FI94644B - Uusien S-adenosyyli-metioniini-dekarboksylaasi-inhibiittoreiden valmistus - Google Patents

Description

1 - 54644

Uusien S-adenosyyli-metioniini-dekarboksylaasi-inhibiit-toreiden valmistus Tämä keksintö koskee menetelmää, jolla valmistetaan 5 uusia, S-adenosyylimetioniinidekarboksylaasin inhibiittoreina käyttökelpoisia kemiallisia yhdisteitä. Nämä yhdisteet ovat käyttökelpoisia moninaisten sellaisten tilojen ja sairaustilojen hoidossa, jotka ovat yhteydessä solujen kasvun nopeaan lisääntymiseen. Lisäksi keksintö koskee 10 mainittujen yhdisteiden valmistuksessa käyttökelpoisia välituotteita.

Keksinnön mukaisesti saatavat yhdisteet, joilla on myöhemmin esitettävä kaava I, ovat yllättäen tehokkaita ja irreversiibeleitä S-adenosyylimetioniinidekarboksylaasin 15 (Ado Met DC) inhibiittoreita. Sitä vastoin julkaisuista Journal of Medicinal Chemistry 25(5) (1982) 550-556 ja

Nucleosides & Nucleotides 6 (1-2) (1987) 73-83 tunnetun tekniikan mukaiset yhdisteet ovat pelkästään kilpailevia inhibiittoreita, mikä tarkoittaa sitä, että kyseiset yh-20 disteet korvaavat tai syrjäyttävät luonnollisen alustan kilpailemalla, ts. mitä enemmän inhibiittoria ja parempi sitoutumusvakio, sitä vähemmin esiintyy luonnollista entsymaattista reaktiota. Kilpailevien inhibiittorien läsnäollessa entsyymiä on kuitenkin aina saatavilla luonnolli-25 seen reaktioonsa. Keksinnön mukaisesti saatavien irrever-siibeleiden inhibiittorien etuna on se, että kun entsyymi-inhibiittori -sitoutuminen on tapahtunut, entsyymi on sen jälkeen pysyvästi kykenemätön luonnolliseen entsymaatti-seen toimintaansa. Täten niistä kilpailevista ja irrever-30 siibeleistä inhibiittoreista, joilla on samaa suuruusluok-; . kaa olevat sitoutumisvakiot, irreversiibelit inhibiittorit ovat merkittävästi tehokkaampia.

Täsmällisemmin esitettynä keksinnön kohteena on menetelmä, jolla valmistetaan uusi terapeuttisesti käyttö-35 kelpoinen yhdiste, jolla on kaava I

2 - 94644

R

Q-N-Ad I

5 sekä sen farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat, jossa kaavassa Ad tarkoittaa adenosinyyliä, R on vety tai C^-alkyy-li ja Q tarkoittaa jonkin kaavoista Ia ja Ie - Ie mukaista rakenneyksikköä, jotka mainitut kaavat ovat 10 Ϊ

V V X

I II II

H2N-CH-(CH2)m-C-(CH2)qCH2- H2N-CH-C-CH2-

Y

Ia Ie 15 V X X V w z

III III

H_N-CH-C-C-CH_- H_N-CH-C=C-CH0- 2 | | 2 2 2

Y Y

20 Id Ie jolloin m on nolla tai yksi ja q on nolla tai yksi, sillä edellytyksellä, että m:n ja q:n summa on pienempi kuin 2, V on H tai -C00H, 25 Won H, F, Cl tai Br, Z on H, F, Cl tai Br, kukin X ja kukin Y on H tai F, sillä edellytyksellä, että ainakin toinen X:stä ja Y:stä on F kaavassa Ie.

"Ad"-rakenneyksiköllä (1. adenosinyylirakenneyksi-30 köliä, joka koostuu lH-puriini-6-amiinista liittyneenä B-D-ribofuranosyyliin) on rakenne

II

3 - 94644 nh2 ro ΊΓ -oh2

JsCN

OH OH

Niissä tapauksissa, joissa Q:ta edustaa kaava Ia, 15 on huomattava, että ryhmistä m ja q voi kussakin kuvatussa yhdisteessä vain yksi olla 1. Niissä tapauksissa, joissa R on jokin muu kuin H, on C^^-alkyyliryhmä edullisesti metyyli ja etyyli, mutta mukaan luetaan kaikki suorat, haaraketjuiset ja sykliset ilmenemismuodot, metyylin ol-20 lessa edullinen ja etyylin, propyylin, isopropyylin, bu-tyylin, t-butyylin, pentyylin, heksyylin, sykloheksyylime-tyylin ja muiden näiden kaltaisten ollessa erityisesti mukaan luettuja. Niissä tapauksissa, joissa Q:ta edustaa kaava Ie, on edullista, että mainitut yhdisteet ovat nii-. 25 den cis-konfiguraatiossa mieluummin kuin niiden trans-kon- figuraatiossa. Niissä tapauksissa, joissa Q:ta edustaa kaava Id, ovat mono-, di-, tri- ja tetrafluorisubstituoi-dut rakenneyksiköt (kuten myös substituoimattomat raken-neyksiköt) mahdollisia. Edullisia sellaisia kaavan I mu-30 kaisia yhdisteitä, joissa Q on Ie, ovat ne, joissa H ja Z ; ovat H ja V on H tai COOH ja R on metyyli tai etyyli.

Kuvaavia esimerkkejä tämän keksinnön mukaisten yhdisteiden farmaseuttisesti soveliaista suoloista ovat ne, jotka ovat muodostuneet epäorgaanisten happojen, edulli-35 sesti suolahapon, vetybromi-, rikki- tai fosforihapon » 4 - 54644 kanssa sekä orgaanisten happojen, sellaisten kuin metaani-sulfoni-, salisyyli-, maleiini-, maloni-, viini-, sitruuna- ja askorbiinihapon kanssa. Nämä suolat voidaan valmistaa standarditekniikoilla ja menetelmillä, jotka tunnetaan 5 alalla hyvin.

Kaavan I mukaisista yhdisteistä ovat edullisia ne, joissa R on vety tai metyyli sekä ne yhdisteet, joissa Q tarkoittaa kaavaa Ie, erityisesti cis-konfiguraatiota ja ne, jotka ovat Ia:n ja Ic:n mukaisia. Edullisia täsmälli-10 sesti määriteltyjä yhdisteitä ovat cis-5'-deoksi-5'-(4- amino-2-butenyyli)metyyliaminoadenosiini, cis-5'-deoksi-5'-(4-amino-2-butenyyli)aminoadenosiini ja niiden 2-fluo-ri-, 3-fluori- ja 2,3-difluorianalogit ja 5'-deoksi-5'-(3-amino-2-metyleenipropyyli)metyyliaminoadenosiini, 5' - 15 deoksi-5’-(3-amino-2-metyleenipropyyli)aminoadenosiini ja niiden mono- sekä difluorianalogit (Ia:n X ja/tai Y on fluori) ja cis-5'-deoksi-5'-(4-amino-4-karboksi-2-butenyy-li)metyyliaminoadenosiini ja cis-5'-deoksi-5'-(4-amino-4-karboksi-2-butenyyli)aminoadenosiini.

20 Kaavan I mukaisten yhdisteiden valmistus voidaan pohjimmiltaan toteuttaa tekniikoilla ja kemiallisilla menetelmillä, jotka analogisesti tunnetaan alalla hyvin; nimenomaisen reitin valinnan riippuessa farmaseuttisen tutkimuksen vakiintuneissa tavoissa tavallisista tekijöis-. 25 tä, sellaisista kuin lähtömateriaalien saatavuus ja hinta, välituotteiden ja lopullisten yhdisteiden erottamisen ja puhdistuksen kesto ja vaikeudet sekä sellaisista muista tekijöistä, jotka ammattimiehet hyvin tuntevat ja yleensä osaavat arvioida.

30 Keksinnön mukaiselle menetelmälle uusien kaavan I

.. mukaisten yhdisteiden ja niiden suolojen valmistamiseksi on tunnusomaista se, mitä on esitetty patenttivaatimuksen 1 tunnusmerkkiosassa.

Täten kaavan I mukaisten yhdisteiden valmistus voi-35 daan yleisesti kuvata reaktiokaavion A mukaisella reaktio- sekvenssillä, seuraavasti: il t 5 - 94644

Reaktiokaavio A

'/y/°\|Ad s v-r» *>' -s**.· vv, —- V “ °x° © (4) 10 jossa Ad' on adeninyyli, jolla on kaava nh2

15 X yS-N

N I

R2X' on reaktantti, joka on jokin kaavoista 3a ja 3c - 3f w Z

20 V C V X

I II II

PgNH-CH-(CH2)m-C-(CH2)qCH2X' PgNH-CH-C-CH2X'

Y

3a 3c ; 25 V X X V w z

III III

PgNH-CH-C-C-CH2X’ PgNH-CH-C=C-CH2X'

Y Y

3d 3e 30 R-00C-CH-C=C-CH«C1 3 I 2 NHAc 3f 35 6 - 94644 joissa Pg on N-suojaryhmä, edullisesti t-butoksikarbonyy-li (Boc) tai ftaali-imido (Pht) (jossa tapauksessa PgNH-ryhmän H ei tietenkään ole läsnä) ja m, q, R, W, X, Y ja Z ovat kuten kaavassa I on määritelty ja X' on OTF (tri-5 flaatti) tai kloori, bromi tai jodi (R2:n ollessa tietenkin 3a:n tai 3c - 3f:n se ryhmä, joka on liittyneenä X'-ryhmään), ja V on H tai -COOH tai soveliaissa tapauksissa COOH-funktion reaktiosuojausjohdannainen, edullisesti t-butoksijohdannainen ja Ac on asyyliryhmä, edullisesti ase-10 taatti ja R3 on t-butyyli.

Silloin kun X' tarkoittaa halidia, saadaan reak-tanttien 2 ja 3 kondensaatio aikaan käyttämällä olosuhteita A-a, joissa ekvimolaaristen reaktanttimäärien annetaan reagoida keskenään emäksen (edullisesti kaliumkarbonaatin) 15 läsnä ollessa emäksisessä liuottimessa (edullisesti aseto-nitriilissä) lämpötiloissa noin 30 - 80 °C. Silloin kun käytetään olosuhteita A-b, 1. silloin kun X' on triflaat-ti, reaktantteja kuumennetaan yhdessä noin 30 - 80 °C:ssa emäksen (edullisesti trietyyliamiinin) läsnä ollessa emäk-20 sisessä liuottimessa (edullisesti dimetyyliformamidissa). N-suojaryhmien poisto saadaan helposti aikaan standardi-tekniikoilla, esim. käsittelemällä 1 N rikkihapolla huoneenlämpötilassa 24 - 48 tuntia ja käsittelemällä tämän jälkeen alkoholilla (edullisesti etanolilla) noin 0 eC:ssa . 25 suojaryhmän ollessa t-butoksikarbonyyli ja silloin kun suojaryhmä on ftaali-imido, saadaan poisto aikaan käyttämällä hydratsiinin etanoliliuosta (käyttämällä klassisia tekniikoita), siten että jälkimmäistä käytetään silloin kun R2 sisältää fluoriatomin. Ribofuranosyylirakenneosan 30 isopropylideenisuojaryhmän poisto saadaan helposti aikaan hydrolyysillä huoneenlämpötiloissa (edullisesti käyttämällä 1 N rikkihappoa), tavallisesti samanaikaisesti N-suoja-ryhmien poiston kanssa. Reaktiokaavion A mukaisten väli-ja lopputuotteiden eristys ja puhdistus toteutetaan stan-35 darditekniikoilla, esim. uudelleenkiteytyksellä, HPLCrllä,

II

» 7 - 94644 flas-kromatografiällä (piihappogeelissä) ja vastaavankaltaisilla tekniikoilla.

Reaktiokaavion A mukaiseen kondensaatioon vaadittavien välituotteiden eli niiden välituotteiden, jotka on 5 merkitty R2X':lla, valmistus voidaan toteuttaa käyttämällä analogisesti tunnettuja menetelmiä, sellaisia kuin ne, jotka on pääpiirteissään esitetty jäljempänä olevissa yleismenetelmissä, joita on havainnollistettu jäljempänä olevissa yksityiskohtaisesti kuvatuissa esimerkeissä.

10 Niissä tapauksissa, joissa R2X' tarkoittaa ala- yleisryhmää 3e, reaktio etenee olosuhteissa A-a, joissa X’ on edullisesti kloori ja N-suojaryhmä on Boc, asianmukainen V,W,Z-substituoitu, N-suojattu 4-kloori-2-buteeni-l-amiini voidaan kätevästi valmistaa seuraavan reaktiokaa-15 vion mukaisesti.

Reaktiokaavio B

W Z W Z

20 V* I I V'J_I

HO— \ OH —— > HO —/// -OTHP B-b ^ B-1 B-2 25 V f w z *J=L ϋ*. V‘)=K M*.

PhtN — X N-OTHP BocNH—^ >-OH

H

30 fbl em 8 · 94644

W Z

v* I 1

BocNH—/// ^—cl 5 ii5 jossa suojaryhmät (Pht ja Boc) sekä V, W ja Z ovat aiemmin määritellyn mukaisia ja (THP) on tetrahydropyraani.

10 Vaiheessa B-a annetaan diolin reagoida dihydropy- raanin kanssa katalyyttisten pyridinium-p-tolueenisulfo-naattimäärien läsnä ollessa noin 0 °C:ssa vedettömässä liuottimessa (tai seoksessa) (esim. CH2C12:THF, 2:1) noin 24 - 48 tunnin ajan. B-2:n muuttaminen B-3:ksi saadaan 15 käyntiin Mitsunobu-tyyppisellä molekyylien välisellä de-hydraatioreaktiolla tekemällä käsittely dietyyliatsodikar-boksylaatilla (DEAD) ja trifenyylifosfiinilla miedoissa neutraaleissa olosuhteissa inertin ilmakehän (typpi) alaisena noin 0 °C:ssa vedettömässä liuottimessa (esim. THF) 20 ftaali-imidin läsnä ollessa - reaktion jatkuessa huoneenlämpötilassa noin 12 tuntia.

Tuloksena olevia B-3-tuotteita käsitellään etanolissa olevalla hydratsiinihydraatilla palautusjäähdytyk-sessä 12 tunnin ajan ftaali-imido- ja THF-suojaryhmien 25 poistamiseksi ja vapaa amiini suojataan uudelleen di-t-butyylidikarbonaatilla palautusjäähdyttämällä dikloorime-taanissa. Alkoholit (B-4) muutetaan vastaaviksi klorideiksi reaktiolla mesyylikloridin kanssa emäksisissä olosuhteissa (TEA) vedettömässä liuottimessa, edullisesti di-30 kloorimetaanissa. Nämä kaavan 3e mukaiset cis-tuotteet ovat valmiita, sen jälkeen kun ne on puhdistettu käyttämällä tavallisesti flash-kromatografisia tekniikoita pii-happogeelissä, kondensaatioon kaavan 2 mukaisten reaktant-tien kanssa niiden tekniikoiden mukaisesti, jotka on ku-35 vattu reaktiokaaviota A varten.

n 9 - 94644

Niissä tapauksissa, joissa halutaan valmistaa 3-e:n mukaisten yhdisteiden trans-konfiguraatio - edullista on käyttää W,Z,V-substituoitua, N-suojattua trans-l-bro-mi-4-amino-2-buteenia (1. 3-e) - reaktantit valmistetaan 5 kätevästi antamalla V,W,Z-substituoidun trans-l-bromi-4-amino-2-buteenin reagoida kaliumftaali-imidin kanssa vedettömässä DMF:ssä noin 50 °C:ssa 24 tunnin ajan alalla hyvin tunnettujen standardimenetelmien mukaisesti. Luokan 3-c mukaiset välttämättömät R2X'-reaktantit valmistetaan 10 helposti sopivasta W, Z, V2-substituoidusta a,a-diklooriksy-leenistä, jolloin yhdiste saatetaan a-ftaali-imido-a'-klooriksyleenin muodostamiseksi korvausreaktioon kalium-ftaali-imidon kanssa kuumentamalla reaktantteja noin 50 eC:ssa noin 24 tunnin ajan vedettömässä DMF:ssä ja näin 15 muodostunut yhdiste puhdistetaan flash-kromatografian tavanomaisilla tekniikoilla piihappogeelissä. Lähtien liikkeelle sopivasti V,W,Z-substituoidusta 3-kloori-2-kloori-metyyli-l-propeenista, voidaan halutut luokan 3-a mukaiset R2X'-reaktantit valmistaa samalla tavalla edellä kuvatulla 20 korvausreaktiolla kaliumftaali-imidin kanssa kuumentamalla reaktantteja noin 50 °C:ssa noin 24 tunnin ajan vedettömässä difluorimetaanissa ja tekemällä tämän jälkeen puhdistus tavanomaisilla tekniikoilla, esim. flash-kromato-grafialla. Niissä tapauksissa, joissa nimenomainen V',W,Z-25 substituoitu reaktantti ei ole tunnettu yhdiste, voidaan sellaiset yhdisteet valmistaa alalla hyvin ymmärretyillä ja tunnetuilla tekniikoilla ja menetelmillä.

Jäljempänä kuvattujen täsmällisten esimerkkien lisäksi voidaan kemia cis-5'-(4-amino-4-karboksi-2-butenyy-30 li)metyyliadenosiinin valmistamiseen analogisesti johtaa

Tolmanin ja Sedmeran artikkelista (Tetrahedron Letters, Voi. 29, nro 47, s. 6183 - 6184, 1988) "Undaturated Amino Acids: Synthesis of Trans-3,4-Didehydro Analogues of L-Ornithine and L-arginine". Seuraava reaktiokaavio esit-35 tää tämän kemian sovellutuksen kaavamaisesti.

- 94644 10

Reaktiokaavio C

(Me02C)2-C-CH=CHC02t-Bu (β) ^ NHAc 5 (6) (Me02C)2-C-CECC02t-Bu —^ NHAc (Z) 10 (Me02C)2-C-CsCH20H -J—2-* NHAc (8) 15 H00C-CH-C=C-CHo0H (d)_^ I 2 * NHAc (9)

Bu-t00C-CH-C=C-CHoCl —-» I 2 20 NHAc (10) H Ad'

Bu-tOOC-CH-CEC-CH2N 0 'y (f) >

25 NHAc I f H

(11) 30 ? Ad' HOOC-C^ \—0 \ ^ V4

(12) OH OH

II

u - 94644

Edellä olevan reaktiokaavion toteutuksessa vaihe (a) käsittää (6):n dibromauksen reaktiolla bromin kanssa, mainitun reaktion tullessa toimeenpannuksi sopivassa liuottimessa (esim. CC14) huoneenlämpötilassa. Tuloksena 5 olevalle dibromianalogille tehdään bromin poisto reaktiolla kalium-t-butoksidin kanssa tetrahydrofuraanissa tai sellaisen emäksen kuin esimerkiksi DBU:n kanssa. Näin saatua yhdistettä (7) käsitellään peräkkäin (1) trifluori-etikkahapolla 25 °C:ssa 20 minuuttia, (2) tionyyliklori-10 dilla 25 °C:ssa kolme tuntia ja (3) DiBalzlla tetrahydro-furaanissa -30 eC:ssa yksi tunti yhdisteen (8) tuottamiseksi. Vaihe (c) käsittää (8):n peräkkäisen käsittelyn emäksellä (esim. Na0H/H20) tetrahydrofuraanissa 20 minuutin ajan, mitä seuraa käsittely laimennetulla HCl:llä 15 50 eC:ssa yhdisteen (9) tuottamiseksi. Tätä yhdistettä käsitellään isobutyleenillä katalyyttisen rikkihappomäärän läsnä ollessa ja tuloksena oleva alkoholi muutetaan vastaavaksi kloridiksi käsittelemällä sitä mesyylikloridilla yhdisteen (10) tuottamiseksi. Tämä yhdiste saatetaan sit-20 ten reaktioon kaavan (2) mukaisten adenosiinijohdannaisten kanssa reaktiokaavion A mukaisen menetelmän mukaisesti (jolloin yhdiste (10) vastaa R2X':a X':n ollessa kloori) yhdisteitä 4 analogisesti vastaavan yhdisteen [1. yhdisteen (11)] tuottamiseksi.

25 Tuloksena oleva kolmoissidoksen sisältävä yhdiste pelkistetään osittain käyttämällä hydrausta Lindlar-kata-lysaattorin (H2/PdS04) läsnä ollessa ja tuloksena olevaa buteenia käsitellään rikkihapolla (t-butoksidi- ja isopropyl ideeni suo jaryhmien poistamiseksi). Viimeinen vaihe on 30 se, että näin tuotettu viimeistä edellinen yhdiste saatetaan N-suoja-asyyliryhmän poistamiseksi alttiiksi asylaasi I:lle (Merck) pH:ssa 7,2 lämpötilassa 37 °C, jotta saadaan tuotettua haluttu yhdiste (12), esim. cis-5'-deoksi-5'-(4-amino-4-karboksi-2-buteeni)metyyliaminoadenosiini.

12 - 94644

Kaavan I mukaiset yhdisteet ovat polyamiinien muodostuksessa osallisena olevien dekarboksylaasientsyymien inhibiittoreita ja tämän vuoksi tällaiset yhdisteet ovat käyttökelpoisia farmakologisina aineina. Erityisesti kaa-5 van I mukaiset yhdisteet ovat tehokkaita ja irreversiibe-leita S-adenosyylimetioniinidekarboksylaasin (Ado Met DC) inhibiittoreita ja tämän vuoksi ne estävät merkittävästi spermiinin ja spermidiinin muodostusta ja ovat siten hyödyllisiä lisiä tutkijoiden ja lääkäreiden tarpeistoon po-10 lyamiinien muodostuksen tutkimuksessa sekä sellaisten tilojen ja sairauksien hoidossa, jotka ovat läheisessä yhteydessä solujen kasvun nopeaan lisääntymiseen. Erityisen merkittävää on tämän keksinnön mukaisten yhdisteiden käyttö yhdessä tunnettujen ornitiinidekarboksylaasin inhibiit-15 toreiden kanssa, tunnettujen kasvainvastaisten aineiden kanssa ja immunomodulaattoreiden kanssa, jotka tunnetaan niiden käytöstä normaalien ja transformoituneiden solujen nopeaan lisääntymiseen yhteydessä olevissa sairauksissa.

Kuten alalla hyvin tiedetään, polyamiinit ovat yh-20 teydessä solujen sekä normaaliin että nopeaan lisääntymiseen ja, kuten myös alalla hyvin tiedetään, polyamiinien tasot ovat korkeita embryoonisissa järjestelmissä, kiveksissä ja potilailla, jotka kärsivät solujen kasvun nopeaan lisääntymiseen yhteydessä olevista sairauksista. Tiedetään 25 myös, että ornitiinin, S-adenosyylimetioniiniin, arginii-nin ja lysiinin dekarboksylaasientsyymien aktiivisuuden ja polyamiinien muodostuksen välillä vallitsee korrelaatio. Tämän keskinäisen suhteen myötä ovat tämän keksinnön mukaiset yhdisteet siten, johtuen niiden ainutlaatuisesta 30 kyvystä inhiboida S-adenosyylimetioniinidekarboksylaasia, myös käyttökelpoisia tutkittaessa polyamiinien biosynteesin estämisen biokemiallisia ja farmakologisia seurauksia nisäkkäillä, kasveilla, bakteereilla ja alkueläimillä.

Täsmällisemmin sanottuna ovat seuraavat sovellutuk-35 set joitakin tämän keksinnön mukaisten yhdisteiden lupaavampia loppukäyttösovellutuksia.

It 13 - 94644 Tämän keksinnön mukaisen Ado Met DC -inhibiittorin käyttö - yksin, mutta tehokkaammin yhdessä ornitiinide-karboksylaasin (ODC) inhibiittorin kanssa - nisäkkäillä yhdynnän jälkeisinä ehkäisyvälineinä, menstruaation induk-5 toreina ja raskauden ensimmäisen kolmanneksen aikaisen keskenmenon aiheuttajina on selkeää, koska tällaisessa käytössä ei puututa kirurgisesti kohdun onteloon, se ei vaadi sairaalassa oloa ja siitä voidaan huolehtia vähäisellä määrällä lääketieteellistä valvontaa.

10 Kuten hyvin tiedetään, on yksittäisten aineiden käyttö syövänvastäisessä kemoterapiassa ollut vain rajoitetusti onnistuttu ja rajoittunutta hyvin harvoihin syöpäsairauksiin. Niinpä sellaisten syöpäsairauksien kuin leukemian (esim. akuutti lymfosyyttinen leukemia, Hodgkinsin 15 tauti), melanooman ja metastaattisen melanooman, multippelin myelooman, rakkokarsinooman, eturauhaskarsinooman (kuten myös hyvänlaatuisen munuaisadenokarsinooman, maha-ade-nokarsinooman, etureuhasen liikakasvun), haiman adenokar-sinooman, paksusuolen syövän, keuhkokarsinooman, fibro-20 sarkooman ja rintakarsinooman hoito tehostuu tämän keksinnön mukaisten Ado Met DC -inhibiittoreiden käytöllä yhdistelevissä hoito-ohjelmissa yhdessä tekniikan tason lääke-yhdistelmien kanssa. Puheena olevien Ado Met DC -inhibiittoreiden käyttö, edullisesti ODC-inhibiittoreiden kanssa 25 ja/tai interferonin kanssa, esimerkiksi helpottaa merkittävästi epäsuotuisien sivuvaikutusten vähentämistä ja lisää elinaikaa käytettäessä niitä yhdistelmässä sellaisten hyvin tunnettujen lääkeyhdistelmien kanssa kuin vinkris-tiini, ametopteriini, merkaptopuriini, prednisoni (VAMP), 30 syklofosfamidi, arabinosyylisytosiini, onkoviini (COAP), mekloorietamiini, prokarbatsiini (MOPP), ABVD, CHOP, CAF, F AM ja PVE [ks. katsausartikkeli Berger, N.A. (1986), J. Clin. Invest. (1131 - 1135)]. Lisäksi tämän keksinnön mukaisten yhdisteiden käyttö parantaa tehokkuutta, kun es-35 tetään etäispesäkkeitä rinnan, paksusuolen ja virtsarakon 14 - 94644 syövässä OCD-inhibiittoreilla. Toinen tämän keksinnön mukaisten yhdisteiden spesifinen kliininen näkökohta on ODC-inhibiittoreiden ja a-interferonin välisen synergismin tehostus syöpien, erityisesti metastasoivan pahanlaatuisen 5 melanooman hoidossa. Vielä yksi näkökohta on ODC-inhibiit-toreiden ja metyyliglykosaalibisguanyylihydratsonin (MGBG; metyyli-GAG) välisen ainutlaatuisen vuorovaikutuksen tehostus, erityisesti uusiutuvien primaaristen aivokasvainten (esim. astrosytoomien) tapauksessa. Tämän keksinnön 10 mukaiset yhdisteet voivat vielä lisäksi olla hyödyllisiä sellaisten hyperproliferatiivisten häiriöiden kuin esimerkiksi psoriasiksen hoidossa.

Edellä esitetyn lisäksi voidaan tämän keksinnön mukaisia yhdisteitä käyttää sellaisten sairauksien hoita-15 miseen, jotka aiheutuvat infektioista eläinparasiiteillä, erityisesti parasiittisilla alkueläimillä ja parasiitti-sillä sukkulamadoilla. Näiden parasiittien aiheuttamien sairauksien hoidossa voidaan tämän keksinnön mukaisia yhdisteitä käyttää yksin tai yhdistelmässä ornitiinidekar-20 boksylaasin inhibiittoreiden kanssa ja/tai yhdistelmässä muiden aineiden kanssa, joiden tiedetään olevan hyödyllisiä tällaisten sairauksien hoidossa. Joissakin tapauksissa, kuten esimerkiksi hoidettaessa Chagas'n tautia, on edullista käyttää arginiinidekarboksylaasin inhibiittorei-25 ta yhdessä tämän keksinnön mukaisten yhdisteiden kanssa. Erityisen mielenkiintoista on afrikkalaisen trypanosomiaa-sin, Chagas'n taudin ja AIDS:ia potevien potilaiden Pneumocystas carinii - pneumonian (PCP) (erityisesti yhdistelmässä ODC-inhibiittorin kanssa), kryptosporidioosin 30 ja malarien hoito.

Vieläkin täsmällisemmin sanottuna tämän keksinnön mukaiset yhdisteet ovat erityisen käyttökelpoisia hoidettaessa: (1) sairauksia, jotka aiheuttaa Onchocerca Voivu-35 lus, filariaalisukkulamato, joka elää ihonalaisessa kudok- ti is - 94644 sessa aiheuttaen ihovaurioita ja silmävaurioita (jokisokeus ). Näitä sairauksia hoidetaan yleensä dietyylikarba-matsiinilla, joka tappaa mikrofilariat mutta ei aikuisia matoj a; 5 (2) sairauksia, jotka aiheuttaa Wuchereria bancrof- ti, sauvamainen sukkulamato, jonka aikuiset elävät ohuissa imusuonissa ja jotka aiheuttavat imusuonentulehdusta, ihotulehdusta ja sidekudostulehdusta. Näitä sairauksia hoidetaan yleensä dietyylikarbamatsiinilla, mutta tämän hoidon 10 tiedetään olevan riittämätön; (3) sairauksia, jotka aiheuttaa Loa loa, filariaa-limato, joka aiheuttaa Loaiaasin, jolle on tunnusmerkillistä kuuma punoittava Calabar-turvotus raajoissa ja pe-riorbitaalisissa kudoksissa ja jota myös on hoidettu die- 15 tyylikarbamatsiinilla; (4) sairauksia, jotka aiheuttaa Trichomonas vaginalis, sukupuolikontaktien välityksellä siirtyvä flagellaat-tialkueläin, joka aiheuttaa siimaeliötaudin, jota yleensä hoidetaan metronidatsolilla; 20 (5) sairauksia, jotka aiheuttaa Giardia lamblia, flagelloitu parasiittialkueläin, joka aiheuttaa giardiaa-sia kotikoirilla ja villieläimillä, kuten myös ihmisellä, jota varten valitut lääkkeet ovat kinakriinihydrokloridi ja metronidatsoli; 25 (6) sairauksia, jotka aiheuttaa Toxoplasma gondii, alaluokan coccidia parasiittialkueläin, joka aiheuttaa synnynnäisen toksoplasmoosin, jota voidaan hoitaa pyrime-tamiinilla ja sulfadiatsiinilla; (7) sairauksia, jotka aiheuttaa suvun Plasmodium 30 malariat, esim. Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax, Plasmodium ovale ja Plasmodium malariae, jotka ovat malarian syitä; tavallinen hoito annetaan klorokiinilla, ki-niinisulfaatilla, pyrimetaniinilla ja sulfadiatsiinilla. Tämän sairauden hoidossa on tämän keksinnön mukaisia yh-35 disteitä parempi käyttää yhdistelmähoidossa edellä oelvien kanssa tai ODC-inhibiittoreiden kanssa; ie 94644 (8) sairauksia, jotka aiheuttaa Trypanosoma cruzi, alkueläin, joka aiheuttaa Chagas'n taudin, sairauden, jota historiallisesti on vaikea hoitaa. Hoidettaessa tätä sairautta tämän keksinnön mukaisilla yhdisteillä, suositel- 5 laan niitä käytettäväksi yhdistelmähoidossa arginiini- ja agmatiinidekarboksylaasin inhibiittoreiden kanssa; (9) sairauksia, jotka aiheuttaa afrikkalaiset try-panosooma-loiset Trypanosoma brucei gambiense ja Trypanosoma brucei rhodesiense, kaksi hemoflagellaattien alala- 10 jia, jotka ovat vastuussa afrikkalaisesta trypanosoomatau-dista, sairaudesta, jota käytetään suramiinilla ja nyttemmin eflornitiinilla. Erityisesti käytettävänä tämän sairauden hoidossa ovat nimenomaiset yhdisteet cis-5'-deoksi-5'-(4-amino-2-butenyyli)metyyliaminoadenosiini ja cis-5'-15 deoksi-5' -(4-karboksi-4-amino-2-butenyyli )metyyliaminoade-nosiini; (10) sairauksia, jotka aiheuttaa Leishmania tropica ja Leishmania mexicana, jotka ovat vastuussa ihon leisma-niataudista sekä viskeraalista leismaniatautia (jota kut- 20 sutaan myös kala azariksi tai mustakuumeeksi), jonka aiheuttaa Leishmania donovani.

Tämän keksinnön mukaista Ado Met DC -inhibiittoria voidaan edelleen käyttää (yksin tai yhdistelmässä ODC-in-hibiittoreiden kanssa) anti-infektiivisinä aineina, ollen 25 tehokkaita kontrolloitaessa kasvunsa puolesta polyamii-neista riippuvaisia bakteereita, sieniä ja viruksia, esimerkiksi E. colia, Enterobacteria, H. influenzaeta, Myco-bacteria-lajeja, Staphylococcus aureusta, Klebsiellaa, sellaisia viruksia kuin poxvirukset, Herpesvirukset, pi-30 cornavirukset ja influenssavirukset. Tämän keksinnön mukaisia yhdisteitä käyettäessä on edullista käyttää hyväksi sellaisia ODC-inhibiittoreita kuin a-difluorimetyyliorni-tiini, a-monofluorimetyyliornitiini, a-etyylinyyliornitii-ni, (£)-2-(fluorimetyyli)dehydro-ornitiini ( ja sen metyy-35 li-, etyyli- ja muut esterit) ja (2R,5R)-6-heptyyni-2,5- «

II

17 - 94644 diamiini; mainitut yhdisteet ja niiden käyttö ovat riittävästi kuvattuja, mitä tulee niiden valmistukseen, niiden ODCrtä inhiboiviin ominaisuuksiin ja niiden loppukäyttöso-vellutuksiin (ks. Inhibition of Polyamine Metabolism, 5 (1987), toimittaneet McCann, P.P., Pegg, A.E., ja

Sjoerdsma, A.)·

Kaavan I mukaisten yhdisteiden S-adenosyylimetio-niinidekarboksylaasia inhiboivat ominaisuudet voidaan kätevästi määrittää alalla hyvin tunnetuilla tavallisilla 10 laboratoriomenetelmillä. Esimerkiksi cis-5'-deoksi-5'-(4-amino-2-butenyyli)metyyliaminoadenosiini saa aikaan rotan maksan Ado Met Dc:n inaktivaation in vitro siten, että t% = 16 minuuttia pitoisuudessa 0,1 μΜ, t^s = 1,6 minuuttia pitoisuudessa 1 μΜ ja th = 0,8 minuuttia pitoisuudessa 15 2 μΜ.

Farmakologisesti käyttökelpoisina aineina voidaan kaavan I mukaiset aineet antaa hoidettavalle potilaalle halutun vaikutuksen saavuttamiseksi useilla eri tavoilla. Yhdisteet voidaan antaa yksin tai yhdistelmässä toisen 20 kanssa yhdistelmähoidon standarditekniikoiden mukaisesti, pitäen mielessä, että tämän keksinnön mukaiset yhdisteet edullisesti tehostavat vakiintuneita hoito-ohjelmia käytettäessä niitä neoplasmojen hoitoon. Yhdisteet annetaan edullisesti farmaseuttisen valmisteen muodossa. Yhdisteet 25 voidaan yleensä antaa suun kautta, parenteraalisesti, esimerkiksi suonensisäisesti, intraperitoneaalisesti tai ihon alle, infuusiona tai topikaalisesti, siten kuin sellaiset tekijät määräävät, jotka ammattimies hyvin tuntee ja arvioi. Yhdisteen annettava määrä vaihtelee laajalla alueel-30 la ja voi olla mikä tahansa tehokas määrä, riippuen hoidettavasta potilaasta, hoidettavasta tilasta ja antotavas-ta. Yhdisteen annettava tehokas määrä vaihtelee noin välillä 0,2 - 200 mg potilaan ruumiinkiloa ja hoitoannosta kohti ja edullisesti se on välillä noin 1 - 50 mg potilaan 35 ruumiinkiloa ja hoitoannosta kohti.

« is 94644

Kiinteät annosteluyksikön muodot voivat olla tavanomaisen tyyppisiä. Niinpä kiinteä muoto voi olla kapseli, joka voi olla tavallinen gelatiinityyppinen kapseli sisältäen tämän keksinnön mukaisen uuden yhdisteen sekä kanta-5 jän, esimerkiksi liukastusaineen ja inerttejä täyteaineita, sellaisia kuin laktoosi, sakkaroosi tai maissitärkke-lys. Toisessa toteutusmuodossa uudet yhdisteet tabletoi-daan tavanomaisten tablettipohjien kanssa, sellaisten kuin laktoosi, sakkaroosi tai maissitärkkelys, yhdistelmässä 10 sitoja-aineiden kanssa, sellaisten kuin arabikumi, maissi tärkkelys tai gelatiini, hajaantumista edistävien aineiden kanssa, sellaisten kuin maissitärkkelys, perunatärkkelys tai algiinihappo ja liukastuaineen kanssa, sellaisen kuin steariinihappo tai magnesiumstearaatti.

15 Parenteraalisessa annossa yhdisteet voidaan antaa injektoitavina annoksina yhdisteen liuosta tai suspensiota fysiologisesti soveliaassa laimennusaineessa yhdessä farmaseuttisen kantajan kanssa, joka voi olla sellainen steriili neste kuin esimerkiksi vesi ja öljyt ja yhdessä pin-20 ta-aktiivisen aineen ja muiden farmaseuttisesti soveliai den adjuvanttien lisäyksen kanssa tai ilman tätä lisäystä. Esimerkkejä öljyistä, joita näissä valmisteissa voidaan käyttää, ovat sellaiset, jotka ovat peräisin raakaöljystä, eläimistä, kasveista tai alkuperältään synteettisiä, esi-25 merkiksi maapähkinäöljy, soijapavun öljy ja mineraaliöljy.

Edullisia nestemäisiä kantajia, erityisesti injektoitaviin liuoksiin, ovat yleensä vesi, suolaliuos, dekstroosin vesiliuos ja tälle sukua olevat sokeriliuokset, etanolit ja glykolit, sellaiset kuin propyleeniglykoli tai polyetylee-30 niglykoli.

, Yhdisteet voidaan antaa kestoinjektiona tai siir- revalmisteena, joka voidaan muotoilla siten, että se sallii aktiivisen aineosan jatkuvan vapautumisen. Aktiiviset aineosat voidaan puristaa lääkehelmiin tai pieniin sylin-35 tereihin ja siitää ihon alle tai lihaksen sisään kestoin- n » « v X9 - 94644 jektioksi tai siirteeksi. Siirteissä voidaan käyttää sellaisia inerttejä materiaaleja kuin esimerkiksi biologisesti hajoavia polymeerejä ja synteettisiä silikoneja, esimerkiksi Silastic'ia, Dow-Corning Corporationin valmista-5 maa silikonikumia.

Seuraavat esimerkit havainnollistavat tämän keksinnön mukaisten välttämättömien välituotteiden ja lopputuotteiden valmistusta.

Esimerkki I

10 cis-5 ' -deoksi-5' -(4-amino-2-butenyyli )metyyliamino- adenosiinin valmistus

Vaihe A

cis-4-tetrahydropyranyylioksi-2-buten-l-oli Jäähdytettyyn (0 °C) liuokseen, jossa oli 2-buten-15 1,4-diolia (8,8 g, 10 mmol) ja pyridiniumparatolueenisul- fonaattia (0,25 g, 10 mmol) vedettömässä dikloorimetaa-ni:tetrahydrofuraanissa (2:1), lisättiin tipoittain dihyd-ropyraania (9,1 ml, 100 mmol). Seosta sekoitettiin kaksi päivää 0 °C:ssa, sitten se konsentroitiin vakuumissa. 20 Jäännös puhdistettiin flash-kromatografialla piihappogee- lissä (etyyliasetaatti:heksaani, 3:7), jolloin saatiin 8,3 g otsikon yhdistettä (49 %).

Vaihe B

cis-l-ftaali-imido-4-tetrahydropyranyylioksi-2-bu-25 teeni Jäähdytettyyn (0 °C) liuokseen, jossa oli cis-4-tetrahydropyranyylioksi-2-buten-l-olia (1,7 g, 10 mmol), trifenyylifosfiinia (2,2 g, 10 mmol) ja ftaali-imidiä (1,47 g, 10 mmol) vedettömässä tetrahydrofuraanissa 30 ( 50 ml), lisättiin typpi-ilmakehässä dietyyliatsodikarbok- sylaattia (1,6 ml, 10 mmol). Kun lisäys oli saatu päätök-seen (5 min), reaktioseoksen annettiin lämmetä huoneenlämpötilaan ja sitä sekoitettiin 12 tuntia. Sitten seos konsentroitiin vakuumissa, laimennettiin etyyliasetaatilla 35 (200 ml) ja pestiin suolavedellä (150 ml). Tavanomaisten • 20 - 94644 toimenpiteiden (vesifaasi uutettiin kolme kertaa 100 ml:n erillä etyyliasetaattia, orgaaninen faasi kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja konsentroitiin vakuu-missa) jälkeen tuote puhdistettiin flash-kromatografialla 5 piihappogeelissä (etyyliasetaatti:heksaani, 2:8), jolloin saatiin 1,9 g otsikon yhdistettä (64 %).

Vaihe C

cis-tertiobutoksikarbonyyli-4-hydroksi-2-butenyyli- 1-amiini 10 Liuosta, jossa oli cis-l-ftaali-imido-4-tetrahydro- pyranyylioksi-2-buteenia (1,9 g, 6,3 mmol) ja hydratsiini-hydraattia (0,35 ml, 6,9 mmol) etanolissa (20 ml), kuumennettiin palautusjäähdytyksessä 12 tuntia. Sitten seos konsentroitiin vakuumissa, laimennettiin 1 N suolahapolla 15 (20 ml) ja sitä kuumennettiin palautusjäähdytyksessä kaksi tuntia. Sitten ftalyylihydratsidi suodatettiin erilleen ja suodos konsentroitiin vakuumissa. Jäännös otettiin dikloo-rimetaaniin (100 ml), neutraloitiin trietyyliamiinilla (pH 8,9) ja ditertiobutyylidikarbonaatin (1,65 g, 20 7,5 mmol) liuos dikloorimetaanissa (5 ml) lisättiin. Seos ta kuumennettiin palautusjäähdytyksessä yön yli ja tuote saatiin - tavanomaisten toimenpiteiden jälkeen - flash-kromatografialla piihappogeelissä (etyyliasetaatti:hek-saani, 25:75) (0,8 g, 74 %).

25 Valhe D

cis-N-tertiobutoksikarbonyyli-4-kloori-2-butenyyli- 1-amiini

Mesyylikloridia (0,6 ml, 7,6 mmol) lisättiin jäähdytettyyn (0 °C) liuokseen, jossa oli cis-tertiobutok-30 sikarbonyyli-4-hydroksi-2-butenyyli-l-amiinia (1,3 g, 7 mmol) ja trietyyliamiinia (1,1 ml, 7,6 mmol) vedettömäs-sä dikloorimetaanissa (30 ml). Seosta sekoitettiin yön yli ja otsikon yhdiste puhdistettiin - tavanomaisten toimenpiteiden jälkeen - flash-kromatografialla piihappogeelissä 35 (etyyliasetaatti:heksaani, 2:8) (0,8 g, 57 %).

II

« 21 94644

Vaihe E

cis-5'-deoksi-5'-(N-tertiobutoksikarbonyyli-4-ami-no-2-butenyyli)metyyliamino-2', 3 ’-isopropylideeni-adenosiini 5 Liuosta, jossa oli cis-N-tertiobutoksikarbonyyli- 4-kloori-2-butenyyli-l-amiinia (0,6 g, 3 mmol), 5'-deoksi-5'-metyyliamino-2',3'-isopropylideeniadenosiinia (0,97 g, 3 mmol), kaliumkarbonaattia (0,42 g, 3 mmol) ja natriumjo-didia (0,05 g, 0,03 mmol) asetonitriilissä (20 ml), kuu-10 mennettiin palautusjäähdytyksessä yön yli. Sitten seos laimennettiin etyyliasetaatilla, pestiin suolavedellä ja kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Sitten tuote puhdistettiin flash-kromatografialla piihappogeelissä (dietyyli-amiini:kloroformi, 2:98) (1,1 g, 55 %).

15 Vaihe F

cis-5' -deoksi-5' -(4-amino-2-butenyyli )metyyliamino-adenosiini

Liuoksen, jossa oli cis-5’-deoksi-5'-[(N-tertiobu-toksikarbonyyli-4-amino-2-butenyyli )metyyliamino] -2',3'-20 isopropylideeniadenosiinia (0,9 g, 1,8 mmol) 1 N rikkihapossa (5 ml), annettiin seistä kaksi päivää huoneenlämpö-tilassa. Sitten seos laimennettiin etanolilla (200 ml) ja sitä jäähdytettiin (0 eC) yön yli. Sakka suodatettiin erilleen, liuotettiin pienimpään mahdolliseen määrään vet-25 tä ja seostettiin sitten uudelleen etanolilla (200 ml). Tämä menettely toistettiin kahdesti, jolloin saatiin otsikon yhdiste (0,5 g), sp. 260 °C hajoten.

Esimerkki II

trans-5' -deoksi-5' - (4-amino-2-butenyyli)metyyliami-30 noadenosiinin valmistus

Vaihe A

trans-1-bromi-4-ftaali-imido-2-buteeni Seosta, jossa oli trans-l,4-bromi-2-buteenia (6,4 g, 30 mmol) ja kaliumftaali-imidiä (5,6 g, 30 mmol) 35 vedettömässä dimetyyliformamidissa (200 ml), kuumennettiin 22 94644 50 °C:ssa 24 tuntia. Sitten reaktioseos konsentroitiin vakuumissa, liuotettiin etyyliasetaattiin, pestiin suolavedellä ja puhdas otsikon yhdiste saatiin dikloorimetaa-nilla piihappogeelissä (etyyliasetaatti:heksaani, 15:85) 5 (3,2 g, 40 %).

Vaihe B

trans-5'-deoksi-5'-(4-ftaali-imido-2-butenyyli)me-tyyliamino-2',3'-isopropylideeniadenosiini Seosta, jossa oli trans-l-bromi-4-ftaali-imido-2-10 buteenia (2 g, 7,5 mmol), kaliumkarbonaattia (1,6 g, 11,5 mmol) ja 5'-deoksi-5'-metyyliamino-2’,3'-isopropylideeni-adenosiinia (2,4 g, 7,5 mmol) vedettömässä asetonitriilis-sä (100 ml), kuumennettiin palautusjäähdytyksessä yön yli.

Sitten seos konsentroitiin vakuumissa, liuotettiin dikloo-15 rimetaaniin, suodatettiin ja puhdistettiin flash-kromato- grafiällä piihappogeelissä (kloroformi:dietyyliamiini, 98:2), jotta saatiin tuotettua otsikon yhdiste (1,25 g, 33 %).

Vaihe C

20 trans-5 ' -deoksi-5' - (4-tertiobutoksikarbonyyliamino- 3-butenyyli)metyyliamino-2’,3'-isopropylideeniadenosiini

Seosta, jossa oli trans-5'-deoksi-5’-(4-ftaali-imi-do-2-butenyyli )metyyliamino-2', 3' -isopropylideeniadenosii-25 nia (1 g, 2 mmol) ja hydratsiinihydraattia (0,1 ml, 2 mmol) absoluuttisessa etanolissa, kuumennettiin palautus jäähdytyksessä yön yli. Sitten seos konsentroitiin vakuumissa, liuotettiin veteen (30 ml) ja pH säädettiin arvoon 4 jääetikalla ja seos jäähdytettiin 0 eC:seen. Sitten 30 seos suodatettiin ja suodos neutraloitiin trietyyliamii-. nilla pH-arvoon 9 ja konsentroitiin vakuumissa. Sitten « jäännös liuotettiin dikloorimetaaniin ja ditertiobutyyli-dikarbonaattia (0,45 g, 2 mmol) lisättiin. Seosta kuumennettiin palautusjäähdytyksessä yön yli ja tuote puhdistet-35 tiin - tavanomaisten toimenpiteiden jälkeen - flash-kroma- • ·«

II

23 94644 tografiällä piihappogeelissä (dietyyliamiini:dikloorime-taani, 2:98), jolloin saatiin otsikon yhdiste (0,5 g, 51 %).

Valhe D

5 trans-5 ' -deoksi-5'-(4-amino-2-butenyyli )metyyliami- noadenosiini

Suspensiota, jossa oli trans-5'-deoksi-5'-(3-ter-tiobutoksikarbonyyliamino-2-butenyyli)metyyliamino-2', 3 ' -isopropylideeniadenosiinia (0,4 g, 0,96 mmol) 1 N rikkiha-10 possa (3 ml), sekoitettiin kaksi päivää huoneenlämpötilassa. Sitten seos laimennettiin absoluuttisella etanolilla (100 ml) ja sitä jäähdytettiin 0 °C:ssa yön yli. Tuote suodatettiin erilleen, liuotettiin pienimpään mahdolliseen määrään vettä ja seostettiin etanolilla (100 ml). Tämä 15 menettely toistettiin kahdesti, jotta saatiin tuotettua otsikon yhdiste (0,16 g), sp. 250 - 260 eC hajoten. Esimerkki III

5'-deoksi-5'-(4-amino-2-butynyyli)metyyliaminoade-nosiinin valmistus 20 Vaihe A

l-kloori-4-ftaali-imido-2-butyyni 1,3-dikloori-2-butyynin (4,9 ml, 50 mmol) ja ka-liumftaali-imidin (5,6 g, 30 mmol) seosta kuumennettiin 50 °C:ssa 24 tunnin ajan. Sitten seos konsentroitiin va-25 kuumissa, laimennettiin etyyliasetaatilla ja tuote puhdistettiin - tavanomaisten toimenpiteiden jälkeen - flash-kromatografialla piihappogeelissä, jolloin saatiin 4,3 g otsikon yhdistettä (62 %).

Vaihe B

30 5'-deoksi-5'-(4-ftaali-imido)-2-butynyyli)metyyli- amino-2',3'-isopropylideeniadenosiini Seosta, jossa oli l-kloori-4-ftaali-imido-2-butyy-niä (1,4 g, 6 mmol), 5'-deoksi-5'-metyyliamino-23'-isopropylideeniadenosiinia (1,6 g, 5 mmol) ja natriumjodidia 35 (0,075 g, 0,5 mmol) vedettömässä asetonitriilissä 24 - 94644 (100 ml), kuumennettiin palautusjäähdytyksessä yön yli. Sitten seos konsentroitiin, laimennettiin dikloorimetaa-nilla, suodatettiin ja puhdistettiin flash-kromatografiällä piihappogeelissä (dietyyliamiini:kloroformi, 2:98), 5 jolloin saatiin otsikon yhdiste (1,6 g, 64 %).

Vaihe C

5'-deoksi-5'-(4-tertiobutoksikarbonyyliamino-2-bu-tynyyli )metyyliamino-2', 3' -isopropylideeniadenosii-ni 10 Seosta, jossa oli 5'-deoksi-5'-(4-ftaali-imido-2- butynyyli)metyyliamino-2', 3'-isopropylideeniadenosiinia(1 g, 1,9 mmol) ja metyylihydratsiinia (0,5 ml, 10 mmol) absoluuttisessa etanolissa (3 ml), kuumennettiin palautus-jäähdytyksessä yön yli. Sitten seos konsentroitiin vakuu-15 missä, liuotettiin seokseen tetrahydrofuraani:vesi (1:1, 200 ml) ja ditertiobutyylidikarbonaatin (0,5 g, 2,5 mmol) liuos tetrahydrofuraanissa (10 ml) lisättiin. Seoksen pH säädettiin arvoon 9 trietyyliamiinilla ja sitten seosta kuumennettiin palautusjäähdytyksessä 24 tuntia. Sitten 20 reaktioseos konsentroitiin vakuumissa, laimennettiin etyyliasetaatilla ja tuote saatiin - tavanomaisten toimenpiteiden jälkeen - flash-kromatografiällä piihappogeelissä (dietyyliamiino:kloroformi, 2:98) (0,5 g, 56 %).

Valhe D

. 25 5'-deoksi-5'-(4-amino-2-butynyyli)metyyliaminoade- nosiini

Suspensiota, jossa oli 5'-deoksi-5'-(4-tertiobutok-sikarbonyyliamino-2-butynyyli) metyyli amino-2', 3 ' -isopropylideeniadenosiinia (0,4 g, 0,82 mmol) 1 N rikkihapossa 30 (25 ml), sekoitettiin kaksi päivää huoneenlämpötilassa.

Sitten seos laimennettiin etanolilla (100 ml) ja sitä sekoitettiin 0 °C:ssa yön yli. Tuote saostettiin erilleen, liuotettiin pienimpään mahdolliseen määrään vettä ja laimennettiin etanolilla (100 ml). Tämä menettely toistettiin 35 kahdesti, jotta saatiin tuotettua puhdasta 5'-deoksi-5'-

II

25 - 94644 (4-amino-2-butynyyli)metyyliaminoadenosiinia valkoisina kiteinä (0,2 g), sp. 230 - 240 °C hajoten. Tämä yhdiste voidaan tietenkin pelkistää vastaavan cis-kaksoissidoksel-lisen yhdisteen muodostamiseksi.

5 Esimerkki IV

5 ' -deoksi-5 ' -(orto-aminometyylibentsyyli )metyyli-aminoadenosiinin valmistus Vaihe A

α-ftaali-imido-a'-klooriksyleeni 10 a,a'-diklooriksyleenin (8,75 g, 50 mmol) ja kalium- ftaali-imidin (5,6 g, 30 mmol) seosta kuumennettiin 50 °C:ssa 24 tuntia. Sitten reaktioseos konsentroitiin vakuumissa, liuotettiin etyyliasetaattiin ja haluttu tuote saatiin - tavanomaisten toimenpiteiden jälkeen - flash-15 kromatografiällä piihappogeelissä (etyyliasetaatti theksaa- ni, 15:85) (6 g, 65 %).

Vaihe B

5'-deoksi-5'-(orto-ftaali-imido-metyylibentsyyli)-metyyliamino-2',3'-isopropylideeniadenosiini 20 α-ftaali-imido-a'-klooriksyleenin (1,6 g, 5,5 mmol), kaliumkarbonaatin (0,7 g, 5 mmol), natriumjodi-din (0,07 g, 0,5 mmol) ja 5'-deoksi-5'-metyyliamino-2',3'-isopropylideeniadenosiinin (1,5 g, 4,7 mmol) seosta vedettömässä asetonitriilissä kuumennettiin palautusjäähdytyk-25 sessä yön yli. Sitten seos konsentroitiin vakuumissa, liuotettiin dikloorimetaaniin, suodatettiin ja puhdistettiin sitten flash-kromatografialla piihappogeelissä (kloroformi :dietyyliamiini, 98:2), jolloin saatiin otsikon yhdiste (1,8 g, 67 %).

30 Vaihe C

5'-deoksi-5'-(orto-tertiobutoksikarbonyyliaminome-tyylibentsyyli)metyyliamino-2',3'-isopropylideeniadenosiini 5'-deoksi-5'-(orto-ftaali-imido-metyylibentsyyli)-35 metyyliamino-2',3'-isopropylideeniadenosiinin (1,3 g, • » 26 '94644 2,3 mmol) ja hydratsiinihydraatin (0,12 ml, 2,3 mmol) seosta absoluuttisessa etanolissa (100 ml) kuumennettiin palautusjäähdytyksessä yön yli. Sitten seos konsentroitiin vakuumissa, laimennettiin veteen (30 ml) ja jääetikkaa 5 lisättiin pH:n säätämiseksi arvoon 4 ja seos jätettiin 0 °C:seen. Sitten seos suodatettiin ja suodos neutraloitiin trietyyliamiinilla reaktioseoksen pH:n säätämiseksi noin 9:ään. Sitten seos konsentroitiin vakuumissa, laimennettiin dikloorimetaanilla ja ditertiobutyylidikarbonaat-10 tia (0,5 g, 2,3 mmol) lisättiin. Sitten seosta kuumennettiin palautusjäähdytyksessä yön yli ja otsikon yhdiste eristettiin - tavanomaisten toimenpiteiden jälkeen - flash-kromatografiällä piihappogeelissä (kloroformi:di-etyyliamiini, 98:2).

15 Vaihe D

5' -deoksi-5' -(orto-aminometyylibentsyyli )metyyli-aminoadenosiini 5'-deoksi-5'-(orto-tertiobutoksikarbonyyliaminome-tyylibentsyyli )metyyliamino-2 ', 3' -isopropylideeniadenosii-20 nin (0,45 g, 0,83 mmol) suspensiota 1 N rikkihapossa (25 ml) sekoitettiin kaksi päivää huoneenlämpötilassa. Sitten seos laimennettiin etanolilla (100 ml) ja sitä säilytettiin 0 eC:ssa yön yli. Sakka suodatettiin erilleen, liuotettiin pienimpään mahdolliseen määrään vettä ja saos-25 tettiin uudelleen etanolilla (100 ml). Tämä menettely toistettiin kahdesti, jolloin saatiin otsikon yhdiste (0,4 g), sp. 230 - 240 °C hajoten.

Esimerkki V

5'-deoksi-5'-(3-amino-2-metyleenipropyyli)metyyli-30 aminoadenosiini

. Vaihe A

1-ftaali-imido-3-kloori-2-metyleenipropaani Seosta, jossa oli 3-kloori-2-kloorimetyyli-l-pro-peenia (6,55 g, 50 mmol) ja kaliumftaali-imidiä (5,6 g, 30 35 mmol) vedettömässä dimetyyliformamidissa (200 ml), kuuli 27 - 94644 mennettiin kaksi päivää 50 °C:ssa. Sitten seos konsentroitiin vakuumissa ja tuote puhdistettiin - tavanomaisten toimenpiteiden jälkeen - flash-kromatografialla piihappo-geelissä (etyyliasetaatti:heksaani, 15:85) (4,2 g, 78 %).

5 Vaihe B

5'-deoksi-5'-(3-ftaali-imido-2-metyleenipropyyli)-metyyliamino-2', 3'-isopropylideeniadenosiini Seosta, jossa oli l-ftaali-imido-3-kloori-2-mety-leenipropaania (0,87 g, 5 mmol), kaliumkarbonaattia 10 (0,7 g, 5 mmol), natriumjodidia (0,08 g, 0,5 mmol) ja 5'-

deoksi-5'-metyyliamino-2',3'-isopropylideeniadenosiinia (1,6 g, 5 mmol) vedettömässä asetonitriilissä (100 ml), kuumennettiin kaksi päivää palautusjäähdytyksessä. Sitten seos konsentroitiin vakuumissa, laimennettiin dikloorime-15 taanilla, suodatettiin ja tuote puhdistettiin flash-kromatografialla piihappogeelissä (dietyyliamino:kloroformi, 2:98), jolloin saatiin 2,85 g (78 %) otsikon yhdistettä. Vaihe C

5’-deoksi-5'-(3-tertiobutoksikarbonyyliamino-2-me-20 tyleenipropyyli)metyyliamino-2', 3' -isopropylideeni adenosiini

Seosta, jossa oli 5'-deoksi-5'-(3-ftaali-imido-2-metyleenipropyyli )metyyliamino-2', 3' -isopropylideeniadenosiinia (2,3 g, 4,4 mmol), metyylihydratsiinia (1,5 ml, . 25 30 mmol) absoluuttisessa etanolissa (5 ml) kuumennettiin kaksi päivää palautusjäähdytyksessä. Sitten seos konsentroitiin vakuumissa, liuotettiin kloroformiin (5 ml), pH säädettiin noin 9:ään trietyyliamiinilla ja sitten lisättiin liuos, jossa oli ditertiobutyylidikarbonaattia 30 (8,8 g, 4,4 mmol) kloroformissa (5 ml). Tuloksena olevaa seosta kuumennettiin palautusjäähdytyksessä yön yli ja tuote puhdistettiin - tavanomaisten toimenpiteiden jälkeen - flash-kromatografialla piihappogeelissä (dietyyli-araiino:kloroformi, 2:98), jolloin saatiin 1,25 g (64 %) 35 otsikon yhdistettä.

28 94644

Vaihe D

5'-deoksi-5'-(3-amino-2-metyleenipropyyli)metyyli-aminoadenosiini

Suspensiota, jossa oli 5'-deoksi-5'-(3-tertiobutok-5 sikarbonyyliamino-2-metyleenipropyyli)metyyliamino-2', 3 ' -isopropylideeniadenosiinia (0,65 g, 1,3 mmol) 1 N rikkihapossa (4 ml), sekoitettiin kaksi päivää huoneenlämpötilassa. Sitten seos laimennettiin absoluuttisella etanolilla (150 ml)ja jätettiin 0 eC:seen yön yli. Sakka suodatettiin 10 erilleen, liuotettiin pienimpään mahdolliseen määrään vettä ja laimennettiin absoluuttisella etanolilla (150 ml). Tämä menettely toistettiin kahdesti, jotta saatiin otsikon yhdiste valkoisina kiteinä (0,55 g, sp. 230 - 240 °C hajoten) .

15 Esimerkki VI

5'-deoksi-5'-(4-amino-2,2-difluoributyyli)metyyli-aminoadenosiinin valmistus Vaihe A

4-ftaali-imido-2,2-difluoributyyli-trifluorimetaa-20 nisulfonaatti "Triflic"-happoanhydridiä (1,1 ml, 6,6 mmol) lisättiin jäähdytettyyn (0 °C) liuokseen, jossa oli 4-ftaali-imido-2, 2-difluori-l-butanolia (1,53 g, 6 mmol), pyridii-niä (0,53 ml, 6,6 mmol) vedettömässä dikloorimetaanissa 25 (50 ml). Seosta sekoitettiin yksi tunti 0 °C:ssa ja tuote puhdistettiin - tavanomaisten toimenpiteiden jälkeen - flash-kromatografialla piihappogeelissä (etyyliasetaatti: heksaani, 20:80), jolloin saatiin 1,8 g (78 %) otsikon yhdistettä.

30 Vaihe B

5'-deoksi-5'-(4-ftaali-imido-2,2-difluoributyyli)-metyyliamino-2', 3'-isopropylideeniadenosiini Seosta, jossa oli 4-ftaali-imido-2,2-difluoributyy-li-trifluorimetaanisulfonaattia (1,8 g, 4,6 mmol), 5'-de-35 oksi-5'-metyyliamino-2’,3’-isopropylideeniadenosiinia

II

• 29 94644

(1,3 g, 4,3 mmol) ja trietyyliamiinia (0,6 ml, 4,3 mmol) vedettömässä dimetyyliformamidissa, kuumennettiin kaksi päivää 50 eC:ssa. Sitten seos konsentroitiin vakuumissa ja tuote puhdistettiin flash-kromatografialla piihappogee-5 Iissä (dietyyliamiino:kloroformi, 2:98) (1,7 g, 70 %). Vaihe C

5' -deoksi-5' - (4-tertiobutoksikarbonyyliamino-2,2-dif luoributyyli )metyyliamino-2', 3' -isopropylideeni-adenosiini 10 Seosta, jossa oli 5'-deoksi-5'-(4-ftaali-imido-2,2- di f luoributyyli )metyyliamino-2 ' , 3 ’ -isopropylideeniadeno-siinia (1,5 g, 2,7 mmol) ja hydratsiinihydraattia (0,153 g, 2,7 mmol) etanolissa (20 ml), kuumennettiin palautus jäähdytyksessä yön yli. Sitten seos konsentroitiin 15 vakuumissa, laimennettiin vedellä ja jääetikkaa lisättiin, kunnes pH oli asettunut 4:ään. Seos jätettiin 0 °C:seen ja sitten se suodatettiin. Suodos neutraloitiin trietyyli-amiinilla pH-arvoon 9, konsentroitiin vakuumissa, laimennettiin dikloorimetaanilla ja sitten lisättiin ditertiobu-20 tyylidikarbonaattia (0,6 g, 2,7 mmol). Seosta kuumennet tiin palautusjäähdytyksessä yön yli ja tuote puhdistettiin - tavanomaisten toimenpiteiden jälkeen - flash-kromatografialla piihappogeelissä (dietyyliamiini:kloroformi, 2:98), jolloin saatiin 1,1 g (75 %) otsikon yhdistettä.

25 Vaihe D

5'-deoksi-5'-(4-amino-2,2-difluoributyyli)metyyli-aminoadenosiini

Suspensiota, jossa oli 51-deoksi-5'-(4-tertiobutok-sikarbonyyliamino-2,2-difluoributyyli)metyyliamino-2',3'-30 isopropylideeniadenosiinia 1 N rikkihapossa (4,5 ml), sekoitettiin kaksi päivää huoneenlämpötilassa. Sitten seos laimennettiin etanolilla (100 ml) ja se jätettiin yön yli 0 eC:seen. Sakka suodatettiin erilleen, liuotettiin pie-nimpään mahdolliseen määrään vettä ja seostettiin etano-35 lilla (150 ml). Tämä menettely toistettiin kahdesti, jotta • · i so 94644 saatiin otsikon yhdiste (0,5 g, 60 %) valkoisina kiteinä (sp. 240 °C hajoten).

Esimerkki VII

cis-5’-deoksi-5'-(4-amino-2-fluori-2-butenyyli)me-5 tyyliaminoadenosiinin valmistus

Vaihe A

cis-4-ftaali-imido-2-fluori-l-tetrahydropyranyyli- 2-buteeni

Seosta, jossa oli cis-4-kloori-2-fluori-l-tetrahyd-10 ropyranyyli-2-buteenia (6,3 g, 30 mmol) ja kaliumftaali-imidiä (5,6 g, 30 mmol) vedettömässä dimetyyliformamidissa (200 ml), kuumennettiin 50 °C:ssa 24 tuntia. Sitten reak-tioseos konsentroitiin vakuumissa, liuotettiin etyyliasetaattiin, pestiin suolavedellä ja puhdas otsikon yhdiste 15 cis-4-ftaali-imido-2-fluori-2-tetrahydropyranyyli-2-butee- ni (6 g, 70 %) saatiin flash-kromatografialla piihappogee-lissä (etyyliasetaattirheksaani, 2:8).

Vaihe B

cis-N-tertiobutoksikarbonyyli-2-fluori-4-hydroksi-20 2-butenyyli-1-amiini

Liuosta, jossa oli cis-4-ftaali-imido-2-fluori-2-tetrahydropyranyyli-2-buteenia (5,7 g, 20 mmol) ja hydrat-siinihydraattia (1,1 ml, 22 mmol) etanolissa (30 ml), kuumennettiin palautusjäähdytyksessä 12 tuntia. Sitten seos 25 konsentroitiin vakuumissa, laimennettiin 1 N HCl:llä (20 ml) ja sitä kuumennettiin palautusjäähdytyksessä kaksi tuntia. Sitten ftaalihydratsidi suodatettiin erilleen ja suodos konsentroitiin vakuumissa. Jäännös otettiin talteen dikloorimetaaniin (150 ml), neutraloitiin trietyyliamii-30 nilla, kunnes pH oli 9 ja liuos, jossa oli ditertiobutyy-lidikarbonaattia (5 g, 22 mmol) dikloorimetaanissa (10 ml), lisättiin. Seosta kuumennettiin palautusjäähdytyksessä yön yli ja tuote saatiin - tavanomaisten toimenpiteiden jälkeen - flash-kromatografialla piihappogeelissä (etyyli- 35 asetaattirheksaani, 25:75) (3 g, 75 %).

Il 31 · 94644

Vaihe C

cis-N-tertiobutoksikarbonyyli-2-fluori-4-kloori-2- butenyy1i-1-amiini

Mesyylikloridia (0,9 ml, 11 mmol) lisättiin kylmään 5 (0 °C) liuokseen, jossa oli cis-N-tertiobutoksikarbonyy- li-2-fluori-4-hydroksi-3-butenyyli-l-amiinia (2,05 g, 10 mmol) ja trietyyliamiinia (1,6 ml, 11 mmol) vedettömässä dikloorimetaanissa (40 ml). Seosta sekoitettiin yön yli ja otsikon yhdiste cis-N-tertiobutoksikarbonyyli-2-fluori-10 4-kloori-2-butenyyli-l-amiini saatiin - tavanomaisten toimenpiteiden jälkeen - flash-kromatografiällä piihappogee-lissä (etyyliasetaattirheksaani, 15:85) (1,7 g, 75 %).

Vaihe D

cis-5 ' -deoksi-5 ' -(4-tertiobutoksikarbonyyliamino-15 2-fluori-2-butenyyli )metyyliamino-2', 3' -isopropyli- deeniadenosiini

Liuosta, jossa oli 5'-deoksi-5'-metyyliamino-2', 3'-isopropylideeniadenosiinia (1,65 g, 5 mmol), cis-N-tertio-butoksikarbonyyli-2-fluori-4-kloori-2-butenyyli-l-amiinia 20 (1,2 g, 4 mmol), kaliumkarbonaattia (0,7 g, 4 mmol) ja natriumjodidia (0,07 g, 0,5 mmol) vedettömässä asetonit-riilissä (30 ml), kuumennettiin palautusjäähdytyksessä yön yli. Seos konsentroitiin vakuumissa, laimennettiin etyyliasetaatilla, pestiin suolavedellä ja kuivattiin MgS04:lla.

. 25 Tuote puhdistettiin flash-kromatografialla piihappogeelis- sä (dietyyliamiini:kloroformi, 2:98) (1,7 g, 70%).

Vaihe E

cis-5'-deoksi-5'-(4-amino-2-fluori-2-butenyyli)me- tyy1iaminoadenösiini 30 Suspensiota, jossa oli cis-5'-deoksi-5'-(4-tertio- butoksikarbonyyliamino-2-fluori-2-butenyyli)metyyliamino-2',3'-isopropylideeniadenosiinia 1 N rikkihapossa (5 ml), sekoitettiin kaksi päivää huoneenlämpötilassa. Sitten seos laimennettiin absoluuttisella etanolilla (200 ml) ja sitä 35 pidettiin 0 °C:ssa yön yli. Sakka kerättiin talteen, liuo- „ - 94544 tettiin pienimpään mahdolliseen määrään vettä ja saostet-tiin uudelleen absoluuttisella etanolilla (200 ml). Tämä menettely toistettiin kahdesti, jolloin saatiin otsikon yhdiste cis-5'-deoksi-5'-(4-amino-2-fluori-2-butenyyli)-5 metyyliaminoadenosiini (1 g, 75 %; sp. 250 - 260 °C hajoten) .

Esimerkki VIII

5' -deoksi-5' -(3-amino-2,2-difluoripropyyli)metyyli-aminoadenosiinin valmistus 10 Vaihe A

Etyyli-2,2-difluori-3-hydroksipropionaatti Seosta, jossa oli paraformaldehydiä (4,5 g, 50 mmol), etyylidifluoribromiasetaattia (10,2 g, 50 mmol) ja aktivoitua sinkkipölyä (3,3 g, 40 mmol) vedettömässä 15 tetrahydrof uraanissa, kuumennettiin palautus jäähdytyksessä 0,5 tuntia. Sitten seosta käsiteltiin ammoniumkloridin kyllästetyllä vesiliuoksella ja uutettiin dietyylieette-rillä. Haluttu yhdiste etyyli-2,2-difluori-3-hydroksipro-pionaatti saatiin tavanomaisten toimenpiteiden jälkeen 20 flash-kromatografialla piihappogeelissä (etyyliasetaatti: heksaani, 25:75) (4,1 g, 53 %).

Vaihe B

Etyyli-2,2-di fluori-3-tetrahydropyranyylipropio-naatti 25 Dihydropyraania (2 ml, 22 mmol) lisättiin liuok seen, jossa oli etyyli-2,2-difluori-3-hydroksipropionaat-tia (3,1 g, 20 mmol) ja pyridinium-p-tolueenisulfonaattia (0,25 g, 1 mmol) vedettömässä dikloorimetaanissa (50 ml).

Seosta sekoitettiin yön yli huoneenlämpötilassa ja haluttu 30 yhdiste etyyli-2,2-difluori-3-tetrahydropyranyylipropio-naatti saatiin flash-kromatografialla piihappogeelissä (etyyliasetaatti:heksaani, 15:85) (4 g, 80 %).

« 33 94644

Vaihe C

2.2- di fluori-3-tetrahydropyranyy1ioksi-1-propanoli

Liuos, jossa oli etyyli-2,2-difluori-3-tetrahydro- pyranyylioksipropionaattia (3,5 g, 15 mmol) absoluuttises-5 sa etanolissa (10 ml), lisättiin tipoittain suspensioon, jossa oli natriumboorihydridiä (0,57 g, 15 mmol) absoluuttisessa etanolissa (20 ml) huoneenlämpötilassa. Sitten seosta sekoitettiin tunti lisää huoneenlämpötilassa. Sitten seos konsentroitiin vakuumissa, hydrolysoitiin ammo-10 niumkloridin vesiliuoksella, uutettiin etyyliasetaatilla ja kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Tuote puhdistettiin flash-kromatografialla piihappogeelissä (etyyliasetaatti: heksaani, 25:75) (2,7 g, 90 %).

Vaihe D

15 2,2-difluori-3-tetrahydropyranyylioksipropyylitri- fluorimetaanisulfonaatti "Triflic"-happoanhydridiä (1,8 ml, 11 mmol) lisättiin kylmään (0 eC) liuokseen, jossa oli 2,2-difluori-3-tetrahydropyranyylioksi-1-propanolia (91,6 g, 10 mmol), 20 pyridiiniä (0,9 ml, 11 mmol) vedettömässä dikloorimetaa-nissa (50 ml). Seosta sekoitettiin yksi tunti 0 ®C:ssa ja tuote puhdistettiin - tavanomaisten toimenpiteiden jälkeen - flash-kromatografialla piihappogeelissä (etyyliasetaatti : heksaani, 15:85) (2,6 g, 80 %).

25 Vaihe E

2.2- difluori-3-ftaali-imido-l-tetrahydropyranyyli- oksipropaani

Seosta, jossa oli 2,2-difluori-3-tetrahydropyra-nyylioksipropyylitrifluorimetaanisulfonaattia (2,3 g, 30 7 mmol), kaliumftaali-imidiä (1,4 g, 7,7 mmol) ja vedetön- • tä dimetyyliformamidia (50 ml) typen alaisena, sekoitettiin ja kuumennettiin 85 °C:ssa yön yli. Jäähdytyksen jälkeen suolat suodatettiin erilleen ja liuotin poistettiin vakuumissa. Jäännös otettiin talteen dikloorimetaaniin 35 (100 ml), pestiin 0,5 M NaOH:lla (30 ml) ja suolavedellä.

• « | - 94644 34

Orgaaninen faasi erotettiin, kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja konsentroitiin. Haluttu yhdiste 2,2-difluori-3-ftaali-imido-l-tetrahydropyranyylioksipropaani puhdistettiin flash-kromatografiällä piihappogeelissä (etyyliase-5 taatti:heksaani, 20:80) (2 g, 90 %).

Vaihe F

2.2- difluori-3-ftaali-imido-l-propanoli

Liuosta, jossa oli 2,2-difluori-3-ftaali-imido-l- tetrahydropyranyylioksipropaania (2 g, 6,15 mmol), parato-10 lueenisulfonihappoa (0,1 g) absoluuttisessa etanolissa, sekoitettiin yön yli huoneenlämpötilassa. Sitten seos konsentroitiin vakuumissa, laimennettiin etyyliasetaatilla ja pestiin suolavedellä. Orgaaninen faasi erotettiin, kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja konsentroitiin vakuumissa. 15 Raaka alkoholi 2,2-difluori-3-ftaali-imido-l-propanoli (1,4 g) käytettiin seuraavaan vaiheeseen ilman lisäpuhdis-tusta.

Vaihe G

2.2- difluori-3-ftaali-imido-propyylitrifluorime- 20 taanisulfonaatti "Triflic"-happoanhydridiä (1,1 ml, 6,6 mmol) lisättiin kylmään (0 °C) liuokseen, jossa oli 2,2-difluori-3-ftaali-imido-l-propanolia (1,4 g, 6 mmol), pyridiiniä (0,5 ml, 6,6 mmol) vedettömässä dikloorimetaanissa ,, 25 (30 ml). Seosta sekoitettiin yksi tunti 0 °C:ssa ja tuote puhdistettiin - tavanomaisten toimenpiteiden jälkeen -flash-kromatografiällä piihappogeelissä (etyyliasetaatti: heksaani, 20:80) (1,7 g, 75 %).

Vaihe H

30 5' -deoksi-5' -(2,2-difluori-3-ftaali-imido-propyy- li)metyyliamino-2',3'-isopropylideeniadenosiini

Seosta, jossa oli 2,2-difluori-3-ftaali-imido-pro-pyylitrifluorimetaanisulfonaattia (1,5 g, 4 mmol), 5'-deoksi-5'-metyyliamino-2',3'-isopropylideeniadenosiinia 35 (1,2 g, 4,2 mmol) ja trietyyliamiinia (0,55 ml, 4,2 mmol)

II

- 94644 t 35 vedettömässä dimetyyliformamidissa, kuumennettiin kaksi päivää 50 °C:ssa. Sitten seos konsentroitiin vakuumissa ja tuote puhdistettiin f lash-kromatograf iällä piihappogeelis-sä (dietyyliamiini:kloroformi, 2:98) (1,5 g, 75 %).

5 Valhe I

5 ' -deoksi-5 '-(2,2-difluori-3-tertiobutoksikarbonyy-liaminopropyyli )metyyliamino-2', 3' - isopropyl ideeni-adenosiini

Seosta, jossa oli 5'-deoksi-5'-(2,2-difluori-3-10 f taali-imidopropyyli )metyyliamino-2' , 3 * -isopropylideeni- adenosiinia (1,1 g, 2 mmol) etanolissa (10 ml), kuumennettiin palautusjäähdytyksessä yön yli. Sitten seos konsentroitiin vakuumissa, laimennettiin 1 N etikkahapolla, kunnes saavutettiin pH 4 ja jäähdytettiin 0 °C:ssa. Sakka 15 suodatettiin erilleen ja suodosta neutraloitiin trietyyli- amiinilla, kunnes pH oli 9 ja konsentroitiin vakuumissa. Jäännös otettiin talteen dikloorimetaaniin ja ditertiobu-tyylidikarbonaattia (0,45 g, 2 mmol) lisättiin. Seosta kuumennettiin palautusjäähdytyksessä yön yli ja tuote puh-20 distettiin - tavanomaisten toimenpiteiden jälkeen - flash-kromatograf iällä piihappogeelissä (dietyyliamiini:kloroformi, 2:98) (0,8 g, 70 %).

Valhe J

5' -deoksi-5'-(3-amino-2,2-difluoripropyyli )metyyli-·· 25 aminoadenosiini

Suspensiota, jossa oli 5’-deoksi-5'-(2,2-difluori- 3-tertiobutoksikarbonyyliaminopropyyli )metyyliamino-2', 3' -isopropylideeniadenosiinia (0,8 g, 1,5 mmol) 1 N rikkihapossa (4 ml), sekoitettiin kaksi päivää huoneenlämpötilas-30 sa. Sitten seos laimennettiin absoluuttisella etanolilla (150 ml) ja sitä pidettiin 0 eC:ssa yön yli. Sakka kerättiin talteen, liuotettiin pienimpään mahdolliseen määrään vettä ja saostettiin uudelleen absoluuttisella etanolilla (150 ml). Tämä menettely toistettiin kahdesti, jolloin 35 saatiin otsikon yhdiste 5'-deoksi-5'-(3-amino-2,2-difluo- - 94644 36 ripropyyli)metyyliaminoadenosiini (0,6 g, 80 %; sp. 250 -260 °C hajoten).

Esimerkki IX

cis-5'-deoksi-5'-(4-karboksi-4-amino-2-butenyyli)-5 metyyliaminoadenosiinin valmistus

Vaihe A

2-amino-5-hydroks i-3-pentyynihappo Seosta, jossa on glyoksaalihappomonohydraattia (23 g, 250 mmol), propargyylialkoholia (16,8 g, 300 mmol), 10 kupari(IIJkloridia (3,2 g, 25 mmol) ja ammoniumasetaattia (49 g, 600 mmol) etanolissa (100 ml), kuumennettiin palautus jäähdytyksessä kuusi tuntia. Sitten reaktioseos konsentroidaan vakuumissa, laimennetaan vedellä (50 ml), happa-moidaan pH-arvoon 5 IN HClrllä ja pestiin kahdesti eet-15 terillä (100 ml). Sitten vesiliuos kaadetaan ioninvaihto-resiinipylvääseen (D0WEX 50, H+). Pylväs eluoidaan 1 M ammoniumhydroksidilla, jolloin saadaan otsikon yhdiste 2-amino-5-hydroksi-3-pentyynihappo.

Vaihe B

20 Tertiobutyyli-2-amino-5-hydroksi-3-pentynoaatti

Suspensiota, jossa on 2-amino-5-hydroksi-3-pentyy-nihappoa (12,5 g, 100 mmol) konsentroituna rikkihapossa (2 ml) ja isopropyleeniä (50 ml) suljetussa Parrin pullossa, ravistellaan kaksi päivää huoneenlämpötilassa. Raakatuote 25 käytetään, isopropyleeniylimäärän haihduttamisen jälkeen, seuraavassa vaiheessa ilman lisäpuhdistusta.

Valhe C

Ter t iobutyy 1 i - 2 - tertiobutokslkarbonyyliamino-5-hyd-roksi-3-pentynoaatti 30 Liuosta, jossa on raaka tertiobutyyli-2-amino-5- ‘ hydroksi-3-pentynoaatti (100 ml), ditertiobutyylidikarbo- naattia (22 g, 100 mmol) ja trietyyliamiinia (25 ml, 200 mmol) kloroformissa, kuumennetaan palautusjäähdytyksessä yön yli. Sitten tuote puhdistetaan - tavanomaisten 35 toimenpiteiden jälkeen - flash-kromatografiällä plihappo- geelissä (etyyliasetaattirheksaani, 20:80).

11 • 94644 37

Vaihe D

cis-tertiobutyyli-2-tertiobutoksikarbonyyli-5-hyd- roksi-3-pentenoaatti

Liuosta, jossa on tertiobutyyli-2-tertiobutoksikar-5 b9nyyliamino-5-hydroksi-3-pentynoaattia (13,6 g, 50 mmol) etanolissa (200 ml), hydrataan Lindlar-katalysaattorin (0,6 g) läsnä ollessa ilmakehän paineessa ja huoneenlämpö-tilassa. Kolmessa tunnissa otetaan sisään yksi ekvivalentti vetyä (1,1 litraa). Sitten katalysaattori poistetaan 10 suodatuksella ja seos konsentroidaan vakuumissa, mikä antaa kirkkaan öljyn. Otsikon yhdiste saadaan flash-kromato-grafiällä piihappogeelissä (etyyliasetaattirheksaani, 15:85).

Vaihe E

15 cis-tertiobutyyli-2-tertiobutoksikarbonyyliamino- 5-kloori-3-pentenoaatti

Mesyylikloridia (0,9 ml, 11 mmol) lisätään kylmään (0 eC) liuokseen, jossa on cis-tertiobutyyli-2-tertiobu-toksikarbonyyliamino-5-hydroksi-3-pentenoaattia (2,75 g, 20 10 mmol) ja trietyyliamiinia (1,6 ml, 11 mmol) vedettömäs sä dikloorimetaanissa (50 ml). Seosta sekoitetaan yön yli ja otsikon yhdiste puhdistetaan - tavanomaisten toimenpiteiden jälkeen - flash-kromatografiällä piihappogeelissä (etyyliasetaatti:heksaani, 20:80).

25 Vaihe F

* cis-5'-deoksi-5'-(4-tertiobutoksikarbonyyli-4-ter- tiobutoksikarbonyyliamino-2-butenyyli )metyyliamino-2',3'-isopropylideeniadenosiini

Liuosta, jossa on cis-tertiobutyyli-2-tertiobut-30 oksikarbonyyliamino-5-kloori-3-pentenoaattia (1,5 g, 5 mmol), 5'-deoksi-5'-metyyliamino-2',3’-isopropylideeni-adenosiinia (1,6 g, 5 mmol), kaliumkarbonaattia (0,7 g, 5 mmol) ja natriumjodidia (0,8 g, 0,5 mol) asetonitriilis-sä (30 ml), kuumennetaan palautusjäähdytyksessä yön yli. 35 Tavanomaisten toimenpideiden jälkeen tuote puhdistetaan - 94644 38 flash-kromatografialla piihappogeelissä (dietyyliamiini: kloroformi, 2:98).

Vaihe G

cis-5'-deoksi-5'-(4-karboksi-4-amino-2-butenyyli)-5 metyyliaminoadenosiini

Suspensiota, jossa on cis-5'-deoksi-5’-(4-tertiobu-toksikarbonyyli-4-tertiobutoksikarbonyyliamino-2-butenyy-li)metyyliamino-2',3'-isopropylideeniadenosiinia (1,5 g, 3 mmol) 1 N rikkihapossa (5 ml), sekoitetaan kaksi päivää 10 huoneenlämpötilassa. Sitten seosta laimennetaan etanolilla (200 ml) ja pidetään 0 °C:ssa yön yli. Sakka kerätään talteen, liuotetaan pienimpään mahdolliseen määrään vettä ja seostetaan uudelleen etanolilla (200 ml). Tämä menettely toistetaan kahdesti ja antaa otsikon yhdisteen cis-5'-de-15 oksi-5' - (4-karboksi-4-amino-2-butenyyli )metyyliaminoadeno- siinin.

(Tavanomaiset toimenpiteet käsittävät tuotteen uuttamisen vesifaasista kolmella uutolla orgaanisella liuottimessa (kuten vaiheessa C, esimerkki I) ja orgaanisen faasin kui-20 vauksen magnesiumsulfaatilla, suodatuksen ja konsentroin-nin vakuumissa).

Il

Claims (12)

1. Menetelmä, jolla valmistetaan uusi terapeuttisesti käyttökelpoinen yhdiste, jolla on kaava I 5 R Q-N-Ad I sekä sen farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat, jossa kaa-10 vassa Ad tarkoittaa adenosinyyliä, R on vety tai C^-alkyy-li ja Q tarkoittaa jonkin kaavoista Ia ja Ie - Ie mukaista rakenneyksikköä, jotka mainitut kaavat ovat W .Z

15. V X IK II H_N-CH-(CH0) -C-(CH0) CH_- H„N-CH-C-CH0- z z m z g z z |Z Y Ia Ie 20 V X X V W Z III III H0N-CH-C-C-CH„- H0N-CH-C=C-CH0- z | | 2 2 2 Y Y Id le 25 jolloin m on nolla tai yksi ja q on nolla tai yksi, sillä edellytyksellä, että m:n ja q:n summa on pienempi kuin 2, V on H tai -C00H, W on H, F, Cl tai Br, 30. on H, F, Cl tai Br, kukin X ja kukin Y on H tai F, sillä edellytyksellä, että ainakin toinen X:stä ja Y:stä on F kaavassa Ie, tunnettu siitä, että sellaisen yhdisteen, jolla on kaava • 94644 40 nh2 N ^ ^-N

5 N R hn-ch2— I—rB V annetaan reagoida R2X'-reaktantin kanssa, R2X':n ollessa yhdiste, jolla on jokin kaavoista 3a ja 3c - 3f 15 W. z V V’ X I II II PgNH-CH-(CH2)m-C-(CH2)gCH2X' PgNH-CH-C-CH2X' Y 20 3a 3c V’ X X V W Z III III PgNH-CH-C-C-CH2X' PgNH-CH-C=C-CH2X' Y Y 25 3d 3e Ro00C-CH-ChC-CHoC1 3 | 2 NHAc 3f 30 jolloin Pg on N-suojaryhmä, V on H, COOH tai C00R3, jossa R3 on reaktiolta suojaava ryhmä, X' on triflaatti, kloori, bromi tai jodi ja Ac on asyyliryhmä, edullisesti asetaat-ti, siten että mainittu reaktio toteutetaan ekvimolaari-35 silla määrillä osallisina olevia reaktantteja emäksen läsnäollessa, edullisesti emäksisessä liuottimessa, noin 30 - II - 94644 41 80 °C:n lämpötilassa, mitä seuraa kaikkien suojaryhmien poisto standarditekniikoita käyttämällä sillä poikkeuksella, että käytettäessä kaavan 3f mukaista reaktanttia, kon-densaatioreaktion tuotteeseen liittyneenä olevat typpi-, 5 karboksyyli- ja/tai hydroksisuojaryhmät poistetaan sen jälkeen kun butyyniryhmä on pelkistetty kemiallisesti sitä vastaavaksi buteeniryhmäksi hydrauksella Lindlar-kataly-saattorin läsnäollessa, ja että mahdollisesti muunnetaan näin tuotetut yhdisteet niiden farmaseuttisesti soveliaik-10 si suoloiksi.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että R on metyyli tai H.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että Q tarkoittaa kaavan Ie mu- 15 kaista rakenneyksikköä.

4. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että yhdiste on cis-konfiguraa-tiossaan.

5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, 20 tunnettu siitä, että Q tarkoittaa kaavan Ia mu kaista rakenneyksikköä.

6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että Q tarkoittaa kaavan Ie mu kaista rakenneyksikköä.

7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan cis-5' -deoksi-5' - (4-amino-2-butenyyli )metyyliaminoadeno-siini, cis-5'-deoksi-5'-(4-amino-2-butenyyli)aminoadenosiini, 30 cis-5'-deoksi-5'-(4-amino-4-karboksi-2-butenyyli)metyyli- aminoadenosiini, cis-5' -deoksi-5' - (4-amino-4-karboksi-2-butenyyli )aminoade-nosiini, 5' -deoksi-5' - (3-amino-2-metyleenipropyyli) me tyyli aminoade-35 nosiini tai 5' -deoksi-5' -(3-amino-2-metyleenipropyyli )aminoadenosiini. - 94644 42

8. Yhdiste, jolla on kaava nh2 ,Α. N .1 R R2N-CH2— 10 ^-f H 0 o X jossa R on vety tai C1.7-alkyyli ja R2 on rakenneyksikkö, 15 jolla on jokin kaavoista 13a ja 13c - 13e W z V' C V X i H il PgNH-CH-(CH0) -C-(CH0) CH0- PgNH-CH-C-CH0- λ* IU Z Q Z | £»

20 Y 13a 13c V X X V’ W Z III III

25 PgNH-CH-C-C-CH2- PgNH-CH-C=C-CH2~ Y Y 13d 13e 30 jolloin in on nolla tai yksi ja q on nolla tai yksi, sillä edellytyksellä, että m:n ja q:n summa on pienempi kuin 2, V on H, COOH tai reaktiolta suojattu COOH, W on H, F, Cl tai Br, Z on H, F, Cl tai Br, 35 kukin X ja kukin Y on H tai F, sillä edellytyksellä, että ainakin toinen X:stä ja Y:stä on F kaavassa 13c. . · II - 94644 43