FR2577138A1

FR2577138A1 - Immuno-regulateur a base de l-carnosine

Info

Publication number: FR2577138A1
Application number: FR8517573A
Authority: FR
Inventors: Kineshiro Nagai; Taiko Suda
Original assignee: Nihon University
Current assignee: Nihon University
Priority date: 1985-02-13
Filing date: 1985-11-28
Publication date: 1986-08-14
Anticipated expiration: 2005-11-28
Also published as: DK171288B1; DE3540632A1; GB2170707A; US4717716A; SE8505121D0; DK500585D0; CH666188A5; SE466787B; JPH0481966B2; DK500585A; JPS61186322A; GB2170707B; GB8527243D0; SE8505121L; NL8600112A; DE3540632C2; FR2577138B1

Abstract

Immuno-régulateur pour rétablir la réaction immunitaire de sa chute anormale et supprimer son accélération excessive afin de maintenir une fonction immunitaire normale, immuno-régulateur qui contient comme matière active de la L-carnosine ou un sel de cette substance.

Description

La présente invention concerne un immuno-

régulateur contenant comme matière active de la L-carnosine

ou un sel de cette substance.

Pour traiter diverses maladies qui sont dues à un caractère anormal des défenses immunitaires, di- vers produits pharmaceutiques ont été mis au point, produits

qui sont généralement appelés immuno-régulateurs, l'appella-

tion "immuno-régulateurs" désignant ici des agents destinés

à rétablir l'immunoréaction de sa chute anormale et à sup-

primer son accélération excessive afin de maintenir un fonc-

tionnement normal de la défense immunitaire. Comme agents

appartenant à cette catégorie ont été élaborés divers pro-

duits, comprenant le lévamisol (Aldrich Corporation), mais ces immunorégulateurs connus dérivent de matières chimiques et non de matières d'origine biologique, de sorte que leurs

effets secondaires dangereux ne peuvent être totalement éli-

minés. En fait, des effets secondaires notables

ont été signalés dans le cas de certains immuno-régulateurs.

Essentiellement, la réaction immunitaire a une fonction physiologique pour maintenir l'homéostasie,

que l'on pense être réglée par des substances douées d'ac-

tivité physiologique que contiennent les organismes vivants.

La présente invention a ainsi pour objet un immuno-régulateur à base d'une substance physiologiquement active

ayant moins d'effets secondaires que les substances chimi-

ques connues.

Elle a plus précisément pour objet un im-

muno-régulateur qui contient comme matière active de la

L-carnosine ou un sel de cette substance.

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La présente demanderesse a en effet trouvé,

en étudiant pendant de nombreuses années l'action physiolo-

gique d'w-amino-acides que contiennent les organismes vivants,

que la L-carnosine, qui en est un dérivé doué d'activité phy-

siologique, a une fonction immuno-régulatrice, et jusqu'ici il n'a été trouvé aucun agent physiologique ayant une telle fonction. On ne savait pas non plus que la L-carnosine avait

cette fonction immuno-régulatrice.

La L-carnosine, ou 3-alanyl-L-histidine, a été trouvée en 1900 par Gulewitsh dans un extrait de viande

de Liebig. C'est un dipeptide formé de L-histidine et de $-

alanine et qui est très abondant dans les muscles des sque-

lettes de mammifères Depuis la découverte de la L-carnosine, son importance physiologique et son intérêt pharmacologique ont été édudiés par de nombreux chercheurs, mais jusqu'à présent

sans résultat.

La L-carnosine est une poudre blanche cris-

tallisée insipide, inodore et facilement soluble dans l'eau, qui fond à 2500C et dont le pouvoir rotatoir (a)20 est de +20,0 (dans l'eau). Sa formule est la suivante:

HC = C - CH 2CHCOOH

1 I 2 1

\N N 2 2 H2

HN N NH - COCH2CH2NH2

C H

et son pH en solution aqueuse est compris entre 8,0 et 8,5.

La L-carnosine est une substance abondante

dans divers muscles des squelettes i mammifères (qui en con-

tiennent de l'ordre de 0,1 à 0,3 %), et elle est ordinaire-

ment prise d'aliments carnés comme source d'apport de l'a-

cide aminé essentiel qu'est la L-histidine. Elle peut être

aussi synthétisée par voie biologique à partir de la L-his-

tidine et de la 5-alanine. La L-carnosine, après avoir été absorbéeest décomposée par la carnosinase en L-histidine

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et e-analine nutritionnelles, dont une partie est resynthé-

tisée en L-carnosine (la C-alanine-1-méthyl-histidine ou

ansérine est connue comme produit intermédiaire de la bio-

synthèse de la L-carnosine).

Comme on vient de le dire, la L-carnosine

est une substance du genre alimentaire d'une grande sécurité d'em-

ploi et qui,après avoir été absorbée, peut être décomposée par la carnosinase contenue dans divers organes internes, et elle

est ainsi très différente de nombreux autres produits phar-

maceutiques qui sont métabolisés dans le foie et qui imposent

une lourde charge à la fonction hépatique.

La toxicité aiguë de la L-carnosine est

montrée ci-après.

Toxicité aiguë

On donne différentes quantités de L-carno-

sine à un groupe de 10 souris par la voie péritonéale ou orale, et 5 heures après l'administration on examine les symptômes de toxicité aiguë On calcule la DL50 à partir du

nombre de souris mortes au bout de 72 heures suivant la mé-

thode de Vander Waerden, la L-carnosine étant dissoute dans du sérum physiologique pour donner une dose de 0,1

à 0,3 ml pour 10 g.

On a observé les symptômes toxiques sui-

vants de la L-carnosine. Environ 30 minutes après l'admi-

nistration intrapéritonéale de 15 000 mg/Kg (DL 100), la moitié des souris présentent une diminution de la motilité volontaire, une position abdominale, une diminution et une irrégularité du rythme respiratoire, l'absence ou la disparition des réflexes de position droite et de fuite,

une réaction d'élévation de la queue et une myoclonie. D'au-

tres symptômes progressifs sont des retournements latéraux répétés, une accélération des réflexes parstimulation de

contact, des convulsions et finalement des crampes tétani-

ques conduisant à la mort. 50 %, 80 % et 100 % des souris

meurent en 30 minutes, 2 heurs et 5 heures, respectivement.

Une administration orale de 15 000 mg/Kg a peu d'effet,

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mais une des 10 souris traitées meurt en 12 heures.

Tableau 1

DL50 de la L-carnosine Voie DL50O (limite de confiance 95 % mg/Kg) Péritonéale 9 087 (8 320 - 9 925) Orale > 14 930 (dose léthale minimale) Ce tableau montre la toxicité aiguë après 72 heures pour des souris mâles de la souche DDY. Comme on

le voit, la L-carnosine est très peu toxique.

Depuis 10 ans la L-carnosine est formulée contre 1' anorexie par la société LISA en Espagne, et elle

s'est confirmée être une substance sûre. De plus, une quan-

tité efficace de L-carnosine pour des tumeurs transpanta-

bles est de 1 mg par souris, soit 50 mg/Kg, ce qui corres-

pond à la fraction 1/181 de la DL50 (9 087 mg/Kg) en admi-

nistration par la voie péritonéale, c'est-à-dire que l'on

peut dire que la L-carnosine est une substance très sure.

On connaît une méthode de synthèse de la

L-carnosine ZJournal of Biological Chemistry, 108, 753 (193517.

On peut la préparer en chlorant la benzoxycarbonyl -$-alanine

avec le pentachlorure de phosphore, en formant l'ester mé-

thylique avec du méthanol et en formant l'azide par l'inter-

médiaire de l'hydro-azide, puis en faisant réagir l'azide avec l'ester méthylique de la L-histidine et finalement en

éliminant le groupe benzoxycarbonyle par réduction catalytique.

Cette invention comprend aussi un agent de traitement contenant un sel de la L-carnosine, par exemple un sel de

son groupe carboxylique, un produit d'addition avec un aci-

de pour usages pharmaceutiques sur le groupe amino ou un

sel à la fois du groupe carboxylique et du groupe amino.

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Comme sels du groupe carboxylique on peut indiquer ceux de métaux comme le sodium, le potassium, le calcium, le magnésium, le zinc et l'aluminium, ainsi que des sels d'ammoniums substitués, par exemple avec des trialkylamines comme la triéthylamine ou d'autres amines, et comme sels

du groupe amino on peut indiquer ceux formés avec des aci-

des organiques ou minéraux tels que les acides chlorhydri-

que, sulfoniques, phosphorique,acétique, propionique, lacti-

que, tartrique, citrique, succinique, maléique, benzène-sul-

fonique et toluène-sulfonique. On peut préparer ces sels de manière connue par réaction de la L-carnosine libre avec la proportion stoechiométrique de l'acide ou de la base

physiologiquement acceptable choisi.

L'effet. immuno-régulateur important de

la L-carnosine sera décrit dans des exemples expérimentaux.

Méthode expérimentale.

On évalue l'effet immunorégulateur sur des souris par une méthode de plaque hémolytique (PFC), un essai d'hémagglutination et une réaction d'hypersensibilité

retardés.

(1) Méthode PFC.

On évalue la capacité de produire des anticorps en comptant les cellules formant des plaques par une

méthode Canningham modifiée ou une méthode liquide chambre-

lame /Hashimoto et al., Experimental Method for Immunity A,

p 491 - 494 (1972), édition de Japan Immunology AcademL/.

On utilise pour la sensibilisation des hématies de mouton (SRBC, provenant de Shizuoka Experimental Animal Corporation) qui sont en principe diluées avec du sérum physiologique tamponné au phosphate (PBS), pour préparer une solution contenant 12,5x108 SBRC/ml, dont on injecte 0, 2 ml (2,5 x 108 cellules) dans une veine de la queue de souris mâles DDY de 5 semaines de Shizuoka Experimental Animal Corporation, et on emploie comme milieu de réaction un milieu MEM de Eagle à 10 % de sérum foetal bovin (FCS) (de Nissui Pharmaceutical Co., Ltd.), milieu auquel on mélange 0,1 ml d'une solution de 4 x 107 cellules spléniques/ml, 0,5 ml d'une solution de

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2,5 x 109 SRBC/ml (12,5 x 108 cellules) et 0,4 ml de

sérum complémentaire dilué au quart d'un cobaye pour pré-

parer une solution que l'on met en chambre scellée et que l'on chauffe pendant 1 heure à 37 C. Suivant cette méthode, on décèle la présence de 50 à 150 cellules PFC dans environ

0,02 ml de chambre.

(2) Détermination du taux d'anticorps sérique.

On prélève du sang dans la réaction PFC des artères carotides d'un groupe de 5 souris, dont on sépare le sérum de la manière habituelle pour déterminer le titre d'hémagglutination (titre HA). On dilue ce sérum d'essai avec un soluté physiologique tamponné au phosphate (PBS)

contenant 0,5 à 1 % de sérum d'un lampin normal, et on pro-

cède à l'évaluation avec des cellules SRBC. La dilution maxi-

male montrant une réaction positive est représentée par N

2N, N étant le taux d'anticorps.

(3) Réaction d'hypersensibilité retardée.

/_Natsuume et ai., Experimental Method

of Immunity A, p 614 - 620 (1972), Japan Immunology Academy7.

On travaille sur une souris mâle DDY de 5 semaines, d'un poids d'environ 20 g, pour déceler sa

dermatite de contact au moyen de 2, 4, 6 trinitro-chioroben-

zène (chlorure de picryle de Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.). Avec une solution éthanolique à 1 % de chlorure de picryle on imprègne un calibre à quatre couches de I x 1 cm, que l'on met en contact avec l'abdomène tondu de la souris

pendant 10 secondes pour provoquer une sensibilisation pri-

maire. On induit la sensibilisation secondaire le septième jour en appliquant une solution à 1 % de chlorure de picryle dans de l'huile d'olive sur les deux surfaces d'une oreille au moyen d'un pinceau, tandis que sur l'autre oreille on n'applique que l'huile d'olive comme témoin. Au bout de 24 heures on anesthésie la souris à l'éther et on mesure l'épaisseur de l'oreille à 1/100 mm avec un micromètre ayant une précision de 1/1000 mm. On détermine de la manière suivante la réaction d'hypersensibilité retardée: (Epaisseur de l'oreille sur laquelle a été appliqué le chlorure de picryle après 24 heures - Epaisseur de l'oreille avant l'application) moins (Epaisseur de l'oreille sur laquelle a été appliquée de l'huile d'olive seule après

24 heures - Epaisseur de l'oreille avant l'application).

(4) Pour examiner l'effet immunoréguiateur de la L-carnosine on effectue dgs essais en modifiant la quantité d'antigène, la dose de L-carnosine et l'âge de l'animal, sur l'étalon d'antigène de 2,5 x 108 SRBC et une souris de cinq semaines, de la manière suivante: (a) Modification de la quantité d'antigène On utilise des quantités d'antigène sensibilisant de 5 x 107 à 2,5 x 109 SRBC pour observer

l'effet d'une dose de L-carnosine de 100 mg/kg.

(b) Modification de l'âge de la souris On oprès sur des souris allant d'une souris immature de 2 semaines à une sourie de plus de semaines pour observer l'effet d'une dose de L-carnosine

de 100 mg/kg.

(c) On modifie la dose de L-carnosine pour observer l'effet sur la réaction PFC, la réaction d'hémagglutination et la réaction d'hypersensibilité retardée Résultats expérimantaux

Les résultats expérimantaux obtenus sont donnés dans les tableaux ciaprès.

T A B L E A U 2

Effet de la L-carnosine sur la réaction PFC et la réaction d'hémagglutination (titre HA) d'une souris immunisée avec diverses doses de SRBC Quantité d'antigène Nombre P F C (%) Taux d'anticorps SRBC Poids de Par g anti-SRBC Par chambre Par rate rate (g) de rate N * * * * /2 + 219 5,1 x 104 0x12 4/2 x 105 3 Normal (100) (100) (100) (100) x 107 5 Lcarnosine 39,4 38 69 x 10 014 5 x 4 L-carnosine(130) (135) (117) (119) Normal 93,2 2;9 18,6 x 104 0,12 15;5 x 105 9 Normal (100) (100) (100) (100) x 108 L-carnosine 6 717 ;8 -caXnosirie 67,1 + 4J8 12,2 x 104 0,15 8,2 x 105 7 À,-ansnC 72) ( 66) (125) ( 53) 4 53 Normal 124,3 3.6 24;9 x 104 0,17 14 3 x 10 10 Normal (100) (100) t100) (100) ra 2.5 x 109 4 5 Lcarnosine 86, 5; rno e 86,3 + 5/5 211 0211 x 104 8 69) 9 85) (124) 71) w C7 A un groupe de souris auxquelles on a donné pendant 6 jours 100 mg/kg par jour de L-carnosine

par voie sous-cutanée, ainsi qu'à un groupe de souris nor-

males, on injecte des hématies de mouton (SRBC) par les veines des queues pour les immuniser, et au bout de quatre jours on effectue la réaction PFC. Les valeurs obtenues

sont données pour une moyenne de 5 souris + S.D.

* P< 0,01

** P < 0,001 groupe témoin *** on prélève du sang après la réaction PFC, dont on

sépare le sérum le jour suivant pour l'essai d'agglutina-

tion. Pour le taux d'anticorps (N) la dilution maximale montrant une réaction positive est représentée par 2N,

N étant le taux d'anticorps.

T A B L E A U 3

Effet de la L-carnosine sur la réaction PFC et la réaction d'hémagglutination (titre HA) chez des souris d'âges divers qui ont été immunisées avec des hématies de mouton (SRBC) Nom br e P F C (%)

Age des L-carnosine Taux d'anti-

souris Par chambre Par rate Poids de Par g de corps anti-SRBC (semaines) rate (g) rate N * * _- 69, 7 + 5, 9 11, 2 x 104 0,15 7,5 x 105 9 -

(100) (100) (100) (100)

+2 50,8 1,9 6/7 x.104 0,14 4,8 x 105 6 - 7 4

( 73) ( 60) (93) ( 64)

-

79,7 8,8 17,1 x 104 0,15 11,4 x 105 9-

(100) (100) (100) (100)

+ 85,3 7,2 18;8 x 10 0,15 12,5x 10 9 - 10 1

(107) (110) (100) (110)

_- 40,4 2,5 12,6 x 104 0, 19 6,6 x 105 4 - 5

(100) (100) (100) (100)

* 82, 5 4 4 26 8 X 104 0,23 11, 7 x 10 9 t + 1(204) (213) t121) (177) A un groupe de souris auxquelles on a dooné pendant 9 jours 100 mg/kg par jour de L-carnosine par la voie sous- u cutanée,ainsi qu'à ungroupe de souris normales, on injecte par les veines des queues, pour lesimmuniser, 2,5 x 10 hématies de mouton (SRBC), et après 4 jours on effectue la réaction PFC. Les valeurs sont données pour une moyenne

de 5 souris + S.D.

* P< O,001 groupe témoin

* On prélève du sang après la réaction PFC, dont on sépare le sérum le jour suivant pour l'essai d'agglutination.

Pour le taux d'anticorps (N) la dilution maximale montrant une réaction positive est représentée par, 2, N étant

le taux d'anticorps.

T A B L E A U 4

Effet de diverses quantités de L-carnosine sur la réaction PFC et la réaction dghémagglutination (titre HA) de souris immunisées avec des SRBC No o m b r e P F C (%) Quantité de

Quantité de Taux d'anti-

L-Carnosine poids de Par g de Par chambre Par rate rate (9) rate orps anti-SBC N * * O mg/kg 60,3 + 8,9 8,7 x 104 0, 15 5 7 x 105 8

(100) (100) (100) (100)

mg/kg 53,0 6! 101 7 x 104 0 14 7,6 x 105 9

( 88) (123) { 92) (133)

mg/kg 73/ 6 6. 2 14;9 x 104 OG l 8 5 x 105 10

* (122) '(171) (116) (149)

250 mg/kg 69/ 8 6;5 1946 2 10 0,15 9 5 x 105 9

** (116) (168) (100) (167)

500 mg/kg 64,8! 4J9 8,3 x 104 0e4 6, 1 x 105 8 -

(107) (95) (89) (107)

A un groupe de souris auxquelles on a donn de le aL carnosine pendant 6 jours et à un groupe de souris normales on injecte 2,5 x 108 d'hématies de mouton (SRBC) par les veines des queues pour les immuniser, et après

4 jours on effectue la réaction PFC, Les valeurs sont données pour une moyenne de 5 souris + S.D.

* P > 0,01 ** P > 0,05 groupe témoin ** On prélève du sang après la réaction PFC, dont on sépare le sérum le jour suivant pour l'essai n d'agglutination. Pour le taux d'anticorps (N) la dilution maximale montrant une réaction positive est

représentée par 2N, N étant le taux d'anticorps.

Co

T A B L E A U 5

Effet de diverses quantités de L-carnosine sur la réaction d'hypersensibilité retardée (DHR) de souris X Quantité de Augmentation d'épaisseur de L-carnosine l'oreille (mg/kg/jour) 3 Témoin % J x 10-3 cm Témoin %

0 11,5 + 4,0 (100)

14,1 + 3,6 122,6

'

!250 15,7 + 2,5 * 136,5

500 21,3 + 8,7 * 185,2

Les quantités indiquées de L-carnosine sont administrées pendant 14 jours par la voie sous-cutanée. Le septième jour on sensibilise avec 1 % de chlorure de picryle et 7 jours après on procède à l'examen. Les valeurs sont

données pour une moyenne de 8 souris + S.D.

* P < 0,05 groupe témoin.

Etude des résultats expérimentaux

1. Effets sur la réactions PFC et la réaction d'hémagglutina-

tion (titre HA) d'une souris adulte dans le cas de diverses

doses d'antigène.

Une méthode d'essai pour cela est une méthode normalisée pour examiner et choisir des substances immunorégulatrices. Si l'on emploie une petite quantité d'antigène pour maintenir une faible réponse d'anticorps dans

une rate normale d'un animal, la réaction est renforcée, tan-

dis que si l'on emploie une plus grande quantité d'antigène pour accroître la réponse, la réaction est supprimée. Après avoir administré 100 mg/kg de L-carnosine pendant 6 jours, on sensibilise avec 5 x 107 cellules, 5 x 108 cellules ou 2,5 x 109 cellules SRBC. La réaction PFC et la réaction d'hémagglutination après 4 jours ont été indiquées au tableau 2. Dans le groupe normal la réaction PFC est accrue proportionnellement à la quantité d'antigène, alors que dans le groupe ayant reçu la L- carnosine la PFC est accrue de 30 % avec la petite quantité d'antigène (5 x 107 SRBC) et elle est abaissée de 30 % pour la forte quantité d'antigène (5 x 108, 2,5 x 109 SRBC). Ce résultat peut être étayé par la réaction d'hémagglutination aux SRBC, la réaction n'étant pas modifiée pour 5 x 108 SRBC mais étant accrue de 3 à 4

pour 5 x 107 SRBC et abaissée de 10 à 8 pour 2,5 x 109 SRBC.

2. Effets sur la réaction PFC et la réaction d'hémagglutina-

tion dans le cas de souris d'âges différents.

Une souris immature donne généralement une plus forte réponse immunitaire qu'une souris adulte,

la réponse immunitaire diminuant avec l'âge de la souris.

Le tableau 3 donne les résultats comparatifs, o l'on com-

pare avec la souris normale les souris de 2,5 et 30 semaines

auxquelles on a donné pendant 9 jours 100 mg/kg de L-carnosine.

On n'observe aucun effet sur la réponse PFC pour la souris

adulte de 5 semaines, mais la réponse immunitaire est suppri-

mée pour la souris immature'de 2 semaines, tandis que la fai-

ble réponse PFC est doublée pour la-vieille souris de

semaines. Ces résultats sont également étayés par la réac-

tion d'hémagglutination.

3. Effets sur la réponse immunitaire de diverses doses de L-carnosine. Comme on l'a dit précédemment, la L-carnosine a une action immunorégulatrice mais elle est connue pour être utilisée à une dose optimale pour produire une action de l'immunorégulateur, ce que montre un phénomène inhibiteur quand elle est appliquée en quantité excessive

au-delà d'un certain taux, et elle diffère d'autres médica-

ments avec lesquels il y a une relation proportionnelle entre la dose et l'effet. Ce mécanisme n'est pas encore connu et il a été étudié pour la Lcarnosine. La réaction PFC chez la souris de 5 semaines au taux de 2,5 x 108 SRBC est accrue par les doses de 50 et de 250 mg/kg pendant

6 jours, mais elle tombe avec une dose supérieure à 500 mg/kg.

La réaction d'hémagglutination tombe également à une dose supérieure à 500 mg/kg (voir le tableau 4). La réaction d'hypersensibilité retardée (DHR) avec 1 % de chlorure de picryle présente une tendance à l'accroissement suivant les doses de 50, 250 et 500 mg/kg (voir le tableau 5).

L'accroissement de la DHR confirme le fait que la L-car-

nosine a une action immunorégulatrice.

Applications cliniques possibles.

D'après les résultats expérimentaux des

essais sur animaux dans la méthode PFC et la réaction d'hy-

persensibilité retardée (DHR), on voit que la dose optimale pour l'action immunorégulatrice de la L-carnosine est de mg/kg par jour par la voie sous-cutanée.Chez l'homme la dose quotidienne doit être de 5 g pour un adulte d'un poids de kg. Les constituants de la L-carnosine sont la Palanine

et la L-histidine, acides aminés des organismes vivants.

La L-carnosine est ainsi un immunorégulateur de grande sécurité, que l'on peut employer sans risques d'effets

secondaires.

Maladies immunitaires pouvant être traitées cliniquement.

La L-carnosinepeut être employée d'une ma-

nière non spécifique pour des méladies dues à une anormalité des défenses immunitaires, maladies parmi lesquelles on peut indiquer par exemple les suivantes:

maladie du sérum, lupus érythémateux, rhumatismes de diver-

ses natures, clioglobulinémie mixte, maladies des tissus conjontifs mixtes, HBV (virus de l'hépatite B), maladie complexe antigène-anticorps, lymphadénite d'immunoblastes, sclérodermie, syndrome ataxique du mésenchyme, myasthénie grave, maladie d'Hashimoto, maladie de Basedow, asmyloidose,

syndrome de Behcet, syndrome d'insuffisance immunitaire, ma-

* ladie de Hodgkin, sclérose en plaques, maladies auto-immunes

spécifiques d'un organe.

La L-carnosine paraît très appropriée comme substance immunorégulatrice pour des transplantations d'organes. L'immunorégulateur de cette invention, tel qu'il vient d'être décrit, peut être mis sous toute forme permettant d'administrer avantageusement la L-carnosine

par la voie orale ou parentérale, par exemple solutions in-

jectables, poudres, granules, comprimés, capsules,enrobages

entériques, produits à inhaler, pastilles et dragées, pom-

mades et autres, tous produits qui peuvent être donnés in-

dividuellement ou associés entre eux, suivant les symptômes.

Les doses peuvent varier beaucoup avec la voie d'administra-

tion, le type et la forme du produit et les symptômes, mais à titre d'exemples on donne ci-après des formes, des doses

et des voies d'administration représentatives pour le pré-

sent médicament.

orme Dose et vole Solution Solution à 5 %, 0,1 à 1,0 ml à chaque injectable fois, en injections locales Pommade Pommade à 1%, 1 9 à chaque fois, en applications locales Ces doses et ces voies d'administration ne sont indiquées qu'à titre purement illustratif, et on

peut les modifier beaucoup suivant les symptômes des pa-

tients, étant donné la grande sécurité d'emploi de la L-carnosine. La Lcarnosine est facilement soluble

dans l'eau, ce qui permet d'en préparer aisément d'une ma-

nière aseptique des solutions aqueuses isotoniques à 0,3 %, 0,5 % ou 1,0 %, et les solutions isotoniques peuvent être mises dans des ampoules scellées sous un gaz inerte pour être ensuite injectées avec des seringues courantes. On peut

également, pour préparer aussitôt avant l'injection des so-

lutions isotoniques à 0,3 %, 0,5 % ou 1,0 %, dissoudre la

L-carnosine en poudre préalablement obtenue par lyophilisa-

tion et mise en ampoules ou flacons scellés par voie asep-

tique.

On peut préparer par les méthodes cou-

rantes bien connues les poudres, granules, comprimés et capsules pour la voie orale, avec des liants tels que de la gomme arabique sirupeuse, la gélatine, le sorbitol, la gomme adragante ou la polyvinyl-pyrrolidone, des exci- pients comme le lactose, l'amidon de mais, le phosphate de calcium, le sorbitol ou le glycocolle; des lubrifiants tels que le stéarate de magnésium, le talc, un polyéthylène glycol, l'hydroxypropylméthylcellulose ou de la silice; des agents de désagrégation comme la fécule de pomme de terre; ou des lubrifiants comme le laurate de sodium, et

les comprimés peuvent être enrobés de manière connue.

Pour préparer une pommade, on peut

mélanger la L-carnosine en poudre avec une base pour pom-

mades, par exemple de la cire blanchie ou du blanc de ba-

leine, de la lanoline déshydratée, de la vaseline blanche, des alcools supérieurs, des macrogols ou une plastibase

(par exemple une base pour pommades d'un gel d'hydrocarbu-

res de Taisho Pharmaceutical Co., Ltd.), une pommade hydro-

phile, une pommade absorbante ou leurs mélanges, à quoi l'on peut ajouter si l'on veut des huiles comme l'huile

de sésame, l'huile d'arachide ou l'huile d'olive, des ré-

sines, du glycérol, du propylène glycol, des surfactifs, des fongicides et agents anti-fongides, des anti-oxydants

etc... et on malaxe le tout pour avoir un mélange homogène.

On donne ci-après des exemples de pré-

parations pharmaceutiques.

EXEMPLE 1:

Solution injectable On dissout dans de l'eau de la L-carnosine synthétique dans des conditions aseptiques pour en préparer des solutions isotoniques à 0,3 %, 0,5 % ou 1%, solutions

que l'on met en ampoules.

EXEMPLE 2:

Granules. On prépare des granules avec la L-carnosine synthétique d'après la formule: L-carnosine 0,2 g Lactose 0,34 g Amidon de mais 0,45 g

Hydroxypropylméthyl-

cellulose 0,01 g

Granules 1,00 g.

EXEMPLE 3:

Pommade. On prépare une pommade à 1,0 % avec la L-carnosine synthétique et une base de gel d'hydrocarbures L-carnosine 1,0 g Gel d'hydrocarbures 99,0 g

Pommade 100,0 g.

R EV EN DI C A T I ON S

1.- Nouvel immuno-régulateur caractérisé en ce qu'il contient comme matière active de la L-carnosine ou un sel de cette- substance avec un acide ou une base physiologiquement acceptable.

2.- Composition pharmaceutique caractéri-

sée en ce qu'elle contient un immuno-régulateur selon la

revendication 1.