NO171982B - Analogifremgangsmaate for fremstilling av nye terapeutisk aktive s-adenosylmethionindecarboxylase-inhibitorer, og mellomprodukter derfor - Google Patents

Description

Foreliggende oppfinnelse angår fremstilling av nye kjemiske forbindelser som er anvendbare som S-adenosylmethionindecarboxylase-inhibitorer, og mellomproduktet derfor.

Nærmere bestemt angår foreliggende oppfinnelse en analogifremgangsmåte for fremstilling av terapeutisk aktive forbindelser av formelen

og farmasøytisk akseptable salter derav, hvori Ad betegner adenosinyl, R er C1.7-alkyl, og Q betegner grupper av formel le:

V er H eller -COOH,

W er H,

Z er H, F, Cl eller Br.

"Ad"-gruppen (dvs. adenosinylgruppen omfattet av 1H-purin-6-amin bundet til B-D-ribofuranosyl) har strukturen

Det er foretrukket at angitte forbindelser er i deres cis-konfigurasjon snarere enn deres trans-konfigurasjon.

Eksempler på farmasøytisk akseptable salter av forbindelsene ifølge oppfinnelsen er de som dannes med uorganiske syrer, fortrinnsvis med saltsyre, hydrobromsyre, svovelsyre eller fosforsyre, og med organiske syrer, slik som methan-sulfonsyre, salisylsyre, maleinsyre, malonsyre, vinsyre, sitronsyre og ascorbinsyre. Disse salter kan fremstilles etter standardteknikker og prosedyrer vel kjent innen faget.

Fremstilling av forbindelsene av formel I kan utføres ved teknikker og kjemiske prosesser som analogt er kjent innen faget, og valg av den spesifikke synteserute er av-

hengig av vanlige faktorer innen farmasøytisk industri, slik som tilgjengelighet og pris på utgangsmaterialer, tid og vanskeligheter ved separering og rensing av mellomprodukter og sluttforbindelser, og slike andre faktorer som er vel kjent innen faget.

Analogifremgangsmåten ifølge oppfinnelsen er kjennetegnet ved at en forbindelse av formel

omsettes med et R2X'-reagens av formelen

hvori Pg er en N-beskyttende gruppe, V er H, COOH eller COOR3, hvori R3 er en reaksjonsbeskyttende gruppe, og X' er et triflat, klor, brom eller jod, og Ac er en acylgruppe, fortrinnsvis acetat, hvilken reaksjon utføres med ekvimolare mengder av de involverte reaktanter i nærvær av en base, fortrinnsvis i

et basisk løsningsmiddel, ved temperaturer på 30-80 °C, etterfulgt av fjerning av enhver beskyttende gruppe under standardteknikker, bortsett fra når en reaktant av formel 3f anvendes, utføres fjerning av nitrogen-, carboxyl-og/eller hydroxy-beskyttende grupper bundet til kondensasjonsreaksjonsproduk-tene etter den kjemiske reaksjon av butyngruppen til dens tilsvarende butengruppe ved hydrogenering i nærvær av en Lindlar-katalysator, og eventuelt at de således erholdte forbindelser omdannes til deres farmasøytisk akseptable salter.

Generelt kan fremstilling av forbindelsene av formel I vises ved denne reaksjonssekvens som er vist i reaksjonsskjerna A som følger:

hvori Ad' er adeninyl av formelen R2X' er en reaktant av følgende formler

hvori Pg er en N-beskyttende gruppe, fortrinnsvis t-butoxycarbonyl (Boe) eller fthalimido (Pht) (i hvilket tilfelle selvsagt H av PgNH-gruppen ikke er til stede), og m, n, q, R, Rlr V, W, X, Y og Z er som definert i formel I, og X' er OTF (triflat) eller klor, brom eller jod (R2 er selvsagt delene av 3e - 3f bundet til X'-gruppen), med unntak av at i egnede tilfeller kan V være et reaksjonsbeskyttelsesderivat av COOH-funksjonen, fortrinnsvis et t-butoxyderivat, og Ac er en acylgruppe, fortrinnsvis acetat, og R3 er t-butyl.

Ved utførelse av kondensasjonen av reaktantene 2 og 3 når X' betegner et halogenid, anvendes betingelser A-a hvori ekvimolare mengder av reaktantene omsettes i nærvær av en base (fortrinnsvis kaliumcarbonat) i et basisk løsningsmiddel (fortrinnsvis acetonitril), ved temperaturer på 30-80 °C. Når betingelser A-b anvendes, dvs. når X' er et triflat, oppvarmes reaktantene sammen til 30-80 °C i nærvær av en base (fortrinnsvis triethylamin) i et basisk løsningsmiddel (fortrinnsvis dimethylformamid). Fjerning av de N-beskyttende grupper utføres lett etter standardteknikker, f.eks. behandling med 1 N svovelsyre ved romtemperatur i 24-48 timer, etterfulgt av behandling med en alkohol (fortrinnsvis ethanol) ved 0 °C når den beskyttende gruppe er t-butoxycarbonyl, og når den beskyttende gruppe er fthalimido, bevirkes fjerningen under anvendelse av en ethanolisk løsning av et hydrazin (under anvendelse av klassiske teknikker), idet det sistnevnte anvendes når R2 inneholder et fluoratom. Fjerning av den isopropylidenbeskyttende gruppe av ribofuranosylgruppen bevirkes lett ved hydrolyse ved romtemperatur (fortrinnsvis under anvendelse av 1 N svovelsyre), generelt samtidig med de N-beskyttende grupper. Isolering og rensing av mellomprodukter og sluttprodukter i reaksjonsskjerna A utføres ved standardteknikker, f.eks. omkrystallisering, HPLC, flashkromatografi (på silicagel) o.l.

Fremstilling av mellomproduktene som er nødvendig for kondensasjon ifølge reaksjonsskjerna A, dvs. de mellomprodukter definert for R2X', kan også utføres ved anvendelse av analogt kjente prosedyrer, slik som de som er illustrert i den etter-følgende beskrevne generiske fremgangsmåte som er illustrert i de etterfølgende eksempler.

I de tilfeller hvori R2X' betegner en subgenerisk gruppe 3e, forløper reaksjonen under A-a-betingelser hvori X' fortrinnsvis er klor, og den N-beskyttende gruppe er Boe, og det egnede V, W, Z-substituert, N-beskyttet 4-klor-2-buten-l-amin kan hensiktsmessig fremstilles ved følgende reaksjons-sk jerna.

hvori de beskyttende grupper (Pht og Boe) og V, W og Z er som tidligere definert, og (THP) er tetrahydrofuran.

I trinn B-a omsettes diolen med dihydropyran i nærvær av katalytiske mengder av pyridinium-p-toluensulfonat ved 0 °C i et vannfritt løsningsmiddel (eller blanding) (f.eks. CH2C12:THF; 2:1) i 24-48 timer. Omdannelsen av B-2 til B-3 initieres ved en intramolekylær dehydratiseringsreaksjon av Mitsunobu-type ved behandling med diethylazodicarboxylat (DEAD) og trifenylfosfin under milde, nøytrale betingelser under en inert atmosfære (nitrogen) ved 0 °C i et vannfritt løsningsmiddel (f.eks. THF) i nærvær av fthalimid, og reaksjonen forløper ved romtemperatur i ca. 12 timer.

De resulterende B-3-produkter etter behandling med hydrazinhydrat i ethanol ved tilbakeløpsbetingelser i 12 timer for å fjerne fthalimido- og THP-beskyttende grupper, og det frie amin rebeskyttes med di-t-butyldicarbonat ved tilbake-løpskoking i diklormethan. Alkoholene (B-4) omdannes til deres klorider ved omsetning med mesylklorid under basiske betingelser (TEA) i et vannfritt løsningsmiddel, fortrinnsvis diklormethan. Disse cis-produkter av formel 3e er etter rensing, generelt under anvendelse av flashkromatografiske teknikker på silicagel, klare for kondensasjon med reaktantene av formel 2 i henhold til teknikkene beskrevet for reaksjonsskjerna A.

I de tilfeller hvor det er ønskelig å fremstille trans-konfigurasjonen av forbindelsene av 3-e, foretrekkes det å anvende et W, Z-V-substituert, N-beskyttet trans-l-brom-4-amino-2-buten (dvs. 3-e), og reaktantene fremstilles lett ved omsetning av et V-W, Z-substituert trans-l-brom-4-amino-2-buten med kaliumfthalimid i vannfritt DMF ved ca. 50 °C i 24 timer etter standardprosedyrer vel kjent innen faget. De nødvendige R2X'-reaktanter av klassen 3-c fremstilles lett fra det egnede W, Z, V2-substituerte a,a-diklorxylen hvori forbindelsen underkastes en fortrengningsreaksjon med kaliumfthalimid under dannelse av et a-fthalimido-a'-klorxylen ved oppvarming av reaktantene til ca. 50 °C i 24 timer i vannfritt DMF, og den således erholdte forbindelse renses ved vanlige teknikker for flashkromatografi fra silicagel. Ved å starte fra det egnede V, W, Z-substituerte 3-klor-2-klormethyl-l-propen, kan de ønskede R2X' -reaktanter av klassen 3-a på lignende måte fremstilles ved den ovenfor beskrevne fortrengningsreaksjon med kaliumfthalimid ved oppvarming av reaktantene til ca. 50 °C i ca. 24 timer i vannfritt dimethylfluormethan, etterfulgt av rensing med de vanlige teknikker, f.eks. flash-kromatograf i . I de tilfeller hvori den bestemte V, W, Z-substituerte reaktant ikke er en kjent forbindelse, kan slike forbindelser fremstilles ved teknikker og prosedyrer vel kjent innen faget.

I tillegg til de etterfølgende spesifikke eksempler kan den anvendte kjemi for fremstilling av cis-5'-(4-amino-4-carboxy-2-butenyl)methyladenosin på analog måte avledes fra Tolman og Sedmeras artikkel (Tetrahedron Letters, Vol. 29, nr. 47, s. 6183-6184, 1988) "Unsaturated Amino Acids: Synthesis of Trans-3,4-Didehydro Analogues of L-Ornithine and L-Arginine". Anvendelse av denne kjemi er skjematisk vist ved etterfølgende reaksj onsskj erna.

Ved utførelse av det foregående reaksjonsskjerna innbefatter trinn (a) dibromering av (6.) ved omsetning med brom, hvilken reaksjon utføres i et egnet løsningsmiddel (f.eks. CC14) ved romtemperatur. Den resulterende dibromanalog debromeres ved omsetning med kalium-t-butoxyd i tetrahydrofuran, eller med et amin slik som DBU. Den således erholdte forbindelse (7) behandles i rekkefølge med (1) trifluoreddiksyre ved 25 "C i 20 min., (2) med thionylklorid ved 25 °C i 3 timer og (3) med DiBal i tetrahydrofuran ved -5-30 "C i 1 time under dannelse av forbindelse (8). Trinn (c) innbefatter sekvensvis behandling av (8) med en base (f.eks. NaOH/H20) i tetrahydrofuran i 20 min., etterfulgt av behandling med fortynnet HC1 ved 50 °C under dannelse av forbindelse (9). Denne forbindelse behandles med isobutylen i nærvær av katalytiske mengder av svovelsyre, og den resulterende alkohol omdannes til dens tilsvarende klorid ved behandling med mesylklorid under dannelse av forbindelse (10). Denne forbindelse underkastes deretter omsetning med adenosinderivatene av formel (2) i henhold til prose-dyren vist i reaksjonsskjerna A [hvori forbindelse (10) svarer til R2X' hvori X' er klor] under dannelse av en analog forbindelse tilsvarende forbindelse 4 [dvs. forbindelse (11)1.

Den resulterende trippelbindingholdige forbindelse reduseres partielt under anvendelse av hydrogenering i nærvær av en Lindlar-katalysator (H2/PdS04), og det resulterende buten behandles med svovelsyre (for å fjerne t-butoxydet og isopropylidenbeskyttende grupper). Sluttrinnet er å underkaste den således fremstilte forbindelse acylase I (Merck) ved pH på 7,2 ved 37 °C for å fjerne den N-beskyttende acylgruppe under dannelse av den ønskede forbindelse (12), f.eks. cis-5'-deoxy-5'-(4-amino-4-carboxy-2-buten)methylaminoadenosin.

Oppfinnelsen angår også nye kjemiske forbindelser som er kjennetegnet ved at de har formelen

hvori R er som ovenfor angitt og R2 er

hvori

V er H, COOH eller alkoxycarbonyl,

W er H,

Z er H, F, Cl eller Br, og

Pg er H eller alkoxycarbonyl.

De etterfølgende eksempler illustrerer fremstilling av de nødvendige mellomprodukter og sluttprodukter ifølge oppfinnelsen.

Eksempel I

Fremstilling av cis- 5'- deoxy- 5'-( 4- amino- 2- butenyl) methylaminoadenosin

Trinn A:

Cis- 4- tetrahydropyranvloxy- 2- buten- l- ol

9,1 ml (100 mmol) dihydropyran ble dråpevis tilsatt en avkjølt (0 °C) løsning av 8,8 g (10 mmol) 2-buten-l,4-diol og 0,25 g (10 mmol) pyridiniumparatoluensulfonat i vannfritt diklormethan:tetrahydrofuran (2:1). Blandingen ble deretter omrørt i 2 dager ved 0 °C og ble deretter konsentrert i vakuum. Residuet ble renset ved flashkromatografi på silicagel (ethylacetat) under dannelse av 8,3 g av tittelforbindelsen (49 %).

Trinn B:

Cis- l- fthalimido- 4- tetrahydropyranyloxv- 2- buten

Under en nitrogenatmosfære ble 1,6 ml (10 mmol) diethylazodicarboxylat tilsatt en avkjølt (0 °C) løsning av 1,7 g (10 mmol) cis-4-tetrahydropyranyloxy-2-buten-l-ol, 2,2 g (10 mmol) trifenylfosfin og 1,47 g (10 mmol) fthalimid i 50 ml vannfritt tetrahydrofuran. Når tilsetningen var fullført (5 min.), fikk reaksjonsblandingen oppvarmes til romtemperatur og ble omrørt i 12 timer. Blandingen ble deretter konsentrert i vakuum, ble fortynnet med 200 ml ethylacetat og vasket med 150 ml saltvann. Etter vanlig opparbeidelse (den vandige fase ble ekstrahert tre ganger med 100 ml porsjoner av ethylacetat) ble den organiske fase tørket over magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert i vakuum. Produktet ble renset ved flash-kromatograf i på silicagel (ethylacetat:hexan, 2:8) under dannelse av 1,9 g av tittelforbindelsen (64 %).

Trinn C:

Cis- tert.- butoxycarbonyl- 4- hydroxy- 2- butenyl- 1- amin

En løsning av 1,9 g (6,3 mmol) cis-l-fthalimido-4-tetrahydropyranyloxy-2-buten og 0,35 ml (6,9 mmol) hydrazinhydrat i 20 ml ethanol ble oppvarmet under tilbakeløpskjøling i 12 timer. Blandingen ble deretter konsentrert i vakuum, ble fortynnet med 20 ml 1 N saltsyre og ble oppvarmet under til-bakeløpskjøling i 2 timer. Fthalylhydrazidet ble deretter filtrert fra, og filtratet ble konsentrert i vakuum. Residuet ble tatt opp i 100 ml diklormethan, ble nøytralisert med triethylamin (pH 8,9), og en løsning av 1,65 g (7,5 mmol) ditertiærbutyldicarbonat i 5 ml diklormethan ble tilsatt. Blandingen ble oppvarmet under tilbakeløpskjøling over natten, og etter vanlig opparbeidelse ble produktet erholdt ved flashkromatografi på silicagel (ethylacetat:hexan, 25:75) (0,8 g, 74 %).

Trinn D:

Cis- N- tert.- butoxycarbonyl- 4- klor- 2- butenyl- l- amin

0,6 ml (7,6 mmol) mesylklorid ble tilsatt en avkjølt (0 °C) løsning av 1,3 g (7 mmol) cis-tert.-butoxycarbonyl-4-hydroxy-2-butenyl-l-amin og 1,1 ml (7,6 mmol) triethylamin i 30 ml vannfritt diklormethan. Blandingen ble omrørt over natten, og etter vanlig opparbeidelse ble tittelproduktet renset ved flashkromatografi på silicagel (ethylacetat:hexan, 2:8) (0,8 g, 57 %).

Trinn E: Cis- 5'- deoxy- 5'-( N- tert.- butoxycarbonvl- 4- amino- 2- butenyl)-methyl- amino- 2'. 3'- isopropylidenadenosin

En løsning av 0,6 g (3 mmol) cis-N-tert.-butoxycarbonyl-4-klor-2-butenyl-l-amin, 0,97 g (3 mmol) 5'-deoxy-5'-methylamino-2',3'-isopropylidenadenosin, 0,42 g (3 mmol) kaliumcarbonat og 0,05 g (0,3 mmol) natriumjodid i 20 ml acetdnitril ble oppvarmet under tilbakeløpskjøling over natten. Blandingen ble deretter fortynnet med ethylacetat, ble vasket med saltvann og tørket over magnesiumsulfat. Produktet ble deretter renset ved flashkromatografi på silicagel (di-ethylamin:kloroform, 2:98) (1,1 g, 55 %).

Trinn F:

Cis- 5'- deoxy- 5'( 4- amino- 2- butenyl) methylaminoadenosin

En løsning av 0,9 g (1,8 mmol) cis-5<1->deoxy-5'-[(N-tert. -butoxycarbonyl-4-amino-2-butenyl)methyl-amino]-2',3'-isopropylidenadenosin i 5 ml 1 N svovelsyre fikk stå i 2 dager ved romtemperatur. Blandingen ble deretter fortynnet med 200 ml ethanol og ble avkjølt (0 °C) over natten. Bunnfallet ble filtrert fra, ble oppløst i en minimal mengde vann og ble deretter reutfelt med 200 ml ethanol. Denne prosedyre ble gjentatt to ganger under dannelse av 0,5 g av tittelforbindelsen med sm.p. 260 °C (spaltning).

Eksempel II

Fremstilling av trans- 5'- deoxy- 5'-( 4- amino- 2- butenyl) methyl-am i no adeno sin

Trinn A:

Trans- l- brom- 4- fthalimido- 2- buten

En blanding av 6,4 g (30 mmol) trans-1,4-dibrom-2-buten og 5,6 g (30 mmol) kaliumfthalimid i 200 ml vannfritt dimethylformamid ble oppvarmet til 50 °C i 24 timer. Reaksjonsblandingen ble deretter konsentrert i vakuum, ble oppløst i ethylacetat, vasket med saltvann, og den rene tittelforbindelse ble erholdt ved flashkromatografi på silicagel (ethylacetat rhexan, 15:85) (3,2 g, 40 %).

Trinn B: Trans- 5'- deoxy- 5'-( 4- fthalimido- 2- butenyl) methylamino- 2', 3'-isopropylidenadenosin

En blanding av 2 g (7,5 mmol) trans-l-brom-4-fthalimido-2-buten, 1,6 g (11,5 mmol) kaliumcarbonat og 2,4 g (7,5 mmol) 5'-deoxy-5'-methylamino-2',3'-isopropylidenadenosin i 100 ml vannfritt acetonitril ble oppvarmet under tilbakeløps-kjøling over natten. Blandingen ble deretter konsentrert i vakuum, ble oppløst i diklormethan, filtrert og renset ved flashkromatografi på silicagel (kloroform:diethylamin, 98:2) under dannelse av tittelforbindelsen (1,25 g, 33 %).

Trinn C:

Trans- 5'- deoxy- 5'-( 4- tert.- butoxycarbonvlamino- 3- butenyl) - methylamino- 2', 3'- isopropylidenadenosin

En blanding av 1 g (2 mmol) trans-5'-deoxy-5'-(4-fthalimido-2-butenyl)methylamino-2' , 3'-isopropylidenadenosin og 0,1 ml (2 mmol) hydrazinhydrat i absolutt ethanol ble oppvarmet under tilbakeløpskjøling over natten. Blandingen ble deretter konsentrert i vakuum, ble oppløst i 30 ml vann, og pH ble justert til 4 med iseddik og ble avkjølt til 0 °C. Blandingen ble deretter filtrert fra, og filtratet ble nøytralisert med triethylamin til pH 9 og ble konsentrert i vakuum. Residuet ble deretter oppløst i diklormethan og 0,45 g

(2 mmol) ditertiærbutyldicarbonat ble tilsatt. Blandingen ble oppvarmet under tilbakeløpskjøling over natten, og etter vanlig opparbeidelse ble produktet renset ved flashkromato-graf i på silicagel (diethylamin:diklormethan, 2:98) under dannelse av tittelforbindelsen (0,5 g, 51 %).

Trinn D:

Trans- 5'- deoxy- 5'-( 4- amino- 2- butenyl) methylaminoadenosin

En suspensjon av 0,4 g (0,96 mmol) trans-5'-deoxy-5'-(4-tert.-butoxycarbonylamino-2-butenyl)methylamino-2',3'-isopropylidenadenosin i 3 ml 1 N svovelsyre ble omrørt i 2 dager ved romtemperatur. Blandingen ble deretter fortynnet med 100 ml absolutt ethanol og ble avkjølt til 0 °C over natten. Produktet ble filtrert fra, ble oppløst i en minimal mengde vann og ble utfelt med 100 ml ethanol. Denne prosedyre ble gjentatt to ganger under dannelse av 0,16 av tittelforbindelsen med sm.p. 250-260 °C (spaltning).

Eksempel III

Fremstilling av 5'- deoxy- 5'-( 4- amino- 2- butynyl) methylaminoadenosin

Trinn A:

l- klor- 4- fthalimido- 2- butyn

En blanding av 4,9 ml (50 mmol) 1,3-diklor-2-butyn og 5,6 g (30 mmol) kaliumfthalimid ble oppvarmet til 50 °C i 24 timer. Blandingen ble deretter konsentrert i vakuum, ble fortynnet med ethylacetat, og etter vanlig opparbeidelse ble produktet renset ved flashkromatografi på silicagel under dannelse av 4,3 g av tittelforbindelsen (62 %).

Trinn B:

5'- deoxy- 5'-( 4- fthalimido- 2- butynyl) methylamino- 2', 3'- isopropylidenadenosin

En blanding av 1,4 g (6 mmol) l-klor-4-fthalimido-2-butyn, 1,6 g (5 mmol) 5'-deoxy-5'-methylamino-2',3<1->isopropylidenadenosin og 0,075 g (0,5 mmol) natriumjodid i 100 ml vannfritt acetonitril ble oppvarmet under tilbakeløpskjøling over natten. Blandingen ble deretter konsentrert, ble fortynnet med diklormethan, filtrert og renset ved flashkromatografi på silicagel (diethylamin:kloroform, 2:98) under dannelse av 1,6 g (64 %) av tittelforbindelsen.

Trinn C: 5'- deoxy- 5'-( 4- tert.- butoxycarbonylamino- 2- butynyl) methylamino- 2 ', 3'- isopropylidenadenosin

En blanding av 1 g (1,9 mmol) 5'-deoxy-5'-(4-fthalimido-2-butynyl)methylamino-2',3'-isopropylidenadenosin og 0,5 ml (10 mmol) methylhydrazin i 3 ml absolutt ethanol ble oppvarmet under tilbakeløpskjøling over natten. Blandingen ble deretter konsentrert i vakuum, ble oppløst i en blanding av tetrahydrofuran:vann (1:1, 200 ml), og en løsning av 0,5 g (2,5 mmol) ditertiærbutyldicarbonat i 10 ml tetrahydrofuran ble tilsatt. pH på blandingen ble justert til 9 med triethylamin, hvorpå blandingen ble oppvarmet under tilbakeløpskjøling i 24 timer. Reaksjonsblandingen ble deretter konsentrert i vakuum, ble fortynnet med ethylacetat, og etter vanlig opparbeidelse ble produktet erholdt ved flashkromatografi på silicagel (diethylamin:kloroform, 2:98) (0,5 g, 56 %).

Trinn D:

5'- deoxy- 5'-( 4- amino- 2- butynyl) methylaminoadenosin

En suspensjon av 0,4 g (0,82 mmol) 5'-deoxy-5'-(4-tert.-butoxycarbonylamino-2-butynyl)methylamino-2',3'-isopropylidenadenosin i 25 ml 1 N svovelsyre ble omrørt i 2 dager ved romtemperatur. Blandingen ble deretter fortynnet med 100 ml ethanol og ble omrørt ved 0 "C over natten. Produktet ble filtrert fra, oppløst i en minimal mengde vann og ble fortynnet med 100 ml ethanol. Denne prosedyre ble gjentatt to ganger under dannelse av 0,2 g rent 5'-deoxy-5'-(4-amino-2-butynyl)methylaminoadenosin som hvite krystaller med sm.p. 230-240 °C (spaltning). Denne forbindelse kan selvsagt reduseres under dannelse av den tilsvarende cis-dobbeltbundne forbindelse.

Eksempel IV

Fremstilling av 5'- deoxy- 5'-( ortho- aminomethylbenzyl) methylaminoadenosin

Trinn A:

g- fthalimido- g'- klorxylen

En blanding av 8,75 g (50 mmol) a,a'-diklorxylen og 5,6 g (30 mmol) kaliumfthalimid ble oppvarmet til 50 °C i 24 timer. Reaksjonsblandingen ble deretter konsentrert i vakuum, ble oppløst i ethylacetat, og etter vanlig opparbeidelse ble den ønskede forbindelse erholdt ved flashkromatografi på silicagel (ethylacetat:hexan, 15:85) (6 g, 65 %).

Trinn B: 5'- deoxy- 5'-( ortho- fthalimido- methylbenzyl) methylamino- 2', 3'-isopropylidenadenosin

En blanding av 1,6 g (5,5 mmol) a-fthalimido-a<1->klorxylen, 0,7 g (5 mmol) kaliumcarbonat, 0,07 g (0,5 mmol) natriumjodid og 1,5 g (4,7 mmol) 5'-deoxy-5'-methylamino-2',3'-isopropylidenadenosin i vannfritt acetonitril ble oppvarmet under tilbakeløpskjøling over natten. Blandingen ble deretter konsentrert i vakuum, ble oppløst i diklormethan, ble filtrert og deretter renset ved flashkromatografi på silicagel (kloroform:diethylamin, 98:2) under dannelse av tittelforbindelsen (1,8 g, 67 %).

Trinn C: 5'- deoxy- 5'-( ortho- tert.- butoxycarbonylaminomethylbenzyl)-methylamino- 2', 3'- isopropylidenadenosin

En blanding av 1,3 g (2,3 mmol) 5'-deoxy-5'-(ortho-fthalimido-methylbenzyl)methylamino-2',3'-isopropylidenadenosin og 0,12 ml (2,3 mmol) hydrazinhydrat i 100 ml abso-lutt ethanol ble oppvarmet under tilbakeløpskjøling over natten. Blandingen ble deretter konsentrert i vakuum, ble fortynnet i 30 ml vann, hvorpå iseddik ble tilsatt for å justere løsningen til pH 4, hvorpå den fikk stå ved 0 °C. Blandingen ble deretter filtrert fra, og filtratet ble nøytralisert med triethylamin for å justere pH på reaksjonsblandingen til rundt 9. Blandingen ble deretter konsentrert i vakuum, ble fortynnet med diklormethan, og 0,5 g (2,3 mmol) ditertiærbutyldicarbonat ble tilsatt. Blandingen ble deretter oppvarmet under tilbake-løpskjøling over natten, og etter vanlig opparbeidelse ble 0,8 g (67 %) av tittelforbindelsen isolert ved flashkromato-graf i på silicagel (kloroform:diethylamin, 98:2).

Trinn D:

5'- deoxy- 5'-( ortho- aminomethylbenzyl) methylaminoadenosin

En suspensjon av 0,45 g (0,83 mmol) 5'-deoxy-5'-(ortho-tert.-butoxycarbonylaminomethylbenzyl)methylamino-2', 3'-isopropylidenadenosin i 25 ml 1 N svovelsyre ble omrørt 2 dager ved romtemperatur. Blandingen ble deretter fortynnet med 100 ml ethanol og ble lagret ved 0 °C over natten. Bunnfallet ble filtrert fra, ble oppløst i en minimal mengde vann og ble utfelt på nytt med 100 ml ethanol. Denne prosedyre ble gjentatt to ganger under dannelse av 0,4 g av tittelforbindelsen med sm.p. 230-240 °C (spaltning).

Eksempel V

5'- deoxy- 5'-( 3- amino- 2- methylenpropyl) methylaminoadenosin Trinn A:

1- fthalimido- 3- klor- 2- methylenpropan

En blanding av 6,55 g (50 mmol) 3-klor-2-klormethyl-1-propen og 5,6 g (30 mmol) kaliumfthalimid i 200 ml vannfritt dimethylformamid ble oppvarmet i 2 dager til 50 "C. Blandingen ble deretter konsentrert i vakuum, og etter vanlig opparbeidelse ble produktet renset ved flashkromatografi på silicagel (ethylacetat:hexan, 15:85) (4,2 g, 78 %).

Trinn B: 5'- deoxy- 5'-( 3- fthalimido- 2- methylenpropyl) methylamino- 2', 3'-isopropylidenadenosin

En blanding av 0,87 g (5 mmol) 1-fthalimido-3-klor-2-methylenpropan, 0,7 g (5 mmol) kaliumcarbonat, 0,08 g (0,5 mmol) natriumjodid og 1,6 g (5 mmol) 5'-deoxy-5'-methylamino-2 ', 3 ' -isopropylidenadenosin i 100 ml vannfritt acetonitril ble oppvarmet i 2 dager under tilbakeløpskjøling. Blandingen ble deretter konsentrert i vakuum, ble fortynnet med diklormethan, ble filtrert, og produktet ble renset ved flashkromatografi på silicagel (diethylamin:kloroform, 2:98) under dannelse av 2,85 g (78 %) av tittelforbindelsen.

Trinn C: 5'- deoxy- 5'-( 3- tert.- butoxycarbonvlamino- 2- methylenpropyl)-methylamino- 2', 3'- isopropylidenadenosin

En blanding av 2,3 g (4,4 mmol) 5'-deoxy-5<*->(3-fthalimido-2-methylenpropyl)methylamino-2', 3'-isopropylidenadenosin, 1,5 ml (30 mmol) methylhydrazin i 5 ml absolutt ethanol ble oppvarmet i 2 dager under tilbakeløpskjøling. Blandingen ble deretter konsentrert i vakuum, ble oppløst i 5 ml kloroform, pH ble justert til rundt 9 med triethylamin, hvorpå en løsning av 8,8 g (4,4 mmol) ditertiærbutyldicarbonat i 5 ml kloroform ble tilsatt. Den resulterende blanding ble oppvarmet over natten under tilbakeløpskjøling, og etter vanlig opparbeidelse ble produktet renset ved flashkromatografi på silicagel (diethylamin:kloroform, 2:98) under dannelse av 1,25 g (64 %) av tittelforbindelsen. ;Trinn D: ;5'- deoxy- 5'-( 3- amino- 2- methylenpropyl) methylaminoadenosin ;En suspensjon av 0,65 g (1,3 mmol) 5'-deoxy-5'-(3-tert.-butoxycarbonylamino-2-methylenpropyl)methylamino-2',3'-isopropylidenadenosin i 4 ml 1 N svovelsyre ble omrørt i 2 dager ved romtemperatur. Blandingen ble deretter fortynnet med 150 ml absolutt ethanol og fikk stå ved 0 °C over natten. Bunnfallet ble filtrert fra, ble oppløst i en minimal mengde vann og ble fortynnet med 150 ml absolutt ethanol. Denne prosedyre ble gjentatt to ganger under dannelse av 0,55 g av tittelforbindelsen som hvite krystaller med sm.p. 230-240 °C (spaltning). ;Eksempel VI ;Fremstilling av 5'- deoxy- 5'-( 4- amino- 2, 2- difluorbutyl) methylaminoadenosin ;Trinn A: ;4- fthalimido- 2, 2- difluorbutyl- trifluormethansulfonat ;1,1 ml (6,6 mmol) triflic anhydrid ble tilsatt en avkjølt (0 °C) løsning av 1,53 g (6 mmol) 4-fthalimido-2,2-difluor-l-butanol og 0,53 ml (6,6 mmol) pyridin i 50 ml vannfritt diklormethan. Blandingen ble omrørt i 1 time ved 0 °C, og etter vanlig opparbeidelse ble produktet renset ved flashkromatografi på silicagel (ethylacetat:hexan, 20:80) under dannelse av 1,8 g (78 %) av tittelforbindelsen. ;Trinn B: 5'- deoxv- 5'-( 4- fthalimido- 2, 2- difluorbutyl) methvlamino- 2'. 3'-isopropylidenadenosin ;En blanding av 1,8 g (4,6 mmol) 4-fthalimido-2,2-difluorbutyl-trifluormethansulfonat, 1,3 g (4,3 mmol) 5'-deoxy-5'-methylamino-2',3'-isopropylidenadenosin og 0,6 ml (4,3 mmol) triethylamin i vannfritt dimethylformamid ble oppvarmet i 2 dager til 50 °C. Blandingen ble deretter konsentrert i vakuum, og produktet ble renset ved flashkromatografi på silicagel (diethylamin:kloroform, 2:98) (1,7 g, 70 %). ;Trinn C: 5'- deoxv- 5'-( 4- tert.- butoxycarbonylamino- 2, 2- difluorbutyl)-methylamino- 2', 3'- isopropylidenadenosin ;En blanding av 1,5 g (2,7 mmol) 5'-deoxy-5'-(4-fthalimido-2, 2-difluorbutyl)methylamino-2',3'-isopropylidenadenosin og 0,135 g (2,7 mmol) hydrazinhydrat i 20 ml ethanol ble oppvarmet under tilbakeløpskjøling over natten. Blandingen ble deretter konsentrert i vakuum, ble fortynnet med vann, og iseddik ble tilsatt til pH var justert til 4. Blandingen fikk stå ved 0 "C og ble deretter filtrert. Filtratet ble nøytrali-sert til pH 9 med triethylamin, ble konsentrert i vakuum, ble fortynnet med diklormethan, hvor-på 0,6 g (2,7 mmol) ditertiærbutyldicarbonat ble tilsatt. Blandingen ble oppvarmet under tilbakeløpskjøling over natten, og etter vanlig opparbeidelse ble produktet renset ved flashkromatografi på silicagel (diethylamin:kloroform, 2:98) under dannelse av 1,1 g (75 %) av tittelforbindelsen. ;Trinn D: ;5'- deoxv- 5'-( 4- amino- 2, 2- difluorbutyl) methylaminoadenosin ;En suspensjon av 5'-deoxy-5'-(4-tert.-butoxycarbonylamino-2,2-difluorbutyl)methylamino-2',3'-isopropylidenadenosin i 4,5 ml 1 N svovelsyre ble omrørt i 2 dager ved romtemperatur. Blandingen ble deretter fortynnet med 100 ml ethanol og fikk stå over natten ved 0 °C. Bunnfallet ble filtrert fra, ble oppløst i en minimal mengde vann og utfelt med 150 ml ethanol. Denne prosedyre ble gjentatt to ganger under dannelse av 0,5 g (60 %) av tittelforbindelsen som hvite krystaller med sm.p. 240 °C (spaltning). ;Eksempel VII ;Fremstilling av cis- 5'- deoxv- 5'-( 4- amino- 2- fluor- 2- butenyl)-methylaminoadenosin ;Trinn A: ;Cis- 4- fthalimido- 2- fluor- l- tetrahydropyranyl- 2- buten ;En blanding av 6,3 g (30 mmol) cis-4-klor-2-fluor-1-tetrahydropyranyl-2-buten og 5,6 g (30 mmol) kaliumfthalimid i 200 ml vannfritt dimethylformamid ble oppvarmet til 50 °C i 24 timer. Reaksjonsblandingen ble deretter konsentrert i vakuum, ble oppløst i ethylacetat, vasket med saltvann, og 6 g (70 %) av den rene tittelforbindelse, cis-4-fthalimido-2-fluor-2-tetrahydropyranyl-2-buten, ble erholdt ved flashkromatografi på silicagel (ethylacetat:hexan, 2:8). ;Trinn B: Cis- N- tert.- butoxycarbonyl- 2- fluor- 4- hydroxv- 2- butenyl- l- amin ;En løsning av 5,7 g (20 mmol) cis-4-fthalimido-2-fluor-2-tetrahydropyranyl-2-buten og 1,1 ml (22 mmol) hydrazinhydrat i 30 ml ethanol ble oppvarmet under tilbakeløps-kjøling i 12 timer. Blandingen ble deretter konsentrert i vakuum, ble fortynnet med 20 ml 1 N HC1 og ble oppvarmet under tilbakeløpskjøling i 2 timer. Fthalhydrazidet ble deretter filtrert fra, og filtratet ble konsentrert i vakuum. Residuet ble tatt opp i 150 ml diklormethan, ble nøytralisert med triethylamin til pH 9, og en løsning av 5 g (22 mmol) ditertiærbutyldicarbonat i 10 ml diklormethan ble tilsatt. Blandingen ble oppvarmet under tilbakeløpskjøling over natten, og etter vanlig opparbeidelse ble produktet erholdt ved flashkromato-graf i på silicagel(ethylacetat:hexan, 25:75) (3 g, 75 %). ;Trinn C ;Cis- N- tert.- butoxycarbonyl- 2- fluor- 4- klor- 2- butenyl- l- amin ;0,9 ml (11 mmol) mesylklorid ble tilsatt en kald (0 °C) løsning av 2,05 g (10 mmol) cis-N-tert.-butoxycarbonyl-2-fluor-4-hydroxy-3-butenyl-l-amin og 1,6 ml (11 mmol) triethylamin i 40 ml vannfritt diklormethan. Blandingen ble omrørt over natten, og etter vanlig opparbeidelse ble tittelforbindelsen, cis-N-tert.-butoxycarbonyl-2-fluor-4-klor-2-butenyl-l-amin, erholdt ved flashkromatografi på silicagel (ethylacetat:hexan, 15:85) (1,7 g, 75 %). ;Trinn D: Cis- 5'- deoxv- 5'-( 4- tert.- butoxycarbonylamino- 2- fluor- 2-butenyl) methylamino- 2', 3'- isopropylidenadenosin ;En løsning av 1,65 g (5 mmol) 5'-deoxy-5'-methylamino-2 ', 3 ' -isopropylidenadenosin, 1,2 g (4 mmol) cis-N-tert.-butoxycarbonyl-2-fluor-4-klor-2-butenyl-l-amin, 0,7 g (4 mmol) kaliumcarbonat og 0,07 g (0,5 mmol) natriumjodid i 30 ml vannfritt acetonitril ble oppvarmet under tilbakeløpskjøling over natten. Blandingen ble konsentrert i vakuum, ble fortynnet med ethylacetat, vasket med saltvann og tørket over MgS04. Produktet ble renset ved flashkromatografi på silicagel (diethylamin:kloroform, 2:98) (1,7 g, 70 %). ;Trinn E: Cis- 5'- deoxy- 5'-( 4- amino- 2- fluor- 2- butenyl) methylaminoadenosin ;En suspensjon av cis-5'-deoxy-5'-(4-tert.-butoxycarbonylamino-2-fluor-2-butenyl)methylamino-2' , 3'-isopropylidenadenosin i 5 ml 1 N svovelsyre ble omrørt i 2 dager ved romtemperatur. Blandingen ble deretter fortynnet med 200 ml absolutt ethanol og ble holdt ved 0 °C over natten. Bunnfallet ble oppsamlet, oppløst i en minimal mengde vann og utfelt på nytt med 200 ml absolutt ethanol. Denne prosedyre ble gjentatt to ganger under dannelse av 1 g (75 %) av tittelforbindelsen, cis-5'-deoxy-5'-(4-amino-2-fluor-2-butenyl)methylaminoadenosin, med sm.p. 250-260 °C (spaltning). ;Eksempel VIII ;Fremstilling av 5'- deoxv- 5'-( 3- amino- 2. 2- difluorpropyl) methylaminoadenosin ;Trinn A: ;Ethyl- 2. 2- difluor- 3- tetrahvdropyranvloxvpropionat ;En blanding av 4,5 g (50 mmol) paraformaldehyd, 10,2 g (50 mmol) ethyldifluorbromacetat og 3,3 g (40 mmol) aktivert sinkstøv i tetrahydrofuran ble behandlet under til-bakeløpskjøling i en halv time. Blandingen ble deretter behandlet med en mettet, vandig løsning av ammoniumklorid og ble ekstrahert med diethylether. Etter vanlig opparbeidelse ble den ønskede forbindelse, ethyl-2,2-difluor-3-hydroxypropionat, erholdt ved flashkromatografi på silicagel (ethylacetatrhexan, 25:75) (4,1 g, 53 %). ;Trinn B: ;Ethyl- 2. 2- difluor- 3- tetrahvdropyranyloxypropionat ;2 ml (22 mmol) dihydropyran ble tilsatt en løsning av 3,1 g (20 mmol) ethyl-2,2-difluor-3-hydroxypropionat og 0,25 g (1 mmol) pyridinium-p-toluensulfonat i 50 ml vannfritt diklormethan. Blandingen ble omrørt over natten ved romtemperatur, og den ønskede forbindelse, ethyl-2,2-difluor-3-tetrahydro-pyranyloxypropionat, ble erholdt ved flashkromatografi på silicagel (ethylacetat:hexan, 15:85) (4 g, 80 %). ;Trinn C: ;2, 2- difluor- 3- tetrahvdropyranyloxy- l- propanol ;En løsning av 3,5 g (15 mmol) ethyl-2,2-difluor-3-tetrahydropyranyloxypropionat i 10 ml absolutt ethanol ble dråpevis tilsatt en oppslemming av 0,57 g (15 mmol) natrium-borhydrid ved romtemperatur i 20 ml absolutt ethanol. Blandingen ble deretter omrørt i ytterligere 1 time ved romtemperatur. Blandingen ble deretter konsentrert i vakuum, ble hydro-lysert med vandig ammoniumklorid, ekstrahert med ethylacetat og tørket over magnesiumsulfat. Produktet ble renset ved flashkromatografi på silicagel (ethylacetat:hexan, 25:75) ;(2,7 g, 90 %). ;Trinn D: 2, 2- difluor- 3- tetrahydropyranyloxvpropyl- trif luormethansul-fonat ;1,8 ml (11 mmol) triflic anhydrid ble tilsatt en av-kjølt (0 °C) løsning av 91,6 g (10 mmol) 2,2-difluor-3-tetra-hydropyranyloxy-l-propanol og 0,9 ml (11 mmol) pyridin i 50 ml vannfritt diklormethan. Blandingen ble omrørt i 1 time ved 0 °C, og etter vanlig opparbeidelse ble produktet renset ved flashkromatografi på silicagel (ethylacetat:hexan, 15:85) ;(2,6 g, 80 %). ;Trinn E: ;2, 2- difluor- 3- fthalimido- l- tetrahydropyranyloxypropan ;En blanding av 2,3 g (7 mmol) 2,2-difluor-3-tetra-hydropyranyloxypropyl-trifluormethansulfonat, 1,4 g (7,7 mmol) kaliumfthalimid og 50 ml vannfritt dimethylformamid under nitrogen ble omrørt og oppvarmet til 85 °C over natten. Etter avkjøling ble saltene filtrert fra, og løsningsmidlet ble fjernet i vakuum. Residuet ble tatt opp i 100 ml diklormethan, ble vasket med 30 ml 0,5 M NaOH og saltvann. Den organiske fase ble fraskilt, tørket over magnesiumsulfat og konsentrert. Den ønskede forbindelse, 2,2-difluor-3-fthalimido-l-tetrahydropyranyloxypropan, ble renset ved flashkromatografi på silicagel (ethylacetat:hexan, 20:80) (2 g, 90 %). ;Trinn F: ;2, 2- difluor- 3- fthalimido- l- propanol ;En løsning av 2 g (6,15 mmol) 2,2-difluor-3-fthalimido-l-tetrahydropyranyloxypropan og 0,1 g paratoluensulfon-syre i absolutt ethanol ble omrørt over natten ved romtemperatur. Blandingen ble deretter konsentrert i vakuum, ble fortynnet med ethylacetat og vasket med saltvann. Den organiske fase ble fraskilt, tørket over magnesiumsulfat og konsentrert i vakuum. 1,4 g av den urene alkohol, 2,2-difluor-3-fthalimido-l-propanol, ble anvendt i neste trinn uten ytterligere rensing. ;Trinn G; ;2, 2- difluor- 3- fthalimido- propyl- trifluormethansulfonat ;1,1 ml (6,6 mmol) triflic anhydrid ble tilsatt en kald (0 °C) løsning av 1,4 g (6 mmol) 2,2-difluor-3-fthai-imido-l-propanol og 0,5 ml (6,6 mmol) pyridin i 30 ml vannfritt diklormethan. Blandingen ble omrørt i 1 time ved 0 °C, og etter vanlig opparbeidelse ble produktet renset ved flashkromatografi på silicagel (ethylacetat:hexan, 20:80) (1,7 g, 75 %). ;Trinn H: 5'- deoxv- 5'-( 2, 2- difluor- 3- fthalimido- propyl) methylamino-2', 3'- isopropylidenadenosin ;En blanding av 1,5 g (4 mmol) 2,2-difluor-3-fthalimido-propyl-trif luormethansulf onat, 1,2 g (4,2 mmol) 5'-deoxy-5'-methylamino-2',3'-isopropylidenadenosin og 0,55 ml (4,2 mmol) triethylamin i vandig dimethylformamid ble oppvarmet i 2 dager til 50 °C. Blandingen ble deretter konsentrert i vakuum, og produktet ble renset ved flashkromatografi på silicagel (diethylamin:kloroform, 2:98) (1,5 g, 75 %). ;Trinn I: 5 ' - deoxy- 5 ' - ( 2, 2- dif luor- 3- tert. - butoxycarbonylaminopropyl) - methylamino- 2 ' , 3 ' - isopropylidenadenosin ;En blanding av 1,1 g (2 mmol) 5'-deoxy-5'-(2,2-difluor-3-fthalimidopropyl)methylamino-2', 3'-isopropylidenadenosin i 10 ml ethanol ble oppvarmet under tilbakeløpskjøling over natten. Blandingen ble deretter konsentrert i vakuum, ble fortynnet med 1 N eddiksyre inntil pH 4 ble nådd, og ble avkjølt til 0 °C. Bunnfallet ble filtrert fra, og filtratet ble nøytralisert til pH 9 med triethylamin og ble konsentrert i vakuum. Residuet ble tatt opp i diklormethan, og 0,45 g (2 mmol) ditertiærbutyldicarbonat ble tilsatt. Blandingen ble oppvarmet under tilbakeløpskjøling over natten, og etter vanlig opparbeidelse ble produktet renset ved flashkromatografi på silicagel (diethylamin:kloroform, 2:98) (0,8 g, 70 %). ;Trinn J: ;5'- deoxv- 5'-( 3- amino- 2, 2- difluorpropyl) methylaminoadenosin ;En suspensjon av 0,8 g (1,5 mmol) 5'-deoxy-5'-(2,2-difluor-3-tert.-butoxycarbonylaminopropyl)methylamino-2' , 3 ' - isopropylidenadenosin i 4 ml 1 N svovelsyre ble omrørt i 2 dager ved romtemperatur. Blandingen ble deretter fortynnet med 150 ml absolutt ethanol og holdt ved 0 °C over natten. Bunnfallet ble oppsamlet, ble oppløst i en minimal mengde vann og reutfelt med 150 ml absolutt ethanol. Denne prosedyre ble gjentatt to ganger under dannelse av tittelforbindelsen, 5'-deoxy-5'-(3-amino-2,2-difluorpropyl)methylaminoadenosin (0,6 g, 80 %; sm.p. 250-260 <6>C, spaltning). ;Eksempel IX ;Fremstilling av cis- 5'- deoxv- 5'-( 4- carboxy- 3- amino- 2- butenyl)-methylaminoadenosin ;Trinn A: ;2- amino- 5- hydroxy- 3- pentynsyre ;En blanding av 23 g (250 mmol) glyoxylsyre-mono-hydrat, 16,8 g (300 mmol) propargylalkohol, 3,2 g (25 mmol) kobber(II)klorid og 49 g (600 mmol) ammoniumacetat i 100 ml ethanol ble oppvarmet under tilbakeløpskjøling i 6 timer. Reaksjonsblandingen ble deretter konsentrert i vakuum, ble fortynnet med 50 ml vann, surgjort til pH 5 med 1 N HC1 og vasket to ganger med 100 ml ether. Den vandige løsning ble deretter helt over på en ionebytterharpikskolonne (DOWEX 50, H<*>). Kolonnen ble eluert med 1 M ammoniumhydroxyd under dannelse av tittelforbindelsen, 2-amino-5-hydroxy-3-pentynsyre.

Trinn B:

Tert.- butyl- 2- amino- 5- hydroxy- 3- pentynoat

En suspensjon av 12,5 g (100 mmol) 2-amino-5-hydroxy-3- pentynsyre konsentrert i 2 ml svovelsyre og 50 ml isopropylen i en forseglet Parr-kolbe ble ristet i 2 dager ved romtemperatur. Det urene produkt ble etter fordamping av overskudd av isopropylen anvendt i neste trinn uten ytterligere rensing.

Trinn C: Tert.- butvl- 2- tert.- butoxycarbonylamino- 5- hydroxv- 3- pentynoat

En løsning av 100 mmol av det urene tert.-butyl-2-amino-5-hydroxy-3-pentynoat, 22 g (100 mmol) ditertiærbutyldicarbonat og 25 ml (200 mmol) triethylamin i kloroform ble oppvarmet under tilbakeløpskjøling over natten. Etter vanlig opparbeidelse ble produktet renset ved flashkromatografi på silicagel (ethylacetat:hexan, 20:80).

Trinn D: Cis- tert.- butyl- 2- tert.- butoxvcarbonylamino- 5- hvdroxv- 3-pentenoat

En løsning av 13,6 g (50 mmol) tert.-butyl-2-tert.--butoxycarbonylamino-5-hydroxy-3-pentynoat i 200 ml ethanol ble hydrogenert i nærvær av 0,6 g Lindlar-katalysator ved atmos-færetrykk og romtemperatur. I løpet av 3 timer ble én ekviva-lent (1,1 1) hydrogen tatt opp. Katalysatoren ble deretter fjernet ved filtrering, og blandingen ble konsentrert i vakuum som gav en klar olje. Tittelforbindelsen ble erholdt ved flashkromatografi på silicagel (ethylacetat:hexan 15:85).

Trinn E: Cis- tert.- butyl- 2- tert.- butoxycarbonvlamino- 5- klor- 3- pentenoat

0,9 ml (11 mmol) mesylklorid ble tilsatt en kald (0 °C) løsning av 2,75 g (10 mmol) cis-tert.-butyl-2-tert.-butoxycarbonylamino-5-hydroxy-3-pentenoat og 1,6 ml (11 mmol) triethylamin i 50 ml vannfritt diklormethan. Blandingen ble omrørt over natten, og etter vanlig opparbeidelse ble tittelforbindelsen renset ved flashkromatografi på silicagel (ethylacetat :hexan, 20:80).

Trinn F: Cis- 5'- deoxy- 5'-( 4- tert.- butoxycarbonyl- 3- tert♦- butoxycarbonylamino- 2- butenyl) methylamino- 2', 3'- isopropylidenadenosin

En løsning av 1,5 g (5 mmol) cis-tert.-butyl-2-tert.-butoxycarbonylamino-5-klor-3-pentenoat, 1,6 g (5 mmol) 5'-deoxy-5'-methylamino-2',3'-isopropylidenadenosin, 0,7 g (5 mmol) kaliumcarbonat og 0,8 g (0,5 mol) natriumjodid i 30 ml acetonitril ble oppvarmet under tilbakeløpskjøling over natten. Etter vanlig opparbeidelse ble produktet renset ved flashkromatografi på silicagel (diethylamin:kloroform, 2:98).

Trinn G: Cis- 5'- deoxv- 5'-( 4- carboxy- 3- amino- 2- butenyl) methylaminoadenosin

En suspensjon av 1,5 g (3 mmol) cis-5'-deoxy-5'-(4-tert.-butoxycarbonyl-3-tert.-butoxycarbonylamino-2-butenyl)-methylamino-2',3'-isopropylidenadenosin i 5 ml 1 N svovelsyre ble omrørt i 2 dager ved romtemperatur. Blandingen ble deretter fortynnet med 200 ml ethanol og fikk stå ved 0 °C over natten. Bunnfallet ble oppsamlet, ble oppløst i en minimal mengde vann og utfelt på nytt med 200 ml ethanol. Denne prosedyre ble gjentatt to ganger og gav tittelforbindelsen, cis-5'-deoxy-5'-(4-carboxy-3-amino-2-butenyl)methylaminoadenosin.

(Vanlig opparbeidelse innbefatter ekstraksjon av produktet fra den vandige fase og tre ekstraksjoner med det organiske løsningsmiddel (som i trinn C, eksempel I), og den organiske fase ble tørket over magnesiumsulfat, filtrert fra og konsentrert i vakuum).

Forbindelsene av formel I er inhibitorer av de-caboxylaseenzymer som er involvert i polyamindannelse og er derfor slike forbindelser som er anvendbare som farmakologiske midler. I særdeleshet er forbindelsene av formel I kraftige og irreversible inhibitorer av S-adenosylmethionindecarboxylase (Ado Met DC) og interfererer derfor signifikant med dannelsen av spermin og spermidin, og er således anvendbare addukter for forskere og klinikere ved studiet av polyamindannelsen, og ved behandling av tilstander og sykdommer vedrørende hurtig celle-deling. Av særlig betydning er anvendelsen av forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen i forbindelse med kjente ornithindecarboxylase-inhibitorer, kjente antitumormidler og med immunomodulatorer kjent for deres anvendelse ved sykdommer assosiert med hurtig formering av normale og transformerte celler.

Som vel kjent innen faget er polyaminer assosiert med både normal og hurtig formering av celler, og som også er vel kjent, er nivåene av polyaminer høye i embryoniske systemer, testes og pasienter som lider av sykdommer forbundet med hurtig formering og cellevekst. Det er også kjent at det er en korrelasjon mellom aktiviteten av decarboxylaseenzymene av ornithin, S-adenosylmethionin, arginin og lysin og polyamindannelse. Under hensyntagen til dettes innbyrdes forhold er forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen ved deres særegne evne til å inhibere S-adenosylmethionindecarboxylase også anvendbare til å studere de biokjemiske og farmakologiske konsekvenser av polyaminbiosynteseblokade i pattedyr, planter, bakterier og protozoa.

Nærmere bestemt er enkelte av de mer lovende sluttelige anvendelsesformer for forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen følgende.

Anvendelse av en Ado Met DC-inhibitor fremstilt ifølge oppfinnelsen, alene, men mer effektivt i forbindelse med en ornithindecarboxylase (ODC)-inhibitor i pattedyr som postcoitale antikonsepsjonsmidler, fremkallere av menstrua-sjon, og som første trimester-abortfremkallende midler er inn-lysende, da slik anvendelse ikke kirurgisk trenger inn i hulrom av uterus, krever ikke sykehusinnleggelse og kan administreres med minimal grad av medisinsk overvåking.

Som vel kjent har anvendelse av enkle midler i anti-neoplastisk kjemoterapi bare vært marginalt vellykket og begrenset til noen få ondartede sykdommer. Behandling av slike ondartede sykdommer som leukemi (f.eks. lymfocyttisk leukemi, Hodgkins' sykdom), melanoma og metastatisk melanoma, multippel myeloma, blærecarcinoma, prostatacarcinoma (så vel som god-artet renal adenocarcinoma, mageadenocarcinoma, prostatisk hypertrofi), pankreatisk adenocarcinoma, coloncancer, lunge-carcinoma, fibrosarcoma og brystcarcinoma vil bli forøket ved anvendelse av Ado Met DC-inhibitorene i oppfinnelsen ved de ledsagende terapeutiske systemer med tidligere kjente lege-middelkombinasjoner. Eksempelvis kan anvendelse av foreliggende Ado Met DC-inhibitorer, fortrinnsvis med ODC-inhibitorer og/eller med interferon signifikant lette en nedsettelse av uønskede bivirkninger og øke overlevelsestiden når de anvendes i forbindelse med slike velkjente legemiddelkombina-sjoner som vincristin, amethopterin, mercaptopurin, prednison (VAMP), cyklofosfamid, arabinosylcytosin, oncovin (COAP), meklorethamin, procarbazin (MOPP), ABVD, CHOP, CAF, FAM og PVE (se oversikt av Berger, N.A. (1986), J. Clin. Invest. (1131-1135)). I tillegg forbedrer anvendelse av forbindelsene effek-tiviteten når det gjelder forhindring av metastasis i cancere i bryst, colon og blære med ODC-inhibitorer. Et annet spesifikt klinisk aspekt ved forbindelsene er økningen av syner-gismen mellom ODC-inhibitorer og a-interferon ved behandling av cancere, i særdeleshet metastatisk ondartet melanoma. Et ytterligere annet aspekt er økningen av den særegne inter-aksjon mellom ODC-inhibitorer og methylglyoxal-bisguanylhydra-zon (MGBG; methyl-GAG), i særdeleshet i tilfeller med til-bakevendende primære hjernetumorer (eksempelvis astrocytomas). Ytterligere kan forbindelsene ifølge oppfinnelsen være nyttige ved behandling av hyperformerende sykdommer, slik som psoriasis.

I tillegg til det foregående kan forbindelsene anvendes for å behandle sykdommer som forårsakes av infeksjoner med animalske parasitter, i særdeleshet parasittiske protozoa og parasittiske nematoder. Ved behandling av sykdommer forårsaket av disse parasitter kan forbindelsene anvendes alene eller i kombinasjon med ornithindecarboxylase-inhibitorer og/eller i kombinasjon med andre midler kjent for å være anvendbare ved behandling av slike sykdommer. I enkelte tilfeller, slik som ved behandling av Chagas sykdom, foretrekkes det å anvende arginindecarboxylase-inhibitorer i forbindelse med forbindelsene ifølge oppfinnelsen. Av særlig interesse er behandling av afrikansk trypanosomiasis, Chagas sykdom og pneumocystis carinii pneumonia (PCP) i pasienter som lider av AIDS (i særdeleshet i forbindelse med en ODC-inhibitor), cryptosporidiosis og malaria.

Spesifikt er forbindelsene særlig anvendbare ved behandling av: (1) sykdommer forårsaket av Onchocerca volvulus, en snyltenematode som lever i subkutant vev og forårsaker hud-lesjoner og øyelesjoner (elveblindhet). Disse sykdommer behandles vanligvis med diethylcarbamazin som dreper mikrosnyl-teormene, men ikke de voksne ormene; (2) sykdommer forårsaket av Wuchereria bancrofti, en trådlignende nematode hvis voksne lever i tynne lymfatiske kar og som forårsaker lymfangitis, dermatitis og cellulitis. Disse sykdommer behandles vanligvis med diethylcarbamazin, men denne behandling er kjent for å være utilstrekkelig; (3) sykdommer forårsaket av Loa loa, en snylteorm som forårsaker loaiasis, karakterisert ved varm erytematøs kalabarsvelling på ekstremiteter og periorbitalvev, som også er blitt behandlet med diethylcarbamazin; (4) sykdommer forårsaket av Trichomonas vaqinalis, en seksuelt overført flagellatprotozoa som forårsaker tri-chomoniasis som vanligvis behandles med metronidazol; (5) sykdommer forårsaket av Giardia lamblia, en flagellert protozoaparasitt som forårsaker giardiasis i kjæle-hunder og villdyr så vel som mennesket, for hvilke de valgte legemidler er kinakrin-hydroklorid og metronidazol; (6) sykdommer forårsaket av Toxoplasmas qondii, en protozoal parasitt av underklassen coccidia som forårsaker kongenital toksoplasmose som kan behandles med pyrimethamin og sulfadiazin; (7) sykdommer forårsaket av malaria av slekten Plasmodium, f.eks. Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax, Plasmodium ovale og Plasmodium malariae, som er årsaken til malaria, og hvor den vanlige behandling er med klorikin, kininsulfat, pyrimethanin og sulfadiazin. Ved behandling av denne sykdom er det bedre å anvende forbindelsene ifølge oppfinnelsen i ledsagende behandling med de foregående eller med ODC-inhibitorer; (8) sykdommer forårsaket av Trypanosoma cruzi, en protozoa som forårsaker Chagas sykdom, en sykdom som historisk sett har vært vanskelig å behandle. Ved behandlingen av denne sykdom med forbindelsene ifølge oppfinnelsen anbefales det at disse anvendes i ledsagende behandling med arginin og agmatin-decarboxylase-inhibitorer; (9) sykdommer forårsaket av afrikansk trypanosomes, Trypanosoma brucei qambiense og Trypanosoma brucei rhodesi-ense, to underarter av hemoflagellater som er ansvarlig for afrikansk trypanosomiasis, en sykdom som behandles med suramin og mer nylig med eflornithin. Av særlig anvendelse ved behandling av denne sykdom er de spesifikke forbindelser cis-5'-deoxy-5'-(4-amino-2-butenyl)methylaminoadenosin og cis-5'-deoxy-5'-(4-carboxy-4-amino-2-butenyl)methylaminoadenosin; (10) sykdommer forårsaket av Leishmania tropica og Leishmania mexicana. som er ansvarlig for kutan leishmaniasis, og visceral leishmaniasis (også kalt kala azar eller svart feber) som forårsakes av Leishmania donovani.

Videre kan en Ado Met DC-inhibitor ifølge oppfinnelsen anvendes (alene eller i kombinasjon med ODC-inhibitorer) som antiinfeksjonsmidler, idet de er effektive til å bevirke kontroll av bakterier, fungi og viruser som er avhengig av polyaminer for vekst, f.eks. E. coli, Enterobacter, H. influenzae, Mycobacteria, Staphylococcus aureus. Klebsiella, viruser slik som poxviruser, herpesviruser, picornaviruser og influensaviruser. Ved anvendelse av forbindelsene ifølge oppfinnelsen foretrekkes det å anvende slike ODC-inhibitorer som a-difluormethylornithin, a-monofluormethylornithin, a-ethylnylornithin, (€)-2-(fluormethyl)dehydroornithin (og methyl, ethyl og andre estere derav) og (2R, 5R)-6-heptyn-2,5-diamin, hvilke forbindelser og anvendelse av disse, så vel som deres fremstilling, ODC-inhiberende egenskaper og deres sluttelige anvendelse er godt beskrevet (se Inhibition of Polyamine Metabolism (1987), McCann, P.P., Pegg, A.E. og Sjoerdsma, A.).

S-adenosylmethionindecarboxylase-inhiberende egenskaper av forbindelsene av formel I kan lett bestemmes ved standard laboratorieprosedyrer som er vel kjent innen faget. Eksempelvis fremkaller cis-5'-deoxy-5'-(4-amino-2-butenyl)-methylaminoadenosin inaktivering av rottelever-Ado Met Dc in vitro med en tl/2 = 16 min. ved 0,1 uM, en tl/2 =1,6 min. ved 1 uM og en tl/2 =0,8 min. ved 2 uM.

Som farmakologisk anvendbare midler kan forbindelsene av formel I administreres på forskjellig måte til den pasient som skal behandles for å oppnå den ønskede effekt. Forbindelsene kan administreres alene eller i kombinasjon med hver-andre i henhold til standardteknikker for ledsagende behandling, idet det tas i betraktning at forbindelsene ifølge oppfinnelsen fortrinnsvis øker etablerte protokoller når de anvendes for å behandle neoplasmer. Forbindelsene administreres fortrinnsvis i form av et farmasøytisk preparat. Generelt kan forbindelsene administreres oralt, parenteralt, f.eks. intravenøst, intraperitonealt eller subkutant, ved infusjon eller topisk, som bestemt ved faktorer som er vel kjent innen faget. Mengden av administrert forbindelse vil variere over et vidt område og kan være en hvilken som helst mengde, avhengig av den pasient som skal behandles, den til-stand som skal behandles og administreringsmåte. Den effektive mengde av en administrert forbindelse vil variere fra 0,2 mg/kg til 200 mg/kg kroppsvekt pr. behandlingsdose, og vil fortrinnsvis være 1 mg/kg til 50 mg/kg kroppsvekt pr. behandlingsdose.

De faste enhetsdoseringsformer kan være av konven-sjonell type. Således kan den faste form være en kapsel som kan være av vanlig gelatintype inneholdende en ny forbindelse ifølge oppfinnelsen og en bærer, f.eks. et smøremiddel, og inerte fyllstoffer, slik som laktose, sukrose og maisstivelse. I en annen utførelsesform tabletteres de nye forbindelser med konvensjonelle tablettbaser, slik som laktose, sukrose eller maisstivelse, i kombinasjon med bindemidler, slik som akasie, maisstivelse eller gelatin, oppbrytende midler, slik som maisstivelse, potetstivelse eller alginsyre, og et smøre-middel, slik som stearinsyre eller magnesiumstearat.

For parenteral administrering kan forbindelsene administreres som injiserbare doser av en løsning eller suspensjon av forbindelsen i et fysiologisk akseptabelt for-tynningsmiddel med en farmasøytisk bærer som kan være en steril væske, slik som vann og oljer, med eller uten tilset-ning av et overflateaktivt middel og andre farmasøytisk akseptable adjuvanser. Eksempler på oljer som kan anvendes i disse preparater er petroleumsoljer og de av animalsk, vegetabilsk eller syntetisk opprinnelse, f.eks. peanøttolje, soyabønneolje og mineralolje. Generelt er vann, saltvann, vandig dekstrose og beslektede sukkerløsninger, ethanoler og glycoler, slik som propylenglycol eller polyethylenglycol, foretrukne væske-formige bærere, i særdeleshet for injiserbare løsninger.

Forbindelsene kan administreres i form av en depot-injeksjon eller implantatpreparat som kan formuleres på en slik måte at det muliggjøres en forlenget frigivelse av aktiv bestanddel. De aktive bestanddeler kan presses til pellets eller småsylindere og implanteres subkutant eller intramusku-lært som depotinjeksjoner eller implantater. Implantater kan anvende inerte materialer, slik som bionedbrytbare polymerer eller syntetiske silikoner, f.eks. Silastic, silikongummi fremstilt av Dow-Corning Corporation. Som tilfellet er for de fleste generiske klasser av forbindelser egnet for farma-søytisk sluttelig anvendelse, er visse underklasser og visse spesifikke forbindelser foretrukket. For forbindelsene ifølge oppfinnelsen (I) er de forbindelser hvori R er hydrogen eller methyl foretrukket, og de forbindelser hvori Q betegner formel le, i særdeleshet cis-konfigurasjonen, og de av formel Ia og Ic foretrukket. Foretrukne spesifikke forbindelser er cis-5'-deoxy-(4-amino-2-butenyl)methylaminoadenosin, cis-5'-deoxy-(4-amino-2-butenyl)aminoadenosin og deres 2-fluor-, 3-fluor- og 2,3-difluoranaloger, og 5'-deoxy-5'-(3-amino-2-methylenpropyl)methylaminoadenosin, 5'-deoxy-5'-(3-amino-2-methylenpropyl)aminoadenosin og mono- og difluoranalogene (X og/eller Y av formel Ia er fluor) og cis-5'-deoxy-5'-(4-amino-4-carboxy-2-butenyl)methylaminoadenosin og cis-5'-deoxy-5'-(4-amino-4-carboxy-2-butenyl)aminoadenosin.

Claims (4)

1. Analogifremgangsmåte for fremstilling av terapeutisk aktive forbindelser av formelen og farmasøytisk akseptable salter derav, hvori Ad betegner adenosinyl, R er C1.7-alkyl, og Q betegner grupper av formel le: le V er H eller -COOH, W er H, Z er H, F, Cl eller Br, karakterisert ved at en forbindelse av formel omsettes med et R2X'-reagens av formelen hvori Pg er en N-beskyttende gruppe, V er H, COOH eller COOR3, hvori R3 er en reaksjonsbeskyttende gruppe, og X' er et triflat, klor, brom eller jod, og Ac er en acylgruppe, fortrinnsvis acetat, hvilken reaksjon utføres med ekvimolare mengder av de involverte reaktanter i nærvær av en base, fortrinnsvis i et basisk løsningsmiddel, ved temperaturer på 30-80 °C, etterfulgt av fjerning av enhver beskyttende gruppe under standardteknikker, bortsett fra når en reaktant av formel 3_f anvendes, utføres fjerning av nitrogen-, carboxyl-og/eller hydroxy-beskyttende grupper bundet til kondensasjonsreaksjonsproduk-tene etter den kjemiske reaksjon av butyngruppen til dens tilsvarende butengruppe ved hydrogenering i nærvær av en Lindlar-katalysator, og eventuelt at de således erholdte forbindelser omdannes til deres farmasøytisk akseptable salter.

2. Fremgangsmåte ifølge krav 1 for fremstilling av cis-5'-deoxy-5'-(4-amino-2-butenyl)methylaminoadenosin, karakterisert ved at tilsvarende utgangsmaterialer anvendes.

3. Fremgangsmåte ifølge krav 1 for fremstilling av cis-5'-deoxy-5'-(4-amino-4-carboxy-2-butenyl)methylaminoadenosin, karakterisert ved at tilsvarende utgangsmaterialer anvendes.

4. Kjemiske forbindelser, karakterisert ved at de har formelen hvori R er som ovenfor angitt og R2 er hvori V er H, COOH eller alkoxycarbonyl, W er H, Z er H, F, Cl eller Br, og Pg er H eller alkoxycarbonyl.