FI94133B - Menetelmä lääkeaineina käyttökelpoisten griseoliinihapon johdannaisten valmistamiseksi - Google Patents

Description

94133

Menetelmä lääkeaineina käyttökelpoisten griseoliinihapon johdannaisten valmistamiseksi Förfarande för framställning av griseolinsyraderivat som används som läkemedel 5

Keksinnön kohteena on analogiamenetelmä kaavan (I) mukaisten lääkeaineina käytettävien griseoliinihapon johdannaisten valmistamiseksi, jossa kaavassa (I) 10 R7 .

fV>

rbAh>V

15 (I.) ' r3

V

R1 ja R2 tarkoittavat kaavan -OR9 mukaisia ryhmiä, joissa R9 tarkoittaa 25 vetyatomia tai bentsoyyliryhmää; R3 ja Ra tarkoittavat toisistaan riippumatta karbamoyyliryhmiä ja karbok-siryhmiä ja alempia alkoksikarbonyyliryhmiä, mainittujen karboksyyli-ryhmien ollessa valinnaisesti substituoitu bentshydryyliryhmällä; 30 sekä R5 että R6 tarkoittaa vetyatomeja tai ne muodostavat yhdessä ylimää-. räisen hiili-hiili-sidoksen niiden hiiliatomien väliin, joihin ne ovat kiinnittyneet; 35 R7 tarkoittaa OH-ryhmää tai ryhmää, jolla on kaava -NR10 R11, jossa R10, R11 tarkoittavat riippumattomasti vetyatomeja, alempia alkoksiryhmiä, jotka on substituoitu fenyyliryhmällä, alempia alkyyliryhmiä, bentshydryyliryhmiä tai hydroksiryhmiä; 2 94133 R® tarkoittaa ryhmää, jolla on kaava NR12R13, SH, OH, jossa R12 ja R13 tarkoittaa dimetyyliaminometyleeniryhmää, vetyatomeja tai toinen ryhmistä on vetyatomi ja toinen tarkoittaa C1-C2o alifaattista asyyliryhmää; 5 sekä näiden yhdisteiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen ja estereiden valmistamiseksi.

Tämä keksintö kohdistuu joukkoon uusia griseoliinihapon johdannaisia.

10

Griseoliinihappo on nukleosidin tyyppinen yhdiste, joka käsittää adeniiniemäksen ja kaksi karboksyylihaposta muodostuvaa ryhmää. Se julkaistiin ensimmäisen kerran muun muassa eurooppalaisessa patenttijulkaisussa no. 29 329A, mutta tällöin sen rakennetta ei vielä tunnettu. Sen 15 rakenne esitettiin ensimmäisen kerran US-patenttijulkaisussa no. 4 460 765 (myönnetty tämän hakemuksen laatijoille). Tämän jälkeen griseoliinihapon joitakin johdannaisia julkaistiin US-patenttihakemuksessa, jonka sarjanumero on 664 866, ja joka on jätetty lokakuun 25. pnä 1984, jättäjänä oheisen hakemuksen laatijat, ja tässä hakemuksessa julkaistaan 20 samoin griseoliinihapon rakenne. Muita griseoliinihapon johdannaisia, erityisesti dihydrodesoksigriseoliinihappo, sen suoloja ja estereitä, esitetään US-patenttihakemuksessa no. 734 868, jätetty toukokuun 16. päivänä 1985.

• 25 Kansainvälisen kemianalan järjestön "International Union of Pure and

Applied Chemistry" (IUPAC) suositusten mukaisesti tämän keksinnön mukaiset yhdisteet nimetään griseoliinihapon (tai dihydrodesoksigriseoliini-hapon) johdannaisina, pitäen perusrakenteena griseoliinihappoa. Käytetty numerointijärjestelmä esitetään US-patenttihakemuksessa 664 866.

30

Griseoliinihappo ja hakemusten no. 664 866 ja 734 868 mukaiset griseoliinihapon johdannaiset sekä tämän keksinnön mukaiset johdannaiset kykenevät inhiboimaan lukuisille syklisille nukleotideille spesifisten fosfodiesteraasien aktiivisuuden, joista fosfodiesteraaseista esimerk-35 keinä mainittakoon 3',5'-syklinen adenosiinimonofosfaatti- (cAMP)-fosfo-diesteraasi (PDE) tai 3',5'-syklinen guanosiini-monofosfaatti- (cGMP)- li 3 94133 PDE, ja näin ollen ne pystyvät lisäämään syklisen nukleotidin, kuten cAMP tai cGMP, tasoa tällaisella yhdisteellä käsiteltävän potilaan soluissa.

On hyvin tunnettua, että eläinkudoksiin laajasti jakautuneena esiintyvä 5 cAMP toimii hormonien suuren joukon toisena lähettinä ja välittää tämän hormonijoukon vaikutusta; tämän seurauksena cAMP-molekyylillä on monia hyvin tärkeitä fysiologisia ja biokemiallisia tehtäviä. Lisäksi sen tiedetään vaikuttavan tai osallistuvan: solujen jakautumiseen, lisääntymiseen ja erikoistumiseen; systoliseen järjestelmään, erityisesti sydämen 10 supistumiseen (miocardia); verisolujen muodostumiseen ja kehittymiseen (hematopoiesis); keskushermostojärjestelmän eri toimintoihin; immuuni-reaktioihin; sekä insuliinin ja histamiinin vapautumiseen. Sen pitoisuus kudoksissa, ja näin ollen sen vaikutus näihin eri tapahtumiin, riippuu cAMP-yhdistettä syntetoivan entsyymin (eli adenylaattisyklaasi) ja cAMP-15 yhdistettä hajottavan entsyymin cAMP PDE, välisestä tasapainosta. cAMP PDE-entsyymin inhibiittori lisää cAMP-tasoa soluissa, ja täten sillä voidaan odottaa olevan lukuisia lääkinnällisiä sovellutuksia, esimerkiksi: hoidettaessa sydän- ja verisuonisairauksia; astmaa parantavana aineena; sileitä lihaksia laukaisevana aineena; psykotrooppisena tai 20 neurotrooppisena aineena; tulehduksia parantavana aineena; syövän hoidossa; sekä sokeritaudin hoidossa.

Toistaiseksi muiden syklisten nukleotidien, kuten cGMP:n, aktiivisuuksia ei olla selvitetty näin yksityiskohtaisesti. Kuitenkin uskotaan, että : 25 niillä on joukko vaikutuksia, jotka ovat samankaltaisia, mutta eivät kuitenkaan samat, kuin cAMP-molekyylin vaikutukset. Näin ollen tällaisille toisille syklisille nukleotideille spesifisten PDE-entsyymien inhi-bitio johtaa samoin lääkinnällisiin vaikutuksiin, jotka ovat samankaltaisia kuin cAMP PDE-entsyymin inhibitiosta aiheutuvat vaikutukset. Kun 30 näiden muiden syklisten nukleotidien aktiivisuudet saadaan selvitetyiksi, niin syntyy tarve löytää näihin muihin nukleotideihin liittyvien PDE-entsyymien inhibiittoreita, joiden suurempi spesifisyys kohdistuu muiden nukleotidien johonkin PDE-entsyymiin, eikä cAMP PDE-entsyymiin; itse asiassa tällaisten inhibiittoreiden kehittäminen saattaa jopa edesauttaa 35 tällaisten muiden syklisten nukleotidien tutkimusta tai kannustaa siinä.

4 94133

Griseoliinihapon ja sen johdannaisten lisäksi muita sellaisia yhdisteitä, joiden tiedetään inhiboivan cAMP- ja cGMP-yhdisteiden PDE-entsyymejä, ovat esimerkiksi papaveriini, dipyridamoli sekä eräät yhdisteet, jotka ovat nukleiinihappojen perustana toimivien emästen kaltaisia, kuten 5 teofylliini tai M & B 22 948 [Kukovetz et ai. , Naunyn-Schmiedeberg's Arch. Pharmakol., 310. 129 (1979)].

Tämän keksinnön puitteissa ollaan löydetty joukko griseoliinihapon ja dihydrodesoksigriseoliinihapon kaltaisia yhdisteitä, joilla on lisäksi 10 griseoliinihapon ja dihydrodesoksigriseoliinihapon aktiivisuutta. Yllättävästi eräiden näiden yhdisteiden aktiivisuus on suurempi cGMP PDE-entsyymiä vastaan kuin cAMP PDE-entsyymiä vastaan. Tietyt tämän keksinnön mukaiset yhdisteet, niiden kuitenkin säilyttäessä toivottu aktiivisuutensa, ovat arvokkaampia välituotteina, muita samankaltaisia yhdisteitä 15 valmistettaessa.

Tämän keksinnön tavoitteena on saada aikaan griseoliinihapon johdannaisia, sekä sen suoloja ja estereitä, jotka ovat uusia yhdisteitä.

20 Edelleen, tämän keksinnön erityisenä tavoitteena on saada aikaan griseoliinihapon sellaisia johdannaisia, jotka kykenevät inhiboimaan syklisiä nukleotidejä hajottavien PDE-entsyymien, kuten cAMP PDE tai cGMP PDE, aktiivisuuden.

: 25 Tämän keksinnön avulla voidaan saada lisäksi aikaan farmaseuttinen valmiste, joka käsittää fosfodiesteraasin inhibiittorin sekoitettuna farmaseuttisesti hyväksyttävään kantajaan tai laimentimeen, ja jossa valmisteessa mainittu fosfodiesteraasin inhibiittori on valittu ryhmästä, joka käsittää edellä määritellyt, kaavan (I) mukaiset yhdisteet sekä 30 niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat ja esterit.

Tämän keksinnön avulla voidaan hoitaa fosfodiesteraasipitoisuuksien epätasapainosta aiheutuneista häiriötiloista kärsiviä eläimiä, erityisesti nisäkkäitä (kuten ihmisiä) antamalla mainitulle eläimelle fosfodieste-35 raasin inhibiittoria, joka fosfodiesteraasin inhibiittori valitaan

II

5 94133 ryhmästä, joka käsittää edellä määritellyt kaavan (I) mukaiset yhdisteet, sekä niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat ja esterit.

Keksinnön mukainen menetelmä on pääasiallisesti tunnettu siitä, että 5 griseoliinihapon (A) hh2 '00

H0°cvT=rW

H00C"V 0H

IM

20 annetaan reagoida siten, että sen hydroksi- ja karboksiryhmät saadaan suojatuksi; ja toivottaessa aminoryhmä griseoliinihapon 6-asemassa muutetaan hydroksiryhmäksi antamalla griseoliinihapon tai suojatun griseoliinihapon reagoida typpihapokkeen suolan kanssa, jonka jälkeen ! 25 menetelmävaihtoehdossa a) ensin, tarvittaessa pelkistetään ryhmien R5 ja R6 muodostama ylimääräinen hiili-hiili-sidos, 30 sitten 1'-asemassa sijaitseva nukleiinihappoemäs muunnetaan alkanoyyliok-siryhmäksi antamalla edellä saadun yhdisteen reagoida i) rikkihapon tai trifluorimetaanisulfonihapon kanssa, ii) alemman karboksyylihapon kanssa ja iii) sen anhydridin kanssa kaavan (XVIII) mukaisen yhdisteen saarni-35 seksi 6 94133

O

V®

5 pB r5 I

R i O O

r23ooc—( 0 orm io R2a (XVIII) jossa R5 ja R6 ovat vetyatomeja 15 R2a tarkoittaa vetyatomia tai suojattua hydroksiryhmää; R22 ja R23 ovat sama tai eri ryhmä, ja kumpikin tarkoittaa karboksia suojaavaa ryhmää; 20 R2a tarkoittaa hydroksia suojaavaa ryhmää; R28 tarkoittaa alempaa alkyyliryhmää, jonka jälkeen kaavan (XVIII) mukaisella sokerijohdannaisella toteutetaan I 25 glykosidaatioreaktio antamalla sen reagoida trimetyylisilyloidun nukle- iinihappoemäksenä toimivan puriinin johdannaisen kanssa, jolloin saadaan kaavan (XXVI) mukainen yhdiste V1 rV> p6 p5 35 (XXVI) R2200C^_7 R2300C-\° 0R2t R2ä

II

94153 7 jossa R5, R6, R2a, R22, R23 ja R24 on määritelty kuten edellä, Y1 ja Y2 on määritelty kuten R7 vast. R8, joka on kaavan I mukainen yhdiste, jossa kaavojen R22OOC ja R23OOC mukaiset ryhmät tarkoittavat muita ryhmien R3 ja R4 mukaisia ryhmiä paitsi karbamoyyliryhmiä ja karboksiryhmiä.

5 jonka jälkeen haluttaessa kaavan (XXVI) mukaisen yhdisteen annetaan reagoida siten, että suojaavat ryhmät saadaan poistetuksi kaavan (XXVII) mukaisen yhdisteen saamiseksi 10 Y1 15 r6 RS 0 20 hoocnM1/ mc-Cj oh : 25 jossa Y1, Y2, R5, R6 on määrätty kuten edellä ja R29 tarkoittaa samaa kuin R2 edellä, joka yhdiste (XXVII) on kaavan I mukainen yhdiste, jossa R3 ja R4 ovat karboksiryhmiä; 30 menetelmävaihtoehdossa b) yhdisteen (A) suojatusta muodosta irrotetaan suojaryhmä yhdisteen (XXIX) saamiseksi 35 94133 8 nh2 0:,) 5 H * r6 r5 r22°°c )— 10 R2300C—oh r29 (XXIX] 15 jossa R5, R6, R22, R23 ja R29 on määritelty kuten edellä, jonka jälkeen kaavan (XXIX) mukainen yhdiste annetaan reagoida peroksidin kanssa kaavan (XXX) mukaiseksi N1-oksidiksi 20 hh2 N " : 25 R6 R5 0 r22oqc ^ y

so R%C-/X° OH

\29 (XXX) jossa R5, R6, R22, R23 ja R29 on määritelty kuten edellä, 35 9 94133 saadun yhdisteen (XXX) annetaan reagoida alemman alkyylihalogenidin tai aralkyylihalogenidin kanssa kaavan (XXXI) mukaiseksi N1-alkoksi- tai N1-aralkyylioksiyhdisteeksi

5 on NH

R300v X « UC> 10 «6 «5 o

«22°ocXO

r23ooc-(^0 15 D 29 K (XXXI) jossa R5, R6, R22, R23 ja R29 on määritelty kuten edellä ja R30 on alkyyli-ryhmä tai aralkyyliryhmä, 20 saadun kaavan (XXXI) mukaisen yhdisteen annetaan reagoida alkalisen vesiliuoksen kanssa, jonka seurauksena kaavan (XXXI) mukaisen yhdisteen rengas aukeaa, mistä seuraa tuloksena olevan formyyliryhmän poistaminen ja samalla poistuu suojaryhmät R22 ja R23, jotka aiemmin edellä kuvatun reaktion mukaisesti edullisesti korvataan uusilla suojaryhmillä R31 ja R32 j 25 kaavan (XXXII) mukaisen yhdisteen valmistamiseksi, KH,

R3V IT K

N lf ? r6 r5 o r%cJ \ 7

R^0C-C"0 OH

r29 (xxxi n 10 94133 jossa R5, R6, R29 ja R1 on määritelty kuten edellä ja R31 ja R32 tarkoittaa vetyatomia tai karboksia suojaavia ryhmiä, saatu kaavan (XXXII) mukainen yhdiste pelkistetään katalyyttisesti alkyy-5 li- tai aralkyyliryhmän R1 poistamiseksi, jolloin saadaan kaavan (XXXIV) mukainen yhdiste HH2 10 I > η2η-^« R6 R5 0

15 R^OOc}-W

r32°0C”d29° °H “ 9 (XXXIV) 20 jossa R5, R6, R29,R31 ja R32 on määritelty kuten edellä, kaavan (XXXIV) mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan hiilidisulfidin kanssa, mikä johtaa renkaan muodostumiseen, jolloin saadaan kaavan (XXXV) ’ 25 mukainen yhdiste nh2 30 HS^^H h R6 R5 .

r310°c

35 R32OOC-Co OH

R29 (XXXV) 11 94133 joka on kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa kaavojen R31OOC ja R3200C ryhmät tarkoittavat ryhmille R3 ja R4 määriteltyjä ryhmiä, R5 ja R6 tarkoittavat samaa kuin edellä, R7 tarkoittaa NH2-ryhmää ja R8 tarkoittaa SH-ryhmää ja R1 tarkoittaa OH-ryhmää ja R29 tarkoittaa ryhmää R2, 5 menetelmävaihtoehdossa c) edellisessä vaihtoehdossa b) valmistettu kaavan (XXX) mukaisen yhdisteen annetaan reagoida syanohalogenidin kanssa kaavan (XXXVIII) mukaiseksi 10 polysykliseksi yhdisteeksi © ©

^-HK XU

15 1 II

20 r6 r50 R 2200Csi \ 'j

ϋ23000-Γ° OH

25 r29 (XXXVIII) 1 jossa R5, R6, R22, R23 ja R29 on määritelty kuten edellä, saadun kaavan (XXXVIII) mukaisen yhdisteen annetaan reagoida emäksisen yhdisteen kanssa kaavan (XXXIX) mukaiseksi N6-syano-Ji1-oksidiksi 35 · 12 94133

n NHCN

X X H

□:> R6 R5 0 10 r22ooc j~\y

R^OOC-X OH

R29 IXXXIX] 15 kaavan (XXXIX) mukaisen yhdisteen annetaan reagoida alemman alkyylihalo-genidin kanssa tai aralkyylihalogenidin kanssa N1-alkoksi- tai N1-aral-kyylioksiyhdisteeksi (XL) 20 R% Γ 0C'> R6 R5 0 3o R 2200\ / R2300C-(O oh R29 (XL) jossa R5, R6, R22, R23, R29 ja R30 on määritelty kuten edellä,

II

35 13 94133 jonka jälkeen kaavan (XL) mukaista yhdistettä käsitellään alkaalilla liuottimessa pH-arvossa 12-13, jolloin sen pyrimidiinirengas saadaan avatuksi (ja jolloin reaktio-olosuhteista riippuen sattumalta myös karboksia suojaavat ryhmät voidaan saada poistetuksi), jolloin saadaan 5 jälleen muodostumaan rengas, mikä johtaa kaavan (XLI) mukaiseen yhdisteeseen, jossa karboksiryhmät ovat suojaamattomat (eli jossa sekä R31 että R32 tarkoittavat vetyatomia) NHOR30

10 I

H

\ S

15 R6 R5 g R%cJ \ / R3200C-(^0 oh 20 R (XLI) ja jossa R5, R6, R29 tai R30 on määritelty kuten edellä, 25 tai (XLIII) mukaiseen yhdisteeseen, jossa karboksia suojaavat ryhmät pysyvät paikallaan NHOR30

Xjt’> rO r5 r23ooc-(^0'oh (XUII) 14 94133 ja R5, R6, R22, R23, R29, R30 on määritelty kuten edellä, sen jälkeen haluttaessa alkyyli- tai aralkyyliryhmä R30 poistetaan kaavan (XLI) mukaisesta yhdisteestä ja korvataan vetyatomilla katalyyttisesii 5 pelkistämällä kaavan (XLII) mukaisen yhdisteen saamiseksi

NHOH

JkX,> «2N H Λ R6 R5 0 15 R 31 000J-\i r3200C-(^0 oh no29 K (XLII) 20 jossa R5, R6, R29, R31 ja R32 on määritelty kuten edellä, joka on kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa R7 on NR10,Rn, jossa R10 on vety ja R11 OH-ryhmä, R8 on NH2-ryhmä ja R31OOC ja R32OOC on R3 vast. R*, R29 on R2 ja R1 on OH-* 25 ryhmä, menetelmävaihtoehdossa d) alkoksi- tai aralkyylioksiryhmä -OR30 kaavan (XLI) mukaisessa yhdisteessä 30 korvataan vetyatomilla käsittelemällä yhdistettä aktiivisella metallilla liuottimen läsnäollessa (ja toivottaessa karboksia suojaavat ryhmät poistetaan ja/tai ne muunnetaan amideiksi ja/tai ne muunnetaan suoloiksi ja/tai muuksi karboksia suojaavaksi yhdisteeksi) 35 jolloin saadaan toivottu kaavan (XLIV) mukainen yhdiste li 15 94133 nh2 Γχ> h2n^n^n R5 R5 fl 10 r3iooc ) Vy R32°0C^9° 0H (XLIV) 15 joka on muuten samanlainen kaavan (I) mukainen yhdiste kuin yhdiste (XLII) paitsi, että R7 on NH2-ryhmä, 20 haluttaessa kaavan (XLIV) mukainen yhdiste muutetaan kaavan (XLVIII) mukaiseksi monohydroksiyhdisteeksi tai kaavan (XLIX) mukaiseksi dihydrok-siyhdisteeksi antamalla sen reagoida diatsoyhdisteen tai triatseeniyhdis-teen kanssa * 25 H«2

ajO

30 HO N " R6 R5 0

35 R32OOC—OH

XR29 (XLVIII) 16 94133 joka muuten on samanlainen kaavan (I) mukainen yhdiste kuin (XLIV), mutta R8 on OH-ryhmä,

OH

1 E > R6 R5 ^ooc J~K2( R3200C-(S'0 oh r29 (XUX) 15 joka muuten on samanlainen kaavan (I) mukainen yhdiste kuin (XLVIII), mutta R7 on OH-ryhmä, 20 menetelmävaihtoehdossa e) edellä kuvattu kaavan (XLIII) mukaisen yhdisteen annetaan reagoida dimetyyliformamidin asetaalin tai aldehydin kanssa sekä orgaanisen emäksen kanssa 2-asemassa olevan aminoryhmän suojaamiseksi substituoitu-25 neella metyleeniryhmällä kaavan (LVII) mukaisen yhdisteen saamiseksi * HNOR30 a J00 R™ = R6 R5 0 35 "%\Mj

R23OOC—(j0 OH

niJ

K ILYID

17 94133 jossa R5, R6, R22, R23, R29, R30 on määritelty kuten edellä, ja R39 on substituoitunut metyleeniryhmä, sitten haluttaessa alkoksi- tai aralkyylioksiryhmä -OR30 poistetaan 5 aikaisemmin kuvatulla toimenpiteellä, jolloin saadaan kaavan (LVIII) mukainen yhdiste nh2

" ir'V

10 i [ ) r39= R5 R5 0 15 R^OOIW \ y R2300C—0 OH o29 (LVni) 20 jossa R5, R6, R22, R23, R29 ja R39 on määritelty kuten edellä, haluttaessa 6-aminoryhmä voidaan muuttua hydroksiryhmäksi antamalla yhdisteen reagoida nitriitin kanssa aiemmin kuvatun toimenpiteen kaltai-: 25 sesti, jolloin saadaan kaavan (LIX) mukainen yhdiste

OH

»^r\\ 30 r39 = H-^N/L'I/

R^QOC —( 0^ QH

\29 (LIX) 18 94133 jossa R5, R6, R29, R31, R32 ja R39 on määritelty kuten edellä, sen jälkeen haluttaessa puriiniemäksessä olevaa 2-aminoryhmää suojaava substituoitunut metyleeniryhmä poistetaan yhdessä molempien karboksia 5 suojaavien ryhmien R31 ja R32 kanssa aiemmin kuvatulla tavalla, jolloin saadaan kaavan (LVI) mukainen yhdiste

OH

l T)

« hH

ΗΟΟΟ^^OH r29 20 joka on kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa R5, R6 on määritelty kuten edellä, R29 on R2, R3 ja R* on karboksyyliryhmiä, R1 on OH-ryhmä, R7 on OH-ryhmä ja R8 on NH2-ryhmä, : 25 sen jälkeen haluttaessa muodostetaan yhdisteen (LVI) suola, esteri tai amidi.

Mikäli R10 ja/tai R11 tarkoittaa alkyyliryhmää, niin kaavan -NR10RU 30 mukainen ryhmä voi olla mono- tai dialkyyliaminoryhmä, erityisesti ·· metyyliamino-, dimetyyliamino-, etyyliamino-, dietyyliamino-, propyyli- amino-, dipropyyliamino-, butyyliamino-, isobutyyliamino-, sek.-butyyli-amino-, t-butyyliamino-, pentyyliamino- ja heksyyliaminoryhmä. Mikäli R10 tarkoittaa aminoalkyyliryhmää, niin tällöin edullisimpia esimerkkejä 35 kaavan -NR10RU mukaisista ryhmistä ovat 2-aminoetyyliamino- ja 3-aminopro-pyyliaminoryhmät.

li 19 94133

Kaavan (I) mukaiset yhdisteet käsittävät kaksi karboksiryhmää, joten ne voivat muodostaa mono- tai di-suoloja sekä mono- tai di-estereitä. Di-suolojen ja di-estereiden tapauksessa suolojen kationiset osat tai este-reiden alkoholiosat voivat olla sama tai eri ryhmä. Käytännössä on kui-5 tenkin kaikkein vaivattominta valmistaa erityisesti sellaisia di-suoloja ja di-esteitä, joissa kaksi kationista osaa tai kaksi alkoholiosaa ovat samoj a.

Esterin alkoholiosan luonteelle ei aseteta mitään erityisiä rajoituksia, 10 kuitenkin edellyttäen, mikäli yhdistettä on tarkoitus käyttää lääkinnällisesti, että se on "farmaseuttisesti hyväksyttävää", mikä tarkoittaa sitä, kuten alan asiantuntija hyvin tietää, ettei se alenna yhdisteen aktiivisuutta tai lisää sen toksisuutta, ei ainakaan asiattoman suuressa määrin, ja että kaikki tavanomaisesti tämän tyyppisille yhdisteille 15 muodostetut esterit voidaan myös muodostaa tämän keksinnön mukaisten yhdisteiden kanssa. Tämäkään rajoitus ei päde, mikäli estereitä ei kuitenkaan ole tarkoitus käyttää lääkinnällisesti (vaan esimerkiksi välituotteina). Esimerkkeinä tällaisista estereistä mainittakoon: Cx-Cg-alkyyliesterit, erityisesti metyyli-, etyyli-, propyyli-, isopropyyli-, 20 butyyli-, isobutyyli- ja t-butyyliesterit; aralkyyliesterit, erityisesti bentsyyli-, p-nitrobentsyyli-, o-nitrobentsyyli-, trifenyylime tyyli-, bis(o-nitrofenyyli)-metyyli-, 9-antryylimetyyli-, 2,4,6-trimetyylibent- . syyli-, p-bromobentsyyli-, p-metoksibentsyyli-, piperonyyli-ja bentshy- dryyliesterit; C1-C6-halogeenialkyyliesterit, joissa voi olla yksi tai : 25 useampia halogeeniatomeja (kuten kloori-, bromi-, fluori- tai jodiatome- ja), aina täydelliseen perhalogenoitumiseen saakka, esimerkiksi 2,2,2-trikloorietyyli-, 2-kloorietyyli-, 2-bromietyyli-, 2-fluorietyyli-, 2- jodietyyli- ja 2,2-dibromietyyliesterit; alkoksimetyyliesterit, missä alkoksiosa on mieluiten Cj-C*,, kuten esimerkiksi me toks ime tyyli-, etoksi-30 metyyli-, propoksimetyyli-, isopropoksimetyyli- ja butoksimetyyliesterit; \ alifaattiset asyylioksialkyyliesterit (erityisesti asyylioksimetyyli- ja asyylioksietyyliesterit), kuten asetoksimetyyli-, propionyylioksimetyy-li-, butyryylioksimetyyli-, pivaloyylioksimetyyli-, 1-asetoksietyyli-, 1-propionyylioksietyyli-, 1-butyryylioksietyyli- ja 1-pivaloyylioksietyyli-35 esterit; (C1-Cil-alkyyli)oksikarbonyylioksiet}ryliesterit, kuten 1-metok-sikarbonyylioksietyyli-, 1-etoksikarbonyylioksietyyli- , 1-propoksikarbo- 94153 20 nyylioksietyyli-, 1-isopropoksikarbonyylioksietyyli-, 1-butoksikarbonyy-lioksietyyli- ja 1-isobutoksikarbonyylioksietyyliesterit; heterosykliset esterit, kuten ftalidyyliesterit; heterosyklyyli-metyyliesterit (joissa heterosyklinen ryhmä on mieluiten ryhmä R9 yhteydessä esitetyn mukainen), 5 esimerkiksi (5-metyyli-2-okso-l,3-dioksolen-4-yyli)metyyliesterit; sekä esterit, jotka hydrolysoituvat helposti in vivo, joka luokka käsittää eräitä estereitä edellä luetelluista luokista [esimerkiksi alifaattiset asyylioksialkyyliesterit, alemmat alkoksikarbonyylioksietyyliesterit, (5-metyyli-2-okso-l,3-dioksolen-4-yyli)metyyliesterit sekä ftalidyylieste-10 rit].

Kationien, joilla muodostetaan suola keksinnön mukaisten yhdisteiden kanssa, luonteelle ei aseteta mitään erityisiä rajoituksia, kuitenkin edellyttäen, mikäli yhdistettä on tarkoitus käyttää lääkinnällisesti, 15 että nämä kationit ovat farmaseuttisesti hyväksyttäviä. Jälleen, mikäli suoloja ei kuitenkaan käytetä lääkinnällisesti (vaan esimerkiksi välituotteina), niin tällöin tämäkään rajoitus ei päde. Edullisia suoloja ovat esimerkiksi alkalimetallien suolat (kuten natriumin tai kaliumin suolat) tai maa-alkalimetallien suolat (kuten kalsiumin suolat).

20

Mikäli jompikumpi tai molemmat ryhmistä R7 ja R8 tarkoittaa aminoryhmää, niin tällöin keksinnön mukaiset yhdisteet muodostavat myös happoaddi-tiosuoloja. Näiden suolojen muodostamiseen käytetyn hapon luonne ei ole kriittinen, kuitenkin edellyttäen, mikäli niitä on tarkoitus käyttää ' 25 lääkinnällisesti, että kyseiset hapot ovat farmaseuttisesti hyväksyttä viä. Jälleen, mikäli happoadditiosuoloja ei käytetä lääkinnällisesti (vaan esimerkiksi välituotteena), niin tällöin tämäkään rajoitus ei päde. Esimerkkeinä tällaisista hapoista mainittakoon: epäorgaaniset hapot, kuten hydrokloorihappo, rikkihappo ja fosforihappo; orgaaniset karboksyy-30 lihapot, kuten etikkahappo, oksaalihappo, maleiinihappo, meripihkahappo, sitruunahappo, viinihappo, fumaarihappo, lauriinihappo, steariinihappo ja palmitiinihappo; sekä eräät orgaaniset sulfonihapot kuten metaanisul-fonihappo, bentseenisulfonihappo ja p-tolueenisulfonihappo.

35 Tämän keksinnön mukaisten yhdisteiden molekyyleissä on monia asymmetrisiä hiiliatomeja, joten ne voivat esiintyä lukuisina steroisomeereinä. Tämän 9 21 94 I 33 keksinnön puitteisiin kuuluvat sekä erilliset eristetyt isomeerit että näiden isomeerien seokset. Luonnontuotteena griseoliinihappo on yksi ainoa isomeeri, jossa sekä 2'- että 7'-hiiliatomit ovat R-konfiguraatios-sa; griseoliinihaposta valmistetut yhdisteet voivat säilyttää tämän saman 5 konfiguraation, tai niissä konfiguraatio voi olla päinvastainen yhdessä tai useammassa asymmetrisessä hiiliatomissa. Esimerkiksi, kun R1 on muu ryhmä tai atomi kuin vety, niin yhdisteiden konfiguraatio 2'-asemassa voi olla a tai β. Kun R2 tarkoittaa muuta ryhmää tai atomia kuin vetyä, niin konfiguraation 7'-asemassa voi olla RS, R, tai S.

10

Edullisia yhdisteitä ovat 6-desamino-6-hydroksi-2-amino-2-dehydro-4',5'-dihydrogriseoliinihappo tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola tai esteri ja 2-amino-6-desamino-6-hydroksigriseoliinihappo tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola tai esteri.

15

Keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa seuraavissa reaktio-kaavioissa kuvatulla tavalla: 20 1 .

22 94133

νη2 I

ί ιΓν> "Ct"> vai hei

HOOC /=W r22°0Cv/“O

HOOC-C0 oh R23OOC—0R2t OH OR211 (Δ) <x' | vaihe** lfvaihe2 [<Vs ΠΛ

kKiV

r22ooc /=W ^ζΊ-Yj r%c-C° or50 r23ooc—y o 0R2t no 51 OR^ UK (XI) (XIII) [ 1 ,

: . vaiheJ

vaihe 5 1 ά:> 6ο r22°°cs/==5—/ r22°qc,o / R23ooc-C"0'^ or50 R^ooc-VJ'or21· 'm 0R‘“ (XIV) (XII)

II

94133 iio , vai he 6 " vaihe / (XIV) -- H H X n r22°°ccMiv

R2300C—OR50 H

(XV) 1 ¥h2 uc‘> rY> : S^»7 ^N-^N7 vaihe 8 "22°%Γίν H00CnT^Ö

R2300C—0RS0 HOOC-O^OH

H , H (XVF) (8) 24 94133

ON

[f\ S.» a f [X .»i a tpj.

r22ooc I—\ 7 r22°0C V)_/ l^0C-< 0 0«M R23ooc_Ao^r2, NR2a R2a (XVII) (XVIII) χΐ .λΧ> vaihe 10 * r6 r5

r22ooc J'V'S

.»ooc-Co^lx^ 1X1X1 R2a vaihe n / Vihe 12

N

ry> rV> X2'^%5K'^N/ χ2/^Ι|·'^Ν R6 R5 n R6 R5 n HOOC7~t/

HOOC-^J OH HOOC-^O OH

R29 (yy> R29 (χχ) (XXI)

II

25 941 33 x I T> vaihe 13 γΙ^Κ^» (XVIII) ——- R6 R5 fl

R220 0C^~W

R23mc-T° or2** R2a (XXII) vaihe 15 j vaihe Ί xX"> Ä) R6 R5 0 R6 R5 g r22°oc J~\y hooctO-7

R2300C—?40 OR21, H00c_(^,0 OH

'R2a R 29 (XXIV) ,xxim

H

nAtS

X^N^11 vaihe^ r6 r5 mcSi HOOC-( 0 OH R29 " (XXY) 94133 v1 2 l Τ>

Y2^V^H

IX VIIII liliilL 8 5 „ l_Vn ,χχϋ!1 R 00CnC \ / R23OOC-(No 0R2t R2a

vaihelQ

γΐ 1 I > R6 r5 I**».·! HOOc/Xj

HOOCA^q° OH

ll » « 27 94133 NH2 NHj e):) co ” vaihe 19 N ^ f f 0 ” R6 R5 n ruml \ y r22ooc )—y R2300C—0R2i1 Β23οοο-Λο^η

R^a \r29 ÖH

IXXVI1!) (XXIXJ

( 2a 94133 NN2 o f 1¾ ft> ' N vaihe 20 N " R6 R5 R6 n5 „

a«vHj '!!tttÄY

rtoC-P" 0» A «-C* » \ 7q nZ3 R/13 " /yvv] (XXIX) 11

30 HH

N«^Vv L i > vaihe 21 . . vaihe 22 -- R6 R5 . -~

r22o°c J^W

r23ooc-\'° oh „29 IXXXI) ,n HHZ 1h2 Κ,*Χ>

R6 R5 . f f O

R%C J"~W R31 °0CV^Y

· R3200C-^S° oh 03200C-^0 oh R29 (XXXII) R (XXXIII)

II

29 941 33 hh2

HO—H

vaihe JL vaihe 2 5 (XXXII) -- c - -- R6 R5 0 r31oqc^ / y i r32°0C Ö29° 0H * 9 (XXXIV) nh2 R33nh ϊ ιΓ"> fV> ·ΛΛ·; „„ R6 R5 r6 r5

R%0 r31°oc HQ

r32OOC-('0'^OH R3200C-(O OH

fj 29 R29 IXXXVI (XXXVI) R55 fV> HSx^!K'>^n vaihe 27 R6 R5· g R3200C—ς 0 OH R29 , (XXXVII) 30 941 33 >\ © ΥΘ

η-ΗΗ X

Oio vaihe 28 ς „C vaihe 29 IXXX1-- R“ Rs Q --

r22»ocKJ

R2300C—OH R29 (XXXVHI1 0 HHCN r300 ¢0 Co vaihe 30 □6 o5 -"· R6 R5 n R^OOC 2R32°°SÖw

R^OOD-C0 OH R 00CH ° OH

r29 R29 IXXXIXI (XL) • «

II

94133

NHOR30 NHOH

Η2Ν^Ν^^ vaihe 31 vai he 32 IXU ~ f f 0 “ R6 R5 g

r31oocs/~W

R32°0C—Co0 0H R3200C—OH

R (XLI) r29 (XLII) vaihe 33 XSs\s^^ NHOR30 I I ^ η^^Ντ^ν7 vaihe3i R6 R5 0 R%>n nh2 r23°0C>° « [ If\ UUI1) h^^h^n7 ; r6 r5 n r31°°c J~Xj

R32°0C_y9° 0H

" (XLJV) 32 94133 R33* OR30 NHOR30 "Λλ vaihe 35 H2N^5sN/^'n Η2Ν'^%;η·^'η (XLII-- R6 r5 + R6 R5

r22°0C^“W R2200C sJ~W

r23ooc-\1° oh r23ooc-{^0 oh ^R33 (XL11I) ^29 (XLV1)

Znh2 :· R6 R5 0 R3100Cn7 \ ! R3200C^°^1h r29 (XLIV)

II

35 941 33

f* OH

N ιΤΛ vaihe 37 H ** ΗΟ'^^'Η'^^Ν^

(XLIVI -- + «O N

f f o r6 r5 R3100C/M^)

R3Z00C—Os0 0H

v ΙΧΙΜΠ) r29 IXLIX)

/ X /W38 rYS

ho^n^n7 r6 r5 ^ IL) R31oocNy \_y

OH

R29 r35 rV> ': ho^n^n7 vaihe 3 9 ~ R6 R5 0 iL11 i»m) K_2/ R^OOC—<^0 oh R29 94133 r33\ Jr3° xit

38 JUO

R36,N^S^N

vaihe AQ 2Π π

(XLVI) -— . e v.a.1he LJ

R R 0 r31ooc )—I y r3200C-(^0^ Jr37 fl38

I LID

HNOR30 NH2 r36v II) 1 L >

„36_N-\>V

Her vaihe L2 Nu vaihe L1 HK r6 f 0 —~ r31°°cI-W R3100cJ I / R3200C^I0 0R37a r 3200c_A(K gp37a R38a h i,n No38a IUII) κ (UV)

RH OH

rV> ]^V\

r35 Νχ XN N

H vaihe LL

f tK “ r6 r5 n R3100cJ~V y HOOC\ !

r32°0c*v)0 0R37a H00C-( 0 OH

1,363 ILV) r29 (LVI) 94133 HNOR30 1 1 > r39= (xliii) va-^i- c R6 R5 r22°0Cn/ t) r23ooc-0° oh

niJ

ILVID

f OH

{ |p\ N<!iSr\ R39= β39 = νΛ,νΑ„/ 05 p5 V3<hei>7 c r L_t0\ r6 r5 n v ”*-£' » Ak-C«M· ™ b® llK,

OH

A'y .......

"* r6 r5 -ILVD

~07 "*V « 94133 R^NOR30 iV> vaihe/,9 H2N/^N^N vajh (XLIII) -- -±i- R6 R5 g R^OOCvV X ! R2300C-(^ 0 1r37 rj38 R (LXI) R37NH r37nh 1 I > | \ hoAA/ vaihe 51 f f 0 ” R6 R5 n r3i°°c ntXv r3iooc j~\y

At-Ci! 1,3,1 At-C' "I31* (LXII) r ILXIII) vaihe 52 -— (XLV1II) li 37 941 33 rV> ,lv, vaihe53 R36-»^^» R6 R5 - r31o°c } R3W-( R^ nR37a o38a (LXIV) „35 rV> r36_

vaihe SL

R6 r5 g r31°ocn/— R32OOC-\ 0 OR373 p38a (LXV) 5β 94133 νη2 aX‘> rY> ,ΧΠνΓϋΜϋ + L_t°\ r6 # o

r31°0CV~~W r3100C

r32°ocV' m R (LXVII R29 (LXVII)

//35 S' H

R6 R5 .

R31°0C/W

r320oc—("0 0H

r29 R maxi ii 35 94133

R6 fl5 n A R6 R5 π A

hoocM^J H0°sMl7 HOOC-( 0 OH HOOC—OR50

OH · OH

(LXXI (LXXI) R6 R5 ή vaih^ r22ooc vaihe 59

R2300C-(O or50 OH

[Lxxm R6 R5 0 A

r22ooc ) V_y^ vaihe R2300C-V° OR50 OR51 (LXXII1)

rO R5 0 A R6 R5 A

r22°0Cs/-^O* v,1h* 61 ΗΟΟ£ν/~^-Υ

R2300C—\ 5 OR50 HOOC-\ 0 OH

V2 \si

(LXX IV) (LXX VI

40 941 33

R6 R5 O I

(LXXII) vilhe 62_ Μΰ:Η(Ί vaihe 63| r23OOC-( 0 or50 OR53 (LXXVI)

f f g f RS r5 A

r22°0c'/ y ( vaihe K r22°°c-J \ /

r2300C-(S0 oh rOoOC^O'T.SI

OR53 0R53 (LXXVII) (LXXVIII)

R6 R5 0 A

vaihe 55 R^OQC / \ / vaihe 6 6 (LXXIX)

R6 R5 „ A

HOOC^O^

OH K

(LXXX) 41 94133 κη2 *54nh rY> rV> vaihe 57 R6 R5 q R5 0

r31ooc /—W R^OOC./-W

R3200C-?^0^ \ r32ooc-\ 1“ \ V? R1 \27 R1

(LXXXI) (IXXXIII

94133 42

Edellä esitetyissä kaavoissa: R3-R12 ja a ovat edellä esitettyjen määritelmien mukaiset; 5 R2a tarkoittaa vetyatomia tai suojattua hydroksiryhmää; R22 ja R23 ovat sama tai eri ryhmä, ja kumpikin tarkoittaa karboksia suojaavaa ryhmää; 10 R2* tarkoittaa hydroksia suojaavaa ryhmää; X tarkoittaa halogeeniatomia; R27 tarkoittaa vetyatomia, hydroksiryhmää tai suojattua hydroksiryhmää; 15 R28 tarkoittaa alempaa alkyyliryhmää, esimerkiksi mitä tahansa ryhmän R12 yhteydessä määriteltyä alempaa alkyyliryhmää; XI ja X2 ovat sama tai eri ryhmä, ja kumpikin niistä tarkoittaa halo-20 geeniatomia; R29 tarkoittaa vetyatomia tai hydroksiryhmää; Y1 ja Y2 ovat sama tai eri ryhmä, ja kumpikin niistä tarkoittaa vety-25 atomia, hydroksiryhmää, merkaptoryhmää, aminoryhmää, suojattua amino-ryhmää tai kaavan -SR28 mukaista ryhmää; R30 tarkoittaa alkyyliryhmää tai aralkyyliryhmää; 30 R31 ja R32 ovat sama tai eri ryhmä, ja kumpikin niistä tarkoittaa vetyato mia tai karboksia suojaavaa ryhmää; R33 tarkoittaa vetyatomia, C:-C6-alkyyliryhmää, aralkyyliryhmää, ali-faattista C1-C20-asyyliryhmää tai aromaattista asyyliryhmää, esimerkiksi 35 ryhmää, joka on määritelty edellä ryhmän R10 yhteydessä; 94133 43 r33« tarkoittaa Ci-Cg-alkyyliryhmää tai aralkyyliryhmää; R3* tarkoittaa vetyatomia, Cj-Cg-alkyyliryhmää, alifaattista Cj-C^-asyyliryhmää, aromaattista asyyliryhmää tai aralkyyliryhmää, esimerkiksi ryhmän 5 R9 yhteydessä esitetyn määritelmän mukaista ryhmää, kuitenkin edellyttäen, ettei sekä R33 että R34 tarkoita vetyatomia; R1 tarkoittaa ryhmää, jolla on kaava -OR9, -NR10Rn tai -SR9, esimerkiksi ryhmää, joka on ryhmän R7 yhteydessä esitetyn määritelmän mukainen; 10 R2 tarkoittaa vetyatomia, alifaattista C1-C2o-asyyliryhmää, aromaattista asyyliryhmää tai trialkyylisilyyliryhmää; R37 tarkoittaa alifaattista C1-C2o-asyyliryhmää, aromaattista asyyliryhmää 15 tai trialkyylisilyyliryhmää; R37a tarkoittaa mitä tahansa ryhmän R37 yhteydessä määriteltyä ryhmää tai vetyatomia; 20 R38 tarkoittaa vetyatomia, alifaattista C1-C20-asyylioksiryhmää, aromaat tista asyylioksiryhmää tai trialkyylisilyloksiryhmää; R38a tarkoittaa mitä tahansa ryhmän R38 yhteydessä määriteltyä ryhmää tai hydroksiryhmää; 25 R39 tarkoittaa substituoitunutta metyleeniryhmää (joka on esimerkiksi ryhmien R10 ja R11 yhdessä esittämän substituoituneen metyleeniryhmän yhteydessä esitetyn määritelmän mukainen); 30 Z tarkoittaa hydroksiryhmää tai aminoryhmää; R50 tarkoittaa alifaattista asyyliryhmää, aromaattista asyyliryhmää tai trialkyylisilyyliryhmää; R51 tarkoittaa C1-C6-alkyylisulfonyyliryhmää, Ci-Cg-fluorialkyylisulfo- 2 nyyliryhmää tai aryylisulfonyyliryhmää; 44 94133 R52 tarkoittaa vetyatomia tai halogeeniatomia; R53 tarkoittaa tetrahydropyranyyliryhmää tai trialkyylisilyyliryhmää (joka on esimerkiksi ryhmän R9 yhteydessä esitetyn määritelmän mukainen); 5 R54 tarkoittaa Cj-Ce-alkyyliryhmää; ja R55 tarkoittaa hydroksiryhmää, halogeeniatomia, hydratsiinoryhmää, subs-tituoitunutta aminoryhmää, substituoituneella metyleeniryhmällä suojattua 10 aminoryhmää tai edellä määriteltyjen kaavojen -OR9 tai -SR9 mukaista ryhmää.

Näissä reaktiokaavioissa lähtömateriaalina käytetään joko kaavan (A) mukaista griseoliinihappoa, tai kaavan (B) mukaista dihydrodesoksi-15 griseoliinihappoa, kaavojen (A) ja (B) ollessa seuraavat: nh2 20 , Xs [ L /' 3 : 25

8i sLjyX

HOOC Π \ rl ΛΗ2'

3o HOOC—U7 0 OH

9l N0H

UI

II

35 94133 45 kh2

nrS

HOOC ' 0 <„

13 fBI

Edellä esitettyyn griseoliinihapon kaavaan (Ä) on selvyyden vuoksi merkitty näkyviin numerointijärjestelmä, jota käytetään kaikkialla tässä julkaisussa.

20

Kuten jo edellä mainittiin, griseoliinihappo on tunnettu yhdiste, joka esitetään esimerkiksi eurooppalaisessa patenttijulkaisussa no 29 329 tai US-patenttijulkaisussa no 4 460 765. Dihydrodesoksigriseoliinihappo esitettiin eurooppalaisessa patenttijulkaisussa no 0162715, julkaistu • 25 oheisen hakemuksen jättöpäivän jälkeen. Sekä griseoliinihappoa että dihydrodesoksigriseoliinihappoa voidaan tuottaa viljelemällä sopivia Streptomyces-suvun mikro-organismeja, erityisesti Streotomvces gri-seoaurantiacus-bakteerin kantaa SANK 63479 (tallennettu lokakuun 9. pnä 1979 kantakokoelmaan "Fermentation Research Institute" , Agency of Indust-30 rial Science and Technology, Japani, josta se on saatavissa tunnusnumerolla FERM-P5223, sekä lokakuun 22. pnä 1980 kantakokoelmaan "Agricultural Research Service", Peoria, USA, josta se on saatavissa tunnusnumerolla NRRL 12314). Yksityiskohtia Strentomvces griseoaurantiacus-kannan SANK 63479 tunnusomaisista piirteistä esitetään eurooppalaisessa patenttijul-35 kaisussa no 29 329A sekä US-patenttijulkaisussa no 4 460 765.

46 94133

Vaihe 1 Tässä vaiheessa griseoliinihapon (A) annetaan reagoida siten, että sen hydroksi- ja karboksiryhmät saadaan suojatuiksi. Käytettävän reaktion 5 luonne riippuu toivottujen suojaavien ryhmien luonteesta, ja seuraavien reaktioiden on tarkoitus pelkästään havainnollistaa tätä vaihetta. Luonnollisestikin on selvää, että tässä vaiheessa voidaan käyttää yhtä hyvin mitä tahansa muuta sellaista alalla tunnettua reaktiota, jolla karboksiryhmät tai hydroksiryhmät saadaan suojatuiksi.

10

Karboksiryhmien suojaamiseksi griseoliinihapon (A) annetaan mieluiten reagoida diatsoyhdisteen, esimerkiksi diatsometaanin tai difenyylidiatso-metaanin, kanssa, tai triatseeniyhdisteen, erityisesti j>-tolyylitriatsee-nin johdannaisen, kuten N-metyyli-j>-tolyylitriatseenin, kanssa. Reaktio 15 toteutetaan mieluiten liuottimen läsnäollessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, edellyttäen, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon, ja edellyttäen, että lähtöaineet voidaan liuottaa tähän liuottimeen, vähintään jossain määrin. Sopivia liuottimia ovat esimerkiksi: ketonit, kuten asetoni; eetterit, kuten tetrahydrofuraani; amidit, kuten dimetyyliforma-20 midi; sekä seokset, jotka käsittävät vettä ja yhtä tai useampaa edellä mainittua orgaanista liuotinta. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella, ja erityisesti valittu reaktiolämpötila ei ole kriittinen, vaikka yleensä onkin edullista, että reaktio toteutetaan -20 - +50°C:n lämpötilassa. Reaktioon tarvittava aika vaihtelee, monista 25 tekijöistä riippuen, erityisesti lähtöaineiden luonteesta ja reaktion lämpötilasta; kuitenkin esimerkiksi huoneen lämpötilassa reaktioon kuluu tavallisesti 1-24 tunnin pituinen ajanjakso.

Griseoliinihapon hydroksiryhmät suojataan samoin, joko ennen karboksi-30 ryhmien suojaamista, tai sen jälkeen. Tämä voidaan toteuttaa esimerkiksi antamalla griseoliinihapon, tai karboksiryhmistään suojatun griseoliinihapon, reagoida happohalogenidin, kuten asetyylikloridin tai bentsoyyli-bromidin, kanssa, tai happoanhydridin, kuten asetanhydridin, kanssa emäksen läsnäollessa. Reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen läsnä-35 ollessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, edellyttäen, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon. Yleisesti ottaen on edullista käyttää

II

94133 47 pyridiiniä, joka toimii samalla emäksenä. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella, ja erityisesti valittu reaktion lämpötila ei ole kriittinen; yleensä reaktio on kuitenkin edullista toteuttaa lämpötilassa, joka on -20°C:sta huoneen lämpötilaan. Reaktioon tarvittava aika 5 vaihtelee huomattavasti, monista tekijöistä riippuen, erityisesti rea-genssien luonteen ja reaktion lämpötilan mukaan; kuitenkin, kun reaktio toteutetaan mainitulla lämpötila-alueella, niin tällöin 1-15 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittävä.

10 Toivottaessa aminoryhmä griseoliinihapon 6-asemassa muutetaan samoin hydroksiryhmäksi. Tämä toteutetaan mieluiten siten, että griseoliinihapon, tai suojatun griseoliinihapon annetaan reagoida typpihapokkeen suolan, esimerkiksi natriumnitriitin, kanssa, etikkahapon läsnäollessa. Reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen läsnäollessa, jonka liuottimen 15 luonne ei ole kriittinen, ja näin ollen tavallisesti käytetään mieluiten etikkahapon vesiliuosta. Mikäli lähtömateriaali on niukkaliukoista, niin tällöin voidaan käyttää etikkahappopuskuria, jonka pH on noin 4. Tämä reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella, vaikkakin tavallisesti reaktio toteutetaan mukavuussyistä huoneen lämpötilassa. Reaktioon 20 tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijöistä, erityisesti reagenssien luonteesta ja reaktiossa käytetystä lämpötilasta; kuitenkin mainitussa lämpötilassa 15-50 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittävä.

25 Vaihe 2 Tässä vaiheessa vetyhalogenidi liitetään kaavan (X) mukaisessa griseoliinihapon johdannaisessa olevan kaksoissidoksen molemmin puolin, jolloin saadaan kaavan (XI) mukainen yhdiste. Tässä reaktiossa käytetyn 30 vetyhalogenidin H-X luonne riippuu liitettäväksi toivotun halogeeniatomin X luonteesta, mutta yleisesti reaktiossa on edullista käyttää kloorivety-happoa, bromivetyhappoa tai jodivetyhappoa. Reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen läsnäollessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, edellyttäen, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon, ja että lähtöaineet 35 voidaan liuottaa siihen, ainakin jossain määrin. Esimerkkinä sopivasta liuottimesta mainittakoon orgaaninen happo, kuten etikkahappo. Reaktio 94133 48 voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella, esimerkiksi 0-100°C:n lämpötilassa, vaikka yleisesti ottaen reaktio voidaan toteuttaa vaivattomasti joko lämpötilassa, joka on 0°C:sta huoneen lämpötilaan, tai kuumentamalla reaktioseosta alueella 80-100°C olevassa lämpötilassa. Reaktioon 5 tarvittu aika vaihtelee huomattavasti, riippuen monista tekijöistä, erityisesti reaktion lämpötilasta ja liuottimen ja reagenssien luonteesta, mutta 1-72 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittävä.

Vaihe 3 10 Tässä vaiheessa vaiheessa 2 liitetty halogeeniatomi X kaavan (XI) mukaisen yhdisteen 4'-asemassa poistetaan pelkistämällä. Pelkistimenä käytetään mieluiten joko trisubstituoitunutta tinahydridiä, kuten tributyy-litinahydridiä, aromaattisessa hiilivetyliuottimessa, kuten bentseenissä, 15 tai sinkkijauhetta, jonka tapauksessa liuottimena käytetään mieluiten alempaa alifaattista happoa, kuten etikkahappoa, tai alkoholia, kuten metanolia tai etanolia. Mikäli pelkistävänä aineena käytetään trisubstituoitunutta tinahydridiä, niin tällöin reaktio toteutetaan mieluiten suurin piirtein liuottimen kiehumislämpötilassa, ja tällöin reaktioon 20 tarvittu aika on tavallisesti 2-10 tuntia. Mikäli pelkistimenä käytetään sinkkijauhetta, niin tällöin reaktio toteutetaan lämpötilassa, joka on huoneen lämpötilasta 100°C:een, ja reaktioon tarvittu aika on yleensä 2-20 tuntia.

25 Vaihe 4 Tässä vaiheessa kaavan (A) mukainen griseoliinihappo muunnetaan johdan-naisekseen, jolla on kaava (XIII).

30 2'-asemassa oleva hydroksiryhmä voidaan suojata antamalla griseoliini- . hapon reagoida asyloivan aineen kanssa, esimerkiksi myös vaiheessa 1 kuvatulla tavalla, jolloin asyyliryhmä R50 saadaan liitetyksi, ja tämän jälkeen griseoliinihapon karboksiryhmät voidaan myös suojata. Toivottaessa griseoliinihapon 6-aminoryhmä voidaan muuntaa hydroksiryhmäksi 35 asianmukaisia, vaiheessa 1 kuvattuja reaktioita käyttäen, ja tämä muun- «

II

94133 49 nosreaktio voidaan toteuttaa joko ennen edellä mainittuja suojaamisvai-heita tai niiden jälkeen.

7'-aseman hydroksiryhmä muunnetaan sulfonyylioksiryhmäksi -OR51 antamalla 5 yhdisteen reagoida sulfonyloivan aineen kanssa, joista mainittakoon alemmat alkyylisulfonyylihalogenidit (kuten metaanisulfonyylikloridi), aryylisulfonyylihalogenidit (kuten £-tolueenisulfonyylikloridi) tai fluoratut alemmat alkyylisulfonyylihalogenidit (kuten trifluorime-taanisulfonyylikloridi). Reaktio toteutetaan mieluiten happoa sitovan 10 aineen läsnäollessa, jonka happoa sitovan aineen tehtävänä on poistaa reaktion väliaineesta tässä reaktiossa vapautuva halogeenivety. Sopivia happoa sitovia aineita ovat pyridiini ja dimetyyliaminopyridiini. Reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen läsnäollessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, edellyttäen, ettei se vaikuta millään tavalla haitalli-15 sesti reaktioon. Sopivista liuottimista mainittakoon halogenoidut hiilivedyt, erityisesti halogenoidut alifaattiset hiilivedyt, kuten mety-leenikloridi tai kloroformi. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella, ja täsmälliselle valitulle lämpötilalle ei aseteta mitään rajoituksia; mukavuussyistä reaktio toteutetaan kuitenkin yleensä lämpö-20 tilassa, joka on -10°C:sta huoneen lämpötilaan. Reaktioon tarvittava aika vaihtelee huomattavasti, riippuen monista tekijöistä, erityisesti reaktion lämpötilasta sekä reagenssien luonteesta; kuitenkin 1-20 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittävä.

25 Vaihe 5 Tässä vaiheessa sulfonyylioksiryhmä kaavan (XIII) mukaisen yhdisteen 7’-asemassa korvataan halogeeniatomilla (antamalla mainitun yhdisteen reagoida vedettömän litiumhalogenidin kanssa happamassa amidissa, kuten 30 dimetyyliformamidissa) ja sitten vetyatomilla (pelkistävän aineen avulla).

Ensiksi mainittu reaktio toteutetaan mieluiten menetelmällä, joka kuvataan jäljempänä esitettävässä vaiheessa 60.

35 94133 50

Pelkistävä aine on mieluiten sinkki etikkahapon vesiliuoksessa, jolloin itse etikkahapon vesiliuos voi toimia reaktion liuottimena. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella, esimerkiksi 0-150°C:n lämpötiloissa, ja reaktioon tarvittava aika, joka vaihtelee huomattavas-5 ti, on tavallisesti 1-10 tuntia.

Vaiheet 6 ia 7 Näissä vaiheissa vaiheessa 5 kuvatulla tavalla valmistetun, kaavan (XIV) 10 mukaisen yhdisteen annetaan ensin reagoida vetyhalogenidin kanssa, jolloin saadaan valmistetuksi kaavan (XV) mukainen yhdiste, ja sitten tämä kaavan (XV) mukainen yhdiste pelkistetään, jolloin saadaan kaavan (XVI) mukainen yhdiste. Näissä vaiheissa toteutetut reaktiot ovat täsmälleen samat, kuin edellä vaiheiden 2 ja 3 yhteydessä kuvatut reaktiot, ja ne 15 voidaan toteuttaa samoja reagensseja ja samoja reaktio-olosuhteita käyttäen.

Vaihe 8 20 Tässä vaiheessa suojataan kaavan (B) mukaisen dihydrodesoksigriseoliini-hapon karboksi- ja hydroksiryhmät, ja valinnaisesti sen 6-aminoryhmä muunnetaan hydroksiryhmäksi. Nämä reaktiot ovat täsmälleen samat, kuin vaiheen 1 yhteydessä esitetyt reaktiot, ja ne voidaan toteuttaa samoja reagensseja käyttäen, samoissa reaktio-olosuhteissa.

25

Vaihe 9 Tässä vaiheessa käytetty lähtömateriaali, kaavan (XVII) mukainen yhdiste, voi olla mikä tahansa edellä kuvatulla tavalla valmistetuista, kaavan 30 (XII) tai (XVI) mukaisista yhdisteistä. Tässä vaiheessa 1'-asemassa sijaitseva nukleiinihappoemäs muunnetaan a lkanoyy li oksi ryhmäksi antamalla kaavan (XVII) mukaisen yhdisteen reagoida (i) rikkihapon tai trifluorime-taanisulfonihapon kanssa, (ii) alemman karboksyylihapon kanssa, ja (iii) sen anhydridin kanssa. Reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen läsnäol-35 lessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, edellyttäen, ettei se vaikuta millään tavalla haitallisesti reaktioon, ja että reagenssit ♦

II

51 94133 liukenevat siihen, edes jossain määrin. Edullisimpia liuottimia ovat alemmat alifaattiset karboksyylihapot, jotka toimivat samalla reagenssi-na. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella, esimerkiksi 0-100°C:n lämpötilassa; yleisesti ottaen, reaktio toteutetaan mieluiten joko 5 lämpötilassa, joka on 0°C:sta huoneen lämpötilaan, tai lämmittämällä reaktioseosta 80-100°C:n lämpötilassa. Reaktioon tarvittava aika vaihte-lee, riippuen monista tekijöistä, erityisesti reaktiossa käytettävästä liuottimesta ja reaktion lämpötilasta, mutta tavallisesti 1-72 tunnin pituinen ajanjakso on riittävä.

10

Vaihe 10 Tässä vaiheessa, vaiheessa 9 kuvatulla tavalla valmistettu sokerijohdan-naisella (XVIII) toteutetaan glykosidaatioreaktio antamalla yhdisteen 15 (XVIII) reagoida trimetyylisilyloidun nukleiinihappoemäksen kanssa, katalyyttinä toimivan Lewis:in hapon läsnäollessa, käyttäen tavanomaisia menetelmiä, jotka kuvataan esimerkiksi julkaisuissa S. Suzaki et ai. , [Chem. Pharm. Bull., 18, 172 (1970)] tai H. Vorbrueggen et ai., [Chem. Ber., 106. 3039 (197)], jolloin saadaan kaavan (XIX) mukainen yhdiste.

20 Käytetty nukleiinihappoemäs on puriinin johdannainen, joka vastaa liitettäväksi toivottua, nukleiinihappoemäksen muodostamaa osaa, ja se on voitu trimetyylisilyloida tavanomaisilla menetelmillä, jotka kuvataan julkaisussa A.E. Pierce et ai., [Silylation of Organic Compounds, 434 (1968)]. 25

Glykosidaatioreaktiossa käytetyn Lewis:in hapon luonteelle ei aseteta mitään erityisiä vaatimuksia, ja esimerkkeinä sopivista Lewis:in hapoista on tinatetrakloridi tai trimetyylisilyyli-trifluorimetaanisulfonaatti. Reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen läsnäollessa, jonka liuottimen 30 luonne ei ole kriittinen, edellyttäen, ettei sillä ole haitallista vaikutusta reaktioon. Sopivia liuottimia ovat polaariset liuottimet, kuten 1,2-dikloorietaani tai asetonitriili. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella, ja valittu täsmällinen reaktiolämpötila ei ole erityisen kriittinen. Tavallisesti reaktio toteutetaan mieluiten 35 lämpötilassa, joka on huoneen lämpötilasta 150°C:een. Reaktioon tarvittu aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijöistä, erityi- t 94133 52 sesti reagenssien luonteesta sekä reaktion lämpötilasta; kuitenkin mainitulla alueella olevissa lämpötiloissa 24-72 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittävä.

5 Mikäli silyloitavassa nukleiinihappoemäksessä oleva substituentti on hydroksiryhmä, merkaptoryhmä, alkyylitioryhmä, halogeeniatomi tai vety-atomi, niin nukleiinihappoemäs silyloituu suoraan. Mikäli nukleiinihappoemäksessä on aminosubstituentti, niin tämä aminosubstituentti tulisi ensin mielellään suojata asyloimalla, ennen silylointia. 7- tai 9-asemas-10 ta substituoituneiden isomeerien saantojen välinen suhde vaihtelee reaktiolämpötilasta riippuen. Esimerkiksi huoneen lämpötilassa bistrime-tyylisilyyli-N2-asetyyliguaniiniä käyttäen toteutettu glykosidaatio tuottaa enemmän 7-asemastaan substituoitunutta yhdistettä kuin 9-asemas-taan substituoitunutta yhdistettä. Toisaalta sama reaktio 80°C:n lämpöti-15 lassa toteutettuna tuottaa enemmän 9-isomeeriä kuin 7-isomeeriä.

Vaihe 11 Tässä vaiheessa 2'-asemassa oleva, ja mahdollisesti myöskin 7'-asemassa 20 oleva, asyyliryhmä tai -ryhmät poistetaan vapaiden hydroksiryhmien saamiseksi, ja samoin karboksia suojaavat ryhmät poistetaan. Kaavan (XIX) mukainen yhdiste liuotetaan mieluiten laimeaan alkaliseen vesiliuokseen, esimerkiksi 0,1-1 N alkaliseen vesiliuokseen, mieluiten natriumhydroksi-din tai kaiiumhydroksidin liuokseen, ja seoksen annetaan seisoa suojaavi-; 25 en ryhmien irroittamiseksi. Tämä reaktio voidaan toteuttaa laajoilla lämpötila-alueilla, mutta tavallisesti se toteutetaan kuitenkin vaivatto-mimmin suurin piirtein huoneen lämpötilassa. Reaktioon tarvittava aika saattaa vaihdella huomattavasti, mutta mainitussa lämpötilassa 1-10 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittävä.

30

Vaihe 12 Tässä vaiheessa kaavan (XIX) mukaisella, vaiheessa 10 kuvatusti valmistetulla yhdisteellä suoritetaan reaktio 6-asemassa olevan halogeeniatomin 35 muuntamiseksi selektiivisesti, valinnaisesti substituoituneeksi, merkap-toryhmäksi, joka käsittää alkyyliryhmän, tai vetyatomiksi tai hydroksi-

II

53 94133 ryhmäksi tai aminoryhmäksi tai suojatuksi aminoryhmäksi. Käytetty reaktio voidaan toteuttaa esimerkiksi tavalla, joka on kuvattu julkaisussa L.B. Townsend, [Nucleic Acid Chemistry, 2,693 (1978)], antamalla kaavan (XIX) mukaisen yhdisteen reagoida erilaisten nukleofiilien, kuten natriumbisul-5 fidin, natriumalkaanitiolaatin, natriumhydroksidin, ammoniakin alkoholi -liuoksen, metyyliamiinin tai dimetyyliamiinin, kanssa. Reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen läsnäollessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, edellyttäen, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon. Sopivia liuottimia ovat alemmat alkoholit, kuten metanoli tai etanoli.

10 Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella, vaikka yleensä reaktio toteutetaankin vaivattomimmin lämpötilassa, joka on huoneen lämpötilasta 150°C:een, mieluiten umpinaisessa putkessa. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijöistä, erityisesti nukleofiilin luonteesta ja reaktion lämpötilasta; kuitenkin 15 mainitulla lämpötila-alueella 2-20 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittävä.

Tämä reaktio johtaa tavallisesti suojaavien ryhmien irtoamiseen.

20 Vaihe 13 Tämä on glykosidaatioreaktio, ja se on olennaisesti sama kuin vaiheessa 10 kuvattu reaktio, ja se voidaan toteuttaa samoja reaktio-olosuhteita käyttäen, jolloin saadaan kaavan (XXII) mukainen yhdiste.

; 25

Vaihe 14 Tässä vaiheessa poistetaan hydroksia suojaavat ryhmät ja karboksia suojaavat ryhmät, ja tämä voidaan toteuttaa olennaisesti vaiheessa 11 30 kuvatulla tavalla, samoja reagensseja ja reaktio-olosuhteita käyttäen. Mikäli Y1 tarkoittaa suojattua aminoryhmää, esimerkiksi asetyyliamino-ryhmää, niin suojaava ryhmä voidaan poistaa hydrolyysireaktiolla. Tämä toteutetaan alkalilla, esimerkiksi ammoniakin metanoliliuoksella (mieluiten noin 20-prosenttisella ammoniakin metanoliliuoksella). Reaktio 35 voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella, vaikka reaktio voidaankin yleensä toteuttaa vaivattomimmin noin huoneen lämpötilassa. Reaktion e 94133 54 vaatima aika voi vaihdella huomattavasti; kuitenkin ehdotetussa lämpötilassa 24-50 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittävä.

Vaihe 15 5 Tässä vaiheessa kaavan (XVIII) mukaisen sokerijohdannaisen annetaan reagoida trimetyylisilyloidun nukleiinihappoemäksen kanssa, vaiheessa 10 kuvatun glykosidaatioreaktion mukaisesti, jolloin saadaan kaavan (XXIV) mukainen yhdiste. Reaktio-olosuhteet ja reagenssit ovat olennaisesti 10 samat kuin vaiheessa 10 kuvatussa reaktiossa.

Vaihe 16 Tässä vaiheessa suojaavat ryhmät poistetaan, jolloin saadaan kaavan (XXV) 15 mukainen yhdiste. Tämä reaktio on olennaisesti sama kuin vaiheessa 11 kuvattu reaktio, ja se voidaan toteuttaa samoja reagensseja ja reaktio-olosuhteita käyttäen.

Vaihe 17 20 Tässä vaiheessa kaavan (XVIII) mukaisella sokerijohdannaisella toteutetaan glykosidaatioreaktio antamalla sen reagoida trimetyylisillyloidun nukleiinihappoemäksen kanssa, jolloin saadaan kaavan (XXVI) mukainen yhdiste. Reagenssit ja reaktio-olosuhteet ovat olennaisesti edellä . 25 vaiheessa 10 esitetyn mukaiset.

Vaihe 18 Tässä vaiheessa kaavan (XXVI) mukaisen, vaiheessa 17 valmistetun yhdis-30 teen annetaan reagoida siten, että suojaavat ryhmät saadaan poistetuiksi, jolloin saadaan kaavan (XXVII) mukainen yhdiste. Tarvittavat reaktiot ovat olennaisesti vaiheessa 11 esitettyjen reaktioiden mukaiset, ja ne voidaan toteuttaa käyttäen samoja reagensseja ja reaktio-olosuhteita.

li 35 55

Vaihe 19 94133 Tässä vaiheessa kaavan (XXVIII) mukaisen yhdisteen, joka voi olla mikä tahansa edellä kuvatusti valmistetuista yhdisteistä (X), (XII), (XIV) tai 5 (XVI), suojatuista 2'-hydroksi- ja 7'-hydroksiryhmistä (missä RZa on suojattu hydroksiryhmä) irroitetaan suojaava ryhmä, jolloin saadaan kaavan (XXIX) mukainen yhdiste. Tämä voidaan toteuttaa vaiheessa 11 kuvatulla hydrolyylireaktiolla, ja se voidaan toteuttaa samoissa olosuhteissa ja samoja reagensseja käyttäen, vaikka tällöin huomiota on 10 kuitenkin kiinnitettävä siihen, ettei samalla hydrolysoida karboksia suojaavia ryhmiä. Mikäli ne hydrolysoituvat, niin tällöin ne voidaan palauttaa vaiheessa 1 kuvatulla esteröintimenetelmällä.

Vaihe 20 15 Tässä vaiheessa kaavan (XXIX) mukainen yhdiste muunnetaan kaavan (XXX) mukaiseksi ^-oksidiksi.

Tämä reaktio toteutetaan mieluiten antamalla kaavan (XXIX) mukaisen 20 yhdisteen reagoida peroksidin kanssa, mieluiten liuottimessa. Tässä reaktiossa käytettävän liuottimen luonne ei ole erityisen kriittinen, edellyttäen kuitenkin, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon, ja edellyttäen, että reagenssit voidaan liuottaa siihen, vähintään jossain määrin. Esimerkkeinä edullisista liuottimista mainittakoon alemmat : 25 alkoholit, kuten metanoli ja etanoli. Samoin käytettävän peroksidin luonteelle ei aseteta mitään erityisiä rajoituksia, ja esimerkkeinä mainittakoon vetyperoksidi ja orgaaniset peroksidit, kuten m-kloori-perbentsoehappo. Mieluiten käytetään orgaanisia perhappoja, kutenm-klooriperbentsoehappoa. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-30 alueella, vaikka tavallisesti reaktio toteutetaan mieluummin lämpötilassa, joka on alueella 0-60°C, mieluiten noin huoneen lämpötilassa. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijöistä, erityisesti reaktion lämpötilasta ja reagenssien luonteesta; kuitenkin ehdotetulla lämpötila-alueella 5-48 tunnin pituinen ajanjakso 35 on tavallisesti riittävä.

Vaihe 21 56 94133 Tässä vaiheessa ^-oksidi muunnetaan kaavan (XXXI) mukaiseksi J^-alkoksi-tai N1-aralkyylioksiyhdisteeksi antamalla N1-oksidin (XXX) reagoida 5 alemman alkyylihalogenidin tai aralkyylihalogenidin kanssa orgaanisen emäksen läsnäollessa, ja mieluiten liuottimen läsnäollessa. Käytettävän liuottimen luonne ei ole erityisen kriittinen, edellyttäen, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon, ja edellyttäen, että reagenssit voidaan liuottaa siihen, vähintään jossain määrin. Sopivia liuottimia ovat happo-10 amidit, kuten diroetyyliformamidi tai dimetyyliasetamidi. Sopivia orgaanisia emäksiä ovat trialkyyliamiinit, kuten trietyyliamiini. Halogenidin luonteelle ei aseteta mitään erityisiä rajoituksia, kuitenkin edellyttäen, että se kykenee alkyloimaan tai aralkyloimaan hydroksiryhmän. Sopivia alempia alkyylihalogenideja ovat metyylijodidi, ja sopivia alempia aral-15 kyylihalogenideja ovat esimerkiksi bentsyylibromidi ja E*nitr°bentsyyli-bromidi. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella, vaikka reaktio voidaankin tavallisesti toteuttaa vaivattomasti alueella 0-100°C olevissa lämpötiloissa, mieluummin noin huoneen lämpötilassa. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijöistä, 20 erityisesti reagenssien luonteesta ja reaktion lämpötilasta; kuitenkin 1-20 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittävä.

Vaihe 22 25 Tässä vaiheessa valmistetaan kaavan (XXXII) mukainen yhdiste reaktiolla, jossa kaavan (XXXI) mukaisen J^-alkoksi- tai N^aralkyylioksiyhdisteen rengas aukeaa, mitä seuraa tuloksena olevan formyyliryhmän poistaminen.

Nämä reaktiot toteutetaan mieluiten antamalla kaavan (XXXI) mukaisen 30 yhdisteen reagoida alkalisen vesiliuoksen kanssa. Sopivia aikalisiä vesiliuoksia ovat alkalimetallihydroksidien, kuten natriumhydroksidin, vesiliuokset. Edullinen liuos on natriumhydroksidin 1,5 N vesiliuos. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella, esimerkiksi -10 -+100°C:n lämpötilassa. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomatta-35 vasti, riippuen monista tekijöistä, erityisesti reagenssien luonteesta ja pitoisuudesta sekä reaktion lämpötilasta; kuitenkin ehdotettuja reagens- * 94133 57 seja ja lämpötiloja käyttäen ajanjakso, joka on pituudeltaan 6 minuutista 10 vuorokauteen, on tavallisesti välttämätön. Tämä reaktio poistaa samalla karboksia suojaavat ryhmät R22 ja R23. Näin ollen, mikäli näitä ryhmiä tarvitaan, ne on tämän jälkeen liitettävä uudestaan vaiheessa 1 5 kuvatulla esteröimisreaktiolla. Yleisesti ottaen, myöhemmissä vaiheissa on edullista, että nämä karboksiryhmät on suojattu, joten sekä ryhmän R31 että ryhmän R32 tulisi tarkoittaa karboksia suojaavaa ryhmää.

Vaihe 23 10 Tässä vaiheessa kaavan (XXXII) mukainen yhdiste pelkistetään, jolloin saadaan kaavan (XXXIII) mukainen yhdiste, ja toivottaessa karboksia suojaavat ryhmät poistetaan ja/tai ne muunnetaan amideiksi ja/tai ne muunnetaan suoloiksi ja/tai muiksi karboksia suojaaviksi ryhmiksi.

15

Kaavan (XXXII) mukaisen yhdisteen pelkistäminen siten, että ryhmä -OR30 saadaan poistetuksi, toteutetaan mieluiten käsittelemällä yhdistettä aktiivisella metallilla liuottimen läsnäollessa. Liuottimen luonne ei ole erityisen kriittinen, edellyttäen, ettei se vaikuta haitallisesti reakti-20 oon, ja että se kykenee liuottamaan lähtöaineita vähintään jossain määrin. Sopivia liuottimia ovat seokset, jotka käsittävät jonkin hapon laimeata vesiliuosta, kuten kloorivetyhapon laimeata vesiliuosta, sekä veteen sekoittuvaa orgaanista liuotinta, kuten asetonia. Edullinen liuotin on seos, joka käsittää yhtä suuret tilavuudet kloorivetyhapon IN 25 vesiliuosta ja asetonia. Käytetyn aktiivisen metallin luonteelle ei myöskään aseteta mitään erityisiä rajoituksia, edellyttäen, että sitä voidaan käyttää sellaisessa pelkistämisreaktiossa, jossa happo toimii protonin luovuttajana. Aktiivisena metallina käytetään mieluiten Raney-nikkeliä. Tämä reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella, 30 vaikka yleensä reaktio voidaankin toteuttaa vaivattomimmin alueella 0-50°C olevissa lämpötiloissa. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijöistä, erityisesti reagenssien luonteesta ja reaktion lämpötilasta; kuitenkin edellä ehdotetuissa olosuhteissa 1-10 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittävä.

35 94133 58

Suojaavat ryhmät voidaan poistaa toivottaessa, jolloin poistamiseen käytetyn reaktion luonne riippuu suojaavien ryhmien luonteesta, kuten alalla hyvin tunnetaan.

5 Mikäli karboksia suojaavana ryhmänä käytetään alempaa alkyyliryhmää, niin se voidaan poistaa käsittelemällä yhdistettä emäksellä, erityisesti alkalimetallin hydroksidilla, kuten natriumhydroksidillä. Edullista on käyttää alkalimetallihydroksidin vesiliuosta, esimerkiksi natriumhydrok-sidin 1 N vesiliuosta. Reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen läsnä-10 ollessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen keksinnölle, edellyttäen kuitenkin, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon. Yleisesti, vesiliuos on tehokas. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella, vaikka yleensä reaktio voidaankin toteuttaa vaivattomasti suurin piirtein huoneen lämpötilassa. Reaktioon tarvittava aika voi 15 vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijöistä, erityisesti rea-genssien luonteesta ja reaktion lämpötilasta; kuitenkin edellä ehdotetuissa olosuhteissa 1-15 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittävä.

20 Mikäli karboksia suojaava ryhmä on diaryyli-substituoitunut metyyliryhmä, kuten difenyylimetyyliryhmä (eli bentshydryyliryhmä), niin se poistetaan mieluiten happamissa olosuhteissa liuottimen läsnäollessa. Tässä reaktiossa käytetyn liuottimen luonne ei ole erityisen kriittinen, edellyttäen, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon. Esimerkkeinä sopivista 25 liuottimista mainittakoon aromaattiset hiilivedyt ja aromaattiset eetterit, kuten anisoli. Happo on mieluiten fluorattu orgaaninen happo, kuten trifluorietikkahappo. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella, vaikka reaktio voidaankin yleensä toteuttaa vaivattomasti suurin piirtein huoneen lämpötilassa. Reaktioon tarvittava aika saattaa 30 vaihdella huomattavasti, mutta ajanjakso, jonka pituus on 30 minuutista 10 tuntiin, on tavallisesti riittävä.

Mikäli karboksia suojaava ryhmä on aralkyyliryhmä tai alempi halogeeni-alkyyliryhmä, niin tällöin se poistetaan mieluiten pelkistämällä. Edul-35 lisiä pelkistimiä ovat: alempien halogeenialkyyliryhmien tapauksessa sinkki/etikkahapon vesiliuos; ja aralkyyliryhmien tapauksessa vety ja

II

94133 59 katalyytti (kuten hiileen sidottu palladium tai platina) tai alkali-metallin sulfidi (kuten kaliumsulfidi tai natriumsulfidi). Reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen läsnäollessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, kuitenkin edellyttäen, ettei se vaikuta haitallisesti 5 reaktioon. Esimerkkeinä sopivista liuottimista mainittakoon; alkoholit, kuten metanoli tai etanoli; eetterit, kuten tetrahydrofuraani tai diok-saani; rasvahapot, kuten etikkahappo; tai seokset, jotka käsittävät yhtä tai useampaa näistä orgaanisista liuottimista sekä vettä. Reaktioon tarvittava aika ei ole erityisen kriittinen, vaikka tavallisesti reaktio 10 voidaankin toteuttaa edullisesti lämpötilassa, joka on 0°C:sta huoneen lämpötilaan. Tällaisessa lämpötilassa reaktio vaatii tavallisesti ajanjakson, jonka pituus on 5 minuutista 12 tuntiin.

Mikäli karboksia suojaava ryhmä on alkoksimetyyliryhmä, niin se voidaan 15 poistaa käsittelemällä yhdistettä hapolla liuottimessa. Edullisia happoja ovat: kloorivetyhappo; etikkahapon ja rikkihapon välinen seos; tai j>-tolueenisulfonihapon ja etikkahapon välinen seos. Tässä reaktiossa käytettävän liuottimen luonteelle ei aseteta mitään erityisiä rajoituksia, kuitenkin edellyttäen, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon. 20 Sopivia liuottimia ovat: alkoholit, kuten metanoli tai etanoli; eetterit, kuten tetrahydrofuraani tai dioksaani; sekä seoksen, jotka käsittävät yhtä tai useampaa edellä mainittua liuotinta ja vettä. Reaktion lämpötilalle ei aseteta mitään erityisiä rajoituksia, vaikka reaktio voidaankin tavallisesti toteuttaa vaivattomasti alueella 0-50°C olevassa lämpöti-• 25 lassa, jossa tavallisesti riittää ajanjakso, jonka pituus on 10 minuutis ta 18 tuntiin.

Mikäli karboksia suojaava ryhmä poistetaan käsittelemällä yhdistettä ammoniakin vesiliuoksella, niin se johtaa tavallisesti 8'- ja 7'-asemissa 30 olevien karboksiryhmien muuntumiseen karbamoyyliryhmiksi.

Toivottaessa, vapaa karboksyylihappo voidaan muuntaa suolakseen, esimerkiksi aikaiimetallin suolaksi, tavanomaisilla menetelmillä. Esimerkiksi sopivassa reaktiossa happo liuotetaan veden ja veteen sekoittuvan 35 orgaanisen liuottimen, kuten etyyliasetaatin, muodostamaan seokseen, johon lisätään asianmukaisen alkalimetallikarbonaatin tai -bikarbonaatin 60 94133 (kuten kaliumkarbonaatin tai natriumbikarbonaatin) vesiliuos asianmukaisessa lämpötilassa (joka on esimerkiksi 0°C:sta huoneen lämpötilaan), jonka jälkeen pH asetetaan siten, että suola voi erottua saostumalla (esimerkiksi suurin piirtein arvoon 7).

5

Tuloksena oleva suola- tai karboksyylihappoyhdiste voidaan toivottaessa muuntaa esteriksi, jossa karboksiryhmät on suojattu helposti in vivo hydrolysoituvilla suojaavilla ryhmillä. Suola tai happo liuotetaan ensin asianmukaiseen liuottimeen, esimerkiksi: eetteriin, kuten tetrahydrofu-10 raaniin; tai polaariseen liuottimeen, kuten dimetyyliformamidiin, dime-tyylisulfoksidiin, heksametyylifosforitriamidiin tai trietyylifosfaat-tiin. Tämän jälkeen sen annetaan reagoida emäksen vähintään 2 ekvivalentin kanssa, joka emäs voi olla orgaaninen emäs (kuten trietyyliamiini tai disykloheksyyliamiini) , alkalimetallin hydridi (kuten natriumhydridi) tai 15 alkalimetallin karbonaatti tai bikarbonaatti (kuten natriumkarbonaatti, kaliumkarbonaatti tai natriumbikarbonaatti), jolloin saadaan syntymään suolaa, ja tuloksena olevan suolan annetaan reagoida alemman alifaattisen asyylioksimetyylihalogenidin (kuten asetoksimetyylikloridin tai pro-pionyylioksimetyylibromidin) kanssa, alemman alkoksikarbonyylioksietyyli-20 halogenidin (kuten 1-metoksikarbonyylioksietyylikloridin tai 1-etoksikar-bonyylioksietyylijodidin) kanssa, ftalidyylihalogenidin kanssa tai (2-okso-5-metyyli-1,3-dioksolen-4-yyli)metyylihalogenidin kanssa. Reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen läsnäollessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, kuitenkin edellyttäen, ettei se vaikuta haitallisesti 25 reaktioon. Sopivia liuottimia ovat esimerkiksi edellä mainitut polaariset liuottimet. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella, vaikka yleensä reaktio voidaankin toteuttaa vaivattomasti alueella 0-100°C olevissa lämpötiloissa. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti; kuitenkin edellä ehdotetuissa olosuhteissa riittää tavallisesti 30 ajanjakso, jonka pituus on 30 minuutista 10 tuntiin. Edellä esitettyä toivottua vaihetta voidaan soveltaa myös toivottaessa vaiheissa 24, 25 ja 25, sekä myöskin vaiheiden 27, 32, 33, 34, 36, 37, 38, 50 ja 54 kussakin vaiheessa.

n 35

Vaihe 24 61 94133 Tässä vaiheessa kaavan (XXXII) mukainen, vaiheessa 22 kuvatulla tavalla valmistettu yhdiste pelkistetään katalyyttisesti alkyyli- tai aralkyyli-5 ryhmän R30 poistamiseksi, jolloin saadaan kaavan (XXXIV) mukainen hydrok-siiminoyhdiste. Tämä reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen läsnäollessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, edellyttäen, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon, ja että se kykenee liuottamaan lähtömateriaaleja, edes jossain määrin. Edullisia ovat orgaaniset karboksyyliha-10 pot, erityisesti rasvahapot, kuten etikkahappo. Katalyytin luonteelle ei aseteta mitään erityisiä rajoituksia, ja tässä reaktiossa voidaan käyttää yhtä hyvin mitä tahansa sellaista katalyyttiä, jota käytetään tavallisesti katalyyttisissä pelkistysprosesseissa. Oheisessa reaktiossa käytetään kuitenkin mieluummin platinaoksidia, hiileen sidottua platinaa tai 15 hiileen sidottua palladiumia, mieluiten aktiivihiilen adsorboitua palla-diumkloridia. Reaktio toteutetaan mieluiten sekoittamalla katalyytin ja kaavan (XXXII) mukaisen yhdisteen seosta valitussa liuottimessa vetyilma-kehässä. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella ja erityisesti valittu lämpötila ei ole kriittinen. Yleensä reaktio voidaan 20 toteuttaa vaivattomasti alueella 5-60°C olevissa lämpötiloissa. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijöistä, kuten yhdisteen (XXXII) luonteesta ja reaktio-olosuhteista, erityisesti reaktion lämpötilasta; kuitenkin edellä ehdotetuissa olosuhteissa 1-10 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittävä. Toivottaessa vaihees- • 25 sa 23 kuvattu valinnainen toimenpide voidaan toteuttaa tuloksena olevalla yhdisteellä.

Vaihe 25 30 Tässä vaiheessa kaavan (XXXIV) mukainen, vaiheessa 24 esitetyllä tavalla valmistettu yhdiste saatetaan reagoimaan hiilidisulfidin kanssa, mikä johtaa renkaan muodostumiseen, jolloin saadaan kaavan (XXXV) mukainen yhdiste. Tämä reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen läsnäollessa, jonka liuottimen luonne ei kuitenkaan ole kriittinen, edellyttäen, ettei 35 se vaikuta haitallisesti reaktioon, ja että se kykenee liuottamaan lähtö-materiaaleja, edes jossain määrin. Reaktiossa käytetään kuitenkin mielui- • t 94133 62 ten seosta, joka muodostuu heikosti emäksisestäliuottimesta (kuten pyridiinistä) sekä alemmasta alkoholista (kuten metanolista), jolloin tässä seoksessa näiden kahden komponentin tilavuudet ovat mieluiten yhtä suuret. Hiilidisulfidin käytetty määrä on mieluiten noin yksi viidesosa 5 liuottimen määrästä. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella, ja tavallisesti reaktio voidaan toteuttaa vaivattomasti alueella 0-150°C olevissa lämpötiloissa, mieluiten noin 80°C:n lämpötilassa. Reaktioon tarvittava aika vaihtelee, riippuen monista tekijöistä, erityisesti lähtömateriaalien luonteesta ja reaktion lämpötilasta; kuitenkin edellä 10 ehdotetuissa olosuhteissa 10-30 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittävä. Toivottaessa vaiheessa 23 kuvattu valinnainen toimenpide voidaan toteuttaa tuloksena olevalla yhdisteellä.

Vaihe 26 15 Tässä vaiheessa kaavan (XXXV) mukaisen merkaptoyhdisteen annetaan reagoida kaavan R33X ja/tai R3AX mukaisen alkyylihalogenidin, aralkyylihalo-genidin, alifaattisen asyylihalogenidin tai aromaattisen asyylihalo-genidin kanssa, jotta tällainen alkyyli-, aralkyyli- tai asyyliryhmä 20 saataisiin liitetyksi merkaptoryhmään tai 6-aminoryhmään. Reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen läsnäollessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, edellyttäen, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon, ja että se kykenee liuottamaan lähtömateriaaleja vähintään jossain määrin. Reaktiossa käytetään kuitenkin mieluiten vettä tai alempaa alkoholia ] 25 (kuten metanolia) tai veden ja tällaisen alkoholin seosta. Reaktio toteutetaan mieluiten happoa sitovan aineen läsnäollessa, jonka happoa sitovan aineen luonne ei ole kriittinen, edellyttäen, että se kykenee poistamaan reaktiossa syntyvän halogeenivedyn HX. Sopivia happoa sitovia aineita ovat esimerkiksi: epäorgaaniset emäkset, erityisesti alkalimetal-30 lien hydroksidit, kuten natriumhydroksidi tai kaiiumhydroksidi; sekä orgaaniset emäkset, erityisesti orgaaniset amiinit, mieluiten trialkyy-liamiinit, kuten trietyyliamiini. Yleensä reaktiossa käytetään mieluiten alkalimetallihydroksidin, kuten natriumhydroksidin, vesiliuosta. Reagens-si R33X tai R3AX voi olla: alempi alkyylihalogenidi, kuten metyylijodidi; 35 aralkyylihalogenidi, kuten bentsyylibromidi; alempi alifaattinen asyyli-halogenidi, kuten asetyylikloridi; tai aromaattinen asyylihalogenidi, • · «

II

94133 63 kuten bentsoyylibromidi. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella, vaikka tavallisesti reaktio toteutetaankin mieluiten alueella 0-80°C olevissa lämpötiloissa, mieluiten suurin piirtein huoneen lämpötilassa. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen 5 monista tekijöistä, erityisesti reagenssien luonteesta ja reaktion lämpötilasta; kuitenkin edellä ehdotetuissa olosuhteissa 1-10 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittävä.

Mikäli reaktio toteutetaan käyttäen alkyylihalogenidia tai aralkyyli-10 halogenidia, niin tällöin mieluiten 2-aseman merkaptoryhmä alkyloituu tai aralkyloituu. Toisaalta, mikäli reagenssi on alifaattinen asyylihalo-genidi tai aromaattinen asyylihalogenidi, niin tällöin ensisijaisesti 6-aminoryhmä asyloituu. Näin ollen yhdisteeseen voidaan liittää sama tai eri ryhmä ryhmien R33 ja R3A muodossa.

15

Toivottaessa, vaiheessa 23 kuvattu valinnainen toimenpide voidaan myös toteuttaa tuloksena olevalla yhdisteellä.

Vaihe 27 20 Tässä vaiheessa kaavan (XXXV) mukaisen yhdisteen 6-aminoryhmä muunnetaan hydroksiryhmäksi ja toivottaessa, tämä hydroksiryhmä halogenoidaan sen korvaamiseksi halogeeniatomilla; toivottaessa tämä halogeeniatomi voidaan tämän jälkeen korvata hydratsiinoryhmällä, substituoidulla aminoryhmällä, 25 substituoituneella metyleeniryhmällä suojatulla aminoryhmällä, tai kaavan -OR9 tai -SR9 mukaisella ryhmällä. Lisäksi toivottaessa, vaiheessa 23 kuvattuihin valinnaisiin vaiheisiin liittyvä reaktio voidaan myös toteuttaa kussakin toimenpiteessä ja/tai toivottaessa, viimeisessä toimenpiteessä merkaptoa suojaava ryhmä, aminoa suojaava ryhmä tai hydroksia 30 suojaava ryhmä voidaan poistaa.

Aminoryhraän muuntaminen hydroksiryhmäksi toteutetaan vaiheeseen 1 kuuluvan saman reaktion yhteydessä esitetyllä tavalla, ja se voidaan toteuttaa samoja reaktio-olosuhteita ja samoja reagensseja käyttäen.

35 64 94Ί33

Halogenointi, jossa hydroksiryhmä korvautuu halogeeniatomilla, voidaan toteuttaa käyttämällä tavanomaisia halogenoivia aineita, jotka kykenevät muuntamaan heterosyklisessä yhdisteessä olevan hydroksiryhmän halogeeni-atomiksi. Esimerkkeinä mainittakoon fosforioksihalogenidit, kuten fosfo-5 rioksikloridi tai fosforioksibromidi; sekä tionyylihalogenidit, kuten tionyylikloridi; näistä käytetään mieluiten fosforioksikloridia. Reaktio toteutetaan mieluiten happoa sitovan aineen läsnäollessa, esimerkiksi; happaman amidin, kuten dimetyyliformamidin; aromaattisen tertiäärisen amiinin, kuten dietyylianilliinin tai dimetyylianilliinin; tai alemman 10 trialkyyliamiinin, kuten trietyyliamiinin, läsnäollessa.

Reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen läsnäollessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, edellyttäen, ettei se häiritse reaktiota, ja yleensä reaktiossa käytetään liuottimena mieluiten itse halogenoivan 15 aineen ylimäärää; vaihtoehtoisesti, reaktiossa voidaan käyttää halogenoivan aineen ylimäärää seoksena toisen orgaanisen liuottimen kanssa, joista orgaanisista liuottimista mainittakoon esimerkiksi: esteri, kuten etyyliasetaatti; tai halogenoitu hiilivety, mieluiten halogenoitu ali-faattinen hiilivety, kuten metyleenikloridi. Reaktio voidaan toteuttaa 20 laajalla lämpötila-alueella, ja valittu täsmällinen lämpötila ei ole erityisen kriittinen reaktiolle; yleensä, reaktio toteutetaan mieluiten käytetyn liuottimen kiehumislämpötilassa. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijöistä, erityisesti rea-genssien luonteesta ja reaktion lämpötilasta; kuitenkin edellä ehdo-’ 25 tetuissa olosuhteissa reaktioon riittää tavallisesti ajanjakso, jonka pituus on 10 minuutista 5 tuntiin.

Tämän jälkeen, toivottaessa, tuloksena oleva 6-aseman halogeeniatomi voidaan muuntaa joksikin edellä mainituksi substituentiksi antamalla 30 yhdisteen reagoida nukleofiilisen reagenssin kanssa, joka reagenssi kuuluu johonkin seuraavaan luokkaan: mono- ja di-alkyyliamiinit, kuten metyyliamiini tai dimetyyliamiini; substituoituneella metyleeniryhmällä suojatut amiinit, kuten bentsylideeniamiini tai muut sellaiset amiinit, jotka vastaavat edellä mainittuja substituoituneitä metyleeniiminoryhmiä; 35 hydroksi-substituoituneet alemmat alkyyliamiinit, kuten 2-hydroksietyyli-amiini; aminosubstituoidut alemmat alkyyliamiinit, kuten 2-aminoetyyli- « 1 «

II

94133 65 amiini; aralkyyliamiinit, kuten bentsyyliamiini; aryyliamiinit, kuten anilliini, α-naftyyliamiini tai £-naftyyliamiini; hydroksyyliamiini; alemmat alkoksiamiinit, kuten metoksiamiini; aralkyylioksiamiinit, kuten bentsyylioksiamiini; aikaiimetaliien hydroksidit, kuten natriumhydroksi-5 di; alkalimetallien vetysulfidit, kuten natriumvetysulfidi; alkalimetal-lien alkaanitiolaatit, kuten natriummetaanitiolaatti; sekä alkalimetallien alkoksidit, kuten natriummetoksidi. Mikäli käytetty nukleofiilinen reagenssi on amiini, niin reaktio voidaan toteuttaa käyttäen amiinin ylimäärää, lisäämättä reaktioseokseen lainkaan happoa sitovaa ainetta.

10 Kuitenkin, mikäli reaktiossa käytetään jotakin muuta edellä mainittua, amiinista poikkeavaa nukleofiilistä ainetta, niin tällöin reaktio toteutetaan mieluiten happoa sitovan aineen läsnäollessa, joka happoa sitova aine ei itse ole nukleofiili; sopivia ovat trialkyyliamiinit, kuten trietyyliamiini. Reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen läsnäol-15 lessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, edellyttäen, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon. Sopivia liuottimia ovat esimerkiksi: alemmat alkoholit, kuten metanoli tai etanoli; happamat amidit, kuten dimetyyliformamidi tai dimetyyliasetamidi; sekä polaariset liuottimet, kuten trimetyylisulfoksidi, heksametyylifosforitriamidi tai trietyylifos-20 faatti. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella, ja valittu täsmällinen reaktiolämpötila ei ole erityisen kriittinen; yleensä, reaktio toteutetaan mieluiten lämpötilassa, joka on huoneen lämpötilasta käytetyn liuottimen kiehumislämpötilaan. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijöistä, erityisesti rea-! 25 genssien luonteesta ja reaktion lämpötilasta; kuitenkin, mikäli lämpötila on ehdotetulla alueella, niin tällöin 6-20 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittävä.

Toivottaessa, suojaavat ryhmät voidaan poistaa tässä vaiheessa, ja 30 tällaisten suojaavien ryhmien poistamiseksi käytetyt reaktiot vaihtelevat tavanomaisesti, riippuen suojaavan ryhmän täsmällisestä luonteesta.

Mikäli hydroksia suoj aavana ryhmänä käytetään trialkyylisilyyliryhmää, se voidaan poistaa käsittelemällä yhdistettä yhdisteellä, joka kykenee 35 tuottamaan fluorianioneja; esimerkkinä mainittakoon tetrabutyyliammonium-fluoridi. Reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen läsnäollessa, jonka 66 94133 liuottimen luonne ei ole erityisen kriittinen, edellyttäen, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon. Sopivia liuottimia ovat esimerkiksi eetterit, kuten tetrahydrofuraani tai dioksaani. Reaktion lämpötila ei ole erityisen kriittinen, vaikka tavallisesti reaktio toteutetaankin 5 mieluiten suurin piirtein huoneen lämpötilassa. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijöistä; kuitenkin ehdotetuissa olosuhteissa 10-18 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittävä.

10 Mikäli hydroksia suojaavana ryhmänä käytetään aralkyylioksikarbonyyli-ryhmää tai aralkyyliryhmää, niin se voidaan poistaa saattamalla yhdiste kosketuksiin pelkistimen kanssa, esimerkiksi: käyttäen katalyyttiä, kuten aktiivihiileen adsorboitua palladiumia tai platinaan vedyn läsnäollessa, mielellään huoneen lämpötilassa; tai käyttäen alkalimetallin sulfidia, 15 kuten natriumsulfidia tai kaliumsulfidia. Reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen läsnäollessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, edellyttäen kuitenkin, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon. Sopivia liuottimia ovat esimerkiksi: alkoholit, kuten metanoli tai etanoli; eetterit, kuten tetrahydrofuraani tai dioksaani; rasvahapot, kuten 20 etikkahappo; tai yhtä tai useampaa mainittua orgaanista liuotinta ja vettä sisältävät seokset. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella, vaikka yleensä se toteutetaankin vaivattomasti huoneen lämpötilassa tai sen alapuolella, esimerkiksi lämpötilassa, joka on alueella 0°C:sta huoneen lämpötilaan. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella 25 huomattavasti, riippuen monista tekijöistä, erityisesti lähtömateriaalien ja pelkistimien luonteesta; kuitenkin tavallisesti riittää ajanjakso, jonka pituus on 5 minuutista 12 tuntiin.

Mikäli hydroksia suojaavana ryhmänä käytetään alifaattista asyyliryhmää, 30 aromaattista asyyliryhmää tai alkoksikarbonyyliryhmää, niin se voidaan poistaa käsittelemällä yhdistettä emäksellä vettä sisältävän liuottimen läsnäollessa. Käytettävän liuottimen luonteelle ei aseteta mitään erityisiä rajoituksia, ja tässä reaktiossa voidaan käyttää yhtä hyvin mitä tahansa yleensä hydrolyysireaktiossa käytettyä liuotinta. Esimerkkeinä 35 edullisista liuottimista mainittakoon vesi ja seokset, jotka sisältävät vettä ja yhtä tai useampaa orgaanista liuotinta, esimerkiksi: alkoholeja, » 94133 67 kuten metanolia, etanolia tai propanolia; tai eettereitä, kuten tetra-hydrofuraania tai dioksaania. Myöskään emäksen luonteelle ei aseteta mitään erityisiä rajoituksia, kuitenkin edellyttäen, ettei se vaikuta molekyylin muihin osiin. Esimerkkeinä sopivista emäksistä mainittakoon: 5 alkalimetallien karbonaatit, kuten natriumkarbonaatti tai kaliumkarbonaatti; alkalimetallien hydroksidit, kuten natriumhydroksidi tai kalium-hydroksidi; sekä ammoniakin metanoliliuos. Ammoniakin metanoliliuos on edullisempi emäs suojaavan ryhmän poistamiseksi nukleiinihappoemäksestä; muissa tapauksissa käytetään mieluiten natriumhydroksidin 1 N vesiliuos-10 ta. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella, ja valittu erityinen reaktion lämpötila ei ole kriittinen; kuitenkin yleensä reaktio toteutetaan mieluiten huoneen lämpötilassa tai sen alapuolella, esimerkiksi lämpötilassa, joka on 0°C:sta huoneen lämpötilaan. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijöistä, 15 erityisesti lähtömateriaalien luonteesta ja reaktion lämpötilasta; kuitenkin edellä ehdotetuisssa olosuhteissa reaktio etenee tavallisesti täydellisesti loppuun 1-10 tunnin kuluessa.

Mikäli hydroksia suojaavana ryhmänä käytetään tetrahydropyranyyliryhmää, 20 tetrahydrofuranyyliryhmää, niiden tioanalogeja, alkoksimetyyliryhmää tai substituoitua etyyliryhmää, niin se voidaan poistaa käsittelemällä yhdistettä hapolla liuottimessa. Esimerkkeinä edullisista hapoista mainittakoon: kloorivetyhappo; etikkahapon ja rikkihapon väliset seokset; tai p-tolueenisulfonihapon ja etikkahapon väliset seokset. Reaktio ’ 25 toteutetaan mieluiten liuottimen läsnäollessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, kuitenkin edellyttäen, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon. Sopivista liuottimista mainittakoon esimerkiksi: alkoholit, kuten metanoli tai etanoli; eetterit, kuten tetrahydrofuraani tai diok-saani; tai seokset, jotka sisältävät vettä ja yhtä tai useampaa näistä 30 orgaanisista liuottimista. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella, esimerkiksi 0-50°C:n lämpötilassa. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijöistä, erityisesti lähtö-materiaalien ja happojen luonteesta; kuitenkin edellä ehdotetuissa olosuhteissa riittää tavallisesti ajanjakso, jonka pituus on 10 minuutis-35 ta 18 tuntiin.

94133 68

Mikäli hydroksia suojaavana ryhmänä käytetään alkenyylioksikarbonyyli-ryhmää, niin se voidaan poistaa käsittelemällä yhdistettä emäksellä. Tämä reaktio voidaan toteuttaa niissä samoissa olosuhteissa, joita käytetään poistettaessa sellaista hydroksia suojaavaa ryhmää, joka on alifaattinen 5 asyyliryhmä, aromaattinen asyyliryhmä tai alkoksikarbonyyliryhmä. Mikäli hydroksia suojaava ryhmä on allyylioksikarbonyyliryhmä, niin se voidaan poistaa yksinkertaisesti käyttämällä palladiumia ja trifenyylifosfiinia tai nikkelitetrakarbonyyliä, ja tämän reaktion etuna on se, että sivu-reaktioita esiintyy erittäin vähän.

10

Hydroksia suojaavien ryhmien poistamiseksi kuvattujen reaktioiden kanssa voidaan samanaikaisesti toteuttaa karboksia suojaavien ryhmien, merkaptoa suojaavien ryhmien ja aminoa suojaavien ryhmien eliminointi, kulloinkin näiden ryhmien luonteen mukaisesti.

15 Näiden reaktioiden toteuttamisen jälkeen toivotut yhdisteet voidaan ottaa talteen reaktioseoksesta tavanomaisin keinoin, esimerkiksi puhdistamalla tuloksena oleva yhdiste uudestaan kiteyttämällä, preparatiivisella ohutkerroskromatografiällä tai pylväskromatografisesti.

20

Mikäli merkaptoa suojaavana ryhmänä käytetään alifaattista asyyliryhmää tai aromaattista asyyliryhmää, niin se voidaan poistaa käsittelemällä yhdistettä emäksellä. Tässä reaktiossa käytetään niitä samoja reaktio-olosuhteita, joita käytettiin poistettaessa hydroksia suojaavana ryhmänä ; 25 käytetty alifaattinen asyyliryhmä tai aromattinen asyyliryhmä. Reaktion kanssa samanaikaisesti voidaan toteuttaa karboksia suojaavan ryhmän, hydroksia suojaavan ryhmän tai aminoa suojaavan ryhmän eliminoiminen.

Reaktion toteuttamisen jälkeen toivotut yhdisteet voidaan toivottaessa 30 ottaa talteen reaktioseoksesta tavanomaisin keinoin, ja esimerkiksi puhdistaa uudestaan kiteyttämällä, preparatiivisella ohutkerroskromatograf iällä tai pylväskromatografisesti.

Mikäli aminoa suojaavana ryhmänä käytetään alifaattista asyyliryhmää, 35 aromaattista asyyliryhmää tai substituoitunutta metyleeniryhmää, niin se voidaan poistaa käsittelemällä yhdistettä emäksellä. Tässä reaktiossa

II

94133 69 käytetään niitä samoja reagensseja ja reaktio-olosuhteita, joita käytettiin poistettaessa hydroksia suojaavana ryhmänä käytettyjä alifaat-tisia asyyliryhmiä ja aromaattisia asyyliryhmiä. Näin ollen, myös muita suojaavia ryhmiä voidaan poistaa samanaikaisesti.

5

Mikäli aminoa suojaavana ryhmänä käytetään trialkyylisilyyliryhmää, niin se voidaan poistaa niillä samoilla reaktioilla, joita käytettiin hydroksia suojaavana ryhmänä käytetyn trialkyylisilyyliryhmän poistamiseen.

10 Näiden aminoa suojaavien ryhmien poistamiseksi käytetyn reaktion kanssa voidaan toteuttaa samanaikaisesti karboksia suojaavan ryhmän, hydroksia suojaavan ryhmän tai merkaptoa suojaavan ryhmän eliminointi. Reaktioiden toteuttamisen jälkeen toivotut yhdisteet voidaan tarvittaessa ottaa talteen reaktioseoksesta tavanomaisin keinoin, ja ne voidaan toivottaessa 15 puhdistaa kiteyttämällä uudestaan preparatiivisellä ohutkerroskromato-grafiällä tai pylväskromatografisesti.

Se järjestys, missä hydroksia suojaavat ryhmät, karboksia suojaavat ryhmät, aminoa suojaavat ryhmät ja merkaptoa suojaavat ryhmät poistetaan, 20 ei ole kriittinen ja näiden ryhmien poistaminen voidaan toteuttaa missä järjestyksessä tahansa, joko peräkkäin tai samanaikaisesti.

Vaihe 28 • 25 Tässä vaiheessa kaavan (XXX) mukainen, vaiheessa 20 kuvatulla tavalla valmistettu ^-oksidi muunnetaan kaavan (XXXVIII) mukaiseksi polysykliseksi yhdisteeksi antamalla sen reagoida syanogeenihalogenidin, kuten syanogeenibromidin, kanssa. Tämä reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen läsnäollessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, kuitenkin edel-30 lyttäen, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon, ja että se kykenee liuottamaan lähtömateriaaleja, vähintään jossain määrin. Sopivista liuottimista mainittakoon esimerkiksi: alemmat alkoholit, kuten metanoli tai etanoli. Reaktion lämpötila ei ole erityisen kriittinen, vaikka tavallisesti reaktio toteutetaankin mieluummin alueella -10 - +50°C olevissa 35 lämpötiloissa, mieluiten suurin piirtein huoneen lämpötilassa. Reaktioon tarvittava aika saattaa vaihdella huomattavasti, riippuen monista teki- 70 94133 joista, erityisesti reagenssien luonteesta sekä reaktion lämpötilasta; kuitenkin edellä ehdotetuissa olosuhteissa 1-10 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittävä.

5 Vaihe 29 Tässä reaktiossa kaavan (XXXVIII) mukainen polysyklinen yhdiste muunnetaan kaavan (XXXIX) mukaiseksi N6-syano-N1-oksidiksi antamalla sen reagoida emäksisen yhdisteen kanssa liuottimessa. Käytetyn liuottimen luonne ei 10 ole erityisen kriittinen, kuitenkin edellyttäen, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon, ja että se kykenee liuottamaan lähtömateriaaleja vähintään jossain määrin. Esimerkkeinä edullisista liuottimista mainittakoon Cx-C*,-alkoholit, kuten metanoli tai etanoli. Käytetyn emäksisen yhdisteen luonteelle ei aseteta mitään erityisiä rajoituksia, vaikka 15 tavallisesti reaktiossa käytetäänkin vaivattomimmin ammoniakkikaasulla kyllästettyä liuotinta, mieluiten ammoniakin metanoliliuosta. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella, esimerkiksi -10 - +50°C:n lämpötilassa, mieluiten huoneen lämpötilassa. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijöistä, erityisesti 20 lähtöaineiden, liuottimien ja emäksisten yhdisteiden luonteesta; kuitenkin edellä ehdotetuissa olosuhteissa 1-5 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittävä.

Vaihe 30 : 25 Tässä vaiheessa t^-oksidi (XXXIX) muunnetaan N1-alkoksi- tai i^-aralkyyli-oksiyhdisteeksi (XL). Käytetyt reaktiot ovat samat kuin edellä vaiheessa 21 kuvatut reaktiot, ja ne voidaan toteuttaa käyttäen samoja reagensseja ja reaktio-olosuhteita.

30

Vaihe 31 Tässä vaiheessa kaavan (XL) mukainen, vaiheessa 30 kuvatulla tavalla valmistettu yhdiste muunnetaan kaavan (XLI) mukaiseksi yhdisteeksi. Reaktio 35 toteutetaan mieluiten seuraavasti. Ensin kaavan (XL) mukaista yhdistettä käsitellään alkalilla liuottimessa, pH-arvon ollessa 12-13, jolloin sen li 94133 71 pyrimidiinirengas saadaan avatuksi (ja jolloin sattumalta myös karboksia suojaavat ryhmät saadaan poistetuiksi). Tämän jälkeen reaktioseoksen pH-arvo asetetaan arvoon 7,0 ja seosta kuumennetaan, jolloin saadaan jälleen muodostumaan rengas, mikä johtaa kaavan (XLI) mukaiseen yhdisteeseen, 5 jossa karboksiryhmät ovat suojaamattomat (eli jossa sekä R31 ja R32 tarkoittavat vetyatomia). Alkalina tämän reaktion ensimmäisessä vaiheessa käytetään mielellään esimerkiksi alkalimetallihydroksidien, kuten nat-riumhydroksidin tai kaiiumhydroksidin, vesiliuoksia. Käytetyn liuottimen luonteelle ei aseteta mitään erityisiä rajoituksia, kuitenkin edellyttä-10 en, ettei se häiritse reaktiota, ja että se kykenee liuottamaan lähtömateriaaleja, vähintään jossain määrin. Reaktiossa käytetään kuitenkin mieluiten vettä tai veden ja alemman alkoholin (kuten metanolin tai etanolin) välisiä seoksia. Molemmat reaktiot voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella, ja valittu täsmällinen lämpötila ei ole erityisen 15 kriittinen. Renkaan avaamiseen tähtäävässä reaktiossa käytetään mieluiten suurin piirtein huoneen lämpötilaa, ja tässä lämpötilassa, pH-arvon ollessa noin 12, reaktio kuluu täydellisesti loppuun tavallisesti 30-60 minuutissa. Renkaan muodostamiseen tähtäävä reaktio toteutetaan mieluiten 0-15oC:n lämpötilassa, ja tässä lämpötilassa reaktio etenee täydellisesti 20 loppuun yleensä 1-5 tunnin pituisessa ajassa.

Toivottaessa, näiden reaktioiden jälkeen karboksia suojaavat ryhmät voidaan liittää uudestaan vaiheessa 1 kuvatulla esteröintireaktiolla.

’ 25 Vaihe 32 Tässä vaiheessa alkyyli- tai aralkyyliryhmä R30 poistetaan ja korvataan vetyatomilla. Tämä reaktio on sama kuin vaiheessa 24 kuvattu reaktio, ja se voidaan toteuttaa näissä samoissa reaktio-olosuhteissa, samoja rea-30 gensseja käyttäen. Toivottaessa vaiheessa 23 kuvattu valinnainen toimenpide voidaan toteuttaa myöskin tuloksena olevalla yhdisteellä.

Vaihe 33 35 Tässä vaiheessa toteutetaan renkaan aukeamiseen ja sen uudestaan muodostumiseen johtava reaktio, joka on vaiheessa 31 kuvatun reaktion kaltai- 72 94133 nen, mutta siinä karboksia suojaavat ryhmät pysyvät paikoillaan. Reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen läsnäollessa, jonka liuottimen luonne ei ole erityisen kriittinen, edellyttäen, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon ja että se kykenee liuottamaan lähtömateriaaleja vähintään 5 jossain määrin. Liuotin on kuitenkin mieluiten sellaista, että se kykenee pitämään reaktioliuoksen pH-arvon alueella 6-8, ja näin ollen reaktiossa käytetään mieluummin puskurin, pH 6-8, ja alemman alkoholin (kuten meta-nolin tai etanolin) muodostamaa seosta, mieluiten puskurin, pH 7,0, ja metanolin muodostamaa seosta. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpö-10 tila-alueella, esimerkiksi 30-150°C:n lämpötilassa. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijöistä, erityisesti reaktion lämpötilasta, pH-arvosta, sekä lähtöaineiden ja liuottimien luonteesta; kuitenkin edellä ehdotetuissa olosuhteissa 3-10 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittävä. Toivottaessa, vaiheessa 23 15 kuvattu valinnainen toimenpide voidaan toteuttaa tuloksena olevalla yhdisteellä.

Vaihe 34 20 Tässä vaiheessa alkoksi- tai aralkyylioksiryhmä -OR30 korvataan vety-atomilla. Käytetyt reaktiot ovat vaiheessa 23 kuvattujen reaktioiden kaltaisia, ja ne voidaan toteuttaa samoja reagensseja käyttäen, samoissa reaktio-olosuhteissa, jolloin saadaan toivottu kaavan (XLIV) mukainen yhdiste. Toivottaessa, vaiheessa 23 kuvattu valinnainen toimenpide * 25 voidaan toteuttaa tuloksena olevalla yhdisteellä.

Vaihe 35 Tässä vaiheessa, mikäli kaavan (XLI) mukaisen yhdisteen karboksiryhmät 30 ovat vapaat (eli R31 ja R32 tarkoittavat vetyatomia), niin ne voidaan suojata vaiheessa 1 kuvatun kaltaisilla reaktioilla. Erityisesti on edullista, että karboksiryhmien suojaamiseksi yhdisteeseen liitetään bentshydryyliryhmiä antamalla yhdisteen reagoida difenyylidiatsometaanin kanssa. Tässä reaktiossa käytetyissä olosuhteissa suojaava ryhmä, kuten 35 bentshydryyliryhmä, voidaan myös liittää 6-aminoryhmään, jolloin saadaan kaavan (XLVI) mukainen yhdiste.

H

73 941 33

Reaktio toteutetaan mieluiten liuottimessa, joka on veden ja veteen sekoittuvan orgaanisen liuottimen, kuten asetonin, seos, jonka pH on 1-2. Reaktio toteutetaan mieluiten huoneen lämpötilassa, ja se vaatii tavaili-5 sesti 1-10 tunnin pituisen ajan.

Vaihe 36 Tässä vaiheessa alkoksi- tai aralkyylioksiryhmä -OR30 poistetaan; reaktio 10 ja käytetyt reaktio-olosuhteet ovat vaiheen 23 yhteydessä kuvatun kaltaiset. Toivottaessa vaiheessa 23 kuvattu valinnainen toimenpide voidaan toteuttaa tuloksena olevalla yhdisteellä.

Vaihe 37 15 Tässä vaiheessa kaavan (XLIV) mukainen, vaiheessa 34 tai 36 kuvatulla tavalla valmistettu yhdiste muunnetaan monohydroksiyhdisteeksi (XLVIII) tai kaavan (XLIX) mukaiseksi dihydroksiyhdisteeksi antamalla sen reagoida nitriitin kanssa, esimerkiksi vaiheessa 1 kuvatulla tavalla. Toivottaessa 20 vaiheessa 23 kuvattu valinnainen toimenpide voidaan toteuttaa tuloksena olevalla yhdisteellä.

Vaihe 38 ' 25 Tässä vaiheessa kaavan (XLVIII) mukaisen yhdisteen 6-aminoryhmä muunne taan halogeeniatomiksi antamalla yhdisteen reagoida nitriitin kanssa halogeenivetyhapossa tai halogeeniboorihapossa, vaiheessa 1 kuvatulla tavalla. Edullisia halogeenivetyhappoja ovat esimerkiksi jodivetyhappo, bromivetyhappo tai kloorivetyhappo. Edullinen halogeeniboorihappo on 30 esimerkiksi fluoriboorihappo. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella, esimerkiksi -30 - +50°C:n lämpötilassa. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijöistä, kuten lähtömateriaalien luonteesta ja reaktion lämpötilasta; kuitenkin 1-20 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittävä. Toivottaessa, 35 vaiheessa 23 kuvattu valinnainen toimenpide voidaan toteuttaa tuloksena olevalla yhdisteellä.

I · 74

Vaihe 39 94133 Tässä vaiheessa puriiniemäksen 6-asemaan liitetään ryhmä R35 (eli kaavan -OR9, -NR10Rn tai -SR9 mukainen ryhmä). Tarpeellinen reaktio on vaiheessa 5 27 kuvatun reaktion kaltainen, jolloin toivottaessa myös vaiheessa 27 kuvatut valinnaisetkin reaktiot toteutetaan.

Vaihe 40 10 Tässä vaiheessa 2-aminoryhmään liitetään kaksi R36-ryhmää ja 2'-hydroksi-ryhmään liitetään ryhmä R37 käyttäen jäljempänä vaiheessa 49 kuvattujen reaktioiden kaltaisia reaktioita, jolloin saadaan kaavan (LII) mukainen yhdiste.

15 Vaiheet 41-43 Näissä vaiheissa: ensinnäkin, yksi edellisessä vaiheessa liitetyistä ryhmistä R36 poistetaan ja ryhmä R33® poistetaan N6-asemasta; tässä vaiheessa 2'-hydroksia suojaava ryhmä ja/tai 7'-hydroksia suojaava ryhmä 20 ja/tai karboksia suojaava ryhmä voi poistua. Toivottaessa karboksiryhmä voidaan suojata vaiheessa 1 kuvatulla tavalla, kun taas hydroksiryhmät voidaan suojata vaiheessa 40 kuvatulla tavalla. Seuraavaksi toteutetaan: alkoksi- tai aralkyylioksiryhmän -OR30 poistaminen N6-asemasta; ja 6-aminoryhmän muuntaminen 6-hydr oksi ryhmäksi. Nämä reaktiot voidaan toteut-25 taa edellä kuvatusti käyttäen samoja reaktioita ja reaktio-olosuhteita.

Vaihe 44 Tässä vaiheessa poistetaan kaikki suojaavat ryhmät, esimerkiksi vaiheessa 30 27 kuvatulla tavalla.

Vaihe 45 Tässä vaiheessa kaavan (XLIII) mukaisen, vaiheessa 33 kuvatulla tavalla 35 valmistetun yhdisteen annetaan reagoida dimetyyliformamidin asetaalin, tai aldehydin, kuten bentsaldehydin, kanssa, sekä orgaanisen emäksen 94133 75 (kuten trietyyliaraiinin) kanssa 2-asemassa olevan aminoryhmän suojaamiseksi substituoituneella metyleeniryhmällä, kuten N,N-dimetyyliamino-metyleenillä, bentsylideenillä, E-metoksibentsylideenillä, p-nitrobentsy-lideenillä, salisylideenillä, 5-kloorisalisylideenillä, difenyylimety-5 leenillä tai (5-kloori-2-hydroksifenyyli)fenyylimetyleenillä. Reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen läsnäollessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, edellyttäen, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon, ja että se kykenee liuottamaan lähtömateriaaleja, vähintään jossain määrin. Sopivia liuottimia ovat happamat amidit, kuten dimetyyliformamidi tai 10 dimetyyliasetamidi. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella, vaikka yleensä reaktio voidaankin toteuttaa vaivattomasti huoneen lämpötilassa. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijöistä, erityisesti reagenssien luonteesta ja reaktion lämpötilasta; kuitenkin edellä ehdotetuissa lämpötiloissa 15 riittää tavallisesti ajanjakso, jonka pituus on 15 minuutista 5 tuntiin.

Vaihe 46 Tässä vaiheessa alkoksi- tai aralkyylioksiryhmä -OR30 poistetaan vaiheessa 20 23 kuvatun kaltaisella toimenpiteellä, jolloin saadaan kaavan (LVIII) mukainen yhdiste.

Vaihe 47 ' 25 Tässä vaiheessa 6-aminoryhmä muunnetaan hydroksiryhmäksi antamalla yhdisteen reagoida nitriitin kanssa vaiheessa 1 kuvatun vastaavan toimenpiteen kaltaisesti, jolloin saadaan kaavan (LIX) mukainen yhdiste.

Vaihe 48 30 . Tässä vaiheessa puriiniemäksessä olevaa 2-aminoryhmää suojaava substitu- oitunut metyleeniryhmä poistetaan yhdessä molempien karboksia suojaavien ryhmien R31 ja R32 kanssa analogisesti vaiheessa 27 valinnaisten toimenpiteiden yhteydessä kuvattujen menetelmien kanssa, jolloin saadaan kaavan 35 (LVI) mukainen yhdiste.

76

Vaihe 49 94133 Tässä vaiheessa kaavan (XLIII) mukainen yhdiste muunnetaan kaavan (LXI) mukaiseksi yhdisteeksi suojaamalla typpiatomi puriiniemäksen 6-asemassa 5 sekä sokeriryhmässä oleva hydroksiryhmä edellä määritetyillä suojaavilla ryhmillä. Tämä voidaan toteuttaa asyloimalla, esimerkiksi antamalla yhdisteen (XLIII) reagoida asyloivan aineen kanssa, joista mainittakoon: asyylihalogenidi, kuten aromaattinen asyylihalogenidi (esimerkiksi bent-syylikloridi) tai alempi alifaattinen asyylihalogenidi (kuten asetyyli-10 bromidi tai propionyylikloridi); tai happoanhydridi, esimerkiksi aromaattisen hapon anhydridi (kuten bentsoehapon anhydridi) tai alemman ali-faattisen hapon anhydridi (kuten etikkahapon anhydridi tai propionihapon anhydridi). Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella, esimerkiksi -30 - +100°C:n lämpötilassa. Reaktioon tarvittava aika voi 15 vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijöistä, erityisesti asyloivan aineen luonteesta ja reaktion lämpötilasta; kuitenkin edellä mainituissa olosuhteissa riittää tavallisesti ajanjakso, jonka pituus on 30 minuutista 50 tuntiin.

20 Vaihe 50 Tässä vaiheessa kaavan (LXI) mukainen, vaiheessa 49 kuvatulla tavalla valmistettu suojattu yhdiste muunnetaan kaavan (LXII) mukaiseksi yhdisteeksi analogisesti vaiheen 23 varsinaisen toimenpiteen kanssa, ja j 25 toivottaessa analogisesti vaiheessa 27 kuvattujen valinnaisten toimenpiteiden kanssa.

Vaihe 51 30 Tässä vaiheessa kaavan (LXII) mukainen yhdiste muunnetaan kaavan (LXIII) . mukaiseksi yhdisteeksi vaiheessa 37 kuvatulla menetelmällä, ja toivot taessa vaiheessa 27 kuvatuilla valinnaisilla toimenpiteillä.

• · 35

II

94133 77

Vaihe 52 Tässä vaiheessa kaavan (LXIII) mukainen, vaiheessa 51 kuvatulla tavalla valmistettu yhdiste muunnetaan kaavan (XLVIII) mukaiseksi yhdisteeksi 5 poistamalla suojaavat ryhmät puriiniemäksessä olevasta 6-aminoryhmästä sekä sokeriryhmässä olevasta 2'-hydroksiryhmästä vaiheessa 27 kuvattuja valinnaisia menetelmiä käyttäen. Näissä olosuhteissa voidaan poistaa samanaikaisesti karboksia suojaavat ryhmät.

10 Vaihe 53 Tässä vaiheessa kaavan (LV) mukainen, vaiheessa 43 kuvatulla tavalla valmistettu yhdiste muunnetaan kaavan (LXIV) mukaiseksi yhdisteeksi, joka käsittää ryhmän X puriiniemäksen 6-asemassa, käyttäen vaiheen 27 toisen 15 toimenpiteen yhteydessä kuvatun kaltaista menetelmää, ja toivottaessa käyttäen vaiheen 27 valinnaisia menetelmiä.

Vaihe 54 20 Tässä vaiheessa puriiniemäksen 6-asemassa oleva ryhmä X korvataan ryhmällä R35 käyttäen vaiheessa 39 kuvatun kaltaista menetelmää, ja toivottaessa vaiheen 27 valinnaisia menetelmiä.

Vaihe 55 • 25 Tässä vaiheessa, kaavan (XLIV) mukainen yhdiste, joka on voitu valmistaa vaiheessa 34 tai 36 kuvatulla tavalla, muunnetaan monohalogeeni- tai dihalogeeniyhdisteeksi (LXVI) tai (LXVII), vastaavasti, vaiheessa 38 kuvatun kaltaisilla menetelmillä, ja toivottaessa vaiheessa 23 kuvatun 30 kaltaisilla valinnaisilla menetelmillä.

Vaihe 56 Tässä vaiheessa dihalogeeniyhdiste (LXVII) muunnetaan kaavan (LXIX) 35 mukaiseksi yhdisteeksi vaiheessa 39 kuvatun kaltaisella menetelmällä, ja « ♦ · 94133 78 toivottaessa vaiheessa 27 kuvatun kaltaisilla valinnaisilla toimenpiteillä .

Vaihe 57 5 Tässä vaiheessa asyloidaan pelkästään hydroksiryhmä kaavan (LXX) mukaisen griseoliinihappojohdannaisen sokeriosan 2'-asemassa, joka johdannainen on voitu valmistaa millä tahansa edellä kuvatulla menetelmällä. Asyloiminen voidaan toteuttaa joko: 10 (i) lisäämällä hitaasti emästä (kuten natriumhydroksidia) griseoliiniha-pon johdannaiseen (LXX), mitä seuraa asyloivan aineen (joka voi olla mitä tahansa edellä esitettyjen asylointivaiheiden yhteydessä kuvattua asyloi-vaa ainetta, kuitenkin mieluiten aromaattista asyylihalogenidia, kuten 15 bentsoyylikloridia) lisääminen reaktioliuokseen, pitäen sen pH-arvo alueella 10-13; tai (ii) liuottamalla griseoliinihapon johdannainen (IXX) puskuriliuokseen, jonka pH on 10-13; jonka jälkeen siihen lisätään asyloivaa ainetta.

20

Reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen läsnäollessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, edellyttäen, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon, ja että se kykenee liuottamaan reagensseja vähintään jossain määrin. Mieluiten käytetään seosta, joka sisältää vettä ja veteen sekoit-! 25 tuvaa liuotinta (erityisesti esteriä, kuten etyyliasetaattia). Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella, esimerkiksi -20 - +50°C:n lämpötilassa. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijöistä, erityisesti reagenssien luonteesta; kuitenkin 1-10 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittävä.

30 , Vaihe 58 Tässä vaiheessa kaavan (LXXI) mukaisen griseoliinihapon johdannaisen (valmistettu vaiheessa 57 kuvatulla tavalla) vapaat karboksiryhmät 35 suojataan vaiheessa 1 kuvatun esteröintireaktion kaltaisella menetelmällä.

« « .· ·

II

79

Vaihe 59 94133 Tässä vaiheessa kaavan (LXXII) mukainen, vaiheessa 58 kuvatulla tavalla valmistettu yhdiste muunnetaan kaavan (LXXIII) mukaiseksi yhdisteeksi 5 sulfonyloimalla. Reaktio toteutetaan antamalla kaavan (LXXII) mukaisen yhdisteen reagoida alemman alkyylisulfonyylihalogenidin (kuten metaani-sulfonyylikloridin), aryylisulfonyylihalogenidin (kuten £-tolueenisul-fonyylikloridin) tai fluoratun alemman alkyylisulfonyylihalogenidin (kuten trifluorimetaanisulfonyylikloridin) kanssa, happoa sitovan aineen, 10 kuten pyridiinin tai dimetyyliaminopyridiinin, läsnäollessa. Reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen läsnäollessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, edellyttäen, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon. Sopivia liuottimia ovat esimerkiksi: halogenoidut hiilivedyt, erityisesti halogenoidut alifaattiset hiilivedyt, kuten metyleenikloridi tai kloro-15 formi. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella, vaikka tavallisesti reaktio toteutetaankin mieluiten alhaisessa lämpötilassa, esimerkiksi -10°C:sta huoneen lämpötilaan olevassa lämpötilassa. Reaktion vaatima aika voi vaihdella, riippuen monista tekijöistä, erityisesti reagenssien luonteesta ja reaktion lämpötilasta; kuitenkin 1-20 tunnin 20 pituinen ajanjakso on tavallisesti riittävä.

Vaihe 60 Tässä vaiheessa kaavan (LXXIII) mukaisen yhdisteen 7'-asemassa oleva • 25 sulfonyylioksiryhmä korvataan halogeeniatomilla (antamalla yhdisteen reagoida vedettömän litiumhalogenidin kanssa happamassa amidissa, kuten dimetyyliformamidissa) ja/tai vetyatomilla (pelkistämällä yhdiste käyttäen sinkkiä ja etikkahapon vesiliuosta, vaiheessa 5 kuvatulla tavalla). Ensin mainittu reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen läsnäollessa, 30 jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, edellyttäen, ettei se vaikuta . haitallisesti reaktioon. Sopivia liuottimia ovat sellaiset polaariset liuottimet, kuten dimetyyliformamidi, dimetyylisulfoksidi, trietyylifos-faatti tai heksametyylifosforitriamidi. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella, esimerkiksi 0-150°C:n lämpötilassa. Reaktioon 35 tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijöistä, mutta tavallisesti 1-10 tunnin pituinen ajanjakso on riittävä.

Vaihe 61 80 941 53 Tässä vaiheessa kaavan (LXXIV) mukaisesta yhdisteestä poistetaan suojaavat ryhmät menetelmillä, jotka ovat asianmukaiset suojaavien ryhmien 5 luonnetta ajatellen. Mikäli, esimerkiksi, pyranyyliryhmää käytetään hydroksia suojaavana ryhmänä, niin se voidaan poistaa käsittelemällä yhdistettä hapolla, kuten etikkahapolla tai p-tolueenisulfonihapolla, mieluiten pyridiini-j>-tolueenisulfonaatilla, liuotinseoksessa, joka käsittää alempaa alkanolia (kuten etanolia) sekä halogenoitua hiilivetyä 10 (kuten metyleenikloridia) . Mikäli hydroksia suojaavana ryhmänä käytetään trialkyylisilyyliryhmää, niin se voidaan poistaa käsittelemällä fluo-rianioneja muodostavalla yhdisteellä, kuten tetrabutyyliammoniumfluori-dilla, eetterin (kuten tetrahydrofuraanin) toimiessa liuottimena. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella, esimerkiksi lämpötilassa, 15 joka on huoneen lämpötilasta 100°C:een. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijöistä, mutta tavallisesti 5-20 tunnin pituinen ajanjakso on riittävä. Karboksia suojaavat ryhmät ja/tai muut hydroksia suojaavat ryhmät voidaan poistaa vaiheessa 27 kuvatulla tavalla.

20

Vaihe 62 Tässä vaiheessa kaavan (LXXII) mukaisen yhdisteen (valmistettu vaiheessa 58 kuvatusti) 7'-asemassa oleva hydroksiryhmä suojataan käyttäen lukuisia * 25 menetelmiä aina sen mukaan, mikä erityinen suojaava ryhmä halutaan liittää. Mikäli ryhmä halutaan suojata pyranyyliryhmällä, niin tällöin yhdisteen (LXXII) annetaan reagoida sopivan pyraanijohdannaisen kanssa, esimerkiksi 3,4-dihydro-a-pyraanin kanssa, happaman katalyytin, kuten kloorivetyhapon, läsnäollessa. Mikäli ryhmä on tarkoitus suojata alemmal-30 la trialkyylisilyyliryhmällä, niin tällöin yhdisteen (LXXII) annetaan reagoida trialkyylisilyylihalogenidin, kuten dimetyyli-t-butyylisilyyli-kloridin, sekä imidatsolin kanssa. Nämä reaktiot toteutetaan mieluiten liuottimen läsnäollessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, edellyttäen, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon. Sopivia liuottimia 35 ovat esimerkiksi: halogenoidut hiilivedyt, erityisesti halogenoidut alifaattiset hiilivedyt, kuten kloroformi; esterit, kuten etyyliasetaat- 94133 81 ti; eetterit, kuten dioksaani; sekä happamat amidit, kuten dimetyylifor-mamidi. Reaktiot voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella, ja erityisesti valittu lämpötila ei ole kriittinen keksinnölle. Reaktio toteutetaan tavallisesti mieluiten suurin piirtein huoneen lämpötilassa. 5 Reaktioon tarvittava aika vaihtelee huomattavasti, riippuen monista tekijöistä, erityisesti reagenssien ja liuottimien luonteesta ja reaktion lämpötilasta; kuitenkin, edellä ehdotetuissa olosuhteissa, 1-30 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittävä.

10 Vaihe 63 Tässä vaiheessa 2'-hydroksiryhmä tehdään suojaamattomaksi poistamalla asyyli- tai silyyliryhmä R50 kaavan (LXXVI) mukaisesta yhdisteestä, jolloin saadaan kaavan (LXXV1I) mukainen yhdiste. Reaktio toteutetaan 15 mieluiten siten, että suojattu yhdiste saatetaan kosketuksiin alkali-metallihydroksidin vesiliuoksen, kuten natriumhydroksidin 1 N vesiliuoksen, kanssa tai ammoniakin 20 % v/v metanoliliuoksen kanssa. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella, esimerkiksi -20 - +50°C:n lämpötilassa. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, 20 riippuen monista tekijöistä, erityisesti reagenssien luonteesta ja reaktion lämpötilasta. Kuitenkin, edellä ehdotetuissa olosuhteissa riittää tavallisesti ajanjakso, jonka pituus on 10 minuutista 3 tuntiin.

Vaihe 64 : 25 Tässä vaiheessa kaavan (LXXVII) mukainen yhdiste sulfonyloidaan analogisesti vaiheessa 59 kuvatun menetelmän kanssa, ja reaktio voidaan toteuttaa samoissa reaktio-olosuhteissa ja samoja reagensseja käyttäen, jolloin saadaan kaavan (LXXVIII) mukainen yhdiste.

30

Vaihe 65 Tässä vaiheessa sulfonyylioksiryhmä kaavan (LXXVIII) mukaisen yhdisteen 2'-asemassa korvataan halogeeniatomilla tai vetyatomilla. Käytettävät 35 reaktiot ovat vaiheessa 60 kuvattujen reaktioiden kaltaisia, ja ne 94133 82 voidaan toteuttaa samoja reagensseja käyttäen, samoissa reaktio-olosuhteissa .

Vaihe 66 5 Tässä vaiheessa kaavan (LXXIX) mukainen, vaiheessa 65 valmistettu yhdiste tehdään suojaamattomaksi, jolloin saadaan kaavan (LXXX) mukainen yhdiste. Tarvittavat reaktiot ovat vaiheessa 61 kuvattujen reaktioiden kaltaisia, ja ne voidaan toteuttaa käyttäen samoja reagensseja, samoissa reaktio-10 olosuhteissa.

Koska jokaiseen vaiheiden 60 ja 65 substitutioreaktioon liittyy Walden:in inversio, niin näistä reaktioista saadaan yhdiste, jonka steerinen konfiguraatio on käänteinen alkuperäiseen yhdisteeseen verrattuna. Yhdistei-15 tä, joiden konfiguraatio on käänteinen edellä saadun yhdisteen konfiguraatioon verrattuna (eli joilla on luonnossa esiintyvä konfiguraatio), voidaan valmistaa toivottaessa seuraavasti: vaiheen 60 tai vaiheen 65 toimenpiteessä lähtömateriaaliin liitetään ryhmäksi R52 alempi alkanoyy-lioksiryhmä; sitten tämä alempi alkanoyylioksiryhmä poistetaan vaiheessa 20 61 kuvatulla menetelmällä; ja tämän jälkeen tuloksena oleva yhdiste käsi tellään jälleen vaiheen 59 toimenpidesarjalla tai vaiheen 64 toimenpide-sarjalla, vastaavasti.

Vaihe 67 ‘ 25

Vaiheen 67 ensimmäisessä osassa kaavan (LXXXI) mukainen griseoliinihappo tai sen johdannainen alkyloidaan tai aralkyloidaan alkyloivalla tai aral-kyloivalla aineella inertissä liuottimessa. Liuottimen luonne ei ole erityisen kriittinen, edellyttäen, ettei se vaikuta haitallisesti reak-30 tioon. Esimerkkeinä sopivista liuottimista mainittakoon: alkoholit, kuten * metanoli, etanoli, isopropanoli, butanoli, ja t-butanoli; eetterit, kuten dietyylieetteri, tetrahydrofuraani, dioksaani tai etyleeniglykolin dimetyylieetteri; nitriilit, kuten asetonitriili; amidit, kuten dimetyy-liformamidi, dimetyyliasetamidi tai heksametyylifosforitriamidi; sekä 35 sulfoksidit, kuten dimetyylisulfoksidi. Liuottimena käytetään mieluiten amideja tai sulfoksideja.

e , e

II

94133 83

Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella, mutta se toteutetaan kuitenkin mieluummin 0-100°C:n lämpötilassa, mieluiten lämpötilassa, joka on huoneen lämpötilasta 70°C:een.

5 Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijöistä, erityisesti reaktion lämpötilasta ja käytetyn liuottimen ja reagenssien luonteesta. Yleensä riittää ajanjakso, jonka pituus on 30 minuutista 10 vuorokauteen. Mikäli reaktio toteutetaan esimerkiksi huoneen lämpötilassa, niin se kuluu yleensä täydellisesti loppuun 1-7 10 vuorokaudessa; toisaalta 70°C:n lämpötilassa se kuluu tavallisesti loppuun 1-20 tunnissa.

Täten saatu välituote voidaan ottaa talteen reaktioseoksesta haihduttamalla liuotin alennetussa paineessa, jonka jälkeen välituotetta voidaan 15 käyttää vaiheen seuraavassa osassa sitä enempää puhdistamatta, samassa reaktioastiassa. Vaihtoehtoisesti, toivottaessa tämä välituote voidaan eristää tavanomaisilla menetelmillä, ennenkuin sitä käytetään vaiheen seuraavassa osassa.

20 Vaiheen 67 toisessa osassa välituotteena toimivan yhdisteen rengas avataan, toisiinnetaan (järjestellään uudestaan) ja se suljetaan uudestaan, tämän reaktion kohdistuessa pyrimidiinirenkaaseen ja vapaaseen aminoryhmään.

25 Tässä vaiheessa alkylointi- tai aralkylointireaktiossa saatu jäännös liuotetaan tai suspentoidaan sopivaan liuottimeen, ja tuloksena olevan liuoksen tai suspension pH pidetään arvossa, joka on vähintään 4, tai asetetaan tällaiseen arvoon, jolloin mainitut renkaan avaamisreaktiot, toisiintumisreaktio ja renkaan sulkemisreaktio saadaan toteutetuksi. 30 Näissä reaktioissa käytetty pH-arvo on mielellään vähintään 5 ja edelleen mieluiten vähintään 7.

pH saadaan pidetyksi valitussa arvossa esimerkiksi (1) toteuttamalla reaktiot puskuriliuoksessa, jonka pH on asetettu edeltäkäsin asianmukai-35 seen arvoon, tai (2) seisottamalla tai kuumentamalla jäännöstä ylimäärässä alkalimetalli- tai maa-alkalimetallihydroksidin vesiliuosta tai 94133 84 liuosta, joka käsittää orgaanista emästä vedessä tai sopivassa orgaanisessa liuottimessa.

Käytetyn puskuriliuoksen luonteelle ei aseteta mitään erityisiä rajoituk-5 siä, edellyttäen, että se kykenee ylläpitämään asianmukaisen pH-arvon koko reaktion ajan. Mitä tahansa tavanomaista puskuriliuosta, esimerkiksi asetaatti-, fosfaatti-, boraatti-, ammoniumbikarbonaatti-, ftalaatti- tai sitraattipuskuria, voidaan käyttää.

10 Esimerkkeinä sopivista alkalimetallien ja maa-alkalimetallien hydroksideista, joita voidaan käyttää vesiliuoksessa, mainittakoon natriumhydroksidi, kaliumhydroksidi, litiumhydroksidi sekä kaisiumhydroksidi. Esimerkkeinä sopivista orgaanisista emäksistä mainittakoon alemmat alkyylial-miinit, kuten monometyyliamiini, dimetyyliamiini tai trimetyyliamiini.

15

Yleensä reaktioliuoksen pH pidetään arvossa, joka on mielellään alueella 4-12, vaikka korkeampiakin pH-arvoja voidaan käyttää.

Tässä reaktiossa käytetyn liuottimen luonteelle ei aseteta mitään rajoi-20 tuksia, edellyttäen, ettei se häiritse reaktioita. Sopivia liuottimia ovat esimerkiksi: vesi; alkoholit, kuten metanoli, etanoli tai propanoli; sekä muut veteen liukenevat liuottimet, kuten asetoni, tetrahydrofuraani, dioksaani, dimetyyliformamidi tai dimetyylisulfoksidi. Reaktiossa voidaan käyttää pelkästään yhtä tällaista liuotinta, tai seosta, joka muodostuu 25 kahdesta tai useammasta tällaisesta liuottimesta. Joissakin tapauksissa orgaaninen emäs voi toimia reaktion liuottimena.

Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella, esimerkiksi 0-150°C:n lämpötilassa, mieluummin 20-100°C:n lämpötilassa. Valittu lämpö-30 tila voi riippua monista tekijöistä. Esimerkiksi lämmittäminen voi olla . edullista, kun reaktio toteutetaan alueella 4-10 olevassa pH-arvossa; toisaalta, reaktio etenee tavallisesti tyydyttävällä tavalla ympäristön lämpötilassa, kun pH on 10 tai sen yläpuolella.

35 Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijöistä, erityisesti substraattien luonteesta, reaktion lämpötilasta « » ·

II

94133 85 ja pH-arvosta, sekä puskurin tai muun käytetyn väliaineen luonteesta, erityisesti lämpötilasta ja pH-arvosta; kuitenkin edellä mainituissa edullisissa olosuhteissa riittää tavallisesti ajanjakso, jonka pituus on 5 minuutista 50 tuntiin. Tämän jälkeen, toivottaessa, voidaan toteuttaa 5 vaiheen 27 valinnaiset toimenpiteet.

Sen jälkeen, kun mikä tahansa edellä mainittu reaktio on edennyt loppuun, niin kunkin vaiheen toivottu tuote voidaan erottaa reaktioseoksesta tavanomaisin keinoin. Esimerkiksi, reaktioseos pestään tarvittaessa 10 vedellä, jonka jälkeen liuotin erotetaan tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös voidaan puhdistaa monella eri tavalla, kuten kitetyttämällä uudestaan, tai käyttäen erilaisia kromatografisia menetelmiä, kuten pylväskromatografiaa tai preparatiivista ohutkerroskromatografiaa, jolloin saadaan toivottu yhdiste.

15

Fosfodiesteraasia (ΡΡΕΊ inhiboiva aktiivisuus

Eräitä tämän keksinnön mukaisia yhdisteitä, joista käytetään jäljempänä esitettyjen esimerkkien mukaisia numeroita, testattiin yhdesssa vertai-20 luna toimivan teofylliinin kanssa.

Kokeet toteutettiin käyttäen olennaisesti menetelmää, joka esitettiin julkaisussa A.L. Pichard and W.Y. Cheung [Journal of Bilogical Chemistry, 251, 5726-5737 (1976)]. cAMP PDE-entsyymin lähteenä käytettiin rottien 25 aivoista saatua raakaentsyymin liuosta.

Substraattina käytettiin UC-merkittyä cAMP-yhdistettä. Sitä käytettiin 0,2 M Tris-kloorivetyhappo-puskuriliuoksessa (pH 8,0) sellaisena määränä, että lopulliseksi pitoisuudeksi saatiin 0,14 uM. "Tris" on tris-(hyd-30 roksimetyyli)aminometaani. Substraattiliuosta sekoitettiin asianmukaiseen * määrään testattavaa yhdistettä, joka oli liuotettu 2,0-5,0 mikrolitraan dimetyylisulfoksidia, ja tähän lisättiin 20 μΐ käärmeen myrkyn liuosta ja 40 μΐ raakaentsyymin liuosta. Seokseen lisättiin niin paljon Tris-kloori-vetyhappo-puskuria, että kokonaistilavuudeksi saatiin 100 μΐ. Seoksen 35 annettiin reagoida 20 minuuttia 30°C:n lämpötilassa. Tämän ajanjakson jälkeen reaktioseosta käsiteltiin Amberlite IRP-58-hartsilla (tavaramerk- 94133 86 ki), ja tuotteeseen jäljelle jäänyt adenosiinin radioaktiivisuus määritettiin. Koe toteutettiin käyttäen kutakin aktiivista yhdistettä erilaisina pitoisuuksina, ja näistä tuloksista laskettiin 50-prosenttisen inhibition arvot (I50).

5

Koe toistettiin, paitsi että syklistä guanosiinin monofosfaattia (cGMP) käytettiin substraattina cAMP:n asemesta. cGMP PDE-entsyymiin liittyvä I50-arvo määritettiin samoin.

10 Tulokset esitetään taulukossa 9, missä I50-arvot esitetään yksikössä μπιοοίϊβ.

Taulukko 9 15 Yhdisteen I50 (μπιοί)

no. esimerkeistä cAMP PDE cGMP PDE

4 50,6 1,5 30 3,3 0,91 20 34 0,049 0,014 36 3,4 0,39 teofylliini 360 196

Vertailuyhdisteenä käytettiin tunnettua teofylliiniä, jonka tiedetään 25 inhiboivan sekä cAMP PDE- että cGMP PDE-entsyymiä, ja jota käytetään lääkinnällisesti tähän tarkoitukseen. Tämän keksinnön mukaisista testatuista yhdisteistä tehottomimman I50-arvo on noin kertaluokkaa pienempi kuin teofylliinin vastaava arvo, kun taas tämän keksinnön mukaisista testatuista yhdisteistä tehokkaimman I50-arvo on suurin piirtein 3-4 30 kertaluokkaa pienempi, mikä osoittaa, että tämän keksinnön mukaisten ' yhdisteiden aktiivisuudet PDE-entsyymin inhibiittoreina ovat erittäin suuret. cAMP PDE-entsyymiä ja cGMP PDE-entsyymiä vastaan kohdistuvien aktiivisuuksien erot nähdään myös selvästi.

35 Näin ollen näillä yhdisteillä on monia lääkinnällisiä sovellutuksia, esimerkiksi: hoidettaessa sydän- ja verisuonitauteja; antiastmaattisena « « 94133 87 aineena; sileitä lihaksia laukaisevana aineena; psykotrooppisena tai neurotrooppisena aineena; tulehduksia estävänä aineena; syöpää hoidettaessa; sekä sokeritautia hoidettaessa.

5 Näin ollen tämän keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan käyttää lääkitsevänä aineena hoidettaessa erilaisia aivojen verenkiertoon liittyviä häiriöitä, kuten aivohalvauksen jälkitilaa, sekä aivoveritulpan jälkitilaa, sekä aivojen metabolian aktivaattoreina, esimerkiksi hoidettaessa vanhuuden tylsistymistilaa tai traumaattista aivoveritulppaa. Tämän keksin-10 nön mukaisia yhdisteitä voidaan antaa suun kautta tai ruuansulatuskanavan ulkopuolisesti (esimerkiksi ihon alaisena tai lihaksen sisäisenä injektiona) .

Tämän keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan antaa suun kautta kiinteinä 15 valmisteina, jotka voivat tarvittaessa sisältää erilaisia tavanomaisia lisäaineita. Tällaisia lisäaineita ovat mm.: laimentimet, kuten sokerit ja selluloosavalmisteet; sitovat aineet, kuten tärkkelys, kumit ja metyy-liselluloosa; sekä hajottavat aineet. Annostus riippuu potilaan oireista, iästä ja ruumiin painosta. Esimerkiksi aikuisen ihmispotilaan tapauksessa 20 sopiva päivittäinen annos voi olla 0,1-100 mg/kg aktiivista yhdistettä, joka voidaan antaa yhtenä annoksena tai osiin jaettuina annoksina.

Tämän keksinnön mukaisten yhdisteiden valmistamista havainnollistetaan ** seuraavissa esimerkeissä. Tiettyjen lähtöaineiden valmistamista havain- ' t » 25 nollistetaan esimerkkien jälkeen esitetyissä valmistuksissa.

ESIMERKKI 1 1 (a) Dimetwli-l*-deadeniino-l' g-asetoksi-4'.5'-dihvdro-01 2 3 4 5'.07’-diase-30 tvvlipriseolaatti ml väkevää rikkihappoa lisätään liuokseen, joka käsittää 500 mg dime- 2 tyyli-6-desamino-6-hydroksi-4' β, 5' -dihydro-01’ ,07’ -diasetyyligriseolaattia 3 (valmistettu valmistuksessa 7 esitetyllä tavalla) 100 millilitrassa 4 35 etikkahapon ja etikkahapon anhydridin 4:1 (v/v) seosta, ja tämän seoksen 5 annettiin seistä huoneen lämpötilassa 14 tuntia typpi-ilmakehässä.

88 94' 33

Reaktioseokseen lisättiin 15 g natriumasetaattia, ja liuotin haihdutettiin pois alennetussa paineessa. Jäännös liuotettiin natriumbikarbonaatin kylläiseen vesiliuokseen, ja tämä liuos uutettiin kolmasti metyleeniklo-ridillä. Metyleenikloridiuutteet yhdistettiin ja kuivattiin vedettömällä 5 magnesiumsulfaatilla. Tämän jälkeen liuotin haihdutettiin alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin kromatografisesti silikageelikolonnia käyttäen, jolloin kolonnia eluoitiin sykloheksaanin ja etyyliasetaatin 2:1 (v/v) seoksella. Kun liuotin haihdutettiin toisena eluoituvasta fraktiosta, niin tällöin saatiin 292 mg otsikon mukaista yhdistettä.

10

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13) ς ppm: 2,44 [1H, dublettien dubletti, J - 6,4 & 14,7 Hz]; 2,65 [1H, dublettien dubletti, J - 14,7 & 3,0 Hz]; 15 4,98 [1H, dublettien dubletti, J - 2,5 & 6,4 Hz]; 5,02 [1H, dublettien dubletti, J - 2,9 & 4,0 Hz]; 5,15 [1H, dublettien dubletti, J - 4,0 & 2,5 Hz]; 5,72 [1H, singletti]; 6,29 [1H, dubletti, J - 2,9 Hz], 20

Massaspektri (m/e): 474 (M+43).

Massaspektri nopeilla atomeilla pommittaen (m/e): 431 (M*).

25 Kb) Dimetwli -1 ’ -deadeniino-1 'a-asetoksi-4' , 5' -dihvdro-02'. O7' -diasetvv-ligriseolaatti

Esimerkissä 1(a) mainitussa pylväskromatografisessa käsittelyssä ensimmäisenä erottunut fraktio väkevöitiin haihduttamalla alennetussa painees-30 sa, jolloin saatiin 33 mg otsikon mukaista yhdistettä.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13) ς ppm: 2,67 [1H, dublettien dubletti, J - 7,4 & 15,1 Hz]; 35 2,98 [1H, dublettien dubletti, J - 15,1 & 2,9 Hz]; 4,94-4,99 [2H, multipletti]; • ·

II

94133 89 5.05- 5,07 [1H, multipletti]; 5,61 [1H, singletti]; 6,38 [1H, dubletti, J - 4,9 Hz], 5 Hassaspektri (m/e): 474 (M+43).

Massaspektri nopeilla atomeilla pommittaen (m/e): 431 (M*) .

1(c) Dimetwli-1 ’-deadeniino-1 * fl-asetoksi-4' . 5 *-dihvdro-02 .07'-dibent-10 sowliEriseolaatti 2 ml väkevää rikkihappoa lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka käsitti 400 mg dimetyyli-6-desamino-6-hydroksi-4',5'-dihydro-02’,07'-dibentsoyyligriseolaattia (valmistettu valmistuksissa 1-3, 5 ja 7 kuvatun 15 kaltaisella menetelmällä, mutta käyttäen bentsoyylikloridia asetanhydri-din sijasta valmistuksessa 2) liuotettuna 80 millilitraan etikkahapon ja asetanhydridin 4:1 (v/v) seosta, ja tämän seoksen annettiin seistä huoneen lämpötilassa 14 tuntia. Tämän jälkeen reaktioseos sekoitettiin 15 grammaan natriumasetaattia ja väkevöitiin haihduttamalla alennetussa 20 paineessa. Jäännös liuotettiin metyleenikloridin ja natriumbikarbonaatin kylläisen vesiliuoksen muodostamaan seokseen, ja uutettiin kolmasti metyleenikloridilla. Metyleenikloridiuutteet yhdistettiin ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, jonka jälkeen liuotin haihdutettiin alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin kromatografisesti käyttäen 25 silikageelikolonnia, jota eluoitiin sykloheksaanin ja etyyliasetaatin 2:1 (v/v) seoksella, ja otsikon mukaista yhdistettä sisältävät fraktiot väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 243 mg otsikon mukaista yhdistettä.

30 Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13) ς ppm: 2.50- 2,60 [1H, multipletti]; 2,96-3,04 [1H, multipletti]; 5.06- 5,16 [2H, multipletti]; 5,48-5,52 [1H, multipletti]; 35 5,88 [1H, singletti]; 6.50- 6,58 [1H, multipletti].

94133 90

Alkuaineanalyysi:

Laskettu yhdisteelle C27H26012: 5 C, 59,78 %; H, 4,83%; N, O %.

Todettu: C, 59,59 %; H, 4,80 %; N, 0,01 %.

Massaspektri (m/e): 585 (M+43).

10 ESIMERKKI 2

Dimetwli-6-desamino-6-hvdroksi-2-asetwliaπlino-2-dehvdro-4, .5' -dihvdro-02' .O7'-dibentsovvligriseolaatti 15 200 mg dimetyyli-1’-deadeniino-l'^-asetoksi-4*,5'-dihydro-O2’ ,07’-di- bentsoyyligriseolaattia (valmistettu esimerkissä 1(c) kuvatusti) ja 200 mg bistrimetyylisilyyli N2-asetyyliguaniinia laitettiin kaksikaula-pulloon typpi-ilmakehässä. 0,4 ml trimetyylisilyyli-trifluorimetaani- sulfonaattia lisättiin liuokseen, joka oli saatu liuottamalla seos 40 20 millilitraan 1,2-dikloorietaania jäissä kylmänä pitäen, jonka jälkeen seoksen annettiin seistä huoneen lämpötilassa 4 vuorokautta. Reaktioseos jatkokäsiteltiin esimerkissä 3 kuvattavalla tavalla. Se puhdistettiin kromatografisesti käyttäen silikageelikolonnia, jota eluoitiin 3 % (v/v) metanolia sisältävällä metyleenikloridilla, jolloin saatiin 54,8 mg ' 25 otsikon mukaista yhdistettä, joka eristettiin toisena eluoituvasta fraktiosta.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2S0] ς ppm: 30 2,59-2,96 [2H, multipletti]; 5,12-5,32 [1H, multipletti]; 5,32-5,63 [1H, multipletti]; 5,83 [1H, singletti]; 6,11 [1H, dublettien dubletti, J - 4,5 & 3,9 Hz]; 35 6,47 [1H, dubletti, J - 4,5 Hz]; 8,32 [1H, singletti].

91 94133

Alkuaineanalyys i:

Laskettu yhdisteelle 032Η29Ν5012. 1/2H20: 5 C, 56,14 %; H, 4,50 %; N, 10,23 %.

Todettu: C, 56,28 %; H, 4,53 %; N, 9,93 %.

ESIMERKKI 3 10 6-desa^llino-6-hydroksi-2-asetwliaπ)ino-2-dehvdro-4, .5' -dihvdrogriseoliini-happo 40 mg dimetyyli-6-desamino-6-hydroksi-2-asetyyliamino-2-dehydro-4',5'-dihydro-O2’ ,07'-dibentsoyyligriseolaattia (valmistettu esimerkissä 2 esite-15 tyllä tavalla) liuotettiin 5 millilitraan natriumhydroksidin 1 N vesiliuosta, jäissä kylmänä pitäen, ja tämän seoksen annettiin seistä huoneen lämpötilassa 4 tuntia. Sitten seoksen pH asetettiin arvoon 1 kloorivety-hapon 1 N vesiliuoksella, ja se käsiteltiin pylväskromatografisesti käyttäen valmiiksi pakattua RP-18-kolonnia (käänteisfaasityyppinen, 20 Merck), jota eluoitiin 5 % (v/v) asetonitriiliä sisältävällä vedellä. Varsinaiset fraktiot lyofilisoitiin, jolloin saatiin 22,0 mg otsikon mukaista yhdistettä.

Ydinmagneettisen resonanssi spektri (D20) ς ppm: ’ 25 2,58 [1H, dublettien dubletti, J - 6,5 & 15,4 Hz]; 2,76 [1H, dublettien dubletti, J - 15,4 & 1,5 Hz]; 4,60-4,75 [3H, multipletti]; 5,10-5,16 [1H, multipletti]; 30 5,97 [1H, dubletti, J - 6,8 Hz]; 8,20 [1H, singletti].

35 « 92 ESIMERKKI 4 94133 e-desamino-e-hvdroksi^-amino^-dehvdro-V , 5' -dihvdro-griseoliinihappo 5 21 mg 6-desamino-6-hydroksi-2-asetyyliamino-2-dehydro-4',5'-dihydro- griseoliinihappoa (valmistettu esimerkissä 3 kuvatulla tavalla) laitettiin pyöreäpohjaiseen pulloon typpi-ilmakehässä. Siihen lisättiin 10 millilitraa metanolia, joka sisälsi 20 % v/v ammoniakkia. Sitten seoksen annettiin seistä huoneen lämpötilassa 1 vuorokauden ajan astiassa, joka 10 oli suljettu tiukasti tulpalla. Liuotin haihdutettiin alennetussa paineessa ja jäännös liuotettiin kloorivetyhapon 0,5 N vesiluokseen. Tämä liuos käsiteltiin pylväskromatografisesti käyttäen valmiiksi pakattua RP-18-kolonnia (käänteisfaasityyppinen; Merck). Kolonnia eluoitiin 3 % v/v asetonitriiliä sisältävällä vedellä, jonka jälkeen eluoitunut liuos 15 lyofilisoitiin, jolloin saatiin 16 mg otsikon mukaista yhdistettä.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20) ς ppm: 2,49 [1H, dublettien dubletti, J - 6,3 & 15,5 Hz]; 20 2,64 [1H, dublettien dubletti, J - 15,5 & 1,5 Hz]; 4,54-4,77 [3H, multipletti]; 5,01-5,05 [1H, multipletti]; 5,89 [1H, dubletti, J - 7,3 Hz]; 8,00 [1H, singletti], ! 25 ESIMERKKI 5

Dimetvvligriseolaatin N1-oksidi 30 8,14 g dimetyyligriseolaattia (valmistettu valmistuksessa 1 kuvatusti) suspendoitiin metanoliin. Tähän lisättiin 6,90 g m-klooriperbentsoehappoa ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 24 tuntia. Liuotin haihdutettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Kun liuotin oli saatu lähes 35 poistetuksi, jäännökseen lisättiin 300 ml dietyylieetteriä, ja liuoksessa olevia möykkyjä hajotettiin spaattelilla niin kauan, että ne saatiin

II

94133 93 häviämään. Seos suodatettiin, ja jäännös pestiin 100 ml dietyylieette-riä, ja kuivattiin, jolloin saatiin 7,81 g valkoista jauhemaista ainetta. Tämä jauhe liuotettiin 200 millilitraan metanolia ja 300 millilitraan metyleenikloridia mahdollisimman täydellisesti lämmittämistä apuna 5 käyttäen, jonka jälkeen liuotinta haihdutettiin alennetussa paineessa imulaitteella siten, että jäljelle jäävän liuoksen tilavuudeksi saatiin noin 50 ml. Tuloksena olevat kiteet erotettiin suodattamalla, jolloin otsikon mukaista yhdistettä saatiin 6,31 g valkoisina jauhemaisina kiteinä.

10

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2SO] <r ppm: 3,68 [3H, singletti]; 3,78 [3H, singletti]; 15 4,60 [1H, dubletti, J - 5,0 Hz]; 4,67 [1H, singletti]; 5,15 [1H, dubletti, J - 2,2 Hz]; 5,90 [1H, dublettien dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 6,53 [1H, singletti]; 20 8,53 [1H, singletti]; 8,72 [1H, singletti], ESIMERKKI 8 25 Dimetwli-N1-bentswlioksigriseolaatti

Seoksen, joka käsitti 5,35 g dimetyyligriseolaatin ^-oksidia (valmistettu esimerkissä 5 kuvatusti) ja 7,6 ml bentsyylibromidia, annettiin reagoida yön yli huoneen lämpötilassa, 90 millilitrassa dimetyyliforfamidia. 30 Sitten seosta jatkokäsiteltiin esimerkissä 7 esitettyjä toimenpiteitä käyttäen. Tuloksena oleva liuos kaadettiin 1 litraan heksaania ja 0,5 litraan dietyylieetteriä koko ajan sekoittaen. Tuloksena oleva jauhemainen aine suodatettiin, jolloin otsikon mukaista yhdistettä saatiin 5,4 grammaa raakajauheena.

35

Ydinmagneettisen resonanssi spektri [(CD3)2S0] ς ppm: 94133 94 3,64, 3,71 [yhteensä 3H, kukin singletti]; 4.54 [1H, dubletti, J - 5,0 Hz]; 4,63 [1H, singletti]; 5,17 [1H, dubletti, J - 2,2 Hz]; 5 5,33 [2H, singletti]; 5,83 [1H, dublettien dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 6,46 [1H, singletti]; 7,3-7,7 [5H, multipletti]; 8,31, 8,39 [yhteensä 1H, kukin singletti], 10 ESIMERKKI 10

Dibentshvdrwli-1' -deadeniino-1' B-\ 5-amino-4-CN2-bentswlioksiamidiino) -15 imidatsol-1-vvlilgriseolaatti 5,4 g dimetyyli-N1-bentsyylioksigriseolaattia (valmistettu esimerkissä 8 kuvatusti) liuotettiin 53 millilitraan natriumhydroksidin 1,5 N vesi-liuosta, ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 3 vuorokautta.

20 Sitten reaktioseos tehtiin happamaksi väkevällä kloorivetyhapolla, ja sitten siihen lisättiin 15 g difenyylidiatsometaania ja 100 ml asetonia, ja sitä jatkokäsiteltiin esimerkissä 9 kuvattuja toimenpiteitä käyttäen. Tuloksena oleva seos puhdistettiin kromatografisesti silikageelikolonnia käyttäen, ja kolonnia eluoitiin 1 % v/v metanolia sisältävällä mety-25 leenikloridilla, jolloin saatiin 3,9 g otsikon mukaista yhdistettä.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2S0] ς ppm: 4.54 [1H, dubletti, J - 5,0 Hz]; 30 4,90 [1H, singletti]; 4,94 [2H, singletti]; 5,26 [1H, dubletti, J - 2,2 Hz]; 5,59 [1H, dublettien dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 6,20 [1H, singletti]; 35 6,69, 6,76 [yhteensä 1H, kukin singletti]; 7,1-7,5 [26H, multipletti].

95 94133 ESIMERKKI 12

Dibentshvdrwli-1' -deadeniino-1' β- r5-amino-4- (N2-hvdroksiamidiino) imi -datsol-1-wlil griseolaatti 5 1,0 g dibentshydryyli-1'-deadeniino-1' β-[5-amino-4-(N2-bentsyylioksi-amidiino)imidatsol-l-yyli]griseolaattia (valmistettu esimerkissä 10 esitetysti) liuotettiin 20 millilitraan etikkahappoa, jonka jälkeen liuokseen lisättiin 0,6 g 10 % w/w hiileen adsorboitua palladiumia, mitä 10 ennen astiassa oleva ilma oli korvattu typellä. Sitten seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 2 tuntia siihen vetyä syöttäen. Hiileen sidottu palladium suodatettiin pois, ja liuotin poistettiin suodoksesta tislaamalla. Jäännös liuotettiin seokseen, joka käsitti 30 ml etyyliasetaattia ja 20 ml natriumbikarbonaatin 10 % w/w vesiliuosta. Erottunut orgaaninen 15 kerros pestiin vedellä ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Sen jälkeen, kun kuivausaine oli poistettu suodattamalla, liuotin tislattiin pois, ja jäännös puhdistettiin kromatografisesti silikageelikolon-nilla, jota eluoitiin 5 % v/v metanolia sisältävällä metyleenikloridillä, jolloin saatiin 0,26 g otsikon mukaista yhdistettä.

20

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [ (CD3)2S0] ς ppm: 4,57 [1H, dubletti, J - 5,0 Hz9; 4,90 [1H, singletti]; : 25 5,27 [1H, dubletti, J - 2,2 Hz]; 5,60 [1H, dublettien dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 6,21 [1H, singletti]; 6,70, 6,76 8yhteensä 1H, kukin singletti]; 7,2-7,6 [21H, multipletti]; 30 8,95 [1H, singletti], • « ESIMERKKI 13 96 94133

Dibentshvdrwli- 2 -merkaptogriseolaatti 5 0,25 g dibentshydryyli-1'-deadeniino-1'0-[5-amino-4-(N2-hydroksi- amidiino)imidatsol-1-yyli]griseolaattia (valmistettu esimerkissä 12 kuvatusti) liuotettiin seokseen, joka käsitti 2 ml metanolia, 2 ml pyridiiniä ja 1 ml hiilidisulfidia. Seoksen annettiin reagoida 80°C:n lämpötilassa terässylinterissä 14,5 tuntia. Sitten liuotin poistettiin 10 tislaamalla. Jäännökseen lisättiin tolueenia, ja tämä toimenpide toistettiin. Jäännös puhdistettiin kromatografisesti silikageelikolonnilla, jota eluoitiin 4 % v/v metanolia sisältävällä metyleenikloridilla, jolloin saatiin 0,062 g otsikon mukaista yhdistettä.

15 Ydinmagneettisen resonanssin spektri 8(CD3)2S0] ς ppm: 4,63 [1H, dubletti, J - 5,0 Hz]; 4,88 [1H, singletti]; 5,26 [1H, dubletti, J - 2,2 Hz]; 20 6,03 [1H, dublettien dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 6,39 [1H, singletti]; 6,69, 6,74 8yhteensä 1H, kukin singletti]; 6,9-7,5 [20H, multipletti]; 8,24 [1H, singletti], : 25 ESIMERKKI 16

Dimetvvli-N1-bentsvvljoksi-N6 - svanogriseolaatti 30 8,53 g dimetyyli-N6-syanogriseolaatin ^-oksidia (valmistettu esimerkissä 15 kuvatulla tavalla) liuotettiin 100 millilitraan dimetyyliformamidia. Tähän liuokseen lisättiin 10 ml bentsyylibromidia ja 10 ml trietyyli-amiinia, ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 4 tuntia. Liuotin tislattiin pois alennetussa paineessa. Jäännökseen lisättiin 30 ml 35 etanolia ja 30 ml tolueenia, ja poistettiin sitten tislaamalla. Tämä toimenpide toistettiin 4 kertaa. Täten saatu öljymäinen aine sekoitettiin 97 94133 500 mi11ilitraan dietyyliesteriä, käsiteltiin ultraäänillä, koko ajan spaattelilla sekoittaen, jolloin saatiin vaaleankeltaista, jauhemaista ainetta. Tämä aine erotettiin suodattamalla, ja se liuotettiin 300 millilitraan vettä ja 500 millilitraan etyyliasetaattia. Erottunut 5 orgaaninen kerros pestiin kulloinkin 100 millilitralla natriumkloridin kylläistä vesiliuosta, kloorivetyhapon 0,2 N vesiliuoksella, natriumbikarbonaatin 10 % w/v vesiliuoksella sekä natriumkloridin kylläisellä vesiliuoksella, tässä järjestyksessä, ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Sen jälkeen, kun liuosta oli käsitelty aktiivihiilel-10 lä, liuotin poistettiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 8,8 g otsikon mukaista yhdistettä keltaisena karamellimaisena aineena.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2S0] ς ppm: 15 3,68 [3H, singletti] ; 3,76 [3H, singletti]; 4,61 [1H, dubletti, J - 5,0 Hz]; 4,67 [1H, singletti]; 20 5,26 [1H, dubletti, J - 2,2 Hz]; 5,37 [2H, singletti]; 5,83 [1H, dublettien dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 6,57 [1H, singletti]; 7,2-7,8 [5H, multipletti]; : 25 8,56 [1H, singletti]; 8,81 [1H, singletti], ESIMERKKI 17 30

Dimetwli-N6-svano-N1-metoksigriseolaatti 8,3 ml trietyyliamiinia ja 3,9 ml metyylijodidia lisättiin 40 milli-litraan dimetyyliformamidia, joka sisältää 4,5 g dimetyyli-N6-syanogriseo-35 laatin ^-oksidia (valmistettu esimerkissä 15 esitetysti), ja jota pidettiin jäiden avulla kylmänä. Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 4,5 « 98 94133 tuntia. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla, ja jäännökseen lisättiin 100 ml dietyylieetteriä, jonka jälkeen saatiin jauhetta, kun seos hajotettiin spaattelilla. Liukenematon materiaali suodatettiin pois, pestiin 30 millilitralla dietyylieetteriä ja liuotettiin seokseen, joka 5 käsitti 80 ml etyyliasetaattia ja 20 ml vettä, jonka jälkeen liuos uutettiin toistamiseen etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattikerros kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Sen jälkeen, kun kuivausaine oli erotettu suodattamalla, liuotin tislattiin pois, jolloin saatiin 3 g otsikon mukaista yhdistettä.

10

Ydinmagneettisen resonanssi spektri [(CD3)2SO] ς ppm: 3,60, 3,73 [yhteensä 3H, kukin singletti]; 4,14 [3H, singletti]; 15 4,58 [1H, dubletti, J - 5,0 Hz]; 4,64 [1H, singletti]; 5,21 [1H, dubletti, J - 2,2 Hz]; 5,83 [1H, dublettien dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 6,55 [1H, singletti]; 20 8,53, 8,93 [yhteensä 1H, kukin singletti], ESIMERKKI 18 2-amino-N6-bentswlioksipriseoliinihaPDo 25 100 ml natriumhydroksidin 0,2 N vesiliuosta lisättiin 400 millilitraan metanolia, joka sisältää 8,8 g dimetyyli-N^bentsyylioksi-l^-syano-griseolaattia (valmistettu esimerkissä 16 esitetyllä tavalla), ja jota sekoitettiin koko ajan. Reaktioliuoksen pH asetettiin arvoon 12-12,5 30 lisäämällä siihen natriumhydroksidin 1 N vesiliuosta, jonka jälkeen sen annettiin seistä huoneen lämpötilassa 60 minuuttia. Liuotinta tislattiin pois siten, että jäljelle jäävän nesteen tilavuudeksi saatiin noin 100 ml. Tuloksena oleva liuos sekoitettiin 50 millilitraan vettä ja 150 millilitraan etanolia, ja kuumennettiin palautusjäähdyttäen 2 tuntia. 35 Tämän jälkeen liuotin poistettiin jälleen tislaamalla alennetussa paineessa, kunnes nesteen tilavuus oli pienentynyt noin 100 millilitraksi.

II

« 99 941 33

Siihen lisättiin 100 ml natriumhydroksidin 2 N vesiliuosta, ja tuloksena olevan liuoksen annettiin seistä huoneen lämpötilassa 60 minuuttia. Liuokseen lisättiin 200 ml etyyliasetaattia, ja pH asetettiin arvoon 0,5 väkevällä kloorivetyhapolla liuosta koko ajan sekoittaen. Vesikerros ja 5 orgaaninen kerros erottuivat, ja orgaaninen kerros pestiin 500 millilit-ralla kloorivetyhapon 0,1 N vesiliuosta, joka yhdistettiin vesikerrokseen ja käsiteltiin aktiivihiilellä. Liuoksen pH asetettiin arvoon 2,3 lisäämällä tämän jälkeen kiinteätä natriumbikarbonaattia voimakkaasti sekoittaen. Liuokseen muodostuva liukenematon saostuma laitettiin yöksi jää-10 kaappiin. Tuloksena oleva jauhemainen aine suodatettiin ja kuivattiin, jolloin saatiin 5,29 g otsikon mukaista yhdistettä vaaleankeltaisena jauheena.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2SO] ς ppm: 15 4.54 [1H, singletti]; 4.55 [1H, dubletti, J - 5,0 Hz]; 5,06 [2H, singletti]; 5,08 [1H, dubletti, J - 2,2 Hz]; 20 5,83 [1H, dublettien dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 6,27 [1H, singletti]; 7,2-7,6 [5H, multipletti]; 7,79 [1H, singletti].

25 ESIMERKKI 19 2-amino-N6-metoksigriseoliinihappo 30 50 ml natriumhydroksidin 0,2 N vesiliuosta lisättiin 70 millilitraan metanolia, joka sisälsi 3 g dimetyyli-^-syano-^-metoksigriseolaattia (valmistettu esimerkissä 17 kuvatusti). Tuloksena olevaa seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 1,5 tuntia, jonka jälkeen sen pH asetettiin arvoon 11,7 2 millilitralla natriumhydroksidin 1 N vesiliuosta, ja seosta 35 sekoitettiin edelleen 30 minuuttia. Liuoksen pH asetettiin arvoon 7,0 väkevällä kloorivetyhapolla ja metanoli poistettiin tislaamalla. Jäljelle t 100 94133 jäävä liuos sekoitettiin 70 millilitraan etanolia ja sitä kuumennettiin 1,5 tuntia palautusjäähdyttäen. Liuotinta poistettiin haihduttamalla siten, että jäljelle jäi noin 50 ml liuosta, ja tuloksena oleva liuos sekoitettiin 50 millilitraan natriumhydroksidin 1 N vesiliuosta ja 5 sekoitettiin huoneen lämpötilassa 60 minuuttia. Tuloksena olevan seoksen pH asetettiin arvoon 1 väkevällä kloorivetyhapolla, ja pestiin tämän jälkeen etyyliasetaatilla. Vesikerroksen pH asetettiin arvoon 2,3 natriumbikarbonaatin 10 % w/v vesiliuoksella. Sitten se puhdistettiin pylväskromatografisesti käyttäen valmiiksi pakattua RP-8-kolonnia (kään-10 teisfaasityyppinen, Merck), jota eluoitiin vesiliuoksella, joka sisälsi 5 % v/v asetonitriiliä ja 0,02 % v/v etikkahappoa, jolloin saatiin 1,91 g otsikon mukaista yhdistettä.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2SO] ς ppm: 15 3.77 [3H, singletti]; 4,51 [1H, singletti]; 4,54 [1H, dubletti, J - 5,0 Hz]; 5.07 [1H, dubletti, J - 2,2 Hz]; 20 5,87 [1H, dublettien dubletti, J — 2,2 & 5,0 Hz]; 6,26 [1H, singletti]; 7.77 [1H, singletti], ESIMERKKI 20 25

2-amino-N6-hvdroksigriseoliinihaPDO

200 mg 2-amino-N6-bentsyylioksigriseoliinihappoa (valmistettu esimerkissä 18 esitetysti) kuumennettiin seoksessa, joka käsitti 20 ml metanolia ja 30 20 ml vettä. Sitten liuoksen annettiin seistä huoneen lämpötilassa jäissä jäähdyttäen. Siihen lisättiin 50 mg hiileen sidottua palladiumia (10 % w/w) ja seosta sekoitettiin siihen vetyä johtaen. Koska reaktioliuos muuttui sameaksi noin 30 minuutissa valkoisen aineen muodostumisen seurauksena, niin se kirkastettiin 5 millilitralla kloorivetyhapon 1 N 35 vesiliuosta, ja tuloksena olevaa liuosta sekoitettiin 1,5 tuntia. Katalyytti poistettiin suodattamalla, metanoli poistettiin tislaamalla » 94133 101 alennetussa paineessa, ja liuoksen pH asetettiin arvoon 2,2 lisäämällä siihen natriumbikarbonaatin kylläistä vesiliuosta koko ajan sekoittaen. Reaktioseoksen annettiin seistä jäähauteessa 30 minuuttia, ja tuloksena oleva kellertävä kiintoaines erotettiin suodattamalla, jolloin saatiin 5 100 mg otsikon mukaista yhdistettä.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2S0] <r ppm: 4,54 [1H, singletti]; 10 4,57 [1H, dubletti, J - 5,0 Hz]; 5,11 [1H, dubletti, J - 2,2 Hz]; 5,95 [1H, dublettien dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 6,31 [1H, singletti]; 7,83 [1H, singletti].

15 ESIMERKKI 21

Dime tvvli - 2 - amino -N6-bentswlioksi pr iseolaatti 20 5,4 g dimetyyli-N^bentsyylioksi-N^syanogriseolaattia (valmistettu esimerkissä 16 kuvatusti) liuotettiin 100 millilitraan metanolia. Tähän lisättiin 100 ml 0,25 M fosfaattipuskuriliuosta, ja seosta lämmitettiin 4 tuntia palautusjäähdyttäen. Kiteitä muodostui, kun metanolia tislattiin ‘ 25 pois. Kun metanoli oli saatu lähes tislatuksi, liuoksen pH asetettiin arvoon 9 natriumbikarbonaatin 10 % w/v vesiliuoksella. Seosta käsiteltiin ultraääniaalloilla 15-20 minuuttia, ja tuloksena olevat kiteet suodatettiin ja kuivattiin, jolloin saatiin 2,14 g otsikon mukaista yhdistettä. Tämän jälkeen emäliuoksen pH asetettiin arvoon 11 natriumhydroksidin 2 N 30 vesiliuoksella, ja sen annettiin seistä huoneen lämpötilassa yön yli.

. Tuloksena olevan liuoksen pH-arvo asetettiin arvoon 0,1 väkevällä kloori- vetyhapolla, ja liuosta käsiteltiin aktiivihiilellä, sen pH asetettiin arvoon 2,3 natriumhydroksidin 2 N vesiliuoksella, ja sen annettiin seistä 5oC:n lämpötilassa yön yli. Laskeutunut materiaali erotettiin suodatta-35 maila, jolloin saatiin 2,0 g esimerkin 18 otsikon mukaista yhdistettä.

102 94133

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [ (CD3)2SO] ς ppm: 3,63, 3,69 [yhteensä 3H, kukin singletti]; 4,51 [1H, dubletti, J - 5,0 Hz]; 5 4,62 [1H, singletti]; 5,03 [2H, singletti]; 5,09 [1H, dubletti, J - 2,2 Hz]; 5,83 [1H, dublettien dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 6,23 [1H, singletti]; 10 7,2-7,6 [5H, multipletti]; 7,70 [1H, singletti].

ESIMERKKI 22 15 2-aminogriseoliinihappo 100 mg 2-amino-N6-bentsyylioksigriseoliinihappoa (valmistettu esimerkissä 18 kuvatusti) liuotettiin seokseen, joka käsitti 20 ml kloorivetyhapon 1 N liuosta ja 20 ml asetonia. Liuokseen lisättiin 1 ml Raney-nikkeliä (W-20 2), ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 2,5 tuntia. Raney-nikkeli erotettiin suodattamalla, ja reaktioseoksen pH asetettiin arvoon 2,3. Se puhdistettiin pylväskromatografisesti käyttäen valmiiksi pakattua RP-8-kolonnia (Merck), jota eluoitiin asetonitriilin 3 % v/v vesiliuoksella. Varsinainen fraktio lyofilisoitiin, jolloin saatiin 12 g otsikon mukaista ’ 25 yhdistettä valkoisena jauheena.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2SO] ς ppm: 4,46 [1H, singletti]; 30 4,55 [1H, dubletti, J - 5,0 Hz]; 5,02 [1H, dubletti, J - 2,2 Hz]; 5,87 [1H, dublettien dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 6,28 [1H, singletti]; 7,90 [1H, singletti], 35 ti 103 g /1 Ί 77 7*1 i Jj

Ohutkerroskromatografia (saadun yhdisteen Rf-arvon ja griseoliinihapon Rf-arvon, joka asetettiin arvoksi 1,0, välinen suhde).

Silikageelilevyllä (Merck): 0,80 (kehitysliuos: vesi: metanoli: aseto-5 nitriili 70:15:15 tilavuusosina) Käänteisfaasilla pinnoitettu RP-8-levy: 0,79 (kehitysliuos: vesi, joka sisältää 2 % v/v asetonitriiliä ja 0,02 % v/v etikkahappoa).

10 ESIMERKKI 23

Dibentshvdrwli - 2-amino-N6-bentsvvl joksi eri seolaatti 1,0 g 2-amino-N6-bentsyylioksigriseoliinihappoa (valmistettu esimerkissä 18 esitetysti) suspendoitiin 100 millilitraan asetonia ja 100 milli-litraan vettä. Difenyylidiatsometaania lisättiin niin paljon, kunnes sen punaisen värin katoamista ei enää voitu todeta. Tämän jälkeen reak-tioseosta sekoitettiin lisäten siihen samalla 4 ml kloorivetyhapon 1 N vesiliuosta; ja difenyylidiatsometaania lisättiin jälleen niin kauan, ^ kunnes sen punaisen värin katoamista ei enää voitu havaita. Sitten seosta sekoitettiin 60 minuuttia. Asetoni poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja vesi poistettiin dekantoimalla. Jäännös liuotettiin seokseen, joka käsitti 50 ml etyyliasetaattia ja 50 ml vettä, ja orgaaninen ; kerros pestiin 30 millilitralla natriumbikarbonaatin 5 % w/v vesiliuosta * os ja 30 millilitralla natriumkloridin kylläistä vesiliuosta, jonka jälkeen se kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös liuotettiin 30 millilitraan etyyliasetaattia, ja tuloksena oleva liuos kaadettiin 500 millilitraan heksaania koko ajan sekoittaen. Tuloksena oleva liukenematon materiaali otettiin talteen suodattamalla ja puhdistettiin kromatografisesti käyttä- * · en valmiiksi pakattua silikageelikolonnia (Merck), jota eluoitiin 2,5 % v/v metanolia sisältävällä metyleenikloridilla. Kahdesta varsinaisesta fraktiosta se, joka eluoitui myöhemmin, otettiin talteen, haihdutettiin kuiviin ja lyofilisoitiin bentseenistä, jolloin saatiin 430 g otsikon 35 mukaista yhdistettä valkoisena jauheena.

• · 104 94133

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2SO] ς ppm: 4,63 [1H, dubletti, J - 5,0 Hz); 4,99 [1H, singletti]; 5 5,07 [2H, singletti]; 5.31 [1H, dubletti, J - 2,2 Hz]; 5,97 [1H, dublettien dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 6,33 [1H, singletti]; 6,75 [1H, singletti]; 10 6,81 [1H, singletti]; 7,74 [1H, singletti], ESIMERKKI 24 15 Dibentshvdrwli-2-amino-N6-bentsvvlioksi-N6-bentshvdrwligriseolaatti

Reaktioseos puhdistettiin kromatografisesti silikageelikolonnia käyttäen, esimerkissä 23 kuvattua toimenpidettä noudattaen. Ensimmäinen varsinainen fraktio otettiin talteen, haihdutettiin kuiviin ja lyofilisoitiin bent-20 seenistä, jolloin saatiin 420 mg otsikon mukaista yhdistettä.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [ (CD3)2SO] ς ppm: 4,53 [2H, leveä singletti]; 25 4,72 [1H, dubletti, J - 5,0 Hz]; 4,96 [1H, singletti]; 5.31 [1H, dubletti, J - 2,2 Hz]; 6,10 [1H, dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 6,46 [1H, singletti]; 30 6,75 [1H, singletti]; . 6,82 [1H, singletti]; 7,69 [1H, singletti]; 8,13 [1H, singletti], 35

II

105 94133 ESIMERKKI 25

Dibentshvdrwli - 2 -aminoeriseolaatti 5 83 mg dibentshydryyli-2-amino-N6-bentsyylioksigriseolaattia (valmistettu esimerkissä 23 esitetysti) liuotettiin seokseen, joka käsitti 20 ml asetonia ja 10 ml kloorivetyhapon 1 N vesiliuosta. Seokseen lisättiin 1 ml Raney-nikkeliä (W-2), jonka jälkeen seosta sekoitettiin voimakkaasti huoneen lämpötilassa 45 minuuttia. Raney-nikkeli poistettiin suodatta-10 maila, ja liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, jatkaen tislaamista niin kauan, ettei asetonin hajua kyetty enää havaitsemaan. Tuloksena oleva seos sekoitettiin 30 millilitraan etyyliasetaattia ja erotettiin. Orgaaninen kerros pestiin 20 millilitralla natriumbikarbonaatin 10 % w/v vesiliuosta ja 20 millilitralla natriumkloridin kylläistä 15 vesiliuosta, ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Liuotin poistettiin alennetussa paineessa tislaamalla, ja jäännös puhdistettiin kromatografisesti käyttäen valmiiksi pakattua silikageelikolonnia (Merck), jota eluoitiin 5 % v/v metanolia sisältävällä metyleenikloridillä. Varsinainen fraktio otettiin talteen ja lyofilisoitiin bentseenistä, 20 jolloin saatiin 73 mg otsikon mukaista yhdistettä valkoisena jauheena.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2S0] ς ppm: 4,67 [1H, dubletti, J - 5,0 Hz]; | 25 4,92 [1H, singletti]; 5,27 [1H, dubletti, J - 2,2 Hz); 6,03 [1H, dublettien dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 6,37 [1H, singletti]; 6,73 [1H, singletti]; 30 6,77 [1H, singletti]; 7,97 [1H, singletti], • · ESIMERKKI 26 106 94133 2-Aminogriseoliinihappo 5 0,56 g dibentshydryyli-2-aminogriseolaattia (valmistettu esimerkissä 25 kuvatusti) suspendoitiin 5 millilitraan anisolia ja tehtiin liukoiseksi lisäämällä 5 ml trifluorietikkahappoa suspensiota jäissä kylmänä pitäen, jonka jälkeen seoksen annettiin seisoa huoneen lämpötilassa 10-15 minuuttia. Reaktioseokseen lisättiin 15 ml tolueenia ja liuotin poistettiin 10 tämän jälkeen tislaamalla. Toimenpide, jossa seokseen lisättiin 5 milli-litrasta asetonia ja 15 millilitrasta tolueenia muodostuva liuotinseos, ja jossa tämä liuotinseos poistettiin tämän jälkeen tislaamalla, toistettiin kahdesti ja jäännös suspendoitiin 2 millilitraan asetonia. Tuloksena oleva suspensio kaadettiin 200 millilitraan heksaania koko ajan 15 sekoittaen. Tuloksena oleva jauhemainen materiaali erotettiin suodattamalla ja liuotettiin natriumbikarbonaatin 10 % w/v vesiliuokseen. Tuloksena olevan liuoksen pH asetettiin arvoon 0,6 väkevällä kloorivetyhapol-la, ja liuosta käsiteltiin aktiivihiilellä. Tuloksena olevan seoksen pH asetettiin arvoon 2 natriumbikarbonaatin 10 % w/v vesiliuoksella ja 20 seoksen annettiin seisoa 5oC:n lämpötilassa yön yli. Erottuneet kiteet erotettiin suodattamalla ja kuivattiin, jolloin saatiin 0,15 g otsikon mukaista yhdistettä. Emäliuos puhdistettiin kromatografisesti käyttäen käänteisfaasilla täytettyä kolonnia, joka oli täytetty valmiiksi RP-8-faasilla (Merck), ja jota eluoitiin asetonitriilin 3 % v/v vesiliuoksel-25 la, jolloin saatiin 0,04 g otsikon mukaista yhdistettä, jolla yhdisteellä oli samat ominaisuudet kuin esimerkin 22 tuotteella.

ESIMERKKI 27 30 Dibentshvdrwli-2-hvdroksigriseolaatti 0,6 g dibentshydryyli-2-aminogriseolaattia (valmistettu esimerkissä 25 kuvatusti) liuotettiin 50 millilitraan etikkahapon 80 % v/v vesiliuosta. Astiassa oleva ilma syrjäytettiin typellä, ja tämän jälkeen seokseen 35 lisättiin 1 g natriumnitriittiä seosta jäissä kylmänä pitäen, ja seoksen annettiin reagoida huoneen lämpötilassa 1,5 tuntia. Liuotin poistettiin « ♦ ♦

II

94133 107 tislaamalla, ja jäännös sekoitettiin veteen, ja vesi poistettiin samoin tislaamalla. Erottunut materiaali suspendoitiin veteen ja vesi poistettiin samoin tislaamalla. Erottunut materiaali suspendoitiin veteen ja otettiin talteen suodattamalla. Jäännös liuotettiin 15 millilitraan 5 asetonia ja liuoksen pH asetettiin arvoon 9-10 lisäämällä siihen ammoniakin väkevää vesiliuosta. Tuloksena olevan liuoksen annettiin seisoa huoneen lämpötilassa 20 minuuttia, jonka jälkeen asetoni poistettiin tislaamalla. Jäännös sekoitettiin 50 millilitraan etyyliasetaattia ja 50 millilitraan vettä ja sitä sekoitettiin huolellisesti. Tuloksena oleva 10 saostuma erotettiin suodattamalla ja puhdistettiin kromatografisesti silikageelikolonnilla (jota eluoitiin 10 % v/v metanolia sisältävällä metyleenikloridilla), jolloin saatiin 0,35 g otsikon mukaista yhdistettä. Erotettu etyyliasetaattikerros pestiin natriumbikarbonaatin 10 % w/v vesiliuoksella ja natriumkloridin kylläisellä vesiliuoksella ja kuivat- 15 tiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Kuivausaine poistettiin suodattamalla ja liuotin tislattiin pois. Tuloksena oleva jäännös puhdistettiin kromatografisesti silikageelikolonnilla, käyttäen eluenttina 10 % v/v metanolia sisältävää metyleenikloridia, jolloin saatiin 0,04 g otsikon mukaista yhdistettä.

20

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2S0] ς ppm: 4,59 [1H, dubletti, J - 5,0 Hz]; 4,90 [1H, singletti]; 25 5,25 (1H, dubletti, J - 2,2 Hz]; 6,05 [1H, dublettien dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 6,30 [1H, singletti]; 6,67, 6,73 [yhteensä 1H, kukin singletti]; 7,0-7,5 [20H, multipletti]; 30 7,93 [1H, singletti].

. « * ESIMERKKI 28 108 94133

Dlbentshvdrwli-6-desamino-2.6-dihvdroksi.grIseolaatti 5 Esimerkissä 27 kuvatussa toimenpiteessä etyyliasetaatin ja veden seoksesta suodattamalla erotettu, saostunut materiaali käsiteltiin kromatografi-sesti silikageelikolonnia käyttäen. Ensiksi eluoitui esimerkin 27 otsikon mukaista yhdistettä 10 % v/v metanolia sisältävällä metyleenikloridilla; seuraava fraktio eluoitiin metanolilla, jolloin saatiin 0,06 g otsikon 10 mukaista yhdistettä.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2SO] ς ppm: 4,47 [1H, dubletti, J = 5,0 Hz]; 15 4,85 [1H, singletti]; 5,19 [1H, dubletti, J - 2,2 Hz]; 6,04 [1H, dublettien dubletti, J - 5,0 & 2,2 Hz]; 6,22 [1H, singletti]; 6,65, 6,73 [yhteensä 1H, kukin singletti]; 20 7,15-7,45 [20H, multipletti]; 7,56 [1H, singletti], ESIMERKKI 29 25 2-hvdroksigriseoliinihappo 0,37 g dibentshydryyli-2-hydroksigriseolaattia (valmistettu esimerkissä 27 esitetysti) liuotettiin 3 millilitraan anisolia. Tähän lisättiin 3 ml trifluorietikkahappoa liuosta jäissä kylmänä pitäen, ja seoksen annettiin 30 seisoa huoneen lämpötilassa 10 minuuttia. Sitten seokseen lisättiin tolu-eenia, jonka jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla. Jäännökseen lisättiin asetonin ja tolueenin seosta, joka tämän jälkeen poistettiin tislaamalla. Toimenpide toistettiin kahdesti ja tuloksena oleva seos suspen-doitiin 2 millilitraan asetonia ja kaadettiin 100 millilitraan heksaania 35 koko ajan sekoittaen. Erottunut materiaali otettiin talteen suodattamalla. Jäännös liuotettiin natriumbikarbonaatin 10 % w/v vesiliuokseen ja

II

94133 109 liuoksen pH asetettiin arvoon 1,2 väkevällä kloorivetyhapolla. Tuloksena oleva seos puhdistettiin pylväskromatografisesti käyttäen valmiiksi pakattua RP-8-kolonnia (Merck), jota eluoitiin vedellä, jolloin saatiin 0,17 g otsikon mukaista yhdistettä.

5

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2SO] ς ppm: 4.46 [1H, singletti]; 4.47 [1H, dubletti, J - 5,0 Hz]; 10 5,05 [1H, dubletti, J - 2,2 Hz]; 5,89 [1H, dublettien dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 6,24 [1H, singletti]; 7,95 [1H, singletti].

15 Ohutkerroskromatografia (saadun yhdisteen Rf-arvon ja griseoliinihapon Rf-arvon, joka asetettiin arvoksi 1,0, välinen suhde) Käänteisfaasilla RP-8-pinnoitettu levy (Merck): 1,32 (kehitysliuos: vesi, joka sisältää 2 % v/v asetonitriiliä ja 0,02 % v/v etikkahappoa).

20 ESIMERKKI 30 6-desamino-2.6-dihvdroksigriseoliinihappo 25 40 mg dibentshydryyli-6-desamino-2,6-dihydroksigriseoliinihappoa (valmis tettu esimerkissä 28 kuvatusti) liuotettiin 1 millilitraan anisolia. Tähän liuokseen lisättiin 1 ml trifluorietikkahappoa liuosta jäissä kylmänä pitäen, ja seoksen annettiin seisoa huoneen lämpötilassa 10-15 minuuttia. Toimenpide, jossa tolueenia lisättiin ja jossa se poistettiin 30 tislaamalla, jonka jälkeen seokseen lisättiin asetonin ja tolueenin seosta, joka poistettiin tislaamalla, toistettiin kahdesti, ja saatu jäännös suspendoitiin 0,5 millilitraan asetonia. Sen jälkeen, kun suspensioon oli lisätty 20 ml heksaania, erottunut materiaali otettiin talteen suodattamalla. Jäännös liuotettiin natriumbikarbonaatin 10 % w/v vesili-35 uokseen. Liuoksen pH asetettiin arvoon 0,6 väkevällä kloorivetyhapolla. Tuloksena oleva liuos puhdistettiin pylväskromatografisesti käyttäen 110 94133 valmiiksi pakattua RP-8-kolonnia (käänteisfaasityyppinen, Merck), jota eluoitiin vedellä, jolloin saatiin 25 mg otsikon mukaista yhdistettä.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2S0] ς ppm: 5 4,49 [1H, singletti]; 4,58 [1H, dubletti, J - 5,0 Hz]; 5,12 [1H, dubletti, J - 2,2 Hz]; 5,53 [1H, dublettien dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 10 6,41 [1H, singletti]; 7,91 [1H, singletti].

Ohutkerroskromatografia (saadun yhdisteen Rf-arvon ja griseoliinihapon Rf-arvon, joka asetettiin arvoksi 1,0, välinen suhde) 15

Silikageelillä pinnoitettu levy (Merck): 0,57 (kehitysliuos: vesi: metanoli: asetonitriili 70:15:15 tilavuusosina); Käänteisfaasila RP-8 pinnoitettu levy (Merck): 1,65 (kehitysliuos: vesi, 20 joka sisältää 2 % v/v asetonitriiliä ja 0,02 % v/v etikkahappoa).

ESIMERKKI 31

Dimetwli-N6-bentswlioksi-2- (Ν' .Ν' -dimetwliaminometvleem' laminoeriseo-25 laatti t 528 mg dimetyyli-2-amino-N6-bentsyylioksigriseolaattia (valmistettu esimerkissä 21 kuvatulla tavalla) liuotettiin 10 millilitraan dimetyyli-formamidia. Tähän lisättiin 0,24 ml dimetyyliformamidin dimetyyliase-30 taalia, ja seoksen annettiin seisoa huoneen lämpötilassa 2 tuntia. Sen jälkeen, kun lähtömateriaalin katoaminen oli varmistettu ohutkerroskromatograf isesti , liuotin poistettiin suodattamalla alennetussa paineessa. Jäännös liuotettiin 40 millilitraan metyleenikloridia ja 40 milli-litraan vettä, ja orgaaninen kerros pestiin 20 millilitralla natrium-35 kloridin kylläistä vesiliuosta. Kaikki saadut vesikerrokset yhdistettiin ja sekoitettiin tämän jälkeen 2 millilitraan natriumbikarbonaatin 5 % w/v •

II

111 o /1 1 7 7

/t I JJ

vesiliuosta ja uutettiin kahdesti 20 millilitralla metyleenikloridia. Orgaaniset kerrokset yhdistettiin, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös käsiteltiin kromatografisesti silikageelikolonnilla (Merck), jota 5 eluoitiin 3 % v/v metanolia sisältävällä metyleenikloridilla. Puhdistamisen jälkeen saatu aine lyofilisoitiin bentseenistä, jolloin otsikon mukaista yhdistettä saatiin 322 mg valkoisena jauheena.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2S0] ς ppm: 10 3,04 [3H, singletti] ; 3,19 [3H, singletti]; 3,67 [3H, singletti]; 3,72 [3H, singletti]; 15 4,47 81H, dubletti, J - 5,0 Hz]; 4,63 [1H, singletti]; 5,01 [2H, singletti]; 5,12 [1H, dubletti, J - 2,2 Hz]; 6,00 [1H, dublettien dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz9; 20 6,38 [1H, singletti]; 7,2-7,6 [5H, multipletti] ; 7,83 [1H, singletti]; 8,50 81H, singletti].

25 ESIMERKKI 32

Dimetwli-2- (N* .N* -dimetwliaminometvleenDaminogriseolaatti 30 583 mg dimetyyli-N6-bentsyylioksi-2-(N' ,N'-dimetyyliaminometyleeni)amino- griseolaattia (valmistettu esimerkissä 31 esitetysti) liuotettiin 100 millilitraan asetonia ja 75 millilitraan 1 N kloorivetyhappoa. Tähän lisättiin 10 ml veteen suspendoitua Raney-nikkeliä (W-2), ja tuloksena olevaa seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia, pitäen pH 35 vähintään arvossa 1,0, seuraten sitä pH-mittarilla. Raney-nikkeli poistettiin suodattamalla ja suodosta tiivistettiin haihduttamalla alenne- • 112 94133 tussa paineessa. Kun asetoni oli saatu poistetuksi lähes täydellisesti, niin tuloksena oleva seos sekoitettiin 200 millilitraan metyleenikloridia ja se neutraloitiin natriumbikarbonaatin vesiliuoksella, ja tuloksena oleva liukenematon materiaali poistettiin suodattamalla. Orgaanisen 5 kerroksen erottamisen jälkeen vesikerros uutettiin kolmasti, kulloinkin 50 millilitralla metyleenikloridia. Orgaaniset kerrokset yhdistettiin ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös käsiteltiin kromatografisesti käyttäen silikageelillä täytettyä kolonnia (Merck), jota eluoitiin 5 % 10 v/v metanolia sisältävällä metyleenikloridilla. Saatu aine puhdistettiin ja lyofilisoitiin bentseenistä, jolloin saatiin 180 mg otsikon mukaista yhdistettä valkoisena jauheena.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2S0] ς ppm: 15 3,04 [3H, singletti]; 3,15 [3H, singletti]; 3,67 [3H, singletti]; 3,73 [3H, singletti]; 20 4,53 [1H, dubletti, J - 5,0 Hz]; 4,64 [1H, singletti]; 5,13 [1H, dubletti, J - 2,2 Hz]; 6,06 [1H, dublettien dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 6,47 [1H, singletti]; *' 25 7,33 [1H, singletti].

ESIMERKKI 33

Dimetwli-6-desamino-2- (Ν' .Ν' -dimetvvliaminometvleeni') -amino-6-hvdroksi-30 eriseolaatti 477 mg dimetyyli-2-(N',N'-dimetyyliaminometyleeni)aminogriseolaattia (valmistettu esimerkissä 32 esitetysti) liuotettiin 50 millilitraan etikkahapon 80 % v/v vesiliuosta. Tähän lisättiin 1,34 g natriumnitriit-35 tiä liuosta jäissä kylmänä pitäen, jonka jälkeen seoksen annettiin seisoa huoneen lämpötilassa 17 tuntia. Sen jälkeen, kun lähtömateriaalin katoa-

II

94133 113 niinen oli varmistettu ohutkerroskromatografisesti, liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännökseen lisättiin etanolia, joka tämän jälkeen poistettiin tislaamalla, ja tätä etanolin lisäämistä ja tislaamalla poistamista toistettiin niin monta kertaa, ettei etikkahapon 5 hajua voitu enää havaita. Jäännös liuotettiin seokseen, joka käsittää 50 ml metyleenikloridia, 20 ml vettä ja 5 ml natriumbikarbonaatin 5 % w/v vesiliuosta. Orgaaninen kerros erotettiin ja se uutettiin kolmasti, kulloinkin 30 millilitralla metyleenikloridia, ja saadut uutteet yhdistettiin. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös 10 puhdistettiin kromatografisesti käyttäen valmiiksi pakattua silikageeli-kolonnia (Merck), jota eluoitiin 10 % v/v metanolia sisältävällä mety-leenikloridilla. Varsinaiset fraktiot otettiin talteen ja lyofilisoitiin bentseenistä, jolloin otsikon mukaista yhdistettä saatiin 310 mg valkoisena jauheena.

15

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (metanoli) Araax: hapan: 292 nm neutraali: 300 nm 20 emäksinen: 279 nm.

ESTMERKKI 34 2-amino-6-desamino-6-hvdroksigriseoliinihappo 25 130 mg dimetyyli-6-desamino-2-(N' -dimetyyliaminometyleeni)amino-6-hydroksigriseolaattia (valmistettu esimerkissä 33 kuvatusti) liuotettiin 20 millilitraan ammoniakin väkevää vesiliuosta, ja seoksen annettiin seisoa huoneen lämpötilassa 3 tuntia. Liuos haihdutettiin kuiviin alenne-30 tussa paineessa, ja jäännös liuotettiin 10 millilitraan vettä. Tuloksena olevan liuoksen pH asetettiin arvoon 2,3, jonka jälkeen se käsiteltiin kromatografisesti käyttäen valmiiksi pakattua RP-8-kromatografiakolonnia (Merck), joka pestiin vedellä, ja jota eluoitiin 5 % v/v asetonitriiliä sisältävällä vedellä. Varsinaiset fraktiot otettiin talteen ja lyofi-35 lisoitiin, jolloin saatiin 67 mg otsikon mukaista yhdistettä valkoisena j auheena.

94133 114

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (H20) Xmax: hapan: 225 nm, 273 nm ("olkapää") neutraali: 253 nm, 278 nm ("olkapää") 5 emäksinen: 264 nm.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2SO] ς ppm: 4,48 [1H, singletti]; 10 4,53 [1H, dubletti, J - 4,9 Hz]; 5,07 [1H, dubletti, J * 2,4 Hz]; 5,79 [1H, dublettien dubletti, J - 2,4 & 4,9 Hz]; 6,25 [1H, singletti]; 7,87 [1H, singletti].

15

Ohutkerroskromatografia (saadun yhdisteen Rf-arvon ja griseoliinihapon Rf-arvon, joka asetetaan arvoksi 1,0, välinen suhde):

Silikageelillä päällystetty levy (Merck): 0,80 (kehitysliuoksena vesi: 20 metanoli: asetonitriili 70:15:15, tilavuusosina); Käänteisfaasilla RP-8 päällystetty levy (Merck): 1,44 (kehitysliuos: vesi, joka sisältää 2 % v/v asetonitriiliä ja 0,02 % v/v etikkahappoa).

25 ESIMERKKI 35

Metwli-2-amino-6-desamino-6-hvdroksigriseolaatti 418 mg hopeaperkloraattia lisättiin suspensioon, joka käsitti 400 mg 2-30 amino-6-desamino-6-hydroksigriseoliinihappoa (valmistettu esimerkissä 34 kuvatulla tavalla) 40 millilitrassa metanolia, ja tuloksena olevaan seokseen lisättiin 0,187 ml metyylijodidia, seosta koko ajan huoneen lämpötilassa sekoittaen. Seosta sekoitettiin jatkuvasti huoneen lämpötilassa edelleen 2,5 tuntia, jonka jälkeen siihen lisättiin jälleen 0,126 35 ml metyylijodidia. Tuloksena olevaa seosta sekoitettiin edelleen 8 tuntia, jonka jälkeen se laitettiin yöksi jääkaappiin. Erottunut liu- 94133 115 kenematon materiaali erotettiin suodattamalla, ja metanoli poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös liuotettiin veteen ja tuloksena olevan liuoksen pH asetettiin arvoon 1,38 kloorivetyhapon väkevällä vesiliuoksella, ja liuos puhdistettiin kromatografisesti valmiiksi 5 pakatun RP-8-kolonnin (Merck) läpi johtaen, käyttäen eluenttina 5 % v/v asetonitriiliä sisältävää vettä. Saatu pääasiallinen fraktio pakaste-kuivattiin, jolloin otsikon mukaista yhdistettä saatiin 170 mg valkoisena jauhemaisena aineena.

10 Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (H20) Amax: hapan: 257,5 nm, 280 nm ("olkapää") neutraali: 253,5 nm, 275 nm ("olkapää") emäksinen: 265 nm.

15

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2SO] ς ppm: 4,53 [1H, dubletti, J - 5,4 Hz]; 4,59 [1H, singletti]; 20 5,09 [1H, dubletti, J - 2,0 Hz]; 5,80 [1H, dublettien dubletti, J - 2,0 & 5,4 Hz]; 6,25 [1H, singletti]; 7,88 [1H, singletti].

*: 25 ESIMERKKI 36 2-amino-6-desamino-6-hvdroksigriseoliinihapon monoamidi 30 Liuoksen, joka käsitti 120 mg metyyli-2-amino-6-desamino-6-hydroksi-griseolaattia (valmistettu esimerkissä 35 esitetysti) 20 millilitrassa ammoniakin 20 % v/v metanoliliuosta, annettiin seisoa yön yli. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, ja jäännös liuotettiin 3 millilitraan natriumhydroksidin 1 N vesiliuosta. Tuloksena 35 olevan liuoksen pH asetettiin arvoon 1,8-1,9 lisäämällä siihen kloorivetyhapon väkevää vesiliuosta, jäissä kylmänä pitäen, jolloin saatiin 116 94133 muodostetuksi in situ geelimäistä materiaalia. Tämän jälkeen se liuotettiin noin 20 millilitraan vettä asettamalla pH arvoon 0,5. Sitten tuloksena olevan liuoksen pH asetettiin arvoon 1,0 lisäämällä natriumbikarbonaatin vesiliuosta. Liukenematon materiaali suodatettiin pois, ja 5 jäännös puhdistettiin pylväskromatografisesti valmiiksi pakatun RP-8-kolonnin (Merck) läpi johtaen, ja käyttäen eluenttina 5 % v/v aseto-nitriiliä sisältävää vettä. Varsinainen fraktio pakastekuivattiin, jolloin saatiin 79 mg otsikon mukaista yhdistettä.

10 Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (H20) Amaxnm (c): hapan: 257 (12100), 280 ("olkapää") (8400); neutraali: 252 (13700), 277 ("olkapää") (8800); emäksinen: 264 (12400).

15

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2SO] ς ppm: 4,32 [1H, singletti]; 4,50 [1H, dubletti, J - 4,9 Hz]; 20 5,05 [1H, dubletti, J — 2,0 Hz]; 5,80 [1H, dublettien dubletti, J - 2,4 & 4,9 Hz]; 6,24 [1H, singletti]; 7,78 [1H, singletti], ·: 25 VALMISTUS 1

Dimetvvligriseolaatti 700 mg griseoliinihappoa liuotettiin 100 millilitraan dimetyyliformami-30 dia, jäissä kylmänä pitäen. Liuosta, joka käsitti 1,0-1,2 millimoolia * diatsometaania 1 millilitrassa dietyylieetteriä, lisättiin sekoittaen tähän liuokseen niin paljon, kunnes keltainen väri osoitti diatsometaanin läsnäolon. Sitten seoksen annettiin seisoa 10 minuuttia. Tämän jälkeen seokseen lisättiin etikkahappoa ylimääräisen diatsometaanin hajottami-35 seksi, jonka jälkeen se poistettiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin jäännös. Jäännös liuotettiin metanoliin, ja liukenematon li 94133 117 materiaali erotettiin suodattamalla. Suodos haihdutettiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin jäännös, joka kiteytettiin uudestaan vedestä, jolloin saatiin 540 mg otsikon mukaista yhdistettä.

5 Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (metanoli) Xmaxnm: 258 (c - 15600).

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [ (CD3)2SO] ς ppm: 10 4,60 [1H, dubletti, J - 6,0 Hz]; 4,66 [1H, singletti]; 5,12 [1H, dubletti, J - 3,0 Hz]; 6,06 [1H, dublettien dubletti, J - 3,0 & 6,0 Hz]; 15 6,53 [1H, singletti]; 8,33 [1H, singletti]; 8,37 [1H, singletti].

VALMISTUS 2 20

Dimetwli-02'. 07' -diasetwlieriseolaatti 10 g dimetyyligriseolaattia (valmistettu valmistuksessa 1 esitetysti) liuotettiin pyöreäpohjaisessa pullossa 150 millilitraan pyrimidiiniä, ja ” 25 siihen lisättiin 33 ml asetanhydridiä jäissä kylmänä pitäen. Seoksen annettiin seisoa huoneen lämpötilassa 2 tuntia. Tämän ajan päätyttyä reaktioseokseen lisättiin 15 ml vettä sitä jäissä kylmänä pitäen, ja liuotin poistettiin haihduttamalla alennetussa paineessa. Jäännös liuotettiin 400 millilitraan metyleenikloridia, ja tuloksena oleva liuos 30 pestiin 400 millilitralla kloorivetyhapon 1 N vesiliuosta, 400 milli-*. litralla vettä ja 400 millilitralla natriumbikarbonaatin kylläistä vesiliuosta, tässä järjestyksessä. Tämän jälkeen liuos uutettiin kahdesti metyleenikloridilla. Metyleenikloridiuutteet kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, ja liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa 35 paineessa, jolloin saatiin 6,70 g otsikon mukaista yhdistettä kiteinä.

118 94135

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2SO] ς ppm: 5,17 [1H, dubletti, J - 3,0 Hz]; 5,66 [1H, dubletti, J - 6,0 Hz]; 5 5,73 [1H, singletti]; 6,31 [1H, dublettien dubletti, J - 3,0 & 6,0 Hz]; 6,89 [1H, singletti]; 8,23 [1H, singletti]; 8,36 [1H, singletti].

10 VALMISTUS 3

Dimetwli-O2' .O7’ -diasetvvli-6-desamino-6-hvdroksigriseolaatti 15 2,55 g natriumnitriittiä lisättiin liuokseen, joka käsitti 1,82 g dime- tyyli-O2’,07'-diasetyyligriseolaattia (valmistettu valmistuksessa 2 kuvatusti) etikkahapon 80 % v/v vesiliuoksessa, liuosta jäissä kylmänä pitäen, ja seoksen annettiin seisoa 16 tuntia tiukasti suljetussa astiassa. Tässä vaiheessa voitiin todeta ohutkerroskromatografisesti, että 20 lähtömateriaalia oli jäljellä reaktioseoksessa. Seokseen lisättiin edelleen 1 g natriumnitriittiä ja seoksen annettiin seisoa 3 tuntia. Liuos poistettiin haihduttamalla, ja saatu jäännös liuotettiin asetoniin. Seokseen lisättiin tolueenia, jonka jälkeen se poistettiin tislaamalla. Tämä toimenpide toistettiin kolmasti.

*: 25 Jäännös liuotettiin veden ja kloroformin seokseen. Orgaaninen kerros pestiin natriumbikarbonaatin vesiliuoksella ja natriumkloridin kylläisellä vesiliuoksella, ja sitten se kuivattiin vedettömällä magnesium-sulfaatilla. Liuottimen haihduttaminen tuotti vaaleanruskeata lasimaista 30 ainetta. Tämä aine puhdistettiin kromatografisesti silikageelikolonnilla, jonka jälkeen se liuotettiin pieneen määrään asetonia. Liuokseen lisättiin asianmukainen määrä bentseeniä, ja seoksen annettiin seisoa. Tuloksena olevat valkoiset kiteet otettiin talteen suodattamalla, jolloin saatiin 1,28 g otsikon mukaista yhdistettä hienoina valkoisina kiteinä. 35

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2S0] ς ppm;

II

94133 119 5,22 [1H, dubletti, J - 3,0 Hz]; 5,62 [1H, dubletti, J - 6,0 Hz]; 5,73 [1H, singletti]; 6,13 [1H, dublettien dubletti, J - 3,0 & 6,0 Hz]; 5 6,88 [1H, singletti]; 8,18 [1H, singletti]; 8,34 [1H, singletti].

VALMISTUS 4 10 6-desamino- 6-hvdroks igriseoliinihappo

Liuos, joka käsitti 5,31 g griseoliinihappoa etikkahapon 80 % v/v vesi-liuoksessa, valmistettiin kuumentamalla, jonka jälkeen sen annettiin 15 jäähtyä huoneen lämpötilaan. Seokseen lisättiin 9,60 g natriumnitriittiä typpi-ilmakehässä. Seoksen annettiin seisoa 16 tuntia tiukasti suljetussa astiassa. Liuotin poistettiin seoksesta haihduttamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin jäännös. Tähän jäännökseen lisättiin etanolia, jonka jälkeen se poistettiin tislaamalla. Tämä toimenpide toistettiin 20 niin moneen kertaan, ettei seoksessa voitu enää todeta etikkahapon hajua. Jäännös liuotettiin 50 millilitraan vettä ja sen pH asetettiin arvoon 1,0 väkevällä kloorivetyhapolla, sitä jäissä kylmänä pitäen. Seoksen annettiin seisoa 16 tuntia jääkaapissa, ja tuloksena oleva saostuma otettiin talteen suodattamalla, pestiin pienellä määrällä vettä, ja kiteytettiin *· 25 uudestaan veden ja asetonin seoksesta, jolloin saatiin 1,66 g otsikon mukaista yhdistettä. Emäliuos väkevöimällä saatiin 2,20 g raakakiteitä, jotka kiteytettiin samoin uudestaan, jolloin saatiin edelleen 1,2 g otsikon mukaista yhdistettä.

30 Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2SO] ς ppm: 4.50 [1H, singletti]; 4,57 [1H, dubletti, J - 6,0 Hz]; 5,12 [1H, dubletti, J - 3,0 Hz]; 35 5,88 [1H, dublettien dubletti, J - 3,0 & 6,0 Hz]; 6.50 [1H, singletti]; 120 94133 8.17 [1H, singletti]; 8,33 [1H, singletti], VALMISTUS 5 5

Dimetwli-6-desamino - 6 -hvdroksi -4' B- kloori - 5 * - hydro-02'. O7' -diasetvvli-eriseolaatti 4 g dimetyyli-02' , O7'- diasetyyli - 6 - desamino - 6-hydroksigriseolaattia 10 (valmistettu valmistuksessa 3 kuvatusti) ja 40 ml etikkahappoa, joka sisälsi 4 % w/v kloorivetyä, laitettiin typpi-ilmakehässä kaksikaula-pulloon, joka oli varustettu jäähdyttimellä. Seosta lämmitettiin 80°C:n lämpötilassa 2 tuntia, jonka jälkeen liuotin poistettiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin jäännös. Jäännös liuotettiin 15 tolueeniin ja metyleenikloridiin, jotka poistettiin tämän jälkeen alennetussa paineessa. Tämä toimenpide toistettiin kolmasti. Jäännös puhdistettiin kromatografisesti silikageelikolonnilla, käyttäen 4 % v/v meta-nolia sisältävää metyleenikloridia eluenttina, jolloin saatiin 2,0 g otsikon mukaista yhdistettä.

20

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2S0] ς ppm: 3,32 [1H, dubletti, J - 15,0 Hz]; 3,75 [1H, dubletti, J - 15,0 Hz9; 25 5,28 [1H, dubletti, J - 4,5 Hz]; 6,00 [1H, singletti]; 6,28 [1H, dublettien dubletti, J - 4,5 & 5,9 Hz]; 6,55 [1H, dubletti, J - 5,9 Hz]; 8.18 [1H, singletti]; 30 8,47 [1H, singletti], li 94133 121 VALMISTUS 6

Dimetvvli-6-desamino-6-hväroksi-O2' .O7'-diasetvvli-4'B-bromi-5'-hvdro-griseolaatti 5

Seos, joka käsitti 500 mg dimetyyli-02',07’-diasetyyli-6-desamino-6-hydroksigriseolaattia (valmistettu valmistuksessa 3 kuvatulla tavalla) ja 10 ml 10 % w/v bromivetyhappoa sisältävää etikkahappoa, laitettiin astiaan, joka suljettiin, ja yhdiste liuotettiin käsittelemällä seosta 10 ultraääniaalloilla 30 minuuttia. Sitten liuoksen annettiin seisoa huoneen lämpötilassa 64 tuntia. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin jäännös, johon lisättiin asetonia ja toluee-nia, jotka liuottimet poistettiin sitten tislaamalla. Tämä toimenpide toistettiin kolmasti. Seos, joka käsitti tuloksena olevan jäännöksen 30 15 millilitrassa etyyliasetaattia, käsiteltiin ultraääniaalloilla, ja suodatettiin liukenemattoman materiaalin talteenottamiseksi. Tämä materiaali liuotettiin seokseen, joka käsitti 30 ml etyyliasetaattia ja 30 ml natriumbikarbonaatin 5 % w/v vesiliuosta, ja erotettiin. Orgaaninen kerros pestiin 20 millilitralla natriumkloridin kylläistä vesiliuosta ja 20 kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Liuos haihdutettiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin jäännös, joka puolestaan puhdistettiin kromatografisesti silikageelikolonnilla käyttäen eluenttina metyleeniklo-ridia, joka sisälsi 3 % v/v metanolia. Liuotin poistettiin varsinaisesta fraktiosta haihduttamalla alennetussa paineessa, ja jäännös liuotettiin 25 bentseeniin. Bentseeniliuos lyofilisoitiin, jolloin otsikon mukaista yhdistettä saatiin 60 mg valkoisena jauheena.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2SO] ς ppm: 30 2,98 [1H, dubletti, J - 15,6 Hz]; 3,47 [1H, dubletti, J - 15,6 Hz]; 5,35 [1H, dubletti, J - 4,2 Hz]; 5,57 [1H, singletti]; 6,32 [1H, dublettien dubletti, J - 6,6 & 4,2 Hz]; 35 6,53 81H, dubletti, J - 6,6 Hz]; 8,17 [1H, singletti]; 122 94133 8.47 [1H, singletti].

VALMISTUS 7 5 Dimetvvli - 6 - desamino - 6 -hvdroks i -4 * B . 5 ' - dihvdro - O2* . 07‘ -diasetvvl i -griseolaatti 500 mg dimetyyli-6-desamino-6-hydroksi-4'/9-kloori-5'-hydro-O2' ,Q7’-diase-tyyligriseolaattia (valmistettu valmistuksessa 5 kuvatusti) ja 10 mg 10 2,2'-atsobisisobutyronitriiliä laitettiin kaksikaulapulloon ja liuotet tiin 20 millilitraan bentseeniä typpi-ilmakehässä. Tähän liuokseen lisättiin 3,1 ml tributyltinahydridiä mäntäruiskulla, ja seosta sekoitettiin palautusjäähdyttäen 2 tuntia. Tämän ajan päätyttyä liuotin poistettiin haihduttamalla alennetussa paineessa. Jäännös liuotettiin mety-15 leenikloridiin ja se puhdistettiin kromatografisesti silikageelikolonnil-la, jota eluoitiin 3 % v/v metanolia sisältävällä metyleenikloridilla. Varsinaiset fraktiot väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 350 mg otsikon mukaista yhdistettä.

20 Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CDC13 + D20] ς ppm: 2,40-2,70 [2H, multipletti] ; 5,00 81H, dubletti, J - 4,5 Hz]; 5,62 [1H, singletti]; *· 25 5,88 81H, dublettien dubletti; J - 4,5 & 7,5 Hz]; 6.48 81H, dubletti, J - 7,5 Hz]; 8,13 [1H, singletti]; 8.48 [1H, singletti].

30 VALMISTUS 8

Dihvdrodesoksigriseoliinihappo

Ensin valmistettiin 30 litraa alustaa, jonka pH ennen sterilointia on 7,0 35 ja jonka koostumus on seuraava (prosenttiset osuudet ilmoitetaan painona tilavuusyksikköä kohden, w/v): il 94133 123 glukoosi 5 % soijajauho 1 % hiivauute 0,1 % polypeptoni 0,4 % 5 lihauute 0,4 % natriumkloridi 0,25 % kalsiumkarbonaatti 0,5 % vesi, täydennetään 100 prosentiksi.

10 15 litraa tätä alustaa laitettiin kulloinkin kahteen 30 litran säiliö- fermentoriin, joita steriloitiin tämän jälkeen paineen alaisuudessa, 120°C:n lämpötilassa 30 minuuttia. Viljelyalusta jäähdytettiin, jonka jälkeen kumpaankin fermentoriin siirrostettiin 150 ml (1 tilavuus-%) Streptomvces griseoaurantiacus SANK 63479-kannan viljelmää (joka oli 15 valmistettu tätä ennen inkuboimalla kantaa mainitussa alustassa pitäen viljelmää pyörösekoittimessa 28°C:n lämpötilassa 72 tuntia). Kantaa viljeltiin 28°C:n lämpötilassa 96 tuntia ilmastaen nopeudella 15 litraa minuutissa, ja sekoittaen nopeudella 200 rpm.

20 Sitten nämä kaksi viljelyalustaa suodatettiin myseelin poistamiseksi, ja yhdistetty suodos, jonka kokonaistilavuus oli 28 litraa ja pH 7,0, johdettiin Diaion HP 20-kolonnin (yhtiön Mitsubishi Chemical Industries Ltd. valmistamalle ioninvahtohartsille annettu tavaramerkki) läpi, ja adsorboitiin tämän jälkeen aktiivihiilellä täytettyyn kolonniin. Tämä * 25 kolonni pestiin vedellä, ja sitten adsorboitunut materiaali eluoitiin asetonin ja veden 60:40 (tilavuusosina) seoksella. Asetoni haihdutettiin tuloksena olevasta liuoksesta alennetussa paineessa, ja jäljelle jäänyt vesiliuos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa, ja lyofi-lisoitiin, jolloin saatiin 150 mg raakajauhetta.

30 Tämä raakajauhe liuotettiin pieneen määrään tislattua vettä ja adsorboitiin sitten Dowex lx4-hartsiin (Cl'-muodosssa; yhtiön Dow Chemical Company tuottaman ioninvaihtohartsin tavaramerkki). Tässä vaiheessa tuote oli seos, joka käsitti griseoliinihappoa ja dihydrodesoksigriseoliini- 35 happoa. Tämä seos eluoitiin käyttäen natriumkloridin avulla aikaansaatua gradienttia näiden kahden komponentin erottamiseksi, jonka jälkeen 94133 124 eluaattia käsiteltiin pylväskromatografisesti käyttäen Sephadex LH-20-kolonnia (yhtiön Pharmacia tavaramerkki) ja tästä kolonnista dihydro-desoksigriseoliinihappo eluoitiin vedellä. Tätä ainetta sisältävät fraktiot yhdistettiin, ja niiden pH asetettiin arvoon 2,5 lisäämällä 5 kloorivetyhapon 1 N vesiliuosta. Tämän jälkeen tuote adsorboitiin Diaion HP 20-kolonniin, pestiin vedellä ja eluoitiin sitten asetonin ja veden 60:40 (tilavuusosina) seoksella. Eluaatin annettiin seistä yön yli 4°C:n lämpötilassa, jolloin dihydrodesoksigriseoliinihappo erottui liuskamaise-na materiaalina. Tämä materiaali erotettiin nesteestä, jolloin saatiin 10 yhteensä 1,87 mg dihydrodesoksigriseoliinihappoa valkeina liuskoina, joiden sulamispiste on 160°C (hajoaa tässä lämpötilassa, värjäytyen ruskeaksi). Tällä yhdisteellä saatiin yksi ainoa täplä silikageelillä toteutetulla ohutkerroskromatografiällä (silikageelin tuotenumero 5715, yhtiön Merck & Co. Inc. tuote).

15 «

Claims (3)

94133

1 T>

10 H2H n 1,6 r5 n 15 ι^-Ο» OH n43 (XUII) 20 ja R5, R6, R22, R23, R29, R30 on määritelty kuten edellä, sen jälkeen haluttaessa alkyyli- tai aralkyyliryhmä R30 poistetaan kaavan (XLI) mukaisesta yhdisteestä ja korvataan vetyatomilla katalyyttisesti pelkistämällä kaavan (XLII) mukaisen yhdisteen saamiseksi 25 NHOH aX’> f Ί/°\ R31OOCnY)_/

35 R3200C-C° OH r29 K (XLII) 94133 jossa R5, R6, R29, R31 ja R32 on määritelty kuten edellä, joka on kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa R7 on NR10,RU, jossa R10 on vety ja R11 OH-ryhmä, R8 on NH2-ryhmä ja R31OOC ja R32OOC on R3 vast. R<1, R29 on R2 ja R1 on 0H-ryhmä, 5 menetelmävaihtoehdossa d) alkoksi- tai aralkyylioksiryhmä -OR30 kaavan (XLI) mukaisessa yhdisteessä korvataan vetyatomilla käsittelemällä yhdistettä aktiivisella metallilla 10 liuottimen läsnäollessa (ja toivottaessa karboksia suojaavat ryhmät poistetaan ja/tai ne muunnetaan amideiksi ja/tai ne muunnetaan suoloiksi ja/tai muuksi karboksia suojaavaksi yhdisteeksi) jolloin saadaan toivottu kaavan (XLIV) mukainen yhdiste 15 m2 fr\ 20 Η2Η'^<5ίΙ('^1'''Ν R6 R5 . r31°oc J-Yj : 25 «32ooc>o>-iH (XLIV) 30 joka on muuten samanlainen kaavan (I) mukainen yhdiste kuin yhdiste (XLII) paitsi, että R7 on NH2-ryhmä, haluttaessa kaavan (XLIV) mukainen yhdiste muutetaan kaavan (XLVIII) mukaiseksi monohydroksiyhdisteeksi tai kaavan (XLIX) mukaiseksi dihydrok-35 siyhdisteeksi antamalla sen reagoida diatsoyhdisteen tai triatseeniyhdis-teen kanssa II 94133 NH2 αΊ.) HO N R6 R5 g

10 R^OOCsJ \_J R3200C—-(^° OH R23 (XLV11I) 15 joka muuten on samanlainen kaavan (I) mukainen yhdiste kuin (XLIV), mutta R8 on OH-ryhmä, 20 OH ajO ^ HO^H^K 25 + R6 R5 R^ooc^y \ 'y

30 R^OOC-/^ OH r29 (XUX) joka muuten on samanlainen kaavan (I) mukainen yhdiste kuin (XLVIII), 35 mutta R7 on OH-ryhmä, 94133 menetelmävaihtoehdossa e) edellä kuvattu kaavan (XLIII) mukaisen yhdisteen annetaan reagoida dimetyyliformamidin asetaalin tai aldehydin kanssa sekä orgaanisen 5 emäksen kanssa 2-asemassa olevan aminoryhmän suojaamiseksi substituoitu-neella metyleeniryhmällä kaavan (LVII) mukaisen yhdisteen saamiseksi HSOÄ30 R39=N^K>-H R6 R5 n R^OOC Ay R%C^° »H R IIY1D 20 jossa R5, R6, R22, R23, R29, R30 on määritelty kuten edellä, ja R39 on substituoitunut metyleeniryhmä, sitten haluttaessa alkoksi- tai aralkyylioksiryhmä -OR30 poistetaan 25 aikaisemmin kuvatulla toimenpiteellä, jolloin saadaan kaavan (LVIII) mukainen yhdiste nh2 3° Ϊ j[ \ R39=N^N>-N/ R6 r5q

33 R2200Cs/ (LVmj II 94133 jossa R5, R6, R22, R23, R29 ja R39 on määritelty kuten edellä, haluttaessa 6-aminoryhmä voidaan muuttua hydroksiryhmäksi antamalla yhdisteen reagoida nitriitin kanssa aiemmin kuvatun toimenpiteen kaltai-5 sesti, jolloin saadaan kaavan (LIX) mukainen yhdiste OH rV>

10 R33 = „AHA|/ R6 R5 „ l5 r22°oc R%C -('r iH r29 (LIX) 20 jossa R5, R6, R29, R22, R23 ja R39 on määritelty kuten edellä, sen jälkeen haluttaessa puriiniemäksessä olevaa 2-aminoryhmää suojaava substituoitunut metyleeniryhmä poistetaan yhdessä molempien karboksia suojaavien ryhmien R22 ja R23 kanssa aiemmin kuvatulla tavalla, jolloin ' 25 saadaan kaavan (LVI) mukainen yhdiste OH i I ) Η2Η^Ν^"/ r6 r5 -(LVI) H00C-< J (Jh R23 94133 joka on kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa R5, R6 on määritelty kuten edellä, R29 on R2, R3 ja R* on karboksyyliryhmiä, R1 on OH-ryhmä, R7 on 0H-ryhmä ja R8 on NHZ-ryhmä, 5 sen jälkeen haluttaessa muodostetaan yhdisteen (LVI) suola, esteri tai amidi.

1. Analogiaroenetelmä kaavan (I) mukaisten lääkeaineina käytettävien griseoliinihapon johdannaisten valmistamiseksi, jossa kaavassa (I) 5 R7 . rV> II.) R6 R*

15. J/IL V 20 R1 ja R2 tarkoittavat kaavan -OR9 mukaisia ryhmiä, joissa R9 tarkoittaa vetyatomia tai bentsoyyliryhmää;

25 R3 ja R* tarkoittavat toisistaan riippumatta karbamoyyliryhmiä ja karbok- i siryhmiä ja alempia alkoksikarbonyyliryhmiä, mainittujen karboksyyli-ryhmien ollessa valinnaisesti substituoitu bentshydryyliryhmällä; sekä R5 että R6 tarkoittaa vetyatomeja tai ne muodostavat yhdessä ylimää- 30 räisen hiili-hiili-sidoksen niiden hiiliatomien väliin, joihin ne ovat « kiinnittyneet; • * R7 tarkoittaa OH-ryhmää tai ryhmää, jolla on kaava -NR10 R11, jossa R10, R11 tarkoittavat riippumattomasti vetyatomeja, alempia 35 alkoksiryhmiä, jotka on substituoitu fenyyliryhmällä, alempia alkyyliryhmiä, bentshydryyliryhmiä tai hydroksiryhmiä; 94133 R® tarkoittaa ryhmää, jolla on kaava NR12R13, SH, OH, jossa R12 ja R13 tarkoittaa dimetyyliaminometyleeniryhmää, vetyatomeja tai toinen ryhmistä on vetyatomi ja toinen tarkoittaa ¢^-020 alifaattista asyyliryhmää; 5 sekä näiden yhdisteiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen ja estereiden valmistamiseksi, tunnettu siitä, että griseoliiniha-pon (A)

10 KH2 Ljö 15 HOOC^W HOOC—OH 20 OH IA) annetaan reagoida siten, että sen hydroksi- ja karboksiryhmät saadaan 25 suojatuksi; ja toivottaessa aminoryhmä griseoliinihapon 6-asemassa muutetaan hydroksiryhmäksi antamalla griseoliinihapon tai suojatun griseoliinihapon reagoida typpihapokkeen suolan kanssa, jonka jälkeen menetelmävaihtoehdossa a) 30 ensin, tarvittaessa pelkistetään ryhmien R5 ja R6 muodostama ylimääräinen hiili-hiili-sidos, sitten 1'-asemassa sijaitseva nukleiinihappoemäs muunnetaan alkanoyyliok-35 siryhmäksi antamalla edellä saadun yhdisteen reagoida i) rikkihapon tai trifluorimetaanisulfonihapon kanssa, ii) alemman karboksyylihapon kanssa e II 94133 ja iii) sen anhydridin kanssa kaavan (XVIII) mukaisen yhdisteen saamiseksi 5 O fi6 R5 „ * 10 r%c^-Vy R2300cJ^0>T12t p2a is «Ylin ✓ 20 jossa R5 ja R6 ovat vetyatomeja R2a tarkoittaa vetyatomia tai suojattua hydroksiryhmää; R22 ja R23 ovat sama tai eri ryhmä, ja kumpikin tarkoittaa karboksia 25 suojaavaa ryhmää; R2a tarkoittaa hydroksia suojaavaa ryhmää; R28 tarkoittaa alempaa alkyyliryhmää, 30 jonka jälkeen kaavan (XVIII) mukaisella sokerijohdannaisella toteutetaan glykosidaatioreaktio antamalla sen reagoida trimetyylisilyloidun nukle-iinihappoemäksenä toimivan puriinin johdannaisen kanssa, jolloin saadaan kaavan (XXVI) mukainen yhdiste 35 94133 Λ> r6 r5 n J—k°\J ίΧχνΠ 10 r^oqcV \ y R^OOC-Co^^t R2a 15 jossa R5, R6, R2b, R22, R23 ja R24 on määritelty kuten edellä, Y1 ja Υ2 on määritelty kuten R7 vast. R8, joka on kaavan I mukainen yhdiste, jossa kaavojen R22OOC ja R23OOC mukaiset ryhmät tarkoittavat muita ryhmien R3 ja 20 R4 mukaisia ryhmiä paitsi karbamoyyliryhmiä ja karboksiryhmiä. jonka jälkeen haluttaessa kaavan (XXVI) mukaisen yhdisteen annetaan reagoida siten, että suojaavat ryhmät saadaan poistetuksi kaavan (XXVII) mukaisen yhdisteen saamiseksi Ä> „ [XXVII] R6 R5 n

35 HOOC HOOC-vJ0 OH R29 II 94133 jossa Y1, Y2, R5, R6 on määrätty kuten edellä ja R29 tarkoittaa samaa kuin R2 edellä, joka yhdiste (XXVII) on kaavan I mukainen yhdiste, jossa R3 ja R* ovat karboksiryhmiä; 5 menetelmävaihtoehdossa b) yhdisteen (A) suojatusta muodosta irrotetaan suojaryhmä yhdisteen (XXIX) saamiseksi N Ho ίο I cx> N "

15 R6 R5 n R22°oc "230»C^Ca0 OH 20 (XXIX) jossa R5, R6, R22, R23 ja R29 on määritelty kuten edellä, 25 jonka jälkeen kaavan (XXIX) mukainen yhdiste annetaan reagoida peroksidin kanssa kaavan (XXX) mukaiseksi ^-oksidiksi NH? ’v,kX> N " R6 R5 0 35 R2300C—( 0 OH 1)29 (XXX) 94133 jossa R5, R6, R22, R23 ja R29 on määritelty kuten edellä, saadun yhdisteen (XXX) annetaan reagoida alemman alkyylihalogenidin tai aralkyylihalogenidin kanssa kaavan (XXXI) mukaiseksi N1-alkoksi- tai N1-5 aralkyylioksiyhdisteeksi ΛχΧ , γν> r6 r5 n R22OOC λ~Υ7 R2300C-Xq0 0H

20 R (XXXI) jossa R5, R6, R22, R23 ja R29 on määritelty kuten edellä ja R30 on alkyyli-ryhmä tai aralkyyliryhmä, ' 25 saadun kaavan (XXXI) mukaisen yhdisteen annetaan reagoida alkalisen vesiliuoksen kanssa, jonka seurauksena kaavan (XXXI) mukaisen yhdisteen rengas aukeaa, mistä seuraa tuloksena olevan formyyliryhmän poistaminen ja samalla poistuu suojaryhmät R22 ja R23, jotka aiemmin edellä kuvatun 30 reaktion mukaisesti edullisesti korvataan uusilla suojaryhmillä R31 ja R32 kaavan (XXXII) mukaisen yhdisteen valmistamiseksi, 35 li 94133 <JV ÄL. " jC > h2h^« Rs R5 0

10 R%C^~Y / R (XXXI I) 15 jossa R5, R6, R29 ja R30 on määritelty kuten edellä ja R31 ja R32 tarkoittaa vetyatomia tai karboksia suojaavia ryhmiä, saatu kaavan (XXXII) mukainen yhdiste pelkistetään katalyyttisesti alkyy-20 li- tai aralkyyliryhmän R30 poistamiseksi, jolloin saadaan kaavan (XXXIV) mukainen yhdiste HH2 ; 25 ΗΟ-ηΑ^Νλ h2n^n R6 R5 0 r31°0C^O—f r32°0C R29° °H R S (XXXIV) jossa R5, R6, R29,R31 ja R32 on määritelty kuten edellä, 35 94133 kaavan (XXXIV) mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan hiilidisulfidin kanssa, mikä johtaa renkaan muodostumiseen, jolloin saadaan kaavan (XXXV) mukainen yhdiste nh2 Äv>

10 HS^N 1 R6 R5 Q

15 R3200C-\ 0 0H r29 (XXXY) 20 joka on kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa kaavojen R3100C ja R32OOC ryhmät tarkoittavat ryhmille R3 ja R* määriteltyjä ryhmiä, R5 ja R6 tarkoittavat samaa kuin edellä, R7 tarkoittaa NH2-ryhmää ja R8 tarkoittaa SH-ryhmää ja R1 tarkoittaa OH-ryhmää ja R29 tarkoittaa ryhmää R2, 25 menetelmävaihtoehdossa c) edellisessä vaihtoehdossa b) valmistettu kaavan (XXX) mukaisen yhdisteen annetaan reagoida syanohalogenidin kanssa kaavan (XXXVIII) mukaiseksi 30 polysykliseksi yhdisteeksi II 35 94133 © ΫΘ ^-HH X Tö r6 d5 10 !t°s r22°ocvV)_/ R2300C—( 0 OH R29 15 (XXXVIII) jossa R5, R6, R22, R23 ja R29 on määritelty kuten edellä, saadun kaavan (XXXVIII) mukaisen yhdisteen annetaan reagoida emäksisen 20 yhdisteen kanssa kaavan (XXXIX) mukaiseksi N6-syano-N1-oksidiksi

0 NHCH R6 R5 n • 30 R22ooc J~KJ R23OOe-(Xo OH 35 (XXXIX) 94133 kaavan (XXXIX) mukaisen yhdisteen annetaan reagoida alemman alkyylihalo-genidin kanssa tai aralkyylihalogenidin kanssa N1-alkoksi- tai N1-aral-kyylioksiyhdisteeksi (XL) 5 ΊΠ NCH R300. Il „ lX>

10 R6 r5 (L R^OOR K_7 R2300C-( 0 OH

15 R29 (XL) jossa R5, R6, R22, R23, R29 ja R30 on määritelty kuten edellä, 20 jonka jälkeen kaavan (XL) mukaista yhdistettä käsitellään alkaalilla liuottimessa pH-arvossa 12-13, jolloin sen pyrimidiinirengas saadaan avatuksi (ja jolloin reaktio-olosuhteista riippuen sattumalta myös karboksia suojaavat ryhmät voidaan saada poistetuksi), jolloin saadaan jälleen muodostumaan rengas, mikä johtaa kaavan (XLI) mukaiseen yhdistee-' 25 seen, jossa karb oksi ryhmät ovat suojaamattomat (eli jossa sekä R31 että R32 tarkoittavat vetyatomia) NHOR30 «M I 1 > R6 R5 q 35 R3200C-(^0 OH R (XLI) li 94133 ja jossa R5, R6, R29 tai R30 on määritelty kuten edellä, tai (XLIII) mukaiseen yhdisteeseen, jossa karboksia suojaavat ryhmät pysyvät paikallaan 5 NHOR30

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että lähtöaineet ja reaktio-olosuhteet valitaan siten, että saadaan 10 valmistetuksi 6-desamino-6-hydroksi-2-amino-2-dehydro-4',5'-dihydro-griseoliinihappo tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola tai esteri.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että lähtöaineet ja reaktio-olosuhteet valitaan siten, että saadaan 15 valmistetuksi 2-amino-6-desamino-6-hydroksigriseoliinihappo tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola tai esteri. li 94133