FI90427C - Välituotteina käytettävät N'-alkoksi- tai N'-aralkyylioksi-N6-syano-griseoliinihapon johdannaiset - Google Patents

Description

.90427 V&lituotteina kåytettåvåt N'-alkoksi- tai N'-aralkyylioksi-N6-syano-griseoliinihapon johdannaiset Som mellanprodukter anvåndbara N'-alkoxi- eller N'-aralkyloxi-N6-cyano-griseolinsyraderivat 5 (Jakamalla erotettu patenttihakemuksesta Fl-861655) Tåmå keksinto kohdistuu joukkoon uusia griseoliinihapon johdannalsia, joita kåytetåån vålituotteina mulden yhdisteiden valmistamiseen.

10 Griseoliinihappo on nukleosidin tyyppinen yhdiste, joka kåsittåå adeniiniemåksen ja kaksi karboksyylihaposta muodostuvaa ryhmåå. Se jul-kaistiin ensiminåisen kerran muun muassa eurooppalaisessa patenttijul-kaisussa no. 29 329A, mutta tålloin sen rakennetta ei vielå tunnettu. Sen rakenne esitettiin ensimmåisen kerran US-patenttijulkaisussa no.

15 4 460 765 (mydnnetty tåmån hakemuksen laatijoille). Tåmån jålkeen grise oliinihapon joitakin johdannaisia julkaistiin US-patenttihakemuksessa, jonka sarjanumero on 664 866, ja joka on jåtetty lokakuun 25. pnå 1984, jåttåjånå oheisen hakemuksen laatijat, ja tåsså hakemuksessa Julkaistaan samoin griseoliinihapon rakenne. HuiCa griseoliinihapon johdannaisia, 20 erityisesti dihydrodesoksigriseoliinihappo, sen suoloja ja estereitå, esitetåån US-patenttihakemuksessa no. 734 868, jåtetty toukokuun 16. påivånå 1985.

Kansainvålisen kemianalan jårjeston "International Union of Pure and 25 Applied Chemistry" (IUPAC) suositusten mukaisesti tåmån keksinndn mukai- ·.'*: set yhdisteet nimetåån griseoliinihapon (tai dihydrodesoksigriseoliini- hapon) johdannaisina, pitåen perusrakenteena griseoliinihappoa. Kåytetty . numerointijårjestelmå esitetåån US-patenttihakemuksessa 664 866.

30 Griseoliinihappo ja hakemusten no. 664 866 ja 734 868 mukaiset grise-oliinihapon johdannaiset sekå tåmån keksinnon mukaiset johdannaiset *..* kykenevåt inhiboimaan lukuisille syklisille nukleotideille spesifisten fosfodiesteraasien aktiivisuuden, joista fosfodiesteraaseista esimerk-keinå mainittakoon 3',5'-syklinen adenosiinimonofosfaatti- (cAMP)-fosfo-: 35 diesteraasi (PDE) tai 3',5'-syklinen guanosiini-monofosfaatti- (cGMP)-

• PDE, ja nåin olien ne pystyvåt lisååmåån syklisen nukleotidin, kuten cAMP

tai cGMP, tasoa tållaisella yhdisteellå kåsiteltåvån potilaan soluissa.

2 90427

On hyvin tunnettua, etta elåinkudoksiin laajasti jakautuneena esiintyvd cAMP toimii hormonien suuren joukon toisena lahettina ja valittaa tåmån hormon!joukon vaikutusta; tSmfin seurauksena cAMP-molekyylilla on monia hyvin tarkeitå fysiologisla ja biokemiallisia tehtåviå. Lisaksi sen 5 tiedeta&n vaikuttavan tai osallistuvan: solujen jakautumiseen, lisåånty-miseen ja erikoistumiseen; systoliseen jårjestelmåån, erityisesti sydamen supistumiseen (miocardia); verisolujen muodostumiseen ja kehittymiseen (hematopoiesis); keskushermostojarjestelmån eri toimintoihin; immuuni-reaktioihin; seka insuliinin ja histamiinin vapautumiseen. Sen pitoisuus 10 kudoksissa, ja nain olien sen vaikutus naihin eri tapahtumiin, riippuu cAMP-yhdistettå syntetoivan entsyymin (eli adenylaattisyklaasi) ja cAMP-yhdistetta hajottavan entsyymin cAMP PDE, vålisesta tasapainosta. cAMP PDE-entsyymin inhibiittori lisaa cAMP-tasoa soluissa, ja taten sillå voidaan odottaa olevan lukuisia laakinnallisia sovellutuksia, esimerkik-15 si: hoidettaessa sydan- ja verisuonisairauksia; astmaa parantavana aineena; sileitå lihaksia laukaisevana aineena; psykotrooppisena tai neurotrooppisena aineena; tulehduksia parantavana aineena; sydvån hoidos-sa; seka sokeritaudin hoidossa.

20 Toistaiseksi mulden syklisten nukleotidien, kuten cGMP:n, aktiivisuuksia ei olla selvitetty nåin yksityiskohtaisesti. Kuitenkin uskotaan, ettå niilla on joukko vaikutuksia, jotka ovat samankaltaisia, mutta eivflt kuitenkaan samat, kuin cAMP-molekyylin vaikutukset. Nain olien tållaisil-le toisille syklisille nukleotideille spesifisten PDE-entsyymien inhi-25 bitio johtaa samoin låakinnållisiin vaikutuksiin, jotka ovat samankaltai-sia kuin cAMP PDE-entsyymin inhibitiosta aiheutuvat vaikutukset. Kun naiden mulden syklisten nukleotidien aktiivisuudet saadaan selvitetyiksi, niin syntyy tarve ldytaa naihin muihin nukleotideihin liittyvien PDE-entsyymien inhibiittoreita, joiden suurempi spesifisyys kohdistuu muiden 30 nukleotidien johonkin PDE-entsyymiin, eika cAMP PDE-entsyymiin; itse asiassa tållaisten inhibiittoreiden kehittåminen saattaa jopa edesauttaa tallalsten muiden syklisten nukleotidien tutkimusta tai kannustaa siina.

Griseoliinihapon ja sen johdannaisten lisaksi muita sellaisia yhdisteitå, 35 joiden tiedetaan inhiboivan cAMP- ja cGMP-yhdisteiden PDE-entsyymejå, ovat esimerkiksi papaveriini, dipyridamoli seka eraat yhdisteet, jotka 3 90427 ovat nukleiinihappojen perustana toiraivien emåsten kaltaisia, kuten teofylliini tai Μ & B 22 948 [Kukovetz et al., Naunyn-Schmiedeberg's Arch. Pharmakol., 310. 129 (1979)].

5 Tåmfln keksinnon pulttelssa ollaan lbydetty joukko griseoliinihapon ja dihydrodesoksigriseoliinihapon kaltaisia yhdisteitå, jotka eivåt itse ole farmaseuttisesti aktiiveja, mutta jotka ovat arvokkaita vålituotteita muita griseoliinihapon ja dihydrodesoksigriseoliinihapon johdannaisia valmistettaessa, joilla on griseoliinihapon ja dihydrodesoksigriseoliini-10 hapon aktiivisuutta. Yllåttåvåsti eråiden nåiden yhdisteiden aktiivisuus, jotka voidaan valmistaa keksinndn mukaisista vålituotteista, on suurempi cGMP PDE-entsyymiå vastaan kuin cAMP PDE-entsyymiå vastaan.

Hakijan FI-hakemuksen 861655 tavoitteena oli saada aikaan griseoliiniha-15 pon johdannaisia, sekå sen suoloja ja estereitå, jotka ovat uusia yhdisteitå .

Hakijan FI-hakemuksen 861655 erityisenå tavoitteena oli saada aikaan griseoliinihapon sellaisia johdannaisia, jotka kykenevåt inhiboimaan 20 syklisiå nukleotideja hajottavien PDE-entsyymien, kuten cAMP PDE tai cGMP PDE, aktiivisuuden.

" Taman keksinnon mukaiset yhdisteet ovat yhdisteitå, joilla on kaava (XL): 25 o3n HC*

Yr> r . so

Si 35 Ra

ULI

4 90427 R1 ja R2 valitaan toisistaan riippumatta ryhmåstå, joka kåsittåå vety-atomin ja kaavan -OR9 mukaiset ryhmåt; R3 ja R* valitaan toisistaan riippumatta ryhmåstå, joka kåsittåå karba-5 moyyliryhmiå ja karboksiryhmiå ja alempia alkoksikarbonyyliryhmiå, ja nåmå alemmat alkoksikarbonyyliryhmåt on valinnaisesti substituoitu fenyyli- tai bentshydryyliryhmållå; R5 ja R6 tarkoittavat molemmat vetyatomia, tai ne muodostavat ylimååråisen 10 hiili-hiili-sidoksen niiden hiiliatomien vålille, joihin ne ovat sitoutu-neet; R9 tarkoittaa vetyatomia, alempaa alkanoyyliryhmåå, bentsyyliryhmåå tai bentsoyyliryhmåå; ja 15 R30 tarkoittaa alempaa alkyyliryhmåå tai aralkyyliryhmåå; sekå nåiden yhdisteiden farmaseuttisesti hyvåksyttåviå suoloja ja este-reitå.

20 Tåmån keksinndn avulla voidaan valmistaa yhdisteitå, joilla voidaan : : hoitaa fosfodiesteraasipitoisuuksien epåtasapainosta aiheutuneista *; håiriotiloista kårsiviå elåimiå, erityisesti nisåkkåitå (kuten ihmisiå) - antamalla mainitulle elåimelle fosfodiesteraasin inhibiittoria, joka ____ 25 fosfodiesteraasin inhibiittori valitaan ryhmåstå, joka kåsittåå FI- hakemuksen 861655 kaavan (I) mukaiset yhdisteet, sekå niiden farmaseuttisesti hyvåksyttåvåt suolat ja esterit.

Tåmån keksinnon mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa antamalla kaavan 30 (XXXIX) mukaisen yhdisteen 35 5 90427

q NHCN

10 R2, (XXXIX) [jossa R^R^R^R^.R^R8 ja R9 on maaritelty kuten edellå]; reagoida alenunan alkyyllhalldln tal aralkyyllhalidin kattssa orgaanisen emaksen 15 lasnaollessa; ja i) vallnnaisesti, korvataan mika vain edella oleva ryhma R1,R2,R3,R4,R5,R6 milla vain toisella ryhmålla mainittujen ryhmien måari-telmien mukaisesti.

Ohessa kaytetyllå kåsitteellå "aryyliryhma", joko sellaisenaan tai 20 suuremman ryhmån osana (esimerkiksi aralkyyliryhma), tarkoitetaan liiili-syklista aryyliryhmaå, jossa on mielellaan 6-14, mieluummin 6-10, renkaan muodostavaa hiiliatomia (esimerkiksi fenyyli tai 1- tai 2-naftyyli), ja joka voi olla substituoitunut tai substituoitumaton. Mikali tama ryhma on substituoitunut, niin substituentit valitaan mieluiten seuraavista ryh-: 25 mistå: C^-C^-alkyyliryhmat, Cj-04-alkoks iryhmat, hydroksiryhmåt, halo- geeniatomit, nitroryhmat, aminoryhmat, C^-C^-alkyyliaminoryhmat, dial-kyyliaminoryhmåt, joissa kukin alkyyliosa on C^-C*-, Cj-C^-halogeeni-alkyyliryhmat, C2-C7-alkoksikarbonyyliryhmat, aryyliryhmåt (jotka itse måaritellaan ohessa, mieluiten fenyyliryhmat, substituoituneet tai 30 substituoitumattomat, kuitenkin mikali substituoituneet, niin mieluiten muulla kuin aryyliryhmillå) seka syanoryhmat.

Mikali R1 tai R2 tarkoittaa kaavan -OR9 mukaista ryhmaa, ja R9 on edella esitetyn maaritelman mukainen, joten -OR9 tarkoittaa hydroksiryhmaa, C7-35 C6-alkoksiryhmåa tai suojattua hydroksiryhmaa.

6 90427

Mikåli symbolien R1 tai R2 edustama -0R9-ryhmå on mainittu C1-C6-alkoksi-ryhmå, niin se voi olla suoraketjuinen tai haaroittunut ryhmå, josta esimerkkeinå mainittakoon metoksi-, etoksi-, propoksi-, isopropoksi-, butoksi-, isobutoksi-, sek.butoksi-, t-butoksi-, pentyylioksi- ja heksyy-5 lioksiryhmåt.

Mikali symbolien R1, R2 tai R® edustama -0R9-ryhmå tarkoittaa mainittua substituoitunutta etoksiryhmåå, niin tåsså etoksiryhmåsså voi tålldin olla yksi tai useampi, mieluiten 1-3, substituenttia, jotka on valittu 10 seuraavista ryhmistå: Cj-C*-alkoksiryhmåt, C^-Cn-alkyyliryhmåt, halo- geeniatomit, C1-C4-alkyyliselenyyli- ja aryyliselenyyliryhmåt (joissa aryyliosa on edellå esitetyn mååritelmån mukainen). Esimerkkeinå tållai-sista ryhmistå mainittakoon 1-etoksietoksiryhmå, 1-metyyli-l-metoksi-etoksiryhmå, 1-isopropoksietoksiryhmå, 2,2,2-trikloorietoksiryhmå ja 2-15 fenyyliselenyylietoksiryhmå.

Kaavan (XL) mukaiset yhdisteet kåsittåvåt kaksi karboksiryhmåå, joten ne voivat muodostaa mono- tai di-suoloja sekå mono- tai di-estereitå. Di-suolojen ja di-estereiden tapauksessa suolojen kationiset osat tai este-20 reiden alkoholiosat voivat olla sama tai eri ryhmå. Kåytånnosså on kui-tenkin kaikkein vaivattominta valmistaa erityisesti sellaisia di-suoloja ja di-esteitå, joissa kaksi kationista osaa tai kaksi alkoholiosaa ovat : : samoja.

25 Esterin alkoholiosan luonteelle ei aseteta mitåån erityisiå rajoituksia. Kaikki tavanomaisesti tåmån tyyppisille yhdisteille muodostetut esterit voidaan myés muodostaa tåmån keksinnon mukaisten yhdisteiden kanssa. Esimerkkeinå tållaisista estereistå mainittakoon: Ci-Cg-alkyyliesterit, erityisesti metyyli-, etyyli-, propyyli-, isopropyyli-, butyyli-, isobu-30 tyyli- ja t-butyyliesterit; aralkyyliesterit, erityisesti bentsyyli-, p-nitrobentsyyli-, o-nitrobentsyyli-, trifenyylimetyyli-, bis(o-nitrofenyy-li)-metyyli-, 9-antryylimetyyli-, 2,4,6-trimetyylibentsyyli-, p-bromo- bentsyyli-, p-metoksibentsyyli-, piperonyyli-ja bentshydryyliesterit; 0Χ-C6-halogeenialkyyliesterit, joissa voi olla yksi tai useampia halo-35 geeniatomeja (kuten kloori-, bromi-, fluori- tai jodiatomeja), aina tåydelliseen perhalogenoitumiseen saakka, esimerkiksi 2,2,2-trikloo- 7 90427 rietyyli-, 2-kloorietyyli-, 2-bromietyyli-, 2-fluorietyyli-, 2-jodietyy-li- ja 2,2-dibromietyyliesterit; alkoksimetyyliesterit, missa alkoksiosa on mieluiten C^-C*, kuten esimerkiksi metoksimetyyli-, etoksimetyyli-, propoksimetyyli-, isopropoksimetyyli- ja butoksimetyyliesterit; alifaat-5 tiset asyylioksialkyyliesterit (erityisesti asyylioksimetyyli- ja asyy-lioksietyyliesterit), kuten asetoksimetyyli-, propionyylioksimetyyli-, butyryylioksimetyyli-, pivaloyylioksimetyyli-, 1-asetoksietyyli-, 1-pro-pionyylioksietyyli-, 1-butyryylioksietyyli- ja 1-pivaloyylioksietyyli-esterit; (C1-C/(-alkyyli)oksikarbonyylioksietyyliesterit, kuten 1-metok-10 sikarbonyylioksietyyli-, 1-etoksikarbonyylioksietyyli-, 1-propoksikarbo-nyylioksietyyli-, 1-isopropoksikarbonyylioksietyyli-, 1-butoksikarbonyy-lioksietyyli- ja 1-isobutoksikarbonyylioksietyyliesterit; heterosykliset esterit, kuten ftalidyyliesterit; heterosyklyyli-metyyliesterit (joissa heterosyklinen ryhma on mieluiten ryhmå R9 yhteydesså esitetyn mukainen), 15 esimerkiksi (5-metyyli-2-okso-l,3-dioksolen-4-yyli)metyyliesterit; seka esterit, jotka hydrolysoituvat helposti iji vivo. joka luokka kåsittåa eråitå estereitå edellå luetelluista luokista [esimerkiksi alifaattiset asyylioksialkyyliesterit, alemmat alkoksikarbonyylioksietyyliesterit, (5-metyyli-2-okso-l,3-dioksolen-4-yyli)metyyliesterit seka ftalidyylieste-20 rit].

Kationien, joilla muodostetaan suola keksinnon mukaisten yhdisteiden kanssa, luonteelle ei aseteta mitaån erityisia rajoituksia. Edullisia suoloja ovat esimerkiksi alkalimetallien suolat (kuten natriumin tai 25 kaliumin suolat) tai maa-alkalimetallien suolat (kuten kalsiumin suolat).

Keksinndn mukaiset yhdisteet muodostavat my6s happoadditiosuoloja. Naiden suolojen muodostamiseen kaytetyn hapon luonne ei ole kriittinen. Esi-merkkeina tallaisista hapoista mainittakoon: epåorgaaniset hapot, kuten 30 hydrokloorihappo, rikkihappo ja fosforihappo; orgaaniset karboksyyliha-pot, kuten etikkahappo, oksaalihappo, maleiinihappo, meripihkahappo, sitruunahappo, viinihappo, fumaarihappo, lauriinihappo, steariinihappo ja palmitiinihappo; sekå erååt orgaaniset sulfonihapot kuten metaanisul-fonihappo, bentseenisulfonihappo ja g-tolueenisulfonihappo.

35 8 90427

Taman keksinndn mukaisten yhdisteiden molekyyleissa on monia asynraietrisia hiiliatomeja, joten ne voivat esiintya lukuisina steroisomeereina. Taman keksinnttn puitteisiin kuuluvat seka erilliset eristetyt isomeerit ettå nåiden isomeerien seokset. Luonnontuotteena griseoliinihappo on yksi 5 ainoa isomeeri, jossa seka 2'- etta 7'-hiiliatomit ovat R-konfiguraatios-sa; grlseoliinihaposta valmistetut yhdisteet voivat såilyttåå tamån saman konfiguraation, tai niissa konfiguraatio voi olla painvastainen yhdesså tai useammassa asymmetrisessa hiiliatomissa. Esimerkiksi, kun R1 on muu ryhmå tai atomi kuin vety, niin yhdisteiden konfiguraatio 2'-asemassa voi 10 olla α tai β. Kun R2 tarkoittaa muuta ryhmaa tai atomia kuin vetyå, niin konfiguraation 7'-asemassa voi olla RS, £, tai S.

Tamån keksinndn mukaisten yhdisteiden edullisimman luokan muodostavat: 15 1. Kaavan (I) mukaiset yhdisteet, joissa R3 ja R* valitaan toisistaan riippumatta ryhmåsta, joka kåsittaa karboksi-ryhmiå, karbamoyyliryhmia, C2-C5-alkoksikarbonyyliryhmia, (5-metyyli-2-okso-1,3-dioksolen-4-yyli)metoksikarbonyyliryhmiå, ftalidyylioksikarbo-20 nyyliryhmia ja C2-C5-alkoksikarbonyyliryhmia, joissa on våhintåån yksi substituentti, joka valitaan aryyliryhmia, alifaattisia karboksyylisia (^-C6-asyylioksiryhmiå ja C1-C4-alkoksikarbonyylioksiryhmiå kasittåvåstå ryhmastå.

25 2. Kaavan (XL) mukaiset yhdisteet, joissa: R1 ja R2 valitaan toisistaan riippumatta ryhmasta, joka kasittaa vetyato-min ja hydroksiryhman.

30 3. Edellå kohdassa 2 maaritellyt yhdisteet, joissa: R3 tarkoittaa karboks i ryhmåå, C2-C5-alkoksikarbonyyliryhmaa, (5-metyyli-2-okso-1,3-dioksolen-4-yyli)metoksikarbonyyliryhmaa, ftalidyylioksikar-bonyy li ryhmåa tai C2-C5-alkoks ikarbonyyl iryhmaa, jossa on 1 tai 2 substi-35 tuenttia, jotka on valittu 0Χ-0Α-alkoksikarbonyylioksiryhmien ja C6-C10- 9 90427 hiilisyklisten aryyliryhmien joukosta, viimeksi mainittujen aryyliryhmien ollessa substituoitumattomia; ja R4 tarkoittaa karbamoyyliryhmåå, tai mitå tahansa edellå R3:n yhteydesså 5 måårite1tya ryhmåå.

Esimerkkejå keksinndn mukaisista yhdisteistå esitetåån seuraavassa kaavassa (1-5), joissa substituentit ovat vastaavasti taulukossa 5 esitettyjen mååritelmien mukaiset. Tåmån jålkeen keksinnbn mukaisiin 10 yhdisteisiin viitataan nåisså taulukoissa yhdisteille annettujen numeroi-den avulla, mikåli vålttåmåtontå.

Taulukoissa kåytetyillå lyhenteillå on seuraava merkitys: 15 Ac asetyyli

Boz bentsoyyli

Bu butyyli

Bz bentsyyli

Bzh bentshydryyli 20 Dox (5-metyyli-2-okso-l,3-dioksolen-4-yyli)metyyli

Et etyyli

Hx heksyyli

Me metyyli

Piv pivaloyyli - 25 Pn pentyyli 30 ' ' 35 10 90427

HH

\ΐ> ",ic -,c%7

S^OOC-O» OH OH

η 90427

Taulukko 5

Yhdiste

5 No R3a RAb W

175 Η H OMe 176 Η H OBz 178 Me Me OMe 10 179 Me Me OBz 181 Bzh Bzh OMe 182 Bzh Bzh OBz 15 Seuraavat edella luetelluista yhdisteista ovat edullisia: yhdisteet, joilla on numerona 175, 176, 178, 179.

Edulllsempia yhdisteita ovat yhdisteet, joilla on numerona: 175 ja 176.

20 FI-hakemuksen 861655 mukaisia yhdisteita voidaan valmistaa seuraavissa reaktiokaavioissa kuvatulla tavalla.

Naista reaktiokaavioista selviaa kuinka keksinndn mukaiset valituoteyh-disteet valmistetaan (vaihe 30) ja kuinka niita kaytetaan laakeaineiden ..: 25 valmistamiseksi.

i2 90427 NH2 f 'όΟ ^ ¢0 0 _

"ij^ru R%cvTW

HOOK 0 OH R2300cK^0 0R2L

OH OR211 (A) (X> J vaihe** jvaihe^ KXrA n"Vs CNX/ ήοι /-Ο '“«“"κ!)

AcOO,» aoX> " „mi ““ .,

vaiheJ

Ivaihe 5 ' c!x> ill) ”,k y“K ί’Κκ.

r23ooc-<K0'^ OH50 R ooc-\OR2i. 0R

H (XIV) IXII) i3 90427 rV> S, .. 7 (yiV)vaihe6| N vaihe 7t U Η X n

r22°°cTO

R2300C-\ 0 OR50 H

(XV) j nh2 ft> ·οο vaihe 8 R22°0sri-/ Η00ι:νΓ”Ο

R2300C—OR50 1)000-(^0 OH

H H

(XVII (0] 14 90 427

OH

r6 r5 . 0 R6 R5 „ i r^^c i-H V£IiL^ R^OOC—\® OR^1, R^OOC—OR^1, R2a R2a (XVIII (XVIII) x’ I T) vaihe 10 "" R6 r5 h 22ooc j—\ y •n /sn/-1 IXIX) R^ OOC—( 0 OR2*· R2a / \ vaihe 12 vaihe 11 / ry> ry> x2/S-7'n q6 d5 q6 r5 U/°n LL·"^ H0°C / \ / hooc/ \ 7

H00C-('0'X OH HOOC-^O^ OH

V9 r29 (HI {XX1}

X

is 90427 wA^N.

i i y *<h. 13 γΙ^Η-^Ν7 (XVIII! ——- R6 R5 g r22o°cJ \ i R2300C-(S'0 or21· 'r2s IXXII) vaihe 15 | val he 1 ^ H * ;*V> fY> 1,6 ^ O f ilo R22°QC / \ ^7 HOOcK y

R2300C-^a° Oltf1· H°0C_r29° °H

(XXIIII

(XXIV]

H

,Λγ-ι, x\X) vaihe15 r6 r5 mc&j

HOOC-( 0 OH

R29 κ (XXV) 16 90 427 V1 γΥ> ΙΧΥ,ΠΙ 6 .5 „ 11/°Ν !χχνπ R'UMZJ \ / R23OOC-\ 0 OR21 R2a

vaihe IQ

γΐ i I )> γ2>ΐ%Η^Ί(/ „6 r5 |ΠνΠΙ H0°cJ-n

H00c-Cq° OH

17 90 427 nh2 nh2 L iC"> UC)

H vaiheig H

t t K t I/O.

r22°oc z' T_/ r22ooc h-r_7

R23 0 0C—( 0 0R2t R2300C—OH

V» R23

IXXVI1!) (XXI XI

18 90427 ΗΠ2 η |«2 |τ\ rV> ^ Η vaihe 20 ^ R6 R5 0 R5 f5 „

r22ooc )—r^ooc./1"-K_J

R2300C-\ 0 OH r23°0C—vTq0 0H

r29 r29 (XXIX) (ΠΧ| V jr , f jT > SA> vaihe 21 _ vaihe 22 -- R6 R5 -~

R2200C J~X_J

R 2300C—\^° OH

r29 (XXXI) 30 Ϊ*Η2 |H2 ""'r S *nr's R6 R5 0 R6 R5 o

R31°ocsMly r31 '«s^J

r32ooc—oh r32ooc-('''9 0H

Xd29 r29 R (ΧΧΧΠΙ R (XXXIII) 19 90 427 NH2 ΗΟ-Ν^γ-Λ vaihe 2t R vaihe 25 (XXXII) -- . , -«- R6 R5 0

R31°0C^/ \ I

r32°0C J29° °H 9 9 (XXXIV) nh2 R33nh

N «‘'Sr'-'V

1 I % il/

HS^N^H vaihe2g R S N

r6 r5 R6 R5 .

r31ooc J~X_j «31ooc><7

R3200C-\ 0 OH R3Z°°C—vT'0 0H

>29 R29 (xxxY) (xxxvii R55 rV> h$'N-'>"n/ vaihe 27 R6 R5· n r31ooc>0

R3200C—( ® ^ OH

Xr29 (XXXVII) 20 90 427 t\ © ©

>-HH XU

V> vaihe 20 c _c vaihe 29 (XXX)-- Rb Rb Q --

R2200C I

R23OOC-\° OH

V9 (XXXVIII)

O HHCN R% |CH

,Λτ\ 'Vv

k,X/ SV

vaihe 30 R6 R5 „ "6 o r22ooc J~\_y r22°°c tO-x R23ooe-T° oh r23ooc^o oh r29 R29 (XXXIX) (XL) 2i 90427 NHOR30 ΝΗΟΗ rV"> rY> H2H^Si^N HzN^n^-N7 vaihe31 vaihe32 IXU " *" R6 R5 o - R6 R5 0 .

r3,°0CnJ \ Ί R31O0Csy/~ r32°oc-\™° oh r3Zooc—<;0 oh R ^ r29 K (XLI) H (XLII) vaihe 33 NHOR30 ι,ίί:ΙχΓ"\ JL· I.___ / vaihe3£.

H2N^^N'^'N

R6 R5 R»00cJ \ / rh2

r23°ocV oh liS

(XUIII h2n^n^n

R6 R5 O

R3100C ) ^ ^ R3200C-y'0^' øh ixliv) 22 90 427 m«x *\ /^30 ιηιΓ-ίϋΙί. „ 1 Γ) $"Ά) *Stej ““v „UI1y >a«X^i /fxmj m2 Φ η5 0 R%C } ^ fXLIV) 23 90 427

*2 OH

N Ipv vaihe 37 HO^^N **

IXLIVl -— + "U

R6 R5 0 R6 R5 R31oocyHf y r31ooc J V^y’

r3Z°0C—Cq° 0H R3200C—0 OH

/(XLVIII) R (XLIX)

X

rYs R5 R5 0 {L) r3i°oc^/ K_y

*3C-C° OH

^35 rVN> ηο^'Ν^"'" vaihe 39

- Φ r5 0 ,UI

R%C—( 0 OH

R29 24 9 0 4 2 7 R33^ OR30

Xr rV> (XLVI, "-^iL ^ ^ N *!ϋϋϋ.

R R O

r%c J Vy R3200C—<^0 OR37 r38 (Lill HNOR30 NH2 "^SrV »A-v -^ΛΛ' * Λ X,> I H R36-N N "

H e . vaihe 12 Xu vaihe U

ft\ — W, — r3100C y \ 7 R3100cJ \ / R3200C-( 0 0R37j R 32OOC—\^Ό 0R37a R3 3 (Ulli fl38a (LIV)

' OH OH

R36-N^N'^'N H2N^tH'^'N

H vaihe ^ R6 R5 o ~ RO R5 „ r31°°c Jryi

R3200C-y0 QR37a HOOC-( 0 OH

3 (LV) r29 ILVI] 25- 90 427 HNOR30 i L> r39= «-At A-)/

vaihe L5 vaihe AK

(XLIII) -- , . -— R6 r5

r22°0Cn^W

R2300C—?b° OH

d29

K ILVID

]H2 OH

i jC'> rV\ r39=N'^Ak-^'N R39=n Α*ν .Ar/ r6 „5 „6 „5

„ L_W AA

R R31OOCvV \ y

R2300C-Q° oh R3200C-(N'<J OH

R IL™1' R29 (LIX)

OH

X&

vaihe i.8 H2N

-- R* r5 <LVI> H°0C v/~t/

*m\? W

26 90 427 r37nor?° vaihe49 Η2ΛΛ« va1h (XLIII) -- -±i- R6 R5 q r22°0Cs,/ V / R2300C—ςΌ ^ OR37 n36 R (IXI) R37NH r37nh N |Τ\ va i he 51 R6 R5 0 ~ r6 r5 r3,°°s/~w r%c J~~\j R3700C_g0 0R37> Ac-N>>a ILXI1) R '(LOT) vaihe 52 -— (XLV1II) 27 .90 427 ~ ί rY\

,m vaihe53 R35-N^K^N

R6 R5 „ r3i°°c j~ty R3200C^{ 0R37a o38a (LXIV) r35 rV> β36_ν/^ν/^ν/

vai he SU

R6 R5 0

R%tJ~W

R ^00-(^0 OR373 p38a (LXV) 28 9 0 4 2 7 nh2 . „ .XX> X»

(XLIV) vaihe 55 x N

L_i/°\ r6 ^ o b3i°°c/7>7 R3200c Λθ 0H „32000_Λθ^“ίι

" ILXVII H3 (LXVIII

y/I35 S' H

/ f i> ^5.

R6 R5 .

r31„oc>^

R320 OC—Λ'0 OH

r29 ilxixi 29 9 0 4 2 7

R6 R5 n A R6 R5 n A

H°ocv/~jc/ H00C-('0'^ oh HOOC—' OR50

OH . OH

ILXXI (UXI) R6 R5 δ ϋΐίΐϋ R2200C y 59 R23ooc>0>-jR5o

OH

uxxm fl6 R5 0 Δ R2200C ) y y vaihe 60 B23OOC—C 0 OR50 OR51 ILXX1II) R” R- r 4 S5 R- „ f r22°0C**- Bl

R^OOC-^0 0fi50 H00C-\ 0 OH

R52 R52

ILXXIVI ' ILXXVI

30 9 0 4 2 7 l>°4 ILXXII) vlitle 6L r22°0CsV-\17 v3ihe 63t

r2300c_7^0^ Jh50 OR53 (LXXVII

f f O i R6 R5 0 A

R2200c 7 \ y vaihe 64 R 2200C ) Y J

R2300C-(S'0 oh R23OOC-\° OR51 OR53 0R53 Π-ΧΧνί!) (LXXVtni R5 R5 Q Δ vaihe 55 R^QQC / \ / vaihe 65 r23ooc-\'0'^' \ , OR33 r52

ILXXIXI

R5 n 4 „ooc^o-^Λ

OH K

UXXX) 3ΐ 90 42 7 T "

νη2 R5t|H

L 1V> Γχ> vaihe 67 R6 R5 „ η6 j^o R3100CJ—\ / R310DCV'/~~y 7 R32OOC Si R 3200C-\1°, Λ, 'r27 V Nr27 r1 (LXXXI) (LXXXIt) 32 . 90427

Edellå esitetyisså kaavoissa: R1-R12 ja A ovat edellå esitettyjen mååritelmien mukaiset; 5 R2a tarkoittaa vetyatomia tai suojattua hydroksiryhmåå; R22 ja R23 ovat sama tai eri ryhmå, ja kumpikin tarkoittaa karboksia suoj aavaa ryhmåå; 10 R2* tarkoittaa hydroksia suojaavaa ryhmåå; X tarkoittaa halogeeniatomia; R27 tarkoittaa vetyatomia, hydroksiryhmåå tai suojattua hydroksiryhmåå; 15 R28 tarkoittaa alempaa alkyyliryhmåå, esimerkiksi mitå tahansa ryhmån R12 yhteydesså mååriteltyå alempaa alkyyliryhmåå; XI ja X2 ovat sama tai eri ryhmå, ja kumpikin niistå tarkoittaa halo-20 geeniatomia; R29 tarkoittaa vetyatomia tai hydroksiryhmåå; Y1 ja Y2 ovat sama tai eri ryhmå, ja kumpikin niistå tarkoittaa vety-25 atomia, hydroksiryhmåå, merkaptoryhmåå, aminoryhmåå, suojattua amino-ryhmåå tai kaavan -SR28 mukaista ryhmåå; R30 tarkoittaa alkyyliryhmåå tai aralkyyliryhmåå; 30 R31 ja R32 ovat sama tai eri ryhmå, ja kumpikin niistå tarkoittaa vetyato mia tai karboksia suojaavaa ryhmåå; R33 tarkoittaa vetyatomia, Cx-C6-alkyyliryhmåå, aralkyyliryhmåå, ali-faattista C1-C2o-asyyliryhmåå tai aromaattista asyyliryhmåå, esimerkiksi 35 ryhmåå, joka on mååritelty edellå ryhmån R10 yhteydesså; 33 90 427 R33a tarkoittaa C^-Cg-alkyyliryhmåå tai aralkyyliryhmåå; R3* tarkoittaa vetyatomia, Cx-Ce-alkyyliryhmåå, alifaattista Cl-C20-asyyli-ryhmåå, aromaattista asyyliryhmåå tai aralkyyliryhmaa, esimerkiksi ryhmån 5 R9 yhteydessa esitetyn maaritelman mukais ta ryhmaa, kuitenkin edellyttaen, ettei seka R33 etta R3A tarkoita vetyatomia; R1 tarkoittaa ryhmåå, jolla on kaava -OR9, -NR10RU tai -SR9, esimerkiksi ryhmaa, joka on ryhmån R7 yhteydesså esitetyn måaritelmån mukainen; 10 R2 tarkoittaa vetyatomia, alifaattista C1-C2o-asyyliryhmåå, aromaattista asyyliryhmaa tai trialkyylisilyyliryhmåå; R37 tarkoittaa alifaattista C^-Cjo-asyyliryhmåå, aromaattista asyyliryhmaa 15 tai trialkyylisilyyliryhmåå; R37a tarkoittaa mita tahansa ryhmån R37 yhteydesså mååriteltyå ryhmåå tai vetyatomia; 20 R38 tarkoittaa vetyatomia, alifaattista Cx-Cao -asyylioksiryhmåå, aromaat tista asyylioksiryhmåå tai trialkyylisilyloksiryhmåå; R38a tarkoittaa mitå tahansa ryhmån R38 yhteydesså mååriteltyå ryhmåå tai hydroks iryhmåå; 25 R39 tarkoittaa substituoitunutta metyleeniryhmåå (joka on esimerkiksi ryhmien R10 ja R11 yhdesså esittåmån substituoituneen metyleeniryhmån yhteydesså esitetyn mååritelmån mukainen); 30 Z tarkoittaa hydroksiryhmåå tai aminoryhmåå; R50 tarkoittaa alifaattista asyyliryhmåå, aromaattista asyyliryhmåå tai trialkyylisilyyliryhmåå; R51 tarkoittaa Cj-Cg-alkyylisulfonyyliryhmåå, Cj-Cg-fluorialkyylisulfo- 2 nyyliryhmåå tai aryylisulfonyyliryhmåå; 34 . 90427 R52 tarkoittaa vetyatomia tai halogeeniatomia; R53 tarkoittaa tetrahydropyranyyliryhmåå tai trialkyylisilyyliryhmåå (joka on esimerkiksi ryhmån R9 yhteydesså esitetyn mååritelmån mukainen); 5 R5A tarkoittaa Cx-Cg-alkyyliryhmaå; ja R55 tarkoittaa hydroksiryhmaa, halogeeniatomia, hydratsiinoryhmåa, subs-tituoitunutta aminoryhmaa, substituoituneella metyleeniryhmallA suojattua 10 aminoryhmaa tai edella mååriteltyjen kaavojen -OR9 tai -SR9 mukaista ryhmåå.

Naisså reaktiokaavioissa låhtomateriaalina kåytetåån joko kaavan (A) mukaista griseoliinihappoa, tai kaavan (B) mukaista dihydrodesoksi-15 griseoliinihappoa, kaavojen (A) ja (B) ollessa seuraavat: 20 NH 2 25 3 81 "SQ-A-

HOOC—v1 0 0H 3' OH

Ul 35 35 9 Π 4 9 7 ΚΗ2

5 I S

10 ο HOOC ί \ / HOOC-' 0 i„ 15 (Β)

Edellå esitettyyn griseoliinihapon kaavaan (A) on selvyyden vuoksi 20 merkitty nåkyviin numerointijarjestelma, jota kaytetaan kaikklalla tassa julkaisussa.

Kuten jo edella mainittiin, grlseollinlhappo on tunnettu yhdiste, joka esitetaan esimerkiksi eurooppalaisessa patenttijulkaisussa no 29 329 tai 25 US-patenttijulkaisussa no 4 460 765. Dihydrodesoksigriseoliinihappo esitettiin eurooppalaisessa patenttijulkaisussa no 0162715, julkaistu oheisen hakemuksen jattdpaivan jalkeen. Sekå griseoliinihappoa etta - ' dihydrodesoksigriseoliinihappoa voidaan tuottaa viljelemalla sopivia

Streptomyces-suvun mikro-organismeja, eritvisesti Streptomvces gri-: 30 seoaurantiacus-bakteerin kantaa SANK 63479 (tallennettu lokakuun 9. pnå 1979 kantakokoelmaan "Fermentation Research Institute", Agency of Industrial Science and Technology, Japani, josta se on saatavissa tunnusnume-. . rolla FERM-P5223, sekå lokakuun 22. pna 1980 kantakokoelmaan "Agricultu

ral Research Service", Peoria, USA, josta se on saatavissa tunnusnumerol-35 la NRRL 12314). Yksityiskohtia Streptomvces priseoaurantiacus-kannan SANK

63479 tunnusomaisista piirteistå esitetåån eurooppalaisessa patenttijul- kaisussa no 29 329A sekå US-patenttijulkaisussa no 4 460 765.

36 9 0 4 2 7

Valhe 1 5 Tåsså vaiheessa griseoliinihapon (A) annetaan reagoida siten, ettå sen hydroksi- ja karboksiryhmåt saadaan suojatuiksi. Kåytettåvån reaktion luonne riippuu toivottujen suojaavien ryhmien luonteesta, ja seuraavien reaktioiden on tarkoitus pelkåståån havainnollistaa tåtå vaihetta. 10 Luonnollisestikin on selvåå, ettå tåsså vaiheessa voidaan kåyttåå yhtå hyvin mitå tahansa muuta sellaista alalla tunnettua reaktiota, jolla karboksiryhmåt tai hydroksiryhmåt saadaan suojatuiksi.

Karboksiryhmien suojaamiseksi griseoliinihapon (A) annetaan mieluiten 15 reagoida diatsoyhdisteen, esimerkiksi diatsometaanin tai difenyylidiatso-metaanin, kanssa, tai triatseeniyhdisteen, erityisesti p-tolyylitriatsee-nin johdannaisen, kuten N-metyyli-p-tolyylitriatseenin, kanssa. Reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen låsnåollessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, edellyttåen, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon, ja 20 edellyttåen, ettå låhtoaineet voidaan liuottaa tåhån liuottimeen, våhin-tåån jossain måårin. Sopivia liuottimia ovat esimerkiksi: ketonit, kuten asetoni; eetterit, kuten tetrahydrofuraani; amidit, kuten dimetyyliforma-midi; sekå seokset, jotka kåsittåvåt vettå ja yhtå tai useampaa edellå mainittua orgaanista liuotinta. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla 25 låmpdtila-alueella, ja erityisesti valittu reaktiolåmpotila ei ole kriittinen, vaikka yleenså onkin edullista, ettå reaktio toteutetaan -20 - +50°C:n låmpotilassa. Reaktioon tarvittava aika vaihtelee, monista tekijdistå riippuen, erityisesti låhtdaineiden luonteesta ja reaktion låmpdtilasta; kuitenkin esimerkiksi huoneen låmpotilassa reaktioon kuluu 30 tavallisesti 1-24 tunnin pituinen ajanjakso.

Griseoliinihapon hydroksiryhmåt suojataan samoin, joko ennen karboksi-ryhmien suojaamista, tai sen jålkeen. Tåmå voidaan toteuttaa esimerkiksi antamalla griseoliinihapon, tai karboksiryhmiståån suojatun griseoliini-35 hapon, reagoida happohalogenidin, kuten asetyylikloridin tai bentsoyyli-bromidin, kanssa, tai happoanhydridin, kuten asetanhydridin, kanssa 37 90427 emåksen lasnaollessa. Reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen låsnå-ollessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, edellyttåen, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon. Yleisesti ottaen on edullista kåyttåå pyridiiniå, joka toimii samalla emåksena. Reaktio voidaan toteuttaa 5 laajalla låmpdtila-alueella, ja erityisesti valittu reaktion låmpotila ei ole kriittinen; yleenså reaktio on kuitenkin edullista toteuttaa låmpoti-lassa, joka on -20°C:sta huoneen låmpfltilaan. Reaktioon tarvittava aika vaihtelee huomattavasti, monista tekijdista riippuen, erityisesti reagenssien luonteen ja reaktion låmpdtilan mukaan; kuitenkin, kun reaktio 10 toteutetaan mainitulla lampotila-alueella, niin tålloin 1-15 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittåvå.

Toivottaessa aminoryhma griseoliinihapon 6-asemassa muutetaan samoin hydroksiryhmåksi. Tåmå toteutetaan mieluiten siten, ettå griseoliini-15 hapon, tai suojatun griseoliinihapon annetaan reagoida typpihapokkeen suolan, esimerkiksi natriumnitriitin, kanssa, etikkahapon låsnåollessa. Reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen ldsnåollessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, ja nåin olien tavallisesti kfiytetåån mieluiten etikkahapon vesiliuosta. Hikdli låhtomateriaali on niukkaliukoista, niin 20 talldin voidaan kayttaa etikkahappopuskuria, jonka pH on noin 4. Tama reaktio voidaan toteuttaa laajalla lflmpotila-alueella, vaikkakin tavallisesti reaktio toteutetaan mukavuussyista huoneen låmpotilassa. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijoista, erityisesti reagenssien luonteesta ja reaktiossa kåytetystå låmpdtilasta; . 25 kuitenkin mainitussa lampotilassa 15-50 tunnin pituinen ajanjakso on . - . tavallisesti riittåvd.

Vaihe 2 30 Tåsså vaiheessa vetyhalogenidi liitetådn kaavan (X) mukaisessa grise-oliinihapon johdannaisessa olevan kaksoissidoksen molemmin puolin, jolloin saadaan kaavan (XI) mukainen yhdiste. Tdssfl reaktiossa k&ytetyn vetyhalogenidin H-X luonne riippuu liitettavaksi toivotun halogeeniatomin X luonteesta, mutta yleisesti reaktiossa on edullista kåyttaa kloorivety-35 happoa, bromivetyhappoa tai jodivetyhappoa. Reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen låsnåollessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, edel- 38 90 427 lyttåen, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon, ja ettd låhtoaineet voidaan liuottaa slihen, ainakin jossain måårin. Esimerkkinå sopivasta liuottimesta mainittakoon orgaanlnen happo, kuten etikkahappo. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla låmpdtila-alueella, esimerkiksi 0-100°C:n 5 lfimpotilassa, vaikka yleisesti ottaen reaktio voidaan toteuttaa vaivatto-masti joko låmpotilassa, joka on 0°C:sta huoneen låmpdtilaan, tai kuuraen-tamalla reaktioseosta alueella 80-100°C olevassa låmpotilassa. Reaktioon tarvittu aika vaihtelee huomattavasti, riippuen monista tekijoistå, erityisesti reaktion låmpdtilasta ja liuottimen ja reagenssien luontees-10 ta, mutta 1-72 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittAvå.

Vaihe 3 Tåsså vaiheessa vaiheessa 2 liitetty halogeeniatomi X kaavan (XI) mukai-15 sen yhdisteen 4'-asemassa poistetaan pelkistAmållå. Pelkistimenå kåy-tetåån mieluiten joko trisubstituoitunutta tinahydridiå, kuten tributyy-litinahydridiå, aromaattisessa hiilivetyliuottimessa, kuten bentseenisså, tai sinkkijauhetta, jonka tapauksessa liuottimena kåytetåån mieluiten alempaa alifaattista happoa, kuten etikkahappoa, tai alkoholia, kuten 20 metanolia tai etanolia. Mikali pelkiståvånå aineena kåytetåån trisubstituoitunutta tinahydridiå, niin talldin reaktio toteutetaan mieluiten suurin piirtein liuottimen kiehumislampdtilassa, ja talldin reaktioon tarvittu aika on tavallisesti 2-10 tuntia. Mikali pelkistimena kaytetaan sinkkijauhetta, niin talldin reaktio toteutetaan lampotilassa, joka on 25 huoneen låmpdtilasta 100°C:een, ja reaktioon tarvittu aika on yleenså 2-20 tuntia.

Vaihe 4 30 Tassa vaiheessa kaavan (A) mukainen griseoliinihappo muunnetaan johdan-naisekseen, jolla on kaava (XIII).

2’-asemassa oleva hydroksiryhma voidaan suojata antamalla griseoliini-hapon reagoida asyloivan aineen kanssa, esimerkiksi myds vaiheessa 1 35 kuvatulla tavalla, jolloin asyyliryhmå R50 saadaan liitetyksi, ja tåmån jålkeen griseoliinihapon karboksiryhmåt voidaan myds suojata. Toivot- 39 90 427 taessa griseoliinihapon 6-aminoryhmå voidaan muuntaa hydroksiryhmaksi asianmukaisia, vaiheessa 1 kuvattuja reaktioita kayttåen, ja tama muun-nosreaktio voidaan toteuttaa joko ennen edellå mainittuja suojaamisvai-heita tai niiden jålkeen.

5 7'-aseman hydroksiryhmå muunnetaan sulfonyylioksiryhmåksi -OR51 antamalla yhdisteen reagoida sulfonyloivan aineen kanssa, joista mainittakoon alemmat alkyylisulfonyylihalogenidit (kuten metaanisulfonyylikloridi), aryylisulfonyylihalogenidit (kuten £-tolueenisulfonyylikloridi) tai 10 fluoratut alemmat alkyylisulfonyylihalogenidit (kuten trifluorime-taanisulfonyylikloridi). Reaktio toteutetaan mieluiten happoa sitovan aineen låsnåollessa, jonka happoa sitovan aineen tehtåvåna on poistaa reaktion våliaineesta tåssa reaktiossa vapautuva halogeenivety. Sopivia happoa sitovia aineita ovat pyridiini ja dimetyyliaminopyridiini. Reaktio 15 toteutetaan mieluiten liuottimen l&sn&ollessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, edellyttåen, ettei se vaikuta millåån tavalla haitalli-sesti reaktioon. Sopivista liuottimista mainittakoon halogenoidut hiili-vedyt, erityisesti halogenoidut alifaattiset hiilivedyt, kuten mety-leenikloridi tai kloroform!. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla låmpoti-20 la-alueella, ja tasmalliselle valitulle lampdtilalle ei aseteta mitåån rajoituksia; mukavuussyistå reaktio toteutetaan kuitenkin yleenså låmpo-tilassa, joka on *10°C:sta huoneen ldmpdtilaan. Reaktioon tarvittava aika vaihtelee huomattavasti, riippuen monista tekijdista, erityisesti reaktion lampdtilasta sekå reagenssien luonteesta; kuitenkin 1-20 tunnin 25 pituinen ajanjakso on tavallisesti riittdva.

Vaihe 5 Tåsså vaiheessa sulfonyylioksiryhmå kaavan (XIII) mukaisen yhdisteen 7'-30 asemassa korvataan halogeeniatomilla (antamalla mainitun yhdisteen reagoida vedettdmSn litiumhalogenidin kanssa happamassa amidissa, kuten dimetyyliformamidissa) ja sitten vetyatomilla (pelkistdvån aineen avul-ia).

35 Ensiksi mainittu reaktio toteutetaan mieluiten menetelmållå, joka kuva-taan jåljempanå esitettavdsså vaiheessa 60.

40 9 0 4 2 7

Pelkiståvå aine on mieluiten sinkki etikkahapon vesiliuoksessa, jolloin itse etikkahapon vesiliuos voi toimia reaktion liuottimena. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla låmpotila-alueella, esimerkiksi 0-150°C:n låmpotiloissa, ja reaktioon tarvittava aika, joka vaihtelee huomattavas-5 ti, on tavallisesti 1-10 tuntia.

Vaiheet 6 ia 7 Nåisså vaiheissa vaiheessa 5 kuvatulla tavalla valmistetun, kaavan (XIV) 10 mukaisen yhdisteen annetaan ensin reagoida vetyhalogenidin kanssa, jolloin saadaan valmistetuksi kaavan (XV) mukainen yhdiste, ja sitten tåmå kaavan (XV) mukainen yhdiste pelkistetåån, jolloin saadaan kaavan (XVI) mukainen yhdiste. Nåisså vaiheissa toteutetut reaktiot ovat tåsmålleen samat, kuin edella vaiheiden 2 ja 3 yhteydesså kuvatut reaktiot, ja ne 15 voidaan toteuttaa samoja reagensseja ja samoja reaktio-olosuhteita kåyttåen.

Vaihe 8 20 Tåsså vaiheessa suojataan kaavan (B) mukaisen dihydrodesoksigriseoliini-hapon karboksi- ja hydroksiryhmåt, ja valinnaisesti sen 6-aminoryhmå muunnetaan hydroksiryhmåksi. Nåmå reaktiot ovat tåsmålleen samat, kuin vaiheen 1 yhteydesså esitetyt reaktiot, ja ne voidaan toteuttaa samoja . . reagensseja kåyttåen, samoissa reaktio-olosuhteissa.

25

Vaihe 9 Tåsså vaiheessa kåytetty låhtomateriaali, kaavan (XVII) mukainen yhdiste, voi olla mikå tahansa edellå kuvatulla tavalla valmistetuista, kaavan 30 (XII) tai (XVI) mukaisista yhdisteistå. Tåsså vaiheessa l'-asemassa sijaitseva nukleiinihappoemås muunnetaan alkanoyylioksiryhmåksi antamalla kaavan (XVII) mukaisen yhdisteen reagoida (i) rikkihapon tai trifluorime-taanisulfonihapon kanssa, (ii) alemman karboksyylihapon kanssa, ja (iii) sen anhydridin kanssa. Reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen låsnåol-35 lessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, edellyttåen, ettei se vaikuta millåån tavalla haitallisesti reaktioon, ja ettå reagenssit 4i 90427 liukenevat slihen, edes jossain måårin. Edullisimpia liuottlmia ovat alemmat allfaattlset karboksyylihapot, jotka toimivat samalla reagenssi-na. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla låmpdtila-alueella, esimerkiksi 0-100°C:n låmpotilassa; yleisesti ottaen, reaktio toteutetaan mieluiten joko 5 låmpotilassa, joka on 0°C:sta huoneen lampotilaan, tai låmmittåmållå reaktioseosta 80-100°C:n låmpotilassa. Reaktioon tarvittava aika vaihte-lee, riippuen monista tekijoistå, erityisesti reaktiossa kåytettåvåstå liuottimesta ja reaktion låmpdtilasta, mutta tavallisesti 1-72 tunnin pituinen ajanjakso on riittåvå.

10

Vaihe 10 Tåsså vaiheessa, vaiheessa 9 kuvatulla tavalla valmistettu sokerijohdan-naisella (XVIII) toteutetaan glykosidaatioreaktio antamalla yhdisteen 15 (XVIII) reagoida trimetyylisilyloidun nukleiinihappoemåksen kanssa, katalyyttinå toimivan Lewis:in hapon låsnåollessa, kåyttåen tavanomaisia menetelmiå, jotka kuvataan esimerkiksi julkaisuissa S. Suzaki et al., [Chem. Pharm. Bull., 18, 172 (1970] tai H. Vorbrueggen et al., [Chem. Ber., 106. 3039 (197)], jolloin saadaan kaavan (XIX) mukainen yhdiste.

20 Kåytetty nukleiinihappoemås on puriinin johdannainen, joka vastaa liitet-tåvåksi toivottua, nukleiinihappoemåksen muodostamaa osaa, ja se on voitu trimetyylisilyloida tavanomaisilla menetelmillå, jotka kuvataan julkai-• sussa A.E. Pierce et al., [Silylation of Organic Compounds, 434 (1968)].

..: 25

Glykosidaatioreaktiossa kåytetyn Lewis:in hapon luonteelle ei aseteta - . mitåån erityisiå vaatimuksia, ja esimerkkeinå sopivista Lewis:in hapoista on tinatetrakloridi tai trimetyylisilyyli-trifluorimetaanisulfonaatti. Reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen låsnåollessa, jonka liuottimen 30 luonne ei ole kriittinen, edellyttåen, ettei sillå ole haitallista vaikutusta reaktioon. Sopivia liuottimia ovat polaariset liuottimet, kuten 1,2-dikloorietaani tai asetonitriili. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla låmpotila-alueella, ja valittu tåsmållinen reaktiolåmpotila ei ole erityisen kriittinen. Tavallisesti reaktio toteutetaan mieluiten 35 låmpotilassa, joka on huoneen låmpOtilasta 150°C:een. Reaktioon tarvittu aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijoistå, erityi- 42 9 0 4 2 7 sesti reagenssien luonteesta sekå reaktion låmpotilasta; kuitenkin maini-tulla alueella olevissa låmpotiloissa 24-72 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittåvå.

5 Mikåli silyloitavassa nukleilnihappoemåksesså oleva substituentti on hydroksiryhmå, merkaptoryhmå, alkyylitioryhmå, halogeeniatomi tai vety-atomi, niin nukleiinihappoemås silyloituu suoraan. Mikåli nukleiinihappo-emåksesså on aminosubstituentti, niin tåmå aminosubstituentti tulisi ensin mielellåån suojata asyloimalla, ennen silylointia. 7- tai 9-asemas-10 ta substituoituneiden isomeerien saantojen vålinen suhde vaihtelee reaktiolåmpotilasta riippuen. Esimerkiksi huoneen låmpotilassa bistrime-tyylisilyyli-N2-asetyyliguaniiniå kåyttåen toteutettu glykosidaatio tuottaa enemmån 7-asemastaan substituoitunutta yhdistettå kuin 9-asemas-taan substituoitunutta yhdistettå. Toisaalta saraa reaktio 80°C:n låmpoti-15 lassa toteutettuna tuottaa enemmån 9-isomeeria kuin 7-isomeeriå.

Vaihe 11 Tåsså vaiheessa 2'-aseraassa oleva, ja mahdollisesti rayoskin 7'-asemassa 20 oleva, asyyliryhmå tai -ryhmat poistetaan vapaiden hydroksiryhmien saamiseksi, ja samoin karboksia suojaavat ryhmåt poistetaan. Kaavan (XIX) mukainen yhdiste liuotetaan mieluiten laimeaan alkaliseen vesiliuokseen, • · esimerkiksi 0,1-1 N alkaliseen vesiliuokseen, mieluiten natriumhydroksi- din tai kaliumhydroksidin liuokseen, ja seoksen annetaan seisoa suojaavi-25 en ryhmien irroittamiseksi. Tfimå reaktio voidaan toteuttaa laajoilla låmpotila-alueilla, mutta tavallisesti se toteutetaan kuitenkin vaivatto-mimmin suurin piirtein huoneen låmpotilassa. Reaktioon tarvittava aika saattaa vaihdella huomattavasti, mutta mainitussa låmpotilassa 1-10 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittåvå.

30

Vaihe 12 Tåsså vaiheessa kaavan (XIX) mukaisella, vaiheessa 10 kuvatusti valmis-tetulla yhdisteellå suoritetaan reaktio 6-asemassa olevan halogeeniatomin 35 muuntamiseksi selektiivisesti, valinnaisesti substituoituneeksi, merkap-toryhmåksi, joka kåsittåå alkyyliryhmån, tai vetyatomiksi tai hydroksi- 43 90 427 ryhmåksi tai aminoryhmåksi tai suojatuksi aminoryhmaksi. Kåytetty reaktio voidaan toteuttaa esimerkiksi tavalla, joka on kuvattu julkaisussa L.B. Townsend, [Nucleic Acid Chemistry, 2,693 (1978)], antamalla kaavan (XIX) mukaisen yhdisteen reagoida erilaisten nukleofiilien, kuten natriumbisul-5 fidin, natriumalkaanitiolaatin, natriumhydroksidin, ammoniakin alkoholi-liuoksen, metyyliamiinin tai dimetyyliamiinin, kanssa. Reaktio toteute-taan mieluiten liuottimen låsnåollessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, edellytt&en, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon. Sopivia liuottimia ovat alemmat alkoholit, kuten metanoli tai etanoli. 10 Reaktio voidaan toteuttaa laajalla låmpdtila-alueella, vaikka yleenså reaktio toteutetaankin vaivattomimmin låmpotilassa, joka on huoneen låmpotilasta 150°C:een, mieluiten umpinaisessa putkessa. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huoraattavasti, riippuen monista tekijoistå, erityisesti nukleofiilin luonteesta ja reaktion låmpotilasta; kuitenkin 15 mainitulla låmpotila-alueella 2-20 tunnin pituinen ajanjakso on tavalli-sesti riittåvå.

Tåmå reaktio johtaa tavallisesti suojaavien ryhmien irtoamiseen.

20 Vaihe 13 Tåmå on glykosidaatioreaktio, ja se on olennaisesti sama kuin vaiheessa · 10 kuvattu reaktio, ja se voidaan toteuttaa samoja reaktio-olosuhteita kåyttåen, jolloin saadaan kaavan (XXII) mukainen yhdiste.

25

Vaihe 14 Tåsså vaiheessa poistetaan hydroksia suojaavat ryhmåt ja karboksia suojaavat ryhmåt, ja tåmå voidaan toteuttaa olennaisesti vaiheessa 11 30 kuvatulla tavalla, samoja reagensseja ja reaktio-olosuhteita kåyttåen. Mikåli Y1 tarkoittaa suojattua aminoryhmåå, esimerkiksi asetyyliamino-ryhmåå, niin suojaava ryhmd voidaan poistaa hydrolyysireaktiolla. Tåmå toteutetaan alkalilla, esimerkiksi ammoniakin metanoliliuoksella (mieluiten noin 20-prosenttisella ammoniakin metanoliliuoksella). Reaktio 35 voidaan toteuttaa laajalla låmpdtila-alueella, vaikka reaktio voidaankin yleenså toteuttaa vaivattomimmin noin huoneen låmpotilassa. Reaktion ω 90427 vaatima aika vol vaihdella huomattavasti; kuitenkin ehdotetussa låmpoti-lassa 24-50 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittåvå.

Vaihe 15 5 Tåsså vaiheessa kaavan (XVIII) mukaisen sokerljohdannaisen annetaan reagoida trimetyylisilyloidun nukleiinihappoemåksen kanssa, vaiheessa 10 kuvatun glykosidaatioreaktion mukaisesti, jolloin saadaan kaavan (XXIV) mukainen yhdiste. Reaktio-olosuhteet ja reagenssit ovat olennaisesti 10 samaC kuin vaiheessa 10 kuvatussa reaktiossa.

Vaihe 16 Tåsså vaiheessa suojaavat ryhmåt poistetaan, jolloin saadaan kaavan (XXV) 15 mukainen yhdiste. Tåmå reaktio on olennaisesti sama kuin vaiheessa 11 kuvattu reaktio, ja se voidaan toteuttaa samoja reagenssej a ja reaktio-olosuhteita kåyttåen.

Vaihe 17 20 Tåsså vaiheessa kaavan (XVIII) mukaisella sokerijohdannaisella toteu-tetaan glykosidaatioreaktio antamalla sen reagoida trimetyylilyloidun nukleiinihappoemåksen kanssa, jolloin saadaan kaavan (XXVI) mukainen yhdiste. Reagenssit ja reaktio-olosuhteet ovat olennaisesti edellå 25 vaiheessa 10 esitetyn mukaiset.

Vaihe 18 Tåsså vaiheessa kaavan (XXVI) mukaisen, vaiheessa 17 valmistetun yhdis-30 teen annetaan reagoida siten, ettå suojaavat ryhmåt saadaan poistetuiksi, jolloin saadaan kaavan (XXVII) mukainen yhdiste. Tarvittavat reaktiot ovat olennaisesti vaiheessa 11 esitettyjen reaktioiden mukaiset, ja ne voidaan toteuttaa kåyttåen samoja reagensseja ja reaktio-olosuhteita.

35 45 .90427

Vaihe 19 Tåsså vaiheessa kaavan (XXVIII) mukaisen yhdisteen, joka voi olla mikå tahansa edella kuvatusti valmistetuista yhdisteistå (X), (XII), (XIV) tai 5 (XVI), suojatuista 2'-hydroksi- ja 7'-hydroksiryhmista (misså RZa on suojattu hydroks iryhmå) irroitetaan suojaava ryhmå, jolloin saadaan kaavan (XXIX) mukainen yhdiste. Tamå voidaan toteuttaa vaiheessa 11 kuvatulla hydrolyylireaktlolla, ja se voidaan toteuttaa samoissa olo-suhteissa ja samoja reagensseja kåyttåen, vaikka tålloin huomiota on 10 kuitenkin kiinnitettåvå siihen, ettei samalla hydrolysoida karboksia suojaavia ryhmiå. Mikali ne hydrolysoituvat, niin tålloin ne voidaan palauttaa vaiheessa 1 kuvatulla esterointimenetelmållå.

Vaihe 70 15 Tåsså vaiheessa kaavan (XXIX) mukainen yhdiste muunnetaan kaavan (XXX) mukaiseksi N^oksidiksi.

Tamå reaktio toteutetaan mieluiten antamalla kaavan (XXIX) mukaisen 20 yhdisteen reagoida peroksidin kanssa, mieluiten liuottimessa. Tåsså reaktiossa kåytettåvån liuottimen luonne ei ole erityisen kriittinen, edellyttåen kuitenkin, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon, ja edellyttåen, ettå reagenssit voidaan liuottaa siihen, våhintåån jossain måårin. Esimerkkeinå edullisista liuottimista mainittakoon alemmat 25 alkoholit, kuten metanoli ja etanoli. Samoin kåytettåvån peroksidin luonteelle ei aseteta mitåån erityisiå rajoituksia, ja esimerkkeinå mainittakoon vetyperoksidi ja orgaaniset peroksidit, kuten m-kloori-perbentsoehappo. Mieluiten kåytetåån orgaanisia perhappoja, kutenm-klooriperbentsoehappoa. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla låmpotila-30 alueella, vaikka tavallisesti reaktio toteutetaan mieluummin låmpotilas-sa, joka on alueella 0-60°C, mieluiten noin huoneen låmpotilassa. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen monista teki-jdistå, erityisesti reaktion lampdtilasta ja reagenssien luonteesta; kuitenkin ehdotetulla låmpdtila-alueella 5-48 tunnin pituinen ajanjakso 35 on tavallisesti riittåvå.

Vaihe 21 46 90427 Tåsså vaiheessa N1-oksidi muunnetaan kaavan (XXXI) mukaiseksi N1-alkoksi-tai N1-aralkyylioksiyhdisteeksi antamalla Nx-oksidin (XXX) reagoida 5 alemman alkyylihalogenidin tai aralkyylihalogenidin kanssa orgaanisen emåksen låsnåollessa, ja mieluiten liuottimen låsnåollessa. Kåytettåvån liuottimen luonne ei ole erityisen krilttinen, edellyttåen, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon, ja edellyttåen, ettå reagenssit voidaan liuottaa siihen, våhintåån jossaln måårin. Sopivia liuottimia ovat happo-10 amidit, kuten dimetyyliformamidi tai dimetyyliasetamidi . Sopivia orgaani-sia emåksiå ovat trialkyyliamiinit, kuten trietyyliamiini. Halogenidin luonteelle ei aseteta mitåån erityisiå rajoituksia, kuitenkin edellyttå-en, ettå se kykenee alkyloimaan tai aralkyloimaan hydroksiryhmån. Sopivia alempia alkyylihalogenideja ovat raetyylijodidi, ja sopivia alempia aral-15 kyylihalogenideja ovat esimerkiksi bentsyylibromidi ja p-nitrobentsyyli-bromidi. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla låmpotila-alueella, vaikka reaktio voidaankin tavallisesti toteuttaa vaivattomasti alueella 0-100°C olevissa låmpdtiloissa, mieluununin noin huoneen låmpotilassa. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijoistå, 20 erityisesti reagenssien luonteesta ja reaktion låmpotilasta; kuitenkin 1-20 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittåva.

Vaihe 22 25 Tåsså vaiheessa valmistetaan kaavan (XXXII) mukainen yhdiste reaktiolla, jossa kaavan (XXXI) mukaisen l^-alkoksi- tai N1-aralkyylioksiyhdisteen rengas aukeaa, mitå seuraa tuloksena olevan formyy1iryhmån poistaminen.

Nåmd reaktiot toteutetaan mieluiten antamalla kaavan (XXXI) mukaisen 30 yhdisteen reagoida alkalisen vesiliuoksen kanssa. Sopivia alkalisia vesiliuoksia ovat alkalimetallihydroksidien, kuten natriumhydroksidin, vesiliuokset. Edullinen liuos on natriumhydroksidin 1,5 N vesiliuos. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla låmpotila-alueella, esimerkiksi -10 -+100°C:n låmpotilassa. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomatta-35 vasti, riippuen monista tekijoistå, erityisesti reagenssien luonteesta ja pitoisuudesta sekå reaktion låmpotilasta; kuitenkin ehdotettuja reagens- 4? 90427 seja ja låmpotiloja kåyttåen ajanjakso, joka on pituudeltaan 6 minuutista 10 vuorokauteen, on tavallisesti vålttåmåtdn. Tåmå reaktio poistaa samalla karboksia suojaavat ryhmåt R22 ja R23. Nåln olien, mlkåll nåitå ryhmiå tarvitaan, ne on tåmån jålkeen liitettåvå uudestaan vaiheessa 1 5 kuvatulla esterdimisreaktiolla. Ylelsesti ottaen, myohemmisså vaihelssa on edullista, ettå nåmå karboksiryhmåt on suojattu, joten sekå ryhmån R31 ettå ryhmån R32 tulisi tarkoittaa karboksia suojaavaa ryhmåå.

Valhe 23 10 Tåsså vaiheessa kaavan (XXXII) mukainen yhdiste pelkistetåån, jolloin saadaan kaavan (XXXIII) mukainen yhdiste, ja toivottaessa karboksia suojaavat ryhmåt poistetaan ja/tai ne muunnetaan amideiksi ja/tai ne muunnetaan suoloiksi ja/tai muiksi karboksia suojaaviksi ryhmiksi.

15

Kaavan (XXXII) mukaisen yhdisteen pelkiståminen siten, ettå ryhmå -OR30 saadaan poistetuksi, toteutetaan mieluiten kåsittelemållå yhdistettå aktiivisella metallilla liuottimen låsnåollessa. Liuottimen luonne ei ole erityisen kriittinen, edellyttåen, ettei se vaikuta haitallisesti reakti-20 oon, ja ettå se kykenee liuottamaan låhtoaineita våhintåån jossain måårin. Sopivia liuottimia ovat seokset, jotka kåsittåvåt jonkin hapon laimeata vesiliuosta, kuten kloorivetyhapon laimeata vesiliuosta, sekå veteen sekoittuvaa orgaanista liuotinta, kuten asetonia. Edullinen liuotin on seos, joka kåsittåå yhtå suuret tilavuudet kloorivetyhapon IN 25 vesiliuosta ja asetonia. Kåytetyn aktiivisen metallin luonteelle ei mydskåån aseteta mitåån erityisiå rajoituksia, edellyttåen, ettå sitå voidaan kåyttåå sellaisessa pelkiståmisreaktiossa, jossa happo toimii protonin luovuttajana. Aktiivisena metallina kåytetåån mieluiten Raney-nikkeliå. Tåmå reaktio voidaan toteuttaa laajalla låmpotila-alueella, 30 vaikka yleenså reaktio voidaankin toteuttaa vaivattomimmin alueella 0-50°C olevissa låmpotiloissa. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomatta-vasti, riippuen monista tekijdistå, erityisesti reagenssien luonteesta ja reaktion låmpotilasta; kuitenkin edellå ehdotetuissa olosuhteissa 1-10 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittåvå.

35 48 9 0 4 2 7

Suojaavat ryhmåt voidaan poistaa toivottaessa, jolloin poistamiseen kåytetyn reaktion luonne riippuu suojaavien ryhmien luonteesta, kuten alalia hyvin tunnetaan.

5 Mikåli karboksia suojaavana ryhmånå kåytetåån alempaa alkyyliryhmåå, niin se voidaan poistaa kåsittelemållå yhdistettå emåksellå, erityisesti alkalimetallin hydroksidilla, kuten natriumhydroksidilla. Edullista on kåyttåå alkalimetallihydroksidin vesiliuosta, esimerkiksi natriumhydrok-sidin 1 N vesiliuosta. Reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen lasnå-10 ollessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen keksinnolle, edellyt-tåen kuitenkin, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon. Yleisesti, vesiliuos on tehokas. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla låmpotila-alueella, vaikka yleensa reaktio voidaankin toteuttaa vaivattomasti suurin piirtein huoneen låmpotilassa. Reaktioon tarvittava aika voi 15 vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijoistå, erityisesti reagenssien luonteesta ja reaktion låmpotilasta; kuitenkin edellå ehdote-tuissa olosuhteissa 1-15 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittåvå.

20 Mikåli karboksia suojaava ryhmå on diaryyli-substituoitunut metyyliryhmå, kuten difenyylimetyyliryhmfi (eli bentshydryyliryhmå), niin se poistetaan mieluiten happamissa olosuhteissa liuottimen låsnåollessa. Tåsså reak-tiossa kaytetyn liuottimen luonne ei ole erityisen kriittinen, edellytta-en, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon. Esimerkkeina sopivista 25 liuottimista mainittakoon aromaattiset hiilivedyt ja aromaattiset eette-rit, kuten anisoli. Happo on mieluiten fluorattu orgaaninen happo, kuten trifluorietikkahappo. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla låmpotila-alueella, vaikka reaktio voidaankin yleenså toteuttaa vaivattomasti suurin piirtein huoneen låmpotilassa. Reaktioon tarvittava aika saattaa 30 vaihdella huomattavasti, mutta ajanjakso, jonka pituus on 30 minuutista 10 tuntiin, on tavallisesti riittåvfi.

Mikåli karboksia suojaava ryhmå on aralkyyliryhmå tai alempi halogeeni-alkyyliryhmå, niin tålléin se poistetaan mieluiten pelkiståmållå. Edul-35 lisia pelkistimiå ovat: alempien halogeenialkyyliryhmien tapauksessa sinkki/etikkahapon vesiliuos; ja aralkyyliryhmien tapauksessa vety ja 49 90427 katalyytti (kuten hiileen sldottu palladium tai platina) tai alkali-metallin sulfidi (kuten kaliumsulfidi tai natriumsulfidi). Reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen låsnåollessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, kuitenkin edellyttåen, ettei se vaikuta haitallisesti 5 reaktioon. Esimerkkeinå sopivista liuottimista mainittakoon; alkoholit, kuten metanoli tai etanoli; eetterit, kuten tetrahydrofuraani tai diok-saani; rasvahapot, kuten etikkahappo; tai seokset, jotka kåsittåvåt yhtå tai useampaa nåistå orgaanisista liuottimista sekå vettå. Reaktioon tarvittava aika ei ole erityisen kriittinen, vaikka tavallisesti reaktio 10 voidaankin toteuttaa edullisesti låmpotilassa, joka on 0°C:sta huoneen låmpotilaan. Tållaisessa låmpotilassa reaktio vaatii tavallisesti ajan-jakson, jonka pituus on 5 minuutista 12 tuntiin.

Mikali karboksia suojaava ryhmå on alkoksimetyyliryhmå, niin se voidaan 15 poistaa kåsittelemållå yhdistettå hapolla liuottimessa. Edullisia happoja ovat: kloorivetyhappo; etikkahapon ja rikkihapon vålinen seos; tai p-tolueenisulfonihapon ja etikkahapon vålinen seos. Tåsså reaktiossa kåytettåvån liuottimen luonteelle ei aseteta mitåån erityisiå rajoituk-sia, kuitenkin edellyttåen, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon. 20 Sopivia liuottimia ovat: alkoholit, kuten metanoli tai etanoli; eetterit, kuten tetrahydrofuraani tai dioksaani; sekå seoksen, jotka kåsittåvåt . . yhtå tai useampaa edellå mainittua liuotinta ja vettå. Reaktion låmpo- tilalle ei aseteta mitåån erityisiå rajoituksia, vaikka reaktio voidaankin tavallisesti toteuttaa vaivattomasti alueella 0-50°C olevassa låmpoti-25 lassa, jossa tavallisesti riittåå ajanjakso, jonka pituus on 10 minuutis-ta 18 tuntiin.

Mikåli karboksia suojaava ryhmå poistetaan kåsittelemållå yhdistettå ammoniakin vesiliuoksella, niin se johtaa tavallisesti 8'- ja 7'-asemissa 30 olevien karboksiryhmien muuntumiseen karbamoyyliryhmiksi.

Toivottaessa, vapaa karboksyylihappo voidaan muuntaa suolakseen, esi-merkiksi alkalimetallin suolaksi, tavanomaisilla menetelmillå. Esimerkik-si sopivassa reaktiossa happo liuotetaan veden ja veteen sekoittuvan 35 orgaanisen liuottimen, kuten etyyliasetaatin, muodostamaan seokseen, johon lisåtåån asianmukaisen alkalimetallikarbonaatin tai -bikarbonaatin so 90427 (kuten kaliumkarbonaatin tal natriumbikarbonaatin) vesiliuos asianmukai-sessa lampdtilassa (joka on esimerkiksi 0°C:sta huoneen låmpotilaan), jonka jalkeen pH asetetaan siten, etta suola voi erottua saostumalla (esimerkiksi suurin plirtein arrvoon 7).

5

Tuloksena oleva suola- tai karboksyylihappoyhdiste voidaan toivottaessa muuntaa esteriksi, jossa karboksiryhmat on suojattu helposti in vivo hydrolysoituvilla suojaavilla ryhmilla. Suola tai happo liuotetaan ensin asianmukaiseen liuottimeen, esimerkiksi: eetteriin, kuten tetrahydrofu-10 raaniin; tai polaariseen liuottimeen, kuten dimetyyliformamidiin, dime-tyylisulfoksidiin, heksametyylifosforitriamidiin tai trietyylifosfaat-tiin. Taman jalkeen sen annetaan reagoida emaksen vahintaan 2 ekvivalen-tin kanssa, joka emas voi olla orgaaninen emås (kuten trietyyliamiini tai disykloheksyyliamiini), alkalimetallin hydridi (kuten natriumhydridi) tai 15 alkalimetallin karbonaatti tai bikarbonaatti (kuten natriumkarbonaatti, kaliumkarbonaatti tai natriumbikarbonaatti), jolloin saadaan syntymaan suolaa, ja tuloksena olevan suolan annetaan reagoida alemman alifaattisen asyylioksimetyylihalogenidin (kuten asetoksimetyylikloridin tai pro-pionyylioksimetyylibromidin) kanssa, alemman alkoksikarbonyylioksietyyli-20 halogenidin (kuten 1-metoksikarbonyylioksietyylikloridin tai 1-etoksikar-bonyylioksietyylijodidin) kanssa, ftalidyylihalogenidin kanssa tai (2-okso-5-metyyli-l,3-dioksolen-4-yyli)metyylihalogenidin kanssa. Reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen låsnaollessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, kuitenkin edellyttåen, ettei se vaikuta haitallisesti 25 reaktioon. Sopivia liuottimia ovat esimerkiksi edella mainitut polaariset liuottimet. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lampotila-alueella, vaikka yleenså reaktio voidaankin toteuttaa vaivattomasti alueella 0-100°C olevissa lårapdtiloissa. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomatta-vasti; kuitenkin edella ehdotetuissa olosuhteissa riittaa tavallisesti 30 ajanjakso, jonka pituus on 30 minuutista 10 tuntiin. Edellå esitettyå toivottua vaihetta voidaan soveltaa myos toivottaessa vaiheissa 24, 25 ja 25, seka myoskin vaiheiden 27, 32, 33, 34, 36, 37, 38, 50 ja 54 kussakin vaiheessa.

35

Vaihe 24 5i 90427 Tåsså valheessa kaavan (XXXII) mukainen, valheessa 22 kuvatulla tavalla valmistettu yhdiste pelkistetåån katalyyttisesti alkyyli- tai aralkyyli-5 ryhmån R30 poistamiseksi, jolloin saadaan kaavan (XXXIV) mukainen hydrok-siiminoyhdiste. Tåmå reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen låsnåolles-sa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, edellyttåen, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon, ja ettå se kykenee liuottamaan låhtoma-teriaaleja, edes jossain måårin. Edullisia ovat orgaaniset karboksyyliha-10 pot, erityisesti rasvahapot, kuten etikkahappo. Katalyytin luonteelle ei aseteta mitåån erityisiå rajoituksia, ja tåsså reaktiossa voidaan kåyttåå yhtå hyvin mi tå tahansa sellaista katalyyttiå, jota kåytetåån tavallises-ti katalyyttisisså pelkistysprosesseissa. Oheisessa reaktiossa kåytetåån kuitenkin mieluummin platinaoksidia, hiileen sidottua platinaa tai 15 hiileen sidottua palladiumia, mieluiten aktiivihiilen adsorboitua palla-ditunkloridia. Reaktio toteutetaan mieluiten sekoittamalla katalyytin ja kaavan (XXXII) mukaisen yhdisteen seosta valitussa liuottimessa vetyilma-kehåsså. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla låmpdtila-alueella ja erityisesti valittu låmpdtila ei ole kriittinen. Yleenså reaktio voidaan 20 toteuttaa vaivattomasti alueella 5-60°C olevissa låmpotiloissa. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijoistå, kuten yhdisteen (XXXII) luonteesta ja reaktio-olosuhteista, erityisesti reaktion låmpfitilasta; kuitenkin edellå ehdotetuissa olosuhteissa 1-10 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittåvå. Toivottaessa vaihees-25 sa 23 kuvattu valinnainen toimenpide voidaan toteuttaa tuloksena olevalla yhdisteellå.

Vaihe 25 30 Tåsså vaiheessa kaavan (XXXIV) mukainen, vaiheessa 24 esitetyllå tavalla valmistettu yhdiste saatetaan reagoimaan hiilidisulfidin kanssa, mikå johtaa renkaan muodostumiseen, jolloin saadaan kaavan (XXXV) mukainen yhdiste. Tåmå reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen låsnåollessa, jonka liuottimen luonne ei kuitenkaan ole kriittinen, edellyttåen, ettei 35 se vaikuta haitallisesti reaktioon, ja ettå se kykenee liuottamaan låhto-materiaaleja, edes jossain måårin. Reaktiossa kåytetåån kuitenkin mielui- 52 9 0 4 2 7 ten seosta, joka muodostuu heikosti emåksiseståliuottimesta (kuten pyridiinistå) sekå alemmasta alkoholista (kuten metanolista), jolloin tåsså seoksessa nåiden kahden komponentin tilavuudet ovat raieluiten yhtå suuret. Hiilidisulfidin kåytetty måårå on mieluiten noin yksi viidesosa 5 liuottimen mååråstå. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla låmpotila-alueel-la, ja tavallisesti reaktio voidaan toteuttaa vaivattomasti alueella 0-150°C olevissa låmpotiloissa, mieluiten noin 80°C:n låmpotilassa. Reak-tioon tarvittava aika vaihtelee, riippuen monista tekijoistå, erityisesti låhtomateriaalien luonteesta ja reaktion låmpotilasta; kuitenkin edellå 10 ehdotetuissa olosuhteissa 10-30 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittåvå. Toivottaessa vaiheessa 23 kuvattu valinnainen toimenpidc voidaan toteuttaa tuloksena olevalla yhdisteellå.

Vaihe 26 15 Tåsså vaiheessa kaavan (XXXV) mukaisen merkaptoyhdisteen annetaan reagoi-da kaavan R33X ja/tai R3*X mukaisen alkyylihalogenidin, aralkyylihalo-genidin, alifaattisen asyylihalogenidin tai aromaattisen asyylihalo-genidin kanssa, jotta tållainen alkyyli-, aralkyyli- tai asyyliryhmå 20 saataisiin liitetyksi merkaptoryhmåån tai 6-aminoryhmåån. Reaktio to-teutetaan mieluiten liuottimen låsnåollessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, edellyttåen, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon, ja ettå se kykenee liuottamaan låhtomateriaaleja våhintåån jossain måårin. Reaktiossa kåytetåån kuitenkin mieluiten vettå tai alempaa alkoholia 25 (kuten metanolia) tai veden ja tållaisen alkoholin seosta. Reaktio toteutetaan mieluiten happoa sitovan aineen låsnåollessa, jonka happoa sitovan aineen luonne ei ole kriittinen, edellyttåen, ettå se kykenee poistamaan reaktiossa syntyvån halogeenivedyn HX. Sopivia happoa sitovia aineita ovat esimerkiksi: epåorgaaniset emåkset, erityisesti alkalimetal-30 lien hydroksidit, kuten natriumhydroksidi tai kaliumhydroksidi; sekå orgaaniset emåkset, erityisesti orgaaniset amiinit, mieluiten trialkyy-liamiinit, kuten trietyyliamiini. Yleenså reaktiossa kåytetåån mieluiten alkalimetallihydroksidin, kuten natriumhydroksidin, vesiliuosta. Reagenssi R33X tai R34X voi olla: a lemp i alkyylihalogenidi, kuten met.yylijodidi; 35 aralkyylihalogenidi, kuten bentsyylibromidi; alempi alifaattinen asyyli-halogenidi, kuten asetyylikloridi; tai aromaattinen asyylihalogenidi, 53 9 0 4 2 7 kuten bentsoyylibromidi. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla låmpdtila-alueella, vaikka tavallisesti reaktio toteutetaankin mieluiten alueella 0-80°C olevissa låmpdtiloissa, mieluiten suurin piirtein huoneen låmpo-tilassa. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen 5 monista tekijdistå, erityisesti reagenssien luonteesta ja reaktion låmpo-tilasta; kuitenkin edellå ehdotetuissa olosuhteissa 1-10 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittåvå.

Mikåli reaktio toteutetaan kåyttåen alkyylihalogenidia tai aralkyyli-10 halogenidia, niin tålldin mieluiten 2-aseman merkaptoryhma alkyloituu tai aralkyloituu. Toisaalta, mikåli reagenssi on alifaattinen asyylihalo-genidi tai aromaattinen asyylihalogenidi, niin tålldin ensisijaisesti 6-aminoryhmå asyloituu. Nåin olien yhdisteeseen voidaan liittåå sama tai eri ryhmå ryhmien R33 ja R3* muodossa.

15

Toivottaessa, vaiheessa 23 kuvattu valinnainen toimenpide voidaan myos toteuttaa tuloksena olevalla yhdisteellå.

Vaihe 27 20 Tåsså vaiheessa kaavan (XXXV) mukaisen yhdisteen 6-aminoryhmå muunnetaan hydroksiryhmåksi ja toivottaessa, tåmå hydroksiryhmå halogenoidaan sen korvaamiseksi halogeeniatomilla; toivottaessa tåmå halogeeniatomi voidaan tåmån jålkeen korvata hydratsiinoryhmallå, substituoidulla aminoryhmållå, 25 substituoituneella metyleeniryhmållå suojatulla aminoryhmållå, tai kaavan -OR9 tai -SR9 mukaisella ryhmållå. Lisåksi toivottaessa, vaiheessa 23 kuvattuihin valinnaisiin vaiheisiin liittyvå reaktio voidaan myos toteuttaa kussakin toimenpiteesså ja/tai toivottaessa, viimeisesså toimenpi-teesså merkaptoa suojaava ryhmå, aminoa suojaava ryhmå tai hydroksia 30 suojaava ryhmå voidaan poistaa.

Aminoryhmån muuntaminen hydroksiryhmåksi toteutetaan vaiheeseen 1 kuulu-van saman reaktion yhteydesså esitetyllå tavalla, ja se voidaan toteuttaa samoja reaktio-olosuhteita ja samoja reagensseja kåyttåen.

35 5* 90 427

Halogenointi, jossa hydroksiryhmå korvautuu halogeeniatomilla, voidaan toteuttaa kåyttåmållå tavanomaisia halogenoivia aineita, jotka kykenevåt muuntamaan heterosyklisesså yhdisteesså olevan hydroksiryhmån halogeeni-atomiksi. Esimerkkeinå mainittakoon fosforioksihalogenidit, kuten fosfo-5 rioksikloridi tai fosforioksibromidi; sekå tionyylihalogenidit, kuten tionyylikloridi; nåistå kåytetåån mielulten fosforioksikloridia. Reaktio toteutetaan mieluiten happoa sitovan aineen låsnåollessa, esimerkiksi; happaman amidin, kuten dimetyyliformamidin; aromaattisen tertiåårisen araiinin, kuten dietyylianilliinin tai dimetyylianilliinin; tai alemman 10 trialkyyliamiinin, kuten trietyyliamiinin, låsnåollessa.

Reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen låsnåollessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, edellyttåen, ettei se håiritse reaktiota, ja yleenså reaktiossa kåytetåån liuottimena mieluiten itse halogenoivan 15 aineen ylimååråå; vaihtoehtoisesti, reaktiossa voidaan kåyttåå halogenoivan aineen ylimååraa seoksena toisen orgaanisen liuottimen kanssa, joista orgaanisista liuottimista mainittakoon esimerkiksi: esteri, kuten etyyliasetaatti; tai halogenoitu hiilivety, mieluiten halogenoitu ali-faattinen hiilivety, kuten metyleenikloridi. Reaktio voidaan toteuttaa 20 laajalla låmpotila-alueella, ja valittu tåsmållinen låmpotila ei ole erityisen kriittinen reaktiolle; yleenså, reaktio toteutetaan mieluiten kåytetyn liuottimen kiehumislåmpdtilassa. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijoistå, erityisesti rea-·. genssien luonteesta ja reaktion låmpotilasta; kuitenkin edellå ehdo- 25 tetuissa olosuhteissa reaktioon riittåå tavallisesti ajanjakso, jonka pituus on 10 minuutista 5 tuntiin.

Tåmån jålkeen, toivottaessa, tuloksena oleva 6-aseman halogeeniatomi voidaan muuntaa joksikin edellå mainituksi substituentiksi antamalla 30 yhdisteen reagoida nukleofiilisen reagenssin kanssa, joka reagenssi kuuluu johonkin seuraavaan luokkaan: mono- ja di-alkyyliamiinit, kuten metyyliamiini tai dimetyyliamiini; substituoituneella metyleeniryhmållå suojatut amiinit, kuten bentsylideeniamiini tai muut sellaiset amiinit, jotka vastaavat edellå mainittuja substituoituneita metyleeniiminoryhmiå; 35 hydroksi-substituoituneet nlemmat alkyyliamiinit, kuten 2-hydroksietyyli-amiini; aminosubstituoidut alemmat alkyyliamiinit, kuten 2-aminoetyyli- 55 90 427 amiini; aralkyyliamiinit, kuten bentsyyliamiini; aryyliamiinit, kuten anilliini, β-naftyyliamiini tai /J-naftyyliamiini; hydroksyyliamiini; alemmat alkoksiamiinit, kuten metoksiamiini; aralkyylioksiamiinit, kuten bentsyylioksiamiini; alkalimetalllen hydroksidit, kuten natriumhydroksi-5 di; alkalimetalllen vetysulfidit, kuten natriumvetysulfidi; alkalimetal-lien alkaanitiolaatit, kuten natriummetaanitiolaatti; sekå alkalimetalli-en alkoksidit, kuten natriummetoksidi. Mikali kåytetty nukleofiilinen reagenssi on amiini, niin reaktio voidaan toteuttaa kåyttaen amiinin ylimaaraa, lisååmåtta reaktioseokseen lainkaan happoa sitovaa ainetta. 10 Kuitenkin, mikali reaktiossa kaytetåån jotakin muuta edella mainittua, amiinista poikkeavaa nukleofiilistå ainetta, niin tålloin reaktio to-teutetaan mieluiten happoa sitovan aineen lasnaollessa, joka happoa sitova aine ei itse ole nukleofiili; sopivia ovat trialkyyliamiinit, kuten trietyyliamiini. Reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen lasnåol-15 lessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, edellyttaen, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon. Sopivia liuottimia ovat esimerkiksi: alemmat alkoholit, kuten metanoli tai etanoli; happamat amidit, kuten dimetyyliformamidi tai dimetyyliasetamidi; sekå polaariset liuottimet, kuten trimetyylisulfoksidi, heksametyylifosforitriamidi tai trietyylifos-20 faatti. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla låmpotila-alueella, ja valittu tåsmållinen reaktiol&mpdtila ei ole erityisen kriittinen; yleensa, reaktio toteutetaan mieluiten låmpdtilassa, joka on huoneen låmpotilasta kåytetyn liuottimen kiehumislåmp5tilaan. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijoista, erityisesti rea-25 genssien luonteesta ja reaktion l&mpdtilasta; kuitenkin, mikali låmpotila on ehdotetulla alueella, niin talldin 6-20 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittåvå.

Toivottaessa, suojaavat ryhmåt voidaan poistaa tSsså vaiheessa, ja 30 tållaisten suojaavien ryhmien poistamiseksi kaytetyt reaktiot vaihtelevat tavanomaisesti, riippuen suojaavan ryhmån tasmållisestå luonteesta.

Mikali hydroksia suojaavana ryhmana kaytetaan trialkyylisilyyliryhmaa, se voidaan poistaa kasittelemalla yhdistettå yhdisteella, joka kykenee 35 tuottamaan fluorianioneja; esimerkkina mainittakoon tetrabutyyliammonium-fluoridi. Reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen lasnaollessa, jonka 56 9 0 4 2 7 liuottimen luonne ei ole erityisen kriittinen, edellyttåen, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon. Sopivia liuottimia ovat esimerkiksi eetterit, kuten tetrahydrofuraani tai dioksaani. Reaktion låmpotila ei ole erityisen kriittinen, vaikka tavallisesti reaktio toteutetaankin 5 mieluiten suurin piirtein huoneen låmpdtilassa. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijoistå; kuitenkin ehdotetuissa olosuhteissa 10-18 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittåvå.

10 Mikåli hydroksia suojaavana ryhmånå kåytetåån aralkyylioksikarbonyyli-ryhmåå tai aralkyyliryhmåå, niin se voidaan poistaa saattamalla yhdiste kosketuksiin pelkistimen kanssa, esimerkiksi: kåyttåen katalyyttiå, kuten aktiivihiileen adsorboitua palladiumia tai platinaan vedyn låsnåollessa, mielellåån huoneen låmpotilassa; tai kåyttåen alkalimetallin sulfidia, 15 kuten natriumsulfidia tai kaliumsulfidia. Reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen låsnåollessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, edellyttåen kuitenkin, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon. Sopivia liuottimia ovat esimerkiksi: alkoholit, kuten metanoli tai etanoli; eetterit, kuten tetrahydrofuraani tai dioksaani; rasvahapot, kuten 20 etikkahappo; tai yhtå tai useampaa mainittua orgaanista liuotinta ja vettå sisåltåvåt seokset. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla låmpotila-alueella, vaikka yleenså se toteutetaankin vaivattomasti huoneen låmpotilassa tai sen alapuolella, esimerkiksi låmpotilassa, joka on alueella 0°C:sta huoneen låmpotilaan. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella 25 huomattavasti, riippuen monista tekijdistå, erityisesti låhtomateriaalien ja pelkistimien luonteesta; kuitenkin tavallisesti riittåå ajanjakso, jonka pituus on 5 minuutista 12 tuntiin.

Mikåli hydroksia suojaavana ryhmånå kåytetåån alifaattista asyyliryhmåå, 30 aromaattista asyyliryhmåå tai alkoksikarbonyyliryhmåå, niin se voidaan poistaa kåsittelemållå yhdistettå emåksellå vettå sisåltåvån liuottimen låsnåollessa. Kåytettåvån liuottimen luonteelle ei aseteta mitåån eri-tyisiå rajoituksia, ja tåsså reaktiossa voidaan kåyttåå yhtå hyvin mitå tahansa yleenså hydrolyysireaktiossa kaytettyå liuotinta. Esimerkkeinå 35 edullisista liuottimista mainittakoon vesi ja seokset, jotka sisåltåvåt vettå ja yhtå tai useampaa orgaanista liuotinta, esimerkiksi: alkoholeja, 57 90427 kuten metanolia, etanolia tal propanolia; tai eettereitå, kuten tetra-hydrofuraania tai dioksaania. Mydskd&n emaksen luonteelle ei aseteta mitaan erityisiå rajoituksia, kultenkin edellyttåen, ettei se vaikuta molekyylin muihin oslin. Esimerkkeina soplvista emåksistå mainittakoon: 5 alkalimetallien karbonaatit, kuten natriumkarbonaatti tai kaliumkarbo-naatti; alkalimetallien hydroksidit, kuten natriumhydroksidi tai kalium-hydroksidi; seka ammoniakin metanoliliuos. Ammoniakin metanoliliuos on edullisempi emas suojaavan ryhmån poistamiseksi nukleiinihappoemåksestå; muissa tapauksissa kåytetaan mieluiten natriumhydroksidin 1 N vesiliuos-10 ta. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lampotila-alueella, ja valittu erityinen reaktion låmpotila ei ole kriittinen; kuitenkin yleenså reaktio toteutetaan mieluiten huoneen låmpfttilassa tai sen alapuolella, esimer-kiksi lampotilassa, joka on 0°C:sta huoneen lampdtilaan. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijoistå, 15 erityisesti låhtomateriaalien luonteesta ja reaktion låmpotilasta; kuitenkin edella ehdotetuisssa olosuhteissa reaktio etenee tavallisesti tåydellisesti loppuun 1-10 tunnin kuluessa.

Mikali hydroksia suojaavana ryhmana kaytetaan tetrahydropyranyyliryhmaa, 20 tetrahydrofuranyyliryhmaa, niiden tioanalogeja, alkoksimetyyliryhmaå tai substituoitua etyyliryhmaa, niin se voidaan poistaa kasittelemalla yhdistetta hapolla liuottimessa. Esimerkkeina edullisista hapoista mainittakoon: kloorivetyhappo; etikkahapon ja rikkihapon valiset seokset; tai p-tolueenisulfonihapon ja etikkahapon valiset seokset. Reaktio 25 toteutetaan mieluiten liuottimen låsnaollessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, kuitenkin edellyttåen, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon. Sopivista liuottimista mainittakoon esimerkiksi: alkoholit, kuten metanoli tai etanoli; eetterit, kuten tetrahydrofuraani tai diok-saani; tai seokset, jotka sisåltavat vetta ja yhta tai useampaa nåista 30 orgaanisista liuottimista. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lampdtila-alueella, esimerkiksi 0-50°C:n lampotilassa. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijoistå, erityisesti låhtomateriaalien ja happojen luonteesta; kuitenkin edellå ehdotetuissa olosuhteissa riittåå tavallisesti ajanjakso, jonka pituus on 10 minuutis-35 ta 18 tuntiin.

58 90 427

Mikåli hydroksia suojaavana ryhmånå kåytetåån alkenyylioksikarbonyyli-ryhmåå, niin se voidaan poistaa kåsittelemållå yhdistettå emåksellå. Tåmå reaktio voidaan toteuttaa niisså samoissa olosuhteissa, joita kåytetåån poistettaessa sellaista hydroksia suojaavaa ryhmåå, joka on alifaattinen 5 asyyliryhmå, aromaattinen asyyliryhmå tai alkoksikarbonyyliryhma. Mikali hydroksia suojaava ryhmå on allyylioksikarbonyyliryhmå, niin se voidaan poistaa yksinkertaisesti kayttamallå palladiumia ja trifenyylifosfiinia tai nikkelitetrakarbonyyliå, ja taman reaktion etuna on se, etta sivu-reaktioita esiintyy erittain vahan.

10

Hydroksia suojaavien ryhmien poistamiseksi kuvattujen reaktioiden kanssa voidaan samanaikaisesti toteuttaa karboksia suojaavien ryhmien, merkaptoa suojaavien ryhmien ja aminoa suojaavien ryhmien eliminointi, kulloinkin nåiden ryhmien luonteen mukaisesti.

15

Naiden reaktioiden toteuttamisen jålkeen toivotut yhdisteet voidaan ottaa talteen reaktioseoksesta tavanomaisin keinoin, esimerkiksi puhdistamalla tuloksena oleva yhdiste uudestaan kiteyttamållå, preparatiivisella ohutkerroskromatografialla tai pylvåskromatografisesti.

20

Mikali merkaptoa suojaavana ryhmana kåytetåån alifaattista asyyliryhmaa tai aromaattista asyyliryhmaa, niin se voidaan poistaa kåsittelemålla yhdistettå emaksella. Tåsså reaktiossa kaytetaån niitå samoja reaktio-olosuhteita, joita kaytettiin poistettaessa hydroksia suojaavana ryhmana 25 kåytetty alifaattinen asyyliryhmå tai aromattinen asyyliryhmå. Reaktion kanssa samanaikaisesti voidaan toteuttaa karboksia suojaavan ryhmån, hydroksia suojaavan ryhmån tai aminoa suojaavan ryhmån eliminoiminen.

Reaktion toteuttamisen jålkeen toivotut yhdisteet voidaan toivottaessa 30 ottaa talteen reaktioseoksesta tavanomaisin keinoin, ja esimerkiksi puhdistaa uudestaan kiteyttåmållå, preparatiivisella ohutkerroskromatograf ialla tai pylvåskromatografisesti.

Mikåli aminoa suojaavana ryhmånå kåytetåån alifaattista asyyliryhmåå, 35 aromaattista asyyliryhmåå tai substituoitunutta metyleeniryhmåå, niin se voidaan poistaa kåsittelemållå yhdistettå emåksellå. Tåsså reaktiossa 59 90427 kåytetåån niitå samoja reagensseja ja reaktio-olosuhteita, joita kåy-tettiin poistettaessa hydroksia suojaavana ryhmånå kåytettyjå alifaat-tisia asyyliryhmiå ja aromaattisia asyyliryhmiå. Nå in olien, myds muita suojaavia ryhmiå voidaan poistaa samanaikaisesti.

5

Mikåli aminoa suojaavana ryhmånå kåytetåån trialkyylisilyyliryhmåå, niin se voidaan poistaa niillå samoilla reaktioilla, joita kåytettiin hydroksia suojaavana ryhmånå kåytetyn trialkyylisilyyliryhmån poistamiseen.

10 Nåiden aminoa suojaavien ryhmien poistamiseksi kåytetyn reaktion kanssa voidaan toteuttaa samanaikaisesti karboksia suojaavan ryhmån, hydroksia suojaavan ryhmån tai merkaptoa suojaavan ryhmån eliminointi. Reaktioiden toteuttamisen jålkeen toivotut yhdisteet voidaan tarvittaessa ottaa tal-teen reaktioseoksesta tavanomaisin keinoin, ja ne voidaan toivottaessa 15 puhdistaa kiteyttåmållå uudestaan preparatiivisellå ohutkerroskromato-grafialla tai pylvåskromatografisesti.

Se jårjestys, misså hydroksia suojaavat ryhmåt, karboksia suojaavat ryhmåt, aminoa suojaavat ryhmåt ja merkaptoa suojaavat ryhmåt poistetaan, 20 ei ole kriittinen ja nåiden ryhmien poistaminen voidaan toteuttaa misså jårjestyksesså tahansa, joko peråkkåin tai samanaikaisesti.

Vaihe 28 25 Tåsså vaiheessa kaavan (XXX) mukainen, vaiheessa 20 kuvatulla tavalla valmistettu J^-oksidi muunnetaan kaavan (XXXVIII) mukaiseksi polysykli-~ - seksi yhdisteeksi antamalla sen reagoida syanogeenihalogenidin, kuten syanogeenibromidin, kanssa. Tåmå reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen låsnåollessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, kuitenkin edel-30 lyttåen, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon, ja ettå se kykenee liuottamaan låhtomateriaaleja, våhintåån jossain måår in. Sopivista liuot-timista mainittakoon esimerkiksi: alemmat alkoholit, kuten metanoli tai etanoli. Reaktion låmpdtila ei ole erityisen kriittinen, vaikka taval-lisesti reaktio toteutetaankin mieluummin alueella -10 - +50°C olevissa 35 låmpotiloissa, mieluiten suurin piirtein huoneen låmpotilassa. Reaktioon tarvittava aika saattaa vaihdella huomattavasti, riippuen monista teki- so 90427 joistå, erityisesti reagenssien luonteesta seks reaktion låmpbtilasta; kuitenkin edellS ehdotetuissa olosuhteissa 1-10 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittåvå.

5 Vaihe 29 TSsså reaktiossa kaavan (XXXVIII) mukainen polysyklinen yhdiste muunne-taan kaavan (XXXIX) mukaiseksi i^-syano-t^-oksidiksi antamalla sen reagoi-da emåksisen yhdisteen kanssa liuottimessa. Kåytetyn liuottimen luonne ei 10 ole erityisen kriittinen, kuitenkin edellyttåen, ettei se vaikuta hai-tallisesti reaktioon, ja ettå se kykenee liuottamaan låhtomateriaaleja vShintSSn jossain måårin. Esimerkkeinå edullisista liuottimista mainit-takoon C^-C^-alkoholit, kuten metanoli tai etanoli. Kåytetyn emåksisen yhdisteen luonteelle ei aseteta mitåån erityisiå rajoituksia, vaikka 15 tavallisesti reaktiossa kåytetåånkin vaivattomimmin ammoniakkikaasulla kyllåstettyå liuotinta, mieluiten aimnoniakin metanoliliuosta. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla låmpbtila-alueella, esimerkiksi -10 - +50°C:n låmpbtilassa, mieluiten huoneen låmpbtilassa. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijoistå, erityisesti 20 låhtoaineiden, liuottimien ja emåksisten yhdisteiden luonteesta; kuitenkin edellå ehdotetuissa olosuhteissa 1-5 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittåvå.

Vaihe 30 25 Tåsså vaiheessa i^-oksidi (XXXIX) muunnetaan I^-alkoksi- tai N^aralkyyli -oksiyhdisteeksi (XL). Kåytetyt reaktiot ovat samat kuin edellå vaiheessa 21 kuvatut reaktiot, ja ne voidaan toteuttaa kåyttåen samoja reagenssej a ja reaktio-olosuhteita.

30

Vaihe 31 Tåsså vaiheessa kaavan (XL) mukainen, vaiheessa 30 kuvatulla tavalla val-mistettu yhdiste muunnetaan kaavan (XLI) mukaiseksi yhdisteeksi. Reaktio 35 toteutetaan mieluiten seuraavasti. Ensin kaavan (XL) mukaista yhdistettå kåsitellåån alkalilla liuottimessa, pH -arvon ollessa 12-13, jolloin sen 61 90427 pyrimidiinirengas saadaan avatuksi (ja jolloin sattumalta myos karboksia suojaavat ryhmflt saadaan poiscetuiksi). T&mfln jålkeen reaktioseoksen pH-arvo asetetaan arvoon 7,0 ja seosta kuumennetaan, jolloin saadaan jålleen muodostumaan rengas, mikå johtaa kaavan (XLI) mukaiseen yhdisteeseen, 5 jossa karboksiryhmat ovat suojaamattomat (ell jossa sekå R31 ja R32 tar-kolttavat vetyatomia). Alkalina tåmån reaktion ensimmaisesså valheessa kåytet&ån mielellåån eslmerklksl alkalimetalllhydroksldien, kuten nat-riumhydroksidln tai kallumhydroksidln, vesllluoksla. KSytetyn liuottiraen luonteelle ei aseteta mitåån erltyisia rajoltuksla, kultenkin edellytta-10 en, ettei se håirltse reaktlota, ja etta se kykenee liuottamaan lahtoma-teriaaleja, våhintaan jossaln måarln. Reaktiossa kaytetaan kuitenkin raieluiten vetta tal veden ja alemman alkohol in (kuten metanolin tai etanolin) vallsiå seoksia. Molemmat reaktiot voidaan toteuttaa laajalla lémpdtila-alueella, ja vallttu tåsmalllnen lSmpdtila ei ole erltyisen 15 kriittlnen. Renkaan avaamiseen tahtååvassa reaktiossa kåytetaån raieluiten suurin piirtein huoneen larapdtilaa, ja tassa lampdtilassa, pH-arvon ollessa noin 12, reaktio kuluu tåydellisesti loppuun tavallisesti 30-60 minuutissa. Renkaan muodostamiseen tahtååvå reaktio toteutetaan mieluiten 0-15°C:n låmpotilassa, ja tåsså låmpotilassa reaktio etenee tåydellisesti 20 loppuun yleensa 1-5 tunnin pituisessa ajassa.

Toivottaessa, nåiden reaktioiden jalkeen karboksia suojaavat ryhmat voidaan liittåå uudestaan vaiheessa 1 kuvatulla esterointireaktiolla.

25 Valhe 32

Tassa vaiheessa alkyyli- tai aralkyyliryhmå R30 poistetaan ja korvataan vetyatomilla. Tåmå reaktio on sama kuin vaiheessa 24 kuvattu reaktio, ja se voidaan toteuttaa naissa saraoissa reaktio-olosuhteissa, samoja rea-30 gensseja kåyttåen. Toivottaessa vaiheessa 23 kuvattu valinnainen toimen-. pide voidaan toteuttaa mydskin tuloksena olevalla yhdisteellå.

Vaihe 33 35 Tåsså vaiheessa toteutetaan renkaan aukeamiseen ja sen uudestaan muodos-tumiseen johtava reaktio, joka on vaiheessa 31 kuvatun reaktion kaltai- 62 90427 nen, mutta siinå karboksia suojaavat ryhmåt pysyvåt paikoillaan. Reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen låsnåollessa, jonka liuottimen luonne ei ole erityisen kriittinen, edellyttåen, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon ja ettå se kykenee liuottamaan låhtomateriaaleja vahintaån 5 jossain måårin. Liuotin on kuitenkin mieluiten sellaista, etta se kykenee pitamaan reaktloliuoksen pH-arvon alueella 6-8, ja nåin olien reaktiossa kåytetaan mieluummin puskurin, pH 6-8, ja alemman alkoholin (kuten meta-nolin tai etanolln) muodostamaa seosta, mieluiten puskurin, pH 7,0, ja metanolin muodostamaa seosta. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla låmpo-10 tila-alueella, esimerkiksi 30-150°C:n låmpotilassa. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijoistå, erityi-sesti reaktion låmpotilasta, pH-arvosta, sekå låhtoaineiden ja liuotti-mien luonteesta; kuitenkin edellå ehdotetuissa olosuhteissa 3-10 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittåvå. Toivottaessa, vaiheessa 23 15 kuvattu valinnainen toimenpide voidaan toteuttaa tuloksena olevalla yhdisteellå.

Vaihe 34 20 Tåsså vaiheessa alkoksi- tai aralkyylioksiryhmå -OR30 korvataan vety-atomilla. Kåytetyt reaktiot ovat vaiheessa 23 kuvattujen reaktioiden kaltaisia, ja ne voidaan toteuttaa samoja reagensseja kåyttåen, samoissa reaktio-olosuhteissa, jolloin saadaan toivottu kaavan (XLIV) mukainen yhdiste. Toivottaessa, vaiheessa 23 kuvattu valinnainen toimenpide 25 voidaan toteuttaa tuloksena olevalla yhdisteellå.

Vaihe 35 Tåsså vaiheessa, mikåli kaavan (XLI) mukaisen yhdisteen karboksiryhmåt 30 ovat vapaat (eli R31 ja R32 tarkoittavat vetyatomia), niin ne voidaan suojata vaiheessa 1 kuvatun kaltaisilla reaktioilla. Erityisesti on edullista, ettå karboksiryhmien suojaamiseksi yhdisteeseen liitetåån bentshydryyliryhmiå antamalla yhdisteen reagoida difenyylidiatsometaanin kanssa. Tåsså reaktiossa kåytetyisså olosuhteissa suojaava ryhmå, kuten 35 bentshydryyliryhmå, voidaan myos liittåå 6-aminoryhmåån, jolloin saadaan kaavan (XLVI) mukainen yhdiste.

63 90427

Reaktio toteutetaan mieluiten liuottimessa, joka on veden ja veteen sekoittuvan orgaanisen liuottimen, kuten asetonin, seos, jonka pH on 1-2. Reaktlo toteutetaan mieluiten huoneen låmpdtilassa, ja se vaatii tavalli-sesti 1-10 tunnin pituisen ajan.

5

Vaihe 36 Tåsså vaiheessa alkoksi- tai aralkyylioksiryhmd -OR30 poistetaan; reaktio ja kåytetyt reaktio-olosuhteet ovat vaiheen 23 yhteydesså kuvatun kaltai-10 set. Toivottaessa vaiheessa 23 kuvattu valinnainen toimenpide voidaan toteuttaa tuloksena olevalla yhdisteellå.

Vaihe 37 15 Tåsså vaiheessa kaavan (XLIV) mukainen, vaiheessa 34 tai 36 kuvatulla tavalla valmistettu yhdiste muunnetaan monohydroksiyhdisteeksi (XLVIII) tai kaavan (XLIX) mukaiseksi dihydroksiyhdisteeksi antamalla sen reagoida nitriitin kanssa, esimerkiksi vaiheessa 1 kuvatulla tavalla. Toivottaessa vaiheessa 23 kuvattu valinnainen toimenpide voidaan toteuttaa tuloksena 20 olevalla yhdisteellå.

Vaihe 38 TAsså vaiheessa kaavan (XLVIII) mukaisen yhdisteen 6-aminoryhmå muunne-25 taan halogeeniatomiksi antamalla yhdisteen reagoida nitriitin kanssa '. halogeenivetyhapossa tai halogeeniboorihapossa, vaiheessa 1 kuvatulla tavalla. Edullisia halogeenivetyhappoja ovat esimerkiksi jodivetyhappo, bromivetyhappo tai kloorivetyhappo. Edullinen halogeeniboorihappo on esimerkiksi fluoriboorihappo. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla låmpo-30 tila-alueella, esimerkiksi -30 - +50°C:n låmpotilassa. Reaktioon tar-vittava aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijoistå, kuten låhtdmateriaalien luonteesta ja reaktion låmpotilasta; kuitenkin 1-20 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittåvå. Toivottaessa, vaiheessa 23 kuvattu valinnainen toimenpide voidaan toteuttaa tuloksena 35 olevalla yhdisteellå.

Vaihe 39 64 90 427 Tåsså vaiheessa puriiniemåksen 6-asemaan liitetåån ryhmå R35 (eli kaavan -OR9, -NR^R11 tai -SR9 mukainen ryhmå). Tarpeellinen reaktio on vaiheessa 5 27 kuvatun reaktion kaltainen, jolloin toivottaessa rayos vaiheessa 27 kuvatut valinnaisetkin reaktiot toteutetaan.

Vaihe 40 10 Tåsså vaiheessa 2-aminoryhmåån liitetåån kaksi R36-ryhmåå ja 2'-hydroksi-ryhmaån liitetåån ryhmå R37 kåyttåen jåljempånå vaiheessa 49 kuvattujen reaktioiden kaltaisia reaktioita, jolloin saadaan kaavan (LII) mukainen yhdiste.

15 Vaiheet 41-43 Nåisså vaiheissa: ensinnåkin, yksi edellisesså vaiheessa liitetyista ryhmistå R36 poistetaan ja ryhmå R33a poistetaan N6-asemasta; tåsså vaiheessa 2'-hydroksia suojaava ryhmå ja/tai 7'-hydroksia suojaava ryhmå 20 ja/tai karboksia suojaava ryhmå voi poistua. Toivottaessa karboksiryhmå voidaan suojata vaiheessa 1 kuvatulla tavalla, kun taas hydroksiryhmåt voidaan suojata vaiheessa 40 kuvatulla tavalla. Seuraavaksi toteutetaan: alkoksi- tai aralkyylioksiryhmån -OR30 poistaminen N6-asemasta; ja 6-aminoryhmån muuntaminen 6-hydroksiryhmåksi. Nåmå reaktiot voidaan toteut-25 taa edellå kuvatusti kåyttåen samoja reaktioita ja reaktio-olosuhteita.

Vaihe 44 Tåsså vaiheessa poistetaan kaikki suojaavat ryhmåt, esimerkiksi vaiheessa 30 27 kuvatulla tavalla.

Vaihe 45 Tåsså vaiheessa kaavan (XLIII) mukaisen, vaiheessa 33 kuvatulla tavalla 35 valmistetun yhdisteen annetaan reagoida dimetyyliformamidin asetaalin, tai aldehydin, kuten bentsaldehydin, kanssa, sekå orgaanisen emåksen 65 9 0 4 2 7 (kuten trietyyliamlinin) kanssa 2-asemassa olevan aminoryhmån suojaami-seksi substituoituneella metyleeniryhmfillå, kuten N,N-dimetyyliamino-metyleenillå, bentsylideenillå, p-metoksibentsylideenillå, p-nitrobentsy-lideenillå, salisylideenillå, 5-kloorisalisylideenillå, difenyylimety-5 leenillå tai (5-kloori-2-hydroksifenyyli)fenyylimetyleenillå. Reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen låsnåollessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, edellyttåen, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon, ja ettå se kykenee liuottamaan låhtdmateriaaleja, vShintåån jossain måårin. Sopivia liuottimia ovat happamat amidit, kuten dimetyyliformamidi tai 10 dimetyyliasetamidi. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla låmpbtila-alueel-la, vaikka yleenså reaktio voidaankin toteuttaa vaivattomasti huoneen låmpotilassa. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijdista, erityisesti reagenssien luonteesta ja reaktion låmpbtilasta; kuitenkin edellå ehdotetuissa låmpotiloissa 15 riittåa tavallisesti ajanjakso, jonka pituus on 15 minuutista 5 tuntiin.

Vaihe 46 Tåsså vaiheessa alkoksi- tai aralkyylioksiryhmå -OR30 poistetaan vaiheessa 20 23 kuvatun kaltaisella toimenpiteella, jolloin saadaan kaavan (LVIII) mukainen yhdiste.

Vaihe 47 25 T&sså. vaiheessa 6-aminoryhmå muunnetaan hydroksiryhmåksi antamalla .. . yhdisteen reagoida nitriitin kanssa vaiheessa 1 kuvatun vastaavan toimen- piteen kaltaisesti, jolloin saadaan kaavan (LIX) mukainen yhdiste.

Vaihe 48 V 30 Tåssd vaiheessa puriiniemåksessd olevaa 2-aminoryhmåå suojaava substitu-oitunut metyleeniryhmd poistetaan yhdessa molempien karboksia suojaavien ryhmien R31 ja R32 kanssa analogisesti vaiheessa 27 valinnaisten toimen-piteiden yhteydesså kuvattujen menetelmien kanssa, jolloin saadaan kaavan 35 (LVI) mukainen yhdiste.

66 9 0 4 2 7

Vaihe 49 T&sså vaiheessa kaavan (XLIII) mukainen yhdiste muunnetaan kaavan (LXI) mukaiseksi yhdisteeksi suojaamalla typpiatomi puriiniemåksen 6-asemassa 5 sekå sokeriryhmåsså oleva hydroksiryhmå edella mååritetyillå suojaavilla ryhmillå. T&raå voidaan toteuttaa asyloimalla, esimerkiksi antamalla yhdisteen (XLIII) reagoida asyloivan aineen kanssa, joista mainittakoon: asyylihalogenidi, kuten aromaattinen asyylihalogenidi (esimerkiksi bent-syylikloridi) tai alempi alifaattinen asyylihalogenidi (kuten asetyyli-10 bromidi tai propionyylikloridi); tai happoanhydridi, esimerkiksi aromaat-tisen hapon anhydridi (kuten bentsoehapon anhydridi) tai alemman ali-faattisen hapon anhydridi (kuten etikkahapon anhydridi tai propionihapon anhydridi). Reaktio voidaan toteuttaa laajalla låmpotila-alueella, esimerkiksi -30 - +100°C:n låmpotilassa. Reaktioon tarvittava aika voi 15 vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijoistå, erityisesti asyloivan aineen luonteesta ja reaktion låmpotilasta; kuitenkin edellå mainituissa olosuhteissa riittåå tavallisesti ajanjakso, jonka pituus on 30 minuutista 50 tuntiin.

20 Vaihe 50 Tåss& vaiheessa kaavan (LXI) mukainen, vaiheessa 49 kuvatulla tavalla valmistettu suojattu yhdiste muunnetaan kaavan (LXII) mukaiseksi yhdisteeksi analogisesti vaiheen 23 varsinaisen toimenpiteen kanssa, ja 25 toivottaessa analogisesti vaiheessa 27 kuvattujen valinnaisten toimenpi-teiden kanssa.

" Vaihe 51 30 Tåsså vaiheessa kaavan (LXII) mukainen yhdiste muunnetaan kaavan (LXIII) mukaiseksi yhdisteeksi vaiheessa 37 kuvatulla menetelmållå, ja toivottaessa vaiheessa 27 kuvatuilla valinnaisilla toimenpiteilla.

35 67 90427

Vaih« S? Tåsså vaiheessa kaavan (LXIII) mukainen, vaiheessa 51 kuvatulla tavalla valmlstettu yhdiste muunnetaan kaavan (XLVIII) mukaiseksi yhdisteeksi 5 poistamalla suojaavat ryhmåt puriiniemåksesså olevasta 6-aminoryhmåstå sekå sokeriryhmåsså olevasta 2'-hydroksiryhmåstå vaiheessa 27 kuvattuja valinnaisia menetelmiå kåyttåen. Nåisså olosuhteissa voidaan polstaa samanalkaisesti karboksla suojaavat ryhmåt.

10 Valhe 53 Tåsså vaiheessa kaavan (LV) mukainen, vaiheessa 43 kuvatulla tavalla valmlstettu yhdiste muunnetaan kaavan (LXIV) mukaiseksi yhdisteeksi, joka kåsittåå ryhmån X puriiniemåksen 6-asemassa, kåyttåen vaiheen 27 toisen 15 toimenpiteen yhteydesså kuvatun kaltaista menetelmåå, ja toivottaessa kåyttåen vaiheen 27 valinnaisia menetelmiå.

Valhe 54 20 Tåsså vaiheessa puriiniemåksen 6-asemassa oleva ryhmå X korvataan ryhmål-lå R35 kåyttåen vaiheessa 39 kuvatun kaltaista menetelmåå, ja toivottaessa vaiheen 27 valinnaisia menetelmiå.

Valhe 55 .. 25 Tåsså vaiheessa, kaavan (XLIV) mukainen yhdiste, joka on voitu valmistaa vaiheessa 34 tai 36 kuvatulla tavalla, muunnetaan monohalogeeni- tai dihalogeeniyhdisteeksi (LXVI) tai (LXVII), vastaavasti, vaiheessa 38 kuvatun kaltaisilla menetelmillå, ja toivottaessa vaiheessa 23 kuvatun 30 kaltaisilla valinnaisilla menetelmillå.

Vaihe 56 Tåsså vaiheessa dihalogeeniyhdiste (LXVII) muunnetaan kaavan (LXIX) 35 mukaiseksi yhdisteeksi vaiheessa 39 kuvatun kaltaisella menetelmållå, ja toivottaessa vaiheessa 27 kuvatun kaltalsilla valinnaisilla toimenpiteil- lfi.

68 9 0 4 2 7

Vaihe 57 5 Tåsså vaiheessa asyloidaan pelkåståån hydroksiryhmå kaavan (LXX) mukaisen griseoliinihappojohdannaisen sokeriosan 2'-asemassa, joka johdannainen on voitu valmistaa milla tahansa edellå kuvatulla menetelmållå. Asyloiminen voidaan toteuttaa joko: 10 (i) lisååmållå hitaasti emåstå (kuten natriumhydroksidia) griseoliiniha-pon johdannaiseen (LXX), mitå seuraa asyloivan aineen (joka voi olla mitå tahansa edellå esitettyjen asylointivaiheiden yhteydesså kuvattua asyloi-vaa ainetta, kuitenkin mieluiten aromaattista asyylihalogenidia, kuten 15 bentsoyylikloridia) lisååminen reaktioliuokseen, pitåen sen pH-arvo alueella 10-13; tai (ii) liuottamalla griseoliinihapon johdannainen (LXX) puskuriliuokseen, jonka pH on 10-13; jonka jålkeen siihen lisåtåån asyloivaa ainetta.

20

Reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen låsnåollessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, edellyttåen, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon, ja ettå se kykenee liuottamaan reagenssej a våhintåån jossain måårin. Mieluiten kåytetåån seosta, joka sisåltåå vettå ja veteen sekoit-25 tuvaa liuotinta (erityisesti esteriå, kuten etyyliasetaattia). Reaktio voidaan toteuttaa laajalla låmpotila-alueella, esimerkiksi -20 - +50°C:n låmpdtilassa. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijdistå, erityisesti reagenssien luonteesta; kuitenkin 1-10 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittåvå.

30

Vaihe 58 Tåsså vaiheessa kaavan (LXXI) mukaisen griseoliinihapon johdannaisen (valmistettu vaiheessa 57 kuvatulla tavalla) vapaat karboksiryhmåt 35 suojataan vaiheessa 1 kuvatun esterdintireaktion kaltaisella menetelmållå.

Vaihe 59 69 90427 Tåsså vaiheessa kaavan (LXXII) mukainen, vaiheessa 58 kuvatulla tavalla valmlstettu yhdiste muunnetaan kaavan (LXXIII) mukaiseksi yhdisteeksi 5 sulfonyloimalla. Reaktio toteuteCaan antamalla kaavan (LXXII) mukaisen yhdisteen reagoida alemman alkyylisulfonyylihalogenidin (kuten metaani-sulfonyylikloridin), aryylisulfonyylihalogenidin (kuten p-tolueenisul-fonyylikloridin) tai fluoratun alemman alkyylisulfonyylihalogenidin (kuten trifluorimetaanisulfonyylikloridin) kanssa, happoa sitovan aineen, 10 kuten pyridiinin tai dimetyyliaminopyridiinin, låsnåollessa. Reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen låsnåollessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, edellyttåen, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon. Sopivia liuottimia ovat esimerkiksi: halogenoidut hiilivedyt, erityisesti halogenoidut alifaattiset hiilivedyt, kuten metyleenikloridi tai kloro-15 formi. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla låmpotila-alueella, vaikka tavallisesti reaktio toteutetaankin mieluiten alhaisessa låmpotilassa, esimerkiksi -10°C:sta huoneen låmpotilaan olevassa låmpotilassa. Reaktion vaatima aika voi vaihdella, riippuen monista tekijoista, erityisesti reagenssien luonteesta ja reaktion låmpotilasta; kuitenkin 1-20 tunnin 20 pituinen ajanjakso on tavallisesti riittåvå.

Vaihe 60 Tåsså vaiheessa kaavan (LXXIII) mukaisen yhdisteen 7'-asemassa oleva 25 sulfonyylioksiryhmå korvataan halogeeniatomilla (antamalla yhdisteen reagoida vedettdmån litiumhalogenidin kanssa happamassa amidissa, kuten dimetyyliformamidissa) ja/tai vetyatomilla (pelkiståmållå yhdiste kåyttå-en sinkkiå ja etikkahapon vesiliuosta, vaiheessa 5 kuvatulla tavalla). Ensin mainittu reaktio toteutetaan mieluiten liuottimen låsnåollessa, 30 jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, edellyttåen, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon. Sopivia liuottimia ovat sellaiset polaariset liuottimet, kuten dimetyyliformamidi, dimetyylisulfoksidi, trietyylifos-faatti tai heksametyylifosforitriamidi. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla låmpotila-alueella, esimerkiksi 0-150°C:n låmpotilassa. Reaktioon 35 tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijoista, mutta tavallisesti 1-10 tunnin pituinen ajanjakso on riittåvå.

Vaihe 61 70 . 90427 Tåsså vaiheessa kaavan (LXXIV) mukaisesta yhdisteesta poistetaan suojaa-vat ryhmåt menetelmillå, jotka ovat asianmukaiset suojaavien ryhmien 5 luonnetta ajatellen. Mikåli, esimerkiksi, pyranyyliryhmåå kåytetåån hydroksia suojaavana ryhmånå, niin se voldaan poistaa kåsittelemallå yhdistetta hapolla, kuten etikkahapolla tai p-tolueenisulfonihapolla, mieluiten pyridiini-E.-tolueenisulfonaatilla, liuotinseoksessa, joka kåsittåå alempaa alkanolia (kuten etanolia) sekå halogenoitua hiilivetyå 10 (kuten metyleeniklorldia). Mikåli hydroksia suojaavana ryhmånå kåytetåån trialkyylisilyyliryhmåå, niin se voidaan poistaa kåsittelemallå fluo~ rianioneja muodostavalla yhdisteellå, kuten tetrabutyyliammoniumfluori-dilla, eetterin (kuten tetrahydrofuraanin) toimiessa liuottimena. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla låmpotila-alueella, esimerkiksi låmpotilassa, 15 joka on huoneen låmpdtilasta 100°C:een. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijoistå, mutta tavallisesti 5-20 tunnin pituinen ajanjakso on riittåvå. Karboksia suojaavat ryhmåt ja/tai muut hydroksia suojaavat ryhmåt voidaan poistaa vaiheessa 27 kuvatulla tavalla.

20

Vaihe 62 Tåsså vaiheessa kaavan (LXXII) mukaisen yhdisteen (valmistettu vaiheessa 58 kuvatusti) 7'-asemassa oleva hydroksiryhmå suojataan kåyttåen lukuisia 25 menetelmiå aina sen mukaan, mikå erityinen suojaava ryhmå halutaan liittåå. Mikåli ryhmå halutaan suojata pyranyyliryhmållå, niin tålloin yhdisteen (LXXII) annetaan reagoida sopivan pyraanijohdannaisen kanssa, esimerkiksi 3,4-dihydro-a-pyraanin kanssa, happaman katalyytin, kuten kloorivetyhapon, låsnåollessa. Mikåli ryhmå on tarkoitus suojata alemmal-30 la trialkyylisilyyliryhmållå, niin tålloin yhdisteen (LXXII) annetaan reagoida trialkyylisilyylihalogenidin, kuten dimetyyli-t-butyylisilyyli-kloridin, sekå imidatsolin kanssa. Nåmå reaktiot toteutetaan mieluiten liuottimen låsnåollessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, edellyttaen, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon. Sopivia liuottimia 35 ovat esimerkiksi: halogenoidut hiilivedyt, erityisesti halogenoidut alifaattiset hiilivedyt, kuten kloroformi; esterit, kuten etyyliasetaat- 7i 90427 ti; eetterit, kuten dioksaani; sekå happamat amidit, kuten dimetyylifor-mamidi. Reaktiot voidaan toteuttaa laajalla låmpotila-alueella, ja erityisesti valittu låmpdtila ei ole kriittinen keksinnolle. Reaktio toteutetaan tavallisesti mieluiten suurin piirtein huoneen låmpotilassa. 5 Reaktioon tarvittava aika vaihtelee huomattavasti, riippuen monista tekijdistå, erityisesti reagenssien ja liuottimien luonteesta ja reaktion låmpdtilasta; kuitenkin, edellå ehdotetuissa olosuhteissa, 1-30 tunnin pituinen ajanjakso on tavallisesti riittåvå.

10 Valhe 63

Tfisså vaiheessa 2'-hydroksiryhmå tehdfifin suojaamattomaksi poistamalla asyyli- tai silyyliryhmd R50 kaavan (LXXVI) mukaisesta yhdisteestå, jolloin saadaan kaavan (LXXVII) mukainen yhdiste. Reaktio toteutetaan 15 mieluiten siten, etta suojattu yhdiste saatetaan kosketuksiin alkali-metallihydroksidin vesiliuoksen, kuten natriumhydroksidin 1 N vesiliuok-sen, kanssa tai ammoniakin 20 % v/v metanoliliuoksen kanssa. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla låmpotila-alueella, esimerkiksi -20 - +50°C:n låmpotilassa. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, 20 riippuen monista tekijoistå, erityisesti reagenssien luonteesta ja reaktion låmpotilasta. Kuitenkin, edellå ehdotetuissa olosuhteissa riittåå tavallisesti ajanjakso, jonka pituus on 10 minuutista 3 tuntiin.

Vaihe 64 ... 25 Tåsså vaiheessa kaavan (LXXVII) mukainen yhdiste sulfonyloidaan analogisesti vaiheessa 59 kuvatun menetelmån kanssa, ja reaktio voidaan toteuttaa samoissa reaktio-olosuhteissa ja samoja reagensseja kåyttåen, jolloin saadaan kaavan (LXXVIII) mukainen yhdiste.

30

Vaihe 65 Tåsså vaiheessa sulfonyylioksiryhmå kaavan (LXXVIII) mukaisen yhdisteen 2'-asemassa korvataan halogeeniatomilla tai vetyatomilla. Kåytettåvåt 35 reaktiot ovat vaiheessa 60 kuvattujen reaktioiden kaltaisia, ja ne voidaan toteuttaa samoja reagensseja kåyttåen, samoissa reaktio-olosuh- teissa.

72 9 0 4 2 7

Vaihe 66 5 Tåsså vaiheessa kaavan (LXXIX) mukainen, vaiheessa 65 valmistettu yhdiste tehdåån suojaamattomaksi, jolloin saadaan kaavan (LXXX) mukainen yhdiste. Tarvittavat reaktiot ovat vaiheessa 61 kuvattujen reaktioiden kaltaisia, ja ne voidaan toteuttaa kåyttåen samoja reagensseja, samoissa reaktio-10 olosuhteissa.

Koska jokaiseen vaiheiden 60 ja 65 substitutioreaktioon liittyy Walden:in inversio, niin nåistå reaktioista saadaan yhdiste, jonka steerinen kon-figuraatio on kåånteinen alkuperåiseen yhdisteeseen verrattuna. Yhdistei-15 tå, joiden konfiguraatio on kåånteinen edellå saadun yhdisteen konfigu-raatioon verrattuna (eli joilla on luonnossa esiintyvå konfiguraatio), voidaan valmistaa toivottaessa seuraavasti: vaiheen 60 tai vaiheen 65 toimenpiteesså låhtbmateriaaliin liitetåån ryhmåksi R52 alempi alkanoyy-lioksiryhmå; sitten tåmå alempi alkanoyylioksiryhmå poistetaan vaiheessa 20 61 kuvatulla menetelmållå; ja tåmån jålkeen tuloksena oleva yhdiste kåsi- tellåån jålleen vaiheen 59 toimenpidesarjalla tai vaiheen 64 toimenpide-sarjalla, vastaavasti.

Vaihe 67 25

Vaiheen 67 ensimmåisesså osassa kaavan (LXXXI) mukainen griseoliinihappo tai sen johdannainen alkyloidaan tai aralkyloidaan alkyloivalla tai aral-kyloivalla aineella inertisså liuottimessa. Liuottimen luonne ei ole erityisen kriittinen, edellyttåen, ettei se vaikuta haitallisesti reak-30 tioon. Esimerkkeinå sopivista liuottimista mainittakoon: alkoholit, kuten metanoli, etanoli, isopropanoli, butanoli, ja t-butanoli; eetterit, kuten dietyylieetteri, tetrahydrofuraani, dioksaani tai etyleeniglykolin dimetyylieetteri; nitriilit, kuten asetonitriili; amidit, kuten dimetyy-liformamidi, dimetyyliasetamidi tai heksametyylifosforitriamidi; sokå 35 sulfoksidit, kuten dimetyylisulfoksidi. Liuottimena kåytetåån mieluiten amideja tai sulfoksideja.

73 9 0 4 2 7

Reaktio voidaan toteuttaa laajalla låmpotila-alueella, mutta se toteute-taan kuitenkin mieluummin 0-100°C:n låmpotilassa, mieluiten låmpdtilassa, joka on huoneen låmpdtilasta 70°C:een.

5 Reaktioon tarvittava aika vol vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijdistå, eritylsesti reaktion låmpdtilasta ja kåytetyn liuottimen ja reagenssien luonteesta. Yleenså riittaa ajanjakso, jonka pituus on 30 minuutista 10 vuorokauteen. Mikåli reaktio toteutetaan esimerkiksi huoneen låmpdtilassa, niin se kuluu yleensa tåydellisesti loppuun 1-7 10 vuorokaudessa; toisaalta 70°C:n låmpdtilassa se kuluu tavallisesti loppuun 1-20 tunnissa.

Tåten saatu vålituote voidaan ottaa talteen reaktioseoksesta haihdutta-malla liuotin alennetussa paineessa, jonka jalkeen valituotetta voidaan 15 kåyttåå vaiheen seuraavassa osassa s ita enempaa puhdistamatta, samassa reaktioastiassa. Vaihtoehtoisesti, toivottaessa tamå vålituote voidaan eristaa tavanomaisilla menetelmillå, ennenkuin sita kåytetaan vaiheen seuraavassa osassa.

20 Vaiheen 67 toisessa osassa vålituotteena toimivan yhdisteen rengas avataan, toisiinnetaan (jårjestellåån uudestaan) ja se suljetaan uudes-taan, tåman reaktion kohdistuessa pyrimidiinirenkaaseen ja vapaaseen aminoryhmåån.

25 Tåsså vaiheessa alkylointi- tai aralkylointireaktiossa saatu jåånnos liuotetaan tai suspentoidaan sopivaan liuottimeen, ja tuloksena olevan liuoksen tai suspension pH pidetåån arvossa, joka on våhintåån 4, tai asetetaan tållaiseen arvoon, jolloin mainitut renkaan avaamisreaktiot, toisiintumisreaktio ja renkaan sulkemisreaktio saadaan toteutetuksi. 30 Nåisså reaktioissa kåytetty pH-arvo on mielellåån våhintåån 5 ja edelleen mieluiten våhintåån 7.

pH saadaan pidetyksi valitussa arvossa esimerkiksi (1) toteuttamalla reaktiot puskuriliuoksessa, jonka pH on asetettu edeltåkåsin asianmukai-35 seen arvoon, tai (2) seisottamalla tai kuumentamalla jåånnostå ylimåårås-så alkalimetalli- tai maa-alkalimetallihydroksidin vesiliuosta tai lluosta, joka kåsittåå orgaanista emåstå vedesså tai sopivassa orgaani- sessa liuottimessa.

74 90 427 Kåytetyn puskuriliuoksen luonteelle ei aseteta mitåån erityisiå rajoituk-5 sia, edellyttåen, ettå se kykenee yllåpitåmåån asianmukaisen pH-arvon koko reaktion ajan. Mitå tahansa tavanomaista puskuriliuosta, esimerkiksi asetaatti-, fosfaatti-, boraatti-, ammoniumbikarbonaatti-, ftalaatti- tai sitraattipuskuria, voidaan kåyttåå.

10 Esimerkkeinå sopivista alkalimetallien ja maa-alkalimetallien hydroksi-deista, joita voidaan kåyttåå vesiliuoksessa, mainittakoon natriumhydrok-sidi, kaliumhydroksidi, litiumhydroksidi sekå kalsiumhydroksidi. Esimerkkeinå sopivista orgaanisista emåksistå mainittakoon alemmat alkyylial-miinit, kuten monometyyliamiini, dimetyyliamiini tai trimetyyliamiini.

15

Yleenså reaktioliuoksen pH pidetåån arvossa, joka on mielellåån alueella 4-12, vaikka korkeampiakin pH-arvoja voidaan kåyttåå.

Tåsså reaktiossa kåytetyn liuottimen luonteelle ei aseteta mitåån rajoi-20 tuksia, edellyttåen, ettei se håiritse reaktioita. Sopivia liuottimia ovat esimerkiksi: vesi; alkoholit, kuten metanoli, etanoli tai propanoli; sekå muut veteen liukenevat liuottimet, kuten asetoni, tetrahydrofuraani, dioksaani, dimetyyliformamidi tai dimetyylisulfoksidi. Reaktiossa voidaan kåyttåå pelkåståån yhtå tållaista liuotinta, tai seosta, joka muodostuu 25 kahdesta tai useammasta tållaisesta liuottimesta. Joissakin tapauksissa orgaaninen emås voi toimia reaktion liuottimena.

Reaktio voidaan toteuttaa laajalla låmpotila-alueella, esimerkiksi 0-150°C:n låmpotilassa, mieluummin 20-100°C:n låmpotilassa. Valittu låmpo-30 tila voi riippua monista tekijdistå. Esimerkiksi låmmittåminen voi olla edullista, kun reaktio toteutetaan alueella 4-10 olevassa pH-arvossa; toisaalta, reaktio etenee tavallisesti tyydyttåvållå tavalla ympåriston låmpotilassa, kun pH on 10 tai sen ylåpuolella.

35 Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella huomattavasti, riippuen monista tekijoistå, erityisesti substraattien luonteesta, reaktion låmpotilasta 75 90427 ja pH-arvosta, sekå puskurin tai muun kåytetyn våliaineen luonteesta, erityisesti låmpdtilasta ja pH-arvosta; kuitenkin edellå mainituissa edullisissa olosuhteissa riittåå tavallisesti ajanjakso, jonka pituus on 5 minuutista 50 tuntiin. Tåmån jålkeen, toivottaessa, voidaan toteuttaa 5 vaiheen 27 valinnaiset toimenpiteet.

Sen jålkeen, kun mikå tahansa edellå mainittu reaktio on edennyt loppuun, niin kunkin vaiheen toivottu tuote voidaan erottaa reaktioseoksesta tavanomaisin keinoin. Esimerkiksi, reaktioseos peståån tarvittaessa 10 vedellå, jonka jålkeen liuotin erotetaan tislaamalla alennetussa painees-sa. Jåånnos voidaan puhdistaa monella eri tavalla, kuten kitetyttåmållå uudestaan, tai kåyttåen erilaisia kromatografisia menetelmiå, kuten pylvåskromatografiaa tai preparatiivista ohutkerroskromatografiaa, jolloin saadaan toivottu yhdiste.

15 Tåmån keksinnon mukaisista yhdisteistå valmistettavien lååkeaineiden valmistamista ja keksinnon mukaista yhdisteiden valmistusta havainnollis-tetaan seuraavissa esimerkeisså. Tiettyjen låhtoaineiden valmistamista havainnollistetaan esimerkkien jålkeen esitetyisså valmistuksissa.

20

Seuraava ketju voidaan mainita esimerkkinå, jossa keksinnon mukainen yhdiste (XL) toimii vålituotteena: Esimerkki 16 (XL) -> Esimerkki 18 -> Esimerkki 23 -> Esimerkki 25 -> Esimerkki 27 -> Esimerkki 27 -> Esimerkki 28 -> Esimerkki 30.

25 ESIMERKKI 1 1 (a) Dimetvvll-l·,-deadeniino-l, fl-asetoksi-4'.5'-dihvdro-02'.07*-diase-tvvligriseolaatti 30 2 ml våkevåå rikkihappoa lisåtåån liuokseen, joka kåsittåå 500 mg dime-tyyli-6-desamino-6-hydroksi-4' β ,5'-dihydro-02' ,07'-diasetyyli -griseolaattia (valmistettu valmistuksessa 6 esitetyllå tavalla) 100 millilitrassa etikkahapon ja etikkahapon anhydridin 4:1 (v/v) seosta, ja 35 tåmån seoksen annettiin seistå huoneen låmpfitilassa 14 tuntia typpi-ilmakehåsså. Reaktioseokseen lisåttiin 15 g natriumasetaattia, ja liuotin 76 90 427 haihdutettiin pols alennetussa paineessa. J&ånnos liuotettiin natriumbi-karbonaatin kyllåiseen vesiliuokseen, ja tårna liuos uutettiin kolmasti metyleenlkloridilla. Metyleenikloridiuutteet yhdistettiin ja kuivattiin vedettbmållå magnesiumsulfaatilla. Taman jålkeen liuotin haihdutettiin 5 alennetussa paineessa. Jåånnos puhdistettiin kromatografisesti silikagee-likolonnia kayttåen, jolloin kolonnia eluoitiin sykloheksaanin ja etyy-liasetaatin 2:1 (v/v) seoksella. Kun liuotin haihdutettiin toisena eluoituvasta fraktiosta, niin talldin saatiin 292 mg otsikon mukaista yhdistettå.

10

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13) S ppm: 2,44 [IH, dublettien dubletti, J - 6,4 & 14,7 Hz]; 2,65 [IH, dublettien dubletti, J - 14,7 & 3,0 Hz]; 15 4,98 [IH, dublettien dubletti, J — 2,5 & 6,4 Hz]; 5,02 [IH, dublettien dubletti, J - 2,9 & 4,0 Hz]; 5,15 [IH, dublettien dubletti, J - 4,0 & 2,5 Hz]; 5,72 [IH, singletti]; 6,29 [IH, dubletti, J - 2,9 Hz], 20

Massaspektri (m/e): 474 (M+43).

Massaspektri nopeilla atomeilla pommittaen (m/e): 431 (M+) .

25 Kb) Dimetwli-K -deadeniino-l'a-asetoksi^* . 5' -dihvdro-O2' .O7' -diasetvv-‘ ligriseolaatti

Esimerkisså 1(a) mainitussa pylvSskromatografisessa kåsittelysså ensim-måisenå erottunut fraktio våkevoitiin haihduttamalla alennetussa painees-30 sa, jolloin saatiin 33 mg otsikon mukaista yhdistettå.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13) S ppm: 2,67 [IH, dublettien dubletti, J - 7,4 & 15,1 Hz]; 35 2,98 [IH, dublettien dubletti, J - 15,1 & 2,9 Hz]; 4,94-4,99 [2H, multipletti]; 90427 5.05- 5,07 [IH, multipletti]; 5,61 [IH, singletti]; 6,38 [IH, dubletti, J - 4,9 Hz], 5 Massaspektri (m/e): 474 (M+43).

Massaspektri nopeilla atomeilla ponunittaen (m/e): 431 (M+).

lCc) Dimetwli-l* -deadeniino-l,θ-asetoksi-4, .5' -dihvdro-02' .07'-dibent-10 sowligriseolaatti 2 ml vakevåå rikkihappoa lisattiin jaissa jaahdytettyyn liuokseen, joka kåsitti 400 mg dimetyyli-6-desamino-6-hydroksi-4',5'-dihydro-02’,07’-dibentsoyyligriseolaattia (valmistettu valmistuksissa 1-3, 5 ja 7 kuvatun 15 kaltaisella menetelmallå, mutta kayttåen bentsoyylikloridia asetanhydri-din sijasta valmistuksessa 2) liuotettuna 80 millilitraan etikkahapon ja asetanhydridin 4:1 (v/v) seosta, ja tamån seoksen annettiin seista huoneen låmpotilassa 14 tuntia. Taman jalkeen reaktioseos sekoitettiin 15 grammaan natriumasetaattia ja vakevoitiin haihduttamalla alennetussa 20 paineessa. Jåånnds liuotettiin metyleenikloridin ja natriumbikarbonaatin kyllaisen vesiliuoksen muodostamaan seokseen, ja uutettiin kolmasti metyleenikloridilla. Metyleenikloridiuutteet yhdistettiin ja kuivattiin vedettdmalla magnesiumsulfaatilla, jonka jålkeen liuotin haihdutettiin alennetussa paineessa. Jåånnos puhdistettiin kromatografisesti kåyttaen 25 silikageelikolonnia, jota eluoitiin sykloheksaanin ja etyyliasetaatin 2:1 (v/v) seoksella, ja otsikon mukaista yhdistettå sisåltåvåt fraktiot våkevditiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 243 mg otsikon mukaista yhdistettå.

30 Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13) 6 ppm: 2,50-2,60 [IH, multipletti]; 2,96-3,04 [IH, multipletti]; 5.06- 5,16 [2H, multipletti]; 35 5,48-5,52 [IH, multipletti]; 5,88 [IH, singletti]; 78 90 427 6,50-6,58 [IH, multipletti].

Alkuaineanalyysi: 5 Laskettu yhdisteelle C27H26012: C, 59,78 %; H, 4,83%; N, O %.

Todettu: C, 59,59 %; H, 4,80 %; N, 0,01 %.

10 Massaspektri (m/e): 585 (M+43).

ESIMERKKI 2

Dimetvvli-6-desamino-6-hvdroksi-2-asetvvliamlno-2-dehvdro-4,.5*-dihvdro-15 O2' . 07'-dibentsowligriseolaatti 200 mg dimetyyli-1'-deadeniino-l'Ø-asetoksi-4',5'-dihydro-02’ ,07’-di-bentsoyyligriseolaattia (valmistettu esimerkisså 1(c) kuvatusti) ja 200 mg bistrimetyylisilyyli Nz-asetyyliguaniinia laitettiin kaksikaulapulloon 20 typpi-ilmakehåsså. 0,4 ml trimetyylisilyyli-trifluorimetaanisulfonaattia lisåttiin liuokseen, joka oli saatu liuottamalla seos 40 millilitraan 1,2-dikloorietaania jåisså kylmånS pitåen, jonka jålkeen seoksen annet-tiin seistå huoneen låmpdtilassa 4 vuorokautta. Reaktioseos jatkokåsitel-tiin esimerkisså 3 kuvattavalla tavalla. Se puhdistettiin kromatografi -25 sesti kåyttåen silikageelikolonnia, jota eluoitiin 3 % (v/v) metanolia sisåltdvallå metyleenikloridilla, jolloin saatiin 54,8 mg otsikon mukais-ta yhdistettå, joka eristettiin toisena eluoituvasta fraktiosta.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2SO] S ppm; : - 30 2,59-2,96 [2H, multipletti]; 5,12-5,32 [IH, multipletti]; 5,32-5,63 [IH, multipletti]; 5,83 [IH, singletti]; 35 6,11 [IH, dublettien dubletti, J - 4,5 & 3,9 Hz]; 6,47 [IH, dubletti, J - 4,5 Hz]; η .90427 8,32 [IH, singletti].

Alkuaineanalyysi: 5 Laskettu yhdisteelle C32H29Ns012.1/2H20: C, 56,14 %; H, 4,50 %; N, 10,23 %.

Todettu: C, 56,28 %; H, 4,53 %; N, 9,93 %.

ESIMERKKI 3 10 6-desamlno-6-hvdroksi-2-asetwliami.no-2-dehvdro-4' .5' -dihvdrogriseoliini-happo 40 mg dimetyyli-6-desamino-6-hydroksi-2-asetyyliamino-2-dehydro-4',5'-15 dihydro-02’,07’-dibentsoyyligriseolaattia (valmistettu esimerkisså 2 esitetyllå tavalla) liuotettiin 5 millilitraan natriumhydroksidin 1 N vesiliuosta, jaissa kylmånå pitåen, ja tamån seoksen annettiin seistå huoneen låmpotilassa 4 tuntia. Sitten seoksen pH asetettiin arvoon 1 kloorivetyhapon 1 N vesiliuoksella, ja se kåsiteltiin pylvåskromato-20 grafisesti kåyttåen valmiiksi pakattua RP-18-kolonnia (kåflnteisfaasi-tyyppinen, Merck), jota eluoitiin 5 % (v/v) asetonitriiliå sisåltåvallå vedellå. Varsinaiset fraktiot lyofilisoitiin, jolloin saatiin 22,0 mg otsikon mukaista yhdistettå.

25 Ydinmagneettisen resonanssi spektri (D20) 6 ppm: 2,58 [IH, dublettien dubletti, J - 6,5 & 15,4 Hz]; 2,76 [IH, dublettien dubletti, J — 15,4 & 1,5 Hz]; 4,60-4,75 [3H, multipletti]; 30 5,10-5,16 [IH, multipletti]; 5,97 [IH, dubletti, J - 6,8 Hz]; 8,20 [IH, singletti], 35 80 90427 ESIMERKKI 4 6-desamino-6-hvdroksl-2-amino-2-dehvdro-4'.5'-dihvdro-griseoliinihappo 5 21 mg 6-desamino-6-hydroksi-2-asetyyliamino-2-dehydro-4',5'-dihydro- griseoliinihappoa (valmistettu esimerklsså 3 kuvatulla tavalla) laitet-tiin pyoreåpohjaiseen pulloon typpi-ilmakehåsså. Slihen lisåttiin 10 millilitraa metanolia, joka sisålsi 20 % v/v ammoniakkia. Sitten seoksen annettiin seistå huoneen låmpdtilassa 1 vuorokauden ajan astiassa, joka 10 oli suljettu tiukasti tulpalla. Liuotin haihdutettiin alennetussa pai-neessa ja jåånnos liuotettiin kloorivetyhapon 0,5 N vesiluokseen. Tama liuos kåsiteltiin pylvåskromatografisesti kåyttåen valmiiksi pakattua RP-18-kolonnia (kåånteisfaasityyppinen; Merck). Kolonnia eluoitiin 3 % v/v asetonitriiliå sisåltåvållå vedellå, jonka jålkeen eluoitunut liuos 15 lyofilisoitiin, jolloin saatiin 16 mg otsikon mukaista yhdistettå.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20) S ppm: 2,49 [IH, dublettien dubletti, J - 6,3 & 15,5 Hz]; 20 2,64 [1H, dublettien dubletti, J - 15,5 6t 1,5 Hz]; 4,54-4,77 [3H, multipletti]; 5,01-5,05 [IH, multipletti]; 5,89 [1H, dubletti, J - 7,3 Hz]; 8,00 [1H, singletti].

25 ESIMERKKI 5

Dimetvvligriseolaatin N1-oksidi (- kaavan XXXIX mukainen låhtoaine, jota voidaan kåyttåå yhdisteen XL 30 valmistamiseksi) 8,14 g dimetyyligriseolaattia (valmistettu valmistuksessa 1 kuvatusti) suspendoitiin metanoliin. Tåhån lisåttiin 6,90 g m-klooriperbentsoehappoa ja seosta sekoitettiin huoneen låmpotilassa 24 tuntia. Liuotin haihdutet-35 tiin tislaamalla alennetussa paineessa. Kun liuotin oli saatu lahes poistetuksi, jåånnokseen lisåttiin 300 ml dietyylieetteriå, ja liuoksessa 81 90 427 olevia moykkyja hajotettiin spaattelilla niin kauan, ettå ne saatiin håviåmaan. Seos suodatettiin, ja jåånnos pestiin 100 ml dietyylieette-riå, ja kuivattiin, jolloin saatiin 7,81 g valkoista jauhemaista ainetta. Tåmå jauhe liuotettiin 200 millilitraan metanolia ja 300 millilitraan 5 metyleenikloridia mahdollisimman tåydellisesti låmmittamistå apuna kåyttåen, jonka jalkeen liuotinta haihdutettiin alennetussa paineessa imulaitteella siten, ettå jåljelle jaavån liuoksen tilavuudeksi saatiin noin 50 ml. Tuloksena olevat kiteet erotettiin suodattamalla, jolloin otsikon mukaista yhdistetta saatiin 6,31 g valkoisina jauhemaisina 10 kiteina.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2SO] 5 ppm: 3,68 [3H, singletti]; 15 3,78 [3H, singletti]; 4,60 [IH, dubletti, J - 5,0 Hz]; 4,67 [IH, singletti]; 5,15 [IH, dubletti, J - 2,2 Hz]; 5,90 [IH, dublettien dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 20 6,53 [IH, singletti]; 8,53 [IH, singletti]; 8,72 [IH, singletti].

25 ESIMERKKI 6

Griseoliinihaoon N1-oksldi 1,1 g dimetyyligriseolaatin N1-oksidia (valmistettu esimerkisså 5 esi-30 tetysti) liuotettiin 15 millilitraan natriumhydroksidin 0,5 N vesiliuos-ta, ja tåman seoksen annettiin seista huoneen låmpotilassa 2 tuntia. Tuloksena olevan liuoksen pH asetettiin arvoon 2,3, jonka jalkeen liuos kåsiteltiin pylvaskromatografisesti kåyttaen valmiiksi pakattua RP-8-kolonnia (Merck) ja pestiin vedella. Kolonnia eluoitiin vedellå, joka 35 sisalsi 5 % v/v asetonitriilia, ja saadut varsinaiset fraktiot kerattiin ja lyofilisoitiin, jolloin otsikon mukaista yhdistetta saatiin 300 mg valkoisena jauhemaisena aineena.

82 9 0 4 2 7

Ydinmagneettisen resonanssi spektri [(CD3)2S0] δ ppm: 5 4,53 [IH, singletti]; 4,61 [IH, dubletti, J - 5,0 Hz]; 5,15 [IH, dubletti, J - 2,2 Hz]; 5,90 [IH, dublettien dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 10 6,52 [IH, singletti]; 8,51 [IH, singletti]; 8,67 [IH, singletti], ESIMERKKI 7 15

Dimetvvli-N1-p-nitrobentsvvlioksigriseolaatti 35 ml dimetyyliformamidia lisåttiin 1,48 grammaan dimetyyligriseolaatin N1-oksidia (valmistettu esimerkisså 5 kuvatusti) ja 2,27 grammaan p-nitro-20 bentsyylibromidia, ja tåtå seosta sekoitettiin huoneen låmpotilassa yon yli. Liuotin tislattiin pois alennetussa paineessa ja jaannos kiteytet-tiin lisaamallå dietyylieetteriå. Sitten seos suodatettiin ja jåånnos liuotettiin seokseen, joka kåsitti etyyliasetaattia ja 10 % v/v natrium-bikarbonaatin vesiliuosta. Erottunut orgaaninen kerros pestiin vedella ja 25 kuivattiin vedettomållå magnesiumsulfaatilla. Kuivausaine erotettiin suodattamalla, ja liuotin poistettiin suodoksesta tislaamalla, ja jaannos puhdistettiin tamån jålkeen kromatografisesti kåyttåen silikageelikolon-nia, jota eluoitiin 3 % v/v metanolia sisåltåvålla metyleenikloridilla, jolloin saatiin 1,5 g otsikon mukaista yhdistettå.

30

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2SO] δ ppm: 3,65, 3,73 [yhteenså 3H, kukin singletti]; 4,56 [IH, dubletti, J - 5,0 Hz]; 35 4,63 [IH, singletti]; 5,17 [IH, dubletti, J - 2,2 Hz]; 83 9 0 4 2 7 5.45 [2H, singletti] ; 5,87 [IH, dublettien dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 6,41 [IH, singletti]; 7,6-8,43 [6H, multipletti].

5 ESIMERKKI 8

Dimetvvli-Ντ -bentswlioksigriseolaatti 10 Seoksen, joka kåsitti 5,35 g dimetyyligriseolaatin ί^-oksidia (valmistettu esimerkisså 5 kuvatusti) ja 7,6 ml bentsyylibromidia, annettiin reagoida yon yli huoneen låmpotilassa, 90 millilitrassa dimetyyliforfamidia. Sitten seosta jatkokåsiteltiin esimerkisså 7 esitettyjå toimenpiteitå kåyttåen. Tuloksena oleva liuos kaadettiin 1 litraan heksaania ja 0,5 15 litraan dietyylieetteria koko ajan sekoittaen. Tuloksena oleva jauhemai-nen aine suodatettiin, jolloin otsikon mukaista yhdistetta saatiin 5,4 grammaa raakajauheena.

Ydinmagneettisen resonanssi spektri [(CD3)2S0] 6 ppm: 20 3,64, 3,71 [yhteenså 3H, kukin singletti]; 4,54 [IH, dubletti, J - 5,0 Hz]; 4,63 [IH, singletti]; 5,17 [IH, dubletti, J - 2,2 Hz]; 25 5,33 [2H, singletti]; 5,83 [IH, dublettien dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 6.46 [IH, singletti]; 7,3-7,7 [5H, multipletti]; 8,31, 8,39 [yhteenså IH, kukin singletti].

30 ESIMERKKI 9

Dibentshvdrvvli-1 * -deadeniino-1' B\ 5-amino-4-CN2-p-nitrobentsy^. amidlino) - iini datsol -1 - vvli 1 griseolaatti 35 84 90427 0,7 g dimetyyli N1-E-nitrobentsyylioksigriseolaattia liuotettiin 6,2 millilitraan natriumhydroksidin 1,5 N vesiliuokseen, ja seosta sekoi-tettiln huoneen låmpotilassa 3 vuorokautta. Sitten reaktloseos tehtiin happamaksi kloorivetyhapon 3 N vesiliuoksella, ja siihen lisåttiin 20 ml 5 asetonia ja 2,5 g difenyylidiatsometaania. Seoksen annettiin reagoida hapon esteroimiseksi huoneen låmpStilassa 60 minuuttia, sitå koko ajan sekoittaen. Tåmån ajan pååtyttyå asetoni poistettiln tislaamalla ja seok-seen lisåttiin 30 ml metyleenikloridia. Erottunut orgaaninen kerros pestiin natriumbikarbonaatin 10 % w/v vesiliuoksella sekå natriumkloridin 10 kyllåisellå vesiliuoksella. Liuotin poistettiin tislaamalla, ja jåånnos liuotettiin 2 millilitraan asetonia. Tuloksena oleva liuos kaadettiin 300 millilitraan heksaania, sitå koko ajan sekoittaen. Tåten saatu jauhemai-nen aine puhdistettiin kromatografisesti kåyttåen silikageelikolonnia, jota eluoitiin sykloheksaanin ja etyyliasetaatin 1:1 v/v seoksella, 15 jolloin saatiin 0,35 g otsikon mukaista yhdistettå.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2S0] δ ppm 4,51 [IH, dubletti, J - 5,0 Hz]; 20 4,87 [IH, singletti]; 5,07 [2H, singletti]; 5,25 [IH, dubletti, J - 2,2 Hz]; 5,56 [IH, leveå singletti]; 6,15 [IH, singletti]; 25 6,66, 6,72 [yhteenså IH, kukin singletti]; 7,15-7,4 [21H, multipletti]; 7,66, 8,20 [yhdesså 2H, kukin dubletti].

30 ESIMERKKI 10

Dibentshydryvli-l*-deadeniino-1*B- Γ5-amino-4-CN2-bentsvvlioksiamidiino^-imidatsol-l-wlil griseolaatti 35 5,4 g dimetyyli-N1-bentsyylioksigriseolaattia (valmistettu esimerkisså 8 kuvatusti) liuotettiin 53 millilitraan natriumhydroksidin 1,5 N vesi- 85 9 0 4 2 7 liuosta, ja seosta sekoitettiin huoneen låmpotilassa 3 vuorokautta. Sitten reaktioseos tehtiin happamaksi våkevållå kloorivetyhapolla, ja sitten siihen lisattiin 15 g difenyylidiatsometaania ja 100 ral asetonia, ja sitå jatkokåsiteltiin esimerkisså 9 kuvattuja toimenpiteitå kåyttåen. 5 Tuloksena oleva seos puhdistettiin kromatografIsesti silikageelikolonnia kåyttåen, ja kolonnia eluoitiln 1 % v/v metanolla sisaltåvållå mety-leenikloridilla, jolloin saatiin 3,9 g otsikon mukaista yhdistettå.

Ydinraagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2SO] S ppm 10 4,54 [IH, dubletti, J - 5,0 Hz]; 4,90 [IH, singletti]; 4,94 [2H, singletti]; 5,26 [IH, dubletti, J - 2,2 Hz]; 15 5,59 [IH, dublettien dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 6,20 [IH, singletti]; 6,69, 6,76 [yhteenså IH, kukin singletti]; 7,1-7,5 [26H, multipletti].

20 ESIMERKKI 11 1' -deadeniino-l’fl- (5-araino-4-araidiinoi^nidatsol-l-vvli,) -griseoliinihappo 1,05 g dibentshydryyli-1'-deadeniino-l'/J-[5-amino-4-(N2-bentsyylioksi-25 amidiino)imidatsol-l-yyli]griseolaattia (valmistettu esimerkisså 10 esitetysti) liuotettiin 60 millilitraan asetonia. Tuloksena olevaan liuokseen lisåttiin 30 ml kloorivetyhapon 1 N vesiliuosta ja 6 ml Raney-nikkeliå (W-2), liuosta koko ajan sekoittaen. Sitten seosta sekoitettiin huoneen l&mpotilassa edelleen 60 minuuttia. Tåmån ajan pååtyttyå Raney-30 nikkeli poistettiin suodattamalla, asetoni poistettiin tislaamalla, ja jåånnds uutettiin kahdesti etyyliasetaatilla. Uute pestiin vedellå, natriumbikarbonaatin 10 % w/v vesiliuoksella, ja sitten natriumkloridin kyllåisellå vesiliuoksella. Sitten uute kuivattiin vedettomdlla mag-nesiumsulfaatilla. Kuivausaine poistettiin suodattamalla, ja liuotin 35 tislattiin pois suodoksesta, jolloin saatiin 0,67 g jåånnostå. Sitten tåma jåånnos liuotettiin 20 millilitraan asetonia ja 20 millilitraan 86 90 427 vettå, ja tuloksena oleva seos tehtiin happamaksi våkevållå kloorivetyha-polla. Seokseen lisåttiin 1 g difenyylidiatsometaania ja seosta sekoitet-tiin huoneen låmpotilassa 60 minuuttia. Asetoni poistettiin tislaamalla, ja jåånnds uutettiin kahdesti etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumbi-5 karbonaatin 10 % w/v vesiliuoksella ja natriurakloridin kyllåisellå vesiliuoksella, ja se kuivattiin vedettomållå magnesiumsulfaatilla, joka poistettiin taman jalkeen suodattamalla. Liuotin haihdutettiin pois suodoksesta, ja jåånnds liuotettiin 10 millilitraan asetonia. Tuloksena oleva seos kaadettiin 200 millilitraan heksaania, sitå koko ajan sekoit-10 tåen. Tuloksena oleva jauhemainen aine suodatettiin ja jåånnos puhdis-tettiin kromatografisesti kayttaen silikageelikolonnia, jota eluoitiin 10 % v/v metanolia sisåltavållå metyleenikloridilla, jolloin saatiin 0,15 g otsikon mukaisen yhdisteen bentshydryyliesteriå.

15 0,06 g tata bentshydryyliesteriå liuotettiin 0,8 millilitraan anisolia, ja tahan lisåttiin 0,8 ml trifluorietikkahappoa, liuosta jåissa kylmanå pitåen. Tuloksena olevaan seokseen lisåttiin 10 ml tolueenia, ja liuotin poistettiin tislaamalla. Jåånnbkseen lisåttiin 5 ml asetonia ja 10 ml tolueenia ja liuotin poistettiin tislaamalla. Tamå toimenpide toistettiin 20 kahdesti, ja sitten jåånnos liuotettiin 1 millilitraan asetonia ja 20 millilitraa heksaania lisåttiin. Tuloksena oleva jauhemainen aine suodatettiin ja liuotettiin natriumbikarbonaatin 10 % w/v vesiliuokseen. Tuloksena olevan liuoksen pH asetettiin arvoon 1,9 kloorivetyhapon 1 N vesiliuoksella. Liuos puhdistettiin pylvåskromatrografisesti kåyttåen 25 valmiiksi pakattua RP-8-kolonnia (kåånteisfaasityyppinen, Merck), jota eluoitiin vedellå, jolloin saatiin 24 mg otsikon mukaista yhdistettå.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2SO] 6 ppm 30 4,08 [IH, singletti]; 4,42 [IH, dubletti, J - 5,0 Hz]; 4,83 [IH, dubletti, J - 2,2 Hz]; 5,44 [IH, dublettien dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 6,20 [IH, singletti]; 35 7,67 [IH, singletti].

87 90 427 ESIMERKKI 12

Dlbentshvdrvvli-1' -deadenilno-1* θ- f 5-amino-4- (N2-hvdroksiamidiino) imi-datsol-l-vvlilgriseolaatti 5 1,0 g dlbentshydryyli-l'-deadeniino-l'/3-[5-amino-4-(N2-bentsyylioksi-amidiino)imidatsol-1-yyli]griseolaattia (valmistettu esimerkisså 10 esitetysti) liuotettiin 20 millilitraan etikkahappoa, jonka jålkeen liuokseen lisåttiin 0,6 g 10 % w/w hiileen adsorboitua palladiumia, mitå 10 ennen astlassa oleva ilma oli korvattu typellfl. Sitten seosta sekoitet-tiin huoneen låmpotilassa 2 tuntla siihen vetyå sydttåen. Hiileen sidottu palladium suodatettiin pois, ja liuotin poistettiin suodoksesta tislaa-malla. Jfiånnos liuotettiin seokseen, joka kåsitti 30 ml etyyliasetaattia ja 20 ml natriumbikarbonaatin 10 % w/w vesiliuosta. Erottunut orgaaninen 15 kerros pestiin vedellå ja kuivattiin vedettomållå magnesiumsulfaatilla. Sen jålkeen, kun kuivausaine oli poistettu suodattamalla, liuotin tislat-tiin pois, ja jåånnos puhdistettiin kromatografisesti silikageelikolon-nilla, jota eluoitiin 5 % v/v metanolia sisåltåvållå metyleenikloridilla, jolloin saatiin 0,26 g otsikon mukaista yhdistettå.

20

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2S0] 6 ppm 4,57 [IH, dubletti, J - 5,0 Hz]; 4,90 [1H, singletti]; 25 5,27 [1H, dubletti, J - 2,2 Hz]; 5,60 [1H, dublettien dubletti, J — 2,2 & 5,0 Hz]; 6,21 [1H, singletti]; 6,70, 6,76 [yhteenså 1H, kukin singletti]; 7,2-7,6 [21H, multipletti]; 30 8,95 [1H, singletti].

ESIMERKKI 13 35 Dibentshvdrvvli-2-merkaptogriseolaatti 88 90427 O,25gdibentshydryyli-l'-deadeniino-l'/i-[5-amino-4-(Nz-hydroksiamidiino)-imldatsol-l-yyli]griseolaattla (valmistettu esimerkisså 12 kuvatusti) liuotettiin seokseen, joka kåsitti 2 ml metanolia, 2 ml pyridiiniå ja 1 ml hiilidisulfidia. Seoksen annettlin reagolda 80oC:n låmpotilassa 5 teråssylinterisså 14,5 tuntla. Sitten liuotin polstettiin tislaamalla. Jåånnbkseen lisåttiin tolueenia, ja tåmå toimenpide toistettiin. Jåånnos puhdistettiin kromatografisesti silikageelikolonnilla, jota eluoitiin 4 % v/v metanolia sisåltåvållå metyleenikloridilla, jolloin saatiin 0,062 g otsikon mukaista yhdistettå.

10

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2SO] δ ppm 4,63 [IH, dubletti, J - 5,0 Hz]; 4,88 [IH, singletti]; 15 5,26 [IH, dubletti, J - 2,2 Hz]; 6,03 [IH, dublettien dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 6,39 [IH, singletti]; 6,69, 6,74 [yhteenså IH, kukin singletti]; 6,9-7,5 [20H, multipletti]; 20 8,24 [IH, singletti].

ESIMERKKI 14

Dimetwli-1'-deadeniino-11B-(2-lmino-f1.2,41oksadiatsolo-f 3.2-i1purin-7-25 vvli)griseolaatin hvdrobromidl (- kaavan XXXIX mukainen låhtftaine, jota voidaan kåyttåå yhdisteen (XL) valmistamiseksi) 8,46 g dimetyyligriseolaatin Jj^-oksidia (valmistettu esimerkisså 5 kuva-30 tulla tavalla) suspendoitiin 400 millilitraan metanolia. Tåhån lisåttiin 2,52 g syanogeenibromidia, ja seosta sekoitettiin huoneen låmpotilassa 1,5 tuntia, jonka jålkeen siihen lisåttiin jålleen 630 mg syanogeenibromidia, ja sitå sekoitettiin edelleen tunnin ajan. Liuotinta pois-tettiin tislaamalla alennetussa paineessa siten, ettå jåljelle jååvån 35 liuoksen tilavuus oli noin 100 ml. Tåhån lisåttiin 100 ml etyyliase-taattia ja tislaamista alennetussa paineessa jatkettiin niin kauan, »s 90427 kunnes nesteen tilavuudeksi saatiin 1000 ml. Jdljelle jdåneeseen liuok-seen lisåttiin våhitellen 100 ml etyyliasetaattia, seosta koko ajan sekoittaen. Kiteitå sisåltavå suspensio laitettiin jådkaappiin yoksi. Kiteet erotettiin suodattamalla, jolloin saatiin 9,77 g otsikon mukaista 5 yhdistettå.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2S0] 6 ppm 3.67 [3H, singletti]; 10 3,73 [3H, singletti]; 4.67 [IH, dubletti, J - 5,0 Hz]; 4,66 [IH, singletti]; 5,26 [IH, dubletti, J - 2,2 Hz]; 5,84 [IH, dublettien dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 15 6,76 [IH, singletti]; 9,07 [IH, singletti]; 10,23 [IH, singletti].

20 ESIMERKKI 15

Dimetwli-N6-svanogriseolaatin N1-oksidi (- kaavan XXXIX mukainen låhtdaine, jota voidaan kåyttåå yhdisteen (XL) • - valmistamiseksi) 25 9,77 g dimetyyli-1'-deadeniini-l'/9-(2-imino-[1,2,4]oksadiatsolo[3,2-i]-purin-7-yyli)griseolaatin hydrobromidia (valmistettu esimerkisså 14 kuvatusti) liuotettiin 50 millilitraan metanolia. Tåhån seokseen lisåt-tiin 50 ml ammoniakin 20 % v/v metanoliliuosta, jonka jålkeen seoksen 30 annettiin seistå huoneen låmpdtilassa 60 minuuttia. Reaktioseokseen lisåttiin 200 ml etyyliasetaattia ja liuotin poistettiin haihduttamalla alennetussa paineessa imulaitteen avulla. Kun nesteen tilavuudeksi oli saatu 100 ml, niin siihen lisdttiin 200 ml etyyliasetaattia, joka sitten poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Kun nesteen tilavuudeksi 35 oli saatu 200 ml, niin tuloksena oleva seos laitettiin yoksi jaåkaappiin.

Liuokseen tåten muodostuneet kiteet suodatettiin, jolloin saatiin 8,53 g otsikon mukaista yhdistetta vaaleankeltaisina hienoina kiteinå.

90 90427

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2SO] 6 ppm 5 3,67 [3H, singletti]; 3,74 [3H, singletti]; 4,63 [IH, dubletti, J - 5,0 Hz]; 4,66 [1H, singletti]; 10 5,16 [IH, dubletti, J - 2,2 Hz]; 5,93 [1H, dublettien dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 6,50 [1H, singletti]; 8,33 [1H, singletti]; 8,49 [1H, singletti], 15 ESIMERKKI 16

Dimetwli-N^bentswlloksi-N^svanogriseolaattl 20 (- keksinndn mukainen kaavan (XL) mukainen yhdiste) 8,53 g dimetyyli-N6-syanogriseolaatin -olcsidla. (valmistettu esimerkisså 15 kuvatulla tavalla) liuotettiin 100 millilitraan dimetyyliformamidia. Tåhån liuokseen lisattiin 10 ml bentsyylibromidia ja 10 ml trietyyli-25 amiinia, ja seosta sekoitettiin huoneen lampdtilassa 4 tuntia. Liuotin tislattiin pois alennetussa paineessa. Jaanndkseen lisattiin 30 ml etanolia ja 30 ml tolueenia, ja poistettiin sitten tislaamalla. Tåmå toimenpide toistettiin 4 kertaa. Tåten saatu éljymåinen aine sekoitettiin 500 millilitraan dietyyliesteria, kasiteltiin ultraåånilla, koko ajan 30 spaattelilla sekoittaen, jolloin saatiin vaaleankeltaista, jauhemaista ainetta. Tama aine erotettiin suodattamalla, ja se liuotettiin 300 millilitraan vettå ja 500 millilitraan etyyliasetaattia. Erottunut orgaaninen kerros pestiin kulloinkin 100 millilitralla natriumkloridin kyllaista vesiliuosta, kloorivetyhapon 0,2 N vesiliuoksella, natriumbi-35 karbonaatin 10 % w/v vesiliuoksella seka natriumkloridin kyllaisella vesiliuoksella, tåsså jårjestyksessa, ja kuivattiin vedettdmaila mag- 9i 90427 nesiumsulfaatilla. Sen jålkeen, kun liuosta oli kåsitelty aktiivihiilel-lå, liuotin poistettiin haihduttaraalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 8,8 g otsikon mukaista yhdistettå keltaisena karamellimaisena aineena.

5

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2SO] 6 ppm 3,68 [3H, singletti]; 3,76 [3H, singletti]; 10 4,61 [IH, dubletti, J - 5,0 Hz]; 4,67 [IH, singletti]; 5,26 [IH, dubletti, J - 2,2 Hz]; 5,37 [2H, singletti]; 5,83 [IH, dublettien dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 15 6,57 [IH, singletti]; 7,2-7,8 [5H, multipletti]; 8,56 [IH, singletti]; 8,81 [IH, singletti].

20 ESIMERKKI 17

Dimetvvli-N6-svano-N1-metoksigriseolaatti (- keksinndn mukainen kaavan (XL) mukainen yhdiste) 25 8,3 ml trietyyliamiinia ja 3,9 ml metyylijodidia lisåttiin 40 milli-litraan dimetyyliformamidia, joka sisåltåå 4,5 g dimetyyli-N6-syano-griseolaatin J^-oksidia (valmistettu esimerkisså 15 esitetysti), ja jota pidettiin jåiden avulla kylmånå. Seosta sekoitettiin huoneen låmpotilassa 30 4,5 tuntia. Tåmån jålkeen liuotin poistettiin tislaamalla, ja jåånnokseen lisåttiin 100 ml dietyylieetteriå, jonka jålkeen saatiin jauhetta, kun seos hajotettiin spaattelilla. Liukenematon materiaali suodatettiin pois, pestiin 30 millilitralla dietyylieetteriå ja liuotettiin seokseen, joka kfisitti 80 ml etyyliasetaattia ja 20 ml vettå, jonka jålkeen liuos 35 uutettiin toistamiseen etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattikerros kuivat-tiin vedettomållå magnesiumsulfaatilla. Sen jålkeen, kun kuivausaine oli erotettu suodattamalla, liuotin tislattiin pois, jolloin saatiin 3 g otsikon mukaista yhdistettå.

92 9 0 4 2 7

Ydirunagneettisen resonanssi spektri [(CD3)2SO] S ppm 5 3,60, 3,73 [yhteenså 3H, kukin singletti]; 4,14 [3H, singletti]; 4,58 [IH, dubletti, J - 5,0 Hz]; 4,64 [IH, singletti]; 10 5,21 [IH, dubletti, J - 2,2 Hz]; 5,83 [IH, dublettien dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 6,55 [IH, singletti]; 8,53, 8,93 [yhteenså IH, kukin singletti].

15 ESIMERKKI 18 Lååkeaineen valmistus kaavan (XL) mukaisesta yhdisteestå.

20 2 - amlno - N6-bentswl ioks i gr iseol i inihappo 100 ml natriumhydroksidin 0,2 N vesiliuosta lisåttiin 400 millilitraan metanolia, joka sisåltåå 8,8 g dimetyyli-N1-bentsyylioksi-N6-syano-griseolaattia (valmistettu esimerkisså 16 esitetyllå tavalla), ja jota 25 sekoitettiin koko ajan. Reaktioliuoksen pH asetettiin arvoon 12-12,5 lisååmållå siihen natriumhydroksidin 1 N vesiliuosta, jonka jålkeen sen annettiin seistå huoneen låmpdtilassa 60 minuuttia. Liuotinta tislattiin pois siten, ettå jåljelle jååvån nesteen tilavuudeksi saatiin noin 100 ml. Tuloksena oleva liuos sekoitettiin 50 millilitraan vettå ja 150 30 millilitraan etanolia, ja kuumennettiin palautusjååhdyttåen 2 tuntia. Tåmån jålkeen liuotin poistettiin jålleen tislaamalla alennetussa pai-neessa, kunnes nesteen tilavuus oli pienentynyt noin 100 millilitraksi. Siihen lisåttiin 100 ml natriumhydroksidin 2 N vesiliuosta, ja tuloksena olevan liuoksen annettiin seistå huoneen låmpdtilassa 60 minuuttia. 35 Liuokseen lisåttiin 200 ml etyyliasetaattia, ja pH asetettiin arvoon 0,5 våkevållå kloorivetyhapolla liuosta koko ajan sekoittaen. Vesikerros ja 93 9 0 4 2 7 orgaaninen kerros erottuivat, ja orgaaninen kerros pestiin 500 millilit-ralla kloorivetyhapon 0,1 N vesiliuosta, joka yhdistettiln veslkerrokseen ja kåsiteltiin aktiivihiilellå. Liuoksen pH asetettiin arvoon 2,3 lisåå-mållå tåmån jålkeen kiinteåtå natriumbikarbonaattia voimakkaasti sekoit-5 tåen. Liuokseen muodostuva liukenematon saostuma laitettiin yoksi jåå-kaappiin. Tuloksena oleva jauheraainen aine suodatettiin ja kuivattiin, jolloin saatiln 5,29 g otsikon mukaista yhdistettå vaaleankeltaisena j auheena.

10 Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2SO] S ppm 4.54 [IH, singletti]; 4.55 [IH, dubletti, J - 5,0 Hz]; 5,06 [2H, singletti]; 15 5,08 [IH, dubletti, J - 2,2 Hz]; 5,83 [IH, dublettien dubletti, J — 2,2 & 5,0 Hz]; 6,27 [IH, singletti]; 7,2-7,6 [5H, multipletti]; 7,79 [IH, singletti], 20 ESIMERKKI 19 Lååkeaineen valmistus kaavan (XL) mukaisesta yhdisteestå.

25 2-amino-N6-metoksigriseoliinihaDPQ

50 ml natriumhydroksidin 0,2 N vesiliuosta lisåttiin 70 millilitraan metanolia, joka sisålsi 3 g dimetyyli-N6-syano-N1-metoksigriseolaattia (valmistettu esimerkisså 17 kuvatusti). Tuloksena olevaa seosta sekoi-30 tettiin huoneen låmpdtilassa 1,5 tuntia, jonka jålkeen sen pH asetettiin arvoon 11,7 2 millilitralla natriumhydroksidin 1 N vesiliuosta, ja seosta sekoitettiin edelleen 30 minuuttia. Liuoksen pH asetettiin arvoon 7,0 våkevållå kloorivetyhapolla ja metanoli poistettiin tislaamalla. Jåljelle jååvå liuos sekoitettiin 70 millilitraan etanolia ja sitå kuumennettiin 35 1,5 tuntia palautusjååhdyttåen. Liuotinta poistettiin haihduttama11a siten, ettå jåljelle jåi noin 50 ml liuosta, ja tuloksena oleva liuos 94 90427 sekoitettiin 50 millilitraan natriumhydroksidin 1 N vesiliuosta ja sekoitettiin huoneen låmpfitilassa 60 minuuttla. Tuloksena olevan seoksen pH asetettiin arvoon 1 våkevållå kloorivetyhapolla, ja pestiin tåmån jålkeen etyyliasetaatilla. Veslkerroksen pH asetettiin arvoon 2,3 nat-5 riumbikarbonaatin 10 % w/v vesiliuoksella. Sitten se puhdistettiin pylvåskromatografisesti kåyttåen valmiiksi pakattua RP-8-kolonnia (kåån-teisfaasityyppinen, Merck), jota eluoitiin vesiliuoksella, joka sisålsi 5 % v/v asetonitriiliå ja 0,02 % v/v etikkahappoa, jolloin saatiin 1,91 g otsikon mukaista yhdistettå.

10

Ydirunagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2SO] 6 ppm 3.77 [3H, singletti]; 4,51 [IH, singletti]; 15 4,54 [IH, dubletti, J - 5,0 Hz]; 5.07 [IH, dubletti, J - 2,2 Hz]; 5,87 [IH, dublettien dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 6,26 [IH, singletti]; 7.77 [IH, singletti].

20 ESIMERKKI 20 (Lååkeaineen valmistus esimerkin 16 yhdisteestå) .V 25 : 2-am-lno-N6-hvdroksigriseoliinihappo ;-·] 200 mg 2-amino-N6-bentsyylioksigriseoliinihappoa (valmistettu esimerkisså .18 esitetysti) kuumennettiin seoksessa, joka kåsitti 20 ml metanolia ja 30 20 ml vettå. Sitten liuoksen annettiin seistå huoneen låmpotilassa jåisså jååhdyttåen. Siihen lisåttiin 50 mg hiileen sidottua palladiumia (10 % w/w) ja seosta sekoitettiin siihen vetyå johtaen. Koska reaktioliuos muuttui sameaksi noin 30 minuutissa valkoisen aineen muodostumisen * seurauksena, niin se kirkastettiin 5 millilitralla kloorivetyhapon 1 N 35 vesiliuosta, ja tuloksena olevaa liuosta sekoitettiin 1,5 tuntia. Kata-lyytti poistettiin suodattamalla, metanoli poistettiin tislaamalla 95 90427 alennetussa paineessa, ja liuoksen pH asetettiin arvoon 2,2 lisååmållå siihen natriumbikarbonaatin kyllåistå vesiliuosta koko ajan sekoittaen. Reaktloseoksen annettiin seistå jååhauteessa 30 minuuttia, ja tuloksena oleva kellertåvå kiintoaines erotettiin suodattamalla, jolloin saatiin 5 100 mg otsikon mukaista yhdistettå.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2S0] S ppm 4,54 [IH, singletti]; 10 4,57 [IH, dubletti, J - 5,0 Hz]; 5,11 [IH, dubletti, J - 2,2 Hz]; 5,95 [IH, dublettien dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 6,31 [IH, singletti]; 7,83 [IH, singletti].

15 ESTMERKKI 21 Lååkeaineen valmistus kaavan (XL) mukaisesta yhdisteestå.

20

Dimetvvli-2-amino-N6-bentsvvlioksigriseolaatti 5,4 g dimetyyli-N1-bentsyylioksi-N6-syanogriseolaattia (valmistettu esimerkisså 16 kuvatusti) liuotettiin 100 millilitraan metanolia. Tåhån 25 lisåttiin 100 ml 0,25 M fosfaattipuskuriliuosta, ja seosta låmmitettiin 4 tuntia palautusjååhdyttåen. Kiteitå muodostui, kun metanolia tislattiin pois. Kun metanoli oli saatu låhes tislatuksi, liuoksen pH asetettiin : arvoon 9 natriumbikarbonaatin 10 % w/v vesiliuoksella. Seosta kåsiteltiin ultraååniaalloilla 15-20 minuuttia, ja tuloksena olevat kiteet suodatet-30 tiin ja kuivattiin, jolloin saatiin 2,14 g otsikon mukaista yhdistettå. Tåmån jålkeen emåliuoksen pH asetettiin arvoon 11 natriumhydroksidin 2 N vesiliuoksella, ja sen annettiin seistå huoneen låmpotilassa yon yli. Tuloksena olevan liuoksen pH-arvo asetettiin arvoon 0,1 våkevållå kloori-vetyhapolla, ja liuosta kåsiteltiin aktiivihiilellå, sen pH asetettiin 35 arvoon 2,3 natriumhydroksidin 2 N vesiliuoksella, ja sen annettiin seistå 96 90427 5°C:n l&mpotilassa y6n yli. Laskeutunut materiaali erotettiin suodatta- malla, jolloin saatlin 2,0 g esimerkin 18 otsikon mukalsta yhdistettå.

Ydlnmagneettlsen resonanssin spektrl [(CD3)2S0] 6 ppm 5 3,63, 3,69 [yhteensS 3H, kukin singlettl]; 4,51 [IH, dubletti, J - 5,0 Hz]; 4,62 [IH, singlettl]; 5,03 [2H, singletti]; 10 5,09 [IH, dubletti, J - 2,2 Hz]; 5,83 [IH, dublettien dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 6,23 [IH, singletti]; 7,2-7,6 [5H, multipletti]; 7,70 [IH, singletti], 15 ESIMERKKI 22 (Ldåkeaineen valmistus esimerkin 16 yhdisteesta) 20 2-aminopriseoliinihappo 100 mg 2-amino-fi6-bentsyylioksigriseoliinihappoa (valmistettu esimerkisså 18 kuvatusti) liuotettiin seokseen, joka kåsitti 20 ml kloorivetyhapon 1 25 N liuosta ja 20 ml asetonia. Liuokseen lisåttiin 1 ml Raney-nikkeliå (W-2) , ja seosta sekoitettiin huoneen l&mpotilassa 2,5 tuntia. Raney-nikkeli erotettiin suodattamalla, ja reaktioseoksen pH asetettiin arvoon 2,3. Se puhdistettiin pylvåskromatografisesti kayttaen valmiiksi pakattua RP-8-kolonnia (Merck), jota eluoitiin asetonitriilin 3 % v/v vesiliuoksella. 30 Varsinainen fraktio lyofilisoitiin, jolloin saatiin 12 g otsikon mukaista yhdistetta valkoisena jauheena.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2S0] δ ppm 35 4,46 [IH, singletti]; 4,55 [IH, dubletti, J - 5,0 Hz]; 97 9 0 4 2 7 5,02 [IH, dubletti, J - 2,2 Hzl; 5,87 [IH, dublettien dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 6,28 [IH, singletti]; 7,90 [IH, singletti].

5

Ohutkerroskromatografia (saadun yhdisteen Rf-arvon ja griseoliinihapon Rf-arvon, joka asetettiin arvoksi 1,0, vålinen suhde).

Silikageelilevylla (Merck): 0,80 (kehitysliuos: vesi: metanoli: aseto-10 nitriili 70:15:15 tilavuusosina) Kåånteisfaasilla pinnoitettu RP-8-levy: 0,79 (kehitysliuos: vesi, joka sisåltaa 2 % v/v asetonitriilia ja 0,02 % v/v etikkahappoa).

15 ESIMERKKI 23 (Låakeaineen valmistus esimerkin 16 yhdisteesta)

Dibentshydryvli^-amino-N^bentswlioksipriseolaatti 20 1,0 g 2-amino-N6-bentsyylioksigriseoliinihappoa (valmistettu esimerkissa 18 esitetysti) suspendoitiin 100 millilitraan asetonia ja 100 milli-litraan vettå. Difenyylidiatsometaania lisåttiin niin paljon, kunnes sen punaisen varin katoamista ei enåå voitu todeta. Tåmån jalkeen reak-25 tioseosta sekoitettiin lisaten siihen samalla 4 ml kloorivetyhapon 1 N vesiliuosta; ja difenyylidiatsometaania lisåttiin jalleen niin kauan, kunnes sen punaisen vårin katoamista ei enaa voitu havaita. Sitten seosta sekoitettiin 60 minuuttia. Asetoni poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja vesi poistettiin dekantoimalla. Jaannos liuotettiin seok-30 seen, joka kåsitti 50 ml etyyliasetaattia ja 50 ml vettå, ja orgaaninen kerros pestiin 30 millilitralla natriumbikarbonaatin 5 % w/v vesiliuosta . . ja 30 millilitralla natriumkloridin kyllåistå vesiliuosta, jonka jalkeen se kuivattiin vedettomållå magnesiumsulfaatilla. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jåånnds liuotettiin 30 millilitraan 35 etyyliasetaattia, ja tuloksena oleva liuos kaadettiin 500 millilitraan heksaania koko ajan sekoittaen. Tuloksena oleva liukenematon materiaali 98 90427 otettiin talteen suodattamalla ja puhdistettiin kromatografisesti kaytta-en valmiiksi pakattua sllikageelikolonnia (Merck), jota eluoitiin 2,5 % v/v metanolia sisaltavålla metyleeniklorldilla. Kahdesta varsinaisesta fraktiosta se, joka eluoitui myohemmin, otettiin talteen, haihdutettiin 5 kuiviin ja lyofilisoitiin bentseenista, jolloin saatiin 430 g otsikon raukaista yhdistetta valkoisena jauheena.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2SO] 6 ppm 10 4,63 [IH, dubletti, J - 5,0 Hz]; 4,99 [1H, singletti]; 5,07 [2H, singletti]; 5,31 [1H, dubletti, J - 2,2 Hz]; 5,97 [1H, dublettien dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 15 6,33 [1H, singletti]; 6,75 [1H, singletti]; 6,81 [1H, singletti]; 7,74 [1H, singletti].

20 ESIMERKKI 24

Dibentshvdrvyli-2-amino-N6-bentsvvl·ioksi-N6-bentshvdrvvligriseolaatti 25 Reaktioseos puhdistettiin kromatografisesti silikageelikolonnia kåyttåen, esimerkissa 23 kuvattua toimenpidetta noudattaen. Ensimmainen varsinainen fraktio otettiin talteen, haihdutettiin kuiviin ja lyofilisoitiin bentseenista, jolloin saatiin 420 mg otsikon mukaista yhdistetta.

30 Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2S0] δ ppm 4,53 [2H, leveå singletti]; 4,72 [1H, dubletti, J - 5,0 Hz]; 4,96 [1H, singletti]; 35 5,31 [1H, dubletti, J - 2,2 Hz]; 6,10 [1H, dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 99 90427 6,46 [IH, singletti]; 6,75 [IH, singletti]; 6,82 [IH, singletti]; 7,69 [IH, singletti]; 5 8,13 [IH, singletti].

ESIMERKKI 25 10 Dibentshvdrvvli-2-aminogriseolaatti 83 mg dibentshydryyli-2-amino-N6-bentsyylioksigriseolaattia (valmistettu esimerkisså 23 esitetysti) liuotettiin seokseen, joka kåsitti 20 ml asetonia ja 10 ml kloorivetyhapon 1 N vesiliuosta. Seokseen lisåttiin 1 15 ml Raney-nikkelia (W-2), jonka jålkeen seosta sekoitettiin voimakkaasti huoneen låmpdtilassa 45 minuuttia. Raney-nikkeli poistettiin suodatta-malla, ja liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, jatkaen tislaamista niin kauan, ettei asetonin hajua kyetty enåå havaitsemaan. Tuloksena oleva seos sekoitettiin 30 millilitraan etyyliasetaattia ja 20 erotettiin. Orgaaninen kerros pestiin 20 millilitralla natriumbikarbo-naatin 10 % w/v vesiliuosta ja 20 millilitralla natriumkloridin kyllåistå vesiliuosta, ja kuivattiin vedettomålla magnesiumsulfaatilla. Liuotin poistettiin alennetussa paineessa tislaamalla, ja jåånnos puhdistettiin kromatografisesti kåyttåen valmiiksi pakattua silikageelikolonnia 25 (Merck), jota eluoitiin 5 % v/v metanolia sisåltåvållå metyleenikloridil-la. Varsinainen fraktio otettiin talteen ja lyofilisoitiin bentseenistå, jolloin saatiin 73 mg otsikon mukaista yhdistettå valkoisena jauheena.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2SO] S ppm 30 4,67 [IH, dubletti, J - 5,0 Hz]; 4,92 [IH, singletti]; 5,27 [IH, dubletti, J - 2,2 Hz]; 6,03 [IH, dublettien dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 35 6,37 [IH, singletti]; 6,73 [IH, singletti]; 100 90427 6,77 [IH, singletti]; 7,97 [IH, singletti], 5 ESIMERKKI 26 0,56 g dibentshydryyli-2-aminogriseolaattia (valmistettu esimerkisså 25 kuvatusti) suspendoitiin 5 millilitraan anisolia ja tehtiin liukoiseksi lisååmållå 5 ml trifluorietikkahappoa suspensiota jåisså kylmånå pitåen, 10 jonka jålkeen seoksen annettiin seisoa huoneen låmpdtilassa 10-15 minuut-tia. Reaktioseokseen lisåttiin 15 ml tolueenia ja liuotin poistettiin tåmån jålkeen tislaamalla. Toimenpide, jossa seokseen lisåttiin 5 milli-litrasta asetonia ja 15 millilitrasta tolueenia muodostuva liuotinseos, ja jossa tåmå liuotinseos poistettiin tåmån jålkeen tislaamalla, tois-15 tettiin kahdesti ja jåånnfis suspendoitiin 2 millilitraan asetonia. Tulok-sena oleva suspensio kaadettiin 200 millilitraan heksaania koko ajan sekoittaen. Tuloksena oleva jauhemainen materiaali erotettiin suodatta-malla ja liuotettiin natriumbikarbonaatin 10 % w]v vesiliuokseen. Tuloksena olevan liuoksen pH asetettiin arvoon 0,6 våkevållå kloorivetyhapol-20 la, ja liuosta kåsiteltiin aktiivihiilellå. Tuloksena olevan seoksen pH asetettiin arvoon 2 natriumbikarbonaatin 10 % w]v vesiliuoksella ja seoksen annettiin seisoa 5°C:n låmpotilassa yon yli. Erottuneet kiteet erotettiin suodattamalla ja kuivattiin, jolloin saatiin 0,15 g otsikon mukaista yhdistettå. Emåliuos puhdistettiin kromatografisesti kåyttåen 25 kåånteisfaasilla tåytettyå kolonnia, joka oli tåytetty valmiiksi RP-8-faasilla (Merck), ja jota eluoitiin asetonitriilin 3 % v]v vesiliuoksella, jolloin saatiin 0,04 g otsikon mukaista yhdistettå, jolla yhdisteellå oli samat ominaisuudet kuin esimerkin 22 tuotteella.

30 ESIMERKKI 27

Dibentshvdrwli-2-hvdroksipriseolaatti 0,6 g dibentshydryyli-2-aminogriseolaattia (valmistettu esimerkisså 25 35 kuvatusti) liuotettiin 50 millilitraan etikkahapon 80 % v]v vesiliuosta.

Astiassa oleva ilma syrjåytettiin typellå, ja tåmån jålkeen seokseen ιοί 90427 lisåttiin 1 g natriumnitriittid seosta jåisså kylmånå pitden, ja seoksen annettiin reagolda huoneen ldmpotilassa 1,5 tuntia. Liuotin poistettiin tislaaraalla, ja jddnnds sekoitettiin veteen, ja vesi poistettiin saraoin tislaamalla. Erottunut materiaali suspendoitiin veteen ja vesi poistet-5 tiin samoin tislaamalla. Erottunut materiaali suspendoitiin veteen ja otettiin talteen suodattamalla. Jddnnos liuotettiin 15 millilitraan asetonia ja liuoksen pH asetettiin arvoon 9-10 lisddmdlld siihen ammoni-akin vdkevdd vesiliuosta. Tuloksena olevan liuoksen annettiin seisoa huoneen ldmpdtilassa 20 minuuttia, jonka jdlkeen asetoni poistettiin 10 tislaamalla. Jddnnos sekoitettiin 50 millilitraan etyyliasetaattia ja 50 millilitraan vetta ja sita sekoitettiin huolellisesti. Tuloksena oleva saostuma erotettiin suodattamalla ja puhdistettiin kromatografisesti silikageelikolonnilla (jota eluoitiin 10 % v/v metanolia sisaltavallå metyleenikloridilla), jolloin saatiin 0,35 g otsikon mukaista yhdistetta.

15 Erotettu etyyliasetaattikerros pestiin natriumbikarbonaatin 10 % w/v vesiliuoksella ja natriumkloridin kyllaisella vesiliuoksella ja kuivat-tiin vedettomdlld magnesiumsulfaatilla. Kuivausaine poistettiin suodattamalla ja liuotin tislattiin pois. Tuloksena oleva jddnnds puhdistettiin kromatografisesti silikageelikolonnilla, kdyttden eluenttina 10 % v/v 20 metanolia sisdltdvdd metyleenikloridia, jolloin saatiin 0,04 g otsikon mukaista yhdistettd.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri ((CD3)2SO] S ppm 25 4,59 [IH, dubletti, J - 5,0 Hz]; 4,90 [IH, singletti]; 5,25 [IH, dubletti, J - 2,2 Hz]; 6,05 [IH, dublettien dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 6,30 [IH, singletti]; 30 6,67, 6,73 [yhteensd IH, kukin singletti]; 7,0-7,5 [20H, multipletti]; 7,93 [IH, singletti], 35 102 90427

ESTHER KKT ?R

Dibentshvdrvvli-6-desamino-2.6-dihvdroksigriseolaatti 5 Esimerkissfl 27 kuvatussa toimenpiteesså etyyliasetaatin ja veden seokses-ta suodattamalla erotettu, saostunut materiaali kåsiteltiin kromatografi* sesti silikageelikolonnia kåyttåen. Ensiksi eluoitui esimerkin 27 otsikon mukaista yhdistettå 10 % v/v metanolia sisåltåvållå metyleenikloridilla; seuraava fraktio eluoitiin metanolilla, jolloin saatiin 0,06 g otsikon 10 mukaista yhdistettå.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2SO] S ppm 4,47 [IH, dubletti, J - 5,0 Hz); 15 4,85 [1H, singletti]; 5,19 [IH, dubletti, J - 2,2 Hz]; 6,04 [1H, dublettien dubletti, J - 5,0 & 2,2 Hz); 6,22 [1H, singletti]; 6,65, 6,73 [yhteenså 1H, kukin singletti]; 20 7,15-7,45 [20H, multipletti]; 7,56 [1H, singletti].

ESIMERKKI 29 25 2-hydroksigriseoliinihapno 0,37 g dibentshydryyli-2-hydroksigriseolaattia (valmistettu esimerkisså 27 esitetysti) liuotettiin 3 millilitraan anisolia. Tåhån lisåttiin 3 ml trifluorietikkahappoa liuosta jåisså kylmånå pitåen, ja seoksen annettiin 30 seisoa huoneen låmpotilassa 10 minuuttia. Sitten seokseen lisåttiin tolu-eenia, jonka jålkeen liuotin poistettiin tislaamalla. Jåånndkseen lisåttiin asetonin ja tolueenin seosta, joka tåmån jålkeen poistettiin tislaamalla. Toimenpide toistettiin kahdesti ja tuloksena oleva seos suspen-doitiin 2 millilitraan asetonia ja kaadettiin 100 millilitraan heksaania : 35 koko ajan sekoittaen. Erottunut materiaali otettiin talteen suodattamal la. Jåånnds liuotettiin natriumbikarbonaatin 10 % w/v vesiliuokseen ja 103 90427 liuoksen pH asetettiin arvoon 1,2 våkevållå kloorivetyhapolla. Tuloksena oleva seos puhdistettiin pylvåskromatografisesti kåyttåen valmliksi pakattua RP-8-kolonnia (Merck), jota eluoitiin vedellå, jolloin saatlin 0,17 g otsikon mukaista yhdistettå.

5

Ydinmagneettisen resonanssin spektrl [(CD3)2S0] S ppm 4.46 [IH, singletti]; 4.47 [IH, dubletti, J - 5,0 Hz]; 10 5,05 [IH, dubletti, J - 2,2 Hz]; 5,89 [IH, dublettien dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 6,24 [IH, singletti]; 7,95 [IH, singletti].

15 Ohutkerroskromatografia (saadun yhdisteen Rf-arvon ja griseoliinihapon Rf-arvon, joka asetettiin arvoksi 1,0, vålinen suhde) Kåånteisfaasilla RP-8-pinnoitettu levy (Merck): 1,32 (kehitysliuos: vesi, joka sisåltåå 2 % v/v asetonitriiliå ja 0,02 % v/v etikkahappoa).

20 ESIMERKKI 30 6-desamino-2.6-dihvdroksigriseoliinihappo 25 40 mg dibentshydryyli-6-desamino-2,6-dihydroksigriseoliinihappoa (valmis- tettu esimerkisså 28 kuvatusti) liuotettiin 1 millilitraan anisolia. Tåhån liuokseen lisåttiin 1 ml trifluorietikkahappoa liuosta jåisså kylmånå pitåen, ja seoksen annettiin seisoa huoneen lårapotilassa 10-15 minuuttia. Toimenpide, jossa tolueenia lisåttiin ja jossa se poistettiin 30 tislaamalla, jonka jålkeen seokseen lisåttiin asetonin ja tolueenin seosta, joka poistettiin tislaamalla, toistettiin kahdesti, ja saatu jåånnos suspendoitiin 0,5 millilitraan asetonia. Sen jålkeen, kun suspension oli lisåtty 20 ml heksaania, erottunut materiaali otettiin talteen suodattamalla. Jåånnds liuotettiin natriumbikarbonaatin 10 % w/v vesili-35 uokseen. Liuoksen pH asetettiin arvoon 0,6 våkevållå kloorivetyhapolla. Tuloksena oleva liuos puhdistettiin pylvåskromatografisesti kåyttåen 104 9 0 427 valmiiksi pakattua RP-8-kolonnla (kåånteisfaasityyppinen, Merck), jota eluoitiin vedellå, jolloin saatiin 25 mg otsikon mukaista yhdistettå.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2SO] δ ppm 5 4,49 [1H, singletti]; 4,58 [IH, dubletti, J - 5,0 Hz]; 5,12 [1H, dubletti, J - 2,2 Hz]; 5,53 [1H, dublettlen dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 10 6,41 [1H, singletti]; 7,91 [1H, singletti].

Ohutkerroskromatografia (saadun yhdisteen Rf-arvon ja griseoliinihapon Rf-arvon, joka asetettiin arvoksi 1,0, vålinen suhde) 15

Silikageelillå pinnoitettu levy (Merck): 0,57 (kehitysliuos: vesi: metanoli: asetonitriili 70:15:15 tilavuusosina); Kåånteisfaasila RP-8 pinnoitettu levy (Merck): 1,65 (kehitysliuos: vesi, 20 joka sisåltaa 2 % v/v asetonitriilia ja 0,02 % v/v etikkahappoa).

ESIMERKKI 31

Dimetwli-N6-bentswlioksi-2- (Ν' .Ν' -dimetvvliaminometvleeni^aminogriseo-25 laatti 528 mg dimetyyli-2-amino-fi6-bentsyylioksigriseolaattia (valmistettu esimerkissa 21 kuvatulla tavalla) liuotettiin 10 millilitraan dimetyyli-formamidia. Tåhån lisattiin 0,24 ml dimetyyliformamidin dimetyyliase-30 taalia, ja seoksen annettiin seisoa huoneen låmpdtilassa 2 tuntia. Sen jålkeen, kun låhtdmateriaalin katoaminen oli varmistettu ohutkerroskromatograf isesti , liuotin poistettiin suodattamalla alennetussa painees-sa. Jåånnos liuotettiin 40 millilitraan metyleenikloridia ja 40 millilitraan vetta, ja orgaaninen kerros pestiin 20 millilitralla natrium-35 kloridin kyllaista vesiliuosta. Kaikki saadut vesikerrokset yhdistettiin ja sekoitettiin tåmån jålkeen 2 millilitraan natriumbikarbonaatin 5 % w/v 105 90427 vesiliuosta ja uutettiin kahdesti 20 millilitralla metyleenikloridia. Orgaaniset kerrokset yhdistettiln, kuivattiin vedettomallå magnesium-sulfaatilla ja liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jåånnds kasiteltiin kromatografisesti silikageelikolonnilla (Merck), jota 5 eluoitiin 3 % v/v metanolia sisaltavalla metyleenikloridilla. Puhdista-misen jålkeen saatu aine lyofilisoitiin bentseenista, jolloin otsikon mukaista yhdistetta saatiin 322 mg valkoisena jauheena.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2SO] 8 ppm 10 3,04 [3H, singletti]; 3,19 [3H, singletti]; 3,67 [3H, singletti]; 3,72 [3H, singletti]; 15 4,47 [IH, dubletti, J = 5,0 Hz]; 4,63 [1H, singletti]; 5,01 [2H, singletti]; 5,12 [IH, dubletti, J - 2,2 Hz]; 6,00 [1H, dublettien dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 20 6,38 [1H, singletti]; 7,2-7,6 [5H, multipletti]; 7,83 [1H, singletti]; 8,50 [1H, singletti], 25 ESIMERKKI 32

Dimetvvli-2- (Ν' .Ν' -dimetvvliaminometvleenilaininopriseolaatti 30 583 mg dimetyyli-N6-bentsyylioksi-2- (Ν' ,N' -dimetyyliaminometyleeni)amino- griseolaattia (valmistettu esimerkissa 31 esitetysti) liuotettiin 100 millilitraan asetonia ja 75 millilitraan 1 N kloorivetyhappoa. Tåhån lisåttiin 10 ml veteen suspendoitua Raney-nikkeliå (W-2), ja tuloksena olevaa seosta sekoitettiin huoneen lampotilassa 30 minuuttia, pitaen pH 35 vahintaan arvossa 1,0, seuraten sita pH-mittarilla. Raney-nikkeli poistettiin suodattamalla ja suodosta tiivistettiin haihduttamalla alenne- 106 90427 tussa paineessa. Kun asetoni oli saatu poistetuksi låhes tåydellisesti, niin tuloksena oleva seos sekoitettiin 200 millilitraan metyleenikloridia ja se neutraloitiin natriumbikarbonaatin vesiliuoksella, ja tuloksena oleva liukenematon materiaali poistettiin suodattamalla. Orgaanisen 5 kerroksen erottamisen jålkeen vesikerros uutettiin kolmasti, kulloinkin 50 millilitralla metyleenikloridia. Orgaaniset kerrokset yhdistettiin ja kuivattiin vedettomållå magnesiumsulfaatilla. Liuotin poistettiin tislaa-malla alennetussa paineessa ja jåånnos kåsiteltiin kromatografisesti kayttåen silikageelilla tåytettyå kolonnia (Merck), jota eluoitiin 5 % 10 v/v metanolia sisåltåvålla metyleenikloridilla. Saatu aine puhdistettiin ja lyofilisoitiin bentseenista, jolloin saatiin 180 mg otsikon mukaista yhdistetta valkoisena jauheena.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2SO] S ppm 15 3,04 [3H, singletti] ; 3,15 [3H, singletti]; 3,67 [3H, singletti]; 3,73 [3H, singletti]; 20 4,53 [IH, dubletti, J - 5,0 Hz]; 4,64 [1H, singletti]; 5,13 [1H, dubletti, J - 2,2 Hz]; 6,06 [1H, dublettien dubletti, J - 2,2 & 5,0 Hz]; 6,47 [1H, singletti]; 25 7,33 [1H, singletti], ESIMERKKI 33

Dimetwli-6-desamino-2-(N*,N*-dimetvvliaminometvleeni)-amino-6-hvdroksi-30 eriseolaatti 477 mg dimetyyli-2-(Ν'-dimetyyliaminometyleeni)aminogriseolaattia (valmistettu esimerkissa 32 esitetysti) liuotettiin 50 millilitraan etikkahapon 80 % v/v vesiliuosta. Tahan lisåttiin 1,34 g natriumnitriit-35 tia liuosta jåissa kylmana pitåen, jonka jålkeen seoksen annettiin seisoa huoneen låmpotilassa 17 tuntia. Sen jålkeen, kun låhtomateriaalin katoa- 107 90 42 7 minen oli varmistettu ohutkerroskromatografisesti, liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jåånndkseen lisåttiin etanolia, joka tåmån jålkeen poistettiin tislaamalla, ja tåtå etanolin lisååmistå ja tislaamalla poistamista toistettiin niin monta kertaa, ettei etikkahapon 5 hajua voitu enaa havaita. Jaånnds liuotettiin seokseen, joka kasittåå 50 ml metyleenikloridia, 20 ml vetta ja 5 ml natriumbikarbonaatin 5 % w/v vesiliuosta. Orgaaninen kerros erotettiin ja se uutettiin kolmasti, kulloinkin 30 millilitralla metyleenikloridia, ja saadut uutteet yhdis-tettiin. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jåånnos 10 puhdistettiin kromatografisesti kåyttåen valmiiksi pakattua silikageeli-kolonnia (Merck), jota eluoitiin 10 % v/v metanolia sisåltåvålla mety-leenikloridilla. Varsinaiset fraktiot otettiin talteen ja lyofilisoitiin bentseenistå, jolloin otsikon mukaista yhdistettå saatiin 310 mg valkoi-sena jauheena.

15

Ultraviolettisåteilyn absorptiospektri (metanoli) λ max: hapan: 292 nm neutraali: 300 nm 20 emåksinen: 279 nm.

ESIMERKKI 34 2-amino-6-desamino-6-hvdroksigriseoliinihappo 25 130 mg dimetyyli-6-desamino-2-(N',N'-dimetyyliaminometyleeni)amino-6-— hydroksigriseolaattia (valmistettu esimerkisså 33 kuvatusti) liuotettiin 20 millilitraan ammoniakin våkevåå vesiliuosta, ja seoksen annettiin seisoa huoneen låmpdtilassa 3 tuntia. Liuos haihdutettiin kuiviin alenne-30 tussa paineessa, ja jaånnds liuotettiin 10 millilitraan vettå. Tuloksena olevan liuoksen pH asetettiin arvoon 2,3, jonka jalkeen se kasiteltiin kromatografisesti kåyttåen valmiiksi pakattua RP-8-kromatografiakolonnia (Merck), joka pestiin vedellå, ja jota eluoitiin 5 % v/v asetonitriiliå sisåltåvålla vedellå. Varsinaiset fraktiot otettiin talteen ja lyofi -35 lisoitiin, jolloin saatiin 67 mg otsikon mukaista yhdistettå valkoisena jauheena.

108 90 427

Ultraviolettisåteilyn absorptiospektri (H2) λ max: hapan: 225 nm, 273 nm ("olkapåå") neutraali: 253 nm, 278 nm ("olkapåå") 5 emåksinen: 264 nm.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [ (CD3)2S0] S ppm 4,48 [IH, singletti]; 10 4,53 [IH, dubletti, J - 4,9 Hz]; 5,07 [IH, dubletti, J - 2,4 Hz]; 5,79 [IH, dublettien dubletti, J — 2,4 & 4,9 Hz]; 6,25 [IH, singletti]; 7,87 [IH, singletti], 15

Ohutkerroskromatografia (saadun yhdisteen Rf-arvon ja griseoliinihapon Rf-arvon, joka asetetaan arvoksi 1,0, vålinen suhde):

Silikageelillå påållystetty levy (Merck): 0,80 (kehitysliuoksena vesi: 20 metanoli: asetonitriili 70:15:15, tilavuusosina); Kåånteisfaasilla RP-8 påållystetty levy (Merck): 1,44 (kehitysliuos: vesi, joka sisåltaa 2 % v/v asetonitriiliå ja 0,02 % v/v etikkahappoa).

. 25 ESIMERKKI 35

Metvvli-2-amino-6 -desamino-6-hydroksieriseolaatti 30 418 mg hopeaperkloraattla lisåttiin suspensioon, joka kåsitti 400 mg 2- amino-6-desamino-6-hydroksigriseoliinihappoa (valmistettu esimerkisså 34 kuvatulla tavalla) 40 millilitrassa metanolia, ja tuloksena olevaan seokseen lisåttiin 0,187 ml metyylijodidia, seosta koko ajan huoneen låmpotilassa sekoittaen. Seosta sekoitettiin jatkuvasti huoneen låmpo-35 tilassa edelleen 2,5 tuntia, jonka jalkeen siihen lisåttiin jålleen 0,126 ml metyylijodidia. Tuloksena olevaa seosta sekoitettiin edelleen 8 109 90427 tuntia, jonka jålkeen se laitettiin yoksi jaåkaappiin. Erottunut liu-kenematon materiaali erotettiin suodattamalla, ja metanoli poistettiin tislaamalla alennetussa palneessa. Jåånnos liuotettiin veteen ja tulokse-na olevan liuoksen pH asetettiin arvoon 1,38 kloorivetyhapon våkevålla 5 vesiliuoksella, ja liuos puhdistettiin kromatografisesti valmiiksi pakatun RP-8-kolonnin (Merck) lapi johtaen, kåyttåen eluenttina 5 % v/v asetonitriiliå sisaltavaå vettå. Saatu påaasiallinen fraktio pakaste -kuivattiin, jolloin otsikon mukaista yhdistetta saatiin 170 mg valkoisena jauhemaisena aineena.

10

Ultraviolettisåteilyn absorptiospektri (H20) λ max: hapan: 257,5 nm, 280 nm ("olkapaa") neutraali: 253,5 nm, 275 nm ("olkapåå") 15 emåksinen: 265 nm.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2S0] δ ppm 4,53 [IH, dubletti, J - 5,4 Hz]; 20 4,59 [IH, singletti]; 5,09 [IH, dubletti, J - 2,0 Hz]; 5,80 [IH, dublettien dubletti, J - 2,0 & 5,4 Hz]; 6,25 [IH, singletti]; ' 7,88 [IH, singletti].

25 ESIMERKKI 36 2-amino-6-desamino-6-hvdroksipriseoliinihapon monoamidi 30

Liuoksen, joka kasitti 120 mg metyyli-2-amino-6-desamino-6-hydroksi-griseolaattia (valmistettu esimerkissa 35 esitetysti) 20 millilitrassa ammoniakin 20 % v/v metanoliliuosta, annettiin seisoa yon yli. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, ja jaannos liuo-35 tettiin 3 millilitraan natriumhydroksidin 1 N vesiliuosta. Tuloksena olevan liuoksen pH asetettiin arvoon 1,8-1,9 lisaamallå siihen kloori- no 90427 vetyhapon våkevåå vesiliuosta, jåisså kylmånå pitåen, jolloin saatiin muodostetuksi in s i tu geelimåistå materiaalia. Tåmån jålkeen se liuo-tettiin noin 20 millilitraan vettå asettamalla pH arvoon 0,5. Sit ton tuloksena olevan liuoksen pH asetettlin arvoon 1,0 lisååmållå natrium-5 bikarbonaatin vesiliuosta. Liukenematon materiaali suodatettiin pois, ja jåånnds puhdistettiin pylvåskromatografisesti valmiiksi pakatun RP-8-kolonnin (Merck) låpi johtaen, ja kåyttåen eluenttina 5 % v/v aseto-nitriiliå sisåltåvåå vettå. Varsinainen fraktio pakastekuivattiin, jolloin saatiin 79 mg otsikon mukaista yhdistettå.

10

Ultraviolettisåteilyn absorptiospektri (H20) Amaxnm (ε): hapan: 257 (12100), 280 ("olkapåå") (8400); neutraali: 252 (13700), 277 ("olkapåå") (8800); 15 emåksinen: 264 (12400).

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2S0] 6 ppm: 4,32 [IH, singletti]; 20 4,50 [IH, dubletti, J - 4,9 Hz]; 5,05 [IH, dubletti, J - 2,0 Hz]; 5,80 [IH, dublettien dubletti, J - 2,4 & 4,9 Hz]; 6,24 [IH, singletti]; 7,78 [IH, singletti], 25 ESIMERKKI 37 N^metwli^* -desoksi-4' .5' -dihvdropriseoliinihappo 30 1 ml metyylijodidia lisåttiin liuokseen, joka kåsittåå 100 mg 7'-desoksi- 4'ct,5'-dihydrogriseoliinihappoa 20 millilitrassa dimetyyliformamidia, ja tåmån seoksen annetaan seisoa huoneen låmpotilassa 24 tuntia umpinaisessa astiassa. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin jåånnos. Jåånnokseen lisåttiin 10 ml asetonia ja 10 ml tolueenia, 35 ja seos våkevoitiin haihduttamalla alennetussa paineessa. Tåmå toimenpide toistettiin kahdesti. Liuos, joka kåsitti tuloksena olevan jåånnoksen 20 in 90427 millilitrassa 0,5 M fosfaattipuskuria, pH 7,0, sekoitettiin 3 tuntia palautusjååhdyttåen, jolloin saatiin reaktioseos, joka puolestaan puhdis-tettiin pylvåskromatografIsesti kåyttåen valmiiksi pakattua RP-8-kolonnla (Merck), jonka jålkeen saatu pååasiallinen fraktio lyofilisoitiin, 5 jolloin saatiin 67 mg otsikon mukaista yhdistettå valkoisena jauheena.

Ultraviolettisåteilyn absorptiospektri (ε) Amax: pH 1,0 262 nm (17700); 10 H20 264 nm (16700); pH 13 266 nm (17100).

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [ (CD3)2SO+D20] S ppm: 15 2,28-2,31 [2H, multipletti]; 2,80-3,03 [5H, multipletti]; 4,37-4,46 [3H, multipletti]; 6,16 [IH, singletti]; 8,26 [IH dubletti] ; 20 8,28 [IH, singletti], VALMISTUS 1

Dimetwligriseolaatti 25 700 mg griseoliinihappoa liuotettiin 100 millilitraan dimetyyliformami-dia, jåisså kylmånå pitåen. Liuosta, joka kåsitti 1,0-1,2 millimoolia diatsometaania 1 millilitrassa dietyylieetteriå, lisåttiin sekoittaen tåhån liuokseen niin paljon, kunnes keltainen våri osoitti diatsometaanin 30 låsnåolon. Sitten seoksen annettiin seisoa 10 minuuttia. Tåmån jfilkeen seokseen lisåttiin etikkahappoa ylimåaråisen diatsometaanin hajottami-seksi, jonka jålkeen se poistettiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin jåånnos. Jåånnds liuotettiin metanoliin, ja liukenematon materiaali erotettiin suodattamalla. Suodos haihdutettiin alennetussa 35 paineessa, jolloin saatiin jåånnos, joka kiteytettiin uudestaan vedestå, jolloin saatiin 540 mg otsikon mukaista yhdistettå.

112 90 42 7

Ultraviolettisåteilyn absorptiospektri (metanoli) Amax nm: 258 (c - 15600).

5 Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2SO] 6 ppm: 4,60 [IH, dubletti, J - 6,0 Hz); 4.66 [IH, singletti]; 5,12 [IH, dubletti, J - 3,0 Hz]; 10 6,06 [IH, dublettien dubletti, J - 3,0 & 6,0 Hz]; 6,53 [IH, singletti]; 8,33 [IH, singletti]; 8,37 [IH, singletti].

15 VALMISTUS 2

Dlmetwli-02'. O7'-diasetvvligrlseolaatti 10 g dimetyyligriseolaattia (valmistettu valmistuksessa 1 esitetysti) 20 liuotettiin pyoreåpohjaisessa pullossa 150 millilitraan pyrimidiiniå, ja siihen lisåttiin 33 ml asetanhydridiå jåisså kylmånå pitåen. Seoksen annettiin seisoa huoneen låmpotilassa 2 tuntia. Tåmån ajan pååtyttyå reaktioseokseen lisåttiin 15 ml vetta sitå jaissa kylmånå pitaen, ja liuotin poistettiin haihduttamalla alennetussa paineessa. Jåånnos liuo-25 tettiin 400 millilitraan metyleenikloridia, ja tuloksena oleva liuos pestiin 400 millilitralla kloorivetyhapon 1 N vesiliuosta, 400 milli-litralla vetta ja 400 millilitralla natriumbikarbonaatin kyllåista vesiliuosta, tasså jarjestyksesså. Tåmån jålkeen liuos uutettiin kahdesti metyleenikloridilla. Metyleenikloridiuutteet kuivattiin vedettomållå 30 magnesiumsulfaatilla, ja liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 6,70 g otsikon mukaista yhdistettå kiteinå.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2SO] S ppm: 35 5,17 [IH, dubletti, J - 3,0 Hz]; 5.66 [IH, dubletti, J - 6,0 Hz]; 113 90 42 7 5.73 [IH, singletti]; 6,31 [IH, dublettien dubletti, J - 3,0 & 6,0 Hz]; 6,89 [IH, singletti]; 8,23 [IH, singletti]; 5 8,36 [IH, singletti], VALMISTUS 3

Dimetvvli-O2' .O7'-diasetvvli-6-desamino-6-hvdroksigriseolaatti 10 2,55 g natriumnitriittiå lisåttiin liuokseen, joka kåsitti 1,82 g dime-tyyli-O2’,07'-diasetyyligriseolaattia (valmistettu valmistuksessa 2 kuvatusti) etikkahapon 80 % v/v vesiliuoksessa, liuosta jåisså kylmånå pitåen, ja seoksen annettiin seisoa 16 tuntia tiukasti suljetussa astias-15 sa. Tåsså vaiheessa voitiin todeta ohutkerroskromatografisesti, ettå låhtdmateriaalia oli jåljellå reaktioseoksessa. Seokseen lisåttiin edelleen 1 g natriumnitriittiå ja seoksen annettiin seisoa 3 tuntia. Liuos poistettiin haihduttamalla, ja saatu jåånnds liuotettiin asetoniin. Seokseen lisåttiin tolueenia, jonka jålkeen se poistettiin tislaamalla. 20 Tåmå toimenpide toistettiin kolmasti.

Jåånnos liuotettiin veden ja kloroformin seokseen. Orgaaninen kerros pestiin natriumbikarbonaatin vesiliuoksella ja natriumkloridin kyllåi-. . sellå vesiliuoksella, ja sitten se kuivattiin vedettomållå magnesium- 25 sulfaatilla. Liuottimen haihduttaminen tuotti vaaleanruskeata lasimaista ainetta. Tåmå aine puhdistettiin kromatografisesti silikageelikolonnilla, jonka jålkeen se liuotettiin pieneen mååråån asetonia. Liuokseen lisåttiin asianmukainen måårå bentseeniå, ja seoksen annettiin seisoa. Tulok-sena olevat valkoiset kiteet otettiin talteen suodattamalla, jolloin 30 saatiin 1,28 g otsikon mukaista yhdistettå hienoina valkoisina kiteinå.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [ (CD3)2SO] S ppm: 5,22 [IH, dubletti, J - 3,0 Hz]; 35 5,62 [IH, dubletti, J - 6,0 Hz]; 5.73 [IH, singletti]; 90427 114 6,13 [IH, dublettien dubletti, J - 3,0 & 6,0 Hz]; 6.88 [IH, singletti]; 8,18 [IH, singletti]; 8,34 [IH, singletti].

5 VALMISTUS 4 6-desamino-6-hvdroksigriseoliinihappo 10 Liuos, joka kåsitti 5,31 g griseoliinihappoa etikkahapon 80 % v/v vesi-liuoksessa, valmistettiin kuumentamalla, jonka jålkeen sen annettiin jååhtyå huoneen låmpotilaan. Seokseen lisåttiin 9,60 g natriumnitriittiå typpi-ilmakehåsså. Seoksen annettiin seisoa 16 tuntia tiukasti suljetussa astiassa. Liuotin poistettiin seoksesta haihduttamalla alennetussa 15 paineessa, jolloin saatiin jåånnds. Tilhån jåånnokseen lisåttiin etanolia, jonka jålkeen se poistettiin tislaamalla. Tåmå toimenpide toistettiin niin moneen kertaan, ettei seoksessa voitu enåå todeta etikkahapon hajua. Jåånnos liuotettiin 50 millilitraan vettå ja sen pH asetettiin arvoon 1,0 våkevållå kloorivetyhapolla, sitå jåisså kylmånå pitåen. Seoksen annet-20 tiin seisoa 16 tuntia jååkaapissa, ja tuloksena oleva saostuma otettiin talteen suodattamalla, pestiin pienellå måårållå vettå, ja kiteytettiin uudestaan veden ja asetonin seoksesta, jolloin saatiin 1,66 g otsikon mukaista yhdistettå. Emåliuos våkevdimållå saatiin 2,20 g raakakiteitå, jotka kiteytettiin samoin uudestaan, jolloin saatiin edelleen 1,2 g 25 otsikon mukaista yhdistettå.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2SO] S ppm: 4.50 [IH, singletti]; 30 4,57 [IH, dubletti, J - 6,0 Hz]; 5,12 [IH, dubletti, J - 3,0 Hz]; 5.88 [IH, dublettien dubletti, J — 3,0 & 6,0 Hz]; 6.50 [IH, singletti]; 8,17 [IH, singletti]; 35 8,33 [IH, singletti].

115 90427 VATMTSTUS 5

Dimetyvli-å-desamino-S-hydroksi-Vfl-kloori-S1 -hydro-O2’.O7' -dlasetvvli-grlseolaatti 5 4 g dimetyyli-O2’ ,Q7’-diasetyyli-6-desamino-6-hydroksigriseolaattia (valmistettu valmistuksessa 3 kuvatusti) ja 40 ml etikkahappoa, joka sisålsi 4 % w/v kloorivetyå, laitettiin typpi-ilmakehåsså kaksikaula-pulloon, joka oli varustettu jååhdyttimellå. Seosta låmmitettiin 80°C:n 10 låmpbtilassa 2 tuntia, jonka jålkeen liuotin poistettiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin jåånnos. Jåånnds liuotettiin tolueeniin ja metyleenikloridiin, jotka poistettiin tåmån jålkeen alennetussa paineessa. Tåmå toimenpide toistettiin kolmasti. Jåånnds puhdis-tettiin kromatografisesti silikageelikolonnilla, kåyttåen 4 % v/v meta-15 nolia sisåltåvåå metyleenikloridia eluenttina, jolloin saatiin 2,0 g otsikon mukaista yhdistettå.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CD3)2S0] S ppm: 20 3,32 [IH, dubletti, J - 15,0 Hz]; 3,75 [IH, dubletti, J - 15,0 Hz]; 5.28 [IH, dubletti, J - 4,5 Hz]; 6,00 [IH, singletti]; 6.28 [IH, dublettien dubletti, J - 4,5 & 5,9 Hz]; 25 6,55 [IH, dubletti, J - 5,9 Hz]; 8,18 [IH, singletti]; 8,47 [IH, singletti], VALMISTUS 6 30

Dimetvvli-6-desamino-6-hvdroksi-02' .O7'-diasetvvli-4'fl-bromi-5'-hvdro-griseolaatti

Seos, joka kåsitti 500 mg dimetyyli-O2’ ,07’-diasetyyli-6-desamino-6-35 hydroks igr iseolaattia (valmistettu valmistuksessa 3 kuvatulla tavalla) ja 10 ml 10 % w/v bromivetyhappoa sisåltåvåå etikkahappoa, laitettiin 116 90427 astiaan, joka suljettiin, ja yhdiste lluotettiin kåsittelemållå seosta ultraååniaalloilla 30 minuuttia. Sitten liuoksen annettiin seisoa huoneen låmpétilassa 64 tuntia. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin jåånnds, johon lisåttiin asetonia ja toluee-5 nia, jotka liuottimet poistettiin sitten tislaamalla. Tåmå toimenpide toistettiin kolmasti. Seos, joka kåsitti tuloksena olevan jåånnbksen 30 millilitrassa etyyliasetaattia, kåsiteltiin ultraååniaalloilla, ja suodatettiin liukenemattoman materiaalin talteenottamiseksi. Tåmå materi-aali liuotettiin seokseen, joka kåsitti 30 ml etyyliasetaattia ja 30 ml 10 natriumbikarbonaatin 5 % w/v vesiliuosta, ja erotettiin. Orgaaninen kerros pestiin 20 millilitralla natriumkloridin kyllåistå vesiliuosta ja kuivattiin vedettdmållå magnesiumsulfaatilla. Liuos haihdutettiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin jåånnos, joka puolestaan puhdistettiin kromatografisesti silikageelikolonnilla kåyttåen eluenttina metyleeniklo-15 ridia, joka sisålsi 3 % v/v metanolia. Liuotin poistettiin varsinaisesta fraktiosta haihduttamalla alennetussa paineessa, ja jåånnos liuotettiin bentseeniin. Bentseeniliuos lyofilisoitiin, jolloin otsikon mukaista yhdistettå saatiin 60 mg valkoisena jauheena.

20 Ydinmagneettisen resonanssin spektri [ (CD3)2SO] S ppm: 2,98 [IH, dubletti, J - 15,6 Hz]; 3.47 [IH, dubletti, J - 15,6 Hz]; 5,35 [IH, dubletti, J - 4,2 Hz]; 25 5,57 [IH, singletti]; 6,32 [IH, dublettien dubletti, J - 6,6 & 4,2 Hz]; 6,53 [IH, dubletti, J - 6,6 Hz]; 8,17 [IH, singletti]; 8.47 [IH, singletti], 30 VALMISTUS 7

Dimetvvli - 6 -desamino - 6 -hvdroks 1-4^,51 - dihvdro - O2' ,07' - diase tvvl i -priseolaatti 35 117 90427 500 mg dimetyyli-6-desamino-6-hydroksi-4'/)-kloori-5'-hydro-O2’ ,07' -diase-tyyligrise°laattia (valmistettu valmistuksessa 5 kuvatusti) ja 10 mg 2,2'-atsobisisobutyronitriiliå laitettiin kaksikaulapulloon ja liuotot-tiin 20 millilitraan bentseeniå typpi-ilmakehåsså. Tåhån liuokseen 5 lisåttiin 3,1 ml tributyltinhydridiå måntåruiskulla, ja seosta sekoitet-tiin palautusjååhdyttåen 2 tuntia. Tåmån ajan pååtyttyå liuotin poistet-tiin haihduttamalla alennetussa paineessa. Jåånnds liuotettiin mety-leenikloridiin ja se puhdistettiin kromatografisesti silikageelikolonnil-la, jota eluoitiin 3 % v/v metanolia sisåltåvållå metyleenikloridilla. 10 Varsinaiset fraktiot våkevoitiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 350 mg otsikon mukaista yhdistettå.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri [(CDC13 + D20] S ppm: 15 2,40-2,70 [2H, multipletti]; 5,00 [IH, dubletti, J - 4,5 Hz]; 5,62 [IH, singletti]; 5,88 [IH, dublettien dubletti; J - 4,5 & 7,5 Hz]; 6.48 [IH, dubletti, J - 7,5 Hz]; 20 8,13 [IH, singletti]; 8.48 [IH, singletti].

VALMISTUS 8 25 Dihvdrodesoksigriseoliinihappo

Ensin valmistettiin 30 litraa alustaa, jonka pH ennen sterilointia on 7,0 ja jonka koostumus on seuraava (prosenttiset osuudet ilmoitetaan painona tilavuusyksikkoå kohden, w/v): 30 glukoosi 5 % soijajauho 1 % hiivauute 0,1 % polypeptoni 0,4 % 35 lihauute 0,4 % natriumklorid! 0,25 % 118 90427 kalsiumkarbonaatti 0,5 % vesi, tåydennetåån 100 prosentiksi.

15 litraa tåtå alustaa laitettiin kulloinkin kahteen 30 litran såilio-5 fermentoriin, joita steriloitiin tåmån jålkeen paineen alaisuudessa, 120°C:n låmpdtilassa 30 minuuttia. Viljelyalusta jååhdytettiin, jonka jålkeen kumpaankin fermentoriin siirrostettiin 150 ml (1 tilavuus-%) Streptomvces griseoaurantiacus SANK 63479-kannan viljelmåå (joka oli valmistettu tåtå ennen inkuboimalla kantaa mainitussa alustassa pitåen 10 viljelmåå pyorosekoittimessa 28°C:n låmpotilassa 72 tuntia). Kantaa viljeltiin 28°C:n låmpotilassa 96 tuntia ilmastaen nopeudella 15 litraa minuutissa, ja sekoittaen nopeudella 200 rpm.

Sitten nåmå kaksi viljelyalustaa suodatettiin myseelin poistamiseksi, ja 15 yhdistetty suodos, jonka kokonaistilavuus oli 28 litraa ja pH 7,0, johdettiin Diaion HP 20-kolonnin (yhtion Mitsubishi Chemical Industries Ltd. valmistamalle ioninvahtohartsille annettu tavaramerkki) låpi, ja adsorboitiin tåmån jålkeen aktiivihiilellå tåytettyyn kolonniin. Tåmå kolonni pestiin vedellå, ja sitten adsorboitunut materiaali eluoitiin 20 asetonin ja veden 60:40 (tilavuusosina) seoksella. Asetoni haihdutettiin tuloksena olevasta liuoksesta alennetussa paineessa, ja jåljelle jåånyt vesiliuos våkevditiin haihduttamalla alennetussa paineessa, ja lyofi-lisoitiin, jolloin saatiin 150 mg raakajauhetta.

25 Tåmå raakajauhe liuotettiin pieneen mååråån tislattua vettå ja adsorboitiin sitten Dowex lx4-hartsiin (Cl‘-muodosssa; yhtion Dow Chemical Company tuottaman ioninvaihtohartsin tavaramerkki). Tåsså vaiheessa tuote oli seos, joka kåsitti griseoliinihappoa ja dihydrodesoksigriseoliini-happoa. Tåmå seos eluoitiin kåyttåen natriumkloridin avulla aikaansaatua 30 gradienttia nåiden kahden komponentin erottamiseksi, jonka jålkeen eluaattia kåsiteltiin pylvåskromatografisesti kåyttåen Sephadex LH-20-kolonnia (yhtion Pharmacia tavaramerkki) ja tåstå kolonnista dihydro-desoksigriseoliinihappo eluoitiin vedellå. Tåtå ainetta sisåltåvåt fraktiot yhdistettiin, ja niiden pH asetettiin arvoon 2,5 lisååmållå 35 kloorivetyhapon 1 N vesiliuosta. Tåmån jålkeen tuote adsorboitiin Diaion HP 20-kolonniin, pestiin vedellå ja eluoitiin sitten asetonin ja veden 119 90427 60:40 (tilavuusosina) seoksella. Eluaatin annettiin seistå yon yli 4°C:n låmpotilassa, jolloin dihydrodesoksigriseoliinihappo erottui liuskamaise-na materiaalina. Tåmå materiaali erotettiin nesteestå, jolloin saatiin yhteenså 1,87 mg dihydrodesoksigriseoliinihappoa valkeina liuskoina, 5 joiden sulamispiste on 160°C (hajoaa tåsså låmpotilassa, vårjåytyen ruskeaksi). Tållå yhdisteellå saatiin yksi ainoa tåplå silikageelillå toteutetulla ohutkerroskromatografialla (silikageelin tuotenumero 5715, yhtion Merck & Co. Inc. tuote).

10

Claims (3)

120 90 427

1. Kaavan (XL) mukainen yhdiste: 5 m KCX cV> 10 Rs R5 n dp, Rx (XU 20 jossa: : R1 ja R2 valitaan toisistaan riippumatta ryhmåstå, joka kåsittåå vety- atomin ja kaavan -OR9 mukaiset ryhmåt;

25 R3 ja Ra valitaan toisistaan riippumatta ryhmåsta, joka kåsittåå karba-moyyliryhraiå ja karboksiryhmiå ja alempia alkoksikarbonyyliryhmiå, ja ·_ nåmå alemmat alkoksikarbonyyliryhmåt on valinnaisesti substituoitu fenyyli- tai bentshydryyliryhmållå;

30 R5 ja R6 tarkoittavat molemmat vetyatomia, tai ne muodostavat ylimååråisen hiili-hiili-sidoksen niiden hiiliatomien vålille, joihin ne ovat sitoutu-neet; R9 tarkoittaa vetyatomia, alempaa alkanoyyliryhmåå, bentsyyliryhmåå tai 35 bentsoyyliryhmåå; ja 121 90427 R30 tarkoittaa alempaa alkyyliryhmåå tai aralkyyliryhmåå; sekå nåiden yhdisteiden farmaseuttisesti hyvåksyttaviå suoloja ja este-reitå. 5

2. Dimetyyli-N1-bentsyylioksi-N6-syanogriseolaatti tai sen farmaseuttisesti hyvåksyttåvå suola tai esteri.

3. Dimetyyli-N6-syano-N1-metoksigriseolaatti tai sen farmaseuttisesti 10 hyvaksyttåvå suola tai esteri. 122 90 427