PT95473B

PT95473B - Processo para a preparacao de derivados de 24-homo-vitamina d e de composicoes farmaceuticas que os contem

Info

Publication number: PT95473B
Application number: PT95473A
Authority: PT
Inventors: Gerald Dr Kirsch; Guenter Dr Neef; Katica Schwarz; Matthias Dr Braeutigam; Ruth Dr Thieroff-Eckerdt; Petra Rach
Original assignee: Schering Ag
Priority date: 1989-10-02
Filing date: 1990-10-01
Publication date: 1997-07-31
Also published as: ATE103893T1; NO904269L; ZA907876B; HU906284D0; DE59005254D1; ES2052166T3; DD299178A5; FI904850A0; IL95872A; CA2026671C; FI93643C; JPH03246273A; CN1053103C; CN1031705C; DK0421561T3; DE3933034A1; IE71227B1; IE903520A1; FI93643B; EP0421561B1

Description

PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE DERIVADOS DE 24-HOMO-VITAMINA D E

DE COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS QUE

OS CONTÊM.

DESCRIÇÃO

A presente invenção refere-se a deriva dos de 24-homo-vitamina D de fórmula I

R'

R‘ (I)

f.

na qual

- . - . . .

R representa um atomo de hidrogénio, um grupo hidroxi ou um grupo aciloxi com 1 a 8 átomos de carbono,

3

R e R independentemente um do outro representam um grupo alquilo de cadeia linear ou ramificada com 1 a 4 átomos de car bono, um grupo trifluormetilo, ou em conjunto formam um anel carbocíclico com 3 a 9 átomos de carbono, saturado, no qual se inclui também o átomo de carbono 25,

5

R e R independentemente um do outro representam um atomo de hidrogénio ou um grupo acilo possuindo 1 a 8 átomos de carbo no, e

A e B representam cada um um átomo de hidrogénio, ou em conjunto representam uma 2§ ligação, assim como nel, 2, 3, 4 ou 5, bem como a um processo para a sua preparação, a composições far maceuticas que contêm estes compostos, assim como à sua utilisa ção para a preparação de medicamentos.

Os grupos aciloxi ou acilo possíveis pa 1 4 5 ra os radicais R , R e R sao derivados especialmente de ácidos carboxílicos saturados ou também de ãcido benzoico.

3

Se R e R em conjunto com o atomo de carbono 25 formarem um anel carbocíclico saturado, trata-se es! pecialmente dos aneis ciclopropilo, ciclopentilo ou ciclohexilo.

São preferidos de acordo com a invenção

j. os derivados de 24-homo-vitamina D de fórmula geral I nos quais i 1 . .

R representa um grupo hidroxi ou 2 3 : R e R representam um grupo metilo ou / 4 5 ; R e R representam um ãtomo de hidrogénio jj e n é 1, 2 ou 3.

j Entre os átomos de carbono 22 e 23 enj contra-se de preferência uma dupla ligação.

j; São especialmente preferidos os compostos j (5Ζ,7E,22E)-(IS,3R,24R)-9,10-seco-24a-homo-5,7,10(19),22-colesta !' tetraeno-l,2,24-triol e l· (5Z,7E,22E)- (1S,3R,24S) -9,10-seco-24a-homo-5,7,10 (19) ,22-colesta ‘,tetraeno-l,3,24-triol.

• As vitaminas Do e D_Q naturais, ou os

-u Δ 3 ί

seus metabolitos biologicamente activos (as vitaminas D₂ e naturais são por si sós biologicamente inactivos e só se tornam ;i activas depois da hidroxilação na posição 25 no fígado, ou na : posição 1 nos rins) possuem como elemento estrutural caracteríis ; tico uma dupla ligação entre as posições C^ e C^g, que se con• sidera como fundamental para a actividade da vitamina D (ver j fórmula geral V). A acção das vitaminas D? e D, consiste na esii tabilizaçao do nível de Ca do plasma e de fosfato do plasma;

w I' t ; opoem-se a uma redução do nível de Ca do plasma.

21 ?^C 26 H C oo * 26 3, ²² 24í CH_ 18 ²llr^Í/²° ²³ 2τΓ^Ε Γ ¹Ί> CH-
	(V)
lí 18 ‘ Xá⁰ ²
í _H0 )
! Ergocalciferol: R^a=R^b=H,R^c=CH₃,	Vitamina D?
dupla ligação C-22/23
Colecalciferol:R^a=R -R^C=H 25-Hidroxicolecalciferol:R^a=R^C=H,R^b=OH	Vitamina D^
la-Hidroxicolecalciferol:R^a=OH,R^b=R^c=H jí la,25-Dihidroxicolecalciferol:R^a=R^b=OH,R^C=H	Calcitriol

j: Alem desta pronunciada acçao sobre o meI ? tabolismo do cálcio e do fosfato as vitaminas e e os seus hderivados sintéticos possuem também acções de inibição de prolij feração e de diferenciação das células (H.F. De Luca, The Metabo i lism and Function of Vitamin D in Biochemistry of Steroid Hormo: nes, Hrsg. H.L.J. Makin, 2nd Edition, Blackwell Scientific Publi !! cations 1984, S. 71-116). No caso da utilização de vitamina D po j de chegar-se todavia à ocorrência de uma dose excessiva de cálcio (hipercalcemia).

Os 10f-colecalciferois hidroxilados na po

|S sição 24 jã são conhecidos da Especificação DE-AS 2 526 981? ί possuem uma toxicidade inferior à do correspondente 1 -colecalI ciferol não hidroxilado. Os compostos hidroxilados exibem uma fi activação selectiva da absorpção intestinal do cálcio e uma mais fraca acção de absorpção pelos ossos do que o lo(-colecalc_i ί· ¹ ferol.

Os análogos de 24-hidroxi-vitamina D descritos no pedido de patente internacional WO 87/00834 podem servir para o tratamento de perturbações causadas por uma proli. feração anormal de células e/ou diferenciação de células no hoi fi mem e nos animais.

, Para diversos derivados de 1,25-dihidro xi-homo-vitamina D já foi citada sucintamente por De Luca uma fi dissociação no que se refere às propriedades da acção de absor^! pção dos ossos e da diferenciação de células HL-60. A acção in : vitro de absorção dos ossos é neste caso uma medida directa pa’ ra a mobilização in vivo do cálcio.

Descobriu-se agora que os derivados de 24-homo-vitamina D de acordo com a invenção, de fórmula geral I, em comparação com o derivado natural da vitamina D calcitriol (loC,25-dihidroxicolecalciferol) possuem, surpreeendentemente, i um espectro de acção mais favorável. Enquanto que os efeitos so l! bre o metabolismo de cálcio e fosfatos são nitidamente atenuados (redução das acções colaterais causadas por uma dose excesfi siva ou por dosagens necessariamente altas) as acções de inibifi ção de proliferação e de diferenciação de células permanecem ¹ inalteradas (dissociação).

fi A actividade de vitamina D dos composi fi tos de acordo com a invenção e determinada por meio do teste do fi receptor de calcitriol. Realiza-se mediante a utilização de uma proteína receptora específica proveniente do intestino de galos fi raquíticos. A proteína de ligação contendo o receptor é incuba{J β fi; da com H-calcitriol (0,5 ng/ml) num volume reactivo de 0,575 ml, i;

fina ausência e na presença das substâncias ensaiadas, durante 1 fihora num tubo de ensaio. Para a separação de calcitriol livre e ,ligado ao receptor realiza-se uma absorpção em carvão-dextrano.

* Para isso adicionam-se a cada tubo de ensaio 200 ul de uma sus• ' ·, pensão de carvao-dextrano e procede-se a mcubaçao a 22QC duran4 te 30 minutos. Em seguida as amostras são centrifugadas a 1500 x g durante 10 minutos a 4QC. 0 sobrenadante é decantado e após cerca de 1 hora de equilíbrio em Atom-Light ê medido num contador de raios

As curvas de competição obtidas com diversas concentrações da substância de ensaio, assim como da substância de referência (calcitriol não marcado), para a su„ _ 3 pressão da substancia de referencia marcada com H, sao compara das uma com a outra e calcula-se um factor de competição (KF).

Este é definido como o cociente das con centrações de cada uma das substâncias de ensaio e da substância de referência que são necessárias para uma competição de 50%:

Concentração da substância de ensaio a 50% de _KF _ _competição_

Concentração da substância de referência a 50% de competição

Por conseguinte o (5Z,7E,22E)-(1S,3R,24R)-(9,20-seco-24a-homo-5,7,10(19),22-colestatetraeno-l,3,24-triol (composto A) possui um valor KF de 67 e o (5Z,7E,22E)-(1S,3R,24S)-9,10-seco-24a-homo-5,7,10(19),22-coles tatetraeno-1,3,24-triol (composto B) possui um valor KF de 0,8.

Para a determinação da potência antiproliferativa dos compostos de acordo com a invenção, tomando como representantes os compostos A e B como substâncias de ensaio, realiza-se o teste descrito a seguir:

_;Ceratinócitos de ratos recém-nascidos são preparados e cultiva:dos de acordo com uma modificação do método de Yuspa, S. und Harris, C.C., Altered differentiation of mouse epidermal cells ^!treated with retinyl acetate in vitro, Exp. Cell Res. 86:95-105, 1974.

: Ratos NMRI neo-natais, de ambos os sexos, são mortos por decapitação, a pele é removida e preparada, é lavada numa solução de antibiõtico-antimicõtico e é incubada ι

uma noite a 4QC com o lado da derme para baixo, em solução Dispase II (1,2 U/ml em meio de cultura de tecidos M199 + 25 mmole/ ^!/1 HEPES + 15% de soro de vitelo fetal (FCS) + 50 U/ml de penicj.

lina/estreptomicina (P/S) (meio de preparação, PM) . A epiderme é removida e é preparada por acção de tripsina sobre uma suspen são de células individuais. Depois da centrifugação o sedimento celular é de novo posto em suspensão, depois da coloração com azul de tripano conta-se o número de pequenas células redondas 5 vivas e semeiam-se as células, a uma densidade de 4 x 10 celu2 las/cm , em placas primárias de 24 cavidades em meio de cultura de tecidos (M199 + 15% FCS + 50 μ/ml P/S). Passadas 24 h de incubação a 37SC lavam-se as células com solução de cloreto de sõ dio tamponisada com fosfato (PBS) e procede-se â incubação por mais 24 h em meio de cultura de tecidos isento de soro (M199 +

U/ml P/S + 0,5% de etanol) com e sem a substância de ensaio, 3 a 32,5QC. Em seguida adicionam-se 0,4 pCi/50 ul de H-metil-timidina (40 Ci/mmole). Após 4 h filtra-se o meio e interrompe-se a reacção por adição de 500 ul de ãcido tricloroacético (TCA) a 10% arrefecido por gelo. As células são lavadas com TCA e PBS, são lisadas por incubação numa solução de proteinase K (10 mmole/1 de tris-HCl, 10 mmole/1 de EDTA, 10 mraole/1 de NaCl, 0,2% de Triton-X 100, pH 8,0, 50 pg/ml de proteínacinase K) e o lisa do é clarificado por centrifugação. Determina-se fotometricamen te por cintilação no sobrenadante a radioactividade e, depois da coloração específica do ADN com diamidinofenilindol (DAPI), determina-se a concentração do ADN fotometricamente por fluoress cência.

Em conformidade, o calcitriol assim como os compostos A e B inibem, em função da dose, a formação de 3 ...

H-timidma no ADN com aproximadamente os mesmos valores IC™:

_g •^3U calcitriol 2,7 x 10 mole/litro composto A 6,0 x 10 mole/litro composto B 9,5 x 10 mole/litro

Devido ao risco reduzido de hipercalcemia, os compostos de acordo com a invenção prestam-se especialmente para a preparação de medicamentos para o tratamento de do enças que se caracterizam por uma hiperproliferação, por exemplo doenças hiperproliferativas da pele (psoríase) e tumores ma lignos (leucémias, carcinoma do colo, carcinoma da mama). A exi gência para um tratamento com êxito é a verificação de receptores de calcitriol no órgão visado.

i A presente invenção refere-se também, í por conseguinte, a composições farmacêuticas que contêm pelo me ί nos um composto de fórmula geral I, em combinação com uma subs• tância veicular farmaceuticamente aceitãvel.

!;

; Os compostos podem ser formulados na : forma de soluções em dissolventes farmaceuticamente aceitáveis, , ou como emulsões, suspensões ou dispersões em solventes ou subs tâncias veiculares farmaceuticamente apropriados, ou como pílulas, comprimidos ou cápsulas que contêm as substâncias veiculares sólidas conhecidas por si. Para uma aplicação tópica os com ; postos são vantajosamente formulados na forma de cremes ou poma , das, ou numa forma de composição semelhante apropriada para uti ; lização tópica. Cada uma destas formulações mencionadas pode ainda conter também outras substâncias auxiliares farmaceuticamente aceitáveis, não tóxicas, como por exemplo estabilisadores, ; antioxidantes, aglutinantes, corantes, emulsionantes, ou correc j tores de paladar. Os compostos são vantajosamente administrados ¹ por injecçâo ou por infusão intravenosa de soluções esteriliza^{1 1} Λ.

;i das apropriadas, ou na forma de composições orais através do ca - nal digestivo, ou na forma tópica na forma de cremes, pomadas, ii loções ou de emplastros transdérmicos apropriados, como é descrito na especificação EP-A 0 387 077.

í As doses diãrias são de 0,1 pg/paciente/

I /dia-1000 pg(l mg)/paciente/dia, de preferência de 1,0 pg/pacij ente/dia-500 pg/paciente/dia.

(ί - , - (ί A invenção refere-se ainda a utilização dos compostos de fórmula I para a preparação de medicamentos.

!í A preparação dos derivados de 24-homoj: -vitamina D de fórmula I é realizada de acordo com a invenção | transformando-se um composto de fórmula geral IV jl i

na qual

1'

R representa um átomo de hidrogénio ou um grupo hidroxi bloqueado e

4'

R representa um grupo de bloqueio de hidroxi e 2 3R e R e n tem os significados indicados para a formula I, eventuaimente depois da hidrogenação selectiva da dupla ligação 22,23, por redução da função carbonilo na posição 24, num composto de fórmula geral III

l! IV e

H

H |j A e B ou representam em conjunto uma 2ã ligaçao, ou cada um re;! presenta um átomo de hidrogénio, | transformando-se um composto de fórmula III, por radiação ί com luz ultra-violeta, com modificação da estereoisomeria ' na dupla ligação 5,6, num composto de fórmula geral II

na qual

1*4*23

R ,R ,R eR,neAeB tem os significados indicados na fórmula III, e em seguida transformando-se este composto num composto de fórmula geral I, por dissociação de grupos de bloqueio de hidroxi existentes e, eventualmente, por esterificação parcial ou total dos grupos hidroxi.

A redução da função carbonilo no átomo de carbono 24, no composto de fórmula geral IV, é realizada por exemplo com cloreto de cério (III)/borohidreto de sódio num di£ solvente polar. Na redução forma-se o isómero de 24-hidroxi de fórmula geral III tanto com a configuração (24R) como também com a configuração (24S). Os 2 isómeros podem ser separados cro matograficamente.

Antes da redução da função carbonilo po de eventualmente ser hidrogenada selectivamente a dupla ligação C22,C23.

A transformação subsequente de um composto de fórmula geral III num composto de fórmula geral II é realizada por exemplo por radiação com luz ultravioleta na presença de um chamado sensibilisador de tripleto. No âmbito da presente invenção utilizam-se para este efeito antracenos. Por dissociação da ligação fY (pi) da dupla ligação 5,6, rotação do anel A de 180° em torno da ligação simples 5,6 e reestabelecimento da dupla ligação 5,6, inverte-se a estereoisomeria na dupla ligação 5,6.

Em seguida dissociam-se os grupos de bloqueio de hidroxi existentes, de preferência utilizando-se i

Γχ,

fluoreto de tetra-n-butil-amõnio, bem como eventualmente os gru pos hidroxi livres são parcial ou completamente esterifiçados, de acordo com processos correntes, com o correspondente halogeneto de ácido carboxílico (halogeneto = cloreto, brometo) ou com o anidrido do ácido carboxílico.

A preparação dos compostos de partida de fórmula geral IV parte dos compostos descritos em Tetrahedron 43, 4609 (1987) ou no Pedido de Patente Internacional WO

H

4 na qual como grupos de bloqueio de hidroxi R e R figura o radical dimetil-t-butilsililo; também se podem utilizar, de acordo com a invenção, outros radicais de trialquilsililo como grupos de bloqueio.

A reacção com um fosforano de fórmula VI ⁰aV.

^(CH2>n

R~ (VI) i: conduz aos compostos de fórmula geral IV (reacção de Wittig) .

i j

Os exemplos de síntese adiante servem 'i ij para uma melhor elucidação da invenção.

Preparação dos compostos de partida

I) Isobutilcarbonilmetilenotrifenilfosforano 1_

a) Bromometil-isobutilcetona ml de isobutil-metil-cetona em 240 ml de metanol são miss turados a OQC com 20 ml de bromo e agita-se ainda 1,5 h a 10QC. Em seguida adicionam-se 360 ml de água e agita-se à temperatura ambiente durante 16 h. A mistura reactiva é mi£3 turada com solução saturada de cloreto de sódio, a fase orgânica é separada e a fase aquosa é extraída com éter. As fases orgânicas depois de reunidas são lavadas com solução a 10% de carbonato de sódio e secam-se com cloreto de cálcio. Depois da filtração o dissolvente é evaporado e o resí duo é destilado. Obtêm-se 53,7 g de bromometil-isobutil-cetona na forma de um óleo incolor; Ρθΐ5_₂θ 67-69QC.

b) Brometo de isobutilcarbonilmetiltrifenilfosfónio

53.6 g da bromo-metil-isobutil-cetona são adicionados a 78,5 g de trifenilfosfina e a solução reactiva, depois de arrefecida, é recristalizada em cloreto de metileno/éter (1:2). Obtêm-se 111,7 g do brometo de fosfónio com pf. 244-245QC.

c) Isobutil-carbonil-metilenotrifenil-fosforano _1

111.6 g de brometo de isobutil-carbonil-metiltrifenil-fosfó nio em 1500 ml de cloreto de metileno são misturados com 1500 ml de soda cáustica 2N e agita-se 30 min. à temperatura ambiente. A fase orgânica é separada, é lavada com ãgua e é seca com sulfato de sódio. Depois da filtração e evaporação do dissolvente o resíduo é reeristalizado em éter t-butilmetílico. Obtêm-se 72,2 g do composto de título 1^ de pf. 120-121QC. Por variação dos componentes cetona no passo da reacção a) podem-se preparar de forma análoga outros fojs foranos de fórmula

II) (ciclopropilmetil)-(trifenil-fosforanilideno)-cetona 2

180 mg de cloreto de lítio e 540 mg de cloreto de cobre (I) são agitados conjuntamente, sob atmosfera de azoto, em 9 ml de tetrahidrofurano durante 1,5 h à temperatura ambiente. Depois do arrefecimento a 10QC adicionam-se 15,0 g de (bromometil)-(trifenilfosforanilideno)-cetona (M. Le Corre,

C.R. Acad. Sc. (C) 273, 81 (1971)) em 225 ml de tetrahidro furano e agita-se durante 30 min.. Em seguida adicionam-se gota a gota 29,5 ml de uma solução aproximadamente 1,6 molar de brometo de ciclopropil-magnésio em tetrahidrofurano (G.F. Reynolds et al, J. Org. Chem. 23, 1217 (1958)) e agi. ta-se 1,5 h à mesma temperatura. Para o tratamento pós-reactivo verte-se a mistura reactiva em gelo/solução saturada de cloreto de amónio e extrai-se em seguida com acetato de etilo. A fase orgânica é seca com sulfato de sódio e em seguida é concentrada. Por cromatografia do resíduo sólido através de sílica-gel com acetato de etilo/acetona (3:1) obtêm-se 5,6 g do composto de título 2^ de ponto de fusão 152QC.

III) (5E,7E,22E) -(IS,3R)-1,3-bis-(t-butildimetilsililoxi-9,10-seco-24a-homo-5,7,10 (19) ,22-colestatetraeno-24-ona 3.

8,0 g de (lS,3R)-bis-(t-butildimetilsililoxi)-(20S)-formil-9,10-secopregna-(5E,7E,10(19))-trieno (Calverley Tetrahedron 43, 4609 (1987)) e 12,0 g do composto 1 são agitados em 46 ml de sulfóxido de dimetilo durante 6 horas a 105QC sob atmosfera de azoto. Em seguida a mistura reactiva é d_i luída à temperatura ambiente com acetato de etilo e lava-se com solução de cloreto de sódio. A fase orgânica é seca com sulfato de sódio e filtrada. Depois da eliminação do dissolvente o resíduo é filtrado com tolueno através de sí. lica-gel. A evaporação do dissolvente e a cromatografia de gradiente (tolueno/hexano (1:1)—*· tolueno) do resíduo atra vés de sílica-gel produzem 3,6 g do composto de título 3 na forma de um sólido amorfo.

(5E,7E,22E)-(1S,3R)-1,3-bis-(t-butildimetilsililoxi)-24-ci clopropilmetil-9,10-secocola-5,7,10(19),22-tetraeno-24-ona 4

Realização e tratamento como em II.

Reagentes: 3,72 g do composto de (20S)-formilo como em II.

5,6 g do composto 2; em 21 ml de sulfóxido de dimeti lo.

Rendimento: 2,2 g do composto 4 na forma de um óleo cristalizável de ponto de fusão: 97-989C.

IV) (5E,7E,22E)-(1S,3R,24R)-1,3-bis-(t-butildimetilsililoxi)-9,10-seco-24a-homo-5,7,10(19),22-colestatetraeno-24-ol 5.

V) (5E,7E,22E)-(1S,3R,24S)-1,3-bis-(t-butildimetilsililoxi)-9,10-seco-24a-homo-5,7,10(19) ,22-colestatetraeno-24-ol

3,5 g do composto 3 em 9 ml de tetrahidrofurano e 20,6 ml de metanol são misturados com 20,6 ml de uma solução meta nólica 0,4 molar de CeClg.71^0. Sob atmosfera de azoto e mediante arrefecimento por gelo adicionam-se 570 mg de bo rohidreto de sódio às porções. A suspensão é ainda agitada durante 40 minutos mantendo-se o arrefecimento por gelo e em seguida é adicionada a uma solução de gelo/cloreto de sódio. A fase aquosa é extraída com acetato de etilo, a fase orgânica é lavada com água até à neutralidade e ê seca com sulfato de sódio. A filtração e eliminação do dissolvente produzem 3,5 g de um óleo. Por cromatografia através de sílica-gel com acetato de etilo/hexano (1:9) obtêm-se 534 mg do composto 5 e 692 mg do composto 6, cada um na forma de um óleo cristalizãvel.

(5E,7E,22E)-(1S,3R,24R)-1,3-bis-(t-butildimetilsililoxi)-24-ciclopropilmetil-9,10-secocola-5,7,10(19),22-tetraeno -24-01 7 (5E,7E,22E)-(1S,3R,24S)-1,3-bis-(t-butildimetilsililoxi)-24-ciclopropilmetil-9,10-secocola-5,7,10(19),22-tetraeno -24-01 8

Realização e tratamento como em IV/V.

Reagentes: 2,2 g do composto 4 em 5,8 ml de tetrahidrofurano e 13,0 ml de metanol

13,0 ml de solução 0,4 molar de CeCl₃.7H₂0 ii 359 mg de borohidreto de sódio u

j 2,22 g de óleo como produto bruto ! Rendimento: 1,05 g do composto 7 (em conjunto com o composto 8)

330 mg do composto 8 na forma de resina.

I·

Nas reacções seguintes descreve-se agol· í ra uma outra reacção do composto 8; o composto 7 pode também ser tratado analogamente ao processo descrito a seguir.

I ' (VI) (5Z,7E,22E)-(1S,3R,24R)-1,3-bis-(t-butildimetilsililoxi)-9,10-seco-24a-homo-5,7,10 (19) ,22-colestatetraeno-24-ol 9_ , 534 mg do composto 5 são dissolvidos em 75 ml de tolueno e depois da adição de 89 mg de antraceno e uma gota de trietilamina submete-se durante 5 minutos, ã temperatura ;^! ambiente, à radiação de uma lâmpada de vapor de mercúrio de alta pressão (Heraeus TQ 150) por vidro de pirex. A d mistura reactiva turva é filtrada, é concentrada e o resí ,í duo e cromatográfado com acetato de etilo/hexano (1:9) , através de sílica-gel. Obtêm-se 410 mg do composto de título 9 na forma de óleo.

íl

IJ

Íj (VII) (5Z , 7E, 22E) - (IS, 3R, 24S) -1,3-bis- (t-butildimetilsililoxi) í! -9,10-seco-24a-homo-5,7,10 (19) ,22-colestatetraeno-24-ol 10 í^;

Analogamente às condições indicada em (VI), a partir de ί 680 mg do composto 6, obtêm-se 570 mg do composto de títu lo 10 na forma de óleo.

i ί (5Z,7E,22E)-(1S,3R,24S)-1,3-bis-(t-butildimetilsililoxi)i^!-24-ciclopropilmetil-9,10-secocola-5,7,10(19),22-tetraeno

-24-01 3Λ ií jj

320 mg do composto 8 são dissolvidos em 45 ml de tolueno e ί I ( Λ» jj depois da adiçao de 54 mg de antraceno e uma gota de trii etilamina submete-se durante 5 minutos, à temperatura ambi ente, à radiação de uma lâmpada de vapor de mercúrio de *' alta pressão (Hereaus TQ 150) por vidro pirex. A mistura • reactiva é concentrada e o resíduo (375 mg) - uma mistura do composto 11 e antraceno - é submetido directamente a reacção com fluoreto de tetrabutilamónio.

EXEMPLO 1

I j (5Z,7E,22E)-(IS,3R,24R)-9,10-seco-24a-homo-5,7,10(19),22-colesj tatetraeno-1,3,24-triol 12

200 mg do composto 9 dissolvidos em 8,8 ml de tetrahidrofurano são mantidos 50 minutos a 60QC com 1,5 ,í ml de uma solução 1 molar de fluoreto de tetrabutilamónio em te ( trahidrofurano. A mistura reaetiva depois de arrefecida é diluí da com acetato de etilo e é lavada com solução de hidrogenocari I bonato de sódio e solução de cloreto de sódio. A fase orgânica é lavada com água até à neutralidade e é seca com sulfato de só dio. Por filtração e evaporação do dissolvente obtêm-se 210 mg í de um óleo como resíduo. Por cromatografia através de sílica( -gel com acetato de etilo/hexano (2:1) obtêm-se 124 mg do comij posto de título 12 na forma de um sólido amorfo. UV (metanol) Λ

II = 210 (Ê = 14 720), 264 (14 240).

.1 íi íi EXEMPLO 2 ii -(5Z,7E,22E) - (1S,3R,24S) -9,10-seco-24a-homo-5,7,10(19) ,22-colesi tatetraeno-1,3,24-triol

I Nas condições do Exemplo 1, a partir de , 200 mg do composto 10 obtem-se 88 mg do composto de título 13, íi de ponto de fusão 128-1292C.

íi í|

II

EXEMPLO 3 i , . , , „

I i; (5Z,7E,22E) - (1S,3R,24S) -24-ciclopropilmetil-9,10-secocola-5,7, 10(19),22-tetraeno-l,3,24-triol 14

.....j 375 mg do resíduo do composto 11 em j: 14,2 ml de tetrahidrofurano são mantidos 60 minutos a 60QC con:j juntamente com 2,39 ml de uma solução 1 molar de fluoreto de te _; trabutilamónio em tetrahidrofurano, sob atmosfera de azoto. Pai ra o restante tratamento a mistura reactiva, depois de arrefeci, í da, é vertida em solução de hidrogenocarbonato de sódio fria e j, em seguida é extraída com acetato de etilo. Depois da secagem |í da fase orgânica com sulfato de sódio, filtração e evaporação |i do dissolvente, obtêm-se 400 mg do resíduo resinoso. A cromatot grafia através de sílica-gel com acetato de etilo/hexano (2:1) produz 150 mg do composto 14 com ponto de fusão 137-139QC.

EXEMPLO 4 í (5Z,7E,22E)-(1S,3R,24S)-24-ciclopentilmetil-9,10-secocola-5,7, li

10(19),22-tetraeno-l,3,24-triol (16)

I) isoamil-carbonilmetilenotrifenil-fosforano 15

O composto de título 15 é obtido na for jl ma de um sólido com ponto de fusão 64-67QC, a partir de |í isoamil-metil-cetona, analogamente ao processo descrito íj para a preparação do isobutilcarbonilmetilenotrifenil-foss jl forano.

II) - V) 0 composto de título 16 é obtido analogamente à sequên | cia ^: II) - V) descrita no Exemplo 1, a partir de 5,69 g de (1S,3R)t -bis-(t-butildimetilsililoxi)-(20S)-formil-9,10-secopregna ; -(5E,7E,10(19))-trieno A e 8,93 g de isoamilcarbonilmetir lenotrifenilfosforano 15, na forma de um sólido com ponto í; de fusão 119-120,520.

í f

I

I EXEMPLO 5 li (5Z,7E,22E)-(1S,3R,24S) -24-ciclopentilmetil-9,10-secocola-5,7, h 10 (19) ,22-tetraeno-l,3,24-triol 18

Ιι I) ciclopentilmetilcarbonilmetilenotrifenilfosforano 17 composto de título 17 é obtido na for ma de um óleo cristalizável com ponto de fusão 84-87QC, a

I:

h partir de ciclopentilacetona, analogamente ao processo des^ i! crito para a preparação do isobutilcarbonilmetilenotrifenilfosforano.

; II) - V) 0 composto de título 18 é obtido analogamente à sequên cia II - V) descrita no Exemplo 1, a partir de 3,50 g de (1S,3R)-bis-(t-butildimetilsililoxi)-(20S)-formil-9,10-secopregna-(5E,7E,10(19))-trieno A e 5,88 g do composto 17, na forma de um sólido com ponto de fusão 90-93QC.

EXEMPLO 6 (5 Ζ,7E,22E)-(IS,3R,24R)-24-(2-etilbutil)-9,10-secocola-5,7,10(19) , 22-tetraeno-l, 3,24-triol 25 e ί

EXEMPLO 7

I í; (5Z,7E,22E)~ (1S,3R,24S)-24- (2-etilbutil) -9,10-secocola-5,7,10: (19),22-tetraeno-l,3,24-triol 26 ί : -P j, ! I) 4-etil-pentanoilmetilenotrifenilfosforano 19^ ; a) etil-2-buteno-l(2)-carbonitrilo 19a

I

170 g (2 mol) de ácido cianoacético são incorporados em 100 ml de benzeno num balão de 1 litro, conjuntamente com 10 g de acetato de amónio e 10 g de ácido acético. Adicionam-se-lhes 172 g (2 mol) de dietilaceto ; na e ferve-se ao refluxo 18 horas muito cuidadosamente, j com um separador de ãgua. Depois da evaporação do benzeno

H <

il o residuo e adicionado a 1000 ml de acido clorídrico 2N, e ;; extraído com éter, a fase orgânica é separada, é lavada : com solução saturada de cloreto de sódio, seca-se com suli fato de sódio e concentra-se. O resíduo é destilado por ’ duas vezes a 18 mm Hg. Obtêm-se 96,7 g do composto 19a na •j forma de um óleo incolor.

p.e. 66-68°C, IR Y~(CN) 2240-2212 cm¹.

i b) etil-2-butanocarbonitrilo 19b

96,7 g (886 mmol) de 4-etil-2-buteno-1 (2)-carbonitrilo 19a são completados a um volume de 150 ml com etanol. Adicionam-se-lhes 2 g de paládio/carvão a j 10% e procede-se à hidrogenaçáo a 50QC durante 7 horas. A i mistura reactiva é filtrada através de celite, ê concentra da, é tomada com 400 ml de ãcido clorídrico 2N, é extraída com éter, é seca, é concentrada e destilada em vácuo. Obtêm-se 50,5 g da substância 19b na forma de um óleo incolor. p.e.^6-8. 45°C, NMR(300MHz) [§] 0,92(6H,t) 1,5 (5H,m) 2,34 (2H,d)

H '' c) 4-etil-2-hexanona 19c j 14,4 g (600 mmol) de aparas de magnésio j são colocados, conjuntamente com 150 ml de éter dietílico, num balão de três tubuladuras. Adicionam-se-lhes 85,2 g (600 mmol) de iodeto de metilo em 50 ml de éter, gota a go | ta. Em seguida adicionam-se 100 ml de benzeno e elimina-se !! por destilação uma parte do éter dietílico. Adicionam-se ij ainda 33,3 g (300 mmol) de etil-2-butil-carbonitrilo 19b e h ferve-se ao refluxo 5 horas. A mistura reactiva é hidroli;^! sada com solução de cloreto de amónio, é extraída com éter,

I é lavada com ãgua, seca com sulfato de sódio, é concentra| da e é destilada em vácuo através de uma coluna de Vigreux.

H Obtêm-se 12,4 g do composto 19c na forma de um óleo incolor.

!} p.e.¹⁶ 54QC. IR<(CD) 1730 cm^-1

NMR [£] 0,86 (6H,t) 1,30 (4H,m) 1,80 (lH,m) 2,13 (3H,s) ji 2,33 (2H,d)

II íj jl d) bromometil-4-etil-pentilcetona 19d ! 12 g (93 mmol) de 4-etil-2-hexanona em i 60 ml de metanol são misturados a 0QC com 14,8 g (93 mmol) | de bromo e agita-se ainda 30 minutos a 0QC. Em seguida adih cionam-se 100 ml de água mediante arrefecimento e agita-se j, 16 horas à temperatura ambiente. A mistura reactiva é mistu •: rada com solução saturada de cloreto de sódio, é extraída com éter, é lavada com solução saturada de hidrogenocarbonato de sódio e é seca com sulfato de sódio. Depois da fil_ tração o dissolvente ê evaporado e o resíduo é destilado. Obtêm-se 13,4 g de bromometil-4-etilpentilcetona 19d.

Kp¹² 54QC

NMR (300 MHz) [61 0,86 (6H,t) 1,23 (4H,m) 1,86 (lH,m) 2,58 (2H,d) 3,88 (2H,s)

e) brometo de 4-etilpentanoilmetiltrifenilfosfõnio 19e

13.4 g (65 mmol) de bromometil-4-etilpentilcetona 19d são adicionados a 17,3 g (65 mmol) de tri fenilfosfina. Depois de repousar uma noite adicionam-se 76 ml de cloreto de metileno e ferve-se ao refluxo durante 30 minutos. Depois do arrefecimento a mistura reaetiva é misturada com 110 ml de éter e é lavada com 80 ml de mistura cloreto de metileno/éter (3:5). Obtêm-se 26,4 g do brometo de fosfónio 19e.

NMR (300 MHz) [$] 0,78 (6H, t) 1,20 (4H,m) 1,77 (lH,m) 2,87 (2H,d) 5,7 (2H,d) 7,78 (15H,m)

f) 4-etilpentanoilmetilenotrifenilfosforano 19 g (55 mmol) de brometo de 4-etilpentanoilmetiltrifenilfosfónio 19e em 70 ml de metanol são misturados com 5,04 g (60 mmol) de hidrogenocarbonato de sódio em 70 ml de ãgua e agita-se 30 minutos à temperatura ambiente. A mistura reaetiva é vertida em ãgua, é extraída com cloreto de metileno, a fase orgânica é separada, é lavada com ãgua, é seca com sulfato de sõdio e concentrada.

O resíduo é triturado com acetato de etilo. Obtêm-se 18,8 g do composto de título 19.

NMR (300 MHz) [fc] 0,93 (6H,t) 1,52 (4H,m) 2,31 (lH,m) 2,48 (2H,d) 3,94 (lH,br d) 7,48 e 7,88 (15H,m)

II) (5E,7E,22E)-(1S,3R)-1,3-bis-(t-butildimetilsililoxi)-24-(2-etilbutil)-9,10-secocola-5,7,10(19),22-tetraeno-24-ona (20)

3.4 g (5,9 mmol) do composto de (20S)-formilo A e 5,7 g (14,7 mmol) do composto 19 são aquecidos

Ij em 100 ml de tolueno durante uma noite a 80°C. Em seguida i a mistura reactiva é vertida em água, a fase orgânica é se ί parada, e lavada com solução saturada de cloreto de sodio, é seca com sulfato de sódio e concentrada. 0 resíduo oleoH so é cromatografado através de sílica-gel com tolueno. Ob! têm-se 1,1 g do composto 20 na forma de óleo, i, NMR (300 MHz) [$] 0,53 (3H,S) 0,79 (24 H) 1,2 (3H,d) 4,17 i (lH,m) 4,48 (lH,m) 4,81 (2H,d) 5,78 (lH,d) 5,98 (lH,d)

6,39 (lH,d) 6,62 (IH, ^.)

III) (5E,7E,22E)-(1S,3R,24R)-1,3-bis-(t-butildimetilsililoxi)-24-(2-etilbutil)-9,10-secocola-5,7,10(19),22-tetraeno-24—ol 21 (5E,7E,22E)-(IS,3R,24S)-1,3-bis-(t-butil dimetilsililoxi)-24-(2-etilbutil)-9,lO-secocola-5,7,10(19)22-tetraeno-24-ol 22

Realização e tratamento como em II, Exemplos 1/2.

Reagentes: 1,1 g (1,6 mmol) do composto 20 em 2,8 ml de tetrahidrofurano e 6.3 ml de metanol í 920 mg (2,47 mmol) ij nol ii 263 mg (6,96 mmol) i

l· Rendimento: 340 mg do composto forma de óleos.

e 22 NMR (300 MHz) ji [$] 0,50 (3H,S) 0,7-0,88 (24H) ¹ (lH,m) 4,91 (2H,d) i (lH,d) 6,40 (lH,d) de CeCl^.V^O em 6,1 ml de metade borohidreto de sódio 21 e 140 mg do composto 22 na

4,05 (lH,m) 4,14 (lH,m) 4,48 i,32 (lH,dd) 5,47 (lH,dd) 5,77 ί IV) (5Z,7E,22E)-(1S,3R,24R)-1,3-bis-(t-butildimetilsililoxi)i’ -24-(2-etilbutil)-9,10-secocola-5,7,10 (19) ,22-tetraeno-24Ί -ol 23.

I ~ j 340 mg do composto 21 são dissolvidos ί em 60 ml de tolueno e depois da adição de 53 mg (0,30 mmol) r de antraceno e uma gota de trietilamina submete-se durante

H 5 minutos e à temperatura ambiente à radiação de uma lâmpa da de vapor de mercúrio de alta pressão (Heraus TQ 150) por vidro pirex. A mistura reactiva turva é filtrada e concen20 trada. Obtêm-se 340 mg do composto de título 23.

(5Z,7E,22E)-(1S,3R,24S)-1,3-bis-(t-butildimetilsililoxi)-24-(2-etilbutil)-9,10-secocola-5,7,10(19)22-tetraeno-24-ol 24

Analogamente âs condições anteriores descritas em (IV) a partir de 130 mg do composto 22 obtêm-se 130 mg do composto de título 24 na forma de óleo.

V) (5Z,7E,22E)-(1S,3R,24R)-24-(2-etilbutil)-9,10-secocola-5, 7,10(19),22-tetraeno-l,3,24-triol (25)

340 mg do composto 23 em 10 ml de tetra hidrofurano são mantidos uma hora a 55QC conjuntamente com 2 ml de fluoreto de tetrabutilamónio IN em tetrahidrofurano. A mistura reactiva depois de arrefecida é diluída com acetato de etilo e é lavada com solução de hidrogenocarbona to de sódio e solução de cloreto de sódio. A fase orgânica é lavada com água até à neutralidade, é seca com sulfato de sódio e concentrada. Depois da cromatografia através de sílica-gel com acetato de etilo e evaporação o resíduo é tomado com hexano e filtrado. Obtêm-se 110 mg do composto de título 25 na forma de um sólido amorfo.

pf. 147-154QC.

(5 Ζ,7E,22E)-(IS,3R,24S)-24-(2-etilbutil)-9,10-secocola-5,7, 10(19) ,22-tetraeno-l,3,24-triol 26

Nas condições descritas para a preparaçao do composto 25 e a partir de 130 mg do composto 24 obtêm-se 40 mg do composto de título 26 com ponto de fusão 135-138QC.

Claims

REIVINDICAÇÕES - lã Processo para a preparação de derivados de 24-homo-vitamina D de fórmula I (CH

1, caracterizado por se obterem derivados de 24-homo-vitamina D

1, caracterizado por se obterem derivados de 24-homo-vitamina D 4 5 em que R e R representam cada um 1 atomo de hidrogénio.

- 4ã Processo de acordo com a reivindicação

1' 4' 2 3

R , R , R e R , n e A e B tem os significados indicados na fórmula III, e por em seguida se transformar este composto num composto de fórmula geral I por dissociação de grupos de bloqueio de hidroxi existentes e eventualmente por esterificação parcial ou total dos grupos hidroxi.

- 2ã Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por se obterem derivados de 24-homo-vitamina D em que R^ representa um grupo hidroxi.

1' ' R representa um atomo de hidrogénio ou um grupo hidroxi bloqueado e

2 3 em que R e R representam cada um um grupo metilo.

2'n ιί na qual

2 3

R e R independentemente um do outro representam um grupo alqui lo de cadeia linear ou ramificada com 1 a 4 átomos de carbo: no, um grupo trifluormetilo, ou em conjunto formam um anel í carbocíclico com 3 a 9 átomos de carbono saturado no qual se inclui também o átomo de carbono 25,

2 n 24a

R~

R representa um átomo de hidrogénio, um grupo hidroxi ou um grupo aciloxi com 1 a 8 átomos de carbono,

- 3* Processo de acordo com a reivindicação

4'

R representa um grupo de bloqueio de hidroxi e 2 3 , R e R e n tem os significados indicados para a formula I, eventualmente depois da hidrogenação selectiva da dupla liJ gação 22,23, por redução da função carbonilo na posição 24 j num composto de fórmula geral III (III), ί na qual j' i' 4' 2 3 !; R , R , R e R e n tem os significados indicados na formula IV e i A e B ou representam em conjunto uma segunda ligação, ou cada um representa um átomo de hidrogénio, por se transformar um composto de fórmula III por radiação com luz ultravioleta, com modificação da estereoisomeria na dupla ligação 5,6, num composto de fórmula geral II (II),

R /A_r3 n

4 5

R e R independentemente um do outro representam 1 atomo de hií drogénio ou um grupo acilo possuindo 1 a 8 átomos de carbo)ί no, e

I!

Π A e B representam cada um 1 ãtomo de hidrogénio, ou em conjunto representam uma segunda ligação, assim como n él, 2, 3, 4 ou 5, caracterizado por se transformar um composto de fórmula geral IV (IV) , (CH

- 5§ Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por se obterem derivados de 24-homo-vitamina D em que A e B em conjunto representam uma segunda ligação.

- 6ã Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por se obterem derivados de 24-homo-vitamina D em que n é 1.

- 7ã Processo de acordo com as reivindicações anteriores, caracterizado por se obterem nomeadamente os compos_ tos (5Z,7E,22E)-(IS,3R,24R)-9,10-seco-24a-homo-5,7,10(19),22-colestatetraeno-1,3,24-triol, (5Z,7E,22E)-(IS,3R,24S)-9,10-seco-24a-homo-5,7,10(19),22-colestatetraeno-1,3,24-triol.

- 8ã Processo para a preparação de composições farmacêuticas, caracterizado por se incorporar como ingrediente activo pelo menos um composto de fórmula I, quando prepa rado por um processo de acordo com as reivindicações 1 a 7, em

I í combinação com substâncias veiculares farmacêuticas correntes.

A requerente reivindica a prioridade do pedido alemão apresentado em 2 de Outubro de 1989, sob o NQ. P 39 33 034.6.

Lisboa, 1 de Outubro de 1990