HU210032B

HU210032B - Process for the production of 24-homo-d-vitamin derivatives and pharmaceutical compositions containing the same

Info

Publication number: HU210032B
Application number: HU906284A
Authority: HU
Inventors: Gerald Dr Kirsch; Guenter Dr Neef; Katica Schwarz; Matthias Dr Braeutigam; Ruth Dr Thieroff-Eckerdt; Petra Rach
Original assignee: Schering Ag
Priority date: 1989-10-02
Filing date: 1990-10-01
Publication date: 1995-01-30
Also published as: PT95473B; ATE103893T1; NO904269L; ZA907876B; HU906284D0; DE59005254D1; ES2052166T3; DD299178A5; FI904850A0; IL95872A; CA2026671C; FI93643C; JPH03246273A; CN1053103C; CN1031705C; DK0421561T3; DE3933034A1; IE71227B1; IE903520A1; FI93643B

Description

A találmány tárgya eljárás az új (I) általános képletű 24-homo-D-vitamin-származékok, valamint a hatóanyagként ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására.

Az új vegyületek (I) általános képletében R^l jelentése hidroxilcsoport,

R² és R³ jelentése egymástól függetlenül egyenes vagy elágazó szénláncú, 1-4 szénatomos alkilcsoport, vagy közösen a 25-ös számú szénatommal együtt

3-9 szénatomos, telített karbociklusos gyűrűt alkotnak, n értéke 1,2, 3, 4 vagy 5.

Ha R² és R³ a 25-ös helyzetű szénatommal együtt egy telített karbociklusos gyűrűt képez, úgy ez különösen ciklopropil-, ciklopentil- vagy ciklohexilcsoport lehet.

A találmány szerint 24-homo-D-vitamin-származékok közül előnyösek azok, amelyeknek (I) általános képletében

R¹ jelentése hidroxilcsoport,

R² és R³ jelentése hidrogéncsoport, n értéke 1, 2 vagy 3.

Különösen előnyösek az alábbi vegyületek: (5Z,7E,22E)-( 1S ,3R,24R)-9,10-szeko-24a-homo5,7,10( 19),22-koleszta-tetraén-1,3,24-triol, (5Z,7E,22E)-( 1 S,3R,24S)-9,10-szeko-24a-homo5,7,10(19),22-koleszta-tetraén-l,3,24-triol.

A természetes D₂- és D₃-vitaminok, illetve biológiailag aktív metabolitjai (a természetes D₂- és D₃-vitaminok önmagukban biológiailag inaktívak és csak azután lesznek aktívak, hogy a 25-helyzetben a májban illetve az 1-helyzetben a vesében hidroxileződnek) jellegzetes szerkezeti vonása a C₁₀- és C₁₉-helyzetek közötti kettőskötés, amelyet meghatározónak tartanak a D-vitamin-aktivitás szempontjából [vö. (V) általános képlet], AD₂- és D₃-vitamin hatása a plazma-Ca⁺⁺- és a plazma-foszfát-tükör stabilizálásában áll; megakadályozzák a plazma-Ca^-tükör csökkenését.

A kalcium- és foszfátanyagcserére kifejtett jelentős hatásuk mellett a D₂- és D₃-vitamin és szintetikus származékai sejtszaporodást gátló és sejtdifferenciáló hatással is rendelkeznek (De Luca, H. F.: The Metabolism and Function of Vitamin D in Biochemistry of Steroid Hormones; Hrsg. H. L. J. Makin, 2and Edition, Blackwell Scientific Publications 1984, 71-116. oldal). D-vitamin alkalmazásnál azonban túladagolási jelenségek is felléphetnek (hiperkalcémia).

24-helyzetben hidroxilezett 1-alfa-kolekalciferolokat már a DE-AS2 526 981. számú német szabadalmi leírásban is ismertettek; toxicitásuk kisebb, mint a megfelelő nem hidroxilezett 1-alfa-kolekalciferolé. A hidroxilezett vegyületek szelektíven aktiválják a bélben kalciumszorpciót és csontabszorpciós hatásuk gyengébb, mint az 1-alfa-kolekalciferolé.

A WO 87/00 834 számon közzétett nemzetközi szabadalmi bejelentésben leírt 24-hidroxi-D-vitamin-analógok emberek és állatok abnormális sejtszaporodás és/vagy -differenciálódás következtében fellépő zavarainak kezelésére alkalmazhatók.

Nemrégiben közölte De Luca a különböző 1,25-dihidroxi-homo-D-vitamin-származékok csontabszorpciós hatással kapcsolatos és HL-60 sejtdifferenciálódásra vonatkozó tulajdonságainak disszociációját. Emellett az in vitro csontabszorpciós hatás az in vivő kalcium-mobilizálás közvetlen mutatója.

Azt találtuk, hogy a találmány szerinti, (I) általános képletű 24-homo-D-vitamin-származékok a Calcitriol nevű D-vitamin-származékkal (l-alfa,25-dihidroxi-kolekalciferol) összehasonlítva meglepő módon kedvezőbb hatásspektrumot mutatnak. Míg a kalcium- és foszfátanyagcserére kifejtett hatás láthatóan csökkent (a túladagolás vagy szükséges nagyobb dózisban való adagolás következtében fellépő mellékhatások csökkenése), a sejtszaporodást gátló és sejtdifferenciáló hatások megközelítőleg azonosak maradnak (disszociáció).

A találmány szerinti vegyületek D-vitamin aküvitását a Calcitriol-receptor vizsgálattal határozzuk meg. A vizsgálatot rachitis-es tyúkok beléből származó specifikus receptorprotein alkalmazásával végezzük. A receptort tartalmazó kötődési proteint 0,575 ml reakciótérfogatban ³H-Calcitriol-lal (0,5 ng/ml) inkubáljuk a vizsgálandó anyag távollétében illetve jelenlétében, 1 óra hosszat egy kémcsőben. A szabad és a receptorhoz kötött Calcitriol elválasztására faszén-dextrán abszorpciót végzünk. Ennek során mindegyik kémcsőbe 200 μΐ faszén-dextrán szuszpenziót teszünk és 22 ’Con 30 percig inkubáljuk. Ezután a mintákat 1500 g-on 10 percig 4 °C-on centrifugáljuk. A maradékot dekantáljuk és körülbelül 1 órás ekvilibrálás után „AtomLight”-ban béta-számlálóval mérjük.

A vizsgálandó anyag és referenciaanyag (jelzetlen Calcitril) különböző koncentrációval kapott, a ³H-val jelzett referenciaanyag kiszorítására vonatkozó kompetíciós görbéket összehasonlítottuk, és megállapítottunk egy kompetíciós faktort.

Ezt a faktort úgy definiáltuk, mint a mindenkori vizsgálandó anyag és referenciaanyag azon koncentrációinak hányadosát, ami az 50%-os kompetícióhoz szükséges:

A vizsgálandó anyag koncentrációja 50% kompetíciónál

A referenciaanyag koncentrációja 50% kompetíciónál

Ennek értelmében az (5Z,7E,22E)-(1S,3R,24R)9,10-szeko-24a-homo-5,7,10( 19),22-koleszta-tetraén1,3,24-triol (A vegyület) KF-értéke 67 és az (5Z,7E,22E)(1S ,3R,24S)-9,10-szeko-24a-homo-5,7,10( 19),22-koles zta-tetraén-1,3,24-triói (B vegyület) KF-értéke 0,8.

A találmány szerinti vegyületek antiproliferációs hatásának meghatározására az A és B vegyületekkel mint vizsgálati anyagokkal az alábbiakban leírt vizsgá55 latot hajtjuk végre:

Újszülött egerek keratinocitáit kipreparáljuk és tenyésztjük Yuspa, S. és Harris, C. C. módszerének [„Altered differentiation of mouse epidermal cells treated with retinyl acetate in vitro”, Exp. Cell Rés., 86, 9560 105, (1974)] módosított alkalmazásával.

HU 210 032 Β

Mindkét nemű újszülött NMRI-egereket lefejezéssel megölünk, bőrüket kipreparáljuk, antibiotikum-antimikotikum oldatban mossuk és dermális oldalával lefelé Dispase II oldatban (1,2 egység/ml M199 szövettenyésztő közegben + 25 millimól/l+HEPES 15% magzati borjúszérum (FCS)+50 egység/ml penicillin/streptomicin (P/S) (preparációs közeg, PM) inkubáljuk 4 °C-on egy éjszakán keresztül. Az epidermist lehúzzuk és tripszines kezeléssel egyedi sejtekből álló szuszpenziót hozunk létre.

Centrifugálás után a sejtüledéket újra szuszpendáljuk, tripán-kékkel megfestjük, meghatározzuk a kis kerek élő sejtek számát és a sejteket 4x10⁵ sejt/cm² vastagságban Primaria 24-üregű lemezekre, szövettenyésztő közegre (Ml99+15% FCS+50 egység/ml P/S) telepítjük. 24 órát inkubáljuk 37 ’C-on, majd a sejteket foszfáttal pufferolt sóoldattal (PBS) mossuk és további 24 órát inkubáljuk szérummentes szövettenyésztő közegben (M199+50 egység/ml P/S+0,5% etanol) vizsgálandó anyaggal együtt vagy anélkül, 32,5 ’C-on. Ezután hozzáadunk 0,4 μΟ/50 pml ³H-metil-timidint (40 Ci/millimól). 4 óra múlva a közeget leszívatjuk és a reakciót 500 μΐ jéghideg 10%-os triklór-ecetsav (TCA) hozzáadásával befejezzük. A sejteket TCA-val és PBS-sel mossuk, Proteinase K oldatban (10 millimól/1 Tris-HCl, 10 millimól/1 EDTA, 10 millimól/1 nátrium-klorid, 0,2% Triton-X 100, pH = 8,0 50 μ/ml Proteinkinase K) inkubálva lízisnek vetjük alá és a lízissel nyert terméket centrifugálással tisztítjuk. A felülúszóban meghatározzuk a radioaktivitást szcintillációs fotometriával, és a DNS diamidino-fenil-indollal (DAPI) végzett specifikus festése után a DNS-koncentrációt fluoreszcenciális fotometriával.

Eszerint a Calcitriol, valamint az A és B vegyületek dózisfüggő módon gátolják a ³H-timidin beépülését a DNS-be a következő, közelítőleg azonos IC₅₀-értékekkel:

Calcitriol 2,7xl0“⁹ mól/1

A vegyület 6,0xl0“⁹ mól/1

B vegyület 9,5x10^-9 mól/1.

A találmány szerinti vegyületek a csökkent hiperkalcémia-veszély miatt különösen alkalmasak olyan megbetegedések kezelésére alkalmas gyógyszerkészítmények előállítására, amely megbetegedéseket hiperproliferáció jellemez, mint például a bőr hiperproliferatív betegségei (psoriasis) és rosszindulatú daganatok (leukémia, vastagbél-karcióma, emlőkarcióma). Az eredményes kezelés előfeltétele a Calcitriol-receptorok kimutatása a célszervben.

A találmány szerint előállítható gyógyszerkészítmények legalább egy (I) általános képletű vegyületet tartalmaznak egy gyógyászatilag elfogadható hordozóval együtt. A hatóanyagokat kiszerelhetjük oldatok alakjában gyógyszerészetileg elfogadható oldószerekben, vagy emulziók, szuszpenziók vagy diszperziók formájában megfelelő, gyógyászatilag elfogadható oldószerekben vagy hordozókban, vagy pirulák, tabletták vagy kapszulák formájában, amelyek önmagában ismert módon készülnek és szilárd hordozóanyagokat tartalmaznak. Helyi (topikális) alkalmazásra a vegyületeket krémek vagy kenőcsök alakjában, vagy más hasonló, helyi alkalmazásra megfelelő gyógyszerformában szereljük ki. Mindegyik készítmény tartalmazhat további, gyógyszerészetileg elfogadható és nem mérgező segédanyagokat, mint például stabilizátorokat, antioxidánsokat, kötőanyagokat, színezőanyagokat, emulgeátorokat vagy ízjavítókat. A vegyületeket előnyösen injekcióban vagy megfelelő steril oldatok intravénás infúzióban való beadásával vagy szájon át adagolva, a tápcsatornán keresztül, vagy helyi adagolással, krémek, kenőcsök, oldatok vagy megfelelő transzdermális tapaszok formájában alkalmazzuk, amint azt az EP-A 0 387 077 számú európai szabadalmi leírásban ismertetik.

A napi dózis körülbelül 0,1 pg/beteg/nap és 1000 pg/betcg/nap között, előnyösen 1,0-500 pg/beteg/nap között van.

A találmány ezen kívül kiterjed az (I) általános képletű vegyületek alkalmazására gyógyszerkészítmények előállítására.

Az (I) általános képletű 24-homo-D-vitamin-származékokat a találmány értelmében úgy állítjuk elő, hogy egy (IV) általános képletű vegyületet - a képletben R¹'jelentése védett hidroxilcsoport és R^jelentése hidroxilvédőcsoport, R² és R³, valamint n jelentése az (I) általános képletű vegyületnél megadott - a 24-karbonilfunkció redukálásával (III) általános képletű vegyületté - a képletben R¹' és R⁴' jelentése a (IV) általános képletű vegyületnél, R², R³, n jelentése az (I) általános képletű vegyületnél megadott - alakítunk, a (III) általános képletű vegyületet ultraibolya fénnyel besugározva a sztereoizomeria megfordításával az 5,6kettőskötésnél (II) általános képletű vegyületté - R¹' és R⁴' jelentése a (IV) általános képletnél, R² és R³, n jelentése az (I) általános képletnél megadott - alakítjuk, majd ezt a vegyületet a jelenlevő hidroxil-védőcsoportok lehasításával (I) általános képletű vegyületté alakítjuk át.

A 24-karbonilfunkció redukálását a (IV) általános képletű vegyületben például Cer(III)-klorid/nátriumbór-hidriddel végezzük poláros oldószerben. A redukciónál (24R)- és (24S)-24-hidroxi-izomerje is keletkezik a (III) általános képletű vegyületnek. A két izomer kromatográfiásan elválasztható.

A (III) általános képletű vegyület ezt követő átalakítása (II) általános képletű vegyületté például ultraibolya fénnyel való besugárzással végezhető egy úgynevezett „triplettszenzibilizátor” jelenlétében. A találmány szerinti megoldásban erre a célra elsősorban antracént alkalmazunk. Az 5,6-kettőskötés Π-kötésének hasításával, az A-gyűrű 180°-os rotációjával az 5,6helyzetű egyszeres kötés körül és az 5,6-kettőskötés helyreállításával az 5,6-kettőskötésnél levő sztereoizoméria megfordul.

Ezután lehasítjuk a jelenlevő hidroxi-védőcsoportokat, előnyösen tetra-n-butil-ammónium-fluorid alkalmazásával.

A (IV) általános képletű kiindulási anyagok előállítását az (A) általános képletű, a Tetrahedron 43, 4609 (1987) irodalmi helyen, illetve a Wo 87/00 834. nem3

HU 210 032 Β zetközi szabadalmi bejelentésben (Calverley és munkatársai) ismertetett vegyületekből - a képletben az R¹ és R⁴ hidroxi-védőcsoportok dimetil-t-butil-szilil-csoportok - kiindulva végezhetjük; a találmány értelmében más trialkil-szilil-csoportok is alkalmazhatók védőcsoportként.

Az (A) általános képletű vegyületek reagáltatása egy (VI) általános képletű foszforánnal - ahol R², R³ és n jelentése az (I) általános képletnél megadott - a (IV) általános képletű vegyületeket eredményezi (Wittid-reakció).

A következő nem-korlátozó előállítási példák a találmány közelebbi szemléltetésére szolgálnak.

A kiindulási anyagok előállítása

I. Izobutil-karbonil-metilén-trifenil-foszforán (1 számú vegyület)

a) Bróm-metil-izobutil-keton ml izobutil-metil-ketont 240 ml metanolban 0 °C-on elegyítünk 20 ml brómmal és további másfél órát keverjük 10 °C-on. Ezután hozzáadunk 360 ml vizet és 16 órát keverjük szobahőmérsékleten. A reakcióelegyet összekeverjük telített konyhasóoldattal, a szerves fázist elválasztjuk és a vizes fázist éterrel extraháljuk. az egyesített szerves fázisokat 10%-os nátriumkarbonát oldattal mossuk és kalcium-klorid fölött szárítjuk. Szűrés után az oldószert lepároljuk és maradékot desztilláljuk. 53,7 g bróm-metil-izobutil-ketont kapunk színtelen olaj alakjában; forráspontja 67-69 ’C (20002660 Pa-on).

b) Izobutil-karbonil-metil-trifenil-foszfónium-bromid

53.6 g bróm-metil-izobutil-ketont hozzáadunk

78,5 g trifenil-foszfinhoz és a lehűtött reakcióelegyet metilén-klorid és éter 1:2 arányú elegyéből átkristályosítjuk. 111,7 g foszfónium-bromidot kapunk, amelynek olvadáspontja 244-245 °C.

c) Izobutil-karbonil-metilén-trifenil-foszforán (1 számú vegyület)

111.6 g izobutil-karbonil-metil-trifenil-foszfóniumbromidot 1500 ml metilén-kloridban elegyítünk 1500 ml 2 n nátrium-hidroxid oldattal és 30 percig keverjük szobahőmérsékleten. A szerves fázist elválasztjuk, vízzel mossuk és nátrium-szulfát fölött szárítjuk. Az oldószer szűrés utáni lepárlását követően a maradékot t-butil-metil-éterből átkristályosítjuk; 72,2 g 1 számú, cím szerinti vegyületet kapunk, amelynek olvadáspontja 120-121 °C.

Az a) reakciólépésben alkalmazott keton komponens változtatásával analóg módon további (IV) általános képletű foszforánokat is előállíthatunk.

IL (Ciklopropil-metil)-(trifenil-foszforanilidén)-keton (2 számú vegyület)

180 mg lítium-kloridot és 540 mg réz(I)-kloridot nitrogénatmoszférában, 9 ml tetrahidrofuránban 1,5 órát keverünk szobahőmérsékleten. Miután az elegy 10 °C-ra hűk, hozzáadunk 15,0 g (bróm-metil)-(trifenil-foszforanilidén)-ketont [Le Corre, M.: C. R. Acad. Se. (C), 273, 81, (1971)] 225 ml tetrahidrofuránban és 30 percig keverjük. Ezután hozzácsöpögtetünk 29,5 ml tetrahidrofurános ciklopropil-magnézium-bromid [Reynolds, G. F. és munkatársai: J. Org. Chem., 23, 1217, (1958)] oldatot (körülbelül 1,6 mólos és másfél órát keverjük ugyanezen a hőmérsékleten. A reakcióelegyet jég/telített ammónium-klorid oldatra öntve és ezt követően ecetsav-etil-észterrel extrahálva dolgozzuk fel. A szerves fázist nátrium-szulfát fölött szárítjuk, majd bepároljuk. A szilárd maradékot kovasavgélen kromatografálva ecetsav-etilészter és aceton 3:1 arányú elegyével 5,6 g 2 számú, cím szerinti vegyületet kapunk, amelynek olvadáspontja 152 °C.

III. (5E, 7E,22E)-(lS,3R)-l,3-bisz(t-butil-dimetilszilil-oxi)-9J0-szeko-24a-homo-5,7,10( 19)-22-koleszta-tetraén-24-on (3. számú vegyület)

8,0 g (lS,3R)-bisz(t-butil-dimetil-szilil-oxi)-(20S)formil-9-10-szeko-pregna-[5E,7E, 10( 19)]-triént [Calverley: Tetrahedron, 43, 4609, (1987)] és 12,0 g 7 számú vegyületet 46 ml dimetil-szulfoxidban 105 °C-on 6 órát keverünk nitrogénatmoszférában. Ezután a reakciókeveréket szobahőmérsékleten etil-acetáttal hígítjuk és konyhasóoldattal mossuk. A szerves fázist nátriumszulfát fölött szárítjuk és szűrjük. Az oldószer eltávolítása után a maradékot toluolban kovasavgélen keresztül szűrjük. Az oldószer lepárlásával és gradienskromatográfiával (toluol/hexán 1:1 arányú elegye - toluol) kovasavgélen a maradékból 3,6 g 3 számú, cím szerinti vegyületet nyerünk amorf szilárd anyag formájában.

(5E,7E,22E)-(1 S,3R)-1,3-bi sz-( t-but il-dimetil-szililoxi)-24-(ciklopropil-metil)-9,10-szeko-kola5,7,10(19),22-tetraén-24-on (4 számú vegyület)

A feldolgozást a III. részben leírt módon végezzük; anyagok: 3,72 g II. rész szerinti (20S)-formil-származék és 5,6 g 2 számú vegyület; dimetil-szulfoxidban. Kitermelés: 2,2 g 4 számú vegyület, kristályos olaj formájában, amelynek olvadáspontja 97-98 °C.

IV. (5E,7E,22E)-(lS,3R,24R)-l,3-bisz(t-Butil-dimetil-szilil-oxi )-9,10-szeko-24a-homo-5,7,10(19),22koleszta-tetraén-24-ol (5. számú vegyület)

E (5E,7E,22E)-(lS,3R,24S)-i,3-bisz(t-Butil-dimetil-szilil-oxi )-9,10-szeko-24a-homo-5,7,10(19),22koleszta-tetraén-24-ol (6. számú vegyület)

3,5 g 3 számú vegyületet 9 ml tetrahidrofuránban és 20,6 ml metanolban elegyítünk 20,6 ml 0,4 mólos metanolos CeCl₃x7H₂O oldattal. Nitrogénatmoszférában, jeges hűtés közben részletekben hozzáadunk 570 mg nátrium-bór-hidridet. A szuszpenziót még 40 percig keverjük jeges hűtés közben, majd jég/konyhasó oldat keverékre öntjük. A vizes fázist etil-acetáttal extraháljuk, a szerves fázist semlegesre mossuk vízzel és nátrium-szulfát fölött szárítjuk. Szűrés és az oldószer eltávolítása után 3,5 g olajat kapunk. Kovasavon, etil-acetát és hexán 1:9 arányú elegy ével végzett kromatográfiával 534 mg 5 és 692 mg 6 számú vegyületet kapunk, kristályosodó olaj formájában.

HU 210 032 Β (5E,7E,22E)-( 1S,3R,24R)-1,3-bisz(t-Butil-dimetilszilil-oxi)-24-(ciklopropil-metil)-9,10-szeko-kola5,7,10(19),22-tetraén-24-ol (7 számú vegyület) (5E,7E,22E)-(lS,3R,24S)-l,3-bisz(t-Butil-dimetilszilil-oxi)-24-(ciklopropil-metil)-9,10-szeko-kola5,7,10(19),22-tetraén-24-ol (8 számú vegyület)

A feldolgozást a IV./V. részekben leírtak szerint hajtjuk végre. A kiindulási anyagok: 2,2 g 4 képletű vegyület 5,8 ml tetrahidrofuránban és 13,0 ml metanolban, 13,0 ml 0,4 mólos CeCl₃x7H₂O oldat, 359 mg nátrium-bór-hidrid; 2,22 g olaj, mint nyerstermék. Kitermelés: 1,05 g 7 képletű vegyület (S számú vegyülettel együtt) és 330 mg 8 számú vegyület, mint gyanta.

A következő reakciókban a 8 számú vegyület továbbalakítását írjuk le; a 7 számú vegyület az alább leírtakkal analóg módon szintén továbbalakítható.

VI. (5Z,7E,22E)-(lS,3R,24R)-l,3-bisz(t-Butil-dimetd-szriil-oxi)-9, J0-szeko-24a-homo-5,7,10(19),22koleszla-tetraén-24-ol (2 számú vegyület)

534 mg 5 számú vegyületet feloldunk 75 ml toluolban és 89 mg antracén és 1 csöpp trietil-amint hozzáadása után 5 percig szobahőmérsékleten besugározzuk egy nagynyomású higanygőzlámpával (Heraeus TQ 150) Pyrex-üvegen keresztül. A zavaros reakciókeveréket szűrjük, besűrítjük és a maradékot etil-acetát és hexán 1:9 arányú elegyével kovasavgélen kromatografáljuk. 410 mg 2 számú, cím szerinti vegyületet kapunk olaj alakjában.

VII. (5Z, 7E,22E)-( 1S,3R,24S)-1,3-bisz(t-Bu.til-dimetil-szilil-oxi)-9,10-szeko-24a-homo5,7,10( 19),22-koleszta-tetraén-24-ol (10 számú vegyület)

AVI. részben leírtakkal analóg körülmények között 680 mg 6 számú vegyületből 570 mg cím szerinti, 10 számú vegyületet kapunk olaj alakjában.

(5Z,7E,22E)-( 1 S,3R,24S)-1,3-bisz-(t-Butil-dimetilszilil-oxi)-24-(ciklopropil-metil)-9,10-szeko-kola5,7,10(19),22-tetraén-24-ol (77 számú vegyület)

320 mg 8 számú vegyületet feloldunk 45 ml toluolban és 54 mg antracén és 1 csöpp trietil-amin hozzáadása után 5 percig szobahőmérsékleten besugározzuk egy nagynyomású higanygőzlámpával (Hereaus TQ 150) Pyrex-üvegen keresztül. A reakciókeveréket besűrítjük és a maradékot (375 mg) - 11 számú vegyület és antracén keveréke - közvetlenül elegyítjük tetrabutil-ammónium-fluoriddal.

I. példa (5Z, 7E,22E)-( I S,3R,24R)-9,10-szeko-24a-homo5,7,10( 19),22-Koleszta-tetraén-1,3,24-triol (12 számú vegyület)

200 mg 9 számú vegyületet 8,8 ml tetrahidrofuránban

1,5 ml 1 mólos tetrahidrofurános tetrabutil-ammóniumfluorid oldattal 50 percig 60 °C-on tartunk. A lehűtött reakciókeveréket etil-acetáttal hígítjuk és nátrium-hidrogén-karbonát oldattal és konyhasóoldattal mossuk. A szerves fázist vízzel semlegesre mossuk és nátrium-szulfát fölött szárítjuk. Szűrés és az oldószer lepárlása után 210 mg olajat kapunk maradékként. Kovasavgélen végzett kromatográfiával (etil-acetát és hexán 2:1 arányú elegyével) 124 mg 12 számú, cím szerinti vegyületet kapunk amorf szilárd anyag alakjában. UV spektrum (MeΟΗ)λ = 210(ε= 14 720), 264(14 240).

2. példa (5Z,7E,22E)-(lS,3R,24S)-9,10-szeko-24a-homo5,7,10( 19)22-Koleszta-tetraén-l,3,24-triol (13 számú vegyület)

Az 1. példában leírt körülmények között 200 mg 10 számú vegyületből 88 mg 13 számú, cím szerinti vegyületet állítunk elő, amelynek olvadáspontja 128129 ’C.

3. példa (5Z,7E,22E)-(lS,3R,24S)-24-(Ciklopropil-metil)9.10- szeko-kola-5,7,I0(I9),22-tetraén-l,3,24-triol (14 számú vegyidet)

A 11 számú vegyület maradékának 375 mg-ját

14,2 ml tetrahidrofuránban 2,39 ml 1 mólos tetrabutilammónium-fluorid oldattal (tetrahidrofurános oldat) nitrogénatmoszférában 60 percig 60 ’C-on tartjuk. A lehűtött reakcióelegyet feldolgozás céljából hideg nátrium-hidrogén-karbonát oldatba öntjük és ezt követően ecetsav-etiléterrel extraháljuk. A szerves fázist nátrium-szulfát fölött szárítjuk, szűrjük és az oldószert lepároljuk, így 400 mg gyantaszerű maradékot kapunk. Kovasavgélen ecetsav-etilészterrel és hexánnal (2:1 arányú elegy) végzett kromatográfiával 150 mg 14 számú, cím szerinti vegyületet kapunk, amelynek olvadáspontja 137-139 ’C.

4. példa (5Z, 7E,22E)-(1S, 3R,24R )-24-( Ciklopropil-metil)9.10- szeko-kola-5,7,10(19),22-tetraén-l,3,24-triol (16. számú vegyület)

119-120,5 ’C olvadáspontú szilárd anyag formájában.

5. példa (5Z,7E,22E)-( IS,3R,24S)-24-( Ciklopentil-metil)9,10-szeko-kola-5,7,10(I9),22-tetraén, 1,3,24-triol (18 számú vegyidet)

I. Ciklopentil-metil-karbonil-metilén-trifenil-foszforán (77 számú vegyület)

A 77 számú, cím szerinti vegyületet az izobutil-karbonil-metilén-trifenil-foszforán előállítására leírttal analóg módon nyerjük ciklopentil-acetonból, 84—87 ’C olvadáspontú kristályosodott olaj formájában.

II-V. A 18 számú, cím szerinti vegyületet a kiindulási anyagok előállításánál a II-V. részekben leírttal analóg módon állítjuk elő 3,50 g (1 S,3R)-bisz(tbutil-dimetil-szilil-oxi)-(20S)-formil-9,10-szekopregna-[5E,7E, 10(19)]-triénből és 5,68 g 17 számú vegyületből, 90-93 °C olvadáspontú szilárd anyag formájában.

HU 210 032 Β

6. példa (5Z, 7E,22E)-(lS,3R,24R)-24-(2-Etil-butil)-9,10szeko-kola,5-7,10( 19),22-tetraén-l,3,24-triol (25 számú vegyület) és

7. példa (5Z, 7E,22E)-(lS,3R,24R)-24-(2-Etil-butil)-9,10szeko-kola-5,7,10( 19),22-Tetraén-1,3,24-triol (26 számú vegyület)

I. 4-Etil-pentanoil-metilén-trifenil-foszforán (19 számú vegyület)

a) Etil-2-butén-l(2)-karbonitril (19 számú vegyület)

170 g (2 mól) cián-ecetsavat 10 g ammónium-acetáttal és 10 ml ecetsavval együtt 100 ml benzolban egy 1 literes lombikba teszünk. Hozzáadunk 172 g (2 mól) dietil-acetont és 18 órát forraljuk nagyon óvatosan, visszafolyató hűtő alatt, vízleválasztóval. A benzol lepárlása után a maradékhoz 1000 ml 2 n sósavat adunk, éterrel extraháljuk, a szerves fázist elválasztjuk, telített nátrium-klorid oldattal mossuk, nátrium-szulfát fölött szárítjuk és besűrítjük. A maradékot kétszer desztilláljuk 2400 Pa nyomáson; 96,7 g 19a számú anyagot kapunk színtelen olaj alakjában, melynek forráspontja 66-68 ’C, IR-spektrum: v (CN) 2240, 2212 cnr¹.

b) Etil-2-bután-karbonitríl (19b számú vegyület)

96,7 g (886 millimól) 4-etil-2-butén-l(2)-karbonitrilt (19a számú vegyület) etanollal 150 ml térfogatra töltünk fel. Hozzáadunk 2 g 10%-os szénhordozós palládiumot és 50 °C-on 7 órát hidrogénezzük. A reakcióelegyet celiten szűrjük, besűrítjük, 400 ml 2 n sósavval felvesszük, éterrel extraháljuk, szárítjuk, besűrítjük és vákuumban desztilláljuk. 50,5 g I9b számú anyagot kapunk színtelen olaj formájában, forráspontja 8001064 Pa-on 45 ’C;

NMR-spektrum (300 MHz) δ: 0,92 (6H, t), 1,5 (5H, m), 2,34 (2H, d).

c) Etil-2-hexánon (19c számú vegyület)

14,4 g (600 millimól) magnéziumforgácsot 150 ml dietil-éterrel együtt háromnyakú lombikba helyezünk. Hozzáadunk 85,2 g (600 millimól) metil-jodidot 50 ml éterben, csöppenként. Ezután hozzáadunk 100 ml benzolt és a dietil-éter egy részét ledesztilláljuk. A maradékhoz 33,3 g (300 millimól) etil-2-butil-karbonitrilt (19b számú vegyület) adunk és 5 órát forraljuk visszafolyató hűtő alatt. A reakcióelegyet ammónium-klorid oldattal hidrolizáljuk, éterrel extraháljuk, vízzel mossuk, nátrium-szulfát fölött szárítjuk, besűrítjük és vákuumban Vigreux-oszlopon desztilláljuk. 12,4 g 79c számú anyagot kapunk színtelen olaj alakjában; forráspontja 2130 Pa-on 54 ’C; IR-spektrum v (CO) 1730 cm-'.

NMR-spektrum δ: 0,86 (6H, t), 1,30 (4H, m), 1,80 (1H, m),2,13(3H, s),2,33(2H, d).

d) Bróm-metil-4-etil-keton (19d számú vegyület) g (93 millimól) 4-etil-2-hexanont 60 ml metanolban 0 ’C-on elegyítünk 14,8 g (93 millimól) brómmal és még 30 percig keverjük 0 ’C-on. Ezután hűtés közben hozzáadunk 100 ml vizet és 16 órát keverjük szobahőmérsékleten. A reakciókeveréket telített konyhasóoldattal elegyítjük, éterrel extraháljuk, telített nátrium-hidrogén-karbonát oldattal mossuk és nátrium-szulfát fölött szárítjuk. Szűrés után az oldószert lepároljuk és a maradékot desztilláljuk.

13,4 g bróm-metil-4-etil-pentil-ketont (19d számú vegyület) kapunk, melynek forráspontja (1600 Paon 54 ’C;

NMR-spektrum (300 MHz) δ: 0,86 (6H, t), 1,23 (4H, m), 1,86 (1H, m), 2,58 (2H, d), 3,88 (2H, s).

e) 4-Etil-pentanoil-metil-trifenil-foszfónium-bromid (19e számú vegyület)

13.4 g (65 millimól) bróm-metil-4-etil-pentil-ketont (19d számú vegyület) hozzáadunk 17,3 g (65 millimól) trifenil-foszfinhoz. Egy éjszakán át állni hagyjuk majd hozzáadunk 76 ml metilén-kloridot és 30 percig forraljuk visszafolyató hűtő alatt. Lehűlés után a reakcióelegyet 110 ml éterrel elegyítjük és 80 ml 3:5 arányú metilén-klorid:éter eleggyel mossuk. 26,4 g 19e számú foszfónium-bromidot kapunk.

NMR-spektrum (300 MHz) δ: 0,78 (6H, t), 1,20 (4H,

m), 1,77 (1H, m), 2,87 (2H, d), 5,7 (2H, d), 7,78 (15H, m).

f) 4-Etil-pentanoil-metilén-trifenil-foszforán (19 számú vegyület) g (55 millimól) 4-etil-pentanoil-metil-trifenilfoszfónium-bromidot (19e számú vegyület) 70 ml metanolban elegyítjük 5,04 g (60 millimól) nátriumhidrogén-karbonáttal 70 ml vízben, és 30 percig keverjük szobahőmérsékleten. A reakcióelegyet vízbe öntjük, metilén-kloriddal extraháljuk, a szerves fázist elválasztjuk, vízzel mossuk, nátrium-szulfát fölött szárítjuk és besűrítjük. A maradékot etil-acetáttal elkeverjük; 18,8 g 19 számú, cím szerinti vegyületet kapunk.

NMR-spektrum (300 MHz) δ: 0,93 (6H, t), 1,52 (4H, m), 2,31 (H, m), 2,48 (2H, d), 3,94 (1H, széles d),

7,48 és 7,88 (15H, m).

II. (5E,7E,22E)-(JS,3R)-I,3-bisz(t-Butil-dimetilszilil-oxi)-24-(2-etil-butil)-9,10-szeko-kola5,7,10(19),22-tetraén-24-on (20 számú vegyület)

3.4 g (5,9 millimól) (20S)-formiI-származékot és

5,7 g (14,7 millimól) 19 számú vegyületet 100 ml toluolban egy éjszakán keresztül 80 ’C-ra melegítünk. Ezután a reakcióelegyet vízbe öntjük, a szerves fázist elválasztjuk, telített konyhasóoldattal mossuk, nátriumszulfát fölött szárítjuk és besűrítjük. Az olajos maradékot kovasavgélen toluollal kromatografáljuk. 1,1 g 20 számú vegyületet kapunk olaj alakjában.

NMR-spektrum (300 MHz) δ: 0,53 (3H, s), 0,79 (24H),

1,2 (3H, d), 4,17 (1H, m), 4,48 (1H, m), 4,81 (2H,

d), 5,78 (1H, d), 5,98 (1H, d), 6,39 (1H, d), 6,62 (1H, q).

HU 210 032 Β

Ili. (5E,7E,22E)-(1 S,3R,24S)-1,3-bisz(t-Butil-dimetil-szilil-oxi)-24-(2-etil-butil)-9,10-szeko-kola,5,7,10( 19),22-tetraén-24-ol (21 számú vegyület) (5E,7E,22E)-(lS,3R,24S)-l,3-bisz(t-Butil-dimetilszilil-oxi)-24-(2-etil-butil)-9,10-szeko-kola5,7,ÍO(19),22-tetraén-24-ol (22 számú vegyület)

A reakció végrehajtását és a feldolgozást az 1. és 2.

példákhoz tartozó IV. és V. részben leírt módon végezzük. Kiindulási anyagok: 1,1 g (1,6 millimól) 20 számú vegyület terhahidrofuránban (2,8 ml) és 6,3 ml metanolban; 263 mg (6,96 millimól) nátrium-bór-hidrid. Kitermelés: 340 mg 21 számú és 140 mg 22 számú vegyület olaj alakjában. A 27 és 22 számú vegyület NMR-spektruma (300 MHz) δ: 0,50 (3H, s), 0,7-0,88 (24H), 4,05 (IH, m), 4,14 (IH, m), 4,48 (IH, 4,91 (2H, d), 5,32 (IH, dd), 5,47 (IH, dd),

5,77 (IH, d), 6,40 (IH, d).

IV. (5Z,7E,22E)-(lS,3R,24R)-I,3-bísz(t-Butil-dimetil-szilil-oxi)-24-(2-etil-butil)-9,10-szeko-kola5,7,10(19),22-tetraén-24-ol (23 számú vegyület) 340 mg 21 számú vegyületet feloldunk 60 ml toluolban és 53 mg (0,30 millimól) antracén és 1 csöpp trietil-amin hozzáadása után 5 percig szobahőmérsékleten besugározzuk egy nagynyomású higanygőzlámpával (Heraus TQ 150) Pyrex-üvegen keresztül. A zavaros reakciókeveréket szűrjük és besűrítjük. 340 mg 23 számú, cím szerinti vegyületet kapunk.

(5Z,7E,22E)-( lS,3R,24S)-l,3-bisz(t-Butil-dimetilszilil-oxi)-24-(2-etil-butil)-9,10-szeko-kola5,7,10(19),22-tetraén-24-ol (24-számú vegyület)

A fenti IV. részben megadott körülményekkel analóg körülmények között 130 mg 22 számú vegyületből 130 mg 24 számú, cím szerinti vegyületet kapunk olaj alakjában.

V.(5Z,7E,22E)-(lS,3R,24R)-24-(2-Etil-butil)-9,10szeko-kola-5,7,10(19),22-tetraén-l,3,24-triol (25 számú vegyület)

340 mg 23 számú vegyületet 10 ml tetrahidrofuránban 2 ml 1 n tetrabutil-ammónium-fluoriddal tetrahidrofuránban 55 °C-on tartunk 1 óra hosszat. A lehűtött reakciókeveréket etil-acetáttal hígítjuk és nátrium-hidrogén-karbonát oldattal és konyhasóoldattal mossuk. A szerves fázist vízzel semlegesre mossuk, nátrium-szulfát fölött szárítjuk és besűrítjük. Kovasavgélen etil-acetáttal végzett kromatográfia és bepárlás után a maradékot hexánnal felvesszük és szűrjük. 110 mg 25 számú, cím szerinti vegyületet kapunk amorf szilárd anyag formájában; op.: 147-154 °C.

(5Z,7E,22E)-(lS,3R,24S)-(2-Etil-butil)-9,I0-szekokola-5,7,10,(I9),22-tetraén-1,3,24-triol (26 számú vegyület)

A 25 számú vegyület előállítására alkalmazott körülmények között 130 mg 24 számú vegyületből 40 mg cím szerint, 26 számú vegyületet állítunk elő, amelynek olvadáspontja 135-138 °C.

Claims

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

1. Eljárás (I) általános képletű 24-homo-D-vitaminszármazékok előállítására - a képletben

R¹ jelentése hidroxilcsoport,

R² és R³ jelentése egymástól függetlenül egyenes vagy elágazó szénláncú, 1-4 szénatomos alkilcsoport, vagy közösen a 25-ös számú szénatommal együtt 3-9 szénatomos, telített karbociklusos gyűrűt alkotnak.

n értéke 1,2,3,4 vagy 5.

azzal jellemezve, hogy egy (IV) általános képletű vegyületet - a képletben R¹' jelentése védett hidroxilcsoport, R⁴⁷ jelentése hidroxil-védőcsoport, R², R³ és n jelentése a tárgyi körben megadott - a 24-karbonilfunkció redukálásával (III) általános képletű vegyületté

- a képletben R¹' és R⁴' jelentése a (IV) általános képletű vegyületnél, R², R³, n a tárgyi körben megadott

- alakítunk, a kapott (III) általános képletű vegyületet ultraibolya fénnyel besugározva az 5,6-heIyzetű kettőskötés izomériájának megfordításával (II) általános képletű vegyületté - a képletben R¹' és R⁴'jelentése a (IV) általános képletű vegyületnél, R², R³, n jelentése a tárgyi körben megadott - alakítjuk, majd ezt a vegyületet a jelenlevő hidroxil-védőcsoportok lehasításával (I) általános képletű vegyületté alakítjuk.
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás R² és R³ helyén külön-külön metilcsoportot tartalmazó 24-homo-D-vitamin-származékok előállítására, azzal jellemezve, hogy megfelelően helyettesített kiindulási anyagokat alkalmazunk.
3. Az 1. igénypont szerinti eljárás olyan 24-homoD-vitamin-származékok előállítására, amelyeknek képletében n jelentése 1, azzal jellemezve, hogy megfelelően helyettesített kiindulási anyagokat alkalmazunk.
4. Az 1. igénypont szerinti eljárás (5Z,7E,22E)(lS,3R,24R)-9,10-szeko-24a-homo-5,7,10(19),22koleszta-tetraén-l,3,24-triol vagy (5Z,7E,22E)(1 S,3R,24S)-9,10-szeko-24a-homo-5,7,10( 19),22koleszta-tetraén-l,3,24-triol előállítására, azzal jellemezve, hogy megfelelően helyettesített kiindulási anyagokat alkalmazunk.
5. Az 1. igénypont szerinti eljárás (5Z,7E,2E)(1 S,3R,24R)-24-(ciklopropil-metil)-9,10-szeko-kola5,7,10(19),22-tetraén-l,3,24-triol vagy (5Z,7E,22E)(lS,3R,24S)-24-(ciklopropil-metil)-9,10-szeko-kola5,7,10(19),22-tetraén-l,3,24-triol előállítására, azzal jellemezve, hogy megfelelően helyettesített kiindulási anyagokat alkalmazunk.
6. Az 1. igénypont szerinti eljárás (5Z,7E,22E)(lS,3R,24S)-24-(ciklopentil-metil)-9,10-szeko-kola5,7,10(19),22-tetraén-1,3,24-triol előállítására, azzal jellemezve, hogy megfelelően helyettesített kiindulási anyagokat alkalmazunk.
7. Az 1. igénypont szerinti eljárás (5Z,7E,22E)(1 S,3R,24R)-24-(2-etil-butil)-9,10-szeko-kola-5,7,10 (19),22-tetraén-l,3,24-triol- vagy (5Z,7E,22E)(lS,3R,24S)-24-(2-etil-butil)-9,10-szeko-kola-5,7,10 (19),22-tetraén-l,3,24-triol előállítására, azzal jellemezve, hogy megfelelően helyettesített kiindulási anya gokat alkalmazunk.

HU 210 032 Β
8. Eljárás gyógyszerkészítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy az 1. igénypont szerint előállított (I) általános képletű vegyületet - ahol a képletben n és R’R³ jelentése az 1. igénypont szerinti - a gyógyszertech nológiában szokásos hordozó- és/vagy egyéb segédanya gokkal együtt gyógyszerkészítménnyé alakítunk.