DK160879B - Anthracyclinantibiotika - Google Patents
Anthracyclinantibiotika Download PDFInfo
- Publication number
- DK160879B DK160879B DK369085A DK369085A DK160879B DK 160879 B DK160879 B DK 160879B DK 369085 A DK369085 A DK 369085A DK 369085 A DK369085 A DK 369085A DK 160879 B DK160879 B DK 160879B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- chloroform
- methanol
- mixture
- water
- compounds
- Prior art date
Links
- 239000003817 anthracycline antibiotic agent Substances 0.000 title claims description 10
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 105
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 66
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 30
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 28
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 21
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 13
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 12
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 12
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 12
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 10
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 10
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 9
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 8
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 6
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 6
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 6
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 5
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 5
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 5
- STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 7-Cyan-hept-2t-en-4,6-diinsaeure Natural products C1=2C(O)=C3C(=O)C=4C(OC)=CC=CC=4C(=O)C3=C(O)C=2CC(O)(C(C)=O)CC1OC1CC(N)C(O)C(C)O1 STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WEAHRLBPCANXCN-UHFFFAOYSA-N Daunomycin Natural products CCC1(O)CC(OC2CC(N)C(O)C(C)O2)c3cc4C(=O)c5c(OC)cccc5C(=O)c4c(O)c3C1 WEAHRLBPCANXCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 4
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 4
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 4
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 4
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 4
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 4
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 4
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 4
- STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N daunorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 3
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 3
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 3
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 3
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 description 2
- TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N Aglycone of yadanzioside D Natural products COC(=O)C12OCC34C(CC5C(=CC(O)C(O)C5(C)C3C(O)C1O)C)OC(=O)C(OC(=O)C)C24 TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N Astrantiagenin E-methylester Natural products CC12CCC(O)C(C)(CO)C1CCC1(C)C2CC=C2C3CC(C)(C)CCC3(C(=O)OC)CCC21C PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 2
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 229940009456 adriamycin Drugs 0.000 description 2
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 2
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 2
- -1 and at the same time Substances 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 2
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 2
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002026 chloroform extract Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N homoegonol Natural products C1=C(OC)C(OC)=CC=C1C1=CC2=CC(CCCO)=CC(OC)=C2O1 PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 239000013587 production medium Substances 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Chemical compound [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 2
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 2
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- GDGDDTIYKPCVEG-NIQDUIQNSA-N (7S,9S)-9-acetyl-7-[(2R,4S,5S,6S)-4-amino-5-hydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxy-6,9-dihydroxy-8,10-dihydro-7H-tetracene-5,12-dione Chemical compound C1[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1C2=C(O)C(C(=O)C3=CC=CC=C3C3=O)=C3C=C2C[C@@](O)(C(C)=O)C1 GDGDDTIYKPCVEG-NIQDUIQNSA-N 0.000 description 1
- OHFMYSNQKZBRNM-UHFFFAOYSA-N 1-[2,3-dihydroxy-4-(hydroxymethyl)cyclopentyl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)C1 OHFMYSNQKZBRNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000186046 Actinomyces Species 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 239000004254 Ammonium phosphate Substances 0.000 description 1
- 241001135931 Anolis Species 0.000 description 1
- 101100005765 Arabidopsis thaliana CDF1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100007579 Arabidopsis thaliana CPP1 gene Proteins 0.000 description 1
- WMUYJHSRMOORHK-BIIVOSGPSA-N C[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](N(C)C)CC=O Chemical compound C[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](N(C)C)CC=O WMUYJHSRMOORHK-BIIVOSGPSA-N 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N D-Fructose Natural products OC[C@H]1OC(O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FHFHNVHRVKQQHN-UHFFFAOYSA-N Islandicin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C3=C(O)C(C)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1O FHFHNVHRVKQQHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005909 Kieselgur Substances 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N L-arabinopyranose Chemical compound O[C@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 208000007093 Leukemia L1210 Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine Chemical compound O=NN(C)C(=N)N[N+]([O-])=O VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006819 RNA synthesis Effects 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 1
- 229930194692 Rhodomycin Natural products 0.000 description 1
- HINUXGZHCXYZMB-UHFFFAOYSA-N Rhodomycin B Natural products C12=C(O)C=3C(=O)C4=C(O)C=CC=C4C(=O)C=3C(O)=C2C(O)C(CC)(O)CC1OC1CC(N(C)C)C(O)C(C)O1 HINUXGZHCXYZMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 229930188522 aclacinomycin Natural products 0.000 description 1
- LJZPVWKMAYDYAS-QKKPTTNWSA-N aclacinomycin T Chemical class O([C@H]1C[C@]([C@@H](C2=CC=3C(=O)C4=CC=CC(O)=C4C(=O)C=3C(O)=C21)C(=O)OC)(O)CC)[C@H]1C[C@H](N(C)C)[C@H](O)[C@H](C)O1 LJZPVWKMAYDYAS-QKKPTTNWSA-N 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-BXKVDMCESA-N aldehydo-L-rhamnose Chemical compound C[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-BXKVDMCESA-N 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910000148 ammonium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019289 ammonium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000010775 animal oil Substances 0.000 description 1
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229940045799 anthracyclines and related substance Drugs 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- HINUXGZHCXYZMB-DJNFHWKQSA-N beta-Rhodomycin Chemical compound O([C@H]1C[C@]([C@@H](C2=C(O)C=3C(=O)C4=CC=CC(O)=C4C(=O)C=3C(O)=C21)O)(O)CC)[C@H]1C[C@H](N(C)C)[C@H](O)[C@H](C)O1 HINUXGZHCXYZMB-DJNFHWKQSA-N 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000002021 butanolic extract Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229940023913 cation exchange resins Drugs 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 1
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000366 copper(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- WPJRFCZKZXBUNI-HCWXCVPCSA-N daunosamine Chemical compound C[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](N)CC=O WPJRFCZKZXBUNI-HCWXCVPCSA-N 0.000 description 1
- MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N diammonium hydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].[NH4+].OP([O-])([O-])=O MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 210000003495 flagella Anatomy 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000005917 in vivo anti-tumor Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 239000002198 insoluble material Substances 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 1
- 229910052748 manganese Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000035407 negative regulation of cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000004317 sodium nitrate Substances 0.000 description 1
- 235000010344 sodium nitrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940045145 uridine Drugs 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
DK 160879 B
Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukendte anthracyc-linantibiotika, som produceres af mikroorganismer, der hører til slægten Streptomyces.
Det er kendt, at antibiotika af anthracyclintypen, daunomy-5 cin og adriamycin, kan isoleres fra en dyrkningsopløsning af actinomycetes, jfr. hhv. USA-patentskrift nr. 3.616.242 og nr. 3.590.028. Disse forbindelser har et bredt anti-cancerspektrum mod eksperimentelle tumorer og har også været anvendt klinisk som kemoterapeutiske midler mod 10 cancer. Imidlertid er daunomycins og adriamycins antican-cervirkning ikke nødvendigvis tilfredsstillende, selv om de har en betydelig kraftig virkning. Det er derfor blevet forsøgt at fremstille forskellige forbindelser analoge med daunomycin og adriamycin på forskellig måd^ såsom fer-15 mentering, semisyntese og omdannelse under anvendelse af mikroorganismer, og nogle anthracyclinantibiotika er blevet fremstillet, jfr. f.eks. publiceret prøvet japansk patentansøgning nr. 34915/76, aclacinomyciner A og B, T. Oki et al., The Journal of Antibiotics, bind 33, side 20 1331-1340, P. Areamone, Topics in Antibiotic Chemistry, bind 2, side 102-279, udgivet af Ellis Horwood Limited, publiceret uprøvet japansk patentansøgning nr. 56494/82 (4-demethoxy-ll-desoxydaunomycin osv.), publiceret uprøvet japansk patentansøgning nr. 15299/81 (antibiotika af 25 rhodomycin-rækken) og andre.
I "Journal of Medicinal Chemistry", 21, 280 (1978), "Canadian Journal of Chemistry, 5j), 1868-1874 (1980) og "Topics in Antibiotic Chemistry", bd. 2, s. 105-108 beskrives monosaccharider, der er analoge med forbindel-30 serne ifølge opfindelsen som beskrevet senere. Imidlertid tilhører disse kendte forbindelsers aglycon- og/-eller sukkerdel forskellige kategorier. Selv om eksempelvis rhodomycin B, der er beskrevet i "Topics in Antibiotic Chemistry" ligner forbindelsen D788-7 ifølge 35 opfindelsen, består en væsentlig forskel mellem de to forbindelser i, at sukkerdelen i den kendte forbindelse 2
DK 160879B
enten er L-rhodosamin eller daunosamin. Denne forskel medfører en klar forskel i disse forbindelsers antitumor-virkning (jf. f.eks. højre spalte på side 1869 i 5 "Canadian Journal of Chemistry").
Endvidere er et antal forbindelser, der ligner forbindelserne ifølge opfindelsen, blevet undersøgt som anti-cancer-midler.
Imidlertid er ingen af de kendte forbindelser tilfreds-10 stillende både med hensyn til toksicitet og anticancer-virkning.
Opfindelsens formål er derfor at tilvejebringe nye forbindelser med lav toksicitet og høj anticancer-virkning.
15 Med den foreliggende opfindelse tilvejebringes hidtil ukendte anthracyclinantibiotika med formlen
O OH
HO O OH q HO NH2 hvori Y betyder en gruppe med formlen
OH OH
r t CH300C o hooc oh euer ^Sn®·
3 DK 160879 B
Disse forbindelser har en kraftig inhiberende virkning mod formeringen af dyrkede leukæmiceller L 1210 og er nyttige som anticancermidler.
Disse forbindelser er hidtil ukendte antibiotika, som i 5 strukturmæssig henseende er karakteriseret ved ring A i anthracyclinonskelettet. Blandt forbindelserne med formlen (I) har den antibiotiske forbindelse med formlen O OH COOCH3
J *OH
(I-a)
OH O OH O
-Γ ΟΗ nh2 betegnelsen D788-6, den antibiotiske forbindelse med form-10 len
0 OH. OH
YYyV d-b) OH 0 OH q Η3εΓ"0- OH NH2 betegnelsen D788-7, den antibiotiske forbindelse med formlen
4 DK 160879 B
O OH OH
(I-C)
O
Η3αΤΝ^ HO NH2 betegnelsen D788-8, den antibiotiske forbindelse med formlen CCOCH3 O OH o (I-d) HO O OH 1
I nh2 HO
betegnelsen D788-9 og den antibiotiske forbindelse med formlen
0 OH CCOH OH
HO ° °H O (I.e) HO NH2 betegnelsen D788-10.
. DK 160879B
5
Disse forbindelser har kraftig inhiberende virkning mod formeringen af dyrkede leukæmiceller L 1210 og er per se anvendelige som anticancermidler.
Inhiberende virkning mod formering af muse-L 1210 leu- 5. kæmiceller og mod syntesen af nucleinsyre_ L 1210-celler i en mængde på 5 x 10^/ml inokuleres på f.eks. RPM 11640-medium (Rosewellberg Research Laboratories) indeholdende 20%'s okseserum, og forsøgsforbindelsen tilsættes i en koncentration på 0,02-0,25 ug/ml 10 på lignende måde. Dyrkningen gennemføres ved 37°C i en carbondioxiddyrkningskolbe. Derefter bestemmes 50%'s inhiberingsvirkningen mod formering baseret på en kontrolfraktion. Desuden suspenderes ovennævnte L 1210-cel-lekultur i 10% okseserumholdigt RPM 11640 medium i en 15 koncentration på 5 x 10^/ml. Efter dyrkning ved 37°C i 1-2 timer i en carbondioxiddyrkningsflaske tilsættes stoffet i forskellige koncentrationer, og 15 minutter senere tilsættes ^C-uridin (0,05 yCi/ml) eller ^C-thymidin (0,05 yCi/ml), hvorpå dyrkningen fortsættes i 20 60 minutter ved 37°C. Reaktionen afbrydes ved tilsæt ning af kold 10%'s trichloreddikesyre til reaktionsopløsningen, og samtidigt udfældes materiale, som er uopløseligt i det sure medium. Efter yderligere vask-ning to gange med kold 5%'s trichloreddikesyre opløses 25 det uopløselige materiale i myresyre, og der foretages måling af radioaktiviteten. 50%'s optagelsesinhiberings-koncentration bestemmes ud fra optagelsesraten for radioaktivitetet, baseret på grundlag af kontrolfraktionen, hvortil der ikke er sat noget stof. Resulta-30 terne er vist i nedenstående tabel 1.
DK 160879B
6
Tabel 1
Inhiberende virkning mod formering af museleukæmi-L 1210-kulturceller og mod syntese af nucleinsyre_ 50%'s inhiberingskoncentration (IC,.q) 5 _(ug/ml) _
Inhibering af Inhibering af Inhibering af celleformering DNA-syntese RNA-syntese D 788-6 0,25 2,6 1,30 D 788-7 0,0003 0,29 0,68 10 D 788-8 0,22 3,4 1,58 D 788-9 0,22 4,2 2,59 D 788-10 0,083 10 10
Antitumorvirkningen mod muse-L 1210-leukæmi er vist i nedenstående tabel 2.
15 Tabel 2
In vivo antitumorvirkning af D788-7 mod muse-L 1210-leukæmi__
Antitumorvirkning in vivo
Dosis Antitumorvirkning T/c (%) 20 (uq/kg/dag) __ 250 100 125 172 62,5 204 32 187 25 16 133 8 104 4 102 mus: CDF1 n = 6 5 inokulering: 1 x 10 celler/mus (i.p.) 30 behandling: dag 1 til dag 10 (i.p.)
7 DK 160879B
De ovenfor omtalte anthracyclinantibiotika kan fremstilles ved/ at man i et medium indeholdende egnede næringskilder dyrker en stamme/ som danner forbindelserne ifølge opfindelsen, og som let isoleres ved en konventionel varia-5 tionsbehandling af en stamme hørende til slægten Actinomyces, som er i stand til at producere daunomycin og dermed analoge forbindelser, og som er isoleret fra jord eller er kendt, under anvendelse af et variationsmiddel, f.eks. N-methyl-N’-nitro-N-nitrosoguanidin (NTG). Blandt 10 disse producerende stammer udgør et specifikt eksempel stammen RPM-5, som er en variant fremkommet ved en variationsbehandling af Streptomyces stamme D 788, som danner daunomycin og paumycin, og som nylig er blevet isoleret fra jord, med NTG.
15 Denne stamme er deponeret i Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Sciences and Technology den 2. juli 1984 under det internationale deponeringsnummer 811 (FERM BP-811).
De bakteriologiske egenskaber ved stamme RPM-5 beskrives 20 i det følgende.
(A) Morphologi
Lineært luftmycelium udvikles fra forgrenet substratmycelium, men der dannes ingen spiraler. Modne sporer i en kæde på 10 eller flere har en diameter på ca. 0,6-0,8 x 25 0,9-2,5 jum. Sporerne har glatte overflader. Der dannes hverken ascosporer elller flagellasporer.
(B) Vækstbetingelser i forskellige medier
Med hensyn til farveangivelsen er standarder angivet i parentes baseret på "System of Color Wheels for Strepto-30 mycete Taxonomy" af Tresner & E.J. Backus (J.Appl. Microbiol., bind 11, side 335-338, 1963), som er suppleret med "Color Standard" udgivet af Nippon Color Research Laboratories .
8 DK 160879 B
(C) Fysiologiske egenskaber (1) . Væksttemperaturområde: (testet ved temperaturerne 20°C, 28°C, 30°C, 37°C og 42°c ved pH-værdi 6,0 under anvendelse af gær-maltosé-agar-medium). Vækst ved tempe- 5 raturerne fra 20-37°c; men ingen vækst ved 42°C.
(2) Smeltning af gelatine: positiv (dyrkning ved 20°C under anvendelse af glucose-pepton-gelatine-medium) (3) Hydrolyse af stivelse: 10 positiv (stivelse-uorganisk salt-agar-medium).
(4) Koagulering af skummetmælk og peptonisering: resultatet negativt i startfasen, men efter 15 dages dyrkning indtræder peptonisering.
(5) Dannelse af melanin-agtigt pigment: 15 (anvendelse af trypton-gær-kulturvæske, pepton-gær-jernagar og tyrosin-agar-medier) positiv i alle medier.
(D) Udnyttelse af forskellige kulstofkilder: (Pridham-Gottlieb-agarmedium) 1. L-Arabinose positiv 20 2. D-Xylose positiv 3. D-Glucose positiv 4. D-Fructose positiv 5. Saccharose positiv 6. Inositol positiv 25 7. L-Rhamnose negativ 8. Raffinose negativ 9. D-Mannitol positiv
Forbindelserne ifølge opfindelsen kan fremstilles ved at dyrke producerende bakterier i medier med kendt sammen-30 sætning, der sædvanligvis anvendes til dyrkning, af acti-nomycetes. Som kulstofkilder kan eksempelvis anvendes glucose, glycerol, saccharose, stivelse, maltose, animalske og vegetabilske olier osv., som nitrogenkilder kan eksem-
9 DK 160879B
pelvis anvendes organiske stoffer, som f.eks. sojabønnepulver, kødekstrakt, gærekstrakt, pepton, majsstøbevand, rester af bomuldsfrø, fiskepulvere osv., samt uorganiske nitrogenkilder, såsom ammoniumsulfat, ammonium-5 chlorid, natriumnitrat, ammoniumphosphat osv. Om nødvendigt eller om ønsket kan der tilsættes natriumchlorid, kaliumchlorid, phosphater eller salte af divalente metaller, 4*4* -t-4- 4»4* 4*4* 4*4· 4*4* I “I· f.eks. af Mg , Ca+ , Zn , Pe , Cu , Mn eller Ni osv.j og aminosyrer eller vitaminer. Til undgåelse af skum-10 dannelse under fermenteringen kan der desuden hensigtsmæssigt tilsættes antiskummidler, f.eks. silicone "KM75" (Shin-Etsu Kagaku K.K.).
Fermenteringsbetingelser, såsom temperatur, pH-værdi, luftomrøring og fermenteringstid og lignende kan vælges på 15 en sådan måde, at de anvendte bakterier akkumulerer den maksimale mængde af den ønskede forbindelse. Det er eksempelvis fordelagtigt at gennemføre fermenteringen ved temperaturer på 20-40°C, fortrinsvis 28°C, ved pH-værdien 5-9, fortrinsvis 6-7, ved en fermenterings-20 tid på 1-10 dage, fortrinsvis 6 dage.
Til isolering af forbindelserne D788-6 til -10 fra fermenteringsopløsningen kan denne efter endt fermentering separeres ved centrifugering eller filtrering i nærværelse af et egnet filterhjælpemiddel, såsom diatoméjord, hvor-25 ved fermenteringsvæsken adskilles i bakterier og supernatant eller filtrat. Forbindelserne ekstraheres fra supernatanten med organiske opløsningsmidler, såsom chloroform, toluen, ethylacetat osv. ved pH-værdien 7-9.
Fra bakterierne ekstraheres stofferne om nødvendigt eller 30 om ønsket under anvendelse af organiske opløsningsmidler, såsom acetone, methanol, ethanol, butanol osv. De enkelte ekstrakter koncentreres til tørhed, hvorved man får et rødt, råt pulver. Pulveret underkastes kromatografi under anvendelse af adsorberende bærestoffer, f.eks.
35 syntetiske adsorberende harpikser eller silicagel, eller de behandles med anionbytterharpikser og kationbytterhar-pikser enkeltvis eller i passende kombination til udvinding af stofferne D788-6 til -10 i ren form.
DK 160879B
10
Opfindelsen illustreres nærmere i de efterfølgende eksempler. Den som D-788-6 betegnede forbindelse er kendt fra det ovennævnte litteratursted i Canadian J. Chem. og 5 er ikke omfattet af opfindelsen.
Eksempel 1
Fra en YS (0,3% gærekstrakt, 1% opløselig stivelse, 1,5% agar, pH-værdi 7,2) skrårørskulturopløsning af Strepto-myces D788, stamme RPM-5 (deponeret i Fermentation Re-10 search Institute, Agency of Industrial Science and Technology, deponeringsnr. 7703) udtages ved hjælp af et pla-tinpcxdenålmateriale, som inokuleres i en 500 ml-Erlen-meyerkolbe, som indeholder 100 ml af det nedenfor beskrevne podekulturmedium i steril form. Der foretages ryste-^5 dyrkning ved 20°C i 2 dage på et roterende rystebord (220 o/m) til fremstilling af podekultur.
Podekulturmedium:
Opløselig stivelse 0,5%
Glucose 0,5% 20 Esusankød (sojabønnepulver fra firmaet Ajinomoto Limited) . 1,0% Gærekstrakt 0,1%
Natriumchlorid 0,1%
Sekundærtkaliumphosphat 0,1% 25 Magnesiumsulfat (indholdende 7^0) 0,1%
Ledningsvand pH-værdi 7,4 (inden sterilisering).
15 liter produktionsmedium med den nedenfor beskrevne sammensætning sættes til en 30-liters fermenterings-30 beholder, hvorpå der steriliseres, derpå tilsættes 750 ml (svarende til 5%) af den ovenfor- beskrevne pode-kulturopløsning, hvorpå der foretages inokulering.
11
DK 160879 B
Produktionsmedium:
Taiwangær 5,00%
Opløselig stivelse 7,50% Gærekstrakt 0,20% 5 Natriumchlorid 0,20%
Calciumcarbonat 0,30%
Mineralblanding* 0,06%
Ledningsvand pH-Værdi 8,2 (inden sterilisering) 10 * En opløsning af 2,8 g CuS0^.5H20, 0,4 g FeSO^. 71^0, 3,2 g MnCl2.4H20 og 0,8 g ZnSO^^I^O i 500 ml destilleret vand.
Dyrkningen gennemføres ved 28°C i 130 timer med en beluft-ning på 15 1/min. under omrøring med 45 o/m, og dyrknings-15 opløsningen antager en dyb rødbrun farve på grund af det dannede produkt. Dyrkningsvæsken udtages fra fermenteringsbeholderen, og dyrkningsopløsningen stilles på pH-værdi-en 1,7 med kone. svovlsyre, hvorpå der omrøres ved stuetemperatur i ca. 1 time. Til dyrkningsvæsken sættes 2% 20 filtreringshjælpemiddel, og bakterierne isoleres ved filtrering, hvorved der fås 13,5 liter filtrat. Bakteriefraktionen suspenderes i 6 liter acetone, hvorpå suspensionen omrøres i 20 minutter og ekstraheres. Efter filtrering koncentreres acetoneekstrakten til et rumfang på 25 ca. 1,5 liter under formindsket tryk. Koncentratet kombineres med det ovenfor dannede filtrat til et samlet rumfang på 15 liter.
Filtratet (pH-værdi indstillet på 2,0-2,5 med 4 N natrium-hydroxidopløsning) ledes gennem en søjle pakket med 750 ml 30 "Dia Ion HP-20" (syntetisk absorptionsharpiks fra Mitsubishi Chemical Co., Ltd.) ved SV på 4,5 til absorption af produktet. Derefter foretages vaskning med 1,5 liter vand med pH-værdi 1,7 (fortyndet svovlsyre), hvorefter det absorberede materiale elueres med 1,4 liter 50%'s 35 vandig acetone (pH-værdi 1,7). Eluatet koncentreres under formindsket tryk til et rumfang på ca. 800 ml. Derefter
12 DK 160879 B
indstilles koncentratet på pH-værdien 8,5 med 4 N natriumhydroxidopløsning, og der ekstraheres med i alt 2 liter chloroform. Den således fremkomne chloroformekstrakt vaskes med vand og derpå med mættet vandig natriumchloridop-5 løsning, hvorpå den tørres over natriumsulfat. Natriumsulfatet frafiltreres, og filtratet koncentreres til et lille rumfang under formindsket tryk. Overskud af n-hexan tilsættes til udfældning. Der foretages filtrering og tørring i vakuum, hvorved man får 1,84 g råt pulver inde-10 holdende D788-6, D788-7, D788-8 og D788-9.
Ekstraktionsremanensen fra chloroformekstraktionen indstilles på pH-værdien 2,5' med 6 N saltsyre, hvorpå der foretages ekstraktion med i alt 1,5 liter n-butanol. De dannede butanolekstrakter udrystes med vand med en pH-værdi 15 2,5. Butanolet fjernes ved koncentrering under formindsket tryk, og remanensen opløses i en lille mængde methanol.
Til opløsningen sættes overskud af toluen til udfældning af produktet. Opløsningsmidlet fjernes ved destillation, hvorved man får 5,0 g råt pulver indeholdende D788-10.
20 Eksempel 2
En søjle pakkes med 30 g Wako Silica Gel C-200 (Wako Junya-ku Kogyo Co., Ltd.) under anvendelse af en blanding af chloroform og methanol (20:1). Det rå pulver, 600 mg, fremkommet i eksempel 1 ved ekstraktion med chloroform 25 opløses i en lille mængde af en blanding af chloroform og methanol (20:1), og opløsningen absorberes på det øverste lag af silicagelsøjlen, hvorpå der fremkaldes med samme opløsningsmiddelsystem. Først elueres aglycon, hvorpå der foretages fremkaldelse med 160 ml af en blan-30 ding af chloroform og methanol (15:1), 140 ml af en blanding af chloroform og methanol (13:1) og derpå med 260 ml af en blanding af chloroform og methanol (12:1) til elu-ering af en D788-6-fraktion. Endvidere elueres en fraktion indeholdende D788-9 med 200 ml af en blanding af 35 chloroform og methanol (10:1). Derefter foretages eluering med 200 ml af en blanding af chloroform, methanol og. vand (200:20:0,5) og derpå med 200 ml af en blanding af chloro-
13 DK 160879 B
form, methanol og vand (180:20:1), hvorved man får en fraktion, som indeholder D788-7 og D788-8. Mængden af det rå pulver i de enkelte fraktioner efter koncentration til tørhed er som følger: 5 D788-6**fraktion 21 mg D788-7*“fraktion 45 mg D788-8*fraktion 79 mg D788-9-fraktion 85 mg
De ovenfor beskrevne rå pulvere renses og fraktioneres 10 ved tyndtlagskromatografi som beskrevet i det følgende.
D788-6: Den ovenfor beskrevne D788-6-fraktion renses un der anvendelse af et tyndt lag silicagel (20 x 20 cm) (PF 254Silica Gel, Merck Inc.) til fraktionering. Fraktionen afsættes i form af en vandret linie i en afstand 15 af 15 mm fra den nederste ende af det tynde lag, hvorpå der fremkaldes med en blanding af chloroform, methanol og vand (25:10:1). Der udtages D788-6-bånd, som ekstra-heres med en blanding af chloroform og methanol (8:1). Ekstrakten koncentreres til tørhed, det fremkomne pulver 20 opløses i 0,1 M eddikesyrepufferopløsning (pH-værdi 3,0), og opløsningen ekstraheres og vaskes med chloroform. Den efter ekstraktionen tilbageblevne vandige fase indstilles med 4 N natriumhydroxidopløsning på pH-værdien 8,5, hvorpå der ekstraheres med chloroform. Den fremkomne ekstrakt 25 vaskes med vand og derpå med en mættet vandig natrium-chloridopløsning, hvorpå ekstrakten tørres over natriumsulfat. Chloroformekstrakten filtreres, og filtratet koncentreres under formindsket tryk. Til koncentratet sættes overskud af n-hexan til fremkaldelse af udfældning. Det 30 udfældede produkt frafiltreres og tørres i vakuum, hvorved man får 10 mg D788-6 på ren form.
D788-7: Den ovenfor omtalte D788-7 fraktion underkastes tyndtlagskromatografi på silicagel (se ovenfor) til fraktionering, idet der som fremkalderopløsningsmiddel 35 anvendes en blanding af chloroform, methanol, vand og eddikesyre (120:25:6:14). Der udtages bånd svarende til
DK 160879B
14 D788-7, og det udtagne materiale ekstraheres med en blanding af chloroform, methanol og vand (4:1:0,5). Efter koncentrering af ekstrakten til tørhed opløses remanensen i 0,1 M eddikesyrepuffer (pH-værdi 3,0), og opløsningen 5 vaskes med chloroform og ekstraheres med chloroform ved pH-værdien 8,5 på samme måde som beskrevet ovenfor i forbindelse med rensningen af D788-6, hvorved man får 21 mg D788-7 på ren form.
D788-8: Den ovenfor omtalte D788-8-fraktion fremkommet 10 ved søjlekromatografi på silicagel renses ved tyndtlags-kromatografi til fraktionering på den ovenfor beskrevne måde under anvendelse af et fremkalderopløsningsmiddel bestående af en blanding af chloroform, methanol, vand, eddikesyre og 28%'s ammoniakvand (125:55:5,5:0,9:1,1).
I5 Bånd svarende til D788-8 udtages og ekstraheres med en blanding af chloroform, methanol og vand (4:1:0,5). Derpå behandles ekstrakten analogt med den ovenfor beskrevne fremgangsmåde til rensning af D788-6-fraktionen, og man får 28 mg ren D788-8.
20 D788-9: D788-9-fraktionen (80 mg) fremkommet ved kroma tografi på silicagel som beskrevet ovenfor sættes på- en søjle fyldt, med en suspension af 4 g Wako Silica Gél C-200 (se ovenfor) i en blanding af chloroform og methanol (20:1), hvorpå der igen kromatograferes, idet der som 25 fremkalder anvendes det samme opløsningsmiddelsystem, hvorved man får D788-9 med en renhed på ca. 50%. Dette stof fraktioneres ved tyndtlagskromatografi (se ovenfor) under anvendelse af et fremkalderopløsningsmiddel bestående af en blanding af chloroform, methanol, vand og 30 eddikesyre (120:25:6:14) til rensning og adskillelse af blandingen. Der udtages bånd svarende til D788-9, og materialet ekstraheres med en blanding af chloroform, methanol og vand (4:1:0,5). Derpå oparbejdes ekstrakten på samme måde som beskrevet ovenfor for D788-6, hvorved man får 35 22 mg rent D788-9.
DK 160879 B
15
Eksempel 3
Det i eksempel 1 fremstillede rå pulver (5 g) indeholdende D788-10 ekstraheret med butanol anbringes på en søjle, som er fyldt med en suspension af 35 g Wako Silica Gel C-200 5 (se ovenfor) i en blanding af chloroform, methanol og vand (100:10:0,5), hvorpå der fremkaldes med 200 ml af en blanding af chloroform, methanol og vand (90:10:1), derpå med 360 ml af en blanding af chloroform, methanol og vand (80:10:1), 240 ml af en blanding af chloroform, meth-10 anol og vand (70:10:1) og til sidst med 210 ml af en blanding af chloroform, methanol og vand i forholdet 60:10:1, hvorved man får fraktioner af D788-10, som er yderligere renset. D788-10-fraktionerne udtages og koncentreres under formindsket tryk, hvorved man får delvis renset D788-10 15 på pulverform. Det pulverformige produkt opløses i en fortyndet vandig natriumhydrogencarbonatopløsning. Opløsningen vaskes med chloroform, og den tilbageblevne vandige fase indstilles på pH-værdien 2,5 med 6 N saltsyre, hvorpå den vandige fase ekstraheres med n-butanol. Ekstrak-20 ten inddampes under formindsket tryk, hvorved man får 80 mg pulverformigt produkt. Produktet renses yderligere ved tyndtlagskromatografi med henblik på fraktionering under anvendelse af en blanding af chloroform, methanol, vand, eddikesyre og 28%'s ammoniakvand (125:55:5,5:0,9:1,1).
25 Der udtages fraktioner svarende til D788-10, og de ekstraheres med en blanding af chloroform, methanol og vand (4:1:0,5), som er tilsat 1 dråbe eddikesyre. Efter koncentrering af ekstrakten under formindsket tryk opløses remanensen i en fortyndet vandig natriumhydrogencarbo-30 natopløsning. Opløsningen vaskes med chloroform, hvorpå den indstilles på pH-værdien 2,5 med 6 N saltsyre, og der ekstraheres med n-butanol. Ekstrakten koncentreres til tørhed, hvorved man får 32 mg renset D788-10.
De fysisk-kemiske egenskaber for hver enkelt af de oven-35 stående eksempler fremstillede forbindelser er anført i det følgende.
D788-6 16
DK 160879B
A) Smeltepunkt 138-140°C (sønderdeling) B) [α]β5 + 165° (° = methanol) C) Absorptionsspektre i UV-området og det synlige omrade 5 (methanol) nm · ): 206 1311) max 1 cm 235 (647) 255 (403) 290 (141) 10 492 (229) 511sh (177) 527sh (153) D) IR-absorptionsspektrum (KBr) γ cm”1 1720, 1590, 1450, 1420, 1390, 1280, 1270, 1190, 1160, 15 1000, 980 E) 1H-NMR-spektrum (CDCl^) δ ppm 1,1 (3H, t, J=7,5 H-14) 1,33 (3H, d, J=6,5 H-6') 1,51 (IH, dd, J=12,4 H-2'a) 20 1,6-2,1 (3H, m, H-13, H-2'b) 2,1-2,4 (2H, m, H-8) 3,05 (IH, dd, J=ll,4 H-3') 3,41 (IH, bs, H-4') 3,69 (3H, s, COOCH3) 25 4,1 (IH, g, J=6,5 H^) 4,26 (IH, s, H-10) 5.22 (IH, bs, H-7 )
5,43 (IH, bs, H-1M
7.22 (IH, dd, J=8,2 H-3 ) 30 7,62 (IH, t, J=8 H-2 ) 7,71 (IH, dd, J=8,2 H-l ) D788-7
17 DK160S79B
A) Smeltepunkt 165-167°C
B) [a]j^ + 16° (c-= 0,0125, raethanol) C) Absorptionsspektre i UV-området og det synlige område 5 (methanol) λ^30Η nm (e}% ) : 207 (332) max 1 cm 235 (702) 254 (424) 292 (139) 10 492 (254) 512sh (187) 528 (169) D) IR absorptionsspektrum (KBr) γ 0¾-1 1595, 1450, 1430, 1400, 1290, 1230, 1190, 1160, 1110, 1005, 980 15 E) 1H“NMR-spektrum (CDC13 + CD30D) δ ppm 1,09 (3H, t, J=7,5 H-14) 1,32 (3H, d, J=6,5 H-6') 1,6-1,9 (4H, m, H-2\ H-13) 2,2 (2H, bs, H-8 ) 20 2,7-3,2 (IH, m, H-3') 3,46 (IH, bs, H-4') 4,12 (1H, g, J=6,5 H-5') 4,81 (IH, s, H-10) 5,1 (IH, bs, H-7 ) 25 5,4 (1H, bs, H-l') 7,23 (1H, dd, J=8, 1,5 H-3) 7,64 (IH, t, J=8 H-2 ) 7,79 (1H, dd, J=8, 1,5 H-l) D788-8
18 DK 160879B
A) Smeltepunkt 126-128°C (sønderdeling) B) [α]^ + 309° (c = 0,0175, methanol) C) Absorptionsspektra i UV-området og det synlige område 5 (i methanol) XCH30H nm (E?-% ) : 206 (609) max 1 cm 227 (429) 269 (619) 494 (283) 10 515 (300) 550sh (183) D) IR-absorptionsspektrum (KBr) γ cm ^ 1600, 1460, 1400, 1370, 1285, 1250, 1200, 1170, 1110, 1015, 980 15 E) ^H-NMR-spektrum (CDCl-^-CDgOD) δ ppm 1.3 (IH, d, J=6,5 H-61) 1.4 (3H, d, J=6,5 H-14) 1,5-1,9 (2H, m, H-2') 2.5 (IH, dd, J=18, 4,5 H-8a) 20 2,8 (IH, d, J=18 H-8b) 2,8-3,2 (IH, m, H-3') 3,38 (IH, bs, H-41) 3,98 (IH, q, J=6,5 H-5') 4,49 (IH, q, J=6,5 H-13) 25 5,2 (IH, bs, H-l') 6,97 (IH, bs, H-10) : 7,18 · (IH, dd, J=8, 1,5 H-3) ! 7,59 (IH, t, J=8 H-2 ) 7,75 (IH, dd, J=8, 1,5 H-l)
19 DK 160879B
D788-9
A) Smeltepunkt 175-180°C
B) [α]^ + 62° (c ^=.0,0145, methanol) C) Absorptionsspektre i UV-området og det synlige område 5 (i methanol) ACH30H nm (E?"% ): 206 (307) max 1 cm 235 (671) 255 (428) 291 (153) 10 481sh (212) 493 (226) 512sh (171) 526 (148) D) IR-absorptionsspektrum (KBr) γ cm ^ 15 1725, 1710sh, 1600, 1450, 1430, 1400, 1290, 1240, 1190, 1165, 1110, 1005, 980 E) ^H-NMR-spektrum (CDCl^): <5 ppm 1.36 (3H, d, J=6,5 H-6') 1,5-2,0 (2H; m, H-21) 20 2,2 (IH, dd, J=16, 4,5 H-8a) 2,27 (3H, s, H-14) 2.6 (IH, d, J=16 H-8b) 2,9-3,3 (IH, m, H-3') 3,46 (IH, bs, H-41) 25 3,69 (3H, s, C00CH3) 4,13 (IH, q, J=6,5 H-5·) 4.37 (IH, s, H-10) 5,12 (IH, d, J=4,5 H-7 ) 5,42 (IH, bs, H-l*) 7,23 (IH, dd, J=8, 1,5 H-3) 7.6 (IH, t, J=8 H-2) 7,77 (IH, dd, J=8, 1,5 H-l) D-788-10 20
DK 160879B
A) Smeltepunkt 174-176°C
B) [a]p5 + 200° (C = 0,0185, methanol) C) Absorptionsspektre i UV-området og det synlige område 5 (i methanol) XCH30H nm (eJ% ): 209 (362) max 1 cm ' 226 (371) 257 (329) 497 (169) 10 514sh (155) D) IR absorptionsspektrum (KBr) γ cm-^ 1710, 1600, 1450, 1390, 1280, 1230, 1190, 1160, 1115, 1010, 980 E) ^H-NMR-spektrum (CDCl^-CD^OD) δ ppm 15 1,3 (3H, d, J=6,5 H-6') 1.4 (3H, d, J=6,5 H-14) 1,5-1,9 (2H, m, H-21) 2,1-2,8 (2H, m, H-8 ) 3,7 (IH, bs, H-41) 20 4,0 (IH, g, J=6,5 H-13) 4.1 (IH, s, H-10) 4.2 (IH, q, J=6,5 H-5') 5,1 (IH, bs, H-7 ) 5.5 (IH, bs, H-l ) 25 7,2 (IH, dd, J=8 1,5 H-3) 7.6 (IH, t, J=8 H-2 ) 7.7 (IH, dd, J=8, 1,5 Η,Ι)
Claims (5)
1. Anthracyclinantibiotika, kendetegnet ved, at de har den almene formel O OH HO O OH 0 »“piV HO NH2 5 hvori Y betyder en gruppe med formlen OH OH ''OH , I CH °°C O HOOC OH ΛΛ I 'OH eller | ΌΗ *
2. Anthracyclinantibiotikum ifølge krav 1, kendetegnet ved, at dethar formlen O OH OH ^ || 'I I 'OH YyYV HO O OH O OH NH2
22 DK 160879 B
3. Anthracyclinantibiotikum ifølge krav 1, kende-5 tegnet ved/ at det har formlen OH O OH q ' NH, OH l
4. Anthracyclinantibiotikum ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det har formlen cocch-3 O OH r, OH 0 °H g *3Cpd U CS2
5. Anthracyclinantibiotikum ifølge krav 1, k endete g n e t' ved, at det har formlen O OH ““ (°H OH 0 0H ° h3 cpp Γ NH, OH 1
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DK369085A DK160879C (da) | 1985-08-14 | 1985-08-14 | Anthracyclinantibiotika |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DK369085A DK160879C (da) | 1985-08-14 | 1985-08-14 | Anthracyclinantibiotika |
| DK369085 | 1985-08-14 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK369085D0 DK369085D0 (da) | 1985-08-14 |
| DK369085A DK369085A (da) | 1987-02-15 |
| DK160879B true DK160879B (da) | 1991-04-29 |
| DK160879C DK160879C (da) | 1991-10-14 |
Family
ID=8125706
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK369085A DK160879C (da) | 1985-08-14 | 1985-08-14 | Anthracyclinantibiotika |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| DK (1) | DK160879C (da) |
-
1985
- 1985-08-14 DK DK369085A patent/DK160879C/da not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK369085D0 (da) | 1985-08-14 |
| DK369085A (da) | 1987-02-15 |
| DK160879C (da) | 1991-10-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0022574A1 (en) | Rhodomycin-group of antibiotics and process for preparing same | |
| US4734493A (en) | Novel anthracycline antibiotics | |
| US4612371A (en) | Anthracycline antibiotics | |
| EP0110155B1 (en) | Novel anthracycline derivatives, a process for preparing the same by a microorganism strain, the novel strain streptomyces cyaneus, and use of the anthracycline derivatives as medicaments | |
| CA1210350A (en) | Antibiotic complex producing bacterial culture | |
| DK160879B (da) | Anthracyclinantibiotika | |
| EP0206138B1 (en) | Anthracycline compounds, a process for their preparation and their use as medicaments | |
| EP0276485A2 (en) | Dihydro derivatives of LL-E33288 antibiotics | |
| JPH0576958B2 (da) | ||
| GB2188624A (en) | Preparation of antitumor antibiotic | |
| US4918172A (en) | Anthracycline antibiotics | |
| JP2701069B2 (ja) | 抗腫瘍性アントラサイクリン系化合物 | |
| JPH0479354B2 (da) | ||
| JP4443740B2 (ja) | アントラサイクリン抗生物質 | |
| EP0399444B1 (en) | New carcinostatic or antitumor antibiotic, conagenin, and production and uses thereof | |
| JPH051276B2 (da) | ||
| JP3069081B2 (ja) | 新規制がん性抗生物質 | |
| JP3026862B2 (ja) | 新規アントラサイクリン化合物 | |
| JPS63301893A (ja) | アントラサイクリン抗生物質 | |
| WO2002026744A1 (en) | Mpc1001 derivatives | |
| EP0355843A2 (en) | Process for preparing antibiotics D788-7 | |
| JPH051277B2 (da) | ||
| JPH03232878A (ja) | 抗腫瘍性物質ｂｅ―１２４０６類 | |
| JPS6366194A (ja) | 新規なアントラサイクリン抗生物質 | |
| JPS608300A (ja) | 新規アントラサイクリン抗生物質 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |
Country of ref document: DK |