fjernelse av katalysatoren ved filtrering og inndampning til tørrhet under nedsatt trykk omrøres residuet med 50 ml ethylacetat

i 1 time, og ethylacetatet fradekanteres. Residuet oppløses i 200 ml 20 volum% ethanol-80 volum% ethylacetat og omrøres med 10 ml mettet natriumcarbonatoppløsning og overskudd av fast natriumcarbonat.

IO g vannfritt magnesiumsulfat tilsettes og fjernes efter noen få minutter ved filtrering, og filtratet gjøres surt med 1 ml 9,6 N ethanolisk vannfri hydrogenkloridoppløsning. Oppløsningsmidlene fjernes under nedsatt trykk, hvorved man får 0,2 g (10,0%) 2-[L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalanyloxymethyl]-1,2-benzisothiazol-3(2H) -on-1,1-dioxyd-hydroklorid som ethylacetatsolvatet, Rf = 0,74, tynnskiktskromatografi (fluorescerende silicagelplate utviklet med et oppløsningsmiddel bestående av Like volumdeler benzen, vann, eddiksyre, n-butanol og aceton).

Anal. beregn, for C^H^N^yS .HC1. l/4c^Hg02: C 49,08; H 4,55; N 6,03 Funnet: C 49,27; H 4,76; N 5,65

Eksempel 14

A. Fremstilling av 1-methyl-2-[L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-dihydroxy -

fenyl)- 2- methylalanyloxymethyl]- imidazol

En oppløsning av 7,8 9 (0,0226 mol) L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-dihydroxyf enyl)-2-methylalanin, 4,2 g (0,042 mol) triethylamin og 3,34 g (0,0256 mol) l-methyl-2-klormethylimidazol i 20 .ml dimethylformamid oppvarmes ved 70 - 75°C i 10 timer og helles så i 200 ml vann. Produktet ekstraheres med 3 x 100 ml ethylacetat, vaskes med 50 ml mettet natriumbicarbonatoppløsning, 50 ml mettet natriumklorid-oppløsning og inndampes under nedsatt trykk, hvorved man får 2,2 g (22%) l-methyl-2-[L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methyl-alanyloxymethyl ] -imidazol , homogent ved tynnskiktskromatografi (fluorescerende silicagelplate utviklet med 15 volum% methanol-

85 volum% kloroform), Rf = 0,66.

B. Fremstilling av L-l-methyl-2-[2-(3,4-dihydroxybenzyl)-alanyloxy-methyl1- imidazol- dihydroklorid- dxhydrat

En oppløsning av 2,1 g (4,78 mmol) l-methyl-2-[L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalanyloxymethyl]-imidazol i 100 ml absolutt ethanol hydrogeneres med 1 g 10%-ig"palladium-på-carbonkatalysator ved et begynnelsestrykk på 2,46 kg/cm i 4 timer. Efter fjernelse av katalysatoren ved filtrering og inndampning til 50 ml under nedsatt trykk tilsettes 2 ml 9,6 N ethanolisk vannfritt hydrogenklorid, og de gjenværende oppløsningsmidler fjernes under nedsatt trykk. Residuet omrøres med 200 ml 20 volum% ethanol-80 volum% ethylacetat, 10 ml mettet natriumcarbonatoppløsning og overskudd av fast natriumcarbonat. 10 g vannfritt magnesiumsulfat tilsettes og fjernes efter noen få minutter ved filtrering. Filtratet gjøres surt med 1 ml 9,6 N ethanolisk vannfri hydrogenkloridoppløsning. Oppløs-ningsmidlene fjernes under nedsatt trykk, hvorved man får 0,2 g (8,5%) L-l-methyl-2-[2-(3,4-dihydroxybenzy1)-alanyloxymethyl]-imidazol-dihydroklorid-dihydrat som ethylacetatsolvatet, Rf = 0,3 ved tynnskiktskromatografi (fluorescerende silicagelplate utviklet med en oppløsning bestående av like volumdeler n-butanol, eddiksyre, vann, benzen og aceton)

Anal. beregn, for C^H-^N.^. 2HC1. 2H20. l/2C^Hg02 : C 44,55; H 6,34;

N 9,17 Funnet: C 44,62; H 6,84;

N 8,95

Eksempel 15

A. Fremstilling av l- methyl- 3- klormethylhydantoin

30 ml thionylklorid tilsettes langsomt i løpet av 20 minutter til en godt omrørt blanding av 25 g (0,173 mol) l-methyl-3-hydroxy-methylhydantoin og l6o ml benzen under tilbakeløp. Efter omrøring under tilbakeløp i 2 timer inndampes reaksjonsblandingen til tørrhet under nedsatt trykk, 70 ml benzen tilsettes, og oppløsningen inndampes igjen til tørrhet. Efter gjentagelse av denne fremgangsmåte nok en gang med 70 ml benzen ekstraheres residuet med 3 x 100 ml carbontetraklorid. Fjernelse av oppløsningsmidler under nedsatt trykk gir 15,7 9 (55,7%) l-methyl-3-klormethylhydantoin.

B. Fremstilling av l-methyl-3-[L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenyl-methylendioxyfenyl)- 2- methylalanyloxymethyl]- hydantoin

En oppløsning av 10,2 g (0,020 mol) L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalanin, 2,1 g (0,021 mol) triethylamin og 3,25 g (0,020 mol) l-methyl-3-klormethylhydantoin i 23 ml dimethylformamid oppvarmes ved 70°C i 18 timer og helles så i 230 ml vann. Produktet ekstraheres med 3 x 100 ml ethylacetat, vaskes med 50 ml fortynnet (5%) natriumhydroxydoppløsning, 50 ml vann og 50 ml mettet natriumkloridoppløsning, og tørres over vannfritt magnesiumsulfat. Efter filtrering fjernes oppløsningsmidlene under nedsatt trykk, hvorved man får 11,7 9 (92%) l-methyl-3-[L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalanyloxymethyl]-hydantoin.

C Fremstilling av L-l-methyl-3-[2-(3,4-dihydroxybenzyl)-alanyloxy- methyl ]- hydantoin - hydroklorid - hyarat

En oppløsning av 4,0 g (6,3 mmol) 1-methyl-3-[L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalanyloxymethyl]-hydantoin i 140 ml absolutt ethanol og 2 g 10%-ig palladium-på-carbonkatalysator hydrogeneres ved et begynnelsestrykk på 2,53 kg/cm<2> i

20 timer. Efter fjernelse av katalysatoren ved filtrering og inh-dampning til tørrhet under nedsatt trykk vaskes residuet med lOO ml hexan. Det hexan-uoppløselige materiale oppløses i 150 ml IO volum% methanol-90 volum% ethylacetat, omrøres med 5 ml mettet natrium-carbonatoppløsning og overskudd av natriumcarbonat og tørres over vannfritt magnesiumsulfat. Efter filtrering gjøres filtratet surt med 2 ml 9,6 N ethanolisk vannfritt hydrogenklorid og inndampes til tørrhet under nedsatt trykk. Residuet omrøres med 80 ml ethylacetat i 3 timer, filtreres og tørres under nedsatt trykk, hvorved man får 0,50 g (18%) L-l-methyl-3-[2-(3,4-dihydroxybenzyl)-alanyl-oxymethyl]-hydantoin-hydroklorid-hydrat som ethylacetatsolvatet. Anal. beregn, for C^H^N^Og .HCl .H20.1/2C^Hg02: c 46,84; h 6,oi; n 9,64

Funnet: C 46,28; H 6,09; N 9,06

Eksempel 16

A. Fremstilling av 2-fenoxyethyl-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenyl-methylendioxyf enyl) - 2- methylalaninat

En oppløsning av 4,5 g (0,0088 mol) L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-dif enylmethylendioxyf enyl) -2-methylalanin, 0,90 g (0,009 mol) triethylamin og 1,81 9 (0,009 mol) 2-bromethylfenylether i 15 ml dimethylformamid oppvarmes ved JO - 75°C i 24 timer, avkjøles så og helles i 150 ml vann. Produktet ekstraheres med 3 x lOO ml por-sjoner ethylether, vaskes med 50 ml 5%-ig natriumhydroxydoppløsning, 50 ml vann og 50 ml mettet nat riumkloridoppløsning og tørres over vannfritt magnesiumsulfat. Efter filtrering fjernes oppløsnings-midlene under nedsatt trykk, hvorved man får 4,8 g (86,5) 2-fenoxy-ethyl-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalaninat , homogent ved tynnskiktskromatografi (fluorescerende silicagelplate utviklet med kloroform) Rf = o,91.

B. Fremstilling av 2-fenoxyethyl-L-3-(3,4-dihydroxybenzyl)-alaninat-hydroklorid- hemihydrat

En oppløsning av 4,7 g (7,5 mmol) 2-fenoxyethyl-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalaninat i

120 ml absolutt ethanol hydrogeneres ved 1,7 Q 10%-ig palladium-på-carbonkatalysator ved et begynnelsestrykk på l,4l kg/cm<2> i 20 timer. Efter frafiltrering av katalysatoren fjernes oppløsningsmidlene under nedsatt trykk, og residuet kromatograferes på en kolonne av 75 g silicagel. Eluering med 400 ml av en 5 volum% methanol-95 volum% benzen-blanding gir 1,42 g (58%) av esterbase, smp. 35 - 42°C homo-

gent ved tynnskiktskromatografi(fluorescerende silicagelplate utviklet med 30 volum% methanol-70 volum% benzen) Rf = 0,52. Basen overføres til hydrokloridsaltet ved oppløsning i 25 ml av en 50 volum% kloroform-50 volum% methanol-blanding og syring med 2 ml 9,6 N ethanolisk vannfri hydrogenkloridoppløsning. Oppløsningsmidler fjernes under nedsatt trykk, hvorved man får 2-fenoxyethyl-L-3-(3,4-dihydroxybenzyl ) -alaninat-hydroklorid-hemihydrat.

Anal. beregn, for C^H^NO^ .HC1.1/2H20: C 57,37; H 6,15; N 3,72 Funnet: C 57,17; H 6,16; N 3,41

Eksempel 17

A. Fremstilling av 2-succinimidoethyl-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-dif enylmethylendioxyf enyl) - 2- methylalaninat"

En oppløsning av 4,5 g (8,8 mmol) L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-dif enylmethylendioxyf enyl) -2-methylalanin , 0,90 g (9 mmol) triethylamin og 1,85 g (9,3 mmol) N-(2-bromethyl)-succinimid i 15 ml dimethylformamid oppvarmes ved 95°C i 19 timer, avkjøles så og helles i 150 ml vann. Produktet ekstraheres med 3 * 100 ml ethylether, vaskes med 50 ml 5%-ig natriumhydroxydoppløsning, 50 ml vann og 50 ml mettet natriumkloridoppløsning, og tørres over vannfritt magnesiumsulfat. Efter filtrering fjernes oppløsningsmidlene under nedsatt trykk, hvorved man får 3,8 9 (86%) 2-succinimidoethyl-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalaninat, homogent ved tynnskiktskromatografi (fluorescerende silicagelplate utviklet med kloroform) Rf = 0,27.

B. Fremstilling av 2-succinimidoethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat- hydroklorid- hemihydrat

En suspensjon av 2,5 g (3,94 mmol) 2-succinimidoethyl-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalaninat i 75 ml methanol, 75 ml ethanol og 3 ml 7,6 N ethanolisk vannfri hydrogen-kloridoppløsning hydrogeneres med 1,2 g 10%-ig palladium-på-carbonkatalysator ved et begynnelsestrykk på l,4l kg/cm i 20 timer. Efter fjernelse av katalysatoren ved filtrering fjernes oppløsningsmidlene under nedsatt trykk, og residuet omrøres med 25 ml benzen og derpå 25 ml ethylacetat. Det uoppløselige materiale behandles med 100 ml IO volum% ethanol-90 volum% ethylacetat, 5 ml mettet natriumcarbonat-oppløsning og 5 g fast natriumcarbonat . Det organiske ekstrakt tørres over vannfritt magnesiumsulfat, filtreres og inndampes under nedsatt trykk. 1 ml 9,6 N ethanolisk vannfri hydrogenkloridoppløs-ning tilsettes. Fjernelse av. alle oppløsningsmidler under nedsatt trykk gir 0,5 g (33%) 2-succinimidoethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat-hydroklorid-hemihydrat, homogent ved tynnskiktskromatografi (fluorescerende silicagelplate utviklet med 30 volum% methanol-70 volum% benzen), Rf = 0,4-

Anal. beregn, for Cl6H2Q<N>2<0>6.HC1.1/2H20: C 50,33; H 5,54; N 7,34 Funnet: C 50,89; H 5,65; N 7,22

Eksempel 18

A. Fremstilling av 1,2-ethylen-bis-[L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4~di-fenylmethylendioxyfenyl)- 2- methylalaninat]

En oppløsning av 10,18 9 (0,020 mol) L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-dif enylmethylendioxyfenyl)-2-methylalanin, 2,12 g (0,021 mol) triethylamin og 0,99 g (0,010 mol) 1,2-diklorethan i 35 ml dimethylformamid omrøres under nitrogen ved 105 - HO°C i 28 timer og helles så i 400 ml isvann. Produktet ekstraheres i 800 ml ethylether, vaskes med 100 ml 5%-ig natriumhydroxydoppløsning, 100 ml vann, tørres over vannfritt magnesiumsulfat, filtreres og inndampes under nedsatt trykk. Residuet kromatograferes på 800 g silicagel, 2,25 9 (21,5%) 1,2-ethylen-bis-[L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylen-dioxyf enyl ) -2-methylalaninat elueres med kloroform.

Fremstilling av L,L-2-[2-(3,4-difenylmethylendioxybenzyl)-alanyloxy]-ethyl-2-(3,4-dihydroxybenzyl)-alaninat-bishydrogen-oxalat

En oppløsning av 2,25 g (2,2 mmol) 1,2-ethylen-bis-[L-N-carbo~ benzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalaninat] i 100 ml absolutt ethanol hydrogeneres med 1,2 g 10%-ig palladium-på-carbonkatalysator ved et begynnelsestrykk på 2,11 kg/cm i 28 timer inntil hydrogenopptagelsen er avsluttet. Efter fjernelse av katalysatoren ved filtrering fjernes oppløsningsmidlene under nedsatt trykk. Residuet omrøres med lOO ml 10 volum% ethanol-90 volum% ethylacetat, 2 ml mettet natriumcarbonatoppløs.ning og 3 g fast nattiumcarbonat i 15 minutter og filtreres så. Filtratet tørres over vannfritt magnesiumsulfat, filtreres og inndampes under nedsatt trykk. Residuet kromatograferes over silicagel og elueres med 30 volum% methanol-70 volum% benzen, hvilket gir 220 mg produkt. Dette produkt overføres til oxalatsaltet med 500 mg oxalsyre i 10 ml ethanol ved feining med tilstrekkelig ethylether. Efter nok en feining fra 10 ml ethanol ved tilsetning av tilstrekkelig ethylether, fåes 246 mg (14%) L,L-2-[2-(3,4-difenyImethylendioxybenzyl)-alanyloxy]-ethyl-2 -

(3,4-dihydroxybenzyl)-alaninat-bishydrogenoxalat.

Anal. beregn, for C^H^N^g.20^0^: C 59,08; H 5,08; N 3,53 Funnet: c 59,15; H 5,18; N 3,55

Eksempel 19

A. Fremstilling av 2-fthalimidoethyl-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)- 2- methylalaninat

En oppløsning av 10,18 9 (0,020 mol) L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalaninat, 2,12 g (0,021 mol) triethylamin og 5,08 9 (0,020 mol) N-(2-bromethyl)-fthalimid i 30 ml dimethylformamid omrøres under nitrogen ved 105 - 110 C over natten og helles så i 6oo ml isvann. Produktet ekstraheres med 3 x 100 ml ethylether og vaskes med 50 ml vann. Etherekstraktet tørres over vannfritt magnesiumsulfat, filtreres og inndampes under nedsatt trykk, hvorved man får et gummiaktig fast stoff. Kromatografi over silicagel og eluering med kloroform gir 10,88 9 (80%) 2-fthalimido-ethyl-L-N-carbobenzyloxy ~3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalaninat, Rf = 0,53, tynnskiktskromatografi (fluorescerende silicagelplate utviklet med kloroform).

B. Fremstilling av 2-fthaiimidoethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2- '

methylalaninat- hydroklorid

En oppløsning av 10,88 9 (0,0159 mol) 2-fthalimidoethyl-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalaninat i 125 ml ethylacetat hydrogeneres med 6 g 10%-ig palladium-på-carbonkatalysator ved et begynnelsestrykk på 2,18 kg/cm i 5 timer inntil hydrogenopptagelsen opphører. Efter fjernelse av katalysatoren ved filtrering og fjernelse av oppløsningsmidler under nedsatt trykk, oppløses residuet i 150 ml absolutt ethanol inneholdende 4 ml 5,15 N ethanolisk vannfri hydrogenkloridoppløsning og hydrogeneres med 4,3 9 palladium-på-carbonkatalysator ved 1,90 - 2,67 kg/cm <2>i 5 dager. Ytterligere 4,3 9 mengder av 10%-ig palladium-på-carbonkatalysator tilsettes i løpet av denne tid. Efter fjernelse av katalysatoren ved filtrering og inndampning under nedsatt trykk, vaskes residuet med 100 ml petrolether og oppløses i ethanol. Det felles tre ganger fra ethanol ved tilsetning av tilstrekkelig ethylether til å felle produktet. Produktet tørres under nedsatt trykk, hvorved man får 2,80 g (4l,8%) 2-fthalimidoethyl-L-3-(3,4-dihydroxy-fenyl)-2-methylalaninat-hydroklorid, smp. 138,0 - l4o,0°C under spaltning, homogent ved tynnskiktskromatografi (fluorescerende silicagelplate utviklet med 50 volum% methanol-50 volum% benzen), Rf = 0,6l.

Anal. beregn, for C20H20<N>2<0>6.<H>Cl: C 57,07; H 5,03; N 6,65; Cl 8,<42 >Funnet: c 56,31; H 5,62; N 6,48; Cl 8,75

Eksempel 20

A. Fremstilling av 2-acetoxyethyl -L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-dif enyl -

methylendioxyf enyl) - 2- methylalaninat

En oppløsning av 10,0 g (0,Ol96 mol) L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalanin, 2,39 g (0,0235 mol), triethylamin og 2,40 g (0,0196 mol) 2-klorethylacetat i 30 ml dimethylformamid omrøres under nitrogen ved 110°C i 20 timer og helles så i 500 ml isvann. Produktet ekstraheres i 4 x 20O ml ethylether som forenes og vaskes med 200 ml vann, 200 ml 5%-ig natrium-hydroxydoppløsning og så med 200 ml vann. Efter tørring over vannfritt magnesiumsulfat og filtrering fjernes oppløsningsmidlene under nedsatt trykk. Residuet kromatograferes på 700 g silicagel. Eluering med 5 volum% methanol-95 volum% kloroform gir 5,6o g (48%) 2-acetoxyethyl-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalaninat.

B. Fremstilling av 2-acetoxyethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat '

En oppløsning av 5,60 g (0,0094 mol) 2-acetoxyethyl-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalaninat i 100 ml absolutt ethanol hydrogeneres med 2,8 g 10%-ig palladium-på-carbonkatalysator ved et begynnelsestrykk på 2,6o kg/cm p i 24 timer inntil hydrogenopptagelsen er avsluttet. Efter fjernelse av katalysatoren ved filtrering og fjernelse av oppløsningsmidler under nedsatt trykk, vaskes residuet med lOO ml petrolether og oppløses i 124 ml lo volum% ethanol-90 volum% ethylacetat. 6,2 g natriumcarbonat og 4 ml mettet natriumcarbonatoppløsning tilsettes og omrøres i 20 minutter. Blandingen filtreres, tørres over vannfritt magnesiumsulfat, filtreres igjen og inndampes under nedsatt trykk. Residuet kromatograferes på silicagel og elueres med 20 volum% methanol-80 volum% benzen. Omkrystallisasjon utføres ved å oppløse det i ethylacetat og tilsette tilstrekkelig cyclohexan til å felle det, hvorved man får 1,01 g (36%) 2-acetoxyethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat,

smp. 114 - 118°C, spaltn.

Anal. beregn, for C^H^NOg.- C 56,55; H 6,44; N 4,71

Funnet; C 56,64; H 6,63; N 4,33

kkseropel 21

A. Fremstilling av 2-benzamidoethyl-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-dif enylmethylendioxyfeny1)- 2- methylalaninat

En oppløsning av 10,0 g (0,0196 mol) L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalanin, 2,11 g (0,021 mol) triethylamin og 3,64 9 (0,Ol96 mol) N-(2-klorethyl)-benzamid i 20 ml dimethylformamid omrøres under nitrogen ved 110°C i 20 timer og helles så i 400 ml isvann. Bunnfallet fjernes ved filtrering, vaskes med lOO ml vann og oppløses i 200 ml ethylether. Etheroppløsningen vaskes med 50 ml 5%-ig natriumhydroxydoppløsning, 50 ml vann og tørres over vannfritt magnesiumsulfat. Tørremidlet frafiltreres, og filtratet inndampes under nedsatt trykk, hvorved man får 11,21 g (87%) 2-benzamidoethyl-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylen-dioxyf enyl)-2-methylalaninat, Rf = 0,7, tynnskiktskromatografi (fluorescerende silicagelplate utviklet med 5 volum% methanol-95 volum% kloroform).

B. Fremstilling av 2-benzamidoethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat- oxalat- hemihydrat

En oppløsning av 11,21 g (0,017 mol) 2-benzamidoethyl-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalaninat i 100 absolutt ethanol hydrogeneres med 5,5 g 10%-ig palladium-på-carbonkatalysator ved et begynnelsestrykk på 2,11 kg/cm i 7 timer. Efter fjernelse av katalysatoren ved filtrering og fjernelse av opp-løsningsmidler under nedsatt trykk, omrøres residuet med lOO ml petroléther over natten. Det uoppløselige materiale oppløses i 250 ml 10 volum% ethanol-90 volum% ethylacetat, rystes i lo minutter med 12 ml mettet natriumcarbonatoppløsning og 12 g natriumcarbonat og filtreres. Filtratet tørres over vannfritt magnesiumsulfat, filtreres og inndampes under nedsatt trykk. Residuet behandles med 1,3 g oxalsyre oppløst i 25 ml absolutt ethanol, og oxalatsaltet felles ved tilsetning av tilstrekkelig ethylether. To ytterligere felninger ut-føres ved å oppløse produktet i ethanol og tilsette tilstrekkelig ethylether til å felle produktet, hvorved man får 1,6o g (23%) 2-benz-amidoethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat-oxalat-hemihydrat, homogent ved tynnskiktskromatografi (fluorescerende silicagelplate utviklet med 50 volum% methanol-5o volum% kloroform) Rf = 0,44.

Anal. beregn, for ClgH22N205.1/20^0^. 1/2H20: C 58,24; H 5,86; n"6,79 Funnet: c 58,39; h 5,73; n 6,37

Eksempel 22

A. Fremstilling av nafthalimidomethyl-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-dif enylmethylendioxyfeny1)- 2- met hy1alaninat

En oppløsning av 10,2 g (0,020 mol) L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalanin, 2,02 g (0,020 mol) triethylamin og 4,9 9 (0,020 mol) N-klormethylnafthalimid i 50 ml dimethylformamid omrøres ved 90°C i 20 timer og helles så i 500 ml isvann. Produktet ekstraheres med 200 ml ethylacetat, vaskes med 50 ml 5%-ig natriumhydroxydoppløsning, 50 ml vann og 50 ml mettet natriumkloridoppløsning og tørres over vannfritt magnesiumsulfat. Efter filtrering fjernes oppløsningsmidler under nedsatt trykk, hvorved man får 13,1 g (91%) nafthalimidomethyl-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalaninat.

B. Fremstilling av nafthalimidomethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat- hydroklorid

En oppløsning av 13 g (0,0181 mol) nafthalimidomethyl-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalaninat i 150 ml 25 volum% absolutt ethanol-75 volum% ethylacetat hydrogeneres med 5 g 10%-ig palladium-på-carbonkatalysator ved 25°C og et begynnelsestrykk på o 2,81 kg/cm 2 i 24 timer inntil hydrogenopptagelsen er avsluttet. Efter fjernelse av katalysatoren ved filtrering og inndampning av filtratet under nedsatt trykk, oppløses residuet i 200 ml 10 volum% absolutt ethanol-90 volum% ethylacetat og omrøres med 5 ml mettet natriumcarbonatoppløsning og 5 g fast natriumcarbonat i 10 minutter. Blandingen filtreres, filtratet tørres over vannfritt mag-nesiumsulf at , filtreres igjen og inndampes under nedsatt trykk. Residuet vaskes med 100 ml hexan for å fjerne difenylmethan, oppløses i 25 ml absolutt ethanol og gjøres suit med 5 ml 8 N ethanolisk vannfri hydrogenkloridoppløsning. Tilsetning av ethylether feller hydrokloridsaltet av nafthaiimidomethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat .

Eksempel 23

A. Fremstilling av racemisk N-carbobenzyloxy-3-(3,4-dihydroxyfenyl) -

2- methylalanin

Til en omrørt oppløsning av 8,0 g (0,0378 mol) racemisk DL-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalanin i 6o ml 2 N natriumhydroxydopp-løsning under nitrogen tilsettes en oppløsning av 9 ml carbobenzyloxyklorid i 25 ml diethylether. Efter omrøring ved 0°C i 1 time fulgt av 1 time ved 25°C, ekstraheres reaksjonsblandingen med 50 ml diethylether. Den vandige del gjøres sur til pH 3 med 6 N saltsyre, og råproduktet ekstraheres i 100 ml ethylacetat og vaskes tre ganger med 35 ml vann. Efter tørring over vannfritt magnesiumsulfat og filtrering fjernes oppløsningsmidlet under nedsatt trykk,- hvorved man får 4,5 g (34%) racemisk N-carbobenzyloxy-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2 - methylalanin som en viskøs olje.

B. Fremstilling av racemisk pivaloyloxymethyl-3-(3,4-dihydroxy-fenyl)- 2- methylalaninat- hydroklorid

En oppløsning av 4,2 g (0,012 mol) racemisk N-carbobenzyloxy-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalanin, 1,3 g (0,013 mol) triethylamin og 1,26 g (0,013 mol) klormethylpivalat i 20 ml dimethylformamid omrøres ved 90°C i 20 timer og helles så i 200 ml vann. Produktet ekstraheres i 100 ml ethylacetat og vaskes med 25 ml mettet natrium-bicarbonatoppløsning og 25 ml vann. Efter tørring over vannfritt magnesiumsulfat og filtrering, inndampes filtratet under nedsatt trykk, hvorved man får N-carbobenzyloxyderivatet av den ønskede ester. Dette materiale oppløses i 100 ml absolutt ethanol inneholdende 10 ml 9,6 N ethanolisk vannfri hydrogenkloridoppløsning og hydrogeneres med 3 g 10%-ig palladium-på-carbpnkatalysator ved et begynnelsestrykk på o 2,46 kg/cm 2 i 24 timer. Efter fjernelse av katalysatoren ved filtrering, inndampes filtratet under nedsatt trykk. Residuet oppløses i 25 ml vann, gjøres alkalisk med en mettet natriumcarbonatoppløsning til pH 8, og det uoppløselige produkt ekstraheres med 100 ml ethylacetat. Efter tørring over vannfritt magnesiumsulfat og filtrering, tilsettes 5 ml 9,6 N ethanolisk vannfri hydrogenkloridoppløsning, og oppløsningen inndampes under nedsatt trykk, hvorved man får 1,5 g (22,6%) av hydrokloridet av det racemiske pivaloyloxymethyl-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat , homogent ved tynnskiktskromatografi (fluorescerende silicagelplate utviklet med en 5 volum:2 volum:3 volum blanding av n-butanol:eddiksyre:vann) Rf = 0,86.

Eksempel 24

Fremstilling av 2-acetamidoethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat - hydroklorid

En suspensjon av 88,3 g (0,30 mol) L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalanin-hydroklorid-ethanolsolvat (ved inndampning av en ethanolisk oppløsning av hydrokloridet under nedsatt trykk) og 146,4 g (1,42 mol) N-acetylethanolamin, under nitrogen, oppvarmes til 104 - 108 C. 84,8 g (0,713 mol) thionylklorid tilsettes i løpet av 15 minutter under omrøring. Reaksjonsblandingen skummer kraftig under tilsetningen. Efter at tilsetningen er avsluttet, omrøres reaksjonsblandingen ved 104 - 108°C i 18 timer. Ytterligere 42,4 g (0,357 mol) thionylklorid tilsettes i løpet av 7 minutter. Reaksjonsblandingen omrøres ved 104 - 108°C i ytterligere 3,5 timer, avkjøles så til 30°C og inndampes under nedsatt trykk, hvorved man får en viskøs olje. Denne olje oppslemmes med 100 ml kloroform, og kloroformen fjernes under nedsatt trykk. Dette gjentaes ytterligere tre ganger, og derpå vaskes oljen med lOO ml benzen som fradekanteres. Residuet oppløses i 7O0 ml isopropanol og tilsettes til 6 1 ethylether. Bunnfallet som dannes, vaskes med 500 ml ethylether og rystes med 6 1 10 volum% ethanol-90 volum% ethylacetat, 150 ml mettet natriumcarbonatoppløsning og 100 g natriumcarbonat. Det organiske ekstrakt tørres over vannfritt magnesiumsulfat, filtreres og inndampes under nedsatt trykk, hvorved man får den frie base av acetamidoethylesteren. Denne base behandles med 15 g fumarsyre i 300 ml isopropanol, og fumaratsaltet felles ved tilsetning av tilstrekkelig ethylether. Fumaratsaltet felles nok en gang fra isopropanol ved tilsetning av tilstrekkelig ethylether og overføres så til den frie base som før ved rystning med 200 ml 10 volum% ethanol-90 volum% ethylacetat, 20 ml mettet natriumcarbonatoppløsning og 20 g fast natriumcarbonat. Den frie base overføres til hydrokloridsaltet ved oppløsning i 100 ml absolutt ethanol, tilsetning av 10 ml 9,6 N saltsyre og feining ved tilsetning av 1 1 ethylether. Efter tre felninger fra ethanol-ethylether utført som ovenfor, fåes 15,1 g (15%) av hydrokloridsaltet av 2-acetamidoethyl-L-3-(3,4-dihydroxy-fenyl)-2-methylalaninat-hydroklorid, Rf =0,57, tynnskiktskromatografi (fluorescerende silicagelplate utviklet med 50 volum% methanol-50 volum% benzen).

Anal. be<r>e<g>n, for C^H^N^ .HC1: C 50,52; H 6,36; N 8,4l

Funnet: C 50 , 49; H 6,69; N 8,49

Eksempel 25

Fremstilling av 3-acetamidopropyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methy1-alaninat- hydrogenoxalat- hydrat

275 ml thionylklorid tilsettes til 250 g L-3-(3,4-dihydroxy-fenyl)-2-methylalaninat-seskvihydrat ved 25°C, og blandingen oppvarmes på dampbad. Efter oppvarmning i 2 timer fortynnes den tykke reaksjonsblanding med 7,5 ml dimethylformamid oppløst i 25 ml benzen

og omrøres på dampbad inntil gassutviklingen opphører. lOO ml benzen tilsettes, og den rå svovelsyrlingester fjernes ved filtrering, vaskes med 100 ml benzen, lOO ml kloroform og 100 ml ether,

og tørres under nedsatt trykk, hvorved man får 280 g av svovelsyrlingester-mellomproduktet, smp. 199°C under spaltning.

En blanding av 13,7 g av det rå svovelsyrlingester-mellom-produkt, 24,98 9 (0,212 mol) N-acetylpropanolamin og 2 g vannfritt dimethylformamid omrøres på dampbad i 20 timer og avkjøles. Reaksjonsblandingen vaskes med 6 x 200 ml ethylether, 4 x 200 ml methylenklorid og tørres under nedsatt trykk. Det halvfaste materiale som er tilbake, omrøres med 200 ml 20 volum% ethanol-80 volum% ethylacetat, 20 ml mettet natriumcarbonatoppløsning og 20 g fast natriumcarbonat. Det organiske ekstrakt tørres over vannfritt mag-nesiumsulf at , filtreres og filtratet tilsettes til en oppløsning av 3,2 g oxalsyre i 50 ml ethanol. Oppløsningsmidler fjernes under nedsatt trykk, og produktet felles ved å oppløse det i 50 ml ethanol og tilsette 500 ml ethylether. Produktet felles igjen ved oppløs-ning i 50 ml ethanol og tilsetning av 500 ml ethylacetat, hvorved man får 3-acetamidopropyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat-hydrogenoxalat-hydrat, Rf = 0,45, tynnskiktskromatografi (fluorescerende silicagelplate utviklet med 25 volum% methanol-75 volum% kloroform) .

Anal. beregn for C-^H^I^O^ .C2H20^ -H20: C 48,80; H 6,26; N 6,69 Funnet: C 48,73; H 6,85; N 6,68

Eksempel 26

Fremstilling av 2-methylthioethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat- hydrogenoxalat

275 ml thionylklorid tilsettes til 250 g L-3-(3-,4~dihydroxy-fenyl)-2-methylalaninat-seskvihydrat ved 25°C, og blandingen oppvarmes på dampbad. Efter oppvarmning i 2 timer fortynnes den tykke reaksjonsblanding med 7,5 ml dimethylformamid i 25"ml benzen og om-røres på dampbad inntil gassutviklingen opphører. lOO ml benzen tilsettes, og den rå svovelsyrlingester fjernes ved filtrering, vaskes med lOO ml benzen, 100 ml kloroform og lOO ml ether, og tørres under nedsatt trykk, hvorved man får 280 g av svovelsyrlingester-mellom-produktet, smp. 199°C under spaltning.

En blanding av 30 g av den rå svovelsyrlingester, 34,6 g

(0,375 mol) 2-hydroxyethylmethylsulfid og 6 g vannfritt dimethylformamid omrøres på dampbad i 28 timer og avkjøles. Reåcsjons-

blandingen vaskes med 4 x 100 ml ethylether og 3 x 100 methylenklorid. Det gjenværende materiale omrøres med 250 ml 20 volum% ethanol-80 volum% ethylacetat, 30 ml mettet nat riumcarbonatoppløs - ning og 60 fast natriumcarbonat og filtreres så. Det uoppløselige materiale vaskes med 3 x 250 ml 20 volum% ethanol-80 volum% ethylacetat, forenes med det første ethanol-ethylacetatekstrakt og tørres over vannfritt magnesiumsulfat. Efter filtrering fjernes oppløs-ningsmidler under nedsatt trykk, og residuet kromatograferes over silicagel. Tilsammen 2,3 g produkt elueres med en 25 volum% methanol-75 volum% kloroformblanding. Dette produkt overføres til oxalatsaltet ved å tilsette det til en oppløsning av 1,3 9 oxalsyre 1 25 ml ethanol fulgt av feining med tilstrekkelig ethylether.

Efter ytterligere tre felninger under anvendelse av ethanol for å oppløse produktet og ethylether for å felle det, fåes 300 mg 2-methylthioethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat-hydrogen-oxalat , homogent ved tynnskiktskromatografi (fluorescerende silicagelplate utviklet med 25 volum% methanol-75 volum% kloroform)

Rf =0,83, smp. 85 - 90°C under spaltning.

Anal. beregn, for C-^H^NO^S .C^O^: C 47,99; H 5,64; N 3,73

Funnet: C 48,00; H 6,IO; N 4,07

Eksempel 27

A. Fremstilling av D,L-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methyl-alanin- hydroklorid

En blanding av 38,6 g (0,155 mol) racemisk-3-(3,4-dihydroxy-fenyl)-2-methylalanin-hydroklorid og 74 g (0,312 mol) diklordifenylmethan neddykkes under langsom omrøring i et foropphetet oljebad ved 190°C. Efter at reaksjonen er begynt, omrøres reaksjonsblandingen hurtig i 6 minutter ved 190°C, taes ut av det varmeooljebad og får avkjøle til 25 - 30°C. Råproduktet fra 6 slike forsøk forenes, oppslemmes med 2 1 diethylether, filtreres, vaskes med ytterligere 2 1 diethylether og tørres ved 30°C under 50 mm trykk. ' Det faste stoff omkrystalliseres ved å oppløse produktet i ethanol og tilsette ethylacetat for å felle D,L-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalanin-hydroklorid.

B. Fremstilling av D,L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenyImethylendioxy-f enyl) - 2- methylalanin

En blanding av 175 g (0,425 mol) racemisk-3-(3,4-difenyl-methylendioxyf enyl)-2-methylalanin-hydroklorid, 1750 ml aceton og 1750 ml vann omrøres under nitrogen ved en temperatur under 10°C, mens pH innstilles på 12,0 ved langsom tilsetning av en 10%-ig natriumhydroxydoppløsning. 93 g (0,545 mol) carbobenzyloxyklorid tilsettes dråpevis i løpet av 5 - 7 minutter til reaksjonsblandingen ved 20 - 30°C under samtidig tilsetning av en 10%-ig natrium-hydroxydoppløsning for å holde pH på 12,0 - 12,2. Efter at tilsetningen av carbobenzyloxykloridet er avsluttet, omrøres reaksjonsblandingen ved 25 - 30°C i 3 timer. Det meste av acetonet fjernes så under nedsatt trykk ved 25 - 35°C for å felle natriumsaltet av det ønskede N-carbobenzyloxyderivat. Natriumsaltet ekstraheres i 1,5 1 ethylacetat, vaskes med 200 ml 5%-ig natriumhydroxydoppløs-ning og 200 ml mettet natriumkloridoppløsning, og tørres så over magnesiumsulfat. Efter tilsetning av 17,5 g avfarvende kull og filtrering gjennom en magnesiumsulfatplate, fjernes oppløsnings-midler under nedsatt trykk ved 25 - 35°C Residuet oppslemmes to ganger med 1 1 20 volum% ethylether-80 volum% hexanoppløsning og filtreres, hvorved man får natriumsaltet av det ønskede N-carbobenzyloxyderivat. Dette natriumsalt oppløses i 1,5 1 ethylacetat, avkjøles til 10°C og gjøres surt til pH 2 med 6 N saltsyre. Ethylacetatekstraktet vaskes med 200 ml mettet natriumkloridoppløsning, tørres over magnesiumsulfat, filtreres og inndampes under nedsatt trykk ved 25 - 35°C. N-carbobenzyloxyderivatet tørres ytterligere ved 25 - 30°C og 0,2 - 0,3 mm Hg, hvorved man får D,L-N-carbobenzyloxy -3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalanin.

C. Fremstilling av D,L-succinimidomethyl-N-carbobenzyloxy~3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)- 2- methylalaninat

En oppløsning av 13,5 g (0,0265 mol) D,L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalanin, 2,7 g (0,027 mol) triethylamin og 5,19 9 (0,029 mol) N-brommethylsuccinimid i 35 ml tørt dimethylformamid omrøres ved 25 - 30°C i 16 timer. Reaksjonsblandingen helles i 400 ml isvann, og produktet ekstraheres i 200 ml av en 50 volum% kloroform-50 volum% diethyletherblanding. Det organiske ekstrakt vaskes med 50 ml 5%-ig natriumcarbonatoppløsning og 50 ml mettet natriumkloridoppløsning og tørres så over vannfritt magnesiumsulfat. Efter filtrering og inndampning under nedsatt trykk, omkrystalliseres residuet. Omkrystallisasjon ble utført ved å oppløse produktet i ethanol og tilsette hexan for å felle D,L-succinimidomethyl-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difen<y>lmeth<y>fe ndioxyfenyl)-2-methylalaninat.

D. Fremstilling av D,L-succinimidomethyl-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2- methylalaninat - hydroklorid- hydrat

En suspensjon av 6,6 g (0,0106 mol) racemisk succinimido-methyl-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalaninat i 180 ml absolutt ethanol og 9 ml 9,6 N ethanolisk vannfri hydrogenkloridoppløsning hydrogeneres med 3,3 9 10%-ig palladium-på-carbonkatalysator ved et begynnelsestrykk på 2,11 kg/cm <2> inntil hydrogenopptagelsen var fullstendig. Efter fjernelse av katalysatoren ved filtrering, konsentreres filtratet under nedsatt trykk. Residuet ekstraheres med 50 ml benzen og derpå 50 ml ethylacetat. Det uoppløselige faste stoff ble så rystet med 50 ml 10 volum% ethanol-90 volum% ethylacetatblanding og IO ml mettet natriumcarbonat oppløsning . Efter filtrering ble filtratet tørret over vannfritt magnesiumsulfat, filtrert og inndampet under nedsatt trykk, hvorved man fikk D,L-succinimidomethyl-3-(3,4-dihydroxyf.enyl)-2-methylalaninat som basen.

E. Fremstilling av succinimidomethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat-hydroklorid-hydrat via omkrystallisasjon av diastereomere salter

En oppløsning av O,47 9 (3,1 mmol) (-)-vinsyre i IO ml 50

50 volum% absolutt ethanol-50 volum% ethylacetatoppløsning ble under nitrogen ved 20 - 25°C tilsatt til en oppløsning av 1,0 g (3,1 mmol) D,L-succinimidomethyl-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat i IO ml absolutt ethanol. Efter oppvarmning av oppløs-ningen til 40 - 60°C ble ethylacetat tilsatt til begynnende blakning og derpå avkjølt langsomt til 25°C og til slutt lagret ved 5 - 10°C i 12 timer. Det uoppløselige rå vinsyresalt ble fjernet ved filtrering og tørret ved 20 - 25°C og 0,2 - 0,5 mm trykk.

Denne omkrystallisasjonsbehandling ble gjentatt inntil smeltepunktet og optisk dreining av vinsyresaltet var i det vesentlige konstant.

Morluten fra den første krystallisasjon ble inndampet ved

15 - 20 mm og 4o - 50°C. Residuet ble rystet med 25 ml 10 volum% ethanol-90 volum% ethylacetatblanding og 10 ml mettet natriumcar-bonatoppløsning. Efter filtrering ble filtratet tørret over vannfritt magnesiumsulfat, filtrert og inndampet ved 15 - 20 mm og 40°C til en gummi. Residuet ble oppløst i 5 ml absolutt ethanol og under nitrogen tilsatt til en oppløsning av o,3 av (+)-vinsyre i 10 ml 50 volum% absolutt ethanol-50 volum% ethylacetatoppløsning. Efter oppvarmning av oppløsningen til 40 - 6o°C ble ethylacetat tilsatt til begynnende blakning og derpå avkjølt langsomt til 25°C og så

lagret ved 5 - 10°C i 14 timer. Det uoppløselige rå vinsyresalt ble fjernet ved filtrering. Gjentagelse av denne omkrystallisasjons - behandling gir den annen optiske antipode av succinimidomethyl-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat som vinsyresaltet. De optisk aktive vinsyresalter ble overført til de optisk aktive hydrokloridsalter ved følgende metode. Vinsyresaltet av succinimido-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat rystes med 50 ml 10 volum% ethanol-90 volum% ethylacetatblanding og 10 ml mettet natriumcarbonatoppløsning. Efter filtrering tørres filtratet over vannfritt magnesiumsulfat, filtreres og inndampes under nedsatt trykk. Residuet oppløses i 25 ml absolutt ethanol, behandles med 5 ml 9,6 N ethanolisk vannfri hydrogenkloridoppløsning og inndampes under nedsatt trykk, hvorved man får succinimidomethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat-hydroklorid-hydrat, homogent ved tynnskiktskromatografi (fluorescerende silicagelplate, 30 volum% methanol-70 volum% benzenoppløsningsmiddel) med en iakttatt Rf = 0,5.

Eksempel 28

Spaltning av racemisk pivaloyloxymethyl-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat ved direkte omkrystallisasjon

Racemisk pivaloyloxymethy1-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat-hydroklorid ble fremstilt som i eksempel 23. 30 g racemisk pivaloyloxymethy1-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat-hydroklorid ble oppslemmet ved 35°C i lOO ml 1,0 N saltsyre. Overskudd av faste stoffer ble frafiltrert. Den mettede oppløsning ble så podet ved 35°C med pivaloyloxymethyl-D-3-(3,4-dihydroxyf enyl)-2-methylalaninat-hydroklorid-hydrat. Blandingen ble avkjølt til 20°C i 30 minutter og hensatt ved 20°C i 0,5 timer. Det utskilte materiale ble isolert ved filtrering, vasket to ganger med 5 ml koldt vann og tørret ved 0,1 - 0,5 mm og 20 - 25°C i 20 timer, hvorved man fikk pivaloyloxymethyl-D-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat-hydroklorid-hydrat.

Morluten fra ovenstående trinn ble oppvarmet til 35°c og podet ved 35°C med pivaloyloxymethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat-hydroklorid. Blandingen ble så avkjølt til 20°C i løpet av 30 minutter og hensatt ved 20°C i 0,5 timer. Det utfelte materiale ble isolert ved filtrering, vasket to ganger med .5 ml koldt vann og tørret ved 0,1 - 0,5 mm og 20 - 25°C i 20 timer, hvorved man fikk pivaloyloxymethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat-hydroklorid-hydrat .

Eksempel 29

A. Fremstilling av a-succinimidoethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat -hydroklorid-dihydrat ((3-isomer) ved fraksjonert krystallisasjon

10 g a-succinimidoethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat -hydroklorid (a- og (3-isomerblanding) fra eksempel 2 ble oppløst i 50 ml varm 95%-ig ethanol (5% vann), fortynnet til begynnende blakning med vannfri ether, podet og skrapet for å bevirke krystallisasjon. Efter avkjøling ved 5 - 10°C i 12 timer, ble det utfelte faste stoff oppsamlet og tørret ved 70°C. Ytterligere lignende omkrystallisasjoner fra 95 volum% ethanol-5 volum% vann-ethylether ga materiale som smeltet ved 123 - 126°C (spaltning). En endelig omkrystallisasjon fra 95%-ig ethanol ga a-succinimidoethyl-L-3- (3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat-hydroklorid-dihydrat (P-isomer) som dihydratet som smeltet ved 129 - 131°C (spaltning)

(tørret ved 70°C over natten, homogent ved tynnskiktskromatografi (fluorescerende silicagelplate, 50 volum% methanol-50 volum% benzen-oppløsningsmiddel), Rf =0,7-

B. Fremstilling av a-succinimidoethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat- hydroklorid- hydrat ( a- isomer)

Morluten fra den første krystallisasjon av p-isomeren av a-succinimidoethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat-hydroklorid-hydrat som er rik på den tilsvarende a-isomer, ble inndampet ved 15 - 20 mm og 40 - 45°C. Residuet ble oppløst i 20 ml varm 95%-ig ethanol (5% vann), fortynnet til begynnende blakning med ethylacetat, podet og skrapet for å felle den anrikede a-isomer av a-succinimidoethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat-hydroklorid-hydrat. Ytterligere felninger fra,95%-ig ethanol (5% vann) og ethylacetat gir a-isomeren som ethylacetatsolvatet, Rf = o,7

(tynnskiktskromatografi, fluorescerende silicagelplate, 5o volum% methanol-50 volum% benzenoppløsningsmiddel).

Eksempel 30

Fremst illing av pivaloyloxymethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methyl - alaninat- hydroklorid

En oppløsning av 0,95 g (4,0 mmol) L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalanin-seskvihydrat og 0,6l g (4,06 mmol) pivaloyloxymethyl-klorid i 5 ml dimethylsulfoxyd omrøres ved 20 - 25°C i 23 timer.

Oppløsningen fortynnes med 10 ml destillert vann og føres gjennom

en kolonne inneholdende 5 g svakt basisk anionbytteharpiks i baseformen. Efter eluering med vannfraksjoner forenes fraksjonene som gir en positiv ferrikloridtest og tilsettes til en kolonne av 3 g svakt sur kationbytteharpiks i syreformen. Uomsatt L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalanin elueres med destillert vann inntil en negativ ferrikloridtest fåes, esteren elueres så med 1 N eddiksyre. Esterf raks jonen, 50 ml (pH 3,2), syres til pH 2,0 med 1 N saltsyre og lyofiliseres ved 0,1 - 0,3 mm i 20 timer, hvorved man får pivaloyl-oxymethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat-hydroklorid som eddiksyresolvatet.

Anal. beregn, for C^H^NOg .HC1.1/3HC2H^02: C 52,11; H 6,69; N 3,58 Funnet: C 52,11; H 6,49; N 3,73

Eksempel 31

Fremstilling av a-succinimidoethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat- hydroklorid

En oppløsning av 0,95 g (4,0 mmol) L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalanin-seskvihydrat og 0,65 g (4,0 mmol) N-(a-klorethyl)-succinimid i 5 ml dimethylsulfoxyd omrøres ved 20 - 25°C i 23 timer. Oppløsningen fortynnes med 10 ml destillert vann og føres gjennom en kolonne inneholdende 5 g svakt basisk anionbytteharpiks i den basiske form. Efter eluering med vannfraksjoner forenes fraksjonene som gir en positiv ferrikloridtest og tilsettes til en kolonne av 3 g svakt sur kationbytteharpiks i den sure form. Uomsatt L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalanin elueres med destillert vann inntil en negativ ferrikloridtest fåes, og esteren elueres så med 1 N eddiksyre. Esterfraksjonen, 55 ml (pH 3,2), behandles med 1 N saltsyre til pH 2,0 og lyofiliseres ved 0,1 - 0,3 mm i 20 timer, hvorved man får a-succinimidoethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat-hydroklorid-eddiksyresolvat.

Anal. beregn, for C^H^gOg .HC1.1/3C2H^02: C 50,96; H 5,73; N 7,13 Funnet: c 50,48; H 6,13; H 6,77 Eksempel 32

Fremstilling av 3-acetamidopropyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat- hydrogenoxalat- hydrat

275 ml thionylklorid tilsettes til 250 g L-3-(3,4-dihydroxy-fenyl)-2-methylalaninat-seskvihydrat ved 25°C, og blandingen oppvarmes på dampbad. Efter oppvarmning i 2 timer fortynnes den tykke

reaksjonsblanding med 7,5 ml dimethylformamid oppløst i 25 ml benzen og omrøres på dampbad inntil gassutviklingen opphører. 100 ml benzen tilsettes, og den rå svovelsyrlingester fjernes ved filtrering, vaskes med 100 ml benzen, lOO ml kloroform og 100 ml ether og tørres under nedsatt trykk, hvorved man får 280 g av svovelsyrlingester-mellomproduktet, smp. 199°C under spaltning.

En blanding av 13,7 g av det rå svovelsyrlingester-mellom-produkt, 24,98 g (0,212 mol) N-acetylpropanolamin og 2 g vannfritt dimethylformamid omrøres på dampbad i 20 timer og avkjøles. Reaksjonsblandingen vaskes med 6 x 200 ml ethylether, 4 x 200 ml methylenklorid og tørres under nedsatt trykk. Det halvfaste materiale som er igjen, omrøres med 200 ml 20 volum% ethanol-80 volum% ethylacetat, 20 ml mettet natriumcarbonatoppløsning og 20 g fast natriumcarbonat. Det organiske ekstrakt tørres over vannfritt magnesiumsulfat, filtreres, og filtratet tilsettes til en oppløs-ning av 3,2 g oxalsyre i 50 ml ethanol. Oppløsningsmidler fjernes under nedsatt trykk, og produktet felles ved å oppløse det i 50 ml ethanol og tilsette 500 ml ethylether. Produktet felles igjen ved oppløsning i 50 ml ethanol og tilsetning av 500 ml ethylacetat, hvorved man får 3-acetamidopropyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat-hydrogenoxalat-hydrat, Rf = 0,45, tynnskiktskromatografi (fluorescerende silicagelplate utviklet med 25 volum% methanol-

75 volum% kloroform).

Anal. beregn, for ^- L^ 22^ 2°5' C2H2°4' H2°: C Zf8'80; H 6'26' N °>69 Funnet: C 48,73; H 6,85; N 6,68

Eksempel 33

Fremstilling av 2-acetamidoethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat- hydroklorid

En oppslemning av 88,3 9 (0,30 mol) L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalanin-hydroklorid-ethanolsolvat (ved konsentrasjon av en ethanolisk oppløsning av hydrokloridet under nedsatt trykk) og 146,5 g (1,42 mol) N-acetylethanolamin, under nitrogen, oppvarmes til 104 - 108°C. 84,8 g (0,713 mol) thionylklorid tilsettes i løpet av 15 minutter under omrøring. Reaksjonsblandingen skummer kraftig under tilsetningen. Efter at tilsetningen er avsluttet, omrøres reaksjonsblandingen ved 104 - 108°C i 18 timer. Ytterligere 42,4 9 (0,357 mol) thionylklorid tilsettes i løpet av 7 minutter. Reaksjonsblandingen omrøres ved 104 - 108°C i ytterligere 3,5 timer, avkjøles så til 30°C og inndampes under nedsatt trykk, hvorved man får en viskøs olje. Denne olje oppslemmes med lOO ml kloroform, og kloroformen fjernes under nedsatt trykk. Dette gjentaes ytterligere tre ganger, og derpå vaskes oljen med lOO ml benzen som fradekanteres. Residuet oppløses i 700 ml isopropanol og tilsettes til 6 1 ethylether. Bunnfallet som dannes, vaskes med 500 ml ethylether og rystes med 6 1 IO volum% ethanol-90 volum% ethylacetat, 150 ml mettet natrium-carbonatoppløsning og 100 g natriumcarbonat. Det organiske ekstrakt tørres over vannfritt magnesiumsulfat, filtreres og inndampes under nedsatt trykk, hvorved man får den frie base av acetamidoethylesteren. Denne base behandles med 15 g fumarsyre i 300 ml isopropanol, og fumaratsaltet felles ved tilsetning av tilstrekkelig ethylether. Fumaratsaltet felles nok en gang fra isopropanol ved tilsetning av tilstrekkelig ethylether og overføres så igjen til den frie base som før ved rystning med 200 ml 10% ethanol-90 volum% ethylacetat, 20 ml mettet natriumcarbonatoppløsning og 20 g fast natriumcarbonat. Den frie base overføres til hydrokloridsaltet ved oppløsning i lOO ml absolutt ethanol, tilsetning av lo ml 9,6 N saltsyre og feining ved tilsetning til 1 1 ethylether. Efter tre felninger fra ethanol-ethylether som utført ovenfor, fåes 2-acet-amidoethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat-hydroklorid-hydroklorid, Rf = 0,57, tynnskiktskromatografi (fluorescerende silicagelplate utviklet med 50 volum% methanol-50 volum% benzen).

Anal. beregn, for C^H^NgO^ .HC1: C 50,52; H 6,36; N 8,4l

Funnet: C 50,49; H 6,69; N 8,49

Eksempel 34

A. Fremstilling av L-3-(3,4-diacetoxyfenyl)-2-methylalanin-hydroklorid

Til en blanding av 320 ml iseddik og 24 mi acetylklorid tilsettes i en porsjon 69,4 g (0,291 mol) L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalanin-seskvihydrat. Temperaturen av reaksjonsblandingen stiger til ca. 50°C, og en klar oppløsning dannes. Ved denne temperatur tilsettes ytterligere 85 ml acetylklorid i løpet av 10 minutter. Den erholdte klare, blekt gule oppløsning hensettes ved 20 - 25°C i 14 timer. 400 ml vannfri ethylether tilsettes i løpet av 15 minutter. Når tilsetningen er nesten avsluttet, begynner et hvitt, fast stoff å utfelles. Blandingen omrøres ved 20 - 25°C i 30 minutter, ved 5 - 10°C i 1 time og avkjøles så til -10°C i 2 timer.

Det faste stoff fjernes ved filtrering, suspenderes i 150 ml 30 volum% eddiksyre-70 volum% ethylether, filtreres og vaskes med 500 ml ethylether. Efter tørring ved 70 C i 2 timer fåes 83,7 g (88%) L-3-(3,4-diacetoxyfenyl)-2-methylalanin-hydroklorid, smp. 196,0 - 197,0°C.

B. Fremstilling av.L-3-(3,4-diacetoxyfenyl)-2-methylalanylklorid-hydroklorid

En blanding av 6,6o g (0,020 mol) L-3~(3,4-diacetoxyfenyl)-2-methylalanin-hydroklorid og 40 ml thionylklorid omrøres ved 6o°C i 2 timer inntil oppløsning er fullstendig. Overskudd av thionylklorid fjernes ved 15 - 20 mm og 40 - 50°C. 50 ml methylenklorid tilsettes, og blandingen konsentreres igjen ved 15 - 20 mm og 40 - 50°C. Dette gjentaes enda en gang med nok 50 ml methylenklorid. Efter tørring ved 0,2 - 0,5 mm og 40°C i 30 minutter, fåes L-3-(3,4-diacetoxyfenyl)-2-methylalanylklorid.

C. Fremstilling av succinimidomethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat- hydroklorid- hydrat

En oppløsning av 3,50 g (10 mmol) L-3-(3,4-diacetoxyfenyl)-2-methylalanylklorid-hydroklorid i 20 ml kloroform tilsettes til en oppløsning av 3,87 g (30 mmol) N-hydroxymethylsuccinimid i 20 ml kloroform ved 25°C. Efter omrøring under tilbakeløp i 20 timer fjernes kloroformen ved 15 - 20 mm og 30 - 40°C. Residuet fortynnes med 10 ml 1 N saltsyre og ekstraheres med 2 x 20 ml ethylether.

Det vandige ekstrakt omrøres under nitrogen ved 20 - 25°C i 5 timer. Efter lyofilisering ved 0,1 - 0,3 mm i 20 timer behandles residuet med 50 ml 10 volum% ethanol-90 volum% ethylacetatoppløsning, 5 ml

mettet nat riumcarbonatoppløsning og 5 g fast natriumcarbonat. Efter filtrering tørres filtratet over vannfritt magnesiumsulfat, filtreres og inndampes ved 15 - 20 mm og 30 - 40°C. Residuet oppløses i 25 ml absolutt ethanol, behandles med 5 ml 9,6 N ethanolisk vannfri hydro-genkloridoppløsning og inndampes under nedsatt trykk, hvorved man får succinimidomethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat-hydroklorid-hydrat, homogent ved tynnskiktskromatografi (fluorescerende silicagelplate, 30 volum% methanol-7o volum% benzenoppløs-ningsmiddel) med en iakttatt Rf =0,5.

Eksempel 35 '

A. Fremstilling av N-carboxyanhydridet av L-3-(3,4-dihydroxyfenyl) -

2- methylalanin

Fosgengass bobles gjennom en blanding av 9,0 g (0,038 mol) L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalanin-seskvihydrat i 500 ml tetra-hydrofuran i 25 minutter inntil oppløsningen er mettet. Under tilsetningen stiger temperaturen av reaksjonsblandingen til 45°C. Oppløsningen omrøres under nitrogengass-innbobling i ytterligere 50 minutter. Uoppløselig materiale fjernes ved filtrering gjennom en diatoméjordplate, og filtratet inndampes til en olje ved 15 -

20 mm trykk og 30 - 35°C. Residuet oppløses i 75 ml ethylacetat,

og hexan tilsettes til blakningspunktet. Efter avkjøling i flere dager ved 0 - 5°C fjernes det utfelte, faste stoff ved filtrering og tørres ved 0,1 - 0,3 mm trykk og 25°C, hvorved man får N-carboxyanhydridet av L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalanin.

B. Fremstilling av succinimidomethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat- hydroklorid- hydrat

En oppløsning av 2,37 g (10 mmol) av N-carboxyanhydridet av L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalanin og 1,29 g (10 mmol) N-hydroxymethylsuccinimid oppvarmes under tilbakeløp inntil alt N-carboxy-anhydrid har reagert. Efter inndampning ved 15 - 20 mm trykk og 30 - 40°C ekstraheres residuet med 50 ml benzen og derpå med 50 ml ethylacetat. Det uoppløselige faste stoff rystes så med 50 ml 10 volum% ethanol-90 volum% ethylacetatblanding og 10 ml mettet natriumcarbonatoppløsning. Efter filtrering tørres filtratet over vannfritt magnesiumsulfat, filtreres og inndampes under nedsatt trykk. Residuet oppløses i 25 ml absolutt ethanol, behandles med 5 ml 9,6 N ethanolisk vannfri hydrogenkloridoppløsning og inndampes under nedsatt trykk, hvorved man får succinimidomethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat-hydroklorid-hydrat, homogent ved tynnskiktskromatografi (fluorescerende silicagelplate, 30 volum% methanol-70 volum% benzenoppløsning) med en iakttatt Rf =0,5.

Eksempel 36

A. Fremstilling av L-3"(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methyl-a lanin - hydroklorid

En blanding av 19,3 g (0,0777 mol) L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2 - methylalanin-hydroklorid og 37 g (0,156 mol) diklordifenylmethan neddykkes under langsom omrøring i et foropphetet oljebad ved 190°C Efter at reaksjonen er begynt, som det fremgår av kraftig gassutvikling, omrøres reaksjonsblandingen hurtig i 6 minutter ved 190°C, taes ut av det varme oljebad og får avkjøle til 25 - 30°C. Råproduktet fra 12 forsøk forenes, oppslemmes med 3 1 diethylether, filtreres, vaskes med ytterligere 2 1 diethylether og tørres ved 30°C under 50 mm trykk. Produktet omkrystalliseres ved å oppløse det i ethanol og tilsette ethylacetat for å felle produktet. Man får 255 g (66,4%) L-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methyl-alanin-hydroklorid, smp. 267 - 268°C under spaltning.

B. Fremstilling av a-succinimidoethyl-L-3-(3,4-difenylmethylen-dioxyf enyl) - 2- methylalaninat

En oppløsning av 1,4 g (4,0 mmol) L-3-(3,4-difenylmethylen-dioxyf enyl) -2-methylalanin og 0,65 g (4,0 mmol) N- (a-klorethyl)-succinimid i 5 ml dimethylsulfoxyd omrøres ved 20 - 25°C i 23 timer. 150 ml vann tilsettes fulgt av en mettet natriumcarbonatoppløsning inntil en pH på 8 fåes. Produktet ekstraheres i 500 ml ethylether som så vaskes med 4 x 25 ml vann, tørres over vannfritt magnesium-sulf at og filtreres. Inndampning ved 15 - 20 mm og 35 - 40°C gir rått a-succinimidoethyl-L-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalaninat med tilstrekkelig renhet for anvendelse i det neste trinn.

C. Fremstilling av a-succinimidoethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat - hydroklorid

En suspensjon av 1,0 g (2,0 mmol) a-succinimidoethyl-L-3-(3 ,4-dif enylmethylendioxyf enyl)-2-methylalaninat i 25 ml 25 volum% absolutt ethanol-75 volum% ethylacetatoppløsning hydrogeneres med 1,0 g 10%-ig palladium-på-carbonkatalysator ved et begynnelsestrykk på 2,81 kg/cm og værelsetemperatur i 23 timer. Katalysatoren frafiltreres, og filtratet inndampes under nedsatt trykk ved 30 - 4o°C. Residuet oppløses i 50 .ml lO volum% ethanol-90 volum% ethylacetat-oppløsning og omrøres med 5 ml mettet natriumcarbonatoppløsning og ca. 5 g vannfritt natriumcarbonat i lo minutter. Efter filtrering tørres filtratet over vannfritt magnesiumsulfat, filtreres og inndampes til tørrhet under nedsatt trykk. Residuet oppløses i 20 ml tørr kloroform, oppløsningen avkjøles på et isbad og mettes med hydrogenkloridgass i 15 minutter. Det faste stoff oppsamles, vaskes ved suspensjon i 25 ml vannfri ether tre ganger, og oppslemmes så i 25 ml ethylacetat under nitrogen i en korket kolbe ved værelsetemperatur over natten. Det uoppløselige faste stoff fjernes ved filtrering, omrøres med 30 ml hexan i 2 timer og tørres i en vakuumekssikator over calciumklorid, hvorved man får |3-succinimidoethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat-hydroklorid som en blanding av a- og |3-isomerer, iakttatt Rf = 0,7 ved tynnskiktskromatografi (fluorescerende silicagelplate, 50 volum% methanol-50 volum% benzen-oppløsningsmiddel).

Eksempel 37

A. Fremstilling av L-3-(3,4-diacetoxyfenyl)-2-methylalanin-hydroklorid

Til en blanding av 320 ml iseddik og 24 ml acetylklorid tilsettes i en porsjon 69,4 g (0,291 mol) L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalanin-seskvihydrat. Temperaturen på reaksjonsblandingen stiger til ca. 50°C og en klar oppløsning fåes. Ved denne temperatur tilsettes ytterligere 85 ml acetylklorid i løpet av 10 minutter. Den erholdte klare, blekt gule oppløsning hensettes ved 20 - 25°C i 14 timer. 400 ml vannfri ethylether tilsettes i løpet av 15 minutter. Når tilsetningen er nesten fullstendig, begynner et hvitt, fast stoff å utfelles. Blandingen omrøres ved 20 - 25°C i 30 minutter, ved 5 - 10°C i 1 time og avkjøles så ved -10°C i 2 timer. Det faste stoff fjernes ved filtrering, suspenderes i 150 ml 30 volum% eddiksyre-70 volum% ethylether, filtreres og vaskes med 500 ml ethylether. Efter tørring ved 70°C i 2 timer, fåes 83,7 g (88%) L-3-(3,4-diacetoxyfenyl)-2-methylalanin-hydroklorid, smp. 196,0 - 197,0°C.

B. Fremstilling av a-succinimidoethyl-L-3-(3,4-diacetoxyfeny1)-2-methylalaninat- hydroklorid

En oppløsning av 1,66 g (5 mmol) L-3-(3,4-diacetoxyfenyl)-2-methylalanin-hydroklorid, 0,51 g (5 mmol) triethylamin og 0,81 9 (5 mmol) N-(a-klorethyl)-succinimid i 5 ml dimethylsulfoxyd omrøres ved 20 - 25°C i 20 - 24 timer. Dimethylsulfoxydet fjernes ved om-røring med 20 ml ethylether i flere minutter og derpå avdekanteres ethyletheren. Denne ekst raksjonsprosses utføres tre ganger. Residuet oppløses i 10 ml absolutt ethanol, og produktet felles ved tilsetning av overskudd av ethylether. Denne felningsprosess gjentaes ytterligere to ganger, hvorved man får rent a-succinimidoethyl-L-3-(3,4-diacetoxyfenyl)-2-methylalaninat-hydroklorid.

Eksempel 38

En oppløsning av 1,8 g (3,94 mmol) a-succinimidoethyl-L-3-(3,4-diacetoxyfenyl)-2-methylalaninat-hydroklorid (fra eksempel 37) i 10 ml 1 N saltsyre omrøres under nitrogen ved 20 - 25°C i 5 timer. Efter lyofilisering ved 0,1 - 0,3 mm i 20 timer, behandles residuet med 50 ml 10 volum% ethanol-90 volum% ethylacetatoppløsning, 5 ml

mettet natriumcarbonatoppløsning og 5 g fast natriumcarbonat. Efter

filtrering tørres filtratet over vannfritt magnesiumsulfat , filtreres og inndampes til tørrhet under nedsatt trykk. Residuet opp-løses i 20 ml tørr kloroform, oppløsningen avkjøles i et isbad og mettes med hydrogenkloridgass i 15 minutter. Det faste stoff oppsamles, vaskes ved suspendering i 25 ml vannfri ethylether tre ganger og oppslemmes så i 25 ml ethylacetat under nitrogen i en korket kolbe ved værelsetemperatur over natten. a-succinimidoethyl-L-3- (3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat-hydrokloridet oppsamles og tørres i en vakuumekssikator over calciumklorid, hvorved man får hydrokloridet av en blanding av a- og |3-isomerer, iakttatt Rf =0,7 ved tynnskiktskromatografi (fluorescerende silicagelplate, 50 volum% methanol-50 volum% benzenoppløsningsmiddel).

Eksempel 39

A. Fremstilling av N-( 1- klorethyl)- maleimid

5,20 g (0,020 mol) stanniklorid tilsettes til en oppløsning

av 49,2 g (0,40 mol) n-vinylmaleimid ill carbontetraklorid, og blandingen omrøres mens den mettes med hydrogenklorid i 6 timer ved 20 - 30°C Efter 24 timer mettes blandingen igjen med hydrogenklorid i 1,5 timer. Ved utløpet av 48 timer dekanteres oppløsningen, og det gummiaktige residuum vaskes med 10 x lOO ml carbontetraklorid. De forenede ekstrakter oppslemmes med 10 g diatoméjord, filtreres, og filtratet inndampes under nedsatt trykk til ca. 4O0 ml. N-(l-klorethyl)-maleimidet frafiltreres og tørres ved 20 - 30°C

B. Fremstilling av a-maleimidoethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat- hydroklorid

En oppløsning av 0,95 g (4,0 mmol) L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalanin-seskvihydrat og 0,64 g (4,0 mmol) N-(a-klorethyl)-maleimid i 5 ml dimethylsulfoxyd omrøres ved 20 - 25°C i 23 timer. Oppløsningen fortynnes med 10 ml destillert vann og føres gjennom en kolonne inneholdende 5 g svakt basisk anionbytteharpiks i den basiske form. Efter eluering med vannfraksjoner, forenes fraksjonene som gir en positiv ferrikloridtest og tilsettes til en kolonne av 3 g av en svakt sur kationbytteharpiks i syreformen. Ureagert L-3-(3,4-di-hydroxyf enyl ) -2-methylalanin elueres med destillert vann inntil man får en negativ f errikloridtest, og esteren elueres så med 1 N eddiksyre. Esterfraksjonen, 55 ml (pH 3,2), behandles med 1 N saltsyre til en pH på 2,0 og lyofiliseres ved 0,1 - 0,3 mm i 20 timer, hvorved man får a-maleimidoethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat-hydroklorid.

C. Fremstilling av a-succinimidoethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat- hydroklorid

En oppløsning av 1,0 g (2,7 mmol) a-maleimidoethyl-L-3-(3,4-dihydroxyf enyl)-2-methylalaninat-hydroklorid i 25 ml absolutt ethanol hydrogeneres med 1,0 g 10%-ig palladium-på-carbonkatalysator ved atmosfæretrykk og 25°C inntil 1 ekvivalent hydrogen er opptatt. Katalysatoren frafiltreres, og filtratet inndampes under nedsatt trykk ved 30 - 40°C. Residuet oppløses i 50 ml 10 volum% ethanol-90 volum% ethylacetatoppløsning og omrøres med 5 ml mettet natrium-carbonatoppløsning og ca. 5 g vannfritt natriumcarbonat i 10 minutter. Efter filtrering tørres filtratet over vannfritt magnesium-sulf at, filtreres og inndampes til tørrhet under nedsatt trykk. Residuet oppløses i 20 ml tørr kloroform, oppløsningen avkjøles i et isbad og mettes med hydrogenklorid i 15 minutter. Det faste stoff oppsamles, vaskes ved suspendering i 25 ml vannfri ether tre ganger, og oppslemmes så i 25 ml ethylacetat under nitrogen i en korket kolbe ved 20 - 25°C over natten. Det uoppløselige faste stoff fjernes ved filtrering, omrøres med 30 ml hexan i 2 timer og tørres i en vakuumekssikator over calciumklorid, hvorved man får a-succin-imidoethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat-hydroklorid som en blanding av a- og p-isomerer, iakttatt Rf = 0,7 ved tynnskiktskromatografi (fluorescerende silicagelplate, 50 volum% methanol-

50 volum% benzenoppløsningsmiddel).

Eksempel 40

A. Fremstilling av g- klorethyl- 3- klor- 2, 2- dimethylpropionat

400 mg zinkklorid smeltes ved 0,2 - 0,5 mm trykk og avkjøles til 25 - 30°C under nitrogen. 62 g (0,40 mol) 3-klor-2,2-dimethyl-propionylklorid tilsettes til det smeltede zinkklorid fulgt av 19,2 g (0,44 mol) acetaldehyd. Under tilsetningen av acetaldehydet, som gjøres så hurtig som mulig, omrøres reaksjonsblandingen og av-kjøles for å forhindre tap av acetaldehyd på grunn av reaksjonens eksoterme natur. Efter oppvarmning under tilbakeløp i 1 time gir destillasjon a-klorethyl-3-klor-2,2-dimethylpropionat.

B. Fremstilling av a-(3-klor-2,2-dimethylpropionyloxy)-ethyl-L-3-( 3, 4- dihydroxyfenyl)- 2- methylalaninat- hydroklorid

En oppløsning av 0,95 g (4,0 mmol) L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalanin-seskvihydrat og 0,81 g (4,06 mmol) a-klorethyl-3-klor-2,2-dimethylpropionat i 5 ml dimethylsulfoxyd omrøres ved 20 - 25 C i 24 timer. Oppløsningen fortynnes med 10 ml destillert vann og føres gjennom en kolonne inneholdende 5 g svakt basisk anionbytteharpiks i baseformen. Efter eluering med vannfraksjoner forenes fraksjonene som gir en positiv ferrikloridtest og tilsettes til en kolonne av 3 g svakt sur kationbytteharpiks i syreformen.

Uomsatt L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalanin elueres med destillert vann inntil man får en'negativ ferrikloridtest, esteren elueres så med 1 N eddiksyre. Esterfraksjonen, 50 ml (pH 3,2), syres til pH 2,0 med 1 N saltsyre og lyofiliseres ved 0,1 - 0,3 mm i 20 timer, hvorved man får a-(3-klor-2,2-dimethylpropionyloxy)-ethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat-hydroklorid som eddiksyresolvatet .

En oppløsning av 1,5 g (3,66 mmol) a-(3~klor-2,2-dimethyl-propionyloxy)-ethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat-hydroklorid i 20 ml absolutt ethanol hydrogeneres med 1,0 g 10%-ig palladium-på-carbonkatalysator ved 20 - 25°C og atmosfæretrykk inntil 1 ekvivalent hydrogen er tatt opp. Efter fjernelse av katalysatoren ved filtrering, fjernes ethanolen ved 15 - 20 mm og 30 -

35°C. Residuet oppløses i 4o ml ethylacetat, omrøres kort med en blanding av 2 g fast natriumcarbonat og 2 ml mettet natriumcarbonat-oppløsning og tørres over vannfritt magnesiumsulfat. Efter filtrering tilsettes 1 ml 9,6 N ethanolisk vannfritt hydrogenklorid, og oppløsningen inndampes under nedsatt trykk til tørrhet. Videre tørr-ing ved 65°C og 0,2 mm trykk gir a-pivaloyloxyethylester-hydrokloridet.

Eksempel 41

A. Fremstilling av benzylsuccinamat

En blanding av 23,4 g (0,20 mol) ravsyre, 25,4 g (0,20 mol) benzylklorid, 20,2 g (0,20 mol) triethylamin og 250 ml dimethylformamid omrøres ved 95 C i 20 timer. Reaksjonsblandingen fortynnes med 500 ml vann, og produktet ekstraheres i 2 x 200 ml ethylether. De forenede etherekstrakter vaskes med 2 x 50 ml mettet natriumbicarbon-atoppløsning, derpå med 2 x 50 ml vann og tørres over vannfritt magnesiumsulfat . Efter filtrering inndampes oppløsningen ved 15 - 20 mm og 4o°C, hvorved man får benzylsuccinamat.

B. Fremstilling av benzyl- N- hydroxymethylsuccinamat

Til en omrørt oppløsning av 20,7 g (0,lO mol) benzylsuccinamat i 150 ml ethylacetat ved 25°C tilsettes 3,0 g paraformaldehyd og 1 ml 20 vekt%-ig ethanolisk kaliumhydroxyd. Efter omrøring ved 25°C i 2o timer tilsettes hexan til blakningspunktet, og blandingen av-kjøles ved 5°C i 24 timer. Oppløsningsmidlene fradekanteres, og residuet vaskes med 25 ml hexan, hvorved man får benzyl-N-hydroxymethylsuccinamat.

C. Fremstilling av benzyl- N- klormethylsuccinamat

En oppløsning av 24,2 g (0,10 mol) benzyl-N-hydroxymethylsuccinamat og 28,9 g (0,11 mol) trifenylfosfin i 500 ml carbontetraklorid omrøres under tilbakeløp i 12 timer. Efter filtrering og vasking av bunnfallet med benzen, fjernes de organiske oppløsnings-midler ved 5l5 - 20 mm og 30 - 4o°C, hvorved man får benzyl-N-klormethylsuccinamat av tilstrekkelig renhet for anvendelse i det neste t rinn.

D. Fremstilling av benzylsuccinamidomethyl-L-N-carbobenzyloxy-3-( 3, 4- difenylmethylendioxyfenyl)- 2- methylalanin

En oppløsning av 10,2 g (0,020 mol) L-N-carbobenzyloxy-3~(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalanin, 2,02 g (0,020 mol) triethylamin og 5,12 g (0,020 mol) benzyl-N-klormethylsuccinamat i 20 ml dimethylformamid omrøres ved 70°C i 5 timer, derpå ved 20 - 30°C i 5 timer og helles til slutt i 200 ml vann. Produktet ekstraheres med 3 x lOO ml ethylacetat, vaskes med 50 ml 5%-ig natrium-hydroxydoppløsning, 50 ml vann og 50 ml mettet natriumkloridoppløs-ning, og tørres over vannfritt magnesiumsulfat. Efter filtrering fjernes oppløsningsmidlene ved 15 - 20 mm og 30 - 40°C, hvorved man får benzylsuccinamidomethyl-L-N-carbobenzyloxy-3-(3,4-difenyl-methylendioxyf enyl)-2-methylalanin.

E. Fremstilling av succinamidomethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat- hydroklorid

En oppløsning av 13,8 9 (0,0189 mol) benzylsuccinamidomethyl-L-N -carbobenzyloxy-3-(3,4-difenylmethylendioxyfenyl)-2-methylalanin i 130 ml 25 volum% absolutt ethanol-75 volum% ethylacetat hydrogeneres med 5 g 10%-ig palladium-på-carbonkatalysator ved 20 - 25°C og et begynnelsestrykk på 2,81 kg/cm i 18 timer inntil hydrogenopptagelsen opphører. Efter fjernelse av katalysatoren ved filtrering og inndampning til tørrhet under nedsatt trykk, oppløses residuet i 200 ml 10 volum% absolutt ethanol-90 volum% ethylacetatoppløsning og omrøres med 5 ml mettet natriumcarbonatoppløsning og overskudd av fast natriumcarbonat i 2 minutter. 10 g vannfritt magnesiumsulfat tilsettes, og efter noen få minutter fjernes det ved filtrering. Oppløsningsmidler fjernes under nedsatt trykk, residuet vaskes med 25 ml hexan og derpå med 25 ml ethylacetat og tørres under nedsatt trykk. Residuet behandles igjen med natriumcarbonat som før for å fjerne de siste spor av a-methyl-3,4-dihydroxyfenylalanin og over-føres til hydrokloridsaltet med 3 ml 9,6 N ethanolisk vannfritt hydrogenklorid, hvorved man får succinamidomethyl-L-3-(3,4-dihydroxy-fenyl)-2-methylalaninat-hydroklorid.

F. Fremstilling av succinimidomethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat- hydroklorid- hydrat

En blanding av 3,95 9 (10 mmol) succinamidomethyl-L-3-(3,4-dihydroxyf enyl-2-methylalaninat-hydroklorid og lOO ml acetylklorid omrøres ved 25°C i 6 timer. Efter inndampning ved 15 - 20 mm og 35°C oppløses residuet i 25 ml 1 N saltsyre og omrøres under nitrogen ved 20 - 25°C i 5 timer. Efter lyofilisering ved 0,1 - 0,3 mm i 20 timer, behandles residuet med 50 ml IO volum% ethanol-90 volum% ethylacetatoppløsning, 5 ml mettet natriumcarbonatoppløsning og 5 g fast natriumcarbonat. Efter filtrering tørres filtratet over vannfritt magnesiumsulfat , filtreres og inndampes ved 15 - 20 og 30 - 4o°C. Residuet oppløses i 25 ml absolutt ethanol, behandles med 5 ml 9,6 N ethanolisk vannfri hydrogenkloridoppløsning og inndampes under nedsatt trykk, hvorved man får succinimidomethyl-L-3-(3,4-di-hydroxyf enyl)-2-methylalaninat-hydroklorid-hydrat, homogent ved tynnskiktskromatografi (fluorescerende silicagelplate, 30 volum% methanol-70 volum% benzenoppløsningsmiddel) med en iakttatt Rf = 0,5-Eksempel 42

A. Fremstilling av 2-hydroxyethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat- hydroklorid

En oppløsning av 0,95 g (4,0 mmol) L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalanin-seskvihydrat og 0,51 g (4,06 mmol) 2-bromethanol i 5 ml dimethylsulfoxyd omrøres ved 6o°C i 5 timer og får så avkjøle til 20 - 25°C i løpet av 23 timer. Oppløsningen fortynnes med lo ml destillert vann og føres gjennom en kolonne inneholdende 5 9 svakt basisk anionbytteharpiks i baseformen. Efter eluering med vannfraksjoner forenes fraksjonene som gir en positiv ferrikloridtest og tilsettes til en kolonne av 3 g svakt sur kationbytteharpiks i syreformen. Uomsatt L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalanin elueres med destillert vann inntil en negativ ferrikloridtest fåes, og esteren elueres så med 1 N eddiksyre. Esterfraksjonen, 50 ml (pH 3,2), syres til pH 2,0 med 1 N saltsyre og lyofiliseres ved 0,1 - 0,3 mm i 20 timer, hvorved man får 2-hydroxyethyl-L-3"(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat-hydroklorid.

B. Fremstilling av 2-acetoxyethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat

En blanding av 1,0 g (3,4 mmol) 2-hydroxyethyl-L-3"(3,4~ dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat-hydroklorid og 50 ml acetylklorid omrøres ved 25°C i 6 timer. Efter inndampning ved 15 - 20 mm og 35°C oppløses residuet i 25 ml 1 N saltsyre og omrøres under nitrogen ved 20 - 25°C i 5 timer. Efter lyofilisering ved 0,1 - 0,3 mm i 20 timer, behandles residuet med 50 ml 10 volum% ethanol-90 volum% ethylacetatoppløsning, 5 ml mettet natriumcarbonatoppløsning og 5 g fast natriumcarbonat. Efter filtrering tørres filtratet over vannfritt magnesiumsulfat, filtreres og inndampes ved 15 - 20 mm og 30 - 4o°c.

Residuet kromatograferes på silicagel og elueres med 20 volum% methanol-80 volum% benzen. Omkrystallisasjon skjer ved å oppløse esteren i varmt ethylacetat og tilsette tilstrekkelig cyclohexari til å felle det ønskede 2-acetoxyethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat, smp. 114 - H8°C (spaltn.).

Eksempel 43

Fremstilling av 2-acetoxyethyl-L-3-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-methylalaninat

En blanding av 1,0 g (3,4 mmol) 2-hydroxyethyl-L-3-(3,4-dihydroxyf enyl ) -2 -methylalaninat -hydroklorid og 50 ml methansulfonyl-klorid omrøres ved 25°C i 6 timer. Inndampning ved 15 - 20 mm og 35°C fulgt av tørring ved 0,1 - 0,5 mm og 4o°C gir det rå methan-sulfonylderivat . Til dette tilsettes IO ml dimethylsulfoxyd og 6,6 g (10 mmol) lithiumacetat , og blandingen omrøres ved 6o°C i 6 timer. Efter tilsetning av overskudd av ethanolisk vannfri hydrogenklorid-oppløsning, fjernes dimethylsulfoxydet ved omrøring tre ganger med 50 ml ethylether og fradekantering av ethyletheren. Residuet opp-løses i 25 ml 1 N saltsyre og omrøres under nitrogen ved 20 - 25°C i 1 time. Efter lyofilisering ved 0,1 - 0,3 mm i 20 timer behandles residuet med 50 ml 10 volum% ethanol-90 volum% ethylacetatoppløsning, 5 ml mettet natriumcarbonatoppløsning og 5 g fast natriumcarbonat. Efter filtrering tørres filtratet over vannfritt magnesiumsulfat, filtreres og inndampes ved 15 - 20 mm og 30 - 40°C.

Residuet kromatograferes på silicagel og elueres med 20 volum% methanol-& 0 volum% benzen. Omkrystallisasjon av esteren skjer ved oppløsning i ethylacetat og tilsetning av tilstrekkelig cyclohexan til å felle det ønskede 2-acetoxyethyl-L-3"(3,4-dihydroxyfeny1)-2-methylalaninat , smp. 114 - H8°C under spaltning.

Eksempel 44

Anti- hypertensiv aktivitet

Metoden for å bedømme den anti-hypertensive aktivitet av de aktive forbindelser omfatter administrering av forbindelsen enten oralt eller intraperitonealt i spontant hypertensive rotter av Wistar-Okamoto-stammen. Arterietrykk opptegnes kontinuerlig i disse dyr gjennnom et istående aortisk kateter innført gjennom kaudal-arterien. Dyrene tillates fri bevegelse i metabolismeburet under målingene.

Når forbindelsene som fremstilles ifølge oppfinnelsen, prøvesi oralt, merkes tydelig anti-hypertensiv aktivitet. Forbindelsene viser også anti-hypertensiv aktivitet når de prøves intraperitonealt. I noen tilfelle viser forbindelsene betraktelig mere aktivitet enn L-a-methyldopa.

Nedenstående tabell viser de relative antihypertensive aktiviteter i spontant hypertensive rotter av noen av fremgangsmåteforbindelsene sammenlignet med L-methyldopa.

Antihypertensiv aktivitet av forbindelser med formelen

Claims

1. Analogifremgangsmåte ved fremstilling av terapeutisk aktive forbindelser med formelen: hvor n er 0, 1, 2 eller 3; m er 0, 1, 2 eller 3; A^ og A2 er hver hydrogen eller lavere alkanoyl; Rl°g R2 er hver nydro9en eller alkyl med 1-3 carbonatomer; og R3 er: (A) en monocyclisk eller bicyclisk heterocyclisk gruppe med 3-12 kjernecarbonatomer og 1 eller 2 kjerne-heteroatomer som er nitrogen og/eller svovel, idet minst én er nitrogen, og hvor hver ring i den heterocycliske gruppe har 5 eller 6 ledd, eller (B) gruppen X-R^, hvor X er -0-, -S- eller -NH-, og R^ har inntil 21 carbonatomer og er (1) en hydrocar-bongruppe, eller (2) en acylgruppe av en organisk acyclisk eller monocyclisk carboxylsyre med ikke mere enn ett heteroatom i ringen, eller et syreaddis jonssalt derav," karakterisert ved at (a) et syrederivat med formelen: eller et syreaddisjonssalt derav, hvor n, m, R^ , R2 og R^ er som ovenfor angitt, og R^, R^ og R_ er hydrogen eller en blokkerende gruppe, idet minst én er en blokkerende gruppe, hydrolyseres eller reduseres, eller (b) et syrederivat med formelen: eller et syrederivat derav, hvor A-j^ og A^ er som ovenfor angitt, og Y er -COOH, -COhalogen eller -carboxylsyresalt, forestres med en forbindelse med formelen: hvor n, m, R^ , R^ og R^ er som ovenfor angitt, og X, er hydroxyl, alkalimetall -O-, halogen eller en substituert -SO^-gruppe; eller ( c) en forbindelse med formelen: hvor n, m, A1, A^, R^ og R^ er som ovenfor angitt, og Z er hydroxy, mercapto, halogen, substituert -SO^-gruppe eller amino, omsettes med et acyleringsmiddel; R„-H eller R„-3 3 alkalimetall hvor R er som ovenfor angitt, og, om ønskes, skilles stereoisomerene ved (1) fraksjonert krystallisasjon av en stereoisomer fra oppløsning, eller (2) dannes diastereomere med en optisk aktiv syre og en av diastereomerene krystalliseres fra oppløsningen.

2. Fremgangsmåte ifølge krav 1 ved fremstilling av 2-methyl-3-(3<1>,4<1->dihydroxyfenyl)-alanin-(succinimido-ethyl-ester), karakterisert ved at der anvendes utgangs-materialer hvor m og n er null, R, er methyl, er hydrogen, og R, er succinimido, og R,, og R^, om nødvendig, overføres til hydrogen.

3. Fremgangsmåte ifølge krav 1 ved fremstilling av 2-methyl-3-(3<1>,4'—dihydroxyfenyl)-alanin-(succinimido-methyl-ester), karakterisert ved at der anvendes utgangs-materialer hvor m og n er null, R^ og R2 er hydrogen, og R5 og Rg, om nødvendig, overføres til hydrogen.

4. Fremgangsmåte ifølge krav 2 eller 3, karakterisert ved at der anvendes et syrederivat hvor syren er i L-konfigurasjon.