FI98122C - Menetelmä lipidimetabolismia edistävän aineen valmistamiseksi - Google Patents

Description

- 98122

Menetelmä lipidimetabolismia edistävän aineen valmistamiseksi - Förfarande för framställnlng av ett lipidmetabo-lismbefrämjande medel Tämä keksintö koskee menetelmää lipidimetabolismia edistävän aineen valmistamiseksi.

Korkean verenpaineen Ja arterioskleroosin estämiseen tai hoitoon on tunnettua käyttää yhdessä rasvansaannin rajoittamisen kanssa lääkkeitä, kuten dekstraanisulfaattia lipidien hajoamisen ja absorption estämiseksi tai veren lipoproteiinilipaasiaktiivisuuden edistämiseksi. Lipidin absorptiota estävänä aineena tunnetaan lääke nimeltä Ni-comole. Lipidimetabolismia edistävänä aineena tunnetaan pankreaattinen elastaasi tai vastaavat, sekä myös edellä mainittu dekstraanisulfaatti.

Nicomolen kaltaisten lääkkeiden välttämättömänä haittana on kuitenkin haitalliset sivuvaikutukset. Toisaalta karjanhoitoon ja merieläinten kasvatukseen liittyvillä aloilla on ollut yleisenä tapana antaa karjalle tai kaloille suurienergiaisia rehuja, jotka sisältävät suuren : määrän rasvaa ja proteiinia, jolloin kasvatettujen eläin- • ; ten lihassa pyrkii olemaan liian suuria määriä rasvaa.

: Viime vuosina terveystietoinen väestö on kuitenkin alka- ·· nut suosia laihaa lihaa halutessaan sopivasti kontrolloi- da rasvankäytön määrää ja laatua. Toisin sanoen tämän päivän tavoitteena on rasvankäytön ja liiallisen rasvan • · · kerääntymisen ruumiiseen rajoittaminen ja lisäksi kerään- . tyneen ruumiin rasvan laadun parantaminen ilman että • · · esiintyisi haitallisia sivuvaikutuksia.

• · · • · « • :*: Tämän keksinnön päätavoitteena on estää aikaisemman tek- • · · · nilkan edellä kuvatut haitat ja aikaansaada menetelmä • · · lipidimetabolismia edistävän aineen valmistamiseksi, joi- # · ·;· la voitaisiin edullisesti estää liian rasvan saaminen ja ’· “ liiallinen rasvan kerääntyminen ruumiiseen ja lisäksi parantaa ruumiiseen kerääntyneen rasvan laatua aiheutta- 98122 2 matta haitallisia sivuvaikutuksia. Esillä oleva keksintö koskee menetelmää trlglyseridien hajoamisen, absorption ja liiallisen ruumiin sisäisen kerääntymisen ehkäisemisessä tehokkaan, lipidimetabolismia edistävän aineen valmistamiseksi, jolle menetelmälle on tunnusomaista, että - hydrolysoidaan proteiini tai proteiinia sisältävä aine proteaasilla tai hapolla hydrolysaatin valmistamiseksi, - eristetään saadusta hydrolysaatista mainitun lipidimetabolismia edistävän aineen vaikuttavana aineena alhaisen molekyylipainon omaava peptidiyhdiste, jonka keskimääräinen aminohappoketjun pituus on noin 3-4, tai - mahdollisesti yhdistetään saatu peptidi jatkealneeseen.

Keksinnön tavoitteeseen pääsemiseksi tämän keksinnön menetelmän mukaisesti valmistetun lipidimetabolismia edistävän aineen aktiivisena komponenttina on pienimolekyylinen peptidi, joka on valmistettu proteiinin tai proteiinia sisältävän aineen hydrolyysillä proteaasin tai hapon kanssa, jolloin peptidin keskimääräinen aminohappoketjun pituus on noin 3-4.

‘ Toisaalta tämän keksinnön mukaiseen lipidimetabolismia edistävän aineen valmistusmenetelmään kuuluu vaihe, jossa sekoitetaan 0,1-50 paino% suhteessa rasvan kokonaismäärään lipidimetabolismia edistävää ainetta, jossa on sen V : aktiivisena komponenttina mukana pienimolekyylistä pepti- :V: diä, joka on valmistettu proteiinin tai proteiinia sisäl tävän aineen hydrolyysillä, jolloin peptidin keskimääräi- . .·. nen aminohappoketjun pituus on noin 3-4. Tavallisilla • · · ruoka-aineilla sekoitettavan aineen määrä voi vastaavasti • · · olla niinkin pieni kuin noin 1 paino% suhteessa ruoka- • · : aineen kokonaismäärään. Lisäksi rasvaisillakaan ruoka- • · · aineilla, joiden lipidipitoisuus on noin 20-40%, määrän ei tarvitse olla suurempi kuin 4-20 paino% suhteessa ruuan kokonaismäärään.

Perinpohjaisilla tutkimuksilla ja erilaisilla kokeilla 98122 3 tämän keksinnön keksijät ovat havainneet, että in vitro lipaasiaktiivisuuden estämiseksi lipidiin on pienimolekyylisen peptidin, jonka keskimääräinen aminohappoketjun pituus on noin 3-4, 0,1-50 paino%:n tai suositeltavammin 1-30 paino%:n lisäys suhteessa kokonaisrasvamäärään tehokkain. Lisäksi on myös selvinnyt, että edellinen aine sellaisenaan tai yhdessä ruoka-aineen tai rehun kanssa vähentää rasvan hajoamista ja absorptiota, pienentää veren triglyseridikonsentraatiota ja kolesterolikonsentraa-tiota ja lisäksi vähentää rasvapitoisuutta ja rasvapisa-roita maksassa vaikuttamatta veren tai maksakudoksen sisältämään proteiinimäärään. Lisäksi aineen on osoitettu vähentävän ruumiin rasvan liiallista määrää ja parantavan lipidien koostumuksen laatua.

Alan ammattimiesten yleisessä tiedossa on ollut, että suuri proteiinien saanti voi aikaansaada liiallisen ruumiin rasvan vähenemisen. Tämän vaikutuksen aikaansaamiseksi tämä suuren proteiinimäärän tulee olla ainakin 40% verrattuna normaalin ruokavalion noin 20%:n määrään. Selvänä vastakohtana edellämainittuun tämän keksinnön mukai-'·' sesti valmistettua ainetta tarvitaan vain 1 paino% sen merkittävien vaikutusten aikaansaamiseksi rasvan hajoamisen ja absorption estämisessä ja ruumiin rasvan vähentämisessä. Tämän keksinnön mukaisesti valmistetun lipidime-tabolismia edistävän aineen käyttö eroaa myös selvästi •Y: kaupallisesti saatavien pienimolekyylisten peptidien vas- • « taavasta, joita käytetään aina proteiinilähteenä, joka . .·. absorboituu tehokkaasti. Toisin sanoen, tämän keksinnön • · · JY mukaisesti valmistettu aine eroaa tavanomaisista pienimo- • · · lekyylisistä peptidiaineista sekä annostukseltaan että :.· · tarkoitukseltaan.

• · · • · • · Y Valmistettaessa pienimolekyylistä peptidiä, jonka keski määräinen aminohappoketjun pituus on noin 3-4, proteaa-‘ silla proteaasin ja proteiinin välinen suhde on 0,1-5 yksikköä proteaasia suhteessa 1 mg/proteiinia. Valmistus- 98122 4 menettely kestää 3-48 tuntia, suositeltavasti 16-30 tuntia, 20-70 Celsiusasteen, suositeltavasti 40-60 Celsiusasteen lämpötilassa. Proteaasin aktiivisuusyksikkö määritellään entsyymimääräksi, joka tuottaa ei-proteiini-sia aineita vastaten 1 pg kanssa tyrosiinia, joka on värjätty Folinin reagenssilla, 1 minuutissa 30 Celsiusasteessa entsyymin optimi-pH:ssa maitokaseiinia substraattina käyttämällä.

Seuraavaksi kuvataan eräs esimerkinomainen pienimolekyylisen peptidin valmistusmenetelmä. Ensin suspensoidaan veteen suhteessa 5-30 paino/til% sopivan proteiinin tai proteiinia sisältävän aineen kiinteää ainesta, jolloin proteiini on kasvi-, eläin- tai mikro-organismiperäistä, ja pH säädetään käytetyn proteaasin optimi-pH:hon hapolla tai alkalilla. Sitten seokseen lisätään proteaasi kerralla tai vähitellen, ja reaktioseoksen annetaan seisoa 3-48 tuntia 20-70 Celsiusasteen lämpötilassa.

Näin saatu pienimolekyylinen peptidiliuos kuivataan sumu-kuivaamalla, tai vaihtoehtoisesti pienimolekyylinen pep-

* * I

tidiliuos lisätään sopivaan määrään jatkeainetta, kuten karboksimetyyliselluloosaa tai dekstriiniä ja kuivataan * ,·.: sen jälkeen, jolloin voidaan saada lipidimetabolismia ;:· edistävää ainetta.

* « · « · · • · · .’.*. Edellä kuvattu tämän keksinnön mukaisesti valmistettu • · · • · lipidimetabolismia edistävä aine pystyy, kun sitä käytetään 0,1-50 paino% tai suositeltavasti 1-30 paino% koko- • · · .'!! naisrasvamäärästä, tehokkaasti estämään rasvan hajoamisen • · «

Ja absorption ja parantamaan lipidimetabolismia aiheutta- • · ·.· · matta haitallisia sivuvaikutuksia. Tämän seurauksen aine osoittautuu hyödylliseksi ihmisruumiin korkean verenpaineen, arterioskleroosin tai liikalihavuuden estämiseen tai hoitoon. Lisäksi ainetta voidaan rehuun lisättynä tehokkaasti käyttää myös karjanhoidossa tai merieläinten kasvatuksessa liian suuren rasvamäärän kerääntymisen es- 98122 5 tämiseksi eläimen lihaan ja eläimen ruhon rasvan koostumuksen laadun parantamiseen.

Pienimolekyylinen peptidi, joka sisältyy tehollisena komponenttina tämän keksinnön mukaisesti valmistettuun lipi-dimetabolismia edistävään aineeseen, saadaan tyypiltään pienimolekyyliseksi aineeksi, jonka keskimääräinen amino-happoketjunpituus on noin 3-4, hydrolysoimalla proteiini-tai proteiinia sisältävä aine proteaasilla tai hapolla. Tämä pienimolekyylinen peptidi voi lisäksi sisältää aminohappoa, dipeptidiä tai suurimolekyylistä peptidiä. Vaihtoehtoisesti pienimolekyylinen peptidi voidaan puhdistaa kaiken tai suurimman osan tällaisesta aminohaposta tai suurimolekyylisestä peptidistä poistamiseksi. Pienimolekyylisessä peptidissä osuutta, jonka keskimääräinen aminohappoketjun pituus on 3-4, tulisi olla vähintään 50%. Tämä pienimolekyylinen peptidi ei menetä lipaasin inhibitiovaikutustaan vaikka se käsiteltäisiin autoklaavissa (121 Celsiusastetta, 1,1 kg/cmz, 30 min) tai kuumennettaisiin 30 minuutin ajan kiehuvassa vesihauteessa.

’·" Edellä mainittu proteaasi on peräisin mikro-organismeis ta, kuten Aspergillus niger'ista, Bacillus subtllis'ta. Proteaasi voi olla mikä tahansa yksittäinen, tai se voi olla happoproteaasin, neutraaliproteaasin tai alkalipro-: teaasin yhdistelmä, ja se voi myös olla tyypiltään joko jV: eläinperäinen tai kasviperäinen. Happona käytetään epäor- • · gaanista happoa kuten suolahappoa tai rikkihappoa. On . .·. kuitenkin huomattava, että hapon sijasta juuri proteaasi • · · on suositeltava pienimolekyylisen peptidin, jonka keski- • ♦ · määräinen aminohappoketjun pituus on noin 3-4, tehokkaak- • · : si tuottamiseksi.

«·· t :

Seuraavaksi kuvataan yksityiskohtaisesti eräitä spesifi-^ : siä pienimolekyylisen peptidin valmistusmenetelmiä.

98122 6 Tällöin tuotteen keskimääräinen aminohappoketjun pituus ilmaistaan seuraavalla yhtälöllä: α-aminoryhmä tuotteen täydellisessä hydrolysaatissa L = HCl:llä_ α-aminoryhmä tuotteessa

Vapautuneen α-aminoryhmän määrä määritettiin ninhydriini-menetelmällä. Täydellinen hydrolyysi suoritettiin 6N suolahapossa 110 Celsiusasteessa 24 tunnin ajan. Myös tuotteen moolimassajakautuma tutkittiin geelisuodatuksella käyttäen Toyopearl HW-40S:ää (pylväs: 2,2 cm x 50 cm, liuotin: 0,1 M asetaattipuskuriliuos pH 5,7).

a) 250 litraa vettä lisättiin 100 kg:aan karjan punaveri-soluja. Seoksen pH säädettiin 2,8:aan fosforihapolla. Sitten tähän seokseen lisättiin 2 x 107 yksikköä happo-proteaasia, joka oli peräisin Aspergillus niger1istä, ja ... inkuboitiin 50 Celsiusasteessa 20 tuntia.

:Tämän reaktion jälkeen reaktioseos kuumennettiin 80 Cel-siusasteeseen 30 minuutiksi reaktion pysäyttämiseksi. Sitten seokseen lisättiin veteen suspensoitua kalsiumhyd-roksidia pH:n säätämiseksi 6,5:een, ja vielä 10 kg pii-maata. Seos suodatettiin sitten puristussuodattimella, ja I | suodatettu neste sumukuivattiin, jolloin saatiin 23 kg jauhetta. Tämän jauheen keskimääräiseksi aminohappoketjun pituudeksi mitattiin 3,6. Myös lisäksi suoritettu mooli- ... massa jakautuman määritys osoitti, että osuus, jonka kes- • · · ’;*/ kimääräinen aminohappoketjun pituus oli 3-4, käsitti • · · *·]·) suunnilleen 65 paino% tästä tuotteesta.

··· • · • t • · · b) 50 kg rasvatonta kalajauhoa suspensoitiin 200 litraan vettä. Sitten suspensionesteen pH säädettiin 2,8:aan fos- [;·; ’ forihapolla. Tähän seokseen lisättiin 3 x 107 yksikköä edellä a):ssa kuvattua happoproteaasia, ja saatiin 21 kg 98122 7 jauhetta. Tämän jauheen keskimääräiseksi aminohappoketjun pituudeksi mitattiin 3,5. Myös lisäksi suoritettu mooli-massajautuman mittaus osoitti, että osuus, jonka keskimääräinen aminohappoketjun pituus oli 3-4, käsitti suunnilleen 63 paino% tuotteesta.

c) 40 kg eristettyä soijaproteiinia suspensoitiin 200 litraan vettä. Sitten suspensioseoksen pH säädettiin 2,8:aan fosforihapolla. Tähän seokseen lisättiin 3 x 107 yksikköä Asperigillus niger-happoproteaasia. Samalla menettelyllä kuin edellä kohdassa a) saatiin 27 kg jauhetta. Tämän jauheen keskimääräiseksi aminohappoketjun pituudeksi mitattiin 3,6. Myös lisäksi suoritettu moolimassa jautuman mittaus osoitti, että osuus, jonka keskimääräinen aminohappoketjun pituus oli 3-4, käsitti noin 67 paino% tuotteesta.

Edellisistä koetuloksista voidaan nähdä, että pienimolekyylinen peptidi, jonka keskimääräinen aminohappoketjun pituus on noin 3-4, on helppo valmistaa.

:.·,ί Näin valmistettuja pienimolekyylisiä peptidejä verrattiin :· toisiinsa niiden lipidimetabolismia edistävien ominai- suuksien suhteen. Vertailut osoittivat, että eristettyyn .·.·. soijaproteiiniin perustuvalla pienimolekyylisellä pepti dillä saadaan heikompi vaikutus kuin muilla, jotka perustuvat eläinproteiineihin, ja että peptidien tehokkuudet eroavat toisistaan riippuen tietyn proteiinin hydrolyy-siin käytetystä proteaasityypistä.

♦ · · * • · ·.·.· Aktiivisena komponenttina keksinnön lipidimetabolismia • · .***; edistävässä aineessa olevan pienimolekyylisen peptidin ··· vaikutukset varmistettiin sitten eläinkokeilla. Ensiksikin rasvan hajoamisen ja absorbtion estyminen nähtiin histologisesti suolen epiteelisoluissa olevien lipidipi-i '.·' saroiden vähenemisenä oliiviöljyn suun kautta tapahtuvan 98122 8 annostuksen jälkeen. Havaittiin myös veren lipidimäärän, erityisesti neutraalilipidimäärän suppressoituminen. Kun eläinkokeissa lisäksi oli neljä viikkoa vapaasti syötetty ainetta, havaittiin että peptidi vähensi ruhon rasvapai-noa ja myös paransi sen lipidikoostumusta. Pienimolekyylisen peptidin annostelu on toisin sanoen osoittautunut tehokkaaksi tavaksi estää lipidihajoamista ja -absorptiota ja parantaa lipidikoostumuksen laatua.

Pienimolekyylisen peptidin vaikutuksia tutkittiin sitten lähemmin sen suhteen, miten ne eroavat lipidihajoamisen estovaikutukseltaan yhdellä annostuksella ja vaikutukseltaan ruhon rasvaan pitkän ajan kuluessa tapahtuvalla toistuvalla annostuksella. Tutkimus osoitti, että jotkut erilaisista pienimolekyylisistä peptideistä ovat tehokkaampia yksittäisannosteltuina kun taas toiset ovat tehokkaampia pitkäaikaisessa käytössä. Tästä voidaan perustellusti olettaa, että haluttua vaikutusta voidaan voimistaa valitsemalla sopivasti erilaisten peptidien joukosta oikea ja kunkin peptidin sopivalla annostelulla.

Seuraavaksi kuvataan yksityiskohtaisesti eräitä keksijän : : : suorittamia kokeita ja sovellutuksia, joiden tarkoitukse- ·· na on osoittaa oikeaksi keksinnön lipidimetabolismia • ·« < .'f; edistävän aineen vaikutus.

• · ♦ 1 · t · »

Koe l 2 · .·" Pienimolekyylisen peptidin vaikutuksen tutkimiseksi in • · · * vitro lipaasiaktiivisuuteen 100 ng/ml - 1 mg/ml pienimo- : lekyylistä peptidiä, jonka keskimääräinen aminohappoket- 2 »3: jun pituus oli noin 3-4, lisättiin noin 0,3 yksikköön/ml \ pankreaattista lipaasia ja 0,125 ml/ml substraattioliivi- 3 V. öljyyn. Tässä on huomattava, että lipaasiaktiivisuusyk- * ; sikkö määritellään entsyymimääränä, joka tuottaa 1 μ- moolin rasvahappoa 1 minuutissa 37 Celsiusasteessa.

98122 9

Kokeet suoritettiin vastaavasti pienimolekyyliselle peptidille, joka oli saatu eristetystä soijaproteiinista, kalajauhosta saadulle pienimolekyyliselle peptidille, pu-naverisoluista saadulle pienimolekyyliselle peptidille, ja peptidille, jonka keskimääräinen ketjunpituus oli 15, ja joka oli saatu punaverisoluista (valmistusmenetelmän ollessa kuten edellä kohdassa a) kuvattu, paitsi että reaktioaika pienennettiin tässä 1 tuntiin). Tulokset, jotka on esitetty taulukossa 1, jossa on esitetty aktii-visuussuhde (%), osoittavat, että lipaasiaktiivisuus pieneni pienimolekyylisiä peptidejä lisättäessä.

Koe 2

Pienimolekyylisen peptidin vaikutuksen tutkimiseksi rasvan hajoamisen ja absorption suhteen rasvansaannin aikana 5 mg punaverisoluihin perustuvaa pienimolekyylistä peptidiä, jonka oli todettu antavan heikoimman estovaikutuksen lipaasille, annettiin 250 mg:n kanssa oliiviöljyä viisi-

• I

' viikkoisille ICR-rodun uroshiirille (painoltaan noin 20 g) mahaletkun kautta. Sitten noin 120 minuutin kulut-tua mitattiin veriplasman kolesteroli ja triglyseridi.

Taulukossa II esitetyt tulokset osoittavat, että oliivini : öljyn annosta huolimatta pienimolekyylinen peptidi sai :V: sekä kolesteroli- että triglyseridiarvot pienemmiksi kuin vertailueläimillä, jotka saivat vain oliiviöljyä.

Koe 3 ··· « · · *;*.* Pienimolekyylisen peptidin toistuvan annostuksen vaiku- ψ m · ***** tuksen tutkimiseksi rasvan hajoamiseen ja absorptioon, se- :*!*: koitettiin 1 paino% edellisessä kokeessa 2 käytettyä pie- ·:>·[ nimolekyylistä peptidiä rehujauhoon (raakarasvapitoisuus 5%, valmistaja Oriental Yeast Inc. Ltd.), ja seosta an- « » nettiin vapaasti 7-viikkoisille ICR-rodun uroshiirille I * : (painoltaan noin 30 g) mahaletkun kautta 14 päivän ajan.

98122 10

Sitten 15. päivänä eläimille annettiin pakolla mahaletkun kautta 250 mg oliiviöljyä. 90 minuutin kuluttua mitattiin veriplasman kolesteroli ja triglyseridi. Taulukossa III esitetyt tulokset osoittavat, että sekä pienimolekyylisen peptidin 14 päivän toistuvan annostuksen jälkeiset arvot olivat pienemmät kuin vertailuhiirillä, ja että lisäksi näiden arvojen mahdolliset oliiviöljyn syöttämisestä johtuvat nousut estyivät pienimolekyylisen peptidin samanaikaisella annostuksella.

Taulukko I (Koe l) (aktiivisuus%) peptidikonsentr. pienimolekyylinen peptidi peptidi_ log (q/ml)__soij a kala punasolu__punasolu -7 36 52 41 66 -6 0 0 19 55 -5 — -- 0 50 -4 25 42 53 -3 32 47 92 : Taulukko II (Koe 2) käsittely kolesteroli triglyseridi __(mq/dl)__(mg/dl)_ ..... ei käsittelyä 114 99 . vain oliviöljy 124 692 *\\ sekä oliiviöljy että i...t punaverisolupeptidi 9 3 77 98122

Taulukko III (Koe 3) 11 käsittely kolesteroli triglyseridi __(rcg/dl)__(rcg/ai)_ ei käsittelyä 100 99 14 päivän annostus punaverisolupeptidiä 90 60 vain oliiviöljy 132 328 sekä oliiviöljy että 5 mg punaverisolupeptidiä 110 140 sekä oliiviöljy että 50 mg punaverisolupeptidiä 90 100

Koe 4

Pienimolekyylisen peptidin vaikutuksen rasvan hajoamiseen • ' ja absorptioon tutkimiseksi mitattiin hajonneen lipidin suhteita annettuun 11 päivän kontrolliajan kuluessa kolvi.· mella porsasryhmällä, joista kukin ryhmä käsitti kolme porsasta. Sitten testiryhmää I syötettiin 12 päivän ajan : : : rehuseoksella, joka sisälsi hajottavaa entsyymiä, testi ryhmää II syötettiin myös 12 päivän ajan vielä rehuseoksella, joka sisälsi hajottavaa entsyymiä ja myös 0,1 pai-no% edellisessä esimerkissä 2 kuvattua pienimolekyylistä peptidiä. Lipidihajoamista tutkittiin mittaamalla eläin-... ten ulosteen sisältämä lipidimäärä. Taulukossa IV esite- tyt tulokset osoittavat, että lipidihajoaminen oli li- • · · *·'·' sääntynyt kontrolliaikana vastaavasti 3 ja 4 %:lla refe- renssiryhmässä ja ryhmässä I, jolle ei annettu hajottavaa • · · ·:··; entsyymiä ja pienimolekyylistä peptidiä, kun taas pieni molekyylinen peptidi oli vähentynyt 8%:11a ryhmässä II. Tämä tarkoittaa, että pienimolekyylisen peptidin lisäys on aikaansaanut jopa 10%:n vähenemisen lipidihajoamises-sa.

12 98Ί22

Koe 5

Kuten hyvin tiedetään, liiallinen rasvansaanti johtaa liikalihavuuteen. Siten tässä kokeessa testihiirille syötettiin 4 viikon ajan rasvaista rehua, joka sisälsi 30 paino% rasvaa lisättynä 1 paino%:lla keksinnön pienimolekyylistä peptidiä, ja mitattiin eläinten ruumiinpainot ja rasvakudosten painot. Taulukossa V esitetyt tulokset osoittavat selvää alenemista rasvakudosten painossa niillä eläimillä, joille on annettu pienimolekyylistä peptidiä, verrattuna eläimiin ilman sitä. Tästä nähdään helposti, että keksinnön lipidimetabolismia edistävä aine voi tällaiseen rasvaiseen ruokaan tai rehuun lisättynä estää rasvan hajoamista ja absorptiota ja siten vastaavasti edistää lipidimetabolismia näin vähentäen ruumiin rasvaa. Lisätutkimukset osoittavat, että eläinproteiiniin perustuva pienimolekyylinen peptidi on vaikutukseltaan ... huomattavasti parempi kuin kasvlproteiiniin perustuva pienimolekyylinen peptidi.

Koe 6

Suklaa on hyvin rasvainen makeinen, joka sisältää yli 35 paino% rasvaa. Koska rasvapitoisuudella kuitenkin on merkittävä vaikutus sen makuun, rasvapitoisuutta on ollut hyvin vaikea vähentää hyvää makua huonontamatta. Siten tämän keksijä valmisti erikoissuklaata lisäämällä 10 pai-... no% suhteessa rasvapitoisuuteen punasoluproteiiniin pe- rustuvaa keksinnön mukaista pienimolekyylistä peptidiä « « · *·/[ kaupalliseen referenssisuklaaseen. Tätä erikoisvalmis- :***: teista suklaata syötettiin pakolla Beagle-koiraryhmille.

»»· ····· Sitten suoritettiin mittaukset ristikkäismenetelmällä eläinten veren kolesterolin ja triglyseridin arvojen ai-kamuutosten havaitsemiseksi. Tulokset on esitetty taulu- • kossa VI. Käyrän alla olevat aluearvot (AUC, mg h/dl) ja veren konsentraation maksimiarvot (C max, mag/dl) saatiin 98122 13 referenssinä muutoksiin veren konsentraatiossa mittausarvoissa. Kuten on esitetty, näissä arvoissa voidaan nähdä merkittävä aleneminen ryhmällä, jolle syötettiin erikois-suklaata, johon oli lisätty pienimolekyylistä peptidiä, verrattuna ryhmään, jolle syötettiin vertailusuklaata.

Koe 7

Nuoria keltapyrstöjä kasvattavalla kalankasvatuslaitok-sella kaloille syötettiin 1 kuukauden ajan rehua, johon oli lisätty 0,2 paino% punasoluproteiinipohjäistä pieni-molekyylistä peptidiä. Sitten sattumanvaraisesti osa kaloista käsiteltiin "sashimiksi" (viipaloitu raakakala-ruoka). Suoritettiin sokkotesti 18 vapaaehtoiselle niiden kalojen lihan makua koskien, joita oli syötetty peptidiä sisältävällä rehulla ja joita oli syötetty pelkästään vertailurehulla. Taulukossa VII esitetyissä tuloksissa on numeerisesti arvioitu vapaaehtoisten makuvaikutelmat, jolloin suuremmat numeroarvot merkitsevät parempia maku-vaikutelmia. Kuten nähdään, vapaaehtoiset testaajat pitivät sellaisia kaloja selvästi parempina, joita oli syö- I | ( ’ tetty peptidiä sisältävällä rehulla. Vapaaehtoiset kuva- * : sivat erityisesti pelkästään vertailurehulla syötettyjä ; ·’ kaloja sellaisilla negatiivisilla ilmaisuilla kuten öl- :· jyinen, tahmea, haiseva tai liian hapan, samalla kuvaten > : ; keksinnön mukaisesti valmistetulla aineella ruokittua |V. lihaa sellaisilla positiivisilla ilmaisuilla kuten taval- « · linen, laiha, maukas, jne. Toisin sanoen vapaaehtoiset arvostivat suuresti kalanlihaa, joka oli viljelty anta- • · * IV, maila tämän keksinnön mukaisesti valmistettua pienimole- • · · *. kyylistä peptidiä, jolloin on odotettavissa rasvamäärän • r j väheneminen ja rasvakoostumuslaadun paraneminen keksinnön »“’? aineen vaikutuksesta. Lisäksi tästä voidaan selvästikin päätellä, että keksinnön mukaisesti valmistetun pienimo-", lekyylisen peptidin antaminen estää myös kalanlihan sitä hajoamista, joka johtuu sen liian suuresta rasvapitoisuudesta, siten tehokkaasti säilyttäen ja pidentäen tuotteen tuoreutta.

Taulukko IV (Koe 4) • 98122 14 vertailuryhmä ryhmä I ryhmä II kontrolliaika 68 62 65 käsittelyaika 71 66 57 ero +3 +4 -8

Taulukko V (Koe 5) rehu _CT_ 9 ruum. rasva- suhde ruum. rasva- suhde paino kudos__paino_kudos_ A 36,5 2,0 5,5 29,0 1,8 6,0 B 36,9 1,6 4,4 29,2 1,4 4,6 C 34,8 1,3 3,3 29,3 1,3 4,2 D 36,9 1,8 4,8 29,3 1,4 4,9 A. ... rasvainen rehu B. .. .punasoluproteiinista saatu pienimolekyylinen peptidi : C... .kalajauhoproteiinista saatu pienimolekyylinen peptidi D. .. .soijaproteiinista saatu pienimolekyylinen peptidi

Taulukko VI (Koe 6) triqlyseridi__kolesteroli ; . ryhmä AUC Cmax AUC Cmax • · · • · referenssi 445 182 100 27 • « · ·:··· punasolupep- tidin kanssa 304 126 19 9 98122

Taulukko VII (Koe 7) 15 sukup. määrä referenssi punasolu- ruuan lisä- ____peptidillä aineilla_ uros 11 16 46 27 naaras 7 11 13 21 kokon. 18 27 59 48

Kuten edellä kuvattujen kokeiden tuloksista selvästi voidaan nähdä, antamalla pienimolekyylistä peptidiä, jonka keskimäärinen aminohappoketjun pituus on noin 3-4, annos-määränä noin 0,5-50% suhteessa rasvansaantiin, lipidiha-joamista ja -absorptiota voidaan estää ja lipidimetabo-lismia parantaa.

Tämän keksinnön mukaisesti valmistettu lipidimetabolismia 9 edistävä aine voi helposti olla sinänsä lisäaine, tai sen voidaan sekoittaa muihin aineisiin lääkkeissä, ruoka-aineissa tai rehussa (mukaanlukien rehuseokset). Erityises-V · ti kun ainetta itsessään käytetään ruoka-aineena tai re- 1 ' 2 huna, sitä voidaan tehokkaasti käyttää fysiologisesti ; ; : funktionaalisena ruokana tai rehuna, joka voi estää ras- ; van hajoamista ja absorptiota ja parantaa lipidimetabo- » · .lismia. Esimerkiksi ihmisruumiin korkean verenpaineen, arterioskleroosin tai liikalihavuuden estämiseen tai hoi- *·* * toon ainetta voidaan käyttää selektiivisesti lääkkeenä, . ruoka-aineena tai ruuan lisäaineena. Vastaavasti kun sitä « 4 * * · “I käytetään karjanhoidossa tai merentuotteiden tuotannossa, I · · ’ ainetta voidaan käyttää selektiivisesti lääkkeenä, rehuna * tai ruuan lisäaineena.

i*t » • » · * ;

I t I

Erityisesti kun tarkoituksena on ihmisruumiin korkean verenpaineen, arterioskleroosin tai liikalihavuuden estä-’ : minen tai hoito, on suositeltavaa, että ainetta käytetään fysiologisesti funktionaalisena ruoka-aineena, koska tämä 98122 16 käyttö sallii saantimäärän helpon kontrollin suhteessa kokonaisrasvansaantiin. Lisäksi merentuotteiden kasvatuksessa, jossa ruumiin sisäistä rasvan lisääntymistä tai kerääntymistä on helppo arvioida näytekalojen dissektiol-la tai tutkimisella, eläinlihan rasvan määrää voidaan helposti parantaa kontrolloimalla keksinnön mukaisen li-pidimetabolismia edistävän aineen annostusmäärää eläimen lihan ruumiinrasvan arviodun lisääntymisen tai kerääntymisen perusteella.

Kuten edellä on kuvattu, tämän keksinnön mukaisesti valmistettu lipidimetabolismia edistävä aine soveltuu korkean verenpaineen tai arterioskleroosin estämiseen tai hoitoon tai karjan tai kalan lihan laadun parantamiseen karjanhoidossa tai merentuotteiden kasvatuksessa.

• « · « » · • · · • · • · · • · · • · • · · • · · « · · • · · • · « • · · « • · • · · • · · »·· · • · · > : « « ·

Claims (7)

98122 17

1. Menetelmä triglyseridien hajoamisen, absorption ja liiallisen ruumiin sisäisen kerääntymisen ehkäisemisessä tehokkaan, lipidimetabolismia edistävän aineen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että - hydrolysoidaan proteiini tai proteiinia sisältävä aine proteaasilla tai hapolla hydrolysaatin valmistamiseksi, - eristetään saadusta hydrolysaatista mainitun lipidimetabolismia edistävän aineen vaikuttavana aineena alhaisen molekyylipainon omaava peptidiyhdiste, jonka keskimääräinen aminohappoketjun pituus on noin 3-4, ja - mahdollisesti yhdistetään saatu peptidi jatkeaineeseen.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että sekoitetaan saatu alhaisen molekyylipainon omaava peptidi lipidejä sisältävään aineeseen määränä 0,1-50 p% laskettuna mainitun aineen lipidipitoisuudesta.

3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että sekoitetaan saatu alhaisen molekyy- *' _ lipainon omaava peptidi lipidejä sisältävään aineeseen määränä 1-30 p% laskettuna mainitun aineen lipidipitoi- .:.' suudesta. • « · V

· 4. Patenttivaatimuksen 2 tai 3 mukainen menetelmä, t u n - :V: n e t t u siitä, että lipidejä sisältävä aine on ravinto aine, karjanrehu tai kalanrehu. • · · » « » • · ·

5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnet- • · · t u siitä, että proteaasi käsittää yhdistelmänä yhden tai i : useamman happoproteaasin, neutraaliproteaasin tai alkali- ··· *,,,· proteaasin.

,·. : 6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnet tu siitä, että happo on epäorgaaninen happo, kuten suolahappo tai rikkihappo. 98122 18

7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että hydrolysoidaan seos, joka sisältää 1 mg proteiinia suhteessa 0,1-5 yksikköön proteaasia, jolloin hydrolyysi suoritetaan 3-48 tunnin ajan 20-70 Celsiusasteen lämpötilassa. • t t i : : • · ♦ ♦ ♦ • ♦ · • ♦ • · · • · « • · « • · · • « « • · « « • · ♦ · · • · · • · · · • · · i : • · · = «·=· »UM M t «| 98122 19