FI98147C - Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten BU-3608-antibioottien seriinianalogien valmistamiseksi - Google Patents
Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten BU-3608-antibioottien seriinianalogien valmistamiseksi Download PDFInfo
- Publication number
- FI98147C FI98147C FI895281A FI895281A FI98147C FI 98147 C FI98147 C FI 98147C FI 895281 A FI895281 A FI 895281A FI 895281 A FI895281 A FI 895281A FI 98147 C FI98147 C FI 98147C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- formula
- compound
- pharmaceutically acceptable
- acceptable salt
- xylosyl
- Prior art date
Links
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 title claims abstract description 28
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 23
- 125000003607 serino group Chemical class [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 title claims 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 title abstract description 25
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 27
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 17
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 16
- 241000972646 Actinomadura hibisca Species 0.000 claims abstract description 13
- 229930195711 D-Serine Natural products 0.000 claims abstract description 12
- MTCFGRXMJLQNBG-UWTATZPHSA-N D-Serine Chemical compound OC[C@@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UWTATZPHSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 125000003404 beta-D-xylosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO1)* 0.000 claims abstract description 7
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 5
- 125000004169 (C1-C6) alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims description 26
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 17
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 17
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 17
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 13
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 13
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 12
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 10
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 8
- LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N teixobactin Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H]1C(N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C[C@@H]2NC(=N)NC2)C(=O)N[C@H](C(=O)O[C@H]1C)[C@@H](C)CC)=O)NC)C1=CC=CC=C1 LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N 0.000 claims description 8
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 7
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 150000002466 imines Chemical class 0.000 claims description 5
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 claims description 5
- 241000187362 Actinomadura Species 0.000 claims description 4
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 claims description 4
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 claims description 4
- 238000005932 reductive alkylation reaction Methods 0.000 claims description 4
- 125000000969 xylosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO1)* 0.000 claims description 4
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 claims description 3
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 3
- -1 β-xylosyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 claims 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 abstract description 7
- 125000000734 D-serino group Chemical group [H]N([H])[C@@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 abstract description 2
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 abstract 1
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 60
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 45
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 22
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 20
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 17
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 13
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 13
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 12
- NBBJYMSMWIIQGU-UHFFFAOYSA-N Propionic aldehyde Chemical compound CCC=O NBBJYMSMWIIQGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 9
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 9
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 9
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 9
- IKHGUXGNUITLKF-UHFFFAOYSA-N Acetaldehyde Chemical compound CC=O IKHGUXGNUITLKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 8
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 7
- ZTQSAGDEMFDKMZ-UHFFFAOYSA-N butyric aldehyde Natural products CCCC=O ZTQSAGDEMFDKMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 7
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 7
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 7
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 6
- TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N Aglycone of yadanzioside D Natural products COC(=O)C12OCC34C(CC5C(=CC(O)C(O)C5(C)C3C(O)C1O)C)OC(=O)C(OC(=O)C)C24 TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N Astrantiagenin E-methylester Natural products CC12CCC(O)C(C)(CO)C1CCC1(C)C2CC=C2C3CC(C)(C)CCC3(C(=O)OC)CCC21C PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 5
- PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N homoegonol Natural products C1=C(OC)C(OC)=CC=C1C1=CC2=CC(CCCO)=CC(OC)=C2O1 PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 5
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 150000001728 carbonyl compounds Chemical class 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 4
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 4
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 4
- 239000013587 production medium Substances 0.000 description 4
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 201000007336 Cryptococcosis Diseases 0.000 description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 3
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 3
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 235000010216 calcium carbonate Nutrition 0.000 description 3
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 3
- 229910052956 cinnabar Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N sodium cyanoborohydride Chemical compound [Na+].[B-]C#N BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 description 3
- MCSXGCZMEPXKIW-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxy-4-[(4-methyl-2-nitrophenyl)diazenyl]-N-(3-nitrophenyl)naphthalene-2-carboxamide Chemical compound Cc1ccc(N=Nc2c(O)c(cc3ccccc23)C(=O)Nc2cccc(c2)[N+]([O-])=O)c(c1)[N+]([O-])=O MCSXGCZMEPXKIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001225321 Aspergillus fumigatus Species 0.000 description 2
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 2
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 2
- 241000221204 Cryptococcus neoformans Species 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N Dimethyl sulfoxide Chemical compound [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000111 LD50 Toxicity 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 229940096437 Protein S Drugs 0.000 description 2
- 102000029301 Protein S Human genes 0.000 description 2
- 108010066124 Protein S Proteins 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 2
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 229940091771 aspergillus fumigatus Drugs 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 150000003840 hydrochlorides Chemical class 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- IHIIRQILYAXIOH-NUVDETJMSA-N pradimicin C Chemical compound O([C@H]1[C@@H](N)[C@@H](C)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@@H]1[C@@H](O)C=2C=C3C(=O)C4=C(O)C=C(C=C4C(=O)C3=C(O)C=2C2=C(O)C(C(=O)N[C@H](C)C(O)=O)=C(C)C=C21)OC)[C@@H]1OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O IHIIRQILYAXIOH-NUVDETJMSA-N 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 2
- VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Chemical compound [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 2
- MJYQFWSXKFLTAY-OVEQLNGDSA-N (2r,3r)-2,3-bis[(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)methyl]butane-1,4-diol;(2r,3r,4s,5s,6r)-6-(hydroxymethyl)oxane-2,3,4,5-tetrol Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O.C1=C(O)C(OC)=CC(C[C@@H](CO)[C@H](CO)CC=2C=C(OC)C(O)=CC=2)=C1 MJYQFWSXKFLTAY-OVEQLNGDSA-N 0.000 description 1
- PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 2-(3-bromo-2-fluorophenyl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(Br)=C1F PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QCQCHGYLTSGIGX-GHXANHINSA-N 4-[[(3ar,5ar,5br,7ar,9s,11ar,11br,13as)-5a,5b,8,8,11a-pentamethyl-3a-[(5-methylpyridine-3-carbonyl)amino]-2-oxo-1-propan-2-yl-4,5,6,7,7a,9,10,11,11b,12,13,13a-dodecahydro-3h-cyclopenta[a]chrysen-9-yl]oxy]-2,2-dimethyl-4-oxobutanoic acid Chemical compound N([C@@]12CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@H]5C(C)(C)[C@@H](OC(=O)CC(C)(C)C(O)=O)CC[C@]5(C)[C@H]4CC[C@@H]3C1=C(C(C2)=O)C(C)C)C(=O)C1=CN=CC(C)=C1 QCQCHGYLTSGIGX-GHXANHINSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 201000002909 Aspergillosis Diseases 0.000 description 1
- 208000036641 Aspergillus infections Diseases 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000009631 Broth culture Methods 0.000 description 1
- 101100283604 Caenorhabditis elegans pigk-1 gene Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000000584 Calmodulin Human genes 0.000 description 1
- 108010041952 Calmodulin Proteins 0.000 description 1
- 206010007134 Candida infections Diseases 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241001337994 Cryptococcus <scale insect> Species 0.000 description 1
- 241000776296 Cryptococcus neoformans var. grubii Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N D-Cellobiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- 235000005206 Hibiscus Nutrition 0.000 description 1
- 235000007185 Hibiscus lunariifolius Nutrition 0.000 description 1
- 244000284380 Hibiscus rosa sinensis Species 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000909851 Mycobacterium tuberculosis (strain ATCC 25618 / H37Rv) cAMP/cGMP dual specificity phosphodiesterase Rv0805 Proteins 0.000 description 1
- VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine Chemical compound O=NN(C)C(=N)N[N+]([O-])=O VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 229910004298 SiO 2 Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- IKHGUXGNUITLKF-XPULMUKRSA-N acetaldehyde Chemical compound [14CH]([14CH3])=O IKHGUXGNUITLKF-XPULMUKRSA-N 0.000 description 1
- 239000003377 acid catalyst Substances 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JTRPLRMCBJSBJV-UHFFFAOYSA-N benzo[a]tetracene Chemical group C1=CC=C2C3=CC4=CC5=CC=CC=C5C=C4C=C3C=CC2=C1 JTRPLRMCBJSBJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 1
- 239000002021 butanolic extract Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 1
- 201000003984 candidiasis Diseases 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 235000013877 carbamide Nutrition 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 239000002962 chemical mutagen Substances 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 235000004426 flaxseed Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 229940102223 injectable solution Drugs 0.000 description 1
- 238000009413 insulation Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000012280 lithium aluminium hydride Substances 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 239000012457 nonaqueous media Substances 0.000 description 1
- 125000001477 organic nitrogen group Chemical group 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- NKGGYWQZHFAHRK-UHFFFAOYSA-N phenanthrene-3,4-dione Chemical class C1=CC=CC2=C(C(C(=O)C=C3)=O)C3=CC=C21 NKGGYWQZHFAHRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000003495 polar organic solvent Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 239000012449 sabouraud dextrose agar Substances 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 150000003355 serines Chemical class 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 1
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004317 sodium nitrate Substances 0.000 description 1
- 235000010344 sodium nitrate Nutrition 0.000 description 1
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000008247 solid mixture Substances 0.000 description 1
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 238000012306 spectroscopic technique Methods 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- HGBOYTHUEUWSSQ-UHFFFAOYSA-N valeric aldehyde Natural products CCCCC=O HGBOYTHUEUWSSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P29/00—Preparation of compounds containing a naphthacene ring system, e.g. tetracycline
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H15/20—Carbocyclic rings
- C07H15/24—Condensed ring systems having three or more rings
- C07H15/244—Anthraquinone radicals, e.g. sennosides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/10—Antimycotics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
- C12P19/56—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen atom of the saccharide radical directly bound to a condensed ring system having three or more carbocyclic rings, e.g. daunomycin, adriamycin
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
- 98147
Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten BU-3608-anti-bioottien seriinianalogien valmistamiseksi Tämä keksintö koskee antifungaalisten antibioottien . 5 tuottamista. Tarkemmin sanoen näitä antibiootteja tuottaa
Actinomadura hibisca, ja niissä on bentso[a]naftaseeni-ydin.
Mikrobilähteistä peräisin olevista bentso[a]nafta-seenikinoneista on raportoitu harvoja esimerkkejä, ja näi-10 hin kuuluvat yhdisteet nimiltään G-2N ja G-2A sekä KS-619-1. G-2N:lle ja G-2A:lle ei raportoitu biologista aktiivisuutta, kun taas KS-619-1 esitetään kalsiumioneista ja kalmoduliinista riippuvan syklisten nukleotidien fosfo-diesteraasin inhibiittorina. Äskettäin julkaistussa EP-15 patenttihakemuksessa 277 621 esitetään antifungaaliset antibiootit BU-3608 (Ia), BU-3608 B (Ib) ja BU-3608 C (Ie). Antibiootit benanomysiini A ja B raportoitiin julkaisussa J. Antibiotics, 1988, 41:807-811; benanomysiini B vaikuttaa olevan sama kuin BU-3608 C, kun taas benanomysiini 20 A:ssa on hydroksyyliryhmä sokerin aminoryhmän paikalla.
R
i
CONHCHCOgH
HCL Jv^CH3 0 Γ Il h|, y HO \ hHR· R-0
30 R«CH, R=H
Ia: R’=CH3; R"=B-D-ksylosyyli Id: R'=CH3; R"=B-D-ksylo- syyli
Ib: R'=CH3; R"=H Ie: R'=H; R"=B-D-ksylosyy- li 35 Ie: R'=H; R"=S-D-ksylosyyli 2 98147
Samaan aikaan vireillä olevassa patenttihakemuksessa U.S.S.N. 203 776, jätetty 7. kesäkuuta 1988, esitetään BU-3608 D (Id) ja BU-3608 E (le).
Tämä keksintö tuo käytettäviksi menetelmän yhdis-5 teiden valmistamiseksi, joilla on kaava II
CM.OM
I * CONHCHCOjH H CL JL .CM, 0 HO y|]^ ^ /v-CH ud jossa seriini on D-seriini; R1 ja R2 ovat toisistaan riip-15 pumatta H tai C^alkyyli; ja R3 on H tai B-D-ksylosyyli; tai niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi.
β-D-ksylosyyli on fragmentti, jolla on kaava 20
Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista, että viljellään Actinomadura hlbisca -kantaa, joka pys-25 tyy tuottamaan mainittua antibioottiyhdistettä, kuten
Actinomadura hibisca -kantaa ATCC 53557, ATCC 53762, ATCC 53815 tai ATCC 53816, elatusaineessa, joka sisältää assimiloitavissa olevat hiilen ja typen lähteet sekä D- tai DL-seriiniä, aerobisissa olosuhteissa, ja otetaan fermen-30 taatiotuote talteen käymisliemestä, jolloin saadaan kaavan II mukainen yhdiste, jossa R3 on B-D-ksylosyyli ja R1 on vety tai metyyli ja R2 on vety, ja haluttaessa i) poistetaan saadusta fermentaatiotuotteesta B-ksylosyyliryhmä kuumentamalla happamassa liuoksessa, jol-35 loin saadaan kaavan II mukainen yhdiste, jossa R1 on vety - 98147 3 tai metyyli ja R2 ja R3 ovat kumpikin vetyatomeja, ja/tai haluttaessa
ii) saatu yhdiste, jolla on kaava 5 fW,OW
CONHCHCOjH
10 ** 8 ** Η°Λ^ν,Η)'4 jossa R3 on H tai ksylosyyli ja R4 on H tai metyyli, alky-loidaan pelkistävällä alkylaatiolla saattamalla se reagoi-15 maan aldehydin tai ketonin kanssa ja pelkistämällä näin saatu imiini, jolloin saadaan kaavan II mukainen yhdiste, jossa R1 ja R2 ovat toisistaan riippumatta vety tai C^-alkyyli ja R3 on vety tai β-ksylosyyliryhmä, ja haluttaessa muutetaan saatu kaavan II mukainen yhdiste farma-20 seuttisesti hyväksyttäväksi suolakseen.
Edullinen kaavan II mukainen yhdiste on sellainen yhdiste, jossa R2 on H ja R3 on β-D-ksylosyyli, tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola, eli yhdiste, jolla on kaava III 25
» ?H‘0H
HOL -L .CHj M °l Y H CM, JL Ys y I I Τι I e| ,. inn 30 ''' * ® \ HHR1 35 BU-3608 FA-1: R^CHj (III") BU-3608 FA-2: R^H (III’) 4 98147 jossa R1 on H tai metyyli. Keksintö koskee myös Actinoma-dura hibisca -kantoja, jotka kykenevät tuottamaan kaavan III mukaisia antibiootteja, ts. biologisesti puhtaita Actinomadura hibiscan viljelmiä, ATCC 53815 ja 53816, jot-5 ka pystyvät tuottamaan kaavan lii' tai III" mukaista antibioottia viljeltäessä vesipohjaisessa elatusaineessa, joka sisältää assimiloitavissa olevan hiilen, typen ja D-serii-nin lähteen.
Yhdisteen, jolla on kaava 10 CH.OH I z
CONHCHCOgH
o HOk JL -.CH, 0 ho 3
JL. J
15 L I M (iv) 20 edustaa BU-3608 FA-l:n ja FA-2:n aglykonia, ja se on hyödyllinen antifungaalisten kantayhdisteiden tai niiden johdannaisten synteesissä.
Kuvio 1 esittää yhdisteen BU-3608 FA-1 400 MHz:n ydinmagneettista protoniresonanssispektriä DMS0-d6:ssa.
25 Kuvio 2 esittää yhdisteen BU-3608 FA-2 400 MHz:n ydinmagneettista protoniresonanssispektriä DMSO-d6:ssa.
Tämän keksinnön mukaisesti valmistetut antibiootit ovat sienilääkkeitä. Kaavan II mukaiset yhdisteet, joissa R3 on β-D-ksylosyyli, R1 on vety tai metyyli ja R2 o vety 30 (eli kaavan III mukaiset yhdisteet) siis BU-3608 FA-1 ja BU-3608 FA-2, tuotetaan siis viljelemällä Actinomadura hibiscan kantaa, joka kykenee tuottamaan näitä antibiootteja, tai sen varianttia tai mutanttia, elatusaineessa, joka sisältää D- tai DL-seriiniä. Esimerkkeinä antibioot- 35 tia tuottavista Actinomadura hibiscan kannoista voidaan mainita kanta P157-2 ja siitä johdetut mutanttikannat ni- - 98147 5 miltään A2660, A2493 ja B0012. Kanta P157-2, joka tuottaa BU-3608 FA-l:tä edullisesti elatusaineessa, jota on täydennetty D-seriinin lähteellä, eristettiin maaperänäyt-teestä, joka oli kerätty Fidzi-saarilta eteläiseltä Tyy-5 neltä valtamereltä. Biologisesti puhdas Actinomadura hi-biscan kannan P157-2 viljelmä on talletettu American Type Culture Collection-talletuslaitokseen, Rockville, Maryland, USA, ja lisätty siellä olevaan pysyvään mikro-organismikokoelmaan ATCC 53557:nä. Kannan P157-2 viljely-10 ominaisuuksien ja fysiologisten ominaisuuksien kuvaus esitetään samaan aikaan vireillä olevassa patenttihakemuksessamme sarjanumero 115 273, jätetty 2. marraskuuta 1987, joka sisällytetään tähän viitteenä. Mutanttikannat A2660, A2493 ja B0012, jotka pystyvät tuottamaan sekä BU-3608 15 FA-l:tä että FA-2:ta elatusaineessa, joka sisältää D-seriinin lähteen, saatiin alkuperäisestä kannasta P157-2 altistamalla alkuperäinen kanta N-metyyli-N'-nitro-N-nitro-soguanidiinille (1000 pg/ml) tunnin ajaksi; kannat valikoitiin sen mukaan, miten ne kykenivät tuottamaan BU-3608-20 antibioottikompleksia, siis BU-3608:a tai B-, C-, D- ja E-komponentteja, ilman lisättyä D-seriinilähdettä. Biologisesti puhtaat viljelmät kantoja A2660, A2493 ja B0012 on tallennettu ATCC:hen, ja niille on annettu hakunumerot 53762 (A2660), 53815 (A2493) ja 53816 (B0012).
25 Edellä mainittujen, antibioottia tuottavien Acti nomadura hibiscan kantojen ominaispiirteet viljelyssä esitetään taulukossa I.
- 98147 6 m
H
O 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 H
O 4 4 4 s- 44444444ZI
n 3 p
-M
fO
ro -p en . « JJ, + * o>
p es 4 111 I I I I I I I I I I V
>1 -H
MÖ CO 4? φ (o <d U) M ..
P|
ή e E
a) »rd a •m g
rH tH
•r· « O
> V vO 4 4 4 +4 444 t(0 3 VO 4444 4444444444 4j > rs
•h L
(U < p
P
Ή t0 •3 >> a tn tn m H es λ; <0 I 4 4 44444
5 t"· 4444 4444444444 -H
ä «n « o r1 e * <u n
O
P
C
fO
X
rt n (0 -P to P to 2 > 3 ω : · a •H j—^ M in !* C ΓΜ | + (U I ft Ό ft 10 •h tn m O H s—'
P
• 0) P Π) P P
r-1 e to tn to to •h tn <e tn tr O <0 HJ I (0 (0 X W I -P I I e
X 3 Φ C -H -P -P
3 P4J-H-PR tn > Ή (O 3 -H -P -P >1 >1
3 -P 3 O' tO -P »P JS
«j w tn to to O' a) E-t m p p to a; to rp to -P P Ai to h a -p to p > to tn e a «o tr.
S n) i tn -P -p as i 1 i *p to ·ρ -p tn *p ·ρ ·ρ ^ to ·ρ tn i -P to tn o tn e -p -p tn tn -p-HO-P tnooooctpcoo o < o o tn ooo-poco -poo .
3.ÖP.0 Ο^ΡΛ-Ρ-Ρρι-PdC + tO tUtOO Λ3ιβΟ<0Ο·ΡΐηΕβ +
>tOAiAi -P.rPAirPXiAitn-PtOlO
P >1 Ai 3 Vt !Ot 2 P O) 3 O Ή P S
•PHIO H IltOaiP-PCfOII
KO.tn o QQtntnEPiJMtn PiD
- 98147 7
On ymmärrettävä, että BU-3608 FA-l:n ja FA-2:n tuottamiseksi tämä keksintö ei rajoitu mainituihin tiettyihin eliöihin, vaan siihen kuuluu mukaan näistä kannoista eri keinoin, kuten röntgensäteilyllä, UV-säteilyllä ja 5 kemiallisilla mutageeneillä, tuotettujen varianttien ja mutanttien käyttö. Myös muut BU-3608-perheen antibioottien tuottajat ja niiden variantit ja mutantit, jotka pystyvät inkorporoimaan seriiniä, kuuluvat mukaan.
Tuottajaeliötä kasvatetaan ravintoliuoksessa, joka 10 sisältää D-seriinin lähteen, aktinomykeettien tunnettujen ravintolähteiden, siis assimiloitavissa olevien hiilen ja typen lähteiden sekä mahdollisesti epäorgaanisten suolojen ja muiden tunnettujen kasvutekijöiden, lisäksi. Aerobisia olosuhteita uppoviljelmässä käytetään edullisesti suurten 15 antibioottimäärien tuotantoon, vaikka rajoitettujen määrien tuotantoon voidaan käyttää myös pintaviljelmiä ja pulloja. Yleiset muiden aktinomykeettien viljelyssä käytettävät menettelytavat ovat sovellettavissa tähän sovellutukseen .
20 Ravintoliuoksen pitäisi sisältää sopiva assimiloi tavissa oleva hiilen lähde, kuten riboosi, glukoosi, sakkaroosi, sellobioosi. Typen lähdeenä, ammoniumkloridia, ammoniumsulfaattia, ureaa, ammoniumnitraattia, natrium-nitraattia jne., voidaan käyttää joko yksin tai yhdistet-25 tynä orgaaniseen typen lähteeseen, kuten peptoniin, li-hauutteeseen, hiivauutteeseen, maissiniiotusnesteeseen, soijajauhoon, pellavansiemenjauhoon jne. Tarvittaessa voidaan myös lisätä epäorgaanisia ravinnesuoloja natriumin, kaliumin, kalsiumin, ammoniumin, fosfaatin, sulfaatin, 30 kloridin, bromidin, karbonaatin, sinkin, magnesiumin, mangaanin, koboltin, raudan ja sen kaltaisten lähteeksi. Se-riinin lähteenä voidaan käyttää joko D-seriiniä tai DL-seriiniä.
Antibioottien BU-3608 FA-1 ja FA-2 tuotanto voidaan 35 toteuttaa missä tahansa lämpötilassa, joka johtaa tuotta-jaeliön tyydyttävään kasvuun, esim. 25-40 “C:ssa, ja se 8 98147 toteutetaan vaivattomimmin lämpötilan 27 - 32 eC vaiheilla. Yleensä optimaaliseen antibioottituotantoon päästään ravistelussa olevissa pulloissa 5-8 päivän inkubaatioai-kojen jälkeen, vaikka pitempi aika voi olla joissakin ta-5 pauksissa tarpeen. Ravisteltavien pullojen ilmastus saadaan aikaan sekoittamalla, esim. ravistelemalla pyörittävässä ravistelijassa. Jos fermentaatio pitää suorittaa tankki f erment toreissa, on haluttavaa tuottaa kasvatusymppi ravinneliemessä siirrostamalla liemiviljelmään eliön vino-10 pintaviljelmästä tai lyofilisoidusta viljelmästä. Kun aktiivinen ymppi on saatu tällä tavalla, se siirretään aseptisesti fermentaatiotankin elatusaineeseen. Antibiootti-tuotanto tankkifermenttoreissa yleensä saavuttaa optimin 3-6 päivän inkubaation jälkeen. Liikuttelu tankkifer-15 menttorissa hoidetaan sekoittamalla, ja ilmastus voidaan saada aikaan ruiskuttamalla ilmaa tai happea sekoitettuun seokseen. Antibioottituotantoa voidaan seurata käyttäen kromatografisia tai spektroskooppisia tekniikoita tai tavanomaisella biologisella määrityksellä.
20 Antibioottien eristys ja puhdistaminen Tämän keksinnön mukaiset antibiootit voidaan saada talteen viljellystä elatusnesteestä millä tahansa tällaiseen talteenottoon sopivalla menetelmällä. Yleiskaavio yhdestä tällaisesta menetelmästä antibioottien BU-3608 25 FA-1 ja FA-2 eristämiseksi ja puhdistamiseksi fermentaa-tioelatusnesteestä esitetään seuraavassa kaaviona I.
9 98147
Kaavio I. BU-3608 FA-1:n ja FA-2:n eristys
Fermentaatioelatusneste | erotus
5 I I
supernatantti myseelikakku 1. pH:n säätö arvoon 2,0 2. suodatus 10 ,--1 sakka suodos 1. pH:n säätö arvoon 5,0 2. suodatus 15 ,--1 suodos sakka 1. liuotus veteen ja liuoksen pH:n 20 säätö arvoon 9,0 2. suodatus
I I
suodos epäpuhtaudet 25 1. pH:n säätö arvoon 2,0 2. HP-20 Diaion-pylväs raaka BU-3608-HCl-kompleksi 30 1. liuotus metanoliin 2. suodatus
I I
suodos epäpuhtaudet 35 etyyliasetaatti
I I
suodos sakka 1. liuotus veteen 40 2. käänteisfaasikromatografia piidioksidigeelissä BU-3608-kompleksin BU-3608 FA-1 HC1 BU-3608 FA-2 HC1 muiden komponenttien 45 HCl-suola HP-20 HP-20 homogeeninen BU-3608 homogeeninen BU-3608 FA-1 HC1 FA-2 HC1 50 pH:n säätö pH:n säätö arvoon 5,5 arvoon 5,5 BU-3608 FA-1 BU-3608 FA-2 • 98147 10
Puhuaksemme tarkemmin kaavion I vuokaaviosta, koko fermentaatioelatusneste erotetaan myseelikakuksi ja super-natantiksi tavanomaisella menetelmällä, kuten sentrifugoi-malla. Supernatantti tehdään happamaksi, ja tällöin muo-5 dostuva sakka poistetaan. Suodoksen pH säädetään arvoon 5 antibiootin saostamiseksi raakatuotteena, joka uudelleen-liuotetaan alkaliseen veteen ja suodatetaan epäpuhtauksien poistamiseksi. Suodos happamoidaan pH-arvoon 2, ja se kro-matografoidaan adsorptiopylväässä, kuten Diaion HP-20, 10 jolloin saadaan BU-3608-HCl-kompleksi raakatuotteena. Antibiootin raakatuotekompleksi voidaan uudelleenkiteyttää esim. etyyliasetaatista, ja erottaa tuote yksittäisiksi antibioottikomponenteiksi käyttäen käänteisfaasi-HPLC:tä piidioksidigeelissä. BU-3608 FA-l:tä ja BU-3608 FA-2:ta 15 sisältävät fraktiot voidaan edelleen puhdistaa Diaion HP-20 -kromatografiällä. Sitten antibioottien hydroklori-disuolat voidaan muuttaa kahtaisionimuotoon säätämällä HCl-suolan vesiliuoksen pH arvoon 5,5.
Antibiooteille BU-3608 FA-1 ja FA-2 ovat tunnus-20 omaisia seuraavat fysikokemialliset ominaisuudet.
Taulukko 11 11 98147 BU-3608 FA-l:n ja FA-2:n fysikokemiallisia ominaisuuksia 5 BU-3608 ΓΑ-1 BU-3608 FA-2
Laatu * Tummanpunainen amorf. jauhe Tummanpun. amorf. jauhe
Sp. (haj.) : 21S - 220eC 186 - 190®C
jej24 s + 919* (c 0,1, 0, IN HC1) + 79® (c 0,1, 0, IN HC1) SIMS */z 857 (M+H)+ 843 (H+H)+ 10 Molekyy1ikaava s C40H44N2°19 C39H42N2°19 7H NMR : olennaisesti sellainen kuin olennaisesti sellainen kuviossa 1 on näytetty kuin kuviossa 2 on näyt.
13C NMR (100MHz DHSO-d.) : 16,3(q), 20,3(q), 36,4(q), 16,4(q), 20,4(q), * 54.9(d), 56,l(q), 61,6(t), 55,0(d), 56,2(q), 63.1(d), 65,9(q), 67,8(d), 61,7(t), 54,3(d), 69,3(d), 69.9(d), 71.7(d), 65,9(q), 67,3(d), 15 73.6(d), 75.8(d), 80,5(d), 69,4(d), 69,7(q), 82.1(d), 104 1(d), 71.8(d), 73.5(d), 104.2(d), 105.2(d), 75.9(d), 79.1(d), 106,0(d), 110,3(8), 82.5(d), 104.2(d), 111.4(d), 117.1(d), 104.3(d), 105,1(d), 119,0(8), 119.2(8), 106.1(d), 110.4(e), 126,3(8), 132,1(8), UI,5(d), 117.2(d), 133,0(8), 136,8(8), 119,l(s), 119,3(s), 137,6(8), 137,9(8), 126,3(s), 132.1(e), on 143,5(8), 158,0(8), 133,1(e), 136,8(s), ^ 163.6(e), 165,8(8), 137,8(8), 138,0(s), 166,2(8), 168,5(8), 143,5(s), 158,2(s), 172,2(8), 180,2(8), 163,7(8), 165,8(s), 187,3(8) 166,2(s), 168.6(e), 172,3(8), 180,1(8), 187,4(8) <*> liuoksessa 50X MeOH : 221(32,100), 276(27,400) 223(27,700), 277(25,400) 25 499(12,900) 499(12,200) liuoksessa 0,01N HC1-50X MeOH : 234(37,400), 299(31,100) 234(34,500), 296(28,900) 460(12,900) 460(12,000) liuoksessa 0,01N Ne0H-50% MeOH : 244(34,100), 320(15,700) 233(37,200), 319(16,600) 498(14,900) 498(15,100) IR (KBr)cm'1 : 3400, 2920, 1605, 1385, 3400, 2920, 1600, 1385, 30 1295, 1260, 1160, 1040 1295, 1255, 1160, 1040 TLC Si02 Rf · 0,26 0,22 (8-114, HeOAc-n-PrOH-28X NH^OH - 451105:60, v/v) HPLC Rt (min) : 8|β1 7,65 (ODS, CHjCN-0.15% KHjPO^, pH 3;5 (25:75) 12 98147
Antibiootteja BU-3608 FA-1 ja FA-2 voidaan edelleen modifioida kemiallisesti. BU-3608 FA-1:n, FA-2:n tai niiden seoksen kuumentaminen happamassa liuoksessa ksylosyy-liryhmän irrottamiseen riittävän ajan tuottaa vastaavat 5 desksylosyylijohdannaiset ja pienen määrän aglykonia IV. Käytetty liuotin voi olla esimerkiksi dioksaani, tetrahyd-rofuraani, vesi, alempi alkanoli tai näiden seos; happoka-talyytti voi olla esimerkiksi suolahappo, rikkihappo tai trifluorietikkahappo. Lämpötila voi olla noin 60 - 100 °C 10 tai liuottimen palautusjäähdytyslämpötila. Reaktioaika voi olla noin 0,5 - 10 tuntia, ja se riippuu käytetyistä reaktio-olosuhteista. N,N-dimetyyli-BU-3608 FA-2, joka on valmistettu seuraavassa kuvattavalla pelkistävällä alkylaa-tiomenetelmällä, voidaan muuttaa sitä vastaavaksi desksy-15 losyyliyhdisteeksi samaan tapaan. On todettu, että N,N-dimetyyli-BU-3608 FA-2:n happohydrolyysi johtaa käytännössä hyödylliseen saantoon aglykonia IV.
BU-3608 FA-1:n, FA-2:n tai niitä vastaavien desksylosyyli johdannaisten aminoryhmä voidaan alkyloida pelkis-20 tävällä alkylaatiolla, jossa ensiksi antibioottilähtöaine saatetaan reagoimaan aldehydin tai ketonin kanssa imiinin muodostamiseksi ja sen jälkeen pelkistetään näin muodostettu imiini. Kondensaatio ja pelkistys voidaan suorittaa samassa reaktioastiassa yhdessä vaiheessa tai kahdessa 25 erillisessä vaiheessa. BU-3608 FA-2:n tai sen desksylosyyli johdannaisten primaarinen aminoryhmä voidaan muuttaa tertiaariseksi amiiniksi, jossa on kaksi identtistä alkyy-liryhmää, käsittelemällä ainakin kahdella ekvivalentilla karbonyyliyhdistettä suhteessa antibioottiin ja sen jäl-30 keen pelkistämällä; tai tertiaarinen amiini, jossa on kaksi eri alkyylisubstituenttia voidaan saada käyttämällä kontrolloitu määrä ensimmäistä karbonyylireagenssia primaarisen amiinin muuttamiseksi sekundaariseksi amiiniksi, joka sitten saatetaan reagoimaan toisen, eri karbonyyliyh-35 disteen kanssa tertiaarisen amiinituotteen saamiseksi. Jos - 98147 13 toista karbonyyliyhdistettä ei lisätä, saadaan sekundaarinen amiini.
Karbonyyliyhdiste voi olla aldehydi tai ketoni, jossa on 1 - 6 hiiliatomia, esimerkiksi formaldehydi, 5 asetaldehydi, propionaldehydi tai asetoni. Imiinin pelkistys voidaan suorittaa käyttäen pelkistimiä, kuten metal-lihydridejä, esimerkiksi natriumboorihydridiä, natrium-syaaniboorihydridiä tai litiumaluminiumhydridiä. Reaktio toteutetaan polaarisessa orgaanisessa liuottimessa tai 10 sellaisen seoksessa, kuten vedessä, alemmissa alkanoleissa tai dimetyylisulfoksidissa. Reaktiolämpötila ei ole erityisen rajoitettu, ja se voi olla huoneenlämmöstä noin 100 °C:seen. Kokemuksemme mukaan huoneenlämmössä suoritettu alkylaatioreaktio on tavallisesti mennyt loppuun 24 15 tunnissa. Optimaaliset reaktio-olosuhteet riippuvat tietysti kulloinkin käytettyjen reagoivien aineiden laadusta ja reaktiivisuudesta. On merkille pantavaa, että N,N-dime-tyyli-BU-3608 FA-2 voidaan saada BU-3608 FA-2:sta, FA-l:stä tai niiden seoksesta tarvitsematta erottaa näitä 20 kahta komponenttia. Samaan tapaan N,N-dimetyylidesksylo-syyli-BU-3608 FA-2 voidaan saada desksylosyyli-BU-3608 FA-2:sta, FA-1:stä tai niiden seoksesta.
Biologinen aktiivisuus Tätä keksintöä edustavien yhdisteiden antifungaa-25 lista tehoa arvioitiin sekä in vitro että in vivo. Pienimmät inhiboivat konsentraatiot (MICit) eri sieniä vastaan määritettiin agarsarjalaimennusmenetelmällä käyttäen Sabouraudin dekstroosiagaria. Täten noin 0,003 ml sieni-suspensiota, joka sisälsi 106 solua/ml, pantiin tutkitta-30 via antibiootteja sisältävien agarmaljojen pinnalle. MIC-arvot, jotka luettiin, kun viljelmiä oli kasvatettu 40 tuntia 28 °C:ssa, esitetään seuraavassa taulukossa III.
- 98147 14
CS
• * <2
W 4J 2 Ο Φ Ή & «O
>ί·ηο d ίο νο ό π π ιο <λ<λ·-η*—« 10 VO ·«*- ·« ^ »-Η. 4— 4— aa. *·*. φ*.
Ä I (Ί 'Ο'βΗΗιΟΌΝΟΌΌϊΟΡΙΟνί in ζ > ·—» to o n
ai - s rH
a z n ui o H «n O >1 o » tn vo Γ- Λ (O N H H H H ΙΟ ΐη 10*0*000 UI i i — — — ^ ^ ^ K jj 3 < mnmcnnnoonnOvoom ft □ M (k h h ιλ o h h o esi
' f-H rH
_. Λ Λ (Ö Ή m rt m >< •rl >i
M W
(0 o tyi r-I 00
ifl >1 O
-H tn \θ >-<^H\o\onn tn Λ! n r-t m m n n m O UI I I «on—I —t Ό Ό O © — - —O w
o r-v O 3 < IOONM««OM
u f*H Q 03 (li rH rH rH rH rH
it a λ λ tn 'i; -* £? £ -3 S S δ
£ S -M
'O O) 3 ε oo
« -HO
H TS vO rHfOCOCOrHrHOOinnnOQQ
3 I n {S| — .r- _.g g
0 z t > n-itoonnioirtcsOOrH
Λ «. 3) <S N N h |Q 7 (D tl
M
O
Λ 00
dl O
+j \θ tst n n toeorH<r)(rj(onn*-H\o n i — ^ _ e, I «t ΌΌΟθηΌΌΌΌνθη<-ιιΟΟ dj 3 tn no
e 0Q rH
•H Λ
r—I
03 03
O' «O
e o s vO rH nmetOHftftmnnHiOifl
i3 n I
j e ΌηοοηΌΌΌΌΌη·—ιη©
Γ; 3 pH rH rH O
§ Λ
O
jj n
h S
> O Q
_ n o oo n >, e σ\ m »t 4 w N -u M -4 n 4 4) OHO -μ Q 5E eo f> oo oo 0)
• 00 < n fcr (0 O O 4J
H 0OWH NÄOfHlnd, -H
H 00 e < O n T3 t-π rn n ^ M ^W-J-WOn-HrH,- :0 XJ B Ή 3 -4 «> M -4 M -H H n .-rt o -h «5 Mmun a « % h h hio e M rH t-« 0 4 0 0 M <0 *j ϋ fl O c λ; ai OMHE6<niOOUW«JUCrf»,.
3 w^o5-rtsn«*He«acoi-< ω rH rt cm 03 rH B < 4 -H 4)U M a) JO "
3 > «OC 3ηηη8>·#Λ W
3 rt O-Cw'Mn-H.CTiUBS··
Eh +j ·Ηΐηΰιο<ααο«ο3<οΡ
u AV)3«V)3(MOOOM -HO Z
•η ^ g u p 3 u g u m « * -o q
IH e W O H H fl w w o *H *H *H
Ti ooo^wpajsajp-iHrHa rt e-HOHH-H-H>äaUaj3rH(n fZ Τ3ΛΟΟβ<ΗβΙ·Ηθαθυ«>
^ -MrHUOiMärHMÄ^UO-rlM
•ο<βαο«3·Μ*«οιυΒ»ΐΜΜθ S>" O. (0-H «eouo •M .10 . ·3Μ · rH Q. M 3
O OIO OK <|<lt*. H Hl ta tn Oh Z
15 98147
In vivo antifungaalisia tehoja arvioitiin laskimonsisäisesti aiheutettuja Candida albicans A9540-, Cryptococcus neoformans IAM4514- ja Aspergillus fumigatus IAM2034-infektioita vastaan hiirissä. Candida albicansia 5 ja Cryptococcus neoformansia viljeltiin 18 ja vastaavasti 48 tuntia 28 eC:ssa YGP-elatusaineessa [hiivauute (0,2 %), glukoosi (1,5 %), peptoni (0,5 %), K2HP04 ( 0,05 %) ja MgS04 (0,05 %)] ja suspensoitiin suolaliuokseen. Aspergillus fumigatusta viljeltiin 7 päivää YGP-agarvinopinnalla ja 10 suspensoitiin suolaliuokseen. Itiöt kerättiin talteen suodattamalla sienisuspensio sideharson läpi. 20 - 24 g:n painoisia, urospuolisia ICR-hiiriä infektoitiin laskimonsisäisesti letaaliin mediaaniannokseen verrattuna noin kymmenkertaisella annoksella sieniä.
15 Tutkittavia yhdisteitä annettiin eri annoksia vii den hiiren ryhmille laskimonsisäisesti kullekin joko kerran juuri sienialtistukesen jälkeen (päivä 0) tai kerran päivässä 5 päivän ajan päivästä 0 päivään 4 (qd x 5). 50-%:isesti suojaava annos (PD50) laskettiin kahdentenakym-20 menentenä päivänä sienialtistuksen jälkeen kirjatuista henkiinjäämismääristä. Kaikki kontrollieläimet kuolivat 7-15 päivän sisällä sieni-infektion jälkeen. In vivo -tutkimusten tulokset esitetään taulukossa IV.
25 Taulukko IV
In vivo -teho laskimonsisäisesti aiheutettuja Candida-, Cryptococcus- ja Aspergillus-infektioita vastaan 30 PD50 (»g/kg/ingj. iv) C. albicans C. neoformans A. fumigatus A9540 ZAM4514 IAM2034
Kerran qd z 5 Kerran qd x 5 Kerran qd x 5 BU-3608 FA-1 18 - 35 BU-3608 FA-2 7.4 - H.N-dimetyyli BU-3608 FA-2 9.0 7,5 11 2,8 36 15 . 98147 16 N,N-dimetyyli-BU-3608 FA-2:n LD50 määritettiin hiirissä laskimonsisäisen kerta-annoksen jälkeen. Annoksella 600 mg/kg, korkeimmalla testatulla annoksella, ei havaittu letaalista toksisuutta eikä mitään merkittävää toksisuus-5 löydöstä havaittu.
Sieni-infektioiden hoitamiseksi eläimissä ja ihmisessä, tämän keksinnön mukaisesti valmistettuja antibiootteja voidaan antaa antifungaalisesti tehokas määrä mitä tahansa hyväksyttyä antotapaa käyttäen; näihin kuuluvat, 10 mainittuihin rajoittumatta, laskimonsisäinen, lihaksen sisäinen, suun kautta, nenänsisäinen, ja pinnallisia infektioita varten, paikallinen antotapa. Parenteraaliseen antoon tarkoitetuihin valmisteisiin kuuluvat steriilit vesi- tai ei-vesipohjaiset liuokset, suspensiot tai emul-15 siot. Niitä voidaan myös valmistaa sellaisten steriilien kiinteiden koostumusten muodossa, jotka voidaan liuottaa steriiliin veteen, fysiologiseen suolaliuokseen tai johonkin muuhuun steriiliin injektiokelpoiseen liuokseen juuri ennen käyttöä. Suun kautta annettavat formulaatiot voivat 20 olla tablettien, gelatiinikapseleiden, jauheiden, pastil lien, siirappien ja sen kaltaisten muodossa. Paikallista antotapaa varten yhdiste voidaan sisällyttää nestemäisiin valmisteisiin, voiteisiin, geeleihin, emulsiovoiteisiin, salvoihin, tinktuuroihin ja sen kaltaisiin. Kerta-annos-25 muotoja voidaan valmistaa käyttäen menetelmiä, jotka ovat yleisesti farmaseuttisten formulaatioiden alan ammattimiesten tiedossa.
On merkille pantavaa, että hoidettaessa tämän keksinnön mukaisesti valmistetuille antibiooteille herkällä 30 sienellä infektoitunutta isäntää, kulloinkin edullinen antotapa ja käytetty annostus ovat sieni-infektioiden hoidossa taitavan hoitavan lääkärin oman harkinnan varassa, ja ne vaihtelevat riippuen aiheuttajaeliöstä, sen herkkyydestä antibiootille, infektion vakavuudesta ja paikasta, 35 ja potilaan ominaisuuksista, kuten iästä, ruumiinpainosta, 98147 17 eritysnopeudesta, samaan aikaan käytettävistä lääkkeistä ja fyysisestä yleiskunnosta.
Seuraavat esimerkit ovat kuvaavia eivätkä rajoita tämän keksinnön suoja-alaa.
* 5 Esimerkki 1 BU-3608 FA-l:n fermentaatiotuotto (a) Agarvinopinta. Actinomadura hibisca P157-2:ta (ATCC 53557) kasvatettiin agarvinopinnalla, pH 7, jolla oli koostumus 10 0,5 % liukoista tärkkelystä 0,5 % glukoosia 0,1 % kala-liha-uutetta 0,1 % hiivauutetta 0,2 % NZ-case (kaseiinin pilkkomistuote, Scheffiel 15 Chemical Co, USA) 0,2 % NaCl 0,1 % CaC03 1,6 % agaria
Viljelmää inkuboitiin 28 °C:ssa 10 päivää.
20 (b) Siemenviljelmä. Pieni erä mikrobikasvustoa vi- nopintaviljelmältä siirrettiin 500 ml:n Erlenmeyer-pul-loon, jossa oli 100 ml elatusainetta, pH 7,0, jonka koostumus oli 3 % glukoosia 25 3 % soijajauhoa 0,5 % Pharmamediaa 0,1 % hiivauutetta 0,3 % CaC03
Viljelmää inkuboitiin 32 °C:ssa 6 päivää pyörittä- 30 vässä ravistelijassa nopeudella 200 rpm.
(c) Tuotantoviljelmä. 5 ml mikrobikasvustoa siirrettiin siemenviljelmästä 500 ml Erlenmeyer-pulloon, jossa oli 100 ml steriiliä tuotantoelatusainetta, jonka koostumus oli 35 3 % glukoosia 3 % soijajauhoa 18 98147 0,5 % Pharmamediaa 0,1 % hiivauutetta 0,3 % CaC03 0,25 % D-seriiniä 5 Viljelmää inkuboitiin 28 °C:ssa 6 päivää pyörittä vässä ravistelijassa nopeudella 200 rpm. Antibioottituotanto ylsi arvoon 443 pg/ml, josta 72,9 % oli BU-3608 FA-l:tä, 26,0 % BU-3608:a ja 1,1 % BU-3608C:tä. Antibiootti-tuotanto määritettiin mittaamalla fermentaatioliemen opti-10 nen tiheys aallonpituuksilla 500 ja 600 nm. Todellinen optinen tiheys saatiin vähentämällä optisen tiheyden arvo aallonpituudella 600 nm vastaavasta aallonpituudella 500 nm. Antibioottipitoisuus ilmaistaan vapaata BU-3608-emästä vastaavana määränä. Antibiootit tunnistettiin käyt-15 täen esimerkissä 5 kuvattua HPLC-menetelmää.
Esimerkki 2 BU-3608 FA-l:n ja FA-2:n fermentaatiotuotto käyttäen kantaa A-2493
Actinomadura hibisca P157-2:n A-2493:ksi (ATCC 20 53815) nimetyn arginiiniauksotrofimutantin agarvinopinta- viljelmä ja siemenviljelmä kasvatettiin käyttäen elatusai-neita, joilla oli samat koostumukset kuin esimerkissä 1 kuvatuilla, ja esimerkissä 1 annetuissa olosuhteissa.
Tuotanto A. 5 ml mikrobikasvustoa siirrettiin sie-25 menviljelmästä kuhunkin 500 ml:n Erlenmeyer-pulloon (100 pulloa), joissa oli 100 ml samaa tuotantoelatusainetta, kuin esimerkissä 1(c) on kuvattu. Viljelmää inkuboitiin 28 °C:ssa 6 päivää pyörittävässä ravistelijassa nopeudella 200 rpm. Antibioottituotanto ylsi arvoon 261 pg/ml, ja sen 30 koostumus oli 29,8 % BU-3608 FA-1, 28,9 % BU-3608 FA-2, 19,5 % BU-3608C ja 21,8 % BU-3608.
Tuotanto B. Kannan A2493 antibioottituotanto saatiin aikaan myös elatusaineessa (pH 7,0), jonka koostumus oli 35 3 % glukoosia 3 % proteiini S:ä (soijajauho, Ajinomoto) 19 58147 0,3 % CaC03 0,5 % DL-seriiniä
Antibioottituotanto ylsi arvoon 890 pg/ml sen jälkeen kun viljelmää oli inkuboitu 11 päivää 28 °C:ssa. Kom-5 ponenttien suhteet olivat BU-3608 FA-2 17,7 %, FA-1 17,0 %, BU-3608 33,5 % ja BU-3608 C 31,8 %.
Esimerkki 3 BU-3608 FA-1:n ja FA-2:n fermentaatiotuotto käyttäen kantaa B-0012 10 Tuotanto A. Esimerkin 1 osissa a, b ja c kuvattuja olosuhteita ja elatusaineita noudatettiin käyttäen vari-anttikantaa nimeltään B-0012 (ATCC 53816) alkuperäisen kannan P157-2 sijasta. Antibioottituotanto ylsi arvoon 1150 pg/ml 6 päivän jälkeen, ja komponenttien suhteet oli-15 vat BU-3608 FA-1 33,7 %, FA-2 21,2 %, BU-3608 24,0 % ja BU-3608 C 21,1 %.
Tuotanto B. Pieni erä mikrobikasvustoa kannan B-0012 vinopintaviljelmältä siirrettiin myös 500 ml:n Erlen-meyer-pulloon, jossa oli 100 ml elatusainetta, pH 7,0, 20 jonka koostumus oli 1 % liukoista tärkkelystä 1 % glukoosia 0,5 % hiivauutetta 0,5 % peptonia 25 0,3 % NaCl 0,2 % CaC03
Siemenviljelmää kasvatettiin 32 eC:ssa 6 päivää, ja 5 ml mikrobikasvustoa siirrettiin 500 ml:n Erlenmeyer-pulloon, jossa oli 100 ml tuotantoelatusainetta, pH 7,0, 30 jonka koostumus oli 3 % glukoosia 3 % proteiini S:ä (soijajauho, Ajinomoto) 0,3 % CaC03 0,25 % D-seriiniä 35 Viljelmää inkuboitiin 11 päivää 28 eC:ssa. Anti bioottituotanto ylsi arvoon 1970 yg/ml, ja komponenttien 20 98147
suhteet olivat BU-3608 FA-2 20,0 %, FA-1 10,0 %, BU-3608 C
39,0 % ja BU-3608 31,0 %.
Esimerkki 4 BU-3608 FA-1:n ja FA-2:n fermentaatiotuotto käyt-5 täen kantaa A-2660
Actinomadura hibiscan mutanttikannan A-2660 (ATCC 53762) agarvinopinta- ja siemenviljelmät tuotettiin käyttäen samoja olosuhteita ja elatusaineita kuin esimerkissä 1 kohdissa a ja b. 5 ml siemenviljelmästä siirrettiin 500 10 ml:n Erlenmeyer-pulloon, jossa oli 100 ml tuotantoelatus-ainetta, jonka koostumus oli 3 % glukoosia 3 % soijajauhoa 0,5 % Pharmamediaa 15 0,1 % hiivauutetta 0,3 % CaC03 0,5 % DL-seriiniä
Viljelmää inkuboitiin 28 °C:ssa 7 päivää. Antibi-oottituotanto ylsi arvoon 620 pg/ml komponenttien suhtei-20 den ollessa BU-3608 FA-1 17,0 %, FA-2 15,6 %, BU-3608 23,9 %, BU-3608 C 24,7 %, D 8,3 % ja E 10,5 %.
Esimerkki 5 BU-3608 FA-1:n ja FA-2:n eristys ja puhdistus fer-mentaatioliuoksesta 25 Kymmenen litraa fermentaatioliuosta, joka oli saatu esimerkissä 2, tuotanto A, kuvatulla menetelmällä, erotettiin myseelikakuksi ja supernatantiksi sentrifugoimalla. Supernatantti tehtiin happamaksi pH-arvoon 2,0 käyttäen 6 N HCl:a, ja kertynyt amorfinen sakka poistettiin suodat-30 tamalla. Kirkkaan suodoksen pH säädettiin arvoon 5,0 käyttäen 6 N NaOH:a, ja suodosta pidettiin 5 °C:ssa kaksi tuntia. Kertynyt tummanpunainen sakka kerättiin talteen suodatuksella. Sakka liuotettiin 4,1 l:an vettä, jonka pH oli säädetty arvoon 9,0 6 N NaOH:lla, ja liuos suodatettiin 35 liukenemattomien epäpuphtauksien poistamiseksi. Suodoksen pH säädettiin arvoon 2,0, ja se pantiin Diaion HP-20 -pyi- 21 98147 vääseen (2,0 1). Pylvästä pestiin vedellä ja eluoitiin asetonin 60 % vesiliuoksella (pH 3,0). Konsentroimalla punainen eluaatti saatiin amorfista kiinteää ainetta, BU-3608-kompleksin hydrokloridia (3,1 g). Kiinteä komplek-5 si (3,0 g) liuotettiin metanoliin (120 ml) ja suodatettiin. Sekoitettuun suodokseen lisättiin tipoittain 720 ml etyyliasetaattia, ja saatua liuosta pidettiin 5 °C:ssa 15 tuntia. Kertynyt sakka kerättiin talteen suodatuksella ja kuivattiin (1,28 g).
10 Kiinteä aine (1,28 g) liuotettiin veteen (100 ml) ja pantiin käänteisfaasikromatografiaan YMC GEL ODS A 60 -pylväässä (10 1, Yamamura Chemical Lab.), joka oli tasapainotettu seoksella CH3CN-0,15 % KH2P04, pH 3,5 (21:79). Eluutio suoritettiin samalla liuotinseoksella, ja eluaatti 15 kerätiin 1 l:n fraktioina. Fraktiot analysoitiin HPLC:llä (pylväs: YMC A-301-3, 4,6 mm sisähalkaisija x 100 mm, 3 pm, ODS Yamamura Chemical Lab., liikkuva faasi CH3CN-0,15 % KH2P04, pH 3,5 (25:75), virtausnopeus: 0,8 ml minuutissa, detektio: UV-absorptio aallonpituudella 254 nm, 20 retentioaika: BU-3608 FA-2, 7,65 minuuttia; BU-3608 FA-1, 8,61 minuuttia; BU-3608A, 19,11 minuuttia). Homogeenista BU-3608 FA-2:ta tai BU-3608 FA-l:tä sisältävät fraktiot yhdistettiin ja konsentroitiin in vacuo CH3CN:n poistamiseksi. Kummastakin konsentraatista poistettiin suolat 25 Diaion HP-20 -kromatografiällä tuloksena lähes homogeenistä BU-3608 FA-2-hydrokloridia (75 mg) ja BU-3608 FA-l-hyd-rokloridia (50 mg).
Hydrokloridisuolan muuttamiseksi vapaaseen muotoonsa ja kontaminoivien epäorgaanisten suolojen poistamisek-30 si, kummankin suolan vesiliuoksen pH säädettiin arvoon 5,5 0,1 N NaOH:11a BU-3608 FA-2:n (48 mg) ja BU-3608 FA-1:n (11 mg) puhtaan kahtaisionisen muodon saostamiseksi.
Esimerkki 6 N,N-dimetyyli-BU-3608 FA-2:n valmistus 35 BU-3608 FA-1:n ja BU-3608 FA-2:n seosta (45:55, 510 mg) liuotettiin 50 ml:an vettä, liuoksen pH säädettiin 22 98147 arvoon 7,9 lisäämällä 1 N natriumhydroksidia, ja se laimennettiin 50 ml:11a asetonitriiliä. Tähän liuokseen lisättiin peräkkäin formaldehydin vesiliuosta (>35 %, 1,6 ml) ja natriumsyaaniboorihydridiä (240 mg) huoneenläm-5 mössä. Liuosta sekoitettiin 1 tunti huoneenlämmössä, ja reaktion edistymistä seurattiin HPLCillä. Orgaaninen liuotin poistettiin in vacuo, ja vesipitoisen jäännöksen pH säädettiin arvoon 10,9, Liuos (40 ml) lisättiin tipoit-tain 240 ml:an asetonia sekoittaen ja pidettiin 5 °C:ssa 2 10 tuntia. Tuloksena saatu sakka kerättiin talteen sentrifu-goimalla (3 000 rpm) ja liuotettiin uudelleen 40 ml:aan vettä. Asetonijäänteiden in vacuo poistamisen jälkeen liuoksen pH säädettiin arvoon 5,0, ja liuoksen annettiin seisoa 5 °C:ssa 24 tuntia. Kertynyt sakka otettiin talteen 15 sentrifugoimalla, pestiin peräkkkäin vedellä ja asetonilla ja kuivattiin vakuumissa 60 °C:ssa, tuloksena 80 mg kah-taisionista N,N-dimetyyli-FA-2:ta. Sp. 214-218 eC (haj.); UV λ Bax (0,01 N NaOH) nm(e) 232,8 (32 900), 320,0 (15 500), 498,4 (15 200).
20 Esimerkki 7
Desksylosyyli BU-3608 FA-l:n valmistus BU-3608 FA-l:n (54 mg) liuosta dioksaanissa (5,4 ml) ja 1 N HCl:ssa (5,4 ml) palautus jäähdytettiin höyryhauteella 8 tuntia. Reaktioseos laimennettiin vedellä 25 (30 ml) ja ladattiin lyhyeen Diaion HP-20 -pylvääseen (Mitsubishikasei, 1,8 x 25 cm). Pylvästä pestiin vedellä ja sitten eluoitiin happamalla 80 % asetonilla (pH 3, hap-pamoitu 1 N HClrlla). Punertavan oranssi eluaatti kerättiin talteen ja haihdutettiin, tuloksena syvänpunainen 30 jauhe. Jauhe liuotettiin liuokseen 35 % asetonitriili/fos-faattipuskuri (pH 3,5) ja ajettiin kromatografiässä ODS-pylväässä (YMC-ODS, 2,1 x 25 cm, ajoliuoksena sama liuotin). Haluttua yhdistettä sisältävät fraktiot yhdistettiin ja ajettiin HP-20 -pylvään läpi. Pylvästä pestiin vedellä 35 ja eluoitiin 80 % asetonilla (pH 3). Eluaatin haihdutuksesta saatiin tummanpunainen jauhe, joka liuotettiin ve- - 98147 23 teen (8 ml), ja liuoksen pH säädettiin arvoon 5,3 0,1 N NaOH:lla. Muodostunut sakka kerättiin talteen sentrifugoi-malla, pestiin asetonilla ja kuivattiin, tuloksena tummanpunainen jauhe (23,3 mg, 51 %). Sp. > 180 °C (haj.)· Puh-5 taus HPLC:n mukaan: > 95 %.
IR: v max (KBr) cm*1: 3400, 1605, 1290, 1255, 1060.
UV: λ max (1/100 N NaOH) nm (6): 212 (35 400), 319 (15 300), 498 (14 500).
^-NMR: (400 MHz, DMS0-d6): 1,26 (3H, d, J = 6 Hz, 10 6' -CH3), 2,32 (3H, s, Ph-CH3), 2,65 (3H, s, NCH3), 3,75 (2H, m, 0CH2), 3,91 (3H, s, OCH3), 4,68 (1H, d, J = 8 Hz, 1'-H), 6,72 (1H, d, J = 2 Hz, 10-H), 6,87 (1H, s, 4-H), 7,12 (1H, d, J = 2 Hz, 12-H), 7,71 (1H, s, 7-H).
Esimerkki 8 15 Desksylosyyli BU-3608 FA-2:n valmistus BU-3608 FA-2:n (54 mg) liuosta dioksaanissa (5,4 ml) ja 1 N HCl:ssa (5,4 ml) palautus jäähdytettiin höyryhauteella 8 tuntia. Reaktioseos laimennettiin vedellä (30 ml) ja adsorboitiin lyhyeen Diaion HP-20 -pylvääseen 20 (Mitsubishikasei, 1,8 x 25 cm), pestiin vedellä ja eluoi-tiin 80 % asetonilla (pH 3). Sinooperinpunainen eluaatti yhdistettiin ja konsentroitiin, ja jäännös liuotettiin veteen (8 ml). Liuoksen pH säädettiin arvoon 5,3 0,1 N NaOH:11a, ja muodostunut sakka kerättiin talteen sentrifu-25 goimalla, pestiin asetonilla ja kuivattiin in vacuo, tuloksena tummanpunainen jauhe (37,7 mg, 85 %). Sp. > 180 eC (haj.). Puhtaus HPLC:n mukaan: > 95 %.
IR: v max (KBr) cm"1: 3400, 1605, 1290, 1265, 1035.
UV: λ max (1/100 N NaOH) nm (e): 214 (33 000), 234 30 (32 300), 319 (14 900), 498 (14 100).
1H-NMR: (DMS0-d6): 1,15 (3H, d, J = 7 Hz, 6'-CH3), 2,32 (3H, s, PhCH3), 3,75 (2H, m, 0CH2), 3,91 (3H, s, OCH3), 4,67 (1H, d, J = 8 Hz, l’-H), 6,72 (1H, d, J = 3 Hz, 10-H), 6,93 (1H, s, 4-H), 7,12 (1H, d, J = 3 Hz, 12-H), 35 7,71 (1H, s, 7-H).
24 98147
Esimerkki 9
Desksylosyyli-N,N-dimetyyli-BU-3608 FA-2:n valmistus
Menetelmä A
5 N,N-dimetyyli-BU-3608 FA-2:n (esimerkin 6 tuote, 50 mg) liuosta dioksaanissa (5 ml) ja 1 N HClrssa (5 ml) palautusjäähdytettiin höyryhauteella 8 tuntia. Reaktioseos jäähdytettiin huoneenlämpöön ja suodatettiin tuloksena 7,2 mg sakkaa. Suodos ladattiin kuivaan piidioksidigeeli-10 pylvääseen (Merck Kieselgel 60, 4 x 30 cm) ja eluoitiin liuoksella n-Bu0H-Ac0H-H20 (3:1:1). Eluaatti kerättiin 10 ml:n fraktioihin. Fraktiot 2-14 ja aikaisemmin saatu sakka käsiteltiin kuten esimerkissä 10 on kuvattu. Fraktiot 21 - 32 yhdistettiin ja ladattiin HP-20 -pylvääseen 15 (1,8 x 25 cm). Pylvästä pestiin vedellä ja eluoitiin 80 % asetonilla (pH 3). Sinooperinpunaisen eluaatin konsen-troinnista saatiin kiinteä aine, joka puhdistettiin peräkkäin ODS-pylväskromatografiällä (YMC-ODS, 2 x 37 cm, ajo-liuoksena 20 % asetonitriili/pH 3,5 fosfaattipuskuri) ja 20 Diaion HP-20 -kromatografiällä (1,8 x 25 cm, eluointi- liuoksena 80 % asetoni, pH 3), tuloksena 7,8 mg (17 %) otsikon yhdistettä tummanpunaisena jauheena.
Sp. > 180 "C (haj.). Puhtaus HPLC:n mukaan: > 95 %.
IR: v max (KBr) cm’1: 3400, 1730, 1610, 1380, 1260, 25 1070.
UV: λ max (1/100 N NaOH) nm (e): 211 (38 100), 318 (14 200), 496 (12 500).
^-NMR: (DMS0-d6): 1,23 (3H, d, J = 7 Hz, 6’-CH3), 2,29 (3H, s, PhCH3), 2,75 (6H, s, NCH3), 3,74 (2H, m, 0CH2), 30 3,91 (3H, s, 0CH3), 4,60 (1H, d, J = 8 Hz, l'-H), 6,73 (1H, d, J = 3 Hz, 10-H), 6,89 (1H, s, 4-H), 7,12 (1H, d, J = 3 Hz, 12-H), 7,77 (1H, s, 7-H).
Menetelmä B
Liuoksen, jossa oli desksylosyyli-BU-3608 FA-2:ta 35 (esimerkin 8 tuotetta, 71 mg) vedessä (7 ml) ja asetonit- 25 98147 rillissä (7 ml), pH säädettiin arvoon 7 käyttäen 0,1 N NaOH:a. Tähän liuokseen lisättiin formaldehydin vesiliuosta (35 %, 0,3 ml) ja natriumsyanoboorihydridiä (45 mg) huoneenlämmössä. Reaktioseosta sekoitettiin yön yli, ja 5 orgaaninen liuotin poistettiin in vacuo. Vesipitoisen jäännöksen pH säädettiin arvoon 10 käyttäen NaOH:a, ja sitten jäännös lisättiin tipoittain asetoniin (70 ml). Sakka suodatettiin pois ja liuotettiin veteen pH:ssa 2,5. Liuos ladattiin Diaion HP-20 -pylvääseen (1,8 x 25 cm), 10 pestiin vedellä ja eluoitiin happamana asetonilla (pH 3, happamoitu 1 N HCltlla). Syvänpunainen eluaatti yhdistettiin, konsentroitiin noin 5 ml:ksi, sen pH säädettiin pH 5,3:ksi laimealla NaOH:lla, ja sitten se lisättiin tipoittain asetoniin (70 ml). Muodostunut sakka kerättiin tal-15 teen suodattamalla ja uudelleensaostettiin asetonin vesi-liuoksesta, tuloksena 66 mg (90 %) otsikon yhdistettä tummanpunaisena jauheena, joka oli kaikin puolin identtinen menetelmällä A saadun kanssa. Puhtaus HPLC:n mukaan: > 95 %.
20 Esimerkki 10 BU-3608 FA aglykoni
Esimerkin 9 (menetelmä A) piidioksidipylvään eluaa-tin fraktiot 2-14 yhdistettiin ja konsentroitiin kuiviin tuloksena jauhe. Tämä jauhe ja esimerkin 9 (menetelmä A) 25 sakka liuotettiin 0,01 N NaOH:in, ladattiin Diaion HP-20 -pylvääseen (1,8 x 25 cm), pestiin vedellä ja eluoitiin 80 % asetonilla (pH 3). Sinooperinpunainen eluaatti yhdistettiin, ja asetoni poistettiin in vacuo, tuloksena suspensio. Suspensio happamoitiin 1 N HClrlla (pH 3), ja sitä 30 uutettiin butanolilla. Konsentroimalla butanoliuutos saatiin 11,5 ml aglykonia (33 %) tummanpunaisena amorfisena j auheena.
Sp. > 200 °C (haj.). Puhtaus HPLCtn mukaan: > 95 %.
IR: v max (KBr) cm*1: 3240, 1720, 1605, 1340, 1305, 35 1165 - 98147 26 UV: λ max (1/100 N NaOH) nm (6): 212 (34 500), 319 (15 200), 498 (14 000).
1H-NMR: (DMSO-d6): 2,34 (3H, s, PhCH3), 3,73 (2H, m, OCH2), 3,91 (3H, s, OCH3), 4,24 (2H, AB-q, J = 11 Hz, 5 5-H & 6-H), 4,46 (1H, m, N-CH-COOH), 6,92 (1H, d, J = 2 Hz, 10-H), 7,06 (1H, S, 4-H), 7,28 (1H, d, J = 2 Hz, 12-H), 8,08 (1H, s, 7-H).
Esimerkki 11
Esimerkissä 6 kuvattua yleistä menettelyä noudate-10 taan käyttäen seuraavassa lueteltuja reagensseja vastaavien BU-3608 FA:l:n ja FA-2:n alkyloitujen analogien saamiseksi .
A + B -> II.
15 A S li BU-3608 FA-1 asetaldehydi (1 ekv.)* RS-&-D-ksylosyyli; ^«CH ; r2=ch5ch2- " propionaldehydi (1 ekv.) RS=fl-D-ksylosyyli; R1«CH3j ^ R2*ch.ch„ch - » 3 2 2 .
" asetoni (1 ekv.) ft *P-D-ksylosyyli; R =CH,; p 3 R =-CH(CH3)2 BU-3608 F A-2 asetaldehydi (2 ekv.) R3=B-D-ksylosyyli; R1=R2=
CW
- asetoni (1 ekv.) RS = p-ksylosyyli; R1=H, 25 R2'CHtCCH3>2 " propionaldehydi (2 ekv.) 3=B-D-ksylosyyli; R1=R2= chsch2ch2- " butyraldehydi (1 ekv.) R3=B-D-ksylosyyli; R^=H; r2= ch3<chz>3- 0esksylosyyli-BU-3608 asetaldehydi (1 ekv.) RS=H; R1=CH ; R2=CH CH - FA-1 30 S 1 2 propionaldehydi (1 ekv.) R =H; R sCH^; R = ch3ch2ch2- 27 98147
Ai il » asetoni-(1 ekv.) R3*H; R*=CHj! R2*-CH(CHj)2
Desksylosyyli-BU-3608 asetaldehydi (2 ekv.) R3=H; R^R2* CHjCH^ FA-2 5 « asetoni (1 ekv.) R3=Hi R^=H, R2=-CH(CHj)2 " propionaldehydi (2 ekv.)R3*H> R*=R2= CH^CH^CH^- butyraldehydi (1 ekv.) R 3 = H; R^=H; R2=CHj(CH2) - 10 *Minimi suhteessa BU-3608-lähtöaineeseen.
Claims (9)
1. Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisen yhdisteen valmistamiseksi, jolla on kaava 5 CHjOM CONHCHCOjH 0 ch3°n. Jl jL jL 11 ίο Ύ^Γιίττ^ (II) i S hT 15 jossa seriini jäännös on D-muodossa, R1 ja R2 ovat toisistaan riippumatta H tai C1.6-alkyyli ja R3 on H tai β-D-ksylosyyli, tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan valmistamiseksi, tunnettu siitä, että 20 viljellään Actinomadura hlbisca -kantaa, joka pys tyy tuottamaan mainittua antibioottiyhdistettä, kuten Actinomadura hibisca -kantaa ATCC 53557, ATCC 53762, ATCC 53815 tai ATCC 53816, elatusaineessa, joka sisältää assimiloitavissa olevat hiilen ja typen lähteet sekä D- tai 25 DL-seriiniä, aerobisissa olosuhteissa, ja otetaan fermen-taatiotuote talteen käymi s liemestä, jolloin saadaan kaavan II mukainen yhdiste, jossa R3 on β-D-ksylosyyli ja R1 on vety tai metyyli ja R2 on vety, ja haluttaessa i) poistetaan saadusta fermentaatiotuotteesta β-30 ksylosyyliryhmä kuumentamalla happamassa liuoksessa, jolloin saadaan kaavan II mukainen yhdiste, jossa R1 on vety tai metyyli ja R2 ja R3 ovat kumpikin vetyatomeja, ja/tai haluttaessa ii) saatu yhdiste, jolla on kaava 29 98147 jossa R3 on H tai ksylosyyli ja R4 on H tai metyyli, alky-10 loidaan pelkistävällä alkylaatiolla saattamalla se reagoimaan aldehydin tai ketonin kanssa ja pelkistämällä näin saatu imiini, jolloin saadaan kaavan II mukainen yhdiste, jossa R1 ja R2 ovat toisistaan riippumatta vety tai C^-alkyyli ja R3 on vety tai β-ksylosyyliryhmä, ja haluttaessa 15 muutetaan saatu kaavan II mukainen yhdiste farma seuttisesti hyväksyttäväksi suolakseen.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan yhdiste, jolla on kaava 20 CHgOM COHMCHCOjH H CL -CH,
0 HO jlS|| <IIIM OH tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan yhdiste, jolla on kaava 98147 30 iHjOH CONHCHCOjW HQ. JL .CHj Q HQ ]j Π ll I T . ru (III") siV tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola.
4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan yhdiste, jolla on kaava CHjOH Ce*H^HC0{H . OH JL CH,
0 OH 3
15 CH,0^^^IJ^^L>^||JJ "A y «S 20 0H tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola.
5 VV^r^^T"3 rr^r^i 10 tal sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola.
5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan yhdiste, jolla on kaava 25 e»jOM cgWxco}M OM JL .CH, 0 oh X I h!
30 X tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola.
6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan yhdiste, jolla 35 on kaava · U . I limu !·>·! u - 98147 31 CNfftH COmcNCO^M o .
7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan yhdiste, jolla on kaava CHjOH Λβ·Ν^Μ·Μ
15 Ov^» 0. li e»j0 XIXXI^<5cb’ Tir^r 20 tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola.
8. Mikro-organismi Actinomadura hibiscan biologinen puhdasviljelmä, ATCC 53815, joka pystyy tuottamaan kaavan 111' tai III" mukaista antibioottia viljeltäessä 25 vesipohjaisessa elatusaineessa, joka sisältää assimiloitavissa olevan hiilen, typen ja D-seriinin lähteen.
9. Mikro-organismi Actinomadura hibiscan biologinen puhdasviljelmä, ATCC 53816, joka pystyy tuottamaan kaavan III' tai III" mukaista antibioottia viljeltäessä 30 vesipohjaisessa elatusaineessa, joka sisältää assimiloitavissa olevan hiilen, typen ja D-seriinin lähteen. 32 ^8147
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US26982188 | 1988-11-10 | ||
| US07/269,821 US4973673A (en) | 1988-11-10 | 1988-11-10 | Serine analogs of BU-3608 antibiotics |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI895281A0 FI895281A0 (fi) | 1989-11-07 |
| FI98147B FI98147B (fi) | 1997-01-15 |
| FI98147C true FI98147C (fi) | 1997-04-25 |
Family
ID=23028793
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI895281A FI98147C (fi) | 1988-11-10 | 1989-11-07 | Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten BU-3608-antibioottien seriinianalogien valmistamiseksi |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4973673A (fi) |
| EP (1) | EP0368349B1 (fi) |
| JP (1) | JP2817064B2 (fi) |
| KR (1) | KR930006995B1 (fi) |
| CN (1) | CN1044299A (fi) |
| AT (1) | ATE94556T1 (fi) |
| AU (1) | AU628418B2 (fi) |
| CA (1) | CA2001714C (fi) |
| CY (1) | CY1884A (fi) |
| DE (1) | DE68909170T2 (fi) |
| DK (1) | DK173464B1 (fi) |
| EG (1) | EG19153A (fi) |
| ES (1) | ES2059681T3 (fi) |
| FI (1) | FI98147C (fi) |
| HK (1) | HK151595A (fi) |
| IE (1) | IE63305B1 (fi) |
| IL (1) | IL92240A (fi) |
| MY (1) | MY110238A (fi) |
| NO (1) | NO172393C (fi) |
| OA (1) | OA09246A (fi) |
| PL (2) | PL161784B1 (fi) |
| PT (1) | PT92263B (fi) |
| ZA (1) | ZA898566B (fi) |
Families Citing this family (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5109122A (en) * | 1987-11-02 | 1992-04-28 | Zaidan Hojin Biseibutsu Kagaku Kenkyu Kai | Antibiotics, dexylosylbenanomicin B |
| US5114857A (en) * | 1988-11-10 | 1992-05-19 | Bristol-Myers Company | Actinomadura hibisca microorganism useful for preparing serine analogs of BU-3608 antibiotics |
| US5061624A (en) * | 1988-11-10 | 1991-10-29 | Bristol-Myers Company | Serine analogs of BU-3608 antibiotics |
| US5183808A (en) * | 1988-11-10 | 1993-02-02 | Bristol-Myers Squibb Company | Method for treating fungal infections with serine analogs of BU-3608 antibiotics |
| JP2643404B2 (ja) * | 1989-01-13 | 1997-08-20 | 財団法人微生物化学研究会 | 新抗生物質ｎ―アセチルベナノマイシンｂならびにその製造法 |
| FI92207C (fi) * | 1989-11-14 | 1994-10-10 | Squibb Bristol Myers Co | Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten pradimisiinijohdannaisten valmistamiseksi |
| US5227370A (en) * | 1989-11-14 | 1993-07-13 | Bristol-Myers Squibb Company | Pradimicin derivatives |
| CA2030166C (en) * | 1989-11-22 | 1997-10-07 | Shimpei Aburaki | Pradimicin derivatives |
| JP3035313B2 (ja) * | 1990-03-14 | 2000-04-24 | 財団法人微生物化学研究会 | ベナノマイシンａ４▲′′′▼‐ｏ‐硫酸エステルの塩類およびそれらの製造法 |
| US5217877A (en) * | 1990-09-28 | 1993-06-08 | Bristol-Myers Squibb Company | Process for the preparation of α-glucosidase inhibitor, pradimicin Q |
| US5696096A (en) * | 1990-09-28 | 1997-12-09 | Bristol-Myers Squibb Company | Pradimicin derivatives |
| US5843908A (en) * | 1990-09-28 | 1998-12-01 | Bristol-Myers Squibb Company | Pradimicins l and fl, and derivatives thereof |
| CA2068484A1 (en) * | 1991-05-29 | 1992-11-30 | Osamu Tenmyo | Pradimicin s antibiotics |
| US5194371A (en) * | 1991-07-31 | 1993-03-16 | Bristol-Myers Squibb Company | Production of pradimicin antibiotics |
| JP3134010B2 (ja) * | 1991-11-26 | 2001-02-13 | 財団法人微生物化学研究会 | デスアラニンベナノマイシンａ誘導体およびそれらの製造法 |
| US5837828A (en) * | 1992-04-08 | 1998-11-17 | Bristol-Myers Squibb Co. | Pradimicin derivatives |
| US5420261A (en) * | 1992-05-29 | 1995-05-30 | Schering Corporation | Glycosides of 3'-deoxyaquayamycin antibiotics |
| US5326867A (en) * | 1992-07-16 | 1994-07-05 | Bristol-Myers Squibb Company | Pradimic acids, amides, and pradimicin derivatives |
| US5338728A (en) * | 1992-08-14 | 1994-08-16 | Bristol-Myers Squibb | Pradimicin compounds |
| ZA938725B (en) * | 1992-11-30 | 1994-05-23 | Bristol Myers Squibb Co | C-11 Modified pradimicin derivatives |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS58154582A (ja) * | 1982-03-10 | 1983-09-14 | Yakult Honsha Co Ltd | 新規なカンプトテシン誘導体およびその製造法 |
| US4870165A (en) * | 1987-02-02 | 1989-09-26 | Bristol-Myers Company | Antifungal antibiotics |
-
1988
- 1988-11-10 US US07/269,821 patent/US4973673A/en not_active Expired - Lifetime
-
1989
- 1989-10-27 CA CA002001714A patent/CA2001714C/en not_active Expired - Fee Related
- 1989-11-07 NO NO894417A patent/NO172393C/no not_active IP Right Cessation
- 1989-11-07 IL IL9224089A patent/IL92240A/en not_active IP Right Cessation
- 1989-11-07 FI FI895281A patent/FI98147C/fi not_active IP Right Cessation
- 1989-11-08 OA OA59678A patent/OA09246A/xx unknown
- 1989-11-08 MY MYPI89001554A patent/MY110238A/en unknown
- 1989-11-09 IE IE361789A patent/IE63305B1/en not_active IP Right Cessation
- 1989-11-09 DK DK198905612A patent/DK173464B1/da not_active IP Right Cessation
- 1989-11-09 PT PT92263A patent/PT92263B/pt unknown
- 1989-11-09 KR KR1019890016238A patent/KR930006995B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1989-11-09 PL PL89295767A patent/PL161784B1/pl unknown
- 1989-11-09 EG EG55089A patent/EG19153A/xx active
- 1989-11-09 PL PL89282227A patent/PL161779B1/pl unknown
- 1989-11-09 ZA ZA898566A patent/ZA898566B/xx unknown
- 1989-11-09 CN CN89108454A patent/CN1044299A/zh active Pending
- 1989-11-10 AU AU44615/89A patent/AU628418B2/en not_active Ceased
- 1989-11-10 EP EP89120904A patent/EP0368349B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-11-10 ES ES89120904T patent/ES2059681T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1989-11-10 DE DE89120904T patent/DE68909170T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1989-11-10 JP JP1291383A patent/JP2817064B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1989-11-10 AT AT89120904T patent/ATE94556T1/de not_active IP Right Cessation
-
1995
- 1995-09-21 HK HK151595A patent/HK151595A/en not_active IP Right Cessation
-
1996
- 1996-04-05 CY CY188496A patent/CY1884A/xx unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI98147C (fi) | Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten BU-3608-antibioottien seriinianalogien valmistamiseksi | |
| EP0238011B1 (en) | Polycyclic condensed amino sugar derivatives with anti-tumor and anti-bacterial activity, produced by streptomyces | |
| EP0271581A1 (en) | Novel compounds dc-88a and dc-89a1 and process for their preparation | |
| FI98739C (fi) | Menetelmät benanomisiinien A ja B sekä deksylosyylibenanomisiinin B valmistamiseksi | |
| JPH0452280B2 (fi) | ||
| GB2147582A (en) | Bbm-2478 antibotic complex | |
| FI92206B (fi) | Analogiamenetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten BU-3608-johdannaisten ja niiden suolojen valmistamiseksi | |
| FI86892C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av antitumoer ll-e33288-antibioter och mikroorganismer, som producerar dessa | |
| EP0499489A1 (en) | Polyhydroxycyclopentane derivatives, their preparation and their therapeutic use | |
| KR900008247B1 (ko) | 새로운 생리활성물질 아르파메닌(Arphamenine)의 제조방법 | |
| US5114857A (en) | Actinomadura hibisca microorganism useful for preparing serine analogs of BU-3608 antibiotics | |
| FI101402B (fi) | Menetelmä uuden antibiootin, balhimysiinin valmistamiseksi | |
| US5061624A (en) | Serine analogs of BU-3608 antibiotics | |
| EP0206138B1 (en) | Anthracycline compounds, a process for their preparation and their use as medicaments | |
| US5183808A (en) | Method for treating fungal infections with serine analogs of BU-3608 antibiotics | |
| EP0399444B1 (en) | New carcinostatic or antitumor antibiotic, conagenin, and production and uses thereof | |
| CA1263621A (en) | Fr-900848 substance and preparation thereof | |
| NZ231319A (en) | Serine analogs of bu-3608 antibiotics, production by culture and the pure culture of the microorganism actinomadura hibisca | |
| IL107367A (en) | Aglycone of d-serine intermediate for the synthesis of bu-3608 antibiotics | |
| KR0143769B1 (ko) | 항균성 폴리펩티드 화합물과 그 제조방법 및 이를 함유하는 약학 조성물 | |
| EP0289354A2 (en) | Antibiotic TAN-950A, its production and use | |
| KR0130473B1 (ko) | 새로운 항생물질, 베나노마이신 a와 b 및 덱실오실베나노마이신 b와 이들의 제조 방법과 용도 | |
| KR840000127B1 (ko) | 이스타마이신의 제조방법 | |
| EP0479505A1 (en) | Pradimicins L and FL and derivatives thereof | |
| DK160879B (da) | Anthracyclinantibiotika |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BB | Publication of examined application | ||
| MM | Patent lapsed |
Owner name: BRISTOL-MYERS SQUIBB COMPANY |