FI93643C - Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten 24-homo-D-vitamiinijohdannaisten valmistamiseksi - Google Patents

Description

93643

Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten 24-homo-D-vitamiinijohdannaisten valmistamiseksi

Keksintö koskee uusien kaavan I mukaisten 24-homo-5 D-vitamiinijohdannaisten valmistusta 0H R1· rx

OlS V

2V

( 1 ) '

HO

15 jossa kaavassa R2 ja R3 merkitsevät toisistaan riippumatta metyyliä tai etyyliä tai ne muodostavat yhdessä hiiliatomin kanssa, johon ne ovat liittyneet, syklopropyyli- tai syklopentyy-20 liryhmän. Näillä yhdisteillä on proliferaatiota estävä vaikutus.

Edullisia kaavan I mukaisia yhdisteitä ovat ne, joissa R2 ja R3 merkitsevät metyyliryhmää.

Erityisen edullisia ovat yhdisteet • 25 (5Z,7E,22E)-(IS,3R,24R)-9,10-seco-24a-homo-5,7,10(19),22- kolestatetraeeni-l,3,24-trioli ja (5Z,7E,22E)-(IS,3R,24S)-9,10-seco-24a-homo-5,7,10(19),22-kolestatetraeeni-1,3,24-trioli.

Luonnollisilla D2- ja D3-vitamiineilla tai niiden 30 biologisesti aktiivisilla metaboliiteilla (luonnolliset D2- ja D3-vitamiinit ovat biologisesti inaktiivisia ja aktivoituvat vasta maksassa 25-asemassa tapahtuneen hydrok- k 2 93643 siloinnin tai munuaisissa 1-asemassa tapahtuneen hydroksi-loinnin jälkeen) on karakteristisena tunnusmerkkinä kak-soissidos asemien C10 ja C19 välillä, jota pidetään ratkaisevana D-vitamiinin aktiviteetille (vrt.yleinen kaava V).

5 D2- ja D3-vitamiinien vaikutus perustuu plasma-Ca*+- ja plasma-fosfaattitason stabiloitumiseen; niillä on vastavaikutusta plasmatason laskuun.

r?H,

Rb (V)

Ergokalsiteroli: R*=Rb=H, Rc=CH3,D2D D2-vitamiini 20 Kaksoissidos C-22/23

Kolekalsiteroli: Ra=Rb=Rc=H D3-vitamiini 25-hydroksikolekalsiteroli: R“«RC*H, Rb= OH Ια-hydroksikolekalsisteroli: R*«0H, Rb=Rc=H la,25-dihydroksikole 25 kalsiteroli: R*=Rb=0H, RC=H kalsitrioli

Kalsium- ja fosfaattiaineenvaihduntaan kohdistuvan erinomaisen vaikutuksen ohella D2- ja D3-vitamiineilla ja niiden synteettisillä johdannaisilla on myös solujen uu-30 diskasvua estävä vaikutus ja lisäksi ne vaikuttavat solujen erilaistumiseen (H.F. De Luca, The Metabolism and «

Function of Vitamin D in Biochemistry of Steroid Hormones, 93643 3

Hrsg. H.L.J. Makin. 2nd Edition, Blackwell Scientific Publications 1984, S. 71 - 116). D-vitamiinin käytössä voi kuitenkin esiintyä yliannostelusta johtuvia sivuvaikutuksia (hyperkalsemia eli veren liiallinen kalk-5 kipitoisuus).

24-asemassa hydroksiloidut Ια-kolekalsiferolit tunnetaan patenttijulkaisusta DE-A 25 26 981; niiden toksisuus on vähäisempää kuin vastaavan ei-hydroksiloidun la-kolekalsiferolin toksisuus. Hydroksiloitujen yhdisteiden 10 vaikutuksesta kalsiumin suolistosta imeytymisessä tapahtuu valikoivaa aktivoitumista ja luustoon kohdistuva absorpti-ovaikutus on heikompi kuin la-kolekalsiferolilla.

Kansainvälisessä patenttihakemuksessa W0 87/00834 kuvattuja 24-hydroksi-D-vitamiini-analogeja voidaan käyt-15 tää epänormaalista solun uudiskasvusta ja/tai solujen erilaistumisesta johtuvien häiriöiden hoitoon ihmisillä ja eläimillä.

De Luca on äskettäin maininnut eri 1,25-dihydroksi-homo-D-vitamiinijohdannaisten kohdalla eroa luustoon koh-20 distuvassa absorptiossa ja HL-60-solujen erilaistumisessa. Luustoon kohdistuva absorptiovaikutus in vitro on tällöin suorana mittana kalsiumin mobilisaatiolle in vivo.

Nyt on havaittu, että yleisen kaavan I mukaisilla, 24-homo-D-vitamiinijohdannaisilla on D-vitamiini-johdan-* 25 naiseen kalsitrioliin (la,25-dihydroksikolekalsiferoli) verrattuna yllättäen edullisempi vaikutusspektri. Koska kalsium- ja fosfaattiaineenvaihduntaan kohdistuvat vaikutukset ovat selvästi heikompia (yliannostelusta tai tarpeellisesta korkeasta annostuksesta johtuvien sivuvaiku-30 tustan väheneminen) säilyvät solujen uudiskavua estävät ja solujen erilaistumiseen kohdistuvat vaikutukset lähes ennallaan . (dissosiaatio).

k 4 93643

Kaavan I mukaisten yhdisteiden D-vitamiini-aktivi-teetti määritetään kalsitrioli-reseptoritestin avulla. Se suoritetaan käyttäen riisitautia sairastavien kanojen suolesta saatua spesifistä reseptoriproteiinia. Reseptoria 5 sisältävää sitojaproteiinia inkuboidaan 3H-kalsitriolin (0,5 ng/ml) kanssa reaktiotilavuuden ollessa 0,575 ml testiaineiden läsnäollessa tai ilman testiaineita 1 tunnin ajan koeputkessa. Vapaasta ja reseptoriin sitoutuneesta kalsitriolista erottamiseksi suoritetaan puuhiili-deks-10 traani-absorptio. Tätä tarkoitusta varten jokaiseen koeputkeen lisätään 200 μΐ puuhiili-dekstraani-suspensiota ja inkuboidaan 22 °C:ssa 30 minuutin ajan. Lopuksi näytteitä sentrifugoidaan 1500xg nopeudella 10 minuuttia 4° C:ssa. Päälläoleva kerros dekantoidaan ja sen jälkeen kun on an-15 nettu tasapainottua noin 1 tunnin ajan, mitataan atomi-valossa B-laskijalla.

i Testiaineen sekä vertailuaineen (leimaamaton kalsi- trioli) eri konsentraatioilla saatuja kompetiitio- eli kilpailukäyriä, jotka kuvaavat 3H-merkityn vertailuaineen 20 syrjäyttämistä, verrataan toisiinsa ja näin saadaan kompe-tiitiotekijä (KF). Se on määritelty kunkin testiaineen ja vertailuaineen 50-%:seen kompetiitioon tarvittavien kon-sentraatioiden osamääräksi: , 25 Testiaineen konsentraatio kompetiition ollessa 50 % KF= -

Vertailuaineen konsentraatio kompetiition ollessa 50 % Tämän mukaisesti (5Z,7E,22E)-(IS,3R,24R)-9,10-seco-30 24a-homo-5,7,10(19),22-kolestatetraeeni-l,3,24-triolin (yhdiste A) kilpailu- eli kompetiitioarvo on 67 ja (5Z,7E,22E)-(IS,3R,24S)-9,10-seco-24a-homo-5,7,10(19),22- li 5 93645 kolestatetraeeni-1,3,24-triolin (yhdiste B) kompetitioarvo on 0,8.

Kaavan I mukaisten yhdisteiden solujen uudiskasvua estävän vaikutuksen määrittämiseksi suoritetaan seuraavas-5 sa kuvattu testi käyttäen testiaineina yhdisteitä A ja B: Vastasyntyneiden hiirien ihon pintakerroksen solut preparoidaan muunnellen julkaisussa "Yuspa, S. und Harris, C.C., "Altered differentiation of mouse epidermall cells treated with retinyl acetate in vitro", Exp. Cell Res. 10 86:95-105, 1974" kuvattua menetelmää ja suoritetaan vil jely. Kumpaakin sukupuolta olevat vastasyntyneet NMRI-hii-ret tapetaan poistamalla pää, iho preparoidaan, pestään antibiootti-antimykootti-liuoksessa ja inkuboidaan ihopuo-len ollessa alaspäin Dispase-II-liuoksessa (1,2 U/ml ku-15 dosviljelyväliaineessa M199 + 25 mmol/1 HEPES + 15 % naudan sikiön seerumia (FCS) + 50 U/ml penisilliini/strepto-mysiiniä (P/S) (preparointiväliaine PM) 4 eC:ssa yön ajan. Ihon pintakerros poistetaan ja käsittelemällä trypsiinillä valmistetaan kertasolususpensio. Sentrifugoinnin jälkeen 20 solusedimentti suspensoidaan uudelleen, ja sen jälkeen kun trypaanisinen on annettu vaikuttaa, määritetään elävien pienien pyöreiden solujen lukumäärä, ja solut pipetoidaan solutiheyden ollessa 4xl05 solua/cm2 Primaria-24-kuoppale-vyille kudosviljelyväliaineeseen (Ml99 + 15 % FCS + 50 ’25 U/ml P/S). Sen jälkeen, kun on inkuboitu 24 tunnin ajan 37 °C:ssa, solut pestään fosfaatilla puskuroidulla suolaliuoksella (PBS) ja inkuboidaan edelleen 24 tunnin ajan seerumivapaassa kudosviljelyväliaineessa (M199 + 50 U/ml P/S + 0,5 % etanolia) testiaineiden kanssa ja ilman testi-30 aineita 32,5 °C:ssa. Sitten lisätään 0,4 pCi/50pl 3H-metyy-li-tymidiiniä (40Ci/mmol). 4 tunnin kuluttua väliaine imu- < suodatetaan ja reaktio päätetään lisäämällä 500 μΐ jääkyl- 6 93643 mää, 10-%i:sta trikloorietikkahappoa (TCA). Solut pestään TCA:lla ja PBS:llä, liuotetaan inkuboimalla proteinaasi-K-liuoksessa (10 mmol/1 Tris-HCl, 10 mmol/1 EDTA, 10 mmol/1 NaCl, 0,2 % Triton-X 100, pH 8,0, 50pg/ml pro-5 teinaasi K) ja liuennut aines selvitetään sentrifugoimal-la. Radioaktiivisuus määritetään päälläolevasta kerroksesta skintillaatiofotometrisesti ja DNA:n diamidinofenyyli-indolilla (DAPI) tapahtuneen spesifisen värjäyksen jälkeen määritetään DNA-konsentraatio fluoresenssifotometrisesti.

10 Tämän mukaisesti kalsitrioli sekä yhdisteet A ja B

estävät annoksesta riippuen 3H-tymidiini-liittymisen DNA:hän lähes samoilla ICS0-arvoilla niiden ollessa kalsi-triolille 2,7 x 10'9 moolia/1, yhdisteelle A 6,0 x 10‘9 moo-lia/1, ja yhdisteelle B 9,5 x 10'9 moolia/1.

15 Pienentyneen hyperkalsemia-riskin johdosta keksin- nönmukaiset aineet soveltuvat erityisesti sellaisten lääkeaineiden valmistamiseksi, joita käytetään hoidettaessa sairauksia, joille on tunnusomaista hyperproliferaatio, esim. ihon hyperproliferatiiviset sairaudet (psoriasis) ja 20 pahanlaatuiset kasvaimet (leukemia, paksusuolisyöpä, rintasyöpä). Menestyksellisen hoidon edellytyksenä on kalsi-triolireseptorien osoittaminen kohde-elimestä.

Yhdisteet voidaan formuloida liuoksiksi farmaseuttisesti hyväksyttäviin liuottimiin tai emulsioiksi, sus-25 pensioiksi tai dispersioiksi sopiviin farmaseuttisiin liuottimiin tai kantajiin tai pillereiksi, tableteiksi tai kapseleiksi, jotka sisältävät tunnettuja kiinteitä kantajia. Paikallista käyttöä varten yhdisteet formuloidaan edullisesti voiteiksi tai salvoiksi tai vastaavaan, pai-30 kalliseen käyttöön sopivaan lääkemuotoon. Kaikki nämä for-mulaatiot voivat sisältää myös muita farmaseuttisesti hyväksyttäviä ja ei-toksisia apuaineita, kuten esim. stabi- 93643 7 lisaattoreita, antioksidantteja, sideaineita, väriaineita, emulgaattoreita tai makua parantavia aineita. Yhdisteet voidaan antaa edullisesti injektioon tai intravenöösiin infuusioon sopivina steriileinä liuoksina tai oraalisesti 5 ruoansulatuskanavan kautta (alimentary canal) tai paikallisesti voiteina, salvoina, lotioneina tai sopivien trans-dermaalisten laastareiden muodossa, kuten on kuvattu julkaisussa EP-A-0 387 077. Päivittäinen annos on 0,1 pg/potilas/päivä - 1000 pg(l mg)/potilas/päivä, edullises-10 ti 1,0 pg/potilas/päivä - 500 pg/potilas/päivä.

Kaavan I mukaisia 24-Homo-D-vitamiinijohdannaisia voidaan valmistaa siten, että yhdiste, jonka kaava on 0 15 * ί Λ (IV), 20 v R1 jossa R1 on suojattu hydroksiryhmä ja R4 on hydroksisuojaryhmä ja ’ 25 R2 ja R3 merkitsevät samaa kuin edellä, muutetaan pelkistämällä 24-karbonyylifunktio yhdisteeksi, jonka kaava on

?H X

I K

30 A 5/ (III), j U iL k* 8 93643 jossa R1 , R4 , R2 ja R3 merkitsevät samaa kuin edellä, ja saatu kaavan III mukainen yhdiste muutetaan säteilyttä-mällä ultraviolettivalolla kääntäen 5,6-kaksoissidoksen stereoisomeria yhdisteeksi, jonka kaava on 5 OH o*· (II), .

15 jossa R1 , R4 , R2 ja R3 merkitsevät samaa kuin edellä, minkä jälkeen saadusta kaavan II mukaisesta yhdisteestä poistetaan hydroksisuojaryhmät.

24-karbonyylifunktion pelkistys yleisen kaavan IV mukaisessa yhdisteessä tapahtuu esimerkiksi Cer(III)klori-20 di/natriumboorihydridillä polaarisessa liuottimessa. Pelkistyksessä muodostuu sekä yleisen kaavan III mukainen (24R)- että myös (24S)-24-hydroksi-isomeeri. Molemmat isomeerit voidaan erottaa kromatografisesti.

Yleisen kaavan III mukaisen yhdisteen muuttaminen 25 tämän jälkeen yleisen kaavan II mukaiseksi yhdisteeksi tapahtuu esim. säteilyttämällä ultraviolettivalolla niin sanotun "Triplettisensibilisaattorin" läsnäollessa. Esillä olevassa keksinnössä käytetään tällöin antraseenia. Lohkaisemalla 5,6-kaksoissidoksen π-sidos, kiertämällä A-ren-30 gasta 180°C:lla 5,6-yksinkertaisen sidoksen ympäri ja muo-. dostamalla uudelleen 5,6-kaksoissidos muuttuu 5,6-kaksois sidoksen stereoisomeria päinvastaiseksi.

Lopuksi esiintyvät hydroksisuojaryhmät lohkaistaan, edullisesti käyttäen tetra-n-butyyli-ammoniumfluoridia.

93643 9

Yleisen kaavan IV mukaisten lähtöyhdisteiden valmistus lähtee julkaisussa "Tetrahedron Letters 43, 4609 (1987)" tai kansainvälisessä patenttihakemuksessa W0 87/ 00834 von Calverley et ai. kuvaamista yhdisteistä, jotka 5 ovat tyypiltään seuraavanlaisia:

Ά f/H

10 i H

£ 0 joissa hydroksisuojaryhminä R1" ja R4" on dimetyyli-tert.-15 butyylisilyyliryhmä; myös muut trialkyylisilyyliryhmät ovat suojaryhminä mahdollisia.

Reaktio kaavan VI mukaisen fosforaanin kanssa o ^ 20 , | (VI) ^p^A(CHi)Xr* johtaa yleisen kaavan IV mukaisiin yhdisteisiin (Wittig-25 reaktio).

Seuraavat valmistusesimerkit selventävät lähemmin keksintöä.

Lähtöyhdisteiden valmistus I)Isobutyylikarbonyylimetyleenitrifenyylifosforaa- 30 ni 1 a) Bromimetyyli-isobutyyliketoni 50 ml:aan isobutyylimetyyliketonia 240 ml:ssa meta-nolia lisätään 0 °C:ssa 20 ml bromia ja sekoitetaan vielä 10 93643 1,5 tuntia 10 °C:ssa. Lopuksi lisätään 360 ml vettä ja sekoitetaan 16 tuntia huoneenlämpötilassa. Reaktioseokseen lisätään kyllästettyä keittosuolaliuosta, orgaaninen faasi erotetaan ja vesipitoinen faasi uutetaan eetterillä. Yh-5 distetyt orgaaniset faasit pestään 10-%:isella natriumkar-bonaattiliuoksella ja kuivataan kalsiumkloridilla. Suodattamisen jälkeen liuotin haihdutetaan ja jäännös tislataan.

* Saadaan 53,7 g bromimetyyli-isobutyyliketonia värittömänä öljynä; Kp15*20 67-69 °C.

10 b) Isobutyylikarbonyylimetyylitrifenyylifosfonium- bromidi 53.6 g bromimetyyli-isobutyyliketonia lisätään 78,5 g:aan trifenyylifosfiinia ja jäähdytetty reaktioseos kiteytetään uudelleen metyleenikloridi/eetterissä (1:2).

15 Saadaan 111,7 g fosfoniumbromidia, jonka sulamispiste on 244-245 *C.

c)Isobutyylikarbonyylimetyleenitrifenyylifosforaa- ni 1 111.6 g:aan isobutyylikarbonyylimetyylitrifenyyli- 20 fosfoniumbromidia 1500 ml:ssa metyleenikloridia lisätään 1500 ml 2N NaOH:ta ja sekoitetaan 30 minuuttia huoneenlämpötilassa. Orgaaninen faasi erotetaan, pestään vedellä ja kuivataan natriumsulfaatilla. Sen jälkeen kun on suodatettu ja liuos on haihdutettu, jäännös kiteytetään uudelleen 25 tert.-butyylimetyylieetterissä. Saadaan 72,2 g otsikonyh-distettä 1 sulamispisteen ollessa 120-121 °C. Vaihtamalla ketonikomponentteja reaktiovaiheessa a) voidaan valmistaa vastaavalla tavalla muita fosforaaneja, joilla on kaava 30 | Sfc (VI) Φ* P**/XCHi)/\rs n 93643 II) (Syklopropyylimetyyli)-(trifenyylifosforanyli-deeni)-ketoni-2 180 mg:aa litiumkloridia ja 540 mg kupari(I)klori-dia sekoitetaan typpiatmosfäärissä 9 mlrssa tetrahydrofu-5 +raania 1,5 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Sen jälkeen kun on jäähdytetty 10 °C:seen, lisätään 15,0 g (bromime-tyyli)-(trifenyylifosforanylideeni)-ketonia (M. Le Corre, C.R. Acad. Sc. (C) 273, 81 (1971)) 225 ml:ssa tetrahydro-furaania ja sekoitetaan 30 minuuttia. Lopuksi tiputetaan 10 29,5 ml noin 1,6 molaarista syklopropyylimagnesiumbromidi- liuosta tetrahydrofuraanissa (G.F. Reynolds et ai., J.Org. Chem. 23, 1217 (1958)) ja sekoitetaan 1,5 tunnin ajan samassa lämpötilassa. Edelleenkäsittelyä varten reaktioseos kaadetaan jäähän/kyllästettyyn ammoniumkloridiliuokseen ja 15 lopuksi uutetaan etikkahappoetyyliesterillä. Orgaaninen faasi kuivataan natriumsulfaatilla ja sitten haihdutetaan. Kromatografioimalla kiinteä jäännös silikageelillä käyttäen etikkahappoetyyliesteri/asetonia (3:1) saadaan 5,6 g otsikonyhdistettä 2, sulamispisteen ollessa 152 °C.

20 III) (5E,7E,22E)-(IS,3R)-1,3-bis-(tert.-butyylidi- metyylisilyylioksi-9,10-seco-24a-homo-5,7,10( 19), 22-koles-tatetraen-24-oni 8,0 g(lS,3R)-bis-(tert.-butyylidimetyylisilyyliok-si)-(20S)-formyyli-9,10-secopregna-(5E, 7E, 10(19) )-trieeniä 25 (Calverley Tetrahedron 43, 4609 (1987)) ja 12,0 g yhdistettä 1 sekoitetaan 46 mlrssa dimetyylisulfoksidia 6 tunnin ajan 105 eC:ssa typpiatmosfäärissä. Lopuksi reaktioseos laimennetaan etikkaesterillä huoneenlämpötilassa ja pestään keittosuolaliuoksella. Orgaaninen faasi kuivataan 30 natriumsulfaatilla ja suodatetaan. Sen jälkeen kun liuotin on poistettu, jäännös suodatetaan silikageelin läpi käyttäen tolueenia. Haihduttamalla liuotin ja gradienttikroma-tografioimalla (tolueeni/heksaani (1:1) -♦ tolueeni) jäännös silikageelillä saadaan tulokseksi 3,6 g otsikonyhdis-35 tettä 3 amorfisena kiinteänä aineena.

k 12 93643 (5E,7E,22E)-(IS,3R)-1,3-bis-(tert.-butyylidimetyy-lisilyylioksi)-24-syklopropyylimetyyli-9,10-secochola-5,-7,10(19),22-tetraen-24-oni 4

Suoritus ja edelleenkäsittely, kuten kohdassa II 5 Seos: 3,72 g (20S)-formyyliyhdistettä, kuten kohdassa II

5,6 g yhdistettä 2; 21 ml:ssa dimetyylisulfoksidia Saanto: 2,2 g otsikonyhdistettä 4 kiteisenä öljynä, jonka jähmettymispiste on 97-98 eC.

IV) (5E,7E,22E)-(IS,3R,24R)-1,3-bis-(tert.-butyy-10 lidimetyylisilyylioksi)-9,10-seco-24a-homo-5,7,10(19),22- kolestatetraen-24-oli 5 V) (5E,7E,22E)-(IS,3R,24S)-1,3-bis-(tert.-butyyli-dimetyylisilyylioksi )-9,10-seco-24a-homo-5,7,10( 19 ), 22-ko-lestatetraen-24-oli 6 15 3,5 g:aan yhdistettä 3, 9 ml:ssa tetrahydrofuraania ja 20,6 ml:ssa metanolia lisätään 20,6 ml 0,4 molaarista metanolipitoista CeCl3 · 7H20-liuosta. Typpiatmosfäärissä lisätään annoksittain ja jäällä jäähdyttäen 570 mg natri-umboorihydridiä. Suspensiota sekoitetaan vielä 40 minuut-20 tia jäällä jäähdyttäen ja sitten lisätään jää/keittosuola-liuokseen. Vesifaasi uutetaan etikkaesterillä, orgaaninen faasi pestään vedellä neutraaliksi ja kuivataan natrium-sulfaatilla. Suodattamalla ja poistamalla liuotin saadaan tulokseksi 3,5 g öljyä. Kromatografioimalla silikageelillä 25 käyttäen etikkaesteri/heksaania (1:9) saadaan 534 mg yhdistettä 5 ja 692 mg yhdistettä 6 kulloinkin kiteytyvänä öljynä.

( 5E, 7E, 22E)-(IS, 3R, 24R)-1,3-bis-(tert. -butyylidi-metyylisilyylioksi)-24-syklopropyylimetyyli-9,10-secocho-30 la-5,7,10(19),22-tetraen-24-oli 7 (5E, 7E, 22E)-(IS,3R, 24S)-l,3-bis-(tert.-butyylidi-metyylisilyylioksi)-24-syklopropyylimetyyli-9,10-secocho-la-5,7,10(19),22-tetraen-24-oli 8

Suoritus ja edelleenkäsittely, kuten kohdassa IV/V

93643 13

Seos: 2,2 g yhdistettä 4, 5,8 ml:ssa THF:ää ja 13,0 ml:- ssa metanolia 13,0 ml 0,4 molaarista CeCl3 · 7H20-liuosta 359 mg NaBH4:ää 5 2,22 g öljyä raakatuotteena

Saanto:1,05 g otsikonyhdistettä 7 (yhdistyneenä 8:n kanssa) 330 mg otsikonyhdistettä 8 hartsina.

Seuraavissa reaktioissa kuvataan nyt yhdisteen 8 10 reaktiota edelleen; myös yhdistettä 7 voidaan käsitellä edelleen kuten seuraavassa kuvataan.

VI) (5Z,7E,22E)-(IS,3R,24R)-1,3-bis-(tert.-butyy-lidimetyylisilyylioksi)-9,10-seco-24a-homo-5,7,10(19),22-kolestatetraen-24-oli 9 15 534 mg yhdistettä 5 liuotetaan 75 ml:aan tolueenia ja sen jälkeen kun on lisätty 89 mg antraseenia ja 1 tippa trietyyliamiinia säteilytetään 5 minuutin ajan huoneenlämpötilassa elohopeakorkeapainelampulla (Heraeus TQ 150) Py-rex-lasin läpi. Samea reaktioseos suodatetaan, haihdute-20 taan ja jäännös kromatografioidaan silikageelillä käyttäen etikkaesteri/heksaania (1:9). Saadaan 410 mg otsikonyhdistettä 9 öljynä.

VII) (5Z,7E,22E)-(IS,3R,24S)-1,3-bis-(tert.-butyy-lidimetyylisilyylioksi)-9,10-seco-24a-homo-5,7,10(19),22- \ 25 kolestatetraen-24-oli 10

Vastaavissa olosuhteissa kuin kohdassa VI saadaan 680 mg:sta yhdistettä 6 570 mg otsikonyhdistettä 10 öljy nä.

( 5Z, 7E, 22E)-(IS, 3R, 24S )-l, 3-bis- (tert. -butyylidi-30 metyylisilyylioksi)-24-syklopropyylimetyyli-9,10-secocho- la-5,7,10(19 ),22-tetraen-24-oli 11 320 mg yhdistettä 8 liuotetaan 45 ml:aan tolueenia ja sen jälkeen kun on lisätty 54 mg antraseenia ja 1 tippa trietyyliamiinia säteilytetään 5 minuutin ajan huoneenläm-35 pötilassa elohopeakorkeapainelampulla (Heraeus TQ 150) Py- i4 93643 i rex-lasin läpi. Reaktioseos haihdutetaan ja jäännöksen (375 mg) - yhdisteen 11 ja antraseenin seoksen - annetaan reagoida suoraan tetrabutyyliammoniumfluoridin kanssa.

Esimerkki 1 5 (5Z,7E,22E)-(IS,3R,24R)-9,10-seco-24a-homo-5/7,10- (19),22-kolestatetraeeni-l,3,24-trioli 12 200 mg yhdistettä 9 8,8 ml:ssa tetrahydrofuraania pidetään 1,5 ml:n kanssa 1-molaarista tetrabutyyliammoni-umfluoridiliuosta tetrahydrofuraanissa 50 minuutin ajan 10 60 °C:ssa. Jäähdytetty reaktioseos laimennetaan etikkaes- terillä ja pestään natriumvetykarbonaattiliuoksella ja keittosuolaliuoksella. Orgaaninen faasi pestään vedellä neutraaliksi ja kuivataan natriumsulfaatilla. Suodattamalla ja haihduttamalla liuotin saadaan tulokseksi 210 mg öl-15 jyä. Kromatografioimalla silikageelillä käyttäen etikkaes-teri/heksaania (2:1) saadaan 124 mg otsikonyhdistettä 12 amorfisena kiinteänä aineena. UV(MeOH)A=210( €«14720), 264 (14240).

Esimerkki 2 20 (5Z,7E,22E)- (IS,3R,24S)-9,10-seco-24a-homo-5,7,10- (19),22-kolestatetraeeni-l,3,24-trioli 13 Esimerkin 1 olosuhteissa saadaan 200 mg:sta yhdistettä 10 88 mg otsikonyhdistettä 13, jonka sulamispiste on 128 - 129 eC.

• 25 Esimerkki 3 (5Z, 7E,22E)-(IS,3R,24S)-24-syklopropyylimetyyli- 9,10-secochola-5,7,10(19), 22-tetraeeni-l,3,24-trio-li 14 375 mg yhdisteen 11 jäännöstä 14,2 ml:ssa tetrahyd-30 rofuraania pidetään 2,39 ml:n kanssa 1-molaarista tetra- butyyliammoniumfluoridiliuosta tetrahydrofuraanissa 60 minuutin ajan typpiatmosfäärissä 60 °C:ssa. Edelleenkäsit-telyä varten jäähdytetty reaktioseos kaadetaan natriumve-tykarbonaattiliuokseen ja lopuksi uutetaan etikkahappo-35 etyylieetterillä. Sen jälkeen kun orgaaninen faasi on kui- 93643 15 vattu natriumsulfaatilla ja on suodatettu ja haihdutettu liuotin, saadaan tulokseksi 400 mg hartsimaista jäännöstä. Kromatografioimalla silikageelillä käyttäen etikkahappo-etyyliesteri/heksaania (2:1) saadaan 150 mg otsikonyhdis-5 tettä, jonka sulamispiste on 137 - 139 *C.

Esimerkki 4 (5Z,7E,22E)- (IS,3R,24S)-24-syklopentyylimetyyli- 9,10-secochola-5,7,10(19),22-tetraeeni-l,3,24-trio-li (16) 10 (I) Isoamyylikarbonyylimetyleenitrifenyylifosfo- raani (15)

Otsikkoyhdiste (15) saadaan kiinteänä aineena, jonka sulamispiste on 64 - 67 °C, isoamyylimetyyliketonista, analogisesti isobutyylikarbonyylimetyleenitrifenyylifos-15 foraanin valmistuksen kanssa.

II)-V) Otsikkoyhdiste (16) saadaan analogisesti esimerkissä 1 kuvatun sekvenssin II)-V) kanssa 5,69 g:sta (IS, 3R) -bis- (tert. -butyylidimetyylisilyylioksi) - (20S )-for-myyli-9,10-secopregna-(5E,7E,10(19))-trieeniä (A) ja 8,93 20 g:sta isoamyylikarbonyylimetyleenitrifenyylifosforaania (15) kiinteänä aineena, jonka sulamispiste on 119 -120,5°C.

Esimerkki 5 (5Z,7E,22E)-(1S,3R,24S)-24-syklopentyylimetyyli-• 25 9,10-secochola-5,7,10(19),22-tetraeeni-l,3,24-trio- li (18) I) Syklopentyylimetyylikarbonyylimetyleenitrife-nyylifosforaani (17)

Otsikkoyhdiste (17) saadaan kiteisenä öljynä, jonka 30 sulamispiste on 84 - 87*, syklopentyyliasetonista, analo- ’ gisesti edellä kuvatun isobutyylikarbonyylimetyleenitri- fenyylifosforaanin valmistuksen kanssa.

II) -V) Otsikkoyhdiste (18) saadaan analogisesti esimerkissä 1 kuvatun sekvenssin II)-V) kanssa 3,50 g:sta 35 (IS, 3R) -bis- (tert. -butyylidimetyylisilyylioksi) - (20S) - f or- ie 93643 myyli-9,10-secopregna-(5E,7E,10(19))-trieeniä (A) ja 5,68 g:sta yhdistettä (17) kiinteänä aineena, jonka sulamispiste on 90 - 93°C.

Esimerkki 6 5 (5Z,7E,22E)-(IS,3R,24R)-24-(2-etyylibutyyli)-9,10- secochola-5,7,10(19),22-tetraeeni-l,3,24-trioli (25) ja

Esimerkki 7 (5Z,7E,22E)-(IS,3R,24S)-24-(2-etyylibutyyli)-9,10-10 secochola-5,7,10(19),22-tetraeeni-l,3,4-trioli(26) (I) 4-etyyli-pentanoyylimetyleenifenyylifosforaani (19) a) Etyyli-2-buteeni-l(2)-karbonitriili (19a) 170 g (2 moolia) syaanietikkahappoa lisätään yhdes-15 sä 10 g:n kanssa ammoniumasetaattia ja 10 g:n kanssa etik-kahappoa 100 ml:aan bentseeniä 1 litran kolvissa. Tähän lisätään 172 g (2 moolia) dietyyliasetonia, ja seosta keitetään 18 tunnin ajan hyvin varovasti palautusjäähdyttäen vedenerottimen läsnäollessa. Bentseeni haihdutetaan, ja 20 sen jälkeen jäännös lisätään 1000 ml:aan 2-n HC1, uutetaan eetterillä, orgaaninen faasi erotetaan, pestään kyllästetyllä NaCl-liuoksella, kuivataan Na2S04:lä ja konsentroidaan. Jäännös tislataan kahdesti 18 mm/Hg:ssä. Saadaan 96,7 g yhdistettä (19a) värittömänä öljynä. Kp. 66 - 68°C, 25 IR A (CN) 2240-2212 cm'1.

b) Etyyli-2-butaanikarbonitriili (19b) 96,7 g:aan (886 mmoolia) 4-etyyli-2-buteeni-l(2)-karbonitriiliä (19a) lisätään etanolia niin, että tilavuudeksi tulee 150 ml. Tähän lisätään 2 g Pd/hiiltä (10-%) ja 30 hydrataan 50e:ssa 7 tuntia. Reaktioseos suodatetaan selii-tin läpi, konsentroidaan, lisätään 400 ml 2-n HC1, uutetaan eetterillä, kuivataan, konsentroidaan ja tislataan vakuumissa. Saadaan 50,5 g yhdistettä (19b) värittömänä öljynä. Kp6'8 45 °C, NMR(300MHz) [6] 0,92 (6H,t), 1,5 35 (5H,m), 2,34 (2H,d).

Il 93643 17 c) 4-etyyli-2-heksanoni (19c) 14.4 g (600 mmoolia) Mg-lastuja lisätään yhdessä 150 ml:n kanssa dietyylieetteriä kolmikaulakolviin. Tähän lisätään pisaroittaan 85,2 g (600 mmoolia) metyylijodidia 5 50 ml:ssa eetteriä. Sen jälkeen lisätään 100 ml bentsee- niä, ja osa dietyylieetteristä tislataan erilleen. Lisätään 33,3 g (8300 mmoolia) etyyli-2-butyyli-karbonitriiliä (19b), ja seosta keitetään palautusjäähdyttäen 5 tuntia. Reaktioseos hydrolysoidaan NH4Cl:llä, uutetaan eetterillä, 10 pestään vedellä, kuivataan Na2S04:llä, konsentroidaan ja tislataan vakuumissa Vigreux-kolonnissa. Saadaan 12,4 g yhdistettä (19c) värittömänä öljynä. Kp16 54 eC, IR A (CO) 1730 cm'1.

NMR [6] 0,86 (6H,t), 1,30 (4H,m), 1,80 (lH,m), 2,13 15 (3H,s), 2,33 (2H,d).

d) Bromimetyyli-4-etyyli-pentyyliketoni (19d) 12 g:aan (93 mmoolia) 4-etyyli-2-heksanonia 60 ml:ssa metanolia lisätään 0 °C:ssa 14,8 g (93 mmoolia) bromia, ja seosta sekoitetaan vielä 30 minuuttia 0 °C:ssa. 20 Sen jälkeen lisätään 100 ml vettä jäähdyttäen, ja seosta sekoitetaan 16 tuntia huoneen lämpötilassa. Reaktioseok-seen lisätään kyllästettyä keittosuolaliuosta, seos uutetaan eetterillä, pestään kyllästetyllä NaHC03:lla ja kuivataan Na2S04:llä. Tuote suodatetaan ja sen jälkeen haihdu-25 tetaan liuotin, ja jäännös tislataan. Saadaan 13,4 g bro-mimetyyli-4-etyylipentyyliketonia (19d). Kp12 54 °C.

NMR (300 MHz) [6] 0,86 (6H,t), 1,23 (4H,m), 1,86 (lH,m), 2,58 (2H,d), 3,88 (2H,s).

e) 4-etyylipentanoyylimetyylitrifenyylifosfonium-30 bromidi (I9e) 13.4 g (65 mmoolia) bromimetyyli-4-etyylipentyyli-ketonia (19d) lisätään 17,3 g:aan (65 mmoolia) trifenyyli-fosfiinia. Seoksen annetaan seistä yön yli, ja sen jälkeen lisätään 76 ml metyleenikloridia ja seosta keitetään pa- i is 93643 lautusjäähdyttäen 30 minuuttia. Saadaan 26,4 g fosfonium-bromidia (19e).

NMR (300 MHz) [6] 0,78 (6H,t), 1,20 (4H,m), 1,77 (lH,m), 2,87 (2H,d), 5,7 (2H,d), 7,78 (15H,m).

5 f)4-etyylipentanoyylimetyleenitrifenyylifosforaani (19) 26 g:aan (55 mmoolia) 4-etyylipentanoyylimetyyli-trifenyylifosfoniumbromidia (19e) 70 ml:ssa metanolia lisätään 5,04 g (60 mmoolia) natriumvetykarbonaattia 70 10 ml:ssa vettä, ja seosta sekoitetaan 30 minuuttia huoneen lämpötilassa. Reaktioseokseen lisätään vettä, uutetaan metyleenikloridilla, orgaaninen faasi erotetaan, pestään vedellä, kuivataan Na2S04:llä ja konsentroidaan. Jäännöstä sekoitetaan etyyliasetaatin kanssa. Saadaan 18,8 g otsik-15 koyhdistettä (19).

NMR (300 MHz) [6] 0,93 (6H,t), 1,52 (4H,m), 2,31 (lH,m), 2,48 (2H,d), 3,94 (1H, leveä d), 7,48 ja 7,88 (15H,m).

II) (5E,7E,22E)-(IS,3R)-1,3-bis-(tert.-butyylidi- metyylisilyylioksi ) -24- (2-etyylibutyyli) -9,10-secochola-20 5,7,10(19),22-tetraeeni-24-oni (20) 3,4 g (5,9 mmoolia) (20S)-formyyliyhdistettä (A) ja 5,7 g (14,7 mmoolia) yhdistettä (19) kuumennetaan 100 ml:ssa tolueenia 80 °C:ssa yön yli. Sen jälkeen reaktio-seokseen lisätään vettä, orgaaninen faasi erotetaan, pes-25 tään kyllästetyllä keittosuolaliuoksella, kuivataan

Na2S04:llä ja konsentroidaan. Öljymäinen jäännös kromato-grafoidaan silikageelissä tolueenilla. Saadaan 1,1 g yhdistettä (20) öljynä.

NMR (300 MHz) [6] 0,53 (3H,S), 0,79 (24H), 1,2 (3H,d), 30 4,17 (lH,m), 4,48 (lH,m), 4,81 (2H,d), 5,78 (lH,d), 5,98 (1H,d), 6,39 (1H,d), 6,62 (lH,q).

(III)(5E,7E,22E)-(IS,3R,24R)-1,3-bis-(tert.-butyy-lidimetyylisilyylioksi)-24-(2-etyylibutyyli)-9,10-secochola-5,7,10(19),22-tetraeeni-24-oli (21) il 19 93643 (5E, 7E, 22E) -(IS,3R,24S)-1,3-bis-(tert.-butyylidime-tyylisilyylioksi)-24-( 2-etyylibutyyli)-9,10-secochola-5,7,10(19),22-tetraeeni-24-oli (22)

Menetellään kuten esimerkin 1/2 kohdassa III käyt-5 täen lähtöaineina: 1,1 g (1,6 mmoolia) yhdistettä (20) 2,8 ml:ssa THF ja 6,3 ml:ssa metanolia, 920 mg (2,47 mmoolia) CeCl3 x 7H20 6,1 ml:ssa metanolia, ja 263 mg (6,96 mmoolia) NaBH4. Saadaan 340 mg yhdistettä (21) ja 140 mg yhdistettä (22) öljynä.

10 Yhdisteiden (21) ja (22) NMR (300 MHz): [6] 0,50 (3H,s), 0,7-0,88 (24H), 4,05 (lH,m), 4,14 (lH,m), 4,48 (1H,m), 4,91 (2H,d), 5,32 (lH,dd), 5,47 (lH,dd), 5,77 (1H,d), 6,40 (1H,d).

IV)(5Z,7E, 22E)-(IS, 3R,24R)-1,3-bis-(tert.-butyyli-15 dimetyylisilyylioksi)-24-(2-etyylibutyyli)-9,10-secochola- 5,7,10(19)-tetraeeni-24-oli (23) 340 mg yhdistettä (21) liuotetaan 60 ml:aan tolu-eenia, lisätään 53 mg (0,30 mmoolia) antraseenia ja pisara trietyyliamiinia, minkä jälkeen seosta säteilytetään 5 20 minuuttia huoneen lämpötilassa elohopea-korkeapainelampul- la (Heraus TQ 150) Pyrex-lasin läpi. Samea reaktioseos suodatetaan ja konsentroidaan. Saadaan 340 mg otsikkoyh-distettä (23).

(5Z, 7E, 22E) - (IS, 3R, 24S) -1,3-bis-(tert. -butyylidime-25 tyylisilyylioksi)-24-(2-etyylibutyyli)-9,10-secochola- 5,7,10(19),22-tetraeeni-24-oli ( 24)

Analogisesti kohdassa IV) kuvattujen olosuhteiden kanssa saatiin 130 mg:sta yhdistettä (22) 130 mg otsikko-yhdistettä (24) öljynä.

30 V) (5Z,7E,22E)-(IS,3R,24R)-24-(2-etyylibutyyli)- 9,10-secochola-5,7,10(19),22-tetraeeni-l,3,24-trioli (25) 340 mg yhdistettä (23) 10 ml:ssa tetrahydrofuraania pidetään 2 ml:ssa 1-n tetrabutyyliammoniumfluoridia tetrahydrof uraanissa 1 tunnin ajan 55 °C:ssa. Jäähdytetty reak-35 tioseos laimennetaan etyyliasetaatilla ja pestään natrium- k 20 93643 vetykarbonaattiliuoksella ja keittosuolaliuoksella. Orgaaninen faasi pestään vedellä neutraaliksi, kuivataan nat-riumsulfaatilla ja konsentroidaan. Jäännös kromatografoi-daan silikageelissä etyyliasetaatilla ja haihdutetaan, 5 minkä jälkeen seos käsitellään heksaanilla ja suodatetaan.

Saadaan 110 mg otsikkoyhdistettä (25) amorfisena öljynä.

Jp. 147-154 eC.

(5Z,7E,22E)-(IS,3R,24S)-24-(2-etyylibutyyli)-9,10-secochola-5,7,10(19),22-tetraeeni-l,3,24-trioli (26) 10 Käyttäen samoja olosuhteita kuin yhdisteen (25) valmistuksessa 130 mg:sta yhdistettä (24) saadaan 40 mg otsikkoyhdistettä (26), jonka sulamispiste on 135 -138 eC.

li

Claims (2)

1. 93643 21 Patenttivaatimus Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten 24-homo-D-vitamiinijohdannaisten valmistamiseksi, joiden 5 kaava on 0H /fC" io *** jf» (I), HO ' 0H 15 jossa R2 ja R3 merkitsevät toisistaan riippumatta metyyliä tai etyyliä tai ne muodostavat yhdessä hiiliatomin kanssa, johon ne ovat liittyneet, syklopropyyli- tai syklopentyy-20 liryhmän, tunnettu siitä, että yhdiste, jonka kaava on I / »A jj JL λ SflT <IV>- V&i 30 ^Λ-Αολ1*' jossa R1 on suojattu hydroksiryhmä ja R4 on hydroksisuojaryhmä ja 35 R2 ja R3 merkitsevät samaa kuin edellä, 93643 22 muutetaan pelkistämällä 24-karbonyylifunktio yhdisteeksi, jonka kaava on f” Rl 5 .. X «/ CHir\ r3 Jm (Hl), 4V jf 10 vs jossa R1 , R4 ’, R2 ja R3 merkitsevät samaa kuin edellä, ja 15 saatu kaavan III mukainen yhdiste muutetaan säteilyttä-mällä ultraviolettivalolla kääntäen 5,6-kaksoissidoksen stereoisomeria yhdisteeksi, jonka kaava on r/ V (II), . jossa R1 , R4 , R2 ja R3 merkitsevät samaa kuin edellä, minkä jälkeen saadusta kaavan II mukaisesta yhdisteestä poistetaan hydroksisuojaryhmät. 93643 23 Förfarande för framställning av nya terapeutiskt användbara 24-homo-D-vitaminderivat med formeln 5 0H R1- < -m. JU isl R3 10 jr <*> H, HO. ' 0H 15 där R2 och R3 betecknar oberoende av varandra metyl eller etyl eller de bildar tillsanunans med kolatomen, tili vilken de är bundna, en cyklopropyl- eller cyklopentylgrupp, k ä n -netecknat därav, att en förening med formeln 20 ? X Ά** A Λ ττΓ> uv)
2. 25 Vr 30 där R1 är en skyddad hydroxigrupp och R4 är en hydroxiskyddsgrupp och R2 och R3 betecknar samma som ovan, omvandlas genom reduktion av 24-karbonylfunktionen tili en 35 förening med formeln 93643 24 ?H f fi 5 (1II) -η,,Λί J U ll k' 10 li^O' där R1 , R4 , R2 och R3 betecknar samma soin ovan, och den erhällna föreningen med formeln III omvandlas genom best rälning med ultraviolett ljus under inversion av 5,6-15 dubbelbindningens stereoisomeri till en förening med formeln OH £ 20 "f'lir'\ '0iL' (u) Xjh, t* i" jT V 25 * °^>" där R1 , R4’, R2 och R3 betecknar samma som ovan, varefter frän den erhälinä föreningen hydroxiskyddsgrupperna av-lägsnas.