FI97551B - Analyysimenetelmä, reagenssikoostumus ja sen käyttö glukoosin määritykseen - Google Patents

Analyysimenetelmä, reagenssikoostumus ja sen käyttö glukoosin määritykseen Download PDF

Info

Publication number
FI97551B
FI97551B FI915020A FI915020A FI97551B FI 97551 B FI97551 B FI 97551B FI 915020 A FI915020 A FI 915020A FI 915020 A FI915020 A FI 915020A FI 97551 B FI97551 B FI 97551B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
nicotinamide
glucose
phenazine
whole blood
nad
Prior art date
Application number
FI915020A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI915020A0 (fi
FI97551C (fi
Inventor
Jan Evert Lilja
Sven-Erik Lennart Nilsson
Original Assignee
Migrata Uk Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Migrata Uk Ltd filed Critical Migrata Uk Ltd
Publication of FI915020A0 publication Critical patent/FI915020A0/fi
Publication of FI97551B publication Critical patent/FI97551B/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI97551C publication Critical patent/FI97551C/fi

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/54Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving glucose or galactose

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Description

97551
Analyysimenetelmä, reagenssikoostumus ja sen käyttö glukoosin määritykseen
Keksintö koskee glukoosin määritystä ja tarkemmin 5 tiettyä kvantitatiivista kokonaisglukoosimääritystä lai-mentamattomasta kokoverestä. Keksintö koskee osaksi analyysimenetelmää, osaksi siihen tarkoitettua reagenssikoos-tumusta ja osaksi tämän reagenssikoostumuksen käyttöä.
Tärkeä rutiinianalyysi kliinisessä kemiassa on ve-10 rensokerin määritys. Tätä analyysiä käytetään diabetes mellituksen diagnosointiin ja sen hoidon seurantaan sekä eräiden muiden aineenvaihduntahäiriöiden diagnosointiin. Tunnetaan useita menetelmiä glukoosin määrittämiseksi kvantitatiivisesti kokoverestä.
15 Eräs näistä menetelmistä perustuu glukoosin määrit tämiseen entsymaattisesti glukoosidehydrogenaasilla, ja yhtä tähän menetelmään soveltuvaa reagenssikoostumusta kuvataan US-patenttijulkaisussa 4 120 755. Tämä koostumus käsittää puskurin, pyridiinikoentsyymin ja glukoosidehyd-20 rogenaasin. Puskurin pH on arvojen 7,9 ja 9,0 välillä. Erästä toista tunnettua glukoosin määritykseen soveltuvaa koostumusta kuvataan US-patenttijulkaisussa 3 964 974.
Tämä koostumus koostuu pääasiallisesti määrätystä, mitä puhtauteen ja tyyppiin tulee, glukoosidehydrogenaasista, 25 pyridiinikoentsyymistä, kuten NAD:stä, puskurisysteemistä koostumuksen vesiliuoksen pH:n pitämiseksi arvojen 6,5 ja 8,5 välillä sekä mutarotaasista. Kumpikaan näistä kahdesta patenttijulkaisuista tuo esiin sellaista menetelmää tai koostumusta, joka soveltuu kokonaisglukoosin määrittämi-30 seen kvantitatiivisesti suoraan laimentamattomasta kokoverestä, ts. ilman edeltäviä laimennus- tai saostusvaiheita. Ainoa tieto siitä, miten glukoosi voidaan analysoida koko-verestä, annetaan US-patenttijulkaisussa 3 964 974 esimerkissä 7, jossa tehdään glukoosin märkäkemiallinen määritys 35 kokoverinäytteestä. Ennen glukoosin mittausta kokoveri- 97551 2 näytteestä poistetaan kuitenkin valkuainen (proteiini). Poistamalla valkuainen poistetaan myös punaiset verisolut. Glukoosin mittausta ei siten tehdä kokoverestä. Tässä viitataan sivulle 9, riveihin 19 - 24, jossa lukija nimeno-5 maan johdetaan irti ajatuksesta, että punaiset verisolut olisivat jäljellä kokoverestä tehtävässä mittauksessa. Sen jälkeen kun laimentamattomasta kokoverestä on poistettu proteiini esilaimennusvaiheessa, se sekoitetaan entsyy-mi/puskuriliuoksen kanssa. Reaktio käynnistetään sitten 10 koentsyymiliuosta (NAD) lisäämällä, jonka jälkeen määritetään glukoosipitoisuus. Glukoosipitoisuus ilmoitetaan voitavan mitata mm. NADH2:n osoittavalla värireaktiolla, esimerkiksi hydraamallla tetratsoliumsuola vastaavaksi for-matsaaniksi diaforaasientsyymin avulla. Julkaisussa ei 15 kuitenkaan ehdoteta tämän NADH2: n osoittavan tekniikan käyttöä kokonaisglukoosin mittaamiseen kokoverihemolysaa-tista vaan yksinomaan glukoosin mittaamiseen veriplasmasta. Mitä tulee veren glukoosin mittaukseen US-patenttijulkaisussa 3 964 974, esimerkiksi esimerkin 7 mukaisesti, 20 mittaus tehdään sitä paitsi tavallisesti laimennetusta verestä erotukseksi tästä keksinnöstä, joka koskee mittausta suoraan laimentamattomasta verinäytteestä.
On selvää, että yksinkertainen ja nopea testi kokonaisglukoosin määrittämiseksi kvantitatiivisesti laimenta-25 mattomasta kokoverestä olisi tärkeä apukeino kliiniselle laboratoriolle.
Yksi tämän keksinnön päämäärä on siksi saada aikaan menetelmä kokonaisglukoosin määrittämiseksi kvantitatiivisesti laimentamattomasta kokoverestä transmissiospektrofo-30 tometrian avulla.
Toinen päämäärä on saada aikaan kuiva reagenssi-koostumus tätä määritystä varten.
Keksintö koskee erityisesti kokonaisglukoosin määritystä tilavuudeltaan pienistä määristä laimentamatonta 35 kokoverta. "Pienillä tilavuuksilla" tarkoitetaan tässä
II
97551 3 yhteydessä tilavuuksia, jotka ovat 0,1 ml:n ja 0,001 ml:n välillä, edullisesti 0,2 ml:n ja 0,,001 ml:n välillä.
Keksinnön mukaan veri on edullisesti paitsi laimen-tamatonta myös käsittelemätöntä.
5 Keksinnön ensimmäisen aspektin mukaisesti saadaan aikaan menetelmä kokonaisglukoosin määrittämiseksi kvantitatiivisesti laimentamattomasta kokoverestä, jolle menetelmälle on tunnusomaista, että laimentamaton kokoverinäyte, joka on edullisesti pienempi kuin 20 μΐ, saatetaan 10 kosketuksiin kuivassa muodossa olevan reagenssin kanssa, joka sisältää glukoosidehydrogenaasia (GDH); yhtä tai useampaa aineista diaforaasi, fenatsiini-metosulfaatti, fenatsiinietosulfaatti, fenatsiinifenosul- 15 faatti ja Meldola-sininen; yhtä tai useampaa aineista NAD, NADP, tio-NAD, tio-NADP, nikotiiniamidi-puriinidinukleotidi, nikotiiniamidi-metyylipuriinidinukleotidi ja nikotiiniamidi-2-kloorime-tyylipuriinidinukleotidi; 20 yhtä tai useampaa hemolysoivista aineista fosfoli- paasi, hemolysoivat saponiinit ja yhdisteet, joita hydro-fiiliset mono-, di- tai trisakkaridit muodostavat 10 -16 hiiliatomia sisältävien alifaattisten hiilivetyjen kanssa; 25 redoksiväri-indikaattoria; sekä mahdollisesti mutarotaasia; ja reagenssin ja laimentamattoman kokoveren sisältämän glukoosin välisen reaktion aiheuttama värin muutos mitataan transmissiospektrofotometrian avulla.
30 Erästä apukeinoa tämän menetelmän toteuttamiseksi kuvataan US-patenttijulkaisussa 4 088 448.
Keksinnön toisen aspektin mukaisesti saadaan aikaan reagenssikoostumus kokonaisglukoosin määrittämiseksi kvantitatiivisesti laimentamattomasta kokoverestä, jolle rea- 97551 4 genssikoostumukselle on tunnusomaista, että se on kuivassa muodossa ja sisältää glukoosidehydrogenaasia (GDH); yhtä tai useampaa aineista diaforaasi, fenatsiini-5 metosulfaatti, fenatsiinietosulfaatti, fenatsiinifenosul- faatti ja Meldola-sininen; yhtä tai useampaa aineista NAD, NADP, tio-NAD, tio-NADP, nikotiiniamidi-puriinidinukleotidi, nikotiiniamidi-metyylipuriinidinukleotidi ja nikotiiniamidi-2-kloori-6-10 metyylipuriinidinukleotidi; yhtä tai useampaa hemolysoivista aineista fosfoli-paasi, hemolysoivat saponiinit ja yhdisteet, joita hydro-fiiliset mono-, di- tai trisakkaridit muodostavat 10 -16 hiiliatomia sisältävien alifaattisten hiilivetyjen 15 kanssa; redoksiväri-indikaattoria; sekä mahdollisesti mutarotaasia.
Keksinnön kolmas puoli koskee sellaisen reagenssi-koostumuksen käyttöä, joka sisältää 20 glukoosidehydrogenaasia (GDH); yhtä tai useampaa aineista diaforaasi, fenatsiini-metosulfaatti, fenatsiinietosulfaatti, fenatsiinifenosul-faatti ja Meldola-sininen; yhtä tai useampaa aineista NAD, NADP, tio-NAD, tio-25 NADP, nikotiiniamidi-puriinidinukleotidi, nikotiiniamidi- metyylipuriinidinukleotidi ja nikotiiniamidi-2-kloorime-tyylipuriinidinukleotidi; yhtä tai useampaa hemolysoivista aineista fosfoli-paasi, hemolysoivat saponiinit ja yhdisteet, joita hydro-30 fiiliset mono-, di- tai trisakkaridit muodostavat 10 - 16 hiiliatomia sisältävien alifaattisten hiilivetyjen kanssa; redoksiväri-indikaattoria; sekä mahdollisesti mutarotaasia; ti.
97551 5 ja on kuivassa muodossa, kokonaisglukoosin määrittämiseen kvantitatiivisesti laimentamattomasta kokoverestä transmissiospektrofotometrialla.
Eri aineosien pitoisuudet keksinnön mukaisessa kui-5 vassa reagenssikoostumuksessa eivät ole ratkaisevia, mutta laimentamatonta kokoverinäytettä kohden, jonka suuruus on 1 ml, niiden voidaan odottaa olevan edullisesti seuraavis-sa rajoissa: 10 Aine Määrä
Glukoosidehydro- 5 - 500 μ (aktiivisuus- genaasi yksikköä)
Diaforaasi/analogit 1 - 100 μ/0,1 - 30 mmol NAD analogeineen 1 - 100 mmol 15 Fosfolipaasi/analogit 1-1 000 μ/0,5 - 70 mg
Mutarotaasi 0,1 - 10 μ
Redoksiväri-indikaattori 5 - 100 mmol
Peruskoostumukseen voidaan lisätä aineosia, jotka 20 optimoivat toimintaa erilaisissa sovellutuksissa. Mutaro- taasia voidaan käyttää alfa-glukoosin muuntamiseen nopeasti beeta-glukoosiksi, joka on juuri se muoto, joka reagoi glukoosidehydrogenaasin kanssa. Tästä on etua silloin, kun analyysi halutaan tehdä näytteestä, jota ei oteta suoraan 25 potilaasta. Glukoosidehydrogenaasi hajottaa spesifisesti beeta-glukoosia. Vesiliuoksissa esiintyy alfa- ja beeta-glukoosia lämpötilasta riippuvassa tasapainossa, joka kehittyy melko hitaasti. Koska ruumiinlämpö on suhteellisen vakio voidaan mutarotaasi, joka nopeuttaa tasapainotilan 30 muodostumista, jättää pois reagenssista, jos näyte otetaan ruumiinlämpöisestä verestä. Sen etuina ovat hinnan alenemista huomioimatta reaktioajan lyheneminen ja analyysialu-een kasvu. Haittapuolena on se, että kalibrointi- ja ver-tailuliuokset pitää temperoida vähintään kerran tunnissa.
6 97551
Reagenssiin voidaan lisätä pH-arvoon vaikuttavia aineita sen varmistamiseksi, että työskentely-pH on entsyymien aktiivi suusalueella.
Reagenssiin voidaan lisätä reagenssikoostumuksen 5 liukoisuuteen ja stabiilisuuteen vaikuttavia aineita erilaisia vaativia sovellutuksia varten.
Glukoosidehydrogenaasia voidaan saada eri lajeista moolimassaltaan, pH-optimiltaan jne. erilaisena. Glukoosi-dehydrogenaasilla tarkoitetaan kuitenkin yksinomaan NAD-10 riippuvaista tai NAD:n analogista riippuvaista entsyymiä eikä sellaisia tyyppejä, jotka ovat hapesta riippuvaisia ja toimivat kinoidakoentsyymin avulla, jota kutsutaan myös glukoosidehydrogenaasiksi.
Diaforaasi voi myös olla peräisin eri lajeista, 15 mutta se voidaan korvata tunnetuilla aineilla, kuten esimerkiksi fenatsiinimetosulfaatilla, Meldola-sinisellä jne. NAD:lie on myös olemassa useita tunnettuja analogeja, kuten niistä tunnetuin NADP, joka voi pelkistyä glukoosi-glukoosidehydrogenaasireaktion vaikutuksesta ja siirtää 20 pelkistymisen värisysteemiin.
• Pintajännitykseen vaikuttavia aineita voi olla tarpeen käyttää apuvälineen pintojen kostumisen helpottamiseksi. Pintajännitystä alentavia aineita voidaan lisätä helpottamaan hydrofobisten muovipintojen päällystämistä.
25 Suspension sovittamiseksi eri tyyppisten päällys- tysvarusteiden mukaiseksi voidaan viskositeettia muuttaa sopivia suurimolekyylisiä polymeerejä lisäämällä. Suurimo-lekyylisten polymeerien valinta ei ole ratkaisevaa mutta vaikuttaa kuivan reagenssin liukenemisnopeuteen. E s inter k-30 keinä käyttökelpoisista polymeereistä voidaan mainita po- lyeteeniglykoli, polyvinyylipyrrolidoni, dekstraani ja erilaiset selluloosajohdannaiset. Polymeeri voidaan valita myös sillä tarkoituksella, että suspensio saadaan stabiloiduksi. Esimerkiksi elintarvike- tai kosmetiikkateolli-35 suudessa käytettävä valmistustekniikka tuntien reagenssin ti 97551 7 sopeuttaminen erilaisten pintojen mukaiseksi ei voi tuottaa mitään ongelmia.
Pintajännitystä alentavilla aineilla voi olla myös hemolysoiva vaikutus niin kuin esimerkiksi dekanoyyli-N-5 metyyliglukamidilla. Tämä on tunnettu tilanne ja siksi voidaan käyttää useita aineita tai aineiden yhdistelmiä.
On myös olemassa hemolysoivia aineita, joilla ei ole mainittuja pintajännitykseen kohdistuvia vaikutuksia, kuten esimerkiksi mellitiini ja fosfolipaasit.
10 Väriä muuttavia aineita, joka kykenevät muuttamaan väriä NADH:n ja diaforaasin ollessa läsnä, on myös olemassa useita tunnettuja tyyppejä. Tetratsoliumyhdisteillä on se etu, että formatsaaniväri muodostuu irreversiibelis-ti normaaleissa reaktio-olosuhteissa. 3-(4,5-dimetyyli-15 tiatsol-2-yyli)-2,5-difenyyli-2H-tetratsoliumbromidi(MTT) johtaa hyvään tulokseen koostumuksessa, mutta monet muutkin tetratsoliumyhdisteet ovat käyttökelpoisia. Tässä yhteydessä on kiinnitettävä huomiota siihen, että ryhmä, josta hemolysoiva aine tai aineet valitaan, sisältää ai-20 noastaan sellaisia aineita, jotka eivät aiheuta häiritse viä saostumisia tetratsoliumyhdisteiden yhdistelmissä.
Keksintöä kuvataan nyt tarkemmin esimerkillä viitaten oheisiin piirroksiin.
Kuvio 1 esittää kaaviomaisesti reaktiokaavaa kysy-25 myksessä oleville reaktioille.
Kuvio 2 on diagrammi, joka havainnollistaa hajontaa sekä "end point" -määrityksen korrelointia vertailumenetelmän kanssa.
Kuvio 3 esittää käyrää, joka kuvaa reaktion kulkua 30 "end point" -määrityksessä.
Kuvio 4 esittää hemoglobiinin ja MTT-formatsaanin spektriä mittaus- ja referenssiaallonpituudella.
Kuvio 5 esittää diagrammia, joka valaisee kineettisen mittauksen korrelointia vertailumittauksen kanssa.
97551 8
Mittaukset on tehty kokoverinäytteestä, joka on preparoitu glukoosilla erilaisten glukoositasojen saavuttamiseksi. Vertailumenetelmä on ollut Merckin valmistama glukoosihydrogenaasitestausjärjestelmä, Gluk-DHR-menetel-5 mä, tyyppi 13886, 13887. Spektrofotometrinen mittaus on vertailumenetelmän tapauksessa tapahtunut UV-alueella (340 nm) kaksoispakkauksen ohjeiden mukaisesti. Vertailumenetelmä on tyypiltään märkäkemiallinen analyysimenetelmä.
10 Esimerkki 1
Reagenssikoostumus (1 ml): 100 yksikköä (y) glukoosihydrogenaasia (Merck) 20 y diaforaasia (Merck) 22 pmol NAD:tä (Merck) 15 30 μιηοΐ MTT:tä (Merck) 25 mg White Saponinia (BDH) 5 mg dekanoyyli-N-metyyliglukamidia 1 ml ionivaihdettua vettä Tämä antaa tulokseksi liuoksen, joka on sopiva kyl-20 mäkuivattavaksi US-patenttijulkaisussa 4 088 448 kuvattua tyyppiä olevissa mikrokyveteissä, jotka ovat tyypiltään ruiskuvalettuja ja joita on saatavissa kaupallisesti (HemoCue AB). Saavutetaan hyvä toistettavuus ja lineaarisuus (ks. kuvio 2). Mittaukset on tehty aallonpituudella 25 660 nm käyttäen referenssiaallonpituuden ollessa 880 nm ja antavat "end point" -mittaustuloksen.
Esimerkki 2
Reagenssikoostumus (1 ml): 1 ky glukoosidehydrogenaasia (Merck) 30 200 y diaforaasia (Merck) 220 pmol NAD:tä (Merck) 0,3 mmol MTT:tä (Merck) 250 mg White SaponiniaR (BDH) 50 mg Pluronic* P 85:tä (SERVA) 35 250 μΐ ionivaihdettua vettä 97551 9
Koostumuksen aineosat hienonnetaan suspensioksi, joka soveltuu käytettäväksi pintojen päällystämiseen erilaisilla painotekniikoilla, kuten silkki- tai sylinteri-painotekniikalla jne. Tätä tyyppiä oleva suspensio sovel-5 tuu jaettua tyyppiä olevien mikrokyvettien päällystämiseen. joita kuvataan US-patenttijulkaisussa 4 088 448.
Esimerkki 3 US-patenttijulkaisun 4 088 448 mukaiset mikrokyve-tit, jotka oli selluloosa-asetaatista/butyraatista ja joi-10 den syvyys oli noin 0,15 mm, päällystettiin esimerkin 2 mukaisella koostumuksen tamponipainokoneen avulla (4 painamista). Kuivauksen ja yhteen liittämisen jälkeen tutkittiin kyvettien toimintaa erilaisten kokoverinäytteiden avulla. Hemolyysi mitattiin aallonpituudella 660 nm ja 15 ajat vaihtelivat 20 sekunnin ja 40 sekunnin välillä eryt-rosyyttien määrästä riippuen. Värin kehittymistä tutkittiin samalla aallonpituudella ja kokoverinäytteelle, jonka glukoosipitoisuus oli noin 12 mmol/1 saavutettiin mittauk-kannalta katsottuna tyydyttävä päätepiste 1,5 minuutin 20 kuluttua (ks. kuvio 3). Kuvio 4 esittää noin 12 mmol glukoosia/ 1 esimerkin 3 mukaisessa kyvetissä sisältävän koko-verinäytteen hemoglobiinin spektriä ja muodostuneen värin spektriä. On selvästi nähtävissä, että on olemassa hyvät mahdollisuudet mitata muodostunut formatsaaniväri ilman 25 hemoglobiinin aiheuttamaa häiritsevää interferenssiä samoin kuin mahdollisuus mitata sameus taustakorjausta varten näiden spektrien ulkopuolella. Päällysteen paksuuden vaikuttaa tietysti reaktioaikoihin ja jossakin määrin myös määritettävissä oleviin maksimipitoisuuksiin.
30 Esimerkki 4
Reagenssikoostumus (1 ml): 25 y glukoosidehydrogenaasia, johon on yhdistetty maksimimäärä polyetyleeniglykolialdehydimetyylieetteri 750:tä 35 5 y diaforaasia (Merck) 10 97551 7 pmol NAD:tä (Merck) 20 μιηοΐ MTT:tä (Merck) 25 mg White SaponiniaR (BDH) 1 ml ionivaihdettua vettä 5 Tämä antaa tulokseksi liuoksen, joka on sopiva kyl- mäkuivattavaksi esimerkin 1 mukaisesti. Reagenssi on tehty kineettiseen mittaukseen sopivaksi erotukseksi edellisistä esimerkeistä, joissa on tarkoitus tehdä päätepistemittaus. Suhteellisen suuri glukoosidehydrogenaasin määrä johtuu 10 aktiivisuuden alenemisesta, joka tapahtuu polymeerimole-kyylien yhdistämisestä. Polymeerimolekyylien yhdistäminen entsyymiin lisää stabiilisuutta, mikä on tunnettu tosiasia ja toivottavaa kineettiseen mittaukseen tarkoitetuissa testeissä. Optimaalista polymeerityyppiä ei ole selvitetty 15 testaamalla ja esimerkin tarkoituksena on ainoastaan valaista mahdollisuuksia. Polyetyleeniglykolimonometyylieet-teri muuunnettiin aldehydiksi reaktiolla dimetyylisulfok-sidin ja etikkahappoanhydridin kanssa. Natriumkloridi-kar-bonaattipuskurissa (pH 10) tehdyn glukoosidehydrogenaa-20 siin yhdistämisen jälkeen, jossa polymeeriä käytettiin ylimäärin, seos dialysoitiin ja väkevöitiin. Entsyymi-po-lymeerikompleksin stabiilisuus osoittautui paremmaksi kuin puhtaan entsyymin. Esimerkkejä tämän esimerkin mukaisella reagenssilla kineettisissä mitauksissa saavutetuista tu-25 loksista on esitetty kuviossa 5. Mittaukset tehtiin aallonpituudella 660 nm 3 - 3,75 minuutin aikana referenssi-aallonpituuden ollessa 880 nm.
ti

Claims (5)

97551 11
1. Menetelmä kokonaisglukoosin määrittämiseksi kvantitatiivisesti laimentamattomasta kokoverestä, 5 tunnettu siitä, että laimentamaton kokoverinäyte saatetaan kosketuksiin kuivassa muodossa olevan reagenssin kanssa, joka sisältää glukoosidehydrogenaasia (GDH); yhtä tai useampaa aineista diaforaasi, fenatsiini-10 metosulfaatti, fenatsiinietosulfaatti, fenatsiinifenosul-faatti ja Meldola-sininen; yhtä tai useampaa aineista NAD, NADP, tio-NAD, tio-NADP, nikotiiniamidi-puriinidinukleotidi, nikotiiniamidi-metyylipuriinidinukleotidi ja nikotiiniamidi-2-kloorime-15 tyylipuriinidinukleotidi; yhtä tai useampaa hemolysoivista aineista fosfoli-paasi, hemolysoivat saponiinit ja yhdisteet, joita hydro-fiiliset mono-, di- tai trisakkaridit muodostavat 10 -16 hiiliatomia sisältävien alifaattisten hiilivetyjen 20 kanssa; redoksiväri-indikaattoria, joka on tetratsoliumsuo-la; sekä mahdollisesti mutarotaasia; ja että reagenssin ja laimentamattoman kokoveren sisältä-25 män glukoosin välisen reaktion aiheuttama värin muutos mitataan transmissiospektrofotometrian avulla.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kokoverinäytteen tilavuus on pienempi kuin 20 μΐ.
3. Reagenssikoostumus kokonaisglukoosin määrittä miseksi kvantitatiivisesti laimentamattomasta kokoverestä, tunnettu siitä, että se on kuivassa muodossa ja sisältää glukoosidehydrogenaasia (GDH); 97551 12 yhtä tai useampaa aineista diaforaasi, fenatsiini-metosulfaatti, fenatsiinietosulfaatti, fenatsiinifenosul-faatti ja Meldola-sininen; yhtä tai useampaa aineista NAD, NADP, tio-NAD, tio-NADP, 5 nikotiiniamidi-puriinidinukleotidi, nikotiiniamidi-metyy-lipuriinidinukleotidi ja nikotiiniamidi-2-kloori-6-metyy-lipuriinidinukleotidi; yhtä tai useampaa hemolysoivista aineista fosfoli-paasi, hemolysoivat saponiinit ja yhdisteet, joita hydro- 10 fiiliset mono-, di- tai trisakkaridit muodostavat 10 -16 hiiliatomia sisältävien alifaattisten hiilivetyjen kanssa; redoksiväri-indikaattoria, joka on tetratsoliumsuo-la; sekä 15 mahdollisesti mutarotaasia.
4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen reagenssikoostu-mus, tunnettu siitä, että se sisältää glukoosidehydrogenaasia, diaforaasia,
20 NAD:tä, yhtä tai useampaa saponiinia, tetratsoliumsuolaa ja mahdollisesti mutarotaasia.
5. Sellaisen reagenssikoostumuksen käyttö, joka si- 25 sältää glukoosidehydrogenaasia (GDH); yhtä tai useampaa aineista diaforaasi, fenatsiini-metosulfaatti, fenatsiinietosulfaatti, fenatsiinifenosul-faatti ja Meldola-sininen; 30 yhtä tai useampaa aineista NAD, NADP, tio-NAD, tio- NADP, nikotiiniamidi-puriinidinukleotidi, nikotiiniamidi-metyylipuriinidinukleotidi ja nikotiiniamidi-2-kloorime-tyylipuriinidinukleotidi; 97551 13 yhtä tai useampaa hemolysoivista aineista fosfoli-paasi, hemolysoivat saponiinit ja yhdisteet, joita hydro-fiiliset mono-, di- tai trisakkaridit muodostavat 10 -16 hiiliatomia sisältävien alifaattisten hiilivetyjen 5 kanssa; redoksiväri-inidikaattoria, joka on tetratsolium-suola; sekä mahdollisesti mutarotaasia; ja joka on kuivassa muodossa, kokonaisglukoosin määrittä-10 miseen kvantitatiivisesti laimentamattomasta kokoverestä transmissiospektrofotometrian avulla. 97551 14
FI915020A 1989-04-25 1991-10-24 Analyysimenetelmä, reagenssikoostumus ja sen käyttö glukoosin määritykseen FI97551C (fi)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE8901515A SE466158B (sv) 1989-04-25 1989-04-25 Analysmetod foer glukosbestaemning i helblod
SE8901515 1989-04-25
SE9000272 1990-04-24
PCT/SE1990/000272 WO1990012889A1 (en) 1989-04-25 1990-04-24 Method of analysis, reagent composition and use thereof for glucose determination

Publications (3)

Publication Number Publication Date
FI915020A0 FI915020A0 (fi) 1991-10-24
FI97551B true FI97551B (fi) 1996-09-30
FI97551C FI97551C (fi) 1997-01-10

Family

ID=20375802

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI915020A FI97551C (fi) 1989-04-25 1991-10-24 Analyysimenetelmä, reagenssikoostumus ja sen käyttö glukoosin määritykseen

Country Status (18)

Country Link
US (1) US5278047A (fi)
EP (1) EP0470201B1 (fi)
JP (1) JPH0734757B2 (fi)
KR (1) KR960001139B1 (fi)
AT (1) ATE122102T1 (fi)
AU (1) AU637612B2 (fi)
BR (1) BR9007339A (fi)
CA (1) CA2053315C (fi)
DE (1) DE69019149T2 (fi)
DK (1) DK0470201T3 (fi)
ES (1) ES2071821T3 (fi)
FI (1) FI97551C (fi)
LT (1) LT3136B (fi)
LV (1) LV10122B (fi)
NO (1) NO300853B1 (fi)
RU (1) RU2050546C1 (fi)
SE (1) SE466158B (fi)
WO (1) WO1990012889A1 (fi)

Families Citing this family (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK0779958T3 (da) * 1994-09-08 2002-04-08 Lindab Ab Indretning til kobling af rørsektioner
DK9500486U3 (da) * 1995-12-18 1997-04-11 Lindab As Indretning til sammenkobling af rørstykker
EP1082006B1 (en) 1998-05-26 2006-02-01 Lifecell Corporation Cryopreservation of human red blood cells
US6077660A (en) * 1998-06-10 2000-06-20 Abbott Laboratories Diagnostic assay requiring a small sample of biological fluid
US6312888B1 (en) 1998-06-10 2001-11-06 Abbott Laboratories Diagnostic assay for a sample of biological fluid
US5902731A (en) * 1998-09-28 1999-05-11 Lifescan, Inc. Diagnostics based on tetrazolium compounds
US6656697B1 (en) 1998-09-28 2003-12-02 Lifescan, Inc. Diagnostics based on tetrazolium compounds
LT4605B (lt) 1999-04-07 2000-01-25 Biochemijos Institutas Fermentinis gliukozės sensorius ir jo gavimo būdas
US6485923B1 (en) 2000-02-02 2002-11-26 Lifescan, Inc. Reagent test strip for analyte determination having hemolyzing agent
KR20020089412A (ko) * 2000-03-28 2002-11-29 라이프스캔, 인코포레이티드 환원된 보조인자를 검출하기 위한 시약 및 방법
US6368818B1 (en) * 2000-10-12 2002-04-09 Qingzhong Kong Methods and compositions for the visualization of cellular organelles using tetrazolium salts
US6420128B1 (en) * 2000-09-12 2002-07-16 Lifescan, Inc. Test strips for detecting the presence of a reduced cofactor in a sample and method for using the same
ATE323174T1 (de) * 2000-09-13 2006-04-15 Merck Patent Gmbh Verfahren zur detektion und messung der biomasse
US7524872B2 (en) * 2000-09-15 2009-04-28 Qingzhong Kong Method and composition for treating cancer using cellular organelle crystallizing agents
EP1828407B1 (en) * 2004-12-17 2009-02-18 Megazyme IP Limited Assay for determination of free d-galactose and/or l-arabinose
WO2006064488A1 (en) * 2004-12-17 2006-06-22 Megazyme Ip Limited A kit for colorimetric assays of food and beverage analytes
KR100793852B1 (ko) * 2005-03-21 2008-01-11 김영기 착즙주스기
KR100776914B1 (ko) 2005-06-14 2007-11-15 주식회사 엘지화학 온도 측정 장치
WO2008030154A1 (en) * 2006-09-08 2008-03-13 Hemocue Ab Haemolysing agent
US8008037B2 (en) * 2008-03-27 2011-08-30 Roche Diagnostics Operations, Inc. Matrix composition with alkylphenazine quaternary salt and a nitrosoaniline
KR101239381B1 (ko) * 2012-05-02 2013-03-05 주식회사 아이센스 산화환원반응용 시약의 안정제 조성물
CN103088108A (zh) * 2012-11-16 2013-05-08 李立和 葡萄糖脱氢酶法检测葡萄糖的试剂盒及制备方法
US9347958B2 (en) 2014-06-27 2016-05-24 Hemocue Ab Device and method for determination of an analyte in blood
CN106018296A (zh) * 2016-05-20 2016-10-12 大连大学 蓝莓中总黄酮含量的测定
CN106018297A (zh) * 2016-05-20 2016-10-12 大连大学 蓝莓中总黄酚含量的测定
CN110715923A (zh) * 2019-11-24 2020-01-21 天津市宝坻区人民医院 α-D-葡萄糖检测试剂盒

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CS164231B2 (fi) * 1972-09-28 1975-11-07
DE2349819A1 (de) * 1973-10-04 1975-04-17 Eppendorf Geraetebau Netheler Verfahren zur enzymkinetischen konzentrationsbestimmung eines substrats
US4120755A (en) * 1977-04-28 1978-10-17 Beckman Instruments, Inc. Kinetic method for determination of glucose concentrations with glucose dehydrogenase
US4975367A (en) * 1986-04-04 1990-12-04 Miles Inc. Catalytic test composition intended to produce a range of colors
US4898813A (en) * 1986-04-04 1990-02-06 Albarella James P Catalytic test composition intended to produce a range of colors
US5059394A (en) * 1986-08-13 1991-10-22 Lifescan, Inc. Analytical device for the automated determination of analytes in fluids

Also Published As

Publication number Publication date
BR9007339A (pt) 1992-04-28
EP0470201A1 (en) 1992-02-12
FI915020A0 (fi) 1991-10-24
NO914181L (no) 1991-10-24
JPH0734757B2 (ja) 1995-04-19
RU2050546C1 (ru) 1995-12-20
AU637612B2 (en) 1993-06-03
ES2071821T3 (es) 1995-07-01
NO300853B1 (no) 1997-08-04
ATE122102T1 (de) 1995-05-15
SE466158B (sv) 1992-01-07
KR920701476A (ko) 1992-08-11
LV10122B (en) 1995-02-20
CA2053315A1 (en) 1990-10-26
JPH04504661A (ja) 1992-08-20
US5278047A (en) 1994-01-11
KR960001139B1 (ko) 1996-01-19
LT3136B (en) 1995-01-31
AU5557590A (en) 1990-11-16
SE8901515D0 (sv) 1989-04-25
EP0470201B1 (en) 1995-05-03
WO1990012889A1 (en) 1990-11-01
DK0470201T3 (da) 1995-07-17
LTIP275A (en) 1994-07-15
SE8901515L (sv) 1990-10-26
DE69019149T2 (de) 1995-09-07
LV10122A (lv) 1994-05-10
FI97551C (fi) 1997-01-10
NO914181D0 (no) 1991-10-24
CA2053315C (en) 2000-07-04
DE69019149D1 (de) 1995-06-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI97551B (fi) Analyysimenetelmä, reagenssikoostumus ja sen käyttö glukoosin määritykseen
Campanella et al. New biosensor for superoxide radical used to evidence molecules of biomedical and pharmaceutical interest having radical scavenging properties
ES2288906T3 (es) Pareja de colorantes para la determinacion espectrofotometrica de analitos.
RU2052819C1 (ru) Способ определения электрононасыщенного ароматического амина, являющегося маркером содержания аналита в биологической жидкости, и средство для его осуществления
Wangsa et al. Fiber-optic biosensors based on the fluorometric detection of reduced nicotinamide adenine dinucleotide
US5156947A (en) Process for reduction of the matrix effect in a fructosamine determination assay
JP2003232789A (ja) 安定化したテトラゾリウム試薬組成物およびこれを使用するための方法
KR20030041809A (ko) 안정화된 테트라졸륨-페나진 시약 조성물 및 이의 사용방법
JP2003521246A (ja) 検体測定用の試薬試験ストリップ
US4940660A (en) Color developing method in clinical examinations
FI81120B (fi) Foerfarande foer bestaemning av glukos ur biologiska vaetska samt reagensblandning foer tillaempning av foerfarandet.
JPS59162899A (ja) β‐ヒドロキシ酪酸の定量用組成物
US5312759A (en) Method for measurement of fructosamines using 1,2-quinones
JP2005118014A (ja) 分析方法およびそれに用いる試薬
JPH0532040B2 (fi)
JPH0365760B2 (fi)
JP4544598B2 (ja) 液状試薬および保存方法
Takahata et al. Spectrophotometric determination of trace amounts of hemoglobin using the oxidative decomposition reaction of a copper (II)–phthalocyanine complex
JP3869601B2 (ja) ホモシステインの測定方法
JP3186911B2 (ja) 微量成分の定量方法
JP2885864B2 (ja) シアル酸の定量法
JPH0640098B2 (ja) 試験手段の製造方法
JPH0772157A (ja) 糖化蛋白の定量方法およびその定量用キット
KR20000010767A (ko) 의학 샘플 분석시 헤모글로빈 오류를 제거하는 방법
JP2001161399A (ja) ホモシステインの定量方法並びにその試薬

Legal Events

Date Code Title Description
BB Publication of examined application